RU2032674C1

RU2032674C1 - Compound having antiherpetic action

Info

Publication number: RU2032674C1
Authority: RU
Inventors: Александр Александрович Озеров; Михаил Станиславович Новиков; Евгений Иванович Бореко; Галина Викентьевна Владыко; Ольга Трифоновна Андреева; Людмила Викторовна Коробченко; Вениамин Иосифович Вотяков
Original assignee: Александр Александрович Озеров
Priority date: 1990-01-11
Filing date: 1990-01-11
Publication date: 1995-04-10

Abstract

FIELD: medicine. SUBSTANCE: 1-allyl oxymethyluracyl is proposed as antiherpetic agent. It is prepared by condensation of 2,4-di(trimethylsilyloxy)pyrimidine being prepared of uracil with chloromethylallyl ether, in chloroform medium. Essential formula of desired compound is C₈H₁₁N₂O₃, its yield being 84.1 %. Melting point of said compound is 113-116 C, its LD₅₀ is more 100 mg/kg. EFFECT: improves quality of desired compound. 3 tbl

Description

Изобретение относится к новому антигерпесному средству, которое может найти применение в медицине. The invention relates to a new anti-herpes remedy, which may find application in medicine.

Известны противовирусные производные пиримидинового ряда, например 5-Е-(2-бромвинил)-2^l-дезоксиуридин, который обладает высокой противогерпесной активностью, однако, являясь хорошим субстратом для клеточной уридинфосфорилазы, он быстро активируется с расщеплением по гликозидной связи, что вызывает необходимость поддержания его постоянной концентрации для обеспечения терапевтического действия.Antiviral derivatives of the pyrimidine series are known, for example, 5-E- (2-bromovinyl) -2 ^l- deoxyuridine, which has high anti-herpes activity, however, being a good substrate for cellular uridine phosphorylase, it is rapidly activated with glycosidic cleavage, which necessitates maintenance its constant concentration to provide a therapeutic effect.

Наиболее эффективным противовирусным соединением, применяемым в настоящее время для лечения заболеваний, вызываемых вирусом герпеса, является-9[(2-гидроксиэтокси)метил-гуанин(ацикловир)] Однако это соединение проявляет мутагенные свойства, кроме того, выделены резистентные по отношению к ацикловиру штаммы вирусов герпеса. The most effective antiviral compound currently used to treat diseases caused by the herpes virus is-9 [(2-hydroxyethoxy) methyl-guanine (acyclovir)]. However, this compound exhibits mutagenic properties, in addition, strains resistant to acyclovir are isolated. herpes viruses.

Цель изобретения поиск в ряду производных пиримидина, которые могут найти применение как соединения, обладающие противогерпесной активностью при низкой токсичности. The purpose of the invention is the search for a series of pyrimidine derivatives that can be used as compounds having anti-herpes activity with low toxicity.

Поставленная цель достигается применением 1-аллил-оксиметилурацила формулы

в качестве вещества, обладающего противогерпесныим действием. Ранее это соединение было предложено в качестве полупродукта для синтеза соединений, обладающих противовирусной и противоопухолевой активностью. Применение его в качестве соединения, обладающего антигерпесной активностью, не известно.This goal is achieved by using 1-allyl-oxymethyluracil of the formula

as a substance with anti-herpes action. Previously, this compound was proposed as an intermediate for the synthesis of compounds with antiviral and antitumor activity. Its use as a compound having anti-herpes activity is not known.

