RU2018133691A - Транспозонная система и способы ее применения - Google Patents
Транспозонная система и способы ее применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2018133691A RU2018133691A RU2018133691A RU2018133691A RU2018133691A RU 2018133691 A RU2018133691 A RU 2018133691A RU 2018133691 A RU2018133691 A RU 2018133691A RU 2018133691 A RU2018133691 A RU 2018133691A RU 2018133691 A RU2018133691 A RU 2018133691A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sequence encoding
- dna sequence
- transposon
- paragraphs
- electroporation
- Prior art date
Links
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 106
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 90
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims 62
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims 62
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims 38
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims 33
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 18
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 18
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 claims 11
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 6
- 210000004405 cytokine-induced killer cell Anatomy 0.000 claims 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 6
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 claims 6
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims 4
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims 3
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 3
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 claims 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 claims 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 2
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 claims 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 claims 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 claims 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims 1
- 102220605874 Cytosolic arginine sensor for mTORC1 subunit 2_D10A_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 claims 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 claims 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 claims 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims 1
- 108091008108 affimer Proteins 0.000 claims 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 claims 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 claims 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/90—Vectors containing a transposable element
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/07—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Claims (150)
1. Способ ex-vivo генетической модификации иммунной клетки, включающий доставку в иммунную клетку:
(а) последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, содержащей последовательность, кодирующую фермент транспозазу, и
(b) рекомбинантной и неприродной последовательности ДНК, включающей последовательность ДНК, кодирующую транспозон.
2. Способ по п.1, где последовательностью, кодирующей фермент транспозазу, является последовательность мРНК.
3. Способ по п. 1, где последовательностью, кодирующей фермент транспозазу, является последовательность ДНК.
4. Способ по п. 1, где последовательностью, кодирующей фермент транспозазу, является аминокислотная последовательность.
5. Способ по любому из пп. 1-4, где стадия доставки включает электропорацию или нуклеофекцию иммунной клетки.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где способ также включает стадию стимуляции иммунной клетки одним или более цитокинами.
7. Способ по п. 6, где стадию стимуляции иммунной клетки одним или более цитокинами осуществляют после стадии доставки.
8. Способ по п. 6, где стадию стимуляции иммунной клетки одним или более цитокинами осуществляют до стадии доставки.
9. Способ по любому из пп. 6-8, где один или более цитокинов включают IL-2, IL-21, IL-7 и/или IL-15.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где иммунной клеткой является аутологичная иммунная клетка.
11. Способ по любому из пп. 1-10, где иммунной клеткой является Т-лимфоцит.
12. Способ по любому из пп. 1-10, где иммунной клеткой является природная клетка-киллер (NK).
13. Способ по любому из пп. 1-10, где иммунной клеткой является клетка-киллер, индуцированная цитокином (CIK).
14. Способ по любому из пп. 1-10, где иммунной клеткой является природная Т-клетка-киллер (NКТ).
15. Способ по любому из пп. 2 и 5-14, где последовательность мРНК, кодирующую фермент транспозазу, продуцируют in vitro.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, где фермент транспозаза представляет собой фермент транспозазу Super piggyBac™ (sPBo).
17. Способ по п. 16, где фермент транспозаза Super piggyBac™ (PB) содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности:
MGSSLDDEHILSALLQSD DELVGEDSDSEVSDHVSE DDVQSDTEEAFIDEVHEV QPTSSGSEILDEQNVIEQ PGSSLASNRILTLPQRTI RGKNKHCWSTSKSTRRSR VSALNIVRSQRGPTRMCR NIYDPLLCFKLFFTDEII SEIVKWTNAEISLKRRES MTSATFRDTNEDEIYAFF GILVMTAVRKDNHMSTDD LFDRSLSMVYVSVMSRDR FDFLIRCLRMDDKSIRPT LRENDVFTPVRKIWDLFI HQCIQNYTPGAHLTIDEQ LLGFRGRCPFRVYIPNKP SKYGIKILMMCDSGTKYM INGMPYLGRGTQTNGVPL GEYYVKELSKPVHGSCRN ITCDNWFTSIPLAKNLLQ EPYKLTIVGTVRSNKREI PEVLKNSRSRPVGTSMFC FDGPLTLVSYKPKPAKMV YLLSSCDEDASINESTGK PQMVMYYNQTKGGVDTLD QMCSVMTCSRKTNRWPMA LLYGMINIACINSFIIYS HNVSSKGEKVQSRKKFMR NLYMSLTSSFMRKRLEAP TLKRYLRDNISNILPKEV PGTSDDSTEEPVMKKRTY CTYCPSKIRRKANASCKK CKKVICREHNIDMCQSCF (SEQ ID NO: 1).
