RU2661678C1 - Антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 (pd-1) и его применение - Google Patents
Антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 (pd-1) и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2661678C1 RU2661678C1 RU2017102399A RU2017102399A RU2661678C1 RU 2661678 C1 RU2661678 C1 RU 2661678C1 RU 2017102399 A RU2017102399 A RU 2017102399A RU 2017102399 A RU2017102399 A RU 2017102399A RU 2661678 C1 RU2661678 C1 RU 2661678C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- cell
- heavy chain
- light chain
- Prior art date
Links
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 title abstract description 15
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 title abstract description 13
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 37
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 17
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims abstract 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 56
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 52
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 32
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 32
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 17
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 13
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 12
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 12
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 12
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 12
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 12
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 11
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 3
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 67
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 36
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 15
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 11
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 9
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 9
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 8
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 6
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 238000011789 NOD SCID mouse Methods 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 101710094000 Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000005210 lymphoid organ Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010059108 CD18 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000272194 Ciconiiformes Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 230000035519 G0 Phase Effects 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000818543 Homo sapiens Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Proteins 0.000 description 1
- 101000617285 Homo sapiens Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010022222 Integrin beta1 Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010050551 Lupus-like syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000409991 Mythimna separata Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- -1 PD-1 Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 1
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 102100021125 Tyrosine-protein kinase ZAP-70 Human genes 0.000 description 1
- 102100033019 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Human genes 0.000 description 1
- 101710116241 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11 Proteins 0.000 description 1
- 102100021657 Tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 6 Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 230000007416 antiviral immune response Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 201000004984 autoimmune cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000011960 computer-aided design Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002766 immunoenhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000019734 interleukin-12 production Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 201000008383 nephritis Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 230000012121 regulation of immune response Effects 0.000 description 1
- 230000011663 regulation of signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003151 transfection method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K40/00—Cellular immunotherapy
- A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
- A61K40/41—Vertebrate antigens
- A61K40/42—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
- A61K2239/57—Skin; melanoma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биохимии и представляет собой антитело, включающее тяжелую цепь и легкую цепь, способное специфически связываться с белком запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1). Изобретение касается также фармацевтической композиции для лечения или профилактики PD-L1-положительного рака или PD-L1-положительного инфекционного заболевания, включающей заявленное антитело и фармацевтически приемлемый носитель. Изобретение позволяет эффективно лечить или предупреждать PD-L1-положительный рак или PD-L1-положительное инфекционное заболевание у субъекта, нуждающегося в этом. 7 н. и 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 табл., 11 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение предлагает новое антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 (англ. PD-1, programmed cell death protein 1 - белок запрограммированной смерти клетки 1) (анти-PD-1 антитело) или его функциональный фрагмент. В частности, настоящее изобретение также относится к применению антитела при приготовлении лекарственного средства для лечения опухолей.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Передача сигнала от Т-клеточного корецептора является важным механизмом четкого регулирования иммунных ответов. Молекулы клеточной поверхности для передачи косигналов (включая костимуляцию и косупрессию) можно подразделить на два основных семейства: суперсемейство иммуноглобулинов (lg) и суперсемейство фактора некроза опухоли (TNF)-рецептор фактора некроза опухоли (TNFR). Как правило, активация Т-клеток зависит от антигенных пептидов, представленных молекулами HLA (англ. human leukocyte antigens - антигены лейкоцитов человека) класса I или II. Корецепторные сигналы будут усиливать либо предотвращать такую активацию. Например, инициацию и зрелость лимфоцитов в периферических лимфоидных органах можно стимулировать или их реакцию в организме можно усиливать за счет активации CD28 или 4-1ВВ агонистами с помощью уникальных путей костимуляции. Иммунная активация также может быть обеспечена путем блокирования косупрессии сигнальных путей с помощью антагонистов, как, например, пути белка запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1), В7 гомолога 1 (В7-Н1, также называемого PDL1), пути антигена 4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA4), В/Т лимфоцитарного аттенюатора (англ. BTLA) и других путей. Такие косупрессии сигнальных путей играют важную роль в регуляции иммунной толерантности, обеспечивающей отрицательные сигналы, которые ограничивают, обрывают и/или ослабляют иммунные реакции. Иммунная активация, опосредованная костимуляцией рецепторов, активируется путем стимулирования мембранной проксимальной киназы и продуцирует каскадное усиление фосфорилирования, тогда как косупрессия рецепторов, таких как CTLA4, PD1 и В/Т лимфоцитарного аттенюатора (BTLA), вовлекает фосфатазу в обратное фосфорилирование, индуцированное иммунной активацией. Иммуномодулирующие биологические композиции могут широко применяться при лечении иммунопатологических заболеваний, для ингибирования гиперфункции иммунной системы, вызванной отторжением трансплантата, аутоиммунным заболеванием или воспалительным заболеванием, или для стимулирования иммунного ответа в случае гипофункции иммунной системы, как, например, при онкологическом заболевании, хронической бактериальной инфекции и вирусной инфекции и тому подобном. В отличие от распространенных методов лечения, в основе которых лежат моноклональные антитела и рекомбинантные слитые белки, то есть действующих за счет нейтрализации или потребления антигенов-мишеней или положительных клеток-мишеней, иммуномодулирующие биологические композиции регулируют сигналы в отношении антиген-специфических Т-клеточных (TCR) и В-клеточных (BCR) рецепторов преимущественно путем связывания и регуляции сигнальных молекул на поверхности иммуноцитов хозяина, что позволяет управлять направлением и интенсивностью реакции лимфоцитов.
Ген PD-1 активируется при апоптозе Т-клеточной гибридомы и называется белком запрограммированной смерти клетки 1. PD-1 (CD279) экспрессируется в активированных Т-клетках, В-клетках и активированных миелоидных клетках (Ishida Y, Agata Y, Shibahara K, Honjo Т. EMBO J. 1992, 1: 3887-3895), а также экспрессируется в активированных макрофагах, DC (англ. dendritic cell - дендритная клетка) и моноцитах, но отсутствует в их незрелых клетках (Agata Y, et al. Int. Immunol. 1996, 8: 765-772; Said E A, et al. Nature Med. 2010, 16: 452-459). Такие повышенные уровни экспрессии PD-1 на клеточной поверхности могут ингибировать приобретенные иммунные ответы и врожденные иммунные ответы организма. Внутриклеточный домен PD-1 содержит два тирозиновых сайта, один из которых представляет собой иммунорецепторный тирозиновый ингибирующий мотив (англ. ITIM, immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif), а другой - иммунорецепторный тирозиновый переключающий мотив (англ. ITSM, immunoreceptor tyrosine-based switch motif). Фосфорилирование тирозина на ITSM задействует тирозинфосфатазу SHP2 и/или SHP1. Эти фосфатазы будут дефосфорилировать ZAP70, CD3 и PKC, ослабляя тем самым сигналы Т-клеток. PD-1 в основном ингибирует пролиферацию Т-клеток и В-клеток, блокируя клетки в G0/G1 фазе, и ингибирует образование цитокина в Т-клетках. Животные с делецией экспрессии PD-1 развивают различные аутоиммунные фенотипы, включая аутоиммунную кардиомиопатию и волчаночноподобный синдром с артритом и нефритом (Nishimura et al. Immunity. 1999, H: 141-51; Nishimura et al. Science. 2001, 291: 319-22). Кроме того, PD-1 также играет важную роль в аутоиммунном энцефаломиелите, системной красной волчанке (SLE), болезни "трансплантат против хозяина" (GVHD), диабете I типа и ревматоидном артрите и т.д. (Salama et al. J Exp Med. 2003, 198: 71-78; Prokunina and Alarcon-Riquelme, Hum Mol Genet. 1992, 13: R143; Nielsen et al. Lupus. 2004, 11: 510).
В настоящее время в литературе описаны два лиганда для PD-1, PD-L1/B7H1/CD274 и PD-L2/B7-DC/CD273 (Freeman G J, et al. J. Exp. Med. 2000, 192: 1027-1034; Latchman Y, et al. Nature Immunol. 2001, 2: 261-268). PD-L1 экспрессируется на низком уровне в иммуноцитах, таких как В-клетки, дендритные клетки, макрофаги и Т-клетки, имеет повышенный уровень экспрессии при активации клетки. PD-L1 также экспрессируется в нелимфоидных органах, таких как клетки эндотелия сосудов, сердце, легкие, поджелудочная железа, мышца, кератиноциты и плацента и т.д. Экспрессия PD-L1 в нелимфоидной ткани показывает, что PD-L1 может регулировать функцию аутореактивных Т-клеток, В-клеток и миелоидных клеток в периферических тканях, и может также участвовать в воспалительных реакциях органа-мишени. Экспрессия PD-L1 регулируется главным образом интерфероном 1 или 2, которые также являются основными регуляторами уровня PD-L1 в клетках эндотелия сосудов и клетках эпителия. PD-L1 также экспрессируется в опухолевых клетках и тесно связан с неблагоприятным прогнозом. Различные вирусные инфекции могут индуцировать экспрессию PD-L1 в тканях хозяина на высоком уровне. Хотя PD-L2-транскрипт обнаружен в негемопоэтических тканях, таких как сердце, печень и поджелудочная железа, экспрессия PD-L2/B7-DC на клеточной поверхности ограничена только макрофагами и дендритными клетками и зависит от продуцирования цитокинов IFNγ и Th2. Экспрессии PD-L1 и PD-L2 также подвержены воздействию различных стимуляций. PD-L1 на макрофагах индуцируется INFγ, тогда как PD-L2 регулируется IL-4. Аналогичное явление наблюдается также и на дендритных клетках. Исследования показывают, что PD-L1, вероятно, предпочтительно регулирует реакцию Тh1, тогда как PD-L2 будет регулировать реакцию Th2 клеток. И PD-L1, и PD-L2 могут ингибировать пролиферацию Т-клеток, продуцирование цитокинов и адгезию, опосредованную β1/β2 интегрином. PD-L2 может также запускать обратную сигнализацию дендритных клеток, посредством этого приводя к продуцированию IL-12 и активации Т-клетки.
