[go: up one dir, main page]

RU2017121367A - Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк - Google Patents

Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк Download PDF

Info

Publication number
RU2017121367A
RU2017121367A RU2017121367A RU2017121367A RU2017121367A RU 2017121367 A RU2017121367 A RU 2017121367A RU 2017121367 A RU2017121367 A RU 2017121367A RU 2017121367 A RU2017121367 A RU 2017121367A RU 2017121367 A RU2017121367 A RU 2017121367A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
tpn
cell
crispr rna
million
sequence
Prior art date
Application number
RU2017121367A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2017121367A3 (ru
RU2734770C2 (ru
Inventor
Эндрю Дж. МЕРФИ
Дэвид ФРЕНДЕВЕЙ
Ка-Ман Венус ЛАЙ
Войтек АУЭРБАХ
Густаво ДРОГУЭТТ
Энтони ГАЛЬЯРДИ
Дэвид М. ВАЛЕНЦУЭЛА
Вера ВОРОНИНА
Линн МАКДОНАЛЬД
Джордж Д. Янкопулос
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2017121367A publication Critical patent/RU2017121367A/ru
Publication of RU2017121367A3 publication Critical patent/RU2017121367A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2734770C2 publication Critical patent/RU2734770C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
    • C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
    • C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/102—Mutagenizing nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C12N9/22—Ribonucleases [RNase]; Deoxyribonucleases [DNase]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/20—Type of nucleic acid involving clustered regularly interspaced short palindromic repeats [CRISPR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
    • C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
    • C12Q2537/16—Assays for determining copy number or wherein the copy number is of special importance

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Claims (179)

