RU2019100561A - Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины с применением клеточной культуральной среды - Google Patents
Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины с применением клеточной культуральной среды Download PDFInfo
- Publication number
- RU2019100561A RU2019100561A RU2019100561A RU2019100561A RU2019100561A RU 2019100561 A RU2019100561 A RU 2019100561A RU 2019100561 A RU2019100561 A RU 2019100561A RU 2019100561 A RU2019100561 A RU 2019100561A RU 2019100561 A RU2019100561 A RU 2019100561A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- final concentration
- culture medium
- stem cells
- mesenchymal stem
- paragraphs
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims 6
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 title claims 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 title 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 24
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 claims 24
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims 24
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims 17
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims 14
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 14
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 13
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims 13
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims 13
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 claims 12
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 claims 12
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 claims 10
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims 9
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims 8
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims 7
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims 7
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims 6
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims 6
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims 5
- 102100037241 Endoglin Human genes 0.000 claims 5
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims 5
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims 5
- 101000881679 Homo sapiens Endoglin Proteins 0.000 claims 5
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims 5
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims 5
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 claims 5
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims 5
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 claims 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 5
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 4
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 4
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 3
- LXHCVQFUTOUZEQ-YDALLXLXSA-N (2s)-2-amino-3-[4-(4-hydroxy-3-iodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]propanoic acid;sodium Chemical compound [Na].IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 LXHCVQFUTOUZEQ-YDALLXLXSA-N 0.000 claims 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims 1
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims 1
- 238000013337 sub-cultivation Methods 0.000 claims 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0665—Blood-borne mesenchymal stem cells, e.g. from umbilical cord blood
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0668—Mesenchymal stem cells from other natural sources
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/34—Sugars
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/38—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/40—Nucleotides, nucleosides or bases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/80—Undefined extracts from animals
- C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/33—Insulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
- C12N2501/395—Thyroid hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/02—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells
- C12N2506/025—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from embryonic cells from extra-embryonic cells, e.g. trophoblast, placenta
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Claims (80)
1. Способ выделения популяции мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины, включающий культивирование ткани пуповины в культуральной среде, содержащей DMEM (среду Игла, модифицированную по Дульбекко), F12 (среду Хэма F-12), М171 (среду 171) и ФБС (фетальную бычью сыворотку).
2. Способ по п. 1, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит DMEM в конечной концентрации приблизительно от 55 до 65% (об./об.), F12 в конечной концентрации приблизительно от 5 до 15% (об./об.), М171 в конечной концентрации приблизительно от 15 до 30% (об./об.) и ФБС в конечной концентрации приблизительно от 1 до 8% (об./об.).
3. Способ по п. 2, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит DMEM в конечной концентрации приблизительно от 57,5 до 62,5% (об./об.), F12 в конечной концентрации приблизительно от 7,5 до 12,5% (об./об.), М171 в конечной концентрации приблизительно от 17,5 до 25,0% (об./об.) и ФБС в конечной концентрации от приблизительно 1,75 до 3,5% (об./об.).
4. Способ по п. 3, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит DMEM в конечной концентрации приблизительно 61,8% (об./об.), F12 в конечной концентрации приблизительно 11,8% (об./об.), М171 в конечной концентрации приблизительно 23,6% (об./об.) и ФБС в конечной концентрации приблизительно 2,5% (об./об.).
5. Способ по любому из пп. 1-4, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда дополнительно содержит эпидермальный фактор роста (EGF) в конечной концентрации от приблизительно 1 нг/мл до приблизительно 20 нг/мл.
6. Способ по любому из пп. 1-5, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит EGF в конечной концентрации приблизительно 10 нг/мл.
7. Способ по любому из пп. 1-6, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит инсулин в конечной концентрации приблизительно от 1 мкг/мл до 10 мкг/мл.
8. Способ по любому из пп. 1-7, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит инсулин в конечной концентрации приблизительно 5 мкг/мл.
9. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда дополнительно содержит по меньшей мере одну из следующих добавок: аденин, гидрокортизон и натриевую соль 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3).
10. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит все три из аденина, гидрокортизона и натриевой соли 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3).
11. Способ по п. 10, характеризующийся тем, что указанная культуральная среда содержит аденин в конечной концентрации от приблизительно 0,01 до приблизительно 0,1 мкг/мл аденина, гидрокортизон в конечной концентрации от приблизительно 0,1 до приблизительно 10 мкг/мл гидрокортизона и/или натриевая соль 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3) в конечной концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 5 нг/мл.
12. Способ по любому из предыдущих пунктов, включающий культивирование ткани пуповины до тех пор, пока разрастание клеток мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны не достигнет конфлюентности приблизительно 70-80%.