Ось регуляции PD-L1-PD-1 играет ключевую роль в контроле над активацией Т-клетки человека и сохранении иммунной толерантности организма, а также используется опухолевой клеткой и вирусом при хронической вирусной инфекции (Yao S, Chen L. Trends Mol. Med. 2006, 12: 244-246; Zou W, Chen L. Nature Rev. Immunol. 2008, 8: 467-477). PD-L1 экспрессируется на высоком уровне в различных раковых тканях человека (Dong et al, Nat. Med. 2002, 8: 787-9). Экспрессия PD-L1 тесно связана с развитием и неблагоприятными прогнозами некоторых типов злокачественных опухолей (Thompson R Н, et al. Cancer Res. 2006, 66: 3381-3385). Также подтверждено, что путь PD-L1-PD1 способствует истощению популяции Т-клеток (Zajac A J, et al. J. Exp. Med. 1998, 188: 2205-2213). Путь PD-L1-PD1, обусловленный опухолями или вирусами, может привести к ускользанию раковых клеток от механизмов иммунологического надзора хозяина посредством различных механизмов, включая стимулирование инактивации Т-клеток, усталость, неотвечаемость и апоптоз, индуцирование амплификации регуляторной Т-клетки и усиление внутренней способности опухоли противостоять киллингу и апоптозу. Взаимодействие между PD-1 и PD-L1, опосредованное раковыми клетками, приводит к уменьшению инфильтрующих опухоль лимфоцитов, ингибированию опосредованной рецепторами Т-клеток пролиферации и усиленному ускользанию раковых клеток от иммунологического надзора (Dong et al. J. Mol. Med. 2003, 81: 281-7; Blank et al. Cancer Immunol. Immunother. 2005, 54: 307-314; Konishi et al. Clin. Cancer Res. 2004, 10: 5094-100).
На сегодняшний день все еще отсутствует удовлетворительный способ, позволяющий индуцировать эффективный иммунный ответ у больных раком, чтобы специфически блокировать ось регуляции PD-L1-PD-1 и обеспечить активацию противоопухолевого и противовирусного иммунного ответа. Таким образом, ощущается острая необходимость в разработке и развитии терапевтического способа, позволяющего специфически блокировать ось регуляции PD-L1-PD-1, преодолеть супрессию иммунного ответа пациентов, страдающих раковым заболеванием или хронической инфекцией.
РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В общем смысле, настоящее изобретение предлагает новое антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 или его функциональный фрагмент. В частности, антитело по настоящему изобретению представляет собой гуманизированное антитело.
Согласно одному из аспектов, настоящее изобретение предлагает антитело или его функциональный фрагмент, которые могут специфически связываться с PD-1, где антитело содержит тяжелую цепь и легкую цепь, где (i) тяжелая цепь включает в себя участки H-CDR1, H-CDR2 и H-CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO 7, 8 и 11, или 9, 10 и 11, соответственно; a (ii) легкая цепь включает в себя участки L-CDR1, L-CDR2 и L-CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO 12, 13 и 14, соответственно.
Согласно одному из аспектов, настоящее изобретение предлагает антитело или его функциональный фрагмент, которые могут специфически связываться с PD-1, где (i) тяжелая цепь включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 1, 2, 4 или 5; a (ii) легкая цепь включает в себя вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 3 или 6.
Согласно другому аспекту, настоящее изобретение предлагает антитело или его функциональный фрагмент, которые могут специфически связываться с PD-1, где (i) тяжелая цепь включает в себя вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 4 или 5; a (ii) легкая цепь включает в себя вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 6.
Предпочтительно, антитело к PD-1 по настоящему изобретению выбирают из 10F8, 15Н6, ВА08-1 и ВА08-2.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает изолированный полинуклеотид, кодирующий антитело к PD-1 или его функциональный фрагмент по настоящему изобретению.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает комбинацию изолированных полинуклеотидов, включающую в себя полинуклеотид, кодирующий легкую цепь антитела к PD-1 или его функционального фрагмента по настоящему изобретению, и полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь антитела к PD-1 или его функционального фрагмента по настоящему изобретению.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает экспрессионный вектор, включающий в себя полинуклеотид по настоящему изобретению или комбинацию полинуклеотидов по настоящему изобретению, полинуклеотид эффективно связывается с регуляторной последовательностью, что позволяет осуществлять экспрессию полипептида, кодированного полинуклеотидом, в клетке-хозяине или бесклеточной экспрессирующей системе. Предпочтительно, экспрессионный вектор является вирусным вектором или невирусным вектором.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, включающую в себя антитело к PD-1 или его функциональный фрагмент по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ лечения или предупреждения ракового или инфекционного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя введение субъекту антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Согласно некоторым определенным вариантам осуществления, субъект получает или предполагает получать терапию антителом к CD3 (анти-CD3 антитело).
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ усиления Т-клеточного иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя введение субъекту антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления, усиление Т-клеточного иммунного ответа включает в себя усиление продуцирования цитокинов Т-клетками, предпочтительно, цитокин включает в себя IL-2 и/или IFN-γ. Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления, усиление продуцирования цитокинов Т-клетками включает в себя продуцирование цитокинов Т-клетками, стимулированными антителом к CD3. Согласно некоторым другим предпочтительным вариантам осуществления, субъектом является пациент, страдающий раком, например, пациент, страдающий PD-L1-положительным раком, предпочтительно, пациент, страдающий раком легких или меланомой.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ стимулирования активации Т-клетки у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя введение субъекту антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Предпочтительно, способ также включает в себя введение субъекту антитела к CD3.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ устранения ингибирования PD-L1 при активации Т-клетки у субъекта, нуждающегося в этом, включающий в себя введение субъекту антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению. Предпочтительно, способ также включает в себя введение субъекту антитела к CD3.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ (предпочтительно, in vitro (лат. in vitro - вне организма)) стимулирования активации Т-клетки, включающий в себя контактирование антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению с Т-клетками. Предпочтительно, способ также включает в себя контактирование антитела к CD3 с Т-клетками.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает способ (предпочтительно, in vitro) устранения ингибирования PD-L1 при активации Т-клетки, включающий в себя контактирование антитела к PD-1 или его функционального фрагмента, полинуклеотида, комбинации полинуклеотидов, экспрессионного вектора и/или фармацевтической композиции по настоящему изобретению с Т-клетками. Предпочтительно, способ также включает в себя контактирование антитела к CD3 с Т-клетками.
Согласно еще одному аспекту, способ по изобретению также представляет комбинированную терапию, включающую в себя введение антитела к PD-1 по настоящему изобретению и антитела к CD3 субъекту, нуждающемуся в этом.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает применение антитела к PD-1 или его функционального фрагмента по настоящему изобретению при приготовлении лекарственного средства для лечения или предупреждения ракового или инфекционного заболевания.
Согласно еще одному аспекту, настоящее изобретение предлагает применение антитела к PD-1 или его функционального фрагмента по настоящему изобретению при приготовлении лекарственного средства для усиления Т-клеточного иммунного ответа. Согласно некоторым вариантам осуществления, усиление Т-клеточного иммунного ответа включает в себя усиление продуцирования цитокинов Т-клетками, предпочтительно, цитокин включает в себя IL-2 и/или IFN-γ. Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления, усиление продуцирования цитокинов Т-клетками включает в себя продуцирование цитокинов Т-клетками, стимулированными антителом к CD3.
Согласно некоторым вариантам осуществления, антитело к PD-1 или его функциональный фрагмент по настоящему изобретению могут применяться для лечения PD-L1 положительного рака и PD-1 отрицательного рака. Согласно некоторым определенным вариантам осуществления, раковое заболевание является раком легких или меланомой (например, PD-L1 положительным раком легких или меланомой и/или PD-L1 отрицательным раком легких или меланомой), а инфекционное заболевание является ВИЧ-инфекцией или вирусом гепатита В.
Согласно некоторым определенным вариантам осуществления, антитело к PD-1 или его функциональный фрагмент согласно настоящему изобретению блокирует взаимодействие между PD-1 и PD-L1 и/или взаимодействие между PD-1 и PD-L2.
Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления, антитело к PD-1 или его функциональный фрагмент по настоящему изобретению также включает в себя константный участок тяжелой цепи человеческого IgG4 или IgG1 и константный участок легкой цепи к-типа человека.
