[go: up one dir, main page]

RU2799555C1 - Способ выделения новых гликозидов из pterocarpus marsupium и их терапевтические эффекты - Google Patents

Способ выделения новых гликозидов из pterocarpus marsupium и их терапевтические эффекты Download PDF

Info

Publication number
RU2799555C1
RU2799555C1 RU2021111223A RU2021111223A RU2799555C1 RU 2799555 C1 RU2799555 C1 RU 2799555C1 RU 2021111223 A RU2021111223 A RU 2021111223A RU 2021111223 A RU2021111223 A RU 2021111223A RU 2799555 C1 RU2799555 C1 RU 2799555C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
str
fraction
aqueous
solvent
pterocarposide
Prior art date
Application number
RU2021111223A
Other languages
English (en)
Inventor
Мухаммед Маджид
Кальянам Нагабхушанам
Original Assignee
Мухаммед Маджид
Кальянам Нагабхушанам
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мухаммед Маджид, Кальянам Нагабхушанам filed Critical Мухаммед Маджид
Application granted granted Critical
Publication of RU2799555C1 publication Critical patent/RU2799555C1/ru

Links

Images

Abstract

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для активации аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK) и для ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих. Композиция для активации аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK) и для ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих, содержащая не менее 5 мас. % экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизированная так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас. % птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас. % сабиозида (STR#2), причем композиция получена способом, включающим стадии: a) загрузки порошка дерева Pterocarpus marsupium в экстрактор, b) экстракции метанолом для получения олеосмолы, c) растворения олеосмолы со стадии b) в воде и экстракции толуолом для получения водного слоя и слоя толуола, d) дополнительной промывки слоя толуола со стадии c) водой для дополнительного получения водной фракции и фракции толуола, e) смешивания водных фракций со стадии c) и стадии d) и сушки распылением для получения водного экстракта, f) фракционирования водной фракции со стадии e) этилацетатом для получения водной фракции и фракции этилацетата, g) пропускания фракции этилацетата со стадии f) через колонку с градиентом растворителя с применением силикагеля 60-120 меш для получения обогащенной фракции 1 и фракции 2, h) пропускания обогащенной фракции 1 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®), и кристаллизации с использованием растворителя при температуре от -5 до 0°C для получения соединения, которое идентифицируют как птерокарпозид, представленный STR#1, i) пропускания обогащенной фракции 2 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®) и кристаллизации с использованием метанола при комнатной температуре для получения соединения, которое идентифицируют как сабиозид, представленный STR#2, j) загрузки водного экстракта Pterocarpus marsupium со стадии e) в экстрактор, k) добавления деминерализованной воды к экстракту, перемешивания в течение 3-4 часов при температуре от 65 до 70°C и оставления раствора на 8-10 часов для осаждения нерастворимых веществ, l) фильтрования раствора со стадии k) для удаления нерастворимых веществ и получения чистого фильтрата, m) проверки нерастворимых веществ со стадии l) на присутствие птерокарпозида (STR#1) или сабиозида (STR#2), отбрасывая их, если они присутствуют в незначительных количествах, n) сбора фильтрата со стадии l) и экстракции растворителем два раза для получения водного слоя и слоя растворителя, o) концентрирования слоя растворителя со стадии n) для извлечения растворителя, p) экстракции водного слоя со стадии n) бутанолом три раза и объединения фракций бутанола, q) концентрирования фракций бутанола и растворения в воде для стандартизации до раствора с общим содержанием растворенных твердых веществ 30 %, r) сушки распылением раствора со стадии q) для получения композиции, содержащей не менее 5 мас. % экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизированной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас. % птерокарпозида и не менее 0,5 мас. % сабиозида, представленных STR#1 и STR#2 соответственно. Вышеописанная композиция эффективна для активации аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK) и для ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Figure 00000005

