RU2005113874A - Полипептиды, участвующие в биосинтезе спирамицинов, нуклеотидные последовательности, кодирующие эти полипептиды, и их применения - Google Patents
Полипептиды, участвующие в биосинтезе спирамицинов, нуклеотидные последовательности, кодирующие эти полипептиды, и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2005113874A RU2005113874A RU2005113874/13A RU2005113874A RU2005113874A RU 2005113874 A RU2005113874 A RU 2005113874A RU 2005113874/13 A RU2005113874/13 A RU 2005113874/13A RU 2005113874 A RU2005113874 A RU 2005113874A RU 2005113874 A RU2005113874 A RU 2005113874A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microorganism
- gene
- seq
- sequence
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 67
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 65
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 28
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 28
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 26
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 26
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 26
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims 18
- 241000187758 Streptomyces ambofaciens Species 0.000 claims 16
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims 16
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 claims 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 16
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims 14
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims 14
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims 14
- 239000004187 Spiramycin Substances 0.000 claims 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 12
- 229930191512 spiramycin Natural products 0.000 claims 12
- 235000019372 spiramycin Nutrition 0.000 claims 12
- ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 2-[(4r,5s,6s,7r,9r,10r,11e,13e,16r)-6-[(2s,3r,4r,5s,6r)-5-[(2s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-4,6-dimethyloxan-2-yl]oxy-4-(dimethylamino)-3-hydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-10-[(2s,5s,6r)-5-(dimethylamino)-6-methyloxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-5-methoxy-9,16-dimethyl-2-o Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)C[C@@H](O)[C@@H]([C@H]([C@@H](CC=O)C[C@H]1C)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C2)[C@@H](C)O1)N(C)C)O)OC)[C@@H]1CC[C@H](N(C)C)[C@@H](C)O1 ACTOXUHEUCPTEW-BWHGAVFKSA-N 0.000 claims 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 10
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims 7
- 229960001294 spiramycin Drugs 0.000 claims 7
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims 6
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 claims 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 5
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 claims 5
- ACTOXUHEUCPTEW-UHFFFAOYSA-N spiramycins Chemical class CC1CC(CC=O)C(OC2C(C(C(OC3OC(C)C(O)C(C)(O)C3)C(C)O2)N(C)C)O)C(OC)C(O)CC(=O)OC(C)CC=CC=CC1OC1CCC(N(C)C)C(C)O1 ACTOXUHEUCPTEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 4
- ACTOXUHEUCPTEW-ZOTSFZJCSA-N spiramycin I Natural products CO[C@H]1[C@H](O)CC(=O)O[C@H](C)CC=CC=C[C@H](O[C@H]2CC[C@@H]([C@@H](C)O2)N(C)C)[C@H](C)C[C@H](CC=O)[C@@H]1O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]4C[C@@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)[C@@H]([C@H]3O)N(C)C ACTOXUHEUCPTEW-ZOTSFZJCSA-N 0.000 claims 4
- 229950001955 spiramycin i Drugs 0.000 claims 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 claims 3
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 claims 3
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 claims 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 claims 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims 2
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 claims 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 claims 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 claims 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims 1
- ZPCCSZFPOXBNDL-LWXQEXJOSA-N Spiramycin-II Natural products CO[C@H]1[C@@H](CC(=O)O[C@H](C)CC=CC=C[C@H](O[C@H]2CC[C@@H]([C@@H](C)O2)N(C)C)[C@H](C)C[C@@H](CC=O)[C@@H]1O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]4C[C@@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)[C@@H]([C@H]3O)N(C)C)OC(=O)C ZPCCSZFPOXBNDL-LWXQEXJOSA-N 0.000 claims 1
- HSZLKTCKAYXVBX-VPIGJTHDSA-N Spiramycin-III Natural products CCC(=O)O[C@@H]1CC(=O)O[C@H](C)CC=CC=C[C@H](O[C@H]2CC[C@@H]([C@@H](C)O2)N(C)C)[C@H](C)C[C@H](CC=O)[C@H](O[C@@H]3O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]4C[C@@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)O4)[C@@H]([C@H]3O)N(C)C)[C@H]1OC HSZLKTCKAYXVBX-VPIGJTHDSA-N 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 claims 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims 1
- DDQFXRYVNIPXRQ-UHFFFAOYSA-L cyclopenta-1,3-diene;dichlorozirconium(2+);1,2,3,5,5-pentamethylcyclopenta-1,3-diene Chemical compound Cl[Zr+2]Cl.C1C=CC=[C-]1.CC1=[C-]C(C)(C)C(C)=C1C DDQFXRYVNIPXRQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 claims 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 claims 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 claims 1
- ZPCCSZFPOXBNDL-RSMXASMKSA-N spiramycin II Chemical compound O([C@H]1/C=C/C=C/C[C@@H](C)OC(=O)C[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H](CC=O)C[C@H]1C)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@](C)(O)C2)[C@@H](C)O1)N(C)C)O)OC)OC(C)=O)[C@H]1CC[C@H](N(C)C)[C@H](C)O1 ZPCCSZFPOXBNDL-RSMXASMKSA-N 0.000 claims 1
- 229950006796 spiramycin ii Drugs 0.000 claims 1
- 229950003659 spiramycin iii Drugs 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 claims 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/36—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Actinomyces; from Streptomyces (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Claims (95)
1. Полинуклеотид, кодирующий полипептид, участвующий в биосинтезе спирамицинов, отличающийся тем, что последовательность вышеуказанного полинуклеотида представляет собой
(а) одну из последовательностей SEQ ID №3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 34, 36, 40, 43, 45, 47, 49, 53, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 107, 109, 111, 113, 115, 118, 120, 141, 143, 145, 147 и 149;
(b) одну из последовательностей, образованных вариантами последовательностей (а);
(с) одну из последовательностей, являющихся производными последовательностей (а) и (b) в соответствии с вырожденностью генетического кода.
