RU2147892C1 - Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота - Google Patents
Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота Download PDFInfo
- Publication number
- RU2147892C1 RU2147892C1 RU98117373A RU98117373A RU2147892C1 RU 2147892 C1 RU2147892 C1 RU 2147892C1 RU 98117373 A RU98117373 A RU 98117373A RU 98117373 A RU98117373 A RU 98117373A RU 2147892 C1 RU2147892 C1 RU 2147892C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- preparation
- components
- mixture
- strains
- days
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title claims description 21
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 title claims description 12
- 208000010711 Cattle disease Diseases 0.000 title abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 32
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 12
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 11
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 35
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 31
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 16
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 14
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 11
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 11
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 108010044279 T-activin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 claims description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 244000309466 calf Species 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011416 Croup infectious Diseases 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 201000010549 croup Diseases 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- ZUJIHUXXWRPGPY-UHFFFAOYSA-H dibismuth;trisulfite Chemical compound [Bi+3].[Bi+3].[O-]S([O-])=O.[O-]S([O-])=O.[O-]S([O-])=O ZUJIHUXXWRPGPY-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 239000001964 microbiological growth medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 244000062645 predators Species 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение предназначено для получения вакцин или сывороток против вирусно-бактериальных заболеваний крупного рогатого скота. Для приготовления компонентов "А", "Б" и "В" препарата из местного очага выделяют все эпизоотические штаммы возбудителей болезней бактериального и вирусного происхождения. После идентификации их раздельно культивируют. Вирусные штаммы выращивают на монослоях культур клеток, например MDBK. При этом добавляют питательную среду, например Игла МЭМ, до получения конечной концентрации каждого вируса не менее 1-106 ЦПД/50 на 1 мл. Сливают вируссодержащую суспензию каждого штамма в равных объемах в общую емкость. Перемешивают и получают компонент "А" препарата. Часть компонента "А" инактивируют формалином в конечной концентрации не более 0,2-0,4 мас.%. Инкубируют не менее 3-5 суток при комнатной температуре. Получают компонент "Б" препарата. Бактериальные штаммы культивируют в матрацах на микробиологическом питательном агаре, например ГРМ-агаре. Получают конечную концентрацию каждого штамма бактерий не менее 1-1011 кл/мл. Затем их собирают в равных объемах в общую емкость с использованием раствора Эрла. Смесь биомассы штаммов бактерий инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2-0,4 мас.%. Инкубируют не менее 3-5 суток при комнатной температуре. Получают компонент "В" препарата. Изобретение позволяет получать универсальный препарат на основе местных вирусно-бактериальных штаммов более широкого спектра действия. 2 з.п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности к получению вакцин или сывороток против вирусно-бактериальных заболеваний крупного рогатого скота.
Известно, что против многих инфекционных заболеваний крупного рогатого скота (КРС) в настоящее время не разработаны вакцинные и сывороточные препараты (например, против лейкоза) и в ряде случаев не идентифицированы их возбудители. В связи с вышесказанным разработка ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против местных вирусно-бактериальных заболеваний КРС имеет крайне важное значение для ветеринарии, животноводства и здравоохранения.
Известен способ получения препарата для приготовления иммуноглобулина "Поликаниглоб", используемого при лечении и профилактике вирусных инфекций, включающий раздельное выращивание культуральных штаммов парвовируса "Геркулес" ВГНКИ N 29, аденовируса типа-2 "Ада" ВГНКИ N 15 и вируса чумы плотоядных "ЭПМ" (Заявка на патент РФ N 94031759, МПК6 A 61 K 39/40, C 12 N 7/00, опубл. 20.11.96). Для получения иммуноглобулина лошадей-продуцентов иммунизируют раздельно указанными компонентами (культуральными штаммами) препарата по схеме: первая инъекция внутримышечно в область шеи и крупа в объеме 10 - 100 см3 каждого антигена, вторую инъекцию проводят на 7-й день в область шейных лимфоузлов в объеме 30 - 90 см3 каждого антигена, третью и четвертую инъекции осуществляют соответственно на 22-й и 37-й день внутривенно в объеме 80 - 120 см3 каждого антигена. На 44-й день забирают кровь от каждой группы лошадей, отделяют сыворотки, стерилизуют и смешивают в равных объемах. Затем смесь сывороток обрабатывают ПЭГ-6000 Д и полученный осадок очищают методом каскадной фильтрации на нитроцеллюлозных фильтрах с диаметром пор от 1,2 до 0,22 мкм. Иммуноглобулин "Поликаниглоб" может использоваться с профилактической и лечебной целями против парвовирусного энтерита, аденовирусных инфекций и чумы собак.
