[go: up one dir, main page]

RU2832905C1 - AGENT FOR INHIBITION OF SARS-CoV-2 VIRUS STRAINS BASED ON (+)-USNIC ACID - Google Patents

AGENT FOR INHIBITION OF SARS-CoV-2 VIRUS STRAINS BASED ON (+)-USNIC ACID Download PDF

Info

Publication number
RU2832905C1
RU2832905C1 RU2023132464A RU2023132464A RU2832905C1 RU 2832905 C1 RU2832905 C1 RU 2832905C1 RU 2023132464 A RU2023132464 A RU 2023132464A RU 2023132464 A RU2023132464 A RU 2023132464A RU 2832905 C1 RU2832905 C1 RU 2832905C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
hcov
cov
sars
russia
virus
Prior art date
Application number
RU2023132464A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Александр Сергеевич Филимонов
Ольга Анатольевна Лузина
Ольга Ивановна Яровая
Михаил Владимирович Хвостов
Нариман Фаридович Салахутдинов
Анна Владимировна Зайковская
Дмитрий Николаевич Щербаков
Олег Викторович Пьянков
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН)
Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН), Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН)
Application granted granted Critical
Publication of RU2832905C1 publication Critical patent/RU2832905C1/en

Links

Abstract

FIELD: molecular biology; biochemistry; medicine; pharmacology.
SUBSTANCE: invention represents the use of (+)-usnic acid derivatives of formula I a–c as an agent for inhibiting reproduction of SARS-CoV-2 virus strains. I a–c.
EFFECT: invention provides effective reduction of SARS-CoV-2 virus titre (strains hCoV-19/Australia/VIC01/2020, hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021, hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021, hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022, hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023, hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023) in cell culture.
2 cl, 1 dwg, 6 tbl, 13 ex

Description

Изобретение относится к новым средствам, способным ингибировать широкий спектр штаммов вируса SARS-CoV-2, и может быть использовано в молекулярной биологии, биохимии, медицине и фармакологии. Раскрывается применение производных (+)-усниновой кислоты, соединений Ia-с, следующей структуры в качестве средства противовирусного действия при SARS-CoV-2 инфекции. Изобретение обеспечивает эффективное снижение титра вируса в клеточной культуре.The invention relates to new agents capable of inhibiting a wide range of SARS-CoV-2 virus strains and can be used in molecular biology, biochemistry, medicine and pharmacology. The use of (+)-usnic acid derivatives, compounds Ia-c, of the following structure as an antiviral agent for SARS-CoV-2 infection is disclosed. The invention provides an effective reduction in the virus titer in cell culture.

Соединения Ia-с могут использоваться в качестве ингибиторов репродукции вируса SARS-CoV-2 и могут быть применены в медицине, вирусологии и фармакологии.Compounds Ia-c can be used as inhibitors of SARS-CoV-2 virus reproduction and can be applied in medicine, virology and pharmacology.

В мае 2023 года ВОЗ объявила об окончании пандемии COVID-19 вызванной новым короновирусом SARS-Cov 2. Однако это не означает, что угроза заражения этим вирусом исчезла, как не исчезла и вероятность тяжелого течения этого заболевания, в том числе с летальным исходом [Wise, J. Covid-19: WHO declares end of global health emergency. BMJ 2023, 368, p 1041]. Вирус продолжает циркулировать в человеческой популяции и его новые мутации, устойчивые к существующим вакцинам, теоретически способны привести к новому всплеску заболеваемости. Росту заболеваемости также способствует снижение вакцинации от SARS-Cov 2 на фоне улучшения эпидемиологической ситуации в мире и возвращения к привычному ритму жизни в большинстве стран. Кроме этого, имеющиеся в настоящее время штаммы вируса могут быть опасны для пожилых людей и людей с различными коморбидными состояниями, повышая смертность среди населения и увеличивая нагрузку на систему здравоохранения [Sahoo, В.М.; Ravi Kumar, B.V. V.; Sruti, J.; Mahapatra, M.K.; Banik, B.K.; Borah, P. Drug Repurposing Strategy (DRS): Emerging Approach to Identify Potential Therapeutics for Treatment of Novel Coronavirus Infection. Front. Mol. Biosci. 2021, 8, 1-11]. Все это делает важной разработку эффективной фармакотерапии, способной эффективно снижать тяжесть течения болезни и уменьшать частоту госпитализаций.In May 2023, the WHO declared the end of the COVID-19 pandemic caused by the new coronavirus SARS-Cov 2. However, this does not mean that the threat of infection with this virus has disappeared, nor has the likelihood of a severe course of this disease, including death, disappeared [Wise, J. Covid-19: WHO declares end of global health emergency. BMJ 2023, 368, p 1041]. The virus continues to circulate in the human population, and its new mutations, resistant to existing vaccines, are theoretically capable of leading to a new surge in cases. The increase in cases is also facilitated by a decrease in vaccination against SARS-Cov 2 against the background of an improving epidemiological situation in the world and a return to normal life in most countries. In addition, the currently existing strains of the virus can be dangerous for the elderly and people with various comorbid conditions, increasing mortality among the population and increasing the burden on the healthcare system [Sahoo, V.M.; Ravi Kumar, B.V. V.; Sruti, J.; Mahapatra, M.K.; Banik, B.K.; Borah, P. Drug Repurposing Strategy (DRS): Emerging Approach to Identify Potential Therapeutics for Treatment of Novel Coronavirus Infection. Front. Mol. Biosci. 2021, 8, 1-11]. All this makes it important to develop effective pharmacotherapy that can effectively reduce the severity of the disease and reduce the frequency of hospitalizations.