2. Полинуклеотид, гибридизующийся в условиях высокой жесткости по меньшей мере с одним из полинуклеотидов по п.1.
3. Полинуклеотид, обладающий по меньшей мере 70%, 80%, 85%, 90%, 95% или 98% идентичности по нуклеотидам с полинуклеотидом, включающим по меньшей мере 10, 12, 15, 18, 20-25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850 или 1900 последовательных нуклеотидов полинуклеотида по п.1.
4. Полинуклеотид по п.2, отличающийся тем, что он выделен из бактерии рода Streptomyces.
5. Полинуклеотид по п.4, отличающийся тем, что он кодирует протеин, участвующий в биосинтезе макролида.
6. Полинуклеотид по пп.2, 3, 4 или 5, отличающийся тем, что он кодирует протеин, обладающий активностью, подобной протеину, кодируемому полинуклеотидом, с которым он гибридизуется или обладает идентичностью.
7. Полипептид, образующийся в результате экспрессии полинуклеотида по п.1.
8. Полипептид, участвующий в биосинтезе спирамицинов, отличающийся тем, что последовательность вышеуказанного полипептида представляет собой
(а) одну из последовательностей SEQ ID №4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 27, 29, 31, 32, 33, 35, 37, 38, 39, 41, 42, 44, 46, 48, 50, 51, 52, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 108, 110, 112, 114, 116, 117, 119, 121, 142, 144, 146, 148 и 150;
(b) одну из последовательностей, таких, как указанные в п.(а), за исключением того, что по всей длине вышеуказанной последовательности одна или несколько аминокислот заменены, встроены или подвергнуты делеции без затрагивания функциональных свойств;
(с) одну из последовательностей, образованных вариантами последовательностей (а) и (b).
9. Полипептид, обладающий по меньшей мере 70%, 80%, 85%, 90%, 95% или 98% идентичности по аминокислотам с полипептидом, включающим по меньшей мере 10, 15, 20, 30-40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 120, 140, 160, 180, 200, 220, 240, 260, 280, 300, 320, 340, 360, 380, 400, 420, 440, 460, 480, 500, 520, 540, 560, 580, 600, 620 или 640 последовательных аминокислот полипептида по п.8.
10. Полипептид по п.9, отличающийся тем, что он выделен из бактерии рода Streptomyces.
11. Полипептид по п.10, отличающийся тем, что он кодирует протеин, участвующий в биосинтезе макролида.
12. Полипептид по п.9, отличающийся тем, что он обладает активностью, подобной активности полипептида, с которым он имеет идентичность.
13. Рекомбинантная ДНК, отличающаяся тем, что она включает по меньшей мере один полинуклеотид по любому из п.1.
14. Рекомбинантная ДНК по п.13, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная ДНК встроена в вектор.
15. Рекомбинантная ДНК по п.14, отличающаяся тем, что вышеуказанный вектор выбирают среди бактериофагов, плазмид, фагемид, интегрирующих векторов, фосмид, космид, шаттл-векторов, ВАС или РАС.
