RU2491331C1 - Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет - Google Patents
Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет Download PDFInfo
- Publication number
- RU2491331C1 RU2491331C1 RU2012119456/10A RU2012119456A RU2491331C1 RU 2491331 C1 RU2491331 C1 RU 2491331C1 RU 2012119456/10 A RU2012119456/10 A RU 2012119456/10A RU 2012119456 A RU2012119456 A RU 2012119456A RU 2491331 C1 RU2491331 C1 RU 2491331C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- consortium
- helveticus
- children under
- bifidum
- microflora
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 244000005706 microflora Species 0.000 title claims abstract description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 title claims abstract description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 241001655328 Bifidobacteriales Species 0.000 title abstract 2
- 206010017943 Gastrointestinal conditions Diseases 0.000 title abstract 2
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 claims abstract description 28
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 claims abstract description 17
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 claims abstract description 14
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims abstract description 12
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 claims abstract description 10
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 claims abstract 4
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 52
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 37
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 28
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 10
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 10
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 claims description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 8
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 claims description 8
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 claims description 8
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 5
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 5
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 5
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 5
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 4
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 235000019740 Vitamins/micromineral premix Nutrition 0.000 claims 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 22
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 abstract description 14
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 abstract description 12
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 abstract description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 3
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 18
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 8
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 5
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 4
- 235000020299 breve Nutrition 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 238000009343 monoculture Methods 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 241001134770 Bifidobacterium animalis Species 0.000 description 2
- 241001134772 Bifidobacterium pseudocatenulatum Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 2
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 2
- 108020004530 Transaldolase Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 description 2
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 206010059447 Allergic colitis Diseases 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010023648 Lactase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028601 Transaldolase Human genes 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 229940118852 bifidobacterium animalis Drugs 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000774 hypoallergenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000031068 symbiosis, encompassing mutualism through parasitism Effects 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Консорциум бифидобактерий и лактобацилл содержит Bifidobacterium bifidum 0V-19, B.bifidum 791, B.longum B379M, B.breve OV-12, B.infantis 73-15, Lactobacillus helveticus К3ш24, L.helveticus NK-1, L.casei KHM-12, используется для приготовления бактерийных препаратов, в составе биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет. Консорциум высокотехнологичен, накапливает биомассу на питательных средах в короткие сроки с высокой концентрацией пробиотических микроорганизмов, обладает кислотообразующими и антагонистическими свойствами в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Получают консорциум совместным культивированием штаммов с учетом длительности экспоненциальной фазы роста каждого из них, на основании чего устанавливают очередность засева питательной среды заданного состава. Использование консорциума в составе бактерийного препарата для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей и биологически активной добавки к пище обеспечивает более эффективную и быструю коррекцию микрофлоры ЖКТ ребенка. 4 н.п. ф-лы, 10 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть использовано для приготовления лечебно-профилактических средств пробиотической направленности, предназначенных для коррекции дисбиотических нарушений микрофлоры желудочно-кишечного тракта и поддержания ее колонизационной резистентности у детей в возрасте от рождения до 3-х лет. Средства для профилактики и лечения конструируются преимущественно на основе двух групп микроорганизмов - бифидобактерий и лактобацилл. Бифидобактерий являются наиболее значимыми представителями микрофлоры человеческого организма - как по удельному весу в составе микробиоценоза, так и по их многофункциональной роли в поддержании гомеостаза организма. У детей на грудном вскармливании они составляют практически 100% микрофлоры толстой кишки. Бифидобактерий оказывают положительное воздействие на становление систем пищеварения, иммунитета, кроветворения ребенка [1, 2, 3]. Бифидобактерий обеспечивают колонизационную резистентность в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; обладают иммуномодулирующим действием; синтезируют аминокислоты, витамины, летучие жирные кислоты, ферменты, участвующие в процессах пищеварения и обмена веществ; способствуют усвоению железа, кальция, поддержанию водно-солевого баланса [4, 5]. Частичная или полная элиминация бифидобактерий приводит к угнетению иммунных сил организма, развитию дисбиоза.
Многофакторное позитивное воздействие на организм ребенка позволяет рассматривать бифидобактерий как эффективный биокорректор и основу для создания препаратов, обладающих регулирующим и стимулирующим воздействием на организм.
В России традиционным подходом к бактериотерапии является назначение больным препаратов на основе культур штаммов бифидобактерий с доказанным пробиотическим действием преимущественно в виде монокультур штаммов Bifidobacterium bifidum 1, В. bifidum 791, B.bifidum ЛВА-3, B.longum В379М, B.adolescentis MC-42. Это, прежде всего, широко применяющийся лечебный препарат "Бифидумбактерин" [6].
При этом следует отметить, что в микробиоценозе кишечника человека бифидобактерий представлены одновременно многими видами - как отдельными, так и в ассоциациях [7]. Это позволяет предположить, что введение в состав пробиотических препаратов сразу нескольких видов бифидобактерий будет способствовать повышению их лечебной и профилактической эффективности.
Подобный подход предлагается в Российском патенте [8], касающемся консорциума на основе 9 штаммов бифидобактерий B.bifidum 791, B.bifidum ЛВА-3, B.longum В379М, B.longum Я-3, В.breve 79-119, В.breve 79-88, B.infantis 73-15, B.infantis 79-43, B.adolescentis Г7513.
