SA92120358B1 - جزئيات ربط cd 25 - Google Patents

Abstract

الملخص: تتعلق البراءة بأجسام مضادة أحادية النسيلة monoclonal antibodies مكتشفة حديثا مضادة ل CD25 وتتميز بسلسلة حمض أميني amino acid عند مناطق التغيير.في البداية ، تنتج الأجسام المضادة من إحدى فصائل القوارض ، ويمكن أن تحول إلى مكونات كيمرية chimeric أو بشرية، مترافقات مانعة immunoconjugates أو أجزاء أجسام مضادة ( توصف عامة بجزيئات ربط ). وتكون المستحضرات مفيدة في المعالجة الوقائية أو معالجة رفض نقل الأعضاء transplant وبخاصة في ترافق مع الأجسام المضادة الأخرى للخلايا النشطة التي على شكل حرف T ، وعلى سبيل المثال الأجسام المضادة CD7.، 15 شكل

Description

ل جزيئات ربط ‎CD25‏ ‎iia ol)‏ الكامل خلفية الإختراع: : يتعلق هذا الاختراع بكبت المناعة ‎immunosuppression‏ وبالأخسص العمل على إعداد أجسام مضادة أحادية ‎dud‏ وجزيئات ربط أخغرى ضد الجسم الغريب ) ‎.CD25 (CD25 antigen‏ ° وأنه لمن المفضل في جراحة نقل الأعضاء وبخاصة الكلية ؛ الكبد ؛ الرئة ؛ جراحة نقل نخاع العظم أن يكبت المناعة لمتلقي التطعيم لكي يقلل من الإحتمال القوي لنبذ ( تقيوء ) التطعيم بعد الجراحة. لهذا الغرض تقترح أنواع مختلفة من الأدوية لكبت المناعة ولكن تحت عناية مراقبة ؛ حيث تبين أن الآشار العرضية الغير مرغوبة ‎Lan ٠‏ عن إستعمال عوامل معينة لكبت المناعة ؛ بالإضافة توجد صعوبة في جعل متلقي التطمعيم معرضاً بصورة إلى العدوى بالبكتيريا والفهروسات بسبب تأثير كبت المناعة ويمكن التحكم بواسطة نظام مناعي عادي. . وتشمل عوامل كبت المناعة المستعملة بتجباح في الممارسة | : 0° الإكلينيكية مثل الأسترويدات ؛ أزوثيوبرينات ؛ سيكلوبورين. ‎ag‏ لمن الضروري في الممارسة الإلكينيكية أن ‎sai‏ ‏الموازنة لدرجة كبت المناعة الضرورية لمنع أو معالجة لاحقة لنبذ الطعم مع حفظ كمية محددة من نظام المناعة المنبوذ لكي تقاوم عوامل العدوى الأخرى في نفس الوقت ؛ لكي تحافظ على أية ‎٠‏ إحتمالية للآثشار العرضية الغير مرغوبة تحت المراقبة. بالإضافة إلى إستعمال الأدوية الكابتة للمناعة فإنه يتركز الإهتمام على استعمال أجسام مضادة أحادية النسيلة محددة لكي تكبت

ب بالإضافة إلى إستعمال الأدوية الكابتة للمناعة فإنه يتركز الإهتمام على استعمال أجسام مضادة أحادية النسيلة محددة لكي تكبت تفاعلات المناعة ؛ وبصورة خاصة ؛ يؤدي الإهتمام إلى الأجسام المضادة الأحادية النسيلة بحيث نتعرف على الأجسام الغريبة السطحيسة ‎feds ddl ٠‏ خلايا على شكل حرف ‎Surface antigens of T-cells ) T‏ ): وتكون المشاكل المقابلة في الممارسة الإكلينيكية في أن ‎Ca¥‏ ‏المضادة للطرق الأولية تكون إماقوية جداً(فعالة)أو غير مؤشقرة بصورة كافية ؛ وأحياناً ‎or‏ آثار خطيرة مثل حمى ‎ils‏ ‏عالية. ‏5 تعين تلك الأجسسام المضادة المونوكلية بواسطة المجموع الحسابي المعين بواسطة تتابع كرات بيضاء نموذجية معملية. على الرغم من أن تعبير ‎Jie‏ 003 يستخدم أحياناً لدلالة على الأجسسام الغريبة السطحية ‎Cell surface antigens‏ والأجسام المضادة لهذه الأجسام الغريبة والتي غالباً ما يعبر عنها ‎antigen-CD3‏ - وفي التقصيلات م اللاحقة سوف نستخدم بعض هذه المصطلحات مثل ‎CD25 , CD3‏ ‎A‏ ‏| لدلالة على الأجسام المضادة ‎antibodies‏ لهذه الأجسبام الغريبة السطحية المقابله لها والتي سوف توصف — ‎antigen‏ 003. ّم وبصورة خاصة ؛ تكون الأجسام المضادة الأحادية النسيلة للأجسام ا الغريبة الغشاتية المتواجدة في كل الخلايا التي على شكل حرف 7 ( أيضاً تسمى الأجسام الغريبة لخلايا 7 العامة ) مثل الجسم الغريب ‎CD3‏ ‏كأجسام مضادة فعالة جداً بحيث أنها تحتوي على نشاط كامل لكبت نظام المناعة. لذلك يمكن أن يحرم جسم الإنسان من الإبستجابة المناعية الفورية ‎vo‏ ويحقق التوسط عن طريق خلايا 1 الذاكرة بمجرد حدوث العدوى - ولا يكون ذلك مرغوباً عند محاولة علاج نبذ التطعيم.

ويجب أن تكون المعالجة المناسبة للاستعمال في المعالجة الوقائية تحت عناية خاصسة ‎Mie‏ مجموعة ‎LDA‏ 7 الذاكرة يجب أن ترك غير مصابة بأذى ‎Lay‏ فئة الخلايا 7 ( خلايا 7 ‎(Aa ll‏ حيث يجب أن تكون غير نشطة عند تواجدها بصسورة مباشرة عند حدوث هم البنذة. : : يمكن تحقيق ذلك المطلب المرغوب باستعمال أجسام مضادة لكي تحفز خلايا ‎T‏ وتتميز خلايا 7 بتواجد إلفه كبيرة من المستقبل 1-2 في سطحها الغشائي. ض ض يتكون المستقبل 17-2 عالي الإلفة على الأقل من مسلسلتان بولي ببتير مختلفتان ؛ تعرف سلسلة الفا بأنها ‎antigen‏ 0025 والسلسلة بيتاً . بقية الخلايا 7 لا تملك الإلفه العالية للمستقبل حيث أن لها الفه قليلة ومتوسطة وتكون في مزدوجات متجانسة لسلنسلة الفا وبيتا. يتداخل الجسم المضاد ‎CD25‏ مع ربساط 11-2 المستقبل العالي الإلفه ولذلك تكبح الإجابة المانعة بإنتقائية ؛ ويكون هو الجسم المضاد المختار للمعالجة الوقائية عن الآثار العرضية ‎A a‏ التعطيم. تتركب الفلوبيولينات المناعية الطبيعية أو الأجسام المضادة من جزئي ملتيميري على شكل حرف واي ‎(Y)‏ يتضمن على موضع رباط أنتجين ‎antigen-binding‏ عند نهاية الذراع العلوي . تتوسط بقية ِ ‎sadly,‏ عن صنف ‎(Y)‏ بوظائف مؤشرة مرافقة للفلوبيولييات . المانئعة لنشاطات الربط صغيرة بالمقاربة إلى تلك التي تتم بتوافق مجال متغير لسلسة كبيرة وتحتوي تلك المجالات المتغيرة لسلاسل كبيرة مفردة على نشاط ربط جيني مضاد يكون مستقلاً. يشار إلى تلك الجزئيات على ‎Led‏ أجسام مضادة ذات ‎Jae‏ ‎Yo‏ مفرد توجد العديد من الأجسام المضادة الأحادية النسيلة ‎CD25‏ الفارية ‎PY Jong‏ ¥ - أب ( أمنوتيك - ميريوكس ) ¢ 28 - ‎)BDAL‏

Co (MRC ١ ‏أمبرشام ) 6 كبا‎ ( A س١ ‏بيككون - ديكنسون ) ؛‎ .) ‏كامبردج ) ¢ و 2111207 ( الجامعة الحرة - برلين‎ ‏الوصف العام للاختراع:‎ aka) CD25 ‏على أية حال ؛ اكتشف حديثاً أن الجسم المضاد لفأر‎ ‏يحتوي‎ « RFTS5 - 19028 ‏بعد‎ La ‏من الأيزوتيب 15028 سمي‎ Lin © ‏للطرق الأولينة مع‎ CD25 ‏على خصائص أفضل من الجسيمات المضادة‎ ‏من المحتمل أن تصساغ‎ dls ‏أذ قرابة الربط في الإعتبار ؛ وبذلك‎ ‏جزئيات ربط 0025 أخرى لها نفس المناطق مفرطة التغيير مثل‎ . RFT5-Ig2a . 5] ‏يوضح البناء العام للجسم المضاد من الطائفة 196 بينانياً في شكل‎ > ‏تتقضمن كل من السلاسل الكبيرة والبسيطة على مجال متغير وجزء‎ ‏ثابت.‎ ‏من مجال متغير‎ antigen ‏يكون موضع ربط الجسم الغريب‎ ‏كبيرة مترافقاً مع مجال متغير لسلسة الربط . توضح المجالات‎ ALL ‏المتغيرة للسلاسل الكبيرة والبسيطة والمحتوية على نفس البناء العام‎ yo ‏كمافي شكل أب.‎

ض وبخصوصية أكثر ؛ تحدد ‎led‏ خصائص ربط الجسم الغريب لجسم مضاد عن طريق ¥ مناطق محددة في المجبال المتغير للسلاسل الكبيرة ; والبسيطة والتي يطلق عليها مجالات مفرطة التغيير ‎hypervariable‏ أو ا

.+ مناطق المحددة بالملحقات ‎CDRs‏ . كما هو موضحاً في شكل أباء؛ تتعاقب تلك ال ¥ مناطق التغيير مع ؛ مناطق بناثية .م78 والتي بالتالي تحفظ تتابعاتها وحيث لا تصل مباشرة في الرباط. تتميز ‎CDRs‏ على شكل حلقات وتعطي تقاربية منع محكمة بواسطة مخالق البنية التي تقر بملائمة بنية لوجية في شكل بيتا . تشكل

‎CDRs vo‏ لسلسلة كبيرة سوياً مع ‎CDRs‏ لترافق سلسلة بسيطة فليا موضع ربط الجسم الغريب لجزئي الجسم المضاد.

بتحديد أكثر ؛ فإنه مما يتواجبد في المنطقة 18 ‎J‏ 005 كم مقارنة تتابع الحمض الأميني لعدد من الأجسسام المضادة الموجودة في بعض الأمسناف . تعطي القواعد العامة للتعرف على مناطق ‎CDR‏ ؛ ‎FR‏ ‏كما في جدول رقم ‎.١‏ ‏1 علاوة على ذلك ؛ فإنه اكتشضف حديثاً أنه تتكون المشاركة بمجال متغير لسلسلة بسيطة طبقاً لذلك ؛ يعمل الاختراع على إعداد جزئي ربط حيث يتضمن على الأقل موضع زبط جسم غريب واحد. ويحتوي على الأقل مجال واحد حيث يضم على التتابع مناطق مفرطة التغيير ‎CDR1‏ ء ‎.CDR3 « CDR2‏ يحتوي 00171 السابق على تتابع حمضي أميني - ‎Arg - Tyr - Trp - Met‏ ‎Nis‏ ويحتوي ‎CDR2‏ السابق على تتابسع حمض ‎al‏ ‎Tyr - Pro - Gly - Asn - Ser - Asp - Thr - Ser - Tyr - Asn - Gln - Lys -‏ - ع1 - علط ‎Phe - Glu - Gly‏ ‎(5a‏ 0083 السابق على ‎a‏ حمضي أميني دم عطط - ‎Gly - Tyr - Phe - Asp‏ - دجا - ‎Asp‏ ‏وتكافقات مباشسرة منها. تتقضمن ‎de ul‏ الأولى للاختراع على جزئى ربط 0025له موضع ربط جسم غريب ‎antigen‏ واحد ذات مجسال واحد . تتضسمن السمة الثانية للاختراع على جزئي ربط 0025 له موضنع ربط جسم ا ,+ غريب واحد كالتالي: | ا أ- يتضمن المجال الأول على التتابع على مناطق مفرطسة التغيير 0011 , 002 , 00173 ؛ يحتوي 0081 المسابق على تتابع حمضشسي أميبني ‎Arg - Tyr - Trp - Met - His‏ . ‎CDR2 (stn‏ السابق على ‎pe‏ حمضتشي ‎vo‏ أميني ‎.Asp - Tyr - Gly - Tyr - Tyr - Phe - Asp - Phe‏ ب- يتضمن المجال الثاني على التتابع على مناطق مفرطة التغيير ‎3RDC3 , 282502 , 1‏ ؛ يحتوي ‎CDR1‏ السابق على تتابع حمضي أميني ما - ‎Ser - Ala - Ser - Ser - Ser - Ile - Ser - Tyr - Met‏ » يحتسوي