16. Рекомбинантная ДНК по п.15, отличающаяся тем, что ее выбирают из pOS49.1, pOS49.11, pOS49.12, pOS49.14, pOS49.16, pOS49.28, pOS44.1, pOS49.2, pOS44.4, pSPM5, pSPM7, pOS49.67, pOS49.88, pOS49.106, pOS49.120, pOS49.107, pOS49.32, pOS49.43, pOS49.44, pOS49.50, pOS49.99, pSPM17, pSPM21, pSPM502, pSPM504, pSPM507, pSPM508, pSPM509, pSPM1, pBXL1111, pBXL1112, pBXL1113, pSPM520, pSPM521, pSPM522, pSPM523, pSPM524, pSPM525, pSPM527, pSPM528, pSPM34, pSPM35, pSPM36, pSPM37, pSPM38, pSPM39, pSPM40, pSPM41, pSPM42, pSPM43, pSPM44, pSPM45, pSPM47, pSPM48, pSPM50, pSPM51, pSPM52, pSPM53, pSPM55, pSPM56, pSPM58, pSPM72, pSPM73, pSPM515, pSPM519, pSPM74, pSPM75, pSPM79, pSPM83, pSPM107, pSPM543 и pSPM106.
17. Экспрессионный вектор, отличающийся тем, что он включает по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид по п.7 или 8.
18. Экспрессионная система, включающая соответствующий экспрессирующий вектор и клетку-хозяина, позволяющая осуществлять экспрессию одного или нескольких полипептидов по п.7 или 8.
19. Экспрессионная система по п.18, отличающаяся тем, что ее выбирают из прокариотных экспрессионных систем или эукариотных экспрессионных систем.
20. Экспрессионная система по п.19, отличающаяся тем, что ее выбирают из экспрессионных систем бактерии E. coli, бакуловирусных экспрессионных систем, позволяющих осуществлять экспрессию в клетках насекомых, экспрессионных систем, позволяющих осуществлять экспрессию в дрожжевых клетках, экспрессионных систем, позволяющих осуществлять экспрессию в клетках млекопитающих.
21. Клетка-хозяин, в которую введен по меньшей мере один полинуклеотид и/или по меньшей мере одна рекомбинантная ДНК и/или по меньшей мере один экспрессирующий вектор по п.1.
22. Способ продуцирования полипептида по п.7 или 8, отличающийся тем, что вышеуказанный способ включает следующие стадии:
а) инсерция по меньшей мере одной нуклеиновой кислоты, кодирующей вышеуказанный полипептид, в соответствующий вектор;
b) культивирование, на соответствующей культуральной среде, клетки-хозяина, предварительно трансформированной или трансфицированной вектором со стадии а);
с) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
d) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии с), вышеуказанного полипептида;
е) в случае необходимости, охарактеризовывание продуцированного рекомбинантного полипептида.
23. Микроорганизм, блокируемый на стадии пути биосинтеза по меньшей мере одного макролида.
24. Микроорганизм по п.23, отличающийся тем, что его получают путем инактивации функции по меньшей мере одного протеина, участвующего в биосинтезе этого или этих макролидов в микроорганизме, являющемся продуцентом этого или этих макролидов.
25. Микроорганизм по п.24, отличающийся тем, что инактивацию этого или этих протеинов осуществляют путем мутагенеза в гене или генах, кодирующих вышеуказанный или вышеуказанные протеины, или путем экспрессии одной или нескольких антисмысловых РНК, комплементарных матричной РНК или матричным РНК, кодирующим вышеуказанный или вышеуказанные протеины.
26. Микроорганизм по п.25, отличающийся тем, что инактивацию этого или этих протеинов осуществляют за счет мутагенеза путем облучения, путем воздействия мутагенного химического агента, путем направленного мутагенеза или путем замены гена.
27. Микроорганизм по п.25, отличающийся тем, что мутагенез или мутагенезы осуществляют in vitro или in situ путем супрессии, замены, делеции и/или инсерции одного или нескольких оснований в случае рассматриваемого гена или рассматриваемых генов или путем генной инактивации.
28. Микроорганизм по п.23, отличающийся тем, что вышеуказанным микроорганизмом является бактерия рода Streptomyces.
29. Микроорганизм по п.28, отличающийся тем, что макролидом является спирамицин.
30. Микроорганизм по п.28, отличающийся тем, что вышеуказанным микроорганизмом является штамм S. ambofaciens.
31. Микроорганизм по п.23, отличающийся тем, что мутагенез осуществляют по меньшей мере в гене, включающем последовательность по п.1.
32. Микроорганизм по п.25, отличающийся тем, что мутагенез осуществляют в одном или нескольких генах, включающих одну из последовательностей, соответствующих одной или нескольким последовательностям SEQ ID №3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 34, 36, 40, 43, 45, 47, 49, 53, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 107, 109, 111, 113, 115, 118, 120, 141, 143, 145, 147 и 149.
33. Микроорганизм по п.32, отличающийся тем, что мутагенез состоит в генной инактивации гена, включающего последовательность, соответствующую последовательности SEQ ID №13.
