RU2001109234A

RU2001109234A - Способы и композиции для модуляции взаимодействия между APJ-рецептором и вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)

Info

Publication number: RU2001109234A
Application number: RU2001109234/14A
Authority: RU
Inventors: Роберт ДОМС; Дарил Фолдс; Джозеф Э. ХЕССЕЛГЕССЕР; Ричард ХОРУК; Бранислава МИТРОВИЦ; Ицин ГЖОУ
Original assignee: Шеринг Акциенгезельшафт
Priority date: 1998-09-08
Filing date: 1999-09-07
Publication date: 2003-05-20

Claims

1. Рекомбинантная человеческая клетка, трансформированная полинуклеотидом, который кодирует полипептид APJ, или полинуклеотидом, который кодирует полипептид CD4, где человеческая клетка совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

2. Рекомбинантная человеческая клетка, трансформированная полинуклеотидом, который кодирует полипептид APJ, и полинуклеотидом, который кодирует полипептид CD4, где клетка совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

3. Рекомбинантная человеческая клетка по п.1, где клетку стабильно трансформируют.

4. Рекомбинантная человеческая клетка по п.2, где клетку стабильно трансформируют обоими полинуклеотидами.

5. Антитело, которое специфично связывается с внеклеточным доменом APJ, где антитело ингибирует заражение ВИЧ клетки-мишени, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

6. Антитело, которое специфично связывается с внеклеточным доменом APJ, где антитело ингибирует слияние мембран между первой клеткой, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, и второй клеткой, которая экспрессирует env-протеин ВИЧ.

7. Антитело по п.5 или 6, где антитело представляет собой моноклональное антитело.

8. Антитело по п.7, где антитело распознает эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, которая является частью первого внеклеточного домена APJ.

9. Антитело по п.8, где аминокислотная последовательность соответствует части первого внеклеточного домена APJ, включающей аминокислотную последовательность Asn-Tyr-Tyr-Gly (SEQ ID N0:3).

10. Антитело по п.7, где антитело распознает эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, которая является частью второго внеклеточного домена APJ.

11. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ, где пептид ингибирует заражение ВИЧ клетки-мишени, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

12. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ, где пептид ингибирует клеточное слияние между первой клеткой, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, и второй клеткой, которая экспрессирует env-протеин ВИЧ.

13. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.11 или 12, где пептидный фрагмент включает аминокислотную последовательность, которая является частью первого внеклеточного домена APJ.

14. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.13, где аминокислотная последовательность соответствует части первого внеклеточного домена APJ, включающей аминокислотную последовательность Asn-Tyr-Tyr-Gly (SEQ ID N0:3).

15. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.11 или 12, где пептидный фрагмент включает аминокислотную последовательность, которая является частью второго внеклеточного домена APJ.

16. Способ идентификации соединения, которое модулирует взаимодействие между вирусом ВИЧ и APJ-рецептором, предусматривающий инкубацию первой линии клеток человека, которая совместно экспрессирует полипептиды CD4 и APJ, и второй линией клеток человека, которая экспрессирует env-протеин, в условиях, которые усиливают слияние клеток, в присутствии тестируемого соединения или без него, и определение ингибирует ли присутствие тестируемого соединения клеточное слияние между первой линией клеток человека и второй линией клеток человека.

17. Способ по п.16, где клеточное слияние определяют путем выявления репортерной молекулы.

18. Способ по п.17, где репортерную молекулу выбирают из группы, включающей радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, биолюминисцентное соединение, хемилюминисцентное соединение, хелатирующий металл или фермент.

19. Способ по п.17, где репортерная молекула представляет собой β-галактозидазу или люциферазу.

20. Способ идентификации соединения, которое модулирует взаимодействие между вирусом ВИЧ и APJ-рецептором, предусматривающий инкубацию линии клеток человека, которая совместно экспрессирует полипептиды CD4 и APJ, с тестируемым вирусом, несущим env-протеин, в присутствии тестируемого соединения или без него, и определение ингибирует ли присутствие тестируемого соединения заражение линии клеток человека тестируемым вирусом.

21. Способ по п.20, где заражение определяют путем выявления репортерной молекулы.

22. Способ по п.21, где репортерную молекулу выбирают из группы, включающей радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, биолюминисцентное соединение, хемилюминисцентное соединение, хелатирующий металл или фермент.

23. Способ по п.21, где репортерная молекула представляет собой β-галактозидазу или люциферазу.

24. Применение эффективного количества связывающего или блокирующего APJ агента для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения ВИЧ-инфекции, путем ингибирования заражения ВИЧ клетки-мишени, которая экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

25. Способ по п.24, где агент представляет собой антитело к APJ или его эпитопсвязывающий фрагмент.

26. Способ по п.25, где антитело представляет собой моноклональное антитело или поликлональное антитело.

27. Способ по п.24, где агент представляет собой пептидный фрагмент APJ.

28. Применение агента, который подавляет APJ у пациента, для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения пациента, имеющего родственное ВИЧ заболевание, связанное с экспрессией APJ.

29. Способ по п.28, где агент представляет собой антитело к APJ.

30. Способ по п.28, где агент представляет собой антисмысловой полинуклеотид, который гибридизуется с полинуклеотидом APJ.

31. Способ по п.28, где агент интродуцируют в клетку с помощью носителя.

32. Способ по п.31, где носитель представляет собой вектор.

33. Применение терапевтически эффективного количества антитела к APJ или его пептидного фрагмента для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения пациента, имеющего риск заражения ВИЧ или родственным заболеванием.

34. Применение по п.33, где пациент представляет собой эмбрион.

35. Трансгенное животное, которое не представляет собой человека, имеющее фенотип, отличающийся экспрессией полипептида APJ и полипептида CD4, который не встречается у животного в естественных условиях, где фенотип обусловлен трансгеном, содержащимся в соматических клетках и зародышевых клетках животного, и где трансген содержит полинуклеотид, кодирующий полипептид APJ и полинуклеотид, кодирующий полипептид CD4.