RU2071765C1 - Method of liposome preparation - Google Patents
Method of liposome preparation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2071765C1 RU2071765C1 RU94027344A RU94027344A RU2071765C1 RU 2071765 C1 RU2071765 C1 RU 2071765C1 RU 94027344 A RU94027344 A RU 94027344A RU 94027344 A RU94027344 A RU 94027344A RU 2071765 C1 RU2071765 C1 RU 2071765C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- liposomes
- film
- dispersion
- microemulsion
- lipid
- Prior art date
Links
- 239000002502 liposome Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 6
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims abstract 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims abstract 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims description 6
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 8
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 7
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 6
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 6
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 5
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 4
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 4
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 4
- 239000011627 DL-alpha-tocopherol Substances 0.000 description 3
- 235000001815 DL-alpha-tocopherol Nutrition 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- LIFNDDBLJFPEAN-BPSSIEEOSA-N (2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[2-[[2-[[(2s)-5-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 LIFNDDBLJFPEAN-BPSSIEEOSA-N 0.000 description 2
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 2
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 2
- 241000257465 Echinoidea Species 0.000 description 2
- LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LLEUXCDZPQOJMY-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 2
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 2
- 108010017853 gangliin Proteins 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108010001708 stroma free hemoglobin Proteins 0.000 description 2
- 230000002047 thymogen Effects 0.000 description 2
- 108010014252 thymogen Proteins 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001993 dienes Chemical class 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
Abstract
Description
Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может найти применение при получении липосом, в частности липосом, содержащих терапевтические вещества. The present invention relates to medicine, namely to pharmacology, and may find application in the preparation of liposomes, in particular liposomes containing therapeutic substances.
Липосомы искусственные фосфолипидные везикулы являются универсальным контейнером для доставки лекарственных препаратов непосредственно в клетку. Они защищают включенное соединение от разрушающего действия ферментов плазмы, снижают токсичность инкапсулируемых веществ и пролонгируют их действие в организме. Методы получения существенным образом влияют на свойства липосом. От технологии приготовления зависит размер везикул, степень окисления липидов (ПОЛ), входящих в состав оболочки (липосомы с высоким соединением продуктов ПОЛ могут быть токсичными для организма), их внутренний объем, стабильность при хранении и др. свойства. Artificial liposomes phospholipid vesicles are a universal container for delivering drugs directly to the cell. They protect the incorporated compound from the destructive effect of plasma enzymes, reduce the toxicity of encapsulated substances and prolong their action in the body. Production methods significantly affect the properties of liposomes. The size of the vesicles, the degree of oxidation of the lipids (lipid peroxidation) that make up the membrane (liposomes with a high connection of lipid peroxidation products may be toxic to the body), their internal volume, storage stability, and other properties depend on the preparation technology.
Одним из основных требований, предъявляемым к препаратам для внутривенного введения, является мелкий размер частиц (менее 1 мкм, желательно менее 0,5 мкм). Это обусловлено тем, что крупные частицы вызывают эмболию мелких кровеносных сосудов. One of the main requirements for preparations for intravenous administration is a small particle size (less than 1 μm, preferably less than 0.5 μm). This is due to the fact that large particles cause embolism of small blood vessels.
Известен способ получения липосом [1] путем многократной экструзии суспензии липидов через поликарбонатные фильтры диаметром 25 мм и с размером пор от 200 до 30 нм под давлением азота около 800 фунт/дюйм2 (около 54 ати) и при температуре выше температуры фазового перехода наиболее тугоплавкого компонента, то есть до 85oC. При этом получают липосомы диаметром 0,120-0,035 мкм.A method of producing liposomes [1] by repeated extrusion suspension of lipids through polycarbonate filters with a diameter of 25 mm and a pore size of 200 to 30 nm under a nitrogen pressure of about 800 lbs / inch 2 (about 54 psig) and at a temperature above the phase transition temperature of the most refractory component, that is, up to 85 o C. In this case, liposomes with a diameter of 0.120-0.035 microns are obtained.
