RU2017128122A - Применение витаминов и генов и белков метаболизма витаминов для получения рекомбинантного белка в клетках млекопитающих - Google Patents
Применение витаминов и генов и белков метаболизма витаминов для получения рекомбинантного белка в клетках млекопитающих Download PDFInfo
- Publication number
- RU2017128122A RU2017128122A RU2017128122A RU2017128122A RU2017128122A RU 2017128122 A RU2017128122 A RU 2017128122A RU 2017128122 A RU2017128122 A RU 2017128122A RU 2017128122 A RU2017128122 A RU 2017128122A RU 2017128122 A RU2017128122 A RU 2017128122A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- protein
- vitamins
- vitamin
- medium
- specified
- Prior art date
Links
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 title claims 31
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 title claims 31
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 title claims 31
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 title claims 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims 17
- 230000037345 metabolism of vitamins Effects 0.000 title claims 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 title 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 title 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 title 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 15
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 10
- 230000022558 protein metabolic process Effects 0.000 claims 9
- 238000009738 saturating Methods 0.000 claims 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 6
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims 5
- 108091006272 SLC5A6 Proteins 0.000 claims 4
- 102100027046 Sodium-dependent multivitamin transporter Human genes 0.000 claims 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims 4
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 claims 4
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 claims 4
- 235000009492 vitamin B5 Nutrition 0.000 claims 4
- 239000011675 vitamin B5 Substances 0.000 claims 4
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N (D)-(+)-Pantothenic acid Chemical compound OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 3
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 claims 3
- 229930003571 Vitamin B5 Natural products 0.000 claims 3
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims 3
- FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N lipoamide Chemical compound NC(=O)CCCCC1CCSS1 FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 3
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims 3
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims 3
- 102000008297 Nuclear Matrix-Associated Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108010035916 Nuclear Matrix-Associated Proteins Proteins 0.000 claims 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 2
- 210000000299 nuclear matrix Anatomy 0.000 claims 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 2
- 108010073742 thiamin-diphosphate kinase Proteins 0.000 claims 2
- 101710148206 4'-phosphopantetheine phosphatase Proteins 0.000 claims 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims 1
- 102100024122 Pantothenate kinase 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710203425 Pantothenate kinase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100024127 Pantothenate kinase 2, mitochondrial Human genes 0.000 claims 1
- 102100024126 Pantothenate kinase 3 Human genes 0.000 claims 1
- 101710203430 Pantothenate kinase 3 Proteins 0.000 claims 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 1
- 239000012212 insulator Substances 0.000 claims 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
- C12N15/68—Stabilisation of the vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
- C12N15/69—Increasing the copy number of the vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/001—Vector systems having a special element relevant for transcription controllable enhancer/promoter combination
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Claims (45)
1. Эукариотическая система экспрессии, содержащая
по меньшей мере один первый полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один белок метаболизма витаминов под контролем по меньшей мере одной первой регуляторной последовательности и
под контролем по меньшей мере одной второй регуляторной последовательности, по меньшей мере один сайт расщепления эндонуклеазой рестрикции и/или по меньшей мере один второй полинуклеотид, кодирующий по меньшей мере один целевой продукт.
2. Эукариотическая система экспрессии по п. 1, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один белок метаболизма витаминов представляет собой белок транспорта витаминов.
3. Эукариотическая система экспрессии по п. 1, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один второй полинуклеотид встроен в указанный по меньшей мере один сайт расщепления эндонуклеазой рестрикции.
4. Эукариотическая система экспрессии по п. 2 или 3, отличающаяся тем, что указанный белок транспорта витаминов переносит растворимый витамин, такой как витамин В1, В5 и/или Н.
5. Эукариотическая система экспрессии по любому из пп. 2-4, отличающаяся тем, что указанный белок транспорта витаминов представляет собой THTR-1, THTR-2, ТРК, ТРС и/или SMVT (натрий-зависимый мультивитаминный транспортер).
6. Эукариотическая система экспрессии по любому из пп. 2-5, отличающаяся тем, что указанный белок транспорта витаминов представляет собой SMVT.
7. Эукариотическая система экспрессии по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная система экспрессии представляет собой по меньшей мере один вектор экспрессии.
