RU2619898C1 - Method for biological materials preservation - Google Patents
Method for biological materials preservation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2619898C1 RU2619898C1 RU2016110713A RU2016110713A RU2619898C1 RU 2619898 C1 RU2619898 C1 RU 2619898C1 RU 2016110713 A RU2016110713 A RU 2016110713A RU 2016110713 A RU2016110713 A RU 2016110713A RU 2619898 C1 RU2619898 C1 RU 2619898C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- carrier
- biological
- immobilization
- preservative solution
- sucrose
- Prior art date
Links
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000004321 preservation Methods 0.000 title abstract description 11
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 22
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 20
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 8
- WZIMSXIXZTUBSO-UHFFFAOYSA-N 2-[[bis(carboxymethyl)amino]methyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O WZIMSXIXZTUBSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- -1 hydrogen ions Chemical class 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 15
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 12
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 11
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 10
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000012052 hydrophilic carrier Substances 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N anhydrous guanidine Natural products NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 1
- 241001552669 Adonis annua Species 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000004555 blood preservation Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области молекулярной биологии и биотехнологии, в частности к способу консервации биологических материалов (кровь, моча, мазки-соскобы, суспензии растений, фитопатогены и т.п.), используемых в дальнейшем для проведения лабораторного анализа.The invention relates to the field of molecular biology and biotechnology, in particular to a method for preserving biological materials (blood, urine, swabs, scrapings, plant suspensions, phytopathogens, etc.), which are further used for laboratory analysis.
Известные способы консервации и транспортировки биологических материалов требуют либо замораживания в жидком азоте суспензии биологического материала со смесью соединений стабилизирующей композиции в водном растворе с получением твердых замороженных частиц, гранул, капель или нитей, либо заключения биологического материала в неагрессивную капсулу из металла, либо нанесения его на абсорбирующий бумажный лист, имеющий множество выборок зон, каждая выборка зоны имеет перфорацию, проходящую, по существу, по всему его периметру, так, чтобы препятствовать перетеканию капиллярного жидкого образца, из одной зоны в другую (RU 2573324, 20.01.2016; US 5516487, 14.05.1996; RU 2228617, 20.05.2004; WO 9957264, 11.11.1999). Однако ни одна из технологий консервации не давала в достаточной мере решения проблемы долгосрочной консервации биологического материала с сохранением их биологически и диагностически значимых свойств. На данный момент является актуальным создание простого способа для сохранения диагностически и биологически значимых свойств биологического материала в течение длительного времени.Known methods for preserving and transporting biological materials require either freezing in a liquid nitrogen a suspension of biological material with a mixture of the compounds of the stabilizing composition in an aqueous solution to obtain solid frozen particles, granules, drops or threads, or enclosing the biological material in a non-aggressive metal capsule, or applying it to an absorbent paper sheet having a plurality of area samples, each area sample has a perforation extending substantially along its entire perimeter such that s capillary prevent overflow of sample liquid from one zone to another (RU 2573324, 20.01.2016; US 5516487, 14.05.1996; RU 2228617, 20.05.2004; WO 9957264, 11.11.1999). However, none of the conservation technologies gave a sufficient solution to the problem of long-term conservation of biological material while preserving their biologically and diagnostically significant properties. At the moment, it is relevant to create a simple method for preserving the diagnostically and biologically significant properties of biological material for a long time.
Известен способ консервации биологических материалов путем сушки без замораживания с помощью стабилизирующей смеси веществ, включающей, по меньшей мере, два компонента: одно из группы, включающей моносахариды, дисахариды и цвиттерион с полярным остатком, второе вещество стабилизирующей смеси является цвиттерионом с неполярным остатком и представляет собой сложный эфир ацетилфенилаланина, аланин, цистеин, глицин, лейцин, метионин, триптофан, валин, саркозин. Стабилизированные биологические материалы обладают устойчивостью в процессе хранения при комнатной температуре и используются для диагностических и терапевтических целей (RU 2191003, 20.10.2002). Однако указанный способ сложен в исполнении и использовании.A known method of preserving biological materials by drying without freezing using a stabilizing mixture of substances comprising at least two components: one of the group comprising monosaccharides, disaccharides and zwitterion with a polar residue, the second substance of the stabilizing mixture is a zwitterion with a non-polar residue and is acetylphenylalanine ester, alanine, cysteine, glycine, leucine, methionine, tryptophan, valine, sarcosine. Stabilized biological materials are stable during storage at room temperature and are used for diagnostic and therapeutic purposes (RU 2191003, 10.20.2002). However, this method is complicated in execution and use.