В качестве основных направлений для разработки новых противовирусных лекарственных средств для терапии COVID-19 обычно рассматриваются следующие мишени: хеликазы, трансмембранная сериновая протеаза 2, катепсин L, циклин G-ассоциированная киназа, адаптор-ассоциированная киназа 1, двухполюсный канал, факторы вирусной вирулентности, 3-химотрипсиноподобная протеаза, подавление избыточного воспалительного ответа, ингибирование вирусной мембраны, нуклеокапсида, оболочки и вспомогательных белков, ингибирование эндоцитоза [DOI: Ayele AG, Enyew EF, Kifle ZD. Roles of existing drug and drug targets for COVID-19 management. Metabol Open. 2021 Sep; 11:100103]. Однако лидером среди них является основная вирусная протеаза (MPro или 3CLpro), которая необходима для репликации вируса [Gil С, Ginex Т, Maestro I, Nozal V, Barrado-Gil L, Cuesta-Geijo MÁ, Urquiza J, Ramírez D, Alonso C, Campillo NE, Martinez A. COVID-19: Drug Targets and Potential Treatments. J Med Chem. 2020 Nov 12;63(21): 12359-12386]. Именно таким механизмом действия обладают препараты, получившие одобрение для фармакотерапии COVID-19. Первый - это Nirmatrelvir входящий совместно с ritonavir в состав Paxlovid от компании Pfizer и одобренный FDA в 2023 году для лечения инфекций COVID-19 легкой и средней степени тяжести у взрослых с высоким риском развития тяжелой формы заболевания [Harris, Е. FDA Grants Full Approval to Paxlovid, COVID-19 Antiviral Treatment. JAMA 2023, 2023]. Второй - это Энситрелвир (Ensitrelvir), торговое наименование Xocova, разработанный компанией Hokkaido University и Shionogi & Co., Ltd проходящий 3 тью фазу клинических испытаний, но получивший экстренное одобрение регулятора в Японии для клинического применения [Unoh, Y.; Uehara, S.; Nakahara, K.; Nobori, H.; Yamatsu, Y.; Yamamoto, S.; Maruyama, Y.; Taoda, Y.; Kasamatsu, K.; Suto, Т.; et al. Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19. J. Med. Chem. 2022, 65, 6499-6512]. В тестах in vitro и in vivo оба этих средства проявляли аналогичное противовирусное действие.The following targets are usually considered as the main directions for the development of new antiviral drugs for the treatment of COVID-19: helicases, transmembrane serine protease 2, cathepsin L, cyclin G-associated kinase, adaptor-associated kinase 1, bipolar channel, viral virulence factors, 3-chymotrypsin-like protease, suppression of excessive inflammatory response, inhibition of viral membrane, nucleocapsid, envelope and accessory proteins, inhibition of endocytosis [DOI: Ayele AG, Enyew EF, Kifle ZD. Roles of existing drug and drug targets for COVID-19 management. Metabol Open. 2021 Sep; 11:100103]. However, the leader among them is the main viral protease (MPro or 3CLpro), which is necessary for viral replication [Gil C, Ginex T, Maestro I, Nozal V, Barrado-Gil L, Cuesta-Geijo MÁ, Urquiza J, Ramírez D, Alonso C, Campillo NE, Martinez A. COVID-19: Drug Targets and Potential Treatments. J Med Chem. 2020 Nov 12;63(21): 12359-12386]. This is the mechanism of action of drugs approved for the pharmacotherapy of COVID-19. The first is Nirmatrelvir, which is a co-administered drug with ritonavir in Pfizer's Paxlovid and approved by the FDA in 2023 for the treatment of mild to moderate COVID-19 infections in adults at high risk of developing severe disease [Harris, E. FDA Grants Full Approval to Paxlovid, COVID-19 Antiviral Treatment. JAMA 2023, 2023]. The second is Ensitrelvir, trade name Xocova, developed by Hokkaido University and Shionogi & Co., Ltd. which is undergoing phase 3 clinical trials but received emergency regulatory approval in Japan for clinical use [Unoh, Y.; Uehara, S.; Nakahara, K.; Nobori, H.; Yamatsu, Y.; Yamamoto, S.; Maruyama, Y.; Taoda, Y.; Kasamatsu, K.; Suto, T.; et al. Discovery of S-217622, a Noncovalent Oral SARS-CoV-2 3CL Protease Inhibitor Clinical Candidate for Treating COVID-19. J. Med. Chem. 2022, 65, 6499-6512]. Both of these agents exhibited similar antiviral activity in in vitro and in vivo tests.

Одним из перспективных направлений медицинской химии для синтеза новых агентов с противовирусной активностью является использование природных соединений в качестве исходных платформ, чему в последнее время уделяется особое внимание [Merarchi, М.; Dudha, N.; Das, B.C.; Garg, M. Natural products and phytochemicals as potential anti-SARS-CoV-2 drugs. Phyther. Res. 2021, 35, 5384-5396].One of the promising areas of medicinal chemistry for the synthesis of new agents with antiviral activity is the use of natural compounds as starting platforms, which has recently received special attention [Merarchi, M.; Dudha, N.; Das, B.C.; Garg, M. Natural products and phytochemicals as potential anti-SARS-CoV-2 drugs. Phyther. Res. 2021, 35, 5384-5396].