18. Способ по любому из пп. 1-15, где фермент транспозаза представляет собой фермент транспозазу Sleeping Beauty.
19. Способ по п. 18, где транспозаза Sleeping Beauty представляет собой гиперактивную транспозазу Sleeping Beauty SB100X.
20. Способ по п. 18 или 19, где фермент транспозаза Sleeping Beauty содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности: MGKSKEISQDLRKKIV DLHKSGSSLGAISKRL KVPRSSVQTIVRKYKH HGTTQPSYRSGRRRYL SPRDERTLVRKVQINP RTTAKDLVKMLEETGT KVSISTVKRVLYRHNL KGRSARKKPLLQNRHK KARLRFATAHGDKDRT FWRNVLWSDETKIELF GHNDHRYVWRKKGEAC KPKNTIPTVKHGGGSI MLWGCFAAGGTGALHK IDGIMRKENYVDILKQ HLKTSVRKLKLGRKWV FQMDNDPKHTSKVVAK WLKDNKVKVLEWPSQS PDLNPIENLWAELKKR VRARRPTNLTQLHQLC QEEWAKIHPTYCGKL VEGYPKRLTQVKQFKGNATKY (SEQ ID NO: 2).
21. Способ по п. 18 или 19, где фермент транспозаза Sleeping Beauty содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 75% идентична последовательности:
MGKSKEISQDLRKRIVD LHKSGSSLGAISKRLAV PRSSVQTIVRKYKHHG TTQPSYRSGRRRYLSP RDERTLVRKVQINPRT TAKDLVKMLEETGTKV SISTVKRVLYRHNLKG HSARKKPLLQNRHKKA RLRFATAHGDKDRTFW RNVLWSDETKIELFGH NDHRYVWRKKGEACKP KNTIPTVKHGGGSIML WGCFAAGGTGALHKID GIMDAVQYVDILKQHL KTSVRKLKLGRKWVFQ HDNDPKHTSKVVAKWL KDNKVKVLEWPSQSPD LNPIENLWAELKKRVR ARRPTNLTQLHQLCQE EWAKIHPNYCGKLVE GYPKRLTQVKQFKGNATKY (SEQ ID NO: 3).
22. Способ по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, содержащие последовательность ДНК, кодирующую транспозон, являются кольцевыми.
23. Способ по п. 22, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, содержится в плазмидном векторе.
24. Способ по п. 22, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, содержится в миникольцевом ДНК-векторе.
25. Способ по любому из пп. 1-21, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, является линейной.
26. Способ по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантную и неприродную последовательность ДНК, кодирующую транспозон, продуцируют in vitro.
27. Способ по п. 25 или 26, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, представляет собой продукт расщепления кольцевой ДНК рестриктирующими ферментами.
28. Способ по п. 27, где кольцевой ДНК является плазмидный вектор или миникольцевой ДНК-вектор.
29. Способ по п. 25 или 26, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, представляет собой продукт полимеразной цепной реакции (ПЦР).
30. Способ по п. 25 или 26, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, представляет собой двухцепочечную последовательность ДНК doggybone™.
31. Способ по п. 30, где последовательность ДНК doggybone™ получают ферментативным способом так, чтобы они по отдельности кодировали антигенный экспрессионный кластер, содержащий антиген, промотор, поли-A хвост и теломерные концы.
32. Способ по любому из предшествующих пунктов, где иммунную клетку выделяют или получают от человека.
33. Способ по любому из пп. 1-31, где иммунную клетку выделяют или получают от млекопитающего, не являющегося человеком.
34. Способ по п. 33, где млекопитающим, не являющимся человеком, являются грызуны, кролики, кошки, собаки, свиньи, лошади, коровы, верблюды или приматы.
35. Способ по любому из предшествующих пунктов, где рекомбинантная и неприродная последовательность ДНК, кодирующая транспозон, также содержит последовательность, кодирующую химерный антигенный рецептор или его часть.
36. Способ по п. 35, где часть последовательности, кодирующей химерный антигенный рецептор, кодирует антиген-распознающую область.
