RU2560569C2 - Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations - Google Patents
Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations Download PDFInfo
- Publication number
- RU2560569C2 RU2560569C2 RU2013159073/10A RU2013159073A RU2560569C2 RU 2560569 C2 RU2560569 C2 RU 2560569C2 RU 2013159073/10 A RU2013159073/10 A RU 2013159073/10A RU 2013159073 A RU2013159073 A RU 2013159073A RU 2560569 C2 RU2560569 C2 RU 2560569C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- virus
- virological
- vaccines
- genetic
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 title claims abstract description 5
- 241000700565 Swinepox virus Species 0.000 title abstract description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 5
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 claims abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 claims abstract description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 34
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 claims description 12
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 abstract description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 13
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000670091 Haematopinus suis Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010037888 Rash pustular Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 244000309715 mini pig Species 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000011265 semifinished product Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к штаммам вируса оспы свиней (ВОС), и может быть использовано в научно-исследовательских институтах и диагностических центрах в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований, изготовления вакцин и диагностических препаратов.The invention relates to the field of veterinary virology, in particular to strains of swine smallpox virus (BOC), and can be used in research institutes and diagnostic centers as a reference strain during virological, molecular genetic, monitoring studies, vaccine manufacturing and diagnostic preparations.
Согласно принятой классификации вирус оспы свиней (Swinepox) относится к семейству Poxviridae род Suipoxvirus. Вирус является этиологическим агентом высококонтагиозного заболевания, характеризующегося лихорадкой и пузырьково-пустулезной сыпью. Оспа свиней регистрируется во всех странах мира и поражает животных всех возрастов, хотя наиболее тяжелое течение наблюдают у молодняка (0-4 мес.) (4, 5). Источник и резервуар инфекции - больные свиньи. Передача вируса осуществляется в основном алиментарным путем и через механических переносчиков - свиную вошь (Haematopinus suis), в которой вирус сохраняется в течение года. К вирусу оспы свиней восприимчивы только свиньи. Вирус способен индуцировать стабильный иммунитет. Ограниченный круг естественно восприимчивых животных и способность индуцировать стабильный защитный иммунитет позволяет использовать данный вирус в качестве вектора экспрессии (1, 2, 3).According to the accepted classification, swinepox virus (Swinepox) belongs to the family Poxviridae of the genus Suipoxvirus. The virus is the etiological agent of a highly contagious disease characterized by fever and vesiculate pustular rash. Smallpox of pigs is registered in all countries of the world and affects animals of all ages, although the most severe course is observed in young animals (0-4 months) (4, 5). The source and reservoir of infection are sick pigs. The transmission of the virus is carried out mainly by alimentary route and through mechanical carriers, the louse (Haematopinus suis), in which the virus persists for a year. Only pigs are susceptible to the smallpox virus in pigs. The virus is able to induce stable immunity. A limited range of naturally susceptible animals and the ability to induce stable protective immunity allows the use of this virus as an expression vector (1, 2, 3).
Целью данного изобретения является получение нового штамма вируса оспы свиней, обладающего стабильными культуральными и антигенными свойствами для использования в качестве референс-штамма при проведении вирусологических, молекулярно-генетических, мониторинговых исследований и изготовления диагностических и вакцинных препаратов.The aim of this invention is to obtain a new strain of swine smallpox virus with stable cultural and antigenic properties for use as a reference strain when conducting virological, molecular genetic, monitoring studies and the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.
Поставленная цель достигается путем выделения вируса из патологического материала от больных поросят с участка доращивания крупного свиноводческого комплекса Белгородской области. Вирус выделили с использованием культур клеток.This goal is achieved by isolating the virus from pathological material from sick piglets from the growing area of a large pig-breeding complex of the Belgorod region. The virus was isolated using cell cultures.
Штамм является новым, ранее неизвестным, выделенным на территории РФ и обозначен как штамм «Алексеевский».The strain is a new, previously unknown, isolated on the territory of the Russian Federation and is designated as the strain "Alekseevsky."
Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВНИИВВиМ за инв. №3072 от 20.11.13.The strain is deposited in the collection of microorganisms VNIIVViM for inv. No. 3072 dated 11/20/13.
Новый штамм «Алексеевский» характеризуется следующими признаками и свойствами.The new strain "Alekseevsky" is characterized by the following features and properties.
Морфологические свойства. При электронно-микроскопических исследованиях в вируссодержащем материале обнаружены вирусные частицы размером 300×250×200 нм, морфологически тождественные представителям рода Suipoxvirus семейства Poxviridae.Morphological properties. Electron microscopic studies revealed virus particles 300 × 250 × 200 nm in size in a virus-containing material, morphologically identical to representatives of the genus Suipoxvirus of the Poxviridae family.
Культуральные свойства. Штамм «Алексеевский» размножается в первичных культурах почки и тестикул поросенка, а также в перевиваемых культурах свиного происхождения СПЭВ, РК-15. Репродукция вируса сопровождается цитопатическим действием, приводящим к полной деструкции монослоя на 3-4 сутки культивирования. В культурах гетерологичного происхождения (ПС, МДВК, VERO) вирус не размножается.Cultural properties. Strain "Alekseevsky" propagates in primary cultures of the kidney and testicles of the piglet, as well as in transplanted cultures of pig origin SPEV, RK-15. Reproduction of the virus is accompanied by a cytopathic effect, leading to complete destruction of the monolayer on 3-4 days of cultivation. In cultures of heterologous origin (PS, MDVC, VERO), the virus does not multiply.
Инфекционная активность. Обладает высокой инфекционной активностью, накапливается в культурах клеток свиного происхождения 6,0-7,5 lg ТЦД50/см3. Этот штамм размножается в культурах клеток СПЭВ в титре 6,0-7,0 lg ЦПД50/см3, РК-15 - в титре 7,0-7,5 lg ЦПД 50/см3.Infectious activity. It has a high infectious activity and accumulates in cell cultures of porcine origin 6.0-7.5 lg TCD 50 / cm3 . This strain propagates in SPEV cell cultures in a titer of 6.0-7.0 lg CPD 50 / cm3 , RK-15 in a titer of 7.0-7.5 lg CPD 50 / cm3 .
Способ выращивания. Штамм культивируют в монослое перевиваемых линий культур клеток свиного происхождения (СПЭВ, РК-15) в стационарных и роллерных культурах. При оптимальных условиях максимальное накопление достигается через 72-96 часов культивирования. В качестве поддерживающей среды используют среду Игла-МЭМ с 2% сыворотки КРС.The method of growing. The strain is cultivated in a monolayer of transplantable cell culture lines of pig origin (SPEV, PK-15) in stationary and roller cultures. Under optimal conditions, maximum accumulation is achieved after 72-96 hours of cultivation. As a supporting medium, Igla-MEM medium with 2% cattle serum is used.
Антигенные свойства. Вызывает образование вируснеитрализующих антител.Antigenic properties. Causes the formation of virus-neutralizing antibodies.
Гемаглютинирующие свойства. Не обладает.Hemagglutinating properties. Does not possess.
Патогенность для человека. Не патогенен.Pathogenicity for humans. Not pathogenic.
Патогенные свойства. Штамм патогенен только для свиней всех пород и возрастных групп. При экспериментальном заражении взрослых свиней вызывает повышение температуры тела (41°-41,5) и потерю веса, а также характерные оспенные поражения на слабопокрытых щетиной местах. При отсутствии осложнений выздоровление наступает на 21-28 сутки. У молодняка наблюдается более тяжелое течение.Pathogenic properties. The strain is pathogenic only for pigs of all breeds and age groups. During experimental infection of adult pigs, it causes an increase in body temperature (41 ° -41.5) and weight loss, as well as characteristic smallpox lesions in places that are poorly covered with bristles. In the absence of complications, recovery occurs on the 21-28th day. Young animals have a more severe course.
