RU2036239C1 - Method of determination of microorganism quantity in deionized water - Google Patents
Method of determination of microorganism quantity in deionized water Download PDFInfo
- Publication number
- RU2036239C1 RU2036239C1 SU4932009A RU2036239C1 RU 2036239 C1 RU2036239 C1 RU 2036239C1 SU 4932009 A SU4932009 A SU 4932009A RU 2036239 C1 RU2036239 C1 RU 2036239C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganisms
- determination
- deionized water
- indicator
- solution
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 title claims description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 title claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 6
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 FTZIQBGFCYJWKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004377 microelectronic Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- -1 monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical class [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологическому контролю и может быть использовано в микроэлектронике, био- и медицинской технологии для контроля содержания бактерий в ультрачистой воде. The invention relates to microbiological control and can be used in microelectronics, bio and medical technology to control the content of bacteria in ultrapure water.
Для определения микроорганизмов в воде используют способ выращивания колоний бактерий на питательных средах с помощью мембранной фильтрации. Время инкубации не менее 24 ч при 37±0,5оС.To determine the microorganisms in water, a method of growing bacterial colonies on nutrient media using membrane filtration is used. The incubation time of at least 24 hours at 37 ° C ± 0,5
Для выявления колоний микроорганизмов используют индикатор вещество, окрашивающее колонии бактерий. To identify colonies of microorganisms, an indicator is used that stains bacteria colonies.
Недостатком данного метода является низкая чувствительность питательной среды и вследствие этого длительность анализа. The disadvantage of this method is the low sensitivity of the nutrient medium and, consequently, the duration of the analysis.
Целью изобретения является сокращение времени определения количества микроорганизмов в деионизированной воде. The aim of the invention is to reduce the time for determining the number of microorganisms in deionized water.
Принципиальным отличием данного метода является отказ от использования стандартных сред (типа РПА, МПА, ДПА) и импортных Millipore, Gelman, Sartorius, а также использование в качестве питательной среды раствора фосфатного буфера "Зеренсона" (рН=8,2). В качестве индикатора метилтиозолилтетразолий бромистый (МТТ). Температура инкубации 39-41оС, длительность инкубации сокращается до 60-75 мин.The principal difference of this method is the rejection of the use of standard media (such as RPA, MPA, DPA) and imported Millipore, Gelman, Sartorius, as well as the use of Zerenson's phosphate buffer solution (pH = 8.2) as a nutrient medium. As an indicator, methylthiosolyltetrazolium bromide (MTT). The incubation temperature is 39-41 о С, the incubation time is reduced to 60-75 minutes.
Олиготрофные бактерии, существующие в ультрачистой воде, довольствуются минимальным количеством питательных веществ для жизнедеятельности, причем питательными веществами для них могут служить не только органические вещества, но и неорганические, каковыми являются элементы калий, натрий, фосфор, входящие в состав буфера [1] Точный подбор рН и температурного режима инкубации обуславливает интенсивный рост микроорганизмов. Oligotrophic bacteria that exist in ultrapure water are satisfied with the minimum amount of nutrients for life, and not only organic substances, but also inorganic ones, which are the elements potassium, sodium, phosphorus that make up the buffer, can serve as nutrients for them [1] pH and temperature incubation causes intensive growth of microorganisms.
