[go: up one dir, main page]

RU2017124909A - Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания - Google Patents

Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания Download PDF

Info

Publication number
RU2017124909A
RU2017124909A RU2017124909A RU2017124909A RU2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A RU 2017124909 A RU2017124909 A RU 2017124909A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
polynucleotide insert
ltvec
cell
paragraphs
homologous
Prior art date
Application number
RU2017124909A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017124909A3 (ru
RU2707137C2 (ru
Inventor
Вера ВОРОНИНА
Линн МАКДОНАЛЬД
Брайан ЗАМБРОВИЦ
Эндрю Дж. МЕРФИ
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2017124909A publication Critical patent/RU2017124909A/ru
Publication of RU2017124909A3 publication Critical patent/RU2017124909A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2707137C2 publication Critical patent/RU2707137C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0276—Knock-out vertebrates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Claims (77)

1. Способ модификации целевого геномного локуса в клетке, включающий в себя:
(a) введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в пределах целевого геномного локуса;
(b) введение в клетку первого большого нацеливающего вектора (LTVEC), который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, и второго LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом,
причем первое 3' гомологичное плечо первого LTVEC имеет первую перекрывающуюся последовательность, гомологичную второму 5' гомологичному плечу второго LTVEC, и первое 5' гомологичное плечо первого LTVEC и второе 3' гомологичное плечо второго LTVEC гомологичны соответствующим геномным сегментам в пределах целевого геномного локуса,
при этом целевой геномный локус модифицирован путем интеграции первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки между соответствующими геномными сегментами; и
(c) отбор клетки с проведенным нацеливанием, содержащей первую полинуклеотидную вставку и вторую полинуклеотидную вставку, интегрированные в целевой геномный локус.
2. Способ по п. 1, в котором первая полинуклеотидная вставка и первое 3' гомологичное плечо и вторая полинуклеотидная вставка и второе 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, которая подвергается реформированию путем интеграции первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус.
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая полинуклеотидная вставка, вторая полинуклеотидная вставка или обе получены от вида, который отличается от вида, к которому относится клетка.
4. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая полинуклеотидная вставка, вторая полинуклеотидная вставка или обе представляют собой человеческие нуклеиновые кислоты.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 75 т.п.н., от приблизительно 75 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до 125 т.п.н., от приблизительно 125 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 175 т.п.н., от приблизительно 175 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 225 т.п.н., от приблизительно 225 т.п.н. до приблизительно 250 т.п.н., от приблизительно 250 т.п.н. до приблизительно 275 т.п.н., от приблизительно 275 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 350 т.п.н., от приблизительно 350 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 450 т.п.н. или от приблизительно 450 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
6. Способ по п. 5, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
7. Способ по п. 6, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки и второй полинуклеотидной вставки составляет приблизительно 300 т.п.н.
8. Способ по любому из пп. 1-4, в котором клетка с проведенным нацеливанием содержит геномную ДНК, содержащую вместе первую полинуклеотидную вставку и вторую полинуклеотидную вставку, которые имеют суммарный размер в диапазоне от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором первая перекрывающаяся последовательность первого LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична первой перекрывающейся последовательности второго LTVEC.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
11. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н.
12. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором интеграция первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки или обеих в целевой геномный локус приводит к одному или более из:
(a) добавления экзогенной последовательности в целевом геномном локусе;
(b) делеции эндогенной последовательности в целевом геномном локусе;
и
(c) нокина, нокаута, точечной мутации, перестановки доменов, перестановки экзонов, перестановки интронов, перестановки регуляторных последовательностей, перестановки генов или их комбинации.
13. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором комбинированное использование первого LTVEC и второго LTVEC приводит к повышению эффективности нацеливания по сравнению с использованием одиночного LTVEC.
14. Способ по п. 13, в котором повышение эффективности нацеливания составляет по меньшей мере 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз.
15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC или второго LTVEC составляет от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 120 т.п.н. или от приблизительно 120 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н.