ل 82 السسابق على تتابع حمضسي أمينسي - ‎Asp - Thr‏ ‎Ser - Ser - Lys - Leu - Ala - Ser‏ » ويحتوي ‎CDR3‏ السسبسابق عللسى تتابع حمضي أميني ‎<i %8l<a y His - Gln - Arg - Ser - Ser - Tyr - Thr‏ مباشرة منها. ‎o‏ توصف السلسلة عديدة ‎Lada idl‏ بعد على ‎Lgl‏ تحتوي على تتابع حمضي ‎fay‏ من النهاية القصوى 17 وتنتهي عن النهاية القصوى ‎we‏ ‏عندما يتضمن موضع ربط الجسم الغريب على كل من المجالين ‎CO‏ ‏والثائي ؛ ‎als‏ يقع في نفس الجزئى متعدد البيتيد أو بتفضيل ؛ يمكن أن يكون سلسلة مختلفة ؛ يكون المجال الأول جزء من سلسلة كبسرى ‎٠‏ علوبيولينية مائعة أو جزء منها ويكون المجال الثاني في جزء من سلسلة بسيطة غلوبيولينية مانعة أو جزء منها. يعني جزئى ربط ‎CD25‏ أية جزيئ قادر على الربط إلى الجبم الغريب ‎CD25‏ إما مفرد أو مترافق مع الجزئيات الأخرى لكي يصسيغ متقبلات 11.2 عالية القرابة. ‎Sa yo‏ توضيح تفاعلات الربط بواسطة طرائفف قياسسية ( اختبارات وصفية ) وتشمل ؛ على سبيل المثال ؛ الاختبار الأحيافي لتثبيط مانع ربط 11-2 إلى متقبلها أو أية نوع من الاختبارات الأحيائية للربط ؛ وبالرجسوع إلى تواجد أختبار الضغط السالب والذي من خلاله يكون الجسم المضاد ليس له علاقة محددة ؛ فمقلاً يستعمل | َ ,جسم مضاد ليسوسومي مضاد. ‎Ally‏ توضح مقارنة جزيئ ربط البراءة إلى الجسم الغريسب في الاختبار ‎a)‏ للربط باستعمال أجسام مضادة ‎AHT207‏ أو 3001-2-8 والتي تستتدم كمنافسات ؛ يندرج مثال هام لاختبار ربط جزيئ أحيائي فيما بعد. ‎vo‏ تتمو خلايا أحادية النوية دموية سطحية بشرية ‎HPBM‏ في وسط إستبات 1640 ‎RPMI‏ مكمل ب ‎٠٠١ » 2024 L-glufamire‏ وحدة / مالي لتر بنسلين ؛ ‎٠٠١‏ ميكرو جم / مللي لتر ستروبتوميسين ؛ ‎25mM‏

Ae

FCS ( ‏عجبل جنينسي‎ dma 7٠١ ‏بيكربونات صوديوم‎ .Fetal calf serum ) ‏ميكرو جم / مللي لتر فيتوهيما جلوتينين 7118 لكي‎ )١( ‏يستعمل‎ ‎SS ‏؛ تعود الجراثيم للتعالق عن‎ dl JV ‏بعد‎ . HPBM ‏يحفز‎ ‏مللي في محلول ملحي متعادل فوسفاتي مكمل ب 27 زلال‎ / ٠*9 ٠ ‏ميكرو لتر من هذا‎ ٠٠ ‏آزيد . يحضر‎ 77 ١ BSA ‏مصل بوفين‎ ‏دقائشق عند حرارة 8١97م ؛ تحت ظروف غير مغطاة مع‎ ٠١ ‏المعلق لمدة‎ ٠٠١ =) ‏تركيزات متدرجة من الجسم المضاد ( المنافس ) تتراوح من‎ ‏ميكرو جم / مللي لقر من‎ )١( ‏ميكرو جم / مللي لتر . ثم يضاف‎ ٠١ ‏جسم مضاد بيوتينيلاتي للبراءة إلى الخلايا ويستمر التحضين لمدة‎ ‏دقائقكق مع‎ ٠١ ‏دقائق . تنظف الخلايا وتحضن لفترة أخرى لمدة‎ ‏المضاف للفلوريسين.‎ Strepta vedin ‏ستربتافيدين‎ ‏تنظف الخلايا مرة أخرى ؛ تثبت بواسطة الفورمالين وتحلل بواسطة‎ ‏فلورو سيتوميتر حيث يكشف عن ربط الجسم المضاد البيوتينيلين الغير‎ : ‏م“ محدد الهوية ؛ كضابط السالبية.‎ ‏الأمثلة لجزئيات ربط الجزيئات الغريبة على جسيمات مضادة‎ Joi ‏مثل الناتجة بواسطة خلايا 3 أو أجسام مضادة فيبريدومية وكيميرية‎ ‏؛ ذات سلسلة مفردة أو‎ Fab ‏؛ أجزاء‎ )7 (ab) ‏و(‎ Dia ‏بشرية أو أجزاء منها‎ - ‏أجسام مضادة ذات مجال مفرد.‎ ‏يتكون الجسم المضاد ذو سلسلة واحدة من مجالات متغيرة لسلسل‎ 0

Vo ‏يتكون عادة من‎ ga dn ‏جسم مضاد كبيرة محاطة تساقمياً بترابط‎ : ‏حمض أميني. لذلك لا يشتمصسل‎ YO - 10 ‏حمض أميني ؛ ويفضل من‎ ٠١ ‏إلى‎ ‏البناء على الجزء الثابت من السلسلة الكبيرة والبسيطة ويعتقد أنه تكون‎ ‏المباعدة الببتيدية الصغيرة أقل في تقبل الأجسام الغريبة من الجزء الثابت‎ ‏كله . يعني جسم مضاد كيميري ؛ إلى أنه حيث تكون المناطق الثابتة‎ vo ‏آدمي بينما تكون‎ Jad ‏للسلسلة الكبيرة والبسيطة أو كلا منها ذا‎

و المجالات المتغيرة لكل من السلاسل البسسيطة والكبيرة ذات أصسل غير ‎ed‏ (مثلاً فار ). يعني الجسم المضاد المعدل ليلائم الطبيعة البشرية إلى جسم مضاد حيث المناطق مفرطة التغيير ‎CDRs‏ تكون ذات أصل غير آدمي ( مثلاً فأر ) ؛ بيتما تكون كل الأجزاء الأخرى من الفلوبيولين المانع قبل المناطق الثابتة والأجزاء العالية الحفظ من المجالات المتغييرة ؛ مثل مناطق البنيةء؛ تكون ذات ‎Jd‏ آنمي. ا ا ال ا على أية حال ؛ يحتفظ الجسم المضاد المعدل ليلاثم الطبيعة البشرية بتتابع أحماض أمينية في الفأر ‎ALE‏ لأجزاء مناطق البنية بالقرب من مناطلق ‎٠‏ مفرطة التغيير. يمكن أن تترافق مناطق مفرطة التغيير مع أي صنف من مناطق البنية ؛ ويفضل أن تكون ذات أصل فاري أو أدمي. توصف مناطق البنية المناسبة في " تتابعات البروتين الفلوبيولينيسة المائعة المؤثقرة " بواسطة كابات وغيره ؛ قسم الصحة والخدمات ‎yo‏ الإنسائية الأمريكية ‏ خدمة الصحة العامة ؛ الهيثة القومية للصحة. ولكن ؛ تكون الصيغة المفضلة للسلسلة الكبيرة ‎RFT5-IgG2a‏ ؛ والقي توضح في التتابع المثالي رقم ‎)١(‏ . وهي تتكون من تتابع .2 مناطق ‎FR4 » FR3 » 782 ¢ FR1‏ . وبطريقة مشابهة ؛ يوضح ‎Fo‏ ‏التتابع المثالي رقم (7) صيغة السلسلة البسيطة المفضلة ‎RFT5-IgG2a‏ ‎٠‏ وتتكون على التوالي من مناطق ‎.FR4 « FR3 « FR2 ¢ FRI‏ طبقاً لذلك ؛ تمد البراءة ‎bind‏ بجزيئ ربط ‎CD25‏ حيث يتضمن على الأقل ض على موضع ربط لجسم الغريب واحد يحتوي على: يضم المجال الأول تتابع حمضي أميني مطابق فعلياً إلى ذلك إلى ذلك المو ضح في التتابع المثالي رقم ‎)١(‏ مبتدءاً بحمض أميني في الموضع ‎)١(‏ ‏.+ وينتهي بحمض أميني في الموضع ‎(VY)‏ أو المجال الأول كالسابق.

yom ‏ويضم المجال الثاني على تتابع حمض أميني مطابق فلياً للتتاببع فعلياً‎ ‏وينتهي بحمض أميني‎ )١( ‏للتابع المثالي رقم )1( مبتدءاً بحمض أميني في الموضع‎ .)٠٠١4( ‏في الموضع‎ ‏المثيرة ضد‎ monoclonal ‏يجب أن تنمو الأجسام المضادة الأحادية النسيلة‎ : - ‏م البروتين الموجود طبيعياً لكل البشر في نظام غير آدمي مثل في الفأر‎ ‏كنتيجبة مباشرة لذلك ؛ عندما يعطي جسم مضاد مخصب تهجينياً مثل‎ ‏إلى الآدمييين فإنه يحدث إجابة مائعة.‎ hybridoma ‏ذلك الناشئ من الهيبريدوما‎ ‏غير مقبولة والتي تحدث غالباً عن طريق الجزء الثابت من العلوبيولين الماع‎ ‏الخصب التهجين . ويتحدد بوضوح أن استعمال تلك الأجسام المضادة فإنه لا‎ ‏يمكن تنازلها لفترة طويلة من الزمن.‎ ٠ ‏لذلك يفضل بصورة خاصة استعمال أجسام مضادة كيميرية أو معدلة‎ ‏لتلائم الاستعمال الآدمي ذات سلسلة مفردة ومجال مفرد والتي يفضل لأنها‎ ‏عند إعطاءها للمرضى.‎ allogenic response ‏تحدث إجابة الوجينية‎ ‏ويتضح مما سبق أنه يختار جزيئ ربط 0025 للبسراءة من جسم مضاد‎ ‏م 0025 كيميري مضاد حيث يتضمن على الأقل على:‎ ‏أ- سلسلة كبيرة غلوبيوليتية مانعة واحدة أو جزء منها وتتضمن:-‎ ‏على التتابع مناطق مفرطة التغيير‎ Jody ‏مجال متغير‎ -١ .CDR3 « CDR2 « CDRI oo 0081 ‏الجزء الثابت أو جزء منها لسلسلة كبيرة بشرية ¢ وتحتوي‎ -" « Arg - Tyr - Trp - Met - His ‏السابقة على تتابع حمضي أميني‎ 7 ‏السابق على تتابع حمضي أميني‎ CDR2 ‏وتحتوي‎ ‎Ala - Ile - Tyr - Pro - Gly - Asn - Ser - Asp - Thr - Gly - Glu - Phe - ‏السابق على تتابع‎ CDR3 ‏ويحتوي‎ Ser - Tyr - Asn - Gln - Lys

Asp - Gly - Tyr - Tyr - Phe - Asp - Phe ‏حمض أميني‎ ‏_ب- سلسلة بسيطة غلوبيولينية مانعة واحدة أو جزء منها حيث تتضمن‎ Yo ‏على:‎ ‏د‎

-١١- ٠ ‏مجال متغيسر يشمل على التتابع مناطق مفرطة التغييسر‎ -١ .CDR3 « CDR2 + ‏ده‎ ‏الجزء الثابت أو جزء منها لسلسلة بسيطة بشضرية ¢ ويتحوي‎ -"

Ser - Ala - Ser - Ser - ‏السسابق على تتابع حمض أميني‎ 21 ‏السابق على تتابع‎ CDR2 ‏ويحتوي‎ Ser - Ile - Ser - Tyr - Met - Gln ° ‏ويحتوي‎ Asp - Thr - Ser - Lys - Leu - Ala - Ser ‏حمض أميني‎

His - Gln - Arg - Ser - Ser - Tyr - Thr ‏السابق على تتابع‎ 3 ‏ومكافكقات مباشرة منها.‎ ‏للبراءة من جزيئ ربط مسلسلة‎ CD25 ‏وبالتالي يمكن إنتقاء جزء ربط‎ ‏مفردة حيث يتضمن على موضع ربط لجسم الغريب مشتملاً على:‎ hie hale ‏يتضمن المجال الأول على التتابع على‎ -أ‎ ‏؛ تكون المناطق المغرطة التغيير‎ CDR3 « CDR2 » CDR1 ‏التغيير‎ ‎.)١( ‏لتتابع الحمض الأميني مطابق للتابع المثالي رقم‎ ‏مفرطة‎ hl nell ‏ب- يتضمن المجال الثاني على‎ ‏وتكون المناطق مفرطة التغيير‎ CDR3 ‏؛‎ CDR2 ¢ 00131 ‏التغييسر‎ vo (Y) ‏لتتابع الحمض الأميني ومطابقة للتابع المثالي رقم‎ ‏للمجال الأول أو‎ N ‏ض ج- رباط بتيدي ويكون محدداً إما بالنهاية الطرفية‎ ‏النهاية الطرفية 6 للمجال الثاني أو النهاية الطرفية © للمجبال‎

Co ‏مباشسرة‎ cil a ‏لمجال الثاني ؛ أو‎ N ‏الأول أو النهاية الطرفية‎ ‏منها.‎ 7 ‏كما هو معروف ؛ تؤدي التغييرات الصغيرة في تتابع الحمض الأمينسي‎ ‏مثل حذف ؛ إضافة أو إستبدال واحد أو عديد من الأحماض الأمينية إلى‎ ‏النموذج يكون مضاد الصفات للبروتين الأمصسلي والذي يكون مطابقاً فعلياً‎ ‏في الخصائص . وبذلك يعني التغيير مكاففات مباشرة منها أيضا إلى‎ .) ‏جزيئ ربط 0025 لمجال مفرد ( جزيئ ل‎ Yo

CDR3 ¢ CDR2 ¢ CDRI ‏حيث تكون لمناطق مفرطة التغيير‎ -١ ‏على‎ 7 ٠0 Jaa ‏معتبرة ككل متماظلة 80 7 على الأقل ؛ ويفضل‎

-١7- ‏الأقل والأكثر تفضيلاً 95 7 تماثل بالنسبة إلى المناطق مفرطة‎ .١ ‏التغيير كما هو موضحاً في التتابع المثالي رقم‎ ‏حيث يكون قادراً على منع ربط 11-2 إلى متلقيها فعلياً بنفس المدى‎ -"

X ‏وتوخذ كجزيئ مصدر محتوياً على مجال بفيوي مماثل إلى جزيئ‎

CDR3 ١ CDR2 ¢ ‏ولكن يحتوي على مناطق مفرطة التغيير لقص‎ > ‏,أو أية‎ ١ ‏مطابقة إلى تلك الموضحة في التتابع المثالي رقم‎ ‏جزيئ ربط 0025 محتوياً على الأقل على مجالين لكل موضع‎ .) ‏ربط ( جزيئ كل‎