Вместе с тем, указанный консорциум не учитывает, что рациональный подход к конструированию и применению новых средств коррекции микрофлоры должен основываться на таком явлении, как аутогенная сукцессия - последовательность смены биоценозов в определенной экологической нише [9, 10]. В ходе этого процесса в видовом сообществе происходит последовательное вытеснение одних видов другими вследствие их биоэкологических преимуществ в определенных условиях. При этом образуется так называемый сукцессионный ряд с образованием конечного -устойчивого биоценоза. Все биоценозы в живой природе развиваются по законам сукцессии. Что касается микроэкологии человеческого организма, данная закономерность прослеживается в смене видового состава бифидофлоры в процессе онтогенеза, совпадающей с критическими периодами развития в детском и подростковом возрасте: становлением иммунной и ферментативной систем, изменением гормонального фона, сменой пищевого рациона. В то же время, видовой состав бифидофлоры взрослых людей относительно стабилен [11, 12].
Таким образом, препараты должны представлять собой ассоциации доминирующих микроорганизмов, которые максимально приближены по составу к естественному микробиоценозу желудочно-кишечного тракта человека в определенный возрастной период. Это является обоснованным подходом, обеспечивающим индивидуализацию бактериотерапии и повышение ее эффективности, способствуя устойчивой локализации или новому заселению биотопа теми видами бифидобактерий, которые преобладают в микробиоценозе конкретного человека.
Помимо бифидобактерий, в биопрепаратах-пробиотиках широко используются лактобациллы. Эти микроорганизмы обладают высокой антагонистической активностью против широкого спектра патогенных и условно-патогенных микробов, стимулируют неспецифическую резистентность организма человека, обладают выраженным воздействием на ферментативную систему. Обладая бета-галактозидазной активностью, нивелируют лактазную недостаточность, которая особенно часто встречается у детей первого года жизни. Применение метода совместного культивирования требует анализа межштаммовых взаимодействий микроорганизмов в условиях in vitro [13]. Пригодными для совместного культивирования считают биосовместимые штаммы, т.е. штаммы, взаимоотношения которых расцениваются как симбиоз.
Совместное культивирование двух и более видов лактобацилл повышает их технологичность и расширяет спектр функциональной активности.
Проведенные эксперименты по изучению биосовместимости различных штаммов, позволили выделить группу лактобацилл, наиболее перспективных в отношении совместного культивирования. Наибольший интерес из этой группы лактобактерий представляют штаммы L. helveticus К3ш24, L. helveticus NK-1 и L.casei KHM-I2. Они обладают выраженным антагонизмом по отношению к условно-патогенным микроорганизмам и устойчивостью к спектру антибактериальных средств. Кроме того, установлена высокая степень биосовместимости этих штаммов, что определило целесообразность их совместного культивирования.
Известен Патент РФ №2180915 [14]. В данном патенте предлагается консорциум бифидобактерий и лактобацилл следующего состава: Bifidobacterium bifidum 1, B.bifidum 791, B.breve 79-88, B.breve 79-119, В.infantis 79-43, В. infantis 75-13, L. plantarum 8-PA-3, L.fermentum 90-TC-4. Характеризуя Патент РФ [14], следует отметить, что недостатком способа получения консорциума, заявленного в нем, является то, что консорциум получают путем объединения инокулятов культур отдельных штаммов бифидобактерий в равных долях, совместным культивированием в питательной среде в течение 10-12 часов в ферментере или 18-20 часов в стационарных условиях при темперуре 37-38° и последующим добавлением к нему культур лактобацилл в соотношении 10:1.
В настоящее время для изучения таксономии представителей микробиоты, в том числе бифидобактерий и лактобацилл, разработаны и широко применяются различные молекулярно-генетические методы, включая секвенирование, мультилокусное генотипирование и другие, что существенно пополнило наши представления о видовом многообразии этих бактерий, позволило реклассифицировать известные и выявить новые виды [15, 16]. Это тесным образом связано с разработкой новых пробиотических препаратов, обладающих иммуномодулирующим действием, широким набором свойств, определяющих метаболическую и антагонистическую активность.
Так, изучение вышеперечисленных штаммов молекулярно-генетическими методами показало несоответствие в видовой принадлежности некоторых штаммов, идентифицированных ранее с помощью биохимических тестов. Так, штамм L.fermentum 90-ТС-4 показал себя, как L.plantarum. Штамм B.bifidum 1, широко используемый в производстве пробиотиков, оказался природным рекомбинантом, состоящим из двух клонов: B.bifidum и B.breve. Данная информация говорит о необходимости новых подходов к конструированию мультипробиотических препаратов.
Изучение видового состава бифидофлоры детей в возрасте до 3 лет на основе амплификации и секвенирования фрагментов двух генов: 16S рибосомальной РНК (16S) и трансальдолазы (tal) показало, что виды B.infantis и B.breve, которые ранее считались постоянными обитателями желудочно-кишечного тракта ребенка, в численном отношении уступают такому виду, как B.pseudocatenulatum (10% и 17%) [17]. Вид B.bifidum остается преобладающим в микробиоценозе ребенка. Постоянно и в высоком процентном соотношении к другим видам в последние годы присутствует вид B.longum [18]. Вместе с тем, вид B.pseudocatenulatum, по мнению ряда авторов [19], ассоциируется с атопической экземой у детей. Это касается также вида B.animalis [20]. Reiter [21] причисляет их к подвидам B.adolescentis, который нехарактерен для микробиоценоза детей. Такие виды нефизиологичны для детей и не могут быть использованы в составе средств коррекции микрофлоры данной возрастной группы.