Настоящее изобретение также относится к способу скрининга и приготовления гуманизированного антитела, описанного выше: иммунизации мышей BLAC/C человеческим белком PD-1, скринингу мышиных антиген-специфических В-клеток с высоким титром посредствам проточного цитометра, клонированию генов тяжелой цепи антитела и вариабельного участка легкой цепи методом ОТ-ПЦР (англ. RT-PCR, reverse transcription polymerase chain reaction - полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой), затем экспрессии рекомбинантного антитела, используя 293 клетки. После очистки с помощью белка А и в результате скрининга на предмет сродства и блокирования активности связывания с PD-L1 в конечном итоге выбирали антитела 10F8 и 15Н6 с неожиданно высоким сродством к PD-1 и способностью к активации Т-клетки. Аминокислотные последовательности вариабельного участка тяжелой цепи антител 10F8 и 15Н6 представлены в SEQ ID NO 1 и 2, соответственно; два антитела содержат вариабельный участок легкой цепи с такой же аминокислотной последовательностью, как представлено в SEQ ID NO 3. Аминокислотные последовательности участков, определяющих комплементарность (CDRs, от англ. complementary-determining regions), тяжелой цепи (H-CDR1, H-CDR2 и H-CDR3) антитела 10F8 представлены в SEQ ID NO 7, 8 и 11, соответственно; аминокислотные последовательности CDRs участков тяжелой цепи (H-CDR1, H-CDR2 и H-CDR3) антитела 15Н6 представлены в SEQ ID NO 9, 10 и 11, соответственно; аминокислотные последовательности CDRs участков легкой цепи (L-CDR1, L-CDR2 и L-CDR3) антител 10F8 и 15Н6 представлены в SEQ ID NO 12, 13 и 14, соответственно. На основании последовательностей каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 (FR, от англ. - framework region) вариабельного участка тяжелой цепи было сделано сравнение с библиотекой последовательностей генов антитела человека и были обнаружены серии соответствующих кандидатных последовательностей вариабельных участков человеческого антитела эмбрионального типа, аналогичных последовательностям каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 вариабельного участка тяжелой цепи. Сродство к связыванию серии кандидатных последовательностей с молекулами HLA-DR анализировали методом компьютерного моделирования (в кремнии) для определения последовательностей рамок считывания с самым низким сродством, чтобы посредством этого в конечном итоге установить гуманизированные последовательности каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 вариабельного участка тяжелой цепи. На основе этих последовательностей каркасных областей, применяли анализ компьютерной модели молекулы для определения соответствующих аминокислотных остатков каркасных областей, зарезервированных в мышином антителе, необходимых для поддержания конфигурации CDR. Аминокислотные последовательности вариабельного участка тяжелой цепи гуманизированного антитела ВА08-1, соответствующие 10F8, и гуманизированного антитела ВА08-2, соответствующие 15Н6, представлены в SEQ ID NO 4 и 5, соответственно. Такой же анализ проводили для последовательности вариабельного участка легкой цепи мышиного антитела. На основании последовательностей каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 вариабельного участка легкой цепи было сделано сравнение с библиотекой последовательностей генов антитела человека (NCBI Ig BLAST) и были обнаружены соответствующие кандидатные последовательности вариабельных участков человеческого антитела эмбрионального типа, аналогичные последовательностям каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 вариабельного участка легкой цепи. Сродство к связыванию последовательностей с молекулами HLA-DR определяли с помощью компьютерного анализа (в кремнии), и выбирали последовательности каркасных областей с самым низким сродством, чтобы посредством этого в конечном итоге установить гуманизированные последовательности каркасных областей FR1, FR2, FR3 и FR4 вариабельных участков легкой цепи. Учитывая эти последовательности каркасных областей, применяли анализ компьютерной модели молекулы для определения пространственной стереоструктуры мышиного антитела и для анализа соответствующих аминокислотных остатков каркасных областей, зарезервированных в легкой цепи мышиного антитела, необходимых для поддержания конфигурации CDR. Вариабельные участки легкой цепи гуманизированного антитела ВА08-1 и гуманизированного антитела ВА08-2, соответствующие 10F8 и 15Н6, представлены в SEQ ID NO 6.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
На Фиг. 1 показано, что антитела ВА08-1 и ВА-08-2 связываются с белком PD-1 с высоким сродством.
На Фиг. 2 показано, что антитела ВА08-1 и ВА-08-2 блокируют связывание PD-L1 cPD-1.
На Фиг. 3 показано, что антитела ВА08-1 и ВА-08-2 значительно усиливают продуцирование IL-2 Т-клеток. Столбики означают слева направо: отрицательный контроль без антитела, положительный контроль (только антитело к CD3), ингибирование PD-L1 при экспрессии IL-2, стимулированной антителом к CD3 (при добавлении PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью антитела ВА08-1 по настоящему изобретению (при добавлении ВА08-1, PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью антитела ВА08-2 по настоящему изобретению (при добавлении ВА08-2, PD-L1 и антитела к CD3) и антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью MK3475 (при добавлении MK3475, PD-L1 и антитела к CD3), в соответствии с условными обозначениями в нижней части рисунка.
На Фиг. 4 показано, что антитела ВА08-1 и ВА-08-2 значительно усиливают продуцирование IFN-γ Т-клеток. Столбики означают слева направо: контроль в отсутствии антитела CD3, положительный контроль (только антитело к CD3), ингибирование PD-L1 при экспрессии IFN-γ, стимулированной антителом к CD3 (при добавлении PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью антитела ВА08-1 по настоящему изобретению (при добавлении ВА08-1, PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью антитела ВА08-2 по настоящему изобретению (при добавлении ВА08-2, PD-L1 и антитела к CD3) и антагонизм ингибирующего эффекта PD-L1 с помощью MK3475 (при добавлении MK3475, PD-L1 и антитела к CD3), в соответствии с условными обозначениями в нижней части рисунка.
На Фиг. 5 показаны влияния антител ВА08-1 и ВА-08-2 на продуцирование цитокинов лимфоцитов.
Фиг. 6 показаны влияния антител ВА08-1 и ВА-08-2 на опухолевые клетки (включая клетку меланомы и клетку рака легких) для ингибирования продуцирования IL-2 активированными Т-клетками, где PD-L1 представляет собой иммобилизованный PD-L1.
На Фиг. 7 показана оценка противоопухолевого эффекта in vivo гуманизированного антитела к PD-1 при использовании мышей модели Hu-PBL SCID с человеческим раком легких.
На Фиг. 8 показана оценка противоопухолевого эффекта in vivo гуманизированного антитела к PD-1 против меланомы.
ОПИСАНИЕ КОНКРЕТНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Если не указано иное, все технические и научные термины, использованные в данной работе, имеют значения, понятные специалистам в данной области техники. Что касается определений и терминологии, принятых в данной области, можно сослаться на работу Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel). Сокращенные названия аминокислотных остатков являются стандартными 3-буквенными и/или 1-буквенными кодами для любой из 20 L-аминокислот, широко используемых в данной области техники.
Настоящее изобретение предлагает антитело к PD-1 и его функциональный фрагмент, которые могут связываться с фактором запрограммированной смерти 1 (PD-1). Антитело или его функциональный фрагмент по настоящему изобретению обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик: способны блокировать взаимодействие PD-1 и PD-L1 с высоким сродством; способны связываться с PD-1 с высокой специфичностью; активируют опухолеспецифические Т-клетки, тем самым убивая опухолевые клетки; значительно улучшают Т-клеточный иммунный ответ, например, улучшают продуцирование цитокинов (включая IFNγ и IL-2) Т-клетками; и в значительной степени повышают уровни иммунных эффекторов.
Настоящее изобретение также предлагает гуманизированное антитело к PD-1 и его функциональный фрагмент. Например, гуманизированное антитело получают с помощью проектирования методом компьютерного моделирования из мышиного антитела, полученного от иммунизированной мыши, в сочетании с технологией дрожжевого дисплея.
При условии несущественного влияния на активность антитела, специалистами в данной области техники могут быть сделаны замена, добавление и/или делеция одной или более (как, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 или более) аминокислот в последовательностях по настоящему изобретению с получением вариантов последовательности антитела или его функционального фрагмента. Такие варианты считаются включенными в объем охраны по настоящему изобретению. Например, аминокислота в вариабельных участках может быть заменена кислотой с аналогичными свойствами. Последовательность варианта по изобретению может быть по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичной начальной последовательности. Идентичность последовательностей по настоящему изобретению может быть измерена с помощью программного обеспечения для анализа последовательностей. Например, может быть использована компьютерная программа BLAST с параметрами по умолчанию, в особенности, BLASTP или TBLASTN.
При использовании в данном контексте, термин "антитело" охватывает полноразмерные антитела (например, антитело IgGI или IgG4), различные их функциональные фрагменты (например, те из них, которые могут включать лишь антигенсвязывающую часть, такие как фрагмент Fab, F(ab')2 или scFv) и модифицированные антитела (например, гуманизированные, гликозилированные и т.д.). Настоящее изобретение включает в себя антитело к PD-1 с модифицированным профилем гликозилирования. В некоторых применениях может быть применима модификация для удаления нежелательных сайтов гликозилирования, или отсутствие фукозного фрагмента на олигосахаридной цепи антитела, например, увеличивает антителозависимую клеточную цитотоксичность (англ. ADCC). В других применениях может быть произведена модификация галактозилирования для изменения комплементзависимой цитотоксичности (англ. CDC).
При использовании в данном контексте, термин "его функциональный фрагмент" предназначен для обозначения фрагмента, сохраняющего функцию полноразмерного антитела; это, например, антигенсвязывающий фрагмент, в частности, следующие фрагменты антитела: например, Fv, scFv (sc означает одноцепочечный), Fab, F(ab')2, Fab', scFv-Fc фрагмент или диатело, или любые фрагменты, которые являются химически модифицированными либо встроенными в липосому для удлинения времени полужизни, при этом химическая модификация представляет собой, например, добавление полиалкиленгликоля, такого как полиэтиленгликоль ("пегилирование, на основе PEG") (пегилированные фрагменты обозначают как Fv-PEG, scFv-PEG, Fab-PEG, F(ab')2-PEG или Fab'-PEG) (англ. PEG, polyethylene glycol - полиэтиленгликоль).
Молекула ДНК (англ. DNA, deoxyribonucleic acid - дезоксирибонуклеиновая кислота), кодирующей антитело к PD-1 по настоящему изобретению, может быть клонирована в векторе специалистами в данной области техники и затем трансформирована в клетку-хозяина. Соответственно, настоящее изобретение также предлагает вектор рекомбинантной ДНК, включающий в себя молекулу ДНК, кодирующую антитело к PD-1 по настоящему изобретению.