34. Штамм Streptomyces ambofaciens, отличающийся тем, что он представляет собой штамм, выбираемый из одного из штаммов, депонированных в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) 10 июля 2002 г. под регистрационным номером I-2909, I-2911, I-2912, I-2913, I-2914, I-2915, I-2916 или I-2917; штамма SPM510.
35. Способ получения медиатора биосинтеза макролида, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
а) культивирование, на соответствующей культуральной среде, микроорганизма по любому из пп.23-33 или 34;
b) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
с) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии b), вышеуказанного медиатора биосинтеза.
36. Способ получения молекулы, происходящей от макролида, отличающийся тем, что получают медиатор биосинтеза согласно способу по п.35 и модифицируют таким образом продуцированный медиатор.
37. Способ получения по п.36, отличающийся тем, что вышеуказанный медиатор модифицируют химическим, биохимическим, ферментативным и/или микробиологическим способом.
38. Способ получения по п.37, отличающийся тем, что в вышеуказанный микроорганизм вводят один или несколько генов, кодирующих протеины, способные модифицировать медиатор, используя его в качестве субстрата.
39. Способ получения по п.36, отличающийся тем, что макролидом является спирамицин.
40. Способ получения по п.36, отличающийся тем, что используемым микроорганизмом является штамм S. ambofaciens.
41. Микроорганизм, продуцирующий спирамицин I, но не продуцирующий спирамицинов II и III.
42. Микроорганизм по п.41, отличающийся тем, что он включает совокупность генов, необходимых в биосинтезе спирамицина I, однако, ген, включающий последовательность SEQ ID №13 или один из ее вариантов или одну из последовательностей, являющихся их вариантом в соответствии с вырожденностью генетического кода, и кодирующий полипептид, соответствующий последовательности SEQ ID №14 или одному из ее вариантов, не экспрессирован или инактивирован.
43. Микроорганизм по п.42, отличающийся тем, что указанную инактивацию осуществляют путем мутагенеза в гене, кодирующем вышеуказанный протеин, или путем экспрессии антисмысловой РНК, комплементарной мРНК, кодирующей вышеуказанный протеин.
44. Микроорганизм по п.43, отличающийся тем, что указанный мутагенез осуществляют в промоторе этого гена, в кодирующей последовательности или некодирующей последовательности с целью инактивации кодируемого протеина или предотвращения его экспрессии или его трансляции.
45. Микроорганизм по п.44, отличающийся тем, что мутагенез осуществляют путем облучения, путем воздействия мутагенного химического агента, путем направленного мутагенеза или путем замены гена.
46. Микроорганизм по п.45, отличающийся тем, что мутагенез осуществляют in vitro или in situ путем супрессии, замены, делеции и/или инсерции одного или нескольких оснований в случае рассматриваемого гена или путем генной инактивации.
47. Микроорганизм по п.41 или 42, отличающийся тем, что вышеуказанный микроорганизм получают за счет экспрессии генов пути биосинтеза спирамицина, причем они не включают ген, содержащий последовательность, соответствующую SEQ ID №13, или один из ее вариантов или одну из последовательностей, являющихся их производной в соответствии с вырожденностью генетического кода, и кодирующий полипептид, соответствующий последовательности SEQ ID №14 или одному из ее вариантов.
48. Микроорганизм по п.41, отличающийся тем, что вышеуказанным микроорганизмом является бактерия рода Streptomyces.
49. Микроорганизм по п.48, отличающийся тем, что вышеуказанный микроорганизм получают из исходного штамма, продуцирующего спирамицины I, II и III.
50. Микроорганизм по п.49, отличающийся тем, что его получают путем мутагенеза в гене, включающем последовательность, соответствующую SEQ ID №13, или один из ее вариантов или одну из последовательностей, являющихся их вариантами в соответствии с вырожденностью генетического кода, и кодирующем полипептид, соответствующий последовательности SEQ ID №14 или одному из ее вариантов, обладающему такой же функцией.
51. Микроорганизм по п.50, отличающийся тем, что вышеуказанный микроорганизм получают из штамма S. ambofaciens, продуцирующего спирамицины I, II и III, в котором осуществляют генную инактивацию гена, включающего последовательность, соответствующую SEQ ID №13, или одну из последовательностей, являющихся ее производными в соответствии с вырожденностью генетического кода.
52. Штамм S. ambofaciens, отличающийся тем, что он представляет собой штамм, депонированный в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM) 10 июля 2002 г. под регистрационным номером I-2910.
53. Способ продуцирования спирамицина I, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
(а) культивирование, на соответствующей культуральной среде, микроорганизма по любому из пп.41-52;
(b) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
(с) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии (b), спирамицина I.
