Изобретение относится к области медицины, а именно к биофизическим методам диагностики различных форм нейросифилиса. The invention relates to medicine, namely to biophysical methods for the diagnosis of various forms of neurosyphilis.
Существуют методы хемилюминесценции, используемые для диагностики опухолей спинного мозга: предлагается сравнивать интенсивность перекисной люминесценции спинномозговой жидкости после замораживания (Журнал невропатологии и психиатрии, т. 94, вып. 4, 1994 г., с. 30-33) или интенсивность люминесценции фотоиндуцированной спинномозговой жидкости (А. с. N 1318913 G 01 N 33/483, 1987 г. ) с критериальным значением люминесценции и по отношению к нему диагностировать экстра или интрамедуллярную опухоль. There are chemiluminescence methods used to diagnose spinal tumors: it is proposed to compare the intensity of peroxide luminescence of cerebrospinal fluid after freezing (Journal of Neuropathology and Psychiatry, vol. 94, issue 4, 1994, pp. 30-33) or the luminescence intensity of photoinduced cerebrospinal fluid (A. p. N 1318913 G 01 N 33/483, 1987) with the criterion value of luminescence and in relation to it diagnose an extra or intramedullary tumor.
Недостатки используемых методов заключаются в следующем: во-первых, интенсивность спонтанного сверхслабого свечения в спинномозговой жидкости больных нейросифилисом довольно мала (1-2 имп/с), что обусловлено низким уровнем свободнорадикального окисления в биосубстрате при этой патологии. Это препятствует четкой дифференциации различных форм нейросифилиса между собой и контролем. Предлагаемое фотоиндуцирование ликвора увеличивает интенсивность люминесценции незначительно (не выше 7-8 имп/с). Во-вторых, замораживание спинномозговой жидкости замедляет диагностический процесс и также способствует угнетению исходно низкой хемилюминесценции. The disadvantages of the methods used are as follows: firstly, the intensity of spontaneous superweak glow in the cerebrospinal fluid of patients with neurosyphilis is rather small (1-2 imp / s), which is due to the low level of free radical oxidation in the biosubstrate with this pathology. This prevents a clear differentiation of various forms of neurosyphilis between themselves and the control. The proposed photoinduction of cerebrospinal fluid increases the luminescence intensity slightly (not higher than 7-8 pulses / s). Secondly, freezing of cerebrospinal fluid slows down the diagnostic process and also contributes to the inhibition of initially low chemiluminescence.
Цель изобретения - повышение точности дифференциальной диагностики ранних и поздних форм нейросифилиса, ускорение и облегчение диагностического процесса, снижение экономических затрат на лабораторные исследования. The purpose of the invention is improving the accuracy of differential diagnosis of early and late forms of neurosyphilis, accelerating and facilitating the diagnostic process, reducing the economic costs of laboratory research.
Поставленную цель решают за счет определения уровня индуцированной перекисью водорода люминесценции спинномозговой жидкости. Измеряют уровень максимальной интенсивности перекисной хемилюминесценции (Imax). Проведенные ранее эксперименты показали, что в случаях сифилитического менингита (острого и подострого течения) максимум интенсивности ХЛ наблюдается в пределах от 250 имп/с и выше, при менинговаскулярном сифилисе 114 Imax<250 имп/с. Поздние формы нейросифилиса характеризуются низким уровнем сверхслабого свечения, сопоставимого с контролем (Imax<114 имп/с).This goal is solved by determining the level of hydrogen peroxide-induced luminescence of the cerebrospinal fluid. The level of maximum intensity of peroxide chemiluminescence (I max ) is measured. Previous experiments have shown that in cases of syphilitic meningitis (acute and subacute course), the maximum CL intensity is observed in the range of 250 imp / s and higher, with meningovascular syphilis 114 I max <250 pulses / s. Late forms of neurosyphilis are characterized by a low level of superweak luminescence, comparable with the control (I max <114 pulse / s).