Известен способ консервации биологических материалов, обеспечивающий сохранность нуклеиновых кислот путем получения лизата смешиванием биологического материала с консервирующим раствором, содержащим соединение гуанидина в количестве, достаточном для существенно полной денатурации содержащихся в образце нуклеаз, а также с компонентами, препятствующими деградации нуклеиновых кислот, а именно с восстановителем белковых S-S-связей в количестве, обеспечивающем существенно полное восстановление S-S-связей в белках лизата, с сильным детергентом, не образующим нерастворимого соединения с гуанидином, в количестве, достаточном для формирования мицелл в лизате, по крайней мере, с одним комплексоном ионов двух- и трехвалентных металлов в количестве, обеспечивающем его молярную концентрацию в лизате, заведомо более высокую, чем ожидаемая максимальная молярная концентрация ионов двух- и трехвалентных металлов, и буфером, поддерживающим значение рН лизата в диапазоне от 6 до 8. Способ обеспечивает сохранность нуклеиновых кислот при длительном хранении образцов в не замороженном состоянии (RU 2322058, 20.04.2008). Недостатками способа являются также его сложность выполнения и невысокая длительность хранения биологического материала, которая была прослежена только в течение 3, 7 и 14 суток.A known method of preserving biological materials, ensuring the preservation of nucleic acids by obtaining a lysate by mixing the biological material with a preserving solution containing a guanidine compound in an amount sufficient to substantially completely denature the nucleases contained in the sample, as well as with components that prevent the degradation of nucleic acids, namely with a reducing agent SS protein bonds in an amount providing substantially complete restoration of SS bonds in lysate proteins with strong determinants a substance that does not form an insoluble compound with guanidine in an amount sufficient to form micelles in the lysate with at least one complexon of divalent and trivalent metal ions in an amount providing its molar concentration in the lysate, which is obviously higher than the expected maximum molar the concentration of ions of divalent and trivalent metals, and a buffer that maintains the pH of the lysate in the range from 6 to 8. The method ensures the preservation of nucleic acids during long-term storage of samples in not frozen state (RU 2322058, 04.20.2008). The disadvantages of the method are its complexity and low duration of storage of biological material, which was tracked only for 3, 7 and 14 days.
В качестве ближайшего аналога нами рассмотрен способ консервации биологических материалов путем иммобилизации их на сухом носителе с последующим высушиванием. В соответствии с данным способом человеческий генетический образец или генетические образцы человека сохраняются в процессе домашнего самостоятельного хранения (US 5856102, 05.01.1999). Однако авторами не показана сохранность биологически значимых свойств образцов и длительность их хранения.As the closest analogue, we considered a method for preserving biological materials by immobilizing them on a dry carrier, followed by drying. In accordance with this method, a human genetic sample or human genetic samples are stored in the process of self-storage at home (US 5856102, 01/05/1999). However, the authors have not shown the safety of biologically significant properties of the samples and the duration of their storage.
Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Технический результат заключается в повышении сохранности диагностически и биологически значимых свойств биологического материала в течение длительного времени и расширении арсенала средств консервации биологических материалов, используемых в дальнейшем для проведения лабораторного анализа.The technical result consists in increasing the safety of diagnostically and biologically significant properties of biological material for a long time and expanding the arsenal of means for preserving biological materials used in the future for laboratory analysis.
Технический результат достигается тем, что консервация биологических материалов включает иммобилизацию их на сухом носителе с последующим высушиванием, при этом в качестве носителя для иммобилизации используют крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал, который предварительно, перед иммобилизацией на него биологического материала, пропитывают консервирующим раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 М Tris HCl с рН 7,4 и 0,5 М этилендиаминтетрауксусную кислоту.The technical result is achieved by preserving the biological materials by immobilizing them on a dry carrier, followed by drying, with the use of a large-porous chemically neutral hydrophilic material as a carrier for immobilization, which is preliminarily impregnated with a preservation solution containing 0 before immobilization of the biological material on it. 7 M sucrose, 1.5 M Tris HCl with a pH of 7.4 and 0.5 M ethylenediaminetetraacetic acid.
Сухой носитель пропитывают консервирующим раствором.The dry carrier is impregnated with a preservative solution.
При этом консервирующий раствор сохраняет постоянство концентрации водородных ионов, с сохранением постоянного значения рН.In this case, the preservation solution maintains a constant concentration of hydrogen ions, while maintaining a constant pH value.
Кроме того, высушивание проводят в условиях, не допускающих разложение консервирующего раствора.In addition, drying is carried out under conditions that do not allow decomposition of the preservative solution.
Восстановление высушенного биоматериала осуществляют путем его смыва водой или растворителем.The recovery of dried biomaterial is carried out by washing it off with water or a solvent.
Пропитывание крупнопористого химически нейтрального гидрофильного материала носителя консервирующим раствором осуществляют до полного его пропитывания.The impregnation of large-pore chemically neutral hydrophilic material of the carrier with a preservative solution is carried out until it is completely saturated.
Кроме того, в способе консервация биологических материалов для предотвращения процесса гемолиза и сохранения гипобиоза растений консервирующий раствор содержит 0.7 М сахарозу. При этом он, пропитывая сухой носитель, позволяет длительно сохранять материал от растений и фитопатогенов.In addition, in the method, the preservation of biological materials to prevent the process of hemolysis and preservation of plant hypobiosis, the preservation solution contains 0.7 M sucrose. At the same time, it, impregnating a dry carrier, allows you to save material from plants and plant pathogens for a long time.