54. Применение полинуклеотида по п.1 для повышения продуцирования макролидов микроорганизмом.
55. Мутантный микроорганизм, являющийся продуцентом макролида, отличающийся тем, что он имеет генетическую модификацию по меньшей мере в одном гене, включающем последовательность по п.1 и/или что он суперэкпрессирует по меньшей мере один ген, включающий последовательность по п.1.
56. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что генетическая модификация состоит в супрессии, замене, делеции и/или инсерции одного или нескольких оснований в случае рассматриваемого гена или рассматриваемых генов с целью экспрессирования одного или нескольких протеинов, обладающих высшей активностью, или экспрессирования на более высоком уровне этого или этих протеинов.
57. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что суперэкспрессии рассматриваемого гена достигают за счет увеличения числа копий этого гена и/или за счет введения более активного промотора, чем промотор дикого типа.
58. Мутантный микроорганизм по п.55 или 57, отличающийся тем, что суперэкспрессии рассматриваемого гена достигают за счет трансформации микроорганизма, являющегося продуцентом макролида, с помощью конструкции рекомбинантной ДНК по п.13, позволяющей осуществлять сверхпродуцирование этого гена.
59. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что генетическую модификацию осуществляют в одном или нескольких генах, включающих одну из последовательностей, соответствующих одной или нескольким последовательностям SEQ ID №3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 34, 36, 40, 43, 45, 47, 49, 53, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 107, 109, 111, 113, 115, 118, 120, 141, 143, 145, 147 и 149, или один из ее вариантов или одну из последовательностей, являющихся их производными в соответствии с вырожденностью генетического кода.
60. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что микроорганизм суперэкспрессирует один или несколько генов, включающих одну из последовательностей, соответствующих одной или нескольким последовательностям SEQ ID №3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 34, 36, 40, 43, 45, 47, 49, 53, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 107, 109, 111, 113, 115, 118, 120, 141, 143, 145, 147 и 149, или один из ее вариантов или одну из последовательностей, являющихся их производными в соответствии с вырожденностью генетического кода.
61. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что вышеуказанным микроорганизмом является бактерия рода Streptomyces.
62. Мутантный микроорганизм по п.55, отличающийся тем, что макролидом является спирамицин.
63. Мутантный микроорганизм по п.61, отличающийся тем, что вышеуказанным микроорганизмом является штамм S. ambofaciens.
64. Способ продуцирования макролидов, отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
(а) культивирование, на соответствующей культуральной среде, микроорганизма по любому из пп.55-62, или 63;
(b) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
(с) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии (b), вышеуказанного продуцированного макролида или вышеуказанных продуцированных макролидов.
65. Применение последовательности и/или рекомбинантной ДНК и/или вектора по п.1 для получения гибридных антибиотиков.
66. Применение по меньшей мере одного полинуклеотида и/или по меньшей мере одной рекомбинантной ДНК и/или по меньшей мере одного экспрессирующего вектора и/или по меньшей мере одного полипептида и/или по меньшей мере одной клетки-хозяина по п.1 для осуществления одной или нескольких биоконверсий.
67. Полинуклеотид, отличающийся тем, что он является полинуклеотидом, комплементарным одному из полинуклеотидов по п.1.
68. Микроорганизм, являющийся продуцентом по меньшей мере одного спирамицина, отличающийся тем, что он суперэкспрессирует:
ген, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции (PCR)при использовании пары праймеров, имеющих следующие последовательности:
5' AAGCTTGTGTGCCCGGTGTACCTGGGGAGC 3' (SEQ ID №138) и
5' GGATCCCGCGACGGACACGACCGCCGCGCA 3' (SEQ ID №139),
и, в качестве матрицы, космиды pSPM36 или полной ДНК Streptomyces ambofaciens;
или ген, являющийся его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода.
69. Микроорганизм по п.68, отличающийся тем, что он представляет собой бактерию рода Streptomyces.
70. Микроорганизм по п.69, отличающийся тем, что представляет собой бактерию вида Streptomyces ambofaciens.
71. Микроорганизм по п.68, отличающийся тем, что суперэкспрессии вышеуказанного гена достигают путем трансформации вышеуказанного микроорганизма экспрессирующим вектором.
72. Штамм Streptomyces ambofaciens, отличающийся тем, что он является штаммом OSC2/pSPM75(1) или штаммом OSC2/pSPM75(2), депонированным в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM), Институт Пастера, 25, rue du Docteur Roux, 75724 Париж, Cedex 15, Франция, 6 октября 2003 г. под регистрационным номером I-3101.
