[go: up one dir, main page]

RS63502B1 - Konjugati pirolobenzodiazepina - Google Patents

Konjugati pirolobenzodiazepina

Info

Publication number
RS63502B1
RS63502B1 RS20220775A RSP20220775A RS63502B1 RS 63502 B1 RS63502 B1 RS 63502B1 RS 20220775 A RS20220775 A RS 20220775A RS P20220775 A RSP20220775 A RS P20220775A RS 63502 B1 RS63502 B1 RS 63502B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
genbank
group
antibody
seq
data update
Prior art date
Application number
RS20220775A
Other languages
English (en)
Inventor
Philip Wilson Howard
Stephen John Gregson
Original Assignee
Medimmune Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1706133.4A external-priority patent/GB201706133D0/en
Priority claimed from GBGB1721337.2A external-priority patent/GB201721337D0/en
Application filed by Medimmune Ltd filed Critical Medimmune Ltd
Publication of RS63502B1 publication Critical patent/RS63502B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na konjugate koji sadrže pirolobenzodiazepine i srodne dimere (PBDs), i prekursore vezničke lekove koji se koriste za pravljenje takvih konjugata.
Stanje tehnike
[0002] Neki pirolobenzodiazepini (PBD) imaju sposobnost da prepoznaju i vežu se za specifične sekvence DNK; poželjna sekvenca je PuGPu. Prvi PBD antitumorski antibiotik, antramicin, otkriven je 1965. godine (Leimgruber, i dr., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, i dr., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Od tada je prijavljen veliki broj PBD koji se pojavljuju u prirodi, a razvijeno je preko 10 sintetičkih puteva do raznih analoga. (Thurston, i dr., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994)). Članovi porodice uključuju abeimicin (Hochlowski, i dr., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), čikamicin (Konishi, i dr., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (Japanese Patent 58-180487; Thurston, i dr., Chem. Brit., 26, 767-772 (1990); Bose, i dr., Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicin (Kuminoto, i dr., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neotramicini A i B (Takeuchi, i dr., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicin (Tsunakawa, i dr., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protrakarcin (Shimizu, i dr, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982); Langley and Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicin (DC-102)(Hara, i dr., J. Antibiotics, 41, 702-704 (1988); Itoh, i dr., J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988)), sibiromicin (Leber, i dr., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) i tomamicin (Arima, i dr., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). PBD su opšte strukture:
[0003] Razlikuju se po broju, vrsti i položaju supstituenata, i po svojim aromatičnim A prstenovima i pirolo C prstenovima, i po stepenu zasićenosti C prstena. U B-prstenu postoji ili imin (N=C), karbinolamin (NH-CH(OH)) ili karbinolamin metil etar (NH-CH(OMe))ram na poziciji N10-C11 koji je elektrofilni centar odgovoran za alkilovanje DNK. Svi poznati prirodni proizvodi imaju (S)-konfiguraciju na hiralnoj poziciji C11a koja im obezbeđuje zaokret udesno kada se posmatra od C prstena prema A prstenu. Ovo im daje odgovarajući trodimenzionalni oblik za izoheličnost sa manjim žlebom DNK oblika B, što dovodi do čvrstog prianjanja na mestu vezivanja (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, str.3-11 (1975); Hurley and Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 230-237 (1986)). Njihova sposobnost da formiraju adukt u malom žlebu omogućava im da ometaju procesiranje DNK, pa se stoga koriste kao antitumorska sredstva.
[0004] Ranije je obelodanjeno da biološka aktivnost ovih molekula može biti potencirana spajanjem dve PBD jedinice zajedno preko njihovih C8/C'-hidroksil funkcionalnosti preko fleksibilnog alkilenskog veznika (Bose, D.S., i dr., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, D.E., et a/., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)). Smatra se da PBD dimeri formiraju lezije DNK selektivne na sekvence kao što je palindromska 5'-Pu-GATC-Py-3' međulančana unakrsna veza (Smellie, M., i dr., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., i dr., Biochemistry, 44, 4135-4147) za koju se smatra da je uglavnom odgovorna za njihovu biološku aktivnost.
[0005] Prvi dimeri (Bose, D.S., i dr., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992)) su bili opšte formule:
gde je n od 3 do 6. Jedinjenja gde je n bilo 3 i 5 pokazala su obećavajuću citotoksičnost in vitro. Međutim, kada je proučavana antitumorska aktivnost n=3 jedinjenja (Walton, M., i dr., Cancer Chemother Pharmacol (1996) 38: 431. doi:10,1007/s002800050507), pokazalo se da ovo nije obećavajuće. Smatralo se da je ovaj nedostatak obećanja „posledica niske selektivnosti tumora i uzimanja leka kao rezultat visokog vezivanja za proteine i/ili ekstenzivnog metabolizma leka in vivo”.
[0006] U cilju poboljšanja ovih jedinjenja, jedinjenja su istraživana (Gregson, S.J., i dr., Chem. Commun., 1999, 797-798. doi: 10,1039/A809791G) sa „uključivanjem C2/C2' supstituenata koji treba da prate konturu manjeg žleba domaćina“. Ovo jedinjenje SG2000 (SJG-136):
otkriveno je da ima "izuzetnu citotoksičnost u pikomolarnom regionu... nekih 9000 puta jače od DSB-120."
[0007] Ovo jedinjenje (takođe diskutovano u Gregson, S., i dr., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C., i dr., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); i Hartley, J.A., i dr., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)) je bio uključen u klinička ispitivanja kao samostalno sredstvo, na primer, NCT02034227 istražuje njegovu upotrebu u lečenju akutne mijeloidne leukemije i hronične limfocitne leukemije (videti: https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02034227).
[0008] Dimerna PBD jedinjenja koja nose C2 aril supstituente pored endo-nezasićenosti, kao što je SG2202 (ZC-207), obelodanjena su u WO 2005/085251:
i u WO2006/111759, bisulfiti takvih PBD jedinjenja, na primer SG2285 (ZC-423):
[0009] Pokazalo se da su ova jedinjenja veoma korisna citotoksična sredstva (Howard, P.W., i dr., Bioorg. Med. Chem. (2009), doi: 10,1016/j.bmcl,2009,09,012).
[0010] U pregledu PBD koji sadrži ADC (Mantaj, J., i dr., Angew. Chem. Int. Ed. (2016), 55, 2-29; DOI: 10,1002/anie,201510610), razmatra se SAR PBD dimera. Rezime SAR-a je predstavljen na Slici 3 – B „C2-egzo i C1-C2/C2-C3 nezasićenost povećava aktivnost“. Detaljnija diskusija se nalazi u odeljku 2,4 koji kaže: „DSB-120 ima slabu aktivnost in vivo, što se delimično pripisuje njegovoj visokoj reaktivnosti sa ćelijskim molekulima koji sadrže tiol, kao što je glutation. Međutim, uvođenje C2/C2'-egzo nezasićenosti kao u SJG-136 dovelo je do ukupnog povećanja afiniteta vezivanja DNK i citotoksičnosti, i niže reaktivnosti prema ćelijskim nukleofilima sa više sredstava koji potencijalno dostiže svoju ciljnu DNK.
[0011] WO 2007/085930 opisuje dobijanje dimer PBD jedinjenja koja imaju linker grupe za povezivanje sa sredstvom za vezivanje ćelije, kao što je antitelo. Veznik je prisutan u mostu koji povezuje monomerne PBD jedinice dimera.
[0012] Dimer PBD jedinjenja koja imaju vezničke grupe za povezivanje sa sredstvom za vezivanje ćelije, kao što je antitelo, opisana su u WO 2011/130598. Veznik u ovim jedinjenjima je vezan za jednu od dostupnih pozicija N10, i generalno se cepa delovanjem enzima na veznu grupu. Dimer PBD jedinjenja imaju ili endo ili egzo nezasićenost u C-prstenu.
[0013] WO 2014/057074 i WO 2015/052322 opisuju specifične konjugate PBD dimera vezane preko N10 položaja na jednom monomeru, a sva ova jedinjenja imaju endo nezasićenost u C-prstenu.
[0014] WO2014/096365 obelodanjuje jedinjenje:
gde je nedostatak nezasićenosti u C-prstenu spojen sa B-prstenom koji je dilaktam i stoga nema sposobnost da kovalentno vezuje DNK.
[0015] WO 2016/044560 se odnosi na PBD, posebno na pirolobenzodiazepine koji imaju labilnu N10 zaštitnu grupu, pogodnu da formiraju veznik za sredstvo za vezivanje ćelije i na određene konjugate napravljene od ovih PBD.
Obelodanjenje prema pronalasku
[0016] Predmetni pronalazak obezbeđuje PBD dimerne veznike i konjugate lekova gde nijedan C-prsten nema endo- ili egzo-nezasićenost.
[0017] Prvi aspekt predmetnog pronalaska obuhvata jedinjenje sa formulom I:
i njihove soli i solvati, pri čemu:
R<6>i R<9>nezavisno odabrani iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa;
R<7>je nezavisno odabran iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo;
gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa;
Y i Y' su izabrani između O, S ili NH;
R<6'>, R<7'>, R<9'>su izabrani iz iste grupe kao i R<6>, R<7>i R<9>respektivno;
R<11b>je izabran iz OH, OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil; i
R<L>je veznik za vezivanje sa sredstvom za vezivanje ćelije, koji se bira između: (iiia):
gde
Q je:
gde je Q<X>takav da je Q aminokiselinski ostatak, dipeptidni ostatak ili tripeptidni ostatak; X je:
gde a = 0 do 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5; G<L>je veznik za vezivanje sa ligandnom jedinicom; i (iiib):
,
gde su R<L1>i R<L2>nezavisno izabrani između H i metila, ili zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilen ili ciklobutilen grupu; i e je 0 ili 1; bilo
(a) R<20>je H, i R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil; ili
(b) R<20>i R<21>formiraju dvostruku vezu azot-ugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezani; ili
(c) R<20>je H i R<21>je SOzM, gde je z 2 ili 3 i M je monovalentni farmaceutski prihvatljiv katjon; ili
(d) R<20>je H i R<21>je H; ili
(e) R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil i R<20>izabran iz:
, gde je R<Z>izabran iz:
(z-ii) OC(=O)CH3;
(z-iii) NO2;
(z-iv) OMe;
(z-v) glukuronid;
(z-vi) -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-R<ZC>, gde -C(=O)-X1-NH- i -C(=O)-X2-NH- predstavljaju prirodne aminokiselinske ostatke i R<ZC>se bira između Me, OMe, OCH2CH2OMe.
[0018] Utvrđeno je da takvi veznici lekova prolaze kroz gotovu konjugaciju sa ligandnim jedinicama kao što su antitela.
[0019] Drugi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje konjugate formule II:
L - (D<L>)p(II)
gde je L jedinica liganda (tj., sredstvo za ciljanje), D<L>je veznik jedinice leka formule I':
gde su R<6>, R<7>, R<9>, R<11b>, Y, R", Y', R<6'>, R<7'>, R<9'>, R<20>i R<21>kao što je definisano u prvom aspektu pronalaska; R<LL>je veznik za povezivanje sa vezujućim sredstvom ćelije, koji se bira između: (iiia):
gde su Q i X kao što je definisano u prvom aspektu i G<LL>je veznik povezan sa ligandnom jedinicom; i (iiib):
gde su R<L1>i R<L2>kao što je definisano u prvom aspektu;
pri čemu je p ceo broj od 1 do 20.
[0020] Ligand jedinica, koja je detaljnije opisana u nastavku, je sredstvo za ciljanje koje se vezuje za ciljni deo. Ligand jedinica može, na primer, da se specifično veže za ćelijsku komponentu (sredstvo za vezivanje ćelije) ili za druge ciljne molekule od interesa. Jedinica liganda može biti, na primer, protein, polipeptid ili peptid, kao što je antitelo, fragment antitela koji se vezuje za antigen, ili drugo vezivno sredstvo, kao što je Fc fuzioni protein.
[0021] Utvrđeno je da ovi konjugati poseduju visoku toleranciju što dovodi do visokog terapijskog indeksa, što ih čini obećavajućim kandidatima za klinički razvoj.
[0022] Treći aspekt obezbeđuje konjugat drugog aspekta pronalaska za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti.
[0023] Stručnjak u ovoj oblasti lako je u stanju da odredi da li ili ne kandidatski konjugat tretira proliferativno stanje za bilo koji određeni tip ćelije. Na primer, testovi koji se mogu prikladno koristiti za procenu aktivnosti koju nudi određeno jedinjenje opisani su u primerima ispod.
Definicije
Supstituenti
[0024] Termin "opciono supstituisan" kako se ovde koristi, odnosi se na roditeljsku grupu koja može biti nesupstituisana ili koja može biti supstituisana.
[0025] Osim ako nije drugačije naznačeno, termin "supstituisan" kako se ovde koristi, odnosi se na roditeljsku grupu koja nosi jedan ili više supstituenata. Termin "supstituent" se ovde koristi u konvencionalnom smislu i odnosi se na hemijski deo koji je kovalentno vezan za roditeljsku grupu, ili ako je prikladno, fuzionisan za roditeljsku grupu. Širok spektar supstituenata je dobro poznat, a takođe su dobro poznati postupci za njihovo formiranje i uvođenje u različite roditeljske grupe.
[0026] Primeri supstituenata su detaljnije opisani u nastavku.
[0027] C1-12alkil: Termin "C1-12alkil" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma ugljenika ugljovodonične jedinjenja koja ima od 1 do 12 atoma ugljenika, koji može biti alifatičan ili alicikličan, i koji može biti zasićeni ili nezasićeni (npr. delimično nezasićeni, potpuno nezasićeni). Termin "C1-4alkil" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma ugljenika ugljovodonične jedinjenja koja ima od 1 do 4 atoma ugljenika, koji može biti alifatičan ili alicikličan, i koji može biti zasićeni ili nezasićeni (npr. delimično nezasićeni, potpuno nezasićeni). Dakle, termin "alkil" uključuje podklase alkenil, alkinil, cikloalkil, itd., o kojima se govori u nastavku.
[0028] Primeri zasićenih alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), propil (C3), butil (C4), pentil (C5), heksil (C6) i heptil (C7).
[0029] Primeri zasićenih linearnih alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), n-propil (C3), n-butil (C4), n-pentil (amil) (C5), n-heksil (C6) i n-heptil (C7).
[0030] Primeri zasićenih razgranatih alkil grupa uključuju izo-propil (C3), izo-butil (C4), sec-butil (C4), tercbutil (C4), izo-pentil (C5), i neo-pentil (C5).
[0031] C2-12Alkenil: Termin "C2-12alkenil" kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više dvostrukih veza ugljenik-ugljenik.
[0032] Primeri nezasićenih alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil (vinil, - CH=CH2), 1-propenil (-CH=CH-CH3), 2-propenil (alil, -CH-CH=CH2), izopropenil (1-metilvinil, -C(CH3)=CH2), butenil (C4), pentenil (C5), i heksenil (C6).
[0033] C2-12alkinil: Termin "C2-12alkinil" kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu koja ima jednu ili više trostrukih veza ugljenik-ugljenik.
[0034] Primeri nezasićenih alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil (-C≡CH) i 2-propinil (propargil, -CH2-C≡CH).
[0035] C3-12cikloalkil: Termin "C3-12cikloalkil" kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu koja je takođe ciklil grupa; to jest, monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa alicikličnog atoma u prstenu cikličnog ugljovodoničkog (karbocikličnog) jedinjenja, koji deo ima od 3 do 7 atoma ugljenika, uključujući od 3 do 7 atoma u prstenu.
[0036] Primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz:
zasićena monociklična ugljovodonična jedinjenja:
ciklopropan (C3), ciklobutan (C4), ciklopentan (C5), cikloheksan (C6), cikloheptan (C7), metilciklopropan (C4), dimetilciklopropan (C5), metilciklobutan (C5), dimetilciklobutan (C6), metilciklopentan (C6), dimetilciklopentan (C7) i metilcikloheksan (C7);
nezasićena monociklična ugljovodonična jedinjenja:
ciklopropen (C3), ciklobuten (C4), ciklopenten (C5), cikloheksen (C6), metilciklopropen (C4), dimetilciklopropen (C5), metilciklobuten (C5), dimetilciklobuten (C6), metilciklopenten (C6), dimetilciklopenten i metilcikloheksen (C7); i
zasićena policiklična ugljovodonična jedinjenja:
norkaran (C7), norpinan (C7), norbornan (C7).
[0037] C3-20heterociklil: Termin "C3-20heterociklil" kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma u prstenu heterocikličnog jedinjenja, koji deo ima od 3 do 20 atoma u prstenu, od kojih je od 1 do 10 prstena. heteroatomi. Poželjno, svaki prsten ima od 3 do 7 atoma u prstenu, od kojih su od 1 do 4 heteroatomi u prstenu.
[0038] U ovom kontekstu, prefiksi (npr. C3-20, C3-7, C5-6, itd.) označavaju broj atoma u prstenu, ili opseg broja atoma u prstenu, bilo da su atomi ugljenika ili heteroatomi. Na primer, termin "C5-6heterociklil", kako se ovde koristi, odnosi se na heterociklil grupu koja ima 5 ili 6 atoma u prstenu.
[0039] Primeri monocikličnih heterociklil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz:
N1: aziridin (C3), azetidin (C4), pirolidin (tetrahidropirol) (C5), pirolin (npr., 3-pirolin, 2,5-dihidropirol) (C5), 2H-pirolin ili 3H-pirolin (izopirolin, izoazol) (C5), piperidin (C6), dihidropiridin (C6), tetrahidropiridin (C6), azepin (C7);
O1: oksiran (C3), oksetan (C4), oksolan (tetrahidrofuran) (C5), oksol (dihidrofuran) (C5), oksan (tetrahidropiran) (C6), dihidropiran (C6), piran (C6), oksepin (C7);
S1: tiiran (C3), tietan (C4), tiolan (tetrahidrotiofen) (C5), tian (tetrahidrotiopiran) (C6), tiepan (C7); O2: dioksolan (C5), dioksan (C6), i dioksepan (C7);
O3: trioksan (C6);
N2: imidazolidin (C5), pirazolidin (diazolidin) (C5), imidazolin (C5), pirazolin (dihidropirazol) (C5), piperazin (C6);
N1O1: tetrahidrooksazol (C5), dihidrooksazol (C5), tetrahidroizoksazol (C5), dihidroizoksazol (C5), morfolin (C6), tetrahidrooksazin (C6), dihidrooksazin (C6), oksazin (C6);
N1S1: tiazolin (C5), tiazolidin (C5), tiomorfolin (C6);
N2O1: oksadiazin (C6);
O1S1: oksatiol (C5) i oksatian (tioksan) (C6); i,
N1O1S1: oksatiazin (C6).
[0040] Primeri supstituisanih monocikličnih heterociklil grupa uključuju one izvedene iz saharida, u cikličnom obliku, na primer, furanoze (C5), kao što su arabinofuranoza, liksofuranoza, ribofuranoza i ksilofuranoza, i piranoze (C6), kao što su alopiranoza, alkopiranoza, glukopiranoza, manopiranoza, gulopiranoza, idopiranoza, galaktopiranoza i talopiranoza.
[0041] C5-20aril: Termin "C5-20aril", kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma aromatičnog prstena aromatičnog jedinjenja, koji deo ima od 3 do 20 atoma u prstenu. Termin "C5-7aril", kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma aromatičnog prstena aromatičnog jedinjenja, koji deo ima od 5 do 7 atoma u prstenu i termin "C5-10aril", kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika sa atoma aromatičnog prstena aromatičnog jedinjenja, koji deo ima od 5 do 10 atoma u prstenu. Poželjno, svaki prsten ima od 5 do 7 atoma u prstenu.
[0042] U ovom kontekstu, prefiksi (npr. C3-20, C5-7, C5-6, C5-10itd.) označavaju broj atoma u prstenu, ili opseg broja atoma u prstenu, bilo da su atomi ugljenika ili heteroatomi. Na primer, termin "C5-6aril", kako se ovde koristi, odnosi se na arilnu grupu koja ima 5 ili 6 atoma u prstenu.
[0043] Atomi u prstenu mogu biti svi atomi ugljenika, kao u "karboaril grupama".
[0044] Primeri karboaril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz benzena (tj. fenila) (C6), naftalena (C10), azulena (C10), antracena (C14), fenantrena (C14), naftacena (C18) i piren (C16).
[0045] Primeri aril grupa koje sadrže spojene prstenove, od kojih je najmanje jedan aromatični prsten, uključuju, ali nisu ograničeni na, grupe izvedene iz indana (npr. 2,3-dihidro-1H-indena) (C9), indena (C9), izoinden (C9), tetralin (1,2,3,4-tetrahidronaftalen (C10), acenaften (C12), fluoren (C13), fenalen (C13), acefenantren (C15) i aceantren (C16).
[0046] Alternativno, atomi u prstenu mogu uključivati jedan ili više heteroatoma, kao u "heteroaril grupama". Primeri monocikličnih heteroaril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, one izvedene iz:
N1: pirol (azol) (C5), piridin (azin) (C6);
O1: furan (oksol) (C5);
S1: tiofen (tiol) (C5);
N1O1: oksazol (C5), izoksazol (C5), izoksazin (C6);
N2O1: oksadiazol (furazan) (C5);
N3O1: oksatriazol (C5);
N1S1: tiazol (C5), izotiazol (C5);
N2: imidazol (1,3-diazol) (C5), pirazol (1,2-diazol) (C5), piridazin (1,2-diazin) (C6), pirimidin (1,3-diazin) (C6) (npr., citozin, timin, uracil), pirazin (1,4-diazin) (C6); N3: triazol (C5), triazin (C6); i, N4: tetrazol (C5).
[0047] Primeri heteroarila koji sadrže spojene prstenove uključuju, ali nisu ograničeni na:
C9(sa 2 spojena prstena) izveden iz benzofurana (O1), izobenzofurana (O1), indola (N1), izoindola (N1), indolizina (N1), indolina (N1), izoindolina (N1), purina (N4) (npr., adenin, gvanin), benzimidazola (N2), indazola (N2), benzoksazola (N1O1), benzizoksazola (N1O1), benzodioksola (O2), benzofurazana (N2O1), benzotriazola (N3), benzotiofurana (S1), benzotiazola (N1S1), benzotiadiazola (N2S);
C10(sa 2 spojena prstena) izveden iz hromena (O1), izohromena (O1), hromana (O1), izohromana (O1), benzodioksana (O2), hinolina (N1), izohinolina (N1), hinolizidina (N1), benzoksazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), hinoksalina (N2), hinazolina (N2), cinolina (N2), ftalazina (N2), nafthiridine (N2), pteridina (N4);
C11(sa 2 spojena prstena) izveden iz benzodiazepina (N2);
C13(sa 3 spojena prstena) izveden iz karbazola (N1), dibenzofurana (O1), dibenzotiofena (S1), karbolina (N2), perimidina (N2), piridoindola (N2); i,
C14(sa 3 spojena prstena) izveden iz akridina (N1), ksantena (O1), tioksantena (S1), oksantrena (O2), fenoksatiina (O1S1), fenazina (N2), fenoksazina (N1O1), fenotiazina (N1S1), tiantrena (S2), fenantridina (N1), fenantrolina (N2), fenazina (N2).
[0048] Iznad navedene grupe, bilo same ili deo drugog supstituenta, mogu same po sebi da budu supstituisane sa jednom ili više grupa koje se biraju između sebe i dodatnih supstituenata navedenih u nastavku.
Halo: -F, -CI, -Br, i -I.
Hidroksi: -OH.
[0049] Eter: -OR, pri čemu je R etarski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa (takođe se pominje kao C1-7alkoksi grupa, o kojoj se govori u nastavku), C3-20heterociklil grupa (takođe označena kao C3-20heterocikliloksi grupa), ili C5-20aril grupa (takođe se naziva C5-20ariloksi grupa), poželjno C1-7alkil grupa.
[0050] Alkoksi: -OR, gde je R alkil grupa, na primer, C1-7alkil grupa. Primeri C1-7alkoksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OMe (metoksi), -OEt (etoksi), -O(nPr) (n-propoksi), -O(iPr) (izopropoksi), -O(nBu) (nbutoksi), -O(sBu) (sek-butoksi), -O(iBu) (izobutoksi) i -O(tBu) (terc-butoksi).
[0051] Acetal: -CH(OR<1>)(OR<2>), gde su R<1>i R<2>nezavisno acetalni supstituenti, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa ili, u slučaju "ciklične" acetal grupe, R<1>i R<2>, uzeti zajedno sa dva atoma kiseonika za koje su vezani, i atomima ugljenika za koje su vezani, formiraju heterociklični prsten koji ima od 4 do 8 atomi u prstenu. Primeri acetalnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, i -CH(OMe)(OEt).
[0052] Hemiacetal: -CH(OH)(OR<1>), gde je R<1>hemiacetalni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri hemiacetalnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -CH(OH)(OMe) i - CH(OH)(OEt).
[0053] Ketal: -CR(OR<1>)(OR<2>), gde su R<1>i R<2>kao što je definisano za acetale, a R je ketal supstituent koji nije vodonik, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri ketal grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(Me)(OMe)2, -C(Me)(OEt)2, -C(Me)(OMe)(OEt), -C(Et)(OMe)2,-C(Et)(OEt)2, i -C(Et)(OMe)(OEt).
[0054] Hemiketal: -CR(OH)(OR<1>), gde je R<1>kao što je definisano za hemiacetale, a R je hemiketalni supstituent koji nije vodonik, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri hemiacetalnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(Me)(OH)(OMe), -C(Et)(OH)(OMe), -C(Me)(OH)(OEt), i -C(Et)(OH)(OEt).
Okso (keto, -on): =O.
Tion (tioketon): =S.
[0055] Imino (imin): =NR, gde je R imino supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno vodonik ili C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, =NH, =NMe, =NEt, and =NPh.
Formil (karbaldehid, karboksaldehid): -C(=O)H.
[0056] Acil (keto): C(=O)R, gde je R acil supstituent, na primer, C17alkil grupa (takođe se pominje kao C1-7alkilacil ili C1-7alkanoil), C3-20heterociklil grupa (takođe se naziva C3-20heterociklilacil), ili C5-20aril grupa (takođe nazvana C5-20arilacil), poželjno C1-7alkil grupa. Primeri acil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)CH3(acetil), -C(=O)CH2CH3(propionil), -C(=O)C(CH3)3(t-butiril), i -C(=O)Ph (benzoil, fenon). Karboksi (karboksilna kiselina): -C(=O)OH.
Tiokarboksi (tiokarboksilna kiselina): -C(=S)SH.
Tiolokarboksi (tiolokarboksilna kiselina): -C(=O)SH.
Tionokarboksi (tionokarboksilna kiselina): -C(=S)OH.
Imidna kiselina: -C(=NH)OH.
Hidroksaminska kiselina: -C(=NOH)OH.
[0057] Estar (karboksilat, estar karboksilne kiseline, oksikarbonil): -C(=O)OR, gde je R estarski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, i -C(=O)OPh.
[0058] Aciloksi (obrnuti estar): -OC(=O)R, gde je R<1>aciloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri aciloksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OC(=O)CH3(acetoksi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, i -OC(=O)CH2Ph.
[0059] Oksikarboiloksi: -OC(=O)OR, gde je R estarski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na,-OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, i -OC(=O)OPh.
[0060] Amino: -NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa (takođe se pominje kao C17alkilamino ili di-C1-7alkilamino), C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa, ili, u slučaju "ciklične" amino grupe, R<1>i R<2>, uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani, formiraju heterociklični prsten koji od 4 do 8 atoma u prstenu. Amino grupe mogu biti primarne (-NH2), sekundarne (-NHR1) ili tercijarne (-NHR1R2), au katjonskom obliku, mogu biti kvaternarne (-<+>NR<1>R<2>R<3>). Primeri amino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, i -NHPh. Primeri cikličnih amino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, aziridino, azetidino, pirolidino, piperidino, piperazino, morfolino i tiomorfolino.
[0061] Amido (karbamoil, karbamil, aminokarbonil, karboksamid): -C(=O)NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri amido grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, i -C(=O)N(CH2CH3)2, kao i amido grupe u kojima R<1>i R<2>, zajedno sa atomom azota za koji su vezani, formiraju heterocikličnu strukturu kao što je, na primer, piperidinokarbonil, morfolinokarbonil, tiomorfolinokarbonil i piperazinokarbonil.
[0062] Tioamido (tiokarbamil): -C(=S)NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri amido grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2, i -C(=S)NHCH2CH3.
[0063] Acilamido (acilamino): -NR<1>C(=O)R<2>, gde je R<1>amidni supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno vodonik ili C1-7alkil grupa, a R<2>je acil supstituent na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno vodonik ili C1-7alkil grupa.
[0064] Primeri acilamidnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3, i -
1
NHC(=O)Ph. R<1>i R<2>mogu zajedno da formiraju cikličnu strukturu, kao što je, na primer, sukcinimidil, maleimidil i ftalimidil:
[0065] aminokarboniloksi: -OC(=O)NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri aminokarboniloksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, i -OC(=O)NEt2.
[0066] Ureido: -N(R<1>)CONR<2>R<3>pri čemu su R<2>i R<3>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe, a R<1>je ureido supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno vodonik ili C1-7alkil grupa. Primeri ureido grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NHCONH2,-NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, -NMeCONMe2, i -NMeCONEt2.
Gvanidin: -NH-C(=NH)NH2.
[0067] Tetrazolil: petočlani aromatični prsten koji ima četiri atoma azota i jedan atom ugljenika,
[0068] Imino: =NR, gde je R imino supstituent, na primer, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa. Primeri imino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, =NH, =NMe i =NEt.
[0069] Amidin (amidino): -C(=NR)NR2, pri čemu je svaki R amidinski supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa. Primeri amidinskih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na,
-C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, i -C(=NMe)NMe2.
Nitro: -NO2.
Nitrozo: -NO.
Azido: -N3.
Cijano (nitril, karbonitril): -CN.
Izocijano: -NC.
Cijanat: -OCN.
Izocijanat: -NCO.
Tiocijano (tiocijanat): -SCN.
Izotiocijano (izotiocijanato): -NCS.
Sulfhidril (tiol, merkapto): -SH.
[0070] Tioeter (sulfid): -SR, gde je R tioetar supstituent, na primer, C1-7alkil grupa (takođe se naziva C1-7alkiltio grupa), C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri C1-7alkiltio grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -SCH3i -SCH2CH3.
[0071] Disulfid: -SS-R, gde je R disulfidni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa (ovde se takođe pominje kao C1-7alkil disulfid). Primeri C1-7alkil disulfidnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -SSCH3i -SSCH2CH3.
[0072] Sulfin (sulfinil, sulfoksid): -S(=O)R, gde je R sulfin supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfin grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)CH3i -S(=O)CH2CH3.
[0073] Sulfon (sulfonil): -S(=O)2R, gde je R sulfonski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa, uključujući, na primer, fluorisanu ili perfluorovanu C1-7alkil grupa. Primeri sulfonskih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2CH3(metansulfonil, mesil), -S(=O)2CF3(triflil), -S(=O)2CH2CH3(esil), -S(=O)2C4F9(nonaflil), -S(=O)2CH2CF3(tresil), -S(=O)2CH2CH2NH2(tauril), -S(=O)2Ph (fenilsulfonil, besil), 4-metilfenilsulfonil (tozil), 4-hlorofenilsulfonil (klozil), 4-bromofenilsulfonil (brosil), 4-nitrofenil (nozil), 2-naftalensulfonat (napsil) i 5-dimetilsulfonatamino-1-naftil (dansil).
Sulfonska kiselina (sulfino): -S(=O)OH, -SO2H.
Sulfonska kiselina (sulfo): -S(=O)2OH, -SO3H.
[0074] Sulfinat (estar sulfinske kiseline): -S(=O)OR; gde je R sulfinat supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri sulfinatnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)OCH3(metoksisulfinil; metil sulfinat) i -S(=O)OCH2CH3(etoksisulfinil; etil sulfinat).
[0075] Sulfonat (estar sulfonske kiseline): -S(=O)2OR, gde je R sulfonat supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri sulfonat grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2OCH3(metoksisulfonil; metil sulfonat ) i -S(=O)2OCH2CH3(etoksisulfonil; etil sulfonat).
[0076] Sulfiniloksi: -OS(=O)R, gde je R sulfiniloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri sulfiniloksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)CH3i -OS(=O)CH2CH3.
[0077] Sulfoniloksi: -OS(=O)2OR, gde je R sulfoniloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri sulfiniloksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)2CH3(mezilat) i -OS(=O)2CH2CH3(ezilat).
[0078] Sulfat: -OS(=O)2OR; gde je R sulfat supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri sulfat grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)2OCH3i -SO(=O)2OCH2CH3.
[0079] Sulfamil (sulfamoil; amid sulfinske kiseline; sulfinamid): -S(=O)NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfamil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2, i -S(=O)NHPh.
[0080] Sulfonamido (sulfinamoil; amid sulfonske kiseline; sulfonamid): -S(=O)2NR<1>R<2>, gde su R<1>i R<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfonamido grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2, i -S(=O)2NHPh. Sulfamino: -NR<1>S(=O)2OH, gde je R<1>amino supstituent, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfamino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)2OH i -N(CH3)S(=O)2OH.
[0081] Sulfonamino: -NR<1>S(=O)2R, gde je R<1>amino supstituent, kao što je definisano za amino grupe, a R je sulfonamino supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfonamino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)2CH3i -N(CH3)S(=O)2C6H5.
[0082] Sulfinamino: -NR<1>S(=O)R, gde je R<1>amino supstituent, kao što je definisano za amino grupe, a R je sulfinamino supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfinamino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)CH3i -N(CH3)S(=O)C6H5.
[0083] Fosfino (fosfin): -PR2, gde je R fosfino supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5- 20aril grupa. Primeri fosfino grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, i -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=O)2.
