RU2119354C1 - Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами - Google Patents
Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2119354C1 RU2119354C1 RU96100341A RU96100341A RU2119354C1 RU 2119354 C1 RU2119354 C1 RU 2119354C1 RU 96100341 A RU96100341 A RU 96100341A RU 96100341 A RU96100341 A RU 96100341A RU 2119354 C1 RU2119354 C1 RU 2119354C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- rvd
- platelet
- peptide
- compounds
- aspartyl
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 title 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 claims abstract description 4
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 19
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 10
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 abstract description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 abstract 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 12
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100023038 WD and tetratricopeptide repeats protein 1 Human genes 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 5
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 4
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 Acetamidomethylcysteinyl-arginyl-glycyl-aspartyl-acetamidomethyl-cysteine Chemical compound 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC#N.OC(=O)C(F)(F)F PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N butan-2-ol Chemical compound CCC(C)O BTANRVKWQNVYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 2
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 2
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HLCTYBOTPCIHTG-QMMMGPOBSA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(=O)NCSC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C HLCTYBOTPCIHTG-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxo-4-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCC(O)=O VRPJIFMKZZEXLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 1
- 240000007651 Rubus glaucus Species 0.000 description 1
- 235000011034 Rubus glaucus Nutrition 0.000 description 1
- 235000009122 Rubus idaeus Nutrition 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 1
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- WRYNUJYAXVDTCB-UHFFFAOYSA-M acetyloxymercury Chemical compound CC(=O)O[Hg] WRYNUJYAXVDTCB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001399 anti-metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002001 anti-metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- LUMYJELISJPCAW-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;2-phenylethanol Chemical compound CCOC(C)=O.OCCC1=CC=CC=C1 LUMYJELISJPCAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000002730 mercury Chemical class 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940082615 organic nitrates used in cardiac disease Drugs 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 230000009805 platelet accumulation Effects 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ICRHORQIUXBEPA-UHFFFAOYSA-N thionitrous acid Chemical compound SN=O ICRHORQIUXBEPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 1
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине. Предложен способ направленного транспорта лекарств, который заключается в связывании in vivo молекул-носителей фармакоактивных соединений с форменными элементами крови, принимающими участие в патологическом процессе. Для связывания синтезированы оригинальные производные фармакологических агентов и пептида, содержащего RGD. Фармакологический агент, присоединенный к RGD-пептиду при введении в кровеносное русло, способен связываться с рецепторами 2b/3a тромбоцитов и адресно транспортироваться клетками в места повышенной адгезии тромбоцитов. Такими местами могут быть участки атеросклеротического поражения корональных сосудов, метастические зоны опухолевого роста и другие точки скопления тромбоцитов. Данный способ позволяет получить высокие концентрации препаратов в очаге поражения в течение необходимого промежутка времени. 2 ил.,1 табл.
Description
Введение.
Проблема целенаправленной локальной доставки фармакологических агентов непосредственно в зону патологического процесса (независимо от его этиологии) является одной из наиболее актуальных в современной фармакологии. Это связано с тем, что получение достаточно высоких концентраций лекарственного препарата в очаге поражения в течение необходимого промежутка времени считается одним из ключевых условий обеспечения эффективности терапии.
При стандартных методах лечения это обычно достигается системным введением больших концентраций препарата, что, однако, обладает рядом ограничений. Наиболее существенными из них являются побочные эффекты, связанные с токсичностью многих соединений в больших концентрациях (например цитостатиков), а также высокая скорость выведения из кровеносного русла и тканей.
Эти трудности могут быть успешно разрешены при направленной доставке фармакологического агента с использованием биоспецифических методов, в частности основанных на лигандрецепторных взаимодействиях. Одним из таких подходов является создание препаратов, состоящих из биоорганического носителя и лиганда с фармакологической активностью. На этом принципе, в чтности, основана система доставки цитостатика к раковым клеткам, являющаяся ближайшим аналогом изобретения (EP 398305, 1990, A 61 K 47/48).
Теоретическое обоснование изобретения.
Мы предлагаем собственную реализацию принципа направленного транспорта, которая заключается в связывании in vivo молекул-носителей фармакоактивных соединений через специфические рецепторы с форменными элементами крови, принимающими учтие в патологическом процессе и способными вследствие этого доставить фармакологический препарат непосредственно в зону патологического поражения.
В этом случае появляется принципиальная возможность минимизировать общее количество препарата, поступающего в организм, с одновременным достижением его максимальной концентрации в течение короткого времени в зоне поражения, что, наряду с обеспечением и усилением терапевтического эффекта, приведет к значимому снижению как общей токсичности, так и системной инактивации применяемого фармакологического соединения.
