RU2018138164A - ПОЛНОСТЬЮ МАСШТАБИРУЕМЫЙ СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА rAAV НА ОСНОВЕ КОЛОНОК - Google Patents
ПОЛНОСТЬЮ МАСШТАБИРУЕМЫЙ СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА rAAV НА ОСНОВЕ КОЛОНОК Download PDFInfo
- Publication number
- RU2018138164A RU2018138164A RU2018138164A RU2018138164A RU2018138164A RU 2018138164 A RU2018138164 A RU 2018138164A RU 2018138164 A RU2018138164 A RU 2018138164A RU 2018138164 A RU2018138164 A RU 2018138164A RU 2018138164 A RU2018138164 A RU 2018138164A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- column
- particles
- raav vector
- paragraphs
- factor
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/34—Size-selective separation, e.g. size-exclusion chromatography; Gel filtration; Permeation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction, e.g. ion-exchange, ion-pair, ion-suppression or ion-exclusion
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/362—Cation-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction, e.g. ion-exchange, ion-pair, ion-suppression or ion-exclusion
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
- B01D15/3804—Affinity chromatography
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D61/00—Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor
- B01D61/14—Ultrafiltration; Microfiltration
- B01D61/145—Ultrafiltration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D2315/00—Details relating to the membrane module operation
- B01D2315/16—Diafiltration
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14142—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector virus or viral particle as vehicle, e.g. encapsulating small organic molecule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
- C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Claims (94)
1. Способ очистки частиц рекомбинантного вектора аденоассоциированного вируса (rAAV), включающий стадии:
(a) сбора клеток и супернатанта культуры клеток, содержащего частицы вектора rAAV для получения сбора;
(b) необязательно, концентрирования указанного сбора, полученного на стадии (а), для получения концентрированного сбора;
(c) лизирования указанного сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b), для получения лизата;
(d) обработки лизата, полученного на стадии (с), для снижения содержания контаминирующей нуклеиновой кислоты в лизате и, таким образом, получения лизата со сниженным содержанием нуклеиновой кислоты;
(e) фильтрации указанного лизата со сниженным содержанием нуклеиновой кислоты, полученного на стадии (d), для получения очищенного лизата и, необязательно, разведения указанного очищенного лизата для получения разведенного очищенного лизата;
(f) подвергания указанного очищенного лизата или разведенного очищенного лизата, полученного на стадии (е), анионообменной хроматографии на колонках для получения колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV, и, необязательно, концентрирования указанного колоночного элюата для получения концентрированного колоночного элюата;
(д) подвергания указанного колоночного элюата или указанного концентрированного колоночного элюата, полученного на стадии (f), эксклюзионной хроматографии на колонках для получения второго колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV, и, таким образом, разделения частиц вектора rAAV и белковых примесей и, необязательно, разведения указанного второго колоночного элюата для получения разведенного второго колоночного элюата;
(h) подвергания указанного второго колоночного элюата или указанного разведенного второго колоночного элюата, полученного на стадии (g), катионообменной хроматографии на колонках для получения третьего колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV, и, таким образом, разделения частиц вектора rAAV и белковых или других производственных примеси, и, необязательно, концентрирования указанного третьего колоночного элюата для получения концентрированного третьего колоночного элюата; и
(i) фильтрации указанного третьего колоночного элюата или указанного концентрированного третьего колоночного элюата, полученного на стадии (h), и, таким образом, получения очищенных частиц вектора rAAV.
2. Способ по п. 1, где указанное концентрирование на стадии (b), и/или стадии (f), и/или стадии (h) осуществляют посредством ультрафильтрации/диафильтрации, необязательно, посредством фильтрации тангенциальным потоком.
3. Способ по п. 1, где посредством указанного концентрирования на стадии (b) снижают объем указанных собранных клеток и супернатанта культуры клеток приблизительно в 2-10 раз.
4. Способ по п. 1, где посредством указанного концентрирования на стадии (f) снижают объем указанного колоночного элюата приблизительно в 5-20 раз.
5. Способ по п. 1, где указанное лизирование указанного сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b), осуществляют посредством микрофлюидизации.