37. Способ по п. 35 или 36, где антиген-распознающая область содержит одну или более гипервариабельных областей.
38. Способ по п. 35 или 36, где антиген-распознающая область содержит антитело, антитело-миметик, каркасный белок или их фрагмент.
39. Способ по п. 38, где антителом является химерное антитело, рекомбинантное антитело, гуманизованное антитело или человеческое антитело.
40. Способ по п. 39, где антителом является антитело со скорректированной аффинностью.
41. Способ по п. 38, где антитело содержит или состоит из них, одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv), VHH, однодоменное антитело (sdAB), небольшую модульную иммунофармацевтическую (SMIP) молекулу или наноантитело.
42. Способ по п. 41, где VHH является верблюжьим.
43. Способ по п. 41 или 42, где VHH является гуманизованным.
44. Способ по п. 38, где фрагмент антитела включает или состоит из них, гипервариабельную область, вариабельную область, тяжелую цепь, легкую цепь или любые их комбинации.
45. Способ по п. 38, где антитело-миметик включает или состоит из них, аффинное антитело, аффилин, аффимер, аффитин, альфа-антитело, антикалин, авимер, DARPin, финомер, пептидный домен Кунитца или моноантитело.
46. Способ по п. 38, где каркасный белок включает Центирин или состоит из него.
47. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 10 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
48. Способ по п. 47, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 100 мкг/мл или менее.
49. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 7,5 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
50. Способ по п. 49, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 75 мкг/мл или менее.
51. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 6,0 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
52. Способ по п. 51, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 60 мкг/мл или менее.
53. Способ по п. 50 или 51, где транспозазой является транспозаза Sleeping Beauty.
54. Способ по п. 53, где транспозазой Sleeping Beauty является транспозаза Sleeping Beauty 100X (SB100X).
55. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 5,0 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
56. Способ по п. 55, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 50 мкг/мл или менее.
57. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 2,5 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
58. Способ по п. 57, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 25 мкг/мл или менее.
59. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 1,67 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
60. Способ по п. 59, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 16,7 мкг/мл или менее.
61. Способ по п. 59 или 60, где транспозазой является транспозаза Super piggyBac (PB).
62. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 0,55 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
63. Способ по п. 62, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 5,5 мкг/мл или менее.
64. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 0,19 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
65. Способ по п. 64, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 1,9 мкг/мл или менее.
66. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность ДНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляют 0,1 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
67. Способ по п. 66, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей фермент транспозазу, и количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляют 1,0 мкг/мл или менее.
68. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 10 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
69. Способ по п. 68, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 100 мкг/мл или менее.
70. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 7,5 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
71. Способ по п. 70, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 75 мкг/мл или менее.
72. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 6,0 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
73. Способ по п. 72, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 60 мкг/мл или менее.
74. Способ по п. 72 или 73, где транспозазой является транспозаза Sleeping Beauty.
75. Способ по п. 74, где транспозазой Sleeping Beauty является транспозаза Sleeping Beauty 100X (SB100X).
76. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 5,0 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
77. Способ по п. 76, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 50 мкг/мл или менее.
78. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 2,5 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
79. Способ по п. 78, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 25 мкг/мл или менее.
80. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 1,67 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
81. Способ по п. 80, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 16,7 мкг/мл или менее.
82. Способ по п. 80 или 81, где транспозазой является транспозаза Super piggyBac (PB).
83. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 0,55 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
84. Способ по п. 83, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 5,5 мкг/мл или менее.
85. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 0,19 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
86. Способ по п. 85, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 1,9 мкг/мл или менее.
87. Способ по любому из пп. 5-46, где:
(а) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая фермент транспозазу, представляет собой последовательность РНК, и
(b) количество последовательности ДНК, кодирующей транспозон, составляет 0,1 мкг или менее на 100 мкл реагента для электропорации или нуклеофекции.
88. Способ по п. 87, где концентрация последовательности ДНК, кодирующей транспозон в реакции электропорации или нуклеофекции, составляет 1,0 мкг/мл или менее.
89. Иммунная клетка, модифицированная способом по любому из пп. 1-88.
90. Иммунная клетка по п. 89, где иммунной клеткой являются T-лимфоцит, природная клетка-киллер (NK), клетка-киллер, индуцированная цитокином (CIK) или природная Т-клетка-киллер (NКТ).
