RU2613910C1 - Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии - Google Patents
Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2613910C1 RU2613910C1 RU2015152552A RU2015152552A RU2613910C1 RU 2613910 C1 RU2613910 C1 RU 2613910C1 RU 2015152552 A RU2015152552 A RU 2015152552A RU 2015152552 A RU2015152552 A RU 2015152552A RU 2613910 C1 RU2613910 C1 RU 2613910C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- inactivity
- acetol
- tissue hypoxia
- skeletal muscle
- during
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 title claims abstract description 26
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 title claims abstract description 21
- XLSMFKSTNGKWQX-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetone Chemical compound CC(=O)CO XLSMFKSTNGKWQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 9
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 5
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 28
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 17
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 13
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Natural products CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 9
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical compound CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 7
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 7
- 239000012855 volatile organic compound Substances 0.000 description 7
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 6
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 6
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N Methylglyoxal Chemical class CC(=O)C=O AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000019439 energy homeostasis Effects 0.000 description 5
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 4
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 4
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 3
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 3
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000004066 metabolic change Effects 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 2
- 230000010627 oxidative phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 101100064317 Arabidopsis thaliana DTX41 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 1
- 108050008072 Cytochrome c oxidase subunit IV Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000026214 Skeletal muscle atrophy Diseases 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006536 aerobic glycolysis Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000004945 aromatic hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002715 bioenergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036782 biological activation Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011208 chromatographic data Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- OSUHJPCHFDQAIT-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-{4-[(6-chloroquinoxalin-2-yl)oxy]phenoxy}propanoate Chemical compound C1=CC(OC(C)C(=O)OCC)=CC=C1OC1=CN=C(C=C(Cl)C=C2)C2=N1 OSUHJPCHFDQAIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000010006 flight Effects 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- -1 isoprene) Natural products 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000003018 phosphorus compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004717 pyruvic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010405 reoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035806 respiratory chain Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000000276 sedentary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000005487 simulated microgravity Effects 0.000 description 1
- 230000025185 skeletal muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000012488 skeletal system development Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/497—Physical analysis of biological material of gaseous biological material, e.g. breath
Landscapes
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к диагностике, а именно к способу определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии. Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии, включающий определение ацетола (гидрооксиацетона C3H6O2 GAS116-09-6) в выдыхаемом воздухе испытуемого методом хроматомасс-спектрометрии, до начала гиподинами и в процессе её воздействия и при достоверном уменьшении ацетола в выдыхаемом воздухе диагностируют тканевую гипоксию скелетных мышц и миокарда при гиподинамии. Вышеописанный способ позволяет исключить инвазивное вмешательство и осуществлять способ в разных условиях неограниченное количество раз и с любой продолжительностью, что позволяет своевременно проводить профилактические мероприятия против развития тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии. 2 табл., 2 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, более точно к космической медицине, и может быть использовано для контроля за состоянием гипоксии скелетных мышц и миокарда лиц, находящихся длительное время в условиях гиподинамии.
Снижение нагрузки на скелетные мышцы и миокард при гиподинамии сопровождается развитием метаболических перестроек в организме человека и прежде всего изменениями энергетического и пластического обеспечения работы мышечной ткани. Ограничение периодов напряжения и распада макроэргов в мышечной ткани и миокарде при гиподинамии сопровождается нарушением нейроэндокринной регуляции энергетических процессов биологического окисления (снижение скорости синтеза аденозинтрифосфата (АТФ)), вследствие уменьшения степени сопряжения окислительного фосфорилирования, структурных нарушений, а также снижением активности ферментов, регулирующих синтетические процессы в органах [1, 2]. Исследованиями газообмена в покое и при выполнении обследованными физической нагрузки при длительном (520 суток в программе «МАРС-500») ограничении двигательной активности показано, что вентиляция и эффективность газообмена, в течение всего периода воздействия, были в пределах физиологической нормы здорового человека [3]. По-видимому, при длительном ограничении двигательной активности покрытие энерготрат в организме происходит, в основном, за счет катаболических процессов в тканях, вследствие нарушения микроциркуляции [1, 2]. Так, в работах [4, 5] показано снижение интенсивности клеточного дыхания при гравитационной разгрузке (до 14 суток) с нарушением процессов в дыхательной цепи митохондрий и снижением активности цитохромоксидазы в камбаловидной мышце [4], а также интенсивности клеточного дыхания в кардиомиоцитах левого желудочка сердца крыс на 3 сутки реабилитации [5]. Уменьшение мышечной массы при длительном ограничении двигательной активности человека в модельных экспериментах (370 суток) и у космонавтов при различной длительности полетов сопровождалось развитием отрицательного азотистого баланса, замедлением нуклеинового обмена, увеличением экскреции мочевины, мочевой кислоты с мочой, вследствие замедления синтеза богатых энергией фосфорных соединений и тканевого дыхания [1, 2, 6].