Предпочтительно, вектор рекомбинантной ДНК является экспрессионным вектором, и специалисты в данной области техники могут клонировать молекулу ДНК антитела в экспрессионном векторе и трансформировать ее в клетки-хозяева с получением антитела с помощью индуцирования экспрессии. Экспрессионный вектор по настоящему изобретению содержит последовательности ДНК, кодирующие вариабельный участок тяжелой цепи, вариабельный участок легкой цепи и/или константный участок антитела к PD-1. Однако два экспрессионных вектора могут быть сконструированы по отдельности, при этом один будет содержать вариабельный участок тяжелой цепи и константный участок, а другой - вариабельный участок легкой цепи и константный участок, и трансфицированы млекопитающему вместе. Согласно одному из предпочтительных вариантов осуществления, экспрессионный вектор также включает в себя промотор и последовательность ДНК, кодирующую сигнальный пептид секреции, и по меньшей мере один ген лекарственной резистентности для скрининга.
Клетка-хозяин по настоящему изобретению может быть прокариотической клеткой-хозяином, эукариотической клеткой-хозяином или бактериофагом. Прокариотическая клетка-хозяин может быть Escherichia coli, Bacillus subtilis, streptomyces или Proteus mirabilis и т.д. Эукариотическая клетка-хозяин может представлять собой грибы, такие как Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, trichoderma и т.д.; клетку насекомого, такую как Mythimna separate; клетку растения, такого как табак, и клетку млекопитающего, такую как клетка ВНК (англ. Baby Hamster Kidney - почка новорожденного хомяка), клетка СНО (англ. Chinese Hamster Ovary - яичник китайского хомячка), клетка COS, миеломная клетка и т.д. Согласно некоторым вариантам осуществления, клетка-хозяин по настоящему изобретению предпочтительно является клеткой млекопитающего, более предпочтительно, клеткой ВНК, клеткой СНО, клеткой COS, клеткой NSO или клеткой COS.
При использовании в данном контексте, термин "фармацевтическая композиция" относится к комбинации по меньшей мере одного лекарственного средства и необязательно фармацевтически приемлемого носителя или вспомогательного вещества, которые объединяют вместе для достижения определенной цели. Согласно некоторым вариантам осуществления, фармацевтическая композиция включает в себя комбинацию компонентов, разделенных во времени и/или пространстве, при условии что они могут функционировать вместе для осуществления цели по настоящему изобретению. Например, ингредиенты, содержащиеся в фармацевтической композиции (например, антитело, молекула нуклеиновой кислоты, комбинация молекул нуклеиновой кислоты и/или конъюгата согласно настоящему изобретению), могут быть введены субъекту как единое целое или вводиться субъекту по отдельности. В случае, когда ингредиенты, содержащиеся в фармацевтической композиции, вводят субъекту по отдельности, указанные ингредиенты могут вводиться субъекту одновременно или последовательно. Предпочтительно, фармацевтически приемлемый носитель является водой, буферным раствором, изотоническим солевым раствором, таким как PBS (англ. phosphate buffered saline - фосфатно-солевой буферный раствор), глюкозой, маннитом, декстрозой, лактозой, крахмалом, стеаратом магния, целлюлозой, карбонатом магния, 0,3% глицерином, гиалуроновой кислотой, этанолом или полиалкиленгликолями, такими как полипропиленгликоль, триглицерид и тому подобное. Тип фармацевтически приемлемого носителя зависит от конкретного способа введения, для которого приготовлена композиция по изобретению, такого как пероральное, назальное, внутрикожное, подкожное, внутримышечное или внутривенное введение. Композиция по изобретению может содержать в виде добавок увлажняющие агенты, эмульгаторы или буферные вещества.
Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут вводиться любым подходящим способом, например, с помощью перорального, назального, внутрикожного, подкожного, внутримышечного или внутривенного способов введения.
В соответствующем аспекте настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию, являющуюся комбинацией антитела к PD-1 со вторым терапевтическим агентом. Согласно одному из вариантов осуществления, второй терапевтический агент является любым агентом, успешно объединенным с антителом к PD-1. Примеры агентов, которые могут быть успешно объединены с антителом к PD-1, включают, не ограничиваясь перечнем, другие агенты, ингибирующие PD-1 активность (включая другие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, пептидные ингибиторы, низкомолекулярные антагонисты и т.д.), и/или агенты, интерферирующие до или после сигнальной трансдукции PD-1. Предпочтительно, второй терапевтический агент является антителом к CD3.
При использовании в данном контексте, термин "PD-L1 положительный рак или инфекционное заболевание" означают раковое или инфекционное заболевание, проистекающее из экспрессии PD-1 или имеющее признак/особенность экспрессии PD-1. Раковое заболевание включает, не ограничиваясь перечнем, рак легких, рак печени, рак яичников, рак шейки матки, рак кожи, рак мочевого пузыря, рак толстой кишки, рак молочной железы, глиому, рак почки, рак желудка, рак пищевода, плоскоклеточная карцинома полости рта, рак головы и шеи. Инфекционное заболевание включает, не ограничиваясь перечнем, ВИЧ-инфекцию и вирус гепатита В.
"Терапевтически эффективное количество" при использовании в данном контексте относится к дозе, достаточной для обеспечения положительного воздействия на субъекта, которому она введена. Фактическое введенное количество, а также скорость и период действия введения будут зависеть от состояния и серьезности заболевания субъекта, подлежащего лечению. Рекомендации по лечению (например, определение дозы) относятся в конечном итоге к зоне ответственности врача общей практики и других врачей и будут зависеть от их решений, принимаемых, главным образом, с учетом заболевания, подлежащего лечению, состояния конкретного пациента, места доставки, способа введения и других факторов, известных врачам.
Термин "субъект" при использовании в данном контексте относится к млекопитающему, такому как человек, но может также относиться к другим животным, таким как дикие животные (такие как цапля, аист, журавль и т.д.), домашние животные (такие как утка, гусь и т.д.) или лабораторные животные (такие как орангутан, обезьяна, крыса, мышь, кролик, морская свинка и т.д.).
Следующие примеры представлены для иллюстрации и дополнительного пояснения некоторых предпочтительных вариантов осуществления и аспектов настоящего изобретения, однако их не следует рассматривать, как ограничивающие объем изобретения.
ОПИСАНИЕ ПРИМЕРОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 1
Получение мышиного моноклонального антитела к PD-1
6-10 недельные мыши линии BALB/C были подкожно (англ. SC) иммунизированы антигеном PD-1-mFc рекомбинантного слитого белка, включающим внеклеточную часть PD-1 (25 мкг) (Sino Biological Inc, Cat lot: 10377-H08H). Мышей сначала иммунизировали путем инокуляции антигеном, смешанным с полным адъювантом Фрейнда (F5881, Sigma), с последующей инокуляцией с помощью подкожной иммунизации антигеном, смешанным с неполным адъювантом Фрейнда (F5506, Sigma) (всего 6 иммунизаций, на 1, 7, 14, 28, 60 и 64 день, соответственно). Иммунный ответ контролировали путем взятия проб крови из орбитального венозного сплетения. Иммунную сыворотку проверяли с помощью ELISA (англ. enzyme-linked immunosorbent assay - твердофазный иммуноферментный анализ), и очищенный рекомбинантный слитый белок PD-1 (Sino Biological Inc, Cat lot: 10377-H08H) разбавляли до 1 мкг/мл PBS, наносили слоем в микролуночный планшет по 100 мкл/лунку и инкубировали при температуре 4°C в течение ночи. Затем лунки блокировали раствором PBS, содержащим 5% фетальную бычью сыворотку и 0,05% Tween 20, по 200 мкл/лунку. После градиентного разбавления в каждую лунку добавляли сыворотку мышей, иммунизированных PD-1, и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. После промывки планшета раствором PBS/Tween-20 в него добавляли поликлональное антитело козы к иммуноглобулину G мыши, конъюгированное с пероксидазой хрена (Jackson Immunoresearch Labs, Cat#: 115-035-044), и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывки планшет проявляли с помощью ТМБ субстрата (англ. ТМВ, (tetramethylbenzidine) substrate - тетраметилбензидиновый субстрат) (Pierce, Cat# 34021) и регистрировали оптическую плотность на уровне OD 450 (англ. optical density). На основании сравнения титров мышей с высоким титром иммуноглобулина против PD-1 использовали для выделения PD-1-специфических В-клеток. Клетки линии B каждой мыши отделяли с помощью сортировки флуоресцентно-активированных клеток (англ. FACS) в соответствии со связыванием с меченным биотином PD-1, и транскрипты генов соответствующей вариабельной области тяжелой цепи (Н) полноразмерного Ig и вариабельной области легкой цепи (L) Ig амплифицировали с помощью ОТ-ПЦР (англ. RT-PCR, reverse transcription polymerase chain reaction - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией). Руководствуясь протоколом производителя, продукты амплификации клонировали в экспрессирующую систему 293 Expression System (Life Technology). Для очистки получаемого в результате моноклонального антитела использовали колонку с белком A, очищенное антитело далее анализировали на способность связываться с PD-1 и блокировать взаимодействие между PD-1 и PD-L1. На основании способности антитела блокировать связывание PD-1 и PD-L1 в качестве кандидатных клонов для дальнейшего исследования и разработки гуманизированных антител были выбраны 10F8 и 15Н6.
Пример 2
Создание последовательности вариабельного участка тяжелой цепи гуманизированного моноклонального антитела против PD-1 рецептора
Аминокислотные последовательности, кодирующие вариабельный участок тяжелой цепи моноклональных антител 10F8 и 15Н6, представлены в SEQ ID NO 1 и SEQ ID NO 2, соответственно. Последовательности каркасных областей зародышевой линии человека с низкой иммуногенностью выбирали путем сравнения с известной последовательностью тяжелой цепи иммуноглобулина зародышевой линии человека, и в конечном итоге было определено, что сегмент VH 3-66 зародышевой линии человека, неопределяемый сегмент D и сегмент JH4 зародышевой линии человека могут быть использованы в качестве тяжелых цепей гуманизированных антител 10F8 и 15Н6. Аминокислотные последовательности вариабельных участков тяжелой цепи гуманизированного 10F8 (то есть ВА08-1) и гуманизированного 15Н6 (то есть ВА08-2) антител представляли собой SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 5, соответственно.