6. Способ по п. 1, где стадия (d) включает обработку нуклеазой и, таким образом, снижение содержания контаминирующей нуклеиновой кислоты.
7. Способ по п. 6, где нуклеаза включает бензоназу.
8. Способ по п. 1, где указанную фильтрацию указанного очищенного лизата или указанного разведенного очищенного лизата на стадии (е) осуществляют с помощью фильтра, имеющего диаметр пор приблизительно от 0,1 до 0,8 мкм включительно.
9. Способ по п. 1, где указанное разведение указанного очищенного лизата или указанного разведенного очищенного лизата на стадии (е) осуществляют с помощью водного забуференного раствора ацетата.
10. Способ по п. 1, где указанное разведение указанного второго колоночного элюата на стадии (д) осуществляют с помощью водного забуференного раствора ацетата.
11. Способ по п. 10, где указанный водный забуференный раствор ацетата имеет рН приблизительно от 4,0 до 7,0 включительно.
12. Способ по п. 1, где указанные частицы вектора rAAV, полученные на стадии (i) и/или стадии (i), составляют с помощью поверхностно-активного вещества для получения состава вектора AAV.
13. Способ по п. 1, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (f) включает полиэтиленгликоль (PEG)-модулируемую хроматографию на колонках.
14. Способ по п. 13, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (f) включает промывку указанной колонки раствором PEG перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
15. Способ по п. 14, где PEG в указанном растворе PEG имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне приблизительно от 1000 до 50000 включительно.
16. Способ по п. 1, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (f) включает промывку указанной колонки водным раствором поверхностно-активного вещества перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
17. Способ по п. 1, где указанная катионообменная хроматография на колонках на стадии (h) включает промывку указанной колонки раствором поверхностно-активного вещества перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
18. Способ по любому из пп. 14-17, где указанный раствор PEG и/или указанный раствор поверхностно-активного вещества содержит водный буфер Трис-Cl/NaCl или водный буфер фосфат/NaCl.
19. Способ по п. 18, где указанный буфер NaCl содержит приблизительно 20-250 мМ NaCl включительно или приблизительно 50-200 мМ NaCl включительно.
20. Способ по п. 1, где указанные частицы вектора rAAV элюируют из указанной анионообменной колонки на стадии (f) в водный буфер Трис-Cl/NaCl.
21. Способ по п. 20, где указанный буфер Трис-Cl/NaCl содержит 50-200 мМ NaCl.
22. Способ по п. 1, где указанные частицы вектора rAAV элюируют из указанной катионообменной колонки на стадии (h) в водный буфер фосфат/NaCl.
23. Способ по п. 22, где указанный буфер фосфат/NaCl содержит приблизительно 100-500 мМ NaCl включительно.
24. Способ по п. 1, где указанная анионообменная колонка на стадии (f) содержит функциональную группу четвертичного аммония, такую как кватернизированный полиэтиленимин.
25. Способ по п. 1, где указанная эксклюзионная колонка на стадии (g) имеет диапазон разделения (по молекулярной массе) приблизительно от 10000 до 600000 включительно.
26. Способ по п. 1, где указанная катионообменная колонка на стадии (h) содержит сульфоновую кислоту или функциональную группу, такую как сульфопропил.
27. Способ по любому из пп. 1-26, где способ исключает стадию ультрацентрифугирования в градиенте хлорида цезия.
28. Способ по любому из пп. 1-27, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из миРНК, антисмысловой молекулы, мкРНК, рибозима и shRNA.