CDR2 « CDRI « CDR3 « CDR2 « CDR1 ‏حيث تكون المناطق مفرطة التغيير‎ -١ 7 ٠٠ ‏على الأقل ؛ ويفضل‎ / Av A Blas J SK) 35 CDR3 « 0 ‏تماثل على الأقل والأكثر تفصيلاً 54 7 تماثل بالنسبة إلى المناطق‎ ‏ورقم‎ )١( ‏كما هو موضحاً في التتابع المثالي رقم‎ ll ‏مفرطة‎ ‎ْ |ّ AY) ‏حيث يكون قادرا على منع ربط 1-2 إلى متلقية بنفس المدى‎ -" ‏لأن جزيئ المصدر يحتوي على مجالات بنيوية وأجزاء ثابتة‎ yo i A ‏مطابقة إلى جزيئ 5 ولكن تحتوي المناطق مفرطة‎ ‏مطابقة إلى تلك‎ 00831 « CDR21 « CDRI1 « CDR3 « CDR2 « CDRI1 .)١( (1) ‏الموضحة في التتابع المثالي رقم‎ ١ ‏تختبر تلك الشواهد الأخيرة بواسطة مواد الاختبار الأحيائي‎ ‏لتفاعل خلية لنفاذية مختلفة ؛‎ MIR ‏المختلفة بما فيها الاختبار الأحيائي‎ +». ¢ antigen Mae ‏لأنتجن‎ HPBM ‏الاختبار الأحيائي للإستجابة النوعية‎ . 1-2 ‏والاختبار الأحيائي لتكاثر آفة لنفاذية - على شكل 17 معتمدة على‎ ‏يتم وصف ذلك الاختبار الأحيائي فيما بعض في النص.‎ ‏والجزئيات المكافثة إحصائياً‎ rad ‏يعني التعبير ( نفس المدى ) أن‎ ‏تبدو مطابقة فعلياً لمنحنيات منع ربط 11-2 في إحدى الاختبارات الأحيائية‎ Yo ‏السابق الإشارة إليها.‎ tp ‏الكيسيري على‎ CD25 ‏والأكثر تفصيلاً ؛ يتضمن الجسم المضاد‎ ‏الأقل على:‎ ‏واحدة حيث تتضمن مجال يحوي تتابع حمض‎ SUITE UM WI (1) ‏أميني مطابق فعلياً إلى ما هو موضح في التتابع المثالي رقم‎ ‏ومنتهياً بحمض أميني في‎ ١ ‏أميني في الموضع‎ aan ‏مبتدءاً‎ ° ‏وجزء ثابت لسلسلة كبيرة بشرية.‎ ١١١7 ‏الموضع‎ ‏ب- سلسلة بسيطة واحدة.حيث تتضمن مجال متغيز محتوياً على تتابع‎ ‏حمض أميني مطابق فعلياً إلى الموضح في التتابع المثالي‎ ١ ‏في الموضع‎ glutamic acid ‏رقم ¥ مبتدءا بحمض غلوتامي‎ ‏وجزء ثابت‎ ٠١ ‏ومنتهياً بحمض غلوتامي في الموضع‎ ١ ‏لسلسلة بسيطة بشرية.‎ ‏يمكن أن يكون الجزء الثابت من السلسلة الكبيرة البشرية من الأصسناف‎ ‏أو صنف 4 ويفضل صنف 8 والأكثر‎ 6 026 01611 yey Ye Y ‏بينما يمكن أن يكون الجزء الثابت لسلسلة بسيطة‎ yg ‏تقصيلاً صنف‎ ‏حيث تشمل 21 ؛ 22 » 23 ) ولكن يفضل‎ JA ‏م بشرية من الأصناف 16 أو‎ ‏صنف 16 . يعطي التتابع الحمضي الدهني لكل الأجزاء الثابتة بواسطة كابات ض‎ ‏وآخرين.‎ ‎. Ota ‏وتشسمل البراءة على مترافقات الجزئيات الرابطة 0025 للبراءة‎ ‏أو مترافقات نظير الأشعاعي التنشط.‎ (toxin) ‏الأنزيم أو التوكسين‎

DNA ‏للبراءة بواسطة تقتيات موحندة‎ CD25 ‏ينتج جزيئ ربط‎ 7 ‏يحمل شفرة جزئ ربط فإنه‎ DNA ‏وبالنظر إلى أن واحد أو أكثر من جزئيات‎ ‏يجب أن تتظن في تتابعات ضبط مناسبة وتنتقل إلى كائنات مضيفة مناسبة‎ ‏وفقاً لذلك ؛ تمدنا الطرق الشائعة للبراءة بالآتي:‎ al) ‏لتعديل الكائن‎

CD25 ‏تحمل جزئيات 0148 شضفرة مفردة المجال الجزئ ربط‎ -١ ‏؛ءلسلسلة‎ CD25 ‏للبراءة ن لسلسلة مفردة لجزء ربط‎ Yo ‏للبراءة.‎ CD25 ‏كبيرة أو بسيطة أو أجزاء منها لجزييغ ربط‎ gm

CD25 ‏للبراءة من أجل إنتاج حزيئ ربط‎ DNA ‏استعمال جزئيات‎ —Y ‏للبراءة بواسطة طرق موحدة.‎

Gal ‏وتكون الصيغة الحالية في أن يستطيع المتخصصين من‎ ‏جزئيات 0118 للبراءة بإتباع المعلومات المعطاة فيما بعد.‎

Bod ‏مثال تتابع حمض أميني لمناطق مفرطة التغييبر ذو‎ o ‏لهم . يتم وصف طريقة لبقاء جين ذو مجال متغير على‎ DAN ‏التتابعات‎ ‏سبيل المثال في البراءة الأوربية 79400 حيث يمكن أن تلخص كما يلي‎ ‏بإيجاز:‎ ينمو ‎CLONED‏ جينة تحمل شفرة مجال متغير لجسم مضاد مونوكلوني ‎Uf‏ كانت موصفاته . يتم حساب جزء ‎DNA‏ الذي يحمل شفرة البنية والمناطق مفرطة التغيير وتطرح أجزاء ‎DNA‏ المشفرة لمناطق مفرطة التغيير لأن أجزاء ‎DNA‏ المشضفرة لمجبالات البنية تكون مندمجة سوياً مع مواضع التقييد عند نقط الاتصال. ْ يمكن أن تتتج مواضع التقييد عند مواضع مناسبة عن ‎Gb‏ ‎yo‏ تكوين متطور لجزء 0118 بواسطة طرق قياسية. تحضر عليبات ‎CDR‏ مخلقة ثائية المعدن بواسطة ‎DAN‏ مخلق طبقاً إلى الخطوات المعطاة في التتابع المثالي رقم ‎)١(‏ ؛ ‎Cod Bags )١(‏ العليبات بواسطة نهايات لزجة بحيث أنه يمكن ربطهم عند نقط اتصال ُ البنية . يوضح البروتوكول لإتمام جزئ ‎DNA‏ يحمل شفرة غلوبيولينية ا .© مائعة ذات مجال متغير وكما هو موضحاً في شكل ‎ody‏ ‏علاوة على ذلك ؛ فإنه ليس من الضصروري أن ‎Mma‏ من 11815 خلية هيبرويدوما منتجة لكي نحصل على شفرة بناء 717718 لكل الأجسام المضادة الأحادية النسيلة الخاصمسة بالبراءة. وبذا يعطي التطبيق ‎[A‏ 7851 التعليمات الكاملة لإنتاج الأجسام ‎vo‏ المضادة الأحادية النسيلة عن طريق متحدات مترافقات ‎DNA‏ ‏تعطي التقنيات معلومات مكتوبة ‎Lad‏ يتعكلق بتتابع نيوك_ليوتيد الجيني تتضمن الطريقة تخليق عدد من الأوليجو نيوكليوتيدات الصغيرة i ‏المرغوب ( يتم تضخيم الأوليجبو‎ DNA ‏ووصلهم بالجدل لكي تعطي تتابع‎ ‏تكون الناقلات المعدلة للكائن الحي‎ (PCR ‏نيوكليوتيدات بواسطة طريقة‎ ‏المتضمنة على متير مناسب أو شفرة للأجزاء الثابتة لسلسلة كبيسرة أو‎ ‏بسيطة متوفرة بصورة عامة.‎ ‏للبراءة فإنه يمكن نقلها بواسسطة‎ DAN ‏وبذلك فإنه متى تم إعداد جزئ‎

Sly sad ‏نقل معدل مناسب يمكن تحضر الأجسام المضادة ذات سلسلة مفردة‎ ‏بواسطة طرق قياسية ؛ على سيبيل المثال كما هو موصوف في‎ ‏حت‎ [AA WO ‏بالنظر إلى ما سبق ؛ لا يكون الجسم المضاد المونوكلوني للافأر‎ ‏كإفراز طبيعي بواسطة الهيبروبيروما هو النوع المفضل من الجسيمات‎ ٠ ‏المضادة الأحادية النسيلة ؛ ويعتقد أن لا يكون قراره هيبربيروما ضرورياً لكي‎ ‏تستجيب مع الشواهد الكافية للوصف.‎ ‏من التجسيدات الخاصة بالبراءة ؛ توصسف طرق متحدة لإنتاج جزئنى‎ ‏تتضمت البناء الأول والثاني ل 0178 في الصفحة التالية:‎ CDps ‏ربط‎ ‏الأول شفرة سلسلة كبيرة أو جزء منها ويتضمن:‎ DNA ‏يحمل بناء‎ vo ‏أ- الجزء الأول والذي يشمل ميدان متغير يضم على التتابع على‎ ‏بنية مفرطة التغيير ومناطق مفرطة التغيير ؛ وتكون المناطق‎ ‏لتتابعات حمض‎ CDR3 « CDR2 « 00181 ‏مفرطة السابقة على التوالي‎

EE ‏أميني من تلك الموضحة في التتابع المثالي رقم )1( يبدأ ذلك‎ ‏الجزء الأول بنظام شفري يحوي الحمض الأميني الأول للميدان‎ v" ‏المتغير وينتهي بنظام شفري يشمل الحمض الأميني الأخير من الميدان‎ ‏المتغير.‎ ‏ب- الجزء الثاني والذي يشمل جزء ثابت لسلسلة كبيرة أو جزء منها‎ ‏حيث تبداً بنظام شفرى يشمل الحمض الأميني الأول للجزء الثابت‎ ‏من السلسلة الكبيرة وينتهي بنظام يشمل الحمض الأميني الأخير من‎ Yo ‏الجزء الثابت أو جزء منها ؛ متبوعاً بنظام شفرى غير مدرك.‎

-١- ‏ويفضل أن يكون الجزء الأول الشفرى من الميدان المتغير المحتوى‎ ‏على تتابع حمض أميني مطابق فعلياً إلى تتابع الحمض الأميني كما هو‎ (0) ‏مبتداء بحمض أميني في الموضع‎ )١( ‏موضحاً في التتابع المثالي رقم‎ ‏والأكثر تفصيلاً يحتوى الجبزء‎ (VY) ‏ومنتهياً بحمض أميني في الموضع‎ gla tua )١( ‏ه الأول على مدى نووي كما هو موضحاً في التتابع المثالي رقم‎ ‏وينتهي بنيوكيوتيد في الموضع 7؟؟ أيضاً‎ VEY ‏بنيوكليوتيد في الموضع‎ ‏يفضل أن يشمل الجبزء الثاني الشفرى من الجزء الثابت للسلسلة‎ ‏وراني‎ Jal ‏البشرية . يمكن أن يكون الجزء الثاني جزء 3118 ذا‎ . Introns DNA ‏أو جزء من بناء‎ (Introns ‏متضمتاً‎ ( ‏الثاني شضفرة سلسلة بسيطة أو جزء منها ويتضمن‎ DNA ‏يحمل بناء‎ Ve ‏على:‎ ‏أ- الجزء الأول والذي يحمل شفرة متغيرة وتحوي على التوالي على‎ ‏بنية ومناطق مفرطة التغيير وتكون المناطق مفرطة التغيير‎ ‏لتتابع حمض أميني‎ CDR3 ‏؛‎ CDR2 ‏السابقة هي على التوالي 0011 ؛‎ ‏الجبزء الأول‎ Tayo )7( ‏كما هو موضحا في التتابع المثالي رقم‎ yo ‏بنظام شفرى يحوي أول حمض أميني للميدان المتغيير وينتهي بنظام‎ ‏شفرى يحمل آخر حمض أميني للميدان المتغير.‎ . ‏ب- الجزء الثاني والذي يحمل شفرة جزء ثابت لسلسلة بسيطة أو‎ oo ‏جزء منها حيث يبدأ بشفرة لحمض أميني للجبزء الثابت للسلسلة‎ ‏الببسيطة وينتهي بنظام شفرى يحمل الحمض الأميتي الأغخير‎ v. ‏للجزء الثابت أو جزء منها متبوعاً بنظام شفرى غير مدرك.‎ ‏ويفضل أن تكون شفرة الجزء الأول للميدان المتغير المحتوية على‎ ‏تتابع حمض أميني مماثئلة فعلياً إلى تتابع الحمض الأميني كما هو موضةاً‎ ‏في التتابع المثالي رقم (7) مبتداء بحمض أميني في الموضع )1( ومنتهياً‎ ‏والأكثر تفضيلاً أن يوي الجبزء‎ . ٠١4 ‏أميني في الموضع‎ aes Yo )7( ‏الأول على تتابع نيوكليوتيدي كما هو موضحاً في التتابع المثالي رقم‎