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ НА ПАТЕНТ
Изобретение представляет собой непредварительную подачу предварительной заявки на патент США № 62700446, поданной 19 июля 2018 г.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[001] Изобретение в целом относится к активным молекулам из Pterocarpus marsupium. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу выделения новых C-гликозидов из Pterocarpus marsupium и их терапевтическим эффектам.
ОПИСАНИЕ ПРЕДШЕСТВУЮЩЕГО УРОВНЯ ТЕХНИКИ
[002] Pterocarpus marsupium представляет собой лиственное дерево, произрастающее в некоторых частях Индии, Непала и Шри-Ланки. Оно содержит множество флавоноидов, гликозидов, катехинов, стильбеноидов и таннинов, обладающих терапевтическими свойствами. Сообщается, что Pterocarpus marsupium обладает положительным эффектом при лечении диареи, зубной боли, лихорадки, инфекций мочевыводящих путей и кожи. (S. S. Handa et al., Pterocarposide, an isoaurone C-glycoside from Pterocarpus marsupium, Tetrahedron Letters 41 (2000) 1579-1581). Сообщается, что С-гликозиды, выделенные из Pterocarpus marsupium, обладают антигипергликемической активностью. Однако большинство С-гликозидов из этого растения еще предстоит идентифицировать, чтобы полностью раскрыть его терапевтический потенциал.
[003] Аденозинмонофосфат-активируемая протеинкиназа (AMPK) уже много лет известна как центральный метаболический регулятор для ингибирования энергоемких путей, а также для активации компенсирующих программ выработки энергии. Фермент AMPK активируется при изменении энергетического статуса клетки, например, при сокращении мышц и гипоксии. AMPK можно фармакологически активировать с помощью соединения 5-аминоимидазол-4-карбоксамид рибонуклеозид (AICAR) и антидиабетического агента метформина. AMPK играет важную роль в стимуляции поглощения глюкозы мышцами с помощью этих физиологических и фармакологических стимулов. Активация AMPK во время ишемии миокарда увеличивает поглощение глюкозы и гликолиз, а также увеличивает окисление жирных кислот во время реперфузии. Следующие статьи раскрывают роль активации AMPK.
1. Ha J, Guan KL, Kim J, AMPK and autophagy in glucose/glycogen metabolism, Mol Aspects Med. 2015 Dec; 46:46-62.
2. N. Musi and L. J. Goodyear, AMP-activated protein kinase and muscle glucose uptake, Acta Physiol Scand 2003, 178, 337-345.
3. Sambandam N, Lopaschuk GD, AMP-activated protein kinase (AMPK) control of fatty acid and glucose metabolism in the ischemic heart, Prog Lipid Res. 2003 May; 42(3):238-56.
[004] В настоящее время AMPK представляет собой терапевтическую мишень для лечения метаболических расстройств, таких как диабет, ожирение и т.д. Ингибирование глюконеогенеза также важно для снижения образования кетоновых тел у людей с диабетом, что в противном случае может оказаться пагубным (Blackshear et al., The effects of inhibition of gluconeogenesis on ketogenesis in starved and diabetic rats, Biochemical Journal 1975, 148 (3): 353-362).
[005] В предыдущих исследованиях были успешно идентифицированы флавоноиды и гликозиды из Pterocarpus marsupium (Bezuidenhoudt et al., Flavonoid Analogues from Pterocarpus Species Phytochemistry. Vol. 26. № 2 pp. 531-535. 1987), однако не удалось выделить некоторые из C-гликозидов в их чистой форме для того, чтобы выяснить их биологическую активность. Настоящее изобретение раскрывает способ идентификации новых С-гликозидов из Pterocarpus marsupium и их терапевтический эффект.
[006] Основная цель изобретения состоит в раскрытии способа выделения С-гликозидов, представляющих собой птерокарпозид (номер CAS 264876-26-8) и сабиозид (номер CAS 108351-24-2), из Pterocarpus marsupium.
[007] Другой целью изобретения является раскрытие композиции, содержащей С-гликозиды птерокарпозид (STR#1) и сабиозид (STR#2), выделенные из Pterocarpus marsupium, и ее терапевтического потенциала в отношении активации AMPK и ингибирования глюконеогенеза.
[008] Настоящее изобретение решает указанные выше задачи и обеспечивает связанные с этим преимущества.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[009] В предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение раскрывает способ выделения C-гликозидов птерокарпозида (STR#1) и сабиозида (STR#2) из Pterocarpus marsupium.
[0010] В связанном варианте осуществления изобретение раскрывает композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованную так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2).
[0011] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает способ активации AMPK в клетках млекопитающих, включающий стадию приведения клеток млекопитающих в контакт с композицией, содержащей не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), чтобы вызвать эффект активации AMPK.