Представленные данные убедительно показывают, что для эффективной коррекции дисбиотических нарушений микробиоценоза детей данной возрастной группы в состав препарата должны входить штаммы с доказанным пробиотическим эффектом и в видовом отношении комплементарных бифидофлоре детей до 3-х лет. Важное значение имеет включение в состав средств коррекции микрофлоры штаммов, выделенных от современных детей.
Это относится к всесторонне изученным и запатентованным штаммам бифидобактерий, выделенным от здоровых детей на грудном вскармливании: штамм В. breve OV-12 [22], штамм В. bifidum OV-19 [23]. Штамм В. breve OV-12 обладает более высокой антагонистической активностью к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, чем штамм В. breve 79-88. Патент РФ №2373274 на штамм В. breve OV-12 отмечен дипломом, как вошедший в 100 лучших изобретений 2011 года под №39.
Штамм В. bifidum 0V-19, помимо, помимо пробиотических свойств, обладает устойчивым генотипом, в отличие от штамма В.Bifidum1.
Задачей настоящего изобретения является создание консорциума бифидобактерий и лактобацилл, по составу максимально приближенного к микробиоценозу детей в возрасте до 3-х лет, а также разработкой способа его получения, учитывающего биосовместимость штаммов в процессе культивирования и при дальнейшем хранении.
Техническим результатом настоящего изобретения является тот факт, что заявляемый консорциум является высокотехнологичным, накапливает биомассу на питательных средах в короткие сроки с высокой концентрацией пробиотических микроорганизмов, обладает кислотообразующими и антагонистическими свойствами в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Синергидный эффект совместного использования штаммов в консорциуме проявляется в повышении всех перечисленных свойств по сравнению с отдельными штаммами.
Консорциум бифидобактерий и лактобацилл для препаратов и БАД, предназначенный для для детей в возрасте до 3-х лет
1. Bifidobacterium bifidum OV-19 - ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского
№216, выделен из содержимого кишечника здорового ребенка, RU 2375444.
2. Bifidobacterium B.bifidum 791 - ВНИИгенетика в ЦМГТМ №В-3300, ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №80, выделен из содержимого кишечника здорового ребенка.
3. Bifidobacterium longum В379М - ВНИИгенетика в ЦМПМ №В-2000, ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №79, выделен из содержимого кишечника здорового человека.
4. Bifidobacterium breve OV-12 - ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №217, выделен из содержимого кишечника здорового ребенка, RU 2373274.
5. Bifidobacterium infantis 73-15 - ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №155, выделен из содержимого кишечника здорового ребенка, RU 2112034.
6. Lactobacillus helveticus К3ш24 - выделен из содержимого кишечника здорового человека, ВНИИгенетика №ЦМПМ В-3190, ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №42.
7. Lactobacillus helveticus NK-1 - выделен из содержимого кишечника здорового человека ВНИМИ ЦЛМ №22/10, ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №54,
8. Lactobacillus casei КНМ-12 - ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского №12, выделен из молочного продукта.
Задачей настоящего изобретения является также разработка определенной схемы совместного культивирования отдельных культур для получения консорциума.
Техническим результатом предлагаемой схемы культивирования отдельных штаммов для получения консорциума является отсутствие взаимного ингибирования штаммов и расширение спектра ферментативной и антагонистической активности.
Способ получения консорциума основан на предварительном изучении и подборе для совместного культивирования штаммов по принципу биосовместимости и с учетом кинетики роста каждого из них.
Алгоритмом к созданию консорциума бифидобактерий и лактобацилл является совместное культивирование определенных штаммов с учетом длительности экспоненциальной фазы роста каждого из них и численного соотношения в микробиоценоза кишечника бифидобактерий и лактобацилл, на основании чего определяется временная точка засева питательной среды при поэтапном внесении инокулятов монокультур.
По оптическому стандарту мутности устанавливают концентрацию ОЕ/мл, соответствующую 1 млрд клеток бифидобактерий. Лактобациллы, являясь микроаэрофиллами, поглощая остаточный кислород из среды, создают благоприятные условия для развития бифидобактерий. По оптическому стандарту мутности устанавливают концентрацию ОЕ/мл, соответствующую 1 млрд клеток. При подборе дозы инокулята необходимо учитывать также соотношение бифидобактерий и лактобацилл в микробиоценозе человека (100:1) и более высокую кинетику роста лактобацилл.
Посев каждой из культур бифидобактерий в ферментер, по 2% к объему среды культивирования, проводят поэтапно, с периодичностью в 30 минут, коррегируя рН культуральной жидкости 20% NaOH перед засевом нового штамма до 6,8. При засеве лактобацилл % инокулята составляет 0,1%; рН среды перед засевом должен быть более кислым - 6,0.
Очередность внесения инокулята для получения данного консорциума является следующей:
1) Bifidobacterium infantis 73-15 - 2%;
2) Bifidobacterium bifidum 791 - 2%;
3) Bifidobacterium breve OV-2 - 2%;
4) 5) Bifidobacterium bifidum OV-19 - 2%;
6) Bifidobacterium longum B379M - 2%;
7) L.casei KHM-12-0,1%;
8) L. helveticus К3ш24 - 0,1%
9) L.helveticus NK-1 - 0,1%.