Осуществление способа поясняются следующими примерами.The implementation of the method is illustrated by the following examples.
Пример 1Example 1
Перед нанесением реагента на крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал носителя готовят консервирующий раствор с определенной концентрацией. Предварительно готовили консервирующий раствор путем смешивания сахарозы, буфера Tris HCl и этилендиаминтетрауксусной кислоты. При этом 10 мл консервирующего раствора содержали в себе Tris - 1,5 М, рН подводили HCl до рН 7,4, сахарозы - 0,7 М, к ним добавляли 2 мл 0,5 М EDTA (рН 7,4).Before applying the reagent to a large-pore chemically neutral hydrophilic carrier material, a preservation solution with a certain concentration is prepared. A preservation solution was previously prepared by mixing sucrose, Tris HCl buffer and ethylenediaminetetraacetic acid. At the same time, 10 ml of the preservation solution contained Tris — 1.5 M, the pH was adjusted with HCl to pH 7.4, and sucrose — 0.7 M; 2 ml of 0.5 M EDTA (pH 7.4) was added to them.
Сухой носитель шириной 1 см и длиной 2.5 см, встроенный в картонный конверт, опускали в емкость с консервирующим раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 М Tris HCl (рН 7,4) и 2 мл 0,5 М EDTA и выдерживали в течение двух часов. Затем носитель высушивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре.A dry carrier with a width of 1 cm and a length of 2.5 cm embedded in a cardboard envelope was lowered into a container with a preserving solution containing 0.7 M sucrose, 1.5 M Tris HCl (pH 7.4) and 2 ml 0.5 M EDTA and kept in for two hours. Then the carrier was dried for 1.5 hours at room temperature.
На высушенный крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал носителя вносили 100-150 мкл крови, то есть до полного впитывания, и высушивали не менее 1.5 часов при комнатной температуре от 15° до 25°С.100-150 μl of blood, that is, until completely absorbed, was added to the dried, large-pore chemically neutral hydrophilic material of the carrier, and dried for at least 1.5 hours at room temperature from 15 ° to 25 ° C.
Затем картонный конверт вместе с осушителем (гидрогелем) упаковали в зип-пакет, и хранили в бытовом холодильнике с температурой 2-5°С в течение не менее пяти лет до основного назначения (исследования методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и иммуноферментным анализом (ИФА)).Then, the cardboard envelope together with a desiccant (hydrogel) was packed in a zip bag and stored in a household refrigerator with a temperature of 2-5 ° C for at least five years until its main purpose (studies by polymerase chain reaction (PCR) and enzyme immunoassay (ELISA) )).
Для исследования биоматериалов, хранившихся на носителе, методами ПЦР и ИФА проводили восстановление их в жидкую форму. Для этого с использованием ножниц аккуратно разрезали носитель на три части, помещали их в 1,5 мл пробирку, содержащую 300 мкл дистиллированной воды. Пробирку оставляли при комнатной температуре на 10 мин, периодически встряхивая на вортексе. Затем центрифугировали пробирку, отбирали надосадочную жидкость и переносили ее в чистую пробирку. Полученную жидкую пробу использовали в дальнейшей работе.To study the biomaterials stored on the carrier, PCR and ELISA carried out their restoration in liquid form. To do this, using scissors, the carrier was carefully cut into three parts, placed in a 1.5 ml tube containing 300 μl of distilled water. The tube was left at room temperature for 10 minutes, periodically shaking on a vortex. Then the tube was centrifuged, the supernatant was taken and transferred to a clean tube. The obtained liquid sample was used in further work.
С использованием коммерческого набора реагентов для выделения ДНК/РНК из различных материалов производства ООО «БИОКОМ» проводили выделения ДНК и РНК микроорганизмов как с образцов с мембраны, так и из жидких образцов крови, отобранных с 3% раствором EDTA. ПЦР проводили согласно протоколу к наборам для амплификации, производства ООО «БИОКОМ». ИФА проводили с использованием коммерческого иммуноферментного набора реагентов IDEXX (США), определяли титры антител в крови животных к сальмонеллезу в нативных, так и в высушенных на носителе образцах. Результаты ПЦР анализа показаны на фиг. 1, где треки: 1-3 - выделенная ДНК Toxoplasma gondii из жидких образов крови, 4-6 - выделенная ДНК Toxoplasma gondii из сухих образцов крови, нанесенных на мембраны, пропитанные раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 M Tris HCl (рН 7,4) и 0,5 М EDTA. Для всех исследованных образцов полученные результаты в ИФА по определению антител с сухих мембран и нативных образцов коррелируют, что свидетельствует о стабильности консервированных сухих образцов.Using a commercial set of reagents for DNA / RNA isolation from various materials manufactured by BIOKOM LLC, DNA and RNA microorganisms were isolated from both membrane samples and liquid blood samples taken with a 3% EDTA solution. PCR was performed according to the protocol for amplification kits manufactured by BIOKOM LLC. ELISA was performed using a commercial IDEXX enzyme-linked immunosorbent reagent kit (USA); antibody titers in animal blood for salmonellosis were determined in both native and carrier-dried samples. The results of PCR analysis are shown in FIG. 1, where tracks: 1-3 - isolated Toxoplasma gondii DNA from liquid blood samples, 4-6 - isolated Toxoplasma gondii DNA from dry blood samples deposited on membranes soaked in a solution containing 0.7 M sucrose, 1.5 M Tris HCl ( pH 7.4) and 0.5 M EDTA. For all studied samples, the results obtained in ELISA for the determination of antibodies from dry membranes and native samples are correlated, which indicates the stability of canned dry samples.
