RU2742034C2 - Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения - Google Patents
Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2742034C2 RU2742034C2 RU2018135044A RU2018135044A RU2742034C2 RU 2742034 C2 RU2742034 C2 RU 2742034C2 RU 2018135044 A RU2018135044 A RU 2018135044A RU 2018135044 A RU2018135044 A RU 2018135044A RU 2742034 C2 RU2742034 C2 RU 2742034C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cell
- cells
- concentration
- growth factor
- umbilical cord
- Prior art date
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 69
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims abstract description 38
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims abstract description 27
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims abstract description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 102100032528 C-type lectin domain family 11 member A Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 101710167766 C-type lectin domain family 11 member A Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 claims abstract description 9
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 102100039350 Interferon alpha-7 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 claims abstract 4
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 31
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 16
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 15
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 15
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 abstract description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 38
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 20
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 10
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 10
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 9
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 9
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 9
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 9
- 244000309464 bull Species 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 6
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 4
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 4
- 102000009088 Angiopoietin-1 Human genes 0.000 description 3
- 108010048154 Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- -1 FGF-basic Proteins 0.000 description 3
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 3
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 3
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 3
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 3
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 3
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 3
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 2
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 206010070511 Hypoxic-ischaemic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 2
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 2
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 description 1
- 206010000804 Acute hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 208000002467 Acute-On-Chronic Liver Failure Diseases 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 1
- 201000006474 Brain Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100021936 C-C motif chemokine 27 Human genes 0.000 description 1
- 101710112538 C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 101710085500 C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 108010055165 Chemokine CCL4 Proteins 0.000 description 1
- 102000001326 Chemokine CCL4 Human genes 0.000 description 1
- 108010014419 Chemokine CXCL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 1
- 108010008951 Chemokine CXCL12 Proteins 0.000 description 1
- 102000006573 Chemokine CXCL12 Human genes 0.000 description 1
- 206010057573 Chronic hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 208000008960 Diabetic foot Diseases 0.000 description 1
- 208000010334 End Stage Liver Disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000049772 Interleukin-16 Human genes 0.000 description 1
- 101800003050 Interleukin-16 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102100032352 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N Liraglutide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)CC[C@H](NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 YSDQQAXHVYUZIW-QCIJIYAXSA-N 0.000 description 1
- 108010019598 Liraglutide Proteins 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000551546 Minerva Species 0.000 description 1
- 208000037212 Neonatal hypoxic and ischemic brain injury Diseases 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102100035846 Pigment epithelium-derived factor Human genes 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 206010037597 Pyelonephritis acute Diseases 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 208000007400 Relapsing-Remitting Multiple Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 1
- 208000008253 Systolic Heart Failure Diseases 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 1
- 206010053615 Thermal burn Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 201000001555 acute pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 208000009973 brain hypoxia - ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000003293 cardioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 210000004252 chorionic villi Anatomy 0.000 description 1
- 208000011444 chronic liver failure Diseases 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229960002701 liraglutide Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002175 menstrual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011133 mesenchymal stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 210000003657 middle cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 208000033300 perinatal asphyxia Diseases 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 108090000102 pigment epithelium-derived factor Proteins 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 208000034133 primary 1 avascular necrosis of femoral head Diseases 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000037394 skin elasticity Effects 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003238 somatosensory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000002660 stem cell treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000036575 thermal burns Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтическому средству для регенеративной медицины. Терапевтическое средство для регенеративной медицины, представляющее собой бесклеточную кондиционированную среду, содержащую продукты секреции мезенхимальных стромальных клеток (МСК) человека, включающее факторы: G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), HGF (фактор роста гепатоцитов), IFN-a2 (интерферон альфа-2), IL-6 (интерлейкин-6), IL-8 (интерлейкин-8), SCF (фактор стволовых клеток), SCGF (фактор роста стволовых клеток), VEGF (фактор роста сосудистого эндотелия), FGF (фактор роста фибробластов), взятые в определенном соотношении, причем бесклеточная кондиционированная среда содержит продукты секреции МСК, полученная путем культивирования мезенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека в присутствии сыворотки пуповинной крови человека, с последующей очисткой кондиционированной среды от остатков клеток, замораживанием или лиофилизацией. Вышеописанное средство, не содержащее клеток и компонентов ксеногенного происхождения, содержит природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, что обеспечивает стимуляцию регенерации. 1 табл., 6 пр.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области медицины, фармакологии и регенеративной медицины, в частности, и к бесклеточным лекарственным средствам для стимуляции регенерации клеток и тканей, в том числе, для стимуляции эпителио- и ангиогенеза, нейропротекции, лечении острых и хронических поражений кожных покровов и роговицы различного генеза, при поражениях центральной и периферической нервной системы различного происхождения, а также к способам получения бесклеточных лекарственных средств.
Описание предшествующего уровня техники
Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК) представляют собой гетерогенную группу клеток, обладающих способностью расти in vitro в прикрепленном состоянии, дифференцироваться в различные типы клеток мезодермального и немезодермального происхождения и несущих на своей поверхности определенный набор маркеров (кластеров дифференцировки).
МСК могут быть выделены из различных тканей млекопитающих, включая человека: сосудистой стенки, печени, кожи, жировой ткани, периферической, пуповинной и менструальной крови, амниотической жидкости и даже из пульпы выпавших молочных зубов [Romanov Y.A., Svintsitskaya V.A., Smirnov V.N. Searching for alternative sources of postnatal human mesenchymal stem cells: candidate MSC-like cells from umbilical cord. Stem Cells. 2003; 21(1):105-110; Gronthos S., Franklin D.M., Leddy H.A., Robey P.G., Storms R.W., Gimble J.M. Surface protein characterization of human adipose tissue-derived stromal cells. J Cell Physiol. 2001; 189(1):54-63; Igura K., Zhang X., Takahashi K., Mitsuru A., Yamaguchi S., Takashi T.A. Isolation and characterization of mesenchymal progenitor cells from chorionic villi of human placenta. Cytotherapy. 2004; 6(6):543-553; Tsai M.-S., Lee J.-L., Chang Y.-J., Hwang S.-M. Isolation of human multipotent mesenchymal stem cells from second-trimester amniotic fluid using a novel two-stage culture protocol. Hum Reprod. 2004; 19(6):1450-1456; Zvaifler N.J., Marinova-Mutafchieva L., Adams G., Edwards С.J., Moss J., Burger J.A., et al. Mesenchymal precursor cells in the blood of normal individuals. Arthritis Res. 2000; 2(6):477-488; Campagnoli C., Roberts I.A., Kumar S., Bennett P.R., Bellantuono I., Fisk N.M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal blood, liver, and bone marrow. Blood. 2001; 98(8):2396-2402; Kalaszczynska I., Ferdyn K. Wharton's jelly derived mesenchymal stem cells: future of regenerative medicine? Recent findings and clinical significance. Biomed Res Int. 2015; 2015:430847]. К наиболее перспективным источникам МСК до недавнего времени можно было отнести два: костный мозг и жировую ткань. Выделение и эффективное размножение МСК из большинства других источников, проблематично в связи с крайне низкой концентрацией искомых клеток (менее тысячных долей процента в случае пуповинной крови при доношенной беременности), либо сложностями в получении этих тканей в достаточных количествах.