Недостатком способа [1] является тот факт, что экструзия при температуре выше 40oС приводит к перекисному окислению липидов, что нежелательно.The disadvantage of this method [1] is the fact that extrusion at temperatures above 40 o With leads to lipid peroxidation, which is undesirable.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту к заявляемому способу является способ [2] получения липосом, возможно содержащих терапевтическое или диагностическое вещество, включающий растворение веществ, способных образовывать липидные везикулы, в органическом растворителе, высушивание полученного раствора с образованием липидной пленки, ресуспендирование липидной пленки в дисперсионной среде или в растворе терапевтического или диагностического вещества и диспергирование суспендированных липидов в микроэмульсию путем пропускания суспензии через микрощель при перепаде давления от 12000 до 8000 фунт/дюйм2 (или от 840 до 560 ати). При этом получают липосомы с диаметром менее 0,2 мкм. Липосомы, полученные способом [2] предназначены для диагностики и изучения опухолей человека. Они содержат радионуклеиды, антибиотики и противораковые препараты.The closest in technical essence and the achieved effect to the claimed method is a method [2] for the preparation of liposomes, possibly containing a therapeutic or diagnostic substance, including dissolving substances capable of forming lipid vesicles in an organic solvent, drying the resulting solution to form a lipid film, resuspending the lipid film in a dispersion medium or in a solution of a therapeutic or diagnostic substance and dispersing suspended lipids into a microemulsion iju by passing the slurry through the microcracks at a differential pressure of 12,000 to 8000 lb / in2 (or from 840 to 560 psig). In this case, liposomes with a diameter of less than 0.2 microns are obtained. Liposomes obtained by the method [2] are intended for the diagnosis and study of human tumors. They contain radionuclides, antibiotics and anti-cancer drugs.
Недостатком способа [2] является слишком высокое давление, при котором происходит диспергирование липидов в микроэмульсию. По нашим данным (см. контрольный пример 4) подъем давления до 400-450 ати уже приводит к заметному увеличению степени окисленности получаемых липосом. The disadvantage of this method [2] is too high a pressure at which the dispersion of lipids into the microemulsion occurs. According to our data (see control example 4), a rise in pressure to 400-450 ati already leads to a noticeable increase in the degree of oxidation of the resulting liposomes.
Целью предполагаемого изобретения является получение липосом с диаметром частиц менее 0,5 мкм, характеризующихся низкой степенью перекисного окисления липидов. The aim of the proposed invention is to obtain liposomes with a particle diameter of less than 0.5 μm, characterized by a low degree of lipid peroxidation.
Указанная цель достигается тем, что в способе получения липосом, включающем растворение веществ, способных образовывать липидные везикулы, в органическом растворителе, высушивание полученного раствора с образованием липидной пленки, ресуспендирование липидной пленки в дисперсионной среде и диспергирование суспендированных липидов в микроэмульсию пропусканием суспензии через микрощель при перепаде давления, диспергирование в микроэмульсию проводят при перепаде давления от 50-300 ати до нормального. This goal is achieved by the fact that in the method of producing liposomes, which includes dissolving substances capable of forming lipid vesicles in an organic solvent, drying the resulting solution to form a lipid film, resuspending the lipid film in a dispersion medium and dispersing suspended lipids into a microemulsion by passing the suspension through a microgap during a drop pressure, dispersion into a microemulsion is carried out at a pressure drop from 50-300 ati to normal.
В качестве дисперсионной среды может быть использована вода или водные растворы терапевтических лекарственных средств. В последнем случае полученные липосомы содержат терапевтические вещества. As a dispersion medium, water or aqueous solutions of therapeutic drugs can be used. In the latter case, the resulting liposomes contain therapeutic substances.