Контагиозность. Штамм контагиозен для свиней. Интактные свиньи заболевают оспой свиней при совместном содержании с инфицироваными животными.Contagiousness. The strain is contagious to pigs. Intact pigs develop swine smallpox when kept together with infected animals.
Контаминация бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Штамм не контаминирован бактериями, грибами, микоплазмами и посторонними вирусами.Contamination with bacteria, fungi, mycoplasmas and extraneous viruses. The strain is not contaminated by bacteria, fungi, mycoplasmas and extraneous viruses.
Способ и срок хранения, периодичность пассажей. Штамм хранят при минус 40°С и «освежают» пассированием в культуре клеток РК-15, СПЭВ. Периодичность освежения штамма один раз в 10 лет. Сущность изобретения поясняется следующими примерами.Method and shelf life, frequency of passages. The strain is stored at minus 40 ° C and is "freshened" by passaging in a culture of RK-15 cells, SPEV. The frequency of refreshment of the strain once every 10 years. The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Накопление вируса в культуре клеток СПЭВ и РК-15. В табл. 1 приведены сведения по культивированию штамма «Алексеевский» вируса оспы свиней в монослое культур клеток СПЭВ и РК-15.Example 1. The accumulation of the virus in cell culture SPEV and PK-15. In the table. 1 shows information on the cultivation of the strain "Alekseevsky" virus of smallpox of pigs in a monolayer of cell cultures SPEV and RK-15.
Как следует из табл. 1, титры выделенного вируса в культуре клеток СПЭВ на уровне третьего пассажа составили 6,5-7,0 lg ЦПД50/см3, в культуре клеток РК-15 на уровне этого же пассажа 7,25-7,5 lg ЦПД 50/см3, что обеспечивает возможность использования культурального вирусного материала для проведения экспертизных исследований, в частности реакции нейтрализации.As follows from the table. 1, titers of the isolated virus in the culture of SPEV cells at the level of the third passage amounted to 6.5-7.0 lg CPD 50 / cm3 , in the culture of cells of PK-15 at the level of the same passage 7.25-7.5 lg CPD 50 / cm3 , which makes it possible to use cultural viral material for expert studies, in particular the neutralization reaction.
Как видно из таблицы 2, штамм «Алексеевский» как нативный, так и лиофилизированный стабилен при длительном пассировании в культурах клеток. Множественность заражения 0,03-0,05 ТЦД50/кл. Стабильность штамма обеспечивает возможность использования вирусного материала для конструирования инактивированных вакцин и диагностических препаратов.As can be seen from table 2, the strain "Alekseevsky" both native and lyophilized is stable during prolonged passage in cell cultures. The multiplicity of infection of 0.03-0.05 TCD 50 / CL. Stability of the strain allows the use of viral material for the construction of inactivated vaccines and diagnostic preparations.
Пример 3. Использование вируса оспы свиней, штамм «Алексеевский», для приготовления инактивированной вакцины против оспы свиней.Example 3. The use of the virus of smallpox of pigs, strain "Alekseevsky", for the preparation of inactivated vaccines against smallpox of pigs.