Среди источников МСК постнатального происхождения наибольший интерес вызывают ткани перинатального происхождения, обладающие целым рядом неоспоримых преимуществ: содержание МСК в них значительно превосходит их концентрацию в тканях взрослого организма: около 5×104 клеток/см пуповины, против 5×103 клеток/г жировой ткани и 0.01% мононуклеарной фракции костного мозга. Кроме этого, заготовка, в частности, ткани пупочного канатика не требует специального хирургического вмешательства, безопасна, безболезненна и проводится уже после свершившихся родов, а биологические свойства «молодых» клеток (пролиферативная и синтетическая активность, способность к разнонаправленной дифференцировке и т.п.) выгодно отличают их от «взрослых» МСК, уже исчерпавших значительную часть заложенного в них от природы потенциала.
Терапевтический эффект МСК достигается как путем миграции клеток в очаг повреждения и/или воспаления, так и за счет секреции растворимых молекул, обладающих противовоспалительными, ангиогенными и иммуномодулирующими свойствами как in vitro [Arutyunyan I., Fatkhudinov Т., Kananykhina E., Usman N., Elchaninov A., Makarov A., et al. Role of VEGF-A in angiogenesis promoted by umbilical cord-derived mesenchymal stromal/stem cells: in vitro study. Stem Cell Res Ther. 2016; 7:46; Svirshchevskaya E. V, Poltavtseva R.A., Beletskii I.P., Selezneva I.I., Savilova A.M., Sukhikh G.T. Interaction of Lymphocytes with Mesenchymal Stem Cells. Bull Exp Biol Med. 2016; 161(4):571-579; Yarygin K.N., Lupatov A.Y., Sukhikh G.T. Modulation of Immune Responses by Mesenchymal Stromal Cells. Bull Exp Biol Med. 2016; 161(4):561-565; Svirshchevskaya E. V, Poltavtseva R.A., Beletskii I.P., Selezneva I.I., Sukhikh G.T. Antiproliferative Effects of Mesenchymal Stem Cells and Epithelial Cells on Lymphocytes. Bull Exp Biol Med. 2016; 161(4):518-522; Arutyunyan I. V, Kananykhina E.Y., Fatkhudinov Т.K., 
, A. V, Makarov A. V, Raimova E.S., et al. Angiogenic Potential of Multipotent Stromal Cells from the Umbilical Cord: an In Vitro Study. Bull Exp Biol Med. 2016; 161(1):141-149], так и in vivo в доклинических моделях заболеваний, включая острые повреждения легких [Matthay MA, Goolaerts A, Howard JP, Lee JW. Mesenchymal stem cells for acute lung injury: preclinical evidence. Crit Care Med. 2010, 38: S569-73; Mei SH, McCarter SD, Deng Y, Parker CH, Liles WC, et al. Prevention of LPS induced acute lung injury in mice by mesenchymal stem cells overexpressing angiopoietin 1. PLoS Med. 2007, 4: e269], септический шок [Mei SH, Haitsma JJ, Dos Santos CC, Deng Y, et al. Mesenchymal stem cells reduce inflammation while enhancing bacterial clearance and improving survival in sepsis. Am J Respir Crit Care Med. 2010, 182: 1047-1057], острый инфаркт миокарда [Boyle AJ, McNiece IK, Hare JM. Mesenchymal stem cell therapy for cardiac repair. Methods Mol Biol. 2010; 660: 65-84] и т.д. [Plotnikov E.Y., Pulkova N. V, Pevzner I.B., Zorova L.D., Silachev D.N., Morosanova M.A., et al. Inflammatory pre-conditioning of mesenchymal multipotent stromal cells improves their immunomodulatory potency in acute pyelonephritis in rats. Cytotherapy. 2013; 15(6):679-689; Bobkova N. V, Poltavtseva R.A., Samokhin A.N., Sukhikh G.T. Therapeutic effect of mesenchymal multipotent stromal cells on memory in animals with Alzheimer-type neurodegeneration. Bull Exp Biol Med. 2013; 156(1):119-121; Fatkhudinov Т.K., 
, G.B., Goldshtein D. V, Sukhikh G.T. Mechanisms of therapeutic activity of multipotent cells in heart diseases. Bull Exp Biol Med. 2014; 156(4):535-543; Silachev D.N., Plotnikov E.Y., Babenko V.A., Danilina T.I., Zorov L.D., Pevzner I.B., et al. Intra-Arterial Administration of Multipotent Mesenchymal Stromal Cells Promotes Functional Recovery of the Brain After Traumatic Brain Injury. Bull Exp Biol Med. 2015; 159(4):528-533; Danilina T.I., Silachev D.N., Pevzner I.B., Gulyaev M. V, Pirogov Y.A., Zorova L.D., et al. The Influence of Proinflammatory Factors on the Neuroprotective Efficiency of Multipotent Mesenchymal Stromal Cells in Traumatic Brain Injury. Bull Exp Biol Med. 2017; 163(4):528-534].
В клинических условиях эффективность МСК была убедительно показана для таких заболеваний, как злокачественные заболевания крови и болезнь «трансплантат против хозяина» (РТПХ) [Can A., Celikkan F.T., Cinar О. Umbilical cord mesenchymal stromal cell transplantations: A systemic analysis of clinical trials. Cytotherapy. 2017; 19(12):1351-1382; Macmillan M.L., Blazar B.R., DeFor Т.Е., Wagner J.E. Transplantation of ex-vivo culture-expanded parental haploidentical mesenchymal stem cells to promote engraftment in pediatric recipients of unrelated donor umbilical cord blood: results of a phase I-II clinical trial. Bone Marrow Transplant. 2009; 43(6):447-54], ишемический инсульт [Chen L., Xi H., Huang H., Zhang F., Liu Y., Chen D., et al. Multiple cell transplantation based on an intraparenchymal approach for patients with chronic phase stroke. Cell Transplant. 2013; 22 Suppl 1:S83-91; Jiang Y., Zhu W., Zhu J., Wu L., Xu G., Liu X. Feasibility of delivering mesenchymal stem cells via catheter to the proximal end of the lesion artery in patients with stroke in the territory of the middle cerebral artery. Cell Transplant. 2013; 22(12):2291-2298], рассеяный склероз [Liang J., Zhang H., Hua В., Wang H., Wang J., Han Z., et al. Allogeneic mesenchymal stem cells transplantation in treatment of multiple sclerosis. Mult Scler. 2009; 15(5):644-646; Hou Z., Liu Y., Mao X.-H., Wei C., Meng M., Liu Y., et al. Transplantation of umbilical cord and bone marrow-derived mesenchymal stem cells in a patient with relapsing-remitting multiple sclerosis. Cell Adh Migr. 7(5):404-407; Li J.-F., Zhang D.-J., Geng Т., Chen L., Huang H., Yin H.-L., et al. The potential of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells as a novel cellular therapy for multiple sclerosis. Cell Transplant. 2014; 23 Suppl 1:S113-22], травматические поражения головного и спинного мозга [Liu J., Han D., Wang Z., Xue M., Zhu L., Yan H., et al. Clinical analysis of the treatment of spinal cord injury with umbilical cord mesenchymal stem cells. Cytotherapy. 2013; 15(2): 185-191; Cheng H., Liu X., Hua R., Dai G., Wang X., Gao J., et al. Clinical observation of umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in treatment for sequelae of thoracolumbar spinal cord injury. J Transl Med. 2014; 12:253; Hua R., Li P., Wang X., Yang J., Zheng P., Niu X., et al. Evaluation of Somatosensory Evoked Potential and Pain Rating Index in a Patient with Spinal Cord Injury Accepted Cell Therapy. Pain Physician. 2016; 19(4):E659-66; Wang S., Cheng H., Dai G., Wang X., Hua R., Liu X., et al. Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation significantly improves neurological function in patients with sequelae of traumatic brain injury. Brain Res. 2013; 1532:76-84], ишемическая энцефалопатия и детский церебральный паралич [Wang X., Hu Н., Hua R., Yang J., Zheng P., Niu X., et al. Effect of umbilical cord mesenchymal stromal cells on motor functions of identical twins with cerebral palsy: pilot study on the correlation of efficacy and hereditary factors. Cytotherapy. 2015; 17(2):224-231; Xie В., Gu P., Wang W., Dong C., Zhang L., Zhang J., et al. Therapeutic effects of human umbilical cord mesenchymal stem cells transplantation on hypoxic ischemic encephalopathy. Am J Transl Res. 2016; 8(7):3241-50], ишемическая болезнь сердца, сердечная недостаточность и инфаркт миокарда [Ward M.R., Abadeh A., Connelly K.A. Concise Review: Rational Use of Mesenchymal Stem Cells in the Treatment of Ischemic Heart Disease. Stem Cells Transl Med. 2018; Zhao X.F., Xu Y., Zhu Z.Y., Gao C.Y., Shi Y.N. Clinical observation of umbilical cord mesenchymal stem cell treatment of severe systolic heart failure. Genet Mol Res. 2015; 14(2):3010-3107; Can A., Ulus A.T., Cinar O., Topal Celikkan F., Simsek E., Akyol M., et al. Human Umbilical Cord Mesenchymal Stromal Cell Transplantation in Myocardial Ischemia (HUC-HEART Trial). A Study Protocol of a Phase 1/2, Controlled and Randomized Trial in Combination with Coronary Artery Bypass Grafting. Stem Cell Rev. 2015; 11(5):752-760; Gao L.R., Chen Y., Zhang N.K., Yang X.L., Liu H.L., Wang Z.G, et al. Intracoronary infusion of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in acute myocardial infarction: double-blind, randomized controlled trial. BMC Med. 2015; 13:162], цирроз печени [Zhang Z., Lin H., Shi M., Xu R., Fu J., Lv J., et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cells improve liver function and ascites in decompensated liver cirrhosis patients. J Gastroenterol Hepatol. 2012; 27 Suppl 2:112-120; Xue H.-L., Zeng W.-Z., Wu X.-L., Jiang M.-D., Zheng S.-M., Zhang Y., et al. Clinical therapeutic effects of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells transplantation in the treatment of end-stage liver disease. Transplant Proc. 2015; 47(2):412-418; Liang J., Zhang H., Zhao C., Wang D., Ma X., Zhao S., et al. Effects of allogeneic mesenchymal stem cell transplantation in the treatment of liver cirrhosis caused by autoimmune diseases. Int J Rheum Dis. 2017; 20(9): 1219-1226; Shi M., Zhang Z., Xu R., Lin H., Fu J., Zou Z., et al. Human mesenchymal stem cell transfusion is safe and improves liver function in acute-on-chronic liver failure patients. Stem Cells Transl Med. 2012; 1(10):725-31], диабет 1 и 2 типа [Liu X., Zheng P., Wang X., Dai G., Cheng H., Zhang Z., et al. A preliminary evaluation of efficacy and safety of Wharton's jelly mesenchymal stem cell transplantation in patients with type 2 diabetes mellitus. Stem Cell Res Ther. 2014; 5(2):57; Chen P., Huang Q., Xu X.J., Shao Z.L., Huang L.H., Yang X.Z., et al. The effect of liraglutide in combination with human umbilical cord mesenchymal stem cells treatment on glucose metabolism and β cell function in type 2 diabetes mellitus. Zhonghua nei ke za zhi. 2016; 55(5):349-354; Qin H.L., Zhu X.H., Zhang В., Zhou L., Wang W.Y. Clinical Evaluation of Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell Transplantation After Angioplasty for Diabetic Foot. Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2016; 124(8):497-503], при заболеваниях опорно-двигательного аппарата [Qu Z., Fang G., Cui Z., Liu Y. Cell therapy for bone nonunion: a retrospective study. Minerva Med. 2015; 106(6):315-321; Cai J., Wu Z., Huang L., Chen J., Wu C., Wang S., et al. Cotransplantation of bone marrow mononuclear cells and umbilical cord mesenchymal stem cells in avascular necrosis of the femoral head. Transplant Proc. 46(l):151-5].
Терапевтическое действие МСК опосредуется синтезом и секрецией в окружающее пространство целой плеяды биологически активных соединений и структур: цитокинов, гормонов, факторов роста, пептидов, микрочастиц, равно как и различных компонентов внеклеточного матрикса, объединенных под термином 
. При этом в отличие от терапевтических продуктов, содержащих живые клетки, секретом бесклеточен и обладает меньшим риском в случае применения.
К ключевым компонентам, продуцируемым МСК, могут быть отнесены следующие:
- мозговой нейротрофический фактор (BDNF), способствующий выживанию и дифференцировке нейронов и уменьшению размера инфаркта [Cantinieaux, D., Quertainmont, R., Blacher, S., et al. Conditioned medium from bone marrow-derived mesenchymal stem cells improves recovery after spinal cord injury in rats: an original strategy to avoid cell transplantation. PLoS One. 2013, 8, e695158];
- эпидермальный ростовой фактор (EGF), способный стимулировать пролиферацию и дифференцировку различных типов клеток [Zagoura DS, RoubelakisMG, Bitsika V, et al. Therapeutic potential of a distinct population of human amniotic fluid mesenchymal stem cells and their secreted molecules in mice with acute hepatic failure. Gut:gutjnl-2011-300908; Park, B.-S., Kim, W.-S., Choi, J.-S., et al. Hair growth stimulated by conditioned medium of adipose-derived stem cells is enhanced by hypoxia: evidence of increased growth factor secretion. Biomedical Research, 2010, 31, 27-34; Lee, M.J., Kim, J., Lee, K.I., Shin, J. M., Chae, J.I., & Chung, H.M. Enhancement of wound healing by secretory factors of endothelial precursor cells derived from human embryonic stem cells. Cytotherapy, 2011, 13, 165-178; Kim, J., Lee, J.H., Yeo, S.M., Chung, H.M., & Chae, J.-I. Stem cell recruitment factors secreted from cord blood-derived stem cells that are not secreted from mature endothelial cells enhance wound healing. In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal, 2014, 50, 146-154];
- фактор роста фибробластов (FGF), участвующиий в ангиогенезе, заживлении ран, способствующий снижению апоптоза и играющий ключевую роль в процессах пролиферации и дифференцировки широкого спектра клеток и тканей [Bhang, S.H., Lee, S., Shin, J.-Y., Lee, T.-J., Jang, H.-K., & Kim, B.-S. Efficacious and clinically relevant conditioned medium of human adipose-derived stem cells for therapeutic angiogenesis. Molecular Therapy. 2014, 22, 862-872; Kim, J., Lee, J.H., Yeo, S.M., Chung, H.M., & Chae, J.-I. Stem cell recruitment factors secreted from cord blood-derived stem cells that are not secreted from mature endothelial cells enhance wound healing. In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal, 2014, 50, 146-154];
