[go: up one dir, main page]

RS63698B1 - Anti-ror2 antitela, fragmenti antitela, njihovi imunokonjugati i njihove upotrebe - Google Patents

Anti-ror2 antitela, fragmenti antitela, njihovi imunokonjugati i njihove upotrebe

Info

Publication number
RS63698B1
RS63698B1 RS20220999A RSP20220999A RS63698B1 RS 63698 B1 RS63698 B1 RS 63698B1 RS 20220999 A RS20220999 A RS 20220999A RS P20220999 A RSP20220999 A RS P20220999A RS 63698 B1 RS63698 B1 RS 63698B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
ror2
seq
antibodies
variable region
Prior art date
Application number
RS20220999A
Other languages
English (en)
Inventor
Jay M Short
Hwai Wen Chang
Gerhard Frey
Original Assignee
Bioatla Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioatla Inc filed Critical Bioatla Inc
Publication of RS63698B1 publication Critical patent/RS63698B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • G01N33/575—
    • G01N33/5758—
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj se opis odnosi na anti-Ror2 antitela ili fragmente antitela, imunokonjugate takvih antitela ili fragmente antitela, i farmaceutske supstance takvih antitela ili fragmenata antitela.
STANJE TEHNIKE
[0002] Receptor tirozinskih kinaza (RTK) su familija receptora na površini ćelija koji regulišu opseg normalnih ćelijskih procesa aktivnošću ligandom kontrolisane tirozinske kinaze. Tokom poslednjih 20 godina, deregulacija receptora tirozinskih kinaza (RTK) je pokazala da igra ključnu ulogu u razvoju i progresiji kancera. Receptor tirozinskih kinaza (RTK) se sada prepoznaju kao prognostički molekularni biomarkeri i kao ciljevi lekova za onkološke terapije.
[0003] Ror2, se takođe zove receptor 2 siroče nalik na receptor tirozinske kinaze, je membranom vezan RTK koji se aktivira nekanonskim Wnt signaliziranjem zahvaljujući njegovoj povezanosti sa Wnt5A glikoproteinom tokom normalnog razvoja kosti i hrskavice. Ror2 ima samo jedan domen transmembrane koji odvaja njegove vanćelijske i unutar ćelijske domene (FIG.1). Ror2 je poznat da igra ključne uloge u normalnom razvoju različitih organa i tkiva. Kod sisara, miševi sa manjkom Ror2- i Wnt5A ispoljavaju slične anomalije tokom razvojnih morfogeneza, što se pokazuje kao njihova nesposobnost za pokrete produžetka približavanja pretvore pokrete produžavanja i polaritet planarne ćelije. Pored toga, mutacije humanog Ror2 gena su odgovorne za tip B brahidaktili dominantne genetske poremećaja skeleta i recesivni Robinov (Robinow) sindrom. Ror2 se pokazao da posreduje u polarizovanoj ćelijskoj migraciji i otkazivanje Ror2 daje kao rezultat nasledne poremećaje skeleta i invaziju tumora (Minami et al., "Ror-family receptor tyrosine kinases in noncanonical Wnt signaling: their implications in developmental morphogenesis and human diseases (Receptor tirozinskih kinaza Ror familije za nekanonsko Wnt signaliziranje: njihove implikacije za razvojnu morfogenezu i bolesti kod ljudi)," Dev Dyn., vol.239, pp.1-15, 2010).
[0004] Ror2 je takođe prijavio da ima protumorigena dejstva. Američki patent br. US 2014/0322234 opisuje da je eksprimovanje i aktivnost Ror2 kod različitih kancera različito u odnosu na normalna tkiva. Dakle, pretpostavlja se da poremećaj regulacije Ror2 kinaze igra ulogu u patogenezi raznoraznih kancera kod ljudi. Prijava US 2014/0322234 takođe razmatra da je antitela protiv Ror2 moguće koristiti za dijagnozu kancera i inhibiciju rasta ćelija kancera. Na primer, takva antitela je moguće konjugovati na citotoksični agens koji ima visok stepen citotoksičnosti za ćelije kancera koje sipoljavaju Ror2, tako da citotoksični agens može efikasno da ubije ćelije kancera. Ror2 gen je takođe moguće koristiti za klasifikaciju kancera prema obrascu eksprimovanja Ror2 kinaze u slučaju kancera.
[0005] Ford i saradnici (Ford et al. ("The dual role of the novel Wnt receptor tyrosine kinase, Ror2, in human carcinogenesis (Dvostruka uloga novih Wnt receptora tirozinskih kinaza, Ror2, za nastanak kancera kod ljudi)," International Journal of Cancer, vol.133, pp.779-787, 2013) još istražuje mehanizam Ror2 u nastanku kancera. Ova referenca opisuje da je Ror2 uključen u razvoj i napredovanje kancera. Specifično, Ror2 je pokazao da igra ključnu ulogu u nastanku brojnih kancera uključujući kancer debelog creva, karcinom hepatoćelija, metastazni melanom i karcinom renalne ćelije. Na primer, Ror2 je prekomerno eksprimovan u slučaju osteosarkoma, melanoma, karcinoma renalne ćelije, karcinoma prostate, karcinoma skvamozne (sunđeraste) ćelije, glave i vrata i stromalnim tumorima. Ror2 dakle ima potencijal da bude ciljni lek za terapije kancera inhibicijom Wnt signalnih putanja.
[0006] Pored toga, (Debebe et al., "Ror2 as a therapeutic target in cancer (Debebe i saradnici Ror2 kao terapijski cilj za kancer)," Pharmacol. Ther., vol.50, pp.143-148, 2015) opisuje da Ror2 posreduje i kanonskim i nekanonskim signalnim putanjama. Ror2 je izrazito eksprimovan u slučaju osteosarkoma i karcinoma renalne ćelije, kao i kod melanoma, kancera debelog creva, karcinoma skvamozne (sunđeraste) ćelije glave i vrata, i kancera dojke. Kod većine ovih tipova kancera, eksprimovanje Ror2 se povezuje sa agresivnijim stanjima kancera. Dakle, ova referenca takođe nagoveštava da je Ror2 potencijalni cilj za lečenje kancera.
[0007] WO2013/103637 opisuje Ror2 kao terapijski cilj i prognostički marker za kancere, i upotrebu konjugata koji obuhvataju antitelo koje prepoznaje i vezuje Ror2 i citotoksični agens (videti Apstrakt).
[0008] WO2013/134743 opisuje uslovno aktivna anti-EGFR antitela i molekule nukleinske kiseline koji kodiraju uslovno aktivna anti-EGFR antitela (videti "Field of the Invention (Oblast pronalaska)").
[0009] (Chang C. et al., "Novel conditionally active biologic anti-Axl antibody-drug conjugate demonstrates anti-tumor efficacy and improved safety profile (Čang C. i saradnici, Novi aktivni biološki anti-Axl konjugat antitelo-lek pokazuje efikasnost protiv tumora i poboljšani profil bezbednosti)," Godišnji susret AACR, april 2016 (AACR Annual Meeting, April 2016)), opisuje uslovno aktivne biološke lekove (CAB)-Axl antitela konjugovana na model koji nosi toksin da bi se generisali CAB-Axl-ADCs (konjugati antitelo lek) (Apstrakt).
[0010] WO2016/138071 opisuje postupke generisanja uslovno aktivnih bioloških proteina, koji su aktivniji u stanju odstupanja nego u normalnom fiziološkom stanju (videti Apstrakt).
[0011] Mada monoklonalna antitela protiv Ror2 jesu komercijalno dostupna, anti-Ror2 antitela pogodna za terapiju kancera nisu prijavljena. Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-Ror2 antitela ili fragmente antitela koji imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 u slučaju tumora u poređenju sa Ror2 prisutinim u normalnom tkivu. Ta anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela imaju barem uporedivu efikasnost kao i duži poluvek, ali smanjena neželjena dejstva, u poređenju sa monoklonalnim anti-Ror2 antitelima poznatim u ovoj oblasti. Ovo može dozvoliti upotrebu viših doza ovih anti- Ror2 antitela ili fragmenata antitela, čime se tako obezbeđuje efikasnija terapijska opcija bez odgovarajućeg značajnog povećanja neželjenih dejstava.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0012] Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji se specifično vezuje na Ror2 protein sa odnosom afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH u tumoroznom mikrookruženju u poređenju sa drugačijom vrednošću pH koja nastaje u netumoroznom mikrookruženju od najmanje 1,5:1, kako je definisano u priloženom patentnom zahtevu 1.
[0013] U jednom izvođenju ovog varijantnog rešenja, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji uključuje promenljivi region teškog lanca (VH) a koji ima sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 21, i SEK ID BR: 22, promenljivi region lakog lanca (VL) a koji ima sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 15, i SEK ID BR: 16.
[0014] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje imunokonjugat koji uključuje antitelo ili fragment antitela iz ovog pronalaska.
[0015] U jednom izvođenju ovog varijantnog rešenja iz ovog pronalaska, ovaj pronalazak obezbeđuje imunokonjugat koji uključuje antitelo ili fragment antitela iz ovog pronalaska koji je konjugovan na najmanje jedan agens izabran iz hemoterapijskog agensa, radioaktivnog atoma, citostatičkog agensa i citotoksičnog agensa.
[0016] Ovaj pronalazak još obezbeđuje farmaceutsku supstancu koja uključuje antitelo ili fragment antitela, ili imunokonjugat iz ovog pronalaska, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0017] Druga specifična svojstva iz ovog pronalaska se iznosi u priloženom nizu patentnih zahteva.
KRATAK OPIS SLIKA
[0018]
SL. 1 je šematski dijagram strukture humanog Ror2 proteina. Taj protein obuhvata domen sličan Ig (Ig), uvojitog ili cisteinom bogatog (CRD) domena, i kringl (Kr) domen u vanćelijskom domenu. Vanćelijski i unutarćelijski domeni su odvojeni transmembranskim (TM) domenom. Unutarćelijski domen sadrži domen tirozinske kinaze (TK) i prolinom bogat domen (PR) sa serinom/treoninom (ST) bogatim domenima na bokovima.
SL. 2A-2B pokazuje poravnanja sekvence promenljivih regiona teškog lanca anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska.
SL. 3A-3B pokazuje poravnanja sekvence promenljivih regiona lakog lanca anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska.
SL. 4 pokazuje ekskluzionu (isključivanje) hromatografiju prema veličini da se anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska ne grupišu (nagomilavaju),
kao što je opisano u Primeru 1.
SL. 5 pokazuje profile vezivanja koji zavise od pH vrednosti za anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska za vezivanje na Ror2, kao što je opisano u Primeru 1.
SL. 6A-6B pokazuje stope povećane i smanjene za uslovno aktivna antitela iz ovog pronalaska kako je izmereno ogledom površinske rezonance plazmona (SPR), kao što je opisano u Primeru 1.
SL. 7A-7B pokazuje dejstva na zapreminu tumora za lečenje ksenografisanih miševa sa paklitakselom konjugovanim anti-Ror2 antitelom iz ovog pronalaska, kao što je opisano u Primeru 2.
SL. 8 pokazuje od pH zavisan afinitet vezivanja za primer uzetog uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska izmereno pH titracijom.
SL. 9 pokazuje afinitet vezivanja uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska na Ror2 proteine ljudi, makaki majmuna, i miša.
SL. pokazuju ubijanje ćelijom uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska konjugovanog na Monometil auristatin E (MMAE) na HEK293 ćelijama koje eksprimuju humani Ror2.
SL. 11A-11C pokazuju ubijanje ćelijom uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska konjugovanog prema/na MMAE na LCLC103H ćelijama.
SL. 12A-12C pokazuju ubijanje ćelijom uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska konjugovanog prema/na MMAE na HT1080 ćelijama.
SL. 13 pokazuje lečenje tumora kod miševa indukovano LCLC103H korišćenjem aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska konjugovanog na MMAE.
SL. 14 pokazuje lečenje tumora kod miševa indukovano LCLC103H korišćenjem uslovno aktivnog antitela BAP048
iz ovog pronalaska konjugovano na MMAE kroz različite linkere.
SL. 15A-15B pokazuje lečenje tumora kod miševa indukovano HT1080 ili MDA-MB-436 prema opisanog redosledu, korišćenjem uslovno aktivnog antitela BAP048 iz ovog pronalaska konjugovano na MMAE.
DEFINICIJE
[0019] Da bi se pojednostavilo razumevanje primera datih ovde, izvesni pojmovi koji se često ponavljaju su ovde definisani.
[0020] U vezi sa izmerenom količinom, pojam "oko" kako je ovde korišćen se odnosi na normalnu varijaciju za tu izmerenu količinu koja bi očekivao stručnjak koji radi merenje i ispituje nivo nege koji je primeren cilju merenja i preciznosti korišćene merne opreme. Osim ako nije drugačije naznačeno, "oko" se odnosi na varijaciju /- 10% date vrednosti.
[0021] Pojam "afinitet" kako je ovde korišćen se odnosi na jačinu ukupnog zbira nekovalentnih interakcija između jednog mesta vezivanja molekula (npr. antitelo) i njegovog partnera za vezivanje (npr. antigen). Osim ako nije drugačije precizirano, kako je ovde korišćeno, pojam "afinitet vezivanja" se odnosi na urođen afinitet vezivanja koji se odražava u interakciji između članova vezujućeg para (npr., antitelo i antigen). Afinitet molekula X za njegovog partnera Y moguće je generalno predstaviti konstantom razdruživanja (Kd). Afinitet je moguće izmeriti uobičajenim postupcima poznatim u ovoj oblasti, uključujući one opisane ove. Specifični postupci kao ilustracija za merenje afiniteta vezivanja su opisani u nastavku.
[0022] Pojam "afinitetno sazrelo" antitelo kako se ovde koristi se odnosi na antitelo sa jednim ili više prepravaka u jednom ili više hipervarijabilnih regiona (HVR), u poređenju sa roditeljskim antitelom koje ne poseduje takve prepravke, kao što su propravke koje daju kao rezultat poboljšanje afiniteta antitela za antigen.
[0023] Pojam "aminokiselina" kako je ovde korišćen se odnosi na bilo koje organsko jedinjenje koje sadrži amino grupu (--NH2) i karboksilnu grupu (--COOH); preporučljivo bilo kao slboodne grupe ili alternativno posle kondenzacije kao deo peptidnih veza. "Dvadeset prirodno kodiranih alfaaminokiselina koje formiraju polipeptid" se razumeju u ovoj oblasti i odnose na : alanin (ala ili A), arginin (arg ili R), asparagin (asn ili N), asparaginsku kiselinu (asp ili D), cistein (cys ili C), gluatarnu kiselinu (glu ili E), glutamin (gin ili Q), glicin (gly ili G), histidin (his ili H), izoleucin (ile ili I), leucin (leu ili L), lizin (lys ili K), metionin (met ili M), fenilalanin (phe ili F), prolin (pro ili P), serin (ser ili S), treonin (thr ili T), triptofan (tip ili W), tirozin (tyr ili Y), i valin (val ili V).
[0024] Pojam "antitelo" kako je ovde korišćen se odnosi na nedirnute molekule imunoglobulina, kao i na fragmente molekula imunoglobulina, kao što su Fab, Fab’, (Fab’)2, Fv, i SCA fragmenti, koji su sposobni za vezivanje na epitop antigena. Ovi fragmenti antitela, koji zadržavaju nekakvu sposobnost da se selektivno vežu na antigen (npr., antigen polipeptida) tog antitela iz kog su izvedeni, može da se napravi korišćenjem dobro poznatih postupaka u ovoj oblasti (videti, npr. Harlow and Lane (Harlou i Lejn), supra), i detaljnije su opisani, kao u nastavku.
[0025] Fab fragment se sastoji od monovalentnog fragmenta koji vezuje antigen nekog molekula antitela, i može da bude proizveden razgradnjom celog molekula antitela sa enzimom papaina, da bi se dao kao prinos fragment koji obuhvata nedirnuti laki lanac i deo teškog lanca.
[0026] Fab' fragment nekog antitela je moguće dobiti tretiranjem celog molekula antitela pepsinom, posle čega sledi redukcija, da bi se dobio prinos molekula koji obuhvata nedirnuti laki lanac i deo teškog lanca. Dva Fab’fragmenta su dobijena po molekulu antitela tretiranom na ovaj način.
[0027] (Fab’)2 fragment antitela moguće je dobiti tretiranjem celog molekula antitela sa enzimom pepsina, bez naknadne redukcije. (Fab’)2 fragment je dimer dva Fab’ fragmenta, koji se drže pomoću disulfidnih veza.
[0028] Fv fragment je definisan kao genetički projektovan fragment koji obuhvata promenljivi region lakog lanca i promenljivi region teškog lanca eksprimovane kao dva lanca.
[0029] Pojam "antibody fragment" kako je ovde korišćen se odnosi na molekul koji nije nedirnuto antitelo koji sadrži deo nedirnutog antitela koje vezuje antigen na koji se to nedirnuto antitelo vezuje. Primeri fragmenata antitela uključuju ali se ne ograničavaju na Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; diatela; linearna antitela; jednolančane molekule antitela (npr. scFv); i višestrukospecifična antitela formirana iz fragmenata antitela.
[0030] Pojmovi "anti-Ror2 antitelo," "Ror2 antitelo" i "antitelo koje se vezuje na Ror2" kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo koje je sposobno za vezivanje Ror2 sa dovoljnim afinitetom tako da antitelo jeste korisno kao dijagnostički i/ili terapijski agens za ciljanje ROr2. Nivo vezivanja anti-Ror2 antitela na nesrodni, ne-Ror2 protein može da bude manji od oko 10% vezivanja antitela na Ror2 kao što je izmereno, npr. radioimunoogledom (RIA). Antitelo koje se vezuje na Ror2 može imati konstantu disocijacije (Kd) od %1 µM, %100 nM, %10 nM, %1 nM, %0,1 nM, %0,01 nM, ili %0,001 nM (npr.10-8M ili manje, npr. od 10-8M do 10-13M, npr. od 10-9M do 10-13 M). Anti-Ror2 antitelo može da se veže na epitop Ror2 koji je konzervisan između Ror2 od različitih vrsta.
[0031] Pojam "vezivanje" kako je ovde korišćen se odnosi na interakciju promenljivog regiona ili Fv antitela sa antigenom sa interakcijom zavisno od prisustva specifične strukture (npr. antigenski determinant ili epitop) na antigenu. Na primer, promenljivi region antitela ili Fv prepoznaje i vezuje se na specifičnu proteinsku strukturu pre nego na proteine uopšteno. Kako je ovde korišćeno, pojam "specifično vezivanje" ili "vezivanje specifično" znači da se neki promenljivi region antitela ili Fv vezuje na ili udružuje sa češće, brže, sa većim trajanjem i/ili sa većim afinitetom sa specifičnim antigenom nego u slučaju drugih proteina. Na primer, promenljivi region antitela ili Fv se specifično vezuje na njegov antigen sa većim afinitetom, intenzivnije, i spremnije, i/ili sa većim trajanjem nego što se vezuje na druge antigene. Za drugi primer, promenljivi region antitela ili Fv se vezuje na protein na površini ćelije (antigen) sa materijalno većim afinitetom nego što je to slučaj sa srodnim proteinima ili drugim proteinima na površini ćelije, ili na antigene koji se uobičajeno prepoznaju pomoću polireaktivnih prirodnih antitel (npr. antitelima koja se prirodno javljaju na poznatim po tome da vezuju raznovrsne antigene prirodno prisutne kod ljudi). Međutim, ''specifično vezivanje'' ne zahteva obavezno i isključivo vezivanje ili nedektibilnovezivanje drugog antigena, ovo se podrazumeva pod pojmom ''selektivno vezivanje''. U jednom primeru, "specifično vezivanje" promenljivog regiona antitela ili Fv (ili drugi region vezivanja) se vezuje na antigen, znači da se promenljivi region antitela ili Fv vezuje na antigen sa ravnotežnom konstantom (KD) od 100 nM ili manje, kao što je 50 nM ili manje, na primer 20 nM ili manje, kao što je, 15 nM ili manje, ili 10 nM ili manje, ili 5 nM ili manje, 2 nM ili manje, ili 1 nM ili manje.
[0032] Pojmovi "kancer" i "kancerozni" kako je ovde korišćeno se odnose na ili opisuju fiziološko stanje kod sisara koje se najčešće karakteriše neregulisanim rastom/proliferacijom ćelija. Primeri kancera uključuju, ali se ne ograničavaju na, karcinom, limfom (npr. Hodgin's (Hodžkinov) i ne-Hodžkinov limfom), blastom, sarkom, i leukemiju. Specifičniji primeri takvih kancera uključuju kancer sunđeraste (skvamozne) ćelije, sitnoćelijski kancer pluća, nesitnoćelijski kancer pluća, adenokarcinom pluća, skvamozni karcinom pluća, kancer potrbušnice, kancer hepatoćelija, kancer gastrointestinalnog trakta, pankreasni kancer, gliom, kancer materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer bešike / žučne kese bladder cancer, hepatom, kancer dojke, kancer debelog creva, kolorektalni kancer, endometrijsalni ili karcinom materice, karcinom pljuvačne žlezde, kancer bubrega, kancer jetre, kancer prostate, kancer vulve, tiroidni kancer karcinom hepatoćelija, leukemija i drugi limfoproliferativni poremećaji, i različiti tipovi glave i vrata.
[0033] Pojmovi "proliferativni poremećaj ćelije" i "proliferativni poremećaj" kako je ovde korišćeno se odnosi na proremećaje koji se povezuju sa nekim stepenom abnormalne proliferacije ćelije. Proliferativni poremećaj ćelije može da bude kancer.
[0034] Pojam "hemoterapijski agens" kako je ovde korišćeno se odnosi na hemijsko jedinjenjekorisno za lečenje kancera. Primeri hemoterapijskih agensa uključuju alkilacione agense kao što je tiotep i ciklofosfamid (CITOKSAN/CYTOXAN®); alkil sulfonati kao što je busulfan, improsulfan i priposulfan; aziridini kao što je benzodop, karbohuon, meturedop, i uredop; etilenimini i metilamelamini uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenefosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilomelamin; acetogenini (naročito bulatacin i bulatacinon); delta-9-tetrahidrokanabinol (dronabinol, MARINOL®); beta-lapahon; lapahol; colhicini; betulinska kiselina;
kamptotecfin (uključujući sintetički analog tropotekana HICAMTIN (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotekan, KAMPTOSAR (CAMPTOSAR ®)), acetilkamptotecin, skopolektin, i 9-aminokamptotecin); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključčujući njegov adozelesin, karzelesin i bizelesin sintetičke analoge); podofilotoksin; podofilinska kiselina; tenipozid; kriptoficini (specifično kripotoficin 1 i kriptoficin 8); dolastin; duokarmicin uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobin; pankratistatin; sarkodiktiin; spongistatin; azotni iperidi kao što je hlorambucil, hlornafazin, hlorofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil iperit; nitrozouree kao što je karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, i ranimnustin; antibiotici kao što su enediin antibiotici (npr. kaliheamicin, posebno kaliheamicin gama1I i kaliheamicin omegaI1 (videti, npr:; Nicolaou et al. (Nikolau i saradnici), Angew. Chem. Intl. Ed. Engl.,33: 183-186 (1994)); CDP323, i inhibitor oralnog alfa-4 integrina; dinemicin, uključujući dinemicin A; esperamicin; kao i neokarzinostatin hromofor i srodni hromoproteinski enediin antibiotički hromofori), aklacinomizini, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, karabicin, kaminomicin, karzinofilin, hromomicini, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, doksorubicin (uključujući ADRIAMYCIN®, morfolino-doksorubicin, cijanomorfolino-doksorubicin, 2-pirolinodoksorubicin, doksorubicin HCl lipozomnu injekciju (DOKSIL (DOXIL®)), lipozomni doksorubicin TLC D-99 (MIOCET (MYOCET®)), pegilisani lipozomni doksorubicin (KAELIKS (CAELYX®)), i deoksidoksorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicini kao što je mitomicin C, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, porfiromicin, puromicin, kvelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-metaboliti kao što je metotreksat, gemcitabin (GEMZAR®), tegafur (UFTORAL®), kapecitabin (KSELODA (XELODA®)), epotilon, i 5-fluorouracil (5-FU); analoge folne kiseline kao što je denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analozi purina kao što je fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analoge pirimidina kao što je ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgene kao što je kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti- adrenali kao što je aminoglutetimid, mitotan, trilostan; nadopunu folne kiseline kao što je frolinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolvulinska kiselina; eniluracil; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin, mekolcin; diazihinon; elformitin; eliptinium acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiurea; lentinan; lonidainin; maitansinoidi kao što je maitansin i ansamitocini; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; losoksantron; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK® polisaharidni kompleks (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); razoksan; rizoksin; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazihinon; 2,2’,2’- trihlorotrietilamin; trihoteceni (naročito T-2 toksin, veravercurin A, roridin A and anguidine); uretan; vindezin (ELDIZIN (ELDISINE®), FILDEZIN (FILDESIN®)); dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid ("Ara-C"); tiotep; taksoid, npr., paklitaksel (TAKSOL (TAXOL®)), albuminom projektovana formulacija nanočestice paklitaksela (ABRAKSAN (ABRAXANE™)), i docetaksel (TAKSOTER (TAXOTERE®)); hloranbucil; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; agensi platine kao što je cisplatin, oksaliplatin (npr., ELOKSATIN (ELOXATIN®)), i karboplatin; vinka (jedinjenja), koja sprevačavaju polimerizaciju tubulina u pogledu formiranja mikrocevčica, uključujući vinblastin (VELBAN®), vinkristin (ONKOVIN (ONCOVIN®)), vindezin (ELDIZIN (ELDISINE®), FILDEZIN ( FILDESIN®)), i vinorelbin (NAVELBIN (NAVELBINE®)); etopozid (VP-16); ifosfamid; mitoksantron; leukovorin; novantron; edatreksat; daunomicin; aminopterin; ibandronat; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilornitin (DMF®); retinoidi kao što je retinoinska kiselina, uključujući beksaroten (TARGRETIN®); bisfosfonati kao što je klodronat (na primer, BONEFOS® ili OSTAK (OSTAC®)), etidronat (DIDROKAL (DIDROCAL®)), NE-58095, zoledronska kiselina/zoledronat (ZOMETA®), alendronat (FOSAMAKS (FOSAMAX®)), pamidronat (AREDIA®), tiludronat (SKELID®), ili risdronat (AKTONEL (ACTONEL®)); troksakitabin ( analog 1,3-dioksolan nukleozid citozina); antisens oligonukleotidi, specifično oni koji inhibiraju eksprimovanje gena za signalne putanje implicirane za nepravilnu proliferaciju ćelije, kao što je, na primer, PKC-alfa, Raf, H-Ras, i receptor epidermalnog faktora rasta (EGF-R); vakcine kao što je TERATOP (THERATOPE®) vakcina i vakcine za gensku terapiju, na primer, ALOVEKTIN (ALLOVECTIN®) vakcina, LEUVEKTIN (LEUVECTIN®) vakcina, i VAKSID (VAXID®) vakcin; topoizomeraza 1 inhibitor (npr., LURTOTEKAN (LURTOTECAN®)); rmRH (npr., ABARELIKS (ABARELIX®)); BAI(BAY)439006 (sorafenib; Bajer (Bayer)); SU-11248 (sunitinib, SUTENT®, Fajzer (Pfizer)); perifozin, KOKS-2 (COX-2) inhibitor (npr. celekoksib ili etorikoksib), inhibitor proteozoma (npr. PS341); bortezomib (VELKADE (VELCADE®)); CCI-779; tipifarnib (R11577); orafenib, ABT510; Bcl-2 inhibitor kao što je oblimersen natrijum (GENASENS (GENASENSE®)); piksantron; inhibitori receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) (videti definiciju u daljem tekstu); inhibitori tirozinske kinaze (videti definiciju dole u tekstu); inhibitori serin-treoninske kinaze kao što je rapamicin (sirolimus, RAPAMUN (RAPAMUNE®)); inhibitori farnezil transferaze kao što je lonafarnib (SCH 6636, SARASAR™); i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo kog od gore nevedenih; kao i kombinacije dva ili više od gorenavedenih kao što je CHOP, zkraćenica za kombinovanu terapiju ciklofosfamida, doksorubicina, vinkristina, i prednizolona; i FOLFOKS (FOLFOX), skraćenica za režim terapije sa oksaliplatinom (ELOKSATIN (ELOXATIN™)) kombinovanim sa 5-FU i leukovorinom.
[0035] Hemoterapijski agensi kako je ovde definisano uključuju "anti-hormonalne agense" ili "endokrine lekove za hormonske terapije," koji deluju da bi regulisali, redukovali, blokirali, ili inhibirali dejstva hormona koja mogu da pospeše rast kancera. To bi mogli biti sami hormoni, uključujući ali ne i ograničeno na anti-estrogene sa pomešanim profilom agonista/antagonista, uključujući tamoksifen (NOLVADEKS (NOLVADEX®)), 4-hidroksitamoksifen, toremifen (FARESTON (FARESTON®)), idoksifen, droloksifen, raloksifen (EVISTA®), trioksifen, keoksifen, i selektivni modulatori receptora estrogena (SERM) kao što je SERM3; čisti antiestrogeni bez agonističkih svojstava, kao što je fulvestrant (FASLODEKS (FASLODEX®)), i EM800 (takvi agensi mogu da blokiraju dimerizaciju receptora estrogena (ER), inhibiraju vezivanje DNK, povećaju promet ili prevrtanje receptora estrogena (ER), i/ili potisnu nivoe receptora estrogena (ER)); inhibitori aromataze, uključujući steroidne inhibitore aromataze kao što je formastan i eksemestan (AROMASIN®), i nesteroidne inhibitore aromataze kao što je anastrazol (ARIMIDEKS (ARIMIDEX®)), letrozol (FEMARA®) i aminoglutetimid, i drugi inhibitori aromataze uključuju vorozol (RIVISOR®), megestrol acetat (MEGASE®), fadrozol, i 4(5)-imidazoli; agonisti lutenizujućeg hormona za otpuštanje hormona, uključujući leuprolid (LUPRON® i ELIGARD®), goserelin, buserelin, i tripterelin; seksualni (hormoni) steroidi, uključujući progestine kao što je megestrol acetat i medroksiprogesteron acetat, estrogenikao
1
što je dietil-stilbestrol i premarin, i androgene/retinoide kao što je fluoksimesteron, celu transretionisku kiselinu i fenretinid; onapriston; anti-progesterone; regulatore smanjenja (zaustavljanja, suzbijanja, ometanja) receptora estrogena (ERDs); anti-androgene kao što je flutamid, nilutamid i bikalutamid; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo kog od gore navedenih kao i kombinacije dva ili vi[e od gore navedenih.
[0036] Pojam "himerno" antitelo kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo kod kog deo teškog i/ili lakog lanca je izvedneo iz specifičnog izvora ili vrsta, pri čemu preostatak teškog i/ili lakog lanca je izveden iz različitih izvora ili vrsta.
[0037] Pojam "klasa" antitela kako je ovde korišćeno se odnosi na tip konstantnog domena ili konstantnog regiona zauzetog njegovim teškim lancem. Ima pet glavnih klasa antitela: IgA, IgD, IgE, IgG, i IgM, i nekoliko ovih klasa može da bude dodatno podeljeno u podklase (izotipove), npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, i IgA2. Konstantni domeni teškog lanca koji odgovaraju različitim klasama imunoglobulina se zovu α, δ, ε, γ, i µ, prema opisanom redosledu.