16. Способ модификации целевого геномного локуса в клетке, включающий в себя:
(a) введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в пределах целевого геномного локуса;
(b) введение в клетку первого большого нацеливающего вектора (LTVEC), который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, второго LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом, и третьего LTVEC, который имеет длину по меньшей мере 10 т.п.н. и содержит третью полинуклеотидную вставку, фланкированную третьим 5' гомологичным плечом и третьим 3' гомологичным плечом,
причем первое 3' гомологичное плечо первого LTVEC имеет первую перекрывающуюся последовательность, гомологичную второму 5' гомологичному плечу второго LTVEC, второе 3' гомологичное плечо второго LTVEC имеет вторую перекрывающуюся последовательность, гомологичную третьему 5' гомологичному плечу третьего LTVEC, и первое 5' гомологичное плечо первого LTVEC и третье 3' гомологичное плечо третьего LTVEC гомологичны соответствующим геномным сегментам в пределах целевого геномного локуса,
при этом целевой геномный локус модифицирован путем интеграции первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки между соответствующими геномными сегментами; и
(с) отбор клетки с проведенным нацеливанием, содержащей первую полинуклеотидную вставку, вторую полинуклеотидную вставку и третью полинуклеотидную вставку, интегрированные в целевой геномный локус.
17. Способ по п. 16, в котором первая полинуклеотидная вставка и первое 3' гомологичное плечо и вторая полинуклеотидная вставка и второе 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, а вторая полинуклеотидная вставка и второе 3' гомологичное плечо и третья полинуклеотидная вставка и третье 5' гомологичное плечо представляют собой перекрывающиеся фрагменты непрерывной нуклеиновой кислоты, которая подвергается реформированию путем интеграции первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус.
18. Способ по п. 16 или 17, в котором одна или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки получены от вида, который отличается от вида, к которому относится клетка.
19. Способ по любому из пп. 16-18, в котором одна или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки представляют собой человеческие нуклеиновые кислоты.
20. Способ по любому из пп. 16-19, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 50 т.п.н. до приблизительно 75 т.п.н., от приблизительно 75 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 125 т.п.н., от приблизительно 125 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 175 т.п.н., от приблизительно 175 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 225 т.п.н., от приблизительно 225 т.п.н. до приблизительно 250 т.п.н., от приблизительно 250 т.п.н. до приблизительно 275 т.п.н., от приблизительно 275 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 350 т.п.н., от приблизительно 350 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 450 т.п.н., от приблизительно 450 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 550 т.п.н., от приблизительно 550 т.п.н. до приблизительно 600 т.п.н., от приблизительно 600 т.п.н. до приблизительно 650 т.п.н. или от приблизительно 650 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
21. Способ по п. 20, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
22. Способ по п. 21, в котором суммарный размер первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки и третьей полинуклеотидной вставки составляет приблизительно 400 т.п.н.
23. Способ по любому из пп. 16-19, в котором клетка с проведенным нацеливанием содержит геномную ДНК, содержащую вместе первую полинуклеотидную вставку, вторую полинуклеотидную вставку и третью полинуклеотидную вставку, которые имеют суммарный размер в диапазоне от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н.
24. Способ по любому из пп. 16-23, в котором первая перекрывающаяся последовательность первого LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична первой перекрывающейся последовательности второго LTVEC и/или вторая перекрывающаяся последовательность второго LTVEC по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична второй перекрывающейся последовательности третьего LTVEC.
25. Способ по любому из пп. 16-24, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н. и/или размер второй перекрывающейся последовательности составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
26. Способ по любому из пп. 16-25, в котором размер первой перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н. и/или размер второй перекрывающейся последовательности составляет по меньшей мере 10 т.п.н. или по меньшей мере 20 т.п.н.
27. Способ по любому из пп. 16-26, в котором интеграция одной или более из первой полинуклеотидной вставки, второй полинуклеотидной вставки или третьей полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус приводит к одному или более из:
(a) добавления экзогенной последовательности в целевом геномном локусе;
(b) делеции эндогенной последовательности в целевом геномном локусе;
или
(c) нокина, нокаута, точечной мутации, перестановки доменов, перестановки экзонов, перестановки интронов, перестановки регуляторных последовательностей, перестановки генов или их комбинации.
28. Способ по любому из пп. 16-27, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC, второго LTVEC или третьего LTVEC составляет от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 120 т.п.н. или от приблизительно 120 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н.
