Claims (99)
1. Способ размножения/поддержания жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников, включающий в себя следующие стадии:1. The method of propagation / maintenance of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells, which includes the following stages:
(a) получение недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(a) obtaining undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells; and
(b) высевание указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в поршневом проточном биореакторе со стационарной фазой, в котором трехмерная культура стромальных клеток предварительно создается на субстрате в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, тем самым способствуя размножению/поддержанию жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников.(b) plating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells in a stationary phase piston flow bioreactor in which a three-dimensional culture of stromal cells is preliminarily created on a substrate in the form of a layer, said substrate comprising a fibrous matrix of non-woven material that forms a physiologically acceptable three-dimensional mesh of fibers, thereby contributing to the reproduction / maintenance of vital activity of undifferentiated hematopoietic stem cells ok or progenitor cells.
2. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники представляют собой клетки, выделенные из ткани, выбранной из группы, состоящей из пуповинной крови, мобилизированной периферической крови и костного мозга.2. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells are cells isolated from tissue selected from the group consisting of umbilical cord blood, mobilized peripheral blood and bone marrow.
3. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток имеют общие антигены HLA.3. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture have common HLA antigens.
4. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного индивидуума.4. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from one individual.
5. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных индивидуумов.5. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various individuals.
6. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного и того же вида.6. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from the same species.
7. Способ по п.1, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных видов.7. The method according to claim 1, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various species.
8. Способ по п.1, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 5×106 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.8. The method according to claim 1, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 5 × 10 6 cells per cubic centimeter of said substrate.
9. Способ по п.1, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 107 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.9. The method according to claim 1, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 10 7 cells per cubic centimeter of said substrate.
10. Способ по п.1, при котором указанную стадию высевания указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в указанный поршневой проточный биореактор со стационарной фазой осуществляют в то время, когда поток в биореакторе выключается по меньшей мере на 10 часов после посева.10. The method according to claim 1, wherein said step of plating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells into said stationary stationary reciprocating piston flow bioreactor is carried out while the flow in the bioreactor is turned off at least 10 hours after plating.
11. Способ по п.1, при котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема, от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.11. The method according to claim 1, wherein said fibers form a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
12. Способ по п.1, при котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.12. The method according to claim 1, wherein said matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular and hollow fibers and mixtures thereof, said fibers being from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
13. Способ по п.1, при котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.13. The method according to claim 1, wherein said matrix consists of tape-shaped fibers having a width of 2 to 20 microns, the ratio of the width of the fibers to their thickness being at least 2: 1.
14. Способ по п.1, при котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый как процент от общего объема, от 60 до 95%.14. The method according to claim 1, wherein said matrix has a pore volume taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
15. Способ по п.1, при котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.15. The method according to claim 1, wherein the matrix has a height of 50-1000 microns.
16. Способ по п.1, при котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокна и волокон инертного металла.16. The method according to claim 1, wherein the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochloroethylene, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, fiberglass and inert metal fibers.
17. Способ по п.1, при котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.17. The method according to claim 1, wherein the matrix is in the form selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
18. Способ по п.1, при котором матрикс находится в форме диска.18. The method according to claim 1, wherein the matrix is in the form of a disk.
19. Способ по п.1, при котором матрикс покрывают поли-D-лизином.19. The method according to claim 1, wherein the matrix is coated with poly-D-lysine.
20. Способ по п.1, дополнительно включающий в себя стадию выделения указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников.20. The method according to claim 1, further comprising the step of isolating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells.
21. Способ размножения/поддержания жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников, включающий в себя следующие стадии:21. The method of propagation / maintenance of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells, comprising the following stages:
(a) получение недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(a) obtaining undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells; and
(b) культивирование указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в среде, содержащей кондиционированную среду стромальных клеток, причем указанную кондиционированную среду стромальных клеток получают из поршневого проточного биореактора со стационарной фазой, в котором трехмерная культура стромальных клеток создается на субстрате в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, тем самым способствуя размножению/поддержанию жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников.(b) culturing said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells in a medium containing an air-conditioned stromal cell medium, wherein said air-conditioned stromal cell medium is obtained from a stationary phase piston flow bioreactor in which a three-dimensional stromal cell culture is created on a substrate in the form of a layer, moreover, the specified substrate includes a fibrous matrix of non-woven material, forming a physiologically acceptable three-dimensional network from fibers, thereby promoting the propagation / maintenance of vital activity of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells.
22. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники представляют собой клетки, выделенные из ткани, выбранной из группы, состоящей из пуповинной крови, мобилизированной периферической крови и костного мозга22. The method according to item 21, in which these undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells are cells isolated from tissue selected from the group consisting of umbilical cord blood, mobilized peripheral blood and bone marrow
23. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток имеют общие HLA-антигены.23. The method according to item 21, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture have common HLA antigens.
24. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного индивидуума.24. The method according to item 21, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from one individual.
25. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных индивидуумов.25. The method according to item 21, in which these undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of the specified culture of stromal cells are taken from various individuals.
26. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного и того же вида.26. The method according to item 21, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from the same species.
27. Способ по п.21, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных видов.27. The method according to item 21, in which these undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of the specified culture of stromal cells are taken from various species.
28. Способ по п.21, при котором стромальные клетки указанных культур стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 5×106 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.28. The method according to item 21, in which the stromal cells of these cultures of stromal cells are grown to a density of at least 5 × 10 6 cells per cubic centimeter of the specified substrate.
29. Способ по п.21, при котором стромальные клетки указанных культур стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 107 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.29. The method of claim 21, wherein the stromal cells of said stromal cell cultures are grown to a density of at least 10 7 cells per cubic centimeter of said substrate.
30. Способ по п.21, при котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема, от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.30. The method according to item 21, in which these fibers form a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
31. Способ по п.21, при котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.31. The method according to item 21, wherein said matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular and hollow fibers and mixtures thereof, said fibers being from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
32. Способ по п.21, при котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.32. The method according to item 21, wherein said matrix consists of fibers in the form of a tape having a width of from 2 to 20 microns, and the ratio of the width of the fibers to their thickness is at least 2: 1.
33. Способ по п.21, при котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый как процент от общего объема, от 60 до 95%.33. The method according to item 21, wherein said matrix has a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
34. Способ по п.21, при котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.34. The method according to item 21, in which the matrix has a height of 50-1000 microns.
35. Способ по п.21, при котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокон и волокон инертного металла.35. The method according to item 21, in which the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochlorethylene, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, glass fibers and inert metal fibers.
36. Способ по п.21, при котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.36. The method according to item 21, in which the matrix is in the form selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
37. Способ по п.21, при котором матрикс находится в форме диска.37. The method according to item 21, in which the matrix is in the form of a disk.
38. Способ по п.21, при котором матрикс покрывают поли-D-лизином.38. The method according to item 21, in which the matrix is coated with poly-D-lysine.
39. Способ приготовления кондиционированной среды стромальных клеток, пригодной для размножения/поддержания жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников, включающий в себя следующие стадии:39. A method of preparing an conditioned medium of stromal cells suitable for propagation / maintenance of vital activity of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells, comprising the following stages:
(a) создание культуры стромальных клеток в поршневом проточном биореакторе со стационарной фазой на субстрате в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, тем самым способствуя размножению/поддержанию жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(a) creating a culture of stromal cells in a piston flow bioreactor with a stationary phase on a substrate in the form of a layer, said substrate comprising a fibrous matrix of non-woven material, forming a physiologically acceptable three-dimensional network of fibers, thereby facilitating the propagation / maintenance of vital activity of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells; and
(b) когда достигается желаемая плотность стромальных клеток, сбор среды из указанного поршневого проточного биореактора со стационарной фазой, с получением тем самым кондиционированной среды стромальных клеток, пригодной для размножения/поддержания жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников.(b) when the desired stromal cell density is achieved, collecting medium from said stationary phase piston flow bioreactor, thereby obtaining a conditioned stromal cell medium suitable for propagating / maintaining the life of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells.
40. Способ по п.39, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 5×106 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.40. The method according to § 39, wherein the stromal cells of the indicated culture of stromal cells are grown to a density of at least 5 × 10 6 cells per cubic centimeter of the specified substrate.
