Claims (48)
1. Полинуклеотид, содержащий открытую рамку считывания FIG4 человека, где открытая рамка считывания FIG4 человека оптимизирована по кодонному составу для экспрессии в клетках человека.1. A polynucleotide comprising a human FIG4 open reading frame, wherein the human FIG4 open reading frame is codon optimized for expression in human cells.
2. Полинуклеотид по п. 1, где указанная открытая рамка считывания FIG4 человека содержит нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO:1 или нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере приблизительно 90% идентичность с ней.2. The polynucleotide of claim 1, wherein said human FIG4 open reading frame comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1 or a nucleotide sequence having at least about 90% identity therewith.
3. Экспрессирующая кассета, содержащая полинуклеотид, содержащий открытую рамку считывания FIG4 человека.3. An expression cassette containing a polynucleotide containing the human FIG4 open reading frame.
4. Экспрессирующая кассета по п. 3, где полинуклеотид представляет собой полинуклеотид по п. 1 или 2.4. An expression cassette according to claim 3, wherein the polynucleotide is a polynucleotide according to claim 1 or 2.
5. Экспрессирующая кассета по п. 3 или 4, где открытая рамка считывания FIG4 человека является функционально связанной с промотором.5. The expression cassette of claim 3 or 4, wherein the human FIG4 open reading frame is operably linked to a promoter.
6. Экспрессирующая кассета по п. 5, где промотор представляет собой промотор бета-актина кур.6. The expression cassette of claim 5, wherein the promoter is the chicken beta actin promoter.
7. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-6, где открытая рамка считывания FIG4 человека является функционально связанной с энхансером.7. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-6, where the human FIG4 open reading frame is operably linked to an enhancer.
8. Экспрессирующая кассета по п. 7, где энхансер представляет собой энхансер цитомегаловируса.8. Expression cassette according to claim 7, wherein the enhancer is a cytomegalovirus enhancer.
9. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-8, где открытая рамка считывания FIG4 человека является функционально связанной с сигналом полиаденилирования.9. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-8, where the human FIG4 open reading frame is operably linked to a polyadenylation signal.
10. Экспрессирующая кассета по п. 9, где сигнал полиаденилирования представляет собой синтетический сигнал полиаденилирования.10. The expression cassette of claim 9 wherein the polyadenylation signal is a synthetic polyadenylation signal.
11. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-10, дополнительно содержащая по меньшей мере один инвертированный концевой повтор (ITR) аденоассоциированного вируса (AAV).11. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-10, further comprising at least one adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeat (ITR).
12. Экспрессирующая кассета по п. 11, где экспрессирующая кассета содержит два ITR AAV.12. The expression cassette of claim 11, wherein the expression cassette contains two AAV ITRs.
13. Экспрессирующая кассета по п. 12, где два ITR AAV имеют одинаковую нуклеотидную последовательность.13. The expression cassette of claim 12, wherein the two AAV ITRs have the same nucleotide sequence.
14. Экспрессирующая кассета по п. 12, где два ITR AAV имеют различные нуклеотидные последовательности.14. The expression cassette of claim 12, wherein the two AAV ITRs have different nucleotide sequences.
15. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 12-14, где один из двух ITR AAV представляет собой модифицированный ITR.15. Expression cassette according to any one of paragraphs. 12-14, where one of the two AAV ITRs is a modified ITR.
16. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 12-14, где один из двух ITR AAV представляет собой модифицированный ITR с делецией D-элемента.16. Expression cassette according to any one of paragraphs. 12-14, where one of the two AAV ITRs is a modified ITR with a D-element deletion.
17. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 11-16, где ITR AAV представляют собой ITR AAV2.17. Expression cassette according to any one of paragraphs. 11-16, where AAV ITRs are AAV2 ITRs.
18. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-17, где экспрессирующая кассета представляет собой самокомплементарный геном AAV.18. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-17, where the expression cassette is a self-complementary AAV genome.
19. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-18, где экспрессирующая кассета содержит промотор, открытую рамку считывания FIG4 человека и участок полиаденилирования.19. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-18, where the expression cassette contains a promoter, a human FIG4 open reading frame, and a polyadenylation site.
20. Экспрессирующая кассета по п. 19, где экспрессирующая кассета содержит ITR AAV, энхансер, промотор, открытую рамку считывания FIG4 человека, участок полиаденилирования и ITR AAV.20. The expression cassette of claim 19, wherein the expression cassette contains an AAV ITR, an enhancer, a promoter, a human FIG4 open reading frame, a polyadenylation site, and an AAV ITR.