29. Способ по п. 12 или 27, в котором делеция эндогенной последовательности в целевом геномном локусе составляет от приблизительно 5 т.п.н. до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 т.п.н. до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 т.п.н. до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 т.п.н. до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 т.п.н. до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 т.п.н. до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 т.п.н. до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 т.п.н. до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 600 т.п.н., от приблизительно 600 т.п.н. до приблизительно 700 т.п.н. или от приблизительно 700 т.п.н. до приблизительно 800 т.п.н.
30. Способ усиления гомологичной рекомбинации в целевом геномном локусе в клетке, включающий в себя введение в клетку первого нацеливающего вектора и второго нацеливающего вектора, причем первый нацеливающий вектор содержит первую полинуклеотидную вставку, фланкированную первым 5' гомологичным плечом и первым 3' гомологичным плечом, а второй нацеливающий вектор содержит вторую полинуклеотидную вставку, фланкированную вторым 5' гомологичным плечом и вторым 3' гомологичным плечом,
при этом первое 3' гомологичное плечо и второе 5' гомологичное плечо содержат перекрывающуюся нуклеотидную последовательность; и
при этом первое 5' гомологичное плечо и второе 3' гомологичное плечо гомологичны соответствующим сегментам в целевом геномном локусе.
31. Способ по п. 30, в котором гомологичная рекомбинация усиливается в целевом геномном локусе без использования нуклеазного агента.
32. Способ по п. 30, дополнительно включающий в себя введение в клетку нуклеазного агента, который осуществляет одно- или двухцепочечный разрыв в целевом геномном локусе или вблизи него.
33. Способ по любому из пп. 1-29 и 32, в котором нуклеазный агент представляет собой нуклеазу с «цинковыми пальцами» (ZFN), эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), или мегануклеазу.
34. Способ по любому из пп. 1-29 и 32, в котором нуклеазный агент содержит белок (Cas), ассоциированный с короткими палиндромными повторами, регулярно расположенными группами (CRISPR), и гидовую РНК (гРНК).
35. Способ по п. 34, в котором белок Cas представляет собой Cas9.
36. Способ по любому из пп. 30-35, усиливающий гомологичную рекомбинацию первого нацеливающего вектора, второго нацеливающего вектора или обоих в целевом геномном локусе.
37. Способ по п. 36, в котором усиление гомологичной рекомбинации составляет по меньшей мере 1,5 раза, 2 раза, 2,5 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз, 16 раз, 17 раз, 18 раз, 19 раз или 20 раз.
38. Способ по любому из пп. 30-37, в котором перекрывающаяся последовательность первого нацеливающего вектора по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% идентична перекрывающейся последовательности второго нацеливающего вектора.
39. Способ по любому из пп. 30-38, в котором перекрывающаяся последовательность составляет от приблизительно 1 т.п.н. до приблизительно 70 т.п.н.
40. Способ по любому из пп. 30-39, в котором перекрывающаяся последовательность составляет по меньшей мере 20 т.п.н.
41. Способ по любому из пп. 30-40, в котором первый нацеливающий вектор представляет собой первый большой нацеливающий вектор (LTVEC) в диапазоне от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
42. Способ по любому из пп. 30-41, в котором второй нацеливающий вектор представляет собой второй большой нацеливающий вектор (LTVEC) в диапазоне от приблизительно 20 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
43. Способ по п. 41 или 42, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч первого LTVEC составляет от 10 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
44. Способ по п. 42 или 43, в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч второго LTVEC составляет от 10 т.п.н. до приблизительно 200 т.п.н.
45. Способ по любому из пп. 30-44, в котором перекрывающаяся нуклеотидная последовательность облегчает рекрутирование механизмов рекомбинации в целевой геномный локус.
46. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором клетка представляет собой человеческую клетку.
47. Способ по любому из пп. 1-45, в котором клетка представляет собой нечеловеческую клетку.
48. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором клетка представляет собой плюрипотентную клетку, гемопоэтическую стволовую клетку, нейрональную стволовую клетку или фибробластную клетку.
49. Способ по п. 48, в котором плюрипотентная клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ЭС) клетку или индуцированную плюрипотентную стволовую (ИПС) клетку.
50. Способ по любому из пп. 47-49, в котором клетка представляет собой клетку млекопитающих.
51. Способ по п. 50, в котором клетка млекопитающих представляет собой клетку грызуна.
52. Способ по п. 51, в котором грызун представляет собой мышь или крысу.