Для выполнения поставленной задачи нами синтезированы оригинальные производные пентапептида цистеинил-аргинилглицил-аспартил-цистена (в дальнейшем CRGDC), которые принадлежат к группе (RGD)-пептидов - соединений, содержащих последовательность, аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD).
Аминокислотная RGD-последовательность, согласно современным представлениям, является ключевым фрагментом комплементарного взаимодействия адгезивных белков (фибриногена, фибронектина, фактора Виллебранда, витронектина) с полифункциональным гликопротеидным комплексом 2b/3a (интегрином), обеспечивающим межклеточные взаимодействия и связь наружной поверхности клеточной мембраны с некоторыми биологически активными растворимыми соединениями [1]. Доказана вовлеченность RGD - содержащих белков, а также чувствительного к ним рецепторного комплекса - интегрина 2b/3a в процессы канцерогенеза, патогенез ряда гематологических и сердечно-сосудистых заболеваний [2,3].
Рецепторы 2b/3a, ответственные за связывание с клеточной поверхностью фиброногена и фибронектина, обнаружены в большом количестве в плазматических мембранах тромбоцитов, которые играют важную роль в формировании метастатических очагов опухолевого роста, образуя клеточные комплексы с мигрирующими в кровеносном русле злокачественными клетками [4]. Также хорошо известна роль тромбоцитов в локальном поражении сосудистой стенки в процессе образования морфологического субстрата атеросклероза - атеросклеротической бляшки [5].
Это дает основание предполагать, что фармакологический агент, присоединенный к RGD-пептиду при введении в кровеносное русло будет связываться с рецепторами 2b/3a тромбоцитов и адресно транспортироваться клетками в места повышенной адгезии тромбоцитов. Такими местами могут быть учтки атеросклеротического поражения коронарных сосудов, метастатические зоны опухолевого роста и другие точки скопления тромбоцитов.
В соответствии с изложенными принципами нами были выбраны лиганды для синтеза двух оригинальных производных RGD-пептидов.
Первый из них - 2,4-диоксо-5-фторпиримидин или 5-фторурацил является антиметаболическим препаратом. Противоопухолевая активность 5-фторурацила определяется его превращением в раковых клетках в 5-фтор-2-дезоксиуридин-5'-монофосфат, который является конкурентным ингибитором активности тимидинсинтетазы, принимающей учтие в синтезе ДНК [6]. 5-фторурацил показан как цитостатический препарат при лечении неоперабельных форм, рецидивов и метастазов рака желудка и толстого кишечника, при опухолях поджелудочной железы. Обычно вводится одномоментно внутривенно из расчета 10-15 мг на килограмм веса, в результате чего его концентрация в крови достигает 1-1,5 ммоль/л.
Второй лиганд - нитрозо-тиол, содержащий группу NO, являющуюся активной чтью коронарорасширяющих фармакологических соединений, относящихся к классу органических нитратов [7].
Для доставки этих биологически активных лигандов в места патологического поражения с использованием в качестве клеток носителей тромбоцитов нами синтезированы оригинальные соединения, представляющие собой гибридные молекулы, состоящие из описанных лигандов и пептидов, содержащих RGD- последовательность: карбоксиметил-5-фторурацил-ацетамидометил-цистеинил-аргинил-глицил-аспартил- ацетамидометил-цистеин (в дальнейшем обозначен как (CMF и GRGDC) и ацетиларгинилглицил-аспартил-S-нитрозоцистенин (Ac-RGDC-SNO).
Синтез оригинальных соединений
Материалы и методы
Для синтеза вышеописанных соединений были использованы аминокислоты и их производные фирмы "Reanal" (Венгрия).
Материалы и методы
Для синтеза вышеописанных соединений были использованы аминокислоты и их производные фирмы "Reanal" (Венгрия).
Температуру плавления полученных соединений определяли на приборе "Boctins" фирмы "Nagema" (Германия). УФ-спектры снимали на спектрофотометре "Beckman" 24/25 (США). Индивидуальность полученных соединений контролировали с помощью тонкослойной хроматографии и электрофореза. Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках "Silnfol" фирмы "Kavalier" (Чехословакия) (S), а также на пластинках фирмы "Merck" (Германия) (m). Использовались системы: (1) 1%-ный аммиак - вторбутиловый спирт 1:3 (2) трет-бутиловый спирт - уксусная кислота - вода 4:1:1; (3) бензол-этанол-этилацетат 3:1:1; (4) метанол - хлороформ 1:7.
