RU2011137030A

RU2011137030A - Способы очистки малых модулярных иммунофармацевтических белков

Info

Publication number: RU2011137030A
Application number: RU2011137030/10A
Authority: RU
Inventors: Кристофер ГАЛЛО; Шуджюн СУН; Джеймс Эдвард БУС; Джейсон КОРМЬЕ; Дэниэл ЛЯКАСС; Аарон НВАЕЗ
Original assignee: УАЙТ ЭлЭлСи
Priority date: 2009-03-11
Filing date: 2010-03-11
Publication date: 2013-04-20
Also published as: JP2010209068A; CA2751000A1; AU2010260476A1; BRPI1009447A2; IL215082A0; KR20110139216A; US20120141497A1; EP2406274A2; CN102395597A; WO2010147686A2; WO2010147686A3

Abstract

1. Способ очистки малого модулярного иммунофармацевтического белка от белкового препарата, содержащего высокомолекулярные агрегаты, включающий стадию хроматографии белкового препарата на колонке с гидроксиапатитом в эксплуатационных условиях, таким образом, что очищенный малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит менее 4% агрегатов.2. Способ по п.1, где способ включает не более 3 хроматографических стадий.3. Способ по п.1 или 2, где эксплуатационное условие включает элюирование малого модулярного иммунофармацевтического белка из хроматографической колонки с гидроксиапатитом в фосфатном буфере.4. Способ по п.3, где фосфатный буфер содержит фосфат натрия в концентрации в диапазоне от 1 мМ до 50 мМ.5. Способ по п.3, где фосфатный буфер дополнительно содержит хлорид натрия в концентрации в диапазоне от 100 мМ до 2,5 М.6. Способ по п.3, где фосфатный буфер содержит фосфат натрия в концентрации в диапазоне от 2 мМ до 32 мМ и хлорид натрия при концентрации в диапазоне от 100 мМ до 1,6 М.7. Способ по п.3, где фосфатный буфер имеет значение рН в диапазоне от 6,5 до 8,5.8. Способ по п.1, где эксплуатационное условие включает элюирование малого модулярного иммунофармацевтического белка из хроматографической колонки с гидроксиапатитом при помощи NaCl или фосфатного градиента.9. Способ по п.1, где способ дополнительно включает стадию очистки белкового препарата при помощи аффинной хроматографии перед проведением хроматографии на колонке с гидроксиапатитом.10. Способ по п.9, где аффинная хроматография включает хроматографию белка А.11. Способ по п.1, где способ дополнительно включает стадию очистки белкового препарата при помощи ионнооб

Claims

1. Способ очистки малого модулярного иммунофармацевтического белка от белкового препарата, содержащего высокомолекулярные агрегаты, включающий стадию хроматографии белкового препарата на колонке с гидроксиапатитом в эксплуатационных условиях, таким образом, что очищенный малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит менее 4% агрегатов.

2. Способ по п.1, где способ включает не более 3 хроматографических стадий.

3. Способ по п.1 или 2, где эксплуатационное условие включает элюирование малого модулярного иммунофармацевтического белка из хроматографической колонки с гидроксиапатитом в фосфатном буфере.

4. Способ по п.3, где фосфатный буфер содержит фосфат натрия в концентрации в диапазоне от 1 мМ до 50 мМ.

5. Способ по п.3, где фосфатный буфер дополнительно содержит хлорид натрия в концентрации в диапазоне от 100 мМ до 2,5 М.

6. Способ по п.3, где фосфатный буфер содержит фосфат натрия в концентрации в диапазоне от 2 мМ до 32 мМ и хлорид натрия при концентрации в диапазоне от 100 мМ до 1,6 М.

7. Способ по п.3, где фосфатный буфер имеет значение рН в диапазоне от 6,5 до 8,5.

8. Способ по п.1, где эксплуатационное условие включает элюирование малого модулярного иммунофармацевтического белка из хроматографической колонки с гидроксиапатитом при помощи NaCl или фосфатного градиента.

9. Способ по п.1, где способ дополнительно включает стадию очистки белкового препарата при помощи аффинной хроматографии перед проведением хроматографии на колонке с гидроксиапатитом.

10. Способ по п.9, где аффинная хроматография включает хроматографию белка А.

11. Способ по п.1, где способ дополнительно включает стадию очистки белкового препарата при помощи ионнообменной хроматографии с использованием анионообменной хроматографической смолы.

12. Способ по любому из пп.9-11, где способ дополнительно включает стадию очистки белкового препарата при помощи ионнообменной хроматографии после проведения аффинной хроматографии, но перед проведением хроматографии на колонке с гидроксиапатитом.

13. Способ по п.1, где очищенный малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит менее 2% агрегатов.

14. Способ по п.1, где белковый препарат содержит более 10% высокомолекулярных агрегатов.

15. Способ по п.1, где малый модулярный иммунофармацевтический белок специфично связывает CD20.

16. Способ по п.15, где малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит аминокислотную последовательность, имеющую как минимум 80% идентичности любой из SEQ ID NOs:1-59 и 67-76.

17. Способ очистки малого модулярного иммунофармацевтического белка от белкового препарата, содержащего высокомолекулярные агрегаты, где способ включает подвергание белкового препарата (а) аффинной хроматографии и/или ионнообменной хроматографии, и (b) хроматографии на колонке с гидроксиапатитом в эксплуатационных условиях, таким образом, что очищенный малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит менее 4% агрегатов.

18. Малый модулярный иммунофармацевтический белок, очищенный при помощи способа в соответствии с п.1.

19. Способ очистки белка от белкового препарата, содержащего более 20% высокомолекулярных агрегатов, включающий стадию хроматографии белкового препарата на колонке с гидроксиапатитом в эксплуатационных условиях, таким образом, что очищенный белок содержит менее 4% агрегатов, где эксплуатационные условия включают элюирование белка из хроматографической колонки с гидроксиапатитом в фосфатному буфере и где фосфатный буфер содержит фосфат натрия в концентрации в интервале от 2 мМ до 32 мМ и хлорид натрия в концентрации в интервале от 100 мМ до 1,6 М.

20. Фармацевтическая композиция, содержащая малый модулярный иммунофармацевтический белок и фармацевтически приемлемый носитель, где малый модулярный иммунофармацевтический белок содержит менее 4% высокомолекулярных агрегатов.