[0012] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает способ ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих, где указанный способ включает стадии приведения клеток млекопитающих в контакт с композицией, содержащей не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), чтобы вызвать эффект снижения образования глюкозы.
[0013] Другие признаки и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из следующего ниже более подробного описания изобретения, рассматриваемого в сочетании с сопроводительными графическими материалами, иллюстрирующими, в качестве примера, принцип изобретения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
[0014] Фиг. 1 представляет собой изображение вестерн-блоттинга, показывающее активацию AMPK в клетках H4IIE при использовании композиции на основе птерокарпозида.
[0015] Фиг. 2 представляет собой графическое изображение, демонстрирующее увеличение экспрессии pAMPK в клетках HepG2 при использовании композиции на основе птерокарпозида.
[0016] Фиг. 3 представляет собой графическое изображение, демонстрирующее снижение образования глюкозы в клетках H4IIE при использовании композиции на основе птерокарпозоида.
ОПИСАНИЕ НАИБОЛЕЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0017] В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает способ выделения С-гликозидов из Pterocarpus marsupium, причем указанный способ включает стадии:
a) загрузки порошка дерева Pterocarpus marsupium в экстрактор,
b) экстракции растворителем для получения олеосмолы,
c) растворения олеосмолы со стадии b) в воде и экстракции растворителем для получения водного слоя и слоя растворителя,
d) дополнительной промывки слоя растворителя со стадии c) водой для дополнительного получения водной фракции и фракции растворителя,
e) смешивания водных фракций со стадии c) и стадии d) и сушки распылением для получения водного экстракта,
f) фракционирования водной фракции со стадии е) растворителем для получения водной фракции и фракции растворителя,
g) пропускания фракции растворителя со стадии f) через колонку с градиентом растворителя с применением силикагеля 60-120 меш для получения обогащенной фракции 1 и фракции 2,
h) пропускания обогащенной фракции 1 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®), и кристаллизации с использованием растворителя при температуре от -5 до 0°C для получения соединения, которое идентифицируют как птерокарпозид, представленный STR#1,
i) пропускания обогащенной фракции 2 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®), и кристаллизации с использованием растворителя при комнатной температуре для получения соединения, которое идентифицируют как сабиозид, представленный STR#2.
Figure 00000001
Figure 00000002
[0018] В связанном варианте осуществления изобретения растворитель выбран из группы, состоящей, но не ограничивающейся перечисленным, из метанола, этанола, бутанола, этилацетата, хлороформа, толуола, ацетона и гексана.
[0019] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованную так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), где указанная композиция получена способом, включающим стадии:
a) загрузки порошка дерева Pterocarpus marsupium в экстрактор,
b) экстракции растворителем для получения олеосмолы,
c) растворения олеосмолы со стадии b) в воде и экстракции растворителем для получения водного слоя и слоя растворителя,
d) дополнительной промывки слоя растворителя со стадии c) водой для дополнительного получения водной фракции и фракции растворителя,
e) смешивания водных фракций со стадии c) и стадии d) и сушки распылением для получения водного экстракта,
f) фракционирования водной фракции со стадии е) растворителем для получения водной фракции и фракции растворителя,
g) пропускания фракции растворителя со стадии f) через колонку с градиентом растворителя с применением силикагеля 60-120 меш для получения обогащенной фракции 1 и фракции 2,
h) пропускания обогащенной фракции 1 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®), и кристаллизации с использованием растворителя при температуре от -5 до 0°C для получения соединения, которое идентифицируют как птерокарпозид, представленный STR#1,
i) пропускания обогащенной фракции 2 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®), и кристаллизации с использованием растворителя при комнатной температуре для получения соединения, которое идентифицируют как сабиозид, представленный STR#2,
j) загрузки водного экстракта Pterocarpus marsupium со стадии е) в экстрактор,
k) добавления деминерализованной воды к экстракту и перемешивания в течение 3-4 часов при температуре от 65 до 70°C и оставления раствора на 8-10 часов для осаждения нерастворимых веществ,
l) фильтрации раствора со стадии k) для удаления нерастворимых веществ и получения чистого фильтрата,