При этом уменьшение квоты мышечной массы у человека при длительной (370 суток) гиподинамии происходило преимущественно в наиболее функционально активных группах скелетных мышц и в миокарде [1, 2]. Метаболизм углеводов при моделировании длительной гиподинамии характеризовался угнетением аэробных процессов гликолиза со снижением продукции АТФ и накоплением молочной и пировиноградной кислот. Подтверждением преобладания анаэробной фазы гликолиза является увеличение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и превращение пировиноградной кислоты в лактат для реокисления восстановленного никотинамидадениндинуклеотида (НАДН) и окисленной формы никотинамидадениндинуклеотида НАД+ со снижением активности НАД-зависимых ферментов в тканях крыс (скелетные мышцы, миокард, печень) при гиподинамии [1, 2]. Процесс стрессорной мобилизации организма в период адаптации к длительной (370 суток) гиподинамии сопровождался снижением функции ферментативных систем, ослаблением процессов гликолиза и ферментативного катализа в клетках и равномерным снижением активности ферментов энергетического гомеостаза [1]. Динамика креатинфосфокиназы (КФК) отражала снижение активности мышечной креатинфосфокиназы (КФК-ММ) и в меньшей степени миокардиальной креатинфосфокиназы (КФК MB) [1]. В то же время исследованием ферментного спектра в ходе длительной (370 суток) гиподинамии было показано, что по мере увеличения длительности воздействия наблюдается нарастание изменений и в энергообмене миокарда [1]. Основываясь на данные литературы, характеризующие метаболические проявления при длительной гиподинамии [1, 2, 6], для верификации информативности ацетола, как биомаркера гипоксии в скелетных мышцах и миокарде, были прослежены следующие биохимические показатели: активность фермента энергетического гомеостаза (КФК) и его изоферментов: мышечного ММ-КФК и миокардиального МВ-КФК, активность дегидрогеназы гликолиза лактатдегидрогеназы (ЛДГ), глюкозы и показателя снижения функциональной нагрузки на скелетные мышцы - креатинина [1, 7, 8]. При выборе летучих органических соединений (ЛОС) для анализа в качестве биомаркеров гипоксии использовали данные, изложенные в работах [9, 10, 11, 12, 13].
В качестве прототипа заявленному способу определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда у человека при гиподинамии был выбран способ, описанный в [1], в котором определение тканевой гипоксии проводилось при моделировании длительной (370 суток) гиподинамии в наземных модельных экспериментах и у космонавтов в условиях невесомости. В прототипе определение гипоксии в скелетных мышцах и миокарде проводилось по динамике биохимических показателей, характеризующих аэробное окисление углеводов, активности энергетических ферментов специфичных для анализа аэробного типа энергетического обмена и активности ферментов энергетического гомеостаза: общей креатинкиназы (КФК) и ее мышечного (ММ КК) и миокардиального (MB КК) изоферментов, снижение активности которых наблюдается при уменьшении мышечной массы у человека и малоподвижном образе жизни (гиподинамии).
Недостатком выбранного прототипа является необходимость отбора венозной крови у обследуемых для проведения анализа, т.е. необходимость осуществления инвазивного вмешательства.
