RU2652444C1 - Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro - Google Patents
Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2652444C1 RU2652444C1 RU2017111942A RU2017111942A RU2652444C1 RU 2652444 C1 RU2652444 C1 RU 2652444C1 RU 2017111942 A RU2017111942 A RU 2017111942A RU 2017111942 A RU2017111942 A RU 2017111942A RU 2652444 C1 RU2652444 C1 RU 2652444C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mucus
- blood
- fish skin
- hemostasis
- platelet aggregation
- Prior art date
Links
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 title claims abstract description 18
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 title claims abstract description 15
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 title claims abstract 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 title 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims abstract description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000035602 clotting Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 238000005375 photometry Methods 0.000 claims abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 4
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 abstract 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 17
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 9
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 3
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 3
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 3
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 3
- 241000881711 Acipenser sturio Species 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 229940030225 antihemorrhagics Drugs 0.000 description 2
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 206010051373 Wound haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004712 air sac Anatomy 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 230000009182 swimming Effects 0.000 description 1
- 108010034963 tachocomb Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO включает внесение слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), в нативную кровь и определение времени образования сгустка визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах. При ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза. 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарии и медицины, а именно гематологии. Известны препараты биологического гемостаза, а именно фибриновая пленка, коллагеновая гемостатическая губка [7, 8], гемостоп, желатиновая губка, ГемоКомпакт, Тахокомб и др., которые активно разрабатываются и внедряются в повседневную практику хирурга [4-6]. Общим недостатком гемостатических средств на основе коллагена является то, что коллаген рассасывается только под действием фермента коллагеназы, которой в организме очень мало, и коллагеновые губки следует удалять из раны после осуществления гемостаза, что приводит к повторной травматизации тканей.
Препараты на основе хитозана активно применяются для остановки кровотечений в медицинской и военной практике [2]. Перевязочные материалы с использованием тромбина и фибриногена лосося удачно останавливали как аортальное, так и поверхностное раневое кровотечение, причем результаты этого исследования показали, что многократное воздействие плазменных белков лосося в течение шести месяцев не давало никаких неблагоприятных эффектов со стороны иммунной системы [3]. Стоит отметить и немаловажные отечественные исследования применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра, богатого коллагеном, на искусственно поврежденной печени белых мышей [1]. Проведенные опыты подтвердили кровоостанавливающий эффект и большую регенераторную способность этого биопрепарата, также не вызывавшего ни аллергической реакции, пи цитотоксических эффектов. Несмотря на все свои плюсы, существенными минусами являются их высокая стоимость и сложность получения компонентов для изготовления вышеуказанных препаратов.
Задача изобретения - оценить пригодность слизи рыб для осуществления гемостаза IN VITRO.
Способ осуществляется следующим образом.
Гемостатическую активность определяют путем внесения 100 мкл слизи кожи рыб в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами с последующей оценкой времени образования сгустка в опытной и контрольной пробах (с индуктором агрегации тромбоцитов млекопитающих - АДФ). При укорочении времени свертывания по сравнению с контролем судят о пригодности препарата для осуществления гемостаза.
Заявляемый способ осуществляется следующим способом.
Для оценки агрегационной активности слизи кожи рыб кровь овцы забирают из яремной вены в пробирки с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин для получения обогащенной тромбоцитами плазмы (ОТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БТП). Для оценки агонистической способности слизи кожи рыб применяют количественный метод, основанный на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы с применением ФЭК по Howard М.А. Определяли суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ), скорость агрегации (СА) и индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ) овец со слизью рыб (опытная группа) и индуктором агрегации - АДФ в концентрации 0,1 мг/мл (контрольная группа). АДФ является активатором тромбоцитов. При добавлении его в плазму, богатую тромбоцитами, формируются агрегаты, повышается прозрачность плазмы и, следовательно, увеличивается поток проходящего через кювету света.
Исследуемую ОТП (1,2-1,5 мл) вносят в кювету ФЭК с длиной оптического пути 3 мм и измеряют оптическую плотность при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) против дистиллированной воды.
Переливают плазму из кюветы в пробирку, прогревают при температуре 37°С.
Через 1 мин вносят в пробирку один из активаторов и включают секундомер.
Через 1, 3, 5 и 10 мин инкубации измеряют оптическую плотность исследуемой плазмы.
Определяют оптическую плотность исследуемой БТП.
Определяют суммирующий индекс агрегации тромбоцитов (СИАТ) по формуле
где Е - оптическая плотность БТП в единицах оптической плотности;
E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.
Скорость агрегации (СА) рассчитывают по формуле
где E1 - оптическая плотность ОТП до агрегации в единицах оптической плотности;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности;
t - время, за которое произошло максимальное падение оптической плотности, в мин.
Рассчитывают Индекс дезагрегации тромбоцитов (ИДТ):
где Е3 - максимальная оптическая плотность ОТП, измеренная через 10 мин после добавления активатора;
Е2 - оптическая плотность ОТП после агрегации в единицах оптической плотности.
Результаты определения индуцированной агрегации тромбоцитов у овец контрольной и опытной групп приведены в табл. 1.
* Различия достоверны (р<0,05).
Данные табл. 1 свидетельствуют о влиянии слизи рыб на агрегацию тромбоцитов млекопитающих in vitro. При использовании слизи кожи рыб как агониста тромбоцитов получили достоверно более высокий индекс и скорость агрегации, чем при использовании АДФ, сильнейшего агониста тромбоцитов млекопитающих.
Способ поясняется следующим примером.
На одно предметное стекло наносят автоматическим дозатором каплю нативной крови овцы в объеме 200 мкл, на второе предметное стекло - 100 мкл крови и 100 мкл слизи кожи рыб, каждые 30 сек определяют при осторожном наклоне стекла образование плотного сгустка.
Точность метода оценивалась на основании результатов повторных определений гемостатической активности слизи с одной и той же порцией крови донора (не менее 9 определений).
Результаты повторных определений приведены в табл.2.
* Различия достоверны (р<0,05).
Слизь кожи рыб активирует тромбоциты овец и пригодна для осуществления гемостаза IN VITRO.
Литература
1. Ксенофонтов, А.М., Никифоров, П.В., Федоров, А.П. Экспериментальный метод применения биологического клея на основе плавательного пузыря осетра при операциях на печени /A.M. Ксенофонтов, П.В. Никифоров, А.П. Федоров // Здоровье и образование в XXI веке. - 2012. Т.14. - №1. - С. 223-224.
2. В России разработано новое гемостатическое средство//Военно-промышленный курьер [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://vpk-news.ru/news/25817
3. The long term immunological response of swine after two exposures lo a salmon thrombin and fibrinogen hemostatic bandage / S.W. Rothwell, T. Settle, S. Wallace et al // Biologicals. - November 2010. - V. 38, I. 6. - P. 619-628, ISSN 1045-1056,
4. Горский В.А., Шуркалин Б.К., Фаллер А.П. Окончательный гемостаз при вмешательствах на паренхиматозных органах // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т.12. - №3. - С. 253.
5. Ткачев П.В., Акопян А.А. Возможности гемостаза ложа желчного пузыря при экстренных лапароскопических холецистэктомиях // XXX Итоговая конференция общества молодых ученых. Труды конференции. М.: МГМСУ, 2008. - С. 332-334.
6. Борисов А.Е., Митин С.Е., Шолков СИ. Использование тахокомба в нестандартных ситуациях // Анн. хирург. гепатол. - 2007. - Т. 12. - №3. - С. 48.
7. Заявка на патент РФ 96119573/14, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.01.99. БИ 1.
8. Патент РФ 2034572, МКИ6 А61L 15/32, опубл. 10.05.95. БИ 13.
Claims (1)
- Способ определения пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза путем активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови IN VITRO путем внесения слизи в плазму крови овец, обогащенную тромбоцитами (ОТП), нативную кровь и определения времени образования сгустка, отличающийся тем, что в качестве испытуемого препарата используют слизь кожи рыб, в качестве биологической жидкости - кровь и плазму, время образования сгустка определяют визуально и путем фотометрии на фотоэлектроколориметре (ФЭК) в опытной и контрольной пробах и при ускорении образования сгустка по сравнению с контролем судят о пригодности слизи кожи рыб для осуществления гемостаза.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017111942A RU2652444C1 (ru) | 2017-04-07 | 2017-04-07 | Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017111942A RU2652444C1 (ru) | 2017-04-07 | 2017-04-07 | Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2652444C1 true RU2652444C1 (ru) | 2018-04-26 |
Family
ID=62045616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017111942A RU2652444C1 (ru) | 2017-04-07 | 2017-04-07 | Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2652444C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2034572C1 (ru) * | 1992-11-03 | 1995-05-10 | Малое многопрофильное предприятие "ПОЛИКОМ" | Гемостатическая губка |
| RU2562569C2 (ru) * | 2010-04-07 | 2015-09-10 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Гемостатическая губка |
-
2017
- 2017-04-07 RU RU2017111942A patent/RU2652444C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2034572C1 (ru) * | 1992-11-03 | 1995-05-10 | Малое многопрофильное предприятие "ПОЛИКОМ" | Гемостатическая губка |
| RU2562569C2 (ru) * | 2010-04-07 | 2015-09-10 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Гемостатическая губка |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| А.М.Ксенофонтов и др. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО КЛЕЯ НА ОСНОВЕ ПЛАВАТЕЛЬНОГО ПУЗЫРЯ ОСЕТРА ПРИ ОПЕРАЦИЯХ НА ПЕЧЕНИ / Журнал научных статей "Здоровье и образование в XXI веке" (Серия медицина), 2012, том 14 [1], стр. 223-224. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kushida et al. | Platelet and growth factor concentrations in activated platelet-rich plasma: a comparison of seven commercial separation systems | |
| Weksler et al. | Platelet-dependent generation of chemotactic activity in serum | |
| Hartman et al. | Autologous whole plasma fibrin gel: intraoperative procurement | |
| Deykin | Uremic bleeding | |
| Martin-Sole et al. | Effects of platelet-rich plasma (PRP) on a model of renal ischemia-reperfusion in rats | |
| Van Poucke et al. | Platelet function during hypothermia in experimental mock circulation | |
| CA3170584A1 (en) | Low-density thixotropic gel-filled centrifuge tube | |
| Jenkins et al. | THOR position paper on remote damage control resuscitation: definitions, current practice and knowledge gaps | |
| Agarwal et al. | Association of blood products administration during cardiopulmonary bypass and excessive post-operative bleeding in pediatric cardiac surgery | |
| RU2652444C1 (ru) | Способ применения слизи кожи рыб для активации агрегации тромбоцитов и свертывания крови in vitro | |
| Bolliger et al. | Patient blood management in cardiac surgery | |
| Chen et al. | The role of a disintegrin and metalloproteinase proteolysis and mechanical damage in nonphysiological shear stress-induced platelet receptor shedding | |
| ES2639445T3 (es) | Composición para su utilización como plasma de control anormal de la coagulación en ensayos in vitro | |
| Kageyama et al. | Rac regulates collagen-induced HSP27 phosphorylation via p44/p42 MAP kinase in human platelets | |
| Bloom et al. | Factor VIII (antihaemophilic factor) in tissues detected by antibody neutralization | |
| Gans et al. | Problems in hemostasis during open-heart surgery: II. On the hypercoagulability of blood during cardiac bypass | |
| Starr et al. | Platelet transfusion for trauma resuscitation | |
| Castelli et al. | Comparative evaluation of two autotransfusion devices in a 72h survival swine model of surgically induced controlled splenic bleeding | |
| RU2633588C2 (ru) | Способ эндоскопического лечения язвенного гастродуоденального кровотечения | |
| Marsch | Disorders of Hemostasis | |
| Stewart et al. | Studies in calcium metabolism: The calcium content of corpuscles, plasma, and serum | |
| RU2632771C1 (ru) | Способ эндоскопической остановки желудочно-кишечного кровотечения | |
| ES2782723B2 (es) | Procedimiento para obtencion y conservacion de factores de crecimiento de alta pureza y sus usos | |
| Oliver Jr et al. | Heparin-coated versus uncoated extracorporeal circuit in patients undergoing coronary artery bypass graft surgery | |
| Chen et al. | The role of ADAM proteolysis and mechanical damage in non-physiological shear stress induced platelet receptor shedding |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC41 | Official registration of the transfer of exclusive right |
Effective date: 20180801 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20200408 |