1. Способ введения биаллельной модификации в геном в клетке, включающий в себя приведение генома в контакт с:
(a) первым белком Cas;
(b) первой РНК CRISPR, которая гибридизуется с первой последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса;
(c) второй РНК CRISPR, которая гибридизуется со второй последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса;
(d) тракрРНК; и
(e) нацеливающим вектором, содержащим полинуклеотидную вставку, фланкированную 5' гомологичным плечом, гибридизующимся с целевой 5'-последовательностью, и 3' гомологичным плечом,- гибридизующимся с целевой 3'-последовательностью, при условии, что если клетка представляет собой эмбрион на стадии единственной клетки, то нацеливающий вектор имеет длину не более 5 т.п.н.;
причем геном содержит пару из первой и второй гомологичных хромосом, содержащих целевой геномный локус; и
при этом первый белок Cas расщепляет по меньшей мере одну из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR с получением по меньшей мере одного двухцепочечного разрыва в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом.
2. Способ по п. 1, дополнительно включающий в себя идентификацию клетки, содержащей модифицированный геном.
3. Способ по п. 2, в котором полинуклеотидная вставка содержит кассету селекции, примыкающую к первому гомологичному плечу, которое гибридизуется с первой целевой последовательностью,
причем первое гомологичное плечо представляет собой 5' гомологичное плечо, а первая целевая последовательность представляет собой целевую 5'-последовательность, или причем первое гомологичное плечо представляет собой 3' гомологичное плечо, а первая целевая последовательность представляет собой целевую 3'-последовательность,
при этом идентификация включает в себя:
(a) получение ДНК из клетки;
(b) воздействие на ДНК клетки зондом, связывающимся в пределах первой целевой последовательности, зондом, связывающимся в пределах полинуклеотидной вставки, и зондом, связывающимся в пределах эталонного гена, имеющего известное число копий, при этом каждый зонд генерирует обнаруживаемый сигнал при связывании;
(c) обнаружение сигналов, обусловленных связыванием каждого из зондов; и
(d) сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда первой целевой последовательности для определения числа копий первой целевой последовательности и сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда полинуклеотидной вставки для определения числа копий полинуклеотидной вставки,
при этом число копий полинуклеотидной вставки, равное одной или двум, и число копий первой целевой последовательности, равное двум, указывает на нацеленную вставку полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус, и
при этом число копий полинуклеотидной вставки, равное одной или более, и число копий первой целевой последовательности, равное трем или более, указывает на случайную вставку полинуклеотидной вставки в геномный локус, отличный от целевого геномного локуса.
4. Способ по любому предшествующему пункту, в котором первый белок Cas расщепляет по меньшей мере одну из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR в каждой из первой и второй гомологичных хромосом с получением по меньшей мере одного двухцепочечного разрыва в каждой из первой и второй гомологичных хромосом.
5. Способ по любому предшествующему пункту, в котором первый белок Cas расщепляет первую и вторую последовательности распознавания РНК CRISPR в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом с получением по меньшей мере двух двухцепочечных разрывов в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом.
6. Способ по любому предшествующему пункту, дополнительно включающий в себя приведение генома в контакт с:
(f) третьей РНК CRISPR, которая гибридизуется с третьей последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса; и
(g) четвертой РНК CRISPR, которая гибридизуется с четвертой последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса.
7. Способ по п. 6, в котором:
(a) первая последовательность распознавания РНК CRISPR и третья последовательность распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние от приблизительно 25 до приблизительно 50 п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 100 п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 250 п.н., от приблизительно 250 до приблизительно 300 п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 350 п.н., от приблизительно 350 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 450 п.н., от приблизительно 450 до приблизительно 500 п.н., от приблизительно 500 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 700 п.н., от приблизительно 700 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 до приблизительно 900 п.н., от приблизительно 900 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 2 т.п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 3 т.п.н., от приблизительно 3 до приблизительно 4 т.п.н., от приблизительно 4 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 6 т.п.н., от приблизительно 6 до приблизительно 7 т.п.н., от приблизительно 7 до приблизительно 8 т.п.н., от приблизительно 8 до приблизительно 9 т.п.н., от приблизительно 9 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 т.п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 т.п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 т.п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 т.п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 т.п.н.; и/или
(b) вторая последовательность распознавания РНК CRISPR и четвертая последовательность распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние от приблизительно 25 до приблизительно 50 п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 100 п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 250 п.н., от приблизительно 250 до приблизительно 300 п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 350 п.н., от приблизительно 350 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 450 п.н., от приблизительно 450 до приблизительно 500 п.н., от приблизительно 500 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 700 п.н., от приблизительно 700 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 до приблизительно 900 п.н., от приблизительно 900 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 2 т.п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 3 т.п.н., от приблизительно 3 до приблизительно 4 т.п.н., от приблизительно 4 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 6 т.п.н., от приблизительно 6 до приблизительно 7 т.п.н., от приблизительно 7 до приблизительно 8 т.п.н., от приблизительно 8 до приблизительно 9 т.п.н., от приблизительно 9 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 т.п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 т.п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 т.п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 т.п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 т.п.н.
8. Способ по п. 6 или 7, в котором первая иФ третья последовательности распознавания РНК CRISPR представляют собой первую пару последовательностей распознавания РНК CRISPR, а вторая и четвертая последовательности распознавания РНК CRISPR представляют собой вторую пару последовательностей распознавания РНК CRISPR, причем первая пара и вторая пара разделены на расстояние от приблизительно 25 до приблизительно 50 п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 100 п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 250 п.н., от приблизительно 250 до приблизительно 300 п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 350 п.н., от приблизительно 350 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 450 п.н., от приблизительно 450 до приблизительно 500 п.н., от приблизительно 500 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 700 п.н., от приблизительно 700 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 до приблизительно 900 п.н., от приблизительно 900 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 1,5 млн п.н., от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 млн п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 2,5 млн п.н., от приблизительно 2,5 до приблизительно 3 млн п.н., от приблизительно 3 до приблизительно 4 млн п.н., от приблизительно 4 до приблизительно 5 млн п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 млн п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 млн п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 млн п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 млн п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 млн п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 млн п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 млн п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 млн п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 млн п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 млн п.н.
9. Способ по п. 8, в котором первый белок Cas расщепляет по меньшей мере две из первой, второй, третьей и четвертой последовательностей распознавания РНК CRISPR с получением по меньшей мере двух двухцепочечных разрывов в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом.
10. Способ по п. 9, в котором первый белок Cas расщепляет по меньшей мере две из первой, второй, третьей и четвертой последовательностей распознавания РНК CRISPR с получением по меньшей мере двух двухцепочечных разрывов как в первой, так и во второй гомологичных хромосомах.
11. Способ по любому предшествующему пункту, в котором приведение генома в контакт как с первой, так и со второй РНК CRISPR приводит к повышенной эффективности биаллельной модификации по сравнению с приведением генома в контакт или только с первой РНК CRISPR, или только со второй РНК CRISPR.
12. Способ по любому предшествующему пункту, в котором полинуклеотидную вставку вставляют между целевыми 5'- и 3'-последовательностями.
13. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетка является диплоидной, а биаллельная модификация приводит к гомозиготности, компаунд-гетерозиготности или гемизиготности в целевом геномном локусе.
14. Способ по любому предшествующему пункту, в котором биаллельная модификация включает в себя делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR в первой гомологичной хромосоме.
15. Способ по п. 14, в котором биаллельная модификация включает в себя делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR как в первой, так и во второй гомологичных хромосомах.
16. Способ по п. 15, в котором биаллельная модификация дополнительно включает в себя вставку полинуклеотидной вставки между целевыми 5'- и 3'-последовательностями как в первой, так и во второй гомологичных хромосомах.
17. Способ по п. 14, в котором биаллельная модификация включает в себя:
(а) делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR как в первой, так и во второй гомологичных хромосомах, и вставку полинуклеотидной вставки между целевыми 5'- и 3'-последовательностями в первой гомологичной хромосоме, но не во второй гомологичной хромосоме;
(b) делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR в первой гомологичной хромосоме и нарушение локуса между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR во второй гомологичной хромосоме;
(c) делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR в первой гомологичной хромосоме, вставку полинуклеотидной вставки между целевыми 5'- и 3'-последовательностями в первой гомологичной хромосоме и нарушение локуса между целевыми 5'- и 3'-последовательностями во второй гомологичной хромосоме; или
(d) делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR в первой гомологичной хромосоме и вставку полинуклеотидной вставки между целевыми 5'- и 3'-последовательностями в первой гомологичной хромосоме, причем последовательность полинуклеотидной вставки гомологична или ортологична удаленной последовательности.
18. Способ по любому предшествующему пункту, в котором:
(a) каждая из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR расположена на расстоянии по меньшей мере 50 п.н., по меньшей мере 100 п.н., по меньшей мере 200 п.н., по меньшей мере 300 п.н., по меньшей мере 400 п.н., по меньшей мере 500 п.н., по меньшей мере 600 п.н., по меньшей мере 700 п.н., по меньшей мере 800 п.н., по меньшей мере 900 п.н., по меньшей мере 1 т.п.н., по меньшей мере 2 т.п.н., по меньшей мере 3 т.п.н., по меньшей мере 4 т.п.н., по меньшей мере 5 т.п.н., по меньшей мере 6 т.п.н., по меньшей мере 7 т.п.н., по меньшей мере 8 т.п.н., по меньшей мере 9 т.п.н., по меньшей мере 10 т.п.н., по меньшей мере 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н. или по меньшей мере 100 т.п.н. как от целевой 5'-последовательности, так и от целевой 3'-последовательности;
(b) каждая из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR расположена на расстоянии более, чем 50 п.н., более, чем 100 п.н., более, чем 200 п.н., более, чем 300 п.н., более, чем 400 п.н., более, чем 500 п.н., более, чем 600 п.н., более, чем 700 п.н., более, чем 800 п.н., более, чем 900 п.н., более, чем 1 т.п.н., более, чем 2 т.п.н., более, чем 3 т.п.н., более, чем 4 т.п.н., более, чем 5 т.п.н., более, чем 6 т.п.н., более, чем 7 т.п.н., более, чем 8 т.п.н., более, чем 9 т.п.н., более, чем 10 т.п.н., более, чем 20 т.п.н., более, чем 30 т.п.н., более, чем 40 т.п.н., более, чем 50 т.п.н., более, чем 60 т.п.н., более, чем 70 т.п.н., более, чем 80 т.п.н., более, чем 90 т.п.н. или более, чем 100 т.п.н. как от целевой 5'-последовательности, так и от целевой 3'-последовательности; или
(с) каждая из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR расположена на расстоянии от приблизительно 50 до приблизительно 100 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 п.н., от приблизительно 500 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 700 п.н., от приблизительно 700 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 до приблизительно 900 п.н., от приблизительно 900 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 2 т.п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 3 т.п.н., от приблизительно 3 до приблизительно 4 т.п.н., от приблизительно 4 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 т.п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 т.п.н. или от приблизительно 50 до приблизительно 100 т.п.н. как от целевой 5'-последовательности, так и от целевой 3'-последовательности.
19. Способ по любому предшествующему пункту, в котором:
(а) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние от приблизительно 1 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 т.п.н. или от приблизительно 150 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 1,5 млн п.н., от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 млн п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 2,5 млн п.н. или от приблизительно 2,5 до приблизительно 3 млн п.н.;
(b) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние по меньшей мере 1 т.п.н., по меньшей мере 2 т.п.н., по меньшей мере 3 т.п.н., по меньшей мере 4 т.п.н., по меньшей мере 5 т.п.н., по меньшей мере 10 т.п.н., по меньшей мере 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н., по меньшей мере 100 т.п.н., по меньшей мере 110 т.п.н., по меньшей мере 120 т.п.н., по меньшей мере 130 т.п.н., по меньшей мере 140 т.п.н., по меньшей мере 150 т.п.н., по меньшей мере 160 т.п.н., по меньшей мере 170 т.п.н., по меньшей мере 180 т.п.н., по меньшей мере 190 т.п.н., по меньшей мере 200 т.п.н., по меньшей мере 250 т.п.н., по меньшей мере 300 т.п.н., по меньшей мере 350 т.п.н., по меньшей мере 400 т.п.н., по меньшей мере 450 т.п.н. или по меньшей мере 500 т.п.н.;