53. Способ получения не относящихся к человеку животных поколения F0, включающий в себя:
(a) введение нечеловеческой ЭС-клетки в нечеловеческий эмбрион-хозяин, причем нечеловеческая ЭС-клетка получена способом по любому из пп. 1-45 и 47-52; и
(b) вынашивание нечеловеческого эмбриона-хозяина в теле суррогатной матери,
при этом суррогатная мать производит поколение F0 не относящегося к человеку животного, содержащего модификацию.
54. Способ по п. 53, в котором не относящееся к человеку животное представляет собой мышь или крысу.
RU2017124909A 2014-12-19 2015-12-18 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания RU2707137C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462094104P 2014-12-19 2014-12-19
US62/094,104 2014-12-19
US201562167408P 2015-05-28 2015-05-28
US62/167,408 2015-05-28
US201562205524P 2015-08-14 2015-08-14
US62/205,524 2015-08-14
PCT/US2015/066681 WO2016100819A1 (en) 2014-12-19 2015-12-18 Methods and compositions for targeted genetic modification through single-step multiple targeting

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017124909A true RU2017124909A (ru) 2019-01-21
RU2017124909A3 RU2017124909A3 (ru) 2019-06-05
RU2707137C2 RU2707137C2 (ru) 2019-11-22

Family

ID=55229831

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017124909A RU2707137C2 (ru) 2014-12-19 2015-12-18 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания

Country Status (15)

Country Link
US (1) US11326184B2 (ru)
EP (2) EP3232774B1 (ru)
JP (2) JP6840077B2 (ru)
KR (1) KR102530821B1 (ru)
CN (1) CN107208113A (ru)
AU (1) AU2015364427B2 (ru)
BR (1) BR112017013104A2 (ru)
CA (1) CA2971213C (ru)
ES (2) ES2760508T3 (ru)
IL (1) IL252755B (ru)
MX (1) MX388784B (ru)
NZ (1) NZ732895A (ru)
RU (1) RU2707137C2 (ru)
SG (1) SG11201704646YA (ru)
WO (1) WO2016100819A1 (ru)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013251558B2 (en) 2012-04-25 2019-01-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
SI2986729T1 (sl) 2013-04-16 2019-02-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ciljana sprememba genoma podgane
CN110951779B (zh) 2013-12-11 2024-04-16 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
DK3152312T3 (da) 2014-06-06 2020-04-06 Regeneron Pharma Fremgangsmåder og sammensætninger til modifikation af et mållocus
JP6752158B2 (ja) 2014-06-26 2020-09-09 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 標的化された遺伝子修飾のための方法及び組成物、並びに使用方法
AU2015330699B2 (en) 2014-10-10 2021-12-02 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for promoting homology directed repair
ES2741387T3 (es) 2014-10-15 2020-02-10 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para generar o mantener células pluripotentes
CA2963820A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Editas Medicine, Inc. Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing
ES3013183T3 (en) 2014-11-21 2025-04-11 Regeneron Pharma Methods for targeted genetic modification using paired guide rnas
CN107208113A (zh) * 2014-12-19 2017-09-26 瑞泽恩制药公司 用于通过单步多重靶向进行靶向遗传修饰的方法和组合物
ES3009538T3 (en) 2015-05-29 2025-03-27 Regeneron Pharma Rodent cells having a disruption in a c9orf72 locus
WO2017053879A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Editas Medicine, Inc. Use of exonucleases to improve crispr/cas-mediated genome editing
AU2017206785C1 (en) 2016-01-13 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents having an engineered heavy chain diversity region
EP3433363A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Editas Medicine, Inc. Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use
WO2017180694A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Editas Medicine, Inc. Cas9 fusion molecules gene editing systems, and methods of use thereof
WO2018064600A1 (en) 2016-09-30 2018-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a hexanucleotide repeat expansion in a c9orf72 locus
SI3766343T1 (sl) 2016-11-04 2022-06-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nehumane živali z modificiranim lokusom lahke verige lambda imunoglobulina
AU2018208463A1 (en) * 2017-01-10 2019-08-01 Christina Care Gene Editing Institute, Inc. Methods for in vitro site-directed mutagenesis using gene editing technologies
WO2019014564A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Editas Medicine, Inc. SYSTEMS AND METHODS OF TARGETED INTEGRATION AND GENOME EDITING AND DETECTION THEREOF WITH INTEGRATED PRIMING SITES
EP3585160A2 (en) * 2017-07-31 2020-01-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr reporter non-human animals and uses thereof
ES2928995T3 (es) 2017-12-05 2022-11-24 Regeneron Pharma Ratones que tienen una cadena ligera lambda de inmunoglobulina genomanipulada y usos de los mismos
IL318469A (en) 2018-06-14 2025-03-01 Regeneron Pharma Non-human animals capable of reorganizing transgenic DH-DH, and their uses
CN111321171A (zh) * 2018-12-14 2020-06-23 江苏集萃药康生物科技有限公司 一种应用CRISPR/Cas9介导ES打靶技术制备基因打靶动物模型的方法
JP7449291B2 (ja) 2018-12-20 2024-03-13 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヌクレアーゼ媒介リピート伸長
CN113795588B (zh) * 2019-04-04 2025-02-25 瑞泽恩制药公司 用于在靶向性载体中无瘢痕引入靶向修饰的方法
CA3136478A1 (en) 2019-06-05 2020-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
MX2023007401A (es) 2020-12-23 2023-07-06 Regeneron Pharma Acidos nucleicos que codifican anticuerpos modificados por anclaje y usos de los mismos.