Однако поливалентные сыворотки, производимые с использованием препарата, изготовленного данным способом, могут быть неэффективными в различных регионах, например России, в связи с тем, что они были созданы на основе отличающихся в антигенном отношении вирусных штаммов, выделенных от животных, обитающих в других регионах страны. При приготовлении поливалентных сывороток с использованием препарата, изготовленного по указанному способу, производится разбавление специфических антител (на конечном этапе получения сыворотки), полученных от разных животных-продуцентов, инфицированных разными вирусными штаммами. В результате использование подобного рода поливалентных сывороток требует введения их больным животным в большом количестве, увеличивая таким образом нагрузку на их иммунную систему и получая при этом слабый лечебный и профилактический эффект. Кроме того, отсутствие в данном препарате антител против патогенных для животных бактерий ограничивает спектр действия иммуноглобулина и требует при лечении и профилактике заболеваний животных введения дополнительных сывороток, содержащих антитела против бактериальных антигенов.
Наиболее близким техническим решением (прототипом) является способ получения препарата (бактериальной вакцины) против некробактериоза крупного рогатого скота, включающий предварительное выделение из местного очага эпизоотического штамма некробактериоза КРС, его идентификацию, наработку биомассы культуры возбудителя микробиологическим способом, разделение выращенной культуры на биомассу и культуральную жидкость, экстракцию антигена из биомассы и параллельно осаждение экзотоксина из культуральной жидкости, инактивацию антигенов формалином, объединение инактивированных антигенов с последующим добавлением адъюванта на основе минерального масла и ланолина и получением целевого продукта (Патент РФ N 2043773, МПК6 A 61 K 39/114, опубл. 20.09.95).
Недостатком данного способа является узкий спектр действия препарата (вакцины), приготавливаемого на его основе, вследствие использования для приготовления препарата только одной эпизоотической культуры возбудителя некробактериоза.
Задачей предлагаемого изобретения является создание такого способа, который позволил бы получать универсальный препарат на основе местных вирусно-бактериальных штаммов для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний КРС более широкого спектра действия.
Указанная задача решается тем, что в способе получения препарата на основе местных вирусно-бактериальных штаммов для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота, включающем предварительное выделение из местного очага одного из эпизоотических штаммов возбудителей болезней, его идентификацию, наработку биомассы культуры возбудителя микробиологическим способом и, при необходимости, инактивацию биомассы культуры возбудителя химическим реагентом, согласно изобретению для приготовления компонентов "А", "Б" и "В" препарата из местного очага выделяют все эпизоотические штаммы возбудителей болезней, как бактериального, так и вирусного происхождения, которые после идентификации раздельно культивируют, причем вирусные штаммы выращивают на монослоях культур клеток, например MDBK, первичнотрипсинизированной культуре клеток почек телят, с добавлением питательной среды (например Игла МЭМ) до получения конечной концентрации каждого вируса не менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл с последующим сливом вируссодержащей суспензии каждого штамма в равных объемах в общую емкость при перемешивании с получением компонента "А" препарата, который инактивируют формалином в конечной концентрации не более 0,2 - 0,4 мас.% и инкубируют не менее 3-5 суток при комнатной температуре с получением компонента "Б" препарата, а бактериальные штаммы культивируют в матрацах на микробиологическом питательном агаре (например агар Хоттингера, ГРМ - агар), до получения конечной концентрации каждого штамма бактерий не менее 1•1011 кл/мл с последующим их сбором в равных объемах в общую емкость с использованием раствора Эрла, полученную смесь биомассы штаммов бактерий инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2 - 0,4 мас.% с последующей инкубацией не менее 3-5 суток при комнатной температуре с получением компонента "В" препарата.
Получение в препарате конечной концентрации вирусов менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл и бактерий - менее 1•1011 кл/мл значительно снижает эффективность действия приготовляемых на его основе ассоциированной вакцины (обеспечивает низкий иммунитет) и гипериммунной сыворотки, полученной путем иммунизации лошадей этим препаратом (низкий титр антител).