Усниновая кислота является вторичным метаболитом лишайников родов Usnea, Cladonia, Alectoria и многих других. Она обладает широким спектром биологической активности: противомикробной, противоопухолевой, противовоспалительной и противовирусной [Macedo, D.C.S.; Almeida, F.J.F.; Wanderley, M.S.O.; Ferraz, M.S.; Santos, N.P.S.; López, A.M.Q.; Santos-Magalhãaes, N.S.; Lira-Nogueira, M.C.B. Usnic acid: from an ancient lichen derivative to promising biological and nanotechnology applications. Phytochem. Rev. 2021, 20, 609-630]. Ранее было показано, что (+) и (-)-усниновые кислоты проявляют активность в отношении вируса Эпштейна-Бара и полиомавируса крыс [Campanella, L.; Delfini, М.; Ercole, P.; Iacoangeli, A.; Risuleo, G. Molecular characterization and action of usnic acid: a drug that inhibits proliferation of mouse polyomavirus in vitro and whose main target is RNA transcription. Biochimie 2002, 84, 329-334]. В серии работ было выявлено, что оба энантиомера усниновой кислоты проявляют активность в отношении вируса гриппа H1N1, а их химическая модификация способна приводить к веществам с более выраженными противогриппозными свойствами [Sokolov, D.N.; Zarubaev, V.V.; Shtro, А.А.; Polovinka, M.P.; Luzina, O.A.; Komarova, N.I.; Salakhutdinov, N.F.; Kiselev, O.I. Anti-viral activity of (-)- and (+)-usnic acids and their derivatives against influenza virus A(H1N1)2009. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 7060-706]. Недавно проведенные исследования in silico демонстрируют потенциальную возможность (+)-усниновой кислоты связываться с активным сайтом протеазы 3CLpro а также с рецептор-связывающим доменом (RBD) поверхностного гликопротеина S вируса SARS-CoV-2 [Prateeksha, G.; Rana, T.S.; Asthana, A.K.; Singh, B.N.; Barik, S.K. Screening of cryptogamic secondary metabolites as putative inhibitors of SARS-CoV-2 main protease and ribosomal binding domain of spike glycoprotein by molecular docking and molecular dynamics approaches. J. Mol. Struct. 2021, 1240, 130506]. В другой работе, было показано, что (+)-усниновая кислота способна связываться с трансмембрановой сериновой протеазой 2 (TMPRSS2) [Coban, М.А.; Morrison, J.; Maharjan, S.; Hernandez Medina, D.H.; Li, W.; Zhang, Y.S.; Freeman, W.D.; Radisky, E.S.; Le Roch, K.G.; Weisend, С.М.; et al. Attacking COVID-19 Progression Using Multi-Drug Therapy for Synergetic Target Engagement. Biomolecules 2021, 11, 787]. Нами ранее показано, что (+)-усниновая кислота может проявлять ингибирующие свойства в отношении трех штаммов вирусов SARS-CoV-2 (Ухань, Дельта и Омикрон В.1.1.529) с показателями ингибирующей активности IC50 10.5, 20.9, 3.7 мкМ и индексами селективности 13, 7 и 39 соответственно [A.S. Filimonov, O.I. Yarovaya, A.V. Zaykovskaya, N.B. Rudometova, D.N. Shcherbakov, V.Yu. Chirkova, D.S. Baev, S.S. Borisevich, O.A. Luzina, O.V. Pyankov, R.A. Maksyutov, N.F. Salakhutdinov (+)-Usnic Acid and Its Derivatives as Inhibitors of a Wide Spectrum of SARS-CoV-2 Viruses. Viruses 2022, 14(10), 2154]. В тоже время исходная усниновая кислота обладает значительной токсичностью, как в отношении исследуемых клеток, так и гепатотоксичностью у живых организмах. Таким образом, наиболее близким к заявляемым соединениям прототипом можно считать природную (+)-усниновую кислоту формулы IIUsnic acid is a secondary metabolite of lichens of the genera Usnea, Cladonia, Alectoria and many others. It has a wide range of biological activities: antimicrobial, antitumor, anti-inflammatory and antiviral [Macedo, DCS; Almeida, FJF; Wanderley, MSO; Ferraz, MS; Santos, NPS; López, AMQ; Santos-Magalhãaes, NS; Lira-Nogueira, MCB Usnic acid: from an ancient lichen derivative to promising biological and nanotechnology applications. Phytochem. Rev. 2021, 20, 609-630]. It was previously shown that (+) and (-)-usnic acids exhibit activity against the Epstein-Barr virus and rat polyomavirus [Campanella, L.; Delfini, M.; Ercole, P.; Iacoangeli, A.; Risuleo, G. Molecular characterization and action of usnic acid: a drug that inhibits proliferation of mouse polyomavirus in vitro and whose main target is RNA transcription. Biochimie 2002, 84, 329-334]. In a series of studies, it was found that both enantiomers of usnic acid exhibit activity against the H1N1 influenza virus, and their chemical modification can lead to substances with more pronounced anti-influenza properties [Sokolov, DN; Zarubaev, VV; Shtro, AA; Polovinka, MP; Luzina, OA; Komarova, NI; Salakhutdinov, NF; Kiselev, OI Anti-viral activity of (-)- and (+)-usnic acids and their derivatives against influenza virus A(H1N1)2009. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 7060-706]. Recent in silico studies demonstrate the potential of (+)-usnic acid to bind to the active site of 3CLpro protease as well as to the receptor-binding domain (RBD) of the SARS-CoV-2 surface glycoprotein S [Prateeksha, G.; Rana, TS; Asthana, AK; Singh, BN; Barik, SK Screening of cryptogamic secondary metabolites as putative inhibitors of SARS-CoV-2 main protease and ribosomal binding domain of spike glycoprotein by molecular docking and molecular dynamics approaches. J. Mol. Struct. 2021, 1240, 130506]. In another study, (+)-usnic acid was shown to bind to transmembrane serine protease 2 (TMPRSS2) [Coban, M.A.; Morrison, J.; Maharjan, S.; Hernandez Medina, D.H.; Li, W.; Zhang, Y.S.; Freeman, W.D.; Radisky, E.S.; Le Roch, K.G.; Weisend, C.M.; et al. Attacking COVID-19 Progression Using Multi-Drug Therapy for Synergetic Target Engagement. Biomolecules 2021, 11, 787]. We have previously shown that (+)-usnic acid can exhibit inhibitory properties against three strains of SARS-CoV-2 viruses (Wuhan, Delta and Omicron B.1.1.529) with inhibitory activity IC 50 values of 10.5, 20.9, 3.7 μM and selectivity indices of 13, 7 and 39, respectively [AS Filimonov, OI Yarovaya, AV Zaykovskaya, NB Rudometova, DN Shcherbakov, V.Yu. Chirkova, DS Baev, SS Borisevich, OA Luzina, OV Pyankov, RA Maksyutov, NF Salakhutdinov (+)-Usnic Acid and Its Derivatives as Inhibitors of a Wide Spectrum of SARS-CoV-2 Viruses. Viruses 2022, 14(10), 2154]. At the same time, the original usnic acid has significant toxicity, both in relation to the studied cells and hepatotoxicity in living organisms. Thus, the closest prototype to the claimed compounds can be considered natural (+)-usnic acid of formula II

Недостатком известного соединения являются невысокая противовирусная активность и относительно высокая цитотоксичность.The disadvantage of the known compound is its low antiviral activity and relatively high cytotoxicity.

Техническим результатом изобретения является выявление новых эффективных агентов, обладающих широким спектром противовирусной активности в отношении различных штаммов вирусов SARS-CoV-2.The technical result of the invention is the identification of new effective agents with a broad spectrum of antiviral activity against various strains of SARS-CoV-2 viruses.

Технический результат достигается применением новых производных (+)-усниновой кислоты формулы Ia-сThe technical result is achieved by using new derivatives of (+)-usnic acid of formula Ia-c

у которых выявлена биологическая активность, заключающаяся в их способности ингибировать репродукцию различных штаммов вируса SARS-CoV-2.which have been shown to have biological activity, consisting of their ability to inhibit the reproduction of various strains of the SARS-CoV-2 virus.

Соединения общей формулы I, после проведения углубленных фармакологических исследований, могут использоваться, как в чистом виде, так и в качестве компонента новых низкотоксичных высокоэффективных против вирусов SARS-CoV-2 лекарственных форм.Compounds of general formula I, after conducting in-depth pharmacological studies, can be used both in pure form and as a component of new low-toxic, highly effective against SARS-CoV-2 viruses dosage forms.

Синтез соединений проводили по схеме, представленной на фиг.1. На первой стадии из (+)-усниновой кислоты II было получено бромпроизводное усниновой кислоты III путем реакции с бромом в диоксане. Бромпроизводное усниновой кислоты III было выделено с выходом 70% после колоночной хроматографии. Тиосемикарбазоны IV были синтезированы по реакции соответствующих альдегидов с тиосемикарбазидом в этаноле. Продукты IV были выделены с выходами 58-97%. На заключительной стадии проводилась реакция между бромусниновой кислотой III и тиосемикарбазоном IV в метаноле, в результате которой были выделены путем высаживания соединения Ia-с с выходами 75-79%.The compounds were synthesized according to the scheme shown in Fig. 1. In the first stage, the bromo derivative of usnic acid III was obtained from (+)-usnic acid II by reaction with bromine in dioxane. The bromo derivative of usnic acid III was isolated in 70% yield after column chromatography. Thiosemicarbazones IV were synthesized by the reaction of the corresponding aldehydes with thiosemicarbazide in ethanol. Products IV were isolated in 58-97% yields. In the final stage, the reaction between bromo derivative III and thiosemicarbazone IV in methanol was carried out, as a result of which compounds Ia-c were isolated by precipitation in 75-79% yields.