Консорциум культивируют при 37°C при периодическом перемешивании в течение 8-10 часов; рН культуральной жидкости после окончания процесса составляет 3,9-4,3.
Культурально-морфологические признаки консорциума.
Клетки представляют Грам+ полиморфные палочки: бифидобактерий расположенны преимущественно в виде скоплений; в стационарной фазе роста часто отмечаются клетки с раздвоениями на концах или булавовидными утолщениями. Лактобациллы - цепочками из крупных клеток с закругленными концами.
При выращивании в ферментере в экспоненциальной фазе роста при микроскопии культура имеет вид ровных палочек разной величины, расположенных цепочками или скоплениями.
В полужидких питательных средах биомасса консорциума бифидобактерий и лактобацилл растет по всему объему питательной среды, кроме зоны аэробиоза. Морфология колоний неоднородна и зависит от входящих в консорциум штаммов, сохраняя признаки каждого из них в совокупной культуре.
Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов, входящих в консорциум.
Бифидобактерий - облигатные анаэробы, лактобациллы - микроаэрофиллы. На агаризованной поверхности образуют прозрачные колонии. Оптимальная температура выращивания составляет 37,5-38°С, рН питательных сред 7,2-7,4. Каталазу не образуют, желатин не разжижают, газообразование отсутствует. Сбраживают глюкозу с образованием кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до рН 4,3-5,1.
Результаты культивирования монокультур бифидобактерий и лактобацилл и их совместного культивирования представлены в таблице 1.
Консорциум активно размножается как на средах, принятых в производстве, со стабильно высокими показателями КОЕ/мл пробиотических микроорганизмов и продуцируемых органических кислот (таблица 2).
| Таблица 2 | ||
| Результаты культивирования консорциума на разных питательных средах | ||
| Среда выращивания | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл | |
| Число КОЕ/мл | ||
| Блаурокка | 8,6±0,6×109 | 180° |
| Гидролизатно-молочная | 7,9±0,2×109 | 220° |
| Среда для культивирования согласно изобретению | 9,2±0,3×109 | 210° |
Как видно из результатов, представленных в таблицах 1 и 2, не происходит взаимного ингибирования культур. При этом отмечается тенденция к синергидному эффекту.
Наиболее перспективной в производстве препаратов и БАД для детей младшего возраста является гидролизатно-молочная среда. В настоящее время среди детей широко распространена непереносимость коровьего молока. Данная среда гипоаллергенна, так как ее основой является гидролизат молока, состоящий из низкомолекулярных пептидов и аминокислот, которые легко усваиваются детским организмом. Среда, изготовленная на основе гидролизата молока, имеет следующий состав (в расчете на 100 л):
| Таблица 3 | |
| Состав гидролизатно-молочной среды | |
| Гидролизат молока | 50 л |
| Цистеин солянокислый | 20 г |
| Лактоза | 1000 г |
| Пептон ферментативный | 200 г |
| Агар-агар микробиологический | 100 г |
| Хлористый натрий | 400 г |
| Вода водопроводная очищенная | до 100 л |
Среда проста в приготовлении, экономически выгодна; вместе с тем, как видно из результатов, представленных в таблице 2, по ростовым свойствам уступает остальным средам.
Для устранения данного недостатка в нее были дополнительно включены добавки, стимулирующие рост пробиотических микроорганизмов - пребиотики инулин и олигофруктоза и дрожжевой аутолизат, содержащий витамины группы В, необходимые для их развития и аскорбиновая кислота, как антиоксидант. Состав усовершенствованной таким образом среды представлен в таблице 4.
| Таблица 4 | |
| Состав заявляемой среды (в расчете на 100 л) | |
| Гидролизат молока | 50 л |
| Аутолизат дрожжей | 500 г |
| Цистеин солянокислый | 20 г |
| Лактоза | 1000 г |
| Пептон ферментативный | 200 г |
| Агар-агар микробиологический | 100 г |
| Хлористый натрий | 400 г |
| Аскорбиновая кислота | 250 г |
| Инулин | 500 г |
| Олигофруктоза | 500 г |
| Вода водопроводная очищенная | до 100 л |
При изучении ростовых свойств заявляемой среды было показано, что они превосходят ростовые свойства гидролизатно-молочной среды, т.е. желаемый результат был достигнут.Результаты представлены в таблице 5.
| Таблица 5 | ||
| Сравнительные результаты культивирования консорциума на гидролизатно-молочной и заявляемой средах | ||
| Среда выращивания | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл | |
| Число КОЕ/мл | Т° | |
| Гидролизатно-молочная | 7,9±0,2×109 | 180° |
| Заявляемая среда | 9,0±0,3×109 | 210° |
Таким образом, заявляемая среда является перспективной в производстве препаратов и БАД для детей младшего возраста.
Синергидный эффект, который был отмечен при культивировании консорциума, проявляется также при определении спектра биохимической активности.
В качестве иллюстрации в таблице 6 представлено, как расширяется спектр ферментативной активности штаммов при совместном культивировании - увеличивается число усвоенных субстратов.
Синергидный эффект консорциума проявляется также в большей антагонистической активности консорциума по сравнению с монокультурами, что повышает пробиотическую значимость препарата. Данный эффект можно наблюдать по зонам задержки роста тест-культур (табл.7).