П р и м е р 1. 1-Аллилоксиметилурацил. К суспензии 4,0 г (0,036 моль) урацила в 40 мл тетрахлорметана прибавляют при комнатной температуре 14,6 г (0,090 моль) гексаметилдисилазана и 0,2 г (0,018 моль) триметилхлорсилана и смесь кипятят до образования прозрачного раствора. Растворитель отгоняют и летучие продукты удаляют в вакууме с защитой от влаги воздуха при остаточном давлении 2-4 мм рт.ст. и температуре не выше 100^оС. Получают 9,1 г (99,5%) 2,4-ди(триметилсилилокси)пиримидина в виде прозрачного бесцветного масла. Силилпроизводное растворяют в 20 мл безводного хлороформа и при комнатной температуре добавляют в течение 5 мин раствор 4,7 г (0,044 моль) хлорметилаллилового эфира в 8 мл хлороформа. Реакционную массу перемешивают 24 ч при комнатной температуре, после чего добавляют 100 мл воды и экстрагируют 8 раз по 50 мл хлороформа. Экстракт сушат сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Остаток перекристаллизовывают из изопропанола и получают 5,47 г 1-аллилоксиметилурацила, т.пл. 113-116^оС, выход 84,1%
Найдено, C 52,46 H 5,30 N 15,28.PRI me R 1. 1-Allyloxymethyluracil. To a suspension of 4.0 g (0.036 mol) of uracil in 40 ml of tetrachloromethane, 14.6 g (0.090 mol) of hexamethyldisilazane and 0.2 g (0.018 mol) of trimethylchlorosilane are added at room temperature and the mixture is boiled until a clear solution is formed. The solvent is distilled off and the volatile products are removed in vacuo with protection from moisture in the air at a residual pressure of 2-4 mm Hg. and a temperature not higher than 100 ^C. 9.1 g (99.5%) of 2,4-di (trimethylsilyloxy) pyrimidine as a clear colorless oil. The silyl derivative is dissolved in 20 ml of anhydrous chloroform, and a solution of 4.7 g (0.044 mol) of chloromethylallyl ether in 8 ml of chloroform is added over 5 minutes at room temperature. The reaction mass is stirred for 24 hours at room temperature, after which 100 ml of water are added and extracted 8 times with 50 ml of chloroform. The extract was dried with magnesium sulfate, filtered and evaporated. The residue was recrystallized from isopropanol to give 5.47 g of 1-allyloxymethyluracil, mp. 113-116 ^about C, yield 84.1%
Found, C, 52.46; H, 5.30; N, 15.28.

C₈H₁₁N₂O₃.C ₈ H ₁₁ N ₂ O ₃ .

Вычислено, C 52,74 H 5,53 N 15,38. Calculated: C, 52.74; H, 5.53; N, 15.38.

R_f=0,61 (этилацетат).R _f = 0.61 (ethyl acetate).

ПМР-спектр, δ, м.д. 4,12 д (6 Гц, 2 Н, -О-CH₂-C=); 5,15-5,50 м (2Н, -С= СН₂); 5,22 с (2Н, N- CH₂-O); 5,73-6,15 м (1Н, -СН=С); 5,85 д (8 Гц, 1 Н Н⁵); 7,43 д (8 Гц, 1 Н Н⁶); 10,02 с (1Н, NH).PMR spectrum, δ, ppm 4.12 d (6 Hz, 2 N, -O-CH ₂ -C =); 5.15-5.50 m (2H, -C = CH ₂ ); 5.22 s (2H, N-CH ₂ -O); 5.73-6.15 m (1H, -CH = C); 5.85 d (8 Hz, 1 N H ⁵ ); 7.43 d (8 Hz, 1 N H ⁶ ); 10.02 s (1H, NH).

Спектр ПМР регистрировали на спектрометре "Tesla BS-567 A" (100 МГц) в режиме FT, 15%-ный раствор в дейтерохлороформе, внутренний стандарт гексаметилдисилоксан, температура образца 20-25^оС.NMR were recorded on a spectrometer "Tesla BS-567 A" (100 MHz) in the FT mode, 15% solution in deutero chloroform, internal standard hexamethyldisiloxane, sample temperature is 20-25 ^C.

Проведены биологические испытания 1-аллил-6-метилурацила. Biological tests of 1-allyl-6-methyluracil were carried out.

П р и м е р 2. Токсические свойства для тканевой культуры первичных фибробластов эмбрионов кур определяют при введении 1-аллилоксиметилурацила в состав поддерживающей среды (среда 199) в различных концентрациях. После 96 ч инкубации в термостате регистрируют цитопатическое действие при малом увеличении (х80) микроскопа. Затем в поддерживающую среду добавляют 0,1 мл 0,1% -ного раствора нейтрального красного на 1 ч, жидкость удаляют, клетки отмывают от избытка красителя трижды изотоническим раствором хлорида натрия и заливают на 1 ч этанолом. Поглощение нейтрального красного клетками определяют по оптической плотности при длине волны 510 нм. Максимальной переносимой концентрацией (МПК) считают наивысшую дозу 1-аллилоксиметилурацила, не вызывающую изменений морфологии клеток и поглощения ими красителя. PRI me R 2. Toxic properties for tissue culture of primary fibroblasts of chicken embryos are determined by the introduction of 1-allyloxymethyluracil in the composition of the supporting medium (medium 199) in various concentrations. After 96 hours of incubation, the cytopathic effect is recorded in a thermostat with a small magnification (x80) of the microscope. Then, 0.1 ml of a 0.1% solution of neutral red is added to the support medium for 1 h, the liquid is removed, the cells are washed from excess dye three times with an isotonic sodium chloride solution, and ethanol is added for 1 h. Absorption of neutral red by cells is determined by optical density at a wavelength of 510 nm. The maximum tolerated concentration (MPC) is considered the highest dose of 1-allyloxymethyluracil, which does not cause changes in the morphology of cells and their absorption of the dye.