Способ осуществляют следующим образом. Пробу цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) в объеме 1 см3 помещают в кварцевую кювету, не имеющую хемилюминесцентных свойств. Инициацию осуществляют путем добавления 5% раствора перекиси водорода в объеме 0,02 мл последовательно 3 раза в каждую кювету. Хемилюминесценцию ЦСЖ измеряют на серийном медицинском хемилюминометре CL 3604, предназначенном для исследования сверхслабых свечений биологически активных объектов в спектральной области 200 - 650 нм. Прибор выполнен в виде единого конструктива и работает под управлением ПЭВМ типа IBM PC-286 XT/AT. Кювету с исследуемой пробой помещают в термостатируемый барабан с температурой 37,0±0,5oC. В качестве детектора в установке используют 24-разрядный счетчик импульсов ФЭУ-85. В рабочем режиме установки напряжение питания для ФЭУ-85 составляет 1500 В, световая чувствительность фотокатода 9•10 exp-5, энергетический эквивалент собственных шумов 0,85 КЭВ. Число импульсов за интервал времени в режиме счета фотонов пропорционально количеству импульсов, испускаемых контрольным источником ядерного заряда за этот же промежуток времени (7300 имп/с). Сигнал из ФЭУ считывается аналого-цифровым преобразователем, фильтруется от помех и посылается через последовательный интерфейс типа RS232 в ПЭВМ, где средствами прилагаемого программного обеспечения строится кривая хемилюминесценции для каждой пробы. Время измерения одной точки хемилюминесцентной кривой составляло 0,1 с, минимальное число точек измерения на каждую кривую - 1, пауза между измерениями 0 с, общее время измерения ХЛ пробы - 120 минут. Графическую информацию подвергают математической обработке функцией полинома с коэффициентом фильтрации 10, после чего рассчитывают максимальный показатель интенсивности хемилюминесценции и проводят сравнительный анализ с установленными экспериментально значениями интенсивности для менингеальных, менинговаскулярных и поздних форм нейросифилиса.The method is as follows. A sample of cerebrospinal fluid (CSF) in a volume of 1 cm 3 is placed in a quartz cuvette that does not have chemiluminescent properties. Initiation is carried out by adding a 5% solution of hydrogen peroxide in a volume of 0.02 ml sequentially 3 times in each cuvette. CSF chemiluminescence is measured on a CL 3604 serial medical chemiluminometer designed to study ultra-weak emission of biologically active objects in the spectral range 200 - 650 nm. The device is made in the form of a single construct and runs on a PC type IBM PC-286 XT / AT. The cuvette with the test sample is placed in a thermostatic drum with a temperature of 37.0 ± 0.5 o C. As a detector in the installation using a 24-bit pulse counter FEU-85. In the operating mode of the installation, the supply voltage for the PMT-85 is 1500 V, the light sensitivity of the photocathode is 9 • 10 exp -5 , the energy equivalent of intrinsic noise is 0.85 KEV. The number of pulses per time interval in the photon counting mode is proportional to the number of pulses emitted by a control source of nuclear charge for the same period of time (7300 pulses / s). The signal from the PMT is read by an analog-to-digital converter, filtered out from interference, and sent via a serial interface of the RS232 type to a PC, where the chemiluminescence curve for each sample is built using the included software. The measurement time of one point of the chemiluminescent curve was 0.1 s, the minimum number of measurement points per curve was 1, the pause between measurements was 0 s, and the total measurement time of the CL sample was 120 minutes. The graphic information is subjected to mathematical processing by a polynomial function with a filtration coefficient of 10, after which the maximum rate of chemiluminescence intensity is calculated and a comparative analysis is carried out with experimentally determined intensity values for meningeal, meningovascular and late forms of neurosyphilis.
Пример 1. Больной Е., 35 лет. Диагноз при поступлении: вторичный свежий сифилис. Жаловался на умеренную головную боль, тяжесть и шум в голове, преходящее головокружение, общую слабость. На фоне проводимого лечения пенициллином (курсовая доза 44 800 тыс. ЕД в/м) указанные жалобы сохранялись. После проведения перекисной хемилюминесценции спинномозговой жидкости больного (Imax = 315 имп/с) был диагностирован подострый сифилитический менингит, лечение скорректировано по методикам терапии нейросифилиса (курсовая доза 168 млн. ЕД в/м). В течение 3 дней наступил регресс менингеальной симптоматики.Example 1. Patient E., 35 years old. Diagnosis at admission: secondary fresh syphilis. Complained of moderate headache, heaviness and noise in the head, transient dizziness, general weakness. Against the background of the treatment with penicillin (course dose of 44,800 thousand units / m), these complaints persisted. After peroxide chemiluminescence of the patient's cerebrospinal fluid (I max = 315 imp / s), subacute syphilitic meningitis was diagnosed, treatment was adjusted according to the methods of treatment of neurosyphilis (course dose of 168 million units / m). Within 3 days there was a regression of meningeal symptoms.