73. Рекомбинантная ДНК, отличающаяся тем, что она включает:
полинуклеотид, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции при использовании пары праймеров, имеющих следующие последовательности:
5' AAGCTTGTGTGCCCGGTGTACCTGGGGAGC 3' (SEQ ID №138) и
5' GGATCCCGCGACGGACACGACCGCCGCGCA 3' (SEQ ID №139),
и, в качестве матрицы, космиды pSPM36 или полной ДНК Streptomyces ambofaciens;
или фрагмент, включающий по меньшей мере 10, 12, 15, 18, 20-25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1460, 1470, 1480, 1490 или 1500 последовательных нуклеотидов этого полинуклеотида.
74. Рекомбинантная ДНК по п.73, отличающаяся тем, что представляет собой вектор.
75. Рекомбинантная ДНК по п.74, отличающаяся тем, что представляет собой экспрессирующий вектор.
76. Клетка-хозяин, в которую введена по меньшей мере одна рекомбинантная ДНК по п.73.
77. Способ продуцирования полипептида, отличающийся тем, что вышеуказанный способ включает следующие стадии:
а) трансформация клетки-хозяина с помощью по меньшей мере одного экспрессирующего вектора по п.75;
b) культивирование, на соответствующей культуральной среде, вышеуказанной клетки-хозяина;
с) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
d) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии с), вышеуказанного полипептида;
е) в случае необходимости, охарактеризовывание продуцированного рекомбинантного полипептида.
78. Микроорганизм по п.51, отличающийся тем, что генную инактивацию осуществляют путем делеции полноразмерного гена или части гена, включающего последовательность, соответствующую SEQ ID №13, или одну из последовательностей, являющихся ее производными в соответствии с вырожденностью генетического кода.
79. Микроорганизм по любому из п.41 или 42, отличающийся тем, что он, кроме того, суперэкспрессирует:
ген, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции при использовании пары праймеров, имеющих следующие последовательности:
5' AAGCTTGTGTGCCCGGTGTACCTGGGGAGC 3' (SEQ ID №138) и
5' GGATCCCGCGACGGACACGACCGCCGCGCA 3' (SEQ ID №139),
и, в качестве матрицы, космиды pSPM36 или полной ДНК Streptomyces ambofaciens;
или ген, являющийся его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода.
80. Экспрессирующий вектор, отличающийся тем, что полинуклеотид, соответствующий последовательности SEQ ID №47, или полинуклеотид, являющийся его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода, находится под контролем промотора, позволяющего осуществлять экспрессию протеина, кодируемого указанным полинуклеотидом, в Streptomyces ambofaciens.
81. Экспрессирующий вектор по п.80, отличающийся тем, что он представляет собой плазмиду pSPM524 или pSPM525.
82. Штамм Streptomyces ambofaciens, трансформированный вектором по п.80.
83. Штамм Streptomyces ambofaciens, трансформированный вектором по п.81.
84. Микроорганизм по п.41, отличающийся тем, что он, кроме того, суперэкспрессирует ген, соответствующий кодирующей последовательности SEQ ID №47 или кодирующей последовательности, являющейся ее производной в соответствии с вырожденностью генетического кода.
85. Микроорганизм по п.42, отличающийся тем, что он, кроме того, суперэкспрессирует ген, соответствующий кодирующей последовательности SEQ ID №47 или кодирующей последовательности, являющейся ее производной в соответствии с вырожденностью генетического кода.
86. Микроорганизм по п.84, отличающийся тем, что он является штаммом SPM502 pSPM525, депонированным в Национальной коллекции культур микроорганизмов (CNCM), Институт Пастера, 25, rue du Docteur Roux, 75724 Париж, Cedex 15, Франция, 26 февраля 2003 г. под регистрационным номером I-2977.
87. Способ продуцирования спирамицина (спирамицинов), отличающийся тем, что он включает следующие стадии:
(а) культивирование, на соответствующей культуральной среде, микроорганизма по любому из пп.68, 72, 78, 79, 82-85, 92 или 94;
(b) рекуперация кондиционированной культуральной среды или клеточного экстракта;
(с) выделение и очистка из вышеуказанной культуральной среды или из клеточного экстракта, полученной(ного) на стадии (b), спирамицинов.
88. Полипептид, отличающийся тем, что его последовательность включает последовательность SEQ ID №112 или последовательность SEQ ID №142.
89. Полипептид, отличающийся тем, что его последовательность соответствует последовательности, выражаемой кодирующей последовательностью:
гена, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции (PCR) при использовании пары праймеров, имеющих следующие последовательности:
5' AAGCTTGTGTGCCCGGTGTACCTGGGGAGC 3' (SEQ ID №138) и
5' GGATCCCGCGACGGACACGACCGCCGCGCA 3' (SEQ ID №139),
и, в качестве матрицы, космиды pSPM36 или полной ДНК Streptomyces ambofaciens;
или гена, являющегося его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода.