В качестве терапевтических веществ могут быть использованы цитостатики, такие как циклофосфан, свободный от стромы гемоглобин, цитохром C, DL-α-токоферол, иммуномодуляторы (тимоген, тималин, ганглиин), полиненасыщенные жирные кислоты из морских животных и другие препараты. При этом соотношение липидсодержащих компонентов и терапевтических препаратов варьируется от 5800:1 до 1:5. As therapeutic substances, cytostatics such as cyclophosphamide, stroma-free hemoglobin, cytochrome C, DL-α-tocopherol, immunomodulators (thymogen, thymalin, gangliin), polyunsaturated fatty acids from marine animals and other drugs can be used. The ratio of lipid-containing components and therapeutic drugs varies from 5800: 1 to 1: 5.
В качестве липидных веществ используются лецитины растительного происхождения (например, соевый лецитин или гидрированный на 50% соевый лецитин), лецитины животного происхождения (из икры морского ежа, яичный), а также отрицательно заряженный фосфолипидный компонент (ОЗФК), то есть смесь кислых фосфолипидов, выделяемая из соевых фосфатидов как единый компонент. Липидные вещества могут также включать холестерин, токоферол и др. As lipid substances, vegetable lecithins are used (for example, soya lecithin or 50% hydrogenated soya lecithin), animal lecithins (from sea urchin caviar, egg), as well as a negatively charged phospholipid component (OZPK), i.e. a mixture of acid phospholipids, secreted from soybean phosphatides as a single component. Lipid substances may also include cholesterol, tocopherol, etc.
Диспергирование проводили на гомогенизаторе марки Manton-Gaulin, модель 15M-8TA, подобном тому, который использовали в способе [2]
Заявляемый способ далее иллюстрируется примерами.Dispersion was carried out on a homogenizer brand Manton-Gaulin, model 15M-8TA, similar to that used in the method [2]
The inventive method is further illustrated by examples.
Пример 1. 68 мл 10%-ного раствора мембранообразующих компонентов, а именно соевого лецитина, холестерина, ОЗФК при соотношении компонентов 15:5:2, в хлороформе высушивали в круглодонной колбе на роторном испарителе до образования пленки, которую дополнительно высушивали 10 часов в вакуумном эксикаторе. К полученной пленке добавляли в качестве дисперсионной среды 300 мл сорбитфосфатного буфера (pH 7,5), содержимое перемешивали при 35-40oC до полного смывания пленки. Полученную грубую липосомальную суспензию диспергировали на гомогенизаторе высокого давления Manton-Gaulin в течение 5 минут при перепаде давлений от 50 ати до нормального (число циклов гомогенизирования 10). Тонкодисперсную однородную липосомальную эмульсию стерилизовали фильтрацией, разливали во флаконы и укупоривали.Example 1. 68 ml of a 10% solution of membrane-forming components, namely soya lecithin, cholesterol, OZPK at a ratio of components of 15: 5: 2, in chloroform was dried in a round bottom flask on a rotary evaporator until a film was formed, which was further dried for 10 hours in a vacuum desiccator. To the resulting film, 300 ml of sorbitol phosphate buffer (pH 7.5) was added as a dispersion medium, the contents were stirred at 35-40 ° C until the film was completely washed off. The resulting coarse liposome suspension was dispersed on a Manton-Gaulin high pressure homogenizer for 5 minutes at a pressure drop from 50 atm to normal (the number of homogenization cycles was 10). A finely divided homogeneous liposomal emulsion was sterilized by filtration, poured into vials and sealed.
Полученная эмульсия липосом исследовалась по следующим параметрам. Дисперсность липосом определяли методом спектротурбидиметрии. Для контроля перекисного окисления липидов (ПОЛ) использовали "индекс Клейна" или индекс окисленности. Промежуточные соединения при ПОЛ, диеновые коньюгаты (ДК) определяли спектрофотометрическим методом. Вторичные продукты ПОЛ, малоновый диальдегид (МДА) определяли с помощью теста тиобарбитуровой кислоты. Кислотность среды (pH) измеряли на pH-метре. Результаты испытания липосомальной эмульсии приведены в таблице 1. The resulting emulsion of liposomes was investigated by the following parameters. The dispersion of liposomes was determined by spectroturbidimetry. To control lipid peroxidation (POL), a Klein index or oxidation index was used. Intermediate compounds during lipid peroxidation, diene conjugates (DC) were determined by spectrophotometric method. Secondary products of LPO, malondialdehyde (MDA) were determined using the thiobarbituric acid test. The acidity of the medium (pH) was measured on a pH meter. The test results of the liposomal emulsion are shown in table 1.