Для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иммуномодулятор, например T-активин, или тимарис, или ридостин, при соотношении иммуномодулятора и смеси компонентов "Б" и "В" препарата не более 1:10.
Иммуномодуляторы являются неспецифическими лекарственными средствами, обеспечивающими более эффективное действие вакцины без проявления негативных эффектов.
Ридостин (ВФС 42-245-7-94. Ридостин для инъекций. Введена в действие от 02.03.95) - иммуномодулятор, лекарственная форма dS-РНК киллерного штамма дрожжей Sac. cerevisiae, производится в НИКТИ БАВ ГНЦ ВБ "Вектор", г. Новосибирск. Получен путем ферментативного и механического разрушения клеточных стенок дрожжей и извлечения dS-РНК фракционированием раствором хлористого лития. Препарат восстанавливает иммунологическую активность, стимулирует процессы кроветворения.
T-активин (иммуномодулятор) - препарат полипептидной природы, получаемый из вилочковой железы (тимуса) КРС, нормализует количественные и функциональные показатели T-системы иммунитета, стимулирует продукцию лимфокинов, в т. ч. α- и γ- интерферона, восстанавливает активность T-киллеров (Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицине. - М., 1989, - с. 370).
Тимарис (иимуномодулятор) - препарат полипептидной природы, получаемый путем экстракции из вилочковой железы (тимуса) КРС, восстанавливает иммунологическую реактивность (регулирует количество и соотношение T- и B-лимфоцитов и их субпопуляций, стимулирует процессы кроветворения (Справочник. Лекарственные средства, применяемые в медицине. - М., 1989, - с. 381).
При увеличении соотношения иммуномодулятора и компонентов препарата более 1:10 отмечено значительное токсическое действие иммуномодуляторов на организм вакцинируемого животного.
Для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В", а также в равных соотношениях смесь компонентов "А" и "В", лошадям-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл; через 7 суток - вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл; через не менее 1,5 месяца проводят вновь трехкратную иммунизацию аналогично тому как, было описано ранее; через 8-9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 литров в бутыли и еще через 5-6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме; причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят не более 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия, далее материал отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция, бутыли с образцами крови встряхивают и повторно отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости.
Препарат с тремя отдельными компонентами (компонент "А" - смесь живых вирусных штаммов, компонент "Б" - смесь инактивированных вирусных штаммов и компонент "В" - смесь инактивированных бактериальных штаммов), включающими штаммы возбудителей заболеваний, полученных из местного очага, позволяет приготавливать как ассоциированные вакцины, обеспечивающие более длительный и напряженный иммунитет, так и поливалентные гипериммунные сыворотки более широкого спектра действия и более специфичные для КРС данного региона, а значит и действующие более эффективно.
Пример 1. Технология получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага
В АО "Салаир" Маслянинского района Новосибирской области осенью 1992 года от телят, больных респираторными и кишечными заболеваниями инфекционной природы с септическими явлениями (температурная реакция 40,0 - 41,0oC), с помощью простых (например агар Хоттингера, ГРМ - агар, тиогликолиевая среда) и дифференциально-диагностических микробиологических сред (среда Олькеницкого, Эндо, висмут-сульфитная) выделены Эшерихия коли и Сальмонеллы. Кроме того, путем проведения 4 пассажей на перевиваемой культуре клеток MDCK, выделены вирусы инфекционного ринотрахеита и парагриппа 3.
В АО "Салаир" Маслянинского района Новосибирской области осенью 1992 года от телят, больных респираторными и кишечными заболеваниями инфекционной природы с септическими явлениями (температурная реакция 40,0 - 41,0oC), с помощью простых (например агар Хоттингера, ГРМ - агар, тиогликолиевая среда) и дифференциально-диагностических микробиологических сред (среда Олькеницкого, Эндо, висмут-сульфитная) выделены Эшерихия коли и Сальмонеллы. Кроме того, путем проведения 4 пассажей на перевиваемой культуре клеток MDCK, выделены вирусы инфекционного ринотрахеита и парагриппа 3.
Выделенные вирусы нарабатывают на культуре клеток MDCK в конечной концентрации не менее 1•106 ЦПД/50 на 1 мл. Вирусные биомассы смешивают и делят на две части, одну из которых (компонент "А") хранят при температуре -18oC в отдельной емкости, а другую - смешивают с формалином в конечной его концентрации 0,3 мас.% и инкубируют при комнатной температуре в течение 3 - 5 суток с получением компонента "Б" препарата, который также хранят в холодильнике при -18oC.