- колониестимулирующие факторы (Г-КСФ и ГМ-КСФ), стимулирующие продукцию нейтрофилов, гранулоцитов и макрофагов, соответственно [Park, В.-S., Kim, W.-S., Choi, J.-S., et al. Hair growth stimulated by conditioned medium of adipose-derived stem cells is enhanced by hypoxia: evidence of increased growth factor secretion. Biomedical Research. 2010, 31, 27-34];
- фактор роста гепатоцитов (HGF), способствующий мобилизации прогениторных клеток, стимулирующий ангиогенез и пролиферацию клеток [See, F., Seki, Т., Psaltis, P.J., et al. Therapeutic effects of human STRO-3-selected mesenchymal precursor cells and their soluble factors in experimental myocardial ischemia. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2011, 15, 2117-2129];
- фактор стволовых клеток (SCF), ндуцирующий пролиферацию стволовых клеток и способствующий их дифференцировке [See, F., Seki, Т., Psaltis, P.J., et al. Therapeutic effects of human STRO-3-selected mesenchymal precursor cells and their soluble factors in experimental myocardial ischemia. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2011, 15, 2117-2129; Bhang, S.H., Lee, S., Shin, J.-Y., Lee, T.-J., Jang, H.-K., & Kim, B.-S. Efficacious and clinically relevant conditioned medium of human adipose-derived stem cells for therapeutic angiogenesis. Molecular Therapy, 2014, 22, 862-872];
- фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), стимулирующий ангиогенез, способствующий мобилизации стволовых клеток, ингибирующий апоптоз [Bhang, S.H., Lee, S., Shin, J.-Y., Lee, T.-J., Jang, H.-K., & Kim, B.-S. Efficacious and clinically relevant conditioned medium of human adipose-derived stem cells for therapeutic angiogenesis. Molecular Therapy, 2014, 22, 862-872; Kim, J., Lee, J.H., Yeo, S.M., Chung, H.M. & Chae, J.-I. Stem cell recruitment factors secreted from cord blood-derived stem cells that are not secreted from mature endothelial cells enhance wound healing. In Vitro Cellular&Developmental Biology-Animal, 2014, 50, 146-154; See, F., Seki, Т., Psaltis, P.J., et al. Therapeutic effects of human STRO-3-selected mesenchymal precursor cells and their soluble factors in experimental myocardial ischemia. Journal of Cellular and Molecular Medicine, 2011, 15, 2117-2129];
а также ряд цитокинов (интерлейкины 6, 8, 9, 10), стимулирующих пролиферацию стволовых клеток, способствующих ангиогенезу, обладающих противовоспалительным, иммуномодулирующим и антиапоптотическим эффектом [Lee, M.J., Kim, J., Lee, K.I., Shin, J.M., Chae, J.I., & Chung, H.M. Enhancement of wound healing by secretory factors of endothelial precursor cells derived from human embryonic stem cells. Cytotherapy, 2011, 13, 165-178; Sadat, S., Gehmert, S., Song, Y.-H., et al. The cardioprotective effect of mesenchymal stem cells is mediated by IGF-I and VEGF. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2007, 363, 674-679; Cho, Y.J., Song, H.S., Bhang, S., et al. Therapeutic effects of human adipose stem cell-conditioned medium on stroke. Journal of Neuroscience Research, 2012, 90, 1794-1802; Sze, S.K., de Kleijn, D.P., Lai, R.C., et al. Elucidating the secretion proteome of human embryonic stem cell-derived mesenchymal stem cells. Molecular & Cellular Proteomics, 2007, 6, 1680-1689; Chen, L., Tredget, E.E., Wu, P.Y., & Wu, Y. Paracrine factors of mesenchymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells and enhance wound healing. PLoS One, 2008, 3, e1886; Gao, F., Chiu, S., Motan, D., et al. Mesenchymal stem cells and immunomodulation: current status and future prospects. Cell Death & Disease, 2017, 7, e2062];
и других факторов, эффективных для применения в различных областях практической медицины: кардиологии, неврологии, ангиологии, травматологии и ортопедии, при заболеваниях печени, почек, репродуктивной системы.
В наиболее типичном случае, среда культивирования, кондиционированная несколькими десятками миллионов МСК, представляет собой практически готовый терапевтический продукт для применения в качестве иммуномодулирующего, противовоспалительного, анти-апоптотического и нейропротективного агента.
Из уровня техники известна композиция (RU 2292212 С1), представляющая собой кондиционную среду, обладающую лечебным эффектом при термических ожогах и содержащая солевой состав и аминокислоты, пенициллин, амфотерицин, L-глутамин и эмбриональную телячью или фетальную бычью сыворотку, достаточные для поддержания жизнеспособности и роста МСК костного мозга человека, отличающаяся тем, что среду получают на стадии стационарного роста культуры стабильной клеточной линии МСК, находящихся в G0 периоде клеточного цикла, а затем среду собирают. К недостаткам указанного способа можно отнести присутствие в составе среды культивирования клеток ксеногенных компонентов, содержащихся в сыворотке крови крупного рогатого скота.
Из уровня техники известно средство для лечения ожогов и ран на основе цитокинов и факторов роста, секретируемых мезенхимными клетками человека, и способ его получения (RU 2455354 С1). Получают средство способом, включающим культивирование МСК жировой ткани человека 2-5 пассажа в среде роста. Проводят отбор и очистку среды культивирования и ее концентрирование до уменьшения исходного объема очищенной среды культивирования в 9-11 раз с получением стерильного концентрата, с последующей его лиофилизацией. Средство содержит продукты секреции МСК человека, включающие FGF basic в концентрации от 2 до 4 пкг/мл, HGF в концентрации от 40 до 80 пкг/мл, VEGF в концентрации от 200 до 800 пкг/мл, ангиопоэтин-1 в концентрации от 0,5 до 10,0 пкг/мл, определяемые методом иммуноферментного анализа при восстановлении лиофилизата в 100 мл стерильного физиологического раствора. При этом среда роста содержит раствор AdvanceSTEM Cell Culture Media и добавки AdvanceSTEM Stem Cell Growth Supplement, состав которых не раскрывается фирмой-производителем.
Из уровня техники известен способ получения композиции для стимуляции роста и регенерации клеток (RU 2341270 С1), содержащей разрушенные клетки лейкоцитов периферической крови и стволовые и/или прогениторные клетки костного мозга человека в кондиционированной среде их культивирования. Способ получения данной композиции предусматривает культивирование указанных клеток в среде, содержащей ксеногенные компоненты - эмбриональную бычью сыворотку.
Из уровня техники также известна композиция, предназначенная для регенерации кожи и слизистых оболочек, содержащая культуральную питательную среду, включающую биологически активные соединения на основе низкомолекулярных пептидов и цитокинов, используемая для культивирования in vitro эукариотических клеток и содержащая продукты жизнедеятельности и ростовые факторы эукариотических клеток, выделяемые ими в питательную среду в процессе культивирования (RU 2455354 С1). В состав композиции входят также МСК человека, а питательная среда - составная часть композиции - содержит ксеногенный компонент (бычью сыворотку).