Для анализа ингибирующей активности препаратов мы использовали шесть штаммов коронавируса SARS-CoV-2: был использован прототипный вариант Ухань (генетическая линия В, не является VOC), вирусы этой генетической линии циркулировали в начале пандемии, дельта-вариант (который был широко распространен на территории РФ в 2021-2022 г. ) и четыре штамма, относящиеся к Омикрон-варианту. Впервые Омикрон-вариант был выявлен в ноябре 2021 года в Южной Африке и быстро стал доминирующим вариантом в мире. На сегодняшний день он полностью вытеснил все остальные варианты коронавируса. Быстрое накопление мутаций в разных комбинациях способствовало появлению большого числа сублиний омикрона, некоторые из которых были доминирующими в мире. В работе был использован штамм сублинии ВА.1, которая являлась первой из известных сублиний варианта омикрон. С начала 2022 года доминирующим вариантом стал ВА.5, одной из широко распространенных его сублиний является ВА.5.2. Еще одним из прямых потомков ВА.5 является линия BQ.1.1, штаммы этой генетической сублинии обладают высокой инфекционностью и способностью уклоняться от иммунного ответа. Субвариант Omicron ХВВ.1.5 является сублинией варианта ХВВ, который возник в результате рекомбинации двух сублиний ВА.2. Субвариант ХВВ содержит 14 мутаций в дополнение к тем, которые обнаружены у ВА.2. Быстрый рост числа этих субвариантов и их обширный набор пиковых мутаций напоминают ситуацию при появлении первого варианта Омикрона ВА.1.To analyze the inhibitory activity of the drugs, we used six strains of the SARS-CoV-2 coronavirus: the prototype Wuhan variant (genetic line B, not VOC) was used; viruses of this genetic lineage circulated at the beginning of the pandemic, the delta variant (which was widespread in the Russian Federation in 2021-2022) and four strains belonging to the Omicron variant. The Omicron variant was first identified in November 2021 in South Africa and quickly became the dominant variant in the world. To date, it has completely displaced all other variants of the coronavirus. The rapid accumulation of mutations in different combinations contributed to the emergence of a large number of omicron sublineages, some of which were dominant in the world. The strain used in the work was subline BA.1, which was the first of the known sublines of the omicron variant. Since the beginning of 2022, BA.5 has become the dominant variant, one of its widespread sublineages is BA.5.2. Another direct descendant of BA.5 is the BQ.1.1 lineage, strains of this genetic sublineage are highly infective and capable of evading the immune response. The Omicron subvariant XBB.1.5 is a sublineage of the XBB variant that arose as a result of recombination of two BA.2 sublineages. The XBB subvariant contains 14 mutations in addition to those found in BA.2. The rapid growth of these subvariants and their extensive set of peak mutations are reminiscent of the situation with the emergence of the first Omicron BA.1 variant.

Исследование проводили с использованием штаммов коронавируса SARS-CoV-2, депонированных в Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора: hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (генетическая линия В, (EPI_ISL_406844)), hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (генетическая линия В.1.617.2 (дельта), (EPI_ISL_7338814)), hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (генетическая линия ВА.1 (омикрон 1), (EPI_ISL_8920444)), hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (генетическая линия ВА.5.2 (омикрон 5.2), (EPI_ISL_16613436)),. hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (субвариант омикрона BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (субвариант омикрона ХВВ.1.5 (EPI_ISL_17770464)), способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина (https://ria.ru/20210204/koronavirus-1595992876.html?ysclid=1pj4kvbaai354867128).The study was conducted using SARS-CoV-2 coronavirus strains deposited in the State Collection of Viral Infection and Rickettsioses Agents of the State Research Center for Biotechnology Vector of Rospotrebnadzor: hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (genetic line B, (EPI_ISL_406844)), hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (genetic line B.1.617.2 (delta), (EPI_ISL_7338814)), hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (genetic line BA.1 (omicron 1), (EPI_ISL_8920444)), hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (genetic line BA.5.2 (omicron 5.2), (EPI_ISL_16613436)),. hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (omicron subvariant BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (omicron subvariant ХВВ.1.5 (EPI_ISL_17770464)), capable of evading the host immune response (https://ria.ru/20210204/koronavirus-1595992876.html?ysclid=1pj4kvbaai354867128).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Синтез (R)-3-Ацетил-8-(2-бромоацетил)-2,5,7-тригидрокси-4а,6-диметил-9-окса-4(4аН)-флуоренон IIIThe invention is illustrated by the following examples. Example 1. Synthesis of (R)-3-Acetyl-8-(2-bromoacetyl)-2,5,7-trihydroxy-4a,6-dimethyl-9-oxa-4(4aH)-fluorenone III

Усниновую кислоту (10 гр, 29,07 ммоль) растворили в 150 мл диоксана. К полученному раствору добавили заранее приготовленный раствор брома (9,306 гр, 3 мл, 58,16 ммоль) в диоксане (150 мл), а также бромоводородную кислоту (1 мл, 48%). Полученную смесь оставили в темноте на 7 дней. После раствор упарили на ротационном испарителе. Бромусниновую кислоту III выделяли колоночной хроматографией (элюент - хлористый метилен-гексан 1:1) на силикагеле (Merk 63-200 μ).Usnic acid (10 g, 29.07 mmol) was dissolved in 150 ml of dioxane. A previously prepared solution of bromine (9.306 g, 3 ml, 58.16 mmol) in dioxane (150 ml) and hydrobromic acid (1 ml, 48%) were added to the resulting solution. The resulting mixture was left in the dark for 7 days. Then the solution was evaporated on a rotary evaporator. Bromusnic acid III was isolated by column chromatography (eluent - methylene chloride-hexane 1:1) on silica gel (Merk 63-200 μ).

Пример 2. Синтез (E)-2-((фуран-3-ил)метилен)гидразинкарботиоамида IVaExample 2. Synthesis of (E)-2-((furan-3-yl)methylene)hydrazinecarbothioamide IVa

Тиосемикарбазид (710 мг, 7,80 ммоль) и 3-Фуранкарбоксальдегид (300 мг, 3,12 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVa) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.Thiosemicarbazide (710 mg, 7.80 mmol) and 3-furancarboxaldehyde (300 mg, 3.12 mmol) were placed in a flask with ethanol (10 mL). The resulting mixture was stirred at reflux for two hours. The mixture was then diluted with water until a precipitate formed. The resulting precipitate (aldehyde thiosemicarbazone IVa) was filtered and air-dried. The product was used without further purification.