Индикатор метилтиозолилтетразолий бромистый (МТТ), легко проникая в живую клетку бактерии, взаимодействует с ферментом живой клетки С-оксидазой, при этом происходит восстановление бесцветной формы МТТ в формазан красного цвета [2-4]
При осуществлении способа определения количества микроорганизмов в деионизированной воде осуществляют отбор исследуемой пробы, фильтрацию ее через мембранный фильтр, введение последнего в питательную среду, содержащую индикатор, инкубирование микроорганизмов с последующим установлением их количества, в качестве питательной среды используют фосфатный буфер с рН=8,2, индикатор представляет собой водно-спиртовой раствор метилтиозолилтетразолия бромистого с концентрацией 0,15% при этом инкубирование микроорганизмов осуществляют при 39-41оС в течение 60-75 мин.The indicator methylthiosolyltetrazolium bromide (MTT), easily penetrating the living cell of the bacterium, interacts with the enzyme of the living cell C-oxidase, and the colorless form of MTT is restored to red formazan [2-4]
When implementing the method for determining the number of microorganisms in deionized water, a test sample is taken, it is filtered through a membrane filter, the latter is introduced into a nutrient medium containing an indicator, the microorganisms are incubated and their quantity is established, and a phosphate buffer with pH = 8.2 is used as a nutrient medium , the indicator is a water-alcohol solution of methylthiosolyltetrazolium bromide with a concentration of 0.15% while the incubation of microorganisms is carried out at 39-41 about C for 60-75 minutes
П р и м е р конкретного осуществления способа. Приготовление 0,15%-ного раствора МТТ на фосфатном буфере "Зеренсона" (рН=8,2). PRI me R particular implementation of the method. Preparation of 0.15% MTT solution on Zerenson's phosphate buffer (pH = 8.2).
Реактивы готовят следующим образом:
1. Приготовление раствора "А".Reagents are prepared as follows:
1. Preparation of solution "A".
9,09 г однозамещенного фосфата калия КН2РО4 растворяют в колбе на 1000 мл в дистиллированной воде и доводят до метки. Раствор должен соответствовать 1/15 М КН2РО4.9.09 g of monosubstituted potassium phosphate KH 2 PO 4 is dissolved in a 1000 ml flask in distilled water and adjusted to the mark. The solution should correspond to 1/15 M KN 2 PO 4 .
2. Приготовление раствора "Б". 2. Preparation of solution "B".
11,88 г двузамещенного фосфата натрия Na2HPO4 ˙ H2O растворяют в мерной колбе на 1000 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор соответствует 1/15 M Na2HPO4 ˙ 2H2O.11.88 g of disubstituted sodium phosphate Na 2 HPO 4 ˙ H 2 O was dissolved in a 1000 ml volumetric flask and adjusted to the mark with distilled water. The solution corresponds to 1/15 M Na 2 HPO 4 ˙ 2H 2 O.
3. Приготовление буферного раствора (рН=8,2). 3. Preparation of a buffer solution (pH = 8.2).
В мерную колбу на 100 мл пипеткой отмеряют 3,3 мл раствора "А". Доводят до метки раствором "Б". Тщательно перемешивают. 3.3 ml of solution "A" is pipetted into a 100 ml volumetric flask. Bring to the mark with solution "B". Mix thoroughly.
4. Приготовление 0,15%-ного раствора МТТ. 4. Preparation of a 0.15% MTT solution.
0,15 г соли МТТ растворяют в 10 мл этилового спирта в мерной колбе на 100 мл. Доливают до метки раствором фосфатного буфера. 0.15 g of MTT salt is dissolved in 10 ml of ethanol in a 100 ml volumetric flask. Top up to the mark with a solution of phosphate buffer.
Способ осуществляют следующим образом. The method is as follows.
250-500 мл испытуемой воды профильтровывают через мембранный фильтр. Фильтр переносят в стерильную чашку Петри, на дно которой помещают обеззоленный фильтр, смоченный 1,5-3,0 мл фосфатного буфера "Зеренсона" с растворенным в нем 0,15% МТТ. 250-500 ml of the test water is filtered through a membrane filter. The filter is transferred to a sterile Petri dish, on the bottom of which is placed an anesthetized filter moistened with 1.5-3.0 ml of Zerenson phosphate buffer with 0.15% MTT dissolved in it.