JP2024533683A (ja) * 2021-09-24 2024-09-12 イムノカン バイオテック カンパニー リミテッド 大型染色体の導入方法と改変染色体およびそれを用いた生物
CN120344670A (zh) * 2022-10-27 2025-07-18 海沃夫治疗技术公司 核靶向的dna递送和用于实践其的组合物

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5612205A (en) 1990-08-29 1997-03-18 Genpharm International, Incorporated Homologous recombination in mammalian cells
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
AU8587598A (en) 1997-07-26 1999-02-16 Wisconsin Alumni Research Foundation Trans-species nuclear transfer
US6372956B1 (en) 1998-12-31 2002-04-16 The J. David Gladstone Institutes Transgenic rats and rat cell lines expressing human CD4 and a human chemokine receptor
US6599692B1 (en) 1999-09-14 2003-07-29 Sangamo Bioscience, Inc. Functional genomics using zinc finger proteins
US20030104526A1 (en) 1999-03-24 2003-06-05 Qiang Liu Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers
DE60023936T2 (de) 1999-12-06 2006-05-24 Sangamo Biosciences Inc., Richmond Methoden zur verwendung von randomisierten zinkfingerprotein-bibliotheken zur identifizierung von genfunktionen
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7105348B2 (en) * 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
EP1341914A2 (en) 2000-12-07 2003-09-10 Sangamo Biosciences Inc. Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins
WO2002057308A2 (en) 2001-01-22 2002-07-25 Sangamo Biosciences, Inc. Zinc finger polypeptides and their use
CA2435394C (en) 2001-01-22 2018-01-09 Sangamo Biosciences, Inc. Modified zinc finger binding proteins
AUPR451401A0 (en) 2001-04-20 2001-05-24 Monash University A method of nuclear transfer
BRPI0307383B1 (pt) 2002-01-23 2019-12-31 The Univ Of Utah Research Foundation método de recombinação genética direcionada em célula de planta hospedeira
WO2003078619A1 (en) 2002-03-15 2003-09-25 Cellectis Hybrid and single chain meganucleases and use thereof
EP1504092B2 (en) 2002-03-21 2014-06-25 Sangamo BioSciences, Inc. Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination
US7612250B2 (en) 2002-07-29 2009-11-03 Trustees Of Tufts College Nuclear transfer embryo formation method
CA2497913C (en) 2002-09-05 2014-06-03 California Institute Of Technology Use of chimeric nucleases to stimulate gene targeting
WO2004031346A2 (en) 2002-09-06 2004-04-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions concerning designed highly-specific nucleic acid binding proteins
US20030175968A1 (en) 2002-10-30 2003-09-18 Golic Kent G. Gene targeting method
WO2004063356A2 (en) 2003-01-13 2004-07-29 Rao Mahendra S Persistent expression of candidate molecule in proliferating stem and progenitor cells for delivery of therapeutic products
US8409861B2 (en) 2003-08-08 2013-04-02 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted deletion of cellular DNA sequences
US7888121B2 (en) 2003-08-08 2011-02-15 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted cleavage and recombination
EP1591521A1 (en) 2004-04-30 2005-11-02 Cellectis I-Dmo I derivatives with enhanced activity at 37 degrees C and use thereof
CA2579677A1 (en) 2004-09-16 2006-03-30 Sangamo Biosciences, Inc. Compositions and methods for protein production
PT1802193E (pt) 2004-10-19 2014-06-23 Regeneron Pharma Método para gerar um murganho homozigótico para uma modificação genética
FR2879622B1 (fr) 2004-12-17 2008-02-01 Agronomique Inst Nat Rech Procede in vitro de production d'ovocytes ou d'oeufs presentant une modification genomique ciblee