Эмбриональную бычью сыворотку содержат также композиция для предотвращения или лечения кожных дефектов (WO 2008155659 А2), а также экстракт кондиционированной культуральной среды, предназначенный для наружного применения для усиления роста волос и омоложения кожи (WO 2010038232 А1). В обоих случаях используют МСК, культивируемые в среде, содержащей сыворотку (эмбриональную бычью или полученную из крови взрослого человека), а перед получением экстракта к ней добавляют ростовые факторы. Недостатком указанных композиций является то, что в их состав входят ксеногенные компоненты, а также не определен состав веществ, непосредственно обеспечивающих действие композиции.
Из уровня техники известен способ получения косметического средства на основе продуктов секреции МСК жировой ткани человека (RU 2620342 С1), включающий в качестве основного компонента культуральную среду, кондиционированную МСК жировой ткани человека, содержащую продукты секреции, включающие VEGF в концентрации не менее 4 нг/млн клеток, FGF basic в концентрации не менее 5.8 пкг/млн клеток, PEDF в концентрации не менее 10 нг/млн клеток, PAI-1 в концентрации не менее 35 нг/млн клеток, а также комплекс из других белков. Изобретение обеспечивает стимуляцию регенерации кожи, повышение упругости кожи и улучшение ее эстетических характеристик. К недостаткам данного, а также всех описанных выше способов можно отнести то, что в качестве клеток для получения композиций использованы клетки, полученные от взрослых доноров (костного мозга, жировой ткани и периферической крови), что повышает риск инфицирования потенциального пациента (реципиента) агентами вирусной природы.
Помимо перечисленных, к недостаткам большинства предлагаемых композиций и способов их получения можно отнести отсутствие систематизированных данных о продуцируемых биологически активных молекулах и других составляющих, способных оказывать или потенцировать терапевтическое действие.
Наиболее близким к заявляемому решению является способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции МСК человека (RU 2620167 C1), направленный на получения биоматериалов для стимуляции регенерации тканей после повреждения. Способ получения средства включает культивирование МСК жировой ткани в среде, поддерживающей рост недифференцированных клеток человека. Кондиционирование МСК проводят в бессывороточной среде роста. После отбора среды культивирования, содержащей продукты секреции МСК, удаляют из нее остатки клеток и очищают от низкомолекулярных компонентов с последующей лиофилизацией очищенной среды культивирования. Средство содержит продукты секреции МСК человека, включающие факторы роста: VEGF в концентрации не менее 200 пкг/мл, HGF в концентрации не менее 150 пкг/мл, FGF basic в концентрации не менее 0,29 пкг/мл, ангиопоэтин-1 в концентрации не менее 145 пкг/мл, PDGF в концентрации не менее 500 пкг/мл, определяемые методом иммуноферментного анализа при восстановлении лиофилизата в стерильном физиологическом растворе. По мнению авторов, использование полученного средства позволяет эффективно стимулировать регенерацию тканей за счет комплексного сбалансированного действия факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых МСК. К недостаткам данного способа можно отнести использование для изготовления композиции тканей, полученных от взрослых доноров, в частности, жировой ткани, коммерческих сред с нераскрытым производителем составом, а также манипуляций, приводящих к удорожанию конечного продукта.
Данные, касающиеся свойств и использования в регенеративной медицине как МСК, получаемых из стромы пупочного канатика, так и клеток и компонентов пуповинной крови свидетельствуют о несомненных перспективах их применения в терапии достаточно широкого спектра патологических состояний организма, вследствие чего создание новых лекарственных средств для стимуляции регенерации органов и тканей в различных областях медицины является актуальной задачей регенеративной медицины.
Краткое описание изобретения
Впервые предложен способ получения не содержащего клеток и компонентов ксеногенного происхождения терапевтического средства, содержащего природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования, содержащую сыворотку пуповинной крови, мезенхимальными стромальными клетками (МСК) пупочного канатика человека.
Другим аспектом изобретения является способ получения не содержащего клеток и компонентов ксеногенного происхождения терапевтического средства, содержащего природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования, содержащую сыворотку пуповинной крови, смешанной культурой МСК пупочного канатика человека и ядросодержащих клеток (ЯСК) пуповинной крови.
Еще одним аспектом изобретения является терапевтическое средство для регенеративной медицины, не содержащее клеток и компонентов ксеногенного происхождения терапевтического средства, содержащего природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования, содержащую сыворотку пуповинной крови, мезенхимальными стромальными клетками (МСК) пупочного канатика человека.
Еще одним аспектом изобретения является терапевтическое средство для регенеративной медицины, не содержащее клеток и компонентов ксеногенного происхождения терапевтического средства, содержащего природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования, содержащую сыворотку пуповинной крови, смешанной культурой мезенхимальных стромальных клеток (МСК) пупочного канатика человека и ядросодержащих клеток (ЯСК) пуповинной крови.
Эффективность средств обеспечивается за счет сбалансированного состава и высокого содержания природных компонентов, обладающих противовоспалительным, ангиогенным, иммуномодулирующим, анти-апоптотическим и нейропротекторным эффектом, содержащихся в сыворотке пуповинной крови и продуцируемых клетками в монокультурах или при со-культивировании.
Дополнительно, при осуществлении предложенного изобретения в результате со-культивирования двух типов клеток обеспечивается неожиданно высокая концентрация биологически активных веществ, обладающих терапевтическим действием, значительно превышающих уровень продукции данных молекул МСК по отдельности.
Подробное описание изобретения
Предложен способ получения терапевтического средства, включающий выделение и культивирование МСК с последующей очисткой кондиционированной среды от остатков клеток, замораживанием или лиофилизацией, отличающийся тем, что МСК культивируют в среде, не содержащей продуктов ксеногенного происхождения и содержащей сыворотку пуповинной крови, с получением кондиционированной среды, содержащей продукты жизнедеятельности МСК, причем указанные клетки представляют собой МСК пупочного канатика человека.
Способ получения терапевтического средства, включающий выделение и культивирование МСК с последующей очисткой кондиционированной среды от остатков клеток, замораживанием или лиофилизацией, отличающийся тем, что культивирование МСК пупочного канатика человека осуществляют в среде, не содержащей продуктов ксеногенного происхождения и содержащей сыворотку пуповинной крови, с получением кондиционированной среды, содержащей продукты жизнедеятельности МСК в условиях, описанных в Примерах 1 и 4.
Полученное в результате осуществления предложенного способа терапевтическое средство содержит природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования МСК пупочного канатика человека, с высокой концентрацией природных компонентов, обладающих противовоспалительным, ангиогенным, иммуномодулирующим, анти-апоптотическим и нейропротекторным эффектом (см. табл. 1), и может быть использовано для регенеративной медицины.
Следовательно, другим аспектом изобретения является терапевтическое средство, полученное культивированием МСК пупочного канатика человека в синтетических средах с сывороткой пуповинной крови человека, поддерживающих жизнеспособность и пролиферацию клеток, и содержащее продукты секреции МСК, включающие факторы G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) в концентрации не менее 2000 пг/мл, HGF (фактор роста гепатоцитов) в концентрации не менее 700 пг/мл, IFN-a2 (интерферон альфа-2) в концентрации не менее 10 пг/мл, IL-6 (интерлейкин-6) в концентрации не менее 2000 пг/мл, IL-8 (интерлейкин-8) в концентрации не менее 2000 пг/мл, SCF (фактор стволовых клеток) в концентрации не менее 8 пг/мл, SCGF (фактор роста стволовых клеток) в концентрации не менее 8000 пг/мл, VEGF (фактор роста сосудистого эндотелия) в концентрации не менее 50 пг/мл, FGF (фактор роста фибробластов) в концентрации не менее 15 пг/мл.