(c) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние от приблизительно 25 до приблизительно 50 п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 100 п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 250 п.н., от приблизительно 250 до приблизительно 300 п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 350 п.н., от приблизительно 350 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 450 п.н., от приблизительно 450 до приблизительно 500 п.н., от приблизительно 500 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 700 п.н., от приблизительно 700 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 до приблизительно 900 п.н. или от приблизительно 900 п.н. до приблизительно 1 т.п.н.; или
(d) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние менее, чем 25 п.н., менее, чем 50 п.н., менее, чем 100 п.н., менее, чем 150 п.н., менее, чем 200 п.н., менее, чем 250 п.н., менее, чем 300 п.н., менее, чем 350 п.н., менее, чем 400 п.н., менее, чем 450 п.н., менее, чем 500 п.н., менее, чем 600 п.н., менее, чем 700 п.н., менее, чем 800 п.н., менее, чем 900 п.н., менее, чем 1 т.п.н., менее, чем 2 т.п.н., менее, чем 3 т.п.н., менее, чем 4 т.п.н., менее, чем 5 т.п.н. или менее, чем 10 т.п.н.
20. Способ по любому одному из пп. 14-19, в котором:
(a) удаленная нуклеиновая кислота составляет от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 1,5 млн п.н., от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 млн п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 2,5 млн п.н. или от приблизительно 2,5 до приблизительно 3 млн п.н.; или
(b) удаленная нуклеиновая кислота составляет по меньшей мере 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н., по меньшей мере 100 т.п.н., по меньшей мере 110 т.п.н., по меньшей мере 120 т.п.н., по меньшей мере 130 т.п.н., по меньшей мере 140 т.п.н., по меньшей мере 150 т.п.н., по меньшей мере 160 т.п.н., по меньшей мере 170 т.п.н., по меньшей мере 180 т.п.н., по меньшей мере 190 т.п.н., по меньшей мере 200 т.п.н., по меньшей мере 250 т.п.н., по меньшей мере 300 т.п.н., по меньшей мере 350 т.п.н., по меньшей мере 400 т.п.н., по меньшей мере 450 т.п.н. или по меньшей мере 500 т.п.н.; или
(c) удаленная нуклеиновая кислота составляет по меньшей мере 550 т.п.н., по меньшей мере 600 т.п.н., по меньшей мере 650 т.п.н., по меньшей мере 700 т.п.н., по меньшей мере 750 т.п.н., по меньшей мере 800 т.п.н., по меньшей мере 850 т.п.н., по меньшей мере 900 т.п.н., по меньшей мере 950 т.п.н., по меньшей мере 1 млн п.н., по меньшей мере 1,5 млн п.н. или по меньшей мере 2 млн п.н.
21. Способ по любому предшествующему пункту, в котором целевые 5'- и 3'-последовательности находятся в пределах целевого геномного локуса.
22. Способ по любому предшествующему пункту, в котором нацеливающий вектор имеет линейную форму.
23. Способ по любому предшествующему пункту, в котором нацеливающий вектор является одноцепочечным или двухцепочечным.
24. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетка представляет собой эукариотическую клетку.
25. Способ по п. 24, в котором эукариотическая клетка представляет собой клетку млекопитающего, человеческую клетку, нечеловеческую клетку, клетку грызуна, мышиную клетку, крысиную клетку, плюрипотентную клетку, неплюрипотентную клетку, нечеловеческую плюрипотентную клетку, человеческую плюрипотентную клетку, плюрипотентную клетку грызуна, мышиную плюрипотентную клетку, крысиную плюрипотентную клетку, мышиную эмбриональную стволовую (ЭС) клетку, крысиную ЭС-клетку, человеческую ЭС-клетку, стволовую клетку взрослого человека, ограниченную в развитии человеческую клетку-предшественник, человеческую индуцированную плюрипотентную стволовую клетку (ИПС) или эмбрион на стадии единственной клетки.
26. Способ по п. 25, в котором клетка представляет собой эмбрион на стадии единственной клетки и в котором:
(a) нацеливающий вектор имеет длину от приблизительно 50 нуклеотидов до приблизительно 5 т.п.н.; или
(b) нацеливающий вектор представляет собой одноцепочечную ДНК и имеет длину от приблизительно 60 до приблизительно 200 нуклеотидов.
27. Способ по п. 25, в котором клетка не является эмбрионом на стадии единственной клетки и в котором:
(а) нацеливающий вектор представляет собой большой нацеливающий вектор (LTVEC) длиной по меньшей мере 10 т.п.н.; или
(b) нацеливающий вектор представляет собой большой нацеливающий вектор (LTVEC), в котором общая длина 5' и 3' гомологичных плеч LTVEC составляет по меньшей мере 10 т.п.н.
28. Способ по п. 27, в котором:
(a) LTVEC составляет от приблизительно 50 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 75 т.п.н., от приблизительно 75 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 125 т.п.н., от приблизительно 125 до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 175 т.п.н., от приблизительно 175 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 225 т.п.н., от приблизительно 225 до приблизительно 250 т.п.н., от приблизительно 250 до приблизительно 275 т.п.н. или от приблизительно 275 до приблизительно 300 т.п.н.; или
(b) общая длина 5' и 3' гомологичных плеч LTVEC составляет от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 т.п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 т.п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 т.п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 т.п.н., от приблизительно 90 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 110 т.п.н., от приблизительно 110 до приблизительно 120 т.п.н., от приблизительно 120 до приблизительно 130 т.п.н., от приблизительно 130 до приблизительно 140 т.п.н., от приблизительно 140 до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 160 т.п.н., от приблизительно 160 до приблизительно 170 т.п.н., от приблизительно 170 до приблизительно 180 т.п.н., от приблизительно 180 до приблизительно 190 т.п.н. или от приблизительно 190 до приблизительно 200 т.п.н.
29. Способ по любому одному из пп. 1-3, в котором клетка не является эмбрионом на стадии единственной клетки,
причем нацеливающий вектор представляет собой большой нацеливающий вектор (LTVEC), при этом общая сумма длин 5' и 3' гомологичных плеч составляет по меньшей мере 10 т.п.н.;
при этом каждая из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR расположена на расстоянии более, чем 200 п.н., более, чем 300 п.н., более, чем 400 п.н., более, чем 500 п.н., более, чем 600 п.н., более, чем 700 п.н., более, чем 800 п.н., более, чем 900 п.н., более, чем 1 т.п.н., более, чем 2 т.п.н., более, чем 3 т.п.н., более, чем 4 т.п.н., более, чем 5 т.п.н., более, чем 6 т.п.н., более, чем 7 т.п.н., более, чем 8 т.п.н., более, чем 9 т.п.н., более, чем 10 т.п.н., более, чем 20 т.п.н., более, чем 30 т.п.н., более, чем 40 т.п.н., более, чем 50 т.п.н., более, чем 60 т.п.н., более, чем 70 т.п.н., более, чем 80 т.п.н., более, чем 90 т.п.н. или более, чем 100 т.п.н. как от целевой 5'-последовательности, так и от целевой 3'-последовательности;
при этом первый белок Cas расщепляет первую и вторую последовательности распознавания РНК CRISPR в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом с получением по меньшей мере двух двухцепочечных разрывов в по меньшей мере одной из первой и второй гомологичных хромосом; и
при этом биаллельная модификация включает в себя делецию между первой и второй последовательностями распознавания РНК CRISPR в первой гомологичной хромосоме и вставку полинуклеотидной вставки между целевыми 5'- и 3'-последовательностями в первой гомологичной хромосоме, при этом последовательность полинуклеотидной вставки гомологична или ортологична удаленной последовательности.
30. Способ модификации генома в клетке, являющейся гетерозиготной по первому аллелю, включающий в себя приведение генома в контакт с:
(a) первым белком Cas;
(b) тракрРНК; и
(c) первой РНК CRISPR, которая гибридизуется с первой не аллель-специфической последовательностью распознавания РНК CRISPR, причем первый аллель находится на первой гомологичной хромосоме, а последовательность распознавания РНК CRISPR расположена в центромерном направлении от локуса, соответствующего первому аллелю на второй гомологичной хромосоме; и
при этом первый белок Cas расщепляет первую последовательность распознавания РНК CRISPR с получением двухцепочечного разрыва, а клетку модифицируют так, чтобы она стала гомозиготной по первому аллелю.
31. Способ по п. 30, дополнительно включающий в себя приведение генома в контакт со второй РНК CRISPR, гибридизующейся со второй не аллель-специфической последовательностью распознавания РНК CRISPR в центромерном направлении от локуса, соответствующего первому аллелю на второй гомологичной хромосоме,
при этом первый белок Cas расщепляет по меньшей мере одну из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR с получением по меньшей мере одного двухцепочечного разрыва.
32. Способ по п. 31, в котором первый белок Cas расщепляет первую последовательность распознавания РНК CRISPR и вторую последовательность распознавания РНК CRISPR.
33. Способ по любому одному из пп. 30-32, в котором потеря гетерозиготности происходит в теломерном направлении от двухцепочечного разрыва.
34. Способ по любому одному из пп. 31-33, в котором первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR расположены на второй гомологичной хромосоме, но не на первой гомологичной хромосоме.
35. Способ по любому одному из пп. 30-34, в котором первый сайт распознавания РНК CRISPR находится на расстоянии от приблизительно 100 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 млн п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 млн п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 млн п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 млн п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 млн п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 млн п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 млн п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 млн п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 млн п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 млн п.н. от центромеры.
36. Способ по любому одному из пп. 30-35, в котором первый аллель находится на расстоянии от приблизительно 100 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 млн п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 млн п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 млн п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 млн п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 млн п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 млн п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 млн п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 млн п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 млн п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 млн п.н. от первого сайта распознавания РНК CRISPR.
37. Способ по любому одному из пп. 30-36, в котором область второй гомологичной хромосомы, заменяемая при потере гетерозиготности, составляет от приблизительно 100 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 10 млн п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 млн п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 30 млн п.н., от приблизительно 30 до приблизительно 40 млн п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 50 млн п.н., от приблизительно 50 до приблизительно 60 млн п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 70 млн п.н., от приблизительно 70 до приблизительно 80 млн п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 90 млн п.н. или от приблизительно 90 до приблизительно 100 млн п.н.
38. Способ по любому одному из пп. 30-37, в котором:
(a) первый аллель содержит мутацию; или
(b) первый аллель представляет собой аллель дикого типа, а соответствующий локус на второй гомологичной хромосоме содержит мутацию.
39. Способ по п. 38, в котором первый аллель содержит мутацию, причем мутация представляет собой нацеленную модификацию.
40. Способ модификации генома в клетке, являющейся гетерозиготной по первому аллелю, включающий в себя приведение генома в контакт с:
(a) первым белком Cas;
(b) тракрРНК;
(c) первой РНК CRISPR, которая гибридизуется с первой последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах второго аллеля, причем первый аллель находится на первой гомологичной хромосоме, а второй аллель находится в соответствующем локусе на второй гомологичной хромосоме; и
(d) второй РНК CRISPR, которая гибридизуется со второй последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах второго аллеля;
при этом первый белок Cas расщепляет по меньшей мере одну из первой и второй последовательностей распознавания РНК CRISPR с получением по меньшей мере одного двухцепочечного разрыва и концевых последовательностей, подвергающихся рекомбинации, при этом рекомбинация осуществляется между первым и вторым аллелями с получением модифицированного генома, гомозиготного по первому аллелю.
41. Способ по п. 40, в котором первый белок Cas расщепляет первую последовательность распознавания РНК CRISPR и вторую последовательность распознавания РНК CRISPR.
42. Способ по п. 40 или 41, в котором первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR расположены в пределах второго аллеля, но не первого аллеля.
43. Способ по любому одному из пп. 40-42, в котором:
(а) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние от приблизительно 1 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 т.п.н. или от приблизительно 150 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 1,5 млн п.н., от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 млн п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 2,5 млн п.н. или от приблизительно 2,5 до приблизительно 3 млн п.н.; или
(b) первая и вторая последовательности распознавания РНК CRISPR разделены на расстояние по меньшей мере 1 т.п.н., по меньшей мере 2 т.п.н., по меньшей мере 3 т.п.н., по меньшей мере 4 т.п.н., по меньшей мере 5 т.п.н., по меньшей мере 10 т.п.н., по меньшей мере 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н., по меньшей мере 100 т.п.н., по меньшей мере 110 т.п.н., по меньшей мере 120 т.п.н., по меньшей мере 130 т.п.н., по меньшей мере 140 т.п.н., по меньшей мере 150 т.п.н., по меньшей мере 160 т.п.н., по меньшей мере 170 т.п.н., по меньшей мере 180 т.п.н., по меньшей мере 190 т.п.н., по меньшей мере 200 т.п.н., по меньшей мере 250 т.п.н., по меньшей мере 300 т.п.н., по меньшей мере 350 т.п.н., по меньшей мере 400 т.п.н., по меньшей мере 450 т.п.н. или по меньшей мере 500 т.п.н.
44. Способ по любому одному из пп. 40-43, в котором:
(а) различия в последовательностях между первым аллелем и вторым аллелем охватывают от приблизительно 100 до приблизительно 200 п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 400 п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 600 п.н., от приблизительно 600 до приблизительно 800 п.н., от приблизительно 800 п.н. до приблизительно 1 т.п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 2 т.п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 3 т.п.н., от приблизительно 4 до приблизительно 5 т.п.н., от приблизительно 5 до приблизительно 10 т.п.н., от приблизительно 10 до приблизительно 20 т.п.н., от приблизительно 20 до приблизительно 40 т.п.н., от приблизительно 40 до приблизительно 60 т.п.н., от приблизительно 60 до приблизительно 80 т.п.н., от приблизительно 80 до приблизительно 100 т.п.н., от приблизительно 100 до приблизительно 150 т.п.н., от приблизительно 150 до приблизительно 200 т.п.н., от приблизительно 200 до приблизительно 300 т.п.н., от приблизительно 300 до приблизительно 400 т.п.н., от приблизительно 400 до приблизительно 500 т.п.н., от приблизительно 500 т.п.н. до приблизительно 1 млн п.н., от приблизительно 1 до приблизительно 1,5 млн п.н., от приблизительно 1,5 до приблизительно 2 млн п.н., от приблизительно 2 до приблизительно 2,5 млн п.н. или от приблизительно 2,5 до приблизительно 3 млн п.н; или