[0038] Pojam "uslovno aktivno antitelo" kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo koje je aktivnije pri pH vrednosti od 7,0 do 7,6 u tumoroznom mikrookruženju u poređenju sa drugačijom vrednošću od pH od 5,8 do 6,8 koja se javlja u netumoroznom mikrookruženju.
[0039] Pojam "konstitutivno" kako je ovde korišćeno, kako se na primer odnosi na Ror2 aktivnost, se odnosi na kontinualnu signalnu aktivnost kinaze receptora koja nije zavisne od prisustva liganda ili drugih aktivacionih molekula. Zavisno od prirode kinaze receptora, sva aktivnost možeda bude sastavni deo ili aktivnost receptora može još da bude aktivirana vezivanjem drugih molekula (npr. liganda). Ćelijski događaji koji vode aktivaciji kinaze receptorasu dobro poznati i među prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, aktivacija može da uključi oligomerizaciju, npr. dimerizaciju, trimerizaciju, itd. u viši red kompleksa receptora. Kompleksi mogu da obuhvate jednu vrstu proteina, tj. homomerni kompleks. Alternativno, kompleksi mogu da obuhvate najmanje dve različite vrste proteina, tj. heteromerni kompleks. Formiranje kompleksa može da bude prouzrokovano, na primer, prekomernim eksprimovanjem normalnih ili mutiranih oblika receptora na površini ćelije. Formiranje kompleksa može takođe da bude prouzrokovano specifičnom mutacijom ili mutacijama u nekom receptoru.
[0040] Pojam "citostatični agens" kako je ovde korišćeno se odnosi na jedinjenje ili supstancu koja zaustavlja rast ćelije bilo in vitro ili in vivo. Dakle, citostatični agens može da bude onaj koji značajno smanjuje procenat ćelija u S fazi. Dalji primeri citostatičnih agenasa uključuju agense koji blokiraju progresiju ciklusa ćelije uvođenjem G0/G1 zaustavljanja ili zaustavljanja M faze. Humanizovano anti-Her2 antitelo trastuzumab (HERCEPTIN®) je primer citostatičnog agensa koji indukuje G0/G1 zaustavljanje. Klasični blokatori M faze uključuju vinka jedinjenja (vinkristin i vinblastin), taksane, i inhibitori topoizomeraze II kao što je doksorubicin, epirubicin, daunorubicin, etopozid, i bleomicin. Izvesni agensi koji zaustavljaju G1 se takođe prelivaju preko te u zaustavljanje S faze, na primer, agensi alikacije DNK kao što je tamoksifen, prednizon, dakarbazin, mehloretamin, cisplatin, metotreksat, 5-fluorouracil, i ara-C. Detaljnije informacije mogu se naći u Poglavlju I Molekularne osnova kancera, pod naslovom ''Regulacija ciklusa ćelije, onkogena, i antineoplastičnih lekova, u izdanjima Mendelson i Izrael (Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs") Murakami et al. (Murakami i saradnici) (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995), npr., str.13. Taksani (paklitaksel i docetaksel) su lekovi protiv kancera oba izvedeni iz drveta poznatog kao tisa. Docetaksel (TAKSOTERE (TAXOTERE®), Rhone-Poulenc Rorer (Ron-Pulank Rorer)), izvedenog iz evropske tise, je polusintetisani analog paklitaksela (TAKSOL (TAXOL®), Bristol-Myers Squibb (Bristol-Majers Skvib)). Paklitaksel i docetaksel pospešuju sklop mikrocevčica iz dimera tubulina i staiblizuju mikrocevčice sprečavanjem depolimerizacije, što kao rezutlat ima inhibiciju mitoze ćelija.
[0041] Pojam "citotoksični agens" kako je ovde korišćen se odnosi na supstancu koja suzbija ili sprečava ćelijsku funkciju i/ili prouzrokuje smrt ili uništenje ćelije. Citotoksični agensi uključuju, ali se ne ograničavaju na radioaktivne izotope (npr., At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 i radioaktivne izotope od Lu); hemoterapijske agense ili lekove (npr., metotreksat, adriamicin, vinka alkaloidi (vinkristin, vinblastin, etopozid), doksorubicin, melfalan, mitomicin C, hlorambucil, daunorubicin ili drugi interkalirajući agensi); rast inhibitornih agenasa; enzima i njihovih fragmenata kao što su nukleotidni enzimi; antibiotici; toksini kao što su toksini malog molekula ili enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog ili životinjskog porekla, uključujući fragmente i/ili njihove varijante; i različite antitumorozne ili antikancerne agense opisane dole u tekstu.
[0042] Pojam "diatela" kako je ovde korišćen se odonosi na male fragmente antitela sa dva mesta vezivanja antigena, čiji fragmenti obuhvataju promenljivi domen teškog lanca (VH) spojen na promenljivi domen lakog lanca (VL) u tom istom lancu polipeptida (VH-VL). Korišćenjem linkera koji je previše kratak da bi dozvolio uparivanje između dva domena na istom lancu, domeni su prisiljeni da se upare sa komplementarnim domenima drugog lanca i stvore dva mesta vezivanja antigena.
[0043] Pojam "funkcije efektora" kako je ovde korišćeno se odnosi na one biološke aktivnosti koje se pripisuju Fc regionu antitela, koje se menjaju sa izotipom antitela. Primeri funkcija efektora antitela uključuju: C1q vezivanje i citotoksičnost zavisnu od komplementa (CDC); vezivanje Fc receptora; ćelijom posredovanu od antitela zavisnu citotoksičnost (ADCC); fagocitozu; smanjenu regulaciju receptora na površini ćelije (npr. receptor B ćelije); i aktivaciju B ćelije.
[0044] Pojam "delotvorna količina" agensa kako je ovde korišćen, npr. farmaceutska formulacija, se odnosi na količinu koja je efektivna, u dozama i periodima vremena neophodnog, da se postigne željeni terapijski ili profilaktički rezultat.
[0045] Pojam "Fc region" kako je ovde korišćen se koristi da bi se definisao region C završetka teškog lanca imunoglobulina koji sadrži barem deo konstantnog regiona. Pojam uključuje prirodne sekvence Fc regiona i varijantne Fc regione. Region Fc humanog teškog lanca IgG mogu biti produženi od Cys226, ili od Pro230, na karboksilni završetak teškog lanca. Međutim, lizin na C završetku (Lys447) Fc regiona može ili ne mora da bude prisutan. Osim ako nije drugačije precizirano ovde, numerisanje ostataka aminokiseline u Fc regionu ili konstantnom regionu je prema EU sistemu numeracije, zove se još i EU indeks, kao što su opisali (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Kabat i saradnici, Sekvence proteina od imunološkog interesa), 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991).
[0046] Pojam "okosnica" ili "FR" kako je ovde korišćeno se odnosi na ostatke promenljivog domena koji nije hipervarijabilni region (HVR ili H1-3 u teškom lancu i L1-3 u lakom lancu) ostataka. FR promenljivog domena se generalno sastoji od četiri FR domena: FR1, FR2, FR3, i FR4. Prema tome, HVR i FR sekvence se generalno javljaju u sledećoj sekvenci u VH (ili VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
[0047] Pojam "antitelo pune dužine," "nedirnuto antitelo," ili "celo antitelo" se odnosi na antitelo koje obuhvata promenljivi region vezivanja antigena (VH ili VL) kao i konstantni domen lakog lanca (CL) i konstantne domene teškog lanca, CH1, CH2 i CH3. Konstantni domeni mogu biti nativna (prirodna) sekvenca konstantnih domena (npr. konstantni domeni nativne sekvence kod čoveka) ili njihove varijantna sekvenca aminokiseline itd. Zavisno od sekvence aminokiseline konstantnog domena njihovih teških lanaca, antitela pune dužine mogu biti dodeljena ''različitim podklasama''. Postoji pet glavnih klasa antitela bine dužine: klase antitela pune dužne: IgA, IgD, IgE, IgG, i IgM, i nekoliko navedenih jedne od njih moguće je dodatno podeliti "podklase" (izotipi), npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, i IgA2. Konstantni domeni teškog lanca koji odgovaraju različitim klasama antitela se zovu alfa, delta, epsilon, gama, i mu, prema opisanom redosledu. Strukture podjedinice i trodimenzionalne konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate.
[0048] Pojmovi "ćelija domaćin," "linija ćelije domaćina," i "kultura ćelije domaćina" se koriste ovde ravnopravno i odnose sena ćelije u koje je eksogena nukleinska kiselina uvedena, uključujući potomstvo takvih ćelija. Ćelije domaćina uključuju "transformante" i "transformisane ćelije," koji uključuju primarnu tranformisanu ćeliju i potomstvo izvedeno iz nje bez obzira na broj odeljaka. Potomstvo ne mora da bude potpuno identično za sadržaj nukleinske kiseline sa ćelijom roditelja, ali može da sadrži mutacije. Mutacija potomstva koje ima istu funkciju ili biološku aktivnost kako je analizirano ili izabrano iz originalno transformisane ćelije su uključeni ovde.
[0049] Pojam "humano antitelo" kao što je ovde korišćeno je ono koje poseduje sekvencu aminokiseline koja odgovara sekvenci antitela proizvedenog od strane čoveka ili ćelije čoveka ili izvedeno iz izvora koji nije čovek a koje koristi repertoare antitela čoveka ili druge sekvence za kodiranje antitela. Definicija humanog antitela specifično isključuje humanizovano antitelo
1
koje obuhvata nehumane ostatke vezivanja antigena.
[0050] Pojam "humana dogovorena okosnica" kako je ovde korišćeno je okosnica koja predstavlja najčešće pojavljivane ostatke aminokiseline u odabir humanog imunoglobulina sekvenci VL ili VH okosnice. Generalno, odabir humanog imunoglobulina VL ili VH sekvenci je iz podgrupe sekvenci promenljivog domena. Generalno, podgrupa sekvenci je podgrupa kao za (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Kabat i saradnici, Sekvence proteina od imunolološkog interesa), Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md. (1991), vols.1-3. Za VL, podgrupa može da bude podgrupa kapa I kao za Kabat et al., supra (Kabat i saradnike). Za VH, podgrupa može da bude podgrupa III kao za Kabat et al., supra (Kabat i saradnike).
[0051] Pojam "humanizovano" antitelo kako je ovde korišćen se odnosi na himerno antitelo koje obuhvata ostatke aminokiseline iz nehumanih HVR i ostataka aminokiseline iz humanih okosnica (FR). Humanizovano antitelo može obuhvatiti pretežno sve od najmanje jednog, a obično dva promenljiva domena, kod kojih svi ili pretežno svi HVR (npr. CDR) odgovaraju onima za nehumano antitelo, i svi ili pretežno svi od FR odgovaraju promenljivim domenima humanog antitela. Humanizovano antitelo može opciono da obuhvati najmanje deo konstantnog regiona antitela izvedenog iz humanog antitela. ''Humanizovani oblik'' antitela, npr. nehumano antitelo, se odnosi na antitelo koje je prošlo humanizaciju.
[0052] Pojam "hipervarijabilni region" ili "HVR" kako je ovde korišćeno se odnosi na svaki od regiona promenljivog domena antitela koji su hipervarijabilni u sekvenci i/ili formiraju strukturno definisane petlje (''hipervarijabilne petlje''). Generalno, prirodna nativna četvorolančana antitela obuhvataju šest hipervarijabilna regiona (HVR); tri u promenljivom teškom VH (H1, H2, H3), i tri u promenljivom lakom (L1, L2, L3). Hipervarijabilni regioni (HVR) generalno obuhvataju ostatke aminokiseline iz hipervarijabilnih petlji i/ili iz "regiona za određivanje komplementarnosti" (CDR), ovi drugi imaju najvišu promenljivost sekvence i/ili uključeni su u prepoznavanje antigena. Primeri hipervarijabilnih petlji nastaju na ostacima aminokiselina 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (H1), 53-55 (H2), i 96-101 (H3). Hotia i Lesk (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol., vol.196, pp.901-9171987) Primeri CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR- H1, CDR-H2, i CDR-H3) nastaju na ostacima aminokiseline 24-34 od L1, 50-56 od L2, 89-97 od L3, 31-35B od H1, 50-65 H2, i 95-102 od H3 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Kabat i saradnici, Sekvence proteina od oimunološkog interesa), 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. 1991). Uz izuzetak CDR1 u VH, CDR generalno obuhvata ostatke aminokiseline koji formiraju hipervarijabilne petlje. CDR takođe obuhvataju "regione određivanja specifičnosti," ili "SDR," što su ostaci koji su u dodiru sa antigenom. SDR su sadržani unutar regiona od CDR koji se zovu skraćeno CDR regioni, ili a-CDR. Primeri a-CDR (a-CDR-Ll, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2, i a-CDR-H3) nastaju na ostacima aminokiseline 31-34 od L1, 50-55 od L2, 89-96 od L3, 31-35B od H1, 50-58 od H2, i 95-102 od H3. (Videti, Almagro and Fransson, Front. Biosci., vol. 13, pp.1619-1633, 2008). Osim ako nije drugačije naznačeno, HVR ostaci i drugi ostaci u promenljivom domenu (npr. FR ostaci) se ove numerišu prema numeraciji Kabat et al. (Kabata i saradnika), supra.
[0053] Pojam "imunokonjugat" kako je ovde korišćen je antitelo konjugovano na jedan ili više heterolognih molekula, uključujući ali ne i ograničeno na citotoksični agens.
[0054] Pojam "pojedinac" ili "subjekat" kako je ovde korišćen se odnosi na sisara. Sisari uključuju, ali se ne ograničavaju na, pritipomljene životinja (npr. krave, ovde, mačke, psi, i konji), primati (npr. humani i nehumani primati kao što su majmuni), zečevi, i glodari (npr. miševi i pacovi). Pojedinac ili subjekat može biti čovek.
[0055] Pojam "inhibira rast ćelija ili proliferaciju" kako je ovde korišćeno znači smanjenje rasta ćelije ili proliferaciju za najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, ili 100%, i uključuje indukovanje smrti ćelije.
[0056] Pojam "izolovano" antitelo kako je ovde korišćeno je ono koje je odvojeno od komponente u svom prirodnom okruženju. U nekim izvođenjima, antitelo je prečišćeno do više od 95% ili 99% čistoće kako je određeno, putem, na primer, elektroforeznog (npr. SDS-PAGE, izoelektrično fokusiranje (IEF), kapilarna elektroforeza) ili dermatografski (npr. jonska izmena ili reverzna faza tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC)). Za pregled postupaka za procenu čistoće antitela, videti, npr. (Flatman et al. (Flatman i saradnici), J. Chromatogr. B, vol. 848, pp.79-87, 2007).
[0057] Pojam "izolovana" nukleinska kiselina kako je ovde korišćeno se odnosi na molekul nukleinske kiseline koji je odvojen od komponente iz njenog prirodnog okruženja. Izolovana nukleinska kiselina uključuje molekul nukleinske kiseline sadržane u ćelijama koje uobičajeno sadrže molekul nukleinske kiseline, ali molekul nukleinske kiseline je prisutan ekstrahromozomski ili na hromoznomskoj lokaciji koja je drugačija od njegove prirodne hromozomske lokacije.
[0058] Pojam "izolovana nukleinska kiselina koja kodira anti-Ror2 antitelo" kako je ovde korišćeno se odnosi na jednu ili više molekula nukleinske kiseline koji kodiraju teške i lake lance antitela (ili njihove fragmente), uključujući takve molekule nukleinske kiseline u jednom vektor ili odvojenim vektorima, i takvi molekuli nukleinske kiseline prisutni na jednoj ili više lokacija u ćeliji domaćinu.
[0059] Pojam "od liganda nezavisno" kako je ovde korišćeno, jer se na primer odnosi na signalnu aktivnost receptora, odnosi se nasignalnu aktivnost koja nije nezavisna od prisustva liganda. Receptor koji ima aktivnost kinaze zavisnu od liganda neće neophodno da onemogućava vezivanje liganda na receptor da bi se proizvela dodatna aktivacija aktivnosti kinaze.
[0060] Pojam "metastaza" kako je ovde korišćen se odnosi na sve postupke koji uključuju Ror2 koji podržavaju ćelije kancera da se rasprši iz primarnog tumora, prodru u limfne i/ili krvne sudove, kruže kroz krvotok, i rastu u udaljenom fokusu (metastaze) u normalnim tkivima
1
drugde u telu. Posebno, odnosi se na ćelijske događaje tumoroznih ćelija kao što je proliferacija, migracija, nezavisno sidrenje, izbegavanje apoptoze, ili izlučivanje angiogenskih faktora, koji podvlače metastazu i stimulišu se ili posreduju nekatalitičkim ili katalitičkim aktivnostima Ror2, preporučljivo uključujući Ror2 fosforilaciju i/ili sa Ror2 posredovanu transdukciju signala.
[0061] Pojam "mikrookruženje" kako je ovde korišćen znači bilo koji deo ili region tkiva ili tela koji ima konstantne ili privremene, fizičke ili hemijske razlike u odnosu na druge regione tkiva ili regione tela. Za tumore, pojam "mikrookruženje tumora" kako je ovde korišćen se odnosi na okruženje u kom tumor postoji, koji je nećelijsko područje unutar tumora i područje direktno izvan tumoroznog tkiva ali ne odnosi se na unutarćelijsku pregradu same ćelije kancera. Tumor i mikrookruženje tumora su blisko povezani i konstantno su u interakciji. Tumor može da promeni svoje mikrookruženje, i mikrookruženje može da utiče na način rasta i širenja tumora. Uobičajeno, mikrookruženje tumora ima nisku pH vrednost u opsegu od 5,8 do 7,0, češće u opsegu od 6,0 do 6,8, u opsegu 6,2-6,8. Sa druge strane, normalna fiziološka pH vrednost je u opsegu od 7,2-7,8. Mikrookruženje tumora je takođe poznato da ima nižu koncentraciju glukoze i drugih nutrijenatai, ali viša koncentracija mlečne kiseline, u poređenju sa plazmom krvi. Pored toga, mikrookruženje tumora može imati temperaturu koja je 0,3 do 1 °C više od normalne fiziiološke temperature. Mikrookruženje tumora se razmatra u radu (Gillies et al., "MRI of the Tumor Microenvironment (Gilisa i saradnika, MRI mikrookruženje tumora)," Journal of Magnetic Resonance Imaging, vol.16, pp.430-450, 2002). Pojam ''mikrookruženje netumora'' se odnosi na mikrookruženje na mestu koje nije tumor.
[0062] Pojam "monoklonalno antitelo" kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo dobijeno iz populacije pretežno homogenih antitela, tj. pojedinačna antitela obuhvataju populaciju su identina i/ili vezuju na isti epitop, osim za moguća varijantna antitela, npr., koja sadrže prirodno prisutne mutacije ili nastaju tokom proizvodnje preparata iz monoklonalnog antitela, takve varijante su generalno prisutne u manjim količinama. Nasuprot preparatima iz poliklonalnih antitela, koji najčešće uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanata (epitopa), svako monoklonalno antitelo nekog preparata iz monoklonalnog antitela je usmereno protiv jednog determinanta na antigen. Dakle, modifikator ''monoklonalno'' ukazuje na karakter antitela kako se dobija iz pretežno homogene populacije antitela, i ne treba ga tumačiti tako da zahteva proizvodnju antitela pomoću bilo kog specifičnog postupka. Na primer, monoklonalna antitela koja treba koristiti u skladu sa ovim pronalaskom mogu da budu napravljena raznoraznim tehnikama uključujući ali ne i ograničeno na postupak hibridoma, rekombinantne DNK postupke, postupke prikaza faga, i postupke korišćenja transgenih životinja koje sadrže sve ili deo humanih mesta imunoglobulina, ovde opisani su takvi postupci i drugi postupci dati kao primer za pravljenje monoklonalnih antitela.
[0063] Pojam "golo antitelo" kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo koje nije konjugovano na heterologni deo (npr., citotoksični deo) ili radiooznačeno. Golo antitelo može
1
biti prisutno u farmaceutskoj formulaciji.
[0064] Pojam "nativna (prirodna) antitela" kako je ovde korišćen se odnosi na molekule imunoglobulina koji se prirodno javljaju sa različitim strukturama. Na primer, nativna (priodna) IgG antitela su heterotetramerni glikoproteini od oko 150.000 daltona, sastavljeni od dva identična laka lanca i dva identična teška lanca koji su disulfidno vezani. Od N- do C-završetka, svaki teški lanac ima promenljivi region (VH), takođe se zove promenljivi teški domen ili promenljivi domen teškog lanca, posle čega slede tri konstantna domena (CH1, CH2, i CH3). Slično, od N- do C-završetka, svaki laki lanac ima promenljivi domen (VL), takođe se zove promenljivi laki domen ili promenljivi domen lakog lanca, posle kog sledi konstantni laki (CL) domen. Laki lanac antitela moguće je dodeliti jednom ili dva tipa, koji se zovu kapa ( κ) i lambda ( λ), na osnovu sekvence aminokiseline njegovog konstantnog domena.
[0065] Pojam "umetak paketa" kako je ovde korišćeno se koristi da se odnosi na instrukcije koje su uobičajeno uključene u komercijalne pakete terapijskih proizvoda, koji sadrže informaciju o indikacijama, upotrebi, doziranju, isporuci, kombinovanoj terapjii, kontraindikacijama i/ili upozorenjima koja se tiču upotrebe takvih terapijskih proizvoda.
[0066] Pojam "procenat (%) identičnosti sekvence aminokiseline" u vezi sa referentnom sekvencom polipeptida kako je ovde korišćeno se definiše kao procenat ostataka aminokiseline u sekvenci kandidatu koju su identični sa ostacima aminokiseline u referentnoj sekvenci polipeptida, posle poravnavanja sekvenci i uvođenja praznina, ako je neophodno, da bi se postigla maksimalna identičnost sekvence, i ne razmatrajući bilo kakve konzervativne supstitucije kao deo identičnosti sekvence. Poravnavanje u svrhu određivanja procenta identičnosti sekvence aminokiseline moguće je postići na različite načine koji su obuhvaćeni okvirom stručnosti u ovoj oblasti, na primer, korišćenjem javno dostupnog računarskog softvera kao što je BLAST, BLAST-2, ALIGN ili Megalign (DNASTAR) softver. Stručnjaci u ovoj oblasti mogu da odrede odgovarajuće parametre za poravnavanje sekvenci, uključujući sve algoritme potrebne da se postigne maksimalno poravnavanje preko pune dužine sekvenci koje treba uporediti. Za svrhe opisane ovde, međutim, % vrednosti identičnosti sekvence aminokiseline se generiše korišćenjem računarskog programa poređenja sekvence ALIGN-2. ALIGN-2 računarski program koji radi poređenje sekvence je autorizovala kompanija Genentech, Inc., i kod izvora je popunjen sa dokumentacijom za korisnika u američkom zavodu za autorsko pravo (U.S. Copyright Office, Washington D.C., 20559, gde je registrovan kao registar autorskog prava SAD (U.S. Copyright Registration No.) i to pod brojem TXU510087. ALIGN-2 program je javno dostupan iz Genentech, Inc., South San Francisco, Calif., ili može da bude kompliran iz izvornog koda. ALIGN-2 program treba da je kompiliran za upotrebu na UNIX operativnom sistemu, uključujući digitalni UNIX V4.0D. Svi parametri poređenja sekvence su postavljeni programom ALIGN-2 i ne razlikuju se.
[0067] U situacijama gde je ALIGN-2 korišćen za poređenja sekvence aminokiseline, % identičnosti sekvence aminokiseline date sekvence A aminokiseline prema, sa, ili naspram
1
date sekvence B aminokiseline (što alternativno može da bude formulisano kao data sekvenca A aminokiseline koja ima ili obuhvata izvestan % identičnosti aminokiseline prema, sa, ili naspram date sekvence B) je izračunat kao u nastavku:
100 puta frakcija X/Y
pri čemu X jeste broj odabranih ostataka aminokiseline kao identična poklapanja pomoću programa ALIGN-2 poravnavanja sekvence u tom programu poravnavanja za A i B, i pri čemu Y jeste ukupan broj ostataka aminokiseline za B. Jasno je da kada dužina sekvence A aminokiseline nije jednaka dužini sekvence B aminokiseline, % identičnosti sekvence aminokiseline od A do B neće biti jednak % identičnosti sekvence aminokiseline za B do A. Osim ako nije specifično precizirano na drugom mestu, svi % vrednosti identičnosti sekvence aminokiseline korišćeni ovde su dobijeni kako je opisano u neposredno prethodnom odeljku korišćenjem ALIGN-2 računarskog programa.
[0068] Pojam "farmaceutska formulacija" kako je ovde korišćen se odnosi na preparat u tom obliku da i se omogućila biološka aktivnost aktivnog sastojka sadržanog u njemu da bi bio delotvoran, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljiv toksične za subjekta kom se isporučuje formulacija.
[0069] Pojam "farmaceutski prihvatljiv nosač" kako je ovde korišćeno se odnosi n sastojak u farmaceutskoj formulaciji, koja nije aktivni sastojak, koja ne netoksična za subjekta, A farmaceutski prihvatljiv nosač uključuje, ali nije ograničen na pufersko sredstvo. ekscipijens, stabilizator, ili konzervans.
[0070] Pojmovi "prečišćen" i "izolovan" koji su ovde korišćeni se odnose na antitelo prema ovom pronalasku ili na sekvencu nukleotida, da je naznačeni molekul prisutan u pretežnom odsustvu drugih bioloških makro molekula istog tipa. Pojam "prečišćen" kako je ovde korišćen se prvenstveno odnosi na barem 75% težine, poželjnije najmanje 85% težine, još poželjnije ipak najmanje 95% težine, i najpoželjnije 98% težine, bioloških makromolekula istog tipa su prisutni. "Izolovani" molekul nukleinske kiseline koji kodira specifični polipeptid se odnosi na molekul nukleinske kiseline koji je pretežno bez drugih molekula nukleinske kiseline koji ne kodiraju taj polipeptid; međutim, taj molekul može da uključi neke dodatne baze ili delove koji ne utiču štetno na osnovne karakteristike te supstance.
[0071] Pojam "rekombinantno antitelo" kako je ovde korišćeno se odnosi na antitelo (npr. himerno, humanizovano, ili humanoantitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen) koje je eksprimovano rekombinantnom ćelijom domaćinom koja obuhvata nukleinsku kiselinu koja kodira to antitelo. Primeri "ćelija domaćina" za proizvodnju rekombinantnih antitela uključuju: (1) ćelije sisara, na primer, jajnik kineskog hrčka (CHO), COS, ćelije mijeloma (uključujući Y0 i NS0 ćelije), bubrega bebe hrčka (BHK), HeLa i Vero ćelije; (2) ćelije insekta, na primer, sf9,
1
sf21 i Tn5; (3) ćelije biljke, na primer biljke koje pripadaju rodu Nicotiana (npr. Nicotiana tabacum); (4) ćelije kvasca, na primer, one koje pripadaju vrsti Saharomica (Saccharomyces) (npr. Saccharomyces cerevisiae) ili vrste Aspergillus (npr. Aspergillus niger); (5) bakterijske ćelije, na primer Escherichia. coli ćelije ili Bacillus subtilis ćelije, itd.
[0072] Pojam "Ror2" kako je ovde korišćen, se odnosi na receptor 2 siroče nalik na receptor tirozinske kinaze, koji je prognozirani protein 943 aminokiseline sa in vitro aktivnošću kinaze proteina, što je pokazano u Genbank bazi, pristupni broj AAI30523. Brojne tirozinske kinaze receptora ograničene na soj su prvobitno označene kao ’siročad’ homologna poznatim receptorima, i samo naknadno korišćene da se identifikuje njihovi nepoznati faktori rasta. DeChiara et al. (2000) identifikovano jedno takvo siroče, kodirano pomoću Ror2 kako je prikazano na SL.1.
[0073] Pojam "terapijski delotvorna količina" antitela iz ovog pronalaska se podrazumeva dovoljnom količinom antitela za lečenje pomenutog kancera, pri razumnom odnosu koristi/rizika koji se primenjuje na bilo kakvo medicinsko lečenje. Jasno je, međutim, da će ukupna dnevna upotreba antitela i supstanci iz ovog pronalaska biti odluka zaduženog lekara kao deo obima meritornog medicinskog suda. Specifičan terapijski delotvoran nivo doze za bilo kog specifičnog pacijenta će zavisiti od raznih činilaca uključujući poremećaj lečenja i ozbiljnost poremećaja, aktivnost specifičnog antitela koje je korišćeno; i specifične supstance koja je korišćena, starost, telesna težina, opšte zdravlje, seks, i način ishrane za tog pacijenta; vreme isporuke leka, ruta isporuke, i brzina izlučivanja specifičnog korišćenog antitela; trajanje terapije; lekova korišćenih u kombinaciji ili koincidentalno sa specifičnim korišćenim antitelom; i slični faktori koji su dobro poznati u medicini. Na primer, dobro je poznato stručnjacima u ovoj oblasti ne formira jedinjenje na nivoima nižim od onih koji su neophodni da bi se postiglo željeno terapijsko dejstvo i postepeno povećala doza sve dok se ne postigne željeno dejstvo.
[0074] Pojam "pojedinačni lanac Fv" ("scFv") kako je ovde korišćeno, je kovalentno vezano (VH: : VLheterodimer koji je obično eksprimovan iz fuzije gena uključujući VH i VL kodirajuće gene povezane pomoću linkera koji kodira peptid. "dsFv" je VH::VL heterodimer stabilisan disulfidnom vezom. Dvovalentni i viševalentni fragmenti antitela mogu još i spontano udruživanjem monovalentnih scFvs, ili mogu biti generisani monovalentnim spajanjem scFvs peptidnom linkeru,
[0075] Pojam "terapija","lečiti", ili "lečenje" kako je ovde korišćeno se odnosi na kliničku intervenciju u pokušaju da promeni prirodni tok kod individue koja se leči, i može da bude izveden bilo za profilaksu ili tokom kliničke patologije. Poželjna dejstva terapije uključuju, ali se ne ograničavaju na, sprečavanje pojave ili povratka bolesti, ublažavanje simptoma, smanjenje bilo kakvih direktnih ili indirektnih patoloških posledica bolesti, sprečavanje metastaza, smanjenje brzine napredovanja bolesti, ublažavanje ili palijacija stanja bolesti, i remisija ili poboljšana prognoza. Antitela iz ovog pronalaska moguće je koristiti da bi se odložio razvoj bolesti ili da bi se usporilo napredovanje bolesti.
1
[0076] Pojam "tumor" kako je ovde korišćen se odnosi na celokupan rast i proliferaciju neoplastične ćelije, bilo da je maligna ili benigna, i sve prekancerne i kancerne ćelije i tkiva. Pojmovi "kancer,", "kancerozan," "proliterativni poremećaj ćelije," "proliferativni poremećaj" i "tumor" nisu međusobno isključivi kao što se ovde upućuje.
[0077] Pojam "promenljivi region" ili "promenljivi domen" kako je ovde korišćeno se odnosi na domen teškog ili lakog lanca antitela koji je uključen u vezivanje antitela na antigen. Promenljivi domeni teškog lanca i lakog lanca (VH i VL, prema opisanom redosledu) nativnog (prirodnog) antitela generalno imaju slične strukture, sa svakim domenom koji obuhvata četiri konzervisana okvirna regiona (FR) i tri hipervarijabilna regiona (HVR). (videti, npr. Kindt et al. (Kindt i saradnici) Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007).)) Pojedinačni VHi VLdomen može biti dovoljan da da specifičnost vezivanja antigena. Pored toga, antitela koja vezuju specifični antigen mogu da budu izolovana korišćenjem VH ili VL domena iz antitela koje vezuje antigen da bi se pregledala biblioteka komplementarnih VL ili VH domena, prema opisanom redosledu. Videti, npr. Portolano et al. (Portolano i saradnici, J. Immunol., vol.150, pp.880-887, 1993); Clarkson et al. (Klarkson i saradnici, Nature, vol.352, pp. 624-628, 1991).