Как показывают данные, представленные в таблице 7, по антагонистической активности в отношении тест-штаммов патогенных микроорганизмов консорциум превосходит отдельные штаммы, входящие в его состав.
Таким образом, полученные результаты говорят не только о возможности совместного культивирования различных видов бифидобактерий и лактобацилл, но и синергидном эффекте консорциума штаммов, что позволяет решить сложную биотехнологическую задачу получения многокомпонентных пробиотических препаратов, имеющих определенный состав и назначение.
В предлагаемом консорциуме помимо определенного видового состава бифидобактерий и лактобацилл, отмечается определенное количественное соотношение микробных культур после культивирования. Количественный учет долевого участия отдельных штаммов производится путем подсчета числа колоний, выросших в полужидкой среде. Культура каждого штамма имеет колонии определенной морфологии и размера, что позволяет их различать. Соотношение отдельных видов бифидобактерий и лактобацилл в консорциуме представлено в таблице 8.
Примеры
1. Консорциум бифидобактерий и лактобацилл для нормализации микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей от рождения до 3-х лет и способ его получения
1-й пассаж - лиофилизированный материал штаммов В. bifidum OV-19, В. bifidum 791, В. longum В379М, В. breve OV-12, В. infantis 73-15, L. L. helveticus К3ш24, L.casei КНМ-12, L.helveticus NK-1 по отдельности регидратируют физиологическим раствором в объеме 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 107-8. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 36 ч.
2-й пассаж.- каждую из выросших культур из разведения 106-8 в объеме 3% вводят в заявляемую среду (30 мл) и культивируют 7 ч при 37-38°С.
3-й пассаж- каждую из выросших культур засевают в питательную полужидкую среду заявляемого состава и выращивают в течение 17 ч при 37-38°С.
Выращивание консорциума.
Консорциум бифидобактерий и лактобацилл получают путем совместного культивирования вышеперечисленных штаммов. Для этого подбирают строго количественное соотношение посевного материала каждого из штаммов согласно разработанной схеме. По оптическому стандарту мутности устанавливают концентрацию ОЕ/мл, соответствующую 1 млрд клеток бифидобактерий.
Процесс культивирования ведут 9 ч при при 37-38°С.
Состав среды выращивания (в расчете на 100):
| Гидролизат молока | 50 л |
| Аутолизат дрожжей | 500 г |
| Цистеин солянокислый | 20 г |
| Лактоза | 1000 г |
| Пептон ферментативный | 200 г |
| Агар-агар микробиологический | 100 г |
| Хлористый натрий | 400 г |
| Аскорбиновая кислота | 250 г |
| Инулин | 500 г |
| Олигофруктоза | 500 г |
| Вода водопроводная очищенная | до 100 л |
2. Биологически активная добавка к пище для детей до 3-х лет и способ ее получения
БАД изготавливается на основе консорциума сухой биомассы бифидобактерий и лактобацилл с добавлением функционально значимых ингредиентов.
Выращивание консорциума.
1-й пассаж - лиофилизированный материал штаммов В.bifidum OV-19, В.bifidum 791, В.breve 79-119, В. breve OV-12, В.infantis 73-15, L.helveticus К3ш24, L.casei KHM-12, L.acidophilus NK-1 по отдельности регидратируют физиологическим раствором в объеме 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 107-8. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 36 ч.
2-й пассаж.- каждую из выросших культур из разведения 106-8 в объеме 3% вводят в среду накопления (30 мл) и культивируют 7 ч при 37-38°С.
3-й пассаж - каждую из выросших культур засевают в питательную полужидкую среду и выращивают в течение 17 ч при 37-38°С.
Консорциум бифидобактерий и лактобацилл получают путем совместного культивирования вышеперечисленных штаммов. Для этого подбирают строго количественное соотношение посевного материала каждого из штаммов в соответствии. По оптическому стандарту мутности устанавливают концентрацию ОЕ/мл, соответствующую 1 млрд клеток бифидобактерий. Посев культур в ферментер проводят поэтапно, с периодичностью в 30 минут по разработанной схеме, коррегируя рН культуральной жидкости 20% NaOH перед засевом нового штамма до 6,0. Процесс культивирования ведут 8 ч при при 37-38°С.
К выращенной биомассе добавляют защитную сахарозо-желатиновую среду и обезжиренное 10%-ное молоко по 10% к объему биомассы бифидобактерий и лиофильно высушивают.
Техническим результатом, достигаемым при получении биологически активной добавки с использованием заявляемого консорциума, является более эффективная и быстрая коррекция микрофлоры и функционального состояния ЖКТ детей в возрасте до 3-х лет, а также источником витаминов, цинка и селена.
После помола биомассу смешивают с витаминно-минеральным премиксом, инулином, олигофруктозой и фасуют по 25 г в стерильные пластиковые баночки с герметично закрывающимися крышками, к которым прилагается мерная ложечка.
Рецептура биологически активной добавки представлена в таблице 9 (а, б).
3. Бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний ЖКТ у детей от рождения до 3 лет и способ его производства
1-й пассаж - лиофилизированный материал штаммов В.bifidum OV-19, В.bifidum 791, В.longum В379М, В. breve OV-12, В.infantis 73-15, L..helveticus К3ш24, L.casei КНМ-12, L.helveticus NK-1 по отдельности регидратируют физиологическим раствором в объеме 1 мл и титруют методом десятикратных разведений в питательной среде до 107-8. Инкубируют при температуре 37-38°С в течение 24 ч.