(b) различия в последовательностях между первым аллелем и вторым аллелем охватывают по меньшей мере 100 п.н., по меньшей мере 200 п.н., по меньшей мере 300 п.н., по меньшей мере 400 п.н., по меньшей мере 500 п.н., по меньшей мере 600 п.н., по меньшей мере 700 п.н., по меньшей мере 800 п.н., по меньшей мере 800 п.н., по меньшей мере 1 т.п.н., по меньшей мере 2 т.п.н., по меньшей мере 3 т.п.н., по меньшей мере 4 т.п.н., по меньшей мере 5 т.п.н., по меньшей мере 6 т.п.н., по меньшей мере 7 т.п.н., по меньшей мере 8 т.п.н., по меньшей мере 9 т.п.н., по меньшей мере 10 т.п.н., 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н., по меньшей мере 100 т.п.н., по меньшей мере 110 т.п.н., по меньшей мере 120 т.п.н., по меньшей мере 130 т.п.н., по меньшей мере 140 т.п.н., по меньшей мере 150 т.п.н., по меньшей мере 160 т.п.н., по меньшей мере 170 т.п.н., по меньшей мере 180 т.п.н., по меньшей мере 190 т.п.н., по меньшей мере 200 т.п.н., по меньшей мере 250 т.п.н., по меньшей мере 300 т.п.н., по меньшей мере 350 т.п.н., по меньшей мере 400 т.п.н., по меньшей мере 450 т.п.н. или по меньшей мере 500 т.п.н.
45. Способ по любому одному из пп. 40-44, в котором:
(a) первый аллель содержит нацеленную модификацию, а второй аллель представляет собой аллель дикого типа; или
(b) первый аллель представляет собой аллель дикого типа, а второй аллель содержит вызывающую заболевание мутацию.
46. Способ по любому одному из пп. 40-45, в котором рекомбинация включает в себя генную конверсию или потерю гетерозиготности (LOH).
47. Способ по любому одному из пп. 30-46, дополнительно включающий в себя идентификацию клетки, гомозиготной по первому аллелю.
48. Способ по любому одному из пп. 30-47, в котором белок Cas и первая РНК CRISPR в природе вместе не встречаются.
49. Способ по любому одному из пп. 30-48, в котором клетка представляет собой эукариотическую клетку.
50. Способ по п. 49, в котором эукариотическая клетка представляет собой клетку млекопитающего, человеческую клетку, нечеловеческую клетку, клетку грызуна, мышиную клетку, крысиную клетку, плюрипотентную клетку, неплюрипотентную клетку, нечеловеческую плюрипотентную клетку, человеческую плюрипотентную клетку, плюрипотентную клетку грызуна, мышиную плюрипотентную клетку, крысиную плюрипотентную клетку, мышиную эмбриональную стволовую (ЭС) клетку, крысиную ЭС-клетку, человеческую ЭС-клетку, стволовую клетку взрослого человека, ограниченную в развитии человеческую клетку-предшественник, человеческую индуцированную плюрипотентную стволовую клетку (ИПС) или эмбрион на стадии единственной клетки.
51. Способ по любому предшествующему пункту, в котором первый белок Cas представляет собой Cas9.
52. Способ по любому предшествующему пункту, в котором первый белок Cas имеет нуклеазную активность в отношении обеих цепей двухцепочечной ДНК.
53. Способ по любому одному из пп. 1-51, в котором первый белок Cas представляет собой никазу.
54. Способ по любому одному из пп. 1-39 и 41-53, в котором первый белок Cas представляет собой никазу, и причем способ дополнительно включает в себя приведение генома в контакт с:
(f) вторым белком Cas, представляющим собой никазу;
(g) третьей РНК CRISPR, гибридизующейся с третьей последовательностью распознавания РНК CRISPR; и
(h) четвертой РНК CRISPR, гибридизующейся с четвертой последовательностью распознавания РНК CRISPR;
при этом первый белок Cas расщепляет первую цепь геномной ДНК в пределах первой последовательности распознавания РНК CRISPR и в пределах второй последовательности распознавания РНК CRISPR, а второй белок Cas расщепляет вторую цепь геномной ДНК в пределах третьей последовательности распознавания РНК CRISPR и в пределах четвертой последовательности распознавания РНК CRISPR.
55. Способ по любому одному из пп. 1-29 и 31-54, в котором:
(a) первая РНК CRISPR и тракрРНК слиты вместе в первую гидовую РНК (гРНК) и/или вторая РНК CRISPR и тракрРНК слиты вместе во вторую гРНК; или
(b) первая РНК CRISPR и тракрРНК представляют собой отдельные молекулы РНК и/или вторая РНК CRISPR и тракрРНК представляют собой отдельные молекулы РНК.
56. Способ по любому предшествующему пункту, в котором приведение в контакт включает в себя введение первого белка Cas, первой и второй РНК CRISP и тракрРНК в клетку.
57. Способ по п. 56, в котором:
(a) первый белок Cas вводят в клетку в виде белка, матричной РНК (мРНК), кодирующей первый белок Cas, или ДНК, кодирующей первый белок Cas;
(b) первую РНК CRISPR вводят в клетку в виде РНК или в виде ДНК, кодирующей первую РНК CRISPR;
(c) вторую РНК CRISPR вводят в клетку в виде РНК или в виде ДНК, кодирующей вторую РНК CRISPR; и/или
(d) тракрРНК вводят в клетку в виде РНК или в виде ДНК, кодирующей тракрРНК.
58. Способ по п. 57, в котором первый белок Cas, первую РНК CRISPR и тракрРНК вводят в клетку в виде первого комплекса белок-РНК и/или первый белок Cas, вторую РНК CRISPR и тракрРНК вводят в клетку в виде второго комплекса белок-РНК.
59. Способ по п. 57, в котором:
(а) ДНК, кодирующая первый белок Cas, функционально связана с первым промотором в первом экспрессионном конструкте;
(b) ДНК, кодирующая первую РНК CRISPR, функционально связана со вторым промотором во втором экспрессионном конструкте;
(c) ДНК, кодирующая вторую РНК CRISPR, функционально связана с третьим промотором в третьем экспрессионном конструкте; и/или
(d) ДНК, кодирующая тракрРНК, функционально связана с четвертым промотором в четвертом экспрессионном конструкте;
причем первый, второй, третий и четвертый промоторы активны в клетке.
60. Способ по п. 59, в котором первый, второй, третий и/или четвертый экспрессионные конструкты являются компонентами одной молекулы нуклеиновой кислоты.
61. Способ по п. 57, в котором:
(a) ДНК, кодирующая первый белок Cas, функционально связана с первым промотором в первом экспрессионном конструкте;
(b) молекулы ДНК, кодирующие первую РНК CRISPR и тракрРНК, слиты вместе в ДНК, кодирующую первую гидовую РНК (гРНК), и функционально связаны со вторым промотором во втором экспрессионном конструкте; и/или
(c) молекулы ДНК, кодирующие вторую РНК CRISPR и тракрРНК, слиты вместе в ДНК, кодирующую вторую гРНК, и функционально связаны с третьим промотором в третьем экспрессионном конструкте;
причем первый, второй и третий промоторы активны в клетке.
62. Способ по п. 61, в котором первый, второй и/или третий экспрессионные конструкты являются компонентами одной молекулы нуклеиновой кислоты.
63. Способ по любому предшествующему пункту, в котором клетка модифицирована для снижения негомологичного соединения концов (NHEJ) и/или для повышения генной конверсии или направляемой гомологией репарации (HDR).
64. Способ по п. 63, в котором клетка модифицирована для снижения экспрессии или активности одной или более из следующего: DNA-PK, PARP1 и лигазы IV.
65. Способ по п. 64, в котором снижение экспрессии или активности является индуцируемым, обратимым, время-специфическим и/или пространственно-специфическим.
66. Способ получения не относящихся к человеку животных поколения F0, включающий в себя:
(a) введение нечеловеческой ЭС-клетки в нечеловеческий эмбрион-хозяин, причем нечеловеческая ЭС-клетка получена способом по любому одному из пп. 1-25 и 27-65; и
(b) вынашивание нечеловеческого эмбриона-хозяина в теле суррогатной матери;
при этом суррогатная мать дает потомство не относящегося к человеку животного поколения F0, имеющее биаллельную модификацию.
67. Способ получения не относящегося к человеку животного поколения F0, включающий в себя имплантацию генетически модифицированного эмбриона на стадии единственной клетки, полученного способом по любому одному из пп. 1-26 и 30-65, в тело суррогатной матери;
при этом суррогатная мать дает потомство не относящегося к человеку животного поколения F0, имеющее биаллельную модификацию.
68. Способ по п. 66 или 67, в котором не относящееся к человеку животное представляет собой мышь или крысу.
69. Способ идентификации нацеленной вставки полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус в диплоидной клетке, не являющейся эмбрионом на стадии единственной клетки, включающий в себя:
(a) получение ДНК из клетки, причем клетку приводили в контакт с большим нацеливающим вектором (LTVEC), содержащим полинуклеотидную вставку, фланкированную первым гомологичным плечом, гибридизующимся с первой целевой последовательностью, и вторым гомологичным плечом, гибридизующимся со второй целевой последовательностью, при этом полинуклеотидная вставка содержит кассету селекции, прилегающую к первому гомологичному плечу;
(b) воздействие на ДНК клетки зондом, связывающимся в пределах первой целевой последовательности, зондом, связывающимся в пределах полинуклеотидной вставки, и зондом, связывающимся в пределах эталонного гена, имеющего известное число копий, при этом каждый зонд генерирует обнаруживаемый сигнал при связывании;
(c) обнаружение сигналов, обусловленных связыванием каждого из зондов; и
(d) сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда первой целевой последовательности для определения числа копий первой целевой последовательности и сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда полинуклеотидной вставки для определения числа копий полинуклеотидной вставки,
при этом число копий полинуклеотидной вставки, равное одной или двум, и число копий первой целевой последовательности, равное двум, указывает на нацеленную вставку полинуклеотидной вставки в целевой геномный локус, и
при этом число копий полинуклеотидной вставки, равное одной или более, и число копий первой целевой последовательности, равное трем или более, указывает на случайную вставку полинуклеотидной вставки в геномный локус, отличный от целевого геномного локуса.
70. Способ по п. 69, в котором сигнал, обусловленный связыванием зонда первой целевой последовательности, используют для определения значения порогового цикла (Ct) для первой целевой последовательности, а сигнал, обусловленный связыванием зонда эталонного гена, используют для определения значения порогового цикла (Ct) для эталонного гена, и число копий первой целевой последовательности определяют путем сравнения значения Ct первой целевой последовательности и значения Ct эталонного гена, и
при этом сигнал, обусловленный связыванием зонда полинуклеотидной вставки, используют для определения значения порогового цикла (Ct) для полинуклеотидной вставки, и число копий полинуклеотидной вставки определяют путем сравнения значения Ct первой целевой последовательности и значения Ct эталонного гена.
71. Способ по п. 69 или 70, в котором кассета селекции содержит ген резистентности к лекарственному средству.
72. Способ по любому одному из пп. 69-71, в котором полинуклеотидная вставка составляет по меньшей мере 5 т.п.н., по меньшей мере 10 т.п.н., по меньшей мере 20 т.п.н., по меньшей мере 30 т.п.н., по меньшей мере 40 т.п.н., по меньшей мере 50 т.п.н., по меньшей мере 60 т.п.н., по меньшей мере 70 т.п.н., по меньшей мере 80 т.п.н., по меньшей мере 90 т.п.н., по меньшей мере 100 т.п.н., по меньшей мере 150 т.п.н., по меньшей мере 200 т.п.н., по меньшей мере 250 т.п.н., по меньшей мере 300 т.п.н., по меньшей мере 350 т.п.н., по меньшей мере 400 т.п.н., по меньшей мере 450 т.п.н. или по меньшей мере 500 т.п.н.
73. Способ по любому одному из пп. 69-72, в котором расстояние между последовательностями, с которыми связываются зонды в первой целевой последовательности, и кассетой селекции составляет не более, чем 100 нуклеотидов, 200 нуклеотидов, 300 нуклеотидов, 400 нуклеотидов, 500 нуклеотидов, 600 нуклеотидов, 700 нуклеотидов, 800 нуклеотидов, 900 нуклеотидов, 1 т.п.н., 1,5 т.п.н., 2 т.п.н., 2,5 т.п.н., 3 т.п.н., 3,5 т.п.н., 4 т.п.н., 4,5 т.п.н. или 5 т.п.н.
74. Способ по любому одному из пп. 69-73, дополнительно включающий в себя определение числа копий второй целевой последовательности.
75. Способ по п. 74, в котором этап (b) дополнительно включает в себя воздействие на ДНК клетки зондом, связывающимся со второй целевой последовательностью, и
причем этап (с) дополнительно включает в себя обнаружение сигнала, обусловленного связыванием зонда второй целевой последовательности, и
при этом этап (d) дополнительно включает в себя сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда второй целевой последовательности для определения числа копий второй целевой последовательности.
76. Способ по любому одному из пп. 69-75, дополнительно содержащий определение числа копий одной или более дополнительных последовательностей в пределах полинуклеотидной вставки.
77. Способ по п. 76, в котором этап (b) дополнительно включает в себя воздействие на ДНК клетки одним или более дополнительными зондами, связывающимися с полинуклеотидной вставкой, и
причем этап (с) дополнительно включает в себя обнаружение сигнала, обусловленного связыванием одного или более дополнительных зондов, и
при этом этап (d) дополнительно включает в себя сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от одного или более дополнительных зондов полинуклеотидной вставки для определения числа копий одной или более дополнительных последовательностей в пределах полинуклеотидной вставки.
78. Способ по п. 76 или 77, в котором одна или более дополнительных последовательностей в пределах полинуклеотидной вставки содержит последовательность, примыкающую ко второй целевой последовательности.
79. Способ по любому одному из пп. 69-78, в котором LTVEC выполнен с возможностью удаления эндогенной последовательности из целевого геномного локуса, или
в котором клетку дополнительно приводили в контакт с белком Cas, первой РНК CRISPR, которая гибридизуется с первой последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса, второй РНК CRISPR, которая гибридизуется со второй последовательностью распознавания РНК CRISPR в пределах целевого геномного локуса, и тракрРНК.
80. Способ по п. 79, дополнительно включающий в себя определение числа копий эндогенных последовательностей в целевом геномном локусе.
81. Способ по п. 80, в котором этап (b) дополнительно включает в себя воздействие на ДНК клетки зондом, связывающимся с эндогенной последовательностью в целевом геномном локусе, и
причем этап (с) дополнительно включает в себя обнаружение сигнала, обусловленного связыванием зонда эндогенной последовательности, и
при этом этап (d) дополнительно включает в себя сравнение сигнала от зонда эталонного гена с сигналом от зонда эндогенной последовательности для определения числа копий эндогенной последовательности.
RU2017121367A 2014-11-21 2015-11-20 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк RU2734770C2 (ru)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462083005P 2014-11-21 2014-11-21
US62/083,005 2014-11-21
US201562182314P 2015-06-19 2015-06-19
US62/182,314 2015-06-19
US201562211421P 2015-08-28 2015-08-28
US62/211,421 2015-08-28
PCT/US2015/062023 WO2016081923A2 (en) 2014-11-21 2015-11-20 METHODS AND COMPOSITIONS FOR TARGETED GENETIC MODIFICATION USING PAIRED GUIDE RNAs