Электрофорез проводили на приборе "Laboratorium Flszeresek" (Венгрия) в 2%-ной уксусной кислоте на бумаге FN-12 производства "Filtrak" (Германия) с напряжением на электродах 1500 В в течение 30 мин. Электрофоретическую подвижность определяли по отношению к глицину (EGly). Для всех синтезированных соединений данные элементного анализа соответствовали вычисленным значениям.
Препаративную высокоэффективную жидкостную хроматографию проводили на хроматографе "Waters" 600 Е (США).
По данным аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии чистота конечных продуктов составляла более 95%.
Аминокислотный анализ проводили на аминокислотном анализаторе "Microteohna" T 339 M (Чехословакия). Пептиды гидролизовали в 6 н. HCl в течение 20 ч при температуре 110oC. Данные аминокислотного анализа для всех конечных продуктов соответствовали расчетным значениям.
Масс-спектры снимали на времяпролетном масс-рефлектроне с источником "Электроспрей" (ФИНЭПХФ РАН).
Используемые сокращения:
5-FU - 5-фторурацил;
CMFU - карбоксиметил-5-фторурацил;
HONp - пара-нитрофенол;
ДМФА - диметилформамид;
Синтез CMFU
0,100 г (0,77 ммоль) 5-FU, 0,130 г (1,38 ммоль) хлоруксусной кислоты и 0,12 г (2,15 ммоль) KOH 30 мин кипятили в 10 мл воды с обратным холодильником. Охлажденный раствор наносили на колонку (2,5 х 10 см) со смолой "Dowex" 2 х 8 ("Serva", Германия) в Cl- форме, промывали колонку водой до полного выхода 5-FU, затем смывали продукт 30%-ной уксусной кислотой. Растворитель упаривали, остаток перекристаллизовывали из смеси этанола с серным эфиром. Выход - 0,040 г (27% от теоретического). m/z : 189 (MH+); Т.пл. - 190-200oC; Rf = 0,14 (1,S); O(2,S); O(3,S).
5-FU - 5-фторурацил;
CMFU - карбоксиметил-5-фторурацил;
HONp - пара-нитрофенол;
ДМФА - диметилформамид;
Синтез CMFU
0,100 г (0,77 ммоль) 5-FU, 0,130 г (1,38 ммоль) хлоруксусной кислоты и 0,12 г (2,15 ммоль) KOH 30 мин кипятили в 10 мл воды с обратным холодильником. Охлажденный раствор наносили на колонку (2,5 х 10 см) со смолой "Dowex" 2 х 8 ("Serva", Германия) в Cl- форме, промывали колонку водой до полного выхода 5-FU, затем смывали продукт 30%-ной уксусной кислотой. Растворитель упаривали, остаток перекристаллизовывали из смеси этанола с серным эфиром. Выход - 0,040 г (27% от теоретического). m/z : 189 (MH+); Т.пл. - 190-200oC; Rf = 0,14 (1,S); O(2,S); O(3,S).
Синтез CMFU-ONp.
0,80 г (0,43 ммоль) CMFu суспендировали в пиридине, при перемешивании и охлаждении на ледяной бане добавляли 0,200 г (0,85 ммоль) трифторацетата л-нитрофенола. Через 1 ч убирали охлаждение и перемешивали при комнатной температуре до полного растворения осадка. Упаривали пиридин, остаток растирали с серным эфиром. Выход - 0,250 г (80% от теоретического). Т.пл. 195oC, Rf = 0,87 (2, S); 0,65 (3, S); 0,53 (4, S)
Синтез H-Cys(Acm)-Arg-Gly-Asp-Cys(Acm)-OH
Синтез проводили твердофазным методом на полимере Меррифильда при использовании автоматического пептидного синтезатора NPS -4000 (Neosistem Laboratoires, Франция). В работе использовали следующие производные аминокислот: Boc-Gly-OH; Boc-Arg(Mts)-OH); Boc-Asp(OBzl)OH; Boc-Cys(Acm)OH. Полноту прохождения реакции образования пептидной связи контролировали с помощью нингидринового теста (8). Трифторуксусную кислоту и растворители готовили в соответствии с требованиями для твердофазного пептидного синтеза, триэтиламин перегоняли над щелочью, а затем над нингидрином.
Синтез H-Cys(Acm)-Arg-Gly-Asp-Cys(Acm)-OH
Синтез проводили твердофазным методом на полимере Меррифильда при использовании автоматического пептидного синтезатора NPS -4000 (Neosistem Laboratoires, Франция). В работе использовали следующие производные аминокислот: Boc-Gly-OH; Boc-Arg(Mts)-OH); Boc-Asp(OBzl)OH; Boc-Cys(Acm)OH. Полноту прохождения реакции образования пептидной связи контролировали с помощью нингидринового теста (8). Трифторуксусную кислоту и растворители готовили в соответствии с требованиями для твердофазного пептидного синтеза, триэтиламин перегоняли над щелочью, а затем над нингидрином.