[0078] Pojam "vektor" kako je ovde korišćeno se odnosi na molekul nukleinske kiseline koji može da prenese (razmnoži) drugu nukleinsku kiselinu na koju je povezan. Pojam uključuje vektor kao samoreplikujuću strukturu nukleinske kiseline kao i vektor koji je inkorporiran u genom ćelije domaćina u koji je uveden. Izvesni vektori koji mogu da usmere eksprimovanje nikleinskih kiselina na koje su funkcionalno povezani. Takvi vektori se pominju ovde kao ''vektori eksprimovanja.''
DETALJAN OPIS
Tehnički opis je iznet dole u tekstu može u nekim delovima da prevazilazi obim ovog pronalaska, koji je definisan priloženim patentnim zahtevima. Elementi opisa koji ne spadaju u obim patentnih zahteva su dati kao informacija, naime da bi se postavio stvarni pronalazak za koji se zaštita patentom traži u širem tehničkom kontekstu.
A. Anti-Ror2 antitela
[0080] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji se specifično vezuje na Ror2 protein sa odnosom afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH u mikrookruženju tumora u poređenju sa različitom vrednošću pH koja nastaje u netumoroznom mikrookruženju od barem 1,5:1, pri čemu
a) pH vrednost u mikrookruženju tumora se kreće u opsezima od 5,8 do 6,8 pH vrednosti, i pH vrednost za netumorozno mikorookruženje se kreće u opsezima od pH vrednosti 7,0 do 7,6;
2
b) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 18-26, i
c) promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13-17, i 27.
[0081] Poravnavanje promenljivih regiona teškog lanca antitela ili fragmenata antitela iz ovog pronalaska je prikazano na SL.2A-2B.
[0082] Poravnavanje promenljivih regiona lakog lanca antitela ili fragmenata antitela iz ovog pronalaska je prikazano na SL.3A-3B.
[0083] Ovi izolovani promenljivi regioni teškog lanca i izolovani promenljivi regioni lakog lanca, prema opisanom redosledu, su identifikovani iz promenljivog regiona teškog lanca i promenljivog regiona lakog lanca roditeljskog antitela kroz postupak opisan u američkom patentu br. U.S. 8,709,755. DNK koje kodiraju promenljivi region teškog lanca i promenljivi region lakog lanca roditeljskog antitela su uključene da bi se generisale biblioteke mutiranog antitela korišćenjem sveobuhvatne pozicione evolucije (CPE), čija svaka pozicija u promenljivom regionu teškog lanca i promenljivom regionu lakog lanca roditeljskog antitela jeste nasumično jedna po jedna. Svaki mutirani teški lanac/laki lanac u bibliotekama ima samo jednu tačku mutacije, u poređenju sa promenljivim regionom teškog lanca ili promenljivim regionom lakog lanca roditeljskog antitela (SL. 2A-2B i 3A-3B). Mutanti u ovim bibliotekama su pregledani na afinitet selektivnog vezivanja na humani Ror2 pri vrednosti pH 6,0 preko pH 7,4 ELISA tehnikom. Mutirani promenljivi regioni teškog lanca/lakog lanca su najaktivniji pri pH vrednosti od 6,0 nego pri pH vrednosti 7,4 su izabrani kao promenljivi regioni teškog lanca/lakog lanca uslovno aktivnih antitela, čije pojedinačne tačke mutacija jesu navedene u svakom od promenljivih regiona teškog lanca i lakog lanca (Tabele 1 i 2, SL.2A-2B i 3A-3B).
Tabela 1. Uslovno aktivni promenljivi regioni lakog lanca anti-Ror2 antitela
*Afinitet mutiranih prema ELISA tehnici; Klon; odnos,
Tabela 2. Uslovno aktivni promenljivi regioni teškog lanca anti-Ror2 antitela
*Afinitet mutiranih prema ELISA tehnici; Klon; odnos,
[0084] U nekom drugom varijantnom rešenju, antitela i fragmenti antitela iz ovog pronalaska uključuju promenljive regione teškog lanca kako je predstavljen na SL. 2A-2B i promenljive regione lakog lanca kao što je prikazano na SL.3A-3B. Sekvence aminokiseline promenljivih regiona teškog lanca su SEK ID BR: 18-26. Sekvence aminokiseline promenljivi regioni lakog lanca su SEK ID BR: 13-17 i 27. Ovi promenljivi regioni teškog lanca i promenljivi regioni lakog lanca mogu specifično da se vežu na humani Ror2. Za antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska obuhvataju jedan od ovih promenljivih regiona teškog lanca i promenljivih regiona lakog lanca je otkriveno da imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 pri pH vrednosti u mikrookruženju tumora od pH vrednosti 5,8 do 6,8 nego pri pH vrednosti u netumoroznom mikrookruženju od pH vrednosti 7,0 do 7,6. Na primer, antitela i fragmenti antitela imaju viši
2
afinitet vezivanja na Ror2 pri pH vrednosti 6,0 nego pri pH vrednosti 7,4.
[0085] Anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 u mikrookruženju tumora od pH vrednosti od 5,8 do 6,8 u poređenju sa njihovim afinitetom vezivanja na Ror2 u normalnom netumoroznom mikrookruženju sa pH vrednošću od 7,0 do 7,6. Ova anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela imaju duži vek poluraspada i smanjena neželjena dejstva, kao i uporedivu efikasnost, u poređenju sa monoklonalnim anti-Ror2 antitelima poznatim u ovoj oblasti. Ova svojstva dozvoljavaju upotrebu više doze ovih anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela koje treba isporučiti pacijentu je dakle efikasnija opcija terapije. Ta antitela i fragmenti antitela iz ovog pronalaska uključuju promenljive regione teškog lanca i promenljive regione lakog lanca prikazane na SL.2A-2B, 3A-3B i ima sekvence aminokiseline sa SEK ID BR: 13-24.
Varijante glikosilacije
[0086] U izvesnim izvođenjima, ovde dato antitelo se menja da bi se povećao ili smanjio nivo na koji se to antitelo glikosilizuje. Dodavanje ili brisanje mesta glikosilacije na antitelo može biti praktično izvedeno promenom sekvence aminokiseline tako da se jedno ili više mesta glikosilacije stvara ili uklanja.
[0087] Tamo gde antitelo obuhvata Fc region, karbohidrat spojen na njega moguće je promeniti. Nativna (prirodna) antitela proizvedena pomoću ćelija sisara obično obuhvataju razgranati, biantenarni oligosaharid koji je generalno spojen N poveznicom na Asn297 od CH2 domena tog Fc regiona. Videti, npr. (Wright et al. (Rait i saradnici) TIBTECH, vol.15, pp.26-32, 1997). Oligosaharid može da uključi različite karbohidrate, npr. manozu, N acetil glukozamin GlcNAc), galaktozu, i salicilnu kiselinu, kao i fukozu spojenu na GlcNAc u "stabljici" biantenarne strukture oligosaharida. U nekim izvođenjima, modifikacije oligosaharida u antitelu iz ovog pronalaska mogu biti napravljene da bi se stvorile varijante antitela sa izvesnim poboljšanim svojstvima.
[0088] U jednom izvođenju, varijante antitela su date tako da imaju strukturu ugljenohidrata koja nema spojenu fukozu (direktno ili indirektno) na Fc region. Na primer, količina fukoze u takvom antitelu može da bude od 1% do 80%, od 1% do 65%, od 5% do 65% ili od 20% do 40%. Količina fukoze je određena izračunavanjem prosečne količine fukoze unutar lanca šećera kao Asn297, u odnosu na zbir svih glikostruktura spojenih na Asn297 (npr. kompleks, hibridne i visokomanozne strukture) kako je izmereno masenom spektrometrijom MALDI-TOF, kako je opisano u WO 2008/077546, na primer. Asn297 se odnosi na ostatak asparagina smešten na oko pozicije 297 u Fc regionu (Eu numeracija ostataka Fc regiona); međutim, Asn297 može takođe da se smesti oko ±3 aminokiseline uzvodno ili nizvodno od pozicije 297, tj. između pozicija 294 i 300, usled manjih varijacija sekvence u antitelima. Takve varijante fukosilacije mogu imati poboljšanu ADCC funkciju. Videti, npr., objave patenata u SAD br. US 2003/0157108 (Presta, L.); US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Primeri objava koje se odnose na "defukosilisane" ili "fukozom deficijentne" varijante antitela uključuju: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; (Okazaki et al. (Okazaki i saradnici) J. Mol. Biol., vol.336, pp.1239-1249, 2004); (Yamane-Ohnuki et al. (Iamane-Onuki i saradnici), Biotech. Bioeng., vol.87, pp.614-622, 2004). Primeri linija ćelije koji mogu da dovedu do proizvodnje defukosilisanih antitela uključuju Lec13 CHO čelije kojima nedostaje fukosilacija proteina na čemu su radili (Ripka et al. (Ripka i saradnici), Arch. Biochem. Biophys., vol.249, pp.533-545, 1986; američka prijava patenta br. US 2003/0157108 A; i WO 2004/056312 A1, posebno u Primeru 11), i laboratorijske linije ćelija, kao što je alfa-1,6-fukosiltransferazni gen, FUT8, laboratorijske ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO) (videti, npr., (Yamane-Ohnuki et al. (Iamane-Ohnuki i saradnici), Biotech. Bioeng., vol.87, pp.614-622, 2004; Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., vol.94, pp.
680-688, 2006; i WO2003/085107).
[0089] Varijante antitela još imaju bisekcirane oligosaharide, npr., kod kojih je biantenarni oligosaharid spojen na Fc region antitela je bisekciran pomoću GlcNAc. Takve varijatne antitela mogu imati smanjenu fukosilaciju i/ili poboljšanu ADCC funkciju. Primeri takvih varijanti antitela su opisane, npr. u WO 2003/011878; američkom patentu br. U.S.6,602,684; i prijavi patenta US 2005/0123546. Varijante antitela sa najmanje jednim ostatkom galaktoze u oligosaharidu spojenom na Fc region su takođe dati. Takve varijante antitela imaju poboljšanu CDC funkciju. Takve varijante antitela su opisane, npr., u WO 1997/30087; WO 1998/58964; i WO 1999/22764.
Varijante Fc regiona
[0090] U izvesnim izvođenjima, jednu ili više modifikacija aminokiseline moguće je uvesti u Fc region ovde datog antitela, čime se generiše varijantni Fc region. Varijanta Fc regiona može da sadrži sekvencu humanog Fc regiona (npr., humani IgG1, IgG2, IgG3 ili IgG4 Fc region) obuhvata modifikaciju aminokiseline (npr. supstituciju) na jednoj ili više pozicija aminokiseline.
[0091] U izvesnim izvođenjima, ovaj pronalazak razmatra varijantu antitela koja poseduje neke ali ne sve funkcije efektora, koje ga čine poželjnim kandidatom za primene u kojima je vek poluraspada antitela in vivo važan iako su izvesne funckije efektora (kao što je ADCC) bespotrebne ili imaju štetno dejstvo. Ogledi in vitro i/ili in vivo citotoksičnosti mogu da budu sprovedeni da bi se potvrdilo smanjenje/pražnjenje CDC i/ili ADCC aktivnosti. Na primer, ogledi vezivanja Fc receptora (FcR) mogu biti sprovedeni da bi se osiguralo da tom antitelu nedostaje FcyR vezivanje (dakle verovatno nema ADCC aktivnosti), ali zadržava aktivnost FcRn vezivanja. Primarne ćelije za posredovanje ADCC, NK ćelija, ispoljavaju Fc γRIII samo,
2
pri čemu monociti eksprimuju Fc γRI, Fc γRII i Fc γRIII. FcR eksprimovanje na hematopoeznim ćelijama je sažeto prikazano u Tabeli 3 na stranici 464, (Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol., vol. 9, pp. 457-492, 1991). Neograničavajući primeri in vitro ogleda za procenu ADCC aktivnosti molekula od interesa je opisano u američkom patentu br. U.S. 5,500,362 (videti takođe, npr. Hellstrom et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, vol.83, pp.7059-7063, 1986) i Hellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, vol.82, pp.1499-1502, 1985; američki patent br. U.S.5,821,337 (videti takođe (Bruggemann et al. (Brugeman i saradnici), J. Exp. Med., vol.
166, pp.1351-1361, 1987)). Alternativno, postupci za neradioaktivna ogledna ispitivanja mogu da budu korišćeni (videti, na primer, ACTI™ neradioaktivni ogled citotoksičnosti za protočnu citometriju (CellTechnology, Inc. Mountain View, Calif.; i CytoTox 96® ogled neradioaktivne citotoksičnosti (Promega, Madison, Wis.). Korisne ćelije efektori za takve oglede uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) i Natural Killer (ćelije prirodne ubice) (NK). Alternativno, ili dodatno, ADCC aktivnost molekula od interesa moguće je proceniti in vivo, npr. na modelu životinje kao što su opisali (Clynes et al. (Klines i saradnici), Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, vol.95, pp.652-656, 1998. C1q ogledi vezivanja mogu takođe da budu izvedeni da bi se potvrdilo da antitelo nije u mogućnosti da veže C1q i zato nema CDC aktivnost. Videti, npr. C1q i C3c vezivanje ELISA tehnikom u prijavi WO 2006/029879, i WO 2005/100402. Da bi se procenila aktivacija komplementa, CDC ogled je moguće izvesti (npr. na primer, (Gazzano-Santoro et al. (Gazano-Santoro i saradnici), J. Immunol. Methods, vol.202, pp.163-171, 1996); (Cragg, M. S. et al. (Kreg, M. S. i saradnici), Blood, vol.101, pp.1045-1052, 2003); i (Cragg, M. S, and M. J. Glennie (Kreg, M. S. i M. J. Gleni), Blood, vol.103, pp.2738-2743, 2004)). FcRn vezivanje i in vivo podaci predodređuju iščišćavanje/vek poluraspada je moguće izvesti korišćenjem postupaka poznatih u ovoj oblasti (videti, npr. Petkova, S. B. et al.,Int’l. Immunol., vol.18, pp.1759-1769, 2006).
[0092] Antitela sa smanjenom funkcijom efektora uključuju ona sa supstitucijom jednog ili više ostataka Fc regiona 238, 265, 269, 270, 297, 327 i 329 (američki patent br. U.S. br.6,737,056). Takvi Fc mutanti uključuju Fc mutante sa supstitucijama na dve ili više pozicije aminokiseline 265, 269, 270, 297 i 327, uključujući takozvani "DANA" Fc mutant sa supstitucijom ostataka 265 i 297 na alanin (američki patent br. U.S.7,332,581).
2
Tabela 2. Uslovno aktivni promenljivi regioni teškog lanca anti-Ror2 antitela
*Afinitet mutiranih prema ELISA tehnici; Klon; odnos,
[0093] U nekom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak uključuje promenljive regione teškog lanca kako je predstavljen na SL. 2A- 2B i promenljive regione lakog lanca kako je prikazano na SL.3A-3B.
[0094] Ovde je dato anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji se specifično vezuje na Ror2 protein sa odnosom afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH u mikrookruženju tumora u poređenju sa drugačijom vrednošću pH koja nastaje u mikrookruženju bez tumora od najmanje 1,5:1, pri čemu se pH vrednost u mikrookruženju tumora kreće u opsezima pH vrednosti od 5,8 do 6,8, i pH za netumorozno mikorookruženje se kreće u opsezima pH vrednosti od 7,0 do 7,6; i
a) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz
2
SEK ID BR: 18-22 i promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13-16; ili
b) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR:23-26, i promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 17 i 27.
[0095] Ovi promenljivi regioni teškog lanca i promenljivi regioni lakog lanca mogu specifično da se vežu na humani Ror2. Antitela ili fragmenti antitela jednog od ovih promenljivh regiona teškog lanca i promenljivih regiona lakog lanca su se pokazali da imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 pri pH u mikrookruženju tumora nego pri pH u mikrookruženju bez tumora. Na primer, antitela i fragmenti antitela imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 pri pH 6,0 nego pri pH 7,4.
Derivati antitela
U izvesnim izvođenjima, antitelo i fragment antitela ovde dat može još da bude modifikovan da sadrži dodatne neproteinske delove koji su poznati u ovoj oblasti i lako dostupni. Ovi delovi pogodni za derivatizaciju antitela ili fragmenta antitela uključuju ali se ne ograničavaju na polimere astvorljive u vodi. Ne ograničavajući primeri polimera rastvorljivih u vodi uključuju, ali se ne ograničavaju na, polietilen glikol (PEG), kopolimere etilen glikola / propilen glikola, karboksimetilceluloze, dekstrana, polivinil alkohola, polivinil pirolidona, poli-1,3-dioksolana, poli-1,3,6-trioksana, etilen/maleinski kopolimer anhidrida, poliaminokiseline (bilo homopolimeri ili nasumični kopolimeri), i dekstran ili poli(n-vinil pirolidon)polietilen glikol, propropilen glikol homopolimeri, polipropilen oksid/etilen oksidni kopolimeri, polioksietilisani polioli (npr., glicerol), polivinil alkohol, i njihove mešavine. Polietilen glikol propionaldehid može imati prednosti za proizvodnju usled svoje stabilnosti u vodi. Polimer može imati bilo koju molekularnu težinu, i može biti razgranat ili nerazgranat. Broj polimera spojenih na antitelo ili fragment antitela može da varira, i ako se spoji više od jednog polimera, oni mogu biti isti ili različiti molekuli. Generalno, broj i/ili tip polimera korišćenih za derivatizaciju moguće je odrediti na osnovu razmatranja uključujući, ali ne i ograničeno na, specifična svojstva ili funkcije antitela ili fragmenta antitela koja treba poboljšati, bilo da će se taj derivat koristiti za terapiju pod definisanim uslovima, itd.
[0097] U jednom drugom izvođenju, dati su konjugati antitela ili fragmenta antitela i neproteinasti deo koji može da bude selektivno zagrehan izlaganjem zračenju. U jednom izvođenju, neproteinasti deo je karbonska nanocev (Kam et al. (Kam i saradnici), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.102, pp.11600-11605, 2005). Zračenje može biti bilo koje talasne dužine, i uključuje, ali se ne ograničava na talasne dužine koje ne oštećuju uobičajene ćelije, ali koje zagrevaju neproteinski deo do temperature na kojoj čelije blizu neproteinsastog dela antitela bivaju ubijene.
[0098] U jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-Ror2 antitelo ili
2
fragment antitela uključujući izolovane polipeptide promenljivog regiona teškog lanca ili izolovane polipeptide promenljivog regiona lakog lanca. Izolovani polipeptidi promenljivog regiona teškog lanca obuhvataju H1, H2, i H3 regjione sa SEK ID BR. 1-6. Ti izolovani polipeptidi promenljivo regiona lakog lanca obuhvataju L1, L2, i L3 regione sa SEK ID BR.7-12.
[0099] Anti-Ror2 antitelo ili fragment anttitela iz ovog pronalaska ima viši afinitet viezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH od 5,8 do 6,8 u mikrookruženju tumora u poređenju sa drugačijom vrednošću pH od 7,0 do 7,6 koja nastaje u mikrookruženju bez tumora. Kao što je prikazano u Primeru 1, anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela imaju viši afinitet vezivanja na Ror2 pri pH 6,0 nego pri pH 7,4.
[0100] U izvesnim izvođenjima, anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska imaju konstantu disocijacije (Kd) sa Ror2 pri uslovu u mikrookruženju tumora od oko ≤ 1 µM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM, ili ≤ 0,001 nM (npr.10<-8>M ili manje, ili od 10<-8>M do 10<-13>M, ili od 10<-9>M do 10<-13>M). U jednom izvođenju, odnos Kd antitela ili fragmenta antitela sa Ror2 pri vrednosti stanja u mikrookruženju tumora prema Kd pri drugačijoj vrednosti istog shvatanja u mikrookruženju bez tumora je najmanje oko 1,5:1, najmanje oko 2:1, najmanje oko 3:1, najmanje oko 4:1, najmanje oko 5:1, najmanje oko 6:1, najmanje oko 7:1, najmanje oko 8:1, najmanje oko 9:1, najmanje oko 10:1, najmanje oko 20:1, najmanje oko 30:1, najmanje oko 50:1, najmanje oko 70:1, ili najmanje oko 100:1.
[0101] Kd je moguće izmeriti ogledom za ispitivanje vezivanja sa radiooznačenim antigenom (RIA) je izveden sa Fab verzijom antitela od interesa i njegov antigen korišćenjem sledećeg ogleda. Afinitet vezivanja rastvora Fabs za antigen je izmeren uravnoteživanjem Fab sa minimalnom koncentracijom (<125>I)-označenog antigena u prisustvu niza titracije neoznačen antigen, zatim hvatanjem vezanog antigena sa anti-Fab antitelom obloženom pločom (videti, npr., (Chen et al. (Čen i saradnici), J. Mol. Bi- ol.293:865-881 (1999)). Da bi se uspostavili uslovi za ovaj ogled, MICROTITER® ploče sa više pregrada (Thermo Scientific) su obložene tokom noći sa 5 µg/ml 'hvatajućeg' anti-Fab antitela (Cappel Labs) u 50 mM natrijum karbonata (pH 9,6), i naknadno blokirano sa 2% (w/v) albumina goveđeg seruma u PBS tokom dva do pet sati na sobnoj temperaturi (približno 23 °C.). U neapsorpcionoj ploči (Nunc #269620), 100 pM ili 26 pM [125I]-antigen su pomešani sa serijskim razblaženjima sa Fab koji je predmet interesovanja (npr., dosledno sa procenom anti-VEGF antitela, Fab-12, u radu Presta et al. (Presta i saradnici), Cancer Res.57:4593-4599 (1997)). Fab od interesa se zatim u toku noći inkubira; međutim, ta inkubacija može da se nastavi i u dužem vremenskom periodu (npr., oko 65 sati) da bi se osiguralo da je dostignuta ravnoteža. Posle toga, mešavine se prenesu na ploču za hvatanje (''capture'') za inkubaciju na sobnoj temperaturi (npr., tokom jedan sat). Rastvor je zatim uklonjen i ploča je oprana osam puta sa 0,1% polisorbata 20 (TWEEN-20®) u PBS. Kada su ploče osušene, 150 periodu µl/pregradi scintilanta (MICRO- SCINT-20™; Packard) je dodato, i ploče se prebrojavaju na TOPCOUNT™ gama brojaču (Packard) tokom deset minuta.
2
Koncentracije svakog Fab koje daju manje od ili jednako 20% maksimalnog vezivanja su izabrane za upotrebu u ogledima konkurektnog vezivanja.
[0102] Kd je moguće izmeriti i ogledima površinske rezonance plazmona korišćenjem BIACORE®-2000 ili BIACORE®-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, N.J.) na 25° C. sa imobilisanim antigen CM5 čipovima na oko 10 jedinica odziva (RU). Ukratko, karboksimetilisanim dekstranom obloženi biosenzorni čipovi (CM5, BIACORE, Inc.) su aktivirani sa N-etil-N’-(3-dimetil-aminopropil)-karbodiimid hidrohlorid (EDC) i N-hidroksisukcinimid (NHS) u skladu sa instrukcijama dobavljača. Antigen je razređen sa 10 mM natrijum acetata, pH 4,8, do 5 µg/ml ( ~0,2 µM) pre ubrizgavanja brzinom protoka od 5 µl/minuti da bi se dostiglo približno 10 jedinica odziva (RU) spojenog (kuplovanjem) proteina. Posle ubrizgavanja antigena, 1 M etanolamin je ubrizgan da bi se blokirale nereakcionirane grupe. Za kinetička merenja, dvodelna serijska razblaženja Fab (0,78 nM do 500 nM) su ubrizgana u PBS sa 0,05% polisorbata 20 (TWEEN-20™) surfaktant (PBST) na 25° C, pri brzini protoka od približno 25 µl/min.
Brzine udruživanja (kon) i brzine razdruživanja (koff) se izračunavaju korišćenjem jednostavnog jedan na jedan modela vezivanja Langmuir (BIACORE® evaluacioni softver (Evaluation Software) verzija 3.2) istovremenim nameštanjem senzograma udruživanja i razdruživanja. Ravnoteža konstante razdruživanja (Kd) je izračunata kao odnos koff/kon. Videti, npr., Chen et al. (Čen i saradnici)., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999). Ako brzina udruživanja (on-rate) premaši 106 M-1 s-1 prema ogledu površinske rezonance plazmona gore u tekstu, onda brzina udruživanja može da se odredi korišćenjem tehnike fluorescentnog hlađenja koja meri povećanje ili smanjenje intenziteta fluorescentne emisije (pobuđenje=295 nm; emisija=340 nm, 16 nm pojasni-prolaz) na 25° C. od 20 nM anti-antigen antitela (Fab oblik) u PBS, pH 7,2, u prisustvu rastućih koncentracija antigena kako je izmereno u spektrometru, kao što je spektrometar opremljen opcijom zaustavljanja protoka (Aviv Instruments) ili 8000-serije SLM-AMINCO™ spektrofotomerač (ThermoSpectronic) sa mešanom kuvetom.
[0103] U jednom izvođenju, koristi se anti-Ror2 fragment antitela, npr., Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, scFv, diatelo, triatelo, tetratelo ili F(ab’)2fragment i višestrukospecifična antitela formirana iz fragmenata antitela. U još jednom izvođenju, fragment antitela je antitelo pune dužine, npr., nnedirnuto IgG antitelo ili druga klasa antitela ili izotipa kako je ovde definisano. Za ocenu izvesnih fragmenata antitela, videti Hudson et al. (Hadson i saradnici), Nat. Med., vol. 9, pp.
129-134, 2003. Za pregled scFv fragmenata, videti, npr., Pluckthün, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies (Pluktun, Farmakologija monoklonalnih antitela) , vol.113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp.269-315 (1994); videti takođe WO 93/16185; i američke patente br. U.S.5,571,894 i 5,587,458. Za razmatranje Fab i F(ab’)2 fragmenata koji obuhvataju spasonosne ostatke epitopa za vezivanje reciptora i ima povećan in vivo vek poluraspada, videti američki patent br. br. U.S.5,869,046.
[0104] Diatela iz ovog pronalaska mogu biti bivalentna ili bispecifična. Videti, na primer, EP 404,097; WO 1993/01161; Hudson et al. (Hadson i saradnici), Nat. Med.9:129-134 (2003); i Hollinger et al. (Holinger i saradnici), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, zapr. 90, pp. 6444-6448, 1993 za primere diatela. Primeri triatela i tetratela su takođe opisali Hudsob et al. (Hadson i saradnici), a Nat. Med., vol.9, pp.129-134, 2003).
[0105] Fragmenti antitela mogu da se naprave različitim tehnikama, uključujući ali ne i ograničeno na proteolitičku razgradnju nedirnutog antitela kao i proizvodnju rekombinantnih ćelija domaćina (npr. E. coli ili fag), kako je ovde opisano.
[0106] Kod nekih izvođenja, anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska mogu da budu himerna antitela. Izvesna himerna antitela su opisana, npr., u američkom patentu br. U.S.4,816,567; i radu Morrison et al. (Morison i saradnici), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.81, pp.6851-6855, 1984). U još jednom primeru, himerno antitelo je "promenjene (svičovane) klase" antitelo kod kog su promenjene klasa ili podklasa antitela u odnosu na klasu ili podklasu roditeljskog antitela. Himerna antitela uključuju njihove fragmente za vezivanje antigena.
[0107] Kod nekih izvođenja, himerna antitela iz ovog pronalaska mogu da budu humanizovano antitelo. Najčešće, takvo nehumanizovano antitelo je humanizovano da bi se smanjila imunogenost na ljude, pri čemu se zadržava specifičnost i afinitet roditeljskog nehumanog antitela. Generalno, humanizovano antitelo obuhvata jedan ili više promenljivih domena kod kojih CDR (ili njihovi delovi) jesu izvedeni iz nehumanog antitela i FR (ili njihovih delova) su izvedeni iz sekvenci ljudskog antitela. Humanizovano antitelo može opciono takođe da obuhvati barem deo konstantnog ljudskog regiona.
[0108] Humanizovana antitela i postupci za njihovo pravljenje su dati, npr., u Almagro and Fransson (Almagro i Franson), Front. Biosci., vol. 13, pp. 1619-1633, 2008, i detaljnije su opisana, npr., u Riechmann et al. (Raihman i saradnici), Nature, vol.332, pp.323-329, 1988; Queen et al.(Kvin i saradnici), Proc. Nat’l Acad. Sci. USA, vol. 86, pp. 10029-10033, 1989; američki patenti br. U.S.5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, i 7,087,409; Kashmiri et al. (Kašmiri i saradnici), Methods (Postupci), vol.36, pp.25-34, 2005 (opisuju SDR (a-CDR) kalemljenje); Padlan, Mol. Immunol. (Padlan, Mol. Imunologija), vol. 28, pp. 489-498, 1991 (opisivanje "ponovnog izbijanja na površinu"); Dall’Acqua et al. (Dal'Akva i saradnici), Methods (Postupci), vol. 36, pp. 43-60, 2005 (opisivanje "FR mešanje"); i Osbourn et al. (Ozborn i saradnici), Methods (Postupci), vol.36, pp.61-68, 2005 i Klimka et al. (Klimka i saradnici), Br. J. Cancer, vol. 83, pp. 252-260, 2000 (koji opisuju pristup "vođenog odabira/ vođene selekcije" za FR mešanje).
[0109] Humani okvirni regioni koji mogu da se koriste za humanizaciju uključuju ali se ne ograničavaju na: okvirne regione izabrane korišćenjem postupka "najpodesniji" (videti, npr., Sims et al (Sim i saradnici). J. Immunol., vol.151, p.2296, 1993); okvirni regioni izvedeni iz konsenzus sekvence humanog antitela specifične podgrupe promenljivih regiona lakog ili teškog lanca (videti, npr., Carter et al. (Karter i saradnici) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.89,
1
p. 4285, 1992; i Presta et al. (Presta i saradnici) J. Immunol., vol. 151, p. 2623, 1993); zreli okvirni regioni čoveka (somatski mutirani) ili klicine linije okvirnih regiona čoveka (videti, npr., Almagro and Fransson (Almagro i Franson), Front. Biosci., vol. 13, pp. 1619-1633, 2008); i okvirni regioni izvedeni iz pregledanja FR biblioteka (videti, npr., Baca et al. (Baka i saradnici), J. Biol. Chem., vol. 272, pp. 10678-10684, 1997 i Rosok et al. (Rosok i saradnici), J. Biol. Chem., vol.271, pp.22611-22618, 1996).
[0110] Kod nekih izvođenja, anti-Ror2 antitela iz ovog pronalaska su višestrukospecifična, npr. bispecifična antitela. Višestrukospecifična antitela su monoklonalna antitela koja imaju specifičnosti vezivanja za najmanje dva različita mesta. U izvesnim izvođenjima, jedna od specifičnosti vezivanja je za Ror2 i druga je za drugi antigen. U izvesnim izvođenjima, bispecifična antitela mogu da se vežu na dva različita epitopa Ror2. Bispecifična antitela moguće je takođe koristiti da bi se lokalizovali citotoksični agensi na ćelije koje eksprimuju Ror2. Bispecifična antitela je moguće prirpemiti kao antitela pune dužine ili fragmente antitela.