29. Способ по любому из пп. 1-28, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий продукт гена, выбранный из группы, состоящей из инсулина, глюкагона, гормона роста (GH), паратиреоидного гормона (РТН), соматолиберина
(GRF), фолликулостимулирующего гормона (FSH), лютеинизирующего гормона (LH), хорионического гонадотропина человека (hCG), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), ангиопоэтинов, ангиостатина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора
(Г-КСФ), эритропоэтина (ЕРО), фактора роста соединительной ткани (CTGF), основного фактора роста фибробластов (bFGF), кислого фактора роста фибробластов (aFGF), эпидермального фактора роста (EGF), трансформирующего фактора роста α (ФНО), тромбоцитарного фактора роста (PDGF), инсулино-подобных факторов роста I и II (IGF-I и IGF-II), TGFβ, активинов, ингибинов, морфогенетического белка кости (BMP), фактора роста нервов (NGF), нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), нейротрофинов NT-3 и NT4/5, цилиарного нейротрофического фактора (CNTF), нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF), нейртурина, агрина, нетрина-1 и нетрина-2, фактора роста гепатоцитов (HGF), эфринов, ноггина, Sonic Hedgehog и тирозингидроксилазы.
30. Способ по любому из пп. 1-28, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий продукт гена, выбранный из группы, состоящей из тромбопоэтина (ТРО), интерлейкинов (ИЛ-1-ИЛ-17), моноцитарного белка-хемоаттрактанта, лейкоз-ингибирующего фактора, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, Fas-лиганда, факторов некроза опухоли α и β, интерферонов α β и γ, фактора стволовых клеток, лиганда flk-2/flt3, IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, химерных иммуноглобулинов, гуманизированных антител, одноцепочечных антител, Т-клеточных рецепторов, химерных Т-клеточных рецепторов, одноцепочечных Т-клеточных рецепторов, молекул МНС класса I и класса II.
31. Способ по любому из пп. 1-28, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий белок, применимый для коррекции врожденных нарушений метаболизма, выбранный из группы, состоящей из карбамоилсинтетазы I, орнитинтранскарбамилазы, аргиносукцинатсинтетазы, аргиносукцинатлиазы, аргиназы, фумариацетацетатгидролазы, фенилаланигидроксилазы, альфа-1-антитрипсина, глюкоза-6-фосфатазы, порфобилиногендезаминазы, фактора V, фактора VIII, фактора IX, цистатион бета-синтазы, декарбоксилазы разветвленных альфа-кетокислот, альбумина, изовалерил-КоА-дегидрогеназа, пропионил-КоА-карбоксилазы, метилмалонил-КоА-мутазы, глутарил-КоА-дегидрогеназы, инсулина, бета-глюкозидазы, пируваткарбоксилазы, печеночной фосфорилазы, фосфорилаза-киназы, глициндекарбоксилазы, RPE65, Н-белка, Т-белка, последовательности трансмембранного регулятора кистозного фиброза (CFTR) и последовательность кДНК дистрофина.
32. Способ по любому из пп. 1-28, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий фактор VIII или фактор IX.
33. Способ по любому из пп. 1-32, где с помощью способа выделяют приблизительно 4 0-70% общего количества частиц вектора rAAV из сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b).
34. Способ по любому из пп. 1-33, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, полученные или очищенные посредством очистки на AAV-аффинной колонке.
35. Способ по любому из пп. 1-34, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, получаемые или очищенные посредством очистки с помощью AAV-аффинной колонки в комбинации с очисткой с помощью анионообменной колонки.
36. Способ по любому из пп. 1-34, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, полученные или очищенные посредством очистки с помощью AAV-аффинной колонки в комбинации с очисткой с помощью анионообменной и катионообменной колонки.
37. Способ по любому из пп. 1-36, где указанные частицы вектора получают из AAV, выбранного из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и AAV10.