Cams ‏بنيوكليوتيد في‎ Lei YEE ‏مبتداء بنيوكليوتيد في الموضع‎ yo

سل 000 أيضاً يفضل أن يحمل الجزء الثاني الشضفرى للجزء الثابت لسلسلة بشرية بسيطة ؛ الأكثر تفضيلاً أن يكون الجزء الثابت لسلسلة 1 بشرية. في كل من البناء الأول والثاني ل ‎DNA‏ أن ينفصل الجزء الأول من ‎٠‏ الجزء الثاني بواسطة ‎Intron‏ المتواجد بين الجزء الأول والثاني فإنه يفضل إدراج محسن ‎enhancer‏ . يمكن أن يكون متكلباً وجود هذا العنصر الوراثي الذي ينسخ ولا ‎J‏ والأكثر تفصيلاً أن يتضمن كل من البناء الأول والثاني ل ‎DNA‏ على محسن من جين ثقيل وعلى نحو مفيد ذا أمسسل بشرى. 0 ويتضمن البناء الأول أو الثاني ل ‎DNA‏ على نحو مفيد على جزء الث والذي يقع أعلى الجزء الأول وحيث يحمل شفره جزء من الببتيد الثابت ؛ يبدأ هذا الجزء الثالث بشفره تحمل أول حمض أميني وتتتهي بآخر حمض أميني من الببتيد الشابت. ويتطلب هذا الببتيد فرز السلاسل عن طريق الكائنات المضيفة ‎Aly (Adal)‏ ترمز إليها ‎Ay‏ تزال على ‎١‏ التوالي بواسطة الكائنات المضيفة ‎host organism‏ . ويفضل أن يكون الجزء الثالث من البناء الأول ل ‎DNA‏ الشفرى أن يحمل ببتيد ثابت ذا تتابع حمضي أميني مطابق فعلياً إلى تتابع الحمض الأميني . الموضح في التتابع رقم ‎)١(‏ ؛ مبتداء بحمض أميني في الموضع ‎Vim‏ ‏ومنتهياً بحمض أميني في الموضع ‎١ .١-‏ ‎Lady,‏ يفضل أن يحمل الجزء الثالث من شسفرة بناء ‎DNA‏ الثاني على - ض ببتيد ثابت ‎aia‏ على تتابع حمض أميني كما هو موضحاً في التتابع المثالي رقم (7) ؛ ‎fa tsa‏ بعمض أميني في الموضع ‎Y=‏ ومنتهياً بحمض أميني في الموضنع ‎N=‏ ‏يحل كل من بناء ‎DNA‏ محل الآخر تحت تتابعات مراقبة مناسبة ؛ ‎vo‏ وبخاصة تحت مراقبة لمادة محفزة مناسبة . يمكن استعمال أيسة صنف من المواد المحفزة ؛ بشرط أنها تتكيف مع الكائن المضيف والذي

Ae ‏من أجل قدرة إحدى الجينات على تعديل الكائن‎ DNA ‏ينقل إليه بناء‎ ‏الحي.‎ ‏على أية حال ؛ عند حدوث التعديل بواسطة الجينات للكائن الحي في‎ ‏خلايا الثشييات ؛ فإنه يفضل بصورة خاصة أن تستعمل مادة محفزة من‎ ‏يمكن أن ينتج الجسم المضاد‎ . immunoglobulin ‏م جين غلوبيوليني مانع‎ ‏المرغوب في خلية استنبات أو في ناقل حيواني للجينات.‎ ‏يمكن الجصول على الناقل الحيواني للجينات المناسبة طبقاً إلى‎

DNA ‏طرائق قياسية والتي تشمل حقن دقيق إلى البيض ايمل بناء‎ ‏الأول والثاني تحت ظروف مراقبة مناسبة محولاً البيبض المحضر إلى‎ ‏حملاً كاذباً مناسبة ومنتقي من جينات معدلة من نفس‎ Alda ‏إناث‎ ‏الجسم المضادة من خلية مستنبتة ؛ فإنه يجب أن يكون بناء‎ Jd

Jet ‏أولاً أن يتصل بجين مفرد ناقل معدل للكائن الحي أو إلى‎ DNA ‏منفصلان ولكن جينات متوافقة ناقلة للكائن الحي ؛ وتكون الأخيرة‎ ‏أكثر تفضيلاً.‎ ‏طبقاً لذلك ؛ تمدنا البراءة أيضاً بجين ناقل للكائن الحي قادراً على أن‎ yo ‏يتكرر ( يتضاعف ) في سلسلة خلية النوية البديلة أو الأصلية والتي‎ ‏واحد كما نكر من قبل.‎ 0178 sly ‏تضم على الأقل على‎ ‏ينقل فيما بعد إلى‎ DAN ‏يشمل كل ناقل معدل للكائن الحي على بناء‎ ‏كائن مضيف مناسب عندما يفصل بناء 037 فإنه يدخل إلى ناقلين‎ ‏يمكن أن ينتقلا بصسورة منفصلة ؛‎ al ‏الجينات معدلة للكائن‎ yp, ‏واحد أصناف من الناقل لكل خلية ؛ أو إنتقال مشترك ويفضل إذا‎ Sik ‏الأخير.‎ Jaa) ‏ويمكن أن يكون الكائن المضيف المناسب هو مل لبككريا‎ ‏الخميرة أو مجموعة خلية ثدييات ؛ ويفضل الأخير . والأكثر تفضيلاً‎ close ‏ليمفاوي مثل‎ Jd ‏تكون مجموعة خلية تدييات ذا‎ vo ‏هيبردوما ء؛ أو خلية بكترية عادية ؛ ولكن لا تعبر عن أية سلسلة بسيطة‎ sail ‏أو كبيرة لجسم مضاد داخلي‎

YoY yao ‏يحتوي الكائن المضيف على عدد كبير من النسخ‎ of ‏أيضاً يفضل‎

Ada ‏ا الناقلة لكل خلية . عندما يكون الكائن المضيف هو سلسلة‎ ‏ثدييات فإنه يمكن أن تصسل إلى هذا الهدف المرغوب عن طريق تكبير‎ ‏عدد النسخ طبقاً إلى طرائق قياسية تنتقي طرق التكبير لكي تزيد مقاومة‎ ‏م العقار ؛ تحمل المقاومة السابقة بواسطة الجبين الناقل المعدل للكائن‎ ‏الحي.‎ ‏طبقاً إلى سمة أخرى للبراءة ؛ فإنها تعطي طريقة لإنتاج سلسلة‎ ‏كائنات والتي تحول‎ lid )١( ‏حيث تتضمن‎ CD25 ‏متعددة لجزيئ ربط‎ ‏استخلاص جزيئ ربط‎ )7( sel ll ‏من‎ DNA ‏إلى البناء الأول والثاني ل‎ ّ ‏نشط من المستتنبت.‎ ©0025 ٠ ‏وبالتالي ؛ تستخلص بإنفصال السلاسل الكبيزة والبسيطة ويعاد تشكيلها إلى ض‎ ‏جزيئ ربط نشط بعد إعادة مضاعفة خارج الجسم البشسري . وتكون‎ ‏للطرق‎ AL ANT ‏طرق إعادة التشكيل معروفة في هذا المجال ؛ وتعطى‎ ‏أو في البراءة الأوربية‎ ١70774 ‏بصورة خاصة في البراءة الأوربية‎ lad ‏لذا تتضمن الطرق‎ 179077 ‏الأول للبسراءة‎ DNA ‏إستبات الكائن الأول حيث يتحول إلى بناء‎ -١ . ‏واستخلاص السلسلة الكبيرة السابقة أو جزء منها من المستنبت.‎ ‏الثاني‎ DNA ‏إستبات الكائن الثاني حيث يتحول بواسطة بناء‎ -" ‏للبراءة واستخلاص السلسلة البسيطة أو جزء منها من المستبت.‎ © DRps ‏إعادة التضاعف خارج جسم الكائن الحي لجزيئ ربط‎ -* Y. ‏النشط من سلسلة كبيرة أو جزء منها والتي نحصل عليهما من‎ ‏والسلسلة الببيطة أو جزء منها كما نحصل عليه في‎ )١( ‏الخطوة‎ ‎| AY) ‏الخطوة‎ ‏بطرق مماثلة ؛ تعطى أيضاً طريقة لإنتاج سلسلة مفردة أو مجال‎ 0 ْ | ‏حيث تتضمن:‎ CD25 ‏مفرد لجزيئ ربط‎ vo

DNAPL mak up ‏استنبات كائن حيث يتحول‎ )١( ‏التوالي لشضفرة تحمل سلسلة مفردة أو مجال مفرد لجزيئ‎

ربط 0025 للبراءة (7) استخلاص الجزء السابق من المستتبث. ‎(Y)‏ تبدي جزيئات ربط 0025 للبراءة فعالية جيدة جداً لتعديل المناعة كما هو موضحاً ؛ على سبيل المثال في ‎o‏ الاختبار الأحيائي 1011 لخلية لنفاذية ( أكبر وآخرون ؛ مجلة المناعة 5460 11971 - 778 ). ل“ ويعتبسر بضفة عامة أن يكون ‎mixed lymphocyte reaction MLR‏ خارج الجسم البشري ‎sila‏ النقل الألوجينية ‎allogevelc transplant‏ حيث تؤدي إلى الرفض داخل الجسم.

(MIR) ‏تثبيط تفاعل‎ -١ ٠ ‏محضر من المعطى الأول - تضاف‎ HPBM ‏ميكرولتر من‎ ٠٠١ ‏يقسم‎ ‏بتركيزات متغيرة من جزيئ البراءة‎ 110314 "٠١ ‏عينات تحتوي على‎ ‏تتراوح من صفر - 00* نانو جم / مالي لتر (شضاملاً تلك القيم‎ ‏ميكرولتر من القاسم التام‎ ٠٠١ ‏المحددة ) . ثم يخلط كل عينة مع‎ ‏من‎ HPBM ‏1.8آ] وغير قابل للتمازج - فافض‎ ٠١ ‏م المحتوى على‎

المعطى الثاني أو 110314 بدون خلايا 1. يحضن المخلوط لمدة + أيام عند درجة حرارة ‎SPY‏ يضاف .. ‎١‏ عنمن ‎methyl °H - thymidire‏ إلى ‎٠١‏ ميكرواتر - بعد ‎١‏ ساعات يقاس تكاثقر الخلية بواسطة الدمج الإشعاعي . في هذا الاختبار الأحيائي ْ ‎+٠.‏ الخاص ؛ يوضح جزئيات البراءة تعديل للمناعة خارج الجسم الحي عند تركيزات تتراوح من ‎١,“‏ نانو جم / مللي لتر كما هو ‎mse‏ : في شكل . يثبط نمو ‎5٠‏ 7 من الخلايا عند ؟ نانو جرام / مللي لتر. يمكن تدبير الفعالية المعدلة للصناعة لجزئيات البراءة بواسطة ‎Yo‏ قياس منع إجابة 1103134 لجسم غريب نوعي أو منع 17-2 يعتمد على تكاثر خلية ‎Lympho last ) T Adal‏ - 1 ) كالتالي: "- تثبيط إستجابة الجسم ‎antigen cy al‏ لخلايا الدم البشرية ‎HPBH‏

١ ‏التوعية ( لقاح السسل )ء‎ PPD ‏تثبيط جزئيات البراءة بكافاءة تولد‎ ‏الإجابة مركزة بخلية على شكل 1 وتشضير إلى قدرتهم على‎ HLA ‏كائنة‎ ‎. receptor ١ ‏تثبيط النمو الداخلي للربط 1-2 الناتج إلى ملقية‎ pall ‏داخل جسم الكائن الحي ؛ يتوقع أن تلعب الاستجابات النوعية‎ ‏الغريب دور حاسم من بداية كبت المناعة الذاتية وكبت نقل الأعضاء.‎ ٠م‎ "٠١ ‏ومحتوية على‎ yas JI HPBM ‏ميكرولتر من‎ ٠٠١ ‏تقسم عينات‎ ‏والذي يضاف إليه تركيزات مختلفة من جزئ البراءة والذي‎ 41 ‏هذه القيم‎ Lamia) ‏يتراوح من صفر - 00" نانو جم / مللي لشر‎ / ‏ميكرو جم‎ ٠١ Sel ‏عند التركيز‎ DPP Judd ‏المحددة ) ولقاح‎

Cai ad apa ‏أيام‎ ١ ‏مللي لتر . تحضن العينات لمدة‎ + ‏ميكرولتر . بعد‎ ٠١ ‏حجم‎ methyl 315 - thymidire ‏من‎ pCi) ‏يضاف‎ ‏ساعات من التحضين ؛ يتم قياس تكاثشر الخلية بواسطة الامج‎ : ‏الإشعاعي.‎ ‏في هذا الاختبار الأحيائي ن تبين جزئيات البراءة فعالية تعديل‎ tame ‏نانو جم / مللي لتر كما هو‎ ٠١ ‏م للمناعة عند تكريزات‎ / ‏نانو جم‎ ٠٠ ‏من الخلية عند تركيز‎ 7 9٠ ‏شكل 7 حيث يثبط نحو‎ ; 1172 ‏المعتمدة على‎ T ‏تثبيط تكاثر خلية الليمفوبلاست‎ -*# ْ ‏تثبط جزئيات البراءة بفعالية 11.2 المعتمدة على نمو طبقة‎ ‏أو 777. يتوقع أن‎ MLR ‏خلوية 7 بشرية مستحدثة بواسطة محفز‎ 2. ‏تلعب تلك الخلايا دور عظيم في تواصل المناعة الذاتية وأعراض‎ .) ‏الكبت ( الرفض‎ 0 ‏أو 10118 ذات عمر‎ PPD 7٠١ X Yo ‏تحتوي ثلاثة من المستتبتات على‎ ‏ميكرولتر لمدة 8؛ ساعة‎ ٠٠١ ‏المحفزة في حجم‎ HPBM ‏أيام . وتحضن‎ ‏نانو جم // ملي‎ ٠١ ‏أو‎ ٠١١٠ ‏درجة حرارة 7١م وفي وجود‎ ds Yo ‏لتر مادة كافية 11-2 وجزئ البراءة عند تركيزات مختلفة تتراوح من‎ 0 ‏ميكرو جم / مللي لتر ( شاملاً القهم المحدة )قم‎ ٠١ - ‏صفر‎

الل يضاف تيميدين 108 - 317 ). بعد 7 ساعات ؛ يقاس تكاشئر الخلية بواسطة الدمج الإشعاعي. في هذا الاختبار الأحيائي ؛ تبين جزئيات البراءة فعالية تعديل المناعة عند تركيز حوالي ١ار‏ ميكروجم /مللي لتركما هو موضهاً في م > الأشكال 18 8 ب 8 ‎cz‏ + د لذلك تمدنا البراءة أيضاً ب : ْ ‎-١‏ استعمال جزيئ ربط 0025 للبراءة في كبت مناعة نظام المناعة البشري. "- طريقة لكبت مناعة نظام المناعة البشرية حيث تتضمن إعطاء كمية فعالة لكبت المناعة من جزيئ ربط 5 للبراءة إلى ‎vs‏ المرضى عند الحاجة للعلاج. #*- مستحضر صيدلي لكبت مناعة نظام المناعة البشضري حيث تتضمن جزيئ ربط 0025 للبراءة وناقل مقبول صيدلياً أو مادة مخففة للزوجة الدم مقبولة صيدلياً. وبصورة خاصة ؛ يكون جزيئ الربط 0025 للبراءة مفيداً في منع أو م معالجة الآثار العرضية لتقيو التطعيم. تكون الجرعة المناسبة لدواعي الاسعمال هذه متغيرة معتمدة على سبيل المثال على جزيئ البراءة الخاص بالاستعمال المضيف ؛ أسلوب ض التعاطي ؛ طبيعة الظطروف وظروف الإنقاذ المعالجة.: : على أية حال ؛ في حالة الاستعمال للمعالجة الوقائية ؛ تظهر ‎ab‏ ْ .+ مرضية بصورة عامة ناتجة من جرعات يومية تتراوح من ١ر‏ - مللي جم إلى ‎١‏ مللي جم / كجم من وزن الجسم ويجب زيادة هذه الجرعات حتى تصل إلى معامل ‎SE‏ تعالسج حدوث الرفض عند حدوثه فعلياً. يتم إعطاء جزيئ البراءة عن طريق المري أو الإبمعاء ؛ والطبيعي ‎vo‏ يدخل عن طريق الوريد ؛ على سبيل المثال ؛ في مقدمة الذراع أوأية وريد سطحي.