Пример 2Example 2
В исследование брали листья картофеля и томата, пораженные X вирусом картофеля (PVX-Грибы), S вирусом картофеля (PVS-тля), M вирусом картофеля (PVM-тля), К вирусом томатов (TVK), L вирусом томатов (TVL). Из пораженных листьев картофеля и томатов отжимали сок. Предварительно готовили консервирующий раствор путем смешивания сахарозы, буфера Tris HCl и этилендиаминтетрауксусной кислоты. При этом 10 мл консервирующего раствора содержали в себе Tris - 1,5 М, рН подводили HCl до рН 7,4, сахарозы - 0,7 М, к ним добавляли 2 мл 0,5 М EDTA (рН 7,4).The study took potato and tomato leaves infected with X potato virus (PVX-Mushrooms), S potato virus (PVS-aphid), M potato virus (PVM-aphid), K tomato virus (TVK), L tomato virus (TVL). Juice was squeezed from the affected leaves of potatoes and tomatoes. A preservation solution was previously prepared by mixing sucrose, Tris HCl buffer and ethylenediaminetetraacetic acid. At the same time, 10 ml of the preservation solution contained Tris — 1.5 M, the pH was adjusted with HCl to pH 7.4, and sucrose — 0.7 M; 2 ml of 0.5 M EDTA (pH 7.4) was added to them.
Сухой носитель шириной 1 см и длиной 2.5 см, встроенный в картонный конверт, опускали в емкость с консервирующим раствором на 10 секунд до его полного пропитывания. Носитель высушивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре. Иммобилизацию проводили путем внесения на высушенный крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал носителя 100-150 мкл сока растений с фитопатогенами. После чего носитель с нанесенным на него соком растений с фитопатогенами, заключенный в бумажный картон, высушивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре от 15° до 25°С. Затем картонный конверт вместе с осушителем упаковали в зип-пакет и хранили в бытовом холодильнике с температурой 2-5°С в течение 5 лет до основного назначения (исследования проводили методами ПЦР и ИФА).A dry carrier with a width of 1 cm and a length of 2.5 cm, built into a cardboard envelope, was lowered into a container with a preserving solution for 10 seconds until it was completely saturated. The carrier was dried for 1.5 hours at room temperature. Immobilization was carried out by adding 100-150 μl of plant sap with phytopathogens to the dried, large-pore chemically neutral hydrophilic carrier material. After that, the carrier with the plant juice applied to it with phytopathogens, enclosed in paper cardboard, was dried for 1.5 hours at room temperature from 15 ° to 25 ° C. Then, the cardboard envelope together with a desiccant was packed in a zip bag and stored in a household refrigerator with a temperature of 2-5 ° C for 5 years until its main purpose (studies were performed by PCR and ELISA).
Для исследования фитопатогенов, хранившихся на носителе методами ПЦР и ИФА, проводили восстановление их в жидкую форму. Для этого с использованием ножниц аккуратно разрезали носитель на три части, помещали их в 1,5 мл пробирку, содержащую 300 мкл дистиллированной воды. Пробирку оставляли при комнатной температуре на 10 мин, периодически встряхивая на вортексе. Затем центрифугировали пробирку, отбирали надосадочную жидкость и переносили ее в чистую пробирку. Полученную жидкую пробу использовали в дальнейшей работе.To study phytopathogens stored on a carrier by PCR and ELISA, they were restored to liquid form. To do this, using scissors, the carrier was carefully cut into three parts, placed in a 1.5 ml tube containing 300 μl of distilled water. The tube was left at room temperature for 10 minutes, periodically shaking on a vortex. Then the tube was centrifuged, the supernatant was taken and transferred to a clean tube. The obtained liquid sample was used in further work.