41. Способ по п.39, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 107 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.41. The method of claim 39, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 10 7 cells per cubic centimeter of said substrate.
42. Способ по п.39, при котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема, от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.42. The method according to § 39, wherein said fibers form a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
43. Способ по п.39, при котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.43. The method according to § 39, wherein said matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular and hollow fibers and mixtures thereof, said fibers being from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
44. Способ по п.39, при котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.44. The method according to § 39, wherein said matrix consists of tape-shaped fibers having a width of 2 to 20 microns, the ratio of the width of the fibers to their thickness being at least 2: 1.
45. Способ по п.39, при котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый процент от общего объема от 60 до 95%.45. The method according to § 39, wherein said matrix has a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
46. Способ по п.39, при котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.46. The method according to § 39, wherein the matrix has a height of 50-1000 microns.
47. Способ по п.39, при котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокон и волокон инертного металла.47. The method according to § 39, wherein the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochlorethylene, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, glass fibers and inert metal fibers.
48. Способ по п.39, при котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.48. The method according to § 39, in which the matrix is in the form selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
49. Способ по п.39, при котором матрикс находится в форме диска.49. The method according to § 39, wherein the matrix is in the form of a disk.
50. Способ по п.39, при котором матрикс покрывают поли-D-лизином.50. The method according to § 39, in which the matrix is coated with poly-D-lysine.
51. Способ трансплантации недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников реципиенту, включающий в себя следующие стадии:51. The method of transplantation of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells to the recipient, which includes the following stages:
(а) размножение/поддержание жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников путем:(a) propagation / maintenance of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells by:
(i) получения недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(i) obtaining undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells; and
(ii) высевания указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в поршневой проточный биореактор со стационарной фазой, в котором трехмерная культура стромальных клеток предварительно создается на субстрате в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, тем самым способствуя размножению/поддержанию жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(ii) plating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells into a stationary phase piston flow bioreactor in which a three-dimensional culture of stromal cells is preliminarily created on a substrate in the form of a layer, said substrate comprising a fibrous matrix of non-woven material that forms a physiologically acceptable three-dimensional mesh of fibers, thereby contributing to the reproduction / maintenance of vital activity of undifferentiated hematopoietic stem cells to or progenitor cells; and
(b) трансплантацию указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников, полученных на стадии (а), реципиенту.(b) transplanting said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells obtained in step (a) to a recipient.
52. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники представляют собой клетки, выделенные из ткани, выбранной из группы, состоящей из пуповинной крови, мобилизированной периферической крови и костного мозга.52. The method according to § 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells are cells isolated from tissue selected from the group consisting of umbilical cord blood, mobilized peripheral blood and bone marrow.
53. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток имеют общие HLA-антигены.53. The method of claim 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture have common HLA antigens.
54. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного индивидуума.54. The method of claim 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from one individual.
55. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных индивидуумов.55. The method of claim 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various individuals.
56. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного и того же вида.56. The method of claim 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from the same species.
57. Способ по п.51, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных видов.57. The method according to § 51, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various species.
58. Способ по п.51, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 5×106 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.58. The method of claim 51, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 5 × 10 6 cells per cubic centimeter of said substrate.
59. Способ по п.51, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 107 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.59. The method of claim 51, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 10 7 cells per cubic centimeter of said substrate.
60. Способ по п.51, при котором указанную стадию посева указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в указанный поршневой проточный биореактор со стационарной фазой осуществляют в то время, когда поток в биореакторе выключается по меньшей мере на 10 часов после посева.60. The method of claim 51, wherein said step of plating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells into said stationary stationary reciprocating piston flow bioreactor is performed while the flow in the bioreactor is turned off at least 10 hours after plating.
61. Способ по п.51, при котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема, от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.61. The method according to § 51, wherein said fibers form a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
62. Способ по п.51, при котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.62. The method according to § 51, wherein said matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular and hollow fibers and mixtures thereof, said fibers being from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
63. Способ по п.51, при котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.63. The method according to § 51, wherein said matrix consists of tape-shaped fibers having a width of 2 to 20 microns, the ratio of the width of the fibers to their thickness being at least 2: 1.
