Claims (26)
1. Вариант исходной альфа-амилазы TS-23 Bacillus sp., где вариант обладает 90% идентичностью с SEQ ID NO: 4, и где указанный вариант содержит по меньшей мере два из а), b) или с), как представлено в SEQ ID NO: 1, и необязательно любое одно или несколько из d)-k):1. A variant of the original alpha-amylase TS-23 Bacillus sp., Where the variant has 90% identity with SEQ ID NO: 4, and where the specified variant contains at least two of a), b) or c), as presented in SEQ ID NO: 1, and optionally any one or more of d) -k):
a) укорочение С-конца;a) shortening of the C-terminus;
b) делеция R180 и/или S181;b) a deletion of R180 and / or S181;
c) M201L;c) M201L;
d) замена Q87 на Е, R;d) replacing Q87 with E, R;
e) замена N225 на Е, R;e) replacement of N225 with E, R;
f) замена N272 на Е или R;f) replacement of N272 with E or R;
g) замена N282 на Е или R;g) replacement of N282 with E or R;
h) делеция Т 182;h) a deletion of T 182;
i) делеция G183;i) deletion of G183;
j) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E и К444Е; илиj) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E and K444E; or
k) S243Q, А, Е, D.k) S243Q, A, E, D.
2. Вариант по по п.1, где вариант имеет аминокислотную последовательность, которая обладает по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4 и содержит делецию ARS в положениях 180-181 в SEQ ID NO: 4 и M201L в SEQ ID NO: 4, и по меньшей мере одно из следующего:2. The variant according to claim 1, where the variant has an amino acid sequence that has at least about 90% sequence identity with SEQ ID NO: 4 and contains a deletion of ARS at positions 180-181 in SEQ ID NO: 4 and M201L in SEQ ID NO: 4, and at least one of the following:
a) замена Q87 на Е, R;a) replacing Q87 with E, R;
b) замена N225 на Е, R;b) replacement of N225 with E, R;
c) замена N272 на Е или R;c) replacement of N272 with E or R;
d) замена N282 на Е или R;d) replacement of N282 with E or R;
е) делеция Т182;e) deletion of T182;
f) делеция G183;f) deletion of G183;
g) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E и К444Е; илиg) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E and K444E; or
h) S243Q, А, Е, D.h) S243Q, A, E, D.
3. Вариант по п.1, где указанный вариант обладает по меньшей мере приблизительно 95% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4.3. The variant according to claim 1, where the specified variant has at least approximately 95% sequence identity with SEQ ID NO: 4.
4. Вариант по п.3, где указанный вариант обладает по меньшей мере приблизительно 98% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 4.4. The variant according to claim 3, where the specified variant has at least approximately 98% sequence identity with SEQ ID NO: 4.
5. Вариант по п.1, где указанный вариант обладает следующими характеристиками:5. The option according to claim 1, where the specified option has the following characteristics:
a) для ферментативной активности требуется менее чем 60 м.д. ионов кальция;a) less than 60 ppm is required for enzymatic activity calcium ions;
b) улучшенная устойчивость к окислению относительно исходной альфа-амилазы TS-23 Bacillus sp.; и/илиb) improved oxidation stability relative to the starting alpha-amylase TS-23 of Bacillus sp .; and / or
c) повышенная термостабильность относительно исходной альфа-амилазы TS-23 Bacillus sp.c) increased thermal stability relative to the starting alpha-amylase TS-23 of Bacillus sp.
6. Вариант по п.1, где укорочение С-конца составляет от 1 аминокислоты до 100 аминокислот.6. The variant according to claim 1, where the shortening of the C-end is from 1 amino acid to 100 amino acids.
7. Выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая вариант исходной альфа-амилазы TS-23 Bacillus sp., где указанный вариант содержит по меньшей мере а), b) или с) и необязательно любой один или несколько из d)-k):7. An isolated nucleic acid encoding a variant of the starting alpha-amylase TS-23 of Bacillus sp., Wherein said variant contains at least a), b) or c) and optionally any one or more of d) -k):
a) укорочение С-конца;a) shortening of the C-terminus;
b) делеция R180 и/или S181;b) a deletion of R180 and / or S181;
c) M201L;c) M201L;
d) замена Q87 на Е, R;d) replacing Q87 with E, R;
e) замена N225 на Е, R;e) replacement of N225 with E, R;
f) замена N272 на Е или R;f) replacement of N272 with E or R;
g) замена N282 на Е или R;g) replacement of N282 with E or R;
h) делеция Т182;h) deletion of T182;
i) делеция G183;i) deletion of G183;
j) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E и К444Е;j) Q98R, M201L, S243Q, R309A, Q320R, Q359E and K444E;
k) S243Q, А, Е, D; илиk) S243Q, A, E, D; or
соответствующий SEQ ID NO: 1 и обладающий по меньшей мере приблизительно 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1, и где указанный вариант проявляет активность альфа-амилазы.corresponding to SEQ ID NO: 1 and having at least about 90% sequence identity with SEQ ID NO: 1, and wherein said variant exhibits alpha-amylase activity.
8. Выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариант по любому из пп.1-6.8. An isolated nucleic acid containing a nucleic acid sequence that encodes a variant according to any one of claims 1 to 6.
9. Выделенная нуклеиновая кислота по п.8, где указанная нуклеиновая кислота состоит из последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует вариант.9. The isolated nucleic acid of claim 8, wherein said nucleic acid consists of a nucleic acid sequence that encodes a variant.
10. Вектор, содержащий нуклеиновую кислоту по любому из пп.7 и 8.10. A vector containing a nucleic acid according to any one of claims 7 and 8.
11. Выделенная клетка-хозяин, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.7 и 8.11. An isolated host cell containing a nucleic acid according to any one of claims 7 and 8.
12. Выделенная клетка-хозяин, содержащая вектор по п.11, и где клетка-хозяин представляет собой прокариотический организм или эукариотический организм.12. The selected host cell containing the vector according to claim 11, and where the host cell is a prokaryotic organism or a eukaryotic organism.
13. Выделенная клетка-хозяин по п.12, представляющая собой бактерию или гриб.13. The isolated host cell of claim 12, which is a bacterium or fungus.
14. Выделенная клетка-хозяин по п.13, где бактерия представляет собой грамположительную бактерию, выбранную из группы, состоящей из Bacillus subtilis, В.licheniformis, В.lentus, В.brevis, В.stearothermophilus, В.alkalophilus, В.amyloliquefaciens, В.coagulans, В.circulans, В.lautus, В.thuringiensis, Streptomyces lividans и S.murinus; или грамотрицательную бактерию, где указанная грамотрицательная бактерия представляет собой Escherichia coli и Pseudomonas sp.14. The isolated host cell of claim 13, wherein the bacterium is a gram-positive bacterium selected from the group consisting of Bacillus subtilis, B.licheniformis, B.lentus, B. brevis, B. stearothermophilus, B. alkalophilus, B. amyloliquefaciens , B. coagulans, B. circulans, B. lautus, B. thuringiensis, Streptomyces lividans, and S. murinus; or a gram-negative bacterium, wherein said gram-negative bacterium is Escherichia coli and Pseudomonas sp.
15. Детергентная добавка, содержащая вариант по любому из пп.1-6.15. A detergent additive containing a variant according to any one of claims 1 to 6.
16. Детергентная добавка по п.15, дополнительно содержащая один или несколько ферментов из группы, состоящей из: целлюлазы, протеазы, аминопептидазы, амилазы, карбогидразы, карбоксипептидазы, каталазы, хитиназы, кутиназы, циклодекстрингликанотрансферазы, дезоксирибонуклеазы, эстеразы, α-галактозидазы, β-галактозидазы, глюкоамилазы, α-глюкозидазы, β-глюкозидазы, галопероксидазы, инвертазы, лакказы, липазы, маннозидазы, оксидазы, пектинолитического фермента, пептидоглутаминазы, пероксидазы, фитазы, полифенолоксидазы, протеолитического фермента, рибонуклеазы, трансглутаминазы, ксиланазы, пуллуланазы, изоамилазы, каррагеназы или любого их сочетания.16. The detergent additive according to clause 15, additionally containing one or more enzymes from the group consisting of: cellulase, protease, aminopeptidase, amylase, carbohydrase, carboxypeptidase, catalase, chitinase, kutinase, cyclodextringlycanotransferase, deoxyribonuclease, esterase, α-galactase, -galactosidase, glucoamylase, α-glucosidase, β-glucosidase, haloperoxidase, invertase, laccase, lipase, mannosidase, oxidase, pectinolytic enzyme, peptidoglutaminase, peroxidase, phytase, polyphenol oxidase, proteolytic farm enta, ribonuclease, transglutaminase, xylanase, pullulanase, isoamylase, carrageenase, or any combination thereof.