С использованием коммерческого набора реагентов для выделения ДНК/РНК из различных материалов производства ООО «БИОКОМ» проводили выделения ДНК картофеля и томатов. Далее проводили постановку полимеразной цепной реакции согласно протоколу к набору реагентов «PlantV-ПЦР-ядро», производства ООО «БИОКОМ». С использованием набора реагентов «ИММУНОТЕСТ-ХВК», производства ООО «БИОКОМ» определяли Х-вирус картофеля в нативных и в высушенных на носителе образцах. Работу проводили согласно инструкции по применению к набору «ИММУНОТЕСТ-ХВК». Результаты работы показали, что ДНК картофеля и томатов выявлялись из всех образцов как нативных, так и с сухого носителя. Результаты ИФА представлены в табл. 1Using a commercial set of reagents for the isolation of DNA / RNA from various materials manufactured by BIOKOM LLC, potato and tomato DNA were extracted. Further, the polymerase chain reaction was carried out according to the protocol for the reagent kit PlantV-PCR-core, manufactured by BIOKOM LLC. Using the IMMUNOTEST-HVK reagent kit manufactured by BIOKOM LLC, potato X virus was determined in native and carrier-dried samples. The work was carried out according to the instructions for use with the IMMUNOTEST-KHV kit. The results of the work showed that the DNA of potatoes and tomatoes was detected from all samples, both native and dry media. The results of ELISA are presented in table. one
Таким образом, полученные результаты показывают, что данный способ консервации применим к растениям и фитопатогенам и сохраняет биологические и диагностические свойства исследуемого материала.Thus, the obtained results show that this method of conservation is applicable to plants and phytopathogens and preserves the biological and diagnostic properties of the studied material.
Пример 3Example 3
Проведено исследование сохранности биологических свойств лактобактерий, изолированных от пациенток в урогенитальных мазках. При этом предварительно готовили консервирующий раствор путем смешивания сахарозы, буфера Tris HCl и этилендиаминтетрауксусной кислоты. При этом 10 мл консервирующего раствора содержали в себе Tris - 1,5 М, рН подводили HCl до рН 7,4, сахарозы - 0,7 М, к ним добавляли 2 мл 0,5 М EDTA (рН 7,4). Сухой носитель шириной 1 см и длиной 2.5 см, встроенный в картонный конверт, опускали в емкость с раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 М Tris Hcl (рН 7,4) и 0,5 М EDTA, и выдерживали 10 секунд до полного его пропитывания. Носитель высушивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре. Иммобилизацию проводили путем внесения на высушенный крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал носителя урогенитальные смывы до полного заполнения пространства материала.A study was made of the preservation of the biological properties of lactobacilli isolated from patients in urogenital smears. In this case, a preservation solution was preliminarily prepared by mixing sucrose, Tris HCl buffer and ethylenediaminetetraacetic acid. At the same time, 10 ml of the preservation solution contained Tris — 1.5 M, the pH was adjusted with HCl to pH 7.4, and sucrose — 0.7 M; 2 ml of 0.5 M EDTA (pH 7.4) was added to them. A dry carrier with a width of 1 cm and a length of 2.5 cm, embedded in a cardboard envelope, was lowered into a container with a solution containing 0.7 M sucrose, 1.5 M Tris Hcl (pH 7.4) and 0.5 M EDTA, and held for 10 seconds until its full impregnation. The carrier was dried for 1.5 hours at room temperature. Immobilization was carried out by introducing urogenital swabs onto the dried, large-pore chemically neutral hydrophilic carrier material until the material space was completely filled.
Затем картонный конверт вместе с осушителем упаковали в зип-пакет и хранили в бытовом холодильнике с температурой 2-5°С в течение 5 лет до основного назначения (микробиологического исследования). Отрезанный кусочек носителя с сухим образцом помещали в пробирку, в которую добавляли воду для растворения сухого образца. Пробирку оставляли в штативе при комнатной температуре в течение 10 мин и периодически встряхивали на вортексе. Затем центрифугировали в течение 40 секунд при 10 тысячах об/мин. Полученную суспензию переносили в чистую пробирку и использовали при микробиологическом исследовании материала. При этом количество жизнеспособных лактобактерий варьировало в различных пределах. Результаты представлены в таблице 2.Then the cardboard envelope together with a desiccant was packed in a zip bag and stored in a household refrigerator with a temperature of 2-5 ° C for 5 years until its main purpose (microbiological study). A cut-off piece of carrier with a dry sample was placed in a test tube into which water was added to dissolve the dry sample. The tube was left in a rack at room temperature for 10 minutes and periodically shaken on a vortex. Then it was centrifuged for 40 seconds at 10 thousand rpm. The resulting suspension was transferred to a clean tube and used in microbiological examination of the material. Moreover, the number of viable lactobacilli varied within different limits. The results are presented in table 2.
Таблица 2. Количество жизнеспособных клеток в культурах лактобактерий, хранившихся на сухом носителе, предварительно пропитанном консервирующим раствором.Table 2. The number of viable cells in cultures of lactobacilli stored on a dry carrier, previously impregnated with a preservative solution.
Полученные результаты показывают, что данный способ консервации позволяет сохранять биологические свойства материалов, нанесенных на сухую мембрану.The results show that this method of conservation allows you to save the biological properties of the materials deposited on a dry membrane.