Техническим результатом заявленного способа является то, что предлагаемый способ исключает инвазивное вмешательство, что позволяет осуществлять способ в самых разных условиях, в динамике неограниченно, с частотой, необходимой для оценки неблагоприятного воздействия гиподинамии и эффективности профилактических мероприятий.
Этот технический результат достигается тем, что в известном способе определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии, включающем анализ у испытуемого молекулярных метаболитов тканевой гипоксии, в качестве молекулярного метаболита в воздухе, выдыхаемом испытуемым, методом хромато-масс-спектрометрии определяют ацетол (гидрооксиацетон C3H6O2 GAS116-09-6), до начала гиподинами и в процессе ее воздействия и при достоверном уменьшении ацетола в выдыхаемом воздухе диагностируют тканевую гипоксию скелетных мышц и миокарда при гиподинамии.
Способ осуществляют следующим образом.
1. Отбор проб
Пробы выдыхаемого воздуха у обследуемых отбирали в мешки из нейтрального полимерного материала, объемом 5 л под контролем CO2 «straw» method. Контроль СО2 проводили на комплексе Oxycon Pro фирмы Jaeger-VITASYS (Германия), имеющем быстродействующий инфракрасный анализатор на СО2 [4]. Выдыхаемый воздух отбирали без вдоха с удлиненным выдохом, следовательно, полученные пробы воздуха содержали в основном альвеолярный газ, соответствующий FETCO2 - содержание СО2 (%) в конечной порции выдыхаемого воздуха. Концентрирование проб проводили в сорбционных трубках, содержащих 180 мг сорбента «Тепах ТА», прокачивая 1 литр выдыхаемого воздуха через сорбент с помощью насоса «Supelco». Ввод образцов в газовый хроматограф-масс-спектрометр (ГХ-МС) проводили через термодесорбер TDS3 (Gerstel, Germany). Во время десорбции поток газа-носителя составлял 50 мл/мин, температура поднималась с начальной температуры 25°С до 250°С со скоростью 60°С/мин (конечная температура держалась 4 минуты в режиме без деления потока). Десорбированные вещества концентрировались криофокусировкой при -30°С жидким азотом в инжекторе CIS-4, содержащем лайнер, наполненный Tenax ТА. Введение образца непосредственно в колонку начиналось нагревом инжектора CIS-4 со скоростью 12°С/секунду до 250°С (конечная температура задерживалась на 3 минуты в режиме без деления потока). ГХ-МС анализ проводился на газовом хроматографе 6890N с масс-селективным детектором 5973N (фирмы Agilent Technologies), работающим при энергии ионизации 70 эВ. Хроматографическое разделение проводилось на капиллярной колонке DB-VRX 60 m × 0,25 mm × 1,4 μm (Agilent Technologies) при температурной программе: начальная температура 45°С выдерживалась 15 минут, затем проводили нагрев до 190°С со скоростью 8°С/мин, с выдержкой 2 минуты, затем нагрев до 250°С со скоростью 8°С/мин и выдержкой 1 мин при конечной температуре. Поток газа-носителя гелия был постоянным и составлял 1,0 мл/мин. Масс-спектрометр работал в режиме TIC с диапазоном m/z от 20 до 350. Хроматографические данные обрабатывались через the Agilent Chemstation Software.
2. Идентификация детектированных соединений
Идентификацию детектируемых соединений проводили с использованием библиотеки масс-спектров NIST. В дополнение к этому, для идентификации были использованы времена удерживания, полученные при анализе калибровочных смесей. Стандартные газовые смеси готовились методом испарения жидких веществ в тефлоновом мешке объемом 5 л. Мешок предварительно продувался чистым азотом (99,999%) с последующим вакуумированием с повторением операции 10 раз. Затем мешок заполнялся 3 литрами азота. Жидкие стандарты (несколько микролитров в зависимости от желаемой концентрации) вводились в мешок с помощью шприца для жидкостной хроматографии (Agilent Technologies). После испарения стандартов мешок дополнительно заполнялся 2 литрами азота. Стандартные пробы отбирались и анализировались в соответствии с процедурой, описанной выше.