[0084] Fosfinil (fosfin oksid): -P(=O)R2, gde je R fosfinil supstituent, na primer, C1-7alkil grupe, C3-20heterociklil grupe, ili C5-20aril grupe, poželjno C1-7alkil grupe. Primeri fosfinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -P(=O)(CH3)2, -P(=O)(CH2CH3)2, -P(=O)(t-BU)2, i -P(=O)(Ph)2.
Fosfonska kiselina (fosfono): -P(=O)(OH)2.
[0085] Fosfonat (fosfono estar): -P(=O)(OR)2, gde je R fosfonatni supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20aril grupa. Primeri fosfonatnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -P(=O)(OCH3)2, -P(=O)(OCH2CH3)2, -P(=O)(O-t-Bu)2, i -P(=O)(OPh)2.
Fosforna kiselina (fosfonoksi): -OP(=O)(OH)2.
[0086] Fosfat (fosfonoksi estar): -OP(=O)(OR)2, gde je R fosfatni supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno - H, C1-7alkil grupa, ili C5-20aril grupa. Primeri fosfatnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OP(=O)(OCH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)2, -OP(=O)(O-t-Bu)2, i -OP(=O)(OPh)2.
Fosforna kiselina: -OP(OH)2.
[0087] Fosfit: -OP(OR)2, gde je R fosfit supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20aril grupa, poželjno - H, C1-7alkil grupa, ili C5-20aril grupa. Primeri fosfit grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, i -OP(OPh)2.
[0088] Fosforamidit: -OP(OR<1>)-NR<2>2, gde su R<1>i R<2>fosforamiditni supstituenti, na primer, -H, (opciono supstituisana) C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa ili C5-20aril grupa. Primeri fosforamidit grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, i -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
[0089] Fosforamidat: -OP(=O)(OR<1>)-NR<2>2, gde su R<1>i R<2>fosforamidatni supstituenti, na primer, -H, (opciono supstituisana) C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20aril grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa ili C5-20aril grupa. Primeri fosforamidat grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(=O)(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, i -OP(=O)(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Alkilen
[0090] C3-12alkilen: Termin "C3-12alkilen", kako se ovde koristi, odnosi se na bidentatni deo dobijen uklanjanjem dva atoma vodonika, oba sa istog atoma ugljenika, ili po jedan sa svakog od dva različita atoma ugljenika, ugljovodoničnog jedinjenja koje ima od 3 do 12 atoma ugljenika (osim ako nije drugačije naznačeno), koji mogu biti alifatični ili aliciklični, i koji mogu biti zasićeni, delimično nezasićeni ili potpuno nezasićeni. Dakle, termin "alkilen" uključuje podklase alkenilen, alkinilen, cikloalkilen, itd., o kojima se govori u nastavku.
[0091] Primeri linearnih zasićenih C3-12alkilen grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, -(CH2)n-gde je n ceo broj od 3 do 12, npr., -CH2CH2CH2- (propilen), -CH2CH2CH2CH2- (butilen), -CH2CH2CH2CH2CH2- (pentilen) i -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2- (heptilen).
[0092] Primeri razgranatih zasićenih C3-12alkilen grupa uključuju, ali nisu ograničeni na njih, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, i -CH2CH(CH2CH3)CH2-.
[0093] Primeri linearnih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12alkenilen i alkinilen grupe) uključuju, ali nisu ograničeni na, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-CH2-, -CH=CH-CH=CH-, -CH=CH-CH=CH-CH2-,-CH=CH-CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH=CH-, -CH=CH-CH2-CH2-CH=CH-, i -CH2-C=C-CH2-.
[0094] Primeri razgranatih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12alkenilen i alkinilen grupe) uključuju, ali nisu ograničeni na, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- i -C=C-CH(CH3)-.
[0095] Primeri alicikličnih zasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12cikloalkileni) uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopentilen (npr. ciklopent-1,3-ilen) i cikloheksilen (npr. cikloheks-1,4-ilen).
[0096] Primeri alicikličnih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12cikloalkileni) uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopentenilen (npr. 4-ciklopenten-1,3-ilen), cikloheksenilen (npr. 2-cikloheksen-1,4-ilen; 3-cikloheksen-1,2-ilen; 2,5-cikloheksadien-1,4-ilen).
[0097] Tamo gde je C3-12alkilen grupa prekinuta heteroatomom, indeks se odnosi na broj atoma u lancu uključujući heteroatome. Na primer, lanac -C2H4-O-C2H4- bi bio C5grupa.
[0098] Tamo gde je C3-12alkilenska grupa prekinuta heteroatomom, indeks se odnosi na broj atoma direktno u lancu uključujući aromatični prsten. Na primer, lanac
1
bila bi C5grupa.
Jedinica liganda
[0099] Jedinica liganda može biti bilo koje vrste i uključuje protein, polipeptid, peptid i nepeptidno sredstvo koji se specifično vezuje za ciljni molekul. U nekim otelotvorenjima, ligand jedinica može biti protein, polipeptid ili peptid. U nekim otelotvorenjima, ligand jedinica može biti ciklični polipeptid. Ove ligandne jedinice mogu uključivati antitela ili fragment antitela koji sadrži najmanje jedno mesto za vezivanje ciljnog molekula, limfokine, hormone, faktore rasta ili bilo koji drugi molekul ili supstancu koji se vezuje za ćeliju koja se može specifično vezati za cilj.
[0100] Termini "specifično vezuje" i "specifično vezivanje" odnose se na vezivanje antitela ili drugog proteina, polipeptida ili peptida za unapred određeni molekul (npr., antigen). Tipično, antitelo ili drugi molekul se vezuju sa afinitetom od najmanje oko 1×10<7>M<-1>, i vezuju se za unapred određeni molekul sa afinitetom koji je najmanje dva puta veći od njegovog afiniteta za vezivanje za nespecifičan molekul (npr., BSA, kazein) osim unapred određenog molekula ili blisko srodnog molekula.
[0101] Primeri ligandnih jedinica uključuju ona sredstva opisana za upotrebu u WO 2007/085930.
[0102] U nekim otelotvorenjima, ligand jedinica je sredstvo za vezivanje ćelije koji se vezuje za vanćelijsku metu na ćeliji. Takvo sredstvo za vezivanje ćelije može biti protein, polipeptid, peptid ili nepeptidno sredstvo. U nekim otelotvorenjima, sredstvo za vezivanje ćelije može biti protein, polipeptid ili peptid. U nekim otelotvorenjima, sredstvo za vezivanje ćelije može biti ciklični polipeptid. Sredstvo za vezivanje ćelije takođe može biti antitelo ili fragment antitela koji se vezuje za antigen. Dakle, u jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak obezbeđuje konjugat antitelo-lek (ADC).
Vezujuće sredstvo ćelija
[0103] Sredstvo za vezivanje ćelije može biti bilo koje vrste, i obuhvata peptide i ne-peptide. Oni mogu uključivati antitela ili fragment antitela koji sadrži najmanje jedno mesto vezivanja, limfokine, hormone, mimetike hormona, vitamine, faktore rasta, molekule za transport hranljivih materija ili bilo koji drugi molekul ili supstancu za ćeliju.
Peptidi
[0104] U jednom otelotvorenju, sredstvo za vezivanje ćelije je linearni ili ciklični peptid koji sadrži 4-30, poželjno 6-20, susednih aminokiselinskih ostataka. U ovom otelotvorenju, poželjno je da je jedno sredstvo za vezivanje ćelije povezano sa jednim monomerom ili dimerom pirolobenzodiazepinskog jedinjenja.
[0105] U jednom otelotvorenju, vezujuće sredstvo ćelije sadrži peptid koji vezuje integrin αvβ6. Peptid može biti selektivan za αvβ6preko XYS.
[0106] U jednom otelotvorenju vezujuće sredstvo ćelije sadrži polipeptid A20FMDV-Cys. A20FMDV-Cys ima redosled: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Alternativno, može se koristiti varijanta A20FMDV-Cys sekvence u kojoj su jedan, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet ili deset aminokiselinskih ostataka supstituisani drugim aminokiselinskim ostatkom. Štaviše, polipeptid može imati sekvencu NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC.
Antitela
[0107] Termin "antitelo" ovde se koristi u najširem smislu i posebno pokriva monoklonalna antitela, poliklonalna antitela, dimere, multimere, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela) i fragmente antitela, sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost (Miller i dr. (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). Antitela mogu biti mišja, ljudska, humanizovana, himerna ili izvedena iz drugih vrsta. Antitelo je protein koji generiše imuni sistem koji je sposoban da prepozna i vezuje se za određeni antigen. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M., Shlomchik (2001) Immuno Biology, 5th Ed., Garland Publishing, New York). Ciljani antigen generalno ima mnoga mesta vezivanja, koja se takođe nazivaju epitopi, prepoznata od strane CDR na više antitela. Svako antitelo koje se specifično vezuje za drugi epitop ima različitu strukturu. Dakle, jedan antigen može imati više od jednog odgovarajućeg antitela. Antitelo uključuje molekul imunoglobulina pune dužine ili imunološki aktivni deo molekula imunoglobulina cele dužine, tj., molekul koji sadrži mesto vezivanja antigena koji imunospecifično vezuje antigen ciljane celine ili njegov deo, takvi ciljevi, uključujući ali nije ograničeno na ćeliju raka ili ćelije koje proizvode autoimuna antitela povezana sa autoimunom bolešću. Imunoglobulin može biti bilo kog tipa (npr. IgG, IgE, IgM, IgD i IgA), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase molekula imunoglobulina. Imunoglobulini mogu biti izvedeni iz bilo koje vrste, uključujući ljudsko, mišje ili zečje poreklo.
[0108] "Fragmenti antitela" obuhvataju deo antitela pune dužine, generalno njegov deo koji se vezuje za antigen ili njegov varijabilni region. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab', F(ab')2i scFv fragmente; dijatela; linearna antitela; fragmenti proizvedeni u Fab ekspresionoj biblioteci, antiidiotipska (anti-Id) antitela, CDR (region koji determiniše komplementarnost) i fragmenti koji se vezuju za epitop bilo kog od iznad navedenih koji se imunospecifično vezuju za antigene ćelija raka, virusne antigene ili mikrobne antigene, jednolančani molekuli antitela; i multispecifična antitela formirana iz fragmenata antitela.
[0109] Termin "monoklonsko antitelo" kao što se ovde koristi, se odnosi na antitelo dobijeno iz populacije znatno homogenih antitela, tj., pojedinačna antitela koja čine populaciju su identična, osim mogućih prirodnih mutacija koje mogu biti prisutne u manjim količinama. Monoklonska antitela su visoko specifična, usmerena su protiv jednog antigenskog mesta. Štaviše, za razliku od preparata poliklonalnih antitela koji uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonsko antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Pored svoje specifičnosti, monoklonska antitela su povoljna i po tome što mogu da se sintetišu nekontaminirana drugim antitelima. Modifikator "monoklonski" ukazuje na karakter antitela koje je dobijeno iz suštinski homogene populacije antitela i ne treba ga tumačiti kao da zahteva proizvodnju antitela bilo kojim određenim postupkom. Na primer, monoklonska antitela koja će se koristiti u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti napravljena metodom hibridoma koji su prvi opisali Kohler i dr. (1975) Nature 256:495, ili mogu biti napravljena postupcima rekombinantne DNK (videti, US 4816567). Monoklonska antitela se takođe mogu izolovati iz biblioteka antitela faga korišćenjem tehnika opisanih u Clackson i dr. (1991) Nature, 352:624-628; Marks i dr. (1991) J. Mol. Biol., 222:581-597 ili od transgenskih miševa koji nose potpuno humani imunoglobulinski sistem (Lonberg (2008) Curr. Opinion 20(4):450-459).
[0110] Monoklonalna antitela ovde posebno uključuju „himerična“ antitela u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima koja potiču od određene vrste ili pripadaju određenoj klasi ili podklasi antitela, dok je ostatak lanca (lanaca) je identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima koja potiču od druge vrste ili pripadaju drugoj klasi ili podklasi antitela, kao i fragmenti takvih antitela, sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost (US 4816567; i Morrison i dr. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). Himerna antitela obuhvataju "primatizovana" antitela koja sadrže sekvence za vezivanje antigena varijabilnog domena izvedene iz ne-humanog primata (npr. majmun iz starog sveta ili čovekoliki majmun) i sekvence humanog konstantnog regiona.
[0111] "Intaktno antitelo" ovde je ono koje sadrži VL i VH domene, kao i konstantni domen lakog lanca (CL) i konstantne domene teškog lanca, CH1, CH2 i CH3. Konstantni domeni mogu biti konstantni domeni izvorne sekvence (npr. konstantni domeni ljudske prirodne sekvence) ili njihova varijanta sekvence aminokiselina. Intaktno antitelo može imati jednu ili više "efektorskih funkcija" koje se odnose na one biološke aktivnosti koje se mogu pripisati Fc regionu (Fc region izvorne sekvence ili Fc region varijante aminokiselinske sekvence) antitela. Primeri efektorskih funkcija antitela uključuju C1 q vezivanje; citotoksičnost zavisna od komplementa; Fc receptor vezivanja; citotoksičnost zavisna od antitela (ADCC); fagocitoza; i naniže regulaciju receptora ćelijske površine kao što su B ćelijski receptor i BCR.
[0112] U zavisnosti od sekvence aminokiselina konstantnog domena njihovih teških lanaca, netaknuta antitela se mogu dodeliti različitim „klasama“. Postoji pet glavnih klasa netaknutih antitela: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, a nekoliko od njih se može dalje podeliti na "podklase" (izotipove), npr., IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA i IgA2. Konstantni domeni teških lanaca koji odgovaraju različitim klasama antitela zovu se α, δ, ε, γ, i µ, respektivno. Strukture podjedinica i trodimenzionalne konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate.
Humanizacija
[0113] Tehnike za smanjenje in vivo imunogenosti ne-humanog antitela ili fragmenta antitela uključuju one koje se nazivaju "humanizacija".
[0114] "Humanizovano antitelo" se odnosi na polipeptid koji sadrži najmanje deo modifikovanog varijabilnog regiona humanog antitela pri čemu je deo varijabilnog regiona, poželjno deo znatno manji od netaknutog humanog varijabilnog domena, supstituisan odgovarajućom sekvencom iz ne-humane vrste i pri čemu je modifikovani varijabilni region vezan za najmanje drugi deo drugog proteina, poželjno konstantni region
1
humanog antitela. Termin "humanizovana antitela" obuhvata ljudska antitela u kojima su jedan ili više aminokiselinskih ostataka regiona koji određuju komplementarnost ("CDR") i/ili jedan ili više okvirnih regiona ("FW" ili "FR") supstituisani aminokiselinama ostaci sa analognih mesta u antitelima glodara ili drugih ne-humanih antitela. Termin "humanizovano antitelo" takođe uključuje varijantu imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njen fragment koji sadrži FR koji ima suštinski aminokiselinsku sekvencu humanog imunoglobulina i CDR koji ima suštinski aminokiselinsku sekvencu ne-humanog imunoglobulina.
[0115] "Humanizovani" oblici ne-humanih (npr., mišjih) antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu izvedenu iz ne-humanog imunoglobulina. Ili, gledano na drugi način, humanizovano antitelo je humano antitelo koje takođe sadrži odabrane sekvence iz ne-humanih (npr. mišjih) antitela umesto humanih sekvenci. Humanizovano antitelo može uključivati konzervativne aminokiselinske supstitucije ili ne-prirodne ostatke iz iste ili različitih vrsta koje ne menjaju značajno njegovo vezivanje i/ili biološku aktivnost. Takva antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu izvedenu iz ne-humanih imunoglobulina.
[0116] Postoji niz tehnika humanizacije, uključujući 'CDR kalemljenje', vođenu selekciju', 'deimunizaciju', 'obnavljanje površine' (poznato i kao 'oblaganje'), kompozitna antitela', 'optimizacija sadržaja ljudskih struna' i premeštanje okvira.
CDR kalemljenje
[0117] U ovoj tehnici, humanizovana antitela su humani imunoglobulini (antitelo primaoca) u kojima su ostaci iz komplementarno određujućeg regiona (CDR) antitela primaoca zamenjeni ostacima iz CDR ne-humane vrste (donorsko antitelo) kao što je miš, pacova, kamila, goveda, koza ili zečeva koji imaju željena svojstva (u stvari, ne-humani CDR-ovi su 'nakalemljeni' na humani okvir). U nekim slučajevima, ostaci okvirnog regiona (FR) humanog imunoglobulina su zamenjeni odgovarajućim ne-humanim ostacima (ovo se može desiti kada, na primer, određeni FR ostatak ima značajan uticaj na vezivanje antigena).
[0118] Štaviše, humanizovana antitela mogu da sadrže ostatke koji se ne nalaze ni u antitelu primaoca, niti u uvezenim CDR ili okvirnim sekvencama. Ove modifikacije su napravljene da bi se dodatno poboljšao i maksimizovao učinak antitela. Dakle, generalno, humanizovano antitelo će sadržati sve od najmanje jednog, a u jednom aspektu dva, varijabilna domena, u kojima sve ili sve hipervarijabilne petlje odgovaraju onima nehumanog imunoglobulina i sve ili suštinski sve FR regioni su oni sekvence humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo opciono će takođe sadržati bar deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), ili deo humanog imunoglobulina.
Vođen izbor
[0119] Postupak se sastoji iz kombinovanja VHili VLdomena datog ne-humanog antitela specifičnog za određeni epitop sa humanom VHili VLbibliotekom i specifični humani V domeni se biraju protiv antigena od interesa. Ovaj odabrani humani VH se zatim kombinuje sa VL bibliotekom da bi se generisala potpuno humana VHxVL kombinacija. Postupak je opisan u Nature Biotechnology (N.Y.) 12, (1994) 899-903.
Kompozitna antitela
[0120] U ovom postupku, dva ili više segmenata sekvence aminokiselina iz humanog antitela se kombinuju unutar konačnog molekula antitela. Konstruisani su kombinovanjem više segmenata humanih VH i VL sekvenci u kombinacijama koje ograničavaju ili izbegavaju epitope humanih T ćelija u krajnjim kompozitnim V regionima antitela. Tamo gde je potrebno, epitopi T ćelija su ograničeni ili izbegavani razmenom segmenata V regiona koji doprinose ili kodiraju epitop T ćelija sa alternativnim segmentima koji izbegavaju epitope T ćelija. Ovaj postupak je opisan u US 2008/0206239 A1.
Deimunizacija
[0121] Ovaj postupak uključuje uklanjanje humanih (ili drugih vrsta) epitopa T-ćelija iz V regiona terapeutskog antitela (ili drugog molekula). Sekvenca V-regiona terapeutskih antitela se analizira na prisustvo motiva vezivanja MHC klase II, na primer, poređenjem sa bazama podataka o motivima koji se vezuju za MHC (kao što je baza podataka „motivi“ koja se nalazi na www.wehi.edu.au). Alternativno, motivi vezivanja MHC klase II mogu se identifikovati korišćenjem računarskih postupaka uvlačenja niti kao što su one koje su osmislili Altuvia i dr. (J. Mol. Biol. 249244-250 (1995)); u ovim postupcima, uzastopni preklapajući peptidi iz sekvenci V-regiona testiraju se na njihovu energiju vezivanja za proteine MHC klase II. Ovi podaci se zatim mogu kombinovati sa informacijama o drugim karakteristikama sekvence koje se odnose na uspešno predstavljene peptide, kao što su amfipatičnost, Rotbardovi motivi i mesta deljenja za katepsin B i druge enzime za obradu.
1
[0122] Kada se identifikuju potencijalni epitopi druge vrste (npr. humana) T-ćelija, oni se eliminišu promenom jedne ili više aminokiselina. Modifikovane aminokiseline se obično nalaze unutar samog epitopa T-ćelije, ali takođe mogu biti susedne epitopu u smislu primarne ili sekundarne strukture proteina (i stoga ne moraju biti susedne u primarnoj strukturi). Najobičnije, promena je putem zamene, ali će u nekim okolnostima dodavanje ili brisanje aminokiselina biti prikladnije.
[0123] Sve promene se mogu postići tehnologijom rekombinantne DNK, tako da se konačni molekul može pripremiti ekspresijom iz rekombinantnog domaćina koristeći dobro uspostavljene postupke kao što je mutageneza usmerena na mesto. Međutim, moguća je i upotreba hemije proteina ili bilo kog drugog načina molekularne promene.
Obnavljanje površine
[0124] Ovaj postupak uključuje:
(a) određivanje konformacione strukture varijabilnog regiona ne-humanog (npr. glodara) antitela (ili njegovog fragmenta) konstruisanjem trodimenzionalnog modela varijabilnog regiona ne-humanog antitela;
(b) generisanje poravnanja sekvenci korišćenjem relativnih distribucija pristupačnosti iz rendgenskih kristalografskih struktura dovoljnog broja teških i lakih lanaca varijabilnog regiona antitela koji nisu humani i ljudski da bi se dobio skup pozicija okvira teškog i lakog lanca gde su pozicije poravnanja identične u 98% dovoljnog broja teških i lakih lanaca ne-humanih antitela;
(c) definisanje za ne-humano antitelo koje treba da bude humanizovano, skupa površinski izloženih aminokiselinskih ostataka teškog i lakog lanca korišćenjem skupa okvirnih pozicija generisanih u koraku (b);
(d) identifikovanje iz sekvenci aminokiselina humanog antitela skupa površinski izloženih aminokiselinskih ostataka teškog i lakog lanca koji je najbliži identičan skupu površinski izloženih aminokiselinskih ostataka definisanih u koraku (c), pri čemu su teški i laki lanci iz ljudska antitela su ili nisu prirodno uparena;
(e) supstituisanje, u sekvenci aminokiselina ne-humanog antitela koje se humanizuje, skupa aminokiselinskih ostataka izloženih površinski teškog i lakog lanca definisanih u koraku (c) sa skupom aminokiselina izloženih površini teškog i lakog lanca ostaci identifikovani u koraku (d);
(f) konstruisanje trodimenzionalnog modela varijabilnog regiona ne-humanog antitela koji je rezultat supstitucije specificirane u koraku (e);
(g) identifikovanje, upoređivanjem trodimenzionalnih modela konstruisanih u koracima (a) i (f), bilo kojih aminokiselinskih ostataka iz skupova identifikovanih u koracima (c) ili (d), koji su unutar 5 Angstroma od bilo kog atoma bilo koji ostatak regiona koji određuju komplementarnost ne-humanog antitela koje se humanizuje; i
(h) promenu svih ostataka identifikovanih u koraku (g) sa humanog na originalni ostatak aminokiseline ne-humane da bi se time definisao humanizujući skup površinski izloženih aminokiselinskih ostataka koji nisu humana antitela; s tim da korak (a) ne mora biti sproveden prvi, već mora biti sproveden pre koraka (g).
Superhumanizacija
[0125] Postupak poredi ne-humanu sekvencu sa funkcionalnim repertoarom gena humane germinalne linije. Odabrani su oni humani geni koji kodiraju kanonske strukture identične ili blisko povezane sa ne-humanim sekvencama. Oni odabrani humani geni sa najvećom homologijom unutar CDR-a su izabrani kao FR donatori. Konačno, ne-humani CDR-ovi su kalemljeni na ove humane FR. Ovaj postupak je opisan u patentu WO 2005/079479 A2.
Optimizacija sadržaja humanih stringova
[0126] Ovaj postupak upoređuje sekvencu koja nije humana (npr. mišja) sa repertoarom gena humane germinalne linije i razlike se ocenjuju kao sadržaj humanog niza (HSC) koji kvantifikuje sekvencu na nivou potencijalnih epitopa MHC/T-ćelija. Ciljna sekvenca se zatim humanizuje maksimiziranjem njenog HSC umesto korišćenjem globalne mere identiteta za generisanje više različitih humanizovanih varijanti (opisano u Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).
1
Mešanje okvira
[0127] CDR-ovi ne-humanog antitela su fuzionisani u okviru sa cDNK skupovima koji obuhvataju sve poznate okvire humanih gena za germinalnu liniju teškog i lakog lanca. Humanizovana antitela se zatim biraju npr. paniranje prikazane biblioteke faga antitela. Ovo je opisano u Methods 36, 43-60 (2005).
[0128] Primeri sredstava za vezivanje ćelija uključuju ona sredstva opisana za upotrebu u WO 2007/085930.
[0129] Antigeni udruženi sa tumorom i srodna antitela za upotrebu u otelotvorenjima predmetnog pronalaska su navedeni u nastavku.
ANTIGENI POVEZANI SA TUMOROM I KOGNATNA ANTITELA
(1) BMPR1B (koštani morfogenetski protein receptor tipa IB)
Nukleotid
[0130]
Genbank pristupni br. NM_001203
Genbank verzija br. NM_001203.2 GI:169790809
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:06 PM
Polipeptid
[0131]
Genbank pristupni br. NP_001194
Genbank verzija br. NP_001194.1 GI:4502431
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:06 PM
Upućivanje u tekstu
[0132]
ten Dijke,P., i drScience 264 (5155): 101-104 (1994), Oncogene 14 (11):1377-1382 (1997)); WO2004/063362 (Patentni zahtev 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12);
US2003/134790-A1 (stranice 38-39); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; stranica 296);
WO2003/055443
(stranica 91-92); WO2002/99122 (Primer 2; stranice 528-530); WO2003/029421 (Patentni zahtev 6); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Sl. 112); WO2002/98358 (Patentni zahtev 1; stranica 183); WO2002/54940 (stranice 100-101); WO2002/59377(stranice 349-350); WO2002/30268 (Patentni zahtev 27; stranica 376); WO2001/48204 (Primer; Sl. 4); NP_001194 receptor za koštani morfogenetski protein, tip IB /pid=NP_001194,1.; MIM:603248; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
Nukleotid
[0133]
Genbank pristupni br. NM_003486
Genbank verzija br. NM_003486.5 GI:71979931
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:06 PM
Polipeptid
[0134]
Genbank pristupni br. NP_003477
Genbank verzija br. NP_003477.4 GI:71979932
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:06 PM
1
Upućivanje u tekstu
[0135]
Biochem. Biophys. Res.
Commun.255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., i dr. (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/032842 (Primer IV); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/78524 (Primer 2); WO2002/99074 (Patentni zahtev 19; stranice 127-129); WO2002/86443 (Patentni zahtev 27; stranice 222, 393); WO2003/003906 (Patentni zahtev 10; stranica 293); WO2002/64798 (Patentni zahtev 33; stranice 93-95); WO2000/14228 (Patentni zahtev 5; stranice 133-136); US2003/224454 (Sl.
3); WO2003/025138 (Patentni zahtev 12; stranica 150); NP_003477 porodica nosača rastvorene supstance 7 (transporter katjonskih aminokiselina, i+sistem), član 5 /pid=NP_003477,3 - Homo sapiens;
MIM:600182;; NM_015923.
(3) STEAP1 (šest transmembranskih epitelnih antigena prostate)
Nukleotid
[0136]
Genbank pristupni br. NM_012449
Genbank verzija br. NM_012449.2 GI:22027487
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.9, 201202:57 PM
Polipeptid
[0137]
Genbank pristupni br. NP_036581
Genbank verzija br. NP_036581.1 GI:9558759
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.9, 201202:57 PM
Upućivanje u tekstu
[0138] Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., i dr. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO2004/065577 (Patentni zahtev 6); WO2004/027049 (Sl.1L); EP1394274 (Primer 11); WO2004/016225 (Patentni zahtev 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); US2003/157089 (Primer 5); US2003/185830 (Primer 5); US2003/064397 (Sl. 2); WO2002/89747 (Primer 5; stranice 618-619); WO2003/022995 (Primer 9; Sl. 13A, Primer 53; stranice 173, Primer 2; Sl. 12A); šest transmembranskih epitelnih antigena prostate; MIM:604415.
(4) 0772P (CA125, MUC16)
Nukleotid
[0139]
Genbank pristupni br. AF361486
Genbank verzija br. AF361486.3 GI:34501466
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201007:56 AM
Polipeptid
[0140]
Genbank pristupni br. AAK74120
Genbank verzija br. AAK74120.3 GI:34501467
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201007:56 AM
Upućivanje u tekstu
1
[0141] J. Biol. Chem.276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (Patentni zahtev 14); WO2002/92836 (Patentni zahtev 6; Sl. 12); WO2002/83866 (Patentni zahtev 15; stranice 116-121); US2003/124140 (Primer 16); GI:34501467;
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, faktor potenciranja megakariocita, mezotelin)
Nukleotid
[0142]
Genbank pristupni br. NM_005823
Genbank verzija br. NM_005823.5 GI:293651528
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:47 PM
Polipeptid
[0143]
Genbank pristupni br. NP_005814
Genbank verzija br. NP_005814.2 GI:53988378
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:47 PM
Upućivanje u tekstu
[0144] Yamaguchi, N., i dr. Biol. Chem.269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem. 270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003/101283 (Patentni zahtev 14); (WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; stranice 287-288); WO2002/101075 (Patentni zahtev 4; stranice 308-309); WO2002/71928 (stranice 320-321); WO94/10312 (stranice 52-57); IM:601051.
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, porodica nosača rastvora 34 (natrijum fosfat), član 2, tip II natrijum zavisan transporter fosfata 3b)
Nukleotid
[0145]
Genbank pristupni br. NM_006424
Genbank verzija br. NM_006424.2 GI:110611905
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201203:39 PM
Polipeptid
[0146]
Genbank pristupni br. NP_006415
Genbank verzija br. NP_006415.2 GI:110611906
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201203:39 PM
Upućivanje u tekstu
[0147] J. Biol. Chem.277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., i dr(1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO2004/022778 (Patentni zahtev 2); EP1394274 (Primer 11); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; stranica 326); EP0875569 (Patentni zahtev 1; stranice 17-19); WO2001/57188 (Patentni zahtev 20; stranica 329); WO2004/032842 (Primer IV); WO2001/75177 (Patentni zahtev 24; stranice 139-140); MIM:604217.
(7) Šema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm,42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforin 5b Hlog, sema domena, sedam trombospondinskih ponavljanja (tip 1 i tipa 1), transmembranski domen (TM) i kratki citoplazmatski domen semaforin) 5B)
Nukleotid
[0148]
2
Genbank pristupni br. AB040878
Genbank verzija br. AB040878.1 GI:7959148
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 2, 200605:40 PM
Polipeptid
[0149]
Genbank pristupni br. BAA95969
Genbank verzija br. BAA95969.1 GI:7959149
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 2, 200605:40 PM
Upućivanje u tekstu
[0150] Nagase T., i dr(2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004/000997 (Patentni zahtev 1); WO2003/003984 (Patentni zahtev 1); WO2002/06339 (Patentni zahtev 1; stranica 50); WO2001/88133 (Patentni zahtev 1; stranice 41-43, 48-58); WO2003/054152 (Patentni zahtev 20); WO2003/101400 (Patentni zahtev 11); Pristupanje: Q9P283; Genew; HGNC:10737
(8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12 gen)
Nukleotid
[0151]
Genbank pristupni br. AY358628
Genbank verzija br. AY358628.1 GI:37182377
Datum ažuriranja podataka Genbank: Dec 1, 200904:15 AM
Polipeptid
[0152]
Genbank pristupni br. AAQ88991
Genbank verzija br. AAQ88991.1 GI:37182378
Datum ažuriranja podataka Genbank: Dec 1, 200904:15 AM
Upućivanje u tekstu
[0153] Ross i dr. (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; US2003/129192 (Patentni zahtev 2); US2004/044180 (Patentni zahtev 12); US2004/044179 (Patentni zahtev 11); US2003/096961 (Patentni zahtev 11); US2003/232056 (Primer 5); WO2003/105758 16 (Patentni zahtev 12); US2003/206918 (Primer 5); EP1347046 (Patentni zahtev 1); WO2003/025148 (Patentni zahtev 20); GI:37182378.
(9) ETBR (receptor endotelina tipa B)
Nukleotid
[0154]
Genbank pristupni br. AY275463
Genbank verzija br. AY275463.1 GI:30526094
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201002:26 AM
Polipeptid
[0155]
Genbank pristupni br. AAP32295
Genbank verzija br. AAP32295.1 GI:30526095
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201002:26 AM
Upućivanje u tekstu
[0156]
Nakamuta M., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun.178, 248-255, 1991; Arai H., i dr. Jpn. Circ. J.56, 1303-1307, 1992; Arai H., i dr. J. Biol. Chem.268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun.178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., i dr. J. Biol. Chem.268, 3873-3879, 1993; Haendler B., i dr. J. Cardiovasc. Pharmacol. 20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., i dr. Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., i drProc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., i dr. J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., i drBiol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., i dr. Am. J. Med. Genet.108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., i dr. Eur. J. Hum. Genet.
5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., i dr. Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., i dr, Hum. Mol.
Genet. 4, 2407-2409, 1995; Auricchio A., i dr. Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., i dr. Hum. Mol.
Genet. 5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., i dr. Nat. Genet. 12, 445-447, 1996; Svensson P.J., i dr. Hum. Genet.103, 145-148, 1998; Fuchs S., i dr. Mol. Med.7, 115-124, 2001; Pingault V., i dr. (2002) Hum. Genet. 111, 198-206; WO2004/045516 (Patentni zahtev 1); WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/040000 (Patentni zahtev 151); WO2003/087768 (Patentni zahtev 1); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/61087 (Sl. 1); WO2003/016494 (Sl.6); WO2003/025138 (Patentni zahtev 12; stranica 144); WO2001/98351 (Patentni zahtev 1; stranice 124-125); EP0522868 (Patentni zahtev 8; Sl.2); WO2001/77172 (Patentni zahtev 1; stranice 297-299); US2003/109676; US6518404 (Sl. 3); US5773223 (Patentni zahtev 1a; Kol 31-34); WO2004/001004.