8. Эукариотическая система экспрессии по п. 7, отличающаяся тем, что отдельный вектор содержит указанный по меньшей мере один первый и указанный по меньшей мере один второй полинуклеотид.
9. Эукариотическая система экспрессии по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что указанная первая и/или указанная вторая регуляторная последовательность представляют собой промоторы, энхансеры, области контроля локуса (LCR), участки прикрепления к ядерному матриксу (MAR), участки прикрепления к ядерному скаффолду (SAR), инсуляторные элементы и/или ДНК, ассоциированные с ядерным матриксом.
10. Набор, содержащий в одном контейнере указанную эукариотическую систему экспрессии по любому из предшествующих пунктов, а во втором контейнере - инструкции по применению указанной системы.
11. Набор по п. 10, дополнительно содержащий среду для культивирования клеток, предпочтительно содержащую лимитирующую и/или насыщающую концентрацию по меньшей мере одного витамина.
12. Набор по п. 11, отличающийся тем, что указанная среда для культивирования клеток содержит лимитирующую и/или насыщающую концентрацию витамина B1, В5 и/или Н.
13. Рекомбинантная эукариотическая клетка, содержащая систему экспрессии по любому из пп. 1-9; и/или
содержащая повышающую или понижающую мутацию белка метаболизма витаминов и содержащая второй полинуклеотид, кодирующий целевой продукт, при этом указанный белок метаболизма витаминов является необязательно присущим указанной клетке.
14. Рекомбинантная эукариотическая клетка по п. 13, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой клетку яичника китайского хомячка (СНО).
15. Рекомбинантная эукариотическая клетка по п. 13 или 14, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один первый полинуклеотид или последовательность, регулирующая экспрессию указанного по меньшей мере одного первого полинуклеотида, содержит повышающую или понижающую мутацию.
16. Рекомбинантная эукариотическая клетка по п. 13 или 14, отличающаяся тем, что указанный белок метаболизма витаминов нарушает метаболизм витаминов и/или связывает витамин внутри клетки.
17. Рекомбинантная эукариотическая клетка по п. 16, отличающаяся тем, что указанный белок метаболизма витаминов представляет собой пантотенатную киназу 1, 2 и/или 3 и/или тиаминпирофосфаткиназу, такую как ТРК1 (тиаминпирофосфаткиназа 1).
18. Рекомбинантная эукариотическая клетка по любому из пп. 13-17, содержащая указанную систему экспрессии, причем указанный белок метаболизма витаминов является селектируемым маркером для указанной рекомбинантной эукариотической клетки, и указанная рекомбинантная эукариотическая клетка продуцирует и, предпочтительно, секретирует указанный целевой продукт.
19. Среда для культивирования эукариотических клеток, содержащая указанные рекомбинантные эукариотические клетки по любому из пп. 13-18, экспрессирующие (i) белок транспорта витаминов в качестве селектируемого маркера и (ii) указанный целевой белок.
20. Среда для культивирования клеток по п. 19, отличающаяся тем, что указанная среда представляет собой среду с лимитирующей концентрацией В5 или среду с насыщающей концентрацией В5, но с лимитирующей концентрацией или нелимитирующей концентрацией Н; или среду с насыщаяющей концентрацией Н, но с лимитирующей или нелимитирующей концентрацией В5, предпочтительно среду с лимитирующей концентрацией В5 или среду с насыщающей концентрацией В5, но лимитирующей концентрацией Н.
21. Способ культивирования и, необязательно, отбора рекомбинантных эукариотических клеток, включающий:
обеспечение системы экспрессии по любому из пп. 1-9,
обеспечение эукариотических клеток, причем жизнеспособность, рост и/или деление указанных эукариотических клеток зависит от поглощения витаминов,
введение указанной системы экспрессии в указанные эукариотические клетки для получения указанных рекомбинантных эукариотических клеток, экспрессирующих указанный белок метаболизма витаминов и указанный целевой белок,
культивирование указанных эукариотических клеток в среде для культивирования клеток и
необязательно отбор посредством указанного белка метаболизма витаминов, который предпочтительным образом экспрессируется на поверхности указанных рекомбинантных эукариотических клеток, причем указанные рекомбинантные эукариотические клетки стабильно экспрессируют указанный целевой продукт.