[0111] Tehnike za pravljenje višestrukospecifičnih antitela uključuju, ali se ne ograničavaju na, rekombinantno koeskprimovanje dva para teškog lanca-lakog lanca imunoglobulina koji imaju različite specifičnosti (videti Milstein and Cuello (Milstain i Kueljo), Nature (Priroda), vol.305, pp. 537-540, 1983), WO 93/08829, i Traunecker et al. (Trauneker i saradnici), EMBO J. vol.
10, pp. 3655-3659, 1991), i inženjering "knob-in-hole (dugme u rupi)" (videti, npr., američki patent br. U.S. 5,731,168). Višestruko specifična antitela moguće je takođe napraviti inženjeringom elektrostatičkih efekata navigacije da bi se napravilo antitelo Fc heterodimernih molekula (WO 2009/089004A1); unakrsno umrežavanje dva ili više antitela ili fragmenata (videti, npr., američki patent br. U.S. 4,676,980, i Brennan et al. (Brenan i saradnici), Science, vol. 229, pp. 81-83, 1985); korišćenjem leucinskih zatvarača (''leucine zippers'') da bi se proizvela bispecifična antitela (videti, npr., Kostelny et al. (Kostelni i saradnici), J. Immunol., vol. 148, pp. 1547-1553, 1992); korišćenjem tehnologije "diatela" za pravljenje bispecifičnih fragmenata antitela (videti, npr., Hollinger et al. (Holinger i saradnici), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.90, pp.6444-6448, 1993); i korišćenjem jednolančanih Fv (scFv) dimera (videti, npr. Gruber et al. (Gruber i saradnici), J. Immunol., vol.152, pp.5368-5374, 1994); i pripremanje trispecifičnih antitela kako je opisano, npr., u Tutt et al (Tut i saradnici). J. Immunol., vol.147, pp. 60-69, 1991.
[0112] Projektovanaantitela sa tri ili više funkcionalna mesta vezivanja antigena, uključujući "Hobotnica antitela ''octopus''," su takođe uključeni ovde (videti, npr. US 2006/0025576A1).
[0113] Antitelo ili fragment antitela može takođe da uključi "Fab sa dvostrukim dejstvom" ili "DAF" koji obuhvata mesto vezivanja antigena koje se veže na Ror2 kao i drugi drugačiji antigen (kao što je Ror1, videti, US 2008/0069820, na primer).
[0114] Anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska mogu da budu proizvedeni korišćenjem rekombinantnih postupaka i supstanci, koji su opisani detaljno u US 2016/0017040.
2
[0115] Fizička/hemijska svojstva i/ili biološke aktivnosti anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela iz ovog pronalaska mogu da budu testirana i izmerena različiitim ogledima poznatim u ovoj oblasti. Neka od ovih ogleda su opisana u američkom patentu br. U.S.8,853,369.
B. Imunokonjugati
[0116]
1. U nekom drugom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje imunokonjugate koji obuhvataju anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji se speifično vezuje na Ror2 protein sa odnosom afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH u mikrookruženju tumora u poređenju sa različitom vrednošću pH koja nastaje u netumoroznom mikrookruženju od barem 1,5:1, pri čemu
a) pH vrednost u mikrookruženju tumora se kreće u opsezima od 5,8 do 6,8 pH vrednosti, i pH vrednost za netumorozno mikorookruženje se kreće u opsezima od pH vrednosti 7,0 do 7,6;
b) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 18-26, i
c) promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13-17, i 27.
[0117] Imunokonjugat iz ovog pronalaska kako je opisano gore u tekstu, je konjugovan na jedan ili više citotoksičnih agenasa, kao što su hemoterapijski agensi ili lekovi, agensi za inhibiciju rasta,, toksini (npr., proteinski toksini, enzimski aktivni toksini bakterijskog, gljivičnog, biljnog, ili životinjskog porekla, ili njihovih fragmenata), ili radioaktivni izotopi.
[0118] U jednom izvođenju, imunokonjugat iz ovog pronalaska je konjugat antitelo lek (ADC) kod koga se antitelo ili fragment antitela konjuguje na jedan ili više lekova, uključujući ali ne ograničeno na maitansinoid (videti američke patente br. U.S.5,208,020, 5,416,064 i evropski patent EP 0425 235 B1); auristatin kao što su delovi monometil-auristatin leka DE i DF (MMAE i MMAF) (videti američke patente br. U.S. 5,635,483 i 5,780,588, i 7,498,298); dolastatin; kaliheamicin ili njegov derivat (videti američke patente br. U.S. 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, i 5,877,296; (Hinman et al. (Hinman i saradnici), Cancer Res., vol. 53, pp. 3336-3342, 1993); i (Lode et al. (Lodei saradnici), Cancer Res., vol.58, pp.2925-2928, 1998)); antraciklin kao što je daunomicin ili doksorubicin (videti, Kratz et al. (Krac i saradnici), Current Med. Chem., vol.13, pp.477-523, 2006; Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters, vol.16, pp.358-362, 2006; Torgov et al., Bioconj. Chem., vol.16, pp.717-721, 2005; Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.
97, pp. 829-834, 2000; (Dubowchik et al. (Dubrovčki i saradnici), Bioorg. & Med. Chem. Letters, vol. 12, vol. 1529-1532, 2002; King et al. (King i saradnici), J. Med. Chem., vol.45, pp. 4336-4343, 2002); i američki patent br. U.S.6,630,579); metotreksat; vindezin; taksan kao što je docetaksel, paklitaksel, larotaksel, tesetaksel, i ortataksel; trihotecen; i CC1065.
[0119] U još jednom izvođenju, imunokonjugat obuhvata antitelo ili fragment antitela kako je opisano konjugovano na enzimski aktivni toksin ili fragment njegov, uključujući ali ne i ograničeno na difterija A lanac, nevezujući aktivne fragmente difterija toksina, egzotoksin A lanac (od Pseudomonas aeruginosa), ricin A lanac, abrin A lanac, modecin A lanac, alfasarcin, Aleurites fordii proteini, diantin proteini, Phytolaca americana proteini (PAPI, PAPII, i PAP-S), momordica charantiainhibitor, mlečika, krotin, inhibitor sapaonaria officinalis, gelonin, mitogelin, restriktocin, fenomicin, enomicin, i trikoteceni.
[0120] U drugom izvođenju ovog pronalaska, imunokonjugat obuhvata antitelo ili fragment antitela kako je opisano konjugovano na radioaktivnom atomu dabi se formirao radiokonjugat. Raznovrsni radioaktivni izotopi su dostupni za proizvodnju radiokonjugata. Primeri uključuju At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 i radioaktivne izotope od Lu. Kada se konjugat se koristi za detekciju, može da obuhvati radioaktivni atom za scintigrafska ispitivanja, na primer tc99m ili 1123, ili vrtložna oznaka (spin label) za snimanje nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR) (takođe poznato kao snimanje magnetnom rezonancom, MRI), kao što je jodin-123 ponovo, jodin-131, indijum-Ill, fluor-19, ugljenik- 13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili gvožđe.
[0121] Konjugati antitela fragmenta antitela i citotoksični agens je moguće napraviti korišćenjem različitih agenasa za spajanje bifunkcionalnog proteina kao što je N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), sukcinimidil-4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao što je dimetil adipimidat HCl), aktivni estri (kao što je disukcinimidil suberat), aldehidi (kao što je glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao što je bis(p-azidobenzoil)heksandiamin), derivati bis-diazonijuma (kao što je bis-(p-diazoniumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao što je toluen 2,6-diizocijanat), i bisaktivna jedinjenja fluora (kao što je 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzen). Na primer, ricin imunotoksin moguće je pripremtii kako su u radu opisali Vitetta et al. (Viteta i saradnici), Science, vol.238, pp.1098-, 1987. Ugljenik-14-označen 1-izotiocijanatobenzil-3-metildietilen triaminepentasirćetna kiselina (MX-DT- PA) je primer agensa helacije za konjugaciju radionukleotida na antitelo. Videti WO94/11026. Linker može da bude "deljiv linker" koji olakšava otpuštanje citotoksičnog leka u ćeliju. Na primer, linker nepostojan na kiselinu, linker osetljiv na peptidazu, fotonepostojan linker, dimetil linker ili linker koji sadrži disulfid (Chari et al. (Čari i saradnici), Cancer Res., vol. 52, pp. 127-131, 1992; američkom patentu br. U.S.
5,208,020) mogu biti korišćeni.
[0122] Ovde dati imunokonjugati izričito razmatraju, ali se ne ograničavaju na konjugate dobijene sa reagensima unakrsnog linkera uključujući, ali ne i ograničeno na, BMPS, EMCS,
4
GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SLAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, i sulfo-SMPB, i SVSB (sukcinimidil-(4-vinilsulfon)benzoat) koji su komercijalno dostupni (npr., od američke kompanije Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, Ill., U.S.A). Primer izvođenja ADC obuhvata antitelo ili fragment antitela (Ab) koji cilja ćeliju tumora, deo leka (D), i deo linkera (L) koji spaja Ab na D. U nekim izvođenjima, antitelo je spojeno na deo linkera (L) kroz jedan ili više ostataka aminokiseline, kao što je lizin i/ili cistein.
[0123] Primer ADC ima Formulu I kao Ab-(L-D)p, pri čemu p jeste 1 do oko 20. Kod nekih izvođenja, broj delova leka koje je moguće konjugovati na antitelo je ograničenbrojem slobodnih ostataka cisteina. Kod nekih izvođenja, slobodni ostaci cisteina su uvedeni u aminikiselinsku sekvencu antitela ovde opisanim postupcima. Primeri ADC iz Formule I uključuju, ali ne i ograničeno na, antitela koja imaju 1, 2, 3, ili 4 projektovane cisteinske aminokiseline (Lyon et al. (Lion i saradnici), Methods in Enzym.(Postupci u enzim.), vol. 502, pp. 123-138, 2012). U nekim izvođenjima, jedan ili više slobodnih ostataka cisteina su već prisutni u antitelu, bez upotrebe inženjeringa, u tom slučaju postoje slobodni ostaci cisteina mogu da se korišćeni da se konjuguje antitelo u lek. U nekim izvođenjima, antitelo je izloženo uslovima smanjenja pre konjugacije antitela da bi se generisao jedan ili više slobodnih cisteinskih ostataka.
a) Primeri linkera
[0124] "Linker" (L) je bifunkcionalan ili višefunkcionalan deo koji je moguće koristiti da se poveže jedan ili više delova kao što su delovi leka (D) na antitelo ili fragment antitela (Ab) da bi se formirao imunokonjugat kao što je ADC iz Formule I. U nekim izvođenjima, ADC je moguće pripremiti korišćenjem linkera koji ima reaktivne funkcionalnosti za kovalentno spajanje na lek i na antitelo. Na primer, u nekim izvođenjima, cistein tiol antitela ili fragmenta (Ab) može da formira vezu sa reaktivnom funkcionalnom grupom linkera ili linker leka posredno da bi se napravio ADC.
[0125] U jednom varijantnom rešenju, linker ima funkcionalnost koja može da reaguje sa slobodnim cisteinom na antitelu da bi se formirala kovalentna veza. Neograničavajući primeri takvih reaktivnih funkcionalnosti uključuju maleimid, haloacetamide, α-haloacetil, aktivirane estre kao što su sukcinimid estri, 4-nitrofenil estri, pentafluorofenil estri, tetrafluorofenil estre, anhidride, hloride kiseline, sulfonil hloride, izocijanate, i izotiocijanate. Videti, npr., postupak konjugacije na strani 766, u Klussman, et al, Bioconjugate Chemistry (Klusman, i saradnici, Hemija biokonjugata), vol.15, pp.765-773, 2004.
[0126] U nekim izvođenjima, linker ima funkcionalnost koja može da reaguje sa elektrofilnom grupom prisutnom na nekom antitelu. Primeri takvih elektrofilnih grupa uključuju, ali se ne ograničavaju na, aldehid i keton karbonil grupe. U nekim izvođenjima, heteroatom reaktivne funkcionalnosti linkera može da reaguje sa elektrofilnom grupom antitela i formira kovalentnu vezu na jedinici antitela. Neograničavajući primeri kao što su reaktivne funkcionalnosti uključuju, ali se ne ograničavaju na, hidrazid, oksim, amino, hidrazin, tiosemikarbazon, hidrazin karboksilat, i arilhidrazid.
[0127] Linker može obuhvatiti jednu ili više komponenata linkera. Primeri komponenata linkera uključuju 6-maleimidokaproil ("MC"), maleimidopropanoil ("MP"), valin-citrulin ("valcit /val-cit" ili "vc"), alanin-fenilalanin ("ala-fe"), p-ami- nobenziloksikarbonil ("PAB"), N-sukcinimidil 4-(2-piridiltio) pentanoat ("SPP"), i 4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1 karboksilat ("MCC"). Različite komponente linkera su poznate u ovoj oblasti, neke od njih su opisane dole u tekstu.
[0128] Linker može da bude "deljiv linker" koji olakšava otpuštanje leka. Neograničavajući primeri deljivih linkera uključuju linkere nepostojane na kiselini (npr., koji obuhvataju hidrazon), linkere osetljive na proteazu (npr., osetljive na peptidazu), fotonepostojane linkere, ili linkere koji sadrže disulfid (Chari et al., Cancer Research (Čari i saradnici, Istraživanje kancera), vol.
52, pp.127-131, 1992; U.S. Pat. br. U.S.5,208,020).
[0129] U nekim izvođenjima, linker ima sledeću Formulu II kao -Aa-Ww-Yy-, pri čemu A jeste "jedinica koja služi kao nosilo", i a je celi broj iz 0 do 1; W je "jedinica aminokiseline", i w je ceo broj iz 0 do 12; Y je "jedinica koja služi kao nosilo", i y je 0, 1, ili 2. ADC obuhvata linker iz Formule II ima Formule I(A): Ab-(Aa-Ww-Yy-D)p, pri čemu su Ab, D, i p definisane kao gore za Formulu I. Primeri izvođenja takvih linkera su opisani u američkom patentu br. U.S.
7,498,298.
[0130] U nekim izvođenjima, komponenta linkera obuhvata "jedinica koja služi kao nosilo" (A) koja povezuje antitelo na drugu komponenta linkera ili na deo leka. Neograničavajući primeri jedinica koje služe kao nosila su pokazani ispod (pri čemu talastasta linija ukazuje na mesta kovalentnog spajanja na antitelo, lek ili dodatne komponente linkera):
[0131] U nekim izvođenjima, komponenta linkera obuhvata "jedinicu aminokiseline" (W). U nekim takvim izvođenjima, ta jedinica aminokiseline omogućava cepanje linkera proteazom, čime se olakšava otpuštanje leka od imunokonjugata posle izlaganja unutarćelijskim proteazama, kao što su lizozomni enzimi (Doronina et al. (Doronina i saradnici), Nat.Biotechnol., vol.21, pp.778-784, 2003). Primeri jedinica aminokiseline uključuju, ali se ne ograničavaju na, dipeptide, tripeptide, tetrapeptide, i pentapeptide. Primeri dipeptida uključuju, ali se ne ograničavaju na, valin-citrulin (vc ili val.cit), alanin-fenilalanin (af ili ala-fe); fenilalalninlizin (fk ili fe-lis); fenilalanin-homolizin (fe-homoliz); i N-metil-valin-vitrulin (Me-val-cit). Primeri tripeptida uključuju, ali se ne ograničavaju na, glicin-valin-citrulin (gli-val-cit) i glicin-glicin-glicin (gli-gli-gli). Jedinica aminokiseline može obuhvatiti ostatke aminokiseline koji se javljaju prirodno i/ili manje aminokiseline i/ili neprirodno nastale analoge aminokseline, kao što su jedinice citrulin aminokiseline mogu da budu peojektovane i optimizovane za enzimsko deljenje pomoću specifičnog enzima, na primer, proteaza povezana sa tumorom, katepsin B, C i D, ili plazmin proteaza.
[0132] Obično, linkeri tipa peptida mogu da budu pripremljeni formiranjem peptidne veze između dve ili više aminokiselina i/ili fragmenata peptida. Takve peptidne veze je moguće pripremiti, na primer, prema postupku sinteze tečne faze (npr., E. Schroder and K. Lübke (E. Šroder i K.Lubke) (1965) "The Peptides (Peptidi)", volume 1, pp 76-136, Academic Press).
[0133] U nekim izvođenjima, komponenta linkera obuhvata "jedinicu razmaknika" (Y) koja povezuje antitelo na deo leka, bilo direktno ili kroz jedinicu nosila i/ili jedinicu aminokiseline. Jedinica razmaknika može da bude "samouništiva" ili "nesamouništiva,''. "Nesamouništiva" jedinica razmaknika je ona koja je deo ili sva jedinica razmaknika ostaje vezana na deo leka posle cepanja ADC. Primeri nesamouništivih jedinica razmaknika uključuju, ali se ne ograničavaju na, jedinicu razmaknika zlicina, i glicin-glicin jedinicu razmaknika. U nekim izvođenjima, enzimsko cepanje ADC kojie sadrži glicin-glicin jedinicu razmaknika pomoću proteaze povezane sa ćelijom tumora daje kao rezultat otpuštanje dela glicin-glicin leka od ostatka ADC. U nekim izvođenjima, deo glicin-glicin leka se podvrgava koraku hidrolize u ćeliji tumora, takvo cepanje glicin-glicin jedinice razmaknika sa dela leka.
[0134] "Samouništiva" jedinica razmaknika omogućava otpuštanje dela leka. U izvesnim izvođenjima, jedinica razmaknika nekog linkera obuhvata p-aminobenzil jedinicu. U nekim takvim izvođenjima, p-aminobenzil alkohol je spojen na jedinicu aminokiseline preko amidne veze, i karbamat, metilkarbamat, ili karbonat je napravljen između benzil alkohola i leka (Hamann et al. (Hamann i saradnici), Expert Opin. Ther. Patents, vol. 15, pp. 1087-1103, 2005). U nekim izvođenjima, jedinica razmaknika obuhvata p-aminobenziloksikarbonil (PAB). U nekim izvođenjima, ADC obuhvata samouništiv linker koji ima strukturu:
pri čemu Q jeste -C1-C8alkil, -O-( C1-C8alkil), -halogen, -nitro, ili -cijano; m je celi broj koji se kreće u opsegu od 0 do 4; X može da bude jedan ili vioše dodatnih jedinica razmaknika ili može da bude odsutan; i p se kreće u opsezima od 1 do oko 20. U nekim izvođenjima, p se kreće u opsezima od 1 do 10, 1 do 7, 1 do 5, ili 1 do 4. Neograničavjaući primer jedinica X razmaknika uključuje:
pri čemu R1i R2jesu nezavisno izabrani iz H i C1-C6alkil. U nekim izvođenjima, R1i R2su svaki -CH3.
[0135] Drugi primeri samouništivih razmaknihka uključuju, ali se ne ograničavaju na, aromatična jedinjenja koja su elektronski slična PAB grupi, kao što su 2-aminoimidazol-5-metanol derivati (američki patent br. U.S. 7,375,078; Hay et al. (Hej i saradnici), Bioorg. Med. Chem. Lett. (BIorg. Let), vol. 9, p. 2237-, 1999) i orto- ili para-aminobenzilacetali. U nekim izvođenjima, razmaknike je moguće koristiti da prođu ciklizaciju posle hidrolize veze amida, kao što su supstituisani i nesupstituisani amidi 4-aminobutirne kiseline (Rodrigues et al. (Rodrigez i saradnici), Chemistry Biology, vol.2, pp.223-, 1995), odgovarajuće supstituisani biciklo[2.2.1] i biciklo[2.2.2] sistemi prstena (Storm et al. (Storm i saradnici), J. Amer. Chem. Soc., vol.94, p.
5815-, 1972) i amidi 2-aminofenilpropionske kiseline (Amsberry et al (Amzberi i saradnici), J. Org. Chem., vol.55, p.5867, 1990). Veza leka na α-ugljenik ostatka glicina je još jedan primer samouništivog razmaknika koja može biti korisna za ADC (Kingsbury et al. (Kingsburi i saradnici), J. Med. Chem., vol.27, p.1447, 1984).
[0136] U nekim izvođenjima, linker L može da bude linker dendritskog tipa za kovalentno spajanje više od jednog dela leka na antitelo kroz granjanje, višefunkcionalni deo linkera (Sun et al. (San i saradnici), Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, vol.12, pp.2213-2215, 2002; Sun et al.(San i saradnici), Bioorganic & Medicinal Chemistry, vol.11, pp.1761-1768, 2003). Dendritski linkeri mogu da povećaju molarni odos leka prema antitelu, t.j. punjenje, što je povezano na jačinu ADC. Dakle, tamo gde antitelo nosi samo jednu reaktivnu cistein tiol grupu, više delova leka moguće je spojiti kroz dendritski linker.
[0137] Neograničavajući primeri linkera su pokazani ispod u kontekstu ADC iz Formule I:
pri čemu su R1i R2nezavisno izabrani iz H i C1-C6alkila. U nekim izvođenjima, R1i R2su svaki -CH3.
pri čemu n je 0 do 12. U nekim izvođenjima, n je 2 do 10. U nekim izvođenjima, n je 4 do 8.
[0138] Dalji neograničavajući primeri ADC uključuju strukture:
Ili
4
Y je:
svako R je nezavisno H ili C1-C6alikil; i n je 1 do 12.
[0139] U nekim izvođenjima, linker je supstituisan sa grupama koje modulišu rastvorljivost i/ili reaktivnost. Kao neograničavajući primer, naelektrisan napunjen supstituent kao što je sulfonat (-SO3-) ili amonijak može povećati rastvorljivost u vodi linker reagena i olakšati reakciju kuplovanja (spajanja) reagensa linkera sa antitelom i/ili delom leka, ili olakšava reakciju kuplovanja (spajanja) Ab-L (međuproizvoda antitelo linker) sa D, ili D-L (međuproizvod lek-linker) sa Ab, zavisno od sintetičke rute koja je korišćena da bi se pripremio ADC. U nekim izvođenjima, deo linkera je spojen na antitelo i deo linkera je spojen na lek, i zatim je Ab-(deo linkera)<a>spojen na lek-(deo linkera)<b>da bi se formiralo ADC iz Formule I.
[0140] Jedinjenja iz ovog pronalaska izričito se razmattraju, ali se ne ograničavaju na, ADC pripremljene sa sledećim linker reagensima: bis-maleimido-trioksietilen glikol (BMPEO), N-( βmaleimidopropiloksi)-N-hidroksi sukcinimid estar (BMPS), N-( ε-maleimidokaproiloksi) sukcinimid estar (EMCS), N-[ γ-maleimidobutiriloksi]sukcinimid estar (GMBS), 1,6-heksan-bisvinilsulfon (HBVS), sukcinimidil 4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1-karboksi-(6-amidokaproat) (LC-SMCC), m-maleimidobenzoil-N-hidroksisukcinimid estar (MBS), 4-(4-N-Maleimidofenil)butirna kiselina hidrazid (MPBH), sukcinimidil 3-(bromoacetamido)propionat (SBAP), sukcinimidil iodoacetat (SIA), sukcinimidil (4-jodoacetil)aminobenzoat (SIAB), N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), N-sukcinimidil-4-(2-piridiltio)pentanoat (SPP), sukcinimidil 4-(N-maleimidometil)cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), sukcinimidil 4-(pmaleimidofenil)butirat (SMPB), sukcinimidil 6-[(beta-maleimidopropionamido)heksanoat] (SMPH), iminotiolan (IT), sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC, i sulfo-SMPB, i sukcinimidil-(4-vinilsulfon)benzoat (SVSB), i uključujući bis-maleimid reagense: ditiobismaleimidoetan (DTME), 1,4-Bismaleimidobutan (BMB), 1,4 Bismaleimidil-2,3-dihidroksibutan (BMDB), bismaleimidoheksan (BMH), bismaleimidoetan (BMOE), BM(PEG)2 (prikazano dole u tekstu), i BM(PEG)3 (prikazano dole u tekstu); bifunkcionalni derivati imidoestara (kao što je dimetil adipimidat HCl), aktivni estri (kao što je disukcinimidil suberat), aldehidi (kao što je glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao što je bis (p-azidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijum derivati (kao što je bis-(p-diazonijum- benzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao što je toluen 2,6-diizocijanat), i bis-aktivna jedinjenja fluora (kao što je 1,5difluoro-2,4-dinitrobenzen). U nekim izvođenjima, reagensi bis-maleimida dozvoljavaju spoj tiol grupe nekog cisteina na to antitelo na deo leka koji sadrži tiol, linker, ili linker-lek međuproizvod. Druge funkcionalne grupe koje su reaktivne sa tiol grupama uključuju, ali se ne ograničavaju na, jodoacetamid, bromoacetamid, vinil piridin, disulfid, piridil disulfid, izocijanat, i izotiocijanat.
[0141] Izvesni korisni reagensi linkera koje je moguće dobiti iz različitih komercijalnih izvora, kao što su kompanije Pierce Biotechnology, Inc. (Rockford, Ill.), Molecular Biosciences Inc. (Boulder, Colo.), ili sintetisane u skladu sa postupcima opisanim u toj oblasti, na primer, Toki et al. (Toki i saradnici), J. Org. Chem., vol. 67, pp. 1866-1872, 2002; Dubowchik, et al. (Dubrovčik, i saradnici), Tetrahedron Letters, vol. 38, pp. 5257-60, 1997; Walker (Voker), J. Org. Chem., vol.60, pp.5352-5355, 1995; Frisch et al. (Friš i saradnici), Bioconjugate Chem., vol. 7, pp. 180-186, 1995; američki patenti br. U.S. 6,214,345; WO 02/088172; US2003130189; US2003096743; WO 03/026577; WO 03/043583; i WO 04/032828.
[0142] Ugljenik- 14-označen 1-izotiocijanatobenzil-3-metildietilen triaminpentasirćetna kiselina (MX-DTPA) je primer agensa helacije za konjugaciju radionukleotida na to antitelo. Videti, npr., WO94/11026.
b) Primer delova leka
1) Maitansin i maitansinoidi
[0143] U nekim izvođenjima, imunokonjugat obuhvata antitelo konjugovano na jedan ili više molekula maitansinoida. Maitansinoidi su derivati maitansina, i inhibitori mitoze koji deluju inhibicijom polimerizacije tubulina. Maitansin je prvo izolovan iz istočnoafričkog žbuna Maytenus serrata (američki patent br. U.S. 3,896,111). Posle toga, je utvrđeno da izvesni mikrobi takođe proizvode maitansinoide, kao što je maitansinol i C-3 maitansinol estri (američki patent br. U.S.4,151,042). Sintetički mitansionidi su opisani, na primer, u američkim patentima br. U.S. 4,137,230; 4,248,870; 4,256,746; 4,260,608; 4,265,814; 4,294,757; 4,307,016; 4,308,268; 4,308,269; 4,309,428; 4,313,946; 4,315,929; 4,317,821; 4,322,348; 4,331,598; 4,361,650; 4,364,866; 4,424,219; 4,450,254; 4,362,663; i 4,371,533.
[0144] Delovi leka maitansinoida su privlačni delovi leka u konjguatima antitelo-lek jer su: (i) relativno dostupi da bi se pripremili fermentacijom ili hemijskom modifikacijom ili derivatizacijom proizvoda fermentacije, (ii) pogodni za derivatizaciju sa funkcionalnim grupama pogodnim za konjugaciju kroznedisulfidne linkere na antitela, (iii) stabilni u plazmi, i (iv) delotvorni protiv raznovrsnih linija ćelije tumora.
[0145] Izvesni maitansinoidi pogodni za upotrebu kao delovi leka maitansinoida su poznati u ovoj oblasti i mogu da budu izolovani iz prirodnih izvora prema poznatim postupcima ili proizvedeni korišćenjem generičkih tehnika inženjeringa (videti, npr., Yu et al. (Ju i saradnici), PNAS, vol. 99, pp. 7968-7973, 2002). Maitansinoide je moguće pripremiti i sintetički prema poznatim postupcima.
[0146] Primeri delova leka maitansinoida uključuju, ali se ne ograničavaju na, one koji imaju modifikovan aromatični prsten, kao što je: C-19-dehloro (američki patent br. U.S. 4,256,746) (pripremljen, na primer, redukcijom litijum aluminijum hidrida od ansamitocina P2); C-20-hidroksi (ili C-20-demetil)+/-C-19-dehloro (američki patenti br. U.S. 4,361,650 i 4,307,016) (pripremljeni, na primer dimetilacijom korišćenjem Streptomyces ili Actinomyces ili dehlorinacije korišćenjem LAH); i C-20- demetoksi, C-20-aciloksi (-OCOR), /-dehloro (američki patent br. U.S. 4,294,757) (pripremljen, na primer, acilacijom korišćenjem acil hlorida), i one koji imaju modifikacije na drugim pozicijama aromatičnog prstena.
[0147] Primeri delova leka maitansinoida takođe uključuju one koji imaju modifikacije kao što je: C-9-SH (američki patent br. U.S.4,424,219) (pripremljen, na primer, reakcijom maitansinola sa H2S ili P2S5); C-14-alkoksimetil(demetoksi/CH2OR)(američki patent br. U.S.4,331,598); C-14-hidroksimetil ili aciloksimetil (CH2OH ili CH2OAc) (američki patent br. U.S. 4,450,254) (pripremljen, na primer, iz Nocardia); C-15-hidroksi/aciloksi (američki patent br. U.S.
4,364,866) (pripremljen, na primer, konverzijom maitansinola pomoću Streptomyces); C-15-metoksi (američki patenti br. U.S. 4,313,946 i 4,315,929) (na primer, izolovano iz Trewia nudlflora); C-18-N-demetil (američki patent br. U.S. 4,362,663 i 4,322,348) (pripremljen, na primer, demetilacijom maitansinola pomoću Streptomyces); i 4,5-deoksi (američki patent br. U.S.4,371,533) (pripremljen, na primer, titanijum trihlorid/LAH redukcijom maitansinola).
[0148] Brojne pozicije na jedinjenjima maitansinoida su korisne ka pozicije veze. Na primer, estar veza može da bude formirana reakcijom sa hidroksil grupom korišćenjem uobičajenih tehnika spajanja (kuplovanja). U nekim izvođenjima, reakcija može da nastane na C-3 poziciji koja ima hidroksil grupu, C-14 pozicija je modifikovana sa hidroksimetil, C- 15 pozicija je modifikovana sa hidroksil grupom, i C-20 pozicija ima hidroksil grupu. U nekim izvođenjima, veza se formira na C-3 poziciji maitansinola ili analoga maitansinola.
[0149] Delovi leka maitansinoida uključuju one koji imaju strukturu:
pri čemu talasasta linija pokazuje kovalentni spoj atoma sumpora tog dela leka maitansinoida na linker ADC. Svako R može nezavisno da bude H ili C1-C6 alkil. Alkilen lanac koji spaja amid grupu na atom sumpora može da bude metanil, etanil, ili propil, t.j., m je 1, 2 ili 3 (američki
4
patent br. U.S. 633,410; američki patent br. U.S. 5,208,020; Chari et al. (Čari i saradnici), Cancer Res., vol.52, pp.127-131, 1992; Liu et al. (Liu i saradnici), Proc. Nall. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp.8618-8623, 1996). [0150] Svi stereoizomeri dela leka maitansinoida se uzimaju u obzir ra ADC iz ovog pronalaska, t.j. bilo koja kombinacija R i S konfiguracija na hiralnim ugljenicima (američki patenti br. U.S.7,276,497; američki patent br. U.S. br. U.S.6,913,748; američki patent br. U.S. br. U.S. 6,441,163; američki patent br. U.S. br. U.S. 633,410 (RE39151); američki patent br. U.S.5,208,020; Widdison et al (Vidison i saradnici) (2006) J. Med. Chem. 49:4392-4408. U nekim izvođenjima, deo leka maitansinoida ima sledeću stereohemiju:
[0151] Primeri izvođenja delova leka maitansinoid uključuju, ali se ne ograničavaju na, DM1; DM3; i DM4, sa strukturama:
pri čemu talasasta linija ukazuje na kovalentni spoj atoma sumpora leka na linker (L) konjugata antitelo-lek.