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020134412A Division RU2020134412A (ru) 2014-11-21 2015-11-20 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2017121367A true RU2017121367A (ru) 2018-12-21
RU2017121367A3 RU2017121367A3 (ru) 2019-11-05
RU2734770C2 RU2734770C2 (ru) 2020-10-23

Family

ID=54771219

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020134412A RU2020134412A (ru) 2014-11-21 2015-11-20 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк
RU2017121367A RU2734770C2 (ru) 2014-11-21 2015-11-20 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020134412A RU2020134412A (ru) 2014-11-21 2015-11-20 Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк

Country Status (25)

Country Link
US (4) US10457960B2 (ru)
EP (2) EP3521437B1 (ru)
JP (2) JP6727199B2 (ru)
KR (3) KR102683423B1 (ru)
CN (2) CN113444747B (ru)
AU (2) AU2015349692B2 (ru)
BR (1) BR112017010547A2 (ru)
CA (2) CA2968440A1 (ru)
CY (1) CY1121738T1 (ru)
DK (1) DK3221457T3 (ru)
ES (2) ES2731437T3 (ru)
HR (1) HRP20190949T1 (ru)
HU (1) HUE044907T2 (ru)
IL (3) IL283585B2 (ru)
LT (1) LT3221457T (ru)
MX (2) MX389266B (ru)
NZ (1) NZ731962A (ru)
PL (1) PL3221457T3 (ru)
PT (1) PT3221457T (ru)
RS (1) RS58893B1 (ru)
RU (2) RU2020134412A (ru)
SG (2) SG11201703747RA (ru)
SI (1) SI3221457T1 (ru)
SM (1) SMT201900354T1 (ru)
WO (1) WO2016081923A2 (ru)