22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что указанная среда представляет собой среду с лимитирующей концентрацией В5 или среду с насыщающей концентрацией В5, но с лимитирующей концентрацией Н.
23. Применение белка метаболизма витаминов в качестве селективного маркера для отбора рекомбинантной эукариотической клетки, стабильно экспрессирующей целевой продукт, при этом жизнеспособность, рост и/или деление указанной клетки зависит от поглощения витаминов.
24. Среда для культивирования, содержащая по меньшей мере один витамин
в концентрации менее, чем 10 нМ и/или
в концентрации 20 мкМ или более, при этом указанный по меньшей мере один витамин представляет собой незаменимый витамин.
25. Среда для культивирования по п. 24, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один витамин представляет собой витамин B1, В5 и/или Н.
26) Среда для культивирования по п. 24 или 25, отличающаяся тем, что указанная среда для культивирования содержит по меньшей мере одну рекомбинантную эукариотическую клетку, экспрессирующую, предпочтительно секретирующую целевой белок.
27. Среда для культивирования по п. 26, отличающаяся тем, что указанный целевой белок представляет собой терапевтический белок.
28) Среда для культивирования по п. 26 или 27 или способ обеспечения указанной среды для культивирования, отличающиеся тем, что рост и/или деление указанных клеток останавливают, и образование указанного целевого белка происходит на максимальном уровне остановки (MAL в [г/Л]), который превышает максимальный уровень (ML в [г/л]) белка, экспрессируемого указанными клетками, при выращивании на среде, предпочтительно на стандартной среде, в которой рост не останавливают, при этом значение MAL более, чем в 1,5 больше значения ML, более, чем в 2 раза больше значения ML или даже более, чем в 2,5 или 3 раза больше значения ML.
29. Способ получения целевого белка, включающий
(a) трансформацию эукариотических клеток системой экспрессии по любому из пп. 1-9 для получения рекомбинантных эукариотических клеток;
(b) культивирование указанных рекомбинантных эукариотических клеток в среде для культивирования, в которой жизнеспособность, рост и/или деление указанных рекомбинантных эукариотических клеток зависят от активности по меньшей мере одного белка метаболизма витаминов;
(c) отбор рекомбинантных эукариотических клеток, экспрессирующих указанный по меньшей мере один белок метаболизма витаминов, при этом указанный белок метаболизма витаминов является селектируемым маркером для получения отобранных рекомбинантных эукариотических клеток и
(d) очистку указанного целевого белка, полученного из указанных отобранных рекомбинантных эукариотических клеток или из их среды для культивирования, содержащей указанные отобранные рекомбинантные эукариотические клетки.
30. Способ по п. 29, отличающийся тем, что указанный белок метаболизма витаминов представляет собой белок транспорта витаминов, предпочтительно переносящий витамины В5, В1 и/или Н, и указанная среда для культивирования содержит лимитирующую концентрацию и/или насыщающую концентрацию по меньшей мере одного из указанных витаминов.