[0152] Primeri konjugata antitelo-lek gde je DM1 povezan kroz BMPEO linker na tiol grupu antitela imaju strukturu i skraćenicu:
pri čemu Ab jeste antitelo; n je 0, 1, ili 2; i p je 1 do oko 20. U nekim izvođenjima, p je 1 do 10, p je 1 do 7, p je 1 do 5, ili p je 1 do 4.
[0153] Imunokonjugati koji sadrže maitansinoide, postupci za pravljenje istih, i njihova terapijska upotreba su opisani, na primer, u američkim patentima br. U.S. 5,208,020 i 5,416,064; US 2005/0276812 A1; i evropskom patentu EP 0425235 B1. Videti i Liu et al. (Liu i saradnici), Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 8618-8623, 1996; i Chari et al. (Čari i saradnici), Cancer Research, vol.52, pp.127-131, 1992.
[0154] U nekim izvođenjima, konjugati antitelo-maitansinoid mogu da budu pripremljeni hemijskim povezivanjem antitela na molekul maitansinoida bez značajnog umanjenja biološke aktivnosti bilo antitela ili molekula maitansinoida.
Videti, npr., američki patent br. U.S.5,208,020. U nekim izvođenima, ADC sa prosekom od 3-
4
4 molekula maitansinoida konjugovano po molekulu antitela je pokazao efikasnost za pospešivanje citotoksičnosti ciljnih ćelija bez negativnog uticaja na funkciju ili rastvorljivost antitela. U nekim primerima, očekuje se da čak i jedan molekul toksina/antitela pospeši citotoksičnost tokom upotrebe golog/ogoljenog antitela.
[0155] Primeri veznih grupa za pravljenje konjugata antitelo-maitansinoid uključuju, na primer, one opisane ovde i one opisane u američkom patentu br. U.S.5,208,020; EP patent 0425235 B1; Chari et al. (Čari i saradnici), Cancer Research, vol. 52, pp. 127-131, 1992; US 2005/0276812 A1; i US 2005/016993 A1.
2) Auristatini i dolastatini
[0156]Delovi leka uključuju dolastatine, auristatine, i njihove analoge i derivate (američki patent br. U.S. 5,635,483; američki patent br. U.S. 5,780,588; američki patent br. U.S. br. U.S.
5,767,237; američki patent br. U.S. br. U.S. 6,124,431). Auristatini su derivati dolastatina-10 jedinjenja morskog mekušca. Bez namere da se ograničimo na bilo koju specifičnu teoriju, dolastatini i auristatini su pokazali da se upliću u dinamiku mikrocevčica, GTP hidroliza, i nukleusna i ćelijska deoba (Woyke et al. (Voike i saradnici), Antimicrob. Agents and Chemother., vol. 45, pp. 3580-3584, 2001) i imaju antikancernu (američki patent br. U.S.
5,663,149) i antigljivičnu aktivnost (Pettit et al. (Petit i saradnici), Antimicrob. Agents Chemother., vol. 42, pp. 2961-2965, 1998). Deo leka dolastatina/auristatina može da bude spojen na antitelo kroz N (amino) završetak ili C (karboksil) završetak dela peptidnog leka (WO 02/088172; Doronina et al.(Doronina i saradnici), Nature Biotechnology, vol.21, pp.778-784, 2003; Francisco et al. (Francisko i saradnici), Blood, vol.102, pp.1458-1465, 2003).
[0157] Primeri izvođenja auristatina uključuju na N-završetak povezane delove leka monometilauristatina DE i DF, opisane u američkom patentu br. U.S. 7,498,298 i američkom patentu br. U.S.7,659,241:
pri čemu talasasta linija DE i DF ukazuje na mesto kovalentnog spoja na antitelo ilikomponentu anitelo-linker, i nezavisno na svakoj lokaciji:
4
R<2>je izabrano iz H i C1-C8alkila;
R<3>je izabrano iz H, C1-C8alkil, C3-C8karbocikl, aril, C1-C8alkil-aril, C1-C8alkil-(C3-C8karbocikl), C3-C8heterocikl i C1-C8alkil-(C3-C8heterocikl);
R<4>je izabrano iz H, C1-C8alkyl, C3-C8karbocikla, aril, C1-C8alkil-aril, C1-C8alkil-(C3-C8karbocikla), C3-C8heterocikla i C1-C8alkil-(C3-C8heterocikl); R<5>je izabrana iz H i metila; ili R<4>i R<5>zajedno formiraju karbociklični prsten i imaju formulu -(CR<a>R<b>)npri čemu R<a>i R<b>jesu nezavisno izabrani iz H, C1-C8alkil i C3-C8karbocikl i n je izabrano iz 2, 3, 4, 5 i 6;
R<6>je izabrano iz H i C1-C8 alkila;
R<7>je izabrano iz H, C1-C8alkil, C3-C8karbocikl, aril, C1-C8alkil-aril, C1-C8alkil-(C3-C8karbocikl), C3-C8heterocikl i C1-C8alkil-(C3-C8heterocikl);
svako R<8>je nezavisno izabrano iz H, OH, C1-C8alkil, C3-C8karbocikl i O-(C1-C8alkil);
R<9>je izabrano iz H i C1-C8alkil;
R<10>je izabrano iz aril ili C3-C8heterocikl;
Z je O, S, NH, ili NR<12>, pri čemu R<12>je C1-C8alkil;
R<11>je izabrano iz H, C1-C20alkil, aril, C3-C8heterocikl, -(R<13>O)m-R<14>, ili - (R<13>O)m-CH(R<15>)2; m je celi broj u opsegu od 1-1000;
R<13>je C2-C8alkil;
R<14>je H ili C1-C8alkil;
svaka pojava e je nezavisno H, COOH, -(CH2)n-N(R<16>)2, -(CH2)n-SO3H, ili -(CH2)n-SO3-C1-C8alkil; svaka pojava e je nezavisno H, C1-C8alkil, ili -(CH2)n-COOH;
R<18>je izabrano iz -C(R<8>)2-C(R<8>)2-aril, -C(R<8>)2-C(R<8>)2-(C3-C8heterocikl),
i -C(R<8>)2-C(R<8>)2-(C3-C8karbocikl); i
n je celi broj u opsegu od 0 do 6.
[0158] U jednom izvođenju, R<3>, R<4>i R<7>su nezavisno izopropil ili sek-butil i R<5>je -H ili metil. U primeru izvođenja, R<3>i R<4>su svaki izopropil, R<5>je -H, i R<7>je sek-butil.
[0159] U još jednom izvođenju, R<2>i R<6>su svaki metil, i R<9>je -H.
[0160] U još jednom nekom izvođenju, svaka pojava R<8>je -OCH3.
[0161] U primeru izvođenja, R<3>i R<4>su svaki izopropil, R<2>i R<6>su svaki metil, R<5>je -H, i R<7>je sek-butil, svaka pojava R<8>je -OCH3, i R<9>je -H.
[0162] U jednom izvođenju, Z je -O- ili -NH-.
[0163] U jednom izvođenju, R<10>je aril.
[0164] U primeru izvođenja, R<10>je -fenil.
[0165] U primeru izvođenja, kada Z jeste -O-, R<11>je -H, metil ili t-butil.
[0166] U jednom izvođenju, kada Z jeste -NH, R<11>je -CH(R<15>)2, pri čemu R<15>jeste -(CH2)n-N(R<16>)2, i R<16>jeste -C1-C8alkil ili -(CH2)n-COOH.
[0167] U još jednom izvođenju, kada Z jeste -NH, R<11>jeste -CH(R<15>)2, pri čemu R<15>jeste -
4
(CH2)n-SO3H.
[0168] U primeru izvođenja auristatina iz formule DE je MMAE, pri čemu talasasta linija ukazuje na kovalentni spoj na linker (L) konjugata antitelo-lek:
[0169] Primer izvođenja auristatina iz formule DE jeste MMAF, pri čemu talasasta linija ukazuje na kovalentni spoj na linker (L) konjugata antitelo-lek:
[0170] Drugi primeri izvođenja uključuju jedinjenja monometilvalina koja imaju fenilalanin karboksi modifikacije na C-završetku dela leka pentapeptid auristatina (WO 2007/008848) i jedinjenja monometilvalina imaju modifikacije fenilalanin bočnog lanca na C-završetku tog dela leka pentapeptid auristatina (WO 2007/008603).
[0171] Neograničavajući primeri izvođenja ADC iz Formule I obuhvataju MMAF i različite komponente linkera još uključuju Ab-MC-PAB-MMAF i Ab-PAB-MMAF. Imunokonjugati koji obuhvataju MMAF spojene na antitelo pomoću linkera koji nije proteolitski deljiv su pokazali da je ta procesna aktivnost uporediva sa imunokonjugatima koji obuhvataju MMAF je spojena na antitelo proteolitski deljivivim linker (Doronina et al. (Doronina i saradnici), Bioconjugate Chem., vol. 17, pp. 114-124, 2006). Kod nekih takvih izvođenja, veruje se da se otpuštanje leka sprovodi razgradnjom antitela u toj ćeliji.
[0172] Obično, deo leka na bazi peptida mogu da budu pripremljeni formiranjem peptidne veze između dve ili više aminokiselina i/ili fragmenata peptida. Takve peptidne veze je moguće pripremiti, na primer, prema postupku sinteze tečne faze (videti, npr., E. Schröder and K. Lübke (E. Šreder i K.Libke) "The Peptides (Peptidi)", volume 1, pp 76, -136, 1965, Academic Press). Deo leka auristatina/dolastatina može, u nekim izvođenjima, da bude pripremljeno prema postupcima u: američkom patentu br. U.S.7,498,298; američki patent br. U.S. br. U.S.
5,635,483; američki patent br. U.S. 5,780,588; Pettit et al. (Peti i saradnici), J. Am. Chem. Soc., vol.111, pp.5463-5465, 1998; Pettit et al. (Peti i saradnici), Anti-Cancer Drug Design, vol. 13, pp.243-277, 1998; Pettit et al. (Peti i saradnici), Synthesis,vol.6, pp.719-725, 1996; Pettit et al. (Peti i saradnici), J. Chem. Soc. Perkin Trans. vol.15, pp.859-863, 1996; i Doronina (Doronina), Nat. Biotechnol., vol.21, pp.778-784, 2003.
[0173] U nekim izvođenjima, delovi leka auristatina/dolastatina iz formula DE kao MMAE, i DE,
4
kao što su MMAF, i međuproizvodi linker leka i njihovi derivati, kao što je MC-MMAF, MC-MMAE, MC-vc-PAB-MMAF, i MC-vc-PAB-MMAE, mogu da budu pripremljeni korišćenjem postupaka opisanih u američkom patentu br. U.S. 7,498,298; Doronina et al. (Doronina i saradnici), Bioconjugate Chem., vol. 17, pp. 114-124, 2006; i Doronina et al. (Doronina i saradnici), Nat. Biotech., vol. 21, pp. 778-784, 2003 i zatim je konjugovano na antitelo od interesa.
3) Kaliheamicin
[0174] U nekim izvođenjima, imunokonjugat obuhvata antitelo ili fragment antitela konjugovan na jedan ili više molekula kaliheamicina. Kaliheamicin familija antibiotika, i njihovih analoga, je sposobna da proizvede prekide dvolančane DNK pri sub-pikomolarnim koncentracijama (Hinman et al. (Hinman i saradnici), Cancer Research, vol.53, pp.3336-3342, 1993; Lode et al. (Lod i saradnici), Cancer Research, vol. 58, pp. 2925-2928, 1998). Kaliheamicin ima međućelijska mesta aktivnosti ali, u izvesnim slučajevima, ne prelazi tako lako membranu plazme. Samim tim, ćelijska apsorpcija ovih agenasa kroz internalizaciju posredovanu antitelom može, u nekim izvođenjima, da u velikoj meri pospeši njihova citotoksična dejstva. Neograničavajući postupci dati kao primer dobijanja konjugata antitelo-lek sa kaliheamicinskim delom leka su opisani, na primer, u američkom patentu br. U.S. 5,712,374; američki patent br. U.S. br. U.S. 5,714,586; američki patent br. U.S. br. U.S. 5,739,116; američki patent br. U.S. br. U.S.5,767,285.
4) Pirolobenzodiazepini
[0175] U nekim izvođenjima, ADC obuhvata pirolobenzodiazepin (PBD). U nekim izvođenjima, PDB dimeri prepoznaju i vezuju se na specifične DNK sekvence. Prirodni proizvod antramicin, PBD, je prvo prijavljen u 1965 (Leimgruber et al. (Leimgruber i saradnici), J. Am. Chem. Soc., vol. 87, pp.5793-5795, 1965; Leimgruber et al. (Leimgruber i saradnici), J. Am. Chem. Soc., vol. 87, pp. 5791-5793, 1965). Od tada, nekoliko PBD, i prirodno postojećih i analoga je prijavljeno (Thurston et al. (Turston i saradnici), Chem. Rev. vol. 1994, pp. 433-4651994, uključujući dimere tricikličnog PBD skele (američki patent br. U.S. br. U.S.6,884,799; američki patent br. U.S. br. U.S.7,049,311; američki patent br. U.S. br. U.S.7,067,511; američki patent br. U.S. br. U.S. 7,265,105; američki patent br. U.S. br. U.S. 7,511,032; američki patent br. U.S. br. br. 7,528,126; američki patent br. U.S. br. U.S. 7,557,099). Bez namere da se ograničimo na bilo koju specifičnu teoriju, veruje se da je struktura dimera brzo učestvuje u odgovarajućem trodimenzionalnom obliku za izoheličnost sa manjim žlebom B oblika DNK, što dovodi do tesnognameštanja na mestu vezivanja (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp.3-11 (1975); Hurley and Needham- VanDevanter, Acc. Chem. Res., vol.19, pp.
230-237, 1986). Dimerna PBD jedinjenja koja nose C2 aril supstituente su se pokazala
4
korisnim kao citotoksični agensi (Hartley et al (Hartli i saradnici) Cancer Res., vol.70, pp.6849-6858, 2010; Antonow, J. Med. Chem.vol. 53, pp. 2927-2941, 2010; Howard et al. (Hauard i saradnici), Bioorganic and Med. Chem. Letters, vol.19, pp.6463-6466, 2009).
[0176] PBD dimeri su konjugovani na antitela i ADC dobijen kao rezultat je pokazao da ima antikancerna svojstva. Neograničavajući primeri mesta vezivanja na PBD dimer uključuju petočlani pirolo prsten, teter između PBD jedinica, i N10-C11 imin grupu (WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598).
[0177] Neograničavajuće PBD komponente dimera iz ADC su od:
i soli i njihovi solvati, pri čemu:
talasasta linija pokazuje mesto kovalentnog spoja na linker;
tačkasta linija ukazuje na opciono prisustvo dvostruke veze između C1 i C2 ili C2 i C3; R<2>je nezavisno izabrano iz H, OH, =O, =CH2, CN, R, OR, =CH-R<D>, =C(R<D>)2, O-SO2-R, CO2R i COR,
i opciono još izabrano iz halo ili dihalo, pri čemu R<D>jeste nezavisno izabrano iz R, CO2R, COR, CHO,
CO2H, i halo;
R<6>i R<9>su nezavisno izabrani iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn i halo; R<7>je nezavisno izabrano iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR’, NO2, Me3Sn i halo;
Q je nezavisno izabrano iz O, S i NH;
R<11>je bilo H, ili R ili, pri čemu Q jeste O, SO3M, pri čemu M jeste metalni katjon;
R i R’ su svaki nezavisno izabrani iz opciono supstituisane C1-8alkil, C1-12alkil, C3-8heterociklill, C3-20heterocikl, i C5-20aril grupe, i opciono u vezi sa grupom NRR’, R i R’ zajedno sa atomom azota na koji sus pojeni da bi formirali opciono supstituisani 4-, 5-, 6-ili 7-člani heterociklični prsten;
R<12>, R<16>, R<19>i R<17>su kao što je definisano za R<2>, R<6>, R<9>i R<7>prema opisanom redosledu; R" je C3-12alkilen grupa, čiji lanac može da bude prekinut jednim ili više heteroatoma, npr. O, S, N(H), NMe i/ili aromatičnih prstena, npr. benzen ili piridin, čiji su prstenovi opciono supstituisani; i
X i X’ su nezavisno izabrani iz O, S i N(H).
[0178] U nekim izvođenjima, R i R’ su svaki nezaivnisno izabrani iz opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterocikl, i C5-20aril grupa, i opciono u vezi sa grupom NRR’, R i R’ zajedno sa atomom azota na koji su spojeni formiraju opciono supstituisani 4-, 5-, 6- ili 7-člani heterociklični prsten. U nekim izvođenjima, R<9>i R<19>su H. U nekim izvođenjima, R<6>i R<16>su H.
[0179] U nekim izvođenjima, R<7>su R<17>su oba OR<7A>, pri čemu R<7A>je opciono supsituisani C1-
4alkil. U nekim izvođenjima, R<7A>je Me. U nekim izvođenjima, R<7A>je Ch2Ph, pri čemu Ph je fenil grupa. U nekim izvođenjima, X je O. U nekim izvođenjima, R<11>is H. U nekim izvođenjima, postoji dvostruka veza između C2 i C3 u svakoj jedinici monomera.
[0180] U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su nezavisno izabrani iz H i R. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su nezavisno R. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su nezavisno opciono supstiutisani C5-20aril ili C5-7aril ili C8-10aril. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su nezavisno opciono supstituisani fenil, tienil, naftil, piridil, hinolil, ili izohinolinil. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su nezavisno izabrani iz =O, =CH2,=CH-R<D>, i =C(R<D>)2. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su svaki = CH2. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su svaki H. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su svaki =O. U nekim izvođenjima, R<2>i R<12>su svaki =CF2. U nekim izvođenjima, R<2>i/ili R<12>su nezavisno =C(RD)2. U nekim izvođenjima, R<2>i/ili R<12>su nezavisno =CH-RD.
[0181] U nekim izvođenjima, kada je R2 i/ili R12 je =CH-RD, svaka grupa može nezavisno da ima bilo koju od dole u tekstu prikazanih konfiguracija:
U nekim izvođenjima, a =CH-RD je u konfiguraciji (I). U nekim izvođenjima, R'' je C3 alkilen grupa ili C5 alkilen grupa.
[0182] Linkeri PBD dimer-val-cit-PAB-Ab i PBD dimer-Phe-Lys-PAB-Ab su deljivi proteazom, pri čemu linker od PBD dimer-maleimid-acetala jeste nepostojan na kiselinu.
[0183] PBD dimeri i ADCs obuhvataju PBD dimere mogu biti pripremljeni prema postupcima poznatim u ovoj oblasti. Videti, npr., WO 2009/016516; US 2009/304710; US 2010/047257; US 2009/036431; US 2011/0256157; WO 2011/130598.
1
5) Antraciklini
[0184] U nekim izvođenjima, ADC može da obuhvati antraciklin. Antraciklini su antibiotska jedinjenja koja ispoljavaju citotoksičnu aktivnost. Bez namere da se ograničimo na bilo koju specifičnu teoriju, studije su ukazale da antraciklini mogu da deluju da ubiju ćelije različitim mehanizmima, uključujući: 1) interkalaciju molekula leka u DNK ćelije čime se inhibira sinteza nukleinske kiseline zavisna od DNK; 2) proizvodnja leka od slobodnih radikala koji zatim reaguju sa ćelijskim makromolekulima da bi prouzrokovali oštećenje ćelija, i/ili 3) interakcije molekula leka sa membranom ćelije (videti, npr., C. Peterson et al. (Peterson i saradnici), "Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And Human Leukemia (Transport i skladištenje antraciklina u eskperimentalnim sistemima i leukeimiji kod ljudi)" u Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy (Terapija kancera antibioticima antraciklina); N. R. Bachur (N.R. Bakhur) , "Free Radical Damage (Oštećenje slobodnih radikala)" id. na pp.
97-102). Zbog njihovog citotoksičnih potencijala antaciklini se koriste za lečenje brojnih kancera kao što je leukemija, karcinom dojke, karcinom pluća, adenokarcinom jajnika i sarkomi (videti npr., P. H-Wiernik (Viernik), u Anthracycline: Current Status And New Developments (Antraciklin: Trenutni satus i novi momenti razvoja), p.11).
[0185] Neograničavajući primeri antraciklini uključuju doksorubicin, epirubicin, idarubicin, daunomicin, nemorubicin, i njegovi derivati. Imunokonjugati i prolekovi daunorubicina i doksorubicina su pripremljeni i proučavani (Kratz et al. (Krac i saradnici), Current Med. Chem., vol. 13, pp.477-523, 2006; Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters, vol.16, pp.358-362.1996; Torgov et al., Bioconj. Chem., vol.16, pp.717-721, 2005; Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol.97, pp.829-834, 2000; Dubowchik et al. (Dubovčik i saradnici), Bioorg. & Med. Chem. Letters, vol.12, pp.1529-1532, 2002; King et al. (King i saradnici), J. Med. Chem., vol. 45, pp.4336-4343, 2002; EP 0328147; američki patent br. U.S. br. U.S.6,630,579). BR96-doksorubicin konjugat antitelo-lek reaguje specifično sa Luis Y (Lewis-Y) antigenom povezanim sa tumorom i ocenjivano je u studijama faze I i II (Saleh et al. (Saleh i saradnici), J. Clin. Oncology, vol.18, pp.2282-2292, 2000; Ajani et al. (Adžani i saradnici), Cancer Jour., vol. 6, pp.78-81, 2000; Tolcher et al. (Tolher i saradnici), J. Clin. Oncology, vol.17, pp.478-484, 1999).
[0186] PNU-159682 je jak metabolit (ili derivat) nemorubicina (Quintieri et al. (Kvintieri i saradnici), Clinical Cancer Research, vol. 11, pp. 1608-1617, 2005). Nemorubicin je polusintetički analog doksorubicina sa 2-metoksimorfolino grupom na glikozid amino delu doksorubicina i u toku je njegovo kliničko ispitivanje (Grandi et al. (Grandi i saradnici), Cancer Treat. Rev. vol.17, pp.133-138, 1990; Ripamonti et al. (Ripamonti i saradnici), Brit. J. Cancer, vol. 65, pp.703-707, 1992), uključujući ispitivanja faze II/III za hepatoćelijski karcinom (Sun et al. (San i saradnici), Proceedings of the American Society for Clinical Oncology (Zbornik američkog društva za kliničku onkologiju), vol. 22, Abs1448, 2003; Quintieri (Kvintieri), Proceedings of the American Association of Cancer Research (Zbornik američkog udruženja
2
za istraživanje kancera), vol.44:1st Ed, Abs 4649, 2003; Pacciarini et al. (Paciarini i saradnici), Jour. Clin. Oncology, vol.24, p.14116, 2006).
[0187] Anthracyclines (Antraciklini), uključujući PNU-159682, mogu da budu konjugovani na antitela kroz nekoliko mesta povezivanja i raznovrsnim linkerima (US 2011/0076287; WO2009/099741; US 2010/0034837; WO 2010/009124), uključujući linkere opisane ovde u tekstu.
[0188] Linker od PNU-159682 maleimid acetal-Ab je nepostojan na kiselinu, pri čemu su linkeri PNU-159682-val-cit-PAB-Ab, PNU-159682-val-cit-PAB-razmaknik-Ab, i PNU-159682-val-cit-PAB-razmaknik(R1R2)-Ab proteazno deljivi.
6) Drugi delovi leka
[0189] Delovi leka takođe uključuju geldanamicin (Mandler et al. (Mandler i saradnici), J. Nat. Cancer Inst., vol.92, pp.1573-1581, 2000; Mandler et al. (Mandler i saradnici), Bioorganic & Med. Chem. Letters, vol. 10, pp. 1025-1028, 2000; Mandler et al. (Mandler i saradnici), Bioconjugate Chem., vol. 13, pp. 786-791, 2002); i enzimski aktivne toksine i njihove fragmente, uključujući, ali ne i ograničeno na, difteriju Lanac, nevezujućih aktivnih fragmenata difterija toksina, eksotoksina A lanca (iz Pseudomonas aeruginosa), ricin A lanac, abrin A lanac, modecin A lanac, alfa-sarcin, proteini Aleurites fordii, proteini diantina, proteini Phytolaca americana (PAPI, PAPII, i PAPS), inhibitor momordica charantia, mlečika, krotin, inhibitor sapaonaria officinalis , gelonin, mitogellin, restriktocin, fenomicin, enomicin i trikoteceni. Videti, npr., WO 93/21232.
[0190] Delovi leka takođe uključuju jedinjenja sa nukleolitnom aktivnošću (npr., ribonukleazu ili DNK endonukleazu).
[0191] U izvesnim izvođenjima, imunokonjugat može da obuhvati izrazito radioaktivni atom. Raznovrsni radioaktivni izotopi su dostupni za proizvodnju radiokonjugovanih antitela. Primeri uključuju At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 i radioaktivne izotope od Lu. U nekim izvođenjima, kada se imunokonjugat koristi za detekciju, može da obuhvati radioaktivni atom za scintigrafska proučavanja, na primer Tc99 ili 1123, ili vrtložnu oznaku za snimanje nuklearnom magnetnom rezonancom (NMR) (poznato i kao snimanje magnentnom rezonancom, MRI), kao što je cirkonijum-89, jod-123, jod-131, indijum-111, fluor-19, ugljenik-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili gvožđe. Cirkonijum-89 može da bude kompleksiran u različite agense helacije metala i konjugovano na antitela, npr., za PET snimanje (WO 2011/056983).
[0192] Radio- ili druge oznake mogu da budu inkorporirane u imunokonjugat na poznate načine. Na primer, peptid može da bude biosintetisan ili hemijski sintetisan korišćenjem pogodnih prekusora aminokisele koji obuhvataju, na primer, jedan ili više atoma fluora-19 umesto jednog ili više vodonika. U nekim izvođenjima, oznake kao Tc99, I123, Re186, Re188 i In111 je moguće spojiti preko ostatka cisteina u tom antitelu. U nekim izvođenjima, itrijum-90 je moguće spojiti preko ostatka lizina u tom antitelu. U nekim izvođenjima, postupak Jodogen (IODOGEN) (Fraker et al. (Fraker i saradnici), Biochem. Biophys. Res. Commun., vol.80, pp.
49-57, 1978) moguće je koristiti da se inkorporira jodin-123. "Monoclonal Antibodies in Immuno- scintigraphy (Monoklonalna antitela u imunoscintigrafiji)" (Chatal (Čatal), CRC Press 1989) opisuje izvesne druge postupke.
[0193] U izvesnim izvođenjima, imunokonjugat može da obuhvati antitelo konjugovano na enzim koji aktivira prolek. U nekim takvim izvođenjima, enzim koji aktivira prolek pretvara prolek (npr., peptidil hemoterapijski agens, videti WO 81/01145) na aktivan lek, kao što je antikancerni lek. Takvi imunokonjugati su korisni, u nekim izvođenjima, u terapiji od antitela zavisnog proleka posredog enzimom (''ADEPT''). Enzimi koje je moguće konjugovati na antitelo uključuju, ali se ne ograničaaju na, alkalne fosfataze, koje su korisne za pretvaranje proizvoda koji sadrže fosfat u slobodne lekove; arilsulfataze, koje su korisne za pretvaranje prolekova koji sadrže sulfat u slobodne lekove; deaminaze citozina, koje su korisne za pretvaranje netoksičnog 5-fluorocitozina u antikancerni lek, 5-fluorouracil; proteaze, kao što je serratia proteaze, termoliza, subtilisin, karboksipeptidaze i katepsini (kao što su katepsini B i L), koji su korisni za pretvaranje prolekova koji sadrže peptid u slobodne lekove; D-alanilkarboksipeptidaze, koje su korisne za pretvaranje prolekova koji sadrže supstituente D-aminokiseline; enzimi deljenja karbohidratakao β-galaktozidaza i neuraminidaza, koje su korisne za pretvaranje glikosilisanih prolekova u slobodne lekove; β-laktamaze, koji je koristan za pretvaranje lekova izvedenih sa β-laktamima u slobodne lekove; i amidaze penicilina, kao što je amidaza penicilina V i amidaza penicilina G, koje su korisne za pretvaranje lekova izvedenih na njihovim azotima amina sa fenoksiacetil ili fenilacetil grupama, prema opisanom redosledu, u slobodne lekove. U nekim izvođenjima, enzimi mogu da budu kovalentno vezani na antitela tehnikama rekombinantne DNK dobro poznatim u ovoj oblasti. Videti, npr., Neuberger et al. (Nojberger i saradnici), Nature, vol.312, pp.604-608, 1984.
c) Punjenje leka
[0194] Punjenje leka je predstavljeno pomoću p, prosečan broj delova leka po antitelu u molekulu iz Formule I. Punjenje leka može da se kreće u opsegu od 1 do 20 delova leka (D) po antitelu. ADC iz Formule I uključuje zbirke antitela konjugovanih sa opsegom delova leka, od 1 do 20. Prosečan broj delova leka po upotrebi antitela u pripremi ADC iz reakcija konjugacije može da bude karakterisan uobičajenim sredstima kao što je masena spektroskopija, ELISA ogled, i HPLC. Kvantitativna raspodela ADC u smislu p može takođe da bude određena. U nekim slučajevima, odvajanje, prečišćavanje, i karakterizacija homogenih ADC pri čemu p je izvesna vrednost iz ADC sa drugim punjenjima leka može da se postigne pomoću takve reverzno-fazne HPLC ili elektroforeze.
4
[0195] Za neke konjugate antitelo-lek, p može da bude ograničena nekolicinom mesta spoja na to antitelo. Na primer, kada spoj jeste cistein tiol, kao u izvesnim izvođenjima datim kao primer gore u tekstu, antitelo može imati samo jednu ili nekoliko cistein tiol grupa, ili može imati samo jednu ili nekoliko dovoljno reaktivnih tiol grupa kroz koje linker može da bude spojen. U izvesnim izvođenjima, više punjenje leka, npr. p>5, može prouzrokovati agregaciju (nagomilavanje), nerastvorljivost, toksičnost, ili gubitak ćelijske propusnosti izvesnih antitelolek konjugata. U izvesnim izvođenjima, prosečno punjenje leka za ADC opsege od 1 do oko 8; od oko 2 do oko 6; ili od oko 3 do oko 5. Naravno, pokazalo se da za izvesne ADC, optimalni odnos delova leka po antitelu može da bude manji od 8, i može da bude oko 2 do oko 5 (američki patent br. U.S. br. U.S.7,498,298).
[0196] U izvesnim izvođenjima, manje od teoretskog maksimuma delova leka se konjuguje u antitelo tokom reakcije konjugacije. Antitelo može da obuhvati, na primer, ostatke lizina koji ne reaguju sa međuproizvodom lek-linker ili reagens linkera, kako se razmatra dole u tekstu. Generalno, antitela ne sadrže mnogo slobodnih i reaktivnih cistein tiol grupa što može biti povezano na deo leka, svakako većina cistein tiol ostataka u antitelima postoji kao disulfidni mostovi. U izvesnim izvođenjima, antitelo može da bude redukovano sa agensom redukcije kao što je ditiotreitol (DTT) ili trikarboniletilfosfin (TCEP), pri delimičnim ili ukupnim uslovima redukovanja, da bi se generisale reaktivne cistein tiol grupe. U izvesnim izvođenjima, antitelo se podvrgava uslovima denaturacije da bi se otkrile reaktivne nukleofilne grupe kao što je lizin ili cistein.