17. Детергентная добавка по п.16 в форме непылящего гранулята, микрогранулята, стабилизированной жидкости или защищенного фермента.17. The detergent additive according to clause 16 in the form of a non-dusting granulate, microgranulate, stabilized liquid or a protected enzyme.
18. Детергентная композиция, содержащая детергентную добавку по п.16.18. A detergent composition containing a detergent additive according to clause 16.
19. Детергентная композиция, содержащая поверхностно-активное вещество и вариант по любому из пп.4-6.19. A detergent composition containing a surfactant and a variant according to any one of claims 4 to 6.
20. Детергентная композиция по п.19, где указанная детергентная композиция представляет собой детергент для стирки или детергент для мытья посуды.20. The detergent composition according to claim 19, where the specified detergent composition is a detergent for washing or detergent for washing dishes.
21. Детергентная композиция по п.20, дополнительно содержащая один или несколько ферментов из группы, состоящей из: целлюлазы, протеазы, аминопептидазы, амилазы, карбогидразы, карбоксипептидазы, каталазы, хитиназы, кутиназы, циклодекстрингликанотрансферазы, дезоксирибонуклеазы, эстеразы, α-галактозидазы, β-галактозидазы, глюкоамилазы, α-глюкозидазы, β-глюкозидазы, галопероксидазы, инвертазы, лакказы, липазы, маннозидазы, оксидазы, пектинолитического фермента, пептидоглутаминазы, пероксидазы, фитазы, полифенолоксидазы, протеолитического фермента, рибонуклеазы, трансглутаминазы, ксиланазы, пуллуланазы, изоамилазы, каррагеназы или любого их сочетания.21. The detergent composition according to claim 20, additionally containing one or more enzymes from the group consisting of: cellulase, protease, aminopeptidase, amylase, carbohydrase, carboxypeptidase, catalase, chitinase, cutinase, cyclodextringlycanotransferase, deoxyribonuclease, esterase, α-galactose β-galactosidase, glucoamylase, α-glucosidase, β-glucosidase, haloperoxidase, invertase, laccase, lipase, mannosidase, oxidase, pectinolytic enzyme, peptidoglutaminase, peroxidase, phytase, polyphenol oxidase, proteolytic f enzyme, ribonuclease, transglutaminase, xylanase, pullulanase, isoamylase, carrageenase, or any combination thereof.
22. Детергентная композиция для стирки, содержащая добавку для стирки по п.21, и дополнительно содержащая одно или несколько из поверхностно-активного вещества, моющего компонента детергента, комплексообразующего агента, полимера, отбеливающей системы, стабилизатора, пенообразователя, ингибитора пены, средства против коррозии, суспендирующего грязь средства, средства против повторного отложения грязи, красителя, бактерицидного средства, гидротропного средства, оптического отбеливателя, кондиционера для тканей и отдушки.22. A detergent composition for washing, containing the washing additive according to item 21, and further containing one or more of a surfactant, a detergent component of a detergent, a complexing agent, a polymer, a bleaching system, a stabilizer, a foaming agent, a foam inhibitor, an anti-corrosion agent a mud suspending agent, anti-redeposition agent, dye, bactericidal agent, hydrotropic agent, optical brightener, fabric conditioner and perfume.
23. Гидролизующая биопленку композиция, содержащая вариант по любому из пп.1-6 в растворе или геле, и необязательно дополнительно содержащая целлюлазу, гемицеллюлазу, ксиланазу, липазу, протеазу, пектиназу, противомикробное средство или любое их сочетание.23. A biofilm hydrolysing composition containing a variant according to any one of claims 1 to 6 in a solution or gel, and optionally additionally containing cellulase, hemicellulase, xylanase, lipase, protease, pectinase, an antimicrobial agent, or any combination thereof.
24. Способ гидролиза биопленки, включающий введение композиции по п.23 в течение периода времени, достаточного для обработки указанной биопленки.24. A method of hydrolysis of a biofilm, comprising administering the composition of claim 23 for a period of time sufficient to process said biofilm.
25. Композиция для выпекания, содержащая вариант по любому из пп.1-6 в растворе или в геле.25. A composition for baking containing a variant according to any one of claims 1 to 6 in solution or in gel.
26. Способ выпекания, включающий введение композиции для выпекания по п.25.
26. A baking method comprising administering a baking composition according to claim 25.