21. Экспрессирующая кассета по любому из пп. 3-18, где экспрессирующая кассета содержит энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания FIG4 человека и синтетический участок полиаденилирования.21. Expression cassette according to any one of paragraphs. 3-18, wherein the expression cassette contains a CMV enhancer, a chicken beta actin promoter, a human FIG4 open reading frame, and a synthetic polyadenylation site.
22. Экспрессирующая кассета по п. 21, где экспрессирующая кассета содержит модифицированный ITR AAV, энхансер CMV, промотор бета-актина кур, открытую рамку считывания FIG4 человека, синтетический участок полиаденилирования и ITR AAV WT.22. The expression cassette of claim 21, wherein the expression cassette contains a modified AAV ITR, a CMV enhancer, a chicken beta actin promoter, a human FIG4 open reading frame, a synthetic polyadenylation site, and a WT AAV ITR.
23. Экспрессирующая кассета по п. 22, содержащая нуклеотидную последовательность из SEQ ID NO:6 или последовательность, по меньшей мере приблизительно на 90% идентичную ей.23. Expression cassette according to claim 22, containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO:6 or a sequence at least about 90% identical to it.
24. Вектор, содержащий полинуклеотид по п. 1 или 2, или экспрессирующую кассету по любому из пп. 3-23.24. A vector containing a polynucleotide according to claim 1 or 2, or an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23.
25. Вектор по п. 24, где вектор представляет собой вирусный вектор.25. The vector of claim 24, wherein the vector is a viral vector.
26. Вектор по п. 24, где вектор представляет собой вектор AAV.26. The vector of claim 24, wherein the vector is an AAV vector.
27. Вектор по п. 26, где вектор AAV представляет собой вектор AAV9.27. The vector of claim 26, wherein the AAV vector is an AAV9 vector.
28. Трансформированная клетка, содержащая полинуклеотид по п. 1 или 2, экспрессирующую кассету по любому из пп. 3-23 и/или вектор по любому из пп. 24-27.28. A transformed cell containing a polynucleotide according to claim 1 or 2, expressing a cassette according to any one of paragraphs. 3-23 and/or a vector according to any one of paragraphs. 24-27.
29. Трансформированная клетка по п. 28, где полинуклеотид, экспрессирующая кассета и/или вектор стабильно встроены в геном клетки.29. A transformed cell according to claim 28, wherein the polynucleotide, expression cassette and/or vector is stably integrated into the genome of the cell.
30. Трансгенное животное, содержащее полинуклеотид по п. 1 или 2, экспрессирующую кассету по любому из пп. 3-23, вектор по любому из пп. 24-27 и/или трансформированную клетку по п.28 или 29.30. A transgenic animal containing a polynucleotide according to claim 1 or 2, expressing a cassette according to any one of paragraphs. 3-23, a vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29.
31. Фармацевтическая композиция, содержащая полинуклеотид по п. 1 или 2, экспрессирующую кассету по любому из пп. 3-23, вектор по любому из пп. 24-27 и/или трансформированную клетку по п.28 или 29 в фармацевтически приемлемом носителе.31. A pharmaceutical composition containing a polynucleotide according to claim 1 or 2, expressing the cassette according to any one of paragraphs. 3-23, a vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29 in a pharmaceutically acceptable carrier.
32. Способ экспрессии открытой рамки считывания FIG4 в клетке, включающий приведение клетки в контакт с полинуклеотидом по п.1 или 2, экспрессирующей кассетой по любому из пп. 3-23, и/или вектором по любому из пп. 24-27, таким образом, экспрессию открытой рамки считывания FIG4 в клетке.32. A method for expressing the FIG4 open reading frame in a cell, comprising bringing the cell into contact with a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23, and/or a vector according to any one of paragraphs. 24-27, thus expression of the FIG4 open reading frame in the cell.
33. Способ экспрессии открытой рамки считывания FIG4 у субъекта, включающий доставку субъекту полинуклеотида по п.1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, экспрессию открытой рамки считывания FIG4 у субъекта.33. A method for expressing a FIG4 open reading frame in a subject, comprising delivering to the subject a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, thus expressing the FIG4 open reading frame in the subject.
34. Способ лечения нарушения, ассоциированного с измененной экспрессией гена FIG4 или измененной активностью продукта гена FIG4, у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п. 1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, что открытая рамка считывания FIG4 экспрессируется у субъекта.34. A method for treating a disorder associated with altered expression of the FIG4 gene or altered activity of the FIG4 gene product in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of claims. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, such that the FIG4 open reading frame is expressed in the subject.