Все аминокислотные остатки были присоединены в соответствии с протоколом стандартного цикла, состоящего из стадий деблокирования, нейтрализации и конденсации.
Деблокирование
1) Промывка 20 мл хлористого метилена в течение 1 мин;
2) Двукратная обработка 20 мл 65% раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене в течение 1 и 15 мин;
3) Двукратная промывка 20 мл хлористого метилена без перемешивания;
4) Двукратная промывка 20 мл хлористого метилена по 1 мине.
1) Промывка 20 мл хлористого метилена в течение 1 мин;
2) Двукратная обработка 20 мл 65% раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене в течение 1 и 15 мин;
3) Двукратная промывка 20 мл хлористого метилена без перемешивания;
4) Двукратная промывка 20 мл хлористого метилена по 1 мине.
Нейтрализация
1) Промывка 20 мл ДМФА - 1 мин;
2) Двукратная обработка 20 мл 5% раствора триэтиламина в ДМФА в течение 1 и 2 мин;
2) Трехкратная промывка 20 мл ДМФА.
1) Промывка 20 мл ДМФА - 1 мин;
2) Двукратная обработка 20 мл 5% раствора триэтиламина в ДМФА в течение 1 и 2 мин;
2) Трехкратная промывка 20 мл ДМФА.
Конденсация
В 3 мл ДМФА растворяли 3 эквивалента (1,5 ммоль) защищенного производного аминокислоты и 1,5 ммоль 1-гидроксибензотриазола, при охлаждении до 0oC и перемешивании добавляли 1,5 ммоль N,N-диизопропилкарбодиимида, через 30 мин перемешивания, раствор вносили в реактор.
В 3 мл ДМФА растворяли 3 эквивалента (1,5 ммоль) защищенного производного аминокислоты и 1,5 ммоль 1-гидроксибензотриазола, при охлаждении до 0oC и перемешивании добавляли 1,5 ммоль N,N-диизопропилкарбодиимида, через 30 мин перемешивания, раствор вносили в реактор.
Продолжительность конденсации - 1 - 2 ч. По окончании конденсации:
1) Дважды промывали пептидилполимер 20 мл ДМФА по 1 мине;
2) Промывали 20 мл хлористого метилен 1 мин;
3) Выполняли тест на полноту прохождения реакции.
1) Дважды промывали пептидилполимер 20 мл ДМФА по 1 мине;
2) Промывали 20 мл хлористого метилен 1 мин;
3) Выполняли тест на полноту прохождения реакции.
Отщепление пептида от полимерного носителя.
К 1 г пептидил-полимера добавляли 1 мл тиоанизола и 0,5 мл этандитиола перемешивали на магнитной мешалке 10 мин, затем при охлаждении до 0oC приливали 10 мл трифторуксусной кислоты, перемешивали 10 мин. По каплям добавляли 1 мл трифторметансульфокислоты, снимали охлаждение и перемешивали 0,5 ч при комнатной температуре. Разбавляли реакционную смесь 250 мл эфира и отфильтровывали осажденный на полимере пептид на фильтре Шотта. Затем смывали пептид с полимера трифторуксусной кислотой и высаживали 250 мл серного эфира. Выпавший продукт отфильтровывали, промывали эфиром и сушили в вакууме. Затем пептид обессоливали на колонке с сефадексом G-15(1,9 х 100 см) в 50% уксусной кислоте. Очистку препарата проводили с помощью ВЭЖХ на колонке Delta Pak C18 (19 х 300 мм, 300 А, 15 мкм); элюент - 0,1%-ная трифторуксусная кислота - ацетонитрил, скорость потока - 15 мл/мин, детекция при 230 нм. После очистки пептид лиофилизовали.
Синтез CMFU-Cys(Alm)-Arg-Gly-Asp-Cys(Acm)-OH (CMFU-CRG-DC).
0,12 г (0,17 ммоль) H-Cys(Acm)-Arg-Gly-Asp-Cys(Acm)-OH растворяли в смеси ДМФА - H2O, добавляли 0,7 г (2,26 ммоль) CMFu-ONp и доводили pH до 8 с помощью диизопропилэтиламина. Через сутки реакционную смесь нейтрализовали 1 н. H2SO4, растворитель упаривали и продукт закристаллизовывали в этаноле. Осадок отфильтровывали и промывали этанолом. Остаток растворяли в 0,2 н. уксусной кислоте и очищали гельфильтрацией на колонке с сефадексом G-15("Pharmacia", Швеция). Окончательную очистку проводили с помощью ВЭЖХ, на колонне Delta Pak C18 (19 х 300 мм, 300 А, 15 мкм); элюент - 0,1%-ная трифторукскусная кислота - ацетонитрил, скорость потока - 15 мл/мин, детекция при 230 нм. После очистки пептид лиофилизовали. EGly = 0,82.