Пример 2. Липосомы получали как в примере 1, но грубую липосомальную суспензию диспергировали на гомогенизаторе в течение 5 минут (10 циклов) при перепаде давления от 210 ати до нормального. Example 2. Liposomes were obtained as in example 1, but the coarse liposome suspension was dispersed on a homogenizer for 5 minutes (10 cycles) at a pressure drop from 210 atm to normal.
Исследование физико-химических характеристик полученной эмульсии липосом проводили как в примере 1. Результаты представлены в таблице 1. The study of the physico-chemical characteristics of the obtained emulsion of liposomes was carried out as in example 1. The results are presented in table 1.
Пример 3. 68 мл 10%-ного раствора гидрированного на 50% соевого лецитина, холестерина и ОЗФК при соотношении компонентов 15:5:2 в хлороформе высушивали до образования пленки. К полученной пленке добавляли 300 мл фосфатного буфера, перемешивали при 35-40oC до смывания пленки, диспергировали на гомогенизаторе в течение 3 минут (6 циклов гомогенизирования) при перепаде давлений от 300 ати до нормального и стерилизовали.Example 3. 68 ml of a 10% solution of 50% hydrogenated soya lecithin, cholesterol and OZPK at a ratio of components of 15: 5: 2 in chloroform was dried to form a film. 300 ml of phosphate buffer was added to the resulting film, stirred at 35-40 ° C until the film was washed off, dispersed on a homogenizer for 3 minutes (6 homogenization cycles) at a pressure drop from 300 atm to normal and sterilized.
Физико-химические характеристики эмульсии липосом представлены в таблице 1. Physico-chemical characteristics of the emulsion of liposomes are presented in table 1.
Пример 4 (контрольный). Раствор мембранообразующих компонентов, аналогичных по составу таковым в примере 1, высушивали до образования пленки, добавляли сорбитфосфатный буфер, перемешивали при 35-40oC до смывания пленки и диспергировали в течение 5 минут (10 циклов гомогенизирования) при перепаде давления от 450 ати до нормального. Липосомальную эмульсию стерилизовали фильтрацией и исследовали как в примере 1. Результаты представлены в таблице 1.Example 4 (control). A solution of membrane-forming components similar in composition to those in Example 1 was dried until a film was formed, sorbitol phosphate buffer was added, stirred at 35-40 ° C until the film was washed off and dispersed for 5 minutes (10 cycles of homogenization) at a pressure drop from 450 atm to normal . The liposomal emulsion was sterilized by filtration and investigated as in example 1. The results are presented in table 1.
Как видно из таблицы 1, диаметр полученных везикул составляет не более 0,3 мкм при гомогенизировании в пределах перепада давлений 50-300 ати, при увеличении давления до 450 ати средний размер липосом уменьшается до 0,02 мкм, но при этом наблюдается рост продуктов ПОЛ. As can be seen from table 1, the diameter of the obtained vesicles is not more than 0.3 μm when homogenized within a pressure differential of 50-300 ati, with an increase in pressure to 450 ati, the average size of liposomes decreases to 0.02 μm, but there is an increase in lipid peroxidation products .