Пример 3
Создание последовательности вариабельного участка легкой цепи гуманизированного моноклонального антитела против PD-1 рецептора
Аминокислотные последовательности вариабельных участков легкой цепи 10F8 и 15Н6 являются идентичными (SEQ ID NO 3). Последовательность каркасных областей зародышевой линии человека с низкой иммуногенностью выбирали путем сравнения с известной последовательностью тяжелой цепи иммуноглобулина зародышевой линии человека, и в конечном итоге было определено, что сегменты VH 3-11 и JK4 зародышевой линии человека могут быть использованы в качестве легких цепей гуманизированных антител 10F8 и 15Н6. Аминокислотная последовательность вариабельного участка легкой цепи, общая для гуманизированного 10F8 (ВА08-1) и гуманизированного 15Н6 (ВА08-2), представляет собой SEQ ID NO 6.
Пример 4
Экспрессия и получение гуманизированного моноклонального антитела против PD-1 рецептора
Последовательность Fc-фрагмента иммуноглобулина IgG4 константного участка тяжелой цепи IgG4 человека (J Ellison, J Buxbaum, L Hood-ДНК, 1981) и последовательность k-фрагмента константного участка легкой цепи (Hieter, Р.А., Max, E.E., Seidman, J.G., Maizel, J.V. Jr., and Leder, P. Cell. 1980; 22: 197-207) были синтезированы компанией IDT Inc. (Integrated DNA Technologies, Coralville, Iowa). Векторы pBA-H4 и pBA-Ck настоящего изобретения конструировали с пкДНКЗ в качестве остова, где рВА-Н4 (содержащий константный участок IgG4Fc тяжелой цепи человеческого IgG4) и pBA-Ck (содержащий k-фрагмент константного участка легкой цепи человека) векторы были сконструированы компанией Bioabs Inc. В векторе рВА-Н4 используются промотор CMV для VH и СН и промотор PGK - для пуромицин-резистентного гена, тогда как в векторе pBA-Ck используются промотор CMV для VL и промотор SV40 для неомицин-резистентного гена. На основании белковых последовательностей последовательности вариабельного участка тяжелой цепи и вариабельного участка легкой цепи антитела были созданы последовательности ДНК, кодирующие вариабельные участки тяжелой цепи и вариабельные участки легкой цепи, которые впоследствии оптимизировали для оптимальной экспрессии в клетках СНО, где последовательности ДНК, кодирующие вариабельный участок тяжелой цепи гуманизированного антитела к PD-1 по настоящему изобретению, представлены в SEQ ID NO 15 (ВА08-1) и 16 (ВА08-2), соответственно, а последовательность ДНК, кодирующая вариабельный участок легкой цепи гуманизированного антитела к PD-1 по настоящему изобретению, представлена в SEQ ID NO 17. ДНК, кодирующие оптимизированные вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, были синтезированы компанией IDT Inc. (Integrated DNA Technologies, Coralville, Iowa). С помощью набора для клонирования In-Fusion®HD (Clontech Cat#: 638910) синтезированный фрагмент ДНК, содержащий тяжелые цепи ВА08-1 и ВА08-2, напрямую клонировали в рВА-Н4 вектор, линеаризованный с Nhel ферментом, а синтезированный фрагмент ДНК, содержащий легкие цепи ВА08-1 и ВА08-2, напрямую клонировали в pBA-Ck вектор, линеаризованный с BsiWI ферментом, с последующей трансформацией в DH5α бактерию, экстракцией плазмид и секвенированием, при этом результат секвенирования согласуется с кодирующими последовательностями ДНК созданного гуманизированного антитела. CHO-S клетки (имеющиеся в Invitrogen) культивировали с 1×CD-CHO (имеющимися в GIBCO), 1×НТ (имеющимися в GIBCO), 8 мМ глутамина (имеющегося в GIBCO) в инкубаторе при температуре 37°C, 8% СO2. CHO-S клетки котрансфецировали плазмидами, содержащими тяжелую цепь и легкую цепь антител ВА08-1 и ВА08-2, при этом метод трансфекции соответствует инструкциям к набору для трансфекции DMRIE-C (приобретенному в Invitrogen). Через 3 дня после трансфекции клетки культивировали в описанной выше культурной среде и добавляли 500 мкг/мл G418 (имеющегося в GIBCO) и 12,5 мкг/мл пуромицина (имеющегося в Sigma) для скрининга под давлением (?pressurized screening?). Через 14 дней после создания избыточного давления (pressurizing?) отбирали положительные клоны, культивировали в 6-луночном планшете и определяли с помощью прямого ELISA количество экспрессии антитела. Выбирали клон с самой высокой скоростью экспрессии, культивировали в крупном масштабе в течение 10 дней, после чего центрифугировали и собирали культуральный супернатант, который очищали с помощью колонки для аффинной хроматографии с белком А (имеющейся в GE), диализовали в PBS и фильтровали через мембрану 0,22 мкм для различных исследований.
Пример 5
Специфичность связывания и относительное сродство к связыванию между антителом и PD-1
Относительное связывание антитела по настоящему изобретению с человеческим PD-1 определяли с помощью ELISA на основе белка. Вкратце, очищенный рекомбинантный слитый белок PD-1 (Sino Biological Inc, Cat#: 10377-H08H) разбавляли до 1 мкг/мл с помощью BPS, наносили слоем в микролуночный планшет по 100 мкл/лунку и инкубировали при температуре 4°C в течение ночи. Затем лунки блокировали раствором PBS, содержащим 5% фетальную бычью сыворотку и 0,05% Tween 20, по 200 мкл/лунку. После градиентного разбавления антитело к PD-1 по настоящему изобретению, MK3475 (контрольный аналог MK-3475, сконструированный авторами настоящего изобретения с помощью экспрессионного вектора по настоящему изобретению в соответствии с раскрытой последовательностью MK3475, далее для краткости именуемый MK3475, специфический протокол конструирования аналогичен настоящему изобретению) и контроль IgG добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. После промывки планшета раствором PBS/Tween-20 добавляли поликлональное антитело козы к иммуноглобулину IgG человека, конъюгированное с пероксидазой хрена (Jackson Immunoresearch Labs, Cat#: 109-035-088), и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. После промывки планшет проявляли с помощью ТМБ субстрата (Cat# 34021, Pierce) и регистрировали оптическую плотность на уровне OD 450. Результат анализа методом ELISA показан на Фиг. 1. Сродство, измеренное с помощью прибора Blitz (Pall life Science), представлено в Таблице 3.
Антитело по настоящему изобретению проявляет неожиданно высокие сродство к связыванию и специфичность связывания с PD-1.
Таблица 3
Пример 6
Антитело к PD-1 блокирует связывание лиганда PD-L1 с рецептором PD-1 Гуманизированное антитело к PD-1 настоящего изобретения испытывали на блокирование связывания PD-1 с его лигандом. В частности, 96-луночный планшет был покрыт 1 мкг/мл немеченным hPD-L1/Fc (R&D Systems, Cat# 156-В7-100) в течение 16 часов. 0,5 мкг/мл белка PD-1 предварительно инкубировали с рекомбинантными антителами к PD-1 при разных концентрациях при температуре 37°C в течение 30 минут, затем добавляли в микролуночный планшет для реакции. Связывание белка PD-1 с покрытым PD-L1 гибридизировали мышиным антителом против человеческого PD-1 (eBioscience, Cat# 14-9989-8214) и далее детектировали с помощью способа на основе козьего антимышиного антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена. После промывки планшет проявляли с помощью ТМБ субстрата (Pierce, Cat# 34021) и регистрировали оптическую плотность на уровне OD 450. Как показано на Фиг. 2, ВА08-1 и ВА08-2 антитела против PD-1 специфически блокировали связывание PD-1 с его лигандом PD-L1 (Фиг. 2), с блокирующим действием, значительно лучшим, чем в случае MK-3475. Таким образом, антитело по настоящему изобретению позволяет достичь неожиданно более высокого блокирования связывания PD-L1 и PD-1.
Пример 7
Влияние антитела к PD-1 на ингибирование активности человеческой Т-клетки, опосредованное PD-L1
Мононуклеарные клетки периферической крови человека (англ. РВМС, Human peripheral blood mononuclear cells) изолировали от здоровых доноров методом фиколла. Т-клетки периферической крови человека в состоянии покоя получали с помощью негативного отбора на колонке для обогащения CD3+ Т-клеток (R&D Systems). 96-луночный планшет покрывали 500 нг/мл антитела к CD3 и 1 мкг/мл рекомбинантного человеческого PD-L1/Fc в течение ночи при температуре 4°C. По 1 мкг антитела к PD-1 по настоящему изобретению или MK3475 добавляли в каждую лунку и инкубировали при температуре 37°C в течение 4 часов. Добавляли RMPI суспензию изолированных Т-клеток (2×104) и собирали супернатант после культивирования в течение 2 дней. Экспрессии IL-2 и IFN-γ детектировали с помощью набора IL-2 ELISA kit (eBioscience Cat# 88-7025-88) и набора IFN-γ ELISA kit (R&D Systems), соответственно, согласно инструкциям по применению. Как изображено на Фиг. 3 и Фиг. 4, столбики означают слева направо: контроль в отсутствии антитела CD3, положительный контроль (использовали только антитело к CD3), ингибирование PD-L1 при экспрессии IL-2 или IFN-γ, стимулированной антителом к CD3 (при добавлении PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм антитела ВА08-1 по настоящему изобретению и ингибирующего действия PD-L1 (при добавлении ВА08-1, PD-L1 и антитела к CD3), антагонизм антитела ВА08-2 по настоящему изобретению и ингибирующего действия PD-L1 (при добавлении ВА08-2, PD-L1 и антитела к CD3) и антагонизм МК3475 и ингибирующего действия PD-L1 (при добавлении MK3475, PD-L1 и антитела к CD3). Оба антитела к PD-1, ВА08-1 и ВА08-2, в значительной степени устраняют ингибирующее действие PD-L1 на продуцирование IL-2 и IFN-γ CD3-стимулированными Т-клетками (** p<0,01), с иммуноусиливающим действием, которое значительно превышает таковое в случае MK-3475 аналога (* p<0,05).