WO2006097854A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Cellectis Heterodimeric meganucleases and use thereof
WO2006097784A1 (en) 2005-03-15 2006-09-21 Cellectis I-crei meganuclease variants with modified specificity, method of preparation and uses thereof
GB0615327D0 (en) 2006-03-30 2006-09-13 Univ Edinburgh Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof
US7910798B2 (en) 2006-03-31 2011-03-22 Medarex, Inc. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
CN101117633B (zh) 2006-08-03 2011-07-20 上海交通大学附属儿童医院 一种细胞核移植方法
ES2586210T3 (es) 2006-12-14 2016-10-13 Sangamo Biosciences, Inc. Proteínas de dedo de zinc no canónicas optimizadas
US7771967B2 (en) 2006-12-22 2010-08-10 The J. David Gladstone Institutes Nucleic acid encoding apolipoprotein E-I3
US8110379B2 (en) 2007-04-26 2012-02-07 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted integration into the PPP1R12C locus
SG10201509853UA (en) 2007-06-01 2015-12-30 Omt Inc Compositions and methods for inhibiting endogenous immunoglobulin genes and producing transgenic human idiotype antibodies
GB0803109D0 (en) * 2008-02-20 2008-03-26 Gene Bridges Gmbh Method of nucleic acid recombination
JP5681114B2 (ja) 2008-12-04 2015-03-04 サンガモ バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド 亜鉛フィンガーヌクレアーゼを使用したラットのゲノム編集
US20110239315A1 (en) 2009-01-12 2011-09-29 Ulla Bonas Modular dna-binding domains and methods of use
EP2206723A1 (en) 2009-01-12 2010-07-14 Bonas, Ulla Modular DNA-binding domains
WO2010107493A2 (en) 2009-03-20 2010-09-23 Sangamo Biosciences, Inc. Modification of cxcr4 using engineered zinc finger proteins
US8772008B2 (en) 2009-05-18 2014-07-08 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for increasing nuclease activity
WO2011017293A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 The General Hospital Corporation Engineering of zinc finger arrays by context-dependent assembly
US20120276537A1 (en) 2009-10-28 2012-11-01 Kuehn Ralf Homologous recombination in the oocyte
PT3147362T (pt) 2009-10-29 2019-04-02 Regeneron Pharma Alelos multifuncionais
US20120315670A1 (en) 2009-11-02 2012-12-13 Gen9, Inc. Compositions and Methods for the Regulation of Multiple Genes of Interest in a Cell
JP5807862B2 (ja) 2009-12-01 2015-11-10 国立研究開発法人国立がん研究センター ラット胚性幹細胞を用いたキメララットの作製法
DK2816112T3 (en) 2009-12-10 2018-11-19 Univ Minnesota TAL effector-mediated DNA modification
US20130023051A1 (en) 2009-12-21 2013-01-24 Keygene N.V. Techniques for transfecting protoplasts
EP2660318A1 (en) 2010-02-09 2013-11-06 Sangamo BioSciences, Inc. Targeted genomic modification with partially single-stranded donor molecules
GB201009732D0 (en) * 2010-06-10 2010-07-21 Gene Bridges Gmbh Direct cloning
US9149026B2 (en) 2010-06-11 2015-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Production of fertile XY animals from XY ES cells
WO2012012667A2 (en) 2010-07-21 2012-01-26 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for modification of a hla locus
KR101971741B1 (ko) 2010-07-23 2019-08-14 시그마-알드리치 컴퍼니., 엘엘씨 표적화 엔도뉴클레아제 및 단일-가닥 핵산을 사용하는 게놈 편집
WO2012018726A1 (en) 2010-08-02 2012-02-09 Cellectis Sa Method for increasing double-strand break-induced gene targeting
WO2012129198A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Genetically modified rat models for obesity and diabetes
US9113616B2 (en) 2011-10-28 2015-08-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetically modified mice having humanized TCR variable genes
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