90. Экспрессирующий вектор, позволяющий осуществлять экспрессию полипептида по пп.88, 89 или 95 в Streptomyces ambofaciens.
91. Экспрессирующий вектор по п.90, отличающийся тем, что он является плазмидой pSPM75.
92. Микроорганизм по п.68, отличающийся тем, что геном, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции, является ген, соответствующий кодирующей последовательности SEQ ID №141, или ген, являющийся его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода.
93. Рекомбинантная ДНК по п.73, отличающаяся тем, что полинуклеотидом, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции, является полинуклеотид, сответствующий последовательности SEQ ID №141.
94. Микроорганизм по п.79, отличающийся тем, что геном, который может быть получен за счет амплификации путем полимеразной цепной реакции, является ген, соответствующий кодирующей последовательности SEQ ID №141, или ген, являющийся его производным в соответствии с вырожденностью генетического кода.
95. Полипептид, отличающийся тем, что его последовательностью является SEQ ID №142.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0212489 | 2002-10-08 | ||
| FR0212489A FR2845394A1 (fr) | 2002-10-08 | 2002-10-08 | Polypeptides impliques dans la biosynthese des spiramycines, sequences nucleotidiques codant ces polypeptides et leurs applications |
| FR0302439 | 2003-02-27 | ||
| FR0302439A FR2851773A1 (fr) | 2003-02-27 | 2003-02-27 | Polypeptides impliques dans la biosynthese des spiramycines, sequences nucleotidiques codant ces polypeptides et leurs applications |
| US60/493,490 | 2003-08-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2005113874A true RU2005113874A (ru) | 2006-02-27 |
| RU2377304C2 RU2377304C2 (ru) | 2009-12-27 |
Family
ID=36114221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005113874/13A RU2377304C2 (ru) | 2002-10-08 | 2003-10-08 | Полинуклеотид, кодирующий ацилтрансферазу, отвечающую за модификацию платенолида в положении 3 (варианты), полипептид, представляющий собой ацилтрансферазу, отвечающую за модификацию платенолида в положении 3 (варианты), бактериальный экспрессионный вектор (варианты), бактериальная экспрессионная система, бактериальная клетка-хозяин, способ продуцирования полипептида, штамм streptomyces ambofaciens, применение полинуклеотида (варианты), клетка бактерии streptomyces ambofaciens, клетка-хозяин streptomyces ambofaciens и способ получения полипептида |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7579167B2 (ru) |
| DK (1) | DK1905833T3 (ru) |
| ES (1) | ES2552912T3 (ru) |
| HU (1) | HUE026468T2 (ru) |
| RU (1) | RU2377304C2 (ru) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101914482B (zh) * | 2010-07-23 | 2012-07-04 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 一株异戊酰螺旋霉素i组分高含量、高产量基因工程菌 |
| EP3325616A1 (en) | 2015-07-24 | 2018-05-30 | Novozymes, Inc. | Polypeptides having arabinofuranosidase activity and polynucleotides encoding same |
| CN116333950A (zh) * | 2022-08-24 | 2023-06-27 | 武汉大学 | 高产洋橄榄叶素的基因工程菌及其构建方法与应用 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5068189A (en) | 1988-05-13 | 1991-11-26 | Eli Lilly And Company | Recombinant dna vectors encoding a 4"-o-isovaleryl acylase derived from a carbomycin biosynthetic gene, designated care, for use in streptomyces and other organisms |
| JP2749616B2 (ja) * | 1988-05-24 | 1998-05-13 | メルシャン株式会社 | マクロライド抗生物質の４”位アシル化酵素をコードする遺伝子 |
| US5098837A (en) * | 1988-06-07 | 1992-03-24 | Eli Lilly And Company | Macrolide biosynthetic genes for use in streptomyces and other organisms |
| CZ289014B6 (cs) * | 1989-09-27 | 2001-10-17 | Dsm N. V. | Vyčiątěná a izolovaná sekvence DNA kódující fungální fytázu, konstrukt pro expresi, vektory a transformované hostitelské buňky a způsob produkce fytázy |