91. Иммунная клетка по п. 89 или 90, дополнительно модифицированная посредством второго инструмента для редактирования генов.
92. Иммунная клетка по п. 91, где второй инструмент для редактирования генов включает эндонуклеазу, функционально присоединенную к последовательности Cas9 или TALE.
93. Иммунная клетка по п. 92, где эндонуклеаза функционально присоединена к последовательности Cas9 или TALE посредством ковалентной связи.
94. Иммунная клетка по п. 92, где эндонуклеаза функционально присоединена к последовательности Cas9 или TALE посредством нековалентной связи.
95. Иммунная клетка по любому из пп. 89-94, где Cas9 представляет собой инактивированную Cas9 (dCas9).
96. Иммунная клетка по п. 95, где инактивированная Cas9 включает D10A и N580A в каталитическом сайте.
97. Иммунная клетка по п. 95 или 96, где Cas9 представляет собой небольшую и инактивированную Cas9 (dSaCas9).
98. Иммунная клетка по п. 97, где dSaCas9 содержит аминокислотную последовательность:
mkrnyilglaigitsvg ygiidyetrdvidagvr lfkeanvennegrrsk rgarrlkrrrrhriqrv kkllfdynlltdhsels ginpyearvkglsqkls eeefsaallhlakrrgv hnvneveedtgnelstk eqisrnskaleekyvae lqlerlkkdgevrgsin rfktsdyvkeakqllkv qkayhqldqsfidtyid lletrrtyyegpgegsp fgwkdikewyemlmghc tyfpeelrsvkyaynad lynalndlnnlvitrde nekleyyekfqiienvf kqkkkptlkqiakeilv needikgyrvtstgkpe ftnlkvyhdikditark eiienaelldqiakilt iyqssediqeeltnlns eltqeeieqisnlkgyt gthnlslkainlildel whtndnqiaifnrlklv pkkvdlsqqkeipttlv ddfilspvvkrsfiqsi kvinaiikkyglpndii ielareknskdaqkmin emqkrnrqtnerieeii rttgkenakyliekikl hdmqegkclysleaipl edllnnpfnyevdhiip rsvsfdnsfnnkvlvkq eeaskkgnrtpfqylss sdskisyetfkkhilnl akgkgrisktkkeylle erdinrfsvqkdfinrn lvdtryatrglmnllrs yfrvnnldvkvksingg ftsflrrkwkfkkernk gykhhaedaliianadf ifkewkkldkakkvmen qmfeekqaesmpeiete qeykeifitphqikhik dfkdykyshrvdkkpnr elindtlystrkddkgn tlivnnlnglydkdndk lkklinkspekllmyhh dpqtyqklklimeqygd eknplykyyeetgnylt kyskkdngpvikkikyy gnklnahlditddypns rnkvvklslkpyrfdvy ldngvykfvtvknldvi kkenyyevnskcyeeak klkkisnqaefiasfyn ndlikingelyrvigvn ndllnrievnmidityr eylenmndkrppriikt iasktqsikkystdilg nlyevkskkhpqiikkg (SEQ ID NO: 4).
99. Композиция, содержащая иммунную клетку по любому из пп. 89-98.
100. Применение композиции по п. 99 для лечения заболевания или расстройства у индивидуума, нуждающегося в этом.
101. Применение по п. 100, где заболеванием или расстройством является рак.
102. Применение по п. 100, где заболеванием или расстройством является инфекционное заболевание.
103. Применение по любому из пп. 99-102, где иммунная клетка является аутологичной.
104. Применение по любому из пп. 99-102, где иммунная клетка является аллогенной.
105. Культуральная среда для повышения жизнеспособности модифицированной иммунной клетки, содержащей IL-2, IL-21, IL-7, IL-15 или любые их комбинации.
106. Культуральная среда по п. 105, где модифицированной иммунной клеткой являются T-лимфоцит, природная клетка-киллер (NK), клетка-киллер, индуцированная цитокином (CIK) или природная Т-клетка-киллер (NКТ).
107. Культуральная среда по п. 105 или 106, где модифицированная иммунная клетка содержит одну или более экзогенных последовательностей ДНК.
108. Культуральная среда по п. 105 или 106, где модифицированная иммунная клетка содержит одну или более экзогенных последовательностей РНК.