Еще одним аспектом изобретения является способ получения терапевтического средства, включающий выделение, культивирование МСК с последующей очисткой кондиционированной среды от остатков клеток, замораживанием или лиофилизацией, отличающийся тем, что МСК культивируют в среде, не содержащей продуктов ксеногенного происхождения и содержащей сыворотку пуповинной крови, совместно с ЯСК пуповинной крови человека с получением кондиционированной среды, содержащей продукты жизнедеятельности МСК и ЯСК, причем указанные клетки МСК представляют собой МСК пупочного канатика человека.
Для осуществления предложенного способа МСК и ЯСК культивируют и со-культивируют в синтетических средах (Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM или ее смеси с Fisher Modified Medium 12, DMEM/F12) или других средах, поддерживающих жизнеспособность и пролиферацию клеток, в присутствии 1-10% сыворотки пуповинной крови человека (Примеры 1 и 4). Клетки культивируют в пластиковых флаконах (например, Corning-Costar, Nunk или аналогичных) при +37 град. Цельсия, 5% углекислого газа и 100% влажности с применением оборудования и расходных материалов, одобренных для медицинского применения.
Полученное в результате осуществления предложенного способа терапевтическое средство содержит природный коктейль цитокинов, факторов роста и других биологически активных молекул, секретируемых в среду культивирования смешанной культурой МСК пупочного канатика человека и ЯСК пуповинной крови, с высокой концентрацией природных компонентов, обладающих противовоспалительным, ангиогенным, иммуномодулирующим, анти-апоптотическим и нейропротекторным эффектом (см. табл. 1), и может быть использовано для регенеративной медицины.
Следует отметить, что обеспечивается неожиданно высокая концентрация биологически активных веществ, обладающих терапевтическим действием, в результате со-культивирования двух типов клеток, значительно превышающих уровень продукции данных молекул МСК по-отдельности, причем увеличение продукции факторов происходит при наличии в культуре МСК незначительного количества ЯСК (в ходе 1-2 недельного сокультивирования число ЯСК в целом сокращалось в среднем с 1 на 3-4 МСК до 1 на 6-10 МСК). Таким образом, добавление к культуре МСК клеток ЯСК увеличивает продукцию факторов МСК.
Следовательно, еще одним аспектом изобретения является терапевтическое средство, полученное со-культивированием МСК пупочного канатика и ядросодержащих клеток пуповинной крови человека в синтетических средах, поддерживающих жизнеспособность и пролиферацию клеток с сывороткой пуповинной крови человека, и содержащее продукты секреции МСК и ЯСК человека, включающие факторы G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) в концентрации не менее 5000 пг/мл, HGF (фактор роста гепатоцитов) в концентрации не менее 500 пг/мл, IFN-a2 (интерферон альфа-2) в концентрации не менее 50 пг/мл, IL-6 (интерлейкин-6) в концентрации не менее 5000 пг/мл, IL-8 (интерлейкин-8) в концентрации не менее 1000 пг/мл, SCF (фактор стволовых клеток) в концентрации не менее 50 пг/мл, SCGF (фактор роста стволовых клеток) в концентрации не менее 10000 пг/мл, VEGF (фактор роста сосудистого эндотелия) в концентрации не менее 500 пг/мл, FGF (фактор роста фибробластов) в концентрации не менее 25 пг/мл.
Полученные в результате осуществления данного изобретения терапевтические средства могут быть использованы для наружного применения (в виде спрея, глазных капель, капель в нос) или внутритканевого применения в виде инъекций, а также в сочетании с биосовместимыми носителями (гелями, губками, кремами).
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Выделение и культивирование МСК пупочного канатика человека.
Для выделения МСК используют фрагменты пупочных канатиков, получаемых во время нормальных родов от обследованных рожениц, подписавших информированное согласие. Выделение и культивирование клеток проводят в условиях сертифицированной лаборатории (чистые помещения, ГОСТ Р ИСО 14644) с использованием оборудования и расходных материалов, одобренных для медицинского применения.
Фрагмент пуповины с наложенными клипсами обтирают от крови стерильной салфеткой, обрабатывают способом орошения раствором «Октенидерм» и дают стечь избытку антисептика. Вырезают фрагмент длиной около 5-7 см; споласкивают от антисептика окунанием в пробирку со сбалансированным солевым раствором (раствор Хенкса, Эрла или физиологический раствор). С помощью стерильного инструмента измельчают фрагменты до получения кусочков ткани размером 1-2 мм. Добавляют 15-30 мл 0.1% раствора коллагеназы на среде без сыворотки и инкубируют на водяной бане в течение 1.5-3 часов при +37 град. Цельсия. Содержимое регулярно перемешивают. Полученную клеточную суспензию распределяют в пробирки объемом 50 мл и центрифугируют 15 минут при 1500-2000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют. Клеточный осадок ресуспендируют в среде культивирования (среда DMEM или DMEM/F-12 с добавлением антибиотиков и 10% эмбриональной телячьей сыворотки) и высевают в культуральные флаконы. Флаконы помещают в СО2-инкубатор. Через 48-72 часа среду культивирования с неприкрепившимися клетками удаляют. В каждый флакон добавляют свежую среду культивирования. Повторные смены среды проводят через 48-72 часов. При появлении клеточных колоний, занимающих более 50% поверхности флакона, производят пересев на новые флаконы. Для этого, культуры отмывают от среды культивирования стерильным солевым раствором и инкубируют в растворе трипсина-версена (1:1), подогретого до температуры +37 град. Цельсия. После открепления клеток в каждый флакон добавляют 10-25 мл среды культивирования; содержимое перемешивают пипетированием. Клеточную суспензию распределить в новые флаконы; через 24-48 часов проводят замену среды культивирования. По мере роста клеток их пересевают в новые флаконы или замораживают для длительного криогенного хранения.
Пример 2. Выделение ЯСК пуповинной крови человека (ЯСК-ПК).
Заготовку пуповинной крови проводят в стерильные емкости (системы для заготовки донорской крови), содержащие изотонический антикоагулянт, с соблюдением предосторожностей, исключающих инфицирование материала в процессе забора и транспортировки. Материал доставлялся в лабораторно-производственный комплекс в изотермическом транспортном контейнере при комнатной температуре. Все процедуры по выделению ядросодержащих клеток пуповинной крови выполняют в соответствии с национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 52249-2004 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» с использованием технологии, одобренной для медицинского применения.
После измерения объема пуповинной крови отбирают аликвоты для проведения гематологического анализа (содержание форменных элементов до выделения, группа крови, резус-фактор). Для получения ЯСК-ПК в контейнер с кровью добавляют 6% раствор гидроксиэтилкрахмала (ГЭК) из расчета 1 объем ГЭК к 4 объемам крови и перемешивают в течение 10-15 минут. Содержимое контейнера переносят в пробирки объемом 50 мл, центрифугируют 5 минут при 90 g и оставляют на 10-15 минут для формирования видимого раздела между обогащенной лейкоцитами плазмой и осадком эритроцитов. Обогащенную лейкоцитами плазму отбирают в отдельные пробирки и центрифугируют 10 минут при 600g для осаждения клеточных элементов. Полученные клеточные осадки ресуспендируют в аутологичной плазме. Аликвоты плазмы и клеточных суспензий используют для постановки тестов на стерильность, выявления возбудителей гемотрансмиссивных инфекционных заболеваний, подсчета числа клеток и их жизнеспособности по тесту с трипановым синим, определения содержания CD34/CD45-позитивных клеток методом проточной цитометрии. К оставшемуся объему плазмы добавляют диметилсульфоксид (ДМСО) до конечной концентрации 20%. К суспензии клеток капельно при постоянном перемешивании добавляют равный объем плазмы с ДМСО. Полученный материал распределяют в криопробирки и подвергают программному замораживанию, после чего переносят на хранение в сосуд Дюара с жидким азотом.