Пример 4Example 4
Из листьев картофеля, томатов отжимали сок, который наносили в количестве 100-150 мкл на крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал носителя, предварительно пропитанный консервирующим раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 М Tris HCl с рН 7,4 в конечной концентрации с добавлением к ним 2 мл 0,5 М этилендиаминтетрауксусной кислоты, и высушенный при комнатной температуре. После нанесения биологического материала носитель высушивали в течение 1,5 часов при комнатной температуре от 15° до 25°С. Затем картонный конверт с носителем биоматериала вместе с осушителем упаковали в зип-пакет и хранили в бытовом холодильнике с температурой 2-5°С в течение 5 лет. Для исследования биоматериалов растений, хранившихся на носителе методами ПЦР и ИФА, проводили восстановление их в жидкую форму. Для этого с использованием ножниц аккуратно разрезали носитель на три части, помещали их в 1,5 мл пробирку, содержащую 300 мкл дистиллированной воды. Пробирку оставляли при комнатной температуре на 10 мин, периодически встряхивая на вортексе. Затем центрифугировали пробирку, отбирали надосадочную жидкость и переносили ее в чистую пробирку. Полученную жидкую пробу использовали в дальнейшей работе. С использованием коммерческого набора реагентов для выделения ДНК/РНК из различных материалов производства ООО «БИОКОМ» проводили выделения ДНК картофеля и томатов. Далее проводили постановку полимеразной цепной реакции согласно протоколу к набору реагентов «Plant-ПЦР-ядро», производства ООО «БИОКОМ». Все исследованные биологические образцы из листьев картофеля и томатов, нанесенные на носитель, с последующем высушиванием, показали положительный результат при обнаружении ДНК. Результаты идентичны исследованию биологических образцов листьев картофеля и томатов из свежеполученной нативной суспензии (сок растений). Таким образом, изотонический консервирующий раствор для тканей растений обязательно должен содержать сахарозу. Экспериментальные данные показывают, что 0.7 М сахароза, используемая для консервации крови, достаточна и для длительной консервации биоматериала растений (сока).Juice was squeezed out of the leaves of potatoes and tomatoes, which was applied in an amount of 100-150 μl to a large-pore chemically neutral hydrophilic carrier material, previously impregnated with a preservation solution containing 0.7 M sucrose, 1.5 M Tris HCl with a pH of 7.4 in a final concentration with the addition of to them 2 ml of 0.5 M ethylenediaminetetraacetic acid, and dried at room temperature. After applying the biological material, the carrier was dried for 1.5 hours at room temperature from 15 ° to 25 ° C. Then a cardboard envelope with a carrier of biomaterial together with a desiccant was packed in a zip bag and stored in a household refrigerator with a temperature of 2-5 ° C for 5 years. To study the biomaterials of plants stored on a carrier by PCR and ELISA, they were restored to liquid form. To do this, using scissors, the carrier was carefully cut into three parts, placed in a 1.5 ml tube containing 300 μl of distilled water. The tube was left at room temperature for 10 minutes, periodically shaking on a vortex. Then the tube was centrifuged, the supernatant was taken and transferred to a clean tube. The obtained liquid sample was used in further work. Using a commercial set of reagents for the isolation of DNA / RNA from various materials manufactured by BIOKOM LLC, potato and tomato DNA were extracted. Next, the polymerase chain reaction was carried out according to the protocol for the reagent kit “Plant-PCR-core”, manufactured by BIOKOM LLC. All studied biological samples from leaves of potatoes and tomatoes, deposited on a carrier, followed by drying, showed a positive result when DNA was detected. The results are identical to the study of biological samples of potato leaves and tomatoes from a freshly obtained native suspension (plant sap). Thus, an isotonic preservative solution for plant tissues must necessarily contain sucrose. Experimental data show that 0.7 M sucrose used for blood preservation is also sufficient for long-term preservation of plant biomaterial (juice).
Концентрации реагентов консервирующего раствора подобраны таким образом, чтобы сохранялась постоянная концентрация водородных ионов, то есть значение рН смеси в растворе сохранялось в значениях 7,4, так как его изменение ниже 7,4 приводит к защелачиванию, а выше 7,4 - к окислению биоматериала и соответственно к разрушению его клеток. А использование концентрации сахарозы в консервирующем растворе (0,7 М) обеспечивало длительное сохранение клеток биологического материала без повреждения, На примере 5 и 6 показано, что концентрация реагентов консервирующего раствора обеспечивает постоянство концентрации водородных ионов и длительное сохранение биологических и диагностических свойств клеток биоматериала.The concentrations of the reagents of the preserving solution are selected so that a constant concentration of hydrogen ions is maintained, that is, the pH of the mixture in the solution was kept at 7.4, since its change below 7.4 leads to alkalization, and above 7.4 to the oxidation of the biomaterial and accordingly to the destruction of its cells. And the use of the concentration of sucrose in the preservation solution (0.7 M) ensured the long-term preservation of the cells of biological material without damage. Examples 5 and 6 show that the concentration of reagents of the preservation solution ensures a constant concentration of hydrogen ions and long-term preservation of the biological and diagnostic properties of the cells of the biomaterial.