Полученные бактерии нарабатывают в матрацах на микробиологическом питательном агаре (ГРМ-агар) и собирают с помощью шпателя и раствора Эрла в отдельные емкости (конечная концентрация каждого вида бактерий составляет при этом 1•1011 клеток на 1 мл). Оба вида бактерий смешивают вместе и к полученной смеси добавляют формальдегид в конечной концентрации 0,3%. После проведенной инкубации в течение 5 суток при комнатной температуре получают компонент "В" препарата, который хранят в холодильнике при +4oC.
Пример 2. Технология приготовления ассоциированной вакцины против заболеваний крупного рогатого скота и исследование эффективности ее действия
Для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иимуномодулятор, например тимарис, в количестве 1 мл на 10 мл смеси компонентов "Б" и "В" препарата. Полученную ассоциированную вакцину исследуют на специфическую стерильность на культуре клеток MDCK и на микробиологической питательной среде (ГРМ - агар). Кроме того, эту вакцину исследуют на реактогенность и безвредность по ответной реакции организма лабораторных животных (белые мыши массой 14 - 16 г и морские свинки массой 200 - 250 г), которым вводят вакцину подкожно (в объеме 0,2 мл и 0,5 мл соответственно). Таким образом приготовленный препарат представляет собой вакцину на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир").
Для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иимуномодулятор, например тимарис, в количестве 1 мл на 10 мл смеси компонентов "Б" и "В" препарата. Полученную ассоциированную вакцину исследуют на специфическую стерильность на культуре клеток MDCK и на микробиологической питательной среде (ГРМ - агар). Кроме того, эту вакцину исследуют на реактогенность и безвредность по ответной реакции организма лабораторных животных (белые мыши массой 14 - 16 г и морские свинки массой 200 - 250 г), которым вводят вакцину подкожно (в объеме 0,2 мл и 0,5 мл соответственно). Таким образом приготовленный препарат представляет собой вакцину на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир").
Перед применением препарата в хозяйстве показатели реактогенности и безвредности оценивают на группе изолированных телят, используя при этом от 5 до 10 животных, которым вводят подкожно по 5 мл вакцины. Наблюдение за лабораторными и домашними животными проводилось в течение 14 - 20 дней. Общее время, связанное с приготовлением конечной формы вакцины составляло 1,5 месяца. После получения хороших результатов на изолированных телятах, вакцинации подвергают двукратно стельных сухостойных коров за 2 и 1 месяц до отела, а также телят в возрасте 25 - 30 дней и 2 месяца.
Для этого проводят подкожную иммунизацию животных вакциной в области шеи. Перед применением вакцину разводят в 50 мл растворителя (физиологический раствор). При этом 1 доза каждого компонента препарата составляет 2 мл первичной вакцинации и 6 мл при повторной вакцинации. В результате проведенной работы гибель КРС в хозяйстве снизилась в 3 раза по сравнению с предыдущими годами, когда данная работа не проводилась.
Пример 3. Технология получения поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний КРС и исследование эффективности ее действия
Для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В" и смесь компонентов "А" и "В" заявляемого препарата. Таким образом приготовленные смеси на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир") использовали для проведения трехкратной иммунизации трех лошадей. Вначале проводят первый цикл трехкратной иммунизации лошадей: животным-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл. Через 7 суток проводят вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл. Затем через не менее 1,5 месяцев после последней иммунизации первого цикла проводят второй цикл иммунизации, аналогично первому. Через 8 - 9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата второго цикла иммунизации у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 литров в бутыли и еще через 5-6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме. Причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия. Далее материал отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция. Бутыли с образцами крови встряхивают для образования пены с фибрином и повторно отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости.
Для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В" и смесь компонентов "А" и "В" заявляемого препарата. Таким образом приготовленные смеси на основе местных вирусных и бактериальных штаммов для конкретного животноводческого хозяйства (АО "Салаир") использовали для проведения трехкратной иммунизации трех лошадей. Вначале проводят первый цикл трехкратной иммунизации лошадей: животным-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл. Через 7 суток проводят вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл. Затем через не менее 1,5 месяцев после последней иммунизации первого цикла проводят второй цикл иммунизации, аналогично первому. Через 8 - 9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата второго цикла иммунизации у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 литров в бутыли и еще через 5-6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме. Причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия. Далее материал отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция. Бутыли с образцами крови встряхивают для образования пены с фибрином и повторно отстаивают в течение 12 - 24 часов при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости.