الا تتضمن المعالجة نمطياً على تعاطي جزيئ البراءة يومياً أو مرة كل أسبوع لمدة ؟ - ؛ أسابيع ؛ بداء من يوم نقل الأعضاء ؛ ويفضل بعض الساعات قبل النقل. وتكون جزئيات البراءة مفيدة ‎Load‏ في معالجة الخلايا الخبيشة م للجسم الغريب ‎CD25‏ على سبيل المّال معالجة خلية ‎T‏ لوكيميا وأنواع أخرى من اللوكيميا والأورام الليمفاوية. | ْ ولهذا السبب ؛ يمكن استعمال جزيئ الربط 6025 في شكل مقترنات إشعاعية حيث يبعث الجزيئ المقترن بنويدة إشضعاعية لجسيمات لفا. ويمكن أن تكون جزئيات البراءة مفيدة في معالجة أو المعالجة ‎٠‏ الوقائية لعدوى 1117 وقد ظهر أن فيروس 11177 يتطلب تكائر خايا 7 لكي يتناسل ولذلك يتم تثبيط تكاثر خلية 7 بواسطة وقف الجبسم المضاد ‎CD25‏ وأيضاً يثبط تكائقر الفيروس. يمكن تحضير المستحضرات الصيدلية للبراءة بطرق مألوفة . ويفضل تحضير المستحضر طبقاً للبراءة في شسكل بودر متجمد لحفظها : تذاب ‎yo‏ الجرعات العاجلة في ناقل مائي متاسب ؛ على سبيل المثال ؛ ماء معقم عند الحقن أو محلول ملحي فسيولوجي معقم. عندما يرغب في عمل محلول بكمية كبيرة للتعاطي عن طريق 0 ‎Alay‏ في الوريد مفضلاً ذلك على إدخال قرص فإنه من المفيد أن يتحد زلال ‎Jamal‏ البشري ‎human Serum albumin‏ أو ‎aa‏ الخساص ْ ‎vy,‏ بالمريض إلى المحلول المحلي عند فترة الصياغة. ّ ويمنع تواجد المزيد من ذلك البروتين الخامل فسيولوجياً من فقد الجببم المضاد الموتوكل وني عن طريق الإدمصاص على الأسطح ‎plat‏ ‏والأنابيب المستعملة مع المحلول المدمج. يتراوح التركيز المناسب للاستعمال عند استعمال الزلال من هر - إلى ‎vo‏ 4,0 7# من وزن المحلول الملحي. طبقاً إلى غرض آخر للبراءة ؛ فإنه قد أكتشف حديثاً أنه يمكن تحقيق نتائج مفيدة بصورة خاصة بواسطة استعمال جزئيات ربط في توافق ؛ ‎YoY‏

ا كي تنشسط خلايا 1 تتميز جزئيات الربط السابقة برباطين لجسمين غريبين لخلايا 1 نشطة. ويفضل استعمال زوج من جزئيات أتتجين ‎antigens‏ مضسادة مختلفان ؛ يتميز كل واحدة بجسم مضاد مختلف وبذلك على الرغم أن ‎٠‏ جزئيات الأجسام الغريبة المضاد تميز الانتجن السطحية لخلية 1 نفطةء؛ فإنهم لا يتنافسون مع بعضهم البعض على نفس موضع الربط لخلايا 1 النتشطة. ويفضل أن يكون أحد الجزئيات الغريبة الرابطة هو جزئ ربط طبقاً ‎oli‏ تمدنا البراءة الحالية بمستحضر كابت للمناعة يتضمن على مخلوط مكون على الأقل من جزئ ربط 0025 واحد وعلى الأقل على جزيئ ربط لجسم غريب مضاد واحد ويكسون الجسم الغريب الواحد على نحو مختلف عن 0025 الذي يكون مميزاً بوجود خلايا 1 نشطة. علاوة على ذلك تضيف البراءة على الأقل جزئيات ربط للأجسام م١‏ _الغريبة لخلايا 1 نشطة وفي ترابط مع بعضهم لكي تستعمل في ‎GAS‏ ‏مناعة النظام المناعي في الثدييات ؛ تتميز جزئيات الربط الغريبة المضادة السابقة بتواجد خاصتين مختلفتين للأأجسام الغريبة من خلايا 1 نشطة ويكون أحداهما الجسم المضاد ‎CD25‏ ؛ يعني التعبير ( جسم ربط غريب مضاد لخلايا 1 نشطة ) إلى جزيئ ربط يتفاعل بقوة مع خلايا 1 النشطة بينماً يتفاعل ببطء أو لا يتقاعل مع خلايا 7 الباقية - ويفضل أن تكون جزئيات الربط الغريبة المضادة هي جزئيات غلوبيولينية تامة المنع ؛ والأكثر تفضيلاً أجسام مضادة أحادية النسيلة فارية أو كيميرية أو : بشرية ؛ وبخاصة أجسام مضادة أحادية النسيلة كيميرية . وتكون الأجسام المضادة الأحادية النسيلة ‎CD25‏ المفضلة هي تلك المحتوية على ‎CDRs‏ ‎vo‏ مع تتابع الحمض الأميني كما سبق الوصف. على نحو مفيد ؛ يمكن أن يشتمل مستحضر البراءة أو أن يستعمل في توافق مع عقار كابت للمناعة ‎Jota‏ سيكلوبورين أ ‎Cyclosporin A‏ . ٍ vo ‏الغريبة‎ al was, faa ‏وتصنف الأجسام المضادة الأحادية النسيلة‎ ‏كما هو مثبت‎ 017 de pana ‏لخلية 7 نشطة غير 0025 نمطياً في‎ ‏خلايا‎ )١( ‏بواسطة معمل بوسطون ويقرر في سمات الكرية البيضاء‎ ‏لنفادية 1 بشرية بواسطة راين هيرزر » هاينز ؛ نادلروبيرشتاين ؛‎ ‏ويظهر الجسم المضاد 007 متغاير الخواصن في‎ ١988 ¢ ‏م سبرنجر فيرلاج‎ ‏الباقية وعلى أية حال ؛ يزداد التعديل بقوة بزيادة‎ 1 WDA ‏من‎ 7 ٠ ‏التشاط زيادة ضعفين أو © أضعاف في الشدة ) لذلك يكون التوافق‎ .CD25 ‏مع جسم مضاد‎ CD7 ‏المضادة هو توافق بين‎ pled) ‏المتفضل‎ ‏طبقاً لذلك ؛ يتضمن المستحضر المفضل للبراءة على مخلوط من واحد‎ ‏سوياً مع واحد على الأقل من جسم‎ CD25 ‏على الأقل من جسم مضاد‎ ‏مضاد 007 ؛ والأكثر تفضللاً على جسم مضاد واحد 0025 مع جسم‎ ‏أيضاً يفضل أن يكون كلا من الأجسام المضادة من‎ CD7 ‏مضاد واحد‎ : IgG ‏الأيزوتيب‎ ‏في الطرق المختلفة للمارسة الأكلينيكية ؛ يمكن استعمال الجسمان‎ ‏المضادان بغير إلزام سوياً مع العقار الكابت لمناعة . ويفضل أن يخلطوا‎ ‏سوياً ويعطي المخلوط الطبيعي إلى المريض + ويكون الإجراء التالي هو‎ ‏إعطاء الأجسام المضادة واخيتارياً العقار الكابت للمناعة إلى المتلقي من‎ ; ‏مصادر منفصلة بأي تتابع ولكن في نفس المدة الزمنية. ض‎ ‏كما سبق‎ La) ‏يمكن تحضير التركيب وإعطائه عن طريق المري أو‎ ‏وصفه بالنسبة للجسم المضاد 0025 مفرداً . على التوالي ؛ يتم إعطاء‎ ‏المضادة‎ JL all ‏العقار الكابت للمناعة عن طريق الفم ويتم إعطاء‎ ‏الأحادية النسيلة عن طريق المري والإمعاء ؛ كل على حده أو كمخلوط.‎

Aa A en ‏لكي نساعد في عمل التركيبات المناسبة فإنه يمكن‎ ‏المضادة الأحادية النسيلة ونغهير إلزام العقار الكابت للمناعة متفصلين‎ ‏داخل نفس المادة الحاويمة مع تعليمات خلط التعاطي أو المرافقة‎ vo ‏للتعاطي.‎ yi ‏تشمل الأمثلة لمجموعات التركيب على محقنه عديدة الشكل البرميلي‎ ‏أو كبسولة مزدوجة تحوي مكونات جرعة منفصلة تحتوي على الأقل على‎ ‏جسيمان مضادان لخلايا 7 نشطة ؛ وتتميز الأجسام المضادة السابقة على‎ ‏الأقل جسمان غريبان مختلفان يميزان خلايا 7 نشطة ويكون أحدهم هو‎ .CD25 ‏الجسم الغريب‎ ٠ ‏الاستقصاءات حتى الآن أن تناول الأجسام المضادة في توافّق مع‎ Jas ‏بعضها البعض واختيارياً مع عقار كبت المناعة يكون خالياً من أية آثار‎ ‏جانبية غير مقبولة وعند نسب الجرعات المستخدمة وأنه لا توجد أية فعالية‎ ‏للآثار الجانبية الناتجة من الأجسام المضادة المستعملة المفردة . للاستعمال‎ ‏في المعالجة الوقائية ؛ فإنه الجرعة المناسبة للاستعمال الطبيعي لكل مرة من‎ ٠ / ) 0025 ‏إلى 0,0 مللي جم من الجسم المضاد الأول ( متل جسم مضاد‎ ٠5 ‏كجم من وزن جسم المريض ؛ 0,06 = 4,0 مللي جم من الجسم المضاد‎ ‏من وزن جسم المريض . عندما يكون‎ pS / ) 007 ‏الثاني ( متل جسم مضاد‎ ‏عقار كبت المناعة هو سيكلوبورين أ فإنه الكمية التي ينصح بها من عقار‎ ‏م كبت المناعة حيث التي يمكن استعماللها اختيارياً من ¥ - © مللي جم / كجم‎ ‏من وزن جسم المريض عندما تؤخذ في العضل عندما تتتاول عن طريق‎ ‏كيلو من وزن الجسم. يمكن تناول‎ ١5-٠١ ‏الفم ويكون التركيز من‎ esd ‏مستحضر البراءة على أساس كل يوم أو أسبوعياً ويفضل أن تكون‎ oo ‏على الرغم من أن مستحضر البراءة يكون مصمماً على نحو مفيد‎ ‏للاستعمال في المعالجة الوقائية من أحداث تقيؤ التطعيم ؛ يمكن أن يمتد‎ +. ‏الاستعمال إلى معالجة أسباب التقيؤ عندما تحدث فعلياً . ولهذا السبب يجب‎ .4 ‏زيادة الجرعات إلى معامل‎ ‏وتعرف الأجسام المضادة الأحادية النسيلة الفأرية المناسبة للاستعمال في‎ ‏البراءة الحالية بذاتها.‎ ‏يمكن الحصول على العديد من الأجسام المضادة الأحادية النسيلة قبالة‎ Yo ‏نشطة من مزارع الاستنبات من العديد‎ T ‏أجسام غريبة مضادة لسطح خلية‎ ‏من بلدان العالم وبخاصة جمعية روكفيل ؛ ماريلاند لاستنبات الصنف‎

ا الأمريكية أن تمد بأجسام مضادة أحادية النسيلة مناسبة أو هيبريدوما مفرزة مثل الأجسام المضادة. ويكون مثال الهيبرويدوما المفرزة للأجسام مضادة أحادية النسيلة ‎CD7‏ ‏التي يمكن استعمالها في البراءة الحالية وتكون متاحة من ‎ATCC‏ وهي © 1ل13-3. : وتكون الأجسام المضادة ‎CD7‏ الأخرى مقل ‎CHH380 « RFT2‏ ( جسم مضاد كيميرى ) يمل الجزء المضاد ‎CD25‏ فوق ذلك على ‎RFT-5‏ . ومشتقاتها الكيميرية كالوصسف السابق ( فولتون آخرون ؛ كلين ايمانول ؛ ‎١588 ( Sls ale)‏ ) 1676 )؛ جسم مضاد ‎Anti-tac‏ ‎٠‏ ( يوشى ياما آخرون ؛ ج إيمانول ‎١97 : (£) ١١ ) ١98١‏ ) ؛ الجسم المضاد المونوكلوني ‎.Campath‏ ‏ويتم شرح التأثير المعادن لتوافق من أجسام مضادة أحادية ‎AL all‏ , 007 خارج جسم الكائن ‎al‏ بواسطة الاختبار الأحياقكي ‎MIR‏ السابق وصفه ؛ وأيضاً داخل جسم الكائن الحي بواسطة بعض ‎yo‏ الفحوص الأكلينيكية للمرضى. ويلاحظ في الاختبار الأحيائي ‎MLR‏ تثبيط امتصاص 11-108 في المستبتات التي يضف إليها الجسم المضاد المونوكل وني ‎(RFT2)‏ ‎CDT‏ أو ‎(RFTS) CD25‏ مفرداً فقط ؛ أيضاً توجد درجة تتبيط أكبر فعلياً عندما يستخدم كل من الأجسام المضادة بنفس درجة التركيز الكلية ْ ‎٠ +».‏ ويكون ‎MIR‏ خارج الجسم الحي مكافي إلى إجابة النقل الألوجينية حيث تؤدي إلى الرفشض داخل الجسم البشري بينما يكون التثبيط المطلوب من قبل يكون مكافي إلى كبت المناعة داخل جسم الكائن البشري. عند وجود 101785 مضاف إليه جرعة تتراوح من ‎٠١‏ نانو جم / - مللي لتر إلى ‎٠٠١‏ ميكروجم / مللي لتر ؛ وفي ‎Ja‏ وجود الأجسام ‎vo‏ المضادة الأحادية النسيلة 007 أو 6025 توجد زيادة في كمية الجرعة الكلية لتثبيط 71-708 بالمقارنة إلى السيكلوبورين تأثير مناع أكبر من أية توافقات أخرى.