AU2013251558B2 (en) 2012-04-25 2019-01-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
JP6559063B2 (ja) 2012-05-07 2019-08-14 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド 導入遺伝子のヌクレアーゼ媒介標的化組み込みのための方法および組成物
RS59199B1 (sr) 2012-05-25 2019-10-31 Univ California Metode i jedinjenja za rnk-upravljanu ciljanu dnk modifikaciju i za rnk- upravljanu modulaciju transkripta
CN110066775B (zh) 2012-10-23 2024-03-19 基因工具股份有限公司 用于切割靶dna的组合物及其用途
ES2757325T3 (es) 2012-12-06 2020-04-28 Sigma Aldrich Co Llc Modificación y regulación del genoma en base a CRISPR
IL300461A (en) 2012-12-12 2023-04-01 Harvard College Engineering and optimization of improved systems, methods and enzyme compositions for sequence manipulation
RU2721275C2 (ru) 2012-12-12 2020-05-18 Те Брод Инститьют, Инк. Доставка, конструирование и оптимизация систем, способов и композиций для манипуляции с последовательностями и применения в терапии
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
EP2931030B2 (en) * 2012-12-14 2024-01-17 OmniAb, Inc. Polynucleotides encoding rodent antibodies with human idiotypes and animals comprising same
CA2895155C (en) 2012-12-17 2021-07-06 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided human genome engineering
EP3491915B1 (en) 2012-12-27 2023-05-31 Keygene N.V. Method for inducing a targeted translocation in a plant.
CN109913495B (zh) 2013-02-20 2022-11-25 瑞泽恩制药公司 大鼠的遗传修饰
JP2016507244A (ja) 2013-02-27 2016-03-10 ヘルムホルツ・ツェントルム・ミュンヒェン・ドイチェス・フォルシュンクスツェントルム・フューア・ゲズントハイト・ウント・ウムベルト（ゲーエムベーハー）Ｈｅｌｍｈｏｌｔｚ Ｚｅｎｔｒｕｍ ＭｕｅｎｃｈｅｎＤｅｕｔｓｃｈｅｓ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓｚｅｎｔｒｕｍ ｆｕｅｒ Ｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔ ｕｎｄ Ｕｍｗｅｌｔ （ＧｍｂＨ） Ｃａｓ９ヌクレアーゼによる卵母細胞における遺伝子編集
WO2014143381A1 (en) 2013-03-09 2014-09-18 Agilent Technologies, Inc. Methods of in vivo engineering of large sequences using multiple crispr/cas selections of recombineering events
US9234213B2 (en) 2013-03-15 2016-01-12 System Biosciences, Llc Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems
AU2014235968B2 (en) 2013-03-21 2018-05-24 Ospedale San Raffaele Srl Targeted disruption of T cell receptor genes using engineered zinc finger protein nucleases
SI2986729T1 (sl) * 2013-04-16 2019-02-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ciljana sprememba genoma podgane
EP3988649B1 (en) 2013-09-18 2024-11-27 Kymab Limited Methods, cells and organisms
US10787684B2 (en) 2013-11-19 2020-09-29 President And Fellows Of Harvard College Large gene excision and insertion
CN110951779B (zh) 2013-12-11 2024-04-16 瑞泽恩制药公司 用于靶向修饰基因组的方法和组合物
CA2933902C (en) 2013-12-19 2022-08-30 Amyris, Inc. Methods for genomic integration
WO2015163733A1 (en) 2014-04-24 2015-10-29 Institute For Basic Science A method of selecting a nuclease target sequence for gene knockout based on microhomology
GB201407852D0 (en) 2014-05-02 2014-06-18 Iontas Ltd Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
DK3152312T3 (da) 2014-06-06 2020-04-06 Regeneron Pharma Fremgangsmåder og sammensætninger til modifikation af et mållocus
JP6752158B2 (ja) 2014-06-26 2020-09-09 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． 標的化された遺伝子修飾のための方法及び組成物、並びに使用方法
CA2959428A1 (en) * 2014-09-19 2016-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Chimeric antigen receptors
WO2016061073A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Composition and method for in vivo engineering of chromosomal rearrangements
ES2741387T3 (es) 2014-10-15 2020-02-10 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para generar o mantener células pluripotentes