Для получения производственного вируса отбирали 1-2-х дневную культуру клеток РК-15 с полным равномерным монослоем, выращенную на культуральных пластиковых одноразовых матрасах с посадочной площадью 225 см2. Из матрасов удаляли ростовую среду и в каждый вносили по 100 мл поддерживающей питательной среды. Затем вносили вирус, множественность заражения при этом составляла 0,03-0,05 ТЦД50/кл. Матрасы с инфицированной культурой помещали в термостат. Выращивание вируса проводили при температуре (37,0±0,5)°С в течение 48-60 часов до проявления характерных цитопатических изменений и поражении 90-100% клеточного монослоя. Затем вирусную суспензию сливали, объединяли и хранили при температуре (-20,0±4,0)°С. Для приготовления инактивированной вакцины использовали вирус с активностью 7,0-7,5 lg ТЦД50/мл.To obtain a production virus, a 1-2-day culture of RK-15 cells with a complete uniform monolayer was grown on cultured plastic disposable mattresses with a landing area of 225 cm 2 . The growth medium was removed from the mattresses and 100 ml of supportive nutrient medium was introduced into each. Then the virus was introduced; the multiplicity of infection was 0.03-0.05 TCD 50 / cell. Infected culture mattresses were placed in a thermostat. Virus cultivation was carried out at a temperature of (37.0 ± 0.5) ° C for 48-60 hours until the manifestation of characteristic cytopathic changes and the defeat of 90-100% of the cell monolayer. Then the viral suspension was poured, combined and stored at a temperature of (-20.0 ± 4.0) ° C. To prepare an inactivated vaccine, a virus with an activity of 7.0-7.5 lg TCD 50 / ml was used.
Биологическую активность вируса определяли титрованием на монослойной культуре клеток РК-15.The biological activity of the virus was determined by titration on a monolayer culture of PK-15 cells.
Инактивацию вируса проводили β-пропиолактоном в разведении 1:4000, поддерживая pH раствора в пределах 7,0-7,4. Вирус инактивировали при комнатной температуре (21±4)°C в течение 2 ч на магнитной мешалке, а затем при 2-6°C в течение ночи (12-14 ч). Полноту инактивации вируса в полуфабрикате проверяли путем проведения 3-х пассажей инактивированного вируса в культуре клеток РК-15. Для этого в 3 матраса с посадочной площадью 25 см2 с монослоем 1-2-х суточной культуры клеток РК-15 вносили по 1 см3 вируса в разведении 1:10, выдерживали 20 мин при температуре (37,0±0,5)°C, затем монослой отмывали питательной средой, в матрасы заливали поддерживающую среду и инкубировали в течение 5 суток. Для проведения пассажей испытуемую культуру клеток кратковременно замораживали-оттаивали, содержимое матрасов в разведении 1:10 переносили в 1-2-х дневную культуру клеток РК-15 с полным равномерным монослоем и инкубировали еще 5 дней. Полноту инактивации оценивали по отсутствию ЦПД в культуре клеток РК-15 на третьем пассаже вируса.Inactivation of the virus was performed with β-propiolactone in a dilution of 1: 4000, maintaining the pH of the solution in the range of 7.0-7.4. The virus was inactivated at room temperature (21 ± 4) ° C for 2 hours on a magnetic stirrer, and then at 2-6 ° C overnight (12-14 hours). The completeness of the inactivation of the virus in the semi-finished product was checked by conducting 3 passages of the inactivated virus in the cell culture of the PK-15. For this, 1 cm 3 of virus at a dilution of 1:10 was introduced into 3 mattresses with a landing area of 25 cm 2 with a monolayer of a 1-2-day culture of RK-15 cells, kept for 20 minutes at a temperature of (37.0 ± 0.5) ° C, then the monolayer was washed with a nutrient medium, a support medium was poured into the mattresses and incubated for 5 days. To conduct the passages, the test cell culture was briefly frozen-thawed, the contents of the mattresses at a 1:10 dilution were transferred to a 1-2-day PK-15 cell culture with a complete uniform monolayer and incubated for another 5 days. The completeness of inactivation was assessed by the absence of CPD in the PK-15 cell culture at the third passage of the virus.