m) проверки нерастворимых веществ со стадии l) на присутствие птерокарпозида (STR#1) или сабиозида (STR#2), отбрасывая их, если они присутствуют в незначительных количествах,
n) сбора фильтрата со стадии l) и экстракции растворителем два раза для получения водного слоя и слоя растворителя,
o) концентрирования слоя растворителя со стадии n) для извлечения растворителя,
p) экстракции водного слоя со стадии n) растворителем три раза и объединения фракций растворителя,
q) концентрирования фракций растворителя и растворения в воде для стандартизации до раствора с общим содержанием растворенных твердых веществ 30 %,
r) сушки распылением раствора со стадии q) для получения композиции, содержащей не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида и не менее 0,5 мас.% сабиозида, представленных STR#1 и STR#2, соответственно.
Figure 00000001
Figure 00000002
[0020] В связанном варианте осуществления изобретения растворитель выбран из группы, состоящей, но не ограничивающейся перечисленным, из метанола, этанола, бутанола, этилацетата, хлороформа, толуола, ацетона и гексана.
[0021] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованную так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2).
[0022] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает способ активации AMPK в клетках млекопитающих, включающий стадию приведения клеток млекопитающих в контакт с композицией, содержащей не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), чтобы вызвать эффект активации AMPK. В связанном варианте осуществления клетки млекопитающих представляют собой клетки человека.
[0023] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованную так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), для применения для активации AMPK в клетках млекопитающих.
[0024] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает способ ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих, где указанный способ включает стадии приведения клеток млекопитающих в контакт с композицией, содержащей не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), чтобы вызвать эффект снижения образования глюкозы. В связанном варианте осуществления клетки млекопитающих представляют собой клетки человека.
[0025] В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение раскрывает композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизованную так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2), для применения для ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих.
[0026] Следующие разделы этого описания состоят из иллюстративных примеров наиболее предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения.
[0027] ПРИМЕРЫ
[0028] Пример 1: C-гликозидная композиция и способ ее получения
[0029] С-гликозиды из Pterocarpus marsupium выделяют и идентифицируют с помощью следующих стадий:
a) загрузки порошка дерева Pterocarpus marsupium в экстрактор,
b) экстракции метанолом для получения олеосмолы,
c) растворения олеосмолы со стадии b) в воде и экстракции толуолом для получения водного слоя и слоя толуола,
d) дополнительной промывки слоя толуола со стадии c) водой для дополнительного получения водной фракции и фракции толуола,
e) смешивания водных фракций со стадии c) и стадии d) и сушки распылением для получения водного экстракта,
f) фракционирования водной фракции со стадии е) этилацетатом для получения водной фракции и фракции этилацетата,
g) пропускания фракции этилацетата со стадии f) через колонку с градиентом растворителя с применением силикагеля 60-120 меш для получения обогащенной фракции 1 и фракции 2,
h) пропускания обогащенной фракции 1 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®) и кристаллизацию с использованием метанола при температуре от -5 до 0°C для получения соединения, которое идентифицируют как птерокарпозид, представленный STR#1,
i) пропускания обогащенной фракции 2 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®) и кристаллизацию с использованием ацетона при комнатной температуре для получения соединения, которое идентифицируют как сабиозид, представленный STR#2.
Figure 00000001
Figure 00000002
[0030] Стереохимия выделенного птерокарпозида (STR#1) и сабиозида (STR#2) представлена ниже:
[0031] Птерокарпозид
номер CAS 264876-26-8
Молекулярная формула: C21 H20 O9
Химическое название: (3E)-7-β-D-глюкопиранозил-6-гидрокси-3-[(4-гидроксифенил)метилен]-2(3H)-бензофуранон.
[0032] Сабиозид
номер CAS 108351-24-2
Молекулярная формула: C21 H20 O10
Химическое название: 8-β-D-глюкопиранозил-3,7-дигидрокси-2-(4-гидроксифенил)-4H-1-бензопиран-4-он.
[0033] Кроме того, получали водорастворимую композицию, содержащую не менее 5 мас.% экстракта P. marsupim, и стандартизовали ее так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас.% птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас.% сабиозида (STR#2). Стадии получения композиции приведены ниже:
a) загрузка водного экстракта Pterocarpus marsupium в экстрактор,
b) добавление деминерализованной воды к экстракту, и перемешивание в течение 3-4 часов при температуре от 65 до 70°C, и оставление раствора на 8-10 часов для осаждения нерастворимых веществ,
c) фильтрация раствора со стадии b) для удаления нерастворимых веществ и получения чистого фильтрата,
d) проверка нерастворимых веществ со стадии c) на присутствие птерокарпозида (STR#1) или сабиозида (STR#2), отбрасывая их, если они присутствуют в незначительных количествах,
e) сбор фильтрата со стадии c) и экстракция растворителем два раза для получения водного слоя и слоя растворителя,
f) концентрирование слоя растворителя со стадии e) для извлечения растворителя,
g) экстракция водного слоя со стадии е) бутанолом три раза и объединение фракций бутанола,
h) концентрирование фракций бутанола и растворение в воде для стандартизации до раствора с общим содержанием растворенных твердых веществ 30 %,
i) сушка распылением раствора со стадии h) для получения композиции, содержащей не менее 5 мас.% экстракта P. marsupim, содержащего птерокарпозид и сабиозид, представленные STR#1 и STR#2, соответственно.
[0034] Пример 2: Активация AMPK
[0035] Проводили несколько экспериментов на клетках гепатомы крысы H4IIE и клетках гепатомы человека HepG2. Сливающиеся чашки клеток H4IIE или HepG2 обрабатывали композицией, содержащей птерокарпозид (STR#1) и сабиозид (STR#2) (композиция на основе птерокарпозида), или положительным контролем, 5-аминоимидазол-4-карбоксамид рибонуклеотидом (AICAR), в следующих дозах.
[0036] Дозы композиции на основе птерокарпозида: 0,05, 0,1, 0,5 и 1 мкМ.
[0037] AICAR (положительный контроль): 2 мМ.
[0038] Клетки лизировали и белки разделяли на 4-20% SDS-PAGE геле и переносили в нитроцеллюлозу. Активацию AMPK детектировали с помощью вестерн-блоттинга с pAMPK (Thrl72) и pACC (Ser79). AMPK и GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) использовали в качестве контроля.
[0039] Результаты: Композиция, содержащая птерокарпозид (STR#1) и сабиозид (STR#2), дозозависимо увеличивала статус фосфорилирования AMPK (Thr172) с максимальным фосфорилированием, наблюдаемым между концентрациями 0,1-0,5 мкМ (фиг. 1). Композиция также дозозависимо увеличивала фосфорилирование ацетил-КоА-карбоксилазы (АСС). Это первая демонстрация того, что композиция, содержащая птерокарпозид (STR#1) и сабиозид (STR#2), активирует AMPK. Повышенное фосфорилирование АСС может указывать на то, что композиция может ингибировать синтез жирных кислот и потенциально активировать окисление жирных кислот. Аналогичные результаты также наблюдали в клетках HepG2 (фиг. 2).
[0040] Пример 2: Ингибирование образования глюкозы
[0041] Сливающиеся чашки с H4IIE обрабатывали 0,1 мкМ или 0,5 мкМ композиции, содержащей птерокарпозид (STR#1) и сабиозид (STR#2), для изучения ее влияния на индуцированное дексаметазоном образование глюкозы. Клетки H4IIE обрабатывали 500 нМ дексаметазона и 0,1 мМ 8-CTP-cAMP (Dex/cAMP), различными концентрациями композиции на основе птерокарпозида или 5 нМ инсулина в буфере для образования глюкозы (среда DMEM (модифицированая по способу Дульбекко среда Игла) без глюкозы, pH 7,4, содержащая 20 мМ лактата натрия и 2 мМ пирувата натрия, без фенолового красного) в течение 5 часов.
[0042] Клетки промывали PBS Дульбекко (фосфатно-солевой буферный раствор Дульбекко), а затем инкубировали в течение 3 часов в буфере для образования глюкозы с такими же концентрациями Dex/cAMP, инсулина и композиции на основе птерокарпозида. Образование глюкозы оценивали путем измерения концентрации глюкозы в среде, как описано в публикации Wang et al (2000) с модификациями, с использованием набора для анализа глюкозы (HK) (Sigma Chemicals).
[0043] Результаты: Обработка композицией на основе птерокарпозида (0,1 и 0,5 мкМ) ингибировала индуцированное дексаметазоном образование глюкозы в клетках H4IIE в той же степени, что и инсулин (100 нМ). Результаты представлены в виде мг образованной глюкозы ± SEM (фиг. 3). Поправки на количество клеток делали на основе концентрации белка, которую оценивали с использованием реагента для анализа белков методом Брэдфорда от компании Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA). (Wang, J. C., Stafford, J. M., Scott, D. K., Sutherland, C., Granner, D. K. (2000). The molecular physiology of hepatic nuclear factor 3 in the regulation of gluconeogenesis. The Journal of Biological Chemistry 275: 14717-14721).
[0044] Хотя изобретение было описано со ссылкой на предпочтительный вариант осуществления, специалистам в данной области должно быть очевидно, что изобретение им не ограничено. Напротив, объем изобретения должен интерпретироваться только в сочетании с прилагаемой формулой изобретения.