(10) MSG783 (RNF124, hipotetički protein FLJ20315)
Nukleotid
[0157]
Genbank pristupni br. NM_017763
Genbank verzija br. NM_017763.4 GI:167830482
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201212:34 AM
Polipeptid
[0158]
Genbank pristupni br. NP_060233
Genbank verzija br. NP_060233.3 GI:56711322
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201212:34 AM
Upućivanje u tekstu
[0159] WO2003/104275 (Patentni zahtev 1); WO2004/046342 (Primer 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2003/083074 (Patentni zahtev 14; stranica 61); WO2003/018621 (Patentni zahtev 1); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Sl.93); WO2001/66689 (Primer 6); LocusID:54894.
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen 1 povezan sa rakom prostate, protein povezan sa rakom prostate 1, šest transmembranskih epitelnih antigena prostate 2, šest transmembranskih proteina prostate)
Nukleotid
[0160]
Genbank pristupni br. AF455138
Genbank verzija br. AF455138.1 GI:22655487
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201001:54 AM
Polipeptid
[0161]
Genbank pristupni br. AAN04080
Genbank verzija br. AAN04080.1 GI:22655488
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201001:54 AM
Upućivanje u tekstu
[0162] Lab. Invest.82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003/087306; US2003/064397 (Patentni zahtev 1; Sl.1); WO2002/72596 (Patentni zahtev 13; stranice 54-55); WO2001/72962 (Patentni zahtev 1; Sl. 4B); WO2003/104270 (Patentni zahtev 11); WO2003/104270 (Patentni zahtev 16); US2004/005598 (Patentni zahtev 22); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); US2003/060612 (Patentni zahtev 12; Sl. 10); WO2002/26822 (Patentni zahtev 23; Sl. 2); WO2002/16429 (Patentni zahtev 12; Sl.10); GI:22655488. (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, tranzijentni potencijal kanala receptora katjona, podfamilija M, član 4)
Nukleotid
[0163]
Genbank pristupni br. NM_017636
Genbank verzija br. NM_017636.3 GI:304766649
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 29, 201211:27 AM
Polipeptid
[0164]
Genbank pristupni br. NP_060106
Genbank verzija br. NP_060106.2 GI:21314671
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 29, 201211:27 AM
Upućivanje u tekstu
[0165] Xu, X.Z., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem.278 (33):30813-30820 (2003)); US2003/143557 (Patentni zahtev 4); WO2000/40614 (Patentni zahtev 14; stranice 100-103); WO2002/10382 (Patentni zahtev 1; Sl.9A); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2002/30268 (Patentni zahtev 27; stranica 391); US2003/219806 (Patentni zahtev 4); WO2001/62794 (Patentni zahtev 14; Sl.1A-D); MIM:606936.
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, faktor rasta izveden iz teratokarcinoma) Nukleotid
[0166]
Genbank pristupni br. NM_003212
Genbank verzija br. NM_003212.3 GI:292494881
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:27 PM
Polipeptid
[0167]
Genbank pristupni br. NP_003203
Genbank verzija br. NP_003203.1 GI:4507425
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:27 PM
Upućivanje u tekstu
[0168] Ciccodicola, A., i dr. EMBO J. 8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet.49 (3):555-565 (1991));
2
US2003/224411 (Patentni zahtev 1); WO2003/083041 (Primer 1); WO2003/034984 (Patentni zahtev 12); WO2002/88170 (Patentni zahtev 2; stranice 52-53); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Sl. 58); WO2002/16413 (Patentni zahtev 1; stranica 94-95, 105); WO2002/22808 (Patentni zahtev 2; Sl. 1); US5854399 (Primer 2; Kol 17-18); US5792616 (Sl.2); MIM:187395.
(14) CD21 (CR2 (receptor komplementa 2) ili C3DR (C3d/Epstein Barr virusni receptor) ili Hs.73792) Nukleotid
[0169]
Genbank pristupni br. M26004
Genbank verzija br. M26004.1 GI:181939
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Polipeptid
[0170]
Genbank pristupni br. AAA35786
Genbank verzija br. AAA35786.1 GI:181940
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Upućivanje u tekstu
[0171] Fujisaku i dr. (1989) J. Biol. Chem.264 (4):2118-2125); Weis J.J., i dr. J. Exp. Med.167, 1047-1066, 1988; Moore M., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.84, 9194-9198, 1987; Barel M., i dr. Mol. Immunol.35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., i dr. (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004/045520 (Primer 4); US2004/005538 (Primer 1); WO2003/062401 (Patentni zahtev 9); WO2004/045520 (Primer 4); WO91/02536 (Sl. 9,1-9,9); WO2004/020595 (Patentni zahtev 1); Pristupanje: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786,1.
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (beta povezan sa imunoglobulinom), B29)
Nukleotid
[0172]
Genbank pristupni br. NM_000626
Genbank verzija br. NM_000626.2 GI:90193589
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:53 PM
Polipeptid
[0173]
Genbank pristupni br. NP_000617
Genbank verzija br. NP_000617.1 GI:11038674
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:53 PM
Upućivanje u tekstu
[0174] Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller i dr. (1992) Eur. J. Immunol. 22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (patentni zahtev 2, Sl.140); WO2003/087768, US2004/101874 (patentni zahtev 1, stranica 102); WO2003/062401 (patentni zahtev 9); WO2002/78524 (Primer 2); US2002/150573 (patentni zahtev 5, stranica 15); US5644033; WO2003/048202 (patentni zahtev 1, stranice 306 i 309); WO 99/58658,
[0175] US6534482 (patentni zahtev 13, Sl.17A/B); WO2000/55351 (patentni zahtev 11, stranice 1145-1146); MIM:147245
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP1A (SH2 domen koji sadrži protein sidrenja fosfataze 1a), SPAP18, SPAP1C)
Nukleotid
[0176]
Genbank pristupni br. NM_030764
Genbank verzija br. NM_030764.3 GI:227430280
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 30, 201212:30 AM
Polipeptid
[0177]
Genbank pristupni br. NP_110391
Genbank verzija br. NP_110391.2 GI:19923629
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 30, 201212:30 AM
Upućivanje u tekstu
[0178]
AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Immunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., i dr. (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun.280 (3):768-775;
WO2004/016225 (Patentni zahtev 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (Patentni zahtev 5; Sl. 18D-1-18D-2);
WO2003/097803 (Patentni zahtev 12); WO2003/089624 (Patentni zahtev 25);: MIM:606509.
(17) HER2 (ErbB2)
Nukleotid
[0179]
Genbank pristupni br. M11730
Genbank verzija br. M11730.1 GI:183986
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Polipeptid
[0180]
Genbank pristupni br. AAA75493
Genbank verzija br. AAA75493.1 GI:306840
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Upućivanje u tekstu
[0181]
Coussens L., i dr. Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., i dr. Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., i dr. J. Cell Biol. 165, 869-880, 2004; Kuhns J.J., i dr. J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., i dr. Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., i dr. (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/027049 (Sl.11); WO2004/009622; WO2003/081210;
WO2003/089904 (Patentni zahtev 9); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); US2003/118592; WO2003/008537 (Patentni zahtev 1); WO2003/055439 (Patentni zahtev 29; Sl. 1A-B); WO2003/025228 (Patentni zahtev 37; Sl. 5C); WO2002/22636 (Primer 13; stranice 95-107); WO2002/12341 (Patentni zahtev 68; Sl. 7); WO2002/13847 (stranice 71-74); WO2002/14503 (stranice 114-117); WO2001/53463 (Patentni zahtev 2; stranice 41-46); WO2001/41787 (stranica 15); WO2000/44899 (Patentni zahtev 52; Sl.7); WO2000/20579
(Patentni zahtev 3; Sl. 2); US5869445 (Patentni zahtev 3; Kol 31-38); WO9630514 (Patentni zahtev
2
2; stranice 56-61); EP1439393 (Patentni zahtev 7); WO2004/043361 (Patentni zahtev 7); WO2004/022709; WO2001/00244 (Primer 3; Sl. 4); Pristupanje: P04626; EMBL; M11767; AAA35808,1. EMBL; M11761; AAA35808,1
ANTITELA
Abbott: US20110177095
[0182] Na primer, antitelo koje sadrži CDR-ove koji imaju ukupni najmanje 80% identičnosti sekvence sa CDR-ovima koji imaju sekvence aminokiselina SEQ ID NO:3 (CDR-H1), SEQ ID NO:4 (CDR-H2), SEQ ID NO:5 (CDR-H3), SEQ ID NO:104 i/ili SEQ ID NO:6 (CDR-L1), SEQ ID NO:7 (CDR-L2), i SEQ ID NO:8 (CDR-L3), pri čemu anti-HER2 antitelo ili anti-HER2 vezujući fragment ima smanjenu imunogenost u poređenju sa antitelom koje ima VH SEQ ID NO:1 i VL SEQ ID NO:2.
Biogen: US20100119511
[0183]
Na primer, ATCC pristupni brojevi: PTA-10355, PTA-10356, PTA-10357, PTA-10358
Na primer, prečišćeni molekul antitela koji se vezuje za HER2 koji sadrži svih šest CDR-ova iz antitela izabranog iz grupe koju čine BIIB71 F10 (SEQ ID NOs:11, 13), BIIB69A09 (SEQ ID NOs:15, 17); BIIB67F10 (SEQ ID NOs:19, 21); BIIB67F11 (SEQ ID NOs:23, 25), BIIB66A12 (SEQ ID NOs:27, 29), BIIB66C01 (SEQ ID NOs:31, 33), BIIB65C10 (SEQ ID NOs:35, 37), BIIB65H09 (SEQ ID NOs:39, 41) i BIIB65B03 (SEQ ID NOs:43, 45), ili CDR-ovi koji su identični ili koji nemaju više od dve izmene iz navedenih CDR-ova.
Herceptin (Genentech) - US6,054,297; ATCC pristupni br. CRL-10463 (Genentech)
Pertuzumab (Genentech)
[0184]
US20110117097
na primer, videti SEQ IDs No. 15&16, SEQ IDs No.17&18, SEQ IDs No. 23&24 & ATCC pristupni brojevi HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12697.
US20090285837
US20090202546
na primer, ATCC pristupni brojevi: HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12698.
US20060088523
• na primer, ATCC pristupni brojevi: HB-12215, HB-12216
• na primer, antitelo koje sadrži varijabilne lake i varijabilne teške aminokiselinske sekvence u SEQ ID NOs.3 i 4, respektivno.
• na primer, antitelo koje sadrži aminokiselinsku sekvencu lakog lanca izabranu između SEQ ID No.
15 i 23, i aminokiselinsku sekvencu teškog lanca izabranu iz SEQ ID No.16 i 24 US20060018899
• na primer, ATCC pristupni brojevi: (7C2) HB-12215, (7F3) HB-12216, (4D5) CRL-10463, (2C4) HB-12697.
• na primer, antitelo koje sadrži aminokiselinsku sekvencu u SEQ ID No.23, ili njegovu deamidiranu i/ili oksidovanu varijantu.
US2011/0159014
• na primer, antitelo koje ima varijabilni domen lakog lanca koji sadrži hipervarijabilne regione SEQ ID NO: 1".
• Na primer, antitelo koje ima varijabilni domen teškog lanca koji sadrži hipervarijabilne regione SEQ ID NO: 2.
US20090187007
2
Glikotop: TrasGEX antitelo http://www.glycotope.com/pipeline
[0185] Na primer, pogledajte Međunarodni zajednički institut za rak i bolnički centar za rak u Čangaju: HMTI-Fc Ab - Gao J., i dr. BMB Rep.2009 Okt.31;42(10):636-41.
Simfogen: US20110217305
[0186] Union Stem Cell &Gene Engineering, China - Liu HQ., i dr. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi.
2010 May;26(5):456-8.
(18) NCA (CEACAM6)
Nukleotid
[0187]
Genbank pristupni br. M18728
Genbank verzija br. M18728.1 GI:189084
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Polipeptid
[0188]
Genbank pristupni br. AAA59907
Genbank verzija br. AAA59907.1 GI:189085
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Upućivanje u tekstu
[0189] Barnett T., i dr. Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun.150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (Patentni zahtev 7); WO2004/044178 (Primer 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2002/78524 (Primer 2); WO2002/86443 (Patentni zahtev 27; stranica 427); WO2002/60317 (Patentni zahtev 2); Pristupanje: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915,1.
EMBL; M18728.
(19) MDP (DPEP1)
Nukleotid
[0190]
Genbank pristupni br. BC017023
Genbank verzija br. BC017023.1 GI:16877538
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 6, 201201:00 PM
Polipeptid
[0191]
Genbank pristupni br. AAH17023
Genbank verzija br. AAH17023.1 GI:16877539
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 6, 201201:00 PM
Upućivanje u tekstu
[0192] Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/64798 (Patentni zahtev 33; stranice 85-87); JP05003790 (Sl. 6-8); WO99/46284 (Sl. 9); MIM:179780.
(20) IL20R-alfa (IL20Ra, ZCYTOR7)
Nukleotid
2
Genbank pristupni br. AF184971
Genbank verzija br. AF184971.1 GI:6013324
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201010:00 PM
Polipeptid
[0194]
Genbank pristupni br. AAF01320
Genbank verzija br. AAF01320.1 GI:6013325
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201010:00 PM
Upućivanje u tekstu
[0195] Clark H.F., i dr. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., i dr. Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., i dr. Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., i dr. J. Immunol.167, 3545-3549, 2001; Parrish-Novak J., i dr. J. Biol. Chem.277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., i dr. (2003) Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., i dr. (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (Primer 11); US2004/005320 (Primer 5); WO2003/029262 (stranice 74-75); WO2003/002717 (Patentni zahtev 2; stranica 63); WO2002/22153 (stranice 45-47); US2002/042366 (stranica
20-21); WO2001/46261 (stranice 57-59); WO2001/46232 (stranice 63-65); WO98/37193 (Patentni zahtev 1; stranice 55-59); Pristupanje: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320,1.
(21) Brevican (BCAN, BEHAB)
Nukleotid
[0196]
Genbank pristupni br. AF229053
Genbank verzija br. AF229053.1 GI:10798902
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201012:58 AM
Polipeptid
[0197]
Genbank pristupni br. AAG23135
Genbank verzija br. AAG23135.1 GI:10798903
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201012:58 AM
Upućivanje u tekstu
[0198] Gary S.C., i dr. Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., i dr. Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (Patentni zahtev 11); US2003/186373 (Patentni zahtev 11); US2003/119131 (Patentni zahtev 1; Sl. 52); US2003/119122 (Patentni zahtev 1; Sl. 52); US2003/119126 (Patentni zahtev 1); US2003/119121 (Patentni zahtev 1; Sl.52); US2003/119129 (Patentni zahtev 1); US2003/119130 (Patentni zahtev 1); US2003/119128 (Patentni zahtev 1; Sl. 52); US2003/119125 (Patentni zahtev 1); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/02634 (Patentni zahtev 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
Nukleotid
[0199]
Genbank pristupni br. NM_004442
Genbank verzija br. NM_004442.6 GI:111118979
2
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.8, 201204:43 PM
Polipeptid
[0200]
Genbank pristupni br. NP_004433
Genbank verzija br. NP_004433.2 GI:21396504
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.8, 201204:43 PM
Upućivanje u tekstu
[0201] Chan,J. and Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (Patentni zahtev 12); WO200053216 (Patentni zahtev 1; stranica 41); WO2004065576 (Patentni zahtev 1); WO2004020583 (Patentni zahtev 9); WO2003004529 (stranice 128-132); WO200053216 (Patentni zahtev 1; stranica 42); MIM:600997.
(23) ASLG659 (B7h)
Nukleotid
[0202]
Genbank pristupni br. AX092328
Genbank verzija br. AX092328.1 GI:13444478
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jan 26, 201107:37 AM
Upućivanje u tekstu
[0203] US2004/0101899 (Patentni zahtev 2); WO2003104399 (Patentni zahtev 11); WO2004000221 (Sl. 3); US2003/165504 (Patentni zahtev 1); US2003/124140 (Primer 2); US2003/065143 (Sl.60); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; stranica 299); US2003/091580 (Primer 2); WO2002/10187 (Patentni zahtev 6; Sl. 10); WO2001/94641 (Patentni zahtev 12; Sl.7b); WO2002/02624 (Patentni zahtev 13; Sl.1A-1B); US2002/034749 (Patentni zahtev 54; stranice 45-46); WO2002/06317 (Primer 2; Stranica 320-321, Patentni zahtev 34; stranice 321-322); WO2002/71928 (stranice 468-469); WO2002/02587 (Primer 1; Sl. 1); WO2001/40269 (Primer 3; stranice 190-192); WO2000/36107 (Primer 2; stranice 205-207); WO2004/053079 (Patentni zahtev 12); WO2003/004989 (Patentni zahtev 1); WO2002/71928 (stranica 233-234, 452-453); WO 01/16318.
(24) PSCA (Prekursor antigena matičnih ćelija prostate)
Nukleotid
[0204]
Genbank pristupni br. AJ297436
Genbank verzija br. AJ297436.1 GI:9367211
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.1, 201111:25 AM
Polipeptid
[0205]
Genbank pristupni br. CAB97347
Genbank verzija br. CAB97347.1 GI:9367212
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.1, 201111:25 AM
Upućivanje u tekstu
[0206] Reiter R.E., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.95, 1735-1740, 1998; Gu Z., i dr. Oncogene 19, 1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Primer 11); US2004/018553 (Patentni zahtev 17); WO2003/008537 (Patentni zahtev 1); WO2002/81646 (Patentni zahtev 1; stranica 164); WO2003/003906 (Patentni zahtev 10; stranica 288); WO2001/40309 (Primer 1; Sl.
17); US2001/055751 (Primer 1; Sl. 1b); WO2000/32752 (Patentni zahtev 18; Sl. 1); WO98/51805 (Patentni
2
zahtev 17; stranica 97); WO98/51824 (Patentni zahtev 10; stranica 94); WO98/40403 (Patentni zahtev 2; Sl.
1B); Pristupanje: O43653; EMBL; AF043498; AAC39607,1
(25) GEDA
Nukleotid
[0207]
Genbank pristupni br. AY260763
Genbank verzija br. AY260763.1 GI:30102448
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201002:24 AM
Polipeptid
[0208]
Genbank pristupni br. AAP14954
Genbank verzija br. AAP14954.1 GI:30102449
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201002:24 AM
Upućivanje u tekstu
[0209] AP14954 lipoma HMGIC protein sličan fuzionom partneru /pid=AAP14954,1 - Homo sapiens (čovek); WO2003/054152 (Patentni zahtev 20); WO2003/000842 (Patentni zahtev 1); WO2003/023013 (Primer 3, Patentni zahtev 20); US2003/194704 (Patentni zahtev 45); GI:30102449;
(26) BAFF-R (receptor faktora koji aktivira B ćelije, BLiS receptor 3, BR3)
Nukleotid
[0210]
Genbank pristupni br. AF116456
Genbank verzija br. AF116456.1 GI:4585274
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201009:44 PM
Polipeptid
[0211]
Genbank pristupni br. AAD25356
Genbank verzija br. AAD25356.1 GI:4585275
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201009:44 PM
Upućivanje u tekstu
[0212] BAFF receptor /pid=NP_443177,1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., i dr. Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Primer; stranice 32-33); WO2003/014294 (Patentni zahtev 35; Sl. 6B); WO2003/035846 (Patentni zahtev 70; stranice 615-616); WO2002/94852 (Kol 136-137); WO2002/38766 (Patentni zahtev 3; stranica 133); WO2002/24909 (Primer 3; Sl. 3); MIM:606269; NP_443177,1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (izoforma CD22-B receptora B-ćelija, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814) Nukleotid
[0213]
Genbank pristupni br. AK026467
Genbank verzija br. AK026467.1 GI:10439337
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.11, 200611:24 PM
Polipeptid
Genbank pristupni br. BAB15489
Genbank verzija br. BAB15489.1 GI:10439338
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.11, 200611:24 PM
Upućivanje u tekstu
[0215] Wilson i dr. (1991) J. Exp. Med.173:137-146; WO2003/072036 (Patentni zahtev 1; Sl.1); IM:107266; NP_001762,1; NM_001771_1.
(27a) CD22 (CD22 molekul)
Nukleotid
[0216]
Genbank pristupni br. X52785
Genbank verzija br. X52785.1 GI:29778
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.2, 201110:09 AM
Polipeptid
[0217]
Genbank pristupni br. CAA36988
Genbank verzija br. CAA36988.1 GI:29779
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.2, 201110:09 AM
Upućivanje u tekstu
[0218] Stamenkovic I. i dr., Nature 345 (6270), 74-77 (1990)
Druge informacije
[0219]
Zvanični simbol: CD22
Drugi pseudonimi: SIGLEC-2, SIGLEC2
Ostale oznake: B-ćelijski receptor CD22; Molekul adhezije ćelija B-limfocita; BL-CAM; CD22 antigen; površinski antigen T-ćelija Leu-14; vezivanje sijalne kiseline nalik Ig lektinu 2; vezivanje sijalne kiseline nalik Ig lektinu 2
ANTITELA
[0220] G5/44 (Inotuzumab): DiJoseph JF.,i dr Cancer Immunol Immunother.2005 Jan;54(1):11-24.
Epratuzumab- Goldenberg DM., i dr. Expert Rev Anticancer Ther.6(10): 1341-53, 2006.
(28) CD79a (CD79A, CD79alpha), alfa povezan sa imunoglobulinom, protein specifičan za B ćelije koji kovalentno reaguje sa Ig beta (CD79B) i formira kompleks na površini sa Ig M molekulima, transdukuje signal uključen u B-ćeliju diferencijacija), pl: 4,84, MW: 25028 TM: 2
[P] Genski hromozom: 19q13,2).
Nukleotid
[0221]
Genbank pristupni br. NM_001783
Genbank verzija br. NM_001783.3 GI:90193587
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:48 PM
Polipeptid
1
Genbank pristupni br. NP_001774
Genbank verzija br. NP_001774.1 GI:4502685
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:48 PM
Upućivanje u tekstu
[0223] WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (patentni zahtev 9); US2002/150573 (patentni zahtev 4, stranice 13-14); WO99/58658 (patentni zahtev 13, Sl. 16); WO92/07574 (Sl. 1); US5644033; Ha i dr. (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Muller i dr. (1992) Eur. J. Immunol.. 22:1621-1625; Hashimoto i dr. (1994) Immunogenetics 40(4):287-295; Preud'homme i dr. (1992) Clin. Exp. Immunol.90(1):141-146; Yu i dr. (1992) J. Immunol.148(2) 633-637; Sakaguchi i dr. (1988) EMBO J.7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (Burkitov limfomski receptor 1, receptor povezan sa G proteinom koji se aktivira hemokinom CXCL13, funkcioniše u migraciji limfocita i humoralnoj odbrani, igra ulogu u HIV-2 infekciji i možda razvoju AIDS-a, limfoma, mijeloma i leukemije); 372 aa, pl: 8,54 MW: 41959 TM: 7 [P] Hromozom gena: 11q23,3,
Nukleotid
[0224]
Genbank pristupni br. NM_001716
Genbank verzija br. NM_001716.4 GI:342307092
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:49 PM
Polipeptid
[0225]
Genbank pristupni br. NP_001707
Genbank verzija br. NP_001707.1 GI:4502415
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:49 PM
Upućivanje u tekstu
[0226] WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Primer 2); US6555339 (Primer 2); WO2002/61087 (Sl.1); WO2001/57188 (Patentni zahtev 20, stranica 269); WO2001/72830 (stranice 12-13); WO2000/22129 (Primer 1, stranice 152-153, Primer 2, stranice 254-256); WO99/28468 (patentni zahtev 1, stranica 38); US5440021 (Primer 2, Kol 49-52); WO94/28931 (stranice 56-58); WO92/17497 (patentni zahtev 7, Sl.5); Dobner i dr. (1992) Eur. J. Immunol.22:2795-2799; Barella i dr. (1995) Biochem. J.309:773-779 (30) HLA-DOB (Beta podjedinica molekula MHC klase II (Ia antigen) koja vezuje peptide i predstavlja CD4+ T limfocitima); 273 aa, pl: 6,56, MW: 30820. TM: 1 [P] Hromozom gena: 6p21,3)
Nukleotid
[0227]
Genbank pristupni br. NM_002120
Genbank verzija br. NM_002120.3 GI:118402587
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.8, 201204:46 PM
Polipeptid
[0228]
Genbank pristupni br. NP_002111
Genbank verzija br. NP_002111.1 GI:4504403
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.8, 201204:46 PM
Upućivanje u tekstu
2
[0229] Tonnelle i dr. (1985) EMBO J.4(11):2839-2847; Jonsson i dr. (1989) Immunogenetics 29(6):411-413; Beck i dr. (1992) J. Mol. Biol. 228:433-441; Strausberg i dr. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius i dr. (1987) J. Biol. Chem.262:8759-8766; Beck i dr. (1996) J. Mol. Biol.255:1-13; Naruse i dr. (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (patentni zahtev 13, Sl.15); US6153408 (Kol 35-38); US5976551 (Kol 168-170); US6011146 (Kol 145-146); Kasahara i dr. (1989) Immunogenetics 30(1):66-68; Larhammar i dr. (1985) J. Biol. Chem.260(26):14111-14119
(31) P2X5 (jonski kanal 5 koji je zatvoren purinergičkim receptorom P2X ligandom, jonski kanal zatvoren vanćelijskim ATP-om, može biti uključen u sinaptičku transmisiju i neurogenezu, nedostatak može doprineti patofiziologiji idiopatske nestabilnosti detruzora); 422 aa), pl: 7,63, MW: 47206 TM: 1 [P] Hromozom gena: 17p13,3).
Nukleotid
[0230]
Genbank pristupni br. NM_002561
Genbank verzija br. NM_002561.3 GI:325197202
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:41 AM
Polipeptid
[0231]
Genbank pristupni br. NP_002552
Genbank verzija br. NP_002552.2 GI:28416933
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:41 AM
Upućivanje u tekstu
[0232] Le i dr. (1997) FEBS Lett.418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (patentni zahtev 10); Touchman i dr. (2000) Genome Res. 10:165-173; WO2002/22660 (patentni zahtev 20); WO2003/093444 (patentni zahtev 1); WO2003/087768 (patentni zahtev 1); WO2003/029277 (stranica 82)
(32) CD72 (Antigen diferencijacije B-ćelija CD72, Lyb-2); 359 aa, pl: 8,66, MW: 40225, TM: 1 [P] Hromozom gena: 9p13,3).
Nukleotid
[0233]
Genbank pristupni br. NM_001782
Genbank verzija br. NM_001782.2 GI:194018444
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:43 PM
Polipeptid
[0234]
Genbank pristupni br. NP_001773
Genbank verzija br. NP_001773.1 GI:4502683
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201201:43 PM
Upućivanje u tekstu
[0235] WO2004042346 (patentni zahtev 65); WO2003/026493 (stranice 51-52, 57-58); WO2000/75655 (stranice 105-106); Von Hoegen i dr. (1990) J. Immunol. 144(12):4870-4877; Strausberg i dr. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903.
(33) LY64 (limfocitni antigen 64 (RP105), membranski protein tipa I iz porodice ponavljanja bogatih leucinom (LRR), reguliše aktivaciju B-ćelija i apoptozu, gubitak funkcije je povezan sa povećanom aktivnošću bolesti kod pacijenata sa sistemskim eritematoznim lupusom); 661 aa, pl: 6,20, MW: 74147 TM: 1 [P] Hromozom gena: 5q12).
Nukleotid
[0236]
Genbank pristupni br. NM_005582
Genbank verzija br. NM_005582.2 GI:167555126
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:50 PM
Polipeptid
[0237]
Genbank pristupni br. NP_005573
Genbank verzija br. NP_005573.2 GI:167555127
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:50 PM
Upućivanje u tekstu
[0238] US2002/193567; WO97/07198 (patentni zahtev 11, stranice 39-42); Miura i dr. (1996) Genomics 38(3):299-304; Miura i dr. (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (patentni zahtev 8, stranice 57-61); WO2000/12130 (stranice 24-26).
(34) FcRH1 (protein 1 sličan Fc receptoru, navodni receptor za imunoglobulinski Fc domen koji sadrži C2 tip Ig slične i ITAM domene, može imati ulogu u diferencijaciji B-limfocita); 429 aa, pl: 5,28, MW: 46925 TM: 1 [P] Hromozom gena: 1q21-1q22)
Nukleotid
[0239]
Genbank pristupni br. NM_052938
Genbank verzija br. NM_052938.4 GI:226958543
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:43 PM
Polipeptid
[0240]
Genbank pristupni br. NP_443170
Genbank verzija br. NP_443170.1 GI:16418419
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.2, 201201:43 PM
Upućivanje u tekstu
[0241] WO2003/077836; WO2001/38490 (patentni zahtev 6, Sl.18E-1-18-E-2); Davis i dr. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (patentni zahtev 8); EP1347046 (patentni zahtev 1); WO2003/089624 (patentni zahtev 7).
(35) IRTA2 (translokacija receptora superfamilije imunoglobulina povezana 2, navodni imunoreceptor sa mogućim ulogama u razvoju B ćelija i limfomagenezi; deregulacija gena translokacijom se javlja kod nekih maligniteta B ćelija); 977 aa, pl: 6,88, MW: 106468, TM: 1 [P] Hromozom gena: 1q21)
Nukleotid
[0242]
Genbank pristupni br. AF343662
Genbank verzija br. AF343662.1 GI:13591709
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mart 11, 201001:16 AM
Polipeptid
[0243]
4
Genbank pristupni br. AAK31325
Genbank verzija br. AAK31325.1 GI:13591710
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mart 11, 201001:16 AM
Upućivanje u tekstu
[0244] AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Miš:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571,1; WO2003/024392 (patentni zahtev 2, Sl.
97); Nakayama i dr. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (patentni zahtev 3, Sl.18B-1-18B-2).
(36) TENB2 (TMEFF2, tomoregulin, TPEF, HPP1, TR, navodni transmembranski proteoglikan, koji se odnosi na familiju faktora rasta EGF/heregulin i folistatin); 374 aa)
Nukleotid
[0245]
Genbank pristupni br. AF179274
Genbank verzija br. AF179274.2 GI:12280939
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201001:05 AM
Polipeptid
[0246]
Genbank pristupni br. AAD55776
Genbank verzija br. AAD55776.2 GI:12280940
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 11, 201001:05 AM
Upućivanje u tekstu
[0247] NCBI pristup: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gen: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (stranice 69-70); WO2002/30268 (stranica 329); WO2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; US2004/005563; US2003/124579; Horie i dr. (2000) Genomics 67:146-152; Uchida i dr. (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang i dr. (2000) Cancer Res.60:4907-12; Glynne-Jones i dr. (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84.
(37) PSMA- FOLH1 (Folat hidrolaza (prostata-specifičan membranski antigen) 1)
Nukleotid
[0248]
Genbank pristupni br. M99487
Genbank verzija br. M99487.1 GI:190663
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Polipeptid
[0249]
Genbank pristupni br. AAA60209
Genbank verzija br. AAA60209.1 GI:190664
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Upućivanje u tekstu
[0250] Israeli R.S., i dr. Cancer Res.53 (2), 227-230 (1993)
Druge informacije
Zvanični simbol: FOLH1
Drugi pseudonimi: GIG27, FGCP, FOLH, GCP2, GCPII, NAALAD1, NAALAdase, PSM, PSMA, mGCP
Ostale oznake: N-acetilisana alfa-vezana kisela dipeptidaza 1; N-acetilisana alfa-vezana kisela dipeptidaza I; NAALADase I; protein gena 27 koji inhibira rast ćelija; folilpoli-gama-glutamat karboksipeptidaza; glutamat karboksilaze II; glutamat karboksipeptidaze 2; glutamat karboksipeptidaze II; membranski glutamat karboksipeptidaze; varijanta antigena membrane specifične za prostatu F; pteroilpoli-gama-glutamat karboksipeptidaza
ANTITELA
[0252] US 7,666,425:
Antitela proizvode hibridomi koji imaju sledeće ATCC reference: ATCC pristupni broj HB-12101, ATCC pristupni broj HB-12109, ATCC pristupni broj HB-12127 i ATCC pristupni broj HB-12126. Proscan: monoklonsko antitelo izabrano iz grupe koju čine 8H12, 3E11, 17G1, 29B4, 30C1 i 20F2 (US 7,811,564; Moffett S., i dr. Hybridoma (Larchmt).2007 Dec;26(6):363-72).
Citogen: monoklonska antitela 7E11-C5 (ATCC pristupni broj HB 10494) i 9H10-A4 (ATCC pristupni broj HB11430) - US 5,763,202
GlycoMimetics: NUH2 - ATCC pristupni br. HB 9762 (US 7,135,301)
Human Genome Science: HPRAJ70 - ATCC pristupni br. 97131 (US 6,824,993); Aminokiselinska sekvenca kodirana klonom cDNK (HPRAJ70) deponovanom kao američka zbirka tipova kultura ("ATCC") depozit br.97131
Medarex: Anti-PSMA antitela kojima nedostaju fukozilni ostaci - US 7,875,278
[0253] Mišja anti-PSMA antitela uključuju antitela 3F5,4G6, 3D7,1,1, 4E10-1,14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9 i 5C8B9. Hibridomi koji luče 3F5,4G6, 3D7,1,1, 4E10-1,14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9 ili su javno opisani i deponovani 4C8B9 U.S. Pat. br.
6,159,508. Relevantni hibridomi su javno deponovani i opisani su u U.S. Pat. br. 6,107,090. Štaviše, humanizovana anti-PSMA antitela, uključujući humanizovanu verziju J591, su detaljnije opisana u PCT objava WO 02/098897.
[0254] Druga mišja anti-humana PSMA antitela su opisana u struci, kao što je mAb 107-1A4 (Wang, S. i dr. (2001) Int. J. Cancer 92:871-876) i mAb 2C9 (Kato, K. i dr. (2003) Int. J. Urol.10:439-444).