3. Детектируемые соединения
Биохимические исследования включали: определение активности ферментов энергетического гомеостаза (КФК) и его изоферментов: мышечного КФК ММ и миокардиального КФК MB, активность гликолиза оценивали по динамике активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ), а также концентрации глюкозы. Функциональную активность скелетной мускулатуры оценивали по динамике концентрации креатинина в крови. Биохимические исследования проводились с использованием коммерческих наборов реагентов производства фирм "DiaSys", ФРГ. Измерения проводились на биохимическом анализаторе "Targa 3000", фирмы "Biotecnica Instruments SPA", Италия. Взятие венозной крови производилось утром, натощак за 7 суток до начала испытаний, при изоляции волонтеров в герметичном помещении и на 7 сутки в период восстановления (ВП). При воздействии «сухой» иммерсии пробы крови отбирали до воздействия на 3 и 7 сутки воздействия, и 7 сутки RP.
4. Статистическую обработку данных проводили в пакете Statistica 8.0 (StatSoft, Inc). Ввиду малого числа обследуемых динамику ЛОС в выдыхаемом воздухе (ВВ) и биохимических показателей крови в ходе эксперимента исследовали с помощью непараметрических методов. Сравнения между сериями измерений проводили с помощью критерия Уилкоксона. Статистически значимыми считали различия при р<0.05. [14, 15].
Результаты исследований
На проведение исследований с длительной изоляцией человека в герметичных помещениях было получено разрешение биоэтической комиссии Института медико-биологических проблем Российской академии наук.
В исследованиях приняли участие 11 практически здоровых мужчин в возрасте 21-38 лет, прошедших клиническое обследование и допущенных к исследованиям медицинской комиссией. Исследования проводились на экспериментальной базе Института медико-биологических проблем Российской академии наук. Моделирование гиподинамии включало 2 серии исследований: 1-я серия (11 человек, длительность - 105 суток) и 2-я серия 520-суточная («Марс-500»). Изоляция обследованных проводилась в герметичном помещении объемом 550 м, оснащенном системами автономного жизнеобеспечения. Распорядок дня в ходе длительной гиподинамии включал 8-часовой ночной сон, трехразовое питание (стандартный рацион калорийностью 2600-2800 ккал), медицинский контроль и контролируемые оптимальные условиях окружающей среды (О2 - 20-22,5%, CO2 - 0,03%, температура - 21-23°С, влажность 60-70%).
Отбор проб выдыхаемого воздуха (1 серия) проводили за 1-3 сутки до посадки в термокамеру, в период изоляции ежемесячно (1 раз) и на 3 сутки после выхода обследованных из термокамеры - реабилитационный период (RP). Отбор проб выдыхаемого воздуха проводили до нагрузки (в покое), сразу по окончании физической нагрузки и спустя 1 час после дозированной работы на велоэргометре в RP. При физической нагрузке обследованные производили педалирование в среднем темпе (60±5 об/мин), увеличивая каждую минуту мощность нагрузки на 15 Вт (начальная нагрузка - 30 Вт). Мощность нагрузки последней ступени для каждого испытателя подбиралась индивидуально в соответствии с тренированностью и составляла от 150 до 210 Вт. Одновременно проводили отбор проб воздуха в гермообъекте и комнате (иммерсионный стенд) и их анализ согласно ISO 16000-6: 2004. В выдыхаемом воздухе практически здоровых обследованных было идентифицировано до 120 летучих органических соединений, включающих насыщенные нормальные и разветвленные углеводороды, их кислородсодержащие производные (спирты, кетоны, альдегиды, кислоты), ненасыщенные углеводороды (в основном изопрен), ароматические углеводороды.
Из перечня детектируемых соединений были выбраны ЛОС, в концентрации которых определялась динамика по мере увеличении длительности гиподинамии (табл. 1).