سل ا في الفحوص الأكلينيكية ؛ يختار المرضى الذين يعانون من نقل الكلية ؛» الكبد أو القلب المداواة بواسطة المعالجة الوقائية . وفي يوم ‎Cdl‏ ‏ساعتان قبل إجراء الجراحة ؛ يتم إعطاء حقنة عن طريق الوريد من جسم مضاد 0025 كيميري من المثال )0( سوياً مع الجسم المضاد ه 007 الكيميري ‎083HHC‏ وبجرعة ‎oY‏ - مللي جم من كل جسم مضاد / كجم من وزن الجسم . 0 يومان بعد إجراء الجراحة ن تعطى حقن مماشل من كل من الجسيمان المضادان بنسبة ‎١,4‏ مللي جم/كجم من وزن الجسم وتم تكرر في كل أسبوع لمدة شهر واحد. ‎Ve‏ ويتم إجراء الحقن داخل الوريد كما يلي: تمزج الأجسام المضادة المتواجدة بحالة متجمدة لحفظها سوياً وتشتت في ‎٠‏ مللي لتر محلول محلي متعادل معقم يحتوي على 74:69 من وزن زلال الإنسان. : يعطي هذا الإنتشار الملحي إلى المريض لمدة ‎Ye‏ دقيقة . يتلقى المريض و أيضاً مداواة بسيكلوبورين قياسي ولم يعاني أية مريض من آثار عرضية ‎all‏ 5 خلال شهر واحد من زمن المداواة. شرح مختصر للرسومات: يوضح شكل ‎١‏ رسم بياني لبناء جزيئ 150 والشسفرة الجينية لسلسلة بسيطة وسلسلة كبيرة. 7 يوضح شكل أ ب عن رسم بياني ترتيب مجال تغير لسلسلة بسيطة أو كبيرة إلى بنيسة ‎(FR)‏ ومناطق مفرطة التغيير ‎(CDR)‏ ‏ويعبر شكل ‎TY‏ ؟ ب عن تحليل ل 018 وراثي مستوعب بواسطة 1 لهيبريدوما فأريسة: ‎RFTS - IgG2a -١‏ ‎RFT5 - IgG2a —-Y vo‏ ‎RFT4 -¥‏ ‎NS-1 —¢‏ nr ‏المشع المصسنف‎ DNA ‏باستعمال‎ Southern blot ‏بواسطة طريقة سزرن‎ ‏أو شضفرة‎ (IY) ‏لكل شفرة محسنة فأرية ذات سلسلة كبيرة شكل‎ 0 ٠١ ‏فأرية 06 ؛ 5 أجبزاء جينية 1 ( شكل ؟ب ) . يستوعب‎ ‏وراثي مع 110081 وتجزاً حجمياً في 70,8 هلام‎ DNA ‏ميكروجم من‎ ‏ا‎ . agarose gel ‏أجاروسي‎ ° . ‏تم تنقل الأجزاء إلى غشاء نيتروسليلوزي مع المختبرة بعد‎

X20 = ‏الغسيل ¢ يعرض الغشاء في شْريحة فلم كوداك أكس‎ ‏و‎ expressim vectors ‏عن الناقلات‎ fly ‏يعبر شتكل‎ 105172 - neo - huCrl

Psv2 -DHfR -Ep-huCk ‏و‎ ٠ ) ‏على جين مقاوم للأمبيسلين‎ plasmids ‏تتضمن كل بلازميده‎ pSV2-neo ‏و 5740 . تتميز‎ pBR322 ‏أمبسيلين ) ومصدر نسخ متطابق ل‎ ‏بوجود جين نيوميسيني ( نيو ) وجزء ثابت لشفرة جينية‎ - Crl (hu Ck) ‏بشرية‎ ‏يحصل بالتوالي على الناقلات النهائية لتعديل سلسلة كيميرية‎

DNA ‏5172م لجزيئ‎ - neo - 0:1 ‏بسيطة أر كبيرة بواسطة إدخالها إلى‎ ‏يحمل شفرة ببتيد ثابتة )1( ؛ ومجال متغير ( 7012 ) لسلسلة كبيرة‎ ‏ض‎ .RFT5-1gG cell pools ‏يعبر شكل 4 أ؛ 4 ب عن إنتاجية أحواض الخلوية المستقلة‎ ‏على التوالي طبقاً‎ (MIX ( ‏الباقية عند تركيزات متزايدة من الميتوتريكسات‎ ٠ 0 ‏إلى طريقة أ ؛ ب الموصوفة في مثال‎ ‏يعبر محور الناقل للمنحنى عن كمية الجسم المضاد المونوكلوني‎ ‏ساعة.‎ VY ‏خلية في‎ ٠١ / ‏الناتج في مللي جم‎

CDR ‏بواسطة علب‎ CDR ‏عن إحلالات بناءات‎ ٠ ‏يعبر شكل‎ ‏المتدرجة إلى الناقل المحتوى على ؛ مناطق بنبرية مندمجة سوياً.‎

سل يعبر شكل + عن تثبيط ‎MLR‏ بواسطة ‎(RFT5 -1gG2a)‏ (امة 76) () و )0( الأجسام المضادة الأحادية النسيلة الكيميرية البشرية الفأرية من البراءة ‎k)‏ ,12( + كل جسم مضاد مونوكلوني يحتوى على مجالات متغيرة كما هو م موضحاً في التتابع المثالي رقم ))( ( 3 ). ض يعبر شكل ‎V‏ عن تشيط إجابة ‎HPBM‏ المحددة ‎PPD‏ وعلاقتها بيسن ‎RFT5-1gG2a ( X)‏ مع (0 ) نفس الجسم المضاد المونوكلوني الكيميري البشري الفاري. ض يعبر شكل ‎A‏ عن تأثير ‎RFT5-IgG2a‏ ونفس الجسم المضاد المونوكلوني الكيميري البشري الفأري في تكاثر الخلية النفانية 7 ‎PPD‏ ¢ ( شكل 8 ب ؛ ‎(TA‏ وفي تكاشر الخلية الليمفاوية 7 ‎MLR‏ ( شكل +“ د + ج ). الوصف التفصيلى: عند تركيز 11.02 يتراوح من: : © نانو جم /مللي لتر (5) و ‎٠١‏ نانوجم/مللي لتر ( ) ‎٠٠‏ نانو جم / مللي لتر ‎(X)‏ ‏ض ويوضح الاختراع إنتاج مضاد كيميري ل 0025 لا تعتبر تحديداً لموضوعه: : ‎:١ Jw‏ ‎Y.‏ هجرة ‎CLONING‏ شفرة جينيسة ذات ‎Jae‏ متغير لسلسلة كبيرة من ‎RFT5-IgG2a‏ . يعزل ‎DAN‏ وراشي لهيبريدوما ‎(CD25, 1 a,k)RFT5-‏ ‎,k)RFT4 « (CD25, 70 ,k) RFTS - IgGl « IgG2a‏ 7 , 004 ). ومن خلية ميلوما غير معدية من الهيريدومات المسماة 1158-1 وتستوعب بواسطة 81 ثم تجزاً كل ال ‎DAN‏ المستوعية في نفس الهلام الإجاروسي.

١ ‏بعد الهجرة يحلل الهلام الأجاروسي بواسطة طريقة سزرن‎ 320-12061160 o . 7kb xbal - EcoRI DNA fragment naa uly ll ‏المستعملة‎ ‏حيث تحمل شفرة فأرية محفز ذو سلسلة كبيرة ( هينوتيسش آخرون ؛‎ .) ‏كل :84م‎ ) ١84 ( ‏مجلة المناعة‎ ‏في الهلام بعد التهجين‎ (bands ) ‏م حيث تتكشف * أنواع من الحزم‎ kb EcoRI ‏كما هو موصوف في شكل ؟. ويكون 1,0 جز‎ ‏فيها 1158-1 ؛ خليسة‎ Lay ‏المستوعب الخلايا المتصلة‎ DNA ‏الموجودة في‎ ‏ميلوما غير معدية ليست على درجة من الأهمية . يكتشف فقط من‎ ‏المستوعبة لهيبريدوما‎ DNA ‏الموجودة في‎ 20081 7,4 bk ‏جزء‎ ‏ويعتقد أنه ينتج عن إعادة توزيع شاذة للجين.‎ 2715-1801 ٠

DNA ‏الذي يكون غير متواجد في‎ EcoRI 6,8 kb ‏يعتبر الجزء‎ ‏المهضوم لخلية غير معدية 1218-1 ؛ يكون ذلك الجزء المطلوب ولذلك‎ ‏تتم ثتتقية تالية لهذا الجزء بواسطة الهجمرة الكهربائية لهام‎ ‏أجاروسي تفاضلي.‎ : BGORI ‏إلى موضع تغيير‎ Kb ١ - © ‏أجزاء 0118 ذات‎ cloned ‏هجرة‎ yo .) ‏طور النمو‎ ( ZAP ‏لاكلة بكتريا‎

AIT ٠١ » ١ Jad ‏باستخدام الاختبار الأحيائي السابق وصفه ؛‎ ‏في لويمات الدم‎ DNA ‏مدخلة إلى‎ clones ‏مستعمرة‎ ١١ 2a 55 ‏مادة كافية‎ ‏المستعملة كمطعمات‎ ) PCR) ‏الآكلة للنيرات بواسطة تفاعل بوليمرز‎ .12 ‏الأولى شفرة جين فأرية‎ ( Oligonucleotide ) ‏يحمل الأليجوني و كليوتيد‎ ٠ 0 ‏حتى‎ RFTS ‏ويحمل الأوليجو نيوكليوتيد الثاني شفرة البداية لسلسلة‎ ‏تتابع سبق تحديدة ) ويكون المطعم الثاني‎ ( VY ‏الحمض الأميني رقم‎ ‏المطعم لكي يدخل في اعتباره الشسفرة الجينية الأكثر استعمالاً.‎ ( Primer) ّ ‏بواسطة‎ clones ‏مستعمرة‎ ) ١١ ( ‏الناتجة في كل‎ DNA ‏تحال أجزاء‎ : ‏طريقة سزرن باستعمال مختبر أوليجو نيوكليوتيدي بحمل شفرة تتابع‎ م٠‎ ‏بين الأحماض‎ RFTS ‏حمض أميني يشتمل على أحماض أمينية لسلسلة كبيرة‎ ‏والتي تصمم طبقاً إلى الشفرة الغالبة الاستخدام. ض‎ TY ‏و‎ 7١ ‏الأمينية‎ ‎yoy

الا" تبدو ال 4 مستعمرات ‎clones‏ الأكلة متطابقة باستخدام المختبر ‎Probe)‏ ). تتابع جزء من ‎DNA‏ المدخل والذي يحمل شفرة مجال متغير بواسطة طريقة اللاحقات - الديريدكسية ‎dideoxy‏ وتوضح في التتابع م المثالي رقم ‎١(‏ ). : ‎Jha‏ ؟: : ‎١‏ ‏بناء جين 87175 كيميرى ذا سلسلة كبيرة: - | 0 يحصل على 1 ‎kb‏ جزء 20081 بواسطة هضم غ01 لأحد التتبع الكلونات الملتهممة ومتضمناً الجين 8775ذا مجبال متغير وسلسلة ‎٠‏ كبيرة . يهجر ‎cloned‏ المجال المتغير ( متضمناً المحفز والمحسن ) إلى موضع تقييد ‎ECORI‏ للناقل المعدل للخلية النوبة الأصلية من الجزء الثابت من ‎pSV2‏ البشرية الحديثة ( ‎(ity pia‏ وآخرون ) ؛ كما هو ‎lage‏ في شكل ؟ أ ثم يعاد تصميم التتابع النيوكليوتيدي لشفرة الجين 2175 للمجال المتغير للسلسلة الكبيرة لكي ينهي احتمالية التغيير الأحيائي في م - الجين الناتج من تكاثر البلازميد. مقثال ؟: ‎CLONING‏ شفرة جين 8775 مجال متغير لسلسلة بسيطة: تعزل ويستوعب ‎DNA‏ الوراثي من هيبريدومات 215 215و ‎RFT4‏ ا ومن خلية غير معدية بواسطة ‎EcoRI‏ . ثم يجزاً كل ‎DNA‏ مستوعب ا .+ بنفس الهلام الأجاروسي . بعد التغير ؛ يحلل الهلام الأجاروسي بواسطة طريقة سزرن المستعطلة كمجس لجزء ‎DNA‏ المضسع م 2 المتضمن على الجينات الفأرية الخمسة ‎Tk‏ والجين الفأري م© . تظهر “ أصناف رئيسية من الأربطة ) ‎(Bands‏ ذات ف تخ ‎kb YA‏ في الهلام بعد التهجين ؛ كما هو موضحاً في شكل ؟ ب . وتكون الأجزاء ‎vo‏ الأكبر هي فقط المحددة لهيببريدوما ‎RFT5‏ ‏الأجزاء ‎EcoRI‏ المقسمة الحجم ذات ‎kb VA‏ ملتهمة ‎EMBLA‏ ( طور النمو ).