Пример 3. Синтез (E)-2-((5-Бромотиофен-2-ил)метилен)гидразин карботиоамида IVbExample 3. Synthesis of (E)-2-((5-Bromothiophen-2-yl)methylene)hydrazine carbothioamide IVb

Тиосемикарбазид (710 мг, 7,80 ммоль) и 5-бромотиофен-2-карбоксальдегид (600 мг, 3,16 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVb) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.Thiosemicarbazide (710 mg, 7.80 mmol) and 5-bromothiophene-2-carboxaldehyde (600 mg, 3.16 mmol) were placed in a flask with ethanol (10 mL). The resulting mixture was stirred at reflux for two hours. The mixture was then diluted with water until a precipitate formed. The resulting precipitate (aldehyde thiosemicarbazone IVb) was filtered and air-dried. The product was used without further purification.

Пример 4. Синтез (E)-2-(3-((4-(4-Фторофенил)пиперазин-1-ил)метил)-4-метоксибензилиден)гидразинкарботиоамид IVcExample 4. Synthesis of (E)-2-(3-((4-(4-Fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)-4-methoxybenzylidene)hydrazinecarbothioamide IVc

Тиосемикарбазид (420 мг, 4,62 ммоль) и 3-((4-(4-фторофенил)пиперазин-1-ил)метил)-4-метоксибензальдегид (600 мг, 1,83 ммоль) помещали в колбу с этанолом (10 мл). Полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение двух часов. Затем смесь разбавляли водой до формирования осадка. Полученный осадок (тиосемикарбазон альдегида IVc) отфильтровывали и сушили на воздухе. Продукт был использован без дальнейшей очистки.Thiosemicarbazide (420 mg, 4.62 mmol) and 3-((4-(4-fluorophenyl)piperazin-1-yl)methyl)-4-methoxybenzaldehyde (600 mg, 1.83 mmol) were placed in a flask with ethanol (10 mL). The resulting mixture was stirred at reflux for two hours. The mixture was then diluted with water until a precipitate formed. The resulting precipitate (aldehyde thiosemicarbazone IVc) was filtered and air-dried. The product was used without further purification.

Пример 5. Синтез (2R)-4-ацетил-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-10-{2-[(2Е)-2-[(фуран-3-ил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-8-оксатрицикло[7.4.0.02,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-она IaExample 5. Synthesis of (2R)-4-acetyl-5,11,13-trihydroxy-2,12-dimethyl-10-{2-[(2E)-2-[(furan-3-yl)methylidene]hydrazin-1-yl]-1,3-thiazol-4-yl}-8-oxatricyclo[7.4.0.0 2,7 ]trideca-1(9),4,6,10,12-pentaen-3-one Ia

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С. К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVa (40 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.Bromusnic acid III (100 mg, 0.24 mmol) was dissolved in methanol at 40°C. Thiosemicarbazone IVa (40 mg, 0.24 mmol) was added to the resulting solution. The mixture was stirred at 40°C for 1 h. The resulting mixture was diluted with water, and the precipitate was filtered and air-dried.

Тразл=155-157°С. Выход: 75% Спектр ЯМР 1Н (CDCl3, δ, м.д., J Гц): 1.71 (3Н, с, Н-15), 2.15 (3Н, с, Н-10), 2.64 (3Н, с, Н-12), 5.90 (1Н, с, Н-4), 6.75 (1Н, м, Н-21), 7.11 (1Н, с, Н-14), 7.39 (1Н, с, Н-20), 7,59 (1Н, с, Н-19), 7.63 (1Н, с, Н-17), 8.93 (1Н, ш с, NH), 10.95 (1Н, с, ОН-9), 18.79 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР 13С (CDCl3, δ, м.д.): 8.30 (С-15), 27.76 (С-10), 32.06 (С-12), 59.37 (С-9b), 97.29 (С-4), 97.49 (С-6), 103.36 (С-9а), 104.61 (С-14), 105.13 (С-2), 107.19 (С-21), 108.84 (С-8), 121.97 (С-18), 135.09 (С-17), 143.27 (С-13), 143.42 (С-19), 144.00 (С-20), 151.25 (С-9), 151.54 (С-7), 156.35 (С-5а), 166.27 (С-16), 180.58 (С-4а), 191.57 (С-3), 198.07 (С-1), 201.34 (С-11). HRMS: Расчетное значение: m/z=493.0938 (C24H19O7N3 32S)+ Измеренное значение: m/z=493.0941. [α]D 19=+135°.T decomposition =155-157°C. Yield: 75% 1H NMR spectrum ( CDCl3 , δ, ppm, J Hz): 1.71 (3H, s, H-15), 2.15 (3H, s, H-10), 2.64 (3H, s , N-12), 5.90 (1N, s, N-4), 6.75 (1N, m, N-21), 7.11 (1Н, s, Н-14), 7.39 (1Н, s, Н-20), 7.59 (1Н, s, Н-19), 7.63 (1Н, s, Н-17), 8.93 (1Н, w s, NH), 10.95 (1H, s, OH-9), 18.79 (1H, s, OH-3). NMR spectrum 13C ( CDCl3 , δ, ppm): 8.30 (C-15), 27.76 (C-10), 32.06 (C-12), 59.37 (C-9b), 97.29 (C-4) , 97.49 (C-6), 103.36 (C-9a), 104.61 (C-14), 105.13 (C-2), 107.19 (C-21), 108.84 (C-8), 121.97 (C-18), 135.09 (C-17), 143.27 (C-13), 143.42 (C-19), 144.00 (C-20), 151.25 (C-9), 151.54 (C-7), 156.35 (C-5a), 166.27 (C-16), 180.58 (C-4a), 191.57 (C-3), 198.07 (C-1), 201.34 (C-11). HRMS: Calculated value: m/z=493.0938 (C 24 H 19 O 7 N 3 32 S) + Measured value: m/z=493.0941. [α] D 19 =+135°.

Пример 6. Синтез (2R)-4-ацетил-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-10-{2-[(2Е)-2-[(5-бромотиофен-2-ил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-8-оксатрицикло[7.4.0.02,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-она IbExample 6. Synthesis of (2R)-4-acetyl-5,11,13-trihydroxy-2,12-dimethyl-10-{2-[(2E)-2-[(5-bromothiophen-2-yl)methylidene]hydrazin-1-yl]-1,3-thiazol-4-yl}-8-oxatricyclo[7.4.0.0 2,7 ]trideca-1(9),4,6,10,12-pentaen-3-one Ib

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С.К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVb (63 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.Bromusnic acid III (100 mg, 0.24 mmol) was dissolved in methanol at 40°C. Thiosemicarbazone IVb (63 mg, 0.24 mmol) was added to the resulting solution. The mixture was stirred at 40°C for 1 h. The resulting mixture was diluted with water, and the precipitate was filtered off and air-dried.