35. Способ по п. 34, где нарушение, ассоциированное с экспрессией гена FIG4, представляет собой невропатию Шарко-Мари-Тута типа 4 J.35. The method of claim 34 wherein the disorder associated with FIG4 gene expression is Charcot-Marie-Tooth type 4J neuropathy.
36. Способ по п. 35, где нарушение, ассоциированное с экспрессией гена FIG4, представляет собой синдром Юниса-Варона.36. The method of claim 35, wherein the disorder associated with the expression of the FIG4 gene is Eunice-Varon syndrome.
37. Способ по п. 34, где нарушение, ассоциированное с измененной экспрессией гена FIG4, представляет собой боковой амиотрофический склероз.37. The method of claim 34, wherein the disorder associated with altered expression of the FIG4 gene is amyotrophic lateral sclerosis.
38. Способ по п. 34, где нарушение, ассоциированное с измененной экспрессией гена FIG4, представляет собой рассеянный склероз с началом в детском возрасте.38. The method of claim 34, wherein the disorder associated with altered expression of the FIG4 gene is childhood onset multiple sclerosis.
39. Способ лечения невропатии Шарко-Мари-Тута типа 4 J у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п. 1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, что открытая рамка считывания FIG4 экспрессируется у субъекта.39. A method of treating Charcot-Marie-Tooth type 4 J neuropathy in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, such that the FIG4 open reading frame is expressed in the subject.
40. Способ лечения синдрома Юниса-Варона у нуждающегося в этом субъекта, включающему введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п. 1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, что открытая рамка считывания FIG4 экспрессируется у субъекта.40. A method of treating Eunice-Varon syndrome in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, such that the FIG4 open reading frame is expressed in the subject.
41. Способ лечения бокового амиотрофического склероза у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п. 1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, что открытая рамка считывания FIG4 экспрессируется у субъекта.41. A method of treating amyotrophic lateral sclerosis in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of paragraphs. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, such that the FIG4 open reading frame is expressed in the subject.
42. Способ лечения рассеянного склероза с началом в детском возрасте у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества полинуклеотида по п. 1 или 2, экспрессирующей кассеты по любому из пп. 3-23, вектора по любому из пп. 24-27 и/или трансформированной клетки по п. 28 или 29, таким образом, что открытая рамка считывания FIG4 экспрессируется у субъекта.42. A method of treating childhood-onset multiple sclerosis in a subject in need thereof, comprising administering to the subject a therapeutically effective amount of a polynucleotide according to claim 1 or 2, an expression cassette according to any one of claims. 3-23, the vector according to any one of paragraphs. 24-27 and/or a transformed cell according to claim 28 or 29, such that the FIG4 open reading frame is expressed in the subject.
43. Способ по любому из пп. 34-42, где субъект представляет собой человека.43. The method according to any one of paragraphs. 34-42, where the subject is a human.
44. Способ по любому из пп. 34-43, где полинуклеотид, экспрессирующую кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют в нервную систему субъекта.44. The method according to any one of paragraphs. 34-43, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector and/or transformed cell is delivered to the subject's nervous system.
45. Способ по п. 44, где полинуклеотид, экспрессирующую кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют посредством интратекальной, интрацеребральной, интрацеребровентрикулярной, интраназальной, внутриушной, интраокулярной или периокулярной доставки, или любой их комбинации.45. The method of claim 44, wherein the polynucleotide, expression cassette, vector, and/or transformed cell is delivered via intrathecal, intracerebral, intracerebroventricular, intranasal, otic, intraocular, or periocular delivery, or any combination thereof.
46. Способ по п. 44, где полинуклеотид, экспрессирующую кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют внутривенно.46. The method of claim 44 wherein the polynucleotide, expression cassette, vector and/or transformed cell is delivered intravenously.
47. Способ по п. 45, где полинуклеотид, экспрессирующую кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют интратекально.47. The method of claim 45 wherein the polynucleotide, expression cassette, vector and/or transformed cell is delivered intrathecally.
48. Способ по п. 45, где полинуклеотид, экспрессирующую кассету, вектор и/или трансформированную клетку доставляют интрацеребровентрикулярно.48. The method of claim 45 wherein the polynucleotide, expression cassette, vector and/or transformed cell is delivered intracerebroventricularly.