38. Способ очистки частиц рекомбинантного вектора аденоассоциированного вируса (rAAV), включающий стадии:
(a) сбора клеток и супернатанта культуры клеток, содержащего частицы вектора rAAV, для получения сбора;
(b) необязательно, концентрирования указанного сбора, полученного на стадии (а), для получения концентрированного сбора;
(c) лизирования указанного сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b), для получения лизата;
(d) обработки лизата, полученного на стадии (с), для снижения содержания контаминирующей нуклеиновой кислоты в лизате и, таким образом, получения лизата со сниженным содержанием нуклеиновой кислоты;
(e) фильтрации указанного лизата со сниженным содержанием нуклеиновой кислоты, полученного на стадии (d), для получения очищенного лизата и, необязательно, разведения указанного очищенного лизата для получения разведенного очищенного лизата;
(f) подвергания указанного очищенного лизата или разведенного очищенного лизата, полученного на стадии (е), катионообменной хроматографии на колонках для получения колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV и, таким образом, разделения частиц вектора rAAV и белковых или других производственных примесей и, необязательно, концентрирования указанного колоночного элюата для получения концентрированного колоночного элюата;
(g) подвергания указанного колоночного элюата или указанного концентрированного колоночного элюата, полученного на стадии (f), эксклюзионной хроматографии на колонках для получения второго колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV, и, таким образом, разделения частиц вектора rAAV и белковых примесей и, необязательно, разведения указанного второго колоночного элюата для получения разведенного второго колоночного элюата;
(h) подвергания указанного второго колоночного элюата или указанного разведенного второго колоночного элюата, полученного на стадии (g), анионообменной хроматографии на колонках для получения третьего колоночного элюата, состоящего из частиц вектора rAAV, и, необязательно, концентрирования указанного третьего колоночного элюата для получения концентрированного третьего колоночного элюата; и
(i) фильтрации указанного третьего колоночного элюата или указанного концентрированного третьего колоночного элюата, полученного на стадии (h), и, таким образом, получения очищенных частиц вектора rAAV.
39. Способ по п. 38, где указанное концентрирование на стадии (b), и/или стадии (f), и/или стадии (h) осуществляют посредством ультрафильтрации/диафильтрации, необязательно, посредством фильтрации тангенциальным потоком.
40. Способ по п. 38, где посредством указанного концентрирования на стадии (b) снижают объем указанных собранных клеток и супернатанта культуры клеток приблизительно в 2-10 раз.
41. Способ по п. 38, где посредством указанного концентрирования на стадии (f) снижают объем указанного колоночного элюата приблизительно в 5-20 раз.
42. Способ по п. 38, где указанное лизирование указанного сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b), осуществляют посредством микрофлюидизации.
43. Способ по п. 38, где стадия (d) включает обработку нуклеазой и, таким образом, снижение содержания контаминирующей нуклеиновой кислоты.
44. Способ по п. 43, где нуклеаза включает бензоназу.
45. Способ по п. 38, где указанную фильтрацию указанного очищенного лизата или указанного разведенного очищенного лизата на стадии (е) осуществляют с помощью фильтра, имеющего диаметр пор приблизительно от 0,1 до 0,8 мкм включительно.
46. Способ по п. 38, где указанное разведение указанного очищенного лизата или указанного разведенного очищенного лизата на стадии (е) осуществляют с помощью водного забуференного раствора ацетата.
47. Способ по п. 38, где указанное разведение указанного второго колоночного элюата на стадии (д) осуществляют с помощью водного забуференного раствора ацетата.
48. Способ по п. 47, где указанный водный забуференный раствор ацетата имеет рН приблизительно от 4,0 до 7,0 включительно.
49. Способ по п. 38, где указанные частицы вектора rAAV, полученные на стадии (i), составляют с помощью поверхностно-активного вещества для получения состава вектора AAV.
50. Способ по п. 38, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (h) включает полиэтиленгликоль (PEG)-модулируемую хроматографию на колонках.
51. Способ по п. 38, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (h) включает промывку указанной колонки раствором PEG перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
52. Способ по п. 51, где PEG в указанном растворе PEG имеет среднюю молекулярную массу в диапазоне приблизительно от 1000 до 50000 включительно.
53. Способ по п. 38, где указанная анионообменная хроматография на колонках на стадии (h) включает промывку указанной колонки водным раствором поверхностно-активного вещества перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
54. Способ по п. 38, где указанная катионообменная хроматография на колонках на стадии (f) включает промывку указанной колонки раствором поверхностно-активного вещества перед элюцией указанных частиц вектора rAAV из колонки.
55. Способ по любому из пп. 50-54, где указанный раствор PEG и/или указанный раствор поверхностно-активного вещества содержит водный буфер Трис-Cl/NaCl или водный буфер фосфат/NaCl.
56. Способ по п. 55, где указанный буфер NaCl содержит приблизительно 20-250 мМ NaCl включительно или приблизительно 50-200 мМ NaCl включительно.