Тразл=153-155°С. Выход: 78% Спектр ЯМР 1Н (CDCl3, δ, м.д., J Гц): 1.69 (3Н, с, Н-15), 2.16 (3Н, с, Н-10), 2.64 (3Н, с, Н-12), 5.92 (1Н, с, Н-4), 6.77 (1Н, д, J=3.83 Hz, Н-19), 6.86 (1Н, д, J=3.78 Hz, Н-20), 7.11 (1Н, с, Н-14), 7.58 (1Н, с, Н-17), 9.06 (1Н, шс, NH), 10.29 (1Н, с, ОН-9), 18.79 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР 13С (CDCl3, δ, м.д.): 7.97 (С-15), 27.47 (С-10), 31.76 (С-12), 59.00 (С-9b), 97.04 (С-4), 97.08 (С-6), 103.17 (С-9а), 104.72 (С-14), 104.88 (С-2), 108.50 (С-8), 115.29 (С-21), 128.64 (С-19), 129.92 (С-20), 135.97 (С-17), 139.39 (С-18), 142.78 (С-13), 151.00 (С-9), 151.22 (С-7), 155.87 (С-5а), 165.49 (С-16), 180.12 (С-4а), 191.26 (С-3), 197.72 (С-1), 201.00 (С-11). HRMS: Расчетное значение m/z=586.9815 (C24H18O6H3Br32S2)+. Измеренное значение m/z=586.9820. [α]D 19=+230°.T decomp = 153-155°C. Yield: 78% 1H NMR spectrum ( CDCl3 , δ, ppm, J Hz): 1.69 (3H, s, H-15), 2.16 (3H, s, H-10), 2.64 (3H, s, H-12), 5.92 (1H, s, H-4), 6.77 (1H, d, J=3.83 Hz, H-19), 6.86 (1H, d, J=3.78 Hz, H-20), 7.11 (1H, s, H-14), 7.58 (1H, s, H-17), 9.06 (1H, br s, NH), 10.29 (1H, s, OH-9), 18.79 (1H, s, OH-3). 13C NMR spectrum ( CDCl3 , δ, ppm): 7.97 (C-15), 27.47 (C-10), 31.76 (C-12), 59.00 (C-9b), 97.04 (C-4), 97.08 (C-6), 103.17 (C-9a), 104.72 (C-14), 104.88 (C-2), 108.50 (C-8), 115.29 (C-21), 128.64 (C-19), 129.92 (C-20), 135.97 (C-17), 139.39 (C-18), 142.78 (C-13), 151.00 (C-9), 151.22 (C-7), 155.87 (C-5a), 165.49 (C-16), 180.12 (C-4a), 191.26 (C-3), 197.72 (C-1), 201.00 (C-11). HRMS: Calculated m/z=586.9815 (C 24 H 18 O 6 H 3 Br 32 S 2 ) + . Measured m/z=586.9820. [α] D 19 =+230°.

Пример 7. Синтез (2R)-4-Ацетил-10-{2-[(Е)-2-[(3-{[4-(4-фторофенил)пиперазин-1-ил]метил}-4-метоксифенил)метилиден]гидразин-1-ил]-1,3-тиазол-4-ил}-5,11,13-тригидрокси-2,12-диметил-8-оксатрицикло[7.4.0.02,7]тридека-1(9),4,6,10,12-пентаен-3-он IcExample 7. Synthesis of (2R)-4-Acetyl-10-{2-[(E)-2-[(3-{[4-(4-fluorophenyl)piperazin-1-yl]methyl}-4-methoxyphenyl)methylidene]hydrazin-1-yl]-1,3-thiazol-4-yl}-5,11,13-trihydroxy-2,12-dimethyl-8-oxatricyclo[7.4.0.0 2,7 ]trideca-1(9),4,6,10,12-pentaen-3-one Ic

Бромусниновую кислоту III (100 мг, 0,24 ммоль) растворяли в метаноле при 40°С. К полученному раствору добавляли тиосемикарбазон IVd (95 мг, 0,24 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение часа. Полученную смесь разбавляли водой, а выпавший осадок отфильтровывали и сушили на воздухе.Bromusnic acid III (100 mg, 0.24 mmol) was dissolved in methanol at 40°C. Thiosemicarbazone IVd (95 mg, 0.24 mmol) was added to the resulting solution. The mixture was stirred at 40°C for 1 h. The resulting mixture was diluted with water, and the precipitate was filtered off and air-dried.

Тразл=120-122°С. Выход: 79% Спектр ЯМР 1Н (CDCl3, δ, м.д., J Гц): 1.67 (3Н, с, Н-15), 2.13 (3Н, с, Н-10), 2.61 (3Н, с, Н-12), 3.83 (3Н, с, Н-25), 5.00 (2Н, с, Н-24), 5.88 (1H, с, Н-4), 6.82 (5Н, м, Н-22, Н-27, Н-28, Н-30, Н-31), 7.09 (1H, с, Н-14), 7.45-7.65 (3Н, м, Н-17, Н-19, Н-23), 8.92 (1Н, шс, NH), 10.24 (1Н, с, ОН-9), 18.78 (1Н, с, ОН-3). Спектр ЯМР 13С (CDCl3, δ, м.д.): 8.31 (С-15), 27.62 (С-10), 32.00 (С-12), 55.47 (С-25), 59.32 (С-9b), 65.26 (С-24), 97.24 (С-4), 97.21 (С-6), 103.31 (С-9а), 104.42 (С-14), 105.01 (С-2), 108.80 (С-8), 110.26 (С-22), 115.56 (С-27, С-31, д, J=12 Hz), 115.83 (С-28, С-30, д, J=3.2 Hz), 125.64 (С-18), 126.07 (С-20), 127.14 (С-19), 127.69 (С-23), 142.43 (С-17), 143.42 (С-13), 151.31 (С-7), 151.42 (С-9), 154.74 (С-26, д, J=2.2 Hz), 155.68 (С-29, д, J=239 Hz), 156.32 (С-5а), 158.06 (С-21), 166.4 (С-16), 180.44 (С-4а), 191.53 (С-3), 197.92 (С-1), 201.21 (С-11). HRMS: Расчетное значение m/z=586.9815 (C34H28O8N3F32S)+. Измеренное значение m/z=586.9820. [α]D 19=+198°.T razl = 120-122°C. Yield: 79% 1H NMR spectrum ( CDCl3 , δ, ppm, J Hz): 1.67 (3H, s, H-15), 2.13 (3H, s, H-10), 2.61 (3H, s, H-12), 3.83 (3H, s, H-25), 5.00 (2H, s, H-24), 5.88 (1H, s, N-4), 6.82 (5H, m, N-22, N-27, N-28, N-30, N-31), 7.09 (1H, s, N-14), 7.45-7.65 (3H, m, N-17, N-19, N-23), 8.92 (1H, ws, NH), 10.24 (1H, s, OH-9), 18.78 (1H, s, OH-3). 13C NMR spectrum ( CDCl3 , δ, ppm): 8.31 (C-15), 27.62 (C-10), 32.00 (C-12), 55.47 (C-25), 59.32 (C-9b), 65.26 (C-24), 97.24 (C-4), 97.21 (C-6), 103.31 (C-9a), 104.42 (C-14), 105.01 (C-2), 108.80 (C-8), 110.26 (C-22), 115.56 (C-27, C-31, d, J=12 Hz), 115.83 (C-28, C-30, d, J=3.2 Hz), 125.64 (C-18), 126.07 (C-20), 127.14 (C-19), 127.69 (C-23), 142.43 (C-17), 143.42 (C-13), 151.31 (C-7), 151.42 (C-9), 154.74 (C-26, d, J=2.2 Hz), 155.68 (C-29, d, J=239 Hz), 156.32 (C-5a), 158.06 (C-21), 166.4 (C-16), 180.44 (C-4a), 191.53 (C-3), 197.92 (C-1), 201.21 (C-11). HRMS: Calculated m/z=586.9815 (C 34 H 28 O 8 N 3 F 32 S) + . Measured m/z=586.9820. [α] D 19 =+198°.