الإ _ تفصل الكلونات الملتهمة المتحدة بواسطة الاختبار السابق وصسفه ويهجن ‎2CLONES‏ ويتضمن كل على المندرج المطابق ‎Xb VA‏ توضح 4,460 ‎kb‏ الجزء البديل 150081 لكي تحتوي على شفرة كاملة لجين 18775 ذا مجال متغير لسلسلة بسيطة وينقل إلى البلازميد ؛ ه ‎pGEM‏ ( طور النمو ) . وبذا يصمم تتابع من 4,40 ©10من الجزيئ . يسلسل جزء من £8 ‎DNA Kb‏ المندرج الذي يحمل شفرة المجال المتغيسر يوضح التتابع والتتابع المثالي ‎Yd‏ مقثال ؛: ّ بناء 28715 كيميرى ذا سلسلة جين بسيطة ‎SUBCLONED Ye‏ ( ينقل ) ‎١١‏ 10 جزء ‎xbal‏ - 021« يحمل شفرة محسن لسلسلة كبيرة فأرية ) هنريتش وغيره ؛ أعلاه ) سوياً مع جزاء ‎Hindlll-sphl‏ ‏يحمل شفرة جزء ثابت بشري ا في ملتهمة 0018 ( طور النمو ). بعد تمزيق مواضع التقييد بواسطة ‎Ji) mutagenesis‏ ) جسزء 200801-71 المتضمن على تتابع للمحسن الفاري ذا سلسلة كبيرة بر م وجزء ثابت البشري ‎ik‏ موضع الطعم ‎EcoRI - BamHI‏ من ‎PSV2-DHFR‏ . يحصل على ‎PSV2-DHFR‏ بواسطة استدال جزئي ‎BAMHI-HINDII‏ ذا ‎PSV2‏ ‏- الجديد مع جزء ‎BAMHI-HINDII‏ يحمل شفرة للجين ‎DHFR‏ ثم يدل جزء 4,4 ‎kb-BcoRI-xbal‏ لمثال * في ‎-hu Cy‏ نر572-0115-5ط. ِ مقال ٠ه: ‎١‏ ‏.؟ تعديل جسم مضاد كيميري ‎RFTS‏ ‏يحول البلازميد الناتج في مثال ؟ ؛ ؛ في ‎da‏ ميلوما فأرية ‎١١8١ ATCC CRL ) SP/0‏ ) بواسطة استعمال جهاز حيوية الجنيات من ‎BIORAD‏ . تستعمل هذه التقنية لخلق ميكروبات ناقلة ثابتة عند تواتر عالي . ‎vo‏ تفشل خلية 802/0 أن نتتج سلاسل بسيطة وكبيرة باطنية التكوين وتكون حساسية إلى جدنتيسين ( جين ‎(EVA‏ عند تركيز 8,8 - مللي جم/ لتر . تتنمو خلايا 502/0 في وسط نمو معتاد ‎٠١ 0 + 2087 ٠١ + RPMI)‏

لو" بيتا - مركابتو ايثانول ) الناتجبة من الطور المسسجل للنمو ويغسل بواسسطة كاف ‎ELECTRO PORATION‏ ( بيوراد ). تضبط تركيز الخلايا عند ‎٠١ x ١‏ خلية / مللي لتر ‎AGL en‏ مللى لتر من المعلق الخلوي إلى ‎Ye - ١١5‏ ميكرجرام من كل بلازميد م يترك الخليط على الثلج لمدة ‎٠١‏ دقائق ثم يوضع المخللوط إلى ‎ard‏ ‏كهربي ‎YAY)‏ فولت ؛ ‎Yo‏ ميكروفاراد )/ ثم يترك مرة أخرى لمدة ‎١5‏ دقيقة . تتقل الخلايا إلى وسط النمو المعتاد وتحضن عند درجنة حرارة ١م‏ وفي محضن ثاني أكسيد الكربون. : بعد ‎dL JY‏ من التحضين ؛ يبداً الإنتقاء إلى مقاومة 418 6 . تعلق ‎٠‏ الخلايا في وسط منتج حديشاً يحتوي على ‎٠,4‏ مللى جم / مللي لتر ‎.G 418‏ تتمو الخلايا المستنبتة الناتجة بعد ‎VE - ٠١‏ يوم من التحضين وفي وجود 418 ‎G‏ . بعد أسبوعين من التحضين ؛ تختبر المادة النظامية للمستتبتات المتلاقيهية للتعديل 150 البشري في نمط شطيري ‎ELISA‏ ‏م ( سلسلة بسيطة - »1 بشرية مضادة / مادة طافية / أنزيمات فوسفاتية قلوية بشرية ‎IgG‏ مضادة ). يبين هذا الاختبار أنه تفرز جزئيات الأجسام المضادة التامة في كل المستنبتات وعند تركيسزات متغيرة في المدى من 50 - 500 نانو جم / ل ‎Ye‏ تفرز كميات كبيرة من الجسم المضاد المرغعوب لكي تنتقي الخاديا التي من خلالها جين ‎DFR‏ ‏تنفذ طريقتان منتقاه لمقاومة الميتوتريكسات ( ‎Methotrexate‏ ) كما في الوصف التالي ولهذا السبب ؛ تقسم الخلية المقاومة 418 6 ؛ كميات الدم المدمعة ويحدث التكبير طبقاً إلى طريقة أ ( زيادة ‎MTX‏ خلال ‎dde vo‏ ؟ أو 7,8 ) . أو طريقة ب ( زيادة ‎MTX‏ وفقاً لعامل ©( ‎YoY |‏ po ‏طريقةب‎ | EE

MTX Yee MTX aM ٠٠١

TMX | ‏للم‎ ١ | MTX | IM Yo.

MTX Mo | MTX | IM Oe

Ce ae ١ ٠ ‏تتضمن كل خطوة تكبير على تلقيح الخلية عند كثافة‎ ٠,4 ‏خلية / مللى وفي وسط النمو العادي يضاف إليه 418 6 عند‎ ‏عند التركيز المختار.‎ MTX ‏مللى جم / مللى لتر ومع‎ ° تفصل الخلايا والمادة الطافية ؛ بعد الحضانة ‎VY sad‏ ساعة . يرشقد عن إفراز الجسم المضاد بواسطة ‎ELISA‏ أو بواسطة ‎HPLC‏ وباستعمال عمود بروتين أ. توضح الأشكال ؛ أ؛ 4 ب إنتاج الجسم المضاد من بعض كميات الدتم ‎A sla)‏ تصل معظم الأحواض إلى أقصىي إنتاج لأجسام مضادة مميزة عند تركيز‏محددة.‎ MTX تنمو الأحواض المنتجة بواسطة تخفيف محدد وتنتقي أففضل ‎Vo‏ ‏مستعمرة ناتجة من الفئات العديدة من ال 0101158 تتراوح إنتاجية الل من ‎9١‏ = 56 مللي جم جسم مضاد مونوكلوني لكل ‎٠١‏ و خلية وفي ‎VY‏ ساعة. ينتقي الجسم المضاد من المادة الطافية المستتبتة بواسطة التحلل .( Protein A affinity Column ) ‏خلال عمود بروتين أ‎

سو التتابع المثالي رقم ‎١‏ ‏المادة الممنوحة: ( ‎(Subject mather‏ ميدان متغير لسلسلة قيلة غلوبيولينية مائعة من جسم مضاد ‎RFT5‏ ‏نمط التتابع: ‎Sequence type‏ تتابع نيوكليوتيدي وتتابع حمض أميني ه مقابل له. النتمط الجزئثى: دي ان أيه ‎(DNA)‏ ورافي ‎€4Y te hal)‏ نيوكليوتيد | 0 ّ المصدر الأصلي: هيبريدوما لأحد ‎ad‏ القوارض معالم التتابع النيوكليوتيدي قطاع في جين على شكل: ‎١47 : 7 ٠‏ - 4750 نيوكليوتيد. ‎Abe Ken 447 - $Y: D‏ ‎£4Y - 44/8 : 7‏ نيوكليوتيد. معالم تتابع حمضي أميني: ْ البتيد الثابت : من - ‎Yo - ١9‏ حمض أميني. ‎FRI vo‏ : من - ‎ ©0 - ١1‏ حمض أميني. ‎CDR!‏ : من - ‎Yo - YY‏ حمض أميني. ‎FR2 |‏ : من - ‎١‏ - £1 حمض أميني. ‎gma 11-6 =: CDR2‏ أميني. ‎FR3‏ : من - 97 - ‎AA‏ حمض أميني. ‎ CDR3 7‏ : من - 94 - ‎٠١١‏ حمض أميني. ‎FR4‏ : من - ‎١١7 - ١١7‏ حمض أميني. ‎ATG CAA TGT AAC 166 ATA CTT CCT TTT ATT 616 TCG GTA ATT TCA‏ ‎Met Gys te AsnTrp lle Leu Pro Phe lle Leu Ser Val lle Ser‏ 10- 15 ‎GTAAGGGGCT CACCAGTTCC ATATCTGAAA GAGGATACAG 717‏ ‎GACAATGACA 106‏

سالا ‎TCTACTCTGC 1611016166 AGAG GG GTC TAC TCA GAG GTT CAG CTC‏ ‎CAG 156‏ ‎Gly Val Tyr Ser Glu Val Gin Leu Gin‏ 1 1-

CAG TCT GGG ACT 616 CTG GCT AGG CCT GGG GCT TCC 616 AAG

ATG TCC 204

Gln Ser Glu Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser

TGC AAG GCT TCT GGC TAC AGC TTT ACC AGG TAC TGG ATG CAC TGG

ATA - 252

Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met His Trp lle

AAA CAG AGG CCT GGA CAG GGT CTA GAA TGG ATT GGT GCT ATT TAT

CCT 300

Lys Gin Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp lle Gly Ala lle Tyr Pro

GGA AAT AGT GAT ACT AGT TAC AAC CAG AAG TTC GAG GGC AAG

GCC AAA 348

Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn 60 Lys Phe Glu Gly Lys Ala Lys 60 65 : CTG ACT GCA GTC ACA TCC GCC AGC ACT GCC TAC ATG GAG CTC

AGC AGC 396

Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser 70 75 80 85

CTG ACA CAT GAG GAC TCT GCG GTC TAT TAC TGT TCA AGA GAC TAC

GGC 444

Leu Thr His Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Asp Tyr Gly 90 95 100

TAC TAC TTT GAC TTC TGG GGC CAA GGC ACC ACT CTC ACA GTC TCC

TCA 492

Tyr Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gin Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 105 110 115

م٠‏ التتابع المثالي رقم ‎Y‏ ‏المادة الممنتوحة: ( ‎(Subject mather‏ ميدان متغير سلسلة قيلة غلوبيولينية مانعة من جسم مضاد ‎RFT5‏ ‏نمط التتابع: ‎Sequence type‏ تتابع نيوكليوتيدي وتتابع حمض أميني ِ مقابل له. ‎bail‏ الجزئى: دي ان أيه ‎(DNA)‏ ورافي : الط_____ول: *#*؟؛ نيوكنيوتيد : المصدر الأصلي: هيبريدوما لأحد فصائل القوارض ّ معالم التتابع النيوكليوتيدي: ‎٠‏ 1078017 يقع من ‎٠٠‏ - 7771 نيوكليوتيد قطاع في جين على شكل 7 ‎Ais Wen 014 YEE:‏ قطاع في جين على شكل 13 :570 - ‎Aig Kangoo‏ معالم تتابع حمضي أميني: ض البتيد الثابت : من - ‎Y= - YY‏ حمض أميني. ‎FRi ~~ '°‏ :من - ‎YY - ١1‏ حمض أميني. ‎CDR‏ 0 : .من - ؛؟ - ‎YY‏ حمض أميني. ‎FR2‏ : من - 4 - ‎EA‏ حمض أميني. ‎ CDR2‏ : من - £4 - 00 حمض أميني. ‎FR3‏ : من - 86 - ‎AY‏ حمض أميني. ‎ CDR3 Ye‏ : من - 88 - 54 حمض أميني. ‎FR4‏ : من - 458 - ‎٠١4‏ حمض أميني. ‎ATG GAT TTT CAG GTG CAG ATT TTC AGC TTC CTG CTA ATC AGT GGC‏ ‎ot Asp Phe Gin Val GIn lle Phe Ser Phe Leu Leu lle Ser Ala Ser‏ 10- 15- 20 ‎GTAACAGAGG GCAGGGAATT TGAGATCAGA ATCCAACCAA AATTATTTTC‏ ‎CCTGGGGAAT 109‏

-Y q —_

TTGAGTCTAA AATACAGTTT TTTTTTCTTT TTCTTCATCT GAATGTTGGG

TGGTATAAAA 169

TTATTTTTGT TTCTCTATTT CTACTAATCC CTTTCTCTCT 11

TTTCTAG 226

TC ATA CTG TCC AGA GGA CAA ATT GTT CTC ACC CAG TCT CCA GCA

ATC 273

Val lle Leu Ser Arg Gly Gin lle Val Leu Thr Gin Ser Pro Ala lle -5 -1 1 : 5 10

ATG TCT GCA TCT CCA GGG GAG AAG GTC ACC ATG ACC TGC AGT

GCC AGC 321

Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser

TCA AGT ATA AGT TAC ATG CAG TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGC

ACC TCC 369

Ser Ser lle Ser Tyr Met Gin Trp Tyr Gln Gin Lys Pro Gly Thr Ser

CCC AAA AGA TGG ATT ATA GAC ACA TCC AAA CTG GCT TCT GGA GTC

CCT 417

Pro Lys Arg Trp lle Yyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro

GCT CGC TTG AGT GGC AGT GGG TCT GGG ACC TCT TAT TCT CTC ACA

ATC 465

Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr lle 60 65 70

AGC AGC ATG GAG GCT GAA GAT GCT GCC ACT TAT TAC TGC CAT

CAG CGG 513

Ser Ser Met Gln Ala Gin Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys His 610 Arg 75 80 85 90 ee

AGT AGT TAC ACG TTC GGA GGG GGG ACC AAA CTG GAA ATA AAA

Ser Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 95 100 ١ ‏جدول رقم‎ ‎Tad‏ تقعفيسلطةيمهرة ااا ‎Tey | FRI‏ حمض ‎(Gerais) gd‏ ‎CORI‏ | © - © حمض أميني ( مع أرقام مدرجة محتطة مثل ‎CB) Yo Te‏ اش م ا ‎gad eae 5. | OO‏ مع أرقم مترجة محتلة مل 61 أدبي ‎om‏ ‎tm | FR‏ حمض أميني ( مع أرقام مترجة مثل 47 أدبي حسي ) ‎CDRS |‏ هه - ‎٠١7‏ حمض أميني ( مع أرقام محتملة مدرجة مثل ‎1٠١‏ بي سي + ‎ood pd |‏ آياء جيهء كيه ). | ض ‎BRE‏ الك لكان اننا ‎ee‏ ال ‎vy | FRI‏ حمض ميتي ‎cit)‏ عرض عند صفر حالف عند ‎٠١‏ في ‎TE - v4 | CDRI |‏ حمض أميني ( مع أرقام مدرجة محتملة 1 بي ؛ سي 6 دي 0 ‎(died |‏ | ! ماك كر 7 ان رتل ‎emer‏ ا ‎aw‏ ‎AY ha | CDRS‏ حمض أميني ( مع أرقام مدرجة مثل 36 ‎mr‏ ‎| .) ‏أف‎ ٠ (0 fag) ‏امع‎ ga nv ta] FR