[0255] Primeri humanih anti-PSMA monoklonskih antitela uključuju 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1C3 antitela, izolovana i strukturno okarakterisana kao što je prvobitno opisano u PCT objave WO 01/09192 i WO 03/064606 i u privremenoj prijavi SAD ser. br. 60/654,125, nazvan "Human Monoclonal Antibodies to Prostate Specific Membrane Antigen (PSMA)", podnesen Feb. 18, 2005. V.sub.H aminokiselinske sekvence 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1C3 su prikazane u SEQ ID NO: 1-9, respektivno. V.sub.L aminokiselinske sekvence 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1C3 su prikazane u SEQ ID NO: 10-18, respektivno.
[0256] Druga humana anti-PSMA antitela uključuju antitela obelodanjena u PCT objava WO 03/034903 i patentna prijava SAD br.2004/0033229.
[0257] NW Biotherapeutics: Hibridomska ćelijska linija izabrana iz grupe koju čine 3F5,4G6 koja ima ATCC pristupni broj HB12060, 3D7-1.I. ima ATCC pristupni broj HB12309, 4E10-1,14 ima ATCC pristupni broj HB12310, 3E11 (ATCC HB12488), 4D8 (ATCC HB12487), 3E6 (ATCC HB12486), 3C9 (ATCC HB12484), 2C7 (ATCC HB12490), 1G3 (ATCC HB12489), 3C4 (ATCC HB12494), 3C6 (ATCC HB12491), 4D4 (ATCC HB12493), 1G9 (ATCC HB12495), 5C8B9 (ATCC HB12492) i 3G6 (ATCC HB12485) - videti US 6,150,508 PSMA Development Company / Progenics / Cytogen - Seattle Genetics: mAb 3,9, proizveden od hibridoma deponovanog pod ATCC pristupnim brojem PTA-3258 ili mAb 10,3, proizveden od hibridoma deponovanog pod ATCC pristupnim br. PTA-3347 - US 7,850,971
PSMA Development Company – Sastavi PSMA antitela (US 20080286284, Tabela 1)
[0258] Ova patentna prijava je deonica patentne prijave SAD ser. br. 10/395,894, podnesena Mar. 21, 2003 (US 7,850,971)
[0259] University Hospital Freiburg, Germany - mAbs 3/A12, 3/E7, i 3/F11 (Wolf P., i dr. Prostate.2010 Apr 1;70(5):562-9).
(38) SST (Somatostatinski receptor; imajte na umu da postoji 5 podtipova) (38,1) SSTR2 (somatostatinski receptor 2)
Nukleotid
[0260]
Genbank pristupni br. NM_001050
Genbank verzija br. NM_001050.2 GI:44890054
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 19, 201201:37 PM
Polipeptid
[0261]
Genbank pristupni br. NP_001041
Genbank verzija br. NP_001041.1 GI:4557859
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 19, 201201:37 PM
Upućivanje u tekstu
[0262] Yamada Y., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.89 (1), 251-255 (1992); Susini C., i dr. Ann Oncol.2006 Dec;17(12):1733-42
Druge informacije
Zvanični simbol: SSTR2
[0263] Ostale oznake: SRIF-1; SS2R; somatostatinski receptor tipa 2
(38,2) SSTR5 (Somatostatinski receptor 5)
Nukleotid
[0264]
Genbank pristupni br. D16827
Genbank verzija br. D16827.1 GI:487683
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 1, 200612:45 PM
Polipeptid
[0265]
Genbank pristupni br. BAA04107
Genbank verzija br. BAA04107.1 GI:487684
Datum ažuriranja podataka Genbank: Aug 1, 200612:45 PM
Upućivanje u tekstu
[0266] Yamada,Y., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun.195 (2), 844-852 (1993)
Druge informacije
[0267]
Zvanični simbol: SSTR5
Drugi pseudonimi: SS-5-R
Ostale oznake: somatostatinski receptor tipa 5; somatostatinski receptor tipa 5
(38,3) SSTR1
(38,4)SSTR3
(38,5) SSTR4
AvB6 - Obe podjedinice (39+40)
(39) ITGAV (Integrin, alfa V;
Nukleotid
[0268]
Genbank pristupni br. M14648 J02826 M18365
Genbank verzija br. M14648.1 GI:340306
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:56 AM
Polipeptid
[0269]
Genbank pristupni br. AAA36808
Genbank verzija br. AAA36808.1 GI:340307
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:56 AM
Upućivanje u tekstu
[0270] Suzuki S., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.83 (22), 8614-8618 (1986)
Druge informacije
[0271]
Zvanični simbol: ITGAV
Drugi pseudonimi: CD51, MSK8, VNRA, VTNR
Ostale oznake: antigen identifikovan monoklonskim antitelom L230; integrin alfa-V; integrin alpfaVbeta3; integrin, alfa V (receptor vitronektina, alfa polipeptid, antigen CD51); podjedinica receptora vitronektina alfa
(40) ITGB6 (Integrin, beta 6)
Nukleotid
[0272]
Genbank pristupni br. NM_000888
Genbank verzija br. NM_000888.3 GI:9966771
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:46 AM
Polipeptid
[0273]
Genbank pristupni br. NP_000879
Genbank verzija br. NP_000879.2 GI:9625002
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 27, 201212:46 AM
Upućivanje u tekstu
[0274] Sheppard D.J., i dr. Biol. Chem.265 (20), 11502-11507 (1990)
Druge informacije
Zvanični simbol: ITGB6
[0275] Ostale oznake: integrin beta-6
ANTITELA
[0276] Biogen: US 7,943,742 - Hibridomski klonovi 6,3G9 i 6,8G6 su deponovani kod ATCC, pristupni brojevi ATCC PTA-3649 i -3645, respektivno.
[0277] Biogen: US7,465,449 - U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži iste polipeptidne sekvence teškog i lakog lanca kao i antitelo proizvedeno hibridomom 6,1A8, 6,3G9, 6,8G6, 6,2B1, 6,2B10, 6,2A1, 6,2E5, 7,1G10, 7,7G5, ili 7,1C5.
Centocor (J&J): US7,550,142; US7,163,681
[0278] Na primer u US 7,550,142 - antitelo koje ima varijabilne regione humanog teškog lanca i humanog lakog lanca koje sadrži sekvence aminokiselina prikazane u SEQ ID NO: 7 i SEQ ID NO: 8.
Seattle Genetics: 15H3 (Ryan MC., i dr. Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4630)
(41) CEACAM5 (Molekul ćelijske adhezije vezan za karcinoembrionalni antigen 5)
Nukleotid
[0279]
Genbank pristupni br. M17303
Genbank verzija br. M17303.1 GI:178676
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Polipeptid
[0280]
Genbank pristupni br. AAB59513
Genbank verzija br. AAB59513.1 GI:178677
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Upućivanje u tekstu
[0281] Beauchemin N., i dr. Mol. Cell. Biol.7 (9), 3221-3230 (1987)
Druge informacije
[0282]
Zvanični simbol: CEACAM5
Drugi pseudonimi: CD66e, CEA
Ostale oznake: mekonijum antigen 100
ANTITELA
[0283] AstraZeneca-Medlmmune:US 20100330103; US20080057063;
US20020142359
• na primer antitelo koje ima regione koji određuju komplementarnost (CDR) sa sledećim sekvencama:
teški lanac: CDR1 - DNYMH, CDR2 - WIDPENGDTE YAPKFRG, CDR3 - LIYAGYLAMD Y; i laki lanac CDR1 - SASSSVTYMH, CDR2 - STSNLAS, CDR3 - QQRSTYPL T.
• Hibridoma 806,077 deponovan kao Evropska zbirka ćelijskih kultura (ECACC) depozit br.
96022936.
Research Corporation Technologies, Inc.:US5,047,507
Bayer Corporation: US6,013,772
BioAlliance: US7,982,017; US7,674,605
[0284]
• US 7,674,605
o antitelo koje sadrži sekvencu varijabilnog regiona teškog lanca iz sekvence aminokiselina SEQ ID NO: 1, i sekvencu varijabilnog regiona lakog lanca iz sekvence aminokiselina SEQ ID NO:2.
o antitelo koje sadrži sekvencu varijabilnog regiona teškog lanca iz aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:5, i sekvencu varijabilnog regiona lakog lanca iz sekvence aminokiselina SEQ ID NO:6.
Celltech Therapeutics Limited: US5,877,293
The Dow Chemical Company: US5,472,693; US6,417,337; US6,333,405
[0285]
US5,472,693 - na primer, ATCC br. CRL-11215
US6,417,337 - na primer, ATCC CRL-12208
US6,333,405 - na primer, ATCC CRL-12208
Immunomedics, Inc: US7,534,431; US7,230,084; US7,300,644; US6,730,300;
[0286]
US20110189085
• antitelo koje ima CDR varijabilnog regiona lakog lanca obuhvata: CDR1 koji sadrži KASQDVGTSVA (SEQ ID NO: 20); CDR2 koji sadrži WTSTRHT (SEQ ID NO: 21); i CDR3 koji sadrži QQYSLYRS (SEQ ID NO: 22); i CDR varijabilnog regiona teškog lanca navedenog anti-CEA antitela obuhvataju: CDR1 koji sadrži TYWMS (SEQ ID NO: 23); CDR2 koji sadrži EIHPDSSTINYAPSLKD (SEQ ID NO: 24); i CDR3 koji sadrži LYFGFPWFAY (SEQ ID NO: 25).
US20100221175; US20090092598; US20070202044; US20110064653;
US20090185974; US20080069775.
(42) MET (met proto-onkogen; receptor faktora rasta hepatocita)
Nukleotid
[0287]
Genbank pristupni br. M35073
Genbank verzija br. M35073.1 GI:187553
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 6, 201211:12 AM
Polipeptid
[0288]
Genbank pristupni br. AAA59589
Genbank verzija br. AAA59589.1 GI:553531
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 6, 201211:12 AM
Upućivanje u tekstu
[0289] Dean M., i dr. Nature 318 (6044), 385-388 (1985)
Druge informacije
[0290]
Zvanični simbol: MET
Drugi pseudonimi: AUTS9, HGFR, RCCP2, c-Met
Ostale oznake: HGF receptor; HGF/SF receptor; SF receptor; receptor faktora rasta hepatocita; met proto-onkogena tirozin kinaza; proto-onkogen c-Met; receptor faktora raspršivanja; tirozin-protein
4
kinaza Met
ANTITELA
[0291] Abgenix/Pfizer: US20100040629
na primer, antitelo proizvedeno hibridomom 13,3,2 koji ima pristupni broj američke zbirke tipskih kultura (ATCC) PTA-5026; antitelo proizvedeno od hibridoma 9,1,2 koje ima ATCC pristupni broj PTA-5027; antitelo proizvedeno od hibridoma 8,70,2 koje ima ATCC pristupni broj PTA-5028; ili antitelo proizvedeno hibridomom 6,90,3 koje ima ATCC pristupni broj PTA-5029.
[0292] Amgen/Pfizer: US20050054019
na primer, antitelo koje sadrži teški lanac koji ima aminokiselinske sekvence koje su navedene u SEQ ID NO: 2 gde je X2 glutamat, a X4 je serin i laki lanac koji ima sekvencu aminokiselina datu u SEQ ID NO: 4 gde je X8 alanin, bez signalnih sekvenci; antitelo koje sadrži teški lanac koji ima aminokiselinske sekvence date u SEQ ID NO: 6 i laki lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu datu u SEQ ID NO: 8, bez signalizirajuće sekvence; antitelo koje sadrži teški lanac koji ima aminokiselinske sekvence date u SEQ ID NO: 10 i laki lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu datu u SEQ ID NO: 12, bez signalizirajuće sekvence; ili antitelo koje sadrži teški lanac koji ima aminokiselinske sekvence date u SEQ ID NO: 14 i laki lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu datu u SEQ ID NO: 16, bez signalizirajuće sekvence.
Agouron Pharmaceuticals (Sada Pfizer): US20060035907
Eli Lilly: US20100129369
[0293] Genentech: US5,686,292; US20100028337; US20100016241; US20070129301; US20070098707; US20070092520, US20060270594; US20060134104; US20060035278; US20050233960; US20050037431 US 5,686,292 - na primer, ATCC HB-11894 i ATCC HB-11895
US 20100016241 -na primer, ATCC HB-11894 (hibridoma 1A3,3,13) ili HB-11895 (hibridoma 5D5,11,6)
[0294] National Defense Medical Center, Taiwan: Lu RM., i dr. Biomaterials.2011 Apr;32(12):3265-74.
[0295] Novartis: US20090175860
• na primer, antitelo koje sadrži sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 teškog lanca 4687, pri čemu su sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 teškog lanca 4687 ostaci 26-35, 50-65 i 98-102, respektivno, SEQ ID NO: 58; i sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 lakog lanca 5097, pri čemu su sekvence CDR1, CDR2 i CDR3 lakog lanca 5097 ostaci 24-39, 55-61 i 94-100 SEQ ID NO: 37.
Pharmacia Corporation: US20040166544
Pierre Fabre: US20110239316, US20110097262, US20100115639
[0296] Sumsung: US 20110129481 - na primer monoklonsko antitelo proizvedeno iz hibridomske ćelije koja ima pristupni broj KCLRF-BP-00219 ili pristupni broj KCLRF-BP-00223.
[0297] Samsung: US 20110104176 - na primer antitelo proizvedeno od strane hibridomske ćelije koja ima pristupni broj: KCLRF-BP-00220.
[0298] University of Turin Medical School: DN-30 Pacchiana G., i dr. J Biol Chem. 2010 Nov 12;285(46):36149-57
[0299] Van Andel Research Institute: Jiao Y., i dr. Mol Biotechnol.2005 Sep;31(1):41-54.
(43) MUC1 (Mucin 1, povezana sa ćelijskom površinom)
Nukleotid
[0300]
Genbank pristupni br. J05581
Genbank verzija br. J05581.1 GI:188869
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Polipeptid
Genbank pristupni br. AAA59876
Genbank verzija br. AAA59876.1 GI:188870
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:48 AM
Upućivanje u tekstu
[0302] Gendler S.J., i dr. J. Biol. Chem.265 (25), 15286-15293 (1990)
Druge informacije
[0303]
Zvanični simbol: MUC1
Drugi pseudonimi: RP11-263K19,2, CD227, EMA, H23AG, KL-6, MAM6, MUC-1, MUC-1/SEC, MUC-1/X, MUC1/ZD, PEM, PEMT, PUM
Ostale oznake: DF3 antigen; H23 antigen; antigen DF3 povezan sa karcinomom dojke; mucin povezan sa karcinomom; episialin; krebs von den Lungen-6; mucin 1, transmembranski; mucin-1; urinarni mucin koji reaguje na kikiriki; polimorfni epitelni mucin; epitelni mucin povezan sa tumorom; antigen epitelne membrane povezan sa tumorom; mucin povezan sa tumorom
ANTITELA
[0304] AltaRex- Quest Pharma Tech: US 6,716,966 - na primer, Alt-1 antitelo proizvedeno od hibridoma ATCC br. PTA-975.
AltaRex- Quest Pharma Tech: US7,147,850
[0305] CRT: 5E5 - Sorensen AL., i dr. Glycobiology vol.16 br.2 str.96-107, 2006; HMFG2 - Burchell J., i dr. Cancer Res., 47, 5476-5482 (1987); videti WO2015/159076
[0306] Glycotope GT-MAB: GT-MAB 2,5-GEX (Website: http://www.glycotope.com/pipeline/pankomab-gex)
Immunogen: US7,202,346
• na primer, antitelo MJ-170: ćelijska linija hibridoma MJ-170 ATCC pristupni br. PTA-5286 Monoklonsko antitelo MJ-171: ćelijska linija hibridoma MJ-171 ATCC pristupni br. PTA-5287; monoklonsko antitelo MJ-172: ćelijska linija hibridoma MJ-172 ATCC pristupni br. PTA-5288; ili monoklonsko antitelo MJ-173: ćelijska linija hibridoma MJ-173 ATCC pristupni br. PTA-5302 Immunomedics: US 6,653,104
Ramot Tel Aviv Uni: US7,897,351
Regents Uni. CA: US 7,183,388; US20040005647; US20030077676.
Roche GlycArt: US8,021,856
Russian National Cancer Research Center: Imuteran- Ivanov PK., i dr. Biotechnol J.2007 Jul;2(7):863-70
Technische Univ Braunschweig: (IIB6, HT186-B7, HT186-D11, HT186-G2, HT200-3A-C1, HT220-M-D1, HT220-M-G8) - Thie H., i dr. PLoS One.2011 Jan 14;6(1):e15921
(44) CA9 (karbonska anhidraza IX)
Nukleotid
[0307]
Genbank pristupni br. X66839
Genbank verzija br. X66839.1 GI:1000701
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.2, 201110:15AM
Polipeptid
[0308]
Genbank pristupni br. CAA47315
Genbank verzija br. CAA47315.1 GI:1000702
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.2, 201110:15 AM
Upućivanje u tekstu
[0309] Pastorek J., i dr. Oncogene 9 (10), 2877-2888 (1994)
Druge informacije
[0310]
Zvanični simbol: CA9
Drugi pseudonimi: CAIX, MN
Ostale oznake: CA-IX; P54/58N; RCC-povezani antigen G250; RCC-povezani protein G250; karbonat dehidrataza IX; karbonska anhidraza 9; karbonska dehidrataza; membranski antigen MN; pMW1; antigen G250 povezan sa karcinomom bubrežnih ćelija
ANTITELA
[0311]
Abgenix/Amgen: US20040018198
Afitelo: Molekuli anti-CAIX afitela
(http://www.affibody.com/en/Product-Portfolio/Pipeline/)
Bayer: US7,462,696
Bayer/Morphosys: 3ee9 mAb - Petrul HM., i dr. Mol Cancer Ther.2012 Feb;11(2):340-9 Harvard Medical School: Antibodies G10, G36, G37, G39, G45, G57, G106, G119, G6, G27, G40 i G125. Xu C., i dr. PLoS One.2010 Mar 10;5(3):e9625
Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences (Bayer) - US5,955,075
• ma primer, M75- ATCC pristupni br. HB 11128 ili MN12- ATCC pristupni br. HB 11647 Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences: US7,816,493
• na primer monoklonsko antitelo M75 koje se izlučuje iz hibridoma VU-M75, koje je deponovano u Američku Kolekciju Tipskih Kultura pod ATCC br. HB 11128; ili V/10 monoklonsko antitelo izlučeno iz hibridoma V/10-VU, koje je deponovano u Međunarodnom depozitarnom organu Belgijske koordinisane kolekcije mikroorganizama (BCCM) u Laboratoriju za Moleculaire Bioloqie-Plasmidencollectie (LMBP) na Univerzumu u Gentu, Belgija, pod pristupnim brojem LMBP 6009CB.
Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences US20080177046; US20080176310; US20080176258; US20050031623
Novartis: US20090252738
Wilex: US7,691,375 - na primer antitelo proizvedeno od strane hibridomske ćelijske linije DSM ASC 2526.
Wilex: US20110123537; Rencarex: Kennett RH., i dr. Curr Opin Mol Ther.2003 Feb;5(1):70-5 Xencor: US20090162382
(45) EGFRvIII (receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), transkript varijanta 3,
Nukleotid
[0312]
4
Genbank pristupni br. NM_201283
Genbank verzija br. NM_201283.1 GI:41327733
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
Polipeptid
[0313]
Genbank pristupni br. NP_958440
Genbank verzija br. NP_958440.1 GI:41327734
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
Upućivanje u tekstu
[0314] Batra SK., i dr. Cell Growth Differ 1995;6:1251-1259.
ANTITELA:
US7,628,986 i US7,736,644 (Amgen)
[0315] Na primer, sekvenca aminokiselina varijabilnog regiona teškog lanca izabrana iz grupe koju čine SEQ ID NO: 142 i varijante i sekvenca aminokiselina varijabilnog regiona lakog lanca izabrana iz grupe koju čine: SEQ ID NO: 144 i varijante.
US20100111979 (Amgen)
[0316] Na primer, antitelo koje sadrži sekvencu aminokiselina teškog lanca koja sadrži:
CDR1 koji se sastoji od sekvence izabrane iz grupe koju čine sekvence aminokiselina za CDR1 region antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17); CDR2 koji se sastoji od sekvence izabrane iz grupe koju čine sekvence aminokiselina za CDR2 region antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17); i
CDR3 koji se sastoji od sekvence izabrane iz grupe koju čine sekvence aminokiselina za CDR3 region antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
US20090240038 (Amgen)
[0317] Na primer, antitelo koje ima najmanje jedan od polipeptida teškog ili lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična sekvenci aminokiselina izabranoj iz grupe koju čine: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, i bilo koja njihova kombinacija.
US20090175887 (Amgen)
[0318] Na primer, antitelo koje ima sekvencu aminokiselina teškog lanca izabranu iz grupe koju čine sekvenca aminokiselina teškog lanca antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
US20090156790 (Amgen)
[0319] Na primer, antitelo koje ima polipeptid teškog lanca i polipeptid lakog lanca, pri čemu najmanje jedan od polipeptida teškog ili lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična sekvenci aminokiselina izabranoj iz grupe koju čine: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, i bilo koja njihova kombinacija.
US20090155282, US20050059087 i US20050053608 (Amgen)
[0320] Na primer, sekvenca aminokiselina teškog lanca antitela izabrana iz grupe koju čine sekvenca aminokiselina teškog lanca antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
MR1-1 (US7,129,332; Duke)
[0321] Na primer, varijanta antitela koje ima sekvencu SEQ ID NO,18 sa supstitucijama S98P-T99Y u CDR3 VH, i F92W u CDR3 VL.
L8A4, H10, Y10 (Wikstrand CJ., i dr. Cancer Res.1995 Jul 15;55(14):3140-8; Duke) US20090311803 (Harvard University)
[0322] Na primer, SEQ ID NO:9 za varijabilni region teškog lanca antitela, i SEQ ID NO: 3 za sekvence aminokiselina varijabilnog regiona lakog lanca
US20070274991 (EMD72000, takođe poznat kao matuzumab; Harvard University)
[0323] Na primer, SEQ ID NOs: 3 & 9 za laki i teški lanac respektivno
US6,129,915 (Schering)
[0324] Na primer, SEQ. ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 i 6.
mAb CH12 - Wang H., i dr. FASEB J.2012 Jan;26(1):73-80 (Shanghai Cancer Institute).
RAbDMvIII - Gupta P., i dr. BMC Biotechnol.2010 Oct 7;10:72 (Stanford University Medical Center). mAb Ua30 - Ohman L., i dr. Tumour Biol.2002 Mar-Apr;23(2):61-9 (Uppsala University).
Han DG., i dr. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao.2010 Jan;30(1):25-9 (Xi'an Jiaotong University). (46) CD33 (CD33 molekul)
Nukleotid
[0325]
Genbank pristupni br. M_23197
Genbank verzija br. NM_23197.1 GI:180097
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Polipeptid
[0326]
Genbank pristupni br. AAA51948
Genbank verzija br. AAA51948.1 GI:188098
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Upućivanje u tekstu
[0327] Simmons D., i dr. J. Immunol.141 (8), 2797-2800 (1988)
Druge informacije
[0328]
Zvanični simbol: CD33
Drugi pseudonimi: SIGLEC-3, SIGLEC3, p67
Ostale oznake: CD33 antigen (gp67); gp67; površinski antigen mijeloidne ćelije CD33; vezivanje sijalne kiseline nalik Ig lektinu 3; vezivanje sijalne kiseline nalik Ig lektinu
ANTITELA
[0329]
H195 (Lintuzumab)- Raza A., i dr. Leuk Lymphoma. 2009 Aug;50(8):1336-44; US6,759,045 (Seattle Genetics/Immunomedics)
4
mAb OKT9: Sutherland, D.R. i dr. Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-45191981, Schneider,C., i dr. J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982)
mAb E6: Hoogenboom,H.R., i dr. J Immunol 144, 3211-3217 (1990)
US6,590,088 (Human Genome Sciences)
Na primer, SEQ ID NOs: 1 i 2 i ATCC pristupni br.97521
US7,557,189 (Immunogen)
[0330] Na primer, antitelo ili njegov fragment koji sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži tri CDR-a koji imaju sekvence aminokiselina SEQ ID NO:1-3 i varijabilni region lakog lanca koji sadrži tri CDR-a koji imaju sekvence aminokiselina SEQ ID NO:4-6.
(47) CD19 (CD19 molekul)
Nukleotid
[0331]
Genbank pristupni br. NM_001178098
Genbank verzija br. NM_001178098.1 GI:296010920
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.10, 201212:43 AM
Polipeptid
[0332]
Genbank pristupni br. NP_001171569
Genbank verzija br. NP_001171569.1 GI:296010921
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.10, 201212:43 AM
Upućivanje u tekstu
[0333] Tedder TF., i dr. J. Immunol.143 (2): 712-7 (1989)
Druge informacije
[0334]
Zvanični simbol: CD19
Drugi pseudonimi: B4, CVID3
Ostale oznake: B-limfocitni antigen CD19; površinski B-limfocitni antigen B4; površinski B-limfocitni antigen B4; diferencijacijski antigen CD19
ANTITELA
[0335] Immunogen: HuB4 - Al-Katib AM., i dr. Clin Cancer Res.2009 Jun 15;15(12):4038-45.
4G7: Kügler M., i dr. Protein Eng Des Sel.2009 Mar;22(3):135-47
[0336] Na primer, sekvence na Sl.3 Knappik, A. i dr. J Mol Biol 2000 Feb;296(1):57-86
AstraZeneca /Medlmmune: MEDI-551 - Herbst R., i dr. J Pharmacol Exp Ther. 2010 Oct;335(1):213-22
Glenmark Pharmaceuticals: GBR-401 - Hou S., i dr. Mol Cancer Ther November 2011 (Meeting Abstract Supplement) C164
US7,109,304 (Immunomedics)
[0337] Na primer, antitelo koje sadrži sekvencu hA19Vk (SEQ ID NO:7) i sekvencu hA19VH (SEQ ID NO:10)
US7,902,338 (Immunomedics)
[0338] Na primer, antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji sadrži CDR sekvence CDR1
4
regiona koji određuje komplementarnost lakog lanca SEQ ID NO: 16 (KASQSVDYDGDSYLN); CDR2 SEQ ID NO: 17 (DASNLVS); i CDR3 SEQ ID NO: 18 (QQSTEDPWT) i CDR sekvence teškog lanca CDR1 SEQ ID NO: 19 (SYWMN); CDR2 SEQ ID NO: 20 (QIWPGDGDTNYNGKFKG) i CDR3 SEQ ID NO: 21 (RETTTVGRYYYAMDY) i takođe sadrži okvir humanog antitela (FR) i sekvence konstantnog regiona sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka okvirnog regiona koji su supstituisani sa odgovarajućih sekvenci okvirnog regiona roditeljskog mišjeg antitela, i gde pomenuti supstituisani FR ostaci sadrže supstituciju serina za fenilalanin u Kabatu ostatak 91 varijabilnog regiona teškog lanca.
[0339] Medarex: MDX-1342 - Cardarelli PM., i dr. Cancer Immunol Immunother.2010 Feb;59(2):257 -65.
[0340] MorphoSys /Xencor: MOR-208/XmAb-5574 - Zalevsky J., i dr. Blood.2009 Apr 16;113(16):3735-43 US7,968,687 (Seattle Genetics)
[0341] Antitelo ili fragment koji se vezuje za antigen koji sadrži varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:9 i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži sekvencu aminokiselina SEQ ID NO: 24.
4G7 chim - Lang P., i dr. Blood.2004 May 15;103(10):3982-5 (University of Tübingen)
[0342] Na primer, Sl. 6 i SEQ ID NO: 80 US20120082664 Zhejiang University School of Medicine: 2E8 -Zhang J., i dr. J Drug Target.2010 Nov;18(9):675-8
(48) IL2RA (Interleukin 2 receptor, alfa); NCBI referentna sekvenca: NM_000417,2);
Nukleotid
[0343]
Genbank pristupni br. NM_000417
Genbank verzija br. NM_000417.2 GI:269973860
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.09, 201204:59 PM
Polipeptid
[0344]
Genbank pristupni br. NP_000408
Genbank verzija br. NP_000408.1 GI:4557667
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.09, 201204:59 PM
Upućivanje u tekstu
[0345] Kuziel W.A., i dr. J. Invest. Dermatol.94 (6 SUPPL), 27S-32S (1990)
Druge informacije
[0346]
Zvanični simbol: IL2RA
Drugi pseudonimi: RP11-536K7,1, CD25, IDDM10, IL2R, TCGFR
Ostale oznake: FIL-2 receptorska podjedinica alfa; IL-2-RA; IL-2R podjedinica alfa; IL2-RA; TAC antigen; podjedinica receptora interleukina-2 alfa; p55
ANTITELA US6,383,487 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
US6,521,230 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
[0347] Na primer, antitelo koje ima mesto za vezivanje antigena sadrži najmanje jedan domen koji sadrži CDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu u SEQ. ID. NO: 7, CDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu u SEQ. ID. NO: 8, i CDR3 koji prati aminokiselinsku sekvencu u SEQ. ID. NO: 9; ili navedeni CDR1, CDR2 i CDR3 uzeti u sekvenci kao celina sadrže aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 90% identična SEQ. ID. NOs: 7, 8 i 9 uzeti u sekvenci u celini.
4
Daclizumab - Rech AJ., i dr. Ann N YAcad Sci.2009 Sep;1174:99-106 (Roche)
(49) AXL (AXL receptor tirozin kinaze)
Nukleotid
[0348]
Genbank pristupni br. M76125
Genbank verzija br. M76125.1 GI:292869
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:53 AM
Polipeptid
[0349]
Genbank pristupni br. AAA61243
Genbank verzija br. AAA61243.1 GI:29870
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:53 AM
Upućivanje u tekstu
[0350] O'Bryan J.P., i dr. Mol. Cell. Biol. 11 (10), 5016-5031 (1991); Bergsagel P.L., i dr. J. Immunol. 148 (2), 590-596 (1992)
Druge informacije
[0351]
Zvanični simbol: AXL
Drugi pseudonimi: JTK11, UFO
Ostale oznake: AXL onkogen; AXL transformišuća sekvenca/gen; onkogen AXL; receptor tirozinprotein kinaze NLO
ANTITELA
[0352]
YW327,6S2 - Ye X., i dr. Oncogene.2010 Sep.23;29(38):5254-64. (Genentech)
BergenBio: BGB324 (http://www.bergenbio.com/BGB324)
(50) CD30 - TNFRSF8 (superfamilija receptora faktora nekroze tumora, član 8)
Nukleotid
[0353]
Genbank pristupni br. M83554
Genbank verzija br. M83554.1 GI:180095
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:53 AM
Polipeptid
[0354]
Genbank pristupni br. AAA51947
Genbank verzija br. AAA51947.1 GI:180096
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:53 AM
Upućivanje u tekstu
[0355] Durkop H., i dr. Cell 68 (3), 421-427 (1992)
Druge informacije
[0356]
4
Zvanični simbol: TNFRSF8
Drugi pseudonimi: CD30, D1S166E, Ki-1
Ostale oznake: CD30L receptor; Ki-1 antigen; citokinski receptor CD30; antigen aktivacije limfocita CD30; član superporodice receptora faktora tumorske nekroze 8
(51) BCMA (antigen sazrevanja B-ćelija) - TNFRSF17 (superfamilija receptora faktora nekroze tumora, član 17)
Nukleotid
[0357]
Genbank pristupni br. Z29574
Genbank verzija br. Z29574.1 GI:471244
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:40 AM
Polipeptid
[0358]
Genbank pristupni br. CAA82690
Genbank verzija br. CAA82690.1 GI:471245
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:40 AM
Upućivanje u tekstu
[0359] Laabi Y., i dr. Nucleic Acids Res.22 (7), 1147-1154 (1994)
Druge informacije
[0360]
Zvanični simbol: TNFRSF17
Drugi pseudonimi: BCM, BCMA, CD269
Ostale oznake: antigen sazrevanja B ćelija; faktor sazrevanja B ćelija; protein sazrevanja B ćelija; član superporodice receptora faktora tumorske nekroze 17
(52) CT Ags - CTA (antigeni raka testisa)
Upućivanje u tekstu
[0361] Fratta E., i dr. Mol Oncol.2011 Apr;5(2):164-82; Lim SH., i dr. Am J Blood Res.2012;2(1):29-35.