В качестве потенциальных биомаркеров гипоксии были выбраны ацетол, изопрен и ацетон. Основанием для выбора ЛОС являлось их образование как промежуточных метаболитов липидного и углеводного обмена, обеспечивающих энергопотребление скелетных мышц и миокарда в покое и при других физиологических условиях [8]. Было обнаружено, что изменение концентрации изопрена и ацетона является неинформативным. Снижение же содержания ацетола в выдыхаемом воздухе обследованных было значимым (Р=0,0002) во все сроки воздействия гиподинамии с максимальным эффектом к 500 суткам воздействия (фиг. 1). При этом важно отметить, что в отличие от динамики изопрена и ацетона, концентрации выдыхаемого ацетола в RP оставалась значительно ниже (Р=0,002) величины, наблюдаемой до воздействия гиподинамии. Это значимое снижение содержания выдыхаемого ацетола по мере увеличения длительности гиподинамии позволили выбрать ацетол, как наиболее вероятный биомаркер тканевой гипоксии и провести сравнительный анализ с изменениями в биохимических показателях энергетического обмена.
Ацетол как метаболит метилглиоксаля в альтернативном пути метаболизма углеводов является субстратом для синтеза лактата и позволяет миновать стадии гликолиза, которые идут с малым выходом АТФ.
При возникновении гипоксии различного генеза, в том числе и при интенсивной физической работе пул восстановленного НАД в организме истощается, кофактор расходуется только в митохондриях и поток электронов в трансгидразные реакции тормозится. Соответственно ингибируется образование ацетола из метилглиоксаля в метилглиоксалевом метаболическом пути [7, 16].
Результаты биохимических показателей крови обследованных при длительном ограничении двигательной активности представлены в табл. 2.
Так, интенсификация катаболических процессов при «недогрузке» скелетных мышц сопровождалось снижением активности ферментов энергетического гомеостаза (КФК), более выраженная в скелетных мышцах (КФК ММ), начиная со 168 суток воздействия, (табл. 2). Снижение ацетола (Р=0,0002) в выдыхаемом воздухе обследованных наблюдалось с 44 суток гиподинамии и к 500 суткам, содержание маркера, по сравнению с величиной до воздействия фактора, значительно уменьшилось (фиг. 1). Активность миокардиальной креатинфосфокиназы (КФК MB) изменялась волнообразно с чередованием периодов увеличения и снижения активности фермента (табл. 2). Увеличение активности миокардиального фермента КФК MB в период адаптационного напряжения организма к гиподинамии (до 60 суток) может быть обусловлена как биологической активацией адаптационных процессов в миокарде (стабилизация или возрастание клеточного дыхания), так и с процессами энергообразования в скелетных мышцах, т.к. в мышечной ткани примерно 10% креатинфосфокиназной активности представлено КФК MB (7, 8). Подтверждением информативности ацетола как биомаркера интенсивности процесса окислительного фосфорилирования при снижении функциональной нагрузки на скелетные мышцы и миокард является однонаправленность изменений ацетола и креатинина в крови по мере увеличения длительности воздействия гиподинамии (фиг. 2).
Увеличение активности биоэнерегетических процессов в скелетных мышцах и в миокарде, в период реабилитации (табл. 2), не сопровождалось значимым увеличением ацетола в выдыхаемом воздухе обследованных, свидетельствуя о сохранении пониженного энергообразования в мышечной ткани, что согласуется с отсутствием динамики креатинина в крови (фиг. 2).
Для уточнения информативности ацетола, как маркера тканевой гипоксии, были проведены пробы с физической нагрузкой, модифицирующей обмен углеводов в условиях гиподинамии. Анализ данных показал, что физическая работа, восстанавливая процессы энергообмена, снижает проявления тканевой гипоксии, увеличивая содержание ацетола в выдыхаемом воздухе. Однако общая направленность снижения выдыхаемого ацетола по мере увеличения длительности гиподинамии как в покое, так и при физической работе принципиально не меняется. Так, по мере нарастания эффекта мышечной «недогрузки» увеличение содержания ацетола, в ответ на физическую работу, постепенно нивелируется и к 500 суткам значимо уменьшается по сравнению с величиной до воздействия. Активация углеводного обмена и увеличение энергообразования в скелетных мышцах и миокарде на 3 сутки после окончания воздействия гиподинамии (табл. 2) сопровождалось тенденцией к увеличению концентрации выдыхаемого ацетола в покое и при выполнении физической нагрузки в выдыхаемом воздухе обследованных до, после и при выполнении физической нагрузки в условиях длительного ограничения двигательной активности). Однако увеличение содержания маркера в выдыхаемом воздухе обследованных при физической нагрузке в PR не достигало значений, наблюдаемых до воздействия гиподинамии.