Синтез Ac-Arg-Gly-Asp-Cys(SNO)-OH (Ac-RGDC-SNO).
К раствору 20 мл (0,0355 ммоль) Ac-Arg-Cly-Asp-Cys(Acm)-OH в 1 мл 30%-ной уксусной кислоты при перемешивании добавляли 11,3 мг (0,0355 ммоль) ацетата ртути. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем добавляли 0,05 мл (0,71 моль) 2-меркаптоэтанола и перемешивали еще 1 ч. Осадок солей ртути отфильтровывали, к фильтрату добавляли 46,5 мг нитрита натрия (раствор окрашивается в малиновый цвет) и перемешивали 0,5 ч при комнатной температура. Контроль за полнотой прохождения реакции осуществляли с помощью ВЭЖХ pH раствора доводили до 8 добавлением бикарбоната натрия и продукт очищали с помощью ВЭЖХ. После очистки пептид лиофилизировали.
В УФ спектре препарата присутствуют два характеристических максимума поглощения - при 337 нм и 545 нм.
Исследование биологической активности синтезированных соединений.
Материалы и методы
Исследования на культуре клеток.
Исследования на культуре клеток.
Клетки линии Colo выращивали в питательной среде DMEM в течение 48-72 ч до достижения содержания общего белка 1 - 1,5 мг/мл, после чего в инкубационную среду вводили H3-тимидин в концентрации 10 мкКи/мл (удельная активность 80 Ки/ммоль), а также CMFU-CRGDC в концентрациях; O (контрольная группа), 10, 100, 500 и 1000 мкмоль/л. После 24-чой инкубации из культурных сосудов отбирали аликвоты в объеме 50 мкл и фильтровали из через микропористые фильтры "Whatman GF/B" с диаметром пор 1 мкм, с последующей промывкой 10-кратным избытком ледяного физиологического раствора (pH 7,35) для удаления несвязавшегося H3-тимидина. После высушивания фильтров радиоактивность контрольной и опытных проб измеряли на сцинтилляционном счетчике "Бета-2" с использованием стандартного толуольного сцинтиллятора. Для стандартизации процедуры в параллельно отобранных аликвотах определяли содержание общего белка по методу Лоури с предварительной солюбилилизацией клеточных структур. Результат эксперимента выражали в виде удельного включения радиоактивности на единицу массы белка (d.p.m./мгк).
Исследования агрегации тромбоцитов
Кровь для исследования брали из локтевой вены доноров в силиконизированные пробирки, содержащие 3,8% раствор цитрата натрия (1 мл на 9 мл крови). Богатую тромбоцитами плазму получали центрифугированием при 160 g в течение 10 мин. Бедную тромбоцитами плазму получали центрифугированием при 1600 g в течение 15 мин. Исследование влияния препаратов на АДФ-индуцированную агрегацию проводили в течение 2 ч с момента забора крови по нефелометрическому методу Born (9) с использованием агрегометра ФРМ-1. Все экспериментальные данные получены на пороговых концентрациях АДФ, которые предварительно устанавливались для данного образца и находились в настоящем исследовании в диапазоне от 0,5 до 2,5 мкмоль/л.
Кровь для исследования брали из локтевой вены доноров в силиконизированные пробирки, содержащие 3,8% раствор цитрата натрия (1 мл на 9 мл крови). Богатую тромбоцитами плазму получали центрифугированием при 160 g в течение 10 мин. Бедную тромбоцитами плазму получали центрифугированием при 1600 g в течение 15 мин. Исследование влияния препаратов на АДФ-индуцированную агрегацию проводили в течение 2 ч с момента забора крови по нефелометрическому методу Born (9) с использованием агрегометра ФРМ-1. Все экспериментальные данные получены на пороговых концентрациях АДФ, которые предварительно устанавливались для данного образца и находились в настоящем исследовании в диапазоне от 0,5 до 2,5 мкмоль/л.
Стабильность образца проверяли по идентичности агрегатограмм при использовании пороговой концентрации АДФ. Исследуемые препараты растворяли в физиологическом растворе (pH 7,35) и вводили в богатую тромбоцитами плазму, находящуюся в кювете агрегометра в необходимых концентрациях. Время преинкубации препарата при 37oC с биологическим образцом составляло 3 мин при постоянном перемешивании (скорость магнитной мешалки - 400 об/мин). Количественно влияние препарата на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов человека оценивалось по величине вторичной агрегации. отнесенной к контрольной пробе.