(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3 (fukoziltransferaza 3 (galaktozid 3(4)-L-fukoziltransferaza, Luisova krvna grupa)
Nukleotid
[0362]
Genbank pristupni br. NM000149
Genbank verzija br. NM000149.3 GI:148277008
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201204:49 PM
Polipeptid
[0363]
Genbank pristupni br. NP_000140
Genbank verzija br. NP_000140.1 GI:4503809
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 26, 201204:49 PM
Upućivanje u tekstu
4
[0364] Kukowska-Latallo,J.F., i dr. Genes Dev.4 (8), 1288-1303 (1990)
Druge informacije
[0365]
Zvanični simbol: FUT3
Drugi pseudonimi: CD174, FT3B, FucT-III, LE, Les
Ostale oznake: Lewis FT; alfa-(1,3/1,4)-fukoziltransferaza; krvna grupa Lewis alfa-4-fukoziltransferaza; fukoziltransferaza III; galaktozid 3(4)-L-fukoziltransferaza
(54) CLEC14A (familija 14 lektinskog domena C-tipa, član A; Genbank pristupni br. NM175060) Nukleotid
[0366]
Genbank pristupni br. NM175060
Genbank verzija br. NM175060.2 GI:371123930
Datum ažuriranja podataka Genbank: Apr.01, 201203:34 PM
Polipeptid
[0367]
Genbank pristupni br. NP_778230
Genbank verzija br. NP_778230.1 GI:28269707
Datum ažuriranja podataka Genbank: Apr.01, 201203:34 PM
Druge informacije
[0368]
Zvanični simbol: CLEC14A
Drugi pseudonimi: UNQ236/PRO269, C14orf27, CEG1, EGFR-5
Ostale oznake: porodica lektinskih domena C-tipa 14 članova A; CIECT i EGF-u sličan domen koji sadrži protein; receptor epidermalnog faktora rasta 5
(55) GRP78 - HSPA5 (toplotni šok 70kDa protein 5 (protein regulisan glukozom, 78kDa)
Nukleotid
[0369]
Genbank pristupni br. NM005347
Genbank verzija br. NM005347.4 GI:305855105
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:42 PM
Polipeptid
[0370]
Genbank pristupni br. NP_005338
Genbank verzija br. NP_005338.1 GI:16507237
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:42 PM
Upućivanje u tekstu
[0371] Ting J., i dr. DNA 7 (4), 275-286 (1988)
Druge informacije
[0372]
Zvanični simbol: HSPA5
Drugi pseudonimi: BIP, GRP78, MIF2
Ostale oznake: 78 kDa protein regulisan glukozom; endoplazmatski retikulum lumenalni Ca(2+)-vezujući protein grp78; protein koji vezuje teški lanac imunoglobulina
(56) CD70 (CD70 molekul) L08096
Nukleotid
[0373]
Genbank pristupni br. L08096
Genbank verzija br. L08096.1 GI:307127
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201208:54 AM
Polipeptid
[0374]
Genbank pristupni br. AAA36175
Genbank verzija br. AAA36175.1 GI:307128
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201208:54 AM
Upućivanje u tekstu
[0375] Goodwin R.G., i dr. Cell 73 (3), 447-456 (1993)
Druge informacije
[0376]
Zvanični simbol: CD70
Drugi pseudonimi: CD27L, CD27LG, TNFSF7
Ostale oznake: CD27 ligand; CD27-L; CD70 antigen; Ki-24 antigen; površinski antigen CD70; faktor nekroze tumora (ligand) super porodica, član 7; faktor nekroze tumora ligand super porodica, član 7 ANTITELA MDX-1411 protiv CD70 (Medarex)
h1F6 (Oflazoglu, E., i dr, Clin Cancer Res.2008 Okt.1;14(19):6171-80; Seattle Genetics)
[0377] Na primer, videti US20060083736 SEQ ID NOs: 1, 2, 11 i 12 i Sl.1.
(57) Antigeni specifični za matične ćelije. Na primer:
[0378]
• 5T4 (pogledajte unos (63) ispod)
• CD25 (pogledajte unos (48) iznad)
• CD32
• ∘ Polipeptid
▪ Genbank pristupni br. ABK42161
▪ Genbank pristupni br. ABK42161,1 GI:117616286
▪ Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 25, 200703:00 PM
• LGR5/GPR49
∘ Nukleotid
▪ Genbank pristupni br. NM_003667
▪ Genbank pristupni br. NM_003667,2 GI:24475886
▪ Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201203:38 PM
1
∘ Polipeptid
▪ Genbank pristupni br. NP_003658
▪ Genbank pristupni br. NP_003658,1 GI:4504379
▪ Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 22, 201203:38 PM
• Prominin/CD133
∘ Nukleotid
▪ Genbank pristupni br. NM_006017
▪ Genbank pristupni br. NM_006017,2 GI:224994187
▪ Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
∘ Polipeptid
▪ Genbank pristupni br. NP_006008
▪ Genbank pristupni br. NP_006008,1 GI:5174387
▪ Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
(58) ASG-5
Upućivanje u tekstu
[0379] (Smith L.M., et.al AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590); Gudas J.M., et.al. AACR 2010 Annual Meeting (abstract #4393)
ANTITELA
[0380] Anti- AGS-5 Antitelo: M6,131 (Smith, L.M., et.al AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590) (59) ENPP3 (Ektonukleotid pirofosfataza/fosfodiesteraza 3)
Nukleotid
[0381]
Genbank pristupni br. AF005632
Genbank verzija br. AF005632.2 GI:4432589
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mart 10, 201009:41 PM
Polipeptid
[0382]
Genbank pristupni br. AAC51813
Genbank verzija br. AAC51813.1 GI:2465540
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201009:41 PM
Upućivanje u tekstu
[0383] Jin-Hua P., i dr. Genomics 45 (2), 412-415 (1997)
Druge informacije
[0384]
Zvanični simbol: ENPP3
Drugi pseudonimi: RP5-988G15,3, B10, CD203c, NPP3, PD-IBETA, PDNP3
Ostale oznake: E-NPP 3; dJ1005H11,3 (fosfodiesteraza 1/nukleotid pirofosfataza 3); dJ914N13,3 (fosfodiesteraza 1/nukleotid pirofosfataza 3); član porodice ektonukleotid pirofosfataze/fosfodiesteraze 3; gp130RB13-6; fosfodiesteraza I beta; fosfodiesteraza l/nukleotid pirofosfataza 3; fosfodiesteraza-I beta
2
(60) PRR4 (bogat prolinom 4 (suzni))
Nukleotid
[0385]
Genbank pristupni br. NM_007244
Genbank verzija br. NM_007244.2 GI:154448885
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 28, 201212:39 PM
Polipeptid
[0386]
Genbank pristupni br. NP_009175
Genbank verzija br. NP_009175.2 GI:154448886
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 28, 201212:39 PM
Upućivanje u tekstu
[0387] Dickinson D.P., i dr. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.36 (10), 2020-2031 (1995)
Druge informacije
[0388]
Zvanični simbol: PRR4
Drugi pseudonimi: LPRP, PROL4
Ostale oznake: protein bogat lakrimalnim prolinom; protein bogat prolinom 4 povezan sa karcinomom nazofarinksa; prolinom bogat polipeptid 4; protein bogat prolinom 4
(61) GCC - GUCY2C (gvanilat ciklaza 2C (receptor enterotoksina stabilan na toplotu)
Nukleotid
[0389]
Genbank pristupni br. NM_004963
Genbank verzija br. NM_004963.3 GI:222080082
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.02, 201201:50 PM
Polipeptid
[0390]
Genbank pristupni br. NP_004954
Genbank verzija br. NP_004954.2 GI:222080083
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.02, 201201:50 PM
Upućivanje u tekstu
[0391] De Sauvage F.J., i dr. J. Biol. Chem.266 (27), 17912-17918 (1991); Singh S., i dr. Biochem. Biophys. Res. Commun.179 (3), 1455-1463 (1991)
Druge informacije
[0392]
Zvanični simbol: GUCY2C
Drugi pseudonimi: DIAR6, GUC2C, MUCIL, STAR
Ostale oznake: GC-C; STA receptor; gvanilil ciklaza C; hSTAR; toplotno stabilan receptor enterotoksina; crevna gvanilat ciklaza
(62) Liv-1 - SLC39A6 (porodica nosača rastvora 39 (transporter cinka), član 6)
Nukleotid
[0393]
Genbank pristupni br. U41060
Genbank verzija br. U41060.2 GI:12711792
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 30, 200904:35 PM
Polipeptid
[0394]
Genbank pristupni br. AAA96258
Genbank verzija br. AAA96258.2 GI:12711793
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 30, 200904:35 PM
Upućivanje u tekstu
[0395] Taylor KM., i dr. Biochim Biophys Acta.2003 Apr.1;1611(1-2):16-30
Druge informacije
[0396]
Zvanični simbol: SLC39A6
Drugi pseudonimi: LIV-1
Ostale oznake: LIV-1 protein, regulisan estrogenom; ZIP-6; estrogenom regulisan protein LIV-1; porodica nosača rastvora 39 (transporter metalnih jona), član 6; porodica nosača rastvora 39 član 6; transporter cinka ZIP6; zrt- i Irt-slični protein 6
(63) 5T4, Trofoblast glikoprotein, TPBG - TPBG (trofoblast glikoprotein)
Nukleotid
[0397]
Genbank pristupni br. AJ012159
Genbank verzija br. AJ012159.1 GI:3805946
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.01, 201110:27 AM
Polipeptid
[0398]
Genbank pristupni br. CAA09930
Genbank verzija br. CAA09930.1 GI:3805947
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.01, 201110:27 AM
Upućivanje u tekstu
[0399] King K.W.,i dr Biochim. Biophys. Acta 1445 (3), 257-270 (1999)
Druge informacije
[0400]
• Zvanični simbol: TPBG
• Drugi pseudonimi: 5T4, 5T4AG, M6P1
• Ostale oznake: 5T4 onkofetalni antigen; 5T4 onkofetalni trofoblast glikoprotein; 5T4 onkotrofoblast glikoprotein
• Videti WO2015/155345
(64) CD56 - NCMA 1 (Molekul adhezije neuronskih ćelija 1)
4
Nukleotid
[0401]
Genbank pristupni br. NM_000615
Genbank verzija br. NM_000615.6 GI:336285433
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:32 PM
Polipeptid
[0402]
Genbank pristupni br. NP_000606
Genbank verzija br. NP_000606.3 GI:94420689
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:32 PM
Upućivanje u tekstu
[0403] Dickson,G., i dr, Cell 50 (7), 1119-1130 (1987)
Druge informacije
[0404]
Zvanični simbol: NCAM1
Drugi pseudonimi: CD56, MSK39, NCAM
Ostale oznake: antigen prepoznat po monoklonskom antitelu 5,1H11; molekul adhezije neuronskih ćelija, NCAM
ANTITELA
Immunogen: HuN901 (Smith SV., i dr. Curr Opin Mol Ther.2005 Aug;7(4):394-401)
[0405] Na primer, pogledajte humanizovano antitelo N901 miša. Videti Sl,1b i 1e iz Roguska, M.A., i dr. Proc Natl Acad Sci USA Feb.1994;91:969-973.
(65) CanAg (antigen povezan sa tumorom CA242)
Upućivanje u tekstu
[0406] Haglund C., i dr. Br J Cancer 60:845-851, 1989;Baeckstrom D., i dr. J Biol Chem 266:21537-21547, 1991
ANTITELA
huC242 (TolcherAW i dr., J Clin Oncol.2003 Jan 15;21(2):211-22; Immunogen)
[0407] Na primer, videti US20080138898A1 SEQ ID NO: 1 i 2
(66) FOLR1 (folatni receptor 1)
Nukleotid
[0408]
Genbank pristupni br. J05013
Genbank verzija br. J05013.1 GI:182417
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Polipeptid
[0409]
Genbank pristupni br. AAA35823
Genbank verzija br. AAA35823.1 GI:182418
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 AM
Upućivanje u tekstu
[0410] Elwood P.C., i dr. J. Biol. Chem.264 (25), 14893-14901 (1989)
Druge informacije
[0411]
Zvanični simbol: FOLR1
Drugi pseudonimi: FBP, FOLR
Ostale oznake: FR-alfa; KB ćelije FBP; protein koji vezuje folat za odrasle; protein koji vezuje folat; folatni receptor alfa; folatni receptor, odrasli; antigen MOv18 povezan sa tumorom jajnika ANTITELA
M9346A - Whiteman KR., i dr. Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4628 (Immunogen) (67) GPNMB (glikoprotein (transmembranski) nmb)
Nukleotid
[0412]
Genbank pristupni br. X76534
Genbank verzija br. X76534.1 GI:666042
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:10 AM
Polipeptid
[0413]
Genbank pristupni br. CAA54044
Genbank verzija br. CAA54044.1 GI:666043
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:10 AM
Upućivanje u tekstu
[0414] Weterman M.A., i dr. Int. J. Cancer 60 (1), 73-81 (1995)
Druge informacije
[0415]
Zvanični simbol: GPNMB
Drugi pseudonimi: UNQ1725/PRO9925, HGFIN, NMB
Ostale oznake: glikoprotein NMB; protein sličan glikoproteinu nmb; osteoaktivin; transmembranski glikoprotein HGFIN; transmembranski glikoprotein NMB
ANTITELA
Celldex Therapeutics: CR011 (Tse KF., i dr. Clin Cancer Res.2006 Feb.15;12(4):1373-82)
[0416] Na primer, videti EP1827492B1 SEQ ID NO: 22, 24, 26, 31, 33 i 35
(68) TIM-1 - HAVCR 1 (ćelijski receptor 1 virusa hepatitisa A)
Nukleotid
[0417]
Genbank pristupni br. AF043724
Genbank verzija br. AF043724.1 GI:2827453
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201006:24 PM
Polipeptid
[0418]
Genbank pristupni br. AAC39862
Genbank verzija br. AAC39862.1 GI:2827454
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201006:24 PM
Upućivanje u tekstu
[0419] Feigelstock D., i dr. J. Virol.72 (8), 6621-6628 (1998)
Druge informacije
[0420]
Zvanični simbol: HAVCR1
Drugi pseudonimi: HAVCR, HAVCR-1, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1 Ostale oznake: T ćelijski imunoglobinski domen i protein domena mucina 1; T-ćelijski membranski protein 1; molekul 1 povrede bubrega
(69) RG-1/Tumor prostate cilja Mindin - Mindin/RG-1
Upućivanje u tekstu
[0421] Parry R., i dr. Cancer Res.2005 Sep.15;65(18):8397-405
(70) B7-H4 - VTCN1 (V-set domen koji sadrži inhibitor aktivacije T ćelija 1
Nukleotid
[0422]
Genbank pristupni br. BX648021
Genbank verzija br. BX648021.1 GI:34367180
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201108:40 AM
Upućivanje u tekstu
[0423] Sica GL., i dr. Immunity.2003 Jun;18(6):849-61
Druge informacije
Zvanični simbol: VTCN1
[0424] Drugi pseudonimi: RP11-229A19,4, B7-H4, B7H4, B7S1, B7X, B7h,5, PRO1291, VCTN1 Druge oznake: B7 član porodice, H4; B7 član superfamilije 1; Kostimulatorni molekul T ćelija B7x; Kostimulatorni molekul T-ćelija B7x; V-set domen koji sadrži inhibitor aktivacije T ćelija 1; imunokostimulatorni protein B7-H4
(71) PTK7 (PTK7 protein tirozin kinaza 7)
Nukleotid
[0425]
Genbank pristupni br. AF447176
Genbank verzija br. AF447176.1 GI:17432420
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 28, 200801:51 PM
Polipeptid
[0426]
Genbank pristupni br. AAL39062
Genbank verzija br. AAL39062.1 GI:17432421
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 28, 200801:51 PM
Upućivanje u tekstu
[0427] Park S.K.,i dr J. Biochem.119 (2), 235-239 (1996)
Druge informacije
[0428]
Zvanični simbol: PTK7
Drugi pseudonimi: CCK-4, CCK4
Ostale oznake: kinaza karcinoma debelog creva 4; neaktivna tirozin-protein kinaza 7; receptor pseudo tirozin kinaze 7; tirozin-protein kinaza nalik 7
(72) CD37 (CD37 molekul)
Nukleotid
[0429]
Genbank pristupni br. NM_001040031
Genbank verzija br. NM_001040031.1 GI:91807109
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 29, 201202:08 PM
Polipeptid
[0430]
Genbank pristupni br. NP_001035120
Genbank verzija br. NP_001035120.1 GI:91807110
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jul 29, 201202:08 PM
Upućivanje u tekstu
[0431] Schwartz-Albiez R., i dr. J. Immunol.140 (3), 905-914 (1988)
Druge informacije
[0432]
Zvanični simbol: CD37
Drugi pseudonimi: GP52-40, TSPAN26
Ostale oznake: CD37 antigen; antigen diferencijacije ćelija 37; leukocitni antigen CD37; površinski antigen leukocita CD37; tetraspanin-26; tspan-26
ANTITELA
[0433]
Boehringer Ingelheim: mAb 37,1 (Heider KH., i dr. Blood.2011 Okt.13;118(15):4159-68) Trubion: CD37-SMIP (G28-1 scFv-Ig) ((Zhao X., i dr. Blood.2007;110: 2569-2577)
[0434] Na primer, videti US20110171208A1 SEQ ID NO: 253
Immunogen: K7153A (Deckert J., i dr. Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4625)
(73) CD138- SDC1 (sindekan 1)
Nukleotid
[0435]
Genbank pristupni br. AJ551176
Genbank verzija br. AJ551176.1 GI:29243141
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.01, 201112:09 PM
Polipeptid
[0436]
Genbank pristupni br. CAD80245
Genbank verzija br. CAD80245.1 GI:29243142
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.01, 201112:09 PM
Upućivanje u tekstu
[0437] O'Connell FP., i dr. Am J Clin Pathol.2004 Feb;121(2):254-63
Druge informacije
[0438]
Zvanični simbol: SDC1
Drugi pseudonimi: CD138, SDC, SYND1, sindekan
Ostale oznake: CD138 antigen; receptor faktora rasta heparan sulfata proteoglikana fibroblasta; sindekan proteoglikan 1; sindekan-1
ANTITELA
Biotest: himerizovano MAb (nBT062) - (Jagannath S., i dr. Poster ASH #3060, 2010; WIPO
[0439] Patentna prijava WO/2010/128087)
[0440] Na primer, videti US20090232810 SEQ ID NO: 1 i 2
Immunogen: B-B4 (Tassone P., i dr. Blood 104_3688-3696)
[0441] Na primer, videti US20090175863A1 SEQ ID NO: 1 i 2
(74) CD74 (CD74 molekul, glavni kompleks histokompatibilnosti, nepromenljivi lanac klase 11)
Nukleotid
[0442]
Genbank pristupni br. NM_004355
Genbank verzija br. NM_004355.1 GI:343403784
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:30 PM
Polipeptid
[0443]
Genbank pristupni br. NP_004346
Genbank verzija br. NP_004346.1 GI:10835071
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:30 PM
Upućivanje u tekstu
[0444] Kudo,J., i dr. Nucleic Acids Res.13 (24), 8827-8841 (1985)
Druge informacije
[0445]
Zvanični simbol: CD74
Drugi pseudonimi: DHLAG, HLADG, II, la-GAMMA
Ostale oznake: CD74 antigen (invarijantni polipeptid glavnog kompleksa histokompatibilnosti, povezan sa antigenom klase II); HLA klasa II histokompatibilni gama lanac antigena; Invarijantni lanac povezan sa HLA-DR antigenima; HLA-DR-gama; la-pridruženi invarijantni lanac; MHC HLA-DR gama lanac; gama lanac antigena klase II; p33
ANTITELA
Immunomedics: hLL1 (Milatuzumab,) - Berkova Z., i dr. Expert Opin Investig Drugs. 2010 Jan;19(1):141-9)
[0446] Na primer, videti US20040115193 SEQ ID NOs: 19, 20, 21, 22, 23 i 24
Genmab: HuMax-CD74 (videti veb sajt)
(75) Claudins - CLs (Claudins)
Upućivanje u tekstu
[0447] Offner S., i dr. Cancer Immunol Immunother.2005 May; 54(5):431-45, Suzuki H., i dr. Ann N YAcad Sci.2012 Jul;1258:65-70)
[0448] Kod ljudi su opisana 24 člana porodice - videti referencu iz literature.
(76) EGFR (receptor epidermalnog faktora rasta)
Nukleotid
[0449]
Genbank pristupni br. NM_005228
Genbank verzija br. NM_005228.3 GI:41927737
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
Polipeptid
[0450]
Genbank pristupni br. NP_005219
Genbank verzija br. NP_005219.2 GI:29725609
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:47 PM
Upućivanje u tekstu
[0451] Dhomen NS., i dr. Crit Rev Oncog.2012;17(1):31-50
Druge informacije
[0452]
Zvanični simbol: EGFR
Drugi pseudonimi: ERBB, ERBB1, HER1, PIG61, mENA
Ostale oznake: virusni homolog eritroblastne leukemije ptica (v-erb-b) onkogen; protein 40 koji inhibira rast ćelija; protein koji indukuje proliferaciju ćelija 61; proto-onkogen c-ErbB-1; receptor tirozin-protein kinaze erbB-1
ANTITELA BMS: Cetuximab (Erbitux) - Broadbridge VT., i dr. Expert Rev Anticancer Ther.2012 May;12(5):555-65.
[0453] Na primer, videti US6217866 - ATTC deposit br.9764.
Amgen: Panitumumab (Vectibix) - Argiles G., i dr. Future Oncol.2012 Apr;8(4):373-89
[0454] Na primer, videti US6235883 SEQ ID NOs: 23-38.
[0455] Genmab: Zalutumumab - Rivera F., i dr. Expert Opin Biol Ther.2009 May;9(5):667-74.
YM Biosciences: Nimotuzumab - Ramakrishnan MS., i dr. MAbs.2009 Jan-Feb;1(1):41-8.
[0456] Na primer, videti US5891996 SEQ ID NOs: 27-34.
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (v-erb-b2 virusni onkogen homolog 3 (ptičji))
Nukleotid
[0457]
Genbank pristupni br. M34309
Genbank verzija br. M34309.1 GI:183990
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 PM
Polipeptid
[0458]
Genbank pristupni br. AAA35979
Genbank verzija br. AAA35979.1 GI:306841
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:47 PM
Upućivanje u tekstu
[0459] Plowman,G.D., i dr., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.87 (13), 4905-4909 (1990)
Druge informacije
[0460]
Zvanični simbol: ERBB3
Drugi pseudonimi: ErbB-3, HER3, LCCS2, MDA-BF-1, c-erbB-3, c-erbB3, erbB3-S, p180-ErbB3, p45-sErbB3, p85-sErbB3
Ostale oznake: protein sličan proto-onkogenu c-ErbB-3; receptor tirozin-protein kinaze erbB-3; receptor ćelijske površine tipa tirozin kinaze HER3
ANTITELA
Merimack Pharma : MM-121 (Schoeberl B., i dr. Cancer Res.2010 Mar 15;70(6):2485-2494)
[0461] Na primer, videti US2011028129 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 i 8.
(78) RON - MST1R (makrofag stimulišući 1 receptor (tirozin kinaza srodna c-met))
Nukleotid
[0462]
Genbank pristupni br. X70040
Genbank verzija br. X70040.1 GI:36109
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:17 PM
Polipeptid
[0463]
Genbank pristupni br. CCA49634
Genbank verzija br. CCA49634.1 GI:36110
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:17 PM
Upućivanje u tekstu
[0464] Ronsin C., i dr. Oncogene 8 (5), 1195-1202 (1993)
Druge informacije
[0465]
Zvanični simbol: MST1R
Drugi pseudonimi: CD136, CDw136, PTK8, RON
Ostale oznake: MSP receptor; MST1R varijanta RON30; MST1R varijanta RON62; PTK8 protein tirozin kinaza 8; RON varijanta E2E3; c-met-srodna tirozin kinaza; receptor proteina koji stimuliše makrofage; p185-Ron; rastvorljiva RON varijanta 1; rastvorljiva RON varijanta 2; rastvorljiva RON
1
varijanta 3; rastvorljiva RON varijanta 4
(79) EPHA2 (EPH receptor A2)
Nukleotid
[0466]
Genbank pristupni br. BC037166
Genbank verzija br. BC037166.2 GI:33879863
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 06, 201201:59 PM
Polipeptid
[0467]
Genbank pristupni br. AAH37166
Genbank verzija br. AAH37166.1 GI:22713539
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 06, 201201:59 PM
Upućivanje u tekstu
[0468] Strausberg R.L., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.99 (26), 16899-16903 (2002)
Druge informacije
[0469]
Zvanični simbol: EPHA2
Drugi pseudonimi: ARCC2, CTPA, CTPP1, ECK
Ostale oznake: efrin tip-A receptor 2; protein tirozin kinaza receptora epitelnih ćelija; rastvorljiva EPHA2 varijanta 1; receptor tirozin-protein kinaze ECK
ANTITELA
Medimmune: 1C1 (Lee JW., i dr. Clin Cancer Res.2010 May 1;16(9):2562-2570)
[0470] Na primer, videti US20090304721A1 Sl.7 i 8.
(80) CD20 - MS4A1 (4-domena koji se protežu kroz membranu, potfamilija A, član 1)
Nukleotid
[0471]
Genbank pristupni br. M27394
Genbank verzija br. M27394.1 GI:179307
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 30, 200911:16 AM
Polipeptid
[0472]
Genbank pristupni br. AAA35581
Genbank verzija br. AAA35581.1 GI:179308
Datum ažuriranja podataka Genbank: Nov 30, 200911:16 AM
Upućivanje u tekstu
[0473] Tedder T.F., i dr. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.85 (1), 208-212 (1988)
Druge informacije
[0474]
Zvanični simbol: MS4A1
2
Drugi pseudonimi: B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7
Ostale oznake: B-limfocitni antigen CD20; Površinski antigen B1 B-limfocita; CD20 antigen; CD20 receptor; površinski antigen leukocita Leu-16
ANTITELA
Genentech/Roche: Rituximab - Abdulla NE., i dr. BioDrugs.2012 Apr 1;26(2):71-82.
[0475] Na primer, videti US5736137, ATCC deposit br. HB-69119.
GSK/Genmab: Ofatumumab - Nightingale G., i dr. Ann Pharmacother.2011Okt;45(10):1248-55.
[0476] Na primer, videti US20090169550A1 SEQ ID NOs: 2, 4 i 5.
Immunomedics: Veltuzumab - Goldenberg DM., i dr. Leuk Lymphoma.2010 Maj;51(5):747-55.
[0477] Na primer, videti US7919273B2 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 i 6.
(81) Tenascin C - TNC (Tenascin C)
Nukleotid
[0478]
Genbank pristupni br. NM_002160
Genbank verzija br. NM_002160.3 GI:340745336
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:33 PM
Polipeptid
[0479]
Genbank pristupni br. NP_002151
Genbank verzija br. NP_002151.2 GI:153946395
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.23, 201202:33 PM
Upućivanje u tekstu
Nies D.E., i dr. J. Biol. Chem.266 (5), 2818-2823 (1991); Siri A., i dr. Nucleic Acids Res.19 (3), 525-531 (1991)
Druge informacije
[0480]
Zvanični simbol: TNC
Drugi pseudonimi: 150-225, GMEM, GP, HXB, JI, TN, TN-C
Ostale oznake: GP 150-225; citotaktin; antigen vanćelijskog matriksa povezan sa gliomom; heksabrahion (tenascin); miotendinozni antigen; neuronektin; tenascin; tenascin-C izoforma 14/AD1/16 ANTITELA
Philogen : G11 (von Lukowicz T., i dr. J Nucl Med.2007 Apr;48(4):582-7) i F16 (Pedretti M., i dr. Lung Cancer. 2009 Apr;64(1):28-33)
[0481] Na primer, videti US7968685 SEQ ID NOs: 29, 35, 45 i 47.
(82) FAP (protein za aktivaciju fibroblasta, alfa)
Nukleotid
[0482]
Genbank pristupni br. U09278
Genbank verzija br. U09278.1 GI:1888315
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201009:22 AM
Polipeptid
[0483]
Genbank pristupni br. AAB49652
Genbank verzija br. AAB49652.1 GI:1888316
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201009:22 AM
Upućivanje u tekstu
[0484] Scanlan,M.J.,i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.91 (12), 5657-5661 (1994)
Druge informacije
[0485]
Zvanični simbol: FAP
Drugi pseudonimi: DPPIV, FAPA
Ostale oznake: 170 kDa melanomska želatinaza vezana za membranu; integralna membranska serinska proteaza; sepraza
(83) DKK-1 (Homolog Dickkopf 1 (Xenopus laevis)
Nukleotid
[0486]
Genbank pristupni br. NM_012242
Genbank verzija br. NM_012242.2 GI:61676924
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:48 PM
Polipeptid
[0487]
Genbank pristupni br. NP_036374
Genbank verzija br. NP_036374.1 GI:7110719
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:48 PM
Upućivanje u tekstu
[0488] Fedi P. i dr. J. Biol. Chem.274 (27), 19465-19472 (1999)
Druge informacije
[0489]
Zvanični simbol: DKK1
Drugi pseudonimi: UNQ492/PRO1008, DKK-1, SK
Ostale oznake: dickkopf povezan protein-1; nalik dickkopf-1; protein 1 nalik dickkopf; dickkopfpovezan protein1; hDkk-1
ANTITELA
Novartis: BHQ880 (Fulciniti M., i dr. Blood.2009 Jul 9;114(2):371-379)
[0490] Na primer, videti US20120052070A1 SEQ ID NOs: 100 i 108.
(84) CD52 (CD52 molekul)
Nukleotid
[0491]
Genbank pristupni br. NM_001803
Genbank verzija br. NM_001803.2 GI:68342029
4
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:48 PM
Polipeptid
[0492]
Genbank pristupni br. NP_001794
Genbank verzija br. NP_001794.2 GI:68342030
Datum ažuriranja podataka Genbank: Sep.30, 201201:48 PM
Upućivanje u tekstu
[0493] Xia M.Q., i dr. Eur. J. Immunol.21 (7), 1677-1684 (1991)
Druge informacije
[0494]
Zvanični simbol: CD52
Drugi pseudonimi: CDW52
Ostale oznake: CAMPATH-1 antigen; CD52 antigen (CAMPATH-1 antigen); CDW52 antigen (CAMPATH-1 antigen); kembridž patologija 1 antigen; sekretorni protein epididima E5; he5; humani protein specifičan za epididimis 5
ANTITELA
Alemtuzumab (Campath) - Skoetz N., i dr. Cochrane Database Syst Rev.2012 Feb.15;2:CD008078.
[0495] Na primer, pogledajte Drugbank izv. br. DB00087 (BIOD00109, BTD00109)
(85) CS1 - SLAMF7 (SLAM porodica član 7)
Nukleotid
[0496]
Genbank pristupni br. NM_021181
Genbank verzija br. NM_021181.3 GI:1993571
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 29, 201211:24 AM
Polipeptid
[0497]
Genbank pristupni br. NP_067004
Genbank verzija br. NP_067004.3 GI:19923572
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 29, 201211:24 AM
Upućivanje u tekstu
Boles K.S., i dr. Immunogenetics 52 (3-4), 302-307 (2001)
Druge informacije
[0498]
Zvanični simbol: SLAMF7
Drugi pseudonimi: UNQ576/PRO1138, 19A, CD319, CRACC, CS1
Ostale oznake: 19A24 protein; CD2 podset 1; citotoksične ćelije koje aktiviraju CD2-slični receptor; citotoksične aktivirajuće ćelije CD2-slični receptor; membranski protein FOAP-12; novi LI9 (limfocitni antigen 9) sličan protein; protein 19A
ANTITELA BMS: elotuzumab/HuLuc63 (Benson DM., i dr. J Clin Oncol.2012 Jun 1;30(16):2013-2015)
[0499] Na primer, videti US20110206701 SEQ ID NOs: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 i 16.
(86) Endoglin - ENG (Endoglin)
Nukleotid
[0500]
Genbank pristupni br. AF035753
Genbank verzija br. AF035753.1 GI:3452260
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201006:36 PM
Polipeptid
[0501]
Genbank pristupni br. AAC32802
Genbank verzija br. AAC32802.1 GI:3452261
Datum ažuriranja podataka Genbank: Mar 10, 201006:36 PM
Upućivanje u tekstu
[0502]
Rius C., i dr. Blood 92 (12), 4677-4690 (1998)
Zvanični simbol: ENG
Druge informacije
[0503]
Drugi pseudonimi: RP11-228B15,2, CD105, END, HHT1, ORW, ORW1
Ostale oznake: CD105 antigen
(87) Aneksin A1 - ANXA1 (Aneksin A1)
Nukleotid
[0504]
Genbank pristupni br. X05908
Genbank verzija br. X05908.1 GI:34387
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:02 AM
Polipeptid
[0505]
Genbank pristupni br. CCA29338
Genbank verzija br. CCA29338.1 GI:34388
Datum ažuriranja podataka Genbank: Feb.02, 201110:02 AM
Upućivanje u tekstu
[0506] Wallner B.P.,i dr Nature 320 (6057), 77-81 (1986)
Druge informacije
[0507]
Zvanični simbol: ANXA1
Drugi pseudonimi: RP11-71A24,1, ANX1, LPC1
Ostale oznake: aneksin I (lipokortin I); aneksin-1; kalpaktin II; kalpaktin-2; hromobindin-9; lipokortin I; p35; protein inhibitor fosfolipaze A2
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (molekul adhezije vaskularnih ćelija 1) Nukleotid
[0508]
Genbank pristupni br. M60335
Genbank verzija br. M60335.1 GI:340193
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:56 AM Polipeptid
[0509]
Genbank pristupni br. AAA61269
Genbank verzija br. AAA61269.1 GI:340194
Datum ažuriranja podataka Genbank: Jun 23, 201008:56 AM Upućivanje u tekstu
[0510] Hession C., i dr. J. Biol. Chem.266 (11), 6682-6685 (1991) Druge informacije
[0511]
Zvanični simbol VCAM1
Drugi pseudonimi: CD106, INCAM-100
Ostale oznake: CD106 antigen; adhezioni protein vaskularnih ćelija 1 Sekvence antitela
Anti-Integrin αvβ6
[0512]
[0518] Roditeljsko antitelo takođe može biti fuzioni protein koji sadrži sekvencu peptida koji vezuje albumin (ABP) (Dennis i dr. (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem. 277:35035-35043; WO 01/45746). Antitela pronalaska uključuju fuzione proteine sa ABP sekvencama koje podučavaju: (i) Dennis i dr. (2002) J Biol Chem.277:35035-35043 u Tabelama III i IV, strana 35038; (ii) US 2004/0001827 na [0076]; i (iii) WO 01/45746 na stranama 12-13.
[0519] U jednom otelotvorenju, antitelo je podignuto da cilja specifičan antigen povezan sa tumorom avβ6.
[0520] Sredstvo za vezivanje ćelije može biti obeleženo, na primer da bi se pomoglo detekciji ili prečišćavanju sredstva ili pre inkorporacije kao konjugata, ili kao deo konjugata. Oznaka može biti oznaka biotina. U drugom otelotvorenju, sredstvo za vezivanje ćelije može biti obeležen radioizotopom.
Povezivanje Vezničke jedinice sa Ligand jedinicom
[0521] Ligand jedinica je povezana sa jedinicom veznika preko disulfidne veze.