Перед применением поливалентной сыворотки в хозяйстве показатели ее реактогенности и безвредности оценивают на лабораторных животных (белые мыши массой 14 - 16 г и морские свинки массой 200 - 250 г), которым вводят сыворотку подкожно (в объеме 0,2 мл и 0,5 мл соответственно). Наблюдение за лабораторными и домашними животными проводят в течение 14 - 20 дней. Специфическая активность антител к вирусам инфекционного ринотрахеита и парагриппа в такой сыворотке составляла в реакции нейтрализации 1:512 - 1:1024, а к Э. коли и Сальмонеллам в реакции приципитации в геле по Оухтерлони 1:32 - 1: 128. Общее время, связанное с приготовлением конечной формы препарата, составляет 3-4 месяца. После получения хороших результатов испытания сыворотку вводят внутримышечно в объеме 5 - 10 мл однократно больным телятам в АО "Салаир" и здоровым с профилактической целью. В результате проведенной работы гибель КРС в хозяйстве снизилась в 3 раза по сравнению с предыдущими годами, когда данная работа не проводилась.
При использовании препарата, изготовленного предлагаемым способом, удается получать сыворотки, содержащие антитела ко всем возбудителям заболевания в высоких титрах, равных тем, которые получаются при иммунизации животных одним или двумя микроорганизмами.
В результате широкого внедрения поливалентных гипериммунных сывороток против местных вирусно-бактериальных заболеваний КРС предполагается погасить энзоотические очаги инфекционных заболеваний среди КРС, существенно снизить объем циркуляции соответствующих вирусов и микробов в природе, что уменьшит в свою очередь опасность инфицирования человека, других домашних и диких животных и птиц. При этом создастся возможность производить экологически чистые (касаясь вирусно-бактериальных загрязнений) мясомолочные продукты высокого качества.
Промышленная применимость. Изобретение может быть использовано в ветеринарии, прикладной микробиологии и вирусологии.
Claims (3)
1. Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота, включающий предварительное выделение из местного очага эпизоотических штаммов возбудителей болезней, их идентификацию, наработку биомассы культур возбудителей микробиологическим способом и, при необходимости, инактивацию полученной биомассы химическим реагентом, отличающийся тем, что для приготовления компонентов "А", "Б" и "В" препарата из местного очага выделяют все эпизоотические штаммы возбудителей болезней как бактериального, так и вирусного происхождения, которые после идентификации раздельно культивируют, причем вирусные штаммы выращивают на монослоях культур клеток, например MDBK, с добавлением питательной среды, например Игла МЭМ, до получения конечной концентрации каждого вируса не менее 1 - 106 ЦПД/50 на 1 мл с последующим сливом вируссодержащей суспензии каждого штамма в равных объемах в общую емкость при перемешивании с получением компонента "А" препарата, часть которого инактивируют формалином в конечной концентрации не более 0,2 - 0,4 мас.% и инкубируют не менее 3 - 5 суток при комнатной температуре с получением компонента "Б" препарата, а бактериальные штаммы культивируют в матрацах на микробиологическом питательном агаре, например ГРМ-агаре, до получения конечной концентрации каждого штамма бактерий не менее 1 - 1011 кл/мл с последующим их сбором в равных объемах в общую емкость с использованием раствора Эрла, полученную смесь биомассы штаммов бактерий инактивируют формалином в конечной концентрации 0,2 - 0,4 мас.% с последующей инкубацией не менее 3 - 5 суток при комнатной температуре с получением компонента "В" препарата.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для приготовления ассоциированной вакцины используют компоненты "Б" и "В" препарата, которые смешивают в равных соотношениях, а в полученную смесь дополнительно вводят иммуномодулятор, например Т-активин, или тимарис, или ридостин, при соотношении иммуномодулятора и смеси компонентов "Б" и "В" препарата не более 1 : 10.