[0197] Punjenje (odnos lek/antitelo) nekog ADC moguće je kontrolisati na različite načine, i na primer, pomoću: (i) ograničavanja molarnog viška međuproizvoda lek-linker ili reagensa linkera u odnosu na antitelo, (ii) ograničavanje vremena reakcije konjugacije ili temperature, i (iii) delimičnim ili ograničavajućim uslovima redukcije za modifikaciju cistein tiol.
[0198] Treba razumeti da tamo gde više od jedne nukleofilne grupe reaguje sa međuproizvodom lek-linker ili reagens linker, onda proizvod dobijen kao rezultat jeste mešavina ADC sa raspodelom jednog ili više delova leka spojenih na antitelo. Prosečan broj lekova po antitelu moguće je izračunati iz mešavine dvostrukog ELISA ogleda sa antitelom, koji je specifičan za natitelo i specifičan za lek. Pojedinačne ADC je moguće identifikovati u mešavini masenom spektroskopijom i odvojeno pomoću HPLC, npr. hromatografijom hidrofobne interakcije (videti, npr., McDonagh et al. (MekDonag), Prot. Engr. Design & Selection, vol.19, pp.299-307, 2006; Hamblett et al. (Hamblet i saradnici), Clin. Cancer Res., vol. 10, pp. 7063-7070, 2004). U izvesnim izvođenjima, homogeni ADC sa samo jednom vrednošću punjenja može da bude izolovan iz mešavine konjugacije postupkom elektroforeze ili hromatografije.
d) Izvesni postupci pripremanja imunokonjugata
[0199] Imunokonjugat koji je ADC iz Formule I može da bude pripremljen pomoću nekoliko ruta koje koriste reakcije organske hemije, uslove, i reagense poznate stručnjacima u ovoj oblasti, uključujući: (1) reakciju nukleofilne grupe antitela sa bivalentnim veznim reagensom linkerom da bi se formirao Ab-L preko kovalentne veze, posle čega sledi reakcija sa delom D leka; i (2) reakcija nukleofilne grupe dela leka sa bivalentnim linker reagensom, dabi se formirao D-L, preko kovalentne veze, posle čega sledi reakcija sa nukleofilnom grupom antitela. Primeri postupaka za pripremanje DC iz Formule I ovom kasnijom rutom su opisani u američkom patentu br. U.S. br. U.S.7,498,298.
[0200] Nukleofilne grupe na antitelima uključuju ali se ne ograničavaju na: (i) grupe amina na N završetku, (ii) bočni lanac grupa amina, npr. lizin, (iii) tiol grupe bočnog lanca, npr. cistein, i (iv) šećer hidroksil ili amino grupe kod kojih je antitelo glikosilisano. Amin, tiol, i hidroksil grupe su nukleofilne i sposobne da reaguju sa bi formirale kovalentne veze sa elektrofilnim grupama na delovima linkera i reagensima linkera uključujući: (i) aktivne estre kao što su NHS estri, HOBt estre, haloformate, i halide kiseline; (ii) alkil i benzil halide kao što su haloacetamidi; i (iii) aldehidi, ketoni, karboksil, i grupe maleimida. Izvesna antitela imaju disulfide između lanca koje je moguće redukovati, tj. cisteinske mostove. Antitela mogu da budu reaktivna za konjugaciju sa reagensima linkera tretiranjem sa agensom redukcije kao tšo je DTT (ditiotreitol) ili trikarboniletilfosfin (TCEP), kao što je antitelo koje je potpuno ili delimično redukovano. Svaki cisteinski most će dakle formirati, teoretski, dva reaktivna nukleofilna tiola. Dodatne nukleofilne grupe je moguće uvesti u antitela kroz modifikaciju lizinskih ostataka, npr., reagovanjem ostataka lizina sa 2-iminotiolanom (Trautov reagens), što kao rezutlat daje pretvaranje amina u tiol. Reaktivne grupe tiola moguće je takođe uvesti u antitelo i to uvođenjem jednog, dva, tri, četiri, ili više ostataka cisteina (npr. pripremanjem varijantnih antitela koja obuhvataju jedan ili više nenativnih ostataka cistein aminokiseline.
[0201] Konjugati antitelo-lek iz ovog pronalaska mogu da budu proizvedeni reakcijom između elektrofilne grupe na antitelo ili fragment antitela, kao što je aldehid ili kabornil grupa ketona, sa nukleofilnom grupom na reagensu linkera ili leku. Korisne nukleofilne grupe na reagensu linkera uključuju, ali se ne ograničavaju na, hidrazid, oksim, amino, hidrazin, tiosemikarbazon, hidrazin karboksilat, i arilhidrazid. U jednom izvođenju, antitelo se modifikuje da bi se uveli elektrofilni delovi koji mogu da se dovedu u reakciju sa nukleofilnim supstituentima na reagens linker li lek. U još jednom izvođenju, šećeri glikosilisanih antitela mogu da oksidiraju, npr. sa reagensima oksidacije perjodata, da bi se formirale grupe aldehida ili ketona koje mogu da reaguju sa grupom amina linker reagensa ili delovima leka. Grupe Šifove (Schiff) baze imina dobijene kao rezultat mogu da formiraju stabilnu vezu, ili mogu da budu redukovane, npr.. reagensima borohidrida da bi se formirale stabilne veze amina. U jednom izvođenju, reakcija dela karbohidrata glikosilisanog antitela sa bilo oksidazom galaktoze ili natrijum metaperojdatom može da da kao prinos karbonil (aldehid i keton) grupe u antitelu koje moegu da reaguju sa odgovarajućim grupama na tom leku (Hermanson, Bioconjugate Techniques). U još jednom izvođenju, antitela koja obuhvataju ostatke serina ili treonina na N završetku mogu da reaguju sa natrijum meta-perjodatom, što daje kao rezultat proizvodnju aldehida umesto prve aminokiseline (Geoghegan & Stroh (Geoghegan i Štoh), Bioconjugate Chem., vol.3, pp.
138-146, 1992; U.S. Pat. br. U.S.5,362,852). Takav aldehid može da reaguje sa delom leka ili nukleofilom linkera.
[0202] Primeri nukleofilnih grupa na delu leka uključuju, ali se ne ograničavaju na: amin, tiol, hidroksil, hidrazid, oksim, idrazin, tiosemikarbazon, hidrazin karboksilat, i arilhidrazidne grupe koje mogu da u reakciji formiraju kovalentne veze sa elektrofilnim grupama na delovima linkera i reagenasa linera uključujući: (i) aktivne estre kao što su NHS estri, HOBt estre, haloformate, i halide kiseline; (ii) alkil i benzil halide kao što su haloacetamidi; (iii) aldehidi, ketoni, karboksil, i grupe maleimida.
[0203] Neograničavajući primeri unakrsnih reagenasa koje je moguće koristiti da bi se pripremili ADC su opisani ovde u segmentu pod nazivom "Primeri linkera." Primeri korišćenja takvih reagenasa unarksnih linkera da bi se povezala dva dela, uključujući proteinski deo i hemijski deo, su poznati u ovoj oblasti. U nekim izvođenjima, protein fuzije obuhvata antitelo i citotoksični agens može da bude napravljen, npr., rekombinantnim tehnikama ili sintezom peptida. Rekombinantni DNK molekul može obuhvatiti regione koji kodiraju antitelo i citotoksične delove konjugata bilo susedne jedne drugima ili odvojene regionom koji kodira peptid linker koji ne uništava željena svojstva konjugata.
[0204] U još jednom izvođenju, antitelo ili fragment antitela moguće je konjugovati na ''receptor'' (kao što je streptavidin) za korišćenje za predciljanje tumora pri čemu se taj konjguat antitela/antitelo-fragment-receptor isporučuje pacijentu, posle čega sledi uklanjanje nevezanog konjugata da bi se formirala cirkulacija korišćenjem agensa za izbacivanje i zatim isporuka pacijentu ''liganda'' (npr., avidina) koji se konjuguje na citotoksični agens (npr., lek ili radionukleotid).
C. Postupci i supstance za dijagnostikovanje i detekciju
[0205] Bilo koje od ovde datih anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela moguće je koristiti za detektovanje prisustva Ror2 u biološkom uzorku. Pojam ''detektovanje'' kako je ovde korišćen obuhvata kvantitativnu ili kvalitativnu detekciju. Biološki uzorak može da obuhvata ćeliju ili tkivo, kao što su ćelije ili tkiva dojke, pankreasa, jednjaka, pluća i/ili mozga.
[0206] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela iz ovog pronalaska mogu da budu korišćeni za dijagnostikovanje i/ili nadgledanje kancera ili druge bolesti u kojoj su nivoi eksprimovanja Ror2 povećani ili smanjeni u odnosu na normalan fiziološki nivo na barem jednoj lokaciji u telu.
[0207] U preporučenom izvođenju, antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska mogu da budu označeni sa detektibilnim molekulom ili supstancom, kao što je fluorescentni molekul, radioaktivni molekul ili bilo koja druga u ovoj oblasti poznata oznaka kao što je gore opisano.
Na primer, antitelo ili fragment antitela iz ovog pronalaska može da bude označen sa radioaktivnim molekulom. Na primer, pogodni radioaktivni molekuli uključuju ali se ne ograničavaju na radioaktivne atome korišćene za scintigrafske studije kao što 123I, 124I, 111In, 186Re, i 188Re. Antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska mogu takođe da budu označeni sa vrtložnom oznakom za snimanje nuklearnom magnentnom rezonancom (NMR) kao što je jod-123, jod-131, indijum-Ill, fluor-19, karbon-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan ili gvožđe. Posle isporuke antitela, detektuje se raspodela radiooznačenog antitela unutar pacijenta. Moguće je koristiti bilo koji pogodan postupak. Neki neograničavajući primeri uključuju, kompjuterizovanu tomografiju (CT), poziciono emisionu tomografiju (PET), snimanje magnetnom rezonancom (MRI), fluorescenciju, hemiluminescenciju i sonografiju.
[0208] Antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska mogu biti korisni za dijagnostikovanje i uspostavljanje stadijuma oboljenja od kancera i bolesti povezanih sa prekomernim eksprimovanjem Ror2. Kanceri povezani sa prekomernim eksprimovanjem Ror2 mogu da uključe kancer sunđeraste (skvamozne) ćelije, sitnoćelijski kancerpluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kancer želuca, kancer pankreasa, tumore glijalne ćelije kao što je glioblastom i neurofibromatoze, kancer grlića materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer bešike, hepatom, kancer dojke, kancer debelog creva, melanom, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma, karcinom pljuvačne žlezde, kancer bubrega, renalni kancer, kancer prostate, kancer vulve, kancer tiroidne žlezde, karcinom hepatoćelija, sarkome, hematološke kancere (leukemije), astrocitome, i različite tipove kancera glave i vrata ili druge Ror2 koji eksprimuju ili prekomerno eksprimuju hiperproliferativne bolesti.
[0209] Antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska mogu biti korisni za dijagnostikovanje bolesti koje nisu kanceri za koje je eksprimovanje Ror2 povećano ili smanjeno. I rastvorljivi ili ćelijski oblici Ror2 mogu da se koriste za takve dijagnoze. Najčešće, takvi dijagnostički postupci uključuju upotrebu biološkog uzorka dobijenog od pacijenta. Kako je ovde korišćeno, pojam "biološki uzorak" obuhvata raznovrsne tipove uzorka dobijene od subjekta koje je moguće koristiti za ogled dijagnostikovanja ili nadgledanja. Biološki uzorci uključuju ali se ne ograničavaju na krv i druge uzorke tečnosti biološkog porekla, uzorke čvrstog tkiva kao što je uzorak biopsije ili kulturu tkiva ili ćelija izvedenih iz njih, i njihovo potomstvo. Na primer, biološki uzorci uključuju ćelije dobijene iz uzorka tkiva prikupljene od pojedinca kod kog postoji sumnja da ima kancer povezan sa Ror2 prekomernom ekspresijom, i poželjno od glioma, želuca, pluća, pankreasa, dojke, prostate, bubrega, hepatoćelije i endometijuma. Biološki uzorci obuhvataju kliničke uzorke, ćelija u kulturi, supernatante ćelije, lizate ćelije, serum, plazmu, biološki fluid, i uzorke tkiva.
[0210] Antitelo iz ovog pronalaska moguće je koristiti u postupku dijagnostikovanja kancera povezanog sa prekomernim eksprimovanjem Ror2 kod subjekta detektovanjem Ror2 na ćelijama iz nekog subjekta. Posebno, pomenuti postupak može da uključi korake:
(a) dovođenja u kontakt biološkog uzorka subjekta sa antitelom ili fragmentom antitela prema ovom pronalasku pod uslovima pogodnim za antitelo ili fragment antitela da bi se formirali kompleksi sa ćelijama u biološkom uzorku koji eksprimuje Ror2; i
(b) detektovanje i/ili kvantifikovanje pomenutih komplesa, pri čemu detekcija pomenutih kompleksa jeste indikator kancera povezanog sa Ror2 prekomernim eksprimovanjem.
[0211] Da bi se nadgledao napredak kancera, taj postupak je moguće ponoviti u različitim vremenskim periodima, da bi se odredilo da li vezivanje antitela na uzorke povećava ili smanjuje, na osnovu čega je moguće odrediti da li je kancer napredovao, regresirao ili se stabilizovao.
[0212] Ovaj pronalazak je moguće koristiti u postupku dijagnostikovanja bolesti povezane sa eksprimovanjem ili prekomernim eksprimovanjem Ror2 ili smanjenjem ili povećanjem rastvorljivog oblika Ror2. Primeri takvih bolesti mogu da uključe poremećaje imunog sistema kod ljudi, bolesti tromboze (trombozu i aterotrombozu), i kardiovaskularne bolesti
[0213] U jednom izvođenju, dato je anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za upotrebu u postupku dijagnostikovanja ili detekcije. Ovaj postupak može da obuhvata dovođenje u kontakt biološkog uzorka sa anti-Ror2 antitelom ili fragmentom antitela kako je ovde opisano pod uslovima koji dozvoljavaju vezivanje anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela na Ror2, i detektovanje da li se kompleks formira između anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela i Ror2. Takav postupak je moguće izvesti in vitro ili in vivo. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela je moguće koristiti da bi se odabrali subjekti koji se kvalifikuju za terapiju. Terapija može da uključi isporuku anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela tom subjektu.
[0214] U izvesnim izvođenjima, označena anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela su dati. Oznake uključuju, ali se ne ograničavaju na, oznake ili delove koji se detektuju direktno (kao što je fluorescentno, hromoforno, elektronski guste, hemiluminiscentne, i radioaktivne oznake), kao i delove, kao što su enzimi ili ligandi, koji se detektuju indirektno, npr. kroz enzimsku reakciju ili molekularnu interakciju. Primeri oznaka uključuju, ali se ne ograničavaju na, radioizotope 32P, 14C, 125I, 3H, i 131I, fluorofore kao što su retki zemni helati ili fluorescein i njegovi derivati, rodamin i njegovi derivati, dansil, umbeliferon, luciferaze, npr. luciferaza svica i bakterijska luciferaza (američki patent br. U.S. br.4,737,456), luciferin, 2,3-dihidroftalazindioni, peroksidaza rena (HRP), alkalna fosfataza, β-galaktozidaza, glukoamilaza, lizozim, saharid oksidaze, npr., glukozna oksidaza, galaktozna oksidaza, i glukoza-6-fosfat dehidrogenaza, heterociklične oksidaze kao što je urikaza i ksantin oksidaza, spojena sa enzimom koji koristi vodonik peroksid da oksidira prekursor boje kaošto je HRP, laktoperoksidaza, ili mikroperoksidaza, biotin/avidin, vrtložne oznake, bakteriofagne oznake, stabilni slobodni radikali, i slično.
D. Farmaceutske formulacije
[0215] Anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela imaju aktivnost ubijanja ćelije. Ova aktivnost ubijanja ćelije se proširuje na više različitih tipova linija ćelije. Pored toga, ova antitela ili fragmenti antitela, kada se jednom konjuguju na citotoksični agens, mogu da smanje veličinu tumora i mogu da ispolje smanjenu citotoksičnost. Videti Primer 2 iz ove prijave. Dakle, anti-Ror2 antitela, fragmenti ili njihovi imunokonjugati mogu da budu korisni za lečenje proliferativnih bolesti povezanih sa Ror2 eksprimovanjem. Antitela, fragmenti ili imunokonjugati mogu da se koriste sami ili u kombinaciji sa bilo kojim pogodnim agensom ili drugim uobičajenim terapijama.
[0216] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti za lečenje bolesti povezanih sa Ror2 eksprimovanjem, prekomernim eksprimovanjem ili aktivacijom. Ne postoje specifična ograničenja na tipove kancera ili tkiva koje je moguće lečiti pored neophodnosti u pogledu Ror2 eksprimovanja. Primeri uključuju kancer skvamozne (sunđeraste) ćelije, sitnoćelijski kancerpluća, nesitnoćelijski kancer pluća, kancer želuca, kancer pankreasa, tumore glijalne ćelije kao što je glioblastom i neurofibromatoze, kancer grlića materice, kancer jajnika, kancer jetre, kancer bešike, hepatom, kancer dojke, kancer debelog creva, melanom, kolorektalni kancer, karcinom endometrijuma, karcinom pljuvačne žlezde, kancer bubrega, renalni kancer, kancer prostate, kancer vulve, kancer tiroidne žlezde, karcinom hepatoćelija, sarkome, hematološke kancere (leukemije), astrocitome, i različite tipove kancera glave i vrata. Preporučljivije je lečenje kancera kao što je gliom, želudačni, plućni, pankreasni, dojke, prostate, bubrega, hepatoćelije i endomterijuma.
[0217] Anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela su potencijalni aktivatori urođenog odgovora imunog sistema i tako mogu da budu korišćeni za lečenje poremećaja imunog sistema kod ljudi, kao što je sepsa. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela iz ovog pronalaska može takođe da se koristi kao adjuvans za imunizaciju kao što je za vakcine i kao agensi protiv infekcije protiv, na primer, bakterija, virusa i parazita.
[0218] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti da bi se zaštitili od, sprečili ili lečili trombozne bolesti kao što je venska i arterijska tromboza i aterotromboza. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti i radi zaštite od, sprečavanja ili lečenja kardiovaskularnih bolesti kao i da bi se sprečio ili inhibirao ulaz virusa kao Lasa (Lassa) i Ebola virusa i za lečenje virusnih infekcija.
[0219] Za lečenje postupaka opisanih ovde, anti-Ror2 antitelo, fragment antitela ili anti-Ror2 antitelo ili imunokonjugat fragmenta antitela mogu da budu isporučeni na način u skladu sa uobičajenim postupcima povezanim sa upravljanjem bolešću ili poremećajem za koji se traži lečenje. U skladu sa opisom datim ovde, delotvorna količina antitela, fragmenta antitela ili imunokonjugata se isporučuje subjektu kom je potrebno za takvo lečenje tokom vremenskog perioda i pod uslovima dovoljnim da se spreči ili leči bolest ili poremećaj. Dakle, bolest povezana sa eksprimovanjem Ror2 moguće je lečiti isporučivanjem subjektu kom je potrebno terapijski delotvorne količine antitela, fragmenta antitela ili konjugata iz ovog pronalaska.
[0220] Za isporuku, anti-Ror2 antitelo, fragment antitela ili imunkonjugat iz ovog pronalaska mogu da budu formulisani kao farmaceutska supstanca. Ta farmaceutske supstance obuhvata anti-Ror2 antitelo, fragment antitela ili imunokonjugat iz ovog pronalaska moguće je formulisati prema poznatim postupcima za dobijanje farmaceutskih supstanci. Kod takvih postupaka, terapijski molekul je najčešće kombinovan sa mešavinom, rastvorom ili supstancom koja obuhvata farmaceutski prihvatljiv nosač.
[0221] Farmaceutski prihvatljiv nosač je materijal koji pacijent koji primi terapiju može tolerisati. Sterilni fosfatom puferisani slani rastvor je jedan primer farmaceutski prihvatljivog nosača. Drugi pogodni farmaceutski prihvatljivih nosača su dobro poznati u ovoj oblasti. (Videti, npr., Gennaro (ed.), Remington’s Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company, 19th ed. 1995)) Formulacije mogu još da obuhvata jedan ili iviše ekscipijenasa, konzevanasa, rastvarača, puferisanih agenasa, albumina da bi se sprečio gubitak proteina na virusnim površinama, itd.
[0222] Oblik farmaceutskih supstanci, ruta isporuke, doziranje i režim sasvim prirodno zavise od ozbiljnosti zdravlja, starosne dobi, težine, i pola pacijenta, itd. Ova razmatranja može uzeti u obzir za razmatranje stručnjak u oblasti da bi formulisao pogodne farmaceutske supstance. Farmaceutske supstance iz ovog pronalaska moguće je formulisati za topikalnu, oralnu, parenteralnu, intranazalnu, intravenoznu, intramuskularnu, potkožnu ili intraokularnu isporuku i slično.
[0223] Preporučljivo, farmaceutske supstance obuhvataju pomoćna farmaceutska sredstva koja su farmaceutski prihvatljiva za formulaciju koja može da se ubrizga. Ovo ogu da budu specifično izotonični, sterilni, slani rastvori (mononatrijum ili dinatrijum fosfat, natrijum, kalijum, kalcijum ili magnezijum hlorid i lični ili mešavine takvih soli), ili suvi, posebno supstance osušene zamrzavanjem koje deluju na dodavanje na primer, sterilisane vode ili fiziološkog slanog rastvora, da se dozvoli sastav rastvora koji mogu da se ubrizgaju.
[0224] U nekim izvođenjima, agensi toničnosti, ponekad poznati kao ''stabilizatori'' jesu prisutni da podese ili održa toničnost tečnosti ili supstance. Kada se koristi sa velikim, naelektrisanim (napunjenim) biomolekulima takvi proteini i antitela koji se često označavaju pojmom ''stabilizatori'' zato što reaguju sa naelektrisanim grupama kao što su bočni lanci aminokiseline, čime se smanjuje potencijal za inter-i intramolekularne interakcije. Agensi toničnosti mogu da budu prisutni u bilo kojoj količini od 0,1% do 25% težine, preporučljivo 1 do 5% farmaceutske supstance. Preporučeni agensi toničnosti uključuju višestruke hidroksi šećerne alkohole, poželjno, trohidroksi ili više šećerne alkohole, kao što je glicerin, eritritol, arabito. ksilitol, sorbitol i manitol.
[0225] Dodatni eksicipijensi uključuju agense koji služe kao jedan ili više od sledećih: (1) agense za pospešivanje creva, (2) pospešivanje rastvaranja, (3) stabilizatore i (4) i agense koji sprečavaju denaturaciju ili prianjanje na zid posude. Takvi ekscipijensi mogu uključiti: polihidroksi šećerne alkohole (numerisane gore u tekstu); aminokiseline kao što je alanin,
1
glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, lizin, ornitin, leucin, 2-fenilalanin, glutarnu kiselinu, treonin, itd.; organske šećere ili šećerne alkohole kao što je saharoza, laktoza, laktitol, trehaloza, sahioza, manoza, sorboza, ksiloza, riboza, rititol, mioinizitoza, mioinizitol, galaktoza, galaktitol, glicerol, ciklitole (npr., inozitol), polietilen glikol; sumpor koji sadrži agense reakcije, kao što je urea, glutation, lipoinska kiselina, natrijum tioglikolat, tioglicerol, α-monotioglicerol i natrijum tiosulfat; proteini male molekularne težine kao što je albumin humanog seruma, albumin goveđeg seruma, želatin ili drugi imunoglobulini; hidrofilni polimeri kao što je polivinil pirolidon; monosaharidi (npr., ksiloza, manoza, fruktoza, glukoza; disaharidi (npr., laktoza, maltoza, saharoza); trisaharidi kao što je rafinoza; i polisaharidi kao što je dekstrin ili dekstran.
[0226] Nejonski surfaktanti ili deterdženti (takođe poznati kao ''agensi vlaženja'') može da se koristi da bi pomoglo da se rastvori terapijski agens kao i da se zaštiti terapijski protein protiv nagomilavanja indukovanog agitacije, što takođe dozvoljava formulacija koju treba izložiti posmičnom površinskom naprezanju a da ne prouzrokuje denaturaciju aktivnog terapijskog proteina ili antitela. Nejonski surfaktanti mogu da budu prisutni u opsegu koncentracije od oko 0,05 mg/m do oko 1.0 mg/ml, preporučljivo oko 0,07 mg/ml do oko 0,2 mg/ml.
[0227] Pogodni nejonski surfaktanti uključujući polisorbate (20, 40, 60, 65, 80, itd.), polioksamere (184, 188, itd.), PLURONIC® poliole, TRITON®, polioksietilen sorbitan monoetre (TWEEN®-20, TWEEN®-80, itd.), lauromakrogol 400, polioksil 40 stearat, polioksietilen hidrogenisano ricinusovo ulje 10, 50 i 60, glicerol monostearat, saharozni estar masne kiseline, metil celulozu i karboksimetil celulozu. Anjonski deterdženti koje je moguće koristiti uključuju natrijum lauril sulfat, dioktil natrijum sulfosukcinat i dioktil natrijum sulfonat. Katjonski deterdženti uključuju benzalknijum hlorid ili benzetonijum hlorid
[0228] Doze korišćene za isporuku mogu da budu prilagođene kao funkcija različitih parametara, i posebno kao funkcija režima isporuke korišćenog, relevantne patologije, ili alternativno željenog trajanja lečenja. Da bi se pripremile supstance, delotvorna količina antitela ili fragment antitela može dase rastvori ili rasprši u farmaceutski prihvatljivom nosaču ili vodenastoj podlozi.
[0229] Farmaceutski oblici pogodni za injektiblnu upotrebu uključuju sterilne vodenaste rastvore ili disperzije; formulacije uključujući susamovo ulje, kikiriki ulje ili vodenasti propilen glikol; i sterilne prahove za proizvoljno dobijanje sterilnih rastvora ili disperzija koje se ubrizgavaju. U svim slučajevima, oblik mora da bude sterilan i mora da bude fluid do mere da postoji laka mogućnost lakog ubrizgavanja. Mora da bude stabilno pod uslovima proizvodnje i skladištenja i mora da bude očuvano od zagađenja mikroorganizmima, kao što su bakterije i gljive.
[0230] Rastvori aktivnih jedinjenja kao slobodna baza ili farmakološki prihvatljive soli mogu da budu pripremljeni u vodi pogodno pomešanoj sa surfaktantom. Disperzije je takođe moguće pripremiti u glicerolu, tečnim polietilen glikolima, i njihovim mešavinama i u uljima. Pod redovnim uslovima skladištenja i upotrebe, ovi preparati sadrže konzervans da bi se sprečio rast mikroorganizama.
2
[0231] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela može da bude formulisano u supstanci u neutralnom ili slanom obliku. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli dodate kiseline (formirane sa slobodnim amino grupama proteina) i koje se formiraju sa neorganskim kiselinama kao, na primer, hlorovodoničnom ili fosfornom kiselinom, ili su takve organske kiseline kao sirćetna, oksalna, tartarna, mandelinska i slične. Soli formirane sa slobodnim grupama karboskila mogu da budu izvedene iz neorganskih baza kao što je, na primer, natrijum, kalijum, amonijak, kalcijum, ili gvožđe hidroksidi, i takve organske baze kao što je izopropilamin, trimetilamin, histidin, prokain i slični.
[0232] Nosač može da bude rastvarač ili disperziona podloga koja obuhvata, na primer, vodu, etanol, poliol (na primer, glicerol, propilen glikol, i tečni polietilen glikol, i slične), njihove pogodne mešavine, i biljna ulja. Moguće je održati propisnu fluidnost, na primer, upotrebom sloja obloge, kao što je lecitin, održavanjem neophodne veličine čestice u slučaju raspršenja i upotrebom surfaktanata. Sprečavanje aktivnosti mikroorganizama može da dovede do različitih antibakterijskih i antigljivičnih agenasa, na primer, parabenea, hlorobutanola, fenola, sorbinske kiseline, timerosala, i sličnog. U brojnim slučajevima, biće poželjno da se uključe agensi izotoničnosti, na primer, šećeri i natrijum hlorid. Produžena apsorpcija injektibilnih supstanci može da dovede do upotrebe supstanci agenasa koji odlažu apsorpciju, na primer, aluminijum monostearat i želatin.
[0233] Sterilni injektibilni rastvori se pripremaju inkorporiranjem aktivnih jedinjenja u neophodnoj količini u odgovarajćem rastvaraču sa jednim ili više drugih sastojaka koji su navedeni gore u tekstu, kao što može biti neophodno posle čega sledi filtrirana starilizacija. Generalno, disperzije se dobijaju ugradnjom različtiih sterilisanih aktivnih sastojaka u sterilno pomoćno farmaceutsko sredstvo koje obuhvata osnovnu disperzionu podlogu i zahteva druge sastojke od onih koji su navedeni gore u tekstu. U slučaju sterilnih prahova za dobijanje sterilnih injektibilnih rastvora, preporučeni postupci dobijanja su vakuumsko sušenje i tehnike sušenja zamrzavanje koje daju prah aktivnog sastojka plus dodatni željeni sastojak iz njegovog prethodno sterilnog filtriranog rastvora.
[0234] Priprema više, ili visoko koncentrovanih rastvora za direktno ubrizgavanje se takođe razmatra, pri čemu upotreba dimetils ulfoksida (DMSO) kao rastvarača se zamišlja da kao rezultat da krajnje brz prodor, isporučujući visoke koncentracije aktivnih sastojaka na malo područje tumora.
[0235] Posle formulacije, rastvori će biti isporučeni na način kompatibilan sa formulacijom doze i u takvoj količini koja je terapiijski delotvorna. Formulacije se lako isporučuju u raznim oblicima doze, kao što je tip injektibilnih rastvora opisanih gore u tekstu, ali kapsule za otpuštanje leka i slično mogu takođe da se koriste.
[0236] Za parenteralnu isporuku u vodenastom rastvoru, na primer, rastvor treba da bude pogodno puferisan ako je neophodno i tečni razblaživač će prvo dati izotoničnost sa dovoljno soli ili glukoze. Ovi specifični vodenasti rastvori su posebno pogodni za intravenozno, intramuskularno, potkožno i intraperitonealno isporučivanje pacijentu. U vezi sa ovim, sterilne vodenaste podloge koje je moguće koristiti će stručnjaci u ovoj oblasti prepoznati u svetlu ovog opisa. Na primer, jedna doza bi mogla da se rastvori u 1 ml izotoničnog NaCl rastvora i bilo da je dodato u 1000 ml fluid za potkožnu infuziju tečnosti (hipodermokliza) ili ubrizgana na predloženom mestu infuzije, (videti na primer, priručnik za farmaciju: "Remington’s Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580). Neke varijacije u dozi će neophodno da se jave zavisno od stanja subjekta koji se leči. Lice odgovorno za isporuku će, u svakom slučaju da odredi odgovarajuću dozu za individualnog subjekta.
[0237] Antitela ili fragmenti antitela mogu da budu formulisana unutar terapijske mešavine da bi isporučili oko 0,0001 do 10,0 miligrama, ili oko 0,001 do 5 miligrama, ili oko 0,001 do 1 miligrama, ili oko 0,001 do 0,1 miligrama, ili oko 0,1 do 1,0 ili čak oko 10 miligrama po dozi. Više doza je takođe moguće isporučiti u izabranim vremenskim intervalima.