2-й пассаж.- каждую из выросших культур из разведения 106-8 в объеме 3% вводят в среду накопления (30 мл) и культивируют 7 ч при 37-38°С.
3-й пассаж- каждую из выросших культур засевают в питательную полужидкую среду и выращивают в течение 17 ч при 37-38°С. Выращивание консорциума. Консорциум бифидобактерий и лактобацилл получается путем совместного культивирования вышеперечисленных штаммов. Для этого подбирают строго количественное соотношение посевного материала каждого из штаммов согласно разработанной схеме. По оптическому стандарту мутности устанавливают концентрацию ОЕ/мл, соответствующую 1 млрд клеток бифидобактерий.
Процесс культивирования ведут 10 ч при при 37-38°С.
Состав среды выращивания (в расчете на 100):
| Гидролизат молока | 50 л |
| Аутолизат дрожжей | 500 г |
| Цистеин солянокислый | 20 г |
| Лактоза | 1000 г |
| Пептон ферментативный | 200 г |
| Агар-агар микробиологический | 100 г |
| Хлористый натрий | 400 г |
| Аскорбиновая кислота | 250 г |
| Инулин | 500 г |
| Олигофруктоза | 500 г |
| Вода водопроводная очищенная | до 100 л |
Процесс культивирования ведут 10 ч при при 37-38°С. К выращенной комплексной биомассе бифидобактерий и лактобацилл добавляют защитную сахарозо-желатиновую среду и обезжиренное 10%-ное молоко по 10% к объему биомассы, разливают в асептических условиях по 5 мл в стеклянные пенициллиновые флаконы и лиофильно высушивают.
Техническим результатом, достигаемым при получении бактериального препарата с использованием заявляемого консорциума в качестве активного вещества, является более эффективная и быстрая коррекция дисбиотических нарушений ЖКТ детей в возрасте от рождения до 3-х лет.
* Содержание КОЕ/г бифидобактерий и лактобацилл в готовом препарате не менее 108.
Список цитируемой литературы
L.Mitsuoka Т. Intestinal Flora and Host.//Asian.Med.J.-1989-V.31.-N7.-P.400-409.
2. Гончарова Г.И., Лянная A.M., Козлова Э.Л., Семенова Л.П. Роль бифидофлоры в повышении устойчивости организма к инфекции. // В сб. материалов международной конференции «Гнотобиология в теоретической и практической медицине». - М. - 1987. - С.62.
3. Шендеров Б.А. Микрофлора пищеварительного тракта - важнейший фактор поддержания микроэкологического гомеостаза хозяина. // Клиническое питание. - 2005. - №2. - С.2-5.
4. Гончарова Г.И. Бифидофлора человека, ее защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата бифидумбактерин // Автореф.дис… д-ра биол..наук. - М. - 1982. -48 С.
5. Шендеров Б.А. Функциональное питание и его роль в профилактике метаболического синдрома // Москва: Дели принт. - 2008. - С.317.
6. Гончарова В.В. Изучение бифидобактерий, разработка препарата «сухой бифидумбактерин» и его эффективность при кишечных заболеваниях детей первого года жизни. // Автореф.дисс… канд.биол.наук. - Москва. 1970. - С.15.
7. Mitsuoka Т., Hayakawa К., Kimura N.. The fecal flora of man. II. Communication: the composition of bifidobacterium flora of different age groups. // Zentralbl. Bakteriol. Mikrobiol. Hyg. 1 Abt. Orig. - A 1974. - V.226/ - P.469-478.
8. Патент РФ №2196174.
9. Сукачев B.H., Дылиса Н.В. Лесной биогеоценоз // М.:Наука. - 1964. - С.574.
10. Рыбальченко О.В., В.М.Бондаренко, Добрица В.П. Атлас ультраструктуры микробиоты кишечника человека. // С-Петербург. - 2008. - С.109.
11. Бифидобактерий и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве. // Сб.научных трудов. - М. - 1986. - С.208.
12. Леванова Л.Л., Алешкин В.А., Воробьев А.Л., и др. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г.Кемерово. // Журн. Микробиол. - 2001. - №3. - С.72-75.
12. Глушанова Н.А., Шендеров Б.А. Взаимоотношения пробиотических и индигенных лактобацилл в условиях совместного культививрования in vitro. // Журнал микроб., эпидемиол., и иммунобиол. - 2005. - №2. - С.56-61.
14. Патент РФ №2180915 «Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет»; Заявка №2001111553 от 28.04.2001 г. Опубл. 27.03.2002 г.
15. Карзанова М.В., Воронина О.Л., Лунин В.Г., Жиленкова О.Г., Амерханова A.M. Определение видовой принадлежности штаммов бифидобактерий на основе секвенирования фрагментов генов 16S рРНК и трансальдолазы. // Сборник докладов Россельхозакадемии. - М. - 2006. - №5. - С.9-12.
16. Namba К., Hatano М. at all. Method of detecting Bifidobacterium infantis // United States Patent.- Prior Publication data 14.12.2006. - 22 P.