Families Citing this family (138)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20100069614A1 (en) 2008-06-27 2010-03-18 Merus B.V. Antibody producing non-human mammals
AU2004242614B2 (en) 2003-05-30 2011-09-22 Merus N.V. Fab library for the preparation of anti vegf and anti rabies virus fabs
US10323236B2 (en) 2011-07-22 2019-06-18 President And Fellows Of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
WO2013163628A2 (en) 2012-04-27 2013-10-31 Duke University Genetic correction of mutated genes
AU2014218931C1 (en) 2013-02-20 2020-05-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetic modification of rats
US9828582B2 (en) 2013-03-19 2017-11-28 Duke University Compositions and methods for the induction and tuning of gene expression
HRP20181648T1 (hr) 2013-04-16 2019-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ciljana modifikacija genoma štakora
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
US9359599B2 (en) 2013-08-22 2016-06-07 President And Fellows Of Harvard College Engineered transcription activator-like effector (TALE) domains and uses thereof
US9340799B2 (en) 2013-09-06 2016-05-17 President And Fellows Of Harvard College MRNA-sensing switchable gRNAs
US9526784B2 (en) 2013-09-06 2016-12-27 President And Fellows Of Harvard College Delivery system for functional nucleases
US9322037B2 (en) 2013-09-06 2016-04-26 President And Fellows Of Harvard College Cas9-FokI fusion proteins and uses thereof
WO2015070083A1 (en) 2013-11-07 2015-05-14 Editas Medicine,Inc. CRISPR-RELATED METHODS AND COMPOSITIONS WITH GOVERNING gRNAS
MX388127B (es) 2013-12-11 2025-03-19 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma.
US20150165054A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 President And Fellows Of Harvard College Methods for correcting caspase-9 point mutations
CA2950173C (en) 2014-06-06 2023-10-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modifying a targeted locus
KR102386101B1 (ko) 2014-06-26 2022-04-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 그 조성물, 및 사용 방법
US10077453B2 (en) 2014-07-30 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
EP3204496A1 (en) 2014-10-10 2017-08-16 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for promoting homology directed repair
PL3207124T3 (pl) 2014-10-15 2019-11-29 Regeneron Pharma Sposoby i kompozycje do wytwarzania lub utrzymywania komórek pluripotencjalnych
WO2016073990A2 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Editas Medicine, Inc. Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing
ES2731437T3 (es) 2014-11-21 2019-11-15 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para la modificación genética dirigida mediante el uso de pares de ARN guías
CN107208113A (zh) 2014-12-19 2017-09-26 瑞泽恩制药公司 用于通过单步多重靶向进行靶向遗传修饰的方法和组合物
US10676726B2 (en) 2015-02-09 2020-06-09 Duke University Compositions and methods for epigenome editing
US11390884B2 (en) 2015-05-11 2022-07-19 Editas Medicine, Inc. Optimized CRISPR/cas9 systems and methods for gene editing in stem cells
CN107920498A (zh) 2015-05-29 2018-04-17 瑞泽恩制药公司 具有c9orf72基因座破坏的非人类动物
JP7396783B2 (ja) 2015-06-09 2023-12-12 エディタス・メディシン、インコーポレイテッド 移植を改善するためのｃｒｉｓｐｒ／ｃａｓ関連方法および組成物
CA3168241A1 (en) 2015-07-15 2017-01-19 Rutgers. The State University of New Jersey Nuclease-independent targeted gene editing platform and uses thereof
US11667911B2 (en) 2015-09-24 2023-06-06 Editas Medicine, Inc. Use of exonucleases to improve CRISPR/CAS-mediated genome editing
EP4089175A1 (en) 2015-10-13 2022-11-16 Duke University Genome engineering with type i crispr systems in eukaryotic cells
US10167457B2 (en) 2015-10-23 2019-01-01 President And Fellows Of Harvard College Nucleobase editors and uses thereof
CA3004497A1 (en) * 2015-11-06 2017-05-11 The Jackson Laboratory Large genomic dna knock-in and uses thereof
EA201891317A3 (ru) 2015-11-30 2019-04-30 Дьюк Юниверсити Терапевтические мишени для коррекции гена дистрофина человека с помощью редактирования генов и способы их применения
EP4257599A3 (en) 2016-01-13 2024-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents having an engineered heavy chain diversity region
US11666666B2 (en) * 2016-02-11 2023-06-06 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for modifying a mutant dystrophin gene in a cell's genome
EP3433363A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Editas Medicine, Inc. Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use
WO2017180694A1 (en) 2016-04-13 2017-10-19 Editas Medicine, Inc. Cas9 fusion molecules gene editing systems, and methods of use thereof
US20190127713A1 (en) 2016-04-13 2019-05-02 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
CN113831407B (zh) 2016-05-20 2024-06-11 瑞泽恩制药公司 用于使用多个引导rna来破坏免疫耐受性的方法
WO2017203275A1 (en) * 2016-05-27 2017-11-30 Cambridge Enterprise Limited Novel nucleic acid construct
WO2017219033A1 (en) * 2016-06-17 2017-12-21 Montana State University Bidirectional targeting for genome editing
ES2982085T3 (es) 2016-06-20 2024-10-14 Octapharma Ag Medios y métodos para modificar alelos múltiples
US10912287B2 (en) * 2016-06-28 2021-02-09 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd Genetically modified mice expressing humanized PD-1
JP7033583B2 (ja) * 2016-07-13 2022-03-10 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ゲノム編集効率を高めるための方法、組成物及びキット
JP7490211B2 (ja) 2016-07-19 2024-05-27 デューク ユニバーシティ Ｃｐｆ１に基づくゲノム編集の治療適用
EP3491130B1 (en) * 2016-07-28 2022-07-27 DSM IP Assets B.V. An assembly system for a eukaryotic cell
MX2019001211A (es) 2016-07-29 2019-09-16 Regeneron Pharma Ratones que comprenden mutaciones que dan lugar a la expresión de la fibrilina-1 truncada en c.
KR20250103795A (ko) 2016-08-03 2025-07-07 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 아데노신 핵염기 편집제 및 그의 용도
EP3497214B1 (en) 2016-08-09 2023-06-28 President and Fellows of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
MX381216B (es) 2016-09-30 2025-03-12 Regeneron Pharma Animales no humanos que tienen una expansion de repeticiones de hexanucleotidos en un locus c9orf72.
AU2017342543B2 (en) 2016-10-14 2024-06-27 President And Fellows Of Harvard College AAV delivery of nucleobase editors
RS66884B1 (sr) 2016-11-04 2025-07-31 Regeneron Pharma Ne-humane životinje koje imaju konstruisani lokus imunoglobulinskog lambda lakog lanca
CN106520831B (zh) * 2016-11-18 2020-05-26 青岛市畜牧兽医研究所 一种哺乳动物基因组修饰方法
EP3555297A1 (en) 2016-12-19 2019-10-23 Editas Medicine, Inc. Assessing nuclease cleavage
US10745677B2 (en) 2016-12-23 2020-08-18 President And Fellows Of Harvard College Editing of CCR5 receptor gene to protect against HIV infection
WO2018129129A1 (en) * 2017-01-05 2018-07-12 Rutgers, The State University Of New Jersey Targeted gene editing platform independent of dna double strand break and uses thereof
WO2018129368A2 (en) 2017-01-06 2018-07-12 Editas Medicine, Inc. Methods of assessing nuclease cleavage
DK3583203T5 (da) 2017-02-15 2024-09-02 2Seventy Bio Inc Donorreparationstemplates multiplex-genomeditering
US12390514B2 (en) 2017-03-09 2025-08-19 President And Fellows Of Harvard College Cancer vaccine
EP3592853A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 President and Fellows of Harvard College Suppression of pain by gene editing
US11542496B2 (en) 2017-03-10 2023-01-03 President And Fellows Of Harvard College Cytosine to guanine base editor
BR112019019655A2 (pt) 2017-03-23 2020-04-22 Harvard College editores de nucleobase que compreendem proteínas de ligação a dna programáveis por ácido nucleico
US11499151B2 (en) 2017-04-28 2022-11-15 Editas Medicine, Inc. Methods and systems for analyzing guide RNA molecules
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
WO2018213081A1 (en) * 2017-05-16 2018-11-22 Generos Biopharma Ltd. Compositions and methods for treating alzheimer's disease
KR102746733B1 (ko) 2017-06-09 2024-12-24 에디타스 메디신, 인코포레이티드 조작된 cas9 뉴클레아제
KR102701443B1 (ko) 2017-06-27 2024-09-04 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 인간화 asgr1 유전자좌를 포함하는 비인간 동물
US11866726B2 (en) 2017-07-14 2024-01-09 Editas Medicine, Inc. Systems and methods for targeted integration and genome editing and detection thereof using integrated priming sites
US11732274B2 (en) 2017-07-28 2023-08-22 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for evolving base editors using phage-assisted continuous evolution (PACE)
KR20200033259A (ko) 2017-07-31 2020-03-27 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 생체내에서 CRISPR/Cas-매개된 파괴 또는 삭제 및 외인성 도너 핵산과의 CRISPR/Cas-유도된 재조합을 평가하기 위한 방법 및 조성물
US11130999B2 (en) 2017-07-31 2021-09-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cas-ready mouse embryonic stem cells and mice and uses thereof
US11319532B2 (en) 2017-08-30 2022-05-03 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising Gam
EP3585162B1 (en) 2017-09-29 2023-08-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Rodents comprising a humanized ttr locus and methods of use
WO2019072241A1 (en) 2017-10-13 2019-04-18 Beijing Biocytogen Co., Ltd NON-HUMAN ANIMAL GENETICALLY MODIFIED WITH PD-1 HUMAN OR CHIMERIC
AU2018352592C1 (en) 2017-10-16 2025-09-25 Beam Therapeutics, Inc. Uses of adenosine base editors
AU2018366290B2 (en) 2017-11-10 2022-01-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising Slc30a8 mutation and methods of use
SG11202002456WA (en) 2017-11-30 2020-04-29 Regeneron Pharma Non-human animals comprising a humanized trkb locus
PT3720279T (pt) 2017-12-05 2022-10-06 Regeneron Pharma Ratinhos tendo uma cadeia leve lambda de imunoglobulina manipulada e seus usos
US12406749B2 (en) 2017-12-15 2025-09-02 The Broad Institute, Inc. Systems and methods for predicting repair outcomes in genetic engineering
US12121524B2 (en) * 2018-01-17 2024-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated DNA-PK inhibitors
ES2980444T3 (es) 2018-01-17 2024-10-01 Vertex Pharma Inhibidores de ADN-PK
KR20200110687A (ko) 2018-01-17 2020-09-24 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 유전체 편집 효율을 증가시키기 위한 퀴녹살리논 화합물, 조성물, 방법 및 키트
EP3740580A4 (en) 2018-01-19 2021-10-20 Duke University GENOME ENGINEERING WITH CRISPR-CAS SYSTEMS IN EUKARYONTS
US11643670B2 (en) 2018-01-29 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Methods of enhancing chromosomal homologous recombination
WO2019183123A1 (en) 2018-03-19 2019-09-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Transcription modulation in animals using crispr/cas systems
US20210071202A1 (en) 2018-03-29 2021-03-11 Jichi Medical University Genome editing method, composition, cell, cell preparation, and method for producing cell preparation
WO2019213183A1 (en) * 2018-04-30 2019-11-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania In utero crispr-mediated therapeutic editing of genes
WO2019216338A1 (ja) * 2018-05-08 2019-11-14 国立大学法人大阪大学 ホモ接合型細胞の作製方法
WO2019222545A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Synthego Corporation Methods and systems for guide rna design and use
US12157760B2 (en) 2018-05-23 2024-12-03 The Broad Institute, Inc. Base editors and uses thereof
IL318469A (en) 2018-06-14 2025-03-01 Regeneron Pharma Non-human animals capable of reorganizing transgenic DH-DH, and their uses
WO2020006423A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Editas Medicine, Inc. Synthetic guide molecules, compositions and methods relating thereto
US12522807B2 (en) 2018-07-09 2026-01-13 The Broad Institute, Inc. RNA programmable epigenetic RNA modifiers and uses thereof
AU2019327449A1 (en) 2018-08-28 2021-03-11 Flagship Pioneering Innovations Vi, Llc Methods and compositions for modulating a genome
JPWO2020050294A1 (ja) * 2018-09-05 2021-08-30 学校法人慶應義塾 相同組換え効率上昇剤及びその使用
US11845958B2 (en) * 2018-09-05 2023-12-19 Wisconsin Alumni Research Foundation Genetically modified genes and cells, and methods of using same for silencing virus gene expression
CN112969367B (zh) 2018-09-13 2023-04-07 瑞泽恩制药公司 作为c3肾小球病模型的补体因子h基因敲除大鼠
JP7250031B2 (ja) * 2018-09-25 2023-03-31 公益財団法人微生物化学研究会 新規ウイルスベクターおよびその製造方法と使用方法
WO2020092453A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The Broad Institute, Inc. Nucleobase editors comprising geocas9 and uses thereof
AU2019403015B2 (en) 2018-12-20 2024-01-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated repeat expansion
US12351837B2 (en) 2019-01-23 2025-07-08 The Broad Institute, Inc. Supernegatively charged proteins and uses thereof
CN114127285B (zh) 2019-03-19 2024-09-10 布罗德研究所股份有限公司 编辑核苷酸序列的方法和组合物
ES2966625T3 (es) * 2019-04-04 2024-04-23 Regeneron Pharma Roedores que comprenden un locus del factor de coagulación 12 humanizado
EP3956349A1 (en) 2019-04-17 2022-02-23 The Broad Institute, Inc. Adenine base editors with reduced off-target effects
JP7610339B2 (ja) 2019-06-04 2025-01-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ベータスリップ変異を有するヒト化ｔｔｒ遺伝子座を含む非ヒト動物と使用方法
AU2020289554A1 (en) 2019-06-05 2021-11-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals having a limited lambda light chain repertoire expressed from the kappa locus and uses thereof
CA3137764A1 (en) 2019-06-07 2020-12-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized albumin locus
US12435330B2 (en) 2019-10-10 2025-10-07 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for prime editing RNA
WO2021108363A1 (en) 2019-11-25 2021-06-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-mediated upregulation of humanized ttr allele
AU2021212668A1 (en) 2020-01-28 2022-08-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized PNPLA3 locus and methods of use
EP4099821A1 (en) 2020-02-07 2022-12-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <smallcaps/>? ? ?klkb1? ? ? ? ?non-human animals comprising a humanizedlocus and methods of use
US20210292754A1 (en) * 2020-03-16 2021-09-23 Pairwise Plants Services, Inc. Natural guide architectures and methods of making and using the same
US20230102342A1 (en) 2020-03-23 2023-03-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use
JP6867635B1 (ja) * 2020-04-06 2021-04-28 株式会社Logomix ゲノム改変方法及びゲノム改変キット
JP2023515710A (ja) * 2020-04-27 2023-04-13 デューク ユニバーシティ ＣＲＩＳＰＲ媒介式エクソン欠失用の最適なｇＲＮＡ対を発見するためのハイスループットスクリーニング法
DE112021002672T5 (de) 2020-05-08 2023-04-13 President And Fellows Of Harvard College Vefahren und zusammensetzungen zum gleichzeitigen editieren beider stränge einer doppelsträngigen nukleotid-zielsequenz
EP4171215A2 (en) 2020-06-26 2023-05-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising a humanized ace2 locus
CN112481297A (zh) * 2020-11-02 2021-03-12 深圳先进技术研究院 一种制造染色体结构变异的方法
KR20220064170A (ko) 2020-11-11 2022-05-18 삼성전자주식회사 이미지 센서를 포함하는 전자 장치 및 그 동작 방법
CN112382339B (zh) * 2020-11-17 2024-08-13 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种识别合子型基因激活zga基因的方法及装置
US20240317849A1 (en) 2020-12-23 2024-09-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding anchor modified antibodies and uses thereof
US20220389461A1 (en) * 2021-05-26 2022-12-08 Inscripta, Inc. Crispr editing in diploid genomes
CN113832189B (zh) * 2021-09-06 2022-10-21 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种用于敲除猪免疫球蛋白重链IGHG区的gRNA及其应用
KR20240069672A (ko) * 2021-09-24 2024-05-20 이뮤노칸 바이오테크 코포레이션 엘티디. 대규모 염색체 전달 방법 및 이를 이용한 변형 염색체 및 유기체
WO2023054573A1 (ja) * 2021-09-30 2023-04-06 国立大学法人大阪大学 相同染色体の一方に特異的なｄｎａ欠失を有する細胞を製造する方法
EP4423271A2 (en) 2021-10-28 2024-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for knocking out c5
WO2023108047A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mutant myocilin disease model and uses thereof
EP4451863A1 (en) 2021-12-20 2024-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Non-human animals comprising humanized ace2 and tmprss loci
US20250194571A1 (en) 2022-02-07 2025-06-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for defining optimal treatment timeframes in lysosomal disease
IL314673A (en) 2022-02-11 2024-10-01 Regeneron Pharma Compositions and methods for screening 4r tau targeting agents
IL317874A (en) 2022-06-24 2025-02-01 Tune Therapeutics Inc Compounds, systems and methods for reducing low density lipoproteins through targeted gene suppression
EP4593590A1 (en) 2022-09-29 2025-08-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Correction of hepatosteatosis in humanized liver animals through restoration of il6/il6r/gp130 signaling in human hepatocytes
KR20250027489A (ko) * 2023-08-16 2025-02-26 기초과학연구원 단일가닥 절단 활성을 가지는 CRISPR/Cas 시스템과 PARP 억제제를 이용하는 세포 사멸 방법
WO2025250495A1 (en) 2024-05-28 2025-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Acceleration of human hepatocyte engraftment in humanized liver animals by supplementing paracrine ligands or agonists that activate human liver regeneration signals
WO2026005012A1 (ja) * 2024-06-28 2026-01-02 学校法人自治医科大学 インビトロ及びインビボのゲノム編集における相同組換えの効率を高める方法