31. Способ по п. 30, отличающийся тем, что указанный белок транспорта витаминов представляет собой SMVT, и указанная среда для культивирования представляет собой среду с лимитирующей концентрацией В5 или среду с насыщающей концентрацией В5, но среду с лимитирующей концентрацией Н.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562142516P | 2015-04-03 | 2015-04-03 | |
| US62/142,516 | 2015-04-03 | ||
| PCT/EP2016/057228 WO2016156574A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-04-01 | Use of vitamins and vitamin metabolic genes and proteins for recombinant protein production in mammalian cells |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017128122A true RU2017128122A (ru) | 2019-05-06 |
| RU2017128122A3 RU2017128122A3 (ru) | 2020-03-19 |
| RU2736705C2 RU2736705C2 (ru) | 2020-11-19 |
Family
ID=55862725
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017128122A RU2736705C2 (ru) | 2015-04-03 | 2016-04-01 | Применение витаминов и генов и белков метаболизма витаминов для получения рекомбинантного белка в клетках млекопитающих |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20180066268A1 (ru) |
| EP (1) | EP3277818B1 (ru) |
| JP (1) | JP6767991B2 (ru) |
| KR (1) | KR102622657B1 (ru) |
| CN (1) | CN107624133A (ru) |
| AU (1) | AU2016240211B2 (ru) |
| DK (1) | DK3277818T3 (ru) |
| ES (1) | ES2773529T3 (ru) |
| HK (1) | HK1244029A1 (ru) |
| HU (1) | HUE047656T2 (ru) |
| IL (1) | IL254799B (ru) |
| LT (1) | LT3277818T (ru) |
| PL (1) | PL3277818T3 (ru) |
| PT (1) | PT3277818T (ru) |
| RU (1) | RU2736705C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201706617SA (ru) |
| SI (1) | SI3277818T1 (ru) |
| WO (1) | WO2016156574A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA3068685A1 (en) * | 2017-06-27 | 2019-01-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Riboflavin derivative-containing medium |
| CN113348248B (zh) | 2018-10-24 | 2024-12-31 | 思兰克斯有限公司 | 表达系统、重组细胞及其用途 |
| WO2020122049A1 (ja) * | 2018-12-11 | 2020-06-18 | 富士フイルム株式会社 | 動物細胞、動物細胞の製造方法および目的タンパク質の製造方法 |
| EP4046657A4 (en) * | 2019-08-02 | 2023-05-31 | Shanghai Raising Pharmaceutical Co., Ltd. | USE OF TPK AS A TARGET IN ALZHEIMER'S DISEASE |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2310686C2 (ru) * | 1999-06-25 | 2007-11-20 | Басф Акциенгезелльшафт | Гены corynebacterium glutamicum, кодирующие белки, участвующие в метаболизме углерода и продуцировании энергии |
| US20030091640A1 (en) * | 2001-02-08 | 2003-05-15 | Srinivasan Ramanathan | Enhanced oral and transcompartmental delivery of therapeutic or diagnostic agents |
| US20100330572A1 (en) * | 2007-12-21 | 2010-12-30 | Assaraf Yehuda G | Organic compounds |
| EP2401377B1 (en) * | 2009-02-27 | 2016-05-18 | Novartis AG | Expression vector system comprising two selection markers |
| PT2401383E (pt) * | 2009-02-27 | 2013-12-16 | Novartis Ag | Métodos para seleccionar células eucarióticas que expressam uma proteína heteróloga |
-
2016
- 2016-04-01 AU AU2016240211A patent/AU2016240211B2/en active Active
- 2016-04-01 SI SI201630642T patent/SI3277818T1/sl unknown
- 2016-04-01 HK HK18103521.2A patent/HK1244029A1/zh unknown
- 2016-04-01 LT LTEP16719778.9T patent/LT3277818T/lt unknown
- 2016-04-01 HU HUE16719778A patent/HUE047656T2/hu unknown
- 2016-04-01 CN CN201680012454.8A patent/CN107624133A/zh active Pending
- 2016-04-01 US US15/561,524 patent/US20180066268A1/en active Pending
- 2016-04-01 KR KR1020177024087A patent/KR102622657B1/ko active Active
- 2016-04-01 WO PCT/EP2016/057228 patent/WO2016156574A1/en not_active Ceased
- 2016-04-01 SG SG11201706617SA patent/SG11201706617SA/en unknown
- 2016-04-01 PL PL16719778T patent/PL3277818T3/pl unknown
- 2016-04-01 RU RU2017128122A patent/RU2736705C2/ru active
- 2016-04-01 PT PT167197789T patent/PT3277818T/pt unknown