К инактивированной суспензии вируса добавляли 6%-ный раствор гидроокиси алюминия (ГОА) до конечной концентрации 5-10 мг/мл, тщательно перемешивали и оставляли при температуре (2-6)°C для адсорбции вирусного антигена. Через 24 часа осторожно, не взбалтывая, декантировали 1/3 часть надосадка, доливали инактивированную вирусную суспензию до первоначального объема, тщательно перемешивали и выдерживали еще 24 часа.A 6% solution of aluminum hydroxide (GOA) was added to an inactivated virus suspension to a final concentration of 5-10 mg / ml, mixed thoroughly and left at a temperature of (2-6) ° C to adsorb the viral antigen. After 24 hours, gently, without shaking, 1/3 of the supernatant was decanted, the inactivated virus suspension was added to the original volume, thoroughly mixed and kept for another 24 hours.
Приготовленная таким образом вакцина представляла собой суспензию бледно-розового цвета с белым осадком.The vaccine thus prepared was a pale pink suspension with a white precipitate.
Проверку иммуногенных свойств вакцины осуществляли на лабораторных животных - кроликах.Checking the immunogenic properties of the vaccine was carried out on laboratory animals - rabbits.
До иммунизации и через 21 день после вакцинации от животных отбирали кровь и исследовали сыворотку на наличие вируснейтрализующих (ВН) антител в реакции нейтрализации (PH). PH проводили по стандартной методике со 100-300 ТЦД50 вируса оспы микрометодом в планшетах (разведение сывороток с 1:2 до 1:256) с использованием культуры клеток РК-15. Вакцина вызывала образование ВН-антител у испытуемых животных в титрах 1:8-1:16.Prior to immunization and 21 days after vaccination, blood was collected from animals and the serum was examined for the presence of virus-neutralizing (BH) antibodies in a neutralization (PH) reaction. PH was carried out according to the standard method with 100-300 TCD 50 of smallpox virus by micromethod in tablets (dilution of serum from 1: 2 to 1: 256) using a PK-15 cell culture. The vaccine caused the formation of BH antibodies in the test animals in titers of 1: 8-1: 16.
Пример 4. Приготовление культурального специфического антигена вируса оспы свиней штамм «Алексеевский».Example 4. Preparation of culture-specific antigen of smallpox virus of pig strain "Alekseevsky".
Монослойную культуру клеток РК-15, выращенную в матрасах с посадочной площадью 225 см3, заражали вирусом оспы свиней штамм «Алексеевский» с множественностью заражения 0,03 ТЦД50/кл. Вирус культивировали при (37,0±0,5)°C, поддерживая pH среды в пределах 7,0-7,4 в течение 24-48 часов до появления 30% ЦПД. Культуральную жидкость удаляли и монослой отмывали двукратно ФБР. Клетки снимали с пластика механически. Отделившиеся клетки собирали в небольшом количестве физиологического раствора, осаждали центрифугированием при 2000 об/мин в течение 10 минут. Затем клетки лизировали добавлением дистиллированной воды в объеме, равном 1/100 исходного объема вируссодержащей жидкости. Полученный материал дважды замораживали-оттаивали и обрабатывали ультразвуком 2 раза по 12 мкм в течение 1 минуты с интервалом 1 мин. Суспензию с клеточным дебрисом снова замораживали-оттаивали и удаляли клеточный детрит центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин.A monolayer culture of RK-15 cells grown in mattresses with a landing area of 225 cm 3 was infected with swine pox virus strain Alekseevsky with a multiplicity of infection of 0.03 TCD 50 / cell. The virus was cultured at (37.0 ± 0.5) ° C, maintaining the pH of the medium in the range of 7.0-7.4 for 24-48 hours until the appearance of 30% CPD. The culture fluid was removed and the monolayer was washed twice with PBS. Cells were removed from plastic mechanically. Separated cells were collected in a small amount of saline, precipitated by centrifugation at 2000 rpm for 10 minutes. Then, the cells were lysed by adding distilled water in a volume equal to 1/100 of the initial volume of the virus-containing liquid. The resulting material was twice frozen, thawed and sonicated 2 times in 12 microns for 1 minute with an interval of 1 minute. The suspension with cell debris was again frozen-thawed and cell detritus was removed by centrifugation at 3000 rpm for 30 minutes.