Claims (1)

1. -١؛؟-‏ عناصر الحماية ‎-١ ١‏ يشتمل جزء الرابط ‎CD25‏ على الأقل موقع ربط أميني محتوي على مجال ‎v‏ واحد والذي بدوره يحتوي على مناطق مفرطة التغيير 0011و ‎CDR2‏ ‎v‏ و 007383 ويحتوي 0081 السسابق على سلسلة ¢ حمض أمينسي ‎Arg - Tyr - Trp — Met — His amino-acid‏ ويحتوي ‎CDR2 °‏ السابق على سلسلة حمض أميني - ‎Ala-Tle-Tyr-Pro-Gly - Asn - Ser‏ ‎Asp - Thr - Ser - Tyr - Asn - Gln - Lys - Phe - Glu - Gly 1‏ ويملك 7 3 المذك ور سابقاً على سلسلة حمض ‎J A‏ مينسي ‎Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe‏ أو مكاففات مباشرة ‎q‏ منها. ‎٠‏ 7- جزء ربط 0025 وفقاً لعنصر الحماية ‎١‏ والذي يحتوي على الأقل ‎v‏ على موقع ربط جسم مضاد واحد يشمل: ‎(I v‏ المجال الأول يشتمل على التسلسل على مناطق مفرطة ¢ التغيير ‎CDR1‏ و 0082 و ‎CDR3‏ ويملك ‎CDR2‏ المنكور سلسلة حمض أميني ‎His - Met - Trp - Tyr - Arg‏ ويملك ‎js SA) CDR2 0‏ على تسلسل حمض أميفكي ‎١ Gly - Glu - Phe - Lys - Gln - Asn - - Gly - Pro - Tyr - Ile - Ala 7‏ ‎Tyr - Ser - Thr - Asp - Ser - Asn A‏ ويملك 0083 المذكوزر على ‎q‏ تسلسل حمض أميني ‎Phe - Asp - Phe - Tyr - Tyr - Gly - Tyr - Asp‏ . ‎١‏ ب) المجال الثاني يشتمل على تسلسل مناطق مفرطة التغيير ‎١١‏ 1و ‎5CDR2‏ 00383 ويملك ‎le ys Sl CDR1‏ تسلسل 7 حمض ‎Ser - Ala - Ser - Ser - Ser - Ser - Tyr - Met - Gln ix‏ ‎yy‏ ويملك ‎CDR2‏ على تسلسل حمض أمينسي - ‎Gln‏ ‎His - Arg - Ser - Ser - Tyr-Thr- 6‏ أو مكافقات مباشرة من ‎Vo‏ ذلك المصدر.

   ‎١‏ *- جزء ربط 0025 وفقاً إلى عنصر الحماية ‎١‏ يحتوي على الأقل ‎Y‏ موقع ربط جسم مضاد واحد إما يحتوي على مجال يمتلك ‎v‏ تسلسل حمض أميني كما موضح في التسلسل 10-280-1 مبتدثاً بحمض ‏1 أميني عند الموقع ‎١‏ ومنتهياً بحمض أميني عند الموقع ‎١١7‏ أو

   ‏. يحتوي على المجال الأول كما موضح ‎Gla‏ والمجال الثاني الذي . 1 يملك تسلسل حمض أميني كما موضح في التسلسل ‎[d-No-2‏ مبتداً ‎v‏ بحمض أميني عند الموقع. ) ومنتهياً عند الموقلع ‎Vet‏ أو مكافئ ‎| ‏مباشرة لذلك المصسدر.‎ A ‎١‏ 4؛- جزء ربط 025 وفقاً لعنصر الحماية ؟ أو ¥ يحتوي على الأقل ‏¥ على: ‎(f v‏ سلسلة ‎bl‏ المناعي الثقيل أو جزء من ذلك المصسدر ‏¢ يحتوي على: ‎(i) °‏ مجال متغيسر يشتمصل على مناطق فرط تغيير

   ‎.CDR3 « CDR2 ‏رو‎ CDR1 ‏متسلسلنة‎ 1 ‎CDRI ll apy ‏قسم ثابت أو جزء من سلسلة بشرية ثقيلة‎ (i) v ‎A‏ المنكور على سلسلة ‎Arg - Tyr - Trp - Met - His‏ ويحتسوي 4 2 المذكور سلسلة حمض أميني ‎Gly - Glu - Phe - Lys - Gln - Asn - Tyr - Ser - Thr - Asp - Ser - ١ ‏المنكور‎ CDR3 ‏فل ويملك‎ - 16 - Tyr - Pro — Asn - Gly ١١ : Asp - Tyr - Gly - Tyr - Tyr - Phe - Asp - Phe - ‏سلسلة حمض أميني‎ YY ‏ب) واحد من سلسلة مناعة الفلوبلين الخفيفة أو جزء منه‎ VY ‏يحتوي على سلسلة:‎ 3 ‏مجال متغير يحتوي في سلسلة مناطق مفرطة‎ (0) )( yo .CDR3 « CDR2 5 CDRI "8 ‏القسم الثابت أو جزء من السلسلة البشضرية الخفيفة‎ (iD) VY Ser - Ser - Ile - Ser - Tyr - Met ‏ويملك 00181 سلسلة حمض أميني‎ VA Ellas Asp - Thr - Ser- - Gln - Ser - Lys - Leu - Ala - Ser - 3

   اسع

   ‎Y.‏ 83 المذكور على سلسلة حمض أميني - ‎His - Gln - Arg - Ser - Ser‏ ‎Tyr- Thr- 71‏ أو مكافكات مباشرة لذلك المصدر. ‎١‏ *- جزء ربط 0025 وفقاً إلى عنصر الحماية ؛ يحتوي على الأقل 7 على: ( سلسلة ثقيلة تحتوي على مجال متغير يملك تسلسل حمنئض ¢ أميني كما هو موضح في السلسلة ‎Ba tie Id-No-1‏ بحمض ° أميني عند الموقع ‎١‏ ومنتهياً بحمض أميني عند الموقع ‎١١7‏ ‏1 والجزء الثابت من السلسلة البشرية الثقيلة و ل ب) سلسلة خفيفة تحتوي على مجال متغير يملك سلسلة حمض ‎A‏ أميني كما هي موضحة في السلسلة ‎Br fe Id-No-2‏ بحمض ‎q‏ أميني عند الموقع ١ومنتهياً‏ بحمض جلوتامك أميني عند ‎dial cl BI 5) Ea sal »"‏ 5 5 لذلك المصدر. ‎-١+ ١‏ جزء ربط ‎CD25‏ وفقاً إلى عنصر الحماية ؛ أو © والذي فيه القسم ‎Y‏ الثابت أو جزء من السلسلة البشرية ‎LEN‏ هي من النوع إلا ‎v‏ والسلسلة البشرية الخفيفة من النوع ؟ا. ‎-١7 ١‏ جزء من ‎DNA‏ الذي يحتوي على سلاسل مد نووي ‎uncleofide‏ ‎vo‏ ترمز إلى سلسلة مناطق مفرطة التغيبير ‎CDR3 5CDR2 5CDRI‏ ‎v‏ كما هي موضحة والسلسلة ‎1d-No-1‏ . ‎—A ١‏ وفقاً إلى عنصر الحماية رقم 7 فإن بناءً ال 7178 ترمز لسلسلة ‎Y‏ ثقيلة أو جزء من ذلك وتحتوي على: 1 أ) القسم الأول والذي يرمز لمجال متغير يحتوي على قوالب متعاقبة ومناطق مفرطة التغيير وتكون المناطق المفرطة 8 التغيير في سلسلة 0171© و 60012 و ‎CDR3‏ جزء من سلاسل ِ الحمض الأميني الموضحة في السلسلة ‎1d-No-1‏ وتبدي هذا الجزء ‎v‏ الأول برمز يرمز إلى الحمض الأميني للمجال ‎stad)‏ ْ ‎A‏ وينتهي شفره ترمز للحمض الأميني الأخير للمجال ‎q‏ المتغير و ei

   ‎١‏ ب) القسم الثاني الذي يرمز إلى القسم الثابت للسلسلة الثقيلة أو

   ‎١‏ جزء منه والذي يبتدي شفره ترمز إلى الحمض الأميني الأول

   ‎VY‏ للقسم الثابت من السلسلة الثقيلة وينتهمي شفره ترمز إلى ‎\V‏ الحمض الأميني الأخير للجزء الثابت أو جزء منه.

   ‎١‏ 4- بناءً ال ‎DNA‏ إلى عنصر الحماية ‎A‏ حيث يحتوي على القسسم

   ‏0 الأول الذي يرمز إلى مجال متغير يملك سلسلة حمض ‎inal‏ كما

   ‏8 الموضحة في السلسلة 10-20-1 ‎Gate‏ بالحمض الأميني عند ‎Casal‏

   ‎١ 1‏ ومنتهياً بحمض أميني عند الموقع ‎١١١7‏ أو ‎cl lS‏ المباشرة

   ‏° لذلك.

   ‎-٠١ ١‏ بناءً ال ‎DNA‏ وفقاً إلى عنصر الحماية 7 والذي يرمز إلى سلسلة

   ‎Y‏ خفيفة أو جزء من ذلك ويحتوي على مناطق:

   ‏0 أ) القسم الأول الذي يرمز إلى مجال متغير يحتوي على قوالب متعاقبة ومناطق تغيير ‎Ada fe‏ وتكون مناطق التغيير

   ‏° المفرطة المذكورة في السلسلة 0181© و 0082 و ‎CDR3‏ كما أن

   ‏1 سلاسل الحمض الأميني كما هو موضح في السلسلة ‎10-No-2‏

   ‎v‏ ويبتدي هذا القسم الأول برمز يرمز إلى الحمض الأميني

   ‎A‏ الأول للمجال المتغير وينتهي برمز يرمز إلى الحمض

   ‏9 الأميني الأخير للمجال المتغير. ‎١‏ ب) ويرمز القسم الثاني إلى القسم الثابت للسلسلة الخفيفة أو ' ‎١‏ جزء منها والذي يبتدئ برمز يرمز للحمض الأميني الأول

   ‎VY‏ للقسم الأول من السلسلة الخفيفة وينتهمي برمز يرمز إلى ‎x‏ الحمض الأميني الأخير للقسم الثابت أو جزء منته يليه

   ‎٠‏ رمز غير محسوس.

   ‎| ‏والذي يحتوي على القسم‎ ٠١ ‏وفقاً إلى عنصر الحماية‎ DNA ‏بناء ال‎ -١١ ١ ‏الأول الذي يرمز لمجال متغير يملك سلسلة حمض أميني كما‎ Y

   ‎v‏ موضح في السلسلة ‎1d-No-2‏ والتي تبتدئ بحمض ‎ud‏ عند الموقع

   ‎| ‏أو المكافئات المناظرة لذلك.‎ ٠٠١4 ‏وتنتهي بحمض أميني عند الموقع‎ ١

   مع ‎-١١ ١‏ عملية تصنيع سلسلة مشتركة لجزء الربط 0025 والتي تشتمل ‎Y‏ على: ‎(i) 1‏ زراعة أعضاء والتي تتحول مع بناء ‎DNA‏ وفقا إلى عنصسر ‏1 الحماية ‎A‏ أو 4 ومع بناء 0778 وفقاً إلى عنصر الحماية ‎٠١‏ ‎: AY ‏أو‎ ° ‎(id) 1‏ استرجاع جزء ربط 0025 النشط من الزراعة. ‎٠‏ ‎Soil ‏الصيدلي للكبت المناهي لنظسام المناععة‎ SE YY) ‎Y‏ الأورام الخبيشة لخلايا 0025 أو معاملة عدوى ‎HIV‏ والتي تحتوي ‏1 جزء ربط ‎CD25‏ لأي من عناصر الحماية ‎١‏ إلى + ويكون ‏¢ التركيب الصيدلاني مقبول أو مخفف. ‎VE‏ تركيب الكبت المناعي يحتوي على خليط يتكون على الأقل ‏من واحد من مضاد أنتجين غير 0025 والذي يتميز ‎TWA‏ ‏1 المنشطة. ْ ‎Sa Se)‏ وفقاً إلى عنصر الحماية ‎VE‏ والذي يحتوي على ‎Y‏ سيكلوسبورين أ. ‎ES SVT ١‏ إلى عنصر الحماية ‎١4‏ أو ‎١٠١‏ والذي فيه جزء ربط ‎Y‏ الانتجين المضاد غير جزء الربط ‎CD25‏ هو الجسم المضاد

   ‎: .CD7 v ‎oo ‏والذي‎ ١١ ‏وفقاً إلى أي واحد من عناصر الحماية من ؛١ إلى‎ بيكرتلا_-١7‎ ١ ‏7 فيه الأجسام المضادة هي مضادات خالية ( كيميرية ). ‎gaint VAY‏ المجموعة المزدوجة على وحدة جرعة تتكون من أتين ‎Y‏ على الأقل من الأجسام المضادة لخلايا 7 النشيطة ؛ المضادات السابقة ‏0 تحتوي على الأقل أثنتي من المضادات الجينية المختلفة التي تميز ‏1 خلايا 7 النشيطة ؛ أحد المضادات هو جزء الربط 0025 لأي من ‏° عناصر الحماية من ‎١‏ إلى ‎١‏ مع تعليمات أو توجيهات لخلط أو دواء ‏1 مقترن.

   gq

   ‎Ae saad S14)‏ المزدوجة وفقاً إلى عنصر الحماية ‎١8‏ والذي يحوي 1 وحدة جرعة يتكون دواء كبت مناعي.

   ‎6 ‏إلى‎ ١ ‏استعمال جزء الربط 0025 لأي من عناصر الحماية من‎ -7١ ١ ‏مع الربط‎ lpn A ‏لتجهيز أو تحضير الدواء للكبت المناعي لنظام‎ ١ ‏بجزء الربط الانتجيني المضاد يعرف المضاد الحيوي غير 0025 واللذي‎ v Ahad 1 ‏يميز خلاايا‎ ¢