Пример 8
Влияние антитела к PD-1 на экспрессию цитокинов в реакции смешанных лимфоцитов
Влияние блокирования PD-L1/PD-1 пути на эффекторные лимфоциты определяли с помощью гетерологичной смешанной лимфоцитной реакции (англ. MLR, mixed lymphocyte reaction). Определяли влияние присутствия или отсутствия моноклонального антитела к PD-1 человека на секрецию IFN-γ Т-клетками. Человеческие CD4+ Т-клетки получали очисткой из РВМС (англ. peripheral blood mononuclear cells - мононуклеарные клетки периферической крови) с помощью набора для негативной селекции CD4+ клеток (Miltenyi Biotech). Дендритные клетки извлекали из очищенных моноцитов, которые культивировали с 1000 ед./мл IL-4 и 500 ед./мл GM-CSF (R&D Biosystems) в течение семи дней. В каждой MLR реакции участвуют 105 очищенных Т-клеток и 104 аллогенных дендритных клеток в общем объеме 200 мкл. Гуманизированное моноклональное антитело к PD-1 добавляли в культуральный планшет при разных концентрациях, после культивирования клеток при температуре 37°C в течение 5 дней отбирали 100 мкл культурального супернатанта для измерения содержания цитокинов. Измерение IL-2 выполняли с помощью такого же метода, как описан в Примере 7, результаты представлены на Фиг. 5. ВА08-1 и ВА08-2 антитела к PD-1 в значительной степени стимулировали активацию Т-клеток и повышали экспрессию IL-2 в зависимости от дозы, оказывая воздействие, которое значительно превосходило таковое для MK-3475.
Пример 9
Влияние антитела к PD-1 на ингибирование опухолевой клеткой продуцирования IL-2 активированной Т-клеткой
Клетки из клеточной линии А2058 меланомы человека и клеточной линии НСС827 рака легких человека приобретали в АТСС (Manassas, VA). Рекомбинантный интерферон человека (англ. IFN) -γ, форбол-12-миристат-13-ацетат (англ. РМА) и фитогемагглютинин (англ. РНА) приобретали в Sigma-Aldrich (St. Louis, МО). Клетки меланомы и рака легких выращивали в полной среде RPMI-1640 (англ. Roswell Park Memorial Institute) до 80% конфлюентности, затем добавляли 500 ед./мл рекомбинантного человеческого IFN-γ для обработки в течение более 48 часов для повышающей регуляции экспрессии PD-L1, которую подтверждали с помощью проточного цитометра с мышиным антителом против PD-L1 человека (BD Pharmingen, Cat# 557924). Т-клетки периферической крови человека в состоянии покоя получали с помощью негативного отбора на колонке для обогащения CD3+ Т-клеток (R&D Systems). Полученные в результате Т-клетки обрабатывали 1 мкг/мл РНА и 50 нг/мл РМА в течение ночи, затем добавляли в 96-луночный планшет, предварительно покрытый 1 мкг/мл рекомбинантным белком PD-L1-Fc (Corning, NY) (обозначенным как PD-L1 на Фиг. 6); или в присутствии 3 мкг/мл антитела (контроль IgG, ВА08-2 или ВА08-1 антитело к PD-1 по настоящему изобретению, или МК3475) добавляли в обработанные IFN-γ опухолевые клетки в соотношении 6:1 (опухолевые клетки:Т-клетки) и инкубировали в течение 48 часов (обозначены как А2058 и НСС827 на Фиг. 6); или же без какой-либо дополнительной обработки (контроль, обозначен как РМА+РНА на Фиг. 6). Собирали супернатант и анализировали на предмет экспрессии IL-2 с помощью ELISA. Как показано на Фиг. 6, иммобилизованный PD-L1 может ингибировать способность активированных Т-клеток продуцировать IL-2, и ВА08-1 и ВА08-2 антитела к PD-1 в значительной степени подавляют ингибирующее действие PD-L1. Аналогичным образом, предварительно обработанные IFN-γ опухолевые клетки также ингибируют экспрессию IL-2, опосредованную активированными Т-клетками, при этом ингибирующее действие также может быть блокировано ВА08-1 и ВА08-2 антителами к PD-1 (*p<0,05), и воздействие антитела по настоящему изобретению значительно превышает таковое в случае MK-3475.
Пример 10
Эксперимент in vivo (на живых организмах) с использованием антитела к PD-1 по настоящему изобретению для лечения рака легких
Для оценки эффекта in vivo гуманизированного антитела к PD-1 в 1 день эксперимента 6-недельные мыши линии NOD-SCID были подкожно инокулированы 1×107 клетками клеточной линии НСС827 человеческого рака легких, полученными из тканевой культуры. Обработку начали на 8 день, когда средний объем опухоли достигает 100 мм3 (55-150 мм3), в каждой группе было по 6 животных, и всем животным в указанной партии внутрибрюшинно вводили человеческие РВМС. Способ приготовления человеческих РВМС такой, как описан выше. РВМС получают с помощью очистки с использованием фиколла в течение 3 часов. Каждую мышь инокулировали с помощью внутрибрюшинной инъекции суспензией RPMI, содержащей 1×107 человеческих РВМС, и в тот же день внутрибрюшинно вводили антитело, два раза в неделю в дозе 5 мг/кг, в общей сложности четыре дозы. Объем опухоли мыши измеряли два раза в неделю с помощью кронциркуля и вычисляли по следующей формуле: Объем = (длина × ширина2)/2. Как показано на Фиг. 7, гуманизированное антитело к PD-1 показало эффективную и продолжительную противоопухолевую активность, при этом воздействие антитела по настоящему изобретению значительно превосходило таковое для MK-3475. По сравнению с контрольной группой скорости ингибирования опухолей ВА08-1 и ВА08-2 антителами к PD-1 на 32 день составляли 84,5% и 77,8% (р<0,01), соответственно, что было значительно больше, чем для образца MK3475, скорость ингибирования опухоли которого составляла 66% (p<0,05).
Пример 11
Эксперимент In vivo с использованием антитела к PD-1 по настоящему изобретению для лечения меланомы
6-недельные мыши линии NOD-SCID были подкожно инокулированы 2×106 клетками меланомы А375 человека и 1×106 человеческими Т-клетками, стимулированными такими же опухолевыми клетками, которые были получены из тканевой культуры. Человеческие Т-клетки, стимулированные опухолевыми клетками, получали следующим образом: негативно селектируемые Т-клетки из мононуклеарных клеток периферической крови здорового человека с помощью набора RosetteSep (Stemcell technologies) сокультивировали с клетками меланомы А375 человека, обработанными 2 мкг митомицина С в течение 16 часов в культуральной среде 10% FBS-RPMI, содержащей 50 ед./мл рекомбинантного IL-2, в течение семи дней и собирали для использования. Обработку начинали в один и тот же день для 6 животных, включенных в каждую группу, животным внутрибрюшинно вводили антитело к PD-1 два раза в неделю в дозе 3 мг/кг, в сумме четыре дозы. Объем опухоли мыши измеряли два раза в неделю с помощью кронциркуля и вычисляли по следующей формуле: Объем = (длина × ширина2)/2. Как показано на Фиг. 8, по сравнению с контрольной группой скорости ингибирования опухолей ВА08-1 и ВА08-2 антителами к PD-1 на 35 день составляли 82% и 72% (p<0,01), соответственно, что было значительно больше, чем для образца МК3475, скорость ингибирования опухоли которого составляла 58% (p<0,05).
Рассмотренные выше предпочтительные варианты осуществления описаны исключительно в качестве примеров, а не в качестве ограничений, с целью объединения основных признаков для осуществления настоящего изобретения. Представленные названия не предназначены для ограничения различных вариантов осуществления настоящего изобретения. Термины, такие как "включает в себя", "содержит" и "включает" не предназначены для того, чтобы быть ограничениями. Кроме того, если не указано иное, если имя существительное не изменено во множественное число, оно включает в себя его форму множественного числа, а "или" означает "и/или". Если не указано иное, все технические и научные термины, использованные в данной работе, имеют значения, обычно понимаемые специалистами в данной области техники.
Все публикации и патенты, упомянутые в данной заявке, включены в нее посредством ссылки. Без отступления от объема и сущности настоящего изобретения различные модификации и изменения способов и композиций, описанных в настоящем изобретении, являются очевидными для специалистов в данной области техники. Хотя настоящее изобретение описано посредством конкретных и предпочтительных вариантов осуществления, подразумевается, что заявляемое изобретение не должно быть безосновательно ограничено такими частными вариантами осуществления. Фактически, множество вариантов, очевидных для специалистов в данной области техники, для осуществления описанных способов настоящего изобретения включены в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (18)
1. Антитело, включающее тяжелую цепь и легкую цепь, способное специфически связываться с белком запрограммированной смерти клетки 1 (PD-1), отличающееся тем, что
(i) тяжелая цепь включает участки H-CDR1, H-CDR2 и H-CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO 7, 8 и 11 или 9, 10 и 11 соответственно; и
(ii) легкая цепь включает участки L-CDR1, L-CDR2 и L-CDR3, имеющие аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO 12, 13 и 14 соответственно.