Family Cites Families (181)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4516228A (en) 1983-08-25 1985-05-07 Mobil Oil Corporation Acoustic well logging device for detecting compressional and shear waves
US5830729A (en) 1996-04-18 1998-11-03 Institut Pasteur I Sce I-induced gene replacement and gene conversion in embryonic stem cells
AU8587598A (en) 1997-07-26 1999-02-16 Wisconsin Alumni Research Foundation Trans-species nuclear transfer
US6372956B1 (en) 1998-12-31 2002-04-16 The J. David Gladstone Institutes Transgenic rats and rat cell lines expressing human CD4 and a human chemokine receptor
JP2002535995A (ja) 1999-02-03 2002-10-29 ザ チルドレンズ メディカル センター コーポレイション 染色体標的部位での二本鎖ｄｎａ切断の誘導を含む遺伝子修復
CA2394850C (en) 1999-12-06 2012-02-07 Sangamo Biosciences, Inc. Methods of using randomized libraries of zinc finger proteins for the identification of gene function
ATE387909T1 (de) 2000-05-31 2008-03-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Verfahren und zusammensetzungen zur behandlung von neoplastischen erkrankungen mittels chemotherapie und strahlungssensibilisatoren
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20050144655A1 (en) 2000-10-31 2005-06-30 Economides Aris N. Methods of modifying eukaryotic cells
US7105348B2 (en) 2000-10-31 2006-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6586251B2 (en) 2000-10-31 2003-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
AUPR451401A0 (en) 2001-04-20 2001-05-24 Monash University A method of nuclear transfer
US8106255B2 (en) 2002-01-23 2012-01-31 Dana Carroll Targeted chromosomal mutagenasis using zinc finger nucleases
US7612250B2 (en) 2002-07-29 2009-11-03 Trustees Of Tufts College Nuclear transfer embryo formation method
US20030175968A1 (en) 2002-10-30 2003-09-18 Golic Kent G. Gene targeting method
EP1587545A2 (en) 2003-01-13 2005-10-26 Mahendra S. Rao Persistent expression of candidate molecule in proliferating stem and progenitor cells for delivery of therapeutic products
NZ547984A (en) 2003-12-01 2009-03-31 Kudos Pharm Ltd DNA damage repair inhibitors for treatment of cancer
DK1802193T3 (da) 2004-10-19 2014-06-10 Regeneron Pharma Fremgangsmåde til frembringelse af en homozygot mus til genetisk modifikation
FR2879622B1 (fr) 2004-12-17 2008-02-01 Agronomique Inst Nat Rech Procede in vitro de production d'ovocytes ou d'oeufs presentant une modification genomique ciblee
GB0615327D0 (en) 2006-03-30 2006-09-13 Univ Edinburgh Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof
AU2007235496B2 (en) 2006-03-31 2013-11-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Transgenic animals expressing chimeric antibodies for use in preparing human antibodies
CN101117633B (zh) 2006-08-03 2011-07-20 上海交通大学附属儿童医院 一种细胞核移植方法
US7771967B2 (en) 2006-12-22 2010-08-10 The J. David Gladstone Institutes Nucleic acid encoding apolipoprotein E-I3
AU2008244473B2 (en) 2007-04-26 2013-06-20 Sangamo Therapeutics, Inc. Targeted integration into the PPP1R12C locus
EP3382022A1 (en) 2007-06-01 2018-10-03 Open Monoclonal Technology, Inc. Compositions and methods for inhibiting endogenous immunoglobulin genes and producing transgenic human idiotype antibodies
US8703489B2 (en) 2008-08-22 2014-04-22 Sangamo Biosciences, Inc. Methods and compositions for targeted single-stranded cleavage and targeted integration
CN102625655B (zh) 2008-12-04 2016-07-06 桑格摩生物科学股份有限公司 使用锌指核酸酶在大鼠中进行基因组编辑
NZ619886A (en) * 2009-08-11 2015-03-27 Sangamo Biosciences Inc Organisms homozygous for targeted modification
US8518392B2 (en) 2009-08-14 2013-08-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Promoter-regulated differentiation-dependent self-deleting cassette
CA2779337A1 (en) 2009-10-28 2011-05-05 Helmholtz Zentrum Muenchen Deutsches Forschungszentrum Fuer Gesundheit U Nd Umwelt (Gmbh) Homologous recombination in the oocyte
US20110104799A1 (en) 2009-10-29 2011-05-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional Alleles
WO2011053957A2 (en) 2009-11-02 2011-05-05 Gen9, Inc. Compositions and methods for the regulation of multiple genes of interest in a cell
JP5807862B2 (ja) 2009-12-01 2015-11-10 国立研究開発法人国立がん研究センター ラット胚性幹細胞を用いたキメララットの作製法
JP5924773B2 (ja) 2009-12-21 2016-05-25 キージーン・エン・フェー プロトプラストを形質移入するための改善された技術
AU2011207387B2 (en) 2010-01-22 2015-02-26 Corteva Agriscience Llc Excision of transgenes in genetically modified organisms
CA2788850C (en) 2010-02-09 2019-06-25 Sangamo Biosciences, Inc. Targeted genomic modification with partially single-stranded donor molecules
EP2571512B1 (en) 2010-05-17 2017-08-23 Sangamo BioSciences, Inc. Novel dna-binding proteins and uses thereof
GB201009732D0 (en) 2010-06-10 2010-07-21 Gene Bridges Gmbh Direct cloning
WO2011156723A1 (en) 2010-06-11 2011-12-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Production of fertile xy female animals from xy es cells
EP2596011B1 (en) 2010-07-21 2018-10-03 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for modification of a hla locus
WO2012018726A1 (en) 2010-08-02 2012-02-09 Cellectis Sa Method for increasing double-strand break-induced gene targeting
WO2012129198A1 (en) 2011-03-23 2012-09-27 Transposagen Biopharmaceuticals, Inc. Genetically modified rat models for obesity and diabetes
EP2718446A2 (en) 2011-06-07 2014-04-16 Helmholtz Zentrum München Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Improved recombination efficiency by inhibition of nhej dna repair
LT3424947T (lt) 2011-10-28 2021-03-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetiškai modifikuotos t ląstelių receptorių pelės
US9637739B2 (en) 2012-03-20 2017-05-02 Vilnius University RNA-directed DNA cleavage by the Cas9-crRNA complex
WO2013141680A1 (en) 2012-03-20 2013-09-26 Vilnius University RNA-DIRECTED DNA CLEAVAGE BY THE Cas9-crRNA COMPLEX
AU2013251558B2 (en) 2012-04-25 2019-01-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Nuclease-mediated targeting with large targeting vectors
EP2847338B1 (en) 2012-05-07 2018-09-19 Sangamo Therapeutics, Inc. Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes
PT3241902T (pt) 2012-05-25 2018-05-28 Univ California Métodos e composições para modificação de adn alvo dirigida por arn e para modulação dirigida por arn de transcrição
JP6279562B2 (ja) 2012-06-12 2018-02-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド 条件付きノックアウト対立遺伝子を生成するための方法および組成物
KR102530118B1 (ko) 2012-07-25 2023-05-08 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 유도 ｄｎａ 결합 단백질 및 게놈 교란 도구 및 이의 적용
JP5952141B2 (ja) * 2012-08-31 2016-07-13 京セラメディカル株式会社 人工心肺ポンプ用駆動装置
WO2014065596A1 (en) 2012-10-23 2014-05-01 Toolgen Incorporated Composition for cleaving a target dna comprising a guide rna specific for the target dna and cas protein-encoding nucleic acid or cas protein, and use thereof
CN108715602A (zh) 2012-12-06 2018-10-30 西格马-奥尔德里奇有限责任公司 基于crispr的基因组修饰和调控
SG10201707569YA (en) 2012-12-12 2017-10-30 Broad Inst Inc Delivery, Engineering and Optimization of Systems, Methods and Compositions for Sequence Manipulation and Therapeutic Applications
WO2014093655A2 (en) 2012-12-12 2014-06-19 The Broad Institute, Inc. Engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation with functional domains
EP4234696A3 (en) 2012-12-12 2023-09-06 The Broad Institute Inc. Crispr-cas component systems, methods and compositions for sequence manipulation
KR20150105634A (ko) 2012-12-12 2015-09-17 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 서열 조작을 위한 개선된 시스템, 방법 및 효소 조성물의 유전자 조작 및 최적화
WO2014093694A1 (en) 2012-12-12 2014-06-19 The Broad Institute, Inc. Crispr-cas nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation in eukaryotes
US8697359B1 (en) 2012-12-12 2014-04-15 The Broad Institute, Inc. CRISPR-Cas systems and methods for altering expression of gene products
DK3553174T3 (da) 2012-12-17 2025-08-04 Harvard College Rna-guided modificering af humant genom
DK3491915T5 (da) 2012-12-27 2024-09-02 Keygene Nv Fremgangsmåde til at inducere en målrettet translokation i en plante
WO2014127287A1 (en) 2013-02-14 2014-08-21 Massachusetts Institute Of Technology Method for in vivo tergated mutagenesis
AU2014218931C1 (en) 2013-02-20 2020-05-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genetic modification of rats
JP6491113B2 (ja) 2013-02-25 2019-03-27 サンガモ セラピューティクス， インコーポレイテッド ヌクレアーゼ媒介性遺伝子破壊を増強するための方法および組成物
EP2922393B2 (en) 2013-02-27 2022-12-28 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Gene editing in the oocyte by cas9 nucleases
US10612043B2 (en) * 2013-03-09 2020-04-07 Agilent Technologies, Inc. Methods of in vivo engineering of large sequences using multiple CRISPR/cas selections of recombineering events
NZ712727A (en) 2013-03-14 2017-05-26 Caribou Biosciences Inc Compositions and methods of nucleic acid-targeting nucleic acids
US9234213B2 (en) 2013-03-15 2016-01-12 System Biosciences, Llc Compositions and methods directed to CRISPR/Cas genomic engineering systems
US20140273230A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Sigma-Aldrich Co., Llc Crispr-based genome modification and regulation
AU2014235968B2 (en) 2013-03-21 2018-05-24 Ospedale San Raffaele Srl Targeted disruption of T cell receptor genes using engineered zinc finger protein nucleases
CN115261411A (zh) 2013-04-04 2022-11-01 哈佛学院校长同事会 利用CRISPR/Cas系统的基因组编辑的治疗性用途
HRP20181648T1 (hr) * 2013-04-16 2019-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ciljana modifikacija genoma štakora
US20160040155A1 (en) 2013-04-16 2016-02-11 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Activating an alternative pathway for homology-directed repair to stimulate targeted gene correction and genome engineering
WO2014172470A2 (en) 2013-04-16 2014-10-23 Whitehead Institute For Biomedical Research Methods of mutating, modifying or modulating nucleic acid in a cell or nonhuman mammal
EP2796558A1 (en) 2013-04-23 2014-10-29 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Improved gene targeting and nucleic acid carrier molecule, in particular for use in plants
CA2910427C (en) 2013-05-10 2024-02-20 Sangamo Biosciences, Inc. Delivery methods and compositions for nuclease-mediated genome engineering
WO2014191518A1 (en) 2013-05-29 2014-12-04 Cellectis A method for producing precise dna cleavage using cas9 nickase activity
US20140359795A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Recombinetics, Inc. Genetic techniques for making animals with sortable sperm
US9982277B2 (en) 2013-06-11 2018-05-29 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for target DNA modification
WO2014204725A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Optimized crispr-cas double nickase systems, methods and compositions for sequence manipulation
JP6738728B2 (ja) 2013-06-17 2020-08-19 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 肝臓ターゲティングおよび治療のためのＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系、ベクターおよび組成物の送達および使用
WO2014204724A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Delivery, engineering and optimization of tandem guide systems, methods and compositions for sequence manipulation
BR112015031611A2 (pt) 2013-06-17 2017-12-12 Massachusetts Inst Technology aplicação, manipulação e otimização de sistemas, métodos e composições para direcionamento e modelação de doenças e distúrbios de células pós-mitóticas
AU2014281031B2 (en) 2013-06-17 2020-05-21 Massachusetts Institute Of Technology Delivery, use and therapeutic applications of the CRISPR-Cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using viral components
WO2014204723A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 The Broad Institute Inc. Oncogenic models based on delivery and use of the crispr-cas systems, vectors and compositions
WO2014205192A2 (en) 2013-06-19 2014-12-24 Sigma-Aldrich Co. Llc Targeted integration
US10011850B2 (en) 2013-06-21 2018-07-03 The General Hospital Corporation Using RNA-guided FokI Nucleases (RFNs) to increase specificity for RNA-Guided Genome Editing
WO2015006498A2 (en) 2013-07-09 2015-01-15 President And Fellows Of Harvard College Therapeutic uses of genome editing with crispr/cas systems
US11060083B2 (en) 2013-07-19 2021-07-13 Larix Bioscience Llc Methods and compositions for producing double allele knock outs
US9663782B2 (en) 2013-07-19 2017-05-30 Larix Bioscience Llc Methods and compositions for producing double allele knock outs
CN105705188A (zh) 2013-07-24 2016-06-22 梅迪克艾克提乌销售有限公司 可更换盒
US10563225B2 (en) 2013-07-26 2020-02-18 President And Fellows Of Harvard College Genome engineering
MX2016002118A (es) * 2013-08-22 2016-06-28 Du Pont Modificacion del genoma de plantas por medio del uso de sistemas de ácido ribonucléico (arn) guía/ endonucleasa cas y metodos de uso.
CA2922428A1 (en) 2013-08-29 2015-03-05 Temple University Of The Commonwealth System Of Higher Education Methods and compositions for rna-guided treatment of hiv infection
EP3842528A1 (en) 2013-09-18 2021-06-30 Kymab Limited Methods, cells and organisms
WO2015048690A1 (en) 2013-09-27 2015-04-02 The Regents Of The University Of California Optimized small guide rnas and methods of use
WO2015048577A2 (en) 2013-09-27 2015-04-02 Editas Medicine, Inc. Crispr-related methods and compositions
WO2015052231A2 (en) 2013-10-08 2015-04-16 Technical University Of Denmark Multiplex editing system
CN116836957A (zh) 2013-10-17 2023-10-03 桑格摩生物科学股份有限公司 用于核酸酶介导的基因组工程改造的递送方法和组合物
US20160264995A1 (en) 2013-11-06 2016-09-15 Hiroshima University Vector for Nucleic Acid Insertion
WO2015070083A1 (en) 2013-11-07 2015-05-14 Editas Medicine,Inc. CRISPR-RELATED METHODS AND COMPOSITIONS WITH GOVERNING gRNAS
US10787684B2 (en) 2013-11-19 2020-09-29 President And Fellows Of Harvard College Large gene excision and insertion
EP3074515B1 (en) 2013-11-28 2018-11-14 Horizon Discovery Limited Somatic haploid human cell line
MX388127B (es) 2013-12-11 2025-03-19 Regeneron Pharma Metodos y composiciones para la modificacion dirigida de un genoma.
WO2015089473A1 (en) 2013-12-12 2015-06-18 The Broad Institute Inc. Engineering of systems, methods and optimized guide compositions with new architectures for sequence manipulation
JP2017527256A (ja) 2013-12-12 2017-09-21 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド ＨＢＶ及びウイルス性疾患及び障害のためのＣＲＩＳＰＲ−Ｃａｓ系及び組成物の送達、使用及び治療適用
JP2017501149A (ja) 2013-12-12 2017-01-12 ザ・ブロード・インスティテュート・インコーポレイテッド 粒子送達構成成分を用いた障害及び疾患の標的化のためのｃｒｉｓｐｒ−ｃａｓ系及び組成物の送達、使用及び治療適用
KR20160097327A (ko) 2013-12-12 2016-08-17 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 유전자 산물, 구조 정보 및 유도성 모듈형 ｃａｓ 효소의 발현의 변경을 위한 ｃｒｉｓｐｒ-ｃａｓ 시스템 및 방법
MX2016007325A (es) 2013-12-12 2017-07-19 Broad Inst Inc Composiciones y metodos de uso de sistemas crispr-cas en desordenes debidos a repeticion de nucleotidos.
MX374529B (es) 2013-12-12 2025-03-06 Broad Inst Inc Suministro, uso y aplicaciones terapeuticas de sistemas y composiciones crispr-cas para edicion del genoma.
AU2014368982B2 (en) 2013-12-19 2021-03-25 Amyris, Inc. Methods for genomic integration
JP6747974B2 (ja) 2014-01-08 2020-08-26 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ Ｒｎａ誘導型遺伝子ドライブ
US10034463B2 (en) 2014-01-24 2018-07-31 Children's Medical Center Corporation High-throughput mouse model for optimizing antibody affinities
US10233456B2 (en) 2014-01-30 2019-03-19 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Method, vectors, cells, seeds and kits for stacking genes into a single genomic site
US20150291969A1 (en) 2014-01-30 2015-10-15 Chromatin, Inc. Compositions for reduced lignin content in sorghum and improving cell wall digestibility, and methods of making the same
EP3114227B1 (en) 2014-03-05 2021-07-21 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating usher syndrome and retinitis pigmentosa
US9938521B2 (en) 2014-03-10 2018-04-10 Editas Medicine, Inc. CRISPR/CAS-related methods and compositions for treating leber's congenital amaurosis 10 (LCA10)
ES2821149T3 (es) 2014-03-12 2021-04-23 Prec Biosciences Inc Eliminación del exón del gen de la distrofina mediante nucleasas modificadas genéticamente
HRP20240186T1 (hr) 2014-03-14 2024-05-10 Cibus Us Llc Postupci i kompozicije za povećanje efikasnosti ciljane modifikacije gena korištenjem reparacije gena posredovane oligonukleotidima
CA2943794C (en) 2014-03-26 2023-01-24 University Of Maryland, College Park Targeted genome editing in zygotes of domestic large animals
GB201406968D0 (en) 2014-04-17 2014-06-04 Green Biologics Ltd Deletion mutants
KR101823661B1 (ko) 2014-04-24 2018-01-30 기초과학연구원 마이크로 상동 기반의 유전자 녹아웃을 위한 뉴클레아제 표적 서열을 확인하는 방법
GB201407852D0 (en) 2014-05-02 2014-06-18 Iontas Ltd Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules
US20170088819A1 (en) 2014-05-16 2017-03-30 Vrije Universiteit Brussel Genetic correction of myotonic dystrophy type 1
KR20170005494A (ko) 2014-05-30 2017-01-13 더 보드 어브 트러스티스 어브 더 리랜드 스탠포드 주니어 유니버시티 잠복 바이러스 감염에 대한 치료제를 전달하는 조성물 및 방법
CA2950173C (en) 2014-06-06 2023-10-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for modifying a targeted locus
BR112016029178A2 (pt) 2014-06-16 2017-10-17 Univ Johns Hopkins composições e métodos para a expressão de rnas guia de crispr usando o promotor h1
KR102386101B1 (ko) 2014-06-26 2022-04-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 표적화된 유전자 변형을 위한 방법 및 그 조성물, 및 사용 방법
CA2954414A1 (en) 2014-07-15 2016-01-21 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells for adoptive cell therapy
EP3193944B1 (en) 2014-07-17 2021-04-07 University of Pittsburgh - Of the Commonwealth System of Higher Education Methods of treating cells containing fusion genes
US9944933B2 (en) 2014-07-17 2018-04-17 Georgia Tech Research Corporation Aptamer-guided gene targeting
SG11201701245QA (en) 2014-08-27 2017-03-30 Caribou Biosciences Inc Methods for increasing cas9-mediated engineering efficiency
WO2016036754A1 (en) 2014-09-02 2016-03-10 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for rna-directed target dna modification
WO2016049024A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for modeling competition of multiple cancer mutations in vivo
WO2016049163A2 (en) 2014-09-24 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Use and production of chd8+/- transgenic animals with behavioral phenotypes characteristic of autism spectrum disorder
WO2016049258A2 (en) 2014-09-25 2016-03-31 The Broad Institute Inc. Functional screening with optimized functional crispr-cas systems
JP2017534295A (ja) 2014-09-29 2017-11-24 ザ ジャクソン ラボラトリー エレクトロポレーションによる遺伝子改変哺乳動物の高効率ハイスループット生成
IL287561B2 (en) 2014-10-01 2024-03-01 Massachusetts Gen Hospital Methods for increasing efficiency of nuclease-induced homology-directed repair
EP3204496A1 (en) 2014-10-10 2017-08-16 Editas Medicine, Inc. Compositions and methods for promoting homology directed repair
WO2016061073A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Composition and method for in vivo engineering of chromosomal rearrangements
PL3207124T3 (pl) 2014-10-15 2019-11-29 Regeneron Pharma Sposoby i kompozycje do wytwarzania lub utrzymywania komórek pluripotencjalnych
WO2016061481A1 (en) 2014-10-17 2016-04-21 The Penn State Research Foundation Methods and compositions for multiplex rna guided genome editing and other rna technologies
WO2016065364A1 (en) 2014-10-24 2016-04-28 Life Technologies Corporation Compositions and methods for enhancing homologous recombination
US12180263B2 (en) 2014-11-06 2024-12-31 President And Fellows Of Harvard College Cells lacking B2M surface expression and methods for allogeneic administration of such cells
WO2016073990A2 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Editas Medicine, Inc. Methods for improving crispr/cas-mediated genome-editing
ES2731437T3 (es) 2014-11-21 2019-11-15 Regeneron Pharma Métodos y composiciones para la modificación genética dirigida mediante el uso de pares de ARN guías
KR20170081268A (ko) 2014-11-27 2017-07-11 단지거 이노베이션즈 엘티디. 게놈 편집용 핵산 구조체
WO2016089866A1 (en) 2014-12-01 2016-06-09 President And Fellows Of Harvard College Rna-guided systems for in vivo gene editing
WO2016094880A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Delivery, use and therapeutic applications of crispr systems and compositions for genome editing as to hematopoietic stem cells (hscs)
EP3230452B1 (en) 2014-12-12 2025-06-11 The Broad Institute, Inc. Dead guides for crispr transcription factors
WO2016094874A1 (en) 2014-12-12 2016-06-16 The Broad Institute Inc. Escorted and functionalized guides for crispr-cas systems
WO2016097751A1 (en) 2014-12-18 2016-06-23 The University Of Bath Method of cas9 mediated genome engineering
CN107208113A (zh) 2014-12-19 2017-09-26 瑞泽恩制药公司 用于通过单步多重靶向进行靶向遗传修饰的方法和组合物
JPWO2016104716A1 (ja) 2014-12-26 2017-10-05 国立研究開発法人理化学研究所 遺伝子のノックアウト方法
WO2016112242A1 (en) 2015-01-08 2016-07-14 President And Fellows Of Harvard College Split cas9 proteins
WO2016112351A1 (en) 2015-01-09 2016-07-14 Bio-Rad Laboratories, Inc. Detection of genome editing
CN107429263A (zh) 2015-01-15 2017-12-01 斯坦福大学托管董事会 调控基因组编辑的方法
WO2016130697A1 (en) 2015-02-11 2016-08-18 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Methods and kits for generating vectors that co-express multiple target molecules
SG11201706766WA (en) 2015-02-23 2017-09-28 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of hemoglobinopathies
WO2016135559A2 (en) 2015-02-23 2016-09-01 Crispr Therapeutics Ag Materials and methods for treatment of human genetic diseases including hemoglobinopathies
GB2535532B (en) 2015-02-23 2021-05-12 Knorr Bremse Systeme Fuer Nutzfahrzeuge Gmbh Brake valve arrangement
EP3265560B1 (en) 2015-03-02 2021-12-08 Sinai Health System Homologous recombination factors
GB201504223D0 (en) 2015-03-12 2015-04-29 Genome Res Ltd Biallelic genetic modification
EP3274453B1 (en) 2015-03-26 2021-01-27 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-mediated gene conversion
JP2018510657A (ja) 2015-03-27 2018-04-19 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ 改変ｔ細胞ならびにそれを作製および使用する方法
EP3277816B1 (en) 2015-04-01 2020-06-17 Editas Medicine, Inc. Crispr/cas-related methods and compositions for treating duchenne muscular dystrophy and becker muscular dystrophy
US10155938B2 (en) 2015-04-14 2018-12-18 City Of Hope Coexpression of CAS9 and TREX2 for targeted mutagenesis
CN107709545A (zh) 2015-04-22 2018-02-16 吉纳知识产权控股私人有限公司 从干细胞生成肌肉谱系细胞
EP3289081B1 (en) 2015-04-27 2019-03-27 Genethon Compositions and methods for the treatment of nucleotide repeat expansion disorders
EP3289080B1 (en) 2015-04-30 2021-08-25 The Trustees of Columbia University in the City of New York Gene therapy for autosomal dominant diseases
CN118879692A (zh) 2015-05-16 2024-11-01 建新公司 深内含子突变的基因编辑
US9790490B2 (en) 2015-06-18 2017-10-17 The Broad Institute Inc. CRISPR enzymes and systems
EP4491732A3 (en) 2015-10-08 2025-03-26 President and Fellows of Harvard College Multiplexed genome editing
JP2018531024A (ja) 2015-10-20 2018-10-25 パイオニア ハイ−ブレッド インターナショナル， イン マーカーフリーゲノム改変のための方法および組成物
CA3004497A1 (en) 2015-11-06 2017-05-11 The Jackson Laboratory Large genomic dna knock-in and uses thereof
EP3433363A1 (en) 2016-03-25 2019-01-30 Editas Medicine, Inc. Genome editing systems comprising repair-modulating enzyme molecules and methods of their use
WO2017173004A1 (en) 2016-03-30 2017-10-05 Mikuni Takayasu A method for in vivo precise genome editing
EP3443080B1 (en) 2016-04-13 2021-08-11 University of Massachusetts Repairing compound heterozygous recessive mutations by allele exchange
CN113831407B (zh) 2016-05-20 2024-06-11 瑞泽恩制药公司 用于使用多个引导rna来破坏免疫耐受性的方法
US11643670B2 (en) 2018-01-29 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Methods of enhancing chromosomal homologous recombination