По-видимому, альтернативный путь энергообразования не способен длительное время компенсировать недостаточность аэробного и анаэробного окисления в энергообеспечении тканей при длительном ограничении двигательной активности человека.
Таким образом, результаты исследований показали, что динамика содержания ацетола в выдыхаемом воздухе при длительной гиподинамии согласуется с изменением активности ферментов энергетического обмена и может рассматриваться как показатель тканевой гипоксии. Однонаправленное увеличение ацетола в выдыхаемом воздухе и активности КФК MB и ММ в крови после завершения воздействия гиподинамии в RP дает возможность предположить, что динамика ацетола может быть отражением метаболических сдвигов как в скелетных мышцах, так и в миокарде.
Краткое описание таблиц и чертежей
Табл. 1. Основные метаболиты ЛОС, идентифицированные в выдыхаемом воздухе здорового человека при длительном ограничении двигательной активности.
Табл. 2. Изменение ферментного спектра сыворотки крови при ограничении двигательной активности характеризовалось периодами увеличения и снижения активности энергетических ферментов и показателя функциональной нагрузки на скелетные мышцы - креатинина.
В табл. 2 использованы следующие обозначения
- *Background - до воздействия гиподинамии;
- ** с 274 суток - профилактика (физические нагрузки на велоэргометре по индивидуальной для волонтеров схеме)
- RP - реабилитационный период
Фиг. 1. Динамика биомаркера ацетола в выдыхаемом воздухе обследованных при длительном ограничении двигательной активности.
Фиг. 2. Изменения ацетола и креатинина в крови по мере увеличения длительности воздействия гиподинамии.
На фиг. 2 пунктиром обозначен ацетол, сплошной линией - креатинин.
Литература
1. Ushakov A.S., Popova I.A. Metabolism // Space biology and medicine. Human in Spaceflight. 1996. Vol. III. Book I. AIAA. Reston, VA. P. 195-211.
2. Lane H., W. Metabolic energy requirement for space flight. // Life support and habitability 1996. Vol. II. Life support systems. AIAA. Reston, VA. P. 167-174.
3. Suvorov A.V., Dyachenko A.I., et all. All-round evaluation of the human cardiorespiratory system. // In Abstracts book. Internatinal symposium on the results of the experimens, simulating manned mission to Mars (Mars-500) Moscow 2012. P. 62.
4. Oishi Y., Ogata T., Yamamoto K.I., et al. Cellular adaptations in soleus muscle during recovery after hindlimb unloading // Acta Physiol. 2008. V. 192(3). P. 381-395.
5. Ogneva L.V., Mirzoev T.M. et al. Stukture and functional characteristics of rats left ventricule cardiomyocytes under antiortostatic suspension of various duration and subsequent reeeeloading // J. of Biomed. and Biotech. V. 2012. Article ID 659869. P. 11.
6. Leach C.S., Leopard J.I., Rambaut P.C. Dynamics of weight loss during prolonged space flight // Physiologist. 1979. Vol. 22. P. 61-62.
7. Lehninger A.L., Nelson D.L., Cox M.M. Lehninger Principles of Biochemistry // 2005. Publisher W.H. Freeman. P. 1119.
8. Dixon M., Webb E.C. Enzymes // 1979. Prentice Hall Press. P. 1156.
9. Amann A., Smith D. // Breath analysis for clinical diagnosis and therapeutic monitoring, World Scientific, 2005.
10. B. de Lacy Costello, A. Amann, H. Al-Kateb, C. Flynn,. Filipiak. A rewiew of the volatiles from the healithy human body / J. of Breath Research / 8 2014 014001. 29pp.