[0238] Pored jedinjenja formulisanih za parenteralnu isporuku, kao što je intravenozna ili intramuskularna injekcija, drugi farmaceutski prihvatljivi oblici uključuju, npr. tablete ili druge čvrste supstance za oralnu isporuku; kapsule koje otpuštaju u određenim vremenskim intervalima; i bilo koji drugi oblik koji se danas koristi.
[0239] U izvesnim izvođenjima, upotreba lipozoma i/ili nanočestica se razmatra za uvođenje antitela ili fragmenata antitel au ćelije domaćina. Formulacija i upotreba lipozoma i/ili nanočestica su poznate stručnjacima u ovoj oblasti.
[0240] Nanokapsule mogu generalno da obuhvate jedinjenja na stabilan i reproduktibilan način. Da bi se izbegla neželjena dejstva usled unutarćelijskog polimernog preopterećenja, takve ultrafine čestice (dimenzionirane na oko 0,1 µm) su generalno projektovane korišćenjem polimera koji mogu da se razgrade in vivo. Biorazgradive nanočestice polialkil-cijanokrilata koje zadovoljavaju ove zahteve se razmatraju za upotrebu, i takve čestice moguće je lako napraviti.
[0241] Lipozomi se formiraju iz fosfolipida koji se rasprše u vodenastoj podlozi i spontano formiraju višestrukolamelarne koncentrične dvoslojne vezikule (takođe se zovu i višestrukolamelarne vezikule (MLV)). Višestrukolamelarne vezikule (MLV) generalno imaju prečnike od 25 nm to 4 µm. Sonikacija višestrukolamelarnih vezikula (MLV) daje kao rezultat formiranje malih unilamelarnih vezikula (SUV) sa prečnicima u opsegu od 200 do 500 Å, koji obuhvataju vodenasti rastvor u jezgru. Fizičke karakteristike lipozoma zavise od pH, jonske jačine i prisustva dvovalentnih katjona.
[0242] Farmaceutske formulacije koje sadrže anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela kako je ovde opisano su pripremljene mešanjem takvog antitela ili fragmenta antitela koji imaju željeni stepen čistoće sa jenim iil više opcionih farmaceutski prihvatljivih nosača (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), u obliku liofilisanih formulacija ili vodenastih rastvora. Farmaceutski prihvatljivi nosači su generalno netoksični za primaoce u dozama i koncentracijama koje se koriste, i obuhvataju, ali se ne ograničavaju na: pufere kao što je fosfat, citrat, i druge organske kiseline; antioksidansi uključujući askorbinsku kiselinu i
4
metionin; konzervanse (kao što je oktadecildimetilbenzil amonijak hlorid;heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid; benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabeni kao što je metil ili propil paraben; katehol; resorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-kresol); malu molekularnu težinu (manje od oko 10 ostataka) polipeptidi; proteini, kao albumin serum, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilni polimeri kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin, ili lizin; monosaharide, disaharide, i druge karbohidrate uključujući glukozu, manozu, ili dekstrine; agense helacije kao što je EDTA; šećere kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontrajoni koji formiraju soli kao što je natrijum; komplekse metala (npr. komplekse Zn proteina); i/ili nejonski surfaktansi kao što je polietilen glikol (PEG).
[0243] Primeri farmaceutski prihvatljivih nosača ovde još uključuje intersticijalne agense za raspršivanje leka kao rastvorljivi neutralno aktivan glikoproteini hijaluronidaze (sHASEGP), na primer, ljudski rastvorljivi PH-20 glikoproteini hijaluronidaze, kao rHuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Izvesni primeri sHASEGP i postupci upotrebe, uključujući rHuPH20, su opisani u američkim objavama prijava br. US 2005/0260186 i 2006/0104968. U jednom varijantnom rešenju, sHASEGP je kombinovan sa jednim ili više dodatnih glikosaminoglikanaza kao što je hondroitinaze.
[0244] Primeri liofilisana formulacije antitela su opisane u američkom patentu br. U.S.
6,267,958. Vodenaste formulacije antitela uključuju one koje su opisane u američkom patentu br. U.S.6,171,586 i WO2006/044908, kasnije formulacije uključujući puferski histidin acetat.
[0245] Formulacije ovde mogu takođe da sadrže više od jednog aktivnog sastojka kako je neophodno za specifičnu indikaciju koja se leči. Preporučljivo, sastojci sa komplementarnim aktivnostima koji neželjeno utiču jedne na druge moguće je kombinovati u pojedinačnu formulaciju. Na primer, može biti poželjno da seobezbedi EGFR antagonist (kao što je erlotinib), anti-angiogeni agens (kao što je VEGF antagonist koji može da bude anti-VEGF antitelo) ili hemoterapijski agens (kao što je taksoid ili platina agens) pored anti-Ror2 antitela, fragmenta antitela ili imunokonjugata iz ovog pronalaska. Takvi aktivni sastojci su pogodno prisutni u kombinaciji u količinama koje su delotvorne za predviđenu namenu.
[0246] Aktivni sastojci mogu da budu enkapsulirani u mikrokapsule pripremljene, na primer, tehnikama koacervacije ili intervacijalnom polimerizacijom. Na primer, hidroksimetilceluloza ili želatinske mikrokapsule i mikrokapsule poli-(metilmetakrilata), prema opisanom redosledu, u sistemima za koloidnu isporuku leka (na primer, lipozomi, mikrokuglice albumina, mikroemulzije, nanočestice i nanokapsule) ili u makroemulzijama mogu da budu korišćene. Takve tehnike su opisane u Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition (Remingtonov farmaceutske nauke, 16. izd.), Osol, A. Ed. (1980).
[0247] Moguće je dobiti preparate sa zadržanim otpuštanjem. Pogodni primeri preparata sa zadržanim otpuštanjem uključuju polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže antitelo ili fragment antitela, čije matrice mogu da budu u obliku oblikovanih predmeta, npr., filmovi, ili mikrokapsula.
[0248] Te formulacije koje treba koristiti za in vivo isporuku pacijentu su generalno sterilne. Sterilnost je moguće lako izvršiti, npr., filtracijom kroz sterilne membrane za filtraciju.
E. Terapijski postupci i supstance
[0249] Bilo koje od ovde datih anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela moguće je koristiti za terapijske postupke. U jednom varijantnom rešenju, anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za upotrebu kao lek se dobija. U još nekim varijantnim rešenjima, anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za upotrebu za lečenje kancera (npr., kancera dojke, nesitnoćelijskog kancera pluća, pankreasnog kancera, kancera mozga, kancera pankreasa, mozga, bubrega, jajnika, želuca, leukemije, endometrijuma materice, debelog creva, prostate, tiroidne žlezde, jetre, osteosarkoma, i/ili melanoma) se dobija. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela je moguće koristiti u postupku lečenja. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti u postupku lečenja pojedinca koji ima kancer koji obuhvata isporuku pojedincu delotvorne količine anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela je moguće koristiti u postupku lečenja pojedinca koji ima poremećaj imunog sistema (npr., autoimuni poremećaj), kardiovaskularni poremećaj (npr., aterosklerozu, hipertenziju, trombozu), infektivnu bolest (npr., virus Ebole, Marburg virus) ili dijabetes, koji obuhvata isporuku pojedincu delotvorne količine anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela. Postupak može još da obuhvata isporuku pojedncu delotvorne količine najmanje jednog dodatnog terapijskog agensa, npr., kako je opisano dole u tekstu. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti za inhibiciju angiogeneze, inhibiciju proliferacije ćelija, inhibiciju funkcije imunog sistema, inhibiciju izlučivanja inflamatornih citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), inhibiciju vaskulature tumora (npr., unutar tumorne vaskulature ili vaskulature povezane sa tumorom), i/ili inhibiciju stromalne funkcije tumora.
[0250] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela je moguće koristiti u postupku inhibicije angiogeneze, inhibicije proliferacije ćelije, inhibicije funkcije imunog sistema, inhibicije izlučivanja inflamatornih citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), inhibicije vaskulature tumora (npr., unutartumorne vaskulature ili vaskulature povezane sa tumorom), i/ili inhibicije stromalne funkcije tumora kod pojedinca koja obuhvata isporuke tom pojedincu delotovorne količie anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela da bi se inhibirala angiogeneza, da bi se inhibirala proliferacija ćelije, da bi se inhibirala funkcija imunog sistema, da bi se inhibiralo izlučivanje inflamatornih citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), da bi se inhibirao razvoj vaskulature tumora (npr., unutartumorna vaskulatura ili vaskulatura povezana sa tumorom), i/ili da bi se inhibirala stromalna funkcija tumora. "Pojedinac" je poželjno ljudsko biće.
[0251] Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela je moguće koristiti za proizvodnju ili dobijanje leka. Lek može da bude za lečenje kancera (u nekim izvođenjima, kancera dojke, nesitnoćeljiskog kancera pluća, pankreasnog kancera, kancera mozga, kancera pankreasa, mozga, bubrega, jajnika, želuca, leukemije, endometrijuma materice, debelog creva, prostate, tiroidee, jetre, osteosarkoma, i/ili melanoma). Lek može da bude za upotrebu u postupku lečenja kancera koji obuhvata isporuku pojedincu koji ima kancer delotvorne količine leka. Lek može da bude za upotrebu u postupku lečenja poremećaja imunog sistema (npr., autoimuni poremećaj), kardiovaskularnog poremećaja (npr., ateroskleroze, hipertenzije, tromboze), infektivne bolesti (npr., virusa Ebole, Marburg virus) ili dijabetesa, koji obuhvata isporuku pojedincu delotvorne količine anti-Ror2 antitela ili fragmenta antitela. Postupak može još da obuhvata isporuku pojedncu delotvorne količine najmanje jednog dodatnog terapijskog agensa, npr., kako je opisano dole u tekstu. Lek može da bude antitelo ili fragment antitela moguće je koristiti za inhibiciju angiogeneze, inhibiciju proliferacije ćelija, inhibiciju funkcije imunog sistema, inhibiciju izlučivanja inflamatornih citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), inhibiciju vaskulature tumora (npr., unutartumorne vaskulature ili vaskulature povezane sa tumorom), i/ili inhibiciju stromalne funkcije tumora. Taj lek je moguće korisiti u postupku inhibiranja angiogeneze, inhibiranja proliferacije ćelije, inhibiranja funkcije imunog sistema, inhibiranja izlučivanja inflamatornog citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), inhibiranja vaskulature tumora (npr., unutartumorna vaskulatura ili sa tumorom povezana vaskulatura), i/ili inhibiranje stromalne funkcije tumora kod pojedinca obuhvata isporuku tom pojedincu količine delotvorne da bi taj lek inhibirao angiogenezu, inhibirao proliferaciju ćelije, pospešio funkciju imunog sistema, indukovao izlučivanje inflamatornih citokina (npr., iz makrofaga povezanih sa tumorom), inhibirao razvoj tumorne vaskulature (npr unutarturmorna vaskulature ili vaksulature povezane sa tumorom), i/ili inhibiralo stromalnu funkciju tumora. "Pojedinac" možebiti ljudsko biće.
[0252] U još jednom varijantnom rešenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutske formulacije koje obuhvataju bilo koje od anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela datih ovde, npr., za upotrebu u bilo kom od gornjih terapijskih postupaka. U jednom izvođenju, farmaceutska formulacija obuhvata bilo koje od anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela obezbeđenih ovde i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekom drugom izvođenju, farmaceutska formulacija obuhvata bilo koje od anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela obezbeđenih ovde i najmanje jedan dodatni terapijski agens, npr., kao što je opisano u dole u tekstu.
[0253] U svakom i svim lečenjima opisanim gore u tekstu, antitela ili fragmenti antitela iz ovog pronalaska omgu biti korišćeni sami, kao imunokonjugati ili u kombinaciji sa drugim agensima u terapiji. Na primer, antitelo iz ovog pronalaska može da bude zajedno isproučeno sa najmanje jednim dodatnim terapijskim agensom. U izvesnim izvođenjima, dodatni terapijski agens je anti-angiogeni agens. U izvesnim izvođenjima, dodatni terapijski agens je VEGF antagonist (u nekim izvođenjima, anti-VEGF antitelo, na primer bevacizumab). U izvesnim izvođenjima, dodatni terapijski agens je EGFR antagonist (u nekom izvođenju, erlotinib). U izvesnim izvođenjima, dodatni terapijski agens je hemoterapijski agens i/ili citostatični agens. U izvesnim izvođenjima, dodatni terapijski agens je taksoid (npr., paklitaksel) i/ili agens platine (npr., karboplatina). U izvesnim izvođenjima dodatni terapijski agens je agens koji pospešuje imunitet pacijenta ili imuni sistem tog pacijenta.
[0254] Takve kombinovane terapije su koje su navedene gore obuhvataju kombinovanu isporuku (pri čemu dva ili više terapijskih agenasa jeste uključeno u iste ili odvojene formulacije), i odvojena isporuka, u kom slučaju, isporuka antitela ili fragmenta antitela može da nastane pre, istovremeno, i/ili posle, isporuke dodatnog terapijskog agensa i/ili adjuvansa. Antitela ili fragmenti antitela mogu takođe da se koriste u kombinaciji sa terapijom zračenja.
[0255] Antitela ili fragmenti antitela mogu da se formulišu, doziraju i isporučuju na način koji je dosledan sa dobrom medicinskom praksom. Činioci za razmatranje u ovom kontekstu uključuju specifičan poremećaj koji se leči, posebno sisara koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, postupak isporuke, planiranje isporuke, i druge činioce poznate medicinskim praktikantima. Antitelo ili fragment antitela ne mora da bude, ali je opciono formulisan sa jednim ili više agenasa koji se trenutno koriste da bi se sprečio ili lečio poremećaj o kom se radi. Delotvorna količina takvih drugih agenasa zavisi od količine antitela ili fragmenta antitela prisutne u toj formulaciji, tipa poremećaja ili terapije, i drugih činilaca koji se razmatraju gore u tekstu. Oni se generalno koriste u istim dozama i uz rute isporuke kako je ovde opisano, ili oko od 1 do 99% doza opisanih ovde, ili u bilo kojoj dozi i bilo kojom rutom koja je empirijski/klinički određena da bude pogodna.
[0256] Za sprečavanje ili lečenje bolesti, odgovarajuća doza antitela ili fragmenta antitela (kada se koristi sama ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih dodatnih terapijskih agenasa) će zavisiti od tipa bolesti koji se leči, tipa antitela ili fragmenta antitela ozbiljnosti i toka bolesti, da li je to antitelo ili fragment antitela isporučeno u preventivne ili terapijske svrhe, prethodne terapije, kliničke istorije pacijenta i odgovora na antitelo ili fragment antitela, i od diskrecione odluke nadležnog lekara. Antitelo ili fragment antitela je pogodno isporučeno pacijentu jednokratno ili tokom niza terapija. Zavisno od tipa i ozbiljnosti bolesti, oko 1 µg/kg do 40 mg/kg antitela ili fragmenta antitela može da bude početna određena doza za isporuku pacijentu, bilo, na primer u obliku jednokratne ili više odvojenih isporuka, ili kontinualnom infuzijom. Jedna uobičajena dnevna doza bi mogla da se kreće u opsegu od oko 1 µg/kg do 100 mg/kg ili više, zavisno od gore pomenutih činilaca. Za ponovljene isporuke tokom nekoliko dana ili duže, zavisno od stanja, lečenje bi generalno bilo zadržano sve dok ne dođe do željenog suzbijanja simptoma bolesti. Takve doze mogu da budu isporučene sa prekidima, npr. svake nedelje ili svake tri nedelje (npr. tako da pacijent prima od oko dve do oko dvadeset, ili npr. oko šest doza antitela ili fragmenta antitela). Početna viša doza punjenja, posle koje sledi jedna ili više manjih doza može biti isporučena pacijentu. Međutim, drugi režimi doza mogu biti korisni. Napredovanje ove terapije se lako nadgleda uobičajenim tehnikama i ogledima.
[0257] Jasno je da bilo koja od gore navedenih formulacija ili terapijskih postupaka može da se izvede korišćenjem fragmenta antitela ili imunokonjugata iz ovog pronalaska umesto ili pored anti-Ror2 antitela.
[0258] Pospešivanje funkcije imunog sistema domaćin da se izbori sa tumorima je predmet sve većeg interesovanja. Uobičajeni postupci obuhvataju (i) APC pospešenje, kao što je (a) injekcija u tumor DNK koja kodira strane MHC aloantigene, ili (b) transfekcija biopsiranih ćelija tumora sa genima što povećava verovatnoću prepoznavanja antigena imunog sistema (npr., imune stimulatorne citokine, GM-CSF, ko-stimulatorne molekule B7.1, B7.2) tog tumora, (iii) usvojenu ćelijsku imunoterapiju, ili lečenje sa aktiviranim za tumor specifičnim T ćelijama. Usvojena ćelijska imunoterapija uključuje izolovanje tumorom infiltriranih T limfocita domaćina, proširenje populacije in vitro, kao što je kroz stimulaciju pomoću IL-2 ili tumora ili oba. Pored toga, izolovane T ćelije koje su disfunkcionalne moguće je takođe aktivirati in vitro primenom anti-PD-Ll antitela iz ovog pronalaska. T ćelije koje se koaktiviraju mogu zatim da budu ponovo isporučene domaćinu. Jedan ili više ovih postupaka je moguće koristiti u kombinaciji sa isporukom antitela, fragmenta antitela ili imunokonjugata iz ovog pronalaska.
[0259] Tradicionalne terapije za kancer uključuju sledeće: (i) terapija zračenjem (npr. radioterapija, terapija rendgenskim zracima, iradijacija) ili upotreba jonizujućeg zračenja da bi se ubile ćelije raka i da bi se skupili tumori. Terapija zračenjem može da se isporuči bilo spolja preko spoljne radioterapije zrakom (EBRT) ili unutra preko brahiterapije; (ii) hemoterapije, ili primene citotoksičnog leka što generalno utiče na brzo deljenje ćelija; (iii) ciljane terapije, ili agensi koji specifično utiču na deregulisane proteine ćelija kancera (npr. inhibitore tirozinske kinaze, imatinib, gefitinib; monoklonalna antitela, fotodinamičku terapiju); (iv) imunoterapiju, ili pospešenje odgovora imunog sistema domaćina (npr. vakcina); (v) hormonska terapija, ili blokada hormona (npr., kada je tumor osetljiv na hormon), (vi) inhibitor angiogeneze, ili blokada formiranja i rasta krvnog suda, i (vii) palijativna nega, ili lečenje usmereno na poboljšanje kvaliteta nege da bi se smanjio bol, mučnina, povraćanje, dijareja, i krvarenje. Lečenje bola kao što je morfin i oksikodon, antiemeticikao što je ondansetron i aprepitant, mogu da dozvole agresivnije režime lečenja.
[0260] Za lečenje kancera, bilo koja od prethodno opisanih uobičajenih terapija za lečenje kancernog imuniteta može da se sprovede, pre, posle ili istovremeno sa isporukom anti-Ror2 antitela ili fragmenata antitela. Pored toga, anti-Ror2 antitela ili fragmenti antitela mogu da budu isporučeni pre, posle ili istovremeno sa uobičajenim terapijama za kancer, kao što je isporuka tumor vezujućih antitela (npr. monoklonalna antitela, toksinom konjugovana monoklonalna antitela) i/ili isporuka hemoterapijskih agenasa.
[0261] Sledeći primeri su ilustrativni, ali ne i ograničavajući, za ovaj opis. Druge pogodne modifikacije i adaptacije raznovrsnih uslova i parametara normalno se susreću u ovoj oblasti, i očigledne su stručnjacima u ovoj oblasti, a i obuhvaćeni su obimom ovog opisa.
PRIMERI
Primer 1: Kondiciono aktivna biološka (CAB) antitela protiv Ror2
[0262] Antitela protiv Ror2 kod ljudi su proizvedena u ovom Primeru. Humanizovano antitelo protiv Ror2 je korišćeno kao antitelo divljeg tipa da bi se generisala CAB antitela protiv Ror2. DNK koja kodira antitelo divljeg tipa (promenljive regione teškog lanca i lakog lanca) su razvijena da bi se generisale biblioteke promenljivog regiona teškog lanca i lakog lanca mutiranog antitela. Mutirani regioni promenljivog teškog lanca i lakog lanca u ovim bibliotekama su pregledani na afinitet selektivnog vezivanje na humani Ror2 pri vrednosti pH 6,0 preko pH 7,4 ELISA tehnikom (SL. 2A-2B i 3A-3B). Istovremeno, nivo eksprimovanja mutrainih antitela je takođe optimizovan u svrhu obezbeđivanja viših prinosa u naknadnom postupku proizvodnje. Pregledanje je urađeno u serumu korišćenjem SL. oznake jer je bilo dva humana antitela u tom serumu što može prouzrokovati netačne pozitivne nalaze za pregledanje. Utvrđeno je da generisana uslovno aktivna antitela imaju viši afinitet vezivnaja na Ror2 pri pH vrednosti od 6,0 nego njihov afinitet vezivanja na Ror2 pri pH od 7,4 (Tabele 1 i 2).
[0263] CAB antitela nisu pokazala nagomilavanje u puferu kako je pokazano na SL.4. CAB antitelo je analizirano hromatografijom isključivanja prema veličini. Kako je prikazano na SL.
4, samo je jedna vršna vrednost detektovana, što pokazuje nedovoljno ilinikakvo nagomilavanje antitela. Slika 5 pokazuje da su neka od izabranih mutiranih antitela (scFv) pokazala viši afinitet vezivanja na Ror2 pri pH vrednosti 6,0 nego afinitet vezivanja na Ror2 pri pH vrednosti 7,4. Pored toga, Slika 5 takođe pokazuje da je podizanje temperature iz sobne temperature do 60 °C nije značajno promenio selektivnost antitela.
[0264] Uslovno aktivna antitela su sva ispoljila visoke nivoe eksprimovanja kako je pokazano u Tabeli 4 dole, sa stupcem "Klon" pokazuje da su antitela i nivo eksprimovanja koj je pokazan u drugom stupcu u mg/ml.
[0265] Klonovi ovih antitela su poslati pružaocu usluga sa zahtevanim nivoom eksprimovanja koji predstavlja očekivani nivo eksprimovanja ("naručena količina"). Međutim, stvarni nivoi eksprimovanja nekoliko ovih antitela ("isporučena količina") su bili veoma visoki i prekoračili su očekivane nivoe eksprimovanja. Barem tri klona su imala nivoe eksprimovanja koji su prekoračili očekivani nivo eksprimovanja (BAP048.7.067-HC-FLAG, BAP048.7-C02D09-FLAG, i BAP048.7-A03F01-FLAG).
Tabela 4. Antitela sa visokim nivoima eksprimovanja
[0266] Uslovno aktivna antitela su takođe ispitivana korišćenjem površinske rezonance plazmona (SPR) da bi se izmerile brzine njihovog udruživanja i razdruživanja za vezivanje na Ror2. SPR ogled je moguće koristiti da bi se izmerile brzine udruživanja i razdruživanja za vezivanje proteina. Ta brzina in vivo udruživanja i razdruživanja (kod životinja i ljudi) uslovno aktivnih antitela je važno svojstvo.
[0267] Primećeno je da uslovno aktivna antitela imaju dobru aktivnost vezivanja pri pH vrednosti 6,0 i nedovoljnu ili nikakvu aktivnost vezivanja pri pH 7.4 (SL.6A-6B). Taj SPR ogled je pokazao da ova ista uslovno aktivna antitela jesu bila visoko osetljiva pri pH vrednosti 6,0 u poređenju sa pH vrednošću 7,4 (SL.6A-6B).
Primer 2: Anti-Ror2 antitela su konjugovana na model toksina
[0268] Anti-Ror2 antitelo iz ovog pronalaska je konjugovano na toksin dat kao model (npr. paklitaksel) da bi se proizveo uslovno aktivan antitelo-lek konjugat (Ror2-CAB-ADC).
[0269] Tumori su uvedeni u miševe ubrizgavanjem MDA-MB-436 ćelija tumora da bi se proizveli ksenograftovani miševi. Ror2- CAB-ADC je zatim ubrizgan u ksenografovane miševe u dozi od 0,3 ili 1 mg/kg jednom nedeljno tokom 2 nedelje. Kontrolna sredstva korišćena u ovoj studiji su uključila PBS pufer kao pomoćno farmaceutsko sredstvo i sam toksin (paklitaksel). Studija je pokazala da je Ror2-CAB-ADC dala značajno veće smanjenje veličine tumora, u poređenju sa kontrolnim sredstvima (SL. 7A-7C). Rezultati za grupu doziranu sa 0,3 mg/kg su prikazani na SL.7B i rezultati za grupu doziranu sa 1 mg/kg su prikazani na SL.
7C. Ova studija je pokazala da je anti-Ror2 antitelo konjugovano sa toksinom delotvorno za smanjenje veličine tumora.
Primer 3. afinitet vezivanja zavisan od pH vrednosti za uslovno aktivno antitelo BAP048
[0270] Afinitet vezivanja jednog od uslovno aktivnih antitela je identifikovan ovim pronalaskom, BAP048 (ili BAP048.7 kao što je prikazano na nekim slikama), je ispitan pH titracijom. Antitelo divljeg tipa je korišćeno kao kontrola. Kao što je prikazano na SL 8, uslovno aktivno antitelo BAP048 je aktivnije pri pH nižoj od pH 6,5, ali manje aktivno pri pH 7,0. Antitelo divljeg tipa ne
1
pokazuje pH zavisnost za svoj afinitet vezivanja.
Primer 4. Afinitet vezivanja između vrsta za uslovno aktivno antitelo BAP048
[0271] Uslovno aktivno antitelo BAP048 je izabrano za uslovni afinitet vezivanja humanog Ror2. Ovo uslovno aktivno antitelo je ispitano na njegov afinitet vezivanja na tri cilja: humani Ror2 (hROR2), makaki majmuna Ror2 (cynoROR2), i miša Ror2 (mROR2) korišćenjem ELISA (SL.9). Uslovno aktivno antitelo BAP048 je pokazalo skoro identičan afinitet vezivanja na Ror2 čoveka i makaki majmuna, ali značajno niži afinitet vezivanja na mišji Ror2. EC50 uslovno aktivnog antitela BAP048 za tri cilja su izračunati da iznose 201,4 ng/ml za humani Ror2, 327.1 ng/ml za Ror2 makaki majmuna, i 7653 ng/ml za Ror2 miša.
Primer 5. Ubijanje ćelije pomoću uslovno aktivnih konjugata BAP048-MMAE antitela
[0272] Uslovno aktivno antitelo BAP048 je konjugovano na monometil auristatin E (MMAE) lek za hemoterapiju da bi proizvelo konjugat antitelo lek (ADC). ADC je testiran na HEK293 ćelijama koje eksprimuju humani Ror2 na površini ćelije. Negativna kontrola korišćena za ovaj test je bila antitelo koje afinitetno odgovara ali ne specifično za humani Ror2. Negativna kontrola je takođe konjugovana na MMAE.
[0273] BAP048 ADC je ispitan pod dve pH vrednosti: 6,0 i 7. Procenat ćelija koje su ostale žive posle terapije, u odnosu na ćelije tretirane negativnom kontrolom je prikazan na SL.10. Primećeno je da je BAP048 ADC pokazao aktivnost ubijanja ćelije pri pH vrednosti 6,0 pri koncentraciji ispod 100 ng/ml, pri čemu je pri pH 7,4, BAP048 ADC pokazao ubijanje ćeije na oko 1000 ng/ml, 10-struku razliku delotvorne koncentracije oko.
[0274] Aktivnost ubijanja ćelije za BAP048 ADC je takođe ispitivana na LCLC103H ćelijama i HT1080 ćelijama. Za LCLC103H ćelije, koje su linija kancera pluća kod čoveka, aktivnost ubijanja ćelije BAP048 ADC je ispitana pri pH 6,0, 6,2, i 6,4 (SL.11A-11C). Razlika u aktivnosti ćelije ubice za BAP048 ADC nije bila značajno različita među tri ispitane pH vrednosti, sa IC50 pri 1,819 ng/ml (pH 6,0), 1,232 ng/ml (pH 6,2), i 3,318 ng/ml (pH 6,5).
[0275] Za HT1080 ćelije, koje su linija ćeije fibrosarkoma, aktivnost ubijanja ćelije BAP048 ADC je takođe ispitana pri pH vredbistu 6,0, 6,2, i 6,4 (SL.12A-12C). Razlika u aktivnosti ćelije ubice za BAP048 ADC nije bila značajno različita među tri ispitane pH vrednosti, sa IC50 pri 2,897 ng/ml (pH 6,0), 3,138 ng/ml (pH 6,2), i 2,601 ng/ml (pH 6,5).
Primer 6. Lečenje tumora na miševima uslovno aktivnim konjugatima BAP048-MMAE antitela
[0276] Ćelije kancera pluća LCLC103H su ubrizgane u miševe da bi se generisali mišji
2
ksenografti (tumori kod miševa). Uslovno aktivno antitelo BAP048 je konjugovano na MMAE kroz tiomost linkera da bi se generisalo ADC za ubrizgavanje miševima u dve koncentracije 1 mg/kg i 6 mg/kg. Negativna kontrola je bila pufersko sredstvo (pomoćno farmaceutsko sredstvo) bez ADC. Jednoj grupi je ubrizgano 1 mg/kg doze nedeljno tokom tri doze, i drugoj grupi je ubrizgano 6 mg/kg doze svaka 4 dana tokom 4 doza.
[0277] Zapremine tumora su izmerene tokom ove studije. Primećeno je da u dozirnoj grupi 6 mg/kg , veličina tumora se značajno skupi do 30. dana pomoću BAP048-MMAE ADC. Pri 1 mg/kg dozirnoj grupi, rast tumora je pokazao da je BAP048-MMAE ADC, u poređenju sa kontrolnim pomoćnim farmaceutskim sredstvom (SL.13).
Primer 7 Dejstvo linkera u na konjugatima uslvono aktivnog konjugata BAP048-MMAE
[0278] Dejstvo linkera uslovno aktivnog antitela BAP048 MMAE konjugacija je bila ispitana korišćenjem dva različita linkera: mc-vc-PAB i mc-PEG8-vc (SL. 14). Korišćena je isto negativno kontrolno sredstvo (pomoćno farmaceutsko sredstvo). Ova dva BAP048-MMAE konjugata su ubrizgana u ksenografte miša pri jednoj dozi od 1 mg/ml. Veličina tumora je izmerena tokom studije. Primećeno je da iako su oba BAP048-MMAE konjugata značajno usporila rast tumora u poređenju sa negativnom kontrolom, razlika između dva BAP048-MMAE konjugata nije bila značajna (SL. 14). Dakle, čini se da dejstvo linkera na BAP048-MMAE konjugate konjugate nije savezno..
Primer 8. Lečenje tumora kod miševa uslovno aktivnim antitelom BAP048
[0279] Ovaj primer je sličan Primeru 6, izuzev što su drugačije ćelije korišćene da se indukuju tumori kod miševa. Dve linije ćelije korišćene u ovom primeru su HT1080 ćelije (linija ćelije fibrosarkoma) i MDA-MB-436 ćelije (linija ćelije kancera dojke).
[0280] Za ksenograft miša indukovan pomoću HT1080, uslovno aktivno antitelo BAP048 je bilo konjugovano na MMAE sa linkerom mc-vc-PAB. Tri grupe doziranja su korišćene: 6 mg/kg svaka 4 dana tokom 4 doze, 10 mg/kg svake nedelje tokom 3 doze, i 10 mg/kg svaka 4 dana za 4 doze (SL. 15A). Korišćena su dva kontrolna sredstva : jedno je pomoćno farmaceutsko sredstvo bez antitela ili MMAE, drugo je bap 048 antitelo koj je bez konguvanih MME.