Also Published As

Publication number Publication date
SG11201703747RA (en) 2017-06-29
KR20170102234A (ko) 2017-09-08
CN113444747B (zh) 2025-02-11
RS58893B1 (sr) 2019-08-30
US10457960B2 (en) 2019-10-29
KR20230070319A (ko) 2023-05-22
LT3221457T (lt) 2019-06-10
IL283585B2 (en) 2023-09-01
US20230332185A1 (en) 2023-10-19
KR102531016B1 (ko) 2023-05-10
AU2021290301B2 (en) 2024-02-29
IL252181A0 (en) 2017-07-31
IL301900A (en) 2023-06-01
AU2015349692B2 (en) 2021-10-28
US20200002731A1 (en) 2020-01-02
KR20220093013A (ko) 2022-07-04
MX389266B (es) 2025-03-20
AU2015349692A1 (en) 2017-06-08
AU2021290301A1 (en) 2022-01-27
ES2731437T3 (es) 2019-11-15
DK3221457T3 (da) 2019-06-03
WO2016081923A3 (en) 2016-07-07
CA2968440A1 (en) 2016-05-26
RU2017121367A3 (ru) 2019-11-05
WO2016081923A2 (en) 2016-05-26
JP2020191880A (ja) 2020-12-03
MX2022000378A (es) 2022-02-10
RU2020134412A (ru) 2020-11-11
US20200002730A1 (en) 2020-01-02
MX2017006670A (es) 2018-03-01
US20160145646A1 (en) 2016-05-26
EP3221457A2 (en) 2017-09-27
SI3221457T1 (sl) 2019-08-30
IL283585A (en) 2021-07-29
JP7101211B2 (ja) 2022-07-14
CY1121738T1 (el) 2020-07-31
PL3221457T3 (pl) 2019-09-30
BR112017010547A2 (pt) 2018-02-27
CA3176380A1 (en) 2016-05-26
CN113444747A (zh) 2021-09-28
SG10201913829YA (en) 2020-03-30
SMT201900354T1 (it) 2019-07-11
CN107208078B (zh) 2021-07-16
EP3521437B1 (en) 2025-01-15
IL283585B1 (en) 2023-05-01
EP3521437C0 (en) 2025-01-15
RU2734770C2 (ru) 2020-10-23
EP3521437A1 (en) 2019-08-07
PT3221457T (pt) 2019-06-27
HRP20190949T1 (hr) 2019-07-26
HUE044907T2 (hu) 2019-11-28
JP6727199B2 (ja) 2020-07-22
KR102415093B1 (ko) 2022-07-04
KR102683423B1 (ko) 2024-07-10
CN107208078A (zh) 2017-09-26
NZ731962A (en) 2022-07-01
US11697828B2 (en) 2023-07-11
IL252181B (en) 2021-06-30
ES3013183T3 (en) 2025-04-11
JP2017535271A (ja) 2017-11-30
EP3221457B1 (en) 2019-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2017121367A (ru) Способы и композиции для нацеленной генетической модификации с использованием парных гидовых рнк
JP2017535271A5 (ru)
JP6840077B2 (ja) 単一ステップの複数標的化を通じた標的化された遺伝子修飾のための方法及び組成物
RU2016126989A (ru) Способы и композиции для направленной модификации генома
JP2017538428A5 (ru)
JP2022522019A (ja) 単一塩基編集による非標的な単一ヌクレオチド変異及び当該変異を避ける高特異性オフターゲットのない単一塩基遺伝子編集ツール
Terol et al. Involvement of a citrus meiotic recombination TTC-repeat motif in the formation of gross deletions generated by ionizing radiation and MULE activation
CN114747541B (zh) 一种psgl-1人源化非人类动物模型的构建方法及应用
CA3171406A1 (en) Optimised methods for cleavage of target sequences
JP7672012B2 (ja) 相同染色体の一方に特異的なｄｎａ欠失を有する細胞を製造する方法
US20190218544A1 (en) Gene editing, identifying edited cells, and kits for use therein
EP3374510B1 (en) Tissue selective transgene expression
WO2024204215A1 (ja) 相同染色体の一方のＣｏｌ７ａ遺伝子に特異的なＤＮＡ欠失を有する細胞を製造する方法
Prykhozhij et al. Successful optimization of CRISPR/Cas9-mediated defined point mutation knock-in using allele-specific PCR assays in zebrafish
HK40009103A (en) Methods for targeted genetic modification using paired guide rnas
Sumiyama et al. For Mol. Biol. Evol. Letters Loss-of–function mutation in a repressor module of human-specifically activated enhancer HACNS1
EP3243906A1 (en) Tissue selective transgene expression
RU2019132992A (ru) Способы и композиции для модификации целевого локуса