Пример 5. Раствор мембранообразующих компонентов как в примере 1 высушивали до образования пленки. К полученной пленке добавляли 300 мл 10%-ного раствора циклофосфана в сорбитфосфатном буфере при соотношении липидсодержащих компонентов и циклофосфана 2,3:1. Содержимое перемешивали при 35oC до полного смывания пленки и диспергировали на гомогенизаторе при перепаде давлений от 220 ати до нормального в течение 3 минут (6 циклов гомогенизирования). Отделение наполненных липосом от невключившегося в липосомы циклофосфана и замену дисперсионной среды на сорбитфосфатный буфер проводили методом ультрафильтрации через мембраны типа Халипор 3-20000 при давлении азота 0,5 ати. Отмытые липосомы стерилизовали фильтрацией через фильтр "Миллипор" (d= 0,22 мкм). Количественное определение содержания циклофосфана в липосомальной суспензии проводили согласно Государственной Фармакопее X роданометрическим методом после разрушения липосом тритоном X-100.Example 5. A solution of membrane-forming components as in example 1 was dried until a film was formed. To the resulting film was added 300 ml of a 10% solution of cyclophosphamide in sorbitol phosphate buffer at a ratio of lipid-containing components and cyclophosphamide of 2.3: 1. The contents were mixed at 35 ° C. until the film was completely washed off and dispersed on a homogenizer at a pressure drop from 220 atm to normal for 3 minutes (6 cycles of homogenization). Separation of filled liposomes from cyclophosphamide that was not included in the liposomes and replacement of the dispersion medium with sorbitol phosphate buffer was carried out by ultrafiltration through Halipor 3-20000 membranes at a nitrogen pressure of 0.5 ati. The washed liposomes were sterilized by filtration through a Millipore filter (d = 0.22 μm). The quantification of the cyclophosphamide content in the liposomal suspension was carried out according to the State Pharmacopoeia X by the rhodanometric method after liposome destruction by Triton X-100.
Результаты изучения физико-химических характеристик липосом с циклофосфаном представлены в таблице 2. The results of the study of the physicochemical characteristics of liposomes with cyclophosphamide are presented in table 2.
Пример 6. 68 мл 10%-ного раствора в хлороформе гидрированного на 50% соевого лецитина, холестерина, ОЗФК и DL-a-токоферола при соотношении компонентов 87: 25:12:1 высушивали до образования пленки, продували азотом и добавляли 12%-ный раствор свободного от стромы гемоглобина в фосфатном буфере, содержащем 21% глюкозы, при соотношении липидсодержащих компонентов и гемоглобина 1: 7. Содержимое перемешивали при 20oC до растворения пленки. Полученную липосомальную суспензию диспергировали при 4oC на гомогенизаторе при перепаде давлений от 50 ати до нормального в течение 5 минут (10 циклов гомогенизирования). Отделение неинкапсулированного гемоглобина осуществляли центрифугированием при 3500 об/мин при 4oC. Концентрацию гемоглобина в липосомах определяли после раскрытия липосом тритоном X-100 спектрофотометрическим методом. Суспензия липосом исследовалась как в примере 1. Результаты изучения физико-химических свойств представлены в таблице 3.Example 6. 68 ml of a 10% solution in chloroform of 50% hydrogenated soya lecithin, cholesterol, OZPK and DL-a-tocopherol at a component ratio of 87: 25: 12: 1 was dried to form a film, purged with nitrogen and 12% was added - solution of stroma-free hemoglobin in a phosphate buffer containing 21% glucose, with a ratio of lipid-containing components and hemoglobin of 1: 7. The contents were mixed at 20 ° C until the film was dissolved. The resulting liposomal suspension was dispersed at 4 ° C on a homogenizer with a pressure drop of 50 atm to normal for 5 minutes (10 cycles of homogenization). Unencapsulated hemoglobin was separated by centrifugation at 3500 rpm at 4 ° C. The concentration of hemoglobin in liposomes was determined after opening of the liposomes with Triton X-100 spectrophotometrically. A suspension of liposomes was studied as in example 1. The results of the study of physico-chemical properties are presented in table 3.