Claims (23)

1. Композиция для активации аденозинмонофосфат-активируемой протеинкиназы (AMPK) и для ингибирования глюконеогенеза в клетках млекопитающих, содержащая не менее 5 мас. % экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизированная так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас. % птерокарпозида (STR#1) и не менее 0,5 мас. % сабиозида (STR#2):
Figure 00000003
Figure 00000004
причем композиция получена способом, включающим стадии:
a) загрузки порошка дерева Pterocarpus marsupium в экстрактор,
b) экстракции метанолом для получения олеосмолы,
c) растворения олеосмолы со стадии b) в воде и экстракции толуолом для получения водного слоя и слоя толуола,
d) дополнительной промывки слоя толуола со стадии c) водой для дополнительного получения водной фракции и фракции толуола,
e) смешивания водных фракций со стадии c) и стадии d) и сушки распылением для получения водного экстракта,
f) фракционирования водной фракции со стадии e) этилацетатом для получения водной фракции и фракции этилацетата,
g) пропускания фракции этилацетата со стадии f) через колонку с градиентом растворителя с применением силикагеля 60-120 меш для получения обогащенной фракции 1 и фракции 2,
h) пропускания обогащенной фракции 1 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®) и кристаллизации с использованием растворителя при температуре от -5 до 0°C для получения соединения, которое идентифицируют как птерокарпозид, представленный STR#1,
i) пропускания обогащенной фракции 2 со стадии g) через изократическую колонку с силикагелем RP-18, затем через колонку LH-20 (Sephadex®) и кристаллизации с использованием метанола при комнатной температуре для получения соединения, которое идентифицируют как сабиозид, представленный STR#2,
j) загрузки водного экстракта Pterocarpus marsupium со стадии e) в экстрактор,
k) добавления деминерализованной воды к экстракту, перемешивания в течение 3-4 часов при температуре от 65 до 70°C и оставления раствора на 8-10 часов для осаждения нерастворимых веществ,
l) фильтрования раствора со стадии k) для удаления нерастворимых веществ и получения чистого фильтрата,
m) проверки нерастворимых веществ со стадии l) на присутствие птерокарпозида (STR#1) или сабиозида (STR#2), отбрасывая их, если они присутствуют в незначительных количествах,
n) сбора фильтрата со стадии l) и экстракции растворителем два раза для получения водного слоя и слоя растворителя,
o) концентрирования слоя растворителя со стадии n) для извлечения растворителя,
p) экстракции водного слоя со стадии n) бутанолом три раза и объединения фракций бутанола,
q) концентрирования фракций бутанола и растворения в воде для стандартизации до раствора с общим содержанием растворенных твердых веществ 30 %,
r) сушки распылением раствора со стадии q) для получения композиции, содержащей не менее 5 мас. % экстракта Pterocarpus marsupium, стандартизированной так, чтобы она содержала не менее 0,5 мас. % птерокарпозида и не менее 0,5 мас. % сабиозида, представленных STR#1 и STR#2 соответственно.
2. Композиция по п. 1, где растворитель выбран из группы, состоящей из метанола, этанола, бутанола, этилацетата, хлороформа, толуола, ацетона и гексана.
3. Композиция по п. 1, где клетки млекопитающих представляют собой клетки человека.
RU2021111223A 2018-07-19 2019-07-18 Способ выделения новых гликозидов из pterocarpus marsupium и их терапевтические эффекты RU2799555C1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US62/700,446 2018-07-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2799555C1 true RU2799555C1 (ru) 2023-07-06