64. Способ по п.51, при котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый как процент от общего объема, от 60 до 95%.64. The method according to § 51, wherein said matrix has a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
65. Способ по п.51, при котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.65. The method according to § 51, wherein the matrix has a height of 50-1000 microns.
66. Способ по п.51, при котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокон и волокон инертного металла.66. The method according to § 51, wherein the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochloroethenes, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, glass fibers and inert metal fibers.
67. Способ по п.51, при котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.67. The method according to § 51, wherein the matrix is in the form selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
68. Способ по п.51, при котором матрикс находится в форме диска.68. The method of claim 51, wherein the matrix is in disk form.
69. Способ по п.51, при котором матрикс покрывают поли-D-лизином.69. The method of claim 51, wherein the matrix is coated with poly-D-lysine.
70. Способ по п.51, дополнительно включающий стадию выделения указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников перед стадией (b).70. The method of claim 51, further comprising the step of isolating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells prior to step (b).
71. Способ трансплантации недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников реципиенту, включающий в себя следующие стадии:71. A method for transplanting undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells to a recipient, the method comprising the following steps:
(а) размножение/поддержание жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников путем:(a) propagation / maintenance of undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells by:
(i) получения недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников; и(i) obtaining undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells; and
(ii) культивирования указанных недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников в среде, содержащей кондиционированную среду стромальных клеток, причем указанную кондиционированную среду стромальных клеток получают из поршневого проточного биореактора со стационарной фазой, в котором трехмерная культура стромальных клеток создается на субстрате в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, тем самым способствуя размножению/поддержанию жизнедеятельности недифференцированных гемопоэтических стволовых клеток или клеток-предшественников.(ii) cultivating said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells in a medium containing an air-conditioned stromal cell medium, wherein said air-conditioned stromal cell medium is obtained from a stationary phase piston flow bioreactor in which a three-dimensional stromal cell culture is created on a substrate in the form of a layer, moreover, the specified substrate includes a fibrous matrix of non-woven material, forming a physiologically acceptable three-dimensional network of fibers, thereby contributing to reproduction / life support undifferentiated hemopoietic stem cells or progenitor cells.
72. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники представляют собой клетки, выделенные из ткани, выбранной из группы, состоящей из пуповинной крови, мобилизированной периферической крови и костного мозга.72. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells are cells isolated from tissue selected from the group consisting of umbilical cord blood, mobilized peripheral blood and bone marrow.
73. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток имеют общие HLA-антигены.73. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture have common HLA antigens.
74. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного индивидуума.74. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from one individual.
75. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных индивидуумов.75. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various individuals.
76. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у одного и того же вида.76. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from the same species.
77. Способ по п.71, при котором указанные недифференцированные гемопоэтические стволовые клетки или клетки-предшественники и стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток берут у различных видов.77. The method of claim 71, wherein said undifferentiated hematopoietic stem cells or progenitor cells and stromal cells of said stromal cell culture are taken from various species.
78. Способ по п.71, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 5×106 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.78. The method of claim 71, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 5 × 10 6 cells per cubic centimeter of said substrate.
79. Способ по п.71, при котором стромальные клетки указанной культуры стромальных клеток выращивают до плотности по меньшей мере 107 клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.79. The method of claim 71, wherein the stromal cells of said stromal cell culture are grown to a density of at least 10 7 cells per cubic centimeter of said substrate.
80. Способ по п.71, при котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема, от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.80. The method according to p, in which these fibers form a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
81. Способ по п.71, при котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.81. The method according to p, in which the specified matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular and hollow fibers and mixtures thereof, and these fibers are from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
82. Способ по п.71, при котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.82. The method according to p, in which the matrix consists of fibers in the form of a tape having a width of from 2 to 20 microns, and the ratio of the width of the fibers to their thickness is at least 2: 1.
83. Способ по п.71, при котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый как процент от общего объема, от 60 до 95%.83. The method according to p, in which the specified matrix has a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
84. Способ по п.71, при котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.84. The method according to p, in which the matrix has a height of 50-1000 microns.