Результаты экспериментов.
Возможность сохранения специфической активности лиганда в составе синтезированной гибридной молекулы продемонстрирована в исследованиях по влиянию CMFU-CRGDC на включение H3-тимидина в ДНК клеточной культуры рака толстого кишечника (линия Colo). Выбор именно этой линии культивируемых раковых клеток обоснован тем, что по клиническим данным одним из основных показаний для клинического применения 5-фторуарацила является рак прямой кишки и толстого кишечника.
Концентрации гибридного соединения 5-фторурацила с RGD-пептидом в инкубационной среде подобраны в соответствии с терапевтическими дозами лекарственных препаратов 5-фтор-урацила.
Инкубация культивируемых клеток CMFU-CRGDC приводит к достоверному снижению скорости синтеза в них ДНК, что является прямым свидетельством антипролиферативной активности исследуемого соединения.
Как видно из фиг. 1, имеет место эффективное дозозависимое подавление CMFU-CRGDC включения H3-тимидина клетками линии Colo.
На основании результатов описанных экспериментов можно сделать однозначный вывод о сохранении цитостатической активности 5-фторурацила в составе гибридной молекулы.
Второй задачей изучения синтезированных соединений была необходимость получения экспериментальных доказательств функциональной активности RGD-фрагмента молекулы, ответственного за специфическое связывание с 2b/3a рецепторами, так как именно это свойство гибридной молекулы позволяет реализовать идею направленного транспорта фармакологического агента с помощью тромбоцитов.
Сохранение способности синтезированных гибридных молекул связываться с клетками-носителями продемонстрирована в экспериментах по исследованию влияния CMFU-CRGDC, AC-RGDC-SNO на АДФ.
- индуцированную агрегацию тромбоцитов человека.
Для этого были испытаны три RGD-содержащих препарата:
1. Ацетамидометилцистеинил-аргинил-глицил-аспартил-ацетамидо- метил-цистеин (CRGSC), в качестве контрольного соединения.
1. Ацетамидометилцистеинил-аргинил-глицил-аспартил-ацетамидо- метил-цистеин (CRGSC), в качестве контрольного соединения.
2. Карбоксиметил-5-фторурацил-ацетамидометилцистеинил-аргинил- глицил-аспартил-ацетамидометилцистеин (CMFU-CRGDC).
3. Ацетиларгинил-глицил-аспартил-S-нитрозоцистеин (AC-RGDC-SNO).
На фиг. 2 представлены сравнительные данные по влиянию CRGD и CMFU-CRGDC на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов человека. Оба препарата дозозависимо подавляли вторичную агрегацию как по скорости агрегации (т.е. изменению оптической плотности за мин. ), так и по амплитуде (т.е. по величине приращения оптической плотности за время, в течение которого процесс вторичной агрегации полностью заканчивается в контрольной пробе). Следует также отметить, что исследованные соединения оказывают ингибирующее влияние и на первичную агрегацию, хотя и в меньшей степени.
Количество экспериментов, выполненных с каждым из препаратов, равнялось пяти.
В таблице приведены количественные данные влияния исследованных соединений на вторичную агрегацию тромбоцитов.
Результаты сравнительного исследования влияния CMFU-CRGDC, Ac-RGDC-SNO и CRGDC на агрегацию тромбоцитов показывают, что RGD-пептидная последовательность, связанная с фармакоактивными лигандами сохраняет способность эффективно связываться с тромбоцитами.
Это свидетельствует о наличии принципиальной возможности использования указанных соединений для направленного транспорта активных лигандов в очаг патологического поражения, поскольку известно, что тромбоциты способы аффинно поглощать RGD-содержащие молекулы с депонированием их в альфагранулах и последующим высвобождением в месте активации тромбоцитов при осуществлении рилизинг-реакции.
Последнее, в чтности, может иметь место при ассоциации тромбоцитов с циркулирующими в кровеносном русле соматическими злокачественными клетками, сопровождающейся усилением адгезивных свойств последних и образованием метастатических очагов опухолевого роста. Предполагается что цитостатик (в данном случае 5-фторурацил), содержащий RGD-пептид, после введения в кровеносное русло будет связываться с 2b/3a рецепторами тромбоцитов. При последующем образовании комплекса циркулирующих опухолевых клеток с тромбоцитами и в результате инициации рилизинг-реакции цитостатик будет высвобождаться из тромбоцитов и воздействовать на ассоциированные с ними опухолевые клетки непосредственно в кровеносных сосудах, т.е. до их фиксации в тканях и органах. Следовательно, данные соединения можно рассматривать как потенциальные антиметастатические лекарственные препараты.