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5886029A (en) * 1997-09-05 1999-03-23 Dhaliwal; Kirpal S. Method and composition for treatment of diabetes
US6617313B1 (en) * 2002-03-13 2003-09-09 Council Of Scientific And Industrial Research Glucopyranoside and process of isolation thereof from pterocarpus marsupium pharmaceutical composition containing the same and use thereof
IN191609B (ru) * 1999-02-25 2003-12-06 Council Scient Ind Res

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5886029A (en) * 1997-09-05 1999-03-23 Dhaliwal; Kirpal S. Method and composition for treatment of diabetes
IN191609B (ru) * 1999-02-25 2003-12-06 Council Scient Ind Res
US6617313B1 (en) * 2002-03-13 2003-09-09 Council Of Scientific And Industrial Research Glucopyranoside and process of isolation thereof from pterocarpus marsupium pharmaceutical composition containing the same and use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
S. S. HANDA et all. Pterocarposide, an isoaurone C-glucoside from Pterocarpus marsupium //Tetrahedron Letters 41 (2000) 1579-1581. BEZUDENHOUDT et all. Flavonoid analoges from Pterocarpus species //Phytochemistry, v.26, n. 2, 1987, pp. 531-535. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101450963B (zh) 葫芦烷型三萜皂苷化合物、其药物组合物及其制备方法和用途
Pari et al. Efficacy of coumarin on hepatic key enzymes of glucose metabolism in chemical induced type 2 diabetic rats
Sawada et al. Glabridin induces glucose uptake via the AMP-activated protein kinase pathway in muscle cells
Bourebaba et al. Laurus nobilis ethanolic extract attenuates hyperglycemia and hyperinsulinemia-induced insulin resistance in HepG2 cell line through the reduction of oxidative stress and improvement of mitochondrial biogenesis–Possible implication in pharmacotherapy
JP5439644B2 (ja) ウーロン茶又は紅茶から抽出された血糖値上昇抑制剤及びミトコンドリア膜電位上昇剤
Najafian The effects of curcumin on alpha amylase in diabetics rats
Qin et al. Synthesis and biological activity of novel tiliroside derivants
CN105646611B (zh) 一种二咖啡酰亚精胺衍生物糖苷及其用途
El Khatib et al. Identification of a sesquiterpene lactone from Arctium lappa leaves with antioxidant activity in primary human muscle cells
Eluehike et al. Changes in organ and body weight, serum amylase and antidiabetic effects of tannins from Spondias mombin on streptozotocin-induced diabetic rats
Raciti et al. Citrus aurantium L. dry extracts promote C/ebpβ expression and improve adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells
CN105232891B (zh) 延龄草提取物及其中皂苷类化合物的制备方法及其在制备抗缺血性心脏病药物中的应用
Hwang et al. Chemical constituents isolated from Actinidia polygama and their α-glucosidase inhibitory activity and insulin secretion effect
US20080160119A1 (en) Sesquiterpenoid Derivatives Having Adipocyte Differentiation Inhibitory Effect
CN111067094B (zh) 一种抑制肝糖异生的非苦味苦瓜三萜组合物及其应用
RU2799555C1 (ru) Способ выделения новых гликозидов из pterocarpus marsupium и их терапевтические эффекты
US20200024296A1 (en) Process for the isolation of novel glycosides from pterocarpus marsupium and their therapeutic effects
Belgacem et al. Exploration of hypoglycemic effect of an extract from leaves of a plant from Tunisian pharmacopeia: Artemisia campestris (Asteraceae)
EP3120847B1 (en) Glechoma longituba extract for the treatment of kidney diseases or diabetes mellitus
Yagasaki Phytochemicals, their intestinal metabolites, and skeletal muscle function
CN112592328A (zh) 草豆蔻中二芳基庚烷-查尔酮聚合物及其药物组合物与应用
US20210338703A1 (en) Process for the isolation of novel glycosides from pterocarpus marsupium and their therapeutic effects
CN101342159B (zh) 溴酚化合物在制备治疗2型糖尿病或肥胖症药物中的应用
CN110123827A (zh) 一种治疗由代谢异常所致疾病的药物组合物及其制备方法和应用
TW201534315A (zh) 用於支援體重管理之植物性己酮糖激酶抑制劑