Пример 5Example 5
Крупнопористый химически нейтральный гидрофильный материал, пропитанный консервирующим раствором, содержащим 0,7 М сахарозу, 1.5 М Tris HCl с рН 7,4 в конечной концентрации и с добавлением 2 мл 0,5 М этилендиаминтетрауксусной кислоты и иммобилизованными на него каплями крови и высушенными при комнатной температуре, еженедельно проверяли на значение рН. Для этого полоску лакмусовой бумажки смачивали дистиллированной водой, после чего ее клали непосредственно на носитель с сухими пятнами крови. По степени изменения окраски судили о реакции. Значение рН было стабильным (7.4) на протяжение всего периода исследования.Large-pore chemically neutral hydrophilic material impregnated with a preservation solution containing 0.7 M sucrose, 1.5 M Tris HCl with a pH of 7.4 at a final concentration and with the addition of 2 ml of 0.5 M ethylenediaminetetraacetic acid and immobilized blood drops on it and dried at room temperature temperature, weekly checked for pH. For this, a strip of litmus paper was moistened with distilled water, after which it was put directly onto a carrier with dry blood stains. The degree of color change was judged on the reaction. The pH value was stable (7.4) throughout the entire study period.
Пример 6Example 6
Консервирующие растворы, в состав которых входила сахароза 0,02 М, 0,2 М сахароза, 1.5 М Tris Hcl (рН 7,4) и 0,5 М EDTA (экспериментальные растворы), позволяли достаточно длительно сохранять эритроциты без гемолиза, но оказались непригодными при процессе восстановления сухих образцов в жидкую форму, т.е. образовывали трудноразбиваемый осадок. Восстановленная жидкая форма сухих образцов крови имеет консистенцию, подходящую для любых методов выделения нуклеиновый кислоты, то есть как на сорбенте, так и при спиртовым осаждении, а особенно для автоматизированных систем выделения, где консистенция образца имеет большое значение. И она была возможна только в результате хранения крови при довольно большой концентрации сахарозы в растворе (0,7 М). Также эффективным было совместное применение буфера (1,5 М Tris-HCl (рН 7,4) и с 2 мл 0,5 М ЭДТА) с сахарозой для сухого носителя. Концентрация ЭДТА (2 мл 0,5 М к 10 мл буфера) - стандартная концентрация используемая в буферных системах. А вот концентрация Tris HCl (1,5 М) подобрана экспериментальным путем, так как в процессе исследования было выявлено, что более низкая его концентрация (1 М, 0,5 М, 0,2 М) приводила к окислению проб, а большая (2 М, 2,5 М) к защелачиванию.Preservative solutions, which included sucrose 0.02 M, 0.2 M sucrose, 1.5 M Tris Hcl (pH 7.4) and 0.5 M EDTA (experimental solutions), allowed red blood cells to be stored for quite a long time without hemolysis, but were unsuitable for the recovery of dry samples into liquid form, i.e. formed a hard to break sediment. The reconstituted liquid form of dry blood samples has a consistency suitable for any nucleic acid isolation method, i.e., both on sorbent and alcohol precipitation, and especially for automated isolation systems where the consistency of the sample is of great importance. And it was possible only as a result of blood storage at a rather high concentration of sucrose in solution (0.7 M). The combined use of a buffer (1.5 M Tris-HCl (pH 7.4) and with 2 ml of 0.5 M EDTA) with sucrose for a dry vehicle was also effective. EDTA concentration (2 ml 0.5 M to 10 ml buffer) is the standard concentration used in buffer systems. But the concentration of Tris HCl (1.5 M) was selected experimentally, since in the course of the study it was revealed that its lower concentration (1 M, 0.5 M, 0.2 M) led to the oxidation of samples, and a large ( 2 M, 2.5 M) to alkalization.