Чашки Петри помещают в термостат при 39-41оС. Через 60-75 мин окрашенные живые клетки микроорганизмов подсчитывают под микроскопом в проходящем свете.The petri dish was placed in a thermostat at 39-41 ° C. After 60-75 minutes, stained live cells of microorganisms were counted under a microscope with transmitted light.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (en) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Method of determination of microorganism quantity in deionized water |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (en) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Method of determination of microorganism quantity in deionized water |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2036239C1 true RU2036239C1 (en) | 1995-05-27 |
Family
ID=21572270
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4932009 RU2036239C1 (en) | 1991-03-21 | 1991-03-21 | Method of determination of microorganism quantity in deionized water |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2036239C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280692C2 (en) * | 1999-12-30 | 2006-07-27 | Налко Кемикал Компани | Method for control of attached and plankton microbiological populations in industrial aqueous system (two variants) |
| RU2350656C2 (en) * | 2006-02-14 | 2009-03-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method of determination of foodstuff contamination with pathogenic biological agents in extreme situations |
-
1991
- 1991-03-21 RU SU4932009 patent/RU2036239C1/en active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 1. Патент США N 4207394, кл. C 12Q 1/04, опублик. 1980. * |
| 2. Патент США N 4292405, кл. C 12Q 1/22, опублик. 1981. * |
| 3. Патент США N 4246339, кл. C 12Q 1/66, опублик. 1981. * |
| 4. Патент США N 4630421, кл. C 12Q 1/04, опублик. 1986. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2280692C2 (en) * | 1999-12-30 | 2006-07-27 | Налко Кемикал Компани | Method for control of attached and plankton microbiological populations in industrial aqueous system (two variants) |
| RU2350656C2 (en) * | 2006-02-14 | 2009-03-27 | Федеральное государственное учреждение здравоохранения Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Method of determination of foodstuff contamination with pathogenic biological agents in extreme situations |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2176895C (en) | Test kit and method for the quantitative determination of coliform bacteria and e. coli | |
| FI67725C (en) | FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ENHETER AVSEDDA FOER BESTAEMNING AV ANTIBIOTIKA- OCH SULFARESTER I BIOLOGISKA VAETSKOR OCH FRAMSTAELLDA ENHETER | |
| EP0871854A2 (en) | Medium for detecting enterococci in a sample | |
| FI57128B (en) | SAETT ATT IDENTIFIED MICROORGANISM | |
| CA2186728A1 (en) | A rapid microbiological test for the detection of antibacterial compounds | |
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| CN1957089B (en) | pollution measurement | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| RU2036239C1 (en) | Method of determination of microorganism quantity in deionized water | |
| Humphreys | Formation of acrolein from glycerol by B. welchii | |
| Rigby | An egg‐yolk agar diffusion assay for monitoring phospholipase C in cultures of Clostridium welchii | |
| CA1060764A (en) | E. coli detection broth for clinical use with automated microbial analyzer | |
| RU2042134C1 (en) | Method for identifying mycobacteria m. tuberculosis and m. bovis | |
| Corper | Sodium Tellurite as a Rapid Test for the Viability of Tubercle Bacilli Studies on the Biochemistry and Chemotherapy of Tuberculosis, XIII | |
| RU2175671C1 (en) | Nutrient medium for isolation of hemoculture in diagnosis of typhoid fever and paratyphoid fever | |
| RU2803258C1 (en) | Method of carbohydrate fermentation by escherichia coli bacteria | |
| SU1537689A1 (en) | Strain of klebsiella pneumoniae bacteria used as reference strain in determining antilysozyme activity of bacteria, and method of determining antilysozyme activity of bacteria | |
| CA1114270A (en) | Growth limiting media | |
| RU2425871C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2052816C1 (en) | Method of aqueous biocenosis state prognosis | |
| Presnell et al. | Use of the membrane filter and a filter aid for concentrating and enumerating indicator bacteria and Salmonella from estuarine waters | |
| RU2708029C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of yersinia pestis ev | |
| SU545671A1 (en) | Method for isolating pure cultures of Vibrio cholerae | |
| SU990810A1 (en) | Culture medium for culturing gonococci | |
| US20010051354A1 (en) | Method for detecting microorganisms and a support which can be used in such a method |