Пример 2. Больная Л., 45 лет. Диагноз при поступлении: поздний скрытый сифилис. У больной отмечалась эмоциональная лабильность, повышенная забывчивость, постоянные головные боли, рассеянная микроорганическая симптоматика, шаткость при ходьбе. После проведения перекисной хемилюминесценции спинномозговой жидкости больной (Imax = 101 имп/с) был диагностирован поздний васкулярный сифилис мозга с дементным синдромом. Назначен курс лечения по методикам терапии позднего нейросифилиса.Example 2. Patient L., 45 years old. Diagnosis at admission: late latent syphilis. The patient had emotional lability, increased forgetfulness, constant headaches, diffuse microorganic symptoms, and shakiness when walking. After peroxide chemiluminescence of the cerebrospinal fluid, the patient (I max = 101 imp / s) was diagnosed with late vascular syphilis of the brain with dementia syndrome. A course of treatment was prescribed according to the methods of treatment of late neurosyphilis.
Способ применен в клинике Краевого кожно-венерологического диспансера. Исследована инициированная перекисью водорода ХЛ ЦСЖ у 20 больных с нейросифилисом и у 5 лиц контрольной группы. Нейросифилис был представлен следующими формами: подострый сифилитический менингит - 8 больных; ранний менинговаскулярный сифилис - 7 больных; васкулярный сифилис мозга, прогрессивный паралич, спинная сухотка - 5. Анализ ЦСЖ проводился до начала специфической терапии, больные подбирались с учетом отсутствия отягощающих анамнез заболеваний и травм нервной системы. Диагноз нейросифилиса у всех больных подтвержден комплексным клинико-лабораторным обследованием. Результаты исследования представлены в таблице и наглядно отображены на фиг. 1. Выявлена сильная корреляционная связь между интенсивностью ХЛ и выраженностью воспалительных изменений СМЖ у больных нейросифилисом (см. фиг. 2). The method is applied in the clinic of the Regional Dermatovenerologic Dispensary. The CSF-initiated hydrogen chloride CL was studied in 20 patients with neurosyphilis and in 5 individuals of the control group. Neurosyphilis was represented by the following forms: subacute syphilitic meningitis - 8 patients; early meningovascular syphilis - 7 patients; cerebral vascular syphilis, progressive paralysis, spinal cord - 5. CSF analysis was carried out before the start of specific therapy, patients were selected taking into account the absence of a burdening history of diseases and injuries of the nervous system. The diagnosis of neurosyphilis in all patients was confirmed by a comprehensive clinical and laboratory examination. The results of the study are presented in the table and are visually displayed in FIG. 1. A strong correlation between the intensity of CL and the severity of inflammatory changes in the CSF in patients with neurosyphilis was revealed (see Fig. 2).
Преимущества предлагаемого способа дифференциальной диагностики ранних и поздних форм нейросифилиса заключаются в использовании нативной спинномозговой жидкости больных нейросифилисом, катализированной перекисью водорода, простоте выполнения, широкой доступности в лабораторных условиях (используется стандартная серийная аппаратура), возможности быстрого получения точных результатов, подвергающихся статистической обработке. Способ не требует затрат каких-либо дорогостоящих материалов (по сравнению с реакцией Ланге с использованием коллоидного золота), создания особых условий для анализа и позволяет провести исследование до 35 проб спинномозговой жидкости одновременно. The advantages of the proposed method for differential diagnosis of early and late forms of neurosyphilis are the use of the native cerebrospinal fluid of patients with neurosyphilis, catalyzed by hydrogen peroxide, ease of implementation, wide availability in the laboratory (standard serial equipment is used), and the ability to quickly obtain accurate results that are subject to statistical processing. The method does not require the cost of any expensive materials (compared with the Lange reaction using colloidal gold), the creation of special conditions for analysis and allows the study of up to 35 samples of cerebrospinal fluid simultaneously.