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для получения поливалентной гипериммунной сыворотки вначале приготавливают в равных соотношениях смесь компонентов "Б" и "В", а также в равных соотношениях смесь компонентов "А" и "В", лошадям-продуцентам подкожно в область шеи проводят первую инъекцию смеси компонентов "Б" и "В" препарата в объеме 10 - 20 мл, через 7 суток - вторую инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 40 - 50 мл и еще через 7 суток - третью инъекцию смеси компонентов "А" и "В" препарата в объеме 150 - 200 мл, через не менее 1,5 месяца повторяют аналогичное трехкратное введение смеси компонентов, через 8 - 9 суток после третьей (последней) инъекции компонентов препарата у лошадей-продуцентов осуществляют через стерильную герметичную систему забор крови в количестве до 10 л в бутыли и еще через 5 - 6 суток осуществляют повторный забор крови в том же объеме, причем в каждый полученный образец крови объемом 10 л вводят не более 300 мл 10%-ного раствора цитрата натрия, далее материал отстаивают в течение 12 - 24 ч при комнатной температуре и добавляют в каждый образец крови объемом 10 л 10 - 15 мл 30%-ного раствора хлористого кальция, бутыли с образцами крови встряхивают и повторно отстаивают в течение 12 - 24 ч при комнатной температуре до образования сыворотки с последующим ее сливом в отдельные емкости.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (ru) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (ru) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2147892C1 true RU2147892C1 (ru) | 2000-04-27 |
Family
ID=20210567
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU98117373A RU2147892C1 (ru) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2147892C1 (ru) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407543C1 (ru) * | 2009-07-09 | 2010-12-27 | Виктор Всеволодович Гуненков | Способ получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят |
| RU2456021C2 (ru) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Способ получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота |
| RU2539105C1 (ru) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
-
1998
- 1998-09-22 RU RU98117373A patent/RU2147892C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Иммунопрофилактика болезней животных. - М.: Колос, 1981, с.144-145. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2407543C1 (ru) * | 2009-07-09 | 2010-12-27 | Виктор Всеволодович Гуненков | Способ получения сыворотки для лечения и профилактики вирусных кишечных и респираторных болезней телят |
| RU2456021C2 (ru) * | 2010-02-24 | 2012-07-20 | ФГОУ ВПО "Дагестанская государственная сельскохозяйственная академия" | Способ получения гипериммунной сыворотки против вируса парагриппа-3 крупного рогатого скота |
| RU2539105C1 (ru) * | 2013-10-04 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Саратовский научно-исследовательский ветеринарный институт" | Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3911108A (en) | Process of producing bovine milk products containing specific antibodies | |
| RU2593718C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типов а, о, азия-1 | |
| RU2143921C1 (ru) | Вакцина против ящура типа а и способ ее изготовления | |
| RU2147892C1 (ru) | Способ получения препарата на основе вирусно-бактериальных штаммов из местного очага для приготовления ассоциированной вакцины или поливалентной гипериммунной сыворотки против заболеваний крупного рогатого скота | |
| RU2159127C1 (ru) | Вакцина против псевдомоноза пушных зверей | |
| RU2549434C2 (ru) | Способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки | |
| RU2065749C1 (ru) | Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота | |
| US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
| RU2432174C1 (ru) | Способ получения эшерихиозного анатоксина | |
| RU2220744C1 (ru) | Вакцина против ящура типа азия-1 и способ ее изготовления | |
| CN108892725A (zh) | 一种e型产气荚膜梭菌抗毒素血清的制备方法 | |
| SU997599A3 (ru) | Способ получени гетеровакцины дл лечени синдрома трихомонада | |
| RU2212895C2 (ru) | Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления | |
| RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| Spiridonov et al. | Clinical trial results of an associated vaccine against cattle clostridiosis and escherichiosis | |
| RU2043773C1 (ru) | Способ получения вакцины против некробактериоза рогатого скота | |
| RU2056861C1 (ru) | Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура | |
| RU2764600C1 (ru) | Вакцина против эшерихиоза телят и поросят | |
| RU2753410C2 (ru) | Способ получения анатоксин-вакцины против эшерихиоза животных | |
| RU2266327C1 (ru) | Штамм "краснодонский" вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| RU2284193C1 (ru) | Сухая культуральная вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных | |
| RU2266326C1 (ru) | Штамм "ленинградский" вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
| SU555664A1 (ru) | Способ получени поливалентной вакцины против лептоспироза животных | |
| RU2766549C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят | |
| RU2814593C1 (ru) | Способ профилактики эшерихиоза у поросят |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070923 |