EP3222718A4 (en) 2014-11-20 2018-05-30 Kyoto University Method for knock-in of dna into target region of mammalian genome, and cell
ES3013183T3 (en) 2014-11-21 2025-04-11 Regeneron Pharma Methods for targeted genetic modification using paired guide rnas
WO2016089866A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided systems for in vivo gene editing
CN107208113A (zh) 2014-12-19 2017-09-26 瑞泽恩制药公司 用于通过单步多重靶向进行靶向遗传修饰的方法和组合物
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems

Also Published As

Publication number Publication date
ES2760508T3 (es) 2020-05-14
EP3232774B1 (en) 2019-10-09
RU2017124909A3 (ru) 2019-06-05
KR20170093246A (ko) 2017-08-14
KR102530821B1 (ko) 2023-05-10
ES2947714T9 (es) 2024-03-14
US20220235381A1 (en) 2022-07-28
IL252755B (en) 2021-10-31
CA2971213C (en) 2023-09-26
AU2015364427A1 (en) 2017-07-06
US20160177339A1 (en) 2016-06-23
RU2707137C2 (ru) 2019-11-22
WO2016100819A1 (en) 2016-06-23
ES2947714T3 (es) 2023-08-17
EP3653048A1 (en) 2020-05-20
JP7095066B2 (ja) 2022-07-04
BR112017013104A2 (pt) 2018-05-15
SG11201704646YA (en) 2017-07-28
JP2021045174A (ja) 2021-03-25
JP6840077B2 (ja) 2021-03-10
EP3653048B9 (en) 2023-10-04
CN107208113A (zh) 2017-09-26
EP3653048C0 (en) 2023-06-07
EP3232774A1 (en) 2017-10-25
IL252755A0 (en) 2017-08-31
NZ732895A (en) 2022-05-27
EP3653048B1 (en) 2023-06-07
MX2017008190A (es) 2018-03-23
CA2971213A1 (en) 2016-06-23
MX388784B (es) 2025-03-20
JP2017538428A (ja) 2017-12-28
AU2015364427B2 (en) 2021-05-27
US11326184B2 (en) 2022-05-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017124909A (ru) Способы и композиции для нацеленной генетической модификации посредством одноэтапного множественного нацеливания
JP2017538428A5 (ru)
JP7101211B2 (ja) ガイドｒｎａのペアを使用したターゲティングによる遺伝子改変の方法及び組成物
JP2021045174A5 (ru)
RU2019143133A (ru) Способы и композиции для нацеленных генетических модификаций и способы их применения
US20220015342A1 (en) Gene editing of reproductive hormones to reduce fertility in ictalurus punctatus
Cooper et al. Generation of gene edited birds in one generation using sperm transfection assisted gene editing (STAGE)
Chakrapani et al. Establishing targeted carp TLR22 gene disruption via homologous recombination using CRISPR/Cas9
RU2016126989A (ru) Способы и композиции для направленной модификации генома
Shrock et al. CRISPR in animals and animal models
Kratochwil et al. Closing the genotype–phenotype gap: emerging technologies for evolutionary genetics in ecological model vertebrate systems
RU2016110827A (ru) Эффективная немейотическая интрогрессия аллелей
JP2015533284A5 (ru)
Barman et al. Gene editing tools: state-of-the-art and the road ahead for the model and non-model fishes
EP3546575A1 (en) Genome editing method
RU2016101246A (ru) Направленная интеграция
US20170251647A1 (en) Method for knock-in of dna into target region of mammalian genome, and cell
RU2015120467A (ru) Контроль полового созревания у животных
RU2016150168A (ru) Способы и композиции для модификации целевого локуса
Lee et al. Conditional targeting of Ispd using paired Cas9 nickase and a single DNA template in mice
WO2020077930A1 (zh) 一种应用Cas9技术制备CKO/KI动物模型的方法
CN104611368B (zh) 重组后不产生移码突变的载体、在爪蛙基因组中进行基因定点敲入的方法及应用
Fujii et al. One-step generation of phenotype-expressing triple-knockout mice with heritable mutated alleles by the CRISPR/Cas9 system
Ansai et al. Speciation and adaptation research meets genome editing
CN113646429A (zh) 敲入细胞的制作方法