13. Способ по п. 12, включающий извлечение мезенхимальных стволовых клеток из контейнера для культивирования, применяемого для культивирования.
14. Способ по п. 13, характеризующийся тем, что извлечение мезенхимальных стволовых клеток из контейнера для культивирования осуществляют ферментативной обработкой.
15. Способ по п. 14, характеризующийся тем, что ферментативная обработка включает трипсинизацию.
16. Способ по любому из пп. 13-15, характеризующийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки переносят для субкультивирования в контейнер культивирования для субкультивирования.
17. Способ по п. 16, характеризующийся тем, что мезенхимальные клетки суспендируют для субкультивирования в концентрации 1,0×106 клеток/мл.
18. Способ по п. 17, характеризующийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки субкультивируют в культуральной среде как определено в любом из пп. 1-10.
19. Способ по п. 18, характеризующийся тем, что мезенхимальные стволовые клетки субкультивируют до тех пор, пока мезенхимальные стволовые клетки не достигнут конфлюентности приблизительно 70-80%.
20. Способ по любому из пп. 16-19, характеризующийся тем, что субкультивирование осуществляют в автономном биореакторе.
21. Способ по п. 20, характеризующийся тем, что биореактор выбирают из группы, состоящей из биореактора с параллельными пластинами, биореактора с полыми волокнами и микрожидкостного биореактора.
22. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что ткань пуповины представляет собой кусок всей пуповины или амниотической мембраны пуповины.
23. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что культивирование проводят в инкубаторе для культивирования клеток с СО2 при температуре 37°С.
24. Способ по п. 23, включающий извлечение мезенхимальных стволовых клеток из контейнера для культивирования, применяемого для субкультивирования.
25. Способ по п. 24, характеризующийся тем, что извлечение мезенхимальных стволовых клеток из контейнера для культивирования осуществляют ферментативной обработкой.
26. Способ по п. 25, характеризующийся тем, что ферментативная обработка включает трипсинизацию.
27. Способ по п. 26, дополнительно включающий сбор выделенных мезенхимальных стволовых клеток.
28. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что по меньшей мере приблизительно 90% или более, приблизительно 91% или более, приблизительно 92% или более, приблизительно 92% или более, приблизительно 93% или более, приблизительно 94% или более, приблизительно 95% или более, приблизительно 96% или более, приблизительно 97% или более, приблизительно 98% или более, приблизительно 99% или более выделенных мезенхимальных стволовых клеток экспрессируют следующие маркеры: CD73, CD90 и CD105.
29. Способ по любому из предыдущих пунктов, характеризующийся тем, что по меньшей мере приблизительно 90% или более, приблизительно 91% или более, приблизительно 92% или более, приблизительно 92% или более, приблизительно 93% или более, приблизительно 94% или более, приблизительно 95% или более, приблизительно 96% или более, приблизительно 97% или более, приблизительно 98% или более, приблизительно 99% или более выделенных мезенхимальных стволовых клеток не экспрессируют следующие маркеры: CD34, CD45 и HLA-DR (антиген лейкоцитов человека - D-родственный антиген).
30. Способ по любому из пп. 28 или 29, характеризующийся тем, что приблизительно 97% или более, приблизительно 98% или более, приблизительно 99% или более выделенных мезенхимальных стволовых клеток экспрессируют CD73, CD90 и CD105 и не экспрессируют CD34, CD45 и HLA-DR.
31. Способ по любому из предыдущих пунктов, дополнительно включающий консервацию выделенных стволовых клеток/клеток-предшественников для дальнейшего применения.
32. Способ по п. 31, характеризующийся тем, что сохранение выполняется путем криоконсервации.
33. Выделенная популяция мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны пуповины, в которой по меньшей мере приблизительно 97% или более клеток выделенной популяции стволовых клеток экспрессируют каждый из следующих маркеров: CD73, CD90 и CD105 и не экспрессируют каждый из CD34, CD45 и HLA-DR.
34. Популяция мезенхимальных стволовых клеток по п. 33, характеризующаяся тем, что по меньшей мере, приблизительно 98% или более, приблизительно 99% или более клеток выделенной популяции мезенхимальных стволовых клеток экспрессируют каждый из CD73, CD90 и CD105 и не экспрессируют каждый из CD34, CD45 и HLA-DR.
35. Популяция мезенхимальных стволовых клеток по любому из пп. 33, 34, характеризующаяся тем, что популяция может быть получена способом, определенным в любом из пп. 1-30.
36. Популяция мезенхимальных стволовых клеток по любому из пп. 33, 34, характеризующаяся тем, что популяция получена способом, определенным в любом из пп. 1-30.