57. Способ по п. 38, где указанные частицы вектора rAAV элюируют из указанной анионообменной колонки на стадии (h) в водный буфер Трис-Cl/NaCl.
58. Способ по п. 57, где указанный буфер Трис-Cl/NaCl содержит 50-200 мМ NaCl.
59. Способ по п. 38, где указанные частицы вектора rAAV элюируют из указанной катионообменной колонки на стадии (f) в водный буфер фосфат/NaCl.
60. Способ по п. 59, где указанный буфер фосфат/NaCl содержит приблизительно 100-500 мМ NaCl включительно.
61. Способ по п. 38, где указанная анионообменная колонка на стадии (h) содержит функциональную группу кватернизированного полиэтиленимина.
62. Способ по п. 38, где указанная эксклюзионная колонка на стадии (g) имеет диапазон разделения (по молекулярной массе) приблизительно от 10000 до 600000 включительно.
63. Способ по п. 38, где указанная катионообменная колонка на стадии (f) содержит сульфопропильную функциональную группу.
64. Способ по любому из пп. 38-63, где способ исключает стадию ультрацентрифугирования в градиенте хлорида цезия.
65. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из миРНК, антисмысловой молекулы, мкРНК, рибозима и shRNA.
66. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий продукт гена, выбранный из группы, состоящей из инсулина, глюкагона, гормона роста (GH), паратиреоидного гормона (РТН), соматолиберина (GRF), фолликулостимулирующего гормона (FSH), лютеинизирующего гормона (LH), хорионического гонадотропина человека (hCG), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), ангиопоэтинов, ангиостатина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), эритропоэтина (ЕРО), фактора роста соединительной ткани (CTGF), основного фактора роста фибробластов (bFGF), кислого фактора роста фибробластов (aFGF), эпидермального фактора роста (EGF), трансформирующего фактора роста а (ФНО), тромбоцитарного фактора роста (PDGF), инсулино-подобных факторов роста I и II (IGF-I и IGF-II), TGFβ, активинов, ингибинов, морфогенетического белка кости (BMP), фактора роста нервов (NGF), нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), нейротрофинов NT-3 и NT4/5, цилиарного нейротрофического фактора (CNTF), нейротрофического фактора глиальных клеток (GDNF), нейртурина, агрина, нетрина-1 и нетрина-2, фактора роста гепатоцитов (HGF), эфринов, ноггина, Sonic Hedgehog и тирозингидроксилазы.
67. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий продукт гена, выбранный из группы, состоящей из тромбопоэтина (ТРО), интерлейкинов (ИЛ-1-ИЛ-17), моноцитарного белка-хемоаттрактанта, лейкоз-ингибирующего фактора, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, Fas-лиганда, факторов некроза опухоли α и β, интерферонов α, β и γ, фактора стволовых клеток, лиганда flk-2/flt3, IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, химерных иммуноглобулинов, гуманизированных антител, одноцепочечных антител, Т-клеточных рецепторов, химерных Т-клеточных рецепторов, одноцепочечных Т-клеточных рецепторов, молекул МНС класса I и класса II.
68. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий белок, применимый для коррекции врожденных нарушений метаболизма, выбранный из группы, состоящей из карбамоилсинтетазы I, орнитинтранскарбамилазы, аргиносукцинатсинтетазы, аргиносукцинатлиазы, аргиназы, фумариацетацетатгидролазы, фенилаланигидроксилазы, альфа-1-антитрипсина, глюкоза-6-фосфатазы, порфобилиногендезаминазы, фактора V, фактора VIII, фактора IX, цистатион бета-синтазы, декарбоксилазы разветвленных альфа-кетокислот, альбумина, изовалерил-КоА-дегидрогеназа, пропионил-КоА-карбоксилазы, метилмалонил-КоА-мутазы, глутарил-КоА-дегидрогеназы, инсулина, бета-глюкозидазы, пируваткарбоксилазы, печеночной фосфорилазы, фосфорилаза-киназы, глициндекарбоксилазы, RPE65, Н-белка, Т-белка, последовательности трансмембранного регулятора кистозного фиброза (CFTR) и последовательность кДНК дистрофина.
69. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора rAAV содержат трансген, кодирующий фактор VIII или фактор IX.
70. Способ по любому из пп. 38-64, где с помощью способа выделяют приблизительно 4 0-70% общего количества частиц вектора rAAV из сбора, полученного на стадии (а), или указанного концентрированного сбора, полученного на стадии (b).
71. Способ по любому из пп. 38-64, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, полученные или очищенные посредством очистки на AAV-аффинной колонке.
72. Способ по любому из пп. 38-64, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, получаемые или очищенные посредством очистки с помощью AAV-аффинной колонки в комбинации с очисткой с помощью анионообменной колонки.
73. Способ по любому из пп. 38-64, где способом получают частицы вектора rAAV, имеющие более высокую чистоту, чем частицы вектора rAAV, полученные или очищенные посредством очистки с помощью AAV-аффинной колонки в комбинации с очисткой с помощью анионообменной и катионообменной колонки.
74. Способ по любому из пп. 38-64, где указанные частицы вектора получают из AAV, выбранного из группы, состоящей из AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9 и AAV10.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662316252P | 2016-03-31 | 2016-03-31 | |
| US62/316,252 | 2016-03-31 | ||
| PCT/US2017/025396 WO2017173283A1 (en) | 2016-03-31 | 2017-03-31 | Column-based fully scalable raav manufacturing process |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018138164A true RU2018138164A (ru) | 2020-04-30 |
| RU2018138164A3 RU2018138164A3 (ru) | 2020-06-16 |
| RU2754467C2 RU2754467C2 (ru) | 2021-09-02 |
Family
ID=59966426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018138164A RU2754467C2 (ru) | 2016-03-31 | 2017-03-31 | ПОЛНОСТЬЮ МАСШТАБИРУЕМЫЙ СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА rAAV НА ОСНОВЕ КОЛОНОК |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11702639B2 (ru) |
| EP (1) | EP3436051B1 (ru) |
| JP (2) | JP7364306B2 (ru) |
| KR (1) | KR102405250B1 (ru) |
| CN (1) | CN109152821A (ru) |
| AU (1) | AU2017240721B2 (ru) |
| BR (1) | BR112018070256A2 (ru) |
| CA (1) | CA3019133A1 (ru) |
| CL (1) | CL2018002754A1 (ru) |
| CO (1) | CO2018011151A2 (ru) |
| DK (1) | DK3436051T3 (ru) |
| ES (1) | ES2896080T3 (ru) |
| HU (1) | HUE056854T2 (ru) |
| IL (1) | IL261970B2 (ru) |
| LT (1) | LT3436051T (ru) |
| MY (1) | MY195391A (ru) |
| PE (1) | PE20190434A1 (ru) |
| PH (1) | PH12018502104B1 (ru) |
| PL (1) | PL3436051T3 (ru) |
| PT (1) | PT3436051T (ru) |
| RU (1) | RU2754467C2 (ru) |
| SA (1) | SA518400146B1 (ru) |
| SG (1) | SG11201808354PA (ru) |
| WO (1) | WO2017173283A1 (ru) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107106689A (zh) | 2014-11-05 | 2017-08-29 | 沃雅戈治疗公司 | 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸 |
| IL292999A (en) | 2014-11-14 | 2022-07-01 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| MX2017006217A (es) | 2014-11-14 | 2018-05-02 | Voyager Therapeutics Inc | Polinucleotidos moduladores. |
| US11697825B2 (en) | 2014-12-12 | 2023-07-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scAAV |
| WO2017173283A1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | Spark Therapeutics, Inc. | Column-based fully scalable raav manufacturing process |
| MX2018014154A (es) | 2016-05-18 | 2019-05-06 | Voyager Therapeutics Inc | Polinucleotidos moduladores. |
| KR20250159068A (ko) | 2016-08-29 | 2025-11-07 | 웨인 스테이트 유니버시티 | 개선된 광 민감성을 갖는 채널옵신 변이체에서의 돌연변이의 확인 및 이의 용도 |