17. Жиленкова О.Г.Селекция производственно перспективных штаммов бифидобактерий, выделенных от детей // Автореф. дисс.канд.биол.наук, Москва, 2011, С.16.
18. Шкопоров А.Н., Кафарская Л.И., Афанасьев С.С. и др. Молекулярно-генетический анализ видового и штаммового разнообразия бифидобактерий у детей раннего возраста. // Вестник Российской АМН. - 2006, - №1. - С.45-50.
19. Smehilova М., Vilkova Е., Nevoral J. Comparison of intestinal microflora in healthy infants and infants with allergic colitis. Folia Microbiol (Praha) 2008. - 53(3). - P.255-258
20. Ezendam J., de Klerk A., Gremmer E.R., van Loveren H. Effects of Bifidobacterium animalis administered during lactaion on allergic and autoimmune responses in rodents. // Clinical and Experimental Immunology. - 2008. - V.154. - P.424-155.
21. Reiter [24] причисляет их к подвидам B.adolescentis, который нехарактерен для микробиоценоза детей. Такие виды нефизиологичны для детей и не могут быть использованы в составе средств коррекции микрофлоры данной возрастной группы.
22. Патент РФ №2373274 от 20.11.2009 Штамм Bifidobacterium breve OV-12, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств.
23. Патент РФ №2375444 от 10.12.2009 Штамм Bifidobacterium bifidum OV-19, используемый для получения бактерийных препаратов, биологически активных добавок к пище, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, гигиенических и косметических средств.
Claims (4)
1. Консорциум бифидобактерий и лактобацилл Bifidobacterium bifidum OV-19, В. bifidum 791, В. longum B379M, В.breve OV-12, В. infantis 73-15, L. helveticus К3ш24, L. helveticus NK-1, L. casei KHM-12, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет.
2. Способ получения консорциума по п.1, предусматривающий совместное культивирование в питательной среде входящих в него штаммов, отличающийся тем, что проводят посев каждого из штаммов бифидобактерий в ферментер по 2% к объему питательной среды культивирования поэтапно с периодичность в 30 мин, коррегируя рН культуральной жидкости 20% NaOH перед засевом каждого штамма до 6,8, а при посеве штаммов лактобацилл процент каждого штамма в ферментер проводят по 0,1% к объему питательной среды культивирования, коррегируя рН культуральной жидкости перед засевом каждого штамма лактобацилл до 6,0, при этом очередность засева каждого штамма устанавливают в зависимости от длительности экспоненциальной фазы его роста в питательной среде, содержащей следующие ингредиенты в расчете на 100 л:
Гидролизат молока 50 л
Аутолизат дрожжей 500 г
Цистеин солянокислый 20 г
Лактоза 1000 г
Пептон ферментативный 200 г
Агар-агар микробиологический 100 г
Хлористый натрий 400 г
Аскорбиновая кислота 250 г
Инулин 500 г
Олигофруктоза 500 г
Вода водопроводная очищенная До 100 л
3. Биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, характеризующаяся тем, что она содержит сухую биомассу консорциума Bifidobacterium bifidum OV-19, В. bifidum 791, В. longum B379M, В. breve OV-12, В.infantis 73-15, L. helveticus К3ш24, L. helveticus NK-1, L. casei KHM-12, инулин, олигофруктозу, витаминно-минеральный премикс в следующем процентном соотношении:
Сухая биомасса консорциума 30%
Инулин 20%
Олигофруктоза 38%
Витаминно-минеральный премикс 12%
4. Бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, отличающийся тем, что он содержит сухую биомассу консорциума Bifidobacterium bifidum OV-19, В. bifidum 791, В. longum B379M, В. breve OV-12, В. infantis 73-15, L. helveticus К3ш24, L. helveticus NK-1, L. casei KHM-12 с содержанием КОЕ/г в готовом препарате не менее 108.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012119456/10A RU2491331C1 (ru) | 2012-05-14 | 2012-05-14 | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012119456/10A RU2491331C1 (ru) | 2012-05-14 | 2012-05-14 | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2491331C1 true RU2491331C1 (ru) | 2013-08-27 |
Family
ID=49163816
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012119456/10A RU2491331C1 (ru) | 2012-05-14 | 2012-05-14 | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2491331C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2752891C1 (ru) * | 2021-01-12 | 2021-08-11 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение Бифилайф" | Консорциум бифидобактерий, используемый для приготовления бифидосодержащих продуктов, и штаммы, входящие в состав консорциума |
| CN118620809A (zh) * | 2024-08-15 | 2024-09-10 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种含有干酪乳杆菌lc89菌株的促进身高发育的益生菌剂及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2180915C1 (ru) * | 2001-04-28 | 2002-03-27 | Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет |
| RU2257408C1 (ru) * | 2003-12-22 | 2005-07-27 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Лечебно-профилактический биопрепарат на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, биологически активная добавка к пище на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, сухая биомасса бифидо- и лактобактерий и способ ее получения |
| RU2326939C2 (ru) * | 2006-05-15 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Вектор-БиАльгам" | Молочная питательная среда для получения биомассы бактерий-пробиотиков |