85. Способ по п.71, при котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокон и волокон инертного металла.85. The method according to p, in which the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochloroethylenes, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, glass fibers and inert metal fibers.
86. Способ по п.71, при котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.86. The method according to p, in which the matrix is in the form selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
87. Способ по п.71, при котором матрикс находится в форме диска.87. The method according to p, in which the matrix is in the form of a disk.
88. Способ по п.71, при котором матрикс покрывают поли-D-лизином.88. The method of claim 71, wherein the matrix is coated with poly-D-lysine.
89. Поршень биореактора, содержащий контейнер, имеющий вход и выход и содержащий внутри субстрат в виде пласта, причем указанный субстрат включает в себя волокнистый матрикс из нетканого материала, образующий физиологически приемлемую трехмерную сетку из волокон, причем указанный субстрат поддерживает по меньшей мере 5×106 стромальных клеток на кубический сантиметр указанного субстрата.89. A bioreactor piston containing a container having an inlet and outlet and containing a substrate in the form of a layer, said substrate including a fibrous matrix of non-woven material, forming a physiologically acceptable three-dimensional network of fibers, said substrate supporting at least 5 × 10 6 stromal cells per cubic centimeter of the indicated substrate.
90. Поршень биореактора по п.89, в котором указанные волокна образуют объем пор, взятый как процент от общего объема от 40 до 95%, а размер пор составляет от 10 до 100 микрон.90. The bioreactor piston of claim 89, wherein said fibers form a pore volume taken as a percentage of the total volume from 40 to 95%, and the pore size is from 10 to 100 microns.
91. Поршень биореактора по п.89, в котором указанный матрикс изготавливают из волокна, выбранного из группы, состоящей из плоских, некруглых и полых волокон и их смесей, причем указанные волокна составляют от 0,5 до 50 микрон в диаметре или по ширине.91. The bioreactor piston of claim 89, wherein said matrix is made from a fiber selected from the group consisting of flat, non-circular, and hollow fibers and mixtures thereof, said fibers being from 0.5 to 50 microns in diameter or width.
92. Поршень биореактора, по п.89, в котором указанный матрикс состоит из волокон в форме ленты, имеющих в ширину от 2 до 20 микрон, причем отношение ширины волокон к их толщине составляет по меньшей мере 2:1.92. The bioreactor piston of claim 89, wherein said matrix is comprised of ribbon-shaped fibers having a width of 2 to 20 microns, the ratio of fiber width to thickness being at least 2: 1.
93. Поршень биореактора по п.89, в котором указанный матрикс имеет объем пор, взятый как процент от общего объема, от 60 до 95%.93. The bioreactor piston of claim 89, wherein said matrix has a pore volume, taken as a percentage of the total volume, from 60 to 95%.
94. Поршень биореактора по п.89, в котором матрикс имеет высоту 50-1000 мкм.94. The bioreactor piston of claim 89, wherein the matrix has a height of 50-1000 microns.
95. Поршень биореактора по п.89, в котором материал матрикса выбран из группы, состоящей из сложных полиэфиров, полиалкиленов, полифторхлорэтиленов, поливинилхлорида, полистирола, полисульфонов, ацетата целлюлозы, стекловолокон и волокон инертного металла.95. The bioreactor piston of claim 89, wherein the matrix material is selected from the group consisting of polyesters, polyalkylenes, polyfluorochlorethylenes, polyvinyl chloride, polystyrene, polysulfones, cellulose acetate, glass fibers and inert metal fibers.
96. Поршень биореактора по п.89, в котором матрикс находится в форме, выбранной из группы, состоящей из квадратов, дисков, колец и крестиков.96. The bioreactor piston of claim 89, wherein the matrix is in a shape selected from the group consisting of squares, discs, rings and crosses.
97. Поршень биореактора по п.89, в котором матрикс находится в форме диска.97. The bioreactor piston of claim 89, wherein the matrix is in disk form.
98. Поршень биореактора по п.89, в котором матрикс покрывают поли-D-лизином.98. The bioreactor piston of claim 89, wherein the matrix is coated with poly-D-lysine.
99. Поршневой проточный биореактор, содержащий поршень для биореактора по п.89.99. A piston flow bioreactor comprising a piston for a bioreactor according to claim 89.