В соответствии с выполненными экспериментами МПК 1-аллилоксиметилурацила составляет не менее 800 мкг/мл. Более высокие концентрации не исследованы. In accordance with the experiments performed, the MPC of 1-allyloxymethyluracil is at least 800 μg / ml. Higher concentrations have not been studied.

Токсические свойства для белых мышей массой 7-10 г определяют при однократном внутрижелудочном введении суспензий 1-аллилоксиметиллурацила на 0,5% -ном крахмальном геле. Для каждой дозы вещества используют 4 животных. Наблюдение за животными ведут в течение 10 дней. The toxic properties for white mice weighing 7-10 g are determined by a single intragastric administration of suspensions of 1-allyloxymethyluracil on a 0.5% starch gel. For each dose of the substance, 4 animals are used. Observation of animals is carried out for 10 days.

Максимальная из исследованных доз, 1000 мг/кг 1-аллилоксиметилурацила, не вызывает гибели ни одной из мышей. Не отмечается также изменение поведения животных. The maximum of the studied doses, 1000 mg / kg of 1-allyloxymethyluracil, does not cause the death of any of the mice. There is also no change in animal behavior.

П р и м е р 3. Антивирусные свойства для тканевой культуры определяют методом редукции бляшек под агаровым покрытием. Монослойные культуры первичных фибробластов эмбрионов кур отмывают от ростовой среды свежей средой 199, наносят разведение вируса герпеса простого 1 типа (штамм 1 С) из расчета 0,00002 БОЕ/клетка на 1 ч, после удаления вируссодержащей жидкости инфицированные клетки покрывают питательной средой на основе концентрата среды 199 с добавлением 1%-ного бактагара; 0,005%-ного нейтрального красного и различных концентраций 1-аллилоксиметилурацила. В контрольные пробы исследуемый препарат не добавляют. Спустя 48 ч инкубации в термостате сосчитывают количество бляшек, образованных под влиянием размножения вируса, на его основе определяют титр вируса. Признаком антивирусного действия считают снижение титра вируса в пробах в присутствии 1-аллилоксиметилурацила по сравнению с необработанным контролем. Минимальную концентрацию, снижающую титр вируса на величину 1,25 lg БОЕ/мл, обозначают как МАК (минимальная активная концентрация) Химиотерапевтический индекс (ХТИ) рассчитывают как отношение МПК и МАК. PRI me R 3. Antiviral properties for tissue culture is determined by the reduction of plaques under agar coating. Monolayer cultures of primary fibroblasts of chicken embryos are washed from the growth medium with fresh medium 199, dilution of herpes simplex virus type 1 (strain 1 C) is applied at a rate of 0.00002 PFU / cell for 1 h, after removal of the virus-containing liquid, infected cells are covered with a nutrient medium based on a concentrate Wednesday 199 with the addition of 1% Bactagar; 0.005% neutral red and various concentrations of 1-allyloxymethyluracil. The test drug is not added to control samples. After 48 hours of incubation, the number of plaques formed under the influence of virus propagation is counted in the thermostat, and the titer of the virus is determined on its basis. A sign of antiviral action is considered to be a decrease in the titer of the virus in the samples in the presence of 1-allyloxymethyluracil compared to the untreated control. The minimum concentration that reduces the titer of the virus by 1.25 lg PFU / ml is designated as MAK (minimum active concentration). The chemotherapeutic index (CTI) is calculated as the ratio of MIC to MAC.

Получаемые результаты сводят в табл.1. The results obtained are summarized in table 1.