11. M. Corradi, A. Mutti Exhaled breath analysis in occupational medicine. In Volatile Biomarcers. Non-invasive diagnosis in physiology and mtdicine / Edited by A. Amann, D. Smith. 2013. Charter 7. P. 117-125.
12. Brindle, J.T., Antti, H., Holmes, E., et al., Rapid and NonnInvasive Diagnosis of the Presence and Severity of Coronary Heart Disease Using 1H NMRRBased Metabolomics, Nature Med., 2002, vol. 8, no. 12, p. 1439. – 1444.
13. O'Hara, M.E., CluttonnBrock, T.H, Green, S., and Mayhew, C.E., Endogenous Volatile Organic Compounds in Breath and Blood of Healthy Volunteers: Examining Breath Analysis as a Surrogate for Blood Measurements, J. Breath Res., 2009, vol. 3, p. 27005.
14. P. Sprent, Nigel C. Smeeton Applied Nonparametric Statistical Methods, Fourth Edition (Chapman & Hall/CRC Texts in Statistical Science) 2007.
15. Hill, Т. & Lewicki, P. STATISTICS: Methods and Applications. StatSoft, Tulsa, 2007.
16. Gottshalk G. Bacterial Metabolism. // 1979. Prentice Hall Press; P. 1156.
17. Barmin V., Kreidich Yu., Repin A., Kozlovsaya I.. The effects of real and simulated microgravity on vestibule-oculomotor interaction // Physiol. l985. V. 19. №6. P. 27-32.
18. Booth F.W., Criswell D.S. Molecular event underlying skeletal muscle atrophy and development of effective countermeasure // J. Sports. Med. 1997. №18. P. 265-268.
19. Buravkova LB, Larina I.M, Popova I A Specific features of metabolism in humanperforming a physical exercise test after 7-day dry immersion // Human Physiology, 2003, v. 29, N5, pp. 588-594.
Claims (1)
- Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии, включающий анализ у обследуемого молекулярных метаболитов тканевой гипоксии, отличающийся тем, что в качестве молекулярного метаболита в воздухе, выдыхаемом обследуемым, методом хромато-масс-спектрометрии определяют ацетол (гидрооксиацетон С3H6O2 GAS116-09-6), до начала гиподинами и в процессе ее воздействия и при достоверном уменьшении ацетола в выдыхаемом воздухе диагностируют тканевую гипоксию скелетных мышц и миокарда при гиподинамии.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015152552A RU2613910C1 (ru) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015152552A RU2613910C1 (ru) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2613910C1 true RU2613910C1 (ru) | 2017-03-21 |
Family
ID=58453046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015152552A RU2613910C1 (ru) | 2015-12-08 | 2015-12-08 | Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2613910C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2839235C1 (ru) * | 2024-07-11 | 2025-04-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кировский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU) | Способ определения степени гипокинезии при вынужденном ограничении двигательной активности у пациентов с травмой |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2376028C2 (ru) * | 2004-01-23 | 2009-12-20 | Корнелл Рисеч Фаундейшн, Инк. | Способ уменьшения окислительного повреждения (варианты) |
-
2015
- 2015-12-08 RU RU2015152552A patent/RU2613910C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2376028C2 (ru) * | 2004-01-23 | 2009-12-20 | Корнелл Рисеч Фаундейшн, Инк. | Способ уменьшения окислительного повреждения (варианты) |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| M. Corradi, A. Mutti Exhaled breath analysis in occupational medicine. In Volatile Biomarcers. Non-invasive diagnosis in physiology and mtdicine / Edited by A. Amann, D. Smith. 2013. Charter 7. P. 117-125.. * |
| Ushakov A.S., Popova I.A. Metabolism // Space biology and medicine. Human in Spaceflight. 1996. Vol. III. Book I. AIAA. Reston, VA. P. 195-211. * |
| Ushakov A.S., Popova I.A. Metabolism // Space biology and medicine. Human in Spaceflight. 1996. Vol. III. Book I. AIAA. Reston, VA. P. 195-211. Васильева Г.Ю. Межгормональное взаимодействие и взаимосвязь показателей нейрогуморального и психофизиологического статуса человека при моделировании условий космического полета. Дис. конд. мед. наук. 2007. * |