109. Культуральная среда по любому из пп. 105-108, где модифицированная иммунная клетка была подвергнута электропорации или нуклеофекции.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201662300387P | 2016-02-26 | 2016-02-26 | |
| US62/300,387 | 2016-02-26 | ||
| PCT/US2017/019531 WO2017147538A1 (en) | 2016-02-26 | 2017-02-24 | Transposon system and methods of use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018133691A true RU2018133691A (ru) | 2020-03-26 |
| RU2018133691A3 RU2018133691A3 (ru) | 2020-07-29 |
Family
ID=58314517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018133691A RU2018133691A (ru) | 2016-02-26 | 2017-02-24 | Транспозонная система и способы ее применения |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP3420090A1 (ru) |
| JP (1) | JP2019506177A (ru) |
| KR (1) | KR20180131545A (ru) |
| CN (1) | CN109312361A (ru) |
| AU (1) | AU2017224111A1 (ru) |
| BR (1) | BR112018067536A2 (ru) |
| CA (1) | CA3015642A1 (ru) |
| IL (1) | IL261343A (ru) |
| MX (1) | MX2018010288A (ru) |
| RU (1) | RU2018133691A (ru) |
| SG (1) | SG11201807134RA (ru) |
| WO (1) | WO2017147538A1 (ru) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3494132A4 (en) | 2016-08-03 | 2020-03-18 | Washington University | Gene editing of car-t cells for the treatment of t cell malignancies with chimeric antigen receptors |
| US20190119636A1 (en) * | 2017-10-23 | 2019-04-25 | Poseida Therapeutics, Inc. | Modified stem cell memory t cells, methods of making and methods of using same |
| EP3555273B1 (en) | 2016-12-16 | 2024-05-22 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | ENHANCED hAT FAMILY TRANSPOSON-MEDIATED GENE TRANSFER AND ASSOCIATED COMPOSITIONS, SYSTEMS, AND METHODS |
| US11278570B2 (en) | 2016-12-16 | 2022-03-22 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | Enhanced hAT family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods |
| CN108728477B (zh) * | 2017-04-24 | 2022-02-22 | 华东理工大学 | 一种高效的转座突变系统及构建方法 |
| US20210115453A1 (en) * | 2017-08-31 | 2021-04-22 | Poseida Therapeutics, Inc. | Transposon system and methods of use |
| AU2018329741B2 (en) * | 2017-09-08 | 2025-02-20 | Poseida Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for chimeric ligand receptor (CLR)-mediated conditional gene expression |
| US10329543B2 (en) | 2017-10-23 | 2019-06-25 | Poseida Therapeutics, Inc. | Modified stem cell memory T cells, methods of making and methods of using same |
| CN112543808A (zh) | 2018-06-21 | 2021-03-23 | 比莫根生物科技公司 | 增强的hAT家族转座子介导的基因转移及相关组合物、系统和方法 |
| US20220170044A1 (en) * | 2019-02-08 | 2022-06-02 | Dna Twopointo, Inc. | Transposon-based modifications of immune cells |
| CN111926041B (zh) * | 2020-10-16 | 2020-12-25 | 广州吉妮欧生物科技有限公司 | 一种SARS-CoV-2假病毒小鼠体内包装系统及其制备方法 |
| CN114246986B (zh) * | 2021-12-29 | 2022-08-23 | 中国人民解放军陆军军医大学 | 一种基于原位调控免疫反应的心血管植入物及其制备方法 |
| CN118185901B (zh) * | 2022-12-12 | 2025-03-21 | 北京精缮生物科技有限责任公司 | 一种PBase蛋白、融合蛋白、核酸和基因整合系统及应用 |
| CN116590341A (zh) * | 2023-07-13 | 2023-08-15 | 山东维真生物科技有限公司 | 一种腺病毒-PiggyBac系统及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
| EP2160461B1 (en) | 2007-07-04 | 2012-08-08 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) | Hyperactive variants of the transposase protein of the transposon system sleeping beauty |
| EP2401376A4 (en) * | 2009-02-25 | 2012-11-28 | Univ Johns Hopkins | TRANSPOSON PIGGYBAC VARIANTS AND METHODS OF USE |