[0281] Primećeno je da je tumor postojano rastao kod dve kontrolne grupe. Rast zapremine tumora je usporen značajno uslogno aktivnih antitela BAP048-MMAE konjugata. Inhibicija rasta tumora je zavisila od doze, sa grupom sa najvišom dozom, 10 mg/kg svaka 4 dana tokom 4 doze. je pokazao najveće smanjenje rasta tumora (SL.15A).
[0282] Za mišji ksenograft indukovan pomoću MDA-MB-436, uslovno aktivno antitelo BAP048 bilo takođe konjugovano na MMAE sa linkerom mc-vc-PAB. Postojala je samo jedna grupa doziranja: 6 mg/kg svaka 4 dana tokom 4 doze, sa pomoćnim farmaceutskim sredstvom (nema antitela ili MMAE) kao kontrolnog sredstva (SL. 15B). Primećeno je da je tumor postojano rastao kod kontrolne grupe. Rast zapremine tumora je usporen značajno pomoću uslovno aktivnih konjugata BAP048-MMAE konjugata (FIG.15B).
4
1
2
4
1
2
4

Claims (12)

Patentni zahtevi
1. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela koji se specifično vezuje na Ror2 protein sa odnosom afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri vrednosti pH u tumoroznom mikrookruženju u poređenju sa drugačijom vrednošću pH koja nastaje u netumoroznom mikrookruženju od najmanje 1,5:1, pri čemu se
pH vrednost u mikrookruženju tumora kreće u opsezima od pH 5,8 do 6,8, i pH za netumorozno mikorookruženje se kreće u opsezima od pH vrednosti 7,0 do 7,6; i
a) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 18-22 i promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13-16; ili
b) promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 23 -26, i promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 17 i 27.
2. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za koji se zaštita patentom traži u patentnom zahtevu 1, pri čemu promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline: izabranu iz SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 21, i SEK ID BR: 22, promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 15, i SEK ID BR: 16.
3. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za koji se zaštita patentom traži u patentnom zahtevu 1, pri čemu promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline: izabranu iz SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 21, i SEK ID BR: 22, promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata sekvencu aminokiseline izabranu iz SEK ID BR: 15 i SEK ID BR: 16.
4. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za koji se zaštita patentom traži u patentnom zahtevu 1, pri čemu je antitelo ili fragment antitela izabrano iz sledećih antitela ili fragmenata antitela:
a) antitelo ili fragment antitela obuhvata promenljivi region teškog lanca (VH) iz SEK ID BR: 20, promenljivi region lakog lanca (VL) iz SEK ID BR: 15;
b) antitelo ili fragment antitela obuhvata promenljivi region teškog lanca (VH) iz SEK ID BR: 21, promenljivi region lakog lanca (VL) iz SEK ID BR: 16; antitelo ili fragment antitela obuhvata promenljivi region teškog lanca (VH) iz SEK ID BR: 22, promenljivi region lakog lanca (VL) iz SEK ID BR: 16.
5. Anti-Ror2 antitelo ili fragment antitela za koji se zaštita patentom traži u patentnom zahtevu 1, pri čemu promenljivi region teškog lanca (VH) obuhvata sekvencu aminokiseline: izabranu iz SEK ID BR: 21, i SEK ID BR: 22, promenljivi region lakog lanca (VL) obuhvata SEK ID BR: 16.
6. Antitelo ili fragment antitela iz bilo kog od patentnih zahteva 1-5, pri čemu antitelo ili fragment antitela ima odnos afiniteta vezivanja na Ror2 protein pri pH vrednosti za mikrookruženje tumora na afinitet vezivanja na Ror2 protein pri različitim pH vrednostima u mikrookruženju bez tumora od najmanje 2:1, najmanje 3:1, najmanje 4:1, najmanje 5:1, najmanje 6:1, najmanje 7:1, najmanje 8:1, najmanje 9:1, najmanje 10:1, najmanje 20:1, najmanje 30:1, najmanje 50:1, najmanje 70:1, ili najmanje 100:1.
7. Imunokonjugat obuhvata antitelo ili fragment antitela iz bilo kog od patentnih zahteva 1-6.
8. Imunokonjugat iz patentnog zahteva 7, pri čemu taj imunokonjugat obuhvata najmanje jedan agens izabran iz hemoterapijskog agensa, radioaktivnog atoma, citostatičkog agensa i citotoksičnog agensa.
9. Imunokonjugat iz patentnog zahteva 8, obuhvata najmanje dva pomenuta agensa.
10. Imunokonjugat iz bilo kog od patentnih zahteva 8-9,
pri čemu to antitelo ili fragment antitela i najmanje jedan agens jesu kovalentno vezani na linker molekul.
11. Imunokonjugat iz bilo kog od patentnih zahteva 8-10, pri čemu se najmanje jedan agens bira iz maitansinoida, auristatina, dolastatina, kaliheamicina, pirolobenzodiazepina, i antraciklina.
12. Farmaceutska supstanca koja obuhvata:
antitelo ili fragment antitela iz bilo kog od patentnih zahteva 1-6, ili imunokonjugat iz bilo kog od patentnih zahteva 7-11; i
farmaceutski prihvatljiv nosač.
RS20220999A 2016-05-13 2017-05-12 Anti-ror2 antitela, fragmenti antitela, njihovi imunokonjugati i njihove upotrebe RS63698B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662335719P 2016-05-13 2016-05-13
US201762447218P 2017-01-17 2017-01-17
PCT/US2017/032357 WO2017197234A1 (en) 2016-05-13 2017-05-12 Anti-ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
EP17796915.1A EP3455261B1 (en) 2016-05-13 2017-05-12 Anti-ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63698B1 true RS63698B1 (sr) 2022-11-30

Family

ID=60266840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220999A RS63698B1 (sr) 2016-05-13 2017-05-12 Anti-ror2 antitela, fragmenti antitela, njihovi imunokonjugati i njihove upotrebe

Country Status (22)

Country Link
US (4) US11254742B2 (sr)
EP (2) EP4122958A1 (sr)
JP (4) JP7051715B2 (sr)
KR (3) KR102713679B1 (sr)
CN (3) CN116731174A (sr)
AU (2) AU2017263568B2 (sr)
CA (1) CA3023979A1 (sr)
DK (1) DK3455261T3 (sr)
ES (1) ES2930255T3 (sr)
HR (1) HRP20221298T1 (sr)
HU (1) HUE060072T2 (sr)
IL (2) IL262404B2 (sr)
LT (1) LT3455261T (sr)
MX (2) MX394735B (sr)
PL (1) PL3455261T3 (sr)
PT (1) PT3455261T (sr)
RS (1) RS63698B1 (sr)
SG (1) SG11201808882QA (sr)
SI (1) SI3455261T1 (sr)
SM (1) SMT202200432T1 (sr)
TW (3) TWI844509B (sr)
WO (1) WO2017197234A1 (sr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11542332B2 (en) * 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
PL3455261T3 (pl) * 2016-05-13 2022-12-12 Bioatla, Inc. Przeciwciała anty-ror2, fragmenty przeciwciał, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
CA3035033A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Bioatla, Llc Conditionally active polypeptides and methods of generating them
CN111378039B (zh) 2018-12-29 2021-08-24 深圳大学 治疗恶性肿瘤的抗体及其应用
CN111378040B (zh) * 2018-12-29 2021-08-10 深圳大学 检测多种恶性肿瘤细胞的抗体及其应用
WO2020143506A1 (zh) * 2019-01-08 2020-07-16 深圳大学 检测多种恶性肿瘤细胞的抗体及其应用
KR20220113951A (ko) * 2019-11-18 2022-08-17 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 항-ror-2 항체 및 사용 방법
EP4482870A1 (en) * 2022-02-25 2025-01-01 BioAtla, Inc. Cancer treatment with a conditionally active anti-ror2 antibody-drug conjugate
WO2026011121A1 (en) * 2024-07-03 2026-01-08 Solve Therapeutics, Inc. Anti-ror2 antibody-drug conjugates

Family Cites Families (272)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1317821A (en) 1919-10-07 Electric switch
US1313946A (en) 1919-08-26 jenney
US1309428A (en) 1919-07-08 Grease-cot
US1307016A (en) 1919-06-17 Oil-cooling system foe
US1315929A (en) 1919-09-09 Wiliiiam h
US1322348A (en) 1919-11-18 Walter rosehhaiet md sydetey l
US1308268A (en) 1919-07-01 Planoorapii co
US1361650A (en) 1920-12-07 Joseph varin
US1308269A (en) 1919-07-01 I lanoqrapii co
US633410A (en) 1898-09-22 1899-09-19 George A Ames Ice-cutter.
US1362663A (en) 1914-04-17 1920-12-21 Us Light & Heat Corp Commutator
US1331598A (en) 1916-06-22 1920-02-24 Tibbetts George Wallace Banker's booklet
US1294757A (en) 1917-12-22 1919-02-18 Filippo Bentivegna Ash-sifter.
US1364866A (en) 1919-04-18 1921-01-11 Kirby Champeau Co Inc Illuminating means
US1450254A (en) 1919-09-26 1923-04-03 American Telephone & Telegraph Balancing arrangement for multiplex carrier circuits
US1371533A (en) 1920-10-28 1921-03-15 William J Wright Wrench-handle
US1424219A (en) 1921-07-06 1922-08-01 Firm Scintilla Wire-clamping terminal for low-voltage installations
US1737456A (en) 1927-12-30 1929-11-26 Sullivan Machinery Co Pressure-fluid motor
US1816567A (en) 1928-03-26 1931-07-28 Alemite Corp Grease gun coupling
US2087409A (en) 1933-03-02 1937-07-20 Woodstock Typewriter Co Key lever adjusting mechanism
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4704362A (en) 1977-11-08 1987-11-03 Genentech, Inc. Recombinant cloning vehicle microbial polypeptide expression
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5770701A (en) 1987-10-30 1998-06-23 American Cyanamid Company Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Acylhydrazone derivatives of anthracycline and methods for their preparation
US5700637A (en) 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
US6054270A (en) 1988-05-03 2000-04-25 Oxford Gene Technology Limited Analying polynucleotide sequences
WO1990005144A1 (en) 1988-11-11 1990-05-17 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
JP2752788B2 (ja) 1989-01-23 1998-05-18 カイロン コーポレイション 感染および過剰増殖障害の為の組換え療法
US5744101A (en) 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US5800992A (en) 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US5527681A (en) 1989-06-07 1996-06-18 Affymax Technologies N.V. Immobilized molecular synthesis of systematically substituted compounds
US5143854A (en) 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
AU648261B2 (en) 1989-08-18 1994-04-21 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
AU663725B2 (en) 1991-08-20 1995-10-19 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, The Adenovirus mediated transfer of genes to the gastrointestinal tract
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
FI941572L (fi) 1991-10-07 1994-05-27 Oncologix Inc Anti-erbB-2-monoklonaalisten vasta-aineiden yhdistelmä ja käyttömenetelmä
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5632957A (en) 1993-11-01 1997-05-27 Nanogen Molecular biological diagnostic systems including electrodes
WO1993010218A1 (en) 1991-11-14 1993-05-27 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Vectors including foreign genes and negative selective markers
GB9125623D0 (en) 1991-12-02 1992-01-29 Dynal As Cell modification
ATE503496T1 (de) 1992-02-06 2011-04-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Biosynthetisches bindeprotein für tumormarker
JPH05236997A (ja) 1992-02-28 1993-09-17 Hitachi Ltd ポリヌクレオチド捕捉用チップ
FR2688514A1 (fr) 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
US5427954A (en) 1992-04-29 1995-06-27 Shriner's Hospitals For Crippled Children Compositions and methods for detection and treatment of human osteoarthritis
WO1993025234A1 (en) 1992-06-08 1993-12-23 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for targeting specific tissue
JPH09507741A (ja) 1992-06-10 1997-08-12 アメリカ合衆国 ヒト血清による不活性化に耐性のあるベクター粒子
GB2269175A (en) 1992-07-31 1994-02-02 Imperial College Retroviral vectors
ATE139900T1 (de) 1992-11-13 1996-07-15 Idec Pharma Corp Therapeutische verwendung von chimerischen und markierten antikörper gegen menschlichen b lymphozyt beschränkter differenzierung antigen für die behandlung von b-zell-lymphoma
EP1024198A3 (en) 1992-12-03 2002-05-29 Genzyme Corporation Pseudo-adenoviral vectors for the gene therapy of haemophiliae
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
DE69434486T2 (de) 1993-06-24 2006-07-06 Advec Inc. Adenovirus vektoren für gentherapie
EP0731106B1 (en) 1993-10-01 2004-11-17 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Dolastatin derivatives
ATE314482T1 (de) 1993-10-25 2006-01-15 Canji Inc Rekombinante adenoviren-vektor und verfahren zur verwendung
US6045996A (en) 1993-10-26 2000-04-04 Affymetrix, Inc. Hybridization assays on oligonucleotide arrays
US6468742B2 (en) 1993-11-01 2002-10-22 Nanogen, Inc. Methods for determination of single nucleic acid polymorphisms using bioelectronic microchip
US5965452A (en) 1996-07-09 1999-10-12 Nanogen, Inc. Multiplexed active biologic array
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5807522A (en) 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US5556752A (en) 1994-10-24 1996-09-17 Affymetrix, Inc. Surface-bound, unimolecular, double-stranded DNA
US5830645A (en) 1994-12-09 1998-11-03 The Regents Of The University Of California Comparative fluorescence hybridization to nucleic acid arrays
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5959098A (en) 1996-04-17 1999-09-28 Affymetrix, Inc. Substrate preparation process
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US6022963A (en) 1995-12-15 2000-02-08 Affymetrix, Inc. Synthesis of oligonucleotide arrays using photocleavable protecting groups
SG83659A1 (en) 1996-01-10 2001-10-16 Kibun Shokuhin Kk Cylindrical food consisting of plurality of concentric cylindrical layers of food material and method and apparatus for making the same
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6013440A (en) 1996-03-11 2000-01-11 Affymetrix, Inc. Nucleic acid affinity columns
US6300065B1 (en) 1996-05-31 2001-10-09 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Yeast cell surface display of proteins and uses thereof
US6057100A (en) 1996-06-07 2000-05-02 Eos Biotechnology, Inc. Oligonucleotide arrays
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6826296B2 (en) 1997-07-25 2004-11-30 Affymetrix, Inc. Method and system for providing a probe array chip design database
AU8908198A (en) 1997-08-15 1999-03-08 Hyseq, Inc. Methods and compositions for detection or quantification of nucleic acid species
DE69833698T2 (de) 1997-09-11 2006-11-16 Bioventures, Inc., Murfreesboro Verfahren zur Herstellung von Arrays hoher Dichte
US6465178B2 (en) 1997-09-30 2002-10-15 Surmodics, Inc. Target molecule attachment to surfaces
WO1999022764A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
WO1999029888A1 (en) 1997-12-05 1999-06-17 The Scripps Research Institute Humanization of murine antibody
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
JP2002510505A (ja) 1998-04-03 2002-04-09 フィロス インク． 位置特定可能な蛋白質アレイ
PT1071700E (pt) 1998-04-20 2010-04-23 Glycart Biotechnology Ag Modificação por glicosilação de anticorpos para melhorar a citotoxicidade celular dependente de anticorpos
US6048695A (en) 1998-05-04 2000-04-11 Baylor College Of Medicine Chemically modified nucleic acids and methods for coupling nucleic acids to solid support
DE69907977T2 (de) 1998-08-27 2004-07-22 Spirogen Ltd., Ryde Pyrrolobenzodiazepine
US6277628B1 (en) 1998-10-02 2001-08-21 Incyte Genomics, Inc. Linear microarrays
US6277489B1 (en) 1998-12-04 2001-08-21 The Regents Of The University Of California Support for high performance affinity chromatography and other uses
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1141024B1 (en) 1999-01-15 2018-08-08 Genentech, Inc. POLYPEPTIDE COMPRISING A VARIANT HUMAN IgG1 Fc REGION
US20090130718A1 (en) 1999-02-04 2009-05-21 Diversa Corporation Gene site saturation mutagenesis
ES2601882T5 (es) 1999-04-09 2021-06-07 Kyowa Kirin Co Ltd Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional
US6221653B1 (en) 1999-04-27 2001-04-24 Agilent Technologies, Inc. Method of performing array-based hybridization assays using thermal inkjet deposition of sample fluids
US6653151B2 (en) 1999-07-30 2003-11-25 Large Scale Proteomics Corporation Dry deposition of materials for microarrays using matrix displacement
CA2388245C (en) 1999-10-19 2012-01-10 Tatsuya Ogawa The use of serum-free adapted rat cells for producing heterologous polypeptides
EP1106603A3 (en) 1999-12-06 2003-11-19 Fuji Photo Film Co., Ltd. DNA chip and reactive solid carrier
DK1242438T3 (da) 1999-12-29 2007-02-12 Immunogen Inc Cytotoksiske midler omfattende modificerede doxorubiciner og daunorubiciner og deres terapeutiske anvendelse
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
ES2302726T3 (es) 2000-02-24 2008-08-01 Invitrogen Corporation Estimulacion y concentracion simultanea de celulas.
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6908744B1 (en) 2000-03-14 2005-06-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of stimulating cartilage formation
DK2857516T3 (en) 2000-04-11 2017-08-07 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses thereof
JP3924113B2 (ja) 2000-05-15 2007-06-06 株式会社日立グローバルストレージテクノロジーズ 複数のヘッドサスペンションアッセンブリを有するヘッドキャリッジアッセンブリ及びこれを用いた磁気ディスク装置
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
HU231090B1 (hu) 2000-10-06 2020-07-28 Kyowa Kirin Co., Ltd. Antitest-kompozíciót termelő sejt
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED ANTIBODY-DEPENDENT CELLULAR CYTOTOXICITY
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
HUP0600342A3 (en) 2001-10-25 2011-03-28 Genentech Inc Glycoprotein compositions
US20050123536A1 (en) 2001-11-20 2005-06-09 Che-Leung Law Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
CN102911987B (zh) 2002-04-09 2015-09-30 协和发酵麒麟株式会社 基因组被修饰的细胞
CA2481656A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells in which activity of the protein involved in transportation of gdp-fucose is reduced or lost
CA2481837A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Production process for antibody composition
WO2003084569A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Drug containing antibody composition
WO2003085119A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. METHOD OF ENHANCING ACTIVITY OF ANTIBODY COMPOSITION OF BINDING TO FcϜ RECEPTOR IIIa
US20050276812A1 (en) 2004-06-01 2005-12-15 Genentech, Inc. Antibody-drug conjugates and methods
EP1382969A1 (en) 2002-07-17 2004-01-21 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Diagnosis and prevention of cancer cell invasion
EP2353611B1 (en) 2002-07-31 2015-05-13 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
ATE499116T1 (de) 2002-08-16 2011-03-15 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
DK2289936T3 (en) 2002-12-16 2017-07-31 Genentech Inc IMMUNGLOBULIN VARIATIONS AND APPLICATIONS THEREOF
JP4148883B2 (ja) 2002-12-18 2008-09-10 株式会社パイオラックス グローブボックス用リッドロック装置
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
DE60326060D1 (de) 2003-03-31 2009-03-19 Council Scient Ind Res Nichtvernetzende pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepine als potentielle antitumor-agentien und ihre herstellung
US7755007B2 (en) 2003-04-17 2010-07-13 K&H Manufacturing, Inc Heated pet mat
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
WO2005035778A1 (ja) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. α1,6-フコシルトランスフェラーゼの機能を抑制するRNAを用いた抗体組成物の製造法
ATE516288T1 (de) 2003-10-22 2011-07-15 Us Gov Health & Human Serv Pyrrolobenzodiazepinderivate, zusammensetzungen, die diese enthalten, und damit in zusammenhang stehende verfahren
DK2380910T3 (en) 2003-11-05 2015-10-19 Roche Glycart Ag Antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
CA2556752C (en) 2004-02-23 2016-02-02 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US7528126B2 (en) 2004-03-09 2009-05-05 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
US20050260711A1 (en) 2004-03-30 2005-11-24 Deepshikha Datta Modulating pH-sensitive binding using non-natural amino acids
MXPA06011199A (es) 2004-03-31 2007-04-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados.
PL1737891T3 (pl) 2004-04-13 2013-08-30 Hoffmann La Roche Przeciwciała przeciw selektynie p
EP1791569A4 (en) 2004-08-23 2009-12-16 Univ Emory Improved selection of-ph dependent compounds for in vivo therapy
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
NZ553500A (en) 2004-09-23 2009-11-27 Genentech Inc Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates withCysteine engineered antibodies and conjugates with a free cysteine amino acid in the heavy chain a free cysteine amino acid in the heavy chain
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
EP3498289A1 (en) 2005-07-07 2019-06-19 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
AU2006304387A1 (en) 2005-10-14 2007-04-26 Medimmune, Llc Cell display of antibody libraries
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
PE20071309A1 (es) * 2006-02-17 2008-02-13 Wyeth Corp Anticuerpos para la modulacion de formacion de huesos
US7624657B2 (en) 2006-07-12 2009-12-01 Thermotion Corporation Motor-driven actuator
WO2008010101A2 (en) 2006-07-18 2008-01-24 Sanofi-Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
US20100255004A1 (en) * 2007-04-13 2010-10-07 Dana Farber Cancer Institute Receptor tyrosine kinase profiling
PT2019104E (pt) 2007-07-19 2013-12-03 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica
WO2009059235A2 (en) 2007-11-01 2009-05-07 Facet Biotech Corporation Immunoglobulin display vectors
CN101939336B (zh) 2007-11-12 2014-05-14 U3制药有限公司 Axl抗体
KR101568051B1 (ko) 2007-11-15 2015-11-10 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 Ａｎｅｘｅｌｅｋｔｏ에 결합하는 단일클론항체, 및 그의 이용
SI2235064T1 (sl) 2008-01-07 2016-04-29 Amgen Inc. Metoda za izdelavo heterodimernih molekul - protitelesa fc z uporabo elektrostatičnih usmerjevalnih učinkov
US8742076B2 (en) 2008-02-01 2014-06-03 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
ES2532635T3 (es) 2008-07-15 2015-03-30 Genentech, Inc. Conjugados de antraciclina, proceso para su preparación y su uso como compuestos antitumorales
PL3006459T3 (pl) 2008-08-26 2022-01-17 City Of Hope Sposób i kompozycje dla wzmocnionego działania efektorowego komórek t przeciw guzowi nowotworowemu
EP4331604B9 (en) 2008-12-09 2025-07-23 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
US20100260739A1 (en) 2009-03-09 2010-10-14 Bioatla, Llc Mirac Proteins
DK2451844T3 (en) 2009-07-10 2015-07-27 Innate Pharma Tlr3-retention agents
EP3156485B1 (en) 2009-07-17 2018-09-12 Bioatla, LLC Simultaneous, integrated selection and evolution of antibody/protein performance and expression in production hosts
WO2011014457A1 (en) 2009-07-27 2011-02-03 Genentech, Inc. Combination treatments
FR2953841B1 (fr) 2009-12-16 2011-12-30 Centre Nat Rech Scient Anticorps diriges contre le recepteur de la transferrine et leurs utilisations pour l'immunotherapie des tumeurs qui dependent du fer
WO2011109726A2 (en) 2010-03-05 2011-09-09 Bioatla Llc Homologous multi-specific antibodies
MA34277B1 (fr) 2010-04-15 2013-06-01 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazépines et conjugués de celles-ci
FI20105715A0 (fi) 2010-06-18 2010-06-18 Helsingin Yliopisto Asetyloituun HMGB1:een sitoutuva polyklonaalinen vasta-aine
BR112012027995A2 (pt) 2010-06-18 2017-01-10 Genentech Inc anticorpo e ácido nucleíco isolado, célula hospedeira, método de produção de um anticorpo, imunoconjugado, formulação farmacêutica, uso do anticorpo, método de tratamento de um indivíduo com câncer, de um indivíduo possuíndo um distúrbio imune, de inibição da angiogênese e para inibir a ativação constitutiva de axl
MX349622B (es) 2010-09-08 2017-08-07 Halozyme Inc Metodos para evaluar e identificar o evolucionar proteinas terapeuticas condicionalmente activas.
ES2602743T3 (es) 2010-09-08 2017-02-22 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Receptores de antígenos quiméricos con una región bisagra optimizada
WO2012044831A1 (en) 2010-09-30 2012-04-05 Board Of Trustees Of Northern Illinois University Library-based methods and compositions for introducing molecular switch functionality into protein affinity reagents
EA034333B1 (ru) 2010-11-30 2020-01-29 Дженентек, Инк. Варианты антитела для переноса соединения через гематоэнцефалический барьер
KR20140004174A (ko) 2011-01-18 2014-01-10 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 암 치료를 위한 조성물 및 방법
GB201108236D0 (en) 2011-05-17 2011-06-29 Ucl Business Plc Method
ES2795023T3 (es) 2011-09-16 2020-11-20 Baylor College Medicine Reconocimiento específico del microambiente tumoral mediante el uso de células NKT manipuladas
CN107287660A (zh) 2011-09-30 2017-10-24 中外制药株式会社 离子浓度依赖性结合分子文库
WO2013103637A1 (en) * 2012-01-03 2013-07-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Analysis and targeting of ror2 in cancer
JP6850528B2 (ja) 2012-02-13 2021-03-31 シアトル チルドレンズ ホスピタル ドゥーイング ビジネス アズ シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート 二重特異性キメラ抗原受容体およびその治療的使用
ES2959443T3 (es) 2012-02-22 2024-02-26 Univ Pennsylvania Uso del dominio de señalización de CD2 en receptores de antígenos quiméricos de segunda generación
EP4230647A1 (en) 2012-02-22 2023-08-23 The Trustees of the University of Pennsylvania Use of icos-based cars to enhance antitumor activity and car persistence
MX2014010750A (es) 2012-03-08 2015-02-05 Halozyme Inc Anticuerpos receptores del factor de crecimiento anti-epidermico condicionalmente activos y metodos de uso de los mismos.
US9511152B2 (en) 2012-04-05 2016-12-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Multicolored pH-activatable fluorescence nanoplatform
US20130280220A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Nabil Ahmed Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes
MX2019001355A (es) 2012-05-10 2023-01-17 Bioatla Llc Anticuerpos monoclonales multiespecíficos.
EP2872617A4 (en) 2012-07-13 2015-12-09 Univ Pennsylvania EPITOP SPREADING IN CONNECTION WITH CAR T CELLS
KR102134088B1 (ko) 2012-08-24 2020-07-14 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 Ror1 암을 치료하고 전이를 저해하는데 이용을 위한 항체와 백신
BR112015004522A2 (pt) 2012-09-04 2017-11-21 Cellectis receptor de antígeno quimérico multicadeia e usos destes
KR102332790B1 (ko) 2013-02-15 2021-12-01 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 키메라 항원 수용체 및 이의 이용 방법
KR102685501B1 (ko) 2013-02-20 2024-07-17 노파르티스 아게 인간화 항-EGFRvIII 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
EP3299391B1 (en) 2013-03-14 2019-12-04 Genentech, Inc. Anti-b7-h4 antibodies and immunoconjugates
US20160229918A1 (en) 2013-07-11 2016-08-11 Benovus Bio, Inc. Tumor selective antibodies specific to oncofetal antigen/immature laminin receptor protein
CN105940102B (zh) 2013-08-26 2020-02-18 海瑞克·亚柏坎 抗cd30嵌合抗原受体及其用途
HK1226081A1 (zh) 2013-09-12 2017-09-22 Halozyme, Inc. 修饰的抗表皮生长因子受体抗体及其使用方法
GB201402631D0 (en) 2014-02-14 2014-04-02 Alligator Bioscience Ab Library
MX2017002605A (es) 2014-08-28 2017-05-19 Bioatla Llc Receptores de antigeno quimerico condicionalmente activos para celulas t modificadas.
US11111288B2 (en) 2014-08-28 2021-09-07 Bioatla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
CA2959786A1 (en) 2014-09-03 2016-03-10 Bioatla, Llc Discovering and producing conditionally active biologic proteins in the same eukaryotic cell production hosts
SG11201705988UA (en) * 2015-02-24 2017-08-30 Bioatla Llc Conditionally active biological proteins
MX395074B (es) 2016-04-15 2025-03-24 Bioatla Llc Anticuerpos anti-axl, fragmentos de anticuerpos y sus inmunoconjugados y usos de los mismos
PL3455261T3 (pl) * 2016-05-13 2022-12-12 Bioatla, Inc. Przeciwciała anty-ror2, fragmenty przeciwciał, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
CA3035033A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Bioatla, Llc Conditionally active polypeptides and methods of generating them
AU2018211081B2 (en) * 2017-01-18 2025-01-02 Bioatla, Inc. Chimeric antigen receptors against Axl or Ror2 and methods of use thereof

Also Published As

Publication number Publication date
AU2017263568B2 (en) 2024-01-18
MX394735B (es) 2025-03-24
JP2019524640A (ja) 2019-09-05
TWI851939B (zh) 2024-08-11
EP4122958A1 (en) 2023-01-25
TW202434312A (zh) 2024-09-01
AU2023285905A1 (en) 2024-02-15
WO2017197234A1 (en) 2017-11-16
KR20240148936A (ko) 2024-10-11
US20200002414A1 (en) 2020-01-02
KR102713679B1 (ko) 2024-10-04
SI3455261T1 (sl) 2023-01-31
US12311032B2 (en) 2025-05-27
LT3455261T (lt) 2022-11-10
EP3455261A1 (en) 2019-03-20
SMT202200432T1 (it) 2022-11-18
US11879011B2 (en) 2024-01-23
CN116751298A (zh) 2023-09-15
US20220169727A1 (en) 2022-06-02
CA3023979A1 (en) 2017-11-16
KR20230044567A (ko) 2023-04-04
HUE060072T2 (hu) 2023-01-28
IL262404A (en) 2018-12-31
JP2022101573A (ja) 2022-07-06
HRP20221298T1 (hr) 2022-12-23
KR20180137517A (ko) 2018-12-27
MX2018013306A (es) 2019-01-30
IL262404B1 (en) 2023-12-01
ES2930255T3 (es) 2022-12-09
PL3455261T3 (pl) 2022-12-12
TWI844509B (zh) 2024-06-11
DK3455261T3 (da) 2022-10-31
JP2025163090A (ja) 2025-10-28
JP7051715B2 (ja) 2022-04-11
IL308504A (en) 2024-01-01
US20240092901A1 (en) 2024-03-21
EP3455261A4 (en) 2019-05-08
EP3455261B1 (en) 2022-08-03
CN109311987A (zh) 2019-02-05
IL262404B2 (en) 2024-04-01
JP7432253B2 (ja) 2024-02-16
CN116731174A (zh) 2023-09-12
AU2017263568A1 (en) 2018-10-25
JP2024023331A (ja) 2024-02-21
US20250170264A1 (en) 2025-05-29
MX2022009915A (es) 2022-09-09
TW202208441A (zh) 2022-03-01
PT3455261T (pt) 2022-11-11
SG11201808882QA (en) 2018-11-29
US11254742B2 (en) 2022-02-22
TW201805307A (zh) 2018-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7759130B2 (ja) 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートならびにそれらの使用
JP7664660B2 (ja) 抗ｃｔｌａ４抗体、抗体断片、それらの免疫コンジュゲートおよびそれらの使用
US12311032B2 (en) Anti-Ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
HK40089824A (en) Anti-ror2 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
JP2026017554A (ja) 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートならびにそれらの使用
WO2023164618A1 (en) Cancer treatment with a conditionally active anti-ror2 antibody-drug conjugate