В результате проведенных исследований установлено, что изученное соединение проявляет выраженный ингибирующий эффект в отношении вируса герпеса в культуре ткани (см. табл.1). Во всех изученных концентрациях отмечено практически полное подавление инфекционного титра вируса на 1,54 lg БОЕ/мл ХТИ составил 8 и более. As a result of the studies, it was found that the studied compound exhibits a pronounced inhibitory effect against herpes virus in tissue culture (see table 1). In all the studied concentrations, almost complete suppression of the infectious titer of the virus by 1.54 lg PFU / ml CTI was 8 or more.

П р и м е р 4. Белых мышей массой 7-10 г инфицируют 1-100 ЛД₅₀ вируса герпеса простого 1 типа (штамм "Коптев") внутрибрюшинно. 1-аллилоксиметилурацил вводят инфицированным мышам внутрижелудочно в виде суспензии на 0,5% -ном крахмальном геле в объеме 0,1 мл 2 раза в сутки в течение 7 дней, начиная спустя 3 ч после инфицирования в дозах 200-1 мг/кг. Контрольным животным вводят крахмальный гель. Наблюдение за мышами ведут в течение 2 недель. Эффективность 1-аллилоксиметилурацила оценивают по снижению летальности в группах в сравнении с контролем. Индекс защиты (ИЗ) рассчитывают по формуле
ИЗ=(А/B-1):А/В.100%
где А процент гибели животных в контроле;
В процент гибели животных в опыте.PRI me R 4. White mice weighing 7-10 g are infected with 1-100 LD ₅₀ herpes simplex virus type 1 (strain "Koptev") intraperitoneally. 1-allyloxymethyluracil is administered intragastrically to infected mice in the form of a suspension on a 0.5% starch gel in a volume of 0.1 ml 2 times a day for 7 days, starting 3 hours after infection in doses of 200-1 mg / kg. Control animals were administered starch gel. Mice are monitored for 2 weeks. The effectiveness of 1-allyloxymethyluracil is assessed by the reduction in mortality in the groups in comparison with the control. The protection index (FROM) is calculated by the formula
FM = (A / B-1): A / B. 100%
where A is the percentage of death of animals in the control;
The percentage of death of animals in the experience.

Полученные результаты сводят в табл.2. The results are summarized in table 2.

Из табл.2 видно, что 1-(аллилоксиметил)урацил также эффективно подавляет размножение штамма вируса герпеса, устойчивого к действию ацикловира. Так в концентрациях 400, 200, 100 мкг/мл отмечено снижение титра вируса на 2,42; 1,42; 1,0 lg БОЕ/мл, соответственно. Кроме того, 1-(аллилоксиметил)урацил обладает высоким противовирусным эффектом в отношении экспериментального герпетического менингоэнцефалифта мышей с индексом защиты 47,36-79,59% (см. табл.3). From table 2 it is seen that 1- (allyloxymethyl) uracil also effectively inhibits the multiplication of the herpes virus strain resistant to the action of acyclovir. So at concentrations of 400, 200, 100 μg / ml, a decrease in the titer of the virus by 2.42 was noted; 1.42; 1.0 lg PFU / ml, respectively. In addition, 1- (allyloxymethyl) uracil has a high antiviral effect against experimental herpetic meningoencephalitis in mice with a protection index of 47.36-79.59% (see Table 3).

Таким образом, 1-(аллилоксиметил)урацил, обладая высоким ингибирующим эффектом в отношении вируса герпеса и его штамма, устойчивого к действию ацикловира, проявляет выраженное защитное действие при экспериментальном менингоэнцефалите мышей, а также имеет достаточно низкую токсичность для культуры ткани. МПК составляет 800 мкг/кл, а также ЛД₅₀ на животных составляет свыше 1000 мг/кг. Кроме того, оно активно в отношении штамма вируса герпеса, устойчивого к действию ацикловира (ВПГ^АЦВ).Thus, 1- (allyloxymethyl) uracil, having a high inhibitory effect against the herpes virus and its strain resistant to the action of acyclovir, has a pronounced protective effect in experimental meningoencephalitis in mice, and also has a fairly low toxicity for tissue culture. MPC is 800 μg / cell, and LD ₅₀ in animals is over 1000 mg / kg. In addition, it is active against a strain of herpes virus resistant to the action of acyclovir (HSV ^ACV ).

Claims

The use of 1-allyloxymethyluracil of the formula

as a substance with anti-herpes action.