RU2015131279A

RU2015131279A - Композиции клеток, полученные из дедифференцированных перепрограммированных клеток

Info

Publication number: RU2015131279A
Application number: RU2015131279A
Authority: RU
Inventors: Алан Д. Агулник; Оливия КЕЛЛИ; Юки ОХИ; Аллан РОБИНС; Томас ШУЛЬЦ
Original assignee: Виасайт, Инк.
Priority date: 2013-02-06
Filing date: 2014-02-06
Publication date: 2017-03-13
Also published as: CA2898431C; RU2675928C2; AU2023202507A1; IL311689A; IL283088B; IL290717B2; AU2022200075A1; WO2014124172A1; IL283088A; JP2019146578A; AU2022200075C1; IL290717B1; JP6517702B2; IL311689B1; RU2018144412A3; AU2019201314B2; CA3212301A1; JP2023017838A; IL239953A0; JP2016506736A

Claims

1. Популяция панкреатических энтодермальных клеток человека in vitro, включающая дифференцированные клетки, полученные из дедифференцированных генетически перепрограммированных клеток, и агент, активирующий рецептор ERBB тирозинкиназы.

2. Популяция панкреатических энтодермальных клеток по п. 1, где агент, активирующий рецептор ERBB тирозинкиназы, включает фактор роста или лиганд EGF.

3. Популяция панкреатических энтодермальных клеток по п. 2, где фактор роста или лиганд EGF включает изоформу херегулина, выбранную из группы, состоящей из херегулина-1, херегулина-2, и херегулина 3 и херегулина-4.

4. Популяция панкреатических энтодермальных клеток по п. 3, где изоформа херегулина включает херегулин-1 и херегулин-4.

5. Популяция панкреатических энтодермальных клеток по п. 3, где лиганд изоформы херегулина включает херегулин-4.

6. Способ получения инсулина, включающий этапы:

(a) обеспечения контакта культуры клеток энтодермы передней части пищеварительного тракта, полученных из дедифференцированных генетически перепрограммированных клеток in vitro, с агентом, активирующим рецептор ERBB тирозинкиназы, с получением, таким образом, популяции клеток, включающей субпопуляции эндокринных клеток и не-эндокринных клеток; и

(b) созревания субпопуляций, полученных на этапе (a), in vivo, с получением, таким образом, инсулин-секретирующих клеток, которые секретируют инсулин в ответ на стимуляцию глюкозой.

7. Способ по п. 6, дополнительно включающий обеспечение контакта культуры клеток энтодермы передней части пищеварительного тракта с ингибитором rho-киназы.

8. Способ по п. 7, где ингибитор rho-киназы выбран из группы, состоящей из Y-27632, Fasudil, Н-1152Р, Wf-536, Y-30141, антисмысловых нуклеиновых кислот для ROCK; нуклеиновой кислоты, индуцирующей интерференцию РНК; конкурирующих пептидов, пептидов-антагонистов, ингибирующих антител, ScFV-фрагментов антител, доминантно-негативных вариантов, их производных и векторов экспрессии.

9. Способ по п. 7, где ингибитор rho-киназы выбран из группы, состоящей из Y-27632, Fasudil, H-1152P, Wf-536, Y-30141 и их производных.

10. Способ по п. 9, где ингибитор rho-киназы выбран из группы, состоящей из Y-27632, Fasudil, Н-1152Р и их производных.

11. Способ получения инсулина, включающий этапы:

(a) обеспечения контакта дедифференцированных генетически перепрограммированных клеток in vitro с первой средой, содержащей агент, активирующий член семейства рецепторов TGFP;

(b) культивирования in vitro клеток, полученных на этапе (а), во второй среде, не содержащей агент, активирующий член семейства рецепторов TGFP, с получением, таким образом, клеток энтодермы передней части пищеварительного тракта;

(c) обеспечения контакта клеток энтодермы передней части пищеварительного тракта, полученных на этапе (b), с агентом, активирующим тирозинкиназный рецептор ERBB, с получением, таким образом, популяции клеток, содержащей субпопуляции эндокринных клеток и не-эндокринных клеток; и

(d) созревания субпопуляций клеток, полученных на этапе (с), in vivo, с получением, таким образом, инсулин-секретирующих клеток, где инсулин-секретирующие клетки секретируют инсулин в ответ на стимуляцию глюкозой.

12. Способ по п. 11, где неэндокринные клетки являются CHGA-негативными (CHGA-) клетками.

13. Способ по п. 11, где эндокринные клетки являются CHGA-позитивными (CHGA+) клетками.

14. Способ по п. 11, где CHGA-негативные (CHGA-) клетки дополнительно экспрессируют NKX6.1.

15. Способ по п. 11, дополнительно включающий обеспечение контакта клеток энтодермы передней части пищеварительного тракта с ингибитором rho-киназы.

16. Способ по п. 15, где ингибитор rho-киназы выбран из группы, состоящей из Y-27632, Fasudil, Н-1152Р, Wf-536, Y-30141, антисмысловых нуклеиновых кислот для ROCK; нуклеиновой кислоты, индуцирующей интерференцию РНК; конкурирующих пептидов, пептидов-антагонистов, ингибирующих антител, ScFV-фрагментов антител, доминантно-негативных вариантов, их производных и векторов экспрессии.