| RU2426438C2 (ru) * | 2006-12-06 | 2011-08-20 | ЗАО "Академия-Т" | Синбиотическая композиция для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма и способ ее получения (варианты) |
-
2012
- 2012-05-14 RU RU2012119456/10A patent/RU2491331C1/ru active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2180915C1 (ru) * | 2001-04-28 | 2002-03-27 | Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактериальных препаратов, заквасок для кисломолочных продуктов, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте до 3-х лет |
| RU2257408C1 (ru) * | 2003-12-22 | 2005-07-27 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Лечебно-профилактический биопрепарат на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, биологически активная добавка к пище на основе сухой биомассы бифидо- и лактобактерий, сухая биомасса бифидо- и лактобактерий и способ ее получения |
| RU2326939C2 (ru) * | 2006-05-15 | 2008-06-20 | Закрытое акционерное общество "Вектор-БиАльгам" | Молочная питательная среда для получения биомассы бактерий-пробиотиков |
| RU2426438C2 (ru) * | 2006-12-06 | 2011-08-20 | ЗАО "Академия-Т" | Синбиотическая композиция для коррекции нарушений микробиоценоза кишечника и повышения общей резистентности организма и способ ее получения (варианты) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2752891C1 (ru) * | 2021-01-12 | 2021-08-11 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение Бифилайф" | Консорциум бифидобактерий, используемый для приготовления бифидосодержащих продуктов, и штаммы, входящие в состав консорциума |
| WO2022154692A1 (ru) * | 2021-01-12 | 2022-07-21 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение Бифилайф" | Консорциум бифидобактерий и штаммы, входящие в состав консорциума |
| CN118620809A (zh) * | 2024-08-15 | 2024-09-10 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种含有干酪乳杆菌lc89菌株的促进身高发育的益生菌剂及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11767503B2 (en) | Bifidobacterium breve 207-1 and use thereof | |
| AU2021319366B2 (en) | Lactobacillus paracasei 207-27 and use thereof | |
| CN114480229B (zh) | 一种动物双歧杆菌乳亚种菌株wkb148及其产品与应用 | |
| CN112175864B (zh) | 动物双歧杆菌及其选育方法和应用 | |
| JP3993168B2 (ja) | ラクトバシルス・ペントサス株を含む組成物およびそれらの使用 | |
| RU2704133C2 (ru) | Применение lactobacillus paracasei для усиления восстановления разнообразия кишечной микрофлоры после дисбактериоза | |
| CN102686112A (zh) | 制造益生菌制剂的乳酸细菌的新颖菌株和其组合 | |
| CN117917475B (zh) | 一种调节肠道菌群的植物乳植杆菌p16及其应用、产品和方法 | |
| CN117106628B (zh) | 一种具有免疫调节能力的嗜酸乳杆菌la15及其应用、产品与方法 | |
| RU2460778C1 (ru) | Способ получения аутопробиотика на основе enterocuccus faecium, представителя индигенной микрофлоры кишечника хозяина | |
| CN114990030B (zh) | 嗜酸乳杆菌la18及其在制备调节肠道菌群或免疫调节的产品方面的应用 | |
| CN105420150A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| Vemuri et al. | Probiotics: a novel approach in improving the values of human life | |
| US11541085B2 (en) | Postbiotic extract and preparation process and use thereof | |
| RU2491331C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет | |
| RU2491336C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры людей старше 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта людей старше 14 лет | |
| RU2584600C2 (ru) | ШТАММ L.bulgaricus, СПОСОБНЫЙ ИНГИБИРОВАТЬ АДГЕЗИЮ ШТАММОВ Н.pylori К ЭПИТЕЛИАЛЬНЫМ КЛЕТКАМ | |
| CN111254087B (zh) | 一株具有增强免疫力功能的高黏附性能瑞士乳杆菌及其应用 | |
| RU2264450C2 (ru) | Биопрепарат "бифистим для взрослых" для профилактики и лечения дисбактериозов и инфекционных болезней желудочно-кишечного тракта у людей старше 12 лет, биологически активная добавка к пище " бифистим для взрослых" для профилактики дисбактериозов и восстановления микрофлоры желудочно-кишечного тракта после антибиотикотерапии и других неблагоприятных воздействий у людей старше 12 лет и консорциум бифидобактерий для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта у людей старше 12 лет | |
| CN111728030A (zh) | 一种提高免疫力的常温长保质期无蔗糖酸奶及其制备方法 | |
| RU2491335C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий и лактобацилл, используемый для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок, предназначенных для коррекции микрофлоры детей в возрасте от 3-х до 14 лет, способ его получения, биологически активная добавка к пище и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта в возрасте от 3-х до 14 лет | |
| CN117721032A (zh) | 一种复合菌粉制剂及其制备方法和用途 | |
| RU2528862C1 (ru) | ШТАММ Lactobacillus fermentum, ОБЛАДАЮЩИЙ ШИРОКИМ СПЕКТРОМ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ПРОБИОТИЧЕСКИЙ КОНСОРЦИУМ ЛАКТОБАКТЕРИЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ | |
| RU2491333C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте до 3-х лет | |
| RU2491334C1 (ru) | Консорциум бифидобактерий для приготовления бактерийных препаратов и биологически активных добавок к пище, предназначенных для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей в возрасте от 3-х до 14 лет, и способ его получения, биологически активная добавка к пище для коррекции микрофлоры желудочно-кишечного тракта детей от 3-х до 14 лет и бактериальный препарат для лечения дисбиотических состояний желудочно-кишечного тракта детей в возрасте от 3-х до 14 лет |