Образцы пуповинной крови тестируют на предмет выявления возбудителей гемотрансмиссивных инфекционных заболеваний: вируса иммунодефицита человека, вирусов гепатитов В и С, вируса Т-клеточного лейкоза, вирусов простого герпеса 1 и 2 типа, цитомегаловируса, возбудителей токсоплазмоза, сифилиса, бактериальных и грибковых агентов. Образцы, не прошедшие тест биологической безопасности, утилизируют в соответствии с действующим законодательством.
Пример 3. Получение сыворотки пуповинной крови человека.
Заготовку ПК проводят у обследованных рожениц после подписания информированного согласия. Кровь собирают в мешки донорской системы (GreenCross, Корея или аналогичные) после удаления из них раствора антикоагулянта. Образцы крови оставляют на 24 часа при комнатной температуре для формирования сгустка. В стерильных условиях (чистые помещения, ГОСТ Р ИСО 14644, ламинарный шкаф II класса биологической защиты) сыворотки отбирают, переносят в стерильные центрифужные пробирки на 50 мл и осветляют центрифугированием при 3000 g в течение 30 минут. Из каждого образца отбирают аликвоты для проведения тестов на гемотрансмиссивные инфекции (ВИЧ-1/2, гепатиты В и С, ВПГ-1/2, цитомегаловирус, токсоплазмоз, сифилис). Оставшиеся сыворотки переносят в чистые пробирки, замораживают и хранят при -18 град. Цельсия. После получения результатов тестирования, серо- и(или) ПЦР-позитивные образцы сывороток утилизируют в установленном порядке. Оставшиеся образцы размораживают, объединяют (по 10-15 для каждой серии), стерилизуют фильтрованием через мембранные фильтры с размером пор 0.22 мкм и расфасовывают. Хранение СПК осуществляют при температуре, не превышающей -18 град. Цельсия.
Пример 4. Co-культивирование МСК и ЯСК-ПК.
Клетки ПК размораживают, отмывают от криопротектора в избыточном количестве среды культивирования и ресуспендируют в среде культивирования в концентрации около 5×106/мл. Полученную суспензию добавляют к культуре МСК на 48 часов, после чего среду с неприкрепившимися клетками удаляют и заменяют на свежую. Последующие смены сред культивирования проводят с интервалом 2-3 суток. Примерно через 1 неделю, когда прикрепившиеся ЯСК начинают активно пролиферировать и формировать колонии, начинают отбор кондиционированных сред.
Пример 5. Получение кондиционированной среды.
Для получения кондиционированной среды проводят отмывку культур и замену среды культивирования на среду, содержащую 1-10% сыворотки пуповинной крови, и продолжают культивирование клеток в течение 48 часов. Повторно заменяют среду культивирования. Через 48-72 часа кондиционированную среду отбирают в стерильные пробирки и освобождают от клеточного дебриса центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 минут. Для получения дополнительных количеств кондиционированной среды процедуру повторяют на протяжении 1-2 недель. Полученные среды разделяют на аликвоты и хранят при температуре +4-8 град. С, замораживают и хранят при температуре, не превышающей -18 град. Цельсия или лиофилизируют.
Пример 6. Анализ продуктов секреции МСК и совместной культуры МСК и ЯСК.
Анализ продуктов секреции проводили в аликвотах кондиционированных сред после их размораживания с помощью наборов «Bio-Plex Pro Human Cytokine Group I Assay» (Eotaxin, FGF-basic, G-CSF, GM-CSF, IFN-γ, IL-β, IL-1Ra, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8/CXCL8, IL-9, IL-10, IL-12(p70), IL-13, IL-15, IL-17α, IP-10, MCP-1, MIP-1a, MIP-1β, PDGF-BB, RANTES, TNF-α, VEGF) и «Bio-Plex Pro Human Cytokine Group II Assay» (CTACK, Gro-α, HGF, IFN-α2, IL-1α, IL-2Ra, IL-3, IL-12(p40), IL-16, LIF, MCP-3, M-CSF, MIG/CXCL9, NGF-β, SCF, SCGF-β, SDF-1α+β/CXCL12, TNF-β, TRAIL) фирмы Био-Рад в соответствии с инструкциями изготовителя. Результаты определения представлены в Таблице 1.
Сокращения: EGF - эпидермальный ростовой фактор; FGF - фактор роста фибробластов; G-CSF - гранулоцитарный колоние-стимулирующий фактор; GM-CSF - гранулоцитарно-макрофагальный колоние-стимулирующий фактор; GRO-связанный с ростом онкоген; HGF - фактор роста гепатоцитов; IFN - интерферон; IL - интерлейкин; IP - интерферон-гамма-индуцируемый белок; МСР - моноцитарный хемоаттрактант; MIP - макрофагальный воспалительный белок; NGF - фактор роста нервов; PDGF - тромбоцитарный фактор роста; RANTES - экспрессируемый и секретируемый Т-клетками, регулируемый при активации) SCGF - фактор роста стволовых клеток; SDF - стромальный (ростовой) фактор; SCF - фактор (роста) стволовых клеток; TGF - трансформирующий ростовой фактор; TNF - фактор некроза опухолей; VEGF - фактор роста сосудистого эндотелия.
Примечание: (*) - содержание аналита в кондиционированной среде, полученной при со-культивировании МСК и ЯСК-ПК, превышает его концентрацию в средах, полученных от культур МСК, причем увеличение продукции факторов происходит при наличии в культуре МСК незначительного количества ЯСК (в ходе 1-2 недельного сокультивирования число ЯСК в целом сокращалось в среднем с 1 на 3-4 МСК до 1 на 6-10 МСК). Таким образом, добавление к культуре МСК клеток ЯСК увеличивает продукцию факторов МСК.