В том же случае, когда в кровеносное русло будет вводиться соединение с RGD-последовательностью, содержащее нитрогруппу, оно, связываясь в тромбоцитами, будет направленно транспортироваться в места обструкции сосудов, в чаcтности коронарных, вызванной атеросклеротическим повреждением интимы. В этих учтках эндотелия обычно происходит усиленная адгезия и агрегация тромбоцитов. Поэтому тромбоциты, нагруженные RGD-пептидами, несущими NO-группу, будут способствовать быстрой концентрации нитратов в зоне атеросклеротического сужения коронарной артерии.
Подобная схема направленного транспорта лекарственных препаратов, содержащих RGD-последовательнсоть, может реализовываться и при другой патологии, где имеет место локальная активация тромбоцитов. Терапевтический эффект в каждом конкретном случае будет зависеть от химической природы фармакоактивного лиганда, соединенного с RGD-последовательность аминокислотных остатков.
Источники информации
1. Zammaron C. , Ginsberg M.H., Plow F.T., J. Biol. Chem., 1991, 266: 16193
2. Clark E.A., Brigge J.S., Mol. Cell. Biol., 1993. 13: 1863.
1. Zammaron C. , Ginsberg M.H., Plow F.T., J. Biol. Chem., 1991, 266: 16193
2. Clark E.A., Brigge J.S., Mol. Cell. Biol., 1993. 13: 1863.
3. Badimon L., Chesebro J.H., Badimon J.J., Circulation 1992, 86: 11174
4. Karpatkin S., Pearlstein F., Ann. Jntern Med. 1981. 85: 646
5. Ross R., Nature. 1993, 362: 801
6. Машковский М.Д., Лекарственные средства, 1987, 2: 455, М., Медицина,
7. Bromn B., G., Ciranlation, 1981, 64: 1089
8. Sarin V.K., Kent S.B.H., Engelhard M., Merrifield R.B., Anal Biochem. , 1981, 117: 147
9. Born G.V., Nature, 1962. 194: 927.
4. Karpatkin S., Pearlstein F., Ann. Jntern Med. 1981. 85: 646
5. Ross R., Nature. 1993, 362: 801
6. Машковский М.Д., Лекарственные средства, 1987, 2: 455, М., Медицина,
7. Bromn B., G., Ciranlation, 1981, 64: 1089
8. Sarin V.K., Kent S.B.H., Engelhard M., Merrifield R.B., Anal Biochem. , 1981, 117: 147
9. Born G.V., Nature, 1962. 194: 927.
Claims (1)
- Способ направленного транспорта фармакологических препаратов в очаги патологического процесса, где имеет место тромбоцитарная адгезия и агрегация, отличающийся тем, что их связывают со специфическими рецепторами (2b/3a) тромбоцитов путем введения в состав молекул препаратов пептида с аминокислотной последовательностью аргинин-глицин-аспарагиновая кислота (RGD).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96100341A RU2119354C1 (ru) | 1996-01-05 | 1996-01-05 | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU96100341A RU2119354C1 (ru) | 1996-01-05 | 1996-01-05 | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU96100341A RU96100341A (ru) | 1998-05-10 |
| RU2119354C1 true RU2119354C1 (ru) | 1998-09-27 |
Family
ID=20175542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96100341A RU2119354C1 (ru) | 1996-01-05 | 1996-01-05 | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2119354C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2244719C1 (ru) * | 2003-07-29 | 2005-01-20 | Терентьев Александр Александрович | Композиция из пептидов, обладающая иммуномодуляторным свойством |
| WO2005009455A1 (fr) * | 2003-07-29 | 2005-02-03 | Terentiev Alexandr Alexandrovi | Composition de peptides presentant une propriete immunoregulatrice |
| RU2266297C1 (ru) * | 2004-05-12 | 2005-12-20 | Терентьев Александр Александрович | Композиция из пептидов, обладающая иммунорегуляторным свойством |
| RU2323737C2 (ru) * | 2002-07-31 | 2008-05-10 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния | Способ лечения опухолей |
| RU2329054C1 (ru) * | 2006-11-27 | 2008-07-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ насыщения форменных элементов крови антибиотиками |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0398305A2 (en) * | 1989-05-17 | 1990-11-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production |
| EP0459624A3 (en) * | 1990-04-27 | 1992-10-14 | Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. | Galactosamine-substituted poly-omega-substituted-l-glutamic and/or-aspartic acid |