| JOP20190269A1 (ar) | 2017-06-15 | 2019-11-20 | Voyager Therapeutics Inc | بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون |
| KR102669561B1 (ko) * | 2017-06-30 | 2024-05-24 | 스파크 테라퓨틱스, 인코포레이티드 | Aav 벡터 컬럼 정제 방법 |
| MX2020004830A (es) | 2017-11-08 | 2020-11-11 | Avexis Inc | Medios y metodo para preparar vectores virales y usos de los mismos. |
| EP3784276A4 (en) * | 2018-04-24 | 2022-03-16 | Merck Sharp & Dohme Corp. | SCALABLE CHROMATOGRAPHY PROCEDURE FOR PURIFICATION OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS |
| JP2021523914A (ja) | 2018-05-15 | 2021-09-09 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドＶｏｙａｇｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． | パーキンソン病を治療するための組成物および方法 |
| CN120718958A (zh) | 2018-06-08 | 2025-09-30 | 诺华股份有限公司 | 用于测量药物产品效力的基于细胞的测定 |
| JP7528066B2 (ja) | 2018-09-28 | 2024-08-05 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 操作されたプロモータを有するフラタキシン発現コンストラクトおよびその使用方法 |
| WO2020264411A1 (en) * | 2019-06-28 | 2020-12-30 | Baxalta Incorporated | Adeno-associated virus purification methods |
| WO2021207132A1 (en) * | 2020-04-06 | 2021-10-14 | Brown University | Formulations and processes for treating water from impacted sources |
| WO2022045055A1 (ja) * | 2020-08-24 | 2022-03-03 | タカラバイオ株式会社 | ｐＨの違いによる非エンベロープウイルスベクター粒子の調製方法 |
| US20230183658A1 (en) * | 2021-10-29 | 2023-06-15 | Oxford Biomedica Solutions Llc | Methods and compositions for the purification of adeno-associated virus |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5139941A (en) | 1985-10-31 | 1992-08-18 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV transduction vectors |
| WO1992001070A1 (en) | 1990-07-09 | 1992-01-23 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce | High efficiency packaging of mutant adeno-associated virus using amber suppressions |
| US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
| CA2115742A1 (en) | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Ronald G. Crystal | Adenovirus mediated transfer of genes to the gastrointestinal tract |
| US5981716A (en) * | 1995-06-07 | 1999-11-09 | Gruppo Lepettit, S.P.A. | Process for the purification of proteins |
| US6001650A (en) | 1995-08-03 | 1999-12-14 | Avigen, Inc. | High-efficiency wild-type-free AAV helper functions |
| US6004797A (en) | 1995-11-09 | 1999-12-21 | Avigen, Inc. | Adenovirus helper-free recombinant AAV Virion production |
| CA2995542A1 (en) * | 1997-09-05 | 1999-03-11 | Genzyme Corporation | Methods for generating high titer helper-free preparations of recombinant aav vectors |
| US7125705B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-10-24 | Genzyme Corporation | Polynucleotides for use in recombinant adeno-associated virus virion production |
| US6593123B1 (en) | 2000-08-07 | 2003-07-15 | Avigen, Inc. | Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification |
| US7419817B2 (en) | 2002-05-17 | 2008-09-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. | Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography |
| JP4559429B2 (ja) * | 2003-05-21 | 2010-10-06 | ジェンザイム・コーポレーション | 空キャプシドを実質的に含まない組換えａａｖビリオン調製物を生成するための方法 |
| PL2191001T4 (pl) | 2007-04-09 | 2017-01-31 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Kompozycje wektora RAAV mające białka kapsydu zmodyfikowane tyrozyną i sposoby ich zastosowania |
| TR201815937T4 (tr) | 2009-06-16 | 2018-11-21 | Genzyme Corp | Rekombinant AAV vektörlerinin purifikasyonu için geliştirilen yöntemler. |