Таким образом, заявленный способ консервации биологических материалов обеспечивает повышение сохранности диагностически и биологически значимых свойств биологического материала в течение длительного времени за счет нанесения его на крупнопористый химически нейтральный гидрофильный носитель, пропитанный консервирующим раствором, способствующим предотвращению деградации клеток, за счет сохранения постоянства концентрации водородных ионов и постоянного значения рН, а также защитного действия, предотвращающего процесс гемолиза и сохраняющего гипобиоз растений.Thus, the claimed method of preserving biological materials provides an increase in the safety of diagnostically and biologically significant properties of biological material for a long time by applying it to a large-pore chemically neutral hydrophilic carrier impregnated with a preservation solution that helps to prevent cell degradation, while maintaining a constant concentration of hydrogen ions and a constant pH value, as well as a protective effect that prevents the process of hemolysis and hypobiosis protected plants.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110713A RU2619898C1 (en) | 2016-03-24 | 2016-03-24 | Method for biological materials preservation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016110713A RU2619898C1 (en) | 2016-03-24 | 2016-03-24 | Method for biological materials preservation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2619898C1 true RU2619898C1 (en) | 2017-05-19 |
Family
ID=58715748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016110713A RU2619898C1 (en) | 2016-03-24 | 2016-03-24 | Method for biological materials preservation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2619898C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2703058C2 (en) * | 2017-12-08 | 2019-10-15 | Владимир Артурович Хачумов | Method of storing dna-containing plant material in a wide temperature range |
| WO2020242970A1 (en) * | 2019-05-24 | 2020-12-03 | East Carolina University | Preservation using sugars |
| CN114480129A (en) * | 2022-01-13 | 2022-05-13 | 力因精准医疗产品（上海）有限公司 | Human excrement preserving fluid and using method thereof |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5516487A (en) * | 1994-06-22 | 1996-05-14 | Isolab, Inc. | Absorbent paper for liquid sampling and impregnated paper calibrators and controls |
| US5856102A (en) * | 1997-02-26 | 1999-01-05 | Bierke-Nelson; Diane Lynn | Home/self-storage to improve DNA banking |
| US20040171139A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-09-02 | Belcher Angela M. | Fabricated biofilm storage device |
| RU2322058C2 (en) * | 2005-12-13 | 2008-04-20 | Институт белка Российской академии наук | Method for preserving biological sample providing safety of nucleic acids |
| RU2567145C1 (en) * | 2014-04-14 | 2015-11-10 | Игорь Валериевич Корниенко | Composition for storing dna-containing preparations or dna (versions) and its application |
| RU2573324C2 (en) * | 2010-08-13 | 2016-01-20 | Эдванст Байоньютришн Корпорейшн | Stabilising composition for dry storage of biologic materials (versions) |
-
2016
- 2016-03-24 RU RU2016110713A patent/RU2619898C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5516487A (en) * | 1994-06-22 | 1996-05-14 | Isolab, Inc. | Absorbent paper for liquid sampling and impregnated paper calibrators and controls |
| US5856102A (en) * | 1997-02-26 | 1999-01-05 | Bierke-Nelson; Diane Lynn | Home/self-storage to improve DNA banking |
| US20040171139A1 (en) * | 2002-09-24 | 2004-09-02 | Belcher Angela M. | Fabricated biofilm storage device |
| RU2322058C2 (en) * | 2005-12-13 | 2008-04-20 | Институт белка Российской академии наук | Method for preserving biological sample providing safety of nucleic acids |
| RU2573324C2 (en) * | 2010-08-13 | 2016-01-20 | Эдванст Байоньютришн Корпорейшн | Stabilising composition for dry storage of biologic materials (versions) |
| RU2567145C1 (en) * | 2014-04-14 | 2015-11-10 | Игорь Валериевич Корниенко | Composition for storing dna-containing preparations or dna (versions) and its application |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2703058C2 (en) * | 2017-12-08 | 2019-10-15 | Владимир Артурович Хачумов | Method of storing dna-containing plant material in a wide temperature range |
| WO2020242970A1 (en) * | 2019-05-24 | 2020-12-03 | East Carolina University | Preservation using sugars |
| CN114480129A (en) * | 2022-01-13 | 2022-05-13 | 力因精准医疗产品（上海）有限公司 | Human excrement preserving fluid and using method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7330325B2 (en) | Systems, methods and devices for sample collection, stabilization and storage | |
| US7748283B2 (en) | Controlled transfer biological sample collection devices and methods of using such devices | |
| US20120100522A1 (en) | Stabilized chemical dehydration of biological material | |
| US10625242B2 (en) | Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules | |
| JP2010536377A (en) | Stabilization of nucleic acids on solid supports | |
| AU2018203078A1 (en) | Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules | |
| Euler et al. | Noradrenaline release from isolated nerve granules | |
| JP2011236237A (en) | Stable protein storage and stable nucleic acid storage in recoverable form | |
| RU2619898C1 (en) | Method for biological materials preservation | |
| CA2354379A1 (en) | Method for isolating dna from biological materials | |
| CN103890176A (en) | A method of preparing biological material | |
| CN204369906U (en) | A kind of test kit extracting and preserve nucleic acid | |
| WO2012113907A2 (en) | Paper support and method of recovering biological material therefrom | |
| CN113999840B (en) | Nucleic acid sample preservation solution and use method and application thereof | |
| JP4869258B2 (en) | Reagent for stabilizing cells by permeabilization and method of using the same | |
| CN110997933B (en) | Methods and compositions for stabilizing cell-free nucleic acids and cells | |
| Gordiyenko et al. | Erythrocyte membrane permeability for a series of diols | |
| US20150118683A1 (en) | Substrates and associated methods for elution of nucleic acids | |
| KR20220146614A (en) | Capillary-assisted vitrification methods and materials for preservation of biological samples | |
| US20040038356A1 (en) | Step-wise process to recover or eliminate biological substances by flotation from underlayered colloidal medium | |
| RU2624241C1 (en) | Solid phase carrier for immobilization and/or storage of biological samples containing nucleic acids | |
| HK40081857A (en) | Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180325 |