| WO1994005696A1 (fr) * | 1992-09-07 | 1994-03-17 | Nippon Steel Corporation | Nouveau peptide et agent antithrombotique, anticoagulant pour la circulation extracorporelle, inhibiteur de fusion cellulaire, inhibiteur de metastases cancereuses, agent de protection de preparation plaquettaire pour la transfusion, et ensemble contenant une preparation plaquettaire pour la transfusion |
-
1996
- 1996-01-05 RU RU96100341A patent/RU2119354C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0398305A2 (en) * | 1989-05-17 | 1990-11-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Anthracycline conjugates having a novel linker and methods for their production |
| EP0459624A3 (en) * | 1990-04-27 | 1992-10-14 | Yamanouchi Pharmaceutical Co. Ltd. | Galactosamine-substituted poly-omega-substituted-l-glutamic and/or-aspartic acid |
| WO1994005696A1 (fr) * | 1992-09-07 | 1994-03-17 | Nippon Steel Corporation | Nouveau peptide et agent antithrombotique, anticoagulant pour la circulation extracorporelle, inhibiteur de fusion cellulaire, inhibiteur de metastases cancereuses, agent de protection de preparation plaquettaire pour la transfusion, et ensemble contenant une preparation plaquettaire pour la transfusion |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2323737C2 (ru) * | 2002-07-31 | 2008-05-10 | Дзе Риджентс Оф Дзе Юниверсити Оф Калифорния | Способ лечения опухолей |
| RU2244719C1 (ru) * | 2003-07-29 | 2005-01-20 | Терентьев Александр Александрович | Композиция из пептидов, обладающая иммуномодуляторным свойством |
| WO2005009455A1 (fr) * | 2003-07-29 | 2005-02-03 | Terentiev Alexandr Alexandrovi | Composition de peptides presentant une propriete immunoregulatrice |
| RU2266297C1 (ru) * | 2004-05-12 | 2005-12-20 | Терентьев Александр Александрович | Композиция из пептидов, обладающая иммунорегуляторным свойством |
| RU2329054C1 (ru) * | 2006-11-27 | 2008-07-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" | Способ насыщения форменных элементов крови антибиотиками |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fridkin et al. | Use of polymers as chemical reagents. I. Preparation of peptides | |
| JPS63215696A (ja) | 新規ペプチドおよびこのペプチドを含む血栓治療剤 | |
| EP0352249A1 (en) | Novel platelet-aggregation inhibitors | |
| US4002740A (en) | Tridecapeptide compositions and methods | |
| WO1998011437A1 (en) | Affinity labeling libraries with tagged leaving groups | |
| EP0482649B1 (en) | CM-chitin derivatives and use thereof | |
| Fletcher et al. | The use of the N (π)-phenacyl group for the protection of the histidine side chain in peptide synthesis | |
| RU2119354C1 (ru) | Способ направленного транспорта фармакологических препаратов путем их конъюгации с аргинил-глицил-аспартил (rgd) содержащими пептидами | |
| CN101104078A (zh) | 多肽及蛋白药物的聚乙二醇偶合物 | |
| CN105315350B (zh) | 抗肿瘤血管生成多肽mPEG-Mal-Cys-AS16 | |
| Albericio et al. | Solid phase synthesis and HPLC purification of the protected 1-12 sequence of apamin for rapid synthesis of apamin analogues differing in the C-terminal region | |
| FI64140B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara peptider | |
| CN102174084B (zh) | 胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物 | |
| US5548062A (en) | Tumor cell invasion-inhibiting peptides, peptide complexes and cancer metastasis inhibitors | |
| Park et al. | Characterization of angiotensin receptors in vascular and intestinal smooth muscles | |
| RU2010799C1 (ru) | Производные пентапептидов | |
| US4058512A (en) | Synthetic peptides having growth promoting activity | |
| Rocchi et al. | Synthesis of peptide analogs of the N-terminal eicosapeptide sequence of ribonuclease A. XI. Synthesis and conformational studies of [Orn10, Nle13]-S-peptide | |
| JPH05271094A (ja) | カルボキシメチル化キチン誘導体を用いる癌転移抑制剤 | |
| CN114957390B (zh) | 肿瘤靶向多肽及其应用 | |
| EP1758922B1 (en) | Peptide substance restoring function of respiratory organs | |
| JPH04221397A (ja) | 水溶性ポリペプチド誘導体とその用途 | |
| JP2628082B2 (ja) | 免疫抑制剤 | |
| JP5373077B2 (ja) | ポリペプチド系物質、その製造方法、組織器官の虚血の予防用薬及び治療用薬 | |
| CN102746385B (zh) | 胸腺素α1活性片段环肽类似物及其聚乙二醇化衍生物 |