- 2016-04-01 JP JP2017548045A patent/JP6767991B2/ja active Active
- 2016-04-01 DK DK16719778.9T patent/DK3277818T3/da active
- 2016-04-01 EP EP16719778.9A patent/EP3277818B1/en active Active
- 2016-04-01 ES ES16719778T patent/ES2773529T3/es active Active
-
2017
- 2017-09-28 IL IL254799A patent/IL254799B/en active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| LT3277818T (lt) | 2020-02-25 |
| EP3277818A1 (en) | 2018-02-07 |
| JP6767991B2 (ja) | 2020-10-14 |
| RU2017128122A3 (ru) | 2020-03-19 |
| JP2018509904A (ja) | 2018-04-12 |
| PL3277818T3 (pl) | 2020-06-15 |
| RU2736705C2 (ru) | 2020-11-19 |
| KR102622657B1 (ko) | 2024-01-10 |
| PT3277818T (pt) | 2020-03-03 |
| ES2773529T3 (es) | 2020-07-13 |
| HK1244029A1 (zh) | 2018-07-27 |
| HUE047656T2 (hu) | 2020-05-28 |
| IL254799B (en) | 2021-04-29 |
| WO2016156574A1 (en) | 2016-10-06 |
| EP3277818B1 (en) | 2020-01-08 |
| IL254799A0 (en) | 2017-12-31 |
| CA2976723A1 (en) | 2016-10-06 |
| AU2016240211B2 (en) | 2022-03-31 |
| CN107624133A (zh) | 2018-01-23 |
| DK3277818T3 (da) | 2020-02-24 |
| US20180066268A1 (en) | 2018-03-08 |
| SI3277818T1 (sl) | 2020-04-30 |
| KR20170133327A (ko) | 2017-12-05 |
| AU2016240211A1 (en) | 2017-08-10 |
| SG11201706617SA (en) | 2017-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Krichnavaruk et al. | Optimal growth conditions and the cultivation of Chaetoceros calcitrans in airlift photobioreactor | |
| RU2017128122A (ru) | Применение витаминов и генов и белков метаболизма витаминов для получения рекомбинантного белка в клетках млекопитающих | |
| Krichnavaruk et al. | Enhanced productivity of Chaetoceros calcitrans in airlift photobioreactors | |
| Sevilla et al. | Pilot‐plant‐scale outdoor mixotrophic cultures of Phaeodactylum tricornutum using glycerol in vertical bubble column and airlift photobioreactors: studies in fed‐batch mode | |
| Lakatos et al. | Terrestrial microalgae: novel concepts for biotechnology and applications | |
| CN103898056A (zh) | 细胞培养基及其在培养人原代肿瘤细胞中的应用 | |
| Fan et al. | Zebrafish embryonic stem cells | |
| KR102813779B1 (ko) | 헤마토코쿠스 플루비알리스 돌연변이 균주, 아스타잔틴 추출물의 제조 방법 및 이를 위한 일체형 생산 시스템 | |
| CN202799865U (zh) | 一种高效番鸭产蛋笼及产蛋设备 | |
| CN105494235A (zh) | 一种多功能养蛙池及养殖方法 | |
| Takebe et al. | A novel mouse model for tracking the fate of CXCR5-expressing T cells | |
| CN105123574A (zh) | 附着基生态的鲫鱼池塘养殖方法 | |
| CN104938391A (zh) | 鲤鱼的养殖方法 | |
| Sánchez et al. | Genetic analysis of wild drone congregations of the stingless bee Scaptotrigona mexicana (Hymenoptera: Apidae) reveals a high number of colonies in a natural protected area in Southern Mexico | |
| CN102823433A (zh) | 一种工厂化真姬菇优质高效栽培技术 | |
| Bome et al. | Optimization of the structurally functional changes in the cultured phytocoenoses in the areas with extreme edaphic-climatic conditions | |
| Bil'diug et al. | Contractile apparatus organization of cardiomyocytes upon their cultivation in collagen gels | |
| Khandy et al. | The instrumental cultivation of Phlojodicarpus sibiricus cell culture | |
| Mueller et al. | GMP-compliant, automated process for generation of CAR NK cells in a closed system for clinical use | |
| CN105349592A (zh) | 代谢互补的植物细胞系混种培养生产次级代谢产物的方法 | |
| CN103290045B (zh) | 利用锌指核酸酶敲除绵羊肌肉抑制素基因的方法 | |
| Gorji et al. | Genetic conservation of Iranian Sistani cattle by establishment and characteristics of fibroblast cell bank | |
| Bilgen et al. | Importance of effective clone number in seed orchards: a comparative study on seven conifer species in Turkey | |
| Papaskiri et al. | Possibilities of land management support for protecting the natural environment during economic use of northern territories | |
| Guillemin et al. | CONTRASTING CYTOPLASMIC AND NUCLEAR PATTERNS OF GENTIC DIVERSITY TO STUDY THE RED ALGAE SPECIES COMPLEX MAZZAELLA LAMINARIOIDES |