Claims (11)
- Терапевтическое средство для регенеративной медицины, представляющее собой бесклеточную кондиционированную среду, содержащую продукты секреции мезенхимальных стромальных клеток (МСК) человека, включающее факторы:
- G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор) в концентрации не менее 2000 пг/мл,
- HGF (фактор роста гепатоцитов) в концентрации не менее 700 пг/мл,
- IFN-a2 (интерферон альфа-2) в концентрации не менее 10 пг/мл,
- IL-6 (интерлейкин-6) в концентрации не менее 2000 пг/мл,
- IL-8 (интерлейкин-8) в концентрации не менее 2000 пг/мл,
- SCF (фактор стволовых клеток) в концентрации не менее 8 пг/мл,
- SCGF (фактор роста стволовых клеток) в концентрации не менее 8000 пг/мл,
- VEGF (фактор роста сосудистого эндотелия) в концентрации не менее 50 пг/мл,
- FGF (фактор роста фибробластов) в концентрации не менее 15 пг/мл,
- причем бесклеточная кондиционированная среда содержит продукты секреции МСК, полученная путем культивирования мезенхимальных стромальных клеток пупочного канатика человека в присутствии 1-10%-ной сыворотки пуповинной крови человека, с последующей очисткой кондиционированной среды от остатков клеток, замораживанием или лиофилизацией.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018135044A RU2742034C2 (ru) | 2018-10-04 | 2018-10-04 | Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018135044A RU2742034C2 (ru) | 2018-10-04 | 2018-10-04 | Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018135044A RU2018135044A (ru) | 2020-04-06 |
| RU2018135044A3 RU2018135044A3 (ru) | 2020-04-06 |
| RU2742034C2 true RU2742034C2 (ru) | 2021-02-01 |
Family
ID=70155534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018135044A RU2742034C2 (ru) | 2018-10-04 | 2018-10-04 | Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2742034C2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2803286C1 (ru) * | 2022-05-23 | 2023-09-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова" (МГУ) | Композиция для нейропротекции и стимуляции нейрорегенерации головного мозга после повреждения, средство на ее основе, способ его получения и применения |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008155659A2 (en) * | 2007-04-24 | 2008-12-24 | Yaojiong Wu | Compositions for preventing or treating skin defects and methods of use thereof |
| WO2010038232A1 (en) * | 2008-10-05 | 2010-04-08 | Hymie Friedlander | Extract from conditioned medium cultured by regenerative cells |
| RU2610132C1 (ru) * | 2015-12-03 | 2017-02-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения мультипотентных стромальных клеток из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса |
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
-
2018
- 2018-10-04 RU RU2018135044A patent/RU2742034C2/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008155659A2 (en) * | 2007-04-24 | 2008-12-24 | Yaojiong Wu | Compositions for preventing or treating skin defects and methods of use thereof |
| WO2010038232A1 (en) * | 2008-10-05 | 2010-04-08 | Hymie Friedlander | Extract from conditioned medium cultured by regenerative cells |
| RU2610132C1 (ru) * | 2015-12-03 | 2017-02-08 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения мультипотентных стромальных клеток из криозамороженных тканей фетоплацентарного комплекса |
| RU2620167C1 (ru) * | 2015-12-21 | 2017-05-23 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) | Способ получения средства для стимуляции регенерации на основе продуктов секреции мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Romanov Y.A., Balashova E.E., et al. Expression of surface molecules in human mesenchymal stromal cells co-cultured with nucleated umbilical cord blood cells//Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2017. Т. 162. N 4. С. 578-582. * |
| ROMANOV YA, BALASHOVA EE, et al. Human umbilical cord blood serum: an effective replacement for fetal bovine serum for the cultivation of multipotent human mesenchymal stromal cells // Cell technologies in biology and medicine. 2016. N 4.S. 215-220. * |
| Romanov Yu.A., Balashova E.E., et al. Changes in the cellular composition of umbilical cord blood and functional activity of hematopoietic stem cells during cryogenic storage and repeated freeze-thaw cycles // Cell technologies in biology and medicine. 2015. N 4.S. 265-269. * |
| РОМАНОВ Ю.А., БАЛАШОВА Е.Е., и др. Изменения клеточного состава пуповинной крови и функциональной активности гемопоэтических стволовых клеток при криогенном хранении и повторных циклах замораживания-оттаивания// Клеточные технологии в биологии и медицине. 2015. N 4. С. 265-269. * |
| РОМАНОВ Ю.А., БАЛАШОВА Е.Е., и др. Сыворотка пуповинной крови человека: эффективная замена эмбриональной телячьей сыворотки для культивирования мультипотентных мезенхимных стромальных клеток человека//Клеточные технологии в биологии и медицине. 2016. N 4. С. 215-220. Romanov Y.A., Balashova E.E., et al. Expression of surface molecules in human mesenchymal stromal cells co-cultured with nucleated umbilical cord blood cells//Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2017. Т. 162. N 4. С. 578-582. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2803286C1 (ru) * | 2022-05-23 | 2023-09-12 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова" (МГУ) | Композиция для нейропротекции и стимуляции нейрорегенерации головного мозга после повреждения, средство на ее основе, способ его получения и применения |
| RU2816034C1 (ru) * | 2023-06-14 | 2024-03-25 | Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования "Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова" Министерства обороны Российской Федерации (ВМедА) | Способ применения бесклеточного лиофилизированного продукта из пуповины человека для заживления ран |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018135044A (ru) | 2020-04-06 |
| RU2018135044A3 (ru) | 2020-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7275441B2 (ja) | 周産期組織由来間葉系幹細胞：その作製方法および使用 | |
| EP2171043B1 (en) | Treatment of diseases and disorders using self-renewing colony forming cells cultured and expanded in vitro | |
| Al Naem et al. | Therapeutic mesenchymal stromal stem cells: Isolation, characterization and role in equine regenerative medicine and metabolic disorders | |
| CA2868251C (en) | Immortalized stem cell and medical composition and medical preparation comprising product thereof as active ingredient | |
| CN100484569C (zh) | 将多潜能干细胞从组织中流通到外周血的药物 | |
| EP2511365A2 (en) | Method for inducing migration of adult stem cells derived from adipose tissue | |
| US10512660B2 (en) | Activator for mesenchymal stem cells, activated mesenchymal stem cells, and method for producing same | |
| CN110898078B (zh) | 一种间充质干细胞分泌因子的制备及应用 | |
| JP2010529987A5 (ru) | ||
| JP6796143B2 (ja) | トロンビン処理幹細胞に由来するエキソソームを含む慢性肺疾患治療用組成物 | |
| Luan et al. | Mesenchymal stem cells therapy for acute liver failure: recent advances and future perspectives | |
| CN115125192A (zh) | 一种骨髓上清液及其在细胞培养中的应用 | |
| RU2742034C2 (ru) | Бесклеточные терапевтические средства для регенеративной медицины и способы их получения | |
| TW201432048A (zh) | 生長因子製劑及其生產方法 | |
| Pieper et al. | Isolation of mesenchymal stromal cells from peripheral blood of ST elevation myocardial infarction patients | |
| JP6250706B2 (ja) | 変形性関節症の予防または治療における異系間質血管層細胞および異系間葉前駆細胞の使用 | |
| Payushina et al. | Menstrual blood-derived mesenchymal stromal cells as a resource for regenerative medicine | |
| EP4227406A1 (en) | Method for stimulation of mesenchymal cells to induce immunomodulatory factor expression | |
| WO2023209458A1 (en) | Process for preparation of human umbilical cord blood plasma and culture media for tissue regeneration | |
| RU2780179C2 (ru) | Происходящие из перинатальной ткани мезенхимальные стволовые клетки: способ их получения и применения | |
| WO2022256865A1 (en) | Use of mesenchymal stem cells and products thereof | |
| Deng et al. | Fundamental concepts and features of mesenchymal stem cells: proliferation, differentiation, migration and immunomodulatory characteristics | |
| Hmadcha et al. | Considerations for Clinical Use of Mesenchymal Stromal Cells | |
| Deng et al. | Fundamental Concepts and Features of Proliferation, Mesenchymal Stem Cells: Differentiation, Migration and Immunomodulatory Characteristics | |
| US20190382728A1 (en) | Menstrual Blood Derived Angiogenesis Stimulatory Cells |