37. Фармацевтическая композиция, содержащая выделенную популяцию мезенхимальных стволовых клеток амниотической мембраны пуповины, характеризующаяся тем, что по меньшей мере 97% или более клеток популяции стволовых клеток экспрессируют каждый из следующих маркеров: CD73, CD90 и CD105 и не экспрессируют каждый из следующих маркеров: CD34, CD45 и HLA-DR.
38. Фармацевтическая композиция по п. 37, характеризующаяся тем, что фармацевтическая композиция адаптирована для системного или местного применения.
39. Фармацевтическая композиция по п. 37 или 38, дополнительно включающая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.
40. Способ получения культуральной среды, пригодной для выделения популяции мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины, включающий смешивание для получения конечного объема 500 мл культуральной среды следующих компонентов:
i. 250 мл DMEM
ii. 118 мл М171
iii. 118 мл DMEM/F12
iv. 12,5 мл фетальной бычьей сыворотки (ФБС) (конечная концентрация 2,5%)
41. Способ по п. 40, дополнительно включающий добавление
v. 1 мл исходного раствора EGF (5 мкг/мл) для достижения конечной концентрации 10 нг/мл)
vi. инсулина, 0,175 мл исходного раствора (14,28 мг/мл) до конечной концентрации 5 мкг/мл.
42. Способ по п. 40 или 41, дополнительно включающий добавление к DMEM одной или нескольких следующих добавок: аденина, гидрокортизона, натриевой соли 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3), для получения общего объема 500 мл культуральной среды.
43. Способ по п. 41, характеризующийся тем, что конечная концентрация добавок в DMEM является следующей:
приблизительно от 0,05 до 0,1 мкг/мл аденина, например, приблизительно 0,025 мкг/мл аденина,
приблизительно от 1 до 10 мкг/мл гидрокортизона,
приблизительно от 0,5 до 5 нг/мл натриевой соли 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3), например 1,36 нг/мл натриевой соли 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3).
44. Клеточная культуральная среда, которую можно получить способом по любому из пп. 40-43.
45. Способ выделения мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины, включающий культивирование ткани амниотической мембраны в культуральной среде, приготовленной способом, определенным в любом из пп. 40-43.
46. Клеточная культуральная среда, содержащая:
- DMEM в конечной концентрации приблизительно от 55 до 65% (об./об.),
- F12 в конечной концентрации приблизительно от 5 до 15% (об./об.),
- М171 в конечной концентрации приблизительно от 15 до 30% (об./об.) И
- ФБС в конечной концентрации приблизительно от 1 до 8% (об./об.).
47. Клеточная культуральная среда по п. 46, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит DMEM в конечной концентрации приблизительно от 57,5 до 62,5% (об./об.), F12 в конечной концентрации приблизительно от 7,5 до 12,5% (об./об.), М171 в конечной концентрации приблизительно от 17,5 до 25,0% (об./об.) и ФБС в конечной концентрации от приблизительно 1,75 до 3,5% (об./об.).
48. Клеточная культуральная среда по п. 47, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит DMEM в конечной концентрации приблизительно 61,8% (об./об.), F12 в конечной концентрации приблизительно 11,8% (об./об.), М171 в конечной концентрации, приблизительно 23,6% (объем/объем) и ФБС в конечной концентрации приблизительно 2,5% (объем/объем).
49. Клеточная культуральная среда по любому из пп. 46-48, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда дополнительно содержит эпидермальный фактор роста (EGF) в конечной концентрации от приблизительно 1 нг/мл до приблизительно 20 нг/мл.
50. Клеточная культуральная среда по любому из пп. 46-49, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит EGF в конечной концентрации приблизительно 10 нг/мл.
51. Клеточная культуральная среда по любому из пп. 46-50, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит инсулин в конечной концентрации приблизительно от 1 мкг/мл до 10 мкг/мл.
52. Клеточная культуральная среда по п. 51, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит инсулин в конечной концентрации приблизительно 5 мкг/мл.
53. Клеточная культуральная среда по любому из пп. 46-52, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда дополнительно содержит по меньшей мере одну из следующих добавок: аденин, гидрокортизон и натриевую соль 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3).
54. Клеточная культуральная среда по п. 53, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда включает все три из следующих добавок: аденин, гидрокортизон и натриевую соль 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3).
55. Клеточная культуральная среда по п. 53 или 54, характеризующаяся тем, что указанная культуральная среда содержит аденин в конечной концентрации от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,1 мкг/мл аденин, гидрокортизон в конечной концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 10 мкг/мл гидрокортизон и/или натриевую соль 3,3',5-трийодо-L- тиронина (Т3) в конечной концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 5 нг/мл.