Полученный осветленный лизат инактивировали β-пропиолактоном. С этой целью в 50 мл надосадка лизированных клеток, содержащего антиген вируса оспы свиней, вносили 0,05 мл β-пропиолактона и выдерживали 18 часов при (4,0±2,0)°C. Полноту инактивации антигена проверяли в 3-х последовательных пассажах в чувствительной культуре клеток РК-15. Полученный антиген не содержал остаточной инфекционности и обладал активностью в реакции диффузионной преципитации 1:2-1:4.The resulting clarified lysate was inactivated with β-propiolactone. For this purpose, 0.05 ml of β-propiolactone was added to 50 ml of the supernatant of lysed cells containing pig pox virus antigen and kept for 18 hours at (4.0 ± 2.0) ° C. The completeness of antigen inactivation was checked in 3 consecutive passages in a sensitive PK-15 cell culture. The resulting antigen did not contain residual infectivity and had activity in the reaction of diffusion precipitation 1: 2-1: 4.
Источники информацииInformation sources
1. Foley, P.L., P.S. Paul, R.L. Levings, S.К. Hanson, and L.A. Middle. 1991. Swinepox virus as a vector for the delivery of immunogens. Ann. N.Y. Acad. Sci. 646:220-222.1. Foley, P.L., P.S. Paul, R.L. Levings, S.K. Hanson, and L.A. Middle. 1991. Swinepox virus as a vector for the delivery of immunogens. Ann. N.Y. Acad. Sci. 646: 220-222.
2. Tripathy, D.N. 1999. Swinepox virus as a vaccine vector for swine pathogens. Adv. Vet. Med. 41:463-480.2. Tripathy, D.N. 1999. Swinepox virus as a vaccine vector for swine pathogens. Adv. Vet. Med. 41: 463-480.
3. Williams, P.P., M.R. Hall, and M.D. McFarland. 1989. Immunological responses of cross-bred and in-bred miniature pigs to swine poxvirus. Vet. Immunol. Immunopathol. 23:149-159.3. Williams, P.P., M.R. Hall, and M.D. McFarland 1989. Immunological responses of cross-bred and in-bred miniature pigs to swine poxvirus. Vet. Immunol. Immunopathol. 23: 149-159.
4. MUNZ, E.; DUMBELL, K. Swinepox. In: COETZER, J.A.W.; THOMSON, G.R.; TUSTIN, R.C. (Eds.). Infectious diseases of livestock. New York: Oxford University Press, 1994. v. l. p. 627-629.4. MUNZ, E .; DUMBELL, K. Swinepox. In: COETZER, J.A.W .; THOMSON, G.R .; TUSTIN, R.C. (Eds.). Infectious diseases of livestock. New York: Oxford University Press, 1994. v. l. p. 627-629.