Пример 8. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм генетической линии В (Ухань) in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 8. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus strain B (Wuhan) in vitro on Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (генетическая линия В, (EPI_ISL_406844). Вирусы этой генетической линии циркулировали в начале пандемии, вызванной коронавирусной инфекцией. Штамм вируса был получен из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 7,5 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Australia/VIC01/2020 (genetic line B, (EPI_ISL_406844). Viruses of this genetic line circulated at the beginning of the pandemic caused by coronavirus infection. The virus strain was obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Research Center for Viral Virology and Virology Vector of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 7.5 lgTCD 50 /ml).

Определение ингибирующих концентраций (IC50) соединений было проведено в тесте снижения цитопатического действия вируса на клетки в трех повторах. Культура клеток Vero Е6 была выращена в 96-луночных культуральных планшетах с конфлюэнтностью не менее 90%. Готовили последовательные понижающиеся трехкратные разведения соединений, начиная с концентрации 300 мкг/мл. В эксперименте использовали вирус множественностью заражения 0,01 (эквивалентно дозе 100 TCD50 на лунку).Determination of inhibitory concentrations (IC 50 ) of compounds was performed in a test for reducing the cytopathic effect of the virus on cells in triplicate. Vero E6 cell culture was grown in 96-well culture plates with a confluence of at least 90%. Successive decreasing threefold dilutions of compounds were prepared, starting with a concentration of 300 μg/ml. The experiment used a virus with a multiplicity of infection of 0.01 (equivalent to a dose of 100 TCD 50 per well).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации соединений проводили одновременно. Для этого в культуральный планшет с монослоем клеток вносили разведения соединений, затем вносили поддерживающую среду без вируса (для определения токсической концентрации соединений) и жидкость, содержащую вирус (для определения ингибирующей активности соединений). Культуральные планшеты инкубировали при 37°С в течение 4 суток, затем окрашивали МТТ (NeoFroxx) согласно инструкции производителя. Учет результатов проводили на планшетном анализаторе (Thermo Scientific MultiskanFC), обработку данных осуществляли при помощи программы SOFTmax PRO 4.0 с использованием 4-х параметрического метода анализа. Для всех исследованных соединений определены 50% токсическая концентрация (СС50) и концентрации 50% ингибирования (IC50) В дальнейшем, для каждого соединения рассчитывали индекс селективности (SI) - отношение токсичности соединения и ингибирующей активности против вируса SARS-CoV-2 (СС50/IC50) (табл. 1).Determination of the inhibitory activity and toxic concentration of the compounds was carried out simultaneously. For this purpose, dilutions of the compounds were added to a culture plate with a cell monolayer, then a maintenance medium without the virus (to determine the toxic concentration of the compounds) and a liquid containing the virus (to determine the inhibitory activity of the compounds) were added. The culture plates were incubated at 37 ° C for 4 days, then stained with MTT (NeoFroxx) according to the manufacturer's instructions. The results were recorded on a plate analyzer (Thermo Scientific MultiskanFC), the data were processed using the SOFTmax PRO 4.0 program using a 4-parameter analysis method. For all the studied compounds, 50% toxic concentration (CC 50 ) and 50% inhibition concentration (IC 50 ) were determined. Subsequently, the selectivity index (SI) was calculated for each compound - the ratio of the toxicity of the compound and the inhibitory activity against the SARS-CoV-2 virus (CC 50 /IC 50 ) (Table 1).

Пример 9. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамма hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (Дельта) in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 9. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (Delta) in vitro on Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (генетическая линия В.1.617.2 (Дельта), (EPI_ISL_7338814)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,75 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021 (genetic line B.1.617.2 (Delta), (EPI_ISL_7338814)), obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Research Center for Viral Virology and Virology "Vector" of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 6.75 lgTCD 50 /ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 2.Determination of inhibitory activity and toxic concentration was carried out as described in Example 8, the results are presented in Table 2.

Пример 10. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 генетической линии ВА.1 (Омикрон 1) in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 10. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus of the BA.1 genetic line (Omicron 1) in vitro on a Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (генетическая линия ВА.1 (омикрон 1), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 5,5 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021 (genetic line BA.1 (omicron 1), obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Budgetary Institution of Science State Research Center of Virology and Virology "Vector" of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 5.5 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 3.Determination of inhibitory activity and toxic concentration was carried out as described in Example 8, the results are presented in Table 3.

Пример 11. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамма hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 генетической линии ВА.5.2 (Омикрон 5.2) in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 11. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 of the genetic line BA.5.2 (Omicron 5.2) in vitro on Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (генетическая линия ВА.5.2 (омикрон 5.2), (EPI_ISL_16613436)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,5 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022 (genetic line BA.5.2 (omicron 5.2), (EPI_ISL_16613436)), obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Research Center for Viral Virology and Virology "Vector" of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 6.5 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 4.Determination of inhibitory activity and toxic concentration was carried out as described in Example 8, the results are presented in Table 4.

Пример 12. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 генетической линии BQ.1.1 in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 12. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 genetic line BQ.1.1 in vitro on Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 штамм hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (генетической линии BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 6,25 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023 (genetic line BQ.1.1 (EPI_ISL_17730076)), obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Research Center for Viral Virology and Virology "Vector" of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 6.25 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 5.Determination of inhibitory activity and toxic concentration was carried out as described in Example 8, the results are presented in Table 5.

Пример 13. Определение противовирусного действия соединений Ia-с в отношении коронавируса SARS-CoV-2 штамм hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (ХВВ.1.5) in vitro на культуре клеток Vero Е6.Example 13. Determination of the antiviral effect of compounds Ia-c against the SARS-CoV-2 coronavirus strain hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (ХВВ.1.5) in vitro on Vero E6 cell culture.