| US5322937A (en) * | 1990-06-01 | 1994-06-21 | Mercian Corporation | Genes encoding a 3-acylation enzyme for macrolide antibiotics |
| US5514544A (en) | 1991-07-26 | 1996-05-07 | Eli Lilly And Company | Activator gene for macrolide biosynthesis |
| CA2197160C (en) | 1996-02-22 | 2007-05-01 | Stanley Gene Burgett | Platenolide synthase gene |
| CA2197524A1 (en) | 1996-02-22 | 1997-08-22 | Bradley Stuart Dehoff | Polyketide synthase genes |
| WO1999005283A2 (fr) | 1997-07-25 | 1999-02-04 | Hoechst Marion Roussel | Genes de biosynthese et de transfert des 6-desoxyhexoses chez saccharopolyspora erythraea et chez streptomyces antibioticus et leur utilisation |
| CA2391131C (en) | 2001-07-26 | 2004-10-12 | Ecopia Biosciences Inc. | Genes and proteins for rosaramicin biosynthesis |
-
2003
- 2003-10-07 US US10/680,860 patent/US7579167B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-08 RU RU2005113874/13A patent/RU2377304C2/ru active
- 2003-10-08 DK DK07019306.5T patent/DK1905833T3/en active
- 2003-10-08 ES ES07019306.5T patent/ES2552912T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-10-08 HU HUE07019306A patent/HUE026468T2/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK1905833T3 (en) | 2015-11-23 |
| US20050202528A1 (en) | 2005-09-15 |
| HUE026468T2 (en) | 2016-05-30 |
| RU2377304C2 (ru) | 2009-12-27 |
| US7579167B2 (en) | 2009-08-25 |
| ES2552912T3 (es) | 2015-12-03 |
| HK1122330A1 (en) | 2009-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11655464B2 (en) | Alkaline protease mutant, and gene, engineered strain, preparation method and application thereof | |
| KR102094875B1 (ko) | 신규한 이소프로필말레이트 신타제 변이체 및 이를 이용한 l-류신의 생산 방법 | |
| CN101679490B (zh) | 通过mRNA的稳定化提高目标产物的生产 | |
| US10633684B2 (en) | Production of riboflavin | |
| CN1831115B (zh) | 嘌呤类物质产生菌及嘌呤类物质的制备方法 | |
| RU2000122755A (ru) | Новые кодирующие нуклеотидные последовательности гена thre и способ ферментативного получения l-треонина с использованием коринебактерий | |
| CN88100523A (zh) | 生产酮古洛糖酸的方法 | |
| KR102617168B1 (ko) | 쉬와넬라 오네이덴시스 유래 단백질을 발현하는 미생물, 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 | |
| CN113604445B (zh) | 一种酪氨酸酶及其制备与应用 | |
| RU2221042C2 (ru) | ПОЛИНУКЛЕОТИДНАЯ МОЛЕКУЛА, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК-РЕГУЛЯТОР ВЫРАБОТКИ АВЕРМЕКТИНА В Streptomyces avermitilis (ВАРИАНТЫ), СОДЕРЖАЩИЕ ЕЕ ВЕКТОР КЛОНИРОВАНИЯ И ШТАММ; СПОСОБЫ СКРИНИНГА МУТАЦИИ В РЕГУЛЯТОРНОМ ГЕНЕ, ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОК И ПОВЫШЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АВЕРМЕКТИНОВ В КУЛЬТУРЕ | |
| CN114107266B (zh) | 耐热性提高的蛋白酶突变体及其编码基因和应用 | |
| RU2005113874A (ru) | Полипептиды, участвующие в биосинтезе спирамицинов, нуклеотидные последовательности, кодирующие эти полипептиды, и их применения | |
| JP6017514B2 (ja) | 細胞内におけるｄｎａ増幅方法 | |
| KR101877120B1 (ko) | 생물전환공정을 이용한 2'-데옥시시티딘의 제조방법 | |
| US20250002881A1 (en) | Class ii, type v crispr systems | |
| US7049097B2 (en) | Antibiotics-independent vector for constant high-expression and method for gene expression using the same | |
| KR102616694B1 (ko) | 쉬와넬라 아틀란티카 유래 단백질을 발현하는 미생물, 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 | |
| JP2006501863A5 (ru) | ||
| EP3498727B1 (en) | Microorganism having enhanced cellulose synthase gene stability and method of producing cellulose by using the same | |
| CN119464346A (zh) | 一种基于蔗糖致死基因的嗜盐菌质粒及其应用 | |
| US20110129894A1 (en) | Secretion optimized microorganism | |
| CN119685366A (zh) | 提高红霉素产量的新方法 | |
| KR100629773B1 (ko) | 대장균에서 발현가능한 ｇｕａＡ 유전자를 포함하는 벡터,이를 포함하는 에스케리키아 속 미생물, 및 상기 미생물을이용하여 ５＇－구아닐산 합성효소를 배지 중에축적시키는 방법 | |
| US20110165619A1 (en) | Secretion Optimized Microorganism | |
| JP5807866B2 (ja) | プラスミドベクター |