[0522] U jednom otelotvorenju, veza između jedinice liganda i veznika leka se formira između tiol grupe cisteinskog ostatka ligandne jedinice i maleimidne grupe jedinice veznika leka.
[0523] Cisteinski ostaci Ligand jedinice mogu biti dostupni za reakciju sa funkcionalnom grupom Vezničke jedinice da bi se formirala veza. U drugim otelotvorenjima, na primer gde je ligand jedinica antitelo, tiol grupe antitela mogu učestvovati u međulančanim disulfidnim vezama. Ove međulančane veze mogu se konvertovati u slobodne tiolne grupe npr. tretman antitela sa DTT pre reakcije sa funkcionalnom grupom Vezničke jedinice.
[0524] U nekim otelotvorenjima, cisteinski ostatak se uvodi u teški ili laki lanac antitela. Pozicije za umetanje cisteina supstitucijom u teške ili lake lance antitela uključuju one opisane u patentnoj prijavi SAD br. 2007-0092940 i međunarodnoj patentnoj objavi WO2008070593.
Postupci lečenja
[0525] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu biti za upotrebu u terapiji. Terapijski efikasna količina konjugata formule II može se koristiti u terapiji. Termin "terapeutski efikasna količina" je količina dovoljna da pokaže korist za pacijenta. Takva korist može biti barem ublažavanje najmanje jednog simptoma. Stvarna količina koja se daje, brzina i vremenski tok primene zavisiće od prirode i ozbiljnosti onoga što se leči. Propisivanje lečenja, npr. odluke o doziranju, u nadležnosti je lekara opšte prakse i drugih lekara.
[0526] Konjugat se može primeniti sam ili u kombinaciji sa drugim tretmanima, bilo istovremeno ili uzastopno u zavisnosti od stanja koje se leči. Primeri tretmana i terapija uključuju, ali nisu ograničeni na, hemoterapiju (davanje aktivnih sredstava , uključujući, npr. lekove; operacija; i radioterapija.
[0527] Farmaceutski sastavi prema predmetnom pronalasku, i za upotrebu u skladu sa predmetnim pronalaskom, mogu sadržati, pored aktivnog sastojka, tj. konjugata formule I, farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač, pufer, stabilizator ili druge dobro poznate materijale onima koji su vešti u ovoj oblasti. Takvi materijali treba da budu netoksični i ne bi trebalo da ometaju efikasnost aktivnog sastojka. Precizna priroda nosača ili drugog materijala zavisiće od puta davanja, koji može biti oralni, ili injekcijom, npr. kožno, potkožno ili intravenozno.
[0528] Farmaceutski sastavi za oralno davanje mogu biti u obliku tableta, kapsula, praha ili tečnosti. Tableta može da sadrži čvrsti nosač ili pomoćno sredstvo. Tečni farmaceutski sastavi generalno sadrže tečni nosač kao što je voda, nafta, životinjska ili biljna ulja, mineralno ulje ili sintetičko ulje. Može biti uključen fiziološki rastvor soli, dekstroza ili drugi rastvor saharida ili glikoli kao što su etilen glikol, propilen glikol ili polietilen glikol. Kapsula može da sadrži čvrsti nosač kao što je želatin.
[0529] Za intravensku, kožnu ili subkutanu injekciju, ili injekciju na mestu nevolje, aktivni sastojak će biti u obliku parenteralno prihvatljivog vodenog rastvora koji ne sadrži pirogen i ima pogodan pH, izotoničnost i stabilnost. Stručnjaci u ovoj oblasti dobro su u stanju da pripreme pogodna rešenja koristeći, na primer, izotonične nosače kao što su ubrizgavanje natrijum hlorida, Ringerova injekcija, laktairana Ringerova injekcija. Prema potrebi mogu biti uključeni konzervansi, stabilizatori, puferi, antioksidanti i / ili drugi aditivi.
[0530] Konjugati se mogu koristiti za lečenje proliferativnih i autoimunih bolesti. Termin "proliferativna bolest" se odnosi na neželjenu ili nekontrolisanu ćelijsku proliferaciju prekomernih ili abnormalnih ćelija koja je nepoželjna, kao što je neoplastični ili hiperplastični rast, bilo in vitro ili in vivo.
1
[0531] Primeri proliferativnih stanja uključuju, ali nisu ograničeni na, benignu, pre-malignu i malignu ćelijsku proliferaciju, uključujući, ali ne ograničavajući se na, neoplazme i tumore (npr., histocitom, gliom, astrocitom, osteom), kancere (na primer. rak pluća, sitnoćelijski rak pluća, gastrointestinalni kancer, rak creva, rak debelog creva, karcinom dojke, karcinom jajnika, rak prostate, rak testisa, rak jetre, rak bubrega, rak mokraćne bešike, rak pankreasa, rak mozga, sarkom, osteosarkom, Kaposijev sarkom, melanom), leukemije, psorijaza, bolesti kostiju, fibroproliferativni poremećaji (npr. vezivnog tkiva) i ateroskleroza. Drugi karcinomi od interesa uključuju, ali nisu ograničeni na, hematološke; maligniteti kao što su leukemije i limfomi, kao što je ne-Hodgkin limfom, i podtipovi kao što su DLBCL, marginalna zona, zona omotača i folikularni, Hodgkinov limfom, AML i drugi karcinomi B ili T ćelijskog porekla.
[0532] Primeri autoimunih bolesti uključuju sledeće: reumatoidni artritis, autoimune demijelinativne bolesti (npr. multipla skleroza, alergijski encefalomijelitis), psorijatični artritis, endokrina oftalmopatija, uveoretinitis, sistemski eritematozni lupus, mijastenija gravis, Grejvsova bolest, glomerulonepsoloska bolest , anafilaksa, alergijska reakcija, Sjogrenov sindrom, dijabetes melitus tipa I, primarna bilijarna ciroza, Vegenerova granulomatoza, fibromijalgija, polimiozitis, dermatomiozitis, višestruka endokrina insuficijencija, Šmitov sindrom, autoimuni uveitis, Adisonova bolest, adrenalitis, tiroiditis, Hašimotov tiroiditis, autoimuna bolest štitne žlezde, perniciozna anemija, atrofija želuca, hronični hepatitis, lupoidni hepatitis, ateroskleroza, subakutni kožni eritematozni lupus, hipoparatiroidizam, Dreslerov sindrom, autoimuna trombocitopenija, idiopatska trombocitopenična purpura, hemolitička anemija, pemfigus vulgaris, pemfigus, dermatitis herpetiformis, alopecija arkata, pemfigoid, skleroderma, progresivna sistemska skleroza, CREST sindrom (kalcinoza, Rejnoov fenomen, dismotilitet jednjaka, sklerodaktilija i telangiektazija), muška i ženska autoimunska neplodnost, ankilozantni spondolitis, ulcerozni kolitis, mešana bolest vezivnog tkiva, poliarteritis, nekroza topikalnog sindroma, nekroza, Šagasova bolest, sarkoidoza, reumatska groznica, astma, ponovljeni abortus, anti-fosfolipidni sindrom, farmerova pluća, multiformni eritem, postkardiotomski sindrom, Kušingov sindrom, autoimuni hronični aktivni hepatitis, pluća odgajivača ptica, nekrolitička epiderma, Alportov sindrom, alveolitis, alergijski alveolitis, fibrozirajući alveolitis, intersticijalna bolest pluća, nodozum eritema, pioderma gangrenozum, reakcija transfuzije, Takaiasuov arteritis, polimialgija reumatika, temporalni arteritis, šistosomijaza, arteritis gigantskih ćelija, askarijaza, aspergiloza, Samterov sindrom, ekcem, limfomatoidna granulomatoza, Behčetova bolest, Kapelanov sindrom, Kavasakijeva bolest, denga, encefalomijelitis, endokarditis, endomiokardijalna fibroza, endoftalmitis, eritema elevum et diutinum, psorijaza, fetalna eritroblastoza, eozinofilni faciitis, Šulmanov sindrom, Feltijev sindrom, filarijaza, ciklitis, hronični ciklitis, heterohronični ciklitis, Fuhov ciklitis, IgA nefropatija, Henoch-Schonlein purpura, bolest transplantata protiv domaćina, odbacivanje transplantacije, kardiomiopatija, Eaton-Lambertov sindrom, relapsni polihondritis, relapsni polihondritis, krioastroglobalni sindrom i krioastroglobalni sindrom neuspeh.
[0533] Autoimuna bolest može biti poremećaj B limfocita (npr., sistemski eritematozni lupus, Gudpastureov sindrom, reumatoidni artritis i dijabetes tipa I), Th1-limfocita (npr. reumatoidni artritis, multipla skleroza, psogreaza, šimo sindrom, tiroiditis, Grejvsova bolest, primarna bilijarna ciroza, Vegenerova granulomatoza, tuberkuloza ili bolest transplantata protiv domaćina), ili Th2-limfociti (npr. atopijski dermatitis, sistemski eritematozni lupus, atopijska astma, rinokonjunktivitis, alergijski sistemski rinitis, rinitis omenskog sistema, ili hronična bolest transplantata protiv domaćina). Generalno, poremećaji koji uključuju dendritske ćelije uključuju poremećaje Th1-limfocita ili Th2-limfocita. U nekim otelotvorenjima, autoimuni poremećaj je imunološki poremećaj posredovan T ćelijama.
[0534] U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,01 do oko 10 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,01 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,05 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 4 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,05 do oko 3 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 3 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 2 mg/kg po dozi.
Opterećenje leka
[0535] Opterećenje lekom (p) je prosečan broj PBD lekova po sredstvu za vezivanje ćelije, npr. antitelo. Tamo gde su jedinjenja pronalaska vezana za cisteine, opterećenje lekom može da se kreće od 1 do 8 lekova (D) po sredstvu za vezivanje ćelije, tj. gde su 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 i 8 delova leka kovalentno vezani za sredstvo za vezivanje ćelija. Sastavi konjugata uključuju kolekcije sredstava za vezivanje ćelija, npr. antitela, konjugovana sa nizom lekova, od 1 do 8. Tamo gde su jedinjenja pronalaska vezana za lizine, opterećenje lekom može biti
2
u rasponu od 1 do 80 lekova (D) po sredstvu za vezivanje ćelije, iako gornja granica od 40, 20, 10 ili 8 može biti poželjna. Sastavi konjugata uključuju kolekcije sredstava za vezivanje ćelija, npr. antitela, konjugovana sa nizom lekova, od 1 do 80, 1 do 40, 1 do 20, 1 do 10 ili 1 do 8.
[0536] Prosečan broj lekova po antitelu u preparatima ADC iz reakcija konjugacije može se okarakterisati konvencionalnim sredstvima kao što su UV, HPLC reverzne faze, HIC, masena spektroskopija, ELISA test i elektroforeza. Takođe se može odrediti kvantitativna raspodela ADC u smislu p. Pomoću ELISA može se odrediti prosečna vrednost p u određenom preparatu ADC (Hamblett i dr. (2004) Clin. Cancer Res.10:7063-7070; Sanderson i dr. (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). Međutim, distribucija vrednosti p (lek) se ne može uočiti vezivanjem antitelo-antigen i ograničenjem detekcije ELISA. Takođe, ELISA test za detekciju konjugata antitelo-lek ne određuje gde su delovi leka vezani za antitelo, kao što su fragmenti teškog ili lakog lanca, ili određeni aminokiselinski ostaci. U nekim slučajevima, odvajanje, prečišćavanje i naznačivanje homogenih ADC gde je p određena vrednost od ADC sa drugim opterećenjima lekovima može se postići sredstvima kao što su HPLC reverzne faze ili elektroforeza. Takve tehnike su takođe primenljive na druge vrste konjugata.
[0537] Za neke konjugate antitelo-lek, p može biti ograničen brojem mesta vezivanja na antitelo. Na primer, antitelo može imati samo jednu ili više cistein tiol grupa, ili može imati samo jednu ili nekoliko dovoljno reaktivnih tiol grupa preko kojih veznik može biti vezan. Veće opterećenje lekom, npr. p >5, može izazvati agregaciju, nerastvorljivost, toksičnost ili gubitak ćelijske permeabilnosti određenih konjugata antitelo-lek.
[0538] Tipično, manje od teoretskog maksimuma delova leka je konjugovano sa antitelom tokom reakcije konjugacije. Antitelo može da sadrži, na primer, mnogo lizinskih ostataka koji ne reaguju sa veznikom leka. Samo najreaktivnije lizinske grupe mogu da reaguju sa amin-reaktivnim vezničkim reagensom. Takođe, samo najreaktivnije tiol grupe cisteina mogu da reaguju sa tiol-reaktivnim vezničkim reagensom. Opšte, antitela ne sadrže mnogo, ako uopšte i sadrže, slobodnih i reaktivnih cistein tiol grupa koje mogu biti povezane sa delom leka. Većina ostataka cistein tiola u antitelima jedinjenja postoji kao disulfidni mostovi i moraju se redukovati redukcionim sredstvom kao što je ditiotreitol (DTT) ili TCEP, pod delimičnim ili potpunim redukcionim uslovima. Opterećenje (odnos lek/antitelo) ADC-a može se kontrolisati na nekoliko različitih načina, uključujući: (i) ograničavanje molarnog viška veznika leka u odnosu na antitelo, (ii) ograničavanje vremena reakcije konjugacije ili temperature, i (iii) delimične ili ograničavajuće reduktivne uslove za modifikaciju cistein tiola.
[0539] Određena antitela imaju redukovane međulančane disulfide, tj. cisteinske mostove. Antitela se mogu učiniti reaktivnim za konjugaciju sa reagensima vezivanja tretmanom sa redukcionim sredstvom kao što je DTT (ditiotreitol). Svaki cisteinski most će tako teoretski formirati dva reaktivna tiolna nukleofila. Dodatne nukleofilne grupe se mogu uvesti u antitela kroz reakciju lizina sa 2-iminotiolanom (Trautov reagens) što dovodi do konverzije amina u tiol. Reaktivne tiol grupe se mogu uvesti u antitelo (ili njegov fragment) konstruisanjem jednog, dva, tri, četiri ili više cisteinskih ostataka (npr., pripremanjem mutantnih antitela koja sadrže jedan ili više ne-izvornih cisteinskih aminokiselinskih ostataka). US 7521541 podučava inženjerska antitela uvođenjem reaktivnih cistein aminokiselina.
[0540] Cisteinske aminokiseline mogu se konstruisati na reaktivnim mestima antitela i koje ne formiraju međulančane ili međumolekularne disulfidne veze (Junutula, i dr., 2008b Nature Biotech., 26(8):925932; Dornan i dr. (2009) Blood 114(13):2721-2729; US 7521541; US 7723485; WO2009/052249). Konstruisani cistein tioli mogu da reaguju sa veznim reagensima ili reagensima lek-veznik iz predmetnog pronalaska koji imaju tiol-reaktivne, elektrofilne grupe kao što su maleimid ili alfa-halo amidi da formiraju ADC sa antitelima napravljenim od cisteina i delovima leka PBD. Lokacija ostatka leka može tako biti dizajnirana, kontrolisana i poznata. Opterećenje lekom se može kontrolisati pošto konstruisane cistein tiolne grupe obično reaguju sa tiol-reaktivnim veznicima reagensima ili reagensima lek-veznik sa visokim prinosom. Inženjering IgG antitela za uvođenje aminokiseline cisteina supstitucijom na jednom mestu na teškom ili lakom lancu daje dva nova cisteina na simetričnom antitelu. Opterećenje lekom blizu 2 može se postići skorom homogenošću proizvoda konjugacije ADC.
[0541] Kada više od jedne nukleofilne ili elektrofilne grupe antitela reaguje sa intermedijerom lek-veznik, ili reagensom povezivača praćenim reagensom grupe leka, onda je rezultujući proizvod mešavina ADC jedinjenja sa distribucijom delova leka vezanih za antitelo, npr. 1, 2, 3, itd. Postupci tečne hromatografije kao što su polimerna reverzna faza (PLRP) i hidrofobna interakcija (HIC) mogu da razdvoje jedinjenja u smeši prema vrednosti punjenja leka. Preparati ADC sa jednom vrednošću punjenja leka (p) mogu biti izolovani, međutim, ovi ADC sa jednom vrednošću punjenja mogu i dalje biti heterogene smeše jer delovi leka mogu biti vezani, preko veznika, na različitim mestima na antitelu.
[0542] Prema tome, sastavi konjugata antitelo-lek prema pronalasku obuhvataju smeše jedinjenja konjugata antitelo-lek gde antitelo ima jedan ili više PBD delova leka i gde delovi leka mogu biti vezani za antitelo na različitim aminokiselinskim ostacima.
[0543] U jednom otelotvorenju, prosečan broj dimer pirolobenzodiazepinskih grupa po sredstvu za vezivanje ćelije je u opsegu od 1 do 20. U nekim otelotvorenjima opseg je izabran od 1 do 8, 2 do 8, 2 do 6, 2 do 4 i 4 do 8.
[0544] U nekim otelotvorenjima, postoji jedna dimer pirolobenzodiazepinska grupa po sredstvu za vezivanje ćelije.
Opšti sintetički putevi
[0545] Sinteza PBD jedinjenja je opširno razmatrana u sledećim referencama:
a) WO 00/12508 (stranice 14 do 30);
b) WO 2005/023814 (stranice 3 do 10);
c) WO 2004/043963 (stranice 28 do 29); i
d) WO 2005/085251 (stranice 30 do 39).
Put sinteze
[0546] Jedinjenja predmetnog pronalaska formule I gde R<20>i R<21>formiraju dvostruku vezu azot-ugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezana mogu se sintetizovati iz jedinjenja Formule II:
gde su R<6>, R<7>, R<9>, R<6'>, R<7'>, R<9'>, R<11b>, Y, Y' i R" kao što je definisano za jedinjenja formule I, a R<LL>je prekursor R<L>- ovaj postupak je posebno primenljiv na jedinjenja formule I gde je R<L>formule IIIa. Za ova jedinjenja, R<LL>će tipično biti deo R<L>, kao što je grupa formule IIIa':
U tom slučaju, reakcija uključuje dodavanje grupe G<L>. Drugi potreban korak je uklanjanje Prot<O>grupe.
[0547] Jedinjenja Formule 2 se mogu napraviti uklanjanjem zaštite sa R<LL>grupe jedinjenja Formule 3:
gde su R<6>, R<7>, R<9>, R<6'>, R<7'>, R<9'>, R<11b>, Y, Y' i R" kao što je definisano za jedinjenja formule I, R<LL-Prot>je zaštićena verzija R<LL>, a Prot<N>predstavlja jednostavnu zaštitnu grupu za azot (npr. Fmoc, Boc) koja je ortogonalna R<LL>zaštitnoj grupi.
[0548] Jedinjenja formule 3 mogu se dobiti zatvaranjem prstena jedinjenja Formule 4:
4
gde se zatvaranje prstena vrši oksidacijom, npr. Swern.
[0549] Jedinjenja formule 4 mogu se sintetizovati iz jedinjenja formule 5:
postepenim dodavanjem dve zaštitne grupe. Ovo se može postići jednostavnom zaštitom amino grupe koja će rezultirati imino vezom u konačnom jedinjenju (npr. Fmoc, Boc), nakon čega sledi postavljanje željene zaštitne grupe na drugu amino grupu.
[0550] Jedinjenja formule I gde je R<L>formule IIIb, mogu se sintetizovati na sličan način, iako se kompletna R<L>grupa može instalirati počevši od jedinjenja Formule 5, pre nego korišćenjem zaštićenog prekursora.
[0551] Jedinjenja Formule 5 mogu se sintetizovati poznatim postupcima, kao što su oni obelodanjeni u WO 2011/130598.
[0552] Alternativno, jedinjenja Formule 4 mogu se sintetizovati monomernim putem, kao što je prikazano u primeru 3.
[0553] Jedinjenja sadašnjeg pronalaska formule I gde R<20>i R<21>ne formiraju dvostruku vezu azot-ugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezani, mogu se napraviti modifikacijama iznad navedenih puteva.
Sinteza konjugata leka
[0554] Konjugati se mogu pripremiti kao što je prethodno opisano. Antitela se mogu konjugovati sa jedinjenjem Veznik Leka kao što je opisano u Doronina i dr., Nature Biotechnology, 2003, 21, 778-784). Ukratko, antitela (4-5 mg/mL) u PBS-u koji sadrži 50 mM natrijum borata na pH 7,4 redukovana su sa tris(karboksietil)fosfin hidrohloridom (TCEP) na 37 °C. Napredak reakcije, koja redukuje međulančane disulfide, prati se reakcijom sa 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzojevom kiselinom) i ostavlja se da se odvija dok se ne postigne željeni nivo tiola/mAb. Redukovano antitelo se zatim ohladi na 0°C i alkiluje sa 1,5 ekvivalenta maleimidnog leka-veznika po tiolu antitela. Posle 1 sata, reakcija je ugašena dodavanjem 5 ekvivalenata N-acetil cisteina. Ugašeni lek-veznik je uklonjen gel filtracijom preko PD-10 kolone. ADC se zatim sterilno filtrira kroz filter šprica od 0,22 µm. Koncentracija proteina se može odrediti spektralnom analizom na 280 nm i 329 nm, respektivno, uz korekciju za doprinos apsorpcije leka na 280 nm. Za određivanje stepena agregacije antitela može se koristiti hromatografija za isključenje veličine, a RP-HPLC se može koristiti za određivanje nivoa preostalog NAC-ugašenog lek-veznika.
Dalja podešavanja
[0555] Sledeće preferencije se mogu primeniti na sve aspekte pronalaska kao što je iznad opisano, ili se mogu odnositi na jedan aspekt. Preference se mogu kombinovati zajedno u bilo kojoj kombinaciji.
[0556] U nekim otelotvorenjima, R<6'>, R<7'>, R<9'>i Y' su izabrani iz iste grupe kao i R<6>, R<7>i R<9>i Y respektivno. U nekim od ovih otelotvorenjima, R<6'>, R<7'>, R<9'>i Y' su izabrani iz iste grupe kao i R<6>, R<7>i R<9>i Y respektivno. N10'-C11'
[0557] U nekim otelotvorenjima, R<20>je H, i R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil. U nekim od ovih otelotvorenja, R<21>je OH. U nekim drugim otelotvorenjima, R<21>je OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil. U nekim od ovih otelotvorenja, R<A>je metil.
[0558] U nekim otelotvorenjima, R<20>i R<21>formiraju dvostruku vezu azot-ugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezani.
[0559] U nekim otelotvorenjima, R<20>je H i R<21>je SOzM, gde je z 2 ili 3 i M je monovalentni farmaceutski prihvatljiv katjon. U nekim od ovih otelotvorenja, M je monovalentni farmaceutski prihvatljiv katjon, i može biti Na<+>. U nastavku, u nekim otelotvorenjima z je 3.
[0560] U nekim otelotvorenjima, R<20>je H i R<21>je H.
[0561] U nekim otelotvorenjima gde je R<20>(d-iii), može postojati dodatna nitro grupa na benzenskom prstenu, npr. orto na R<Z>.
[0562] U nekim otelotvorenjima, R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil i R<20>je izabran iz:
[0563] -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH- predstavlja dipeptid. Aminokiseline u dipeptidu mogu biti bilo koja kombinacija prirodnih aminokiselina. Dipeptid može biti mesto delovanja za deljenje posredovano katepsinom.
[0564] U jednom otelotvorenju, dipeptid, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-, je izabran iz:
− Phe-Lys-,
− Val-Ala-,
− Val-Lys-,
− Ala-Lys-,
− Val-Cit-,
− Phe-Cit-,
− Leu-Cit-,
− lle-Cit-,
− Phe-Arg-,
− Trp-Citgde je Cit citrulin.
[0565] Poželjno, dipeptid, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-, je izabran iz:
− Phe-Lys-,
− Val-Ala-,
− Val-Lys-,
− Ala-Lys-,
− Val-Cit-.
[0566] Najpoželjnije, dipeptid, -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-, je -Phe-Lys- ili -Val-Ala-.
[0567] Mogu se koristiti i druge kombinacije dipeptida, uključujući one koje su opisali Dubowchik i dr., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869.
[0568] U jednom otelotvorenju, bočni lanac aminokiseline je derivatizovan, gde je prikladno. Na primer, amino grupa ili karboksi grupa bočnog lanca aminokiseline može biti derivatizovana.
[0569] U jednom otelotvorenju, amino grupa NH2aminokiseline bočnog lanca, kao što je lizin, je derivatizovani oblik izabran iz grupe koju čine NHR i NRR'.
[0570] U jednom otelotvorenju, karboksi grupa COOH aminokiseline bočnog lanca, kao što je asparaginska kiselina, je derivatizovani oblik izabran iz grupe koju čine COOR, CONH2, CONHR i CONRR'.
[0571] U jednom otelotvorenju, bočni lanac aminokiselina je hemijski zaštićen, tamo gde je to prikladno. Zaštitna grupa bočnog lanca može biti grupa kao što je objašnjeno iznad. Sadašnji pronalazači su ustanovili da se zaštićene aminokiselinske sekvence mogu deliti enzimima. Na primer, ustanovljeno je da se dipeptidna sekvenca koja sadrži Lys ostatak zaštićen Boc bočnim lancem može deliti katepsinom.
[0572] Zaštitne grupe za bočne lance aminokiselina su dobro poznate u tehnici i opisane su u Novabiochem katalogu. Dodatne strategije zaštitnih grupa su navedene u Zaštitnim grupama u organskoj sintezi, Greene i Wuts.
[0573] Moguće zaštitne grupe bočnog lanca su prikazane u nastavku za one aminokiseline koje imaju reaktivnu funkcionalnost bočnog lanca:
Arg: Z, Mtr, Tos;
Asn: Trt, Xan;
Asp: Bzl, t-Bu;
Cys: Acm, Bzl, Bzl-OMe, Bzl-Me, Trt;
Glu: Bzl, t-Bu;
Gln: Trt, Xan;
His: Boc, Dnp, Tos, Trt;
Lys: Boc, Z-CI, Fmoc, Z, Alloc;
Ser: Bzl, TBDMS, TBDPS;
Thr: Bz;
Trp: Boc;
Tyr: Bzl, Z, Z-Br.
[0574] U jednom otelotvorenju, zaštita bočnog lanca je odabrana da bude ortogonalna grupi koja je obezbeđena kao, ili kao deo, grupa za zatvaranje, gde je prisutna. Prema tome, uklanjanje zaštitne grupe bočnog lanca ne uklanja zaštitnu grupu, ili bilo koju funkcionalnost zaštitne grupe koja je deo grupe za zatvaranje.
[0575] U drugim otelotvorenjima pronalaska, odabrane aminokiseline su one koje nemaju reaktivnu funkcionalnost bočnog lanca. Na primer, aminokiseline se mogu izabrati između: Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, i Val.
[0576] Posebno je poželjno u ovom pronalasku, da ako L<1>sadrži dipeptid, onda je -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH- isti dipeptid.
[0577] Druge poželjne grupe R<20>uključuju:
Dimerni veznik
[0578] U nekim otelotvorenjima, Y i Y' su oba O.
[0579] U nekim otelotvorenjima, R" je C3-7alkilen grupa bez supstituenata. U nekim od ovih otelotvorenja, R" je C3, C5ili C7alkilen. Naročito, R" može biti C3ili C5alkilen.
[0580] U drugim otelotvorenjima, R" je grupa formule:
gde je r 1 ili 2.
[0581] Fenilenska grupa može biti zamenjena piridilen grupom.
R<6>do R<9>
[0582] U nekim otelotvorenjima, R<9>je H.
[0583] U nekim otelotvorenjima, R<6>je izabrana između H, OH, OR, SH, NH2, nitro i halo, i može biti izabrana između H ili halo. U nekim od ovih otelotvorenja, R<6>je H.
[0584] U nekim otelotvorenjima, R<7>je izabrana između H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR' i halo. U nekim od ovih otelotvorenja R<7>je izabrana između H, OH i OR, gde je R izabrana između opciono supstituisanih C1-7alkila, C3-10heterociklila i C5-10aril grupa. R može biti poželjnije C1-4alkil grupa, koja može ili ne mora biti supstituisana. Supstituent od interesa je C5-6aril grupa (npr. fenil). Posebno poželjni supstituenti na pozicijama 7 su OMe i OCH2Ph. Drugi supstituenti od posebnog interesa su dimetilamino (tj. -NMe2); -(OC2H4)qOMe, gde je q od 0 do 2; C6heterociklile koji sadrže azot, uključujući morfolino, piperidinil i N-metil-piperazinil.
[0585] Ova otelotvorenja i preferencije se primenjuju na R<9'>, R<6'>i R<7'>respektivno.
R<11b>
[0586] U nekim otelotvorenjima, R<11b>je OH.
[0587] U nekim otelotvorenjima, R<11b>je OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil. U nekim od ovih otelotvorenja, R<A>je metil.
[0588] U nekim otelotvorenjima prvog aspekta predmetnog pronalaska su formule la, Ib ili Ic:
gde je R<1a>odabran između metila i benzila;
R<L>i R<11b>su kao što su definisani iznad.
[0589] Ova otelotvorenja i preferencije se takođe primenjuju na drugi aspekt pronalaska.
Veznik (R<L>)
[0590] U nekim otelotvorenjima, R<L>je formule IIIa.
[0591] U nekim otelotvorenjima, R<LL>je formule IIIa'.
G<L>
[0592] G<L>može biti izabran iz
gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu, npr. fenilen.
[0593] U nekim otelotvorenjima, G<L>je izabran iz G<L1-1>i G<L1-2>. U nekim od ovih otelotvorenja, G<L>je G<L1-1>.
G<LL>
[0594] G<LL>može biti izabran iz:
gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu, npr. fenilen.
[0595] U nekim otelotvorenjima, G<LL>je izabran iz G<LL1-1>i G<LL1-2>. U nekim od ovih otelotvorenja, G<LL>je G<LL1-1>.
X
[0596] X je:
gde a = 0 do 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5.
a može biti 0, 1, 2, 3, 4 ili 5. U nekim otelotvorenjima, a je 0 do 3. U nekim od ovih otelotvorenjima, a je 0 do 1. U daljim otelotvorenjima, a je 0.
b može biti 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16. U nekim otelotvorenjima, b je 0 do 12. U nekim od ovih otelotvorenjima, b je 0 do 8, i može biti 0, 2, 4 ili 8.
c može biti 0 ili 1.
d može biti 0, 1, 2, 3, 4 ili 5. U nekim otelotvorenjima, d je 0 do 3. U nekim od ovih otelotvorenjima, d je 1 do 2. U daljim otelotvorenjima, d je 2.
[0597] U nekim otelotvorenjima X, a je 0, c je 1 i d je 2, i b može biti od 0 do 8. U nekim od ovih otelotvorenjima, b je 0, 4 ili 8.
Q
[0598] U jednom otelotvorenju, Q je aminokiselinski ostatak. Aminokiselina može biti prirodna aminokiselina ili ne-prirodna aminokiselina.
[0599] U jednom otelotvorenju, Q se bira između: Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, i Trp, gde je Cit citrulin.
[0600] U jednom otelotvorenju, Q sadrži ostatak dipeptida. Aminokiseline u dipeptidu mogu biti bilo koja kombinacija prirodnih aminokiselina i neprirodnih aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, dipeptid sadrži prirodne aminokiseline. Tamo gde je veznik katepsin labilni veznik, dipeptid je mesto dejstva za cepanje posredovano katepsinom. Tada je dipeptid mesto prepoznavanja katepsina.
[0601] U jednom otelotvorenju, Q se bira između:
<CO>-Phe-Lys-<NH>,
<CO>-Val-Ala-<NH>,
<CO>-Val-Lys-<NH>,<co>-Ala-Lys-<NH>,
1
<co>-Val-Cit-<NH>,
<co>-Phe-Cit-<NH>,
<co>-Leu-Cit-<NH>,
<co>-Ile-Cit-<NH>,
<co>-Phe-Arg-<NH>, i
<co>-Trp-Cit-<NH>;
gde je Cit citrulin.
[0602] Poželjno, Q je izabran iz:
<co>-Phe-Lys-<NH>,
<co>-Val-Ala-<NH>,
<co>-Val-Lys-<NH>,
<co>-Ala-Lys-<NH>,
<co>-Val-Cit-<NH>.
[0603] Najpoželjnije, Q je izabran iz<co>-Phe-Lys-<NH>,<co>-Val-Cit-<NH>i<co>-Val-Ala-<NH>.
[0604] Ostale kombinacije dipeptida od interesa uključuju:
<co>-Gly-Gly-<NH>,
<co>-Pro-Pro-<NH>, i
<co>-Val-Glu-<NH>.
[0605] Mogu se koristiti i druge kombinacije dipeptida, uključujući one koje su opisali Dubowchik i dr., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869.
[0606] U nekim otelotvorenjima, Q<x>sadrži ostatak tripeptida. Aminokiseline u tripeptidu mogu biti bilo koja kombinacija prirodnih aminokiselina i neprirodnih aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, tripeptid sadrži prirodne aminokiseline. Tamo gde je veznik katepsin labilni veznik, tripeptid je mesto dejstva za cepanje posredovano katepsinom. Tada je tripeptid mesto prepoznavanja katepsina.
[0607] U jednom otelotvorenju, bočni lanac aminokiselina je hemijski zaštićen, tamo gde je to prikladno. Zaštitna grupa bočnog lanca može biti grupa kao što je objašnjeno u nastavku. Zaštićene sekvence aminokiselina mogu se deliti enzimima. Na primer, dipeptidna sekvenca koja sadrži Boc bočni lanac zaštićeni ostatak Lys može se deliti katepsinom.
[0608] Zaštitne grupe za bočne lance aminokiselina su dobro poznate u tehnici i opisane su u Novabiochem katalogu i kako je iznad opisano.
[0609] U nekim otelotvorenjima, R<L>je formule IIIb.
[0610] U nekim otelotvorenjima, R<LL>je formule IIIb'.