В работе был использован коронавирус SARS-CoV-2 hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 (генетической линии ХВВ.1.5. (EPI_ISL_17770464)), полученный из Государственной коллекции возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов ФБУН ГНЦ БВ «Вектор» Роспотребнадзора в виде культуральной жидкости (титр вируса 4,75 lgTCD50/ml).The work used the SARS-CoV-2 hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023 coronavirus (genetic line HVV.1.5. (EPI_ISL_17770464)), obtained from the State Collection of Pathogens of Viral Infections and Rickettsioses of the Federal Research Center for Viral Virology and Virology "Vector" of Rospotrebnadzor in the form of a culture fluid (virus titer 4.75 lgTCD50/ml).

Определение ингибирующей активности и токсической концентрации проводили как описано в примере 8, результаты представлены в таблице 6.Determination of inhibitory activity and toxic concentration was carried out as described in Example 8, the results are presented in Table 6.

Таким образом, в результате представленных экспериментальных данных, было показано, что заявленные соединения формулы I обладают противовирусной активностью в отношении широкого спектра штаммов вируса SARS-CoV-2. Ингибирование репродукции вируса SARS-CoV-2 касается штаммов hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина.Thus, as a result of the presented experimental data, it was shown that the claimed compounds of formula I have antiviral activity against a wide range of SARS-CoV-2 virus strains. Inhibition of SARS-CoV-2 virus reproduction concerns the strains hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, which are capable of evading the immune response of the host organism.

Claims (4)

1. Применение тиазологидразонов на основе (+)-усниновой кислоты общей формулы Ia-с1. The use of thiazolohydrazones based on (+)-usnic acid of general formula Ia-c в качестве средства для ингибирования репродукции штаммов вируса SARS-CoV-2.as a means of inhibiting the reproduction of SARS-CoV-2 virus strains. 2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что ингибирование репродукции вируса SARS-CoV-2 касается штаммов hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, способных уклоняться от иммунного ответа организма-хозяина.2. The use according to claim 1, characterized in that the inhibition of reproduction of the SARS-CoV-2 virus concerns the strains hCoV-19/Australia/VIC01/2020; hCoV-19/Russia/PSK-2804/2021; hCoV-19/Russia/Moscow171619-031221/2021; hCov-19/Russia/Moscow-49415/2022; hCoV-19/Russia/TOM-SRC-8663/2023; hCov-19/Russia/TYU-SRC-8642/2023, capable of evading the immune response of the host organism.
RU2023132464A 2023-12-04 AGENT FOR INHIBITION OF SARS-CoV-2 VIRUS STRAINS BASED ON (+)-USNIC ACID RU2832905C1 (en)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2832905C1 true RU2832905C1 (en) 2025-01-09

Family

ID=

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018030916A1 (en) * 2016-08-08 2018-02-15 Общество с ограниченной ответственностью "Иновационные Фармакологические Разработки" (ООО "Ифар") 2-acetyl-6-(2-(2-(4-bromobenzylidene)hydrazinyl)thiazole-4-yl)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bh)-one exhibiting an inhibitory effect on human tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 enzyme

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018030916A1 (en) * 2016-08-08 2018-02-15 Общество с ограниченной ответственностью "Иновационные Фармакологические Разработки" (ООО "Ифар") 2-acetyl-6-(2-(2-(4-bromobenzylidene)hydrazinyl)thiazole-4-yl)-3,7,9-trihydroxy-8,9b-dimethyldibenzo[b,d]furan-1(9bh)-one exhibiting an inhibitory effect on human tyrosyl-dna-phosphodiesterase 1 enzyme

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Aleksander S. Filimonov et al., (+)-usnic acid and its derivatives as inhibitors of awide spectrum of SARS-CoV-2 viruses. Viruses 2022, 14, 2154, р.1-21. Aleksander S. Filimonov et al., New hydrazinothiazole derivatives of usnic acid as potent Tdp1 inhibitors. Molecules, 2019, 24, 3711, p.1-34. Д.С. Баев и др., Молекулярное моделирование механизма противовирусного действия новых производных усниновой кислоты в отношении вируса SARS-COV-2. Сборник тезисов докладов Восьмой Междисциплинарной конференции "Молекулярные и Биологические аспекты Химии, Фармацевтики и Фармакологии", Санкт-Петербург, Российская Федерация 24-27 апреля 2023 года, 288 с. RU 2612256 C1 C1, 03.03.2017. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Cihan-Üstündağ et al. Synthesis and antiviral properties of novel indole-based thiosemicarbazides and 4-thiazolidinones
El-Sabbagh et al. Synthesis and antiviral activity of new pyrazole and thiazole derivatives
Pohjala et al. Betulin-derived compounds as inhibitors of alphavirus replication
CN103961340B (en) A kind of LSD1 inhibitor and its application
US5679828A (en) Betulinic acid and dihydrobetulinic acid derivatives and uses therefor
CN103402516B (en) Compound, composition and application method as antiviral drugs
WO2007141390A1 (en) Betulin derived compounds useful as antiviral agents
Huang et al. Structure and anti-HIV activity of betulinic acid analogues
CN1950376A (en) Curcumenol derivative, composition containing curcumenol derivative and pharmaceutical application of curcumenol derivative
Radwan et al. Novel 1, 2, 4-triazole derivatives as antitumor agents against hepatocellular carcinoma
Guggilapu et al. Synthesis of C5-tethered indolyl-3-glyoxylamide derivatives as tubulin polymerization inhibitors
TWI418539B (en) Compounds from mycelium of antrodia cinnamomea and use thereof
Modzelewska-Banachiewicz et al. Antiviral activity of the products of cyclization of dimethyl 2-[(1-arylamino-1-arylmethylidene) hydrazono] succinate
CN104327152A (en) Triptolide derivatives and application thereof
RU2832905C1 (en) AGENT FOR INHIBITION OF SARS-CoV-2 VIRUS STRAINS BASED ON (+)-USNIC ACID
Mahajan et al. Design, synthesis and anti-HIV-1 activity of modified styrylquinolines
CN101616674A (en) Maleic acid monosalt of antiviral agent and pharmaceutical composition comprising the same
US10450295B2 (en) Method of using an indolinone molecule and derivatives for inhibiting liver fibrosis and hepatitis
EP4074314A1 (en) Isoquinoline derivatives for use as antiviral and antitumour agents
JP5172894B2 (en) Anti-hepatitis C composition, method for preparing a medicament for inhibiting or treating hepatitis C virus, and use of limonoid compounds
WO2005084222A2 (en) Synthesis of epothilones, intermediates thereto, analogues and uses thereof
CN115322237B (en) A compound that inhibits RNA viruses
CN110041186A (en) The preparation and application of two condensation body of Kessazulen aldehyde
Chutiwitoonchai et al. Antiviral effect of pinostrobin, a bioactive constituent of Boesenbergia rotunda, against porcine epidemic diarrhea virus
EP0272810A2 (en) Antitumor and antiviral alkaloids