| Васильева Г.Ю. Межгормональное взаимодействие и взаимосвязь показателей нейрогуморального и психофизиологического статуса человека при моделировании условий космического полета. Дис. конд. мед. наук. 2007. M. Corradi, A. Mutti Exhaled breath analysis in occupational medicine. In Volatile Biomarcers. Non-invasive diagnosis in physiology and mtdicine / Edited by A. Amann, D. Smith. 2013. Charter 7. P. 117-125.. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2839235C1 (ru) * | 2024-07-11 | 2025-04-28 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кировский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU) | Способ определения степени гипокинезии при вынужденном ограничении двигательной активности у пациентов с травмой |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miekisch et al. | Diagnostic potential of breath analysis—focus on volatile organic compounds | |
| Spriet | Anaerobic metabolism during exercise | |
| Filipiak et al. | Dependence of exhaled breath composition on exogenous factors, smoking habits and exposure to air pollutants | |
| Kim et al. | Attenuation of bacterial lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity by betaine or taurine in rats | |
| Mastaloudis et al. | Oxidative stress in athletes during extreme endurance exercise | |
| Bogdanis et al. | Short-term high-intensity interval exercise training attenuates oxidative stress responses and improves antioxidant status in healthy humans | |
| Putman et al. | Effects of short-term submaximal training in humans on muscle metabolism in exercise | |
| Fox et al. | Studies on the coordinate activity and lability of orotidylate phosphoribosyltransferase and decarboxylase in human erythrocytes, and the effects of allopurinol administration | |
| Hughson | Regulation of VO2 on-kinetics by O2 delivery | |
| LeBlanc et al. | Effects of 7 wk of endurance training on human skeletal muscle metabolism during submaximal exercise | |
| Dong et al. | Postmortem and ex vivo carbon monoxide ventilation reduces injury in rat lungs transplanted from non–heart-beating donors | |
| De Moffarts et al. | Impact of training and exercise intensity on blood antioxidant markers in healthy Standardbred horses | |
| Arakawa et al. | Fluorometric biosniffer camera “sniff-cam” for direct imaging of gaseous ethanol in breath and transdermal vapor | |
| Axton et al. | Treatment with nitrate, but not nitrite, lowers the oxygen cost of exercise and decreases glycolytic intermediates while increasing fatty acid metabolites in exercised zebrafish | |
| Areta et al. | Achieving energy balance with a high‐fat meal does not enhance skeletal muscle adaptation and impairs glycaemic response in a sleep‐low training model | |
| Ayoub et al. | Inhibition of proliferation of human leukaemia 60 cells by methylglyoxal in vitro | |
| Zhao et al. | Effects of oxygen concentrations on postresuscitation myocardial oxidative stress and myocardial function in a rat model of cardiopulmonary resuscitation | |
| García-Díaz et al. | Chronic mild stress induces variations in locomotive behavior and metabolic rates in high fat fed rats | |
| RU2613910C1 (ru) | Способ определения тканевой гипоксии скелетных мышц и миокарда при гиподинамии | |
| Totzeck et al. | Nitrite circumvents canonical cGMP signaling to enhance proliferation of myocyte precursor cells | |
| SUMMER et al. | Tumor Necrosis Fador Inhibits Stimulated but Not Basal Release of Nitric Oxide | |
| Gold et al. | Effects of altitude stress on mitochondrial function | |
| Carter et al. | Sildenafil does not improve performance in 16.1 km cycle exercise time-trial in acute hypoxia | |
| Broderick et al. | Effects of chronic food restriction and exercise training on the recovery of cardiac function following ischemia | |
| Brurok et al. | Effects of MnDPDP, DPDP--, and MnCl2 on cardiac energy metabolism and manganese accumulation: an experimental study in the isolated perfused rat heart |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20201209 |