Примеры 7-12. Пленку из мембранообразующих компонентов получали согласно примеру 1. В качестве инкапсулируемых препаратов использовали ганглиин, тималин, тимоген, цитохром С, DL-a-токоферол и смесь высоконепредельных жирных кислот, входящих в состав фосфолипидов из икры морского ежа. Examples 7-12. A film of membrane-forming components was obtained according to Example 1. Gangliin, thymalin, thymogen, cytochrome C, DL-a-tocopherol and a mixture of highly unsaturated fatty acids that are part of phospholipids from sea urchin caviar were used as encapsulated preparations.
Полученные суспензии липосом исследовались как в примере 1. Данные представлены в таблице 4. The resulting suspension of liposomes was investigated as in example 1. The data are presented in table 4.
Как видно из данных таблиц 1-4, предлагаемый способ получения липосом, содержащих различные терапевтические средства, методом гомогенизирования при перепаде давлений в пределах от 50-300 ати до нормального на гомогенизаторе высокого давления обеспечивает получение тонкодисперсных эмульсий липосом со средним диаметром, не превышающим 0,4 мкм, что отвечает требованиям, предъявляемым к препаратам для внутривенного, внутримышечного и подкожного введения. As can be seen from the data of tables 1-4, the proposed method for producing liposomes containing various therapeutic agents by homogenization at a pressure drop ranging from 50-300 ati to normal on a high pressure homogenizer provides finely dispersed liposome emulsions with an average diameter not exceeding 0, 4 microns, which meets the requirements for drugs for intravenous, intramuscular and subcutaneous administration.
Предлагаемый способ обеспечивает получение малоокисленных липосом в заявляемом интервале давлений. При повышении давления выше 450 ати наблюдается рост продуктов ПОЛ, что необходимо избегать при работе с терапевтическими препаратами. The proposed method provides for the production of low-oxidized liposomes in the claimed pressure range. With an increase in pressure above 450 ati, an increase in LPO products is observed, which must be avoided when working with therapeutic drugs.
Данные изучения терапевтической эффективности полученных липосомальных препаратов приведены в таблице 5. The data of the study of the therapeutic efficacy of the obtained liposome preparations are shown in table 5.
Как видно из данных таблицы 5, полученные по предлагаемому способу липосомы с терапевтическими препаратами показали по сравнению с нативной формой этих препаратов пролонгирование в организме и увеличение терапевтической эффективности. As can be seen from the data of table 5, the liposomes obtained with the therapeutic preparations according to the proposed method showed, in comparison with the native form of these preparations, prolongation in the body and an increase in therapeutic efficacy.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027344A RU2071765C1 (en) | 1994-07-14 | 1994-07-14 | Method of liposome preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU94027344A RU2071765C1 (en) | 1994-07-14 | 1994-07-14 | Method of liposome preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94027344A RU94027344A (en) | 1996-05-10 |
| RU2071765C1 true RU2071765C1 (en) | 1997-01-20 |
Family
ID=20158740
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94027344A RU2071765C1 (en) | 1994-07-14 | 1994-07-14 | Method of liposome preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2071765C1 (en) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2223749C2 (en) * | 1997-09-23 | 2004-02-20 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Liposome aerosols with small-size particles for transporting anticancer therapeutic preparations |
| RU2297827C2 (en) * | 2001-09-28 | 2007-04-27 | Эсперион Терапьютикс, Инк. | Method and the device for carrying out vesicle extrusion under high pressure |
| RU2306949C2 (en) * | 2005-10-24 | 2007-09-27 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства | Protective medium for virus vaccine production in aviculture |
| RU2395493C2 (en) * | 2003-10-23 | 2010-07-27 | Тс Фарма | Novel surfactants and use thereof |
| US7803413B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-09-28 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc. | Encapsulation of readily oxidizable components |
| RU2476235C2 (en) * | 2008-12-23 | 2013-02-27 | Грифольс, С.А. | Compositions of biocompatible microparticles of alginic acid for regulated release of active ingredients in intravenous introduction |