2. Антитело по п. 1, где
(i) тяжелая цепь включает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 1, 2, 4 или 5; и
(ii) легкая цепь включает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 3 или 6.
3. Антитело по п. 1, где
(i) тяжелая цепь включает вариабельный участок тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 4 или 5; и
(ii) легкая цепь включает вариабельный участок легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO 6.
4. Изолированный полинуклеотид, кодирующий антитело по любому из пп. 1-3.
5. Комбинация изолированных полинуклеотидов, которая кодирует антитело по любому из пп. 1-3, включающая полинуклеотид, кодирующий легкую цепь антитела по любому из пп. 1-3, и полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь антитела по любому из пп. 1-3.
6. Экспрессионный вектор, включающий полинуклеотид по п. 4 или комбинацию полинуклеотидов по п. 5, где полинуклеотид эффективно связывается с регуляторной последовательностью, что позволяет осуществлять экспрессию полипептида, кодированного полинуклеотидом, в клетке-хозяине или в бесклеточной экспрессирующей системе.
7. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики PD-L1-положительного рака или PD-L1-положительного инфекционного заболевания, включающая антитело по любому из пп. 1-3 и фармацевтически приемлемый носитель.
8. Способ лечения или предупреждения PD-L1-положительного рака или PD-L1-положительного инфекционного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту антитела по любому из пп. 1-3, полинуклеотида по п. 4, комбинации полинуклеотидов по п. 5, экспрессионного вектора по п. 6 и/или фармацевтической композиции по п. 7.
9. Способ по п. 8, где раковое заболевание является раком легких или меланомой, а инфекционное заболевание представляет собой ВИЧ-инфекцию или вирус гепатита В.
10. Способ усиления Т-клеточного иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту антитела по любому из пп. 1-3, полинуклеотида по п. 4, комбинации полинуклеотидов по п. 5, экспрессионного вектора по п. 6 и/или фармацевтической композиции по п. 7.
11. Способ по п. 10, где усиление Т-клеточного иммунного ответа включает усиление продуцирования цитокинов Т-клетками, предпочтительно, цитокин включает IL-2 и/или IFN-γ.
12. Способ по п. 10, где способ также включает введение субъекту антитела к CD3.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410369300.7A CN105330740B (zh) | 2014-07-30 | 2014-07-30 | 抗pd-1抗体及其应用 |
| CN201410369300.7 | 2014-07-30 | ||
| PCT/CN2015/088384 WO2016015685A1 (zh) | 2014-07-30 | 2015-08-28 | 抗pd-1抗体及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2661678C1 true RU2661678C1 (ru) | 2018-07-18 |
Family
ID=55216788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017102399A RU2661678C1 (ru) | 2014-07-30 | 2015-08-28 | Антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 (pd-1) и его применение |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10414821B2 (ru) |
| EP (1) | EP3176180B1 (ru) |
| JP (1) | JP6654186B2 (ru) |
| KR (1) | KR102540601B1 (ru) |
| CN (1) | CN105330740B (ru) |
| AU (1) | AU2015295946B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017000664B1 (ru) |
| CA (1) | CA2955541C (ru) |
| RU (1) | RU2661678C1 (ru) |
| WO (1) | WO2016015685A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2828011C2 (ru) * | 2019-07-09 | 2024-10-07 | Зидус Лайфсайенсиз Лимитед | Антитела против рецептора программируемой смерти pd-1 человека |
Families Citing this family (59)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105026428B (zh) | 2013-12-12 | 2018-01-16 | 上海恒瑞医药有限公司 | PD‑l抗体、其抗原结合片段及其医药用途 |
| TWI693232B (zh) | 2014-06-26 | 2020-05-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法 |
| CN107849144B (zh) | 2015-05-29 | 2021-09-17 | 艾吉纳斯公司 | 抗-ctla-4抗体及其使用方法 |
| TWI773646B (zh) | 2015-06-08 | 2022-08-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 結合lag-3的分子和其使用方法 |
| MX383464B (es) | 2015-07-13 | 2025-03-14 | Cytomx Therapeutics Inc | Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y métodos de uso de los mismos. |
| CN108136025B (zh) | 2015-07-16 | 2022-09-06 | 比奥克斯塞尔医疗股份有限公司 | 一种使用免疫调节治疗癌症的新颖方法 |
| PT3456346T (pt) | 2015-07-30 | 2021-09-28 | Macrogenics Inc | Moléculas de ligação pd-1 e lag-3 e respetivos métodos de utilização |
| CN114605548A (zh) | 2015-09-01 | 2022-06-10 | 艾吉纳斯公司 | 抗-pd-1抗体及其使用方法 |
| EA201890790A1 (ru) | 2015-09-29 | 2018-10-31 | Селджин Корпорейшн | Связывающие pd-1 белки и способы их применения |
| UA125611C2 (uk) | 2015-12-14 | 2022-05-04 | Макродженікс, Інк. | Біспецифічні молекули, що мають імунореактивність відносно pd-1 і ctla-4, і способи їх застосування |
| WO2017205721A1 (en) | 2016-05-27 | 2017-11-30 | Agenus Inc. | Anti-tim-3 antibodies and methods of use thereof |
| WO2017220988A1 (en) | 2016-06-20 | 2017-12-28 | Kymab Limited | Multispecific antibodies for immuno-oncology |
| WO2018026248A1 (ko) * | 2016-08-05 | 2018-02-08 | 주식회사 와이바이오로직스 | 프로그램화된 세포 사멸 단백질(pd-1)에 대한 신규 항체 및 이의 용도 |
| EP3495390A4 (en) | 2016-08-05 | 2020-08-19 | Y-Biologics Inc. | NOVEL ANTIBODY AGAINST PROGRAMMED CELL DEATH PROTEIN (PD-1) AND USE OF IT |
| EP4653462A2 (en) | 2016-08-22 | 2025-11-26 | Arbutus Biopharma Corporation | Anti-pd-1 antibodies, or fragments thereof, for treating hepatitis b |
| US10766958B2 (en) | 2016-09-19 | 2020-09-08 | Celgene Corporation | Methods of treating vitiligo using PD-1 binding antibodies |
| AU2017329024A1 (en) | 2016-09-19 | 2019-03-21 | Celgene Corporation | Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins |
| WO2018053709A1 (en) * | 2016-09-21 | 2018-03-29 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | The novel monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) |
| BR112019007369A2 (pt) | 2016-10-11 | 2019-07-16 | Agenus Inc | anticorpos anti-lag-3 e métodos de uso dos mesmos |
| IL307242A (en) | 2016-12-07 | 2023-11-01 | Agenus Inc | Anti-CTLA-4 antibodies and methods of using them |
| EP3551225A1 (en) | 2016-12-07 | 2019-10-16 | Agenus Inc. | Antibodies and methods of use thereof |
| CN107043420B (zh) * | 2016-12-26 | 2018-07-31 | 中国科学院微生物研究所 | 一种抗pd-1抗体及其应用 |
| AU2018207172B2 (en) | 2017-01-13 | 2023-10-12 | Mink Therapeutics, Inc. | T cell receptors that bind to NY-ESO-1 and methods of use thereof |
| CN108341871A (zh) * | 2017-01-24 | 2018-07-31 | 三生国健药业（上海）股份有限公司 | 抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| US11161905B2 (en) | 2017-03-04 | 2021-11-02 | Xiangtan Tenghua Bioscience | Recombinant antibodies to programmed death 1 (PD-1) and uses thereof |
| TW202500588A (zh) | 2017-04-13 | 2025-01-01 | 美商艾吉納斯公司 | 抗ｃｄ１３７抗體及其使用方法 |
| TW202402800A (zh) | 2017-05-01 | 2024-01-16 | 美商艾吉納斯公司 | 抗ｔｉｇｉｔ抗體類和使用彼等之方法 |
| CA3073055A1 (en) | 2017-09-04 | 2019-03-07 | Agenus Inc. | T cell receptors that bind to mixed lineage leukemia (mll)-specific phosphopeptides and methods of use thereof |
| JP7404256B2 (ja) | 2018-03-14 | 2023-12-25 | ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | 汎発性膿疱性乾癬の処置のための抗ｉｌ－３６ｒ抗体の使用 |
| TWI841554B (zh) | 2018-03-21 | 2024-05-11 | 丹麥商珍美寶股份有限公司 | 以鉑為主之劑與抗組織因子抗體－藥物共軛物的組合治療癌症之方法 |
| JP2021522239A (ja) | 2018-04-26 | 2021-08-30 | アジェナス インコーポレイテッド | 熱ショックタンパク質結合ペプチド組成物およびその使用方法 |
| KR102882368B1 (ko) | 2018-05-07 | 2025-11-07 | 젠맵 에이/에스 | 항-pd-1 항체와 항-조직 인자 항체-약물 접합체의 조합을 사용하여 암을 치료하는 방법 |
| BR112020022642A2 (pt) | 2018-05-07 | 2021-02-17 | Genmab A/S | método para tratar câncer em um indivíduo, e, estojo |
| JP7468903B2 (ja) | 2018-06-17 | 2024-04-16 | エルアンドエル バイオファーマ カンパニー リミテッド | Ｃｌｄｎ１８．２を標的とする抗体、二重特異性抗体、ａｄｃ及びｃａｒならびにその使用 |