[0611] R<L1>i R<L2>su nezavisno izabrani između H i metila, ili zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilen ili ciklobutilen grupu.
[0612] U nekim otelotvorenjima, i R<L1>i R<L2>su različiti.
[0613] U nekim otelotvorenjima, R<L1>je H, a R<L2>je metil.
[0614] U nekim otelotvorenjima, i R<L1>i R<L2>su metil.
[0615] U nekim otelotvorenjima, R<L1>i R<L2>zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilensku grupu.
[0616] U nekim otelotvorenjima, R<L1>i R<L2>zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilensku grupu.
[0617] U grupi IIIb, u nekim otelotvorenjima, e je 0. U drugim otelotvorenjima, e je 1 i nitro grupa može biti na bilo kojoj dostupnoj poziciji prstena. U nekim od ovih otelotvorenjima, nalazi se u orto položaju. U drugim
2
od ovih otelotvorenja, on je u para položaju.
[0618] U jednom određenom otelotvorenju, prvi aspekt pronalaska sadrži jedinjenje formule Id:
gde se Q bira između:
(a) -CH2-;
(b) -C3H6-; i
1.
[0619] U jednom određenom otelotvorenju, drugi aspekt pronalaska, veznik leka (D<L>) je formule (Id'):
gde se Q bira između:
(a) -CH2-;
(b) -C3H6-; i
[0620] U nekim otelotvorenjima predmetnog pronalaska, supstituent C11 može biti u sledećem stereohemijskom rasporedu u odnosu na susedne grupe:
[0621] U drugim otelotvorenjima, supstituent C11 može biti u sledećem stereohemijskom rasporedu u odnosu na susedne grupe:
Primeri
Opšte informacije
[0622] Fleš hromatografija je izvedena korišćenjem Biotage Isolera 1 ™ koristeći gradijentnu eluaciju počev od 88% heksana / EtOAc ili 99,9% DCM / MeOH dok sve UV aktivne komponente (detekcija na 214 i 254 nm) nisu eluirane iz kolone. Gradijent se ručno održavao kad god je primećeno značajno eluiranje UV aktivnog materijala. Čistoća frakcija proveravana je tankoslojnom hromatografijom (TLC), koristeći Merck Kieselgel 60 F254 silikagel, sa fluorescentnim indikatorom na aluminijumskim pločama. Vizualizacija TLC je postignuta UV svetlošću ili parom joda, ukoliko nije drugačije navedeno. Rastvarači za ekstrakciju i hromatografiju su kupljeni i korišćeni bez daljeg prečišćavanja od kompanije VWR UK. Sve fine hemikalije su kupljene od Sigma-Aldrich ili TCI Europe, osim ako nije drugačije naznačeno. Pegilovani reagensi su dobijeni od kompanije Kuanta biodesign US preko kompanije Stratech UK.
[0623]<1>H i<13>C NMR spektri su dobijeni na Bruker Avance<®>400 spektrometru. Konstante sprege navedene su u hercima (Hz). Hemijske promene su zabeležene u delovima na milion (ppm) ispod polja od tetrametilsilana. Više rotacija je opisano kao s (singlet), bs (široki singlet), d (dublet), t (triplet) i m (multiplet).
[0624] Analitički uslovi LC / MS (za praćenje reakcija i određivanje čistoće) bili su sledeći: Maseni spektrometrijski elektrosprej u pozitivnom režimu su izvedeni primenom Shimadzu Nexera<®>/Prominence<®>LCMS-2020. Korišćene mobilne faze su rastvarač A (H2O sa 0,1% mravlje kiseline) i rastvarač B (CH3CN sa 0,1% mravlje kiseline). Gradijent za rutinsko sprovođenje od 3 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 25 sekundi, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 1 minuta 35 sekundi. Sastav se držao 50 sekundi na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 5 sekundi i držao tamo 5 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 3,0 minuta. Gradijent za sprovođenje od 15 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 1 minuta, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 9 minuta. Sastav se držao 2 minuta na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 10 sekundi i držao tamo 2 minuta i 50 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 15,0 minuta. Brzina protoka je bila 0,8 mL / minut (za trčanje od 3 minuta) i 0,6 mL / minut (za trčanje od 15 minuta). Detekcija je bila na 254 nm. Kolone: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP181,7 µm 2,1 x 50 mm na 50°C opremljen Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard predkolona, 130A, 1,7 µm, 2,1 mm u hodu x 5 mm (rutinski 3-minutno puštanje); i ACE Excel 2 C18-AR, 2 µ, 3,0 x 100mm opremljen sa Waters Acquity UPLC<®>BEH Shield RP18 VanGuard Pre-kolona, 130A, 1,7µm, 2,1 mm x 5 mm (15-minutno sprovođenje).
[0625] Uslovi za preparativnu HPLC bili su sledeći: Ultra-brza tečna hromatografija visokih performansi (UFLC) u reverznoj fazi je izvedena na Shimazdzu Prominence<®>mašini korišćenjem Phenomenex<®>Gemini NX 5µ C18 kolone (na 50°C) 150 × 21,2 mm. Korišćeni su rastvarač A (H2O sa 0,1% mravlje kiseline) i rastvarač B (CH3CN sa 0,1% mravlje kiseline). Svi UFLC eksperimenti izvedeni su sa gradijentnim uslovima:
Postupak A: Početni sastav 13% B se povećao na 60% B tokom perioda od 15 minuta, a zatim povećao na 100% B tokom 2 minuta. Sastav se držao 1 minut na 100% B, a zatim se vratio na 13% B za 0,1 minut i držao tamo 1,9 minuta. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 20,0 minuta. Protok je bio 20,0 ml / minut, a detekcija na 254 i 280 nm.
Postupak B: Početni sastav 13% B je povećan na 70% B tokom perioda od 17 minuta i održavan tokom 2 minuta, a zatim se vratio na 13% B za 0,1 minut i ostao tamo 1,9 minuta. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 20,0 minuta. Protok je bio 20,0 mL/minut, a detekcija na 223 nm.
Postupak C: Početni sastav 13% B se povećao na 75% B tokom perioda od 15 minuta, a zatim povećao na 100% B tokom 2 minuta. Sastav se držao 1 minut na 100% B, a zatim se vratio na 13% B za 0,1 minut i držao tamo 1,9 minuta. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 20,0 minuta. Brzina protoka je bila 20,0 ml / minut, a detekcija na 254 i 280 nm.
Primer 1
[0626]
4
(a) ((Propan1, 3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4, 1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)metanon) (I2)
[0627] DMF (12 kapi) je dodat mešanoj suspenziji bis-nitrobenzojeve kiseline I1 (10 g, 21,5 mmol) i oksalil hlorida (5,6 mL, 8,2 g, 64,5 mmol) u bezvodnom DCM (150 mL). Posle početne šumeće reakciona suspenzija je postala rastvor i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati. Većina rastvarača je uklonjena uparavanjem u vakuumu i dobijeni koncentrovani rastvor je ponovo rastvoren u minimalnoj količini suvog DCM i triturisan sa dietil etrom. Dobijeni žuti talog je sakupljen vakuum filtracijom, ispran hladnim dietil etrom i osušen 1 sat u vakuumskoj peći na 40°C. Čvrsti kiselinski hlorid je dodat u obrocima u mešanu suspenziju (S)-(+)-2-pirolidinmetanola (5,0 g, 4,9 mL, 49,5 mmol) i TEA (15,0 mL, 10,9 g, 108 mmol) u DCM (100mL) na -40°C (suvi led / CH3CN). Posle 1 sata mešanja, reakcija je završena kako je ocenjeno na LC / MS sa ekskluzivno željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 1,33 minuta, ES+ m/z 655 [M+ Na]<+>·, 633 [M H]<+>·. Smeša je razblažena DCM (100 ml) i isprana sa 1N HCI (2 x 50 mL), zasićenim NaHCO3(3 x 40 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i rastvarač je isparen in vacuo da bi se dati je čisti proizvod I2 kao žuta čvrsta supstanca (13,6 g, prinos 100%).
(b) ((2S,2'S)-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitrobenzoil))bis(pirolidin-1,2-diil))bis(metilen) diacetat (I3)
[0628] Rastvor Ac2O (4,47 mL, 4,83 g, 47,3 mmol) u suvom DCM (25 mL) je dodat u kapima u mešani rastvor bis-alkohola I2 (13,6 g, 21,5 mmol), DMAP (263 mg, 2,15mmol) i piridin (4,17 mL, 4,08 g, 51,6 mmol) u suvom DCM (125 mL) na 0°C (led/aceton) u atmosferi argona. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje i nakon 1 sata na sobnoj temperaturi analiza pomoću LC/MS je otkrila završetak reakcije i čistu konverziju u željeni proizvod u vremenu zadržavanja od 1,55 minuta, ES+ m/z 740 [M+ Na]<+>, 717 [M H]<+>. Smeša je razblažena sa DCM (20 mL) i isprana sa 1N HCl (2 x 100 mL), H2O (25 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i rastvarač isparen u vakuumu da bi se dobio sirovi bis-acetat I3 kao žuta čvrsta supstanca (14,4 g, 94% prinos) koja je bila zadovoljavajuće čistoće da bi se prenela u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(c) ((2S,2'S)-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksibenzoil))bis(pirolidin-1,2-diil))bis(metilen) diacetat (I4)
[0629] Uzorak od 10% Pd-C (132 mg) je pažljivo tretiran sa EtOAc (10 mL) da bi se dobila suspenzija koja je dodata u rastvor nitro jedinjenja I3 (1,32 g, 1,84 mmol) u EtOAc (20 mL) i EtOH (30 mL) u posudi za hidrogenizaciju. Korišćenjem Parr® aparata, smeša je tretirana gasovitim vodonikom do 10 psi i protresena na sobnoj temperaturi, a zatim degasirana u vakuumu, ovaj proces je ponovljen još dva puta. Posuda je napunjena gasovitim vodonikom do 45 psi, protresena i pritisak je održavan nakon potrošnje vodonika. Analiza pomoću LC/MS pokazala je da reakcija nije bila potpuna nakon 3 sata i ostavljena je da se trese na 45 psi tokom 3 dana (vikend) nakon čega je postignuta zadovoljavajuća konverzija u proizvod, vreme zadržavanja = 1,32 minuta, ES+ m/z 657 [M H]<+>. Reakciona smeša je degasirana in vacuo, a zatim filtrirana kroz celite<®>jastučić. Filtrat je isparen in vacuo, rezultujući ostatak je ponovo rastvoren u DCM (30 mL), osušen (MgSO4), filtriran i rastvarač je isparen in vacuo da bi se dobio sirovi bis-anilin I4 kao žućkasta pena (1,1 g, 91% prinos) koji je sadržao 8% nečistoće, ali je prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(d) ((S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-(acetoksimetil)pirolidin-1-karbonil)-5-((terc-butoksikarbonil)amino)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-amino-5-metoksibenzoil)pirolidin-2-rl)metrl acetat (I5)
[0630] Boc2O (330 mg, 1,51 mmol) je dodat u mešani rastvor bis-anilina I4 (1,1 g, 1,68 mmol) u suvom THF (10 mL). Reakciona smeša je zagrevana i mešana na 75°C tokom 16 sati. Analiza pomoću LC/MS otkrila je željeni mono Boc proizvod I5 u vremenu zadržavanja 1,58 minuta, I% = 50, ES+ m/z 779 [M+ Na]<+>, 757 [M+ H]<+>zajedno sa neizreagovanim početnim materijalom u vremenu zadržavanja 1,32 minuta, I% = 30, i bis-Boc materijalom u vremenu zadržavanja 1,81 minuta, I% = 21, ES+ m/z 879 [M+ Na]<+>,857 [M+ H]<+>. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i THF je uklonjen isparavanjem u vakuumu. Prečišćavanje Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 50 g, 100 mL u minuti) dalo je mono Boc proizvod I5 kao narandžastu penu (519 mg, 46% prinos na bazi Boc2O, eluiranje sa 97% DCM/MeOH) neizreagovanim bis-anilinom I4 (285 mg, eluiranje sa 95% DCM/MeOH) i bis-Boc (248 mg, eluiranje sa 98% DCM/MeOH).
(e) ((S)-1-(4-(3-(4-((S)-2-(acetoksimetil)pirolidin-1-karbonil)-5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((terc-butoksickarbonil)amino)-5-metoksibenzoil)pirolidin-2-il)metil acetat (I7)
[0631] Trifosgen (380 mg, 1,28 mmol) je dodat u mešani rastvor mono Boc proizvoda I5 (2,69 g, 3,56 mmol) i TEA (1,09 mL, 791 mg, 7,83 mmol) u suvom DCM (30 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC / MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 1,66 minuta, ES+ m/z 837 [M+ Na]<+>, 815 [M+ H]<+>). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (740 µL, 539 mg, 5,34 mmol), praćeno dodavanjem veznika I6 (1,34 g, 3,56 mmol). Posle 2 sata mešanja pod argonom, LC / MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat I7 (vreme zadržavanja 1,74 minuta, ES+ m/z 1182 [M+ Na]<+>·, 1160 [M+ H]<+>·). Smeša je razblažena DCM (80 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (2 x 30 mL), H2O (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje Isolerom™ (Heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti karbamat I7 (eluiranjem sa 65% Heksan/EtOAc) kao žutu penu (2,95 g, 71% prinos).
(f) terc-butil (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I8)
[0632] Čvrsti K2CO3(1,75 g, 12,7 mmol) je dodat u mešani rastvor acetatom zaštićenog jedinjenja I7 (2,93 g, 2,53 mmol) u MeOH (60 mL) i H2O (12 mL). Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, reakcija se smatra završenom, kao što je ocenjeno pomoću LC/MS sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 1,57 minuta, ES+ m/z 1098 [M+ Na]<+>, 1076 [M+ H]<+>. MeOH je uklonjen uparavanjem in vacuo i rezultujući ostatak je podeljen između vode (75 mL) i DCM (75 mL). Organski slojevi su odvojeni i vodeni sloj je izvađen sa DCM (3 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom (3 x 50 mL), slanim rastvorom (60 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) bis-alkohola I8 (eluiranjem 97% DCM/MeOH) u vidu bele pene (2,44 g, 90% prinos).
(g) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(terc-butoksikarbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (I9)
[0633] Rastvor anhidrovanog DMSO (710 µL, 780 mg, 9,99 mmol) u suvom DCM (20 mL) je dodat u kapima u mešani rastvor oksalil hlorida (2,72 mL 2,0 M rastvora u DCM, 5,44 mmol) u suvom DCM (20 mL) na -45°C (suvi led/CH3CN) u atmosferi argona. Posle 15 minuta mešanja na -45°C, reakciona smeša je tretirana kap po kap sa rastvorom bis-alkohola I8 (2,44 g, 2,27 mmol) u suvom DCM (30 mL). Posle mešanja na -45°C još 1 sat, reakciona smeša je tretirana kap po kap sa rastvorom TEA (3,16 mL, 2,29 g, 22,7 mmol) u suvom DCM (20 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom perioda od 1,5 sata i razblažena sa DCM (100 mL), zatim isprana zasićenim NH4Cl (2 x 50 mL), zasićenim NaHCO3(50 mL), vodom (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušen (MgSO4), filtriran i isparen in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je ciklizovano jedinjenje I9 (eluiranje sa 95,7% DCM/MeOH) u vidu žućkaste pene (1,61 g, 66% prinos): LC/MS I9 pri vremenu zadržavanja 1,46 minuta, ES+ m/z 1072 [M+ H]<+>, 1094 [M+ Na]<+>.
(h) 4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(tercbutoksikarbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c[1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (I10)
[0634] Pd(PPh3)4(6,47 mg, 5,6 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (29 µL, 25 mg, 0,35 mmol) i alok jedinjenja I9 (300 mg, 0,28 mmol) u suvom DCM (10 mL). Posle mešanja tokom 4 sata pod argonom na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom primećenim u vremenu zadržavanja 1,10 minuta, ES+, m/z 1010 [M+ Na]<+>. , 988 [M+ H]<+>. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (30 mL), zatim isprana zasićenim NH4CI (2 x 20 mL), slanim rastvorom (30 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Trituracija sa dietil etrom praćena isparavanjem u vakuumu dala je sirovi amin I10 (261 mg, 95% prinos) koji je sproveden u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(i) terc-butil(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (I11)
[0635] EDCI (56 mg, 0,29 mmol) je dodat u mešani rastvor MAL-dPEG<®>8-kiseline (172 mg, 0,29 mmol, Stratech Scientific Limited) i amina I10 (261 mg, 0,26 mmol) u suvom DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana pod atmosferom argona 2,5 sata pri čemu je analiza pomoću LC/MS pokazala potpunu konverziju u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 1,38 minuta, ES+ m/z 1585 [M+ Na]<+>, 1563 [M+ H]<+>. Reakciona smeša je razblažena sa DCM (30 mL) i isprana sa H2O (20 mL), slanim rastvorom (2 x 20 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL po minuti) dalo je amid I11 (eluiranje sa 91% DCM/MeOH) kao belu penu (277 mg, 67% prinos).
(j) 4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil(11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (1)
[0636] Rastvor 95:5 v/v TFA/H2O (2 mL) je dodat sirovom uzorku Boc-pripremljenog jedinjena I11 (262 mg, 0,,17 mmol) na 0°C (led/aceton). Posle mešanja na 0°C tokom 3 sata, reakcija se smatra završenom, kako je ocenjeno LC/MS, željeni pik proizvoda u vremenu zadržavanja 1,30 minuta, ES+ m/z 1445 [M+ H]<+>. Reakciona smeša je držana na hladnom i dodavana u kapima u ohlađeni zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(100 mL). Smeša je ekstrahovana sa DCM (3 x 30 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (30 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje Isolerom™ (CHCl3/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 25 mL u minuti) dalo je 1 (eluiranje sa 89,6% CHCl3/MeOH) kao žutu penu (170 mg, 70% prinos). Dalje prečišćavanje preparativnom HPLC (Postupak A) dalo je 1 kao svetlo žutu penu (105 mg, 43% prinos): LC/MS (15-minutni puštanje), vreme zadržavanja 5,25 minuta, ES+ m/z 1445 [M+ H]<+>;<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,92 (s, 1H), 8,16 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 7,99 (t, 1H, J = 5,7 Hz), 7,86 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 4,5 Hz), 7,64-7,50 (m, 2H), 7,34 (s, 1H), 7,24-7,13 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,88 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,53-6,41 (m, 1H), 5,52-5,41 (m, 1H), 5,13 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 4,93-4,77 (m, 1H), 4,42-4,34 (m, 1H), 4,30-3,90 (m, 6H), 3,80-3,60 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,60 (t, 4H, J = 7,3 Hz), 3,53-3,46 (m, 28H), 3,41-3,33 (m, 1H), 3,32-3,29 (m, 2H, zamućeno H2O), 3,19-3,12 (m, 2H), 2,48-1,60, m, 15H), 1,35-1,20 (m, 3H), 0,87 (d, 3H, J = 6,6 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Primer 2
[0637]
(a) ((pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)metanon) (I13)
[0638] DMF (5 kapi) je dodat mešanoj suspenziji bis-nitrobenzojeve kiseline I12 (4,05 g, 8,192 mmol, 1,0 ekv.) i oksalil hlorida (12,3 mL 2M rastvora, 24,57 mmol, 3,0 ekv.) u rastvoru CH2Cl2(65 mL). Posle početne šumeće reakciona suspenzija je postala rastvor i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i dobijena čvrsta supstanca je triturisana sa Et2O i sušena u vakuum pećnici na 40°C tokom 3 sata. Čvrsti kiseli hlorid je u porcijama dodat u mešanu suspenziju (S)-(+)-2-pirolidinmetanola (1,78 mL, 18,02 mmol, 2,2 ekv.) i i-Pr2NEt (7,13 mL, 40,96 mmol, 5,0 ekv.) u CH2Cl2(65mL) na -40°C (suvi led/CH3CN). Posle 1 sata mešanja, reakciona temperatura je dostigla 0°C i završena je kako je ocenjeno LC/MS sa isključivo željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 1,44 minuta, ES+ m/z 661 [M+ H]<+>, 683 [M Na]<+>. Smeša je razblažena sa CH2Cl2(100 mL) i isprana uzastopno sa H2O, 1N NaOH i 1M HCl (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i rastvarač je isparen u vakuumu da bi se dobio čist proizvod I13 kao žuta pena (4,44 g, 82% prinos), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.
(b) ((pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (I14)
[0639] Imidazol (2,74 g, 40,32 mmol, 6,0 ekv.), zatim TBSCI (3,04 g, 20,16 mmol, 3,0 ekv.) dodati su u porcijama u mešani rastvor bis-alkohola I13 (4,44 g, 6,720 mmol, 3,0 ekv.). pod atmosferom argona. Posle 90 minuta, reakciona smeša je filtrirana i filtrirana isprana sa H2O, osušena preko MgSO4i koncentrovana u vakuumu. Fleš hromatografija na koloni (50-80% EtOAc u heksanu) dala je proizvod I14 u vidu žute pene (4,84 g, 5,443 mmol, 81% prinos). LC/MS vreme zadržavanja = 2,18 minuta, ES+ m/z 889 [M H]<+>, 911 [M Na]<+>.
(c) ((pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (I15)
[0640] Zn prah je dodat u mešani rastvor bis-nitro jedinjenja I14 (1,32 g, 1,84 mmol) u MeOH (40 mL) na 0°C.5% HCO2H u MeOH je dodat u vidu kapi na 0°C i smeša je mešana 2 sata. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa zas. NaHCO3rastvorom, organska faza je osušena preko MgSO4 i koncentrovana in vacuo. Fleš hromatografija na koloni (0-2% MeOH u CHCl3) dala je proizvod I15 u vidu bledo žute pene (3,098 mmol, 3,736 mmol, 69% prinos). LC/MS vreme zadržavanja = 2,09 minuta, ES+ m/z 415 [M 2H]<2+>, 829 [M H]<+>, 851 [M Na]<+>.
(d) terc-butil (5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I16)
[0641] Boc2O (734 mg, 3,362 mmol) je dodat u mešani rastvor bis-anilina I15 (3,098 g, 3,736 mmol) u suvom THF (20 mL). Reakciona smeša je mešana 16 sati i koncentrovana u vakuumu. Fleš hromatografijom na koloni (30-50% EtOAc u heksanu) dala je mono Boc proizvod I16 u vidu žute pene (1,474 g, 47% prinosa na osnovu Boc2O), neizreagovanog bis-anilina I15 (1,043 g, 30% prinosa) i bis-Boc (419 mg, 15% prinos, LC/MS vreme zadržavanja = 2,37 min). LC/MS vreme zadržavanja I16 = 2,25 minuta, ES<+>m/z 929 [M H]<+>, 951 [M Na]<+>.
(e) terc-butil (5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tercbutildimethylsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-hidroksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I17)
[0642] Trifosgen (169 mg, 0,5710 mmol, 0,36 ekv.) je dodat u mešani rastvor mono Boc proizvoda I16 (1,474 g, 1,586 mmol, 1,0 ekv.) i Et3N (486 µL, 3,489 mmol) u suvom CH2Cl2(9 mL) na -10°C. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC / MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,30 minuta, ES+ m/z 1009 [M+ Na]<+>, 987 [M+ H]<+>). Dodat je rastvor I6 (898 mg, 2,379 mmol, 1,5 ekv.) i Et3N (332 uL, 2,379 mmol, 1,5 ekv.) u suvom CH2Cl2(14 mL). Reakcija je postepeno zagrevana do sobne temperature i mešana 16 h.15-minutna LC/MS analiza je otkrila da je početni materijal potrošen. Reakciona smeša je filtrirana kroz sloj SiO2(5% MeOH u eluaciji sa CH2Cl2) da bi se uklonio višak I6. Fleš hromatografija na koloni (20-80% EtOAc u heksanu) dala je I17 kao žutu penu (1,439 g, 68% prinos). LC/MS vreme zadržavanja = 2,26 min (3 minuta rada) i 10,43 min (15 minuta rada) ES<+>m/z 1355 [M Na]<+>, 1333 [M H]<+>. Primećena je zanemarljiva količina dimera uree (LC/MS vreme zadržavanja = 12,11 min, ES<+>m/z 1906 [M Na]<+>) koji je uklonjen u narednim koracima prečišćavanja.
(f) terc-butil (5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-2-hidroksi-4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)fenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I18)
[0643] Sirćetna kiselina (124 µL, 2,160 mmol, 2,0 ekv.) je dodata u 1M rastvor TBAF (3,2 mL, 3,200 mmol, 3,0 ekv.) i zatim dodata u mešani rastvor I17b u THF (67 mL) na 0°C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana 16 sati. LC/MS je pokazao da je reakcija nepotpuna. Dodat je TBAF (1,00 mL 1M rastvora, 1 mmol, 1,0 ekv.) i reakciona smeša je mešana još 24 sata. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i prečišćena pomoću Isolera™ (0-5% MeOH u CH2Cl2) da bi se dobio proizvod I18 kao bledo žuta pena (916 mg, 77% prinos). LC/MS vreme zadržavanja = 1,62 min, ES<+>m/z 1126 [M Na]<+>, 1104 [M H]<+>. (g) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(terc-butoksikarbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-benzo[ejpirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11atetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I19)
[0644] IBX (1,14 g, 1,825 mmol, 2,2 ekv.) je dodat u mešani rastvor diola I18 (916 mg, 0,8296 mmol, 1,0 ekv.) u DMSO. Reakciona smeša je zagrejana do 35°C i mešana 60 sati. Dodata je H2O i vodeni sloj je ekstrahovan sa CHCl3nekoliko puta. Organski ekstrakti su kombinovani, isprani sa zas. NaHCO3i osušeni preko MgSO4. Prečišćavanje Isolerom™ (1-8% MeOH u CH2Cl2) dalo je I19 kao narandžastu penu (908 mg, 99% prinos): LC/MS vreme zadržavanja = 1,50 minuta, ES+ m/z 1122 [M+ Na]<+>·, 1100 [M+ H]<+>.
(h) 4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(tercbutoksikarbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I20)
[0645] Pd(PPh3)4(15,8 mg, 13,64 µmol, 0,050 ekv.) je dodat u mešani rastvor pirolidina (56 µL, 0,6818 mmol, 2,5 ekv.) i I19 (300 mg, 0,2727 mmol) u CH2Cl2(10 mL) pod argonom. Nakon 30 minuta, zas. NH4Cl rastvor je dodat i smeša je snažno mešana i prebačena u Isolute® separator faza. Sakupljena organska faza je koncentrovana in vacuo da bi se dobila narandžasta pena I20 koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. (i) terc-butil (11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,1,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriacontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I21)
[0646] EDCl.HCl (117 mg, 0,29 mmol) je dodat u mešani rastvor MAL-dPEG®8-kiseline (360 mg, 0,6079 mmol, Stratech Scientific Limited) i amina I20 (608 mg, 0,5526 mmol) u CH2Cl2(15 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je mešana u atmosferi argona 24 sata, pri čemu je analiza pomoću LC/MS pokazala potpunu potrošnju 120. Reakciona smeša je razblažena sa CH2Cl2i isprana uzastopno sa zas. NH4Cl i zas. NaHCO3, osušena preko MgSO4, i koncentrovana in vacuo kako bi dala sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (4-16% MeOH u CH2Cl2) dalo je amid I21 kao belu čvrstu supstancu (77 mg, 79% čistoće (UV integracija @ 223 nm) 8,8% sirovog prinosa; 107 mg, 88% čistoće, 12% sirovi prinos; 224 mg, 86% čistoće, 25% sirovi prinos.
(j) 4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropzl-2-metzl-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil(11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (2)
[0647] Ledeno hladan rastvor 95:5 v/v TFA/H2O (3 mL) je dodat u sirovi uzorak Boc-zaštićenog jedinjenja I21 (107 mg, 67,51 µmol) na 0°C (led/rasol). Posle mešanja na 0°C tokom 30 minuta, reakcija se smatra završenom, kako je ocenjeno LC/MS, željeni pik proizvoda u vremenu zadržavanja 1,38 minuta, ES+ m/z 737 [M+ 2H]<2+>, 748 [M H Na]<2+>; 1472 [M H]<+>. Reakciona smeša je držana na hladnom i dodavana u kapima u ohlađeni zasićeni vodeni rastvor NaHCO3. Smeša je ekstrahovana sa CH2Cl2, zatim 10% MeOH u CH2Cl2, kombinovani organski slojevi su osušeni preko MgSO4i koncentrovani in vacuo da bi se dobio sirovi proizvod. Ovaj proces je ponovljen za druge serije od 121, sirovi proizvodi su kombinovani i prečišćeni preparativnom HPLC (Postupak B) da bi se dobio 2 kao bela čvrsta supstanca nakon liofilizacije (126 mg, 33% prinos, 96% čistoće na UV pri 223 nm): LC/MS (30 minuta rada), vreme zadržavanja = 10,96 minuta, ES+ m/z 1472 [M+ H]<+>.
Primer 3
1
(a) I23
[0649] Ovaj korak se može izvesti kao u literaturi (videti na primer WO2005085259A2; ili Wells, i dr., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 18 (2008) 2147-2151). Postupak uključuje Parr hidrogenaciju na sobnoj temperaturi sa 10% Pd/C u EtOH. Prinos je kvantitativan. Etanol se uklanja dva puta isparavanjem (EtOAc, a zatim DCM).
(b) Terc-butil (11S, 11aS)-8-((3-(bromometil)benzil)oksi)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I25)
[0650] Smeša fenola I23 (4 g, 8,91 mmol, 1 ekv.), 1,3-bis(bromometil)benzena I24 (9,42 g, 35,7 mmol, 4 ekv.), kalijum karbonata (1,23 g, 8,91 mmol, 1 ekv.), i aceton (40 mL) su zagrevani na 60°C tokom 5 sati. Nakon završetka je primećeno pomoću LC/MS, čvrste materije su uklonjene filtracijom i filtrat je koncentrovan do suvoće pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom (Biotage Isolera, 100 g Ultra, gradijent EtOAc/heksan 30/70 do 80/20 u 12CV). Prinos 4,25 g (75%). LC/MS, postupak od 3 minuta, 1,82 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 631,15 ([M+H]<+>, 100), podeljeni pik: THP diastereoizomeri.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,67 - 7,27 (m, 4H), 7,20 - 6,57 (m, 2H), 5,72 - 5,57 (m, 1H), 5,24 - 4,84 (m, 3H), 4,72 (s, 2H), 3,91 - 3,73 (m, 4H), 3,61 - 3,33 (m, 4H), 2,20 - 1,75 (m, 4H), 1,74 - 1,57 (m, 2H), 1,55 - 1,01 (m, 13H).
[0651] 128 je poznat u literaturi (videti WO2013053872A1, Jedinjenje 2, str.60)
(c) (S)-(2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)(5-metoksi-2-nitro-4-((triizopropilsilil)oksi)fenil)metanon (I29)
[0652] EDCI (12,4 g, 65 mmol, 1,2 ekv.) je dodat u rastvor kiseline I28 (20 g, 54,1 mmol, 1 ekv.) i hidroksibenzotriazol hidrata (8,05 g, 59,5 mmol, 1,1 ekv.) u dihlorometan (200 mL) na 0°C. Hladna kupka je uklonjena i reakcija je ostavljena da se nastavi 30 minuta na sobnoj temperaturi, a zatim rastvor (S)-pirolidin-2-ilmetanola (5,87 mL, 59,5 mmol, 1,1 ekv.) i trietilamina (11,32 mL, 81,1 mmol, 1,5 ekv.) u dihlorometanu (100 mL) je brzo dodato na -10°C pod argonom. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi tokom 40 minuta do 1 h i praćena je pomoću LC/MS i TLC (EtOAc). Čvrste materije su uklonjene filtracijom preko celita i organska faza je isprana hladnom vodenom 0,1 M HCl dok pH nije izmeren na 4 ili 5. Organska faza je zatim isprana vodom, a zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i višak rastvarača je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Isolera Biotage, 340 g Ultra; gradijent 25/75 etil acetat/heksan do 100/0 etil acetat/heksan u 6 CV). Višak rastvarača je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom dajući čisti proizvod I29 u vidu bledo žute pene (15,7 g, 64%). LC/MS 1,92 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 453,15 ([M+H]<+>, 30%; 328,15, 100%);<1>H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7,70 (s, 1H), 6,77 (s, 1H), 4,57 - 4,24 (m, 2H), 4,01 - 3,69 (m, 5H), 3,25-3,06 (m, 2H), 2,18 (dt, J = 7,5, 5,6 Hz, 1H), 1,96 - 1,62 (m, 3H), 1,42 - 1,18 (m, 3H), 1,10 (d, J= 7,4 Hz, 18H).
(d) (S)-(2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)(5-metoksi-2-nitro-4-((triizopropilsilil)oksi)fenil)metanon (I30)
[0653] t-Butildimetilsilil hlorid (10,39 g, 68,9 mmol, 2 ekv.) je dodat u rastvor alkohola I29 (15,6 g, 34,5 mmol, 1 ekv.) i imidazola (5,87 g, 86,2 mmol, 2,5 ekv.) u DCM (100 mL). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je uzastopno isprana vodom (300 mL), 0,5 M limunskom kiselinom (200 mL), slanim rastvorom (100 mL) i osušena (MgSO4). Filtracijom i uklanjanjem viška rastvarača dobijen je sirov proizvod, koji je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage Isolera, KP-Sil 340 g; 10/90 v/v etil acetat/heksan do 30/70 v/v etil acetat/heksan) da bi se izolovao silil etar I30 kao gusto žuto ulje. Prinos: 18,9 g, 97%. LC/MS 2,32 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 567,55 ([M+H]<+>, 100%)
(e) (S)-(2-amino-5-metoksi-4-((triizopropzlsilzl)oksi)fenil)(2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon (I31)
[0654] Rastvor nitro jedinjenja I30 (18,9 g, 33,3 mmol, 1 ekv.) u etil acetatu (200 mL) preko 10% Pd/C (10% w/w, 1,89 g) je hidrogenizovan pod pritiskom (45 psi) na Parovom aparatu za 6 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit da bi se uklonio Pd/C, a filterski jastučić je ispran etil acetatom. Višak rastvarača je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom, nakon čega je usledilo sušenje pod visokim vakuumom da bi se dobio amin I31 kao gusto ulje. LC/MS, postupak od 3 minuta, 2,28 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 537,30 ([M H]<+>, 100);<1>H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 6,73 (s, 1H), 6,24 (s, 1H), 4,54-4,13 (m, 3H), 4,07-3,80 (m, 1H), 3,79 - 3,61 (m, 4H), 3,50 (dd, J= 9,2, 4,2 Hz, 2H), 2,10 - 1,97 (m, 2H), 1,92 (dt, J = 11,7, 6,2 Hz, 1H), 1,80 - 1,65 (m, 1H), 1,24 (ddt, J = 13,7, 9,9, 6,4 Hz, 3H), 1,09 (d, J = 7,3 Hz, 18H), 0,90 (s, 9H), 0,04 (d, J = 2,8 Hz, 6H).