| EA023080B1 (en) * | 2012-12-24 | 2016-04-29 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" | Process for preparation of inhalational liposomal form of rifabutin |
| RU2745290C2 (en) * | 2019-04-12 | 2021-03-23 | Ирина Николаевна Кузнецова | Emulsion of perfluorocarbon compounds for biomedical purposes and a method for its production |
-
1994
- 1994-07-14 RU RU94027344A patent/RU2071765C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Патент ЕР N 0190050, кл. А 61 К 9/50, 1986. * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2223749C2 (en) * | 1997-09-23 | 2004-02-20 | Рисерч Дивелопмент Фаундейшн | Liposome aerosols with small-size particles for transporting anticancer therapeutic preparations |
| RU2297827C2 (en) * | 2001-09-28 | 2007-04-27 | Эсперион Терапьютикс, Инк. | Method and the device for carrying out vesicle extrusion under high pressure |
| RU2395493C2 (en) * | 2003-10-23 | 2010-07-27 | Тс Фарма | Novel surfactants and use thereof |
| RU2306949C2 (en) * | 2005-10-24 | 2007-09-27 | Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства | Protective medium for virus vaccine production in aviculture |
| US7803413B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-09-28 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc. | Encapsulation of readily oxidizable components |
| US7803414B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-09-28 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc | Encapsulation of readily oxidizable components |
| RU2420082C2 (en) * | 2005-10-31 | 2011-06-10 | Дженерал Миллз, Инк. | Easily oxidable components encapsulation |
| US8142831B2 (en) | 2005-10-31 | 2012-03-27 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc | Encapsulation of readily oxidizable components |
| RU2476235C2 (en) * | 2008-12-23 | 2013-02-27 | Грифольс, С.А. | Compositions of biocompatible microparticles of alginic acid for regulated release of active ingredients in intravenous introduction |
| EA023080B1 (en) * | 2012-12-24 | 2016-04-29 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Технология Лекарств" | Process for preparation of inhalational liposomal form of rifabutin |
| RU2745290C2 (en) * | 2019-04-12 | 2021-03-23 | Ирина Николаевна Кузнецова | Emulsion of perfluorocarbon compounds for biomedical purposes and a method for its production |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU94027344A (en) | 1996-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4844904A (en) | Liposome composition | |
| AU738020B2 (en) | Method for producing liposomes with increased percent of compound encapsulated | |
| US4687661A (en) | Method for producing liposomes | |
| DE69425773T2 (en) | Stable aqueous dispersions containing liposomes | |
| JPS60155109A (en) | Liposome pharmaceutical | |
| CA1302885C (en) | Method of preparing single bilayered liposomes | |
| WO2008109031A2 (en) | Liposome carriers for in vivo delivery of fullerenes | |
| PL181541B1 (en) | Stable liposomal medicinal preparations PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL | |
| RU2071765C1 (en) | Method of liposome preparation | |
| KR101739208B1 (en) | A hybrid multilamellar nanostructure of epidermal growth factor and liposome and a preparation method of the same | |
| RU2605616C1 (en) | Liposomal agent based on ubiquinol and preparation method thereof | |
| EP0598116B1 (en) | Fat emulsion | |
| US4935244A (en) | Nedocromil sodium compositions and methods for their preparation | |
| EP0346472B1 (en) | Process for preparing liposomes | |
| RU2223764C1 (en) | Method for preparing rifampicin liposomal form | |
| WO1995026185A1 (en) | Liposome with increased retention volume | |
| DE60127140T2 (en) | AMPHOTERICIN B CONTAINING STRUCTURED EMULSION | |
| JP3249583B2 (en) | Liposome preparation | |
| RU2084219C1 (en) | Liposome vesicle | |
| KR100535213B1 (en) | Nano liquid crystal carrier comprising a water-soluble physiological active compound, method for producing the same and composition containing the same | |
| JPH0651109B2 (en) | Lipid membrane structure | |
| CN110934829B (en) | Nanometer micelle of aprepitant | |
| KR920008159B1 (en) | Process for preparing lyposome of flavonoid | |
| WO1994011100A1 (en) | Stable aqueous liposome suspension | |
| JPS6350330B2 (en) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20120715 |