| EP2325194A1 (en) * | 2009-11-24 | 2011-05-25 | Glycotope GmbH | Process for the purification of glycoproteins |
| ES2680915T3 (es) | 2010-01-28 | 2018-09-11 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Plataforma de fabricación escalable para la purificación de vectores virales y vectores virales purificados de este modo para su utilización en terapia génica |
| JP2014528729A (ja) | 2011-10-05 | 2014-10-30 | モルメド エスピーエー | ウイルスベクター精製システム |
| WO2017173283A1 (en) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | Spark Therapeutics, Inc. | Column-based fully scalable raav manufacturing process |
-
2017
- 2017-03-31 WO PCT/US2017/025396 patent/WO2017173283A1/en not_active Ceased
- 2017-03-31 HU HUE17776783A patent/HUE056854T2/hu unknown
- 2017-03-31 US US16/088,743 patent/US11702639B2/en active Active
- 2017-03-31 IL IL261970A patent/IL261970B2/en unknown
- 2017-03-31 CN CN201780022146.8A patent/CN109152821A/zh active Pending
- 2017-03-31 KR KR1020187031464A patent/KR102405250B1/ko active Active
- 2017-03-31 LT LTEPPCT/US2017/025396T patent/LT3436051T/lt unknown
- 2017-03-31 CA CA3019133A patent/CA3019133A1/en active Pending
- 2017-03-31 SG SG11201808354PA patent/SG11201808354PA/en unknown
- 2017-03-31 MY MYPI2018001663A patent/MY195391A/en unknown
- 2017-03-31 EP EP17776783.7A patent/EP3436051B1/en active Active
- 2017-03-31 AU AU2017240721A patent/AU2017240721B2/en active Active
- 2017-03-31 BR BR112018070256A patent/BR112018070256A2/pt active Search and Examination
- 2017-03-31 DK DK17776783.7T patent/DK3436051T3/da active
- 2017-03-31 PE PE2018001938A patent/PE20190434A1/es unknown
- 2017-03-31 PT PT177767837T patent/PT3436051T/pt unknown
- 2017-03-31 PH PH1/2018/502104A patent/PH12018502104B1/en unknown
- 2017-03-31 JP JP2018550782A patent/JP7364306B2/ja active Active
- 2017-03-31 RU RU2018138164A patent/RU2754467C2/ru active
- 2017-03-31 ES ES17776783T patent/ES2896080T3/es active Active
- 2017-03-31 PL PL17776783T patent/PL3436051T3/pl unknown
-
2018
- 2018-09-27 CL CL2018002754A patent/CL2018002754A1/es unknown
- 2018-09-30 SA SA518400146A patent/SA518400146B1/ar unknown
- 2018-10-18 CO CONC2018/0011151A patent/CO2018011151A2/es unknown
-
2022
- 2022-06-07 JP JP2022092235A patent/JP7659523B2/ja active Active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018138164A (ru) | ПОЛНОСТЬЮ МАСШТАБИРУЕМЫЙ СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА rAAV НА ОСНОВЕ КОЛОНОК | |
| JP2020526190A5 (ru) | ||
| JP2018121653A5 (ru) | ||
| JP2019509745A5 (ru) | ||
| FI3488007T3 (fi) | Skaalautuvia korkeasaantoisia menetelmiä adeno-assosioidun rekombinanttiviruksen (rAAV) vektorin tuottamiseksi korkealla saannolla ja siten tuotettuja adeno-assosioidun rekombinanttiviruksen (rAAV) vektoreita | |
| JP2016185153A5 (ru) | ||
| KR102669561B1 (ko) | Aav 벡터 컬럼 정제 방법 | |
| RU2015144057A (ru) | Масштабный производственный способ получения рекомбинантных лентивирусных векторов в системе культивирования клеток в бессывороточной суспензии | |
| JP2016512700A5 (ru) | ||
| KR20240021231A (ko) | Aav 벡터 컬럼 정제 방법 | |
| RU2772876C2 (ru) | Колоночные способы очистки вектора на основе aav | |
| NZ747126B2 (en) | Column-based fully scalable raav manufacturing process | |
| CN117794629A (zh) | Aav载体的柱纯化方法 | |
| BR112019028299B1 (pt) | Método para a purificação de partículas de vetores adenoassociados recombinantes (raav) | |
| HK40003857B (en) | Column-based fully scalable raav manufacturing process |