| EP2401367B1 (en) * | 2009-02-26 | 2016-11-30 | Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. | Hyperactive piggybac transposases |
| US20130045491A1 (en) * | 2011-07-19 | 2013-02-21 | Derya Unutmaz | Methods for activating t cells |
| US20150322439A1 (en) * | 2012-11-19 | 2015-11-12 | Nature Technology Corporation | Replicative minicircle vectors with improved expression |
-
2017
- 2017-02-24 BR BR112018067536A patent/BR112018067536A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2017-02-24 CN CN201780025816.1A patent/CN109312361A/zh active Pending
- 2017-02-24 JP JP2018544891A patent/JP2019506177A/ja active Pending
- 2017-02-24 RU RU2018133691A patent/RU2018133691A/ru not_active Application Discontinuation
- 2017-02-24 EP EP17711046.7A patent/EP3420090A1/en not_active Withdrawn
- 2017-02-24 AU AU2017224111A patent/AU2017224111A1/en not_active Abandoned
- 2017-02-24 KR KR1020187027345A patent/KR20180131545A/ko not_active Withdrawn
- 2017-02-24 MX MX2018010288A patent/MX2018010288A/es unknown
- 2017-02-24 SG SG11201807134RA patent/SG11201807134RA/en unknown
- 2017-02-24 WO PCT/US2017/019531 patent/WO2017147538A1/en not_active Ceased
- 2017-02-24 CA CA3015642A patent/CA3015642A1/en not_active Abandoned
-
2018
- 2018-08-23 IL IL261343A patent/IL261343A/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SG11201807134RA (en) | 2018-09-27 |
| CN109312361A (zh) | 2019-02-05 |
| JP2019506177A (ja) | 2019-03-07 |
| CA3015642A1 (en) | 2017-08-31 |
| EP3420090A1 (en) | 2019-01-02 |
| MX2018010288A (es) | 2019-06-06 |
| KR20180131545A (ko) | 2018-12-10 |
| RU2018133691A3 (ru) | 2020-07-29 |
| IL261343A (en) | 2018-10-31 |
| BR112018067536A2 (pt) | 2019-02-05 |
| AU2017224111A1 (en) | 2018-09-13 |
| WO2017147538A1 (en) | 2017-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2018133691A (ru) | Транспозонная система и способы ее применения | |
| JP2019506177A5 (ru) | ||
| Phan et al. | High affinity germinal center B cells are actively selected into the plasma cell compartment | |
| KR102708285B1 (ko) | 조혈 줄기세포의 선택적 제거 및 대체를 위한 조성물 및 방법 | |
| KR20210129105A (ko) | 면역치료법을 위한 변형된 자연 살해(nk) 세포 | |
| CN114258429A (zh) | 免疫效应细胞工程化和其用途 | |
| TW202538050A (zh) | 製備表現嵌合抗原受體的細胞之方法 | |
| CN112877291A (zh) | 基因修饰的t细胞产品、其制备方法和用途 | |
| CN109810188A (zh) | 用于克隆和表达关联抗体可变区基因区段的快速方法 | |
| CN105624107A (zh) | 一种多种淋巴细胞亚群的扩增方法及其应用 | |
| JP2023552441A (ja) | ＳＩＲＰ－αエンゲージャーによる自然免疫細胞のサイレンシング | |
| CN113785048B (zh) | 用于扩增和分化在过继转移疗法中的t淋巴细胞和nk细胞的方法 | |
| US20250333762A1 (en) | Cell-specific transcriptional regulatory sequences and uses thereof | |
| US20210002609A1 (en) | Modified lymphocytes | |
| CN116981685A (zh) | 基因工程化细胞及其用途 | |
| KR20230124983A (ko) | 유전적으로 조작된 세포를 추적하기 위한 펩타이드마커 | |
| JP2023532917A (ja) | Ｂ細胞のｂ２ｍ遺伝子座を編集するための方法および組成物 | |
| CA3082560A1 (en) | Il-33 secreting immunoresponsive cells and uses thereof | |
| JP6687246B2 (ja) | 改変型免疫細胞、改変型免疫細胞の製造方法、およびこれらの利用 | |
| US20190233843A1 (en) | Transposon system and methods of use | |
| CN111107856A (zh) | 增强基于t细胞的免疫疗法的效力的组合物和方法 | |
| CN119331908A (zh) | Car-t细胞的制备方法及其产品 | |
| US20250262301A1 (en) | Methods of inducing antibody-dependent cellular cytotoxicity (adcc) using modified natural killer (nk) cells | |
| CN112236514A (zh) | 改善细胞过继转移的持久性的组合物和方法 | |
| CN119350509A (zh) | 一种具有归巢特性的基因工程化骨髓间充质干细胞及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FA92 | Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted) |
Effective date: 20210702 |