4
(f) Alil ((S)-1-(((S)-1-((4-((((2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksi-5-((triizopropilsilil)oksi)fenil)karbamoil)oksi)metil)fenil)amino)-1-oksopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)karbamat (I32)
[0655] Trietilamin (10,1 mL, 72,4 mmol, 2,2 ekv.) je dodat u mešani rastvor amina I31 (17,68 g, 32,9 mmol, 1 ekv.) i trifosgena (3,51 g, 11,8 mmol, 0,36 ekv.) u suvi tetrahidrofuran (180 mL) na 5°C (ledeno kupatilo). Napredak reakcije izocijanata je praćen periodičnim uklanjanjem alikvota iz reakcione smeše i gašenjem metanolom i izvođenjem LC/MS analize. Kada je formiranje izocijanata završeno, brzo je dodata suspenzija alok-Val-Ala-PABOH I6 (18,6 g, 49,4 mmol, 1,5 ekv.) i trietilamina (6,88 mL, 49,4 mmol, 1,5 ekv.) u suvom tetrahidrofuranu (70 mL) na sveže pripremljeni izocijanat. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 40°C tokom 4 sata. Čvrste materije su uklonjene filtracijom. Višak rastvarača je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je suv nanet na silika gel i podvrgnut ručnoj fleš hromatografiji na koloni; 40/60 v/v etil acetat/heksan do 70/30 v/v etil acetat/heksan. Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a višak eluenta je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom da bi se dobio proizvod I32 8,17 g (26,4%). LC/MS, postupak od 3 minuta, 2,29 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 962,45 ([M Na]<+>, 100; 940,40 ([M+H]<+>, 30);<1>H NMR (400 MHz, Hloroform-d) δ 8,95 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,53 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 6,80 (s, 1H), 6,71 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 5,89 (tt, J = 10,8, 5,3 Hz, 1H), 5,44 - 5,15 (m, 3H), 5,10 (s, 2H), 4,66 (p, J = 7,2 Hz, 1H), 4,62 - 4,53 (m, 2H), 4,32 (s, 1H), 4,08 - 3,86 (m, 2H), 3,74 (s, 4H), 3,52 (dd, J = 27,4, 7,6 Hz, 2H), 2,15 (h, J= 6,8 Hz, 1H), 2,09 - 1,85 (m, 3H), 1,71 (s, 1H), 1,46 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,29 (dq, J= 15,0, 7,4 Hz, 3H), 1,11 (d, J=7,4 Hz, 18H), 0,95 (dd, J= 14,1, 6,8 Hz, 6H), 0,89 (s, 9H), 0,02 (d, J = 13,1 Hz, 6H).
(g) Alil ((S)-1-(((S)-1-((4-((((2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-5-hidroksi-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)fenil)amino)-1-oksopropan-2-il)amino)-3-metil-1-oksobutan-2-il)karbamat (I33)
[0656] Litijum acetat (50 mg, 0,49 mmol) je dodat u rastvor jedinjenja I32 (7 g, 7,44 mmol, 1 ekv.) u vlažnom dimetilformamidu (61,2 mL, 50:1 DMF/voda). Posle 4 sata, reakcija je završena. Višak DMF je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je razblažen etil acetatom (300 mL) i ispran sa 0,5 M vodenim rastvorom limunske kiseline (100 mL), vodom (300 mL) i slanim rastvorom (100 mL). Organski sloj je osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i višak etil acetata je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage Isolera 100 g Ultra; gradijent, 40/60 do 80/20 v/v etil acetat/heksan u 8 CV). Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a višak eluenta je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom da bi se dobio proizvod I335,13 g (88%). LC/MS, postupak od 3 minuta, 1,82 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 784,40 ([M H]<+>, 100).<1>H NMR (400 MHz, Hloroformd) δ 9,06 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,45 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,35 - 7,18 (m, 2H), 6,92 (d, J= 7,5 Hz, 1H), 6,80 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,89 (ddd, J= 16,2, 10,7, 5,4 Hz, 1H), 5,44 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,37 - 5,15 (m, 2H), 5,14 - 5,01 (m, 2H), 4,67 (p, J = 7,1 Hz, 1H), 4,63-4,50 (m, 2H), 4,33 (s, 1H), 4,13-3,89 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,74-3,33 (m, 3H), 2,24 - 1,84 (m, 4H), 1,69 (d, J = 21,2 Hz, 1H), 1,43 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,07 - 0,71 (m, 15H), 0,23 - -0,20 (m, 6H).
(h) Terc-butil (11S,11aS)-8-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I34)
[0657] Kalijum karbonat (582 mg, 4,21 mmol, 1,1 ekv.) je dodat u rastvor I25 (2,66 g, 4,21 mmol, 1,1 ekv.) i fenola I33 (3 g, 3,82 mmol, 1 ekv.) u acetonu (18 mL). Reakcija je mešana 4 sati na 63°C. Čvrste materije su uklonjene filtracijom preko vate. Aceton je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage isolera, 100 g Ultra, silika gel; gradijent, 50/50 do 100/0 v/v etil acetat/heksan u 8 CV, eluiranje od 83%). Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a višak eluenta je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom da bi se dobio proizvod I34 4,71 g (92%). LC/MS, postupak od 3 minuta, 2,08 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1335,15 ([M H]<+>, 50).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 9,20 (s, 1H), 8,13 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 7,68-7,50 (m, 3H), 7,50 - 7,37 (m, 3H), 7,32 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,28 - 7,01 (m, 2H), 6,86 (s, 2H), 5,90 (ddd, J = 16,0, 10,7, 5,2 Hz, 1H), 5,64 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 5,30 (d, J= 17,2 Hz, 1H), 5,23-4,84 (m, 8H), 4,57-4,36 (m, 3H), 4,11 (s, 1H), 3,95-3,59 (m, 9H), 3,56-3,34 (m, 4H), 1,94 (d, J = 34,0 Hz, 10H), 1,74-1,06 (m, 21H), 1,01 -0,59 (m, 15H), 0,03 (s, 6H).
(i) Terc-butil (11S,11aS)-8-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,11,11atetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I35)
[0658] Tetra-n-butilamonijum fluorid (1M, 6,94 mL, 6,94 mmol, 2 ekv.) je dodat u rastvor I34 (4,63 g, 3,47 mmol, 1 ekv.) u tetrahidrofuranu (28 mL). Početni materijal je potpuno potrošen nakon 1 h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (30 mL) i isprana uzastopno sa vodom i slanim rastvorom. Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i višak etil acetata je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage isolera, 50g Ultra; gradijent, 98/2 do 90/10 v/v etil acetat/metanol u 4 CV, eluiranje sa 10% metanola). Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a višak eluenta je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom da bi se dobio proizvod I35 (4,23g, kvantitativno). LC/MS, 3 minuta, 1,75 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1220,30 ([M H]<+>, 100).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,98 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 8,13 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,70 -7,49 (m, 3H), 7,51 - 7,27 (m, 6H), 7,21 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,15 - 6,58 (m, 3H), 5,90 (dt, J = 10,9, 5,5 Hz, 1H), 5,66 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 5,38 - 4,82 (m, 9H), 4,73 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 4,59 - 4,34 (m, 3H), 4,05 (dd, J = 15,4, 8,3 Hz, 1H), 3,96 - 3,68 (m, 8H), 3,66 - 3,32 (m, 6H), 2,16 - 1,72 (m, 8H), 1,63 (d, J= 9,8 Hz, 3H), 1,54 - 1,02 (m, 18H), 0,86 (dd, J= 18,2, 6,7 Hz, 6H).
(j) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(terc-butoksikarbonil)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I36)
[0659] Stabilizovani IBX 45% (2,72 g, 4,36 mmol, 1,2 ekv.) je dodat u rastvor I35 (4,44 g, 3,64 mmol, 1 ekv.) u DMSO (2,6 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša preko noći. Dodato je još 0,2 ekv. IBX (450 mg, 0,73 mmol, 0,2 ekv.) i rastvor je ostavljen da se meša još 18 h dok se ne primeti završetak reakcije pomoću LC/MS. Rastvor je istaložen u vodi (250 mL) i filtriran. Proizvod je rastvoren u DCM i zaostala bela čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom. Organska faza je isprana vodenim rastvorom NaHCO3, vodom, slanim rastvorom i osušena preko magnezijum sulfata. Dihlorometan je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage Isolera 100g Ultra; gradijent, 99/1 do 92/8 v/v DCM/metanola u 10 CV). Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a uklanjanje viška eluenta rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom dalo je proizvod I36 (3,04 g, 69%). LC/MS, postupak od 15 minuta, Ace Excel 2, 7,89 i 7,97 min (THP dijastereoizomeri) (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1218,30 ([M]<+>, 100).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,93 (s, 1H), 8,11 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,68 - 7,27 (m, 6H), 7,27 - 7,01 (m, 4H), 7,01 - 6,32 (m, 3H), 6,02 - 5,81 (m, 1H), 5,71 - 5,57 (m, 1H), 5,57 - 5,40 (m, 1H), 5,29 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,21 - 4,78 (m, 8H), 4,58-4,32 (m, 3H), 3,99 - 3,68 (m, 8H), 3,58-3,31 (m, 8H), 2,23-1,72 (m, 9H), 1,72- 1,04 (m, 18H), 0,85 (dd, J= 18,0, 6,7 Hz, 6H).
(k) 4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(terc-butoksikarbonil)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I37)
[0660] Tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (11 mg, 0,01 mmol, 0,02 ekv.) je dodat u rastvor I36 (600 mg, 0,49 mmol, 1 ekv.) i pirolidina (51 µL, 0,62 mmol, 1,25 hlorometana) u suvom (10 mL). Reakcija je isprana argonom tri puta i mešana 20 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je reakcija razblažena dihlorometanom (50 mL) i isprana uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL) i slanim rastvorom (30 mL). Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i višak dihlorometana je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak I37 je korišćen kao sirova smeša za sledeću reakciju. LC/MS, postupak od 3 minuta, 1,29 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1134,35 ([M+H]<+>, 80).
(I) terc-butil (11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-7-metoksi-5-okso-11-((tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I38)
[0661] 1-etil-3-(3'-dimetilaminopropil)karbodiimid (94 mg, 0,79 mmol, 1 ekv.) je dodat u rastvor sirovog I37 (558 mg, 0,49 mmol, 1 ekv.) i Mal-(PEG)8-kiseline (292 mg, 0,49 mmol, 1 ekv.) u hloroformu (12 mL). Reakcija je degasirana tri puta sa argonom i mešana 2 sata i prisustvo polaznog materijala više nije primećeno pomoću LC/MS. Reakcija je razblažena dihlorometanom i isprana uzastopno vodom i slanim rastvorom. Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i višak dihlorometana je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage Isolera 50g Ultra; 98/2 do 90/10 v/v DCM/metanola u 10 CV). Čiste frakcije su sakupljene i kombinovane, a višak eluenta je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom da bi se dobio I38 485 mg (58%). LC/MS, postupak od 3 minuta, 1,58 minuta (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1709,30 ([M+H]<+>, 100).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,88 (s, 1H), 8,13 (d, J= 7,0 Hz, 1H), 8,06-7,92 (m, 1H), 7,85 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,68 - 7,04 (m, 9H), 6,99 (s, 2H), 6,89 (d, J = 15,0 Hz, 2H), 6,52 (s, 1H), 5,66 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 5,47 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,26 - 4,75 (m, 6H), 4,49 - 4,31 (m, 1H), 4,20 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 11,9 Hz, 6H), 3,59 (t, J = 7,2 Hz, 4H), 3,55 - 3,41 (m, 32H), 3,41 - 3,30 (m, 11H), 3,21 - 3,09 (m, 3H), 2,48- 2,28 (m, 4H), 2,18 - 1,08 (m, 24H), 0,84 (dd, J= 15,0, 6,7 Hz, 5H).
(m) 4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil (11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-((3-((((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (3)
[0662] Hladna smeša TFA/vode (6 mL) je dodata u I38 (460 mg, 0,27 mmol, 1 ekv.) i dobijeni rastvor je ostavljen da se meša na 0°C tokom 2 sata. Reakcija je neutralizovana zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(200 mL) i dihlorometanom (50 mL). DCM sloj je ispran uzastopno sa vodom i slanim rastvorom. Organska faza je osušena preko magnezijum sulfata, filtrirana i višak dihlorometana je uklonjen rotacionim isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni ostatak je podvrgnut fleš hromatografiji na koloni (Biotage Isolera 50g Ultra; 98/2 do 88/12 v/v DCM/metanola u 10 CV). Čiste frakcije su sakupljene, kombinovane (154 mg, 38%) i dalje prečišćene preparativnom HPLC reverzne faze (Postupak C) (gradijent do 75/25 acetonitril/voda, 0,02% mravlja) da bi se dobio čist 3 (78 mg, 19%). LC/MS, postupak od 15 minuta, Ace-Excel2, 6,18 min (ES+) m/z (relativni intenzitet) 1506,70 ([M+H]<+>, 100).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,07 - 9,79 (m, 1H), 8,14 (d, J= 7,2 Hz, 1H), 7,98 (t, J= 5,6 Hz, 1H), 7,85 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 7,78 (d, J= 4,4 Hz, 1H), 7,67 - 7,30 (m, 7H), 7,28 - 7,05 (m, 3H), 6,99 (s, 2H), 6,98 - 6,85 (m, 2H), 6,58 - 6,47 (m, 1H), 5,59 - 5,34 (m, 1H), 5,32 - 4,77 (m, 6H), 4,48 - 4,30 (m, 1H), 4,28 - 4,08 (m, 1H), 3,88 - 3,75 (m, 5H), 3,75 - 3,55 (m, 6H), 3,55 - 3,42 (m, 28H), 3,42 - 3,32 (m, 6H), 3,14 (q, J= 5,8 Hz, 2H), 2,48-2,16 (m, 6H), 2,08-1,77 (m, 6H), 1,36 - 1,17 (m, 4H), 0,84 (dd, J = 15,4, 6,7 Hz, 6H).
Primer 4
[0663]
(a) ((Propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)metanon) (I2)
[0664] DMF (12 kapi) je dodat u mešanu suspenziju I1 (10 g, 21,5 mmol) i oksalil hlorida (5,6 mL, 8,2 g, 64,5 mmol) u anhidrovanom DCM (150 mL). Posle početne šumeće reakciona suspenzija je postala rastvor i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati. Većina rastvarača je uklonjena isparavanjem pod redukovanim pritiskom. Dobijeni koncentrovani rastvor je ponovo rastvoren u minimalnoj količini suvog DCM i trituriran sa dietil etrom. Žuti talog je sakupljen vakuum filtracijom, ispran hladnim dietil etrom i osušen 1 sat u vakuumskoj peći na 40 °C. Kiselinski hlorid je dodat u delovima u mešanu suspenziju (S)-(+)-2-pirolidinmetanola (5,0 g, 4,9 mL, 49,5 mmol) i TEA (15,0 mL, 10,9 g, 108 mmol) u bezvodni DCM (100mL) na -40 °C (suvi led / CH3CN). Dobijeni rastvor je mešan još 60 minuta, razblažen sa DCM (100 mL) i ispran sa 1N HCl (2 × 50 mL), zasićenim NaHCO3(3 × 40 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušen (MgSO4) i rastvarač je isparen pod vakuumom da bi se dobio čisti proizvod I2 kao žuta čvrsta supstanca (13,6 g, 100% prinos). LC/MS (postupak A): vreme zadržavanja 1,33 min. (ES+) m/z 655 [M+ Na]<+>, 633 [M H]<+>(videti dodatak).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,68 - 1,80 (m, 2H), 1,80 - 2,00 (m, 6H), 2,27 (d, 2H), 3,05 - 3,25 (m, 4H), 3,37 - 3,48 (m, 2H), 3,56 - 3,76 (m, 2H), 3,92 (s, 6H), 4,09 (dd, 2H), 4,25 - 4,31 (m, 4H), 4,82 (t, 2H), 7,08 (s, 2H), 7,73 (s, 2H).
(b) ((propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (I39)
[0665] TBS-Cl (8,12 g, 53,90 mmol) je dodat u rastvor I2 (15,5 g, 24,50 mmol) i imidazola (4,17 g, 61,25 mmol) u DCM (300 mL) na sobnoj temperaturi pod azotom. Dobijeni smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 12 h. Dodata je voda (200 mL), organski sloj je uklonjen, a vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 × 300 mL). Kombinovane organske faze su osušene (Na2SO4) i isparene pod vakuumom da bi se dobio tamni ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni (0 do 2% metanol/DCM). Čiste frakcije su isparene pod vakuumom da se dobije I39 kao braon čvrsta supstanca (17,0 g, 81 % prinos). LC/MS (postupak A): vreme zadržavanja 1,83 minuta (ES+) m/z 861 [M H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,09 (s, 12H), 0,91 (s,18H), 1,70 - 1,81 (m, 2H), 1,87 - 1,99 (m, 6H), 2,22 - 2,30 (m, 2H), 3,10 (t, 4H), 3,40 - 3,51 (m, 2H), 3,59 - 3,67 (m, 2H), 3,88-3,95 (m, 2H), 3,91 (s, 6H), 4,28 (t, 6H), 6,96 (s, 2H), 7,72 (s, 2H).
(c) ((propan-1,3-diilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (I40)
[0666] Cink (25,8 g, 394,8 mmol) i zasićeni NH4Cl (150 mL) su dodati u rastvor I39 (17 g, 19,74 mmol) u EtOH (300 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana na 50°C tokom 3 sata, hlađena i filtrirana kroz sloj celita koji je zatim ispran sa EtOAc (300 mL) i vodom (300 mL). Organski sloj je uklonjen, a vodeni sloj ekstrahovan sa EtOAc (3 × 400 mL). Kombinovane organske faze su osušene (MgSO4) i uparene pod vakuumom da bi se dobio žuti ostatak koji je prečišćen hromatografijom na koloni (0 do 5% metanol/DCM). Čiste frakcije su isparene do suvoće da bi se dobio I40 kao žuta čvrsta supstanca (13,00 g, 82 % prinos). LC/MS (postupak A): vreme zadržavanja 2,30 minuta (ES+) m/z 802,2 [M H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,06 (s, 12H), 0,85 (s,18H), 1,52 - 1,78 (m, 2H), 1,81 - 2,00 (m, 6H), 2,14 - 2,22 (m, 2H), 3,41 (d, 4H), 3,61-3,75 (m, 4H), 3,63 (s, 6H), 4,01 - 4,16 (m, 6H), 4,98 - 5,22 (m, 4H), 6,40 (s, 2H), 6,66 (s, 2H).
(d) alil (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((t-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((t-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I41)
[0667] Alil hloroformijat (784 µL, 0,9 g, 7,36 mmol) je dodat u kapima u rastvor I40 (5,9 g, 7,36 mmol) i piridina (715 µL, 0,7 g, 8,84 mmol) u DCM (100 mL) na 0°C. Reakciona smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana još 2 h. Reakciona smeša je isprana sa 0,5 M HCl (50 mL), zasićenim natrijum hidrogenkarbonatom (50 mL) i slanim rastvorom (50 mL). Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom i dobijeno ulje je prečišćeno hromatografijom na koloni; (početno eluiranje sa 50% etil acetat/heptan uklonilo je bis-alok zaštićen amin, nakon čega je usledilo eluiranje etil acetatom da bi se uklonio željeni mono-alok zaštićeni proizvod (141). Konačno, svaki neizreagovani početni materijal je uklonjen sa 5% metanola / DCM). Čiste frakcije su isparene pod redukovanim pritiskom da bi se ostavio I41 kao žuta čvrsta supstanca (3,5 g, 54% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 2,41 minuta (ES+) m/z 886,5 [M H]<+>
(e) alil (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I42)
[0668] Trifosgen (0,41 g, 1,4 mmol) je dodat mešanom rastvoru I41 (3,5 g, 3,95 mmol) u suvom THF (70 mL) na sobnoj temperaturi pod argonom. Dodan je trietilamin (1,2 mL, 0,87 g, 8,6 mmol) i dobijena smeša je mešana 10 minuta. Analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,48 minuta, (ES+) m/z 944,4 [M+ H]<+>). Dodata je smeša I6 (1,64 g, 4,35 mmol) i trietilamina (0,83 mL, 0,6 g, 5,9 mmol) u suvom THF (30 mL). Reakciona smeša je mešana pod argonom 2 sata na 40°C. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (0,5 do 2,5% metanol / DCM) da bi se dobio I42 kao bela čvrsta supstanca (3,58 g, 70% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 2,45, minuta (ES+) m/z 1290,0 [M H]<+>.
(f) alil(5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I43)
[0669] 1M tetrabutilamonijum fluorid (6,1 mL, 6,1 mmol) je dodat u rastvor I42 (3,58 g, 2,78 mmol) u THF (35 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan 60 minuta zatim isparen do suvoće pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (2 do 5% metanol / DCM) da bi se dobio I43 kao bela pena (2,95 g, 98% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 1,70 minuta, (ES+) m/z 1061,3 [M+ H]<+>
(g) alil (11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3metilbutanamido)propanamido)benzil)okso)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I44)
[0670] Stahl aerobna oksidacija TEMPO rastvor 0,2M u MeCN (5,47 mL, 1,1 mmol), a zatim tetrakisacetonitril bakar (I) triflat (0,41 g, 1,1 mmol) je dodat u rastvor I43 (2,9 g, 2,74 mmol) u DCM-a (30 mL) i acetonitrila (6 mL) i mešano na 35°C tokom 36 h u atmosferi vazduha. Reakciona smeša je isprana vodom (25 mL), osušena (separator faza biotage) i isparena do suvoće pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (3 do 6% metanol / DCM) da bi se dobio oksidovani proizvod I44 kao bela čvrsta supstanca (2,46 g, 85% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 1,60 minuta, (ES+) m/z 1057,1 [M+ H]<+>
(h) 4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I45)
[0671] Pd(Ph3P)4(10 mg, 5 mol%) je dodat u rastvor I44 (200 mg, 0,19 mmol) i pirolidina (40 µL, 0,34 g, 0,48 mmol) u DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan 30 minuta. Reakciona smeša je isprana zasićenim amonijum hloridom (10 mL), osušena (biotage fazni separator) i isparena do suvoće pod redukovanim pritiskom. Ostatak je zatim stavljen na liniju visokog vakuuma tokom 4 sata da bi se uklonili tragovi pirolidina. Dobijena beličasta čvrsta supstanca je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja (160 mg, 97% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 1,17 minuta, (ES+) m/z 871,1 [M+ H]<+>
(i) 4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil (11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (1)
[0672] EDCl.HCl (46 mg, 0,24 mmol) je dodat u rastvor I45 i Mal-PEG8-kiseline (130 mg, 0,22 mmol) u CHCl3(10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. LC/MS pokazuje 78% prisutnog početnog materijala. Dodatna 2 ekv. EDCl.HCl je dodata u porcijama da se reakcija podstakne do završetka. Reakciona smeša je isprana vodom (10 mL), osušena (Biotage PS) i uparena do suva, pod redukovanim pritiskom, da bi se dobila žuta čvrsta supstanca koja je prečišćena preparativnom HPLC da bi se ostavio proizvod 1 kao prljavo bela čvrsta supstanca (90). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 1,47, minuta (ES+) m/z 1445,9 [M H]<+>.
Primer 5
[0673]
1
EDCl.HCl (27 mg, 0,14 mmol) je dodat u rastvor I45 i Azido-PEGs-kiseline (49 mg, 0,10 mmol) u CHCl3(6 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 1 sata. Rastvarač je isparen pod redukovanim pritiskom, da bi se ostavila žuta pena. Prečišćavanjem preparativnom HPLC dobija se proizvod 4 kao beličasta čvrsta supstanca (20 mg, 17% prinos). LC/MS (postupak B): vreme zadržavanja 6,01 min, (ES+) m/z 1320 [M+ H]<+>.
(ii) (R)-2-((3-nitropiridin-2-il)disulfanil)propil (11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-5-okso-2,3,11,11atetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (5)
(a) terc-butil (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (I46) Boc anhidrid (0,5 g, 2,3 mmol, 1,0 ekv.) je dodat rastvoru I40 (1,9 g, 2,3 mmol, 1,0 ekv.) u THF (50 mL) i mešano je na 55°C 5 sati. Rastvarač je uklonjen isparavanjem pod redukovanim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (50-100 % etil acetat/heksan) da bi se dobio proizvod kao žuta čvrsta supstanca, 1,7 g (80%). LC/MS (postupak 1): rt 2,48 min, m/z (902,5) M+H.
(b) terc-butil (2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-5-(3-(4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksi-5-((((R)-2-((3-nitropiridin-2-il)disulfaneil)propoksi)karbonil)amino)fenoksi)propoksi)-4-metoksifenil)karbamat (I47) Trifosgen (0,135 g, 0,455 mmol, 0,35 ekv.) je dodat u rastvor (2R)-2-[(3-nitro-2-piridil)disulfanil]propan-1-ola (0,316 g, 1,28 mmol, 1,05 ekv.) i piridin (111 mg, 1,4 mmol, 1,15 ekv.) u anhidrovanom dihlorometanu (5 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 30 minuta. Dobijeni rastvor je zatim dodat u rastvor I46 (1,10 g, 1,22 mmol, 1,0 ekv.) i piridina (106 mg, 1,34 mmol, 1,1 ekv.) u anhidrovanom dihlorometanu (10 mL) i mešan na sobnoj temperaturi 60 minuta. Rastvarač je uklonjen isparavanjem pod redukovanim pritiskom i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni (40-50 % etil acetat/heksan) da bi se dobio proizvod kao žuta pena, 1,21 g (85%). LC/MS (postupak 1): rt 2,53 min, m/z (1174,5) M+H.
(c) terc-butil (2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-5-(3-(4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksi-5-((((R)-2-((3-nitropiridin-2-yl)disulfanil)propoksi)karbonil)amino)fenoksi)propoksi)-4-metoksifenil)karbamat (I48)
I47 (1,21 g, 1,03 mmol) je rastvoren u smeši sirćetne kiseline (5 mL), THF (1 mL), metanola (1 mL) i vode (2 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 90 minuta, a zatim isparen do suvoće. Ostatak je stavljen u etil acetat (50 mL), ispran vodom (50 mL), zatim zasićenim NaHCO3(50 mL), osušen (MgSO4) i isparen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni (4% metanol / DCM) da bi se dobio proizvod kao žuta čvrsta supstanca, 0,97 g (100%).
1 1
LC/MS (postupak 1): rt 1,87 min, m/z (946,0) M+H.
(d) terc-butil (11S, 11aS)-11-hidroksi-8-(3-(((11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-10-(((R)-2-((3-nitropiridin-2-il)disulfanil)propoksi)karbonil)-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)oksi)propoksi)-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (I49)
Stahl aerobna oksidacija TEMPO rastvor (2,05 mL, 0,4 mmol, 0,2 mol/L), a zatim tetrakisacetonitril bakar(I) triflat (0,15 g, 0,40 mmol) je dodat u rastvor I48 (0,97 g, 1,0 mm20) u DCM (20 mL, 312,0 mmol). Dobijena smeša je zagrevana na 35°C tokom 15 sati. Organska faza je isprana vodom (25 mL), osušena (biotage) i uparena do suva pod sniženim pritiskom i prečišćena hromatografijom na koloni (3-6% metanol / DCM) da bi se dobio proizvod kao bela čvrsta supstanca, 0,77 g (79 %). LC/MS (postupak 1): rt 1,70 min, m/z (941,9) M+H.
(e) (R)-2-((3-nitropiridin-2-il)disulfanil)propil (11S,11aS)-11-hidroksi-7-metoksi-8-(3-(((S)-7-metoksi-5-okso-2,3,5,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-il)okso)propoksi)-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-benzo[e]pirolo[1,2-a][1,4]diazepin-10(5H)-karboksilat (5)
Trifluorosirćetna kiselina (4,5 mL) je dodata u vodu (0,5 mL) i ohlađena na 0°C. Ovaj rastvor je zatim dodat u I49 (0,75 g, 0,80 mmol) i dobijena smeša je mešana na 0°C tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom, ostatak je uzet u DCM (10 mL) i reakciona smeša je neutralizovana dodavanjem zasićenog NaHCO3. Posle sušenja (biotaža) i isparavanja pod redukovanim pritiskom, ostatak je prečišćen na koloni (4-6% metanol / DCM) da bi se dobio proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca, 0,6 g (91%). LC/MS (postupak 2): rt 6,04 min, m/z (824,0) M+H.
Analitički LC/MS uslovi za Primer 5(ii)
[0674] Masena spektrometrija sa pozitivnim modom elektrosprej je izvedena korišćenjem Waters Aquity H-klase SQD2. Korišćene mobilne faze su rastvarač A (voda sa 0,1% mravlje kiseline) i rastvarač B (acetonitril sa 0,1% mravlje kiseline).
[0675] Postupak 1: Gradijent za rutinsko sprovođenje od 3 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 25 sekundi, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 1 minuta 35 sekundi. Sastav se držao 50 sekundi na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 5 sekundi i držao tamo 5 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 3,0 minuta. Brzina protoka je bila 0,8 mL/min. Detekcija je bila na 254 nm. Kolona: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP181,7 µm 2,1 × 50 mm na 50 °C opremljen Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard pred-kolona, 130A, 1,7 µm, 2,1 mm u hodu × 5 mm.
[0676] Postupak 2: Gradijent za sprovođenje od 15 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 1 minuta, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 9 minuta. Sastav se držao 2 minuta na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 10 sekundi i držao tamo 2 minuta i 50 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 15,0 minuta. Brzina protoka je bila 0,8 mL / minut (za trčanje od 3 minuta) i 0,6 mL / minut (za trčanje od 15 minuta). Detekcija je bila na 254 nm. Kolona: ACE Excel 2 C18-AR, 2 µ, 3,0 × 100mm opremljen sa Waters Acquity UPLC<®>BEH Shield RP18 VanGuard Pre-kolona, 130A, 1,7µm, 2,1 mm x 5 mm.
Primer 6 - Konjugacija
Konj-HER-1
[0677] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 16 mikromola, 0,32 mL na 50 mM) u 12 mL rastvora antitela Herceptin (30 mg, 0,2 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 3 mikromola, 0,08 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 1,5 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom
1 2
membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,0 mikromol, u 1,5 mL DMSO) u 13,5 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (15 mg, 0,1 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (15 mikromola, 0,150 mL na 100 mM).
[0678] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0679] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konj-HER-1 na 214 nm i 330 nm (specifično jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,74 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0680] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HER-1 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,39 mg / ml u 7,8 mL, dobijena masa ADC je 10,8 mg (prinos 72%).
Konj-HER-2
[0681] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 55,5 mikromola, 1,11 mL na 50 mM) u 11,8 mL rastvora antitela Herceptin (104 mg, 0,69 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta / antitelo, 12,4 mikromola, 0,25 ml na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ∼ 2,4 mg / mL (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 2 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,03 mikromol, u 1,40 mL DMSO) u 14 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (15,5 mg, 0,103 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 1,5 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (5,15 mikromola, 0,051 mL na 100 mM).
[0682] Višak slobodnog leka je uklonjen preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) korišćenjem mPES, MidiKros® 30 kDa filtera od vlakana sa 115 cm<2>površine, u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0683] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Conj-HER-2 na 214 nm i 330 nm (specifičan za Jedinjenje 2) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 2, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,85 molekula jedinjenja 2 po antitelu.
[0684] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HER-2 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 0,88 mg / ml u 8,5 mL, dobijena masa ADC je 7,5 mg (prinos 48%).
Konj-HER-3
[0685] 50 mM rastvora tris(2-karboksietil)fosfina (TCEP) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4
1
(PBS) je dodato (40 molarni ekvivalent / antitelo, 40 mikromola, 0,08 mL na 50 mM) u 1,39 mL rastvora antitela Herceptin (15 mg, 0,1 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 37°C tokom 2 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja do sobne temperature, redukovano antitelo je zamenjeno puferom, dijalizom korišćenjem 50 KDa MWCO kasete, u reoksidacioni pufer koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog sredstva tokom 16 sati na sobnoj temperaturi. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 25 molarni ekvivalent/antitelo, 2,5 mikromola, 0,04 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 2 sata na sobnoj temperaturi uz lagano mućkanje (60 rpm) pri koncentraciji antitela od ~ 1,5 mg/mL. Zbog nepotpune oksidacije dodato je još 0,04 mL 50 mM DHAA i dalje mućkano na sobnoj temperaturi 2 h. Nakon toga, potpuna reoksidacija tiola cisteina da bi se reformisali međulančani cistein disulfidi se posmatra pomoću UHPLC. Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 3 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 0,8 mikromol, u 1,1 mL DMSO) u 11 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (12 mg, 0,08 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 1 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (3,2 mikromola, 0,032 mL na 100 mM).
[0686] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0687