| IL319456A (en) | 2018-06-20 | 2025-05-01 | Incyte Holdings Corp | ANTI-PD-1 ANTIBODIES AND THEIR USES |
| CN110669135B (zh) | 2018-07-03 | 2022-11-11 | 上海健信生物医药科技有限公司 | 一种双特异性抗体及其用途 |
| TWI844571B (zh) | 2018-10-30 | 2024-06-11 | 丹麥商珍美寶股份有限公司 | 使用抗血管內皮生長因子（ｖｅｇｆ）抗體與抗組織因子（ｔｆ）抗體－藥物共軛體之組合以治療癌症之方法 |
| DK3883966T5 (da) * | 2018-12-21 | 2024-08-05 | Ose Immunotherapeutics | Humaniseret anti-human-pd-1-antistof |
| CN111423510B (zh) | 2019-01-10 | 2024-02-06 | 迈威(上海)生物科技股份有限公司 | 重组抗人pd-1抗体及其应用 |
| US20220213193A1 (en) | 2019-05-06 | 2022-07-07 | Brown University | Bispecific antibodies against chi3l1 and pd1 with enhanced t cell-mediated cytotoxic effects on tumor cells |
| WO2020255011A1 (en) | 2019-06-18 | 2020-12-24 | Janssen Sciences Ireland Unlimited Company | Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and anti-pd-1 or anti-pd-l1 antibody |
| KR20220041079A (ko) | 2019-06-18 | 2022-03-31 | 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니 | B형 간염 바이러스(hbv) 백신 및 항-pd-1 항체의 조합 |
| TWI889320B (zh) | 2019-07-05 | 2025-07-01 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療 |
| WO2021005546A1 (en) * | 2019-07-09 | 2021-01-14 | Cadila Healthcare Limited | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
| EP4011918A4 (en) | 2019-08-08 | 2023-08-23 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | DUAL SPECIFIC PROTEIN |
| PE20221151A1 (es) | 2019-08-30 | 2022-07-18 | Agenus Inc | Anticuerpos anti-cd96 y sus metodos de uso |
| US12312405B2 (en) | 2020-05-26 | 2025-05-27 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Anti-PD-1 antibodies |
| MX2023005528A (es) | 2020-11-17 | 2023-06-23 | Seagen Inc | Metodos de tratamiento del cancer con una combinacion de tucatinib y un anticuerpo anti-pd-1/anti-pd-l1. |
| GB202107994D0 (en) | 2021-06-04 | 2021-07-21 | Kymab Ltd | Treatment of cancer |
| JP2024525758A (ja) | 2021-07-13 | 2024-07-12 | ビオンテック・ソシエタス・エウロパエア | がんのための併用療法におけるｃｄ４０およびｃｄ１３７に対する多重特異性結合剤 |
| IL311771A (en) | 2021-10-06 | 2024-05-01 | BioNTech SE | Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 in combination |
| WO2023083439A1 (en) | 2021-11-09 | 2023-05-19 | BioNTech SE | Tlr7 agonist and combinations for cancer treatment |
| CN119451985A (zh) | 2022-05-12 | 2025-02-14 | 健玛保 | 在组合疗法中能够结合cd27的结合剂 |
| AU2023401158A1 (en) | 2022-12-01 | 2025-05-29 | BioNTech SE | Multispecific antibody against cd40 and cd137 in combination therapy with anti-pd1 ab and chemotherapy |
| IL322179A (en) | 2023-01-30 | 2025-09-01 | Kymab Ltd | Antibodies |
| WO2024209072A1 (en) | 2023-04-06 | 2024-10-10 | Genmab A/S | Multispecific binding agents against pd-l1 and cd137 for treating cancer |
| WO2024216028A1 (en) | 2023-04-12 | 2024-10-17 | Agenus Inc. | Methods of treating cancer using an anti-ctla4 antibody and an enpp1 inhibitor |
| WO2024235862A1 (en) | 2023-05-12 | 2024-11-21 | Genmab A/S | Antibodies capable of binding to ox40, variants thereof and uses thereof |
| TW202540189A (zh) | 2023-11-30 | 2025-10-16 | 德商生物新技術公司 | 在組合療法中能夠結合ｏｘ４０之抗體 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010089411A2 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Universite De La Mediterranee | Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof |
| WO2011110604A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Ucb Pharma, S.A. | Pd-1 antibody |
| RU2494107C2 (ru) * | 2005-05-09 | 2013-09-27 | Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. | Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101899114A (zh) * | 2002-12-23 | 2010-12-01 | 惠氏公司 | 抗pd-1抗体及其用途 |
| CA2691357C (en) * | 2007-06-18 | 2014-09-23 | N.V. Organon | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
| PL2699264T3 (pl) * | 2011-04-20 | 2018-08-31 | Medimmune, Llc | Przeciwciała i inne cząsteczki wiążące B7-H1 i PD-1 |
| CN103242448B (zh) * | 2013-05-27 | 2015-01-14 | 郑州大学 | 一种全人源化抗pd-1单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| MX383464B (es) * | 2015-07-13 | 2025-03-14 | Cytomx Therapeutics Inc | Anticuerpos anti-pd-1, anticuerpos anti-pd-1 activables, y métodos de uso de los mismos. |
-
2014
- 2014-07-30 CN CN201410369300.7A patent/CN105330740B/zh active Active
-
2015
- 2015-08-28 BR BR112017000664-2A patent/BR112017000664B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2015-08-28 WO PCT/CN2015/088384 patent/WO2016015685A1/zh not_active Ceased
- 2015-08-28 KR KR1020177002113A patent/KR102540601B1/ko active Active
- 2015-08-28 RU RU2017102399A patent/RU2661678C1/ru active
- 2015-08-28 AU AU2015295946A patent/AU2015295946B2/en active Active
- 2015-08-28 CA CA2955541A patent/CA2955541C/en active Active
- 2015-08-28 US US15/328,462 patent/US10414821B2/en active Active
- 2015-08-28 EP EP15826387.1A patent/EP3176180B1/en active Active
- 2015-08-28 JP JP2017505240A patent/JP6654186B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2494107C2 (ru) * | 2005-05-09 | 2013-09-27 | Оно Фармасьютикал Ко., Лтд. | Моноклональные антитела человека к белку программируемой смерти 1 (pd-1) и способы лечения рака с использованием анти-pd-1-антител самостоятельно или в комбинации с другими иммунотерапевтическими средствами |
| WO2010089411A2 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-12 | Universite De La Mediterranee | Pd-1 antibodies and pd-l1 antibodies and uses thereof |
| WO2011110604A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Ucb Pharma, S.A. | Pd-1 antibody |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| FULLER MJ et.al. Immunotherapy of chronic hepatitis C virus infection with antibodies against programmed cell death-1 (PD-1), Proc Natl Acad Sci USA. 2013 Sep 10; 110(37):15001-6. doi: 10.1073/pnas.1312772110. Epub 2013 Aug 26. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2828011C2 (ru) * | 2019-07-09 | 2024-10-07 | Зидус Лайфсайенсиз Лимитед | Антитела против рецептора программируемой смерти pd-1 человека |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP3176180B1 (en) | 2019-10-30 |
| KR20180035728A (ko) | 2018-04-06 |
| US10414821B2 (en) | 2019-09-17 |
| EP3176180A4 (en) | 2018-01-03 |
| CA2955541A1 (en) | 2016-02-04 |
| BR112017000664A2 (pt) | 2017-11-07 |
| BR112017000664B1 (pt) | 2024-04-30 |
| KR102540601B1 (ko) | 2023-06-07 |
| AU2015295946A1 (en) | 2017-03-16 |
| CA2955541C (en) | 2023-06-27 |
| JP2018502044A (ja) | 2018-01-25 |
| CN105330740B (zh) | 2018-08-17 |
| WO2016015685A1 (zh) | 2016-02-04 |
| EP3176180A1 (en) | 2017-06-07 |
| JP6654186B2 (ja) | 2020-02-26 |
| AU2015295946B2 (en) | 2020-06-25 |
| US20170210806A1 (en) | 2017-07-27 |
| CN105330740A (zh) | 2016-02-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2661678C1 (ru) | Антитело против белка запрограммированной смерти клетки 1 (pd-1) и его применение | |
| JP7581420B2 (ja) | 抗ｔｉｇｉｔ抗体並びに治療剤及び診断剤としてのその使用 | |
| JP7158552B2 (ja) | 抗Ｔｉｍ－３抗体及びその使用 | |
| JP7361610B2 (ja) | 抗ｐｄ－ｌ１抗体及びその使用 | |
| JP7425604B2 (ja) | 抗ｃｔｌａ４－抗ｐｄ－１二機能性抗体、その医薬組成物および使用 | |
| JP7082620B2 (ja) | 抗ｐｄ１モノクローナル抗体、その医薬組成物およびその使用 | |
| JP6212493B2 (ja) | 抗ｃｄ１３４（ｏｘ４０）抗体およびその使用 | |
| JP6976322B2 (ja) | 新規抗ｃｔｌａ４抗体 | |
| RS66073B1 (sr) | Anti-pd-1 i anti-vegfa bifunkcionalno antitelo, njegova farmaceutska kompozicija i njena upotreba | |
| JP2025156298A (ja) | 抗ニューヨーク食道扁平上皮がん１（ｎｙ－ｅｓｏ－１）抗原結合タンパク質およびその使用方法 | |
| CA3202384A1 (en) | Cd40 binding molecules and uses thereof | |
| CN118477173A (zh) | 靶向HER2/p95HER2的P329G抗体及其与嵌合抗原受体细胞的组合和应用 | |
| TW202417503A (zh) | 特異性識別ｂ和ｔ淋巴細胞衰減器（ｂｔｌａ）的抗體及其應用 | |
| JP2024514255A (ja) | 増強された抗ｈｖｅｍ抗体及びその使用 | |
| HK40116731A (zh) | 双特异性抗体、药物组合物及用途 |