56. Клеточная культуральная среда по п. 46, характеризующаяся тем, что 500 мл этой клеточной культуральной среды содержат:
i. 250 мл of DMEM
ii. 118 мл М171
iii. 118 мл DMEM/F12
iv. 12,5 мл фетальной бычьей сыворотки (ФБС) (конечная концентрация 2,5%)
57. Клеточная культуральная среда по п. 56, дополнительно содержащая
v. EGF в конечной концентрации 10 нг/мл
vi. Инсулин в конечной концентрации 5 мкг/мл.
vi. Инсулин 0,175 мл (конечная концентрация 5 мкг/мл)
58. Клеточная культуральная среда по п. 56 или 57, дополнительно содержащая аденин в конечной концентрации от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,1 мкг/мл аденина, гидрокортизон в конечной концентрации от приблизительно 1 до приблизительно 10 мкг/мл гидрокортизона и/или натриевую соль 3,3',5-трийодо-L-тиронина (Т3) в конечной концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 5 нг/мл.
59. Применение клеточной культуральной среды по любому из пп. 46-58 для выделения мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины.
60. Применение клеточной культуральной среды по любому из пп. 46-58 для культивирования мезенхимальных стволовых клеток из амниотической мембраны пуповины.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662404582P | 2016-10-05 | 2016-10-05 | |
| US62/404,582 | 2016-10-05 | ||
| PCT/SG2017/050500 WO2018067071A1 (en) | 2016-10-05 | 2017-10-05 | A method of isolating mesenchymal stem cells from umbilical cord amniotic membrane using a cell culture medium |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019100561A true RU2019100561A (ru) | 2020-11-06 |
| RU2019100561A3 RU2019100561A3 (ru) | 2021-02-15 |
| RU2783992C2 RU2783992C2 (ru) | 2022-11-23 |
Family
ID=
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240141298A1 (en) | Method of isolating mesenchymal stem cells from the amniotic membrane of the umbilical cord, a mesenchymal stem cell population isolated from the amniotic membrane of the umbilical cord and a cell culture medium for isolating mesenchymal stem cells from the amniotic membrane of the umbilical cord | |
| Debnath et al. | Standardization and quality assessment for clinical grade mesenchymal stem cells from human adipose tissue | |
| Eibes et al. | Maximizing the ex vivo expansion of human mesenchymal stem cells using a microcarrier-based stirred culture system | |
| AU2011208948B2 (en) | Method for stem cell differentiation | |
| CN104726401A (zh) | 一种利用胎盘间充质干细胞提高脐血间充质干细胞培养成功率的方法 | |
| CN106566803A (zh) | 一种培养液及其应用和培养脐带间充质干细胞的方法 | |
| KR102281535B1 (ko) | 줄기세포 유래 간오가노이드의 제작 및 제１형 혈우병 세포치료제로서의 용도 | |
| Kocak et al. | Comparison of enzymatic and nonenzymatic isolation methods for endometrial stem cells | |
| JP2011211956A (ja) | 幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤 | |
| Carvalho et al. | Isolation and characterization of equine peripheral blood-derived multipotent mesenchymal stromal cells | |
| JPWO2019199234A5 (ru) | ||
| Wang et al. | Isolation and biological characterization of mesenchymal stem cells from goose dermis | |
| JP5710145B2 (ja) | 幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤 | |
| Bayne et al. | A novel, single-use bioreactor system for expansion of human mesenchymal stem/stromal cells | |
| JP2011200180A (ja) | 幹細胞の未分化維持剤及び増殖促進剤 | |
| CN105713872A (zh) | 间充质干细胞培养试剂盒 | |
| CN114045258A (zh) | 间充质干细胞培养用无血清培养基及用途 | |
| TH1901000183A (th) | วิธีการแยกเซลล์ต้นกำเนิดมีเซนไคม์ออกจากสายสะดือในเยื้อหุ้มน้ำคร่ำโดยใช้ ตัวกลางเพาะเลี้ยงเซลล์ | |
| WO2014135949A2 (en) | Novel method of progenitor cell expansion | |
| SLAMEČKA et al. | Rabbit amniotic fluid as a potential alternative source of broadly multipotent stem cells | |
| EP3153576A1 (en) | Improved expansion of eukaryotic cells | |
| BAI et al. | The study of isolation and culture in vitro of human umbilical cord mesenchymal stem cells and their biological properties | |
| Akyash et al. | Reproductive biology, stem cells biotechnology and regenerative medicine: a 1-day national symposium held at Shahid Sadoughi University of Medical Sciences | |
| CN105779385A (zh) | 一种间充质干细胞培养试剂盒 | |
| Anahita et al. | Isolation and characterization of human mesenchymal stromal cells derived from placental decidua basalis; umbilical cord wharton's jelly and amniotic membrane |