5. BARLOW, A.M. & G RIST, C. An outbreak of congenital pig pox. Pig. J. Proceed. Sec, v.46, p. l18-121, 2000.5. BARLOW, A.M. & G RIST, C. An outbreak of congenital pig pox. Pig. J. Proceed. Sec, v. 46, p. l18-121, 2000.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013159073/10A RU2560569C2 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013159073/10A RU2560569C2 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013159073A RU2013159073A (en) | 2015-07-10 |
| RU2560569C2 true RU2560569C2 (en) | 2015-08-20 |
Family
ID=53538156
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2013159073/10A RU2560569C2 (en) | 2013-12-30 | 2013-12-30 | Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2560569C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2647757C1 (en) * | 2016-11-21 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | Volgogradsky strain of cattle nodular dermatitis virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
| RU2647768C1 (en) * | 2016-11-23 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | "kalmykia-16" strain of sheep pox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080305129A1 (en) * | 2005-06-16 | 2008-12-11 | Anton Mayr | Highly Attenuated Pox Virus Strains, Method for the Production Thereof and the Use Thereof as Paramunity Inducers or For Producing Vector Vaccines |
-
2013
- 2013-12-30 RU RU2013159073/10A patent/RU2560569C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20080305129A1 (en) * | 2005-06-16 | 2008-12-11 | Anton Mayr | Highly Attenuated Pox Virus Strains, Method for the Production Thereof and the Use Thereof as Paramunity Inducers or For Producing Vector Vaccines |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2647757C1 (en) * | 2016-11-21 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | Volgogradsky strain of cattle nodular dermatitis virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
| RU2647768C1 (en) * | 2016-11-23 | 2018-03-19 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр вирусологии и микробиологии" (ФГБНУ ФИЦВиМ) | "kalmykia-16" strain of sheep pox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2013159073A (en) | 2015-07-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101869702B (en) | Vaccine produced by suspension microcarrier cell culture system and method thereof | |
| CN109439634A (en) | Pseudorabies virus genetic engineering attenuated vaccine strain and its application | |
| US20220259569A1 (en) | Methods for growing african swine fever virus in fetal porcine lung alveolar macrophage cells | |
| CN106190988B (en) | Inactivated feline calicivirus CH-JL5 strain vaccine | |
| Wang et al. | Comparison of the sensitivity of three cell cultures to ORFV | |
| RU2560569C2 (en) | Alekseevskiy strain of swinepox virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations | |
| CN103864931B (en) | A kind of preparation of pseudoabies standard positive serum and freeze-drying store method thereof | |
| CN118480515B (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus NADC30 virus strain and application thereof | |
| CN101380470B (en) | Pig parvovirus live vaccine | |
| ES2594403T3 (en) | Methods of cultivation of bacterial species of the Anaplasmataceae family | |
| Darke et al. | Experimental infection of Boa constrictor with an orthoreovirus isolated from a snake with inclusion body disease | |
| CN102961742A (en) | Bivalent inactivated vaccine of porcine circovirus type 2 and porcine parvovirus and preparation method thereof | |
| RU2647757C1 (en) | Volgogradsky strain of cattle nodular dermatitis virus for virological, molecular-genetic, monitoring studies, production of vaccines and diagnostic preparations | |
| CN102805862A (en) | Preparation method for SFTS bunyavirus purification and inactivation vaccines through VERO cell culture | |
| RU2675995C1 (en) | Strain "vn-3" of hepatitis virus of ducklings of type i of the genus avihepatovirus of the family picornaviridae for the production of vaccine drugs and diagnostic kits | |
| Li et al. | Immunogenicity assessment of rift valley fever virus virus-like particles in BALB/c mice | |
| RU2770815C1 (en) | Strain "tyumen/2019" of the virus of infectious nodular dermatitis (lumpy dermatitis) of cattle dermatitis nodularis bovum of the genus capripoxvirus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of infectious nodular dermatitis of cattle | |
| Salmakov et al. | Comparative study of the immunobiological properties of live brucellosis vaccines | |
| CN104388396A (en) | Porcine pseudorabies virus strain, inactivated vaccine prepared from porcine pseudorabies virus strain and application of porcine pseudorabies virus strain | |
| RU2708335C1 (en) | Strain "privolzhsky" of a virus of nodular dermatitis in cattle dermatitis nodularis bovum, a genus capripoxvirus for manufacturing biopreparations for diagnostics and specific prevention of infectious dermatitis of bovine animals | |
| RU2399668C1 (en) | Swine transmissible gastroenteritis "t=-96" virus strain used for manufacturing of diagnostic and vaccine preparations | |
| CN113736749A (en) | Avian influenza virus strain and application thereof | |
| RU2825899C1 (en) | Live cultural dry vaccine against porcine reproductive-respiratory syndrome and method for preparing vaccine | |
| RU2266326C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2515058C1 (en) | Associated inactivated emulsion bovine viral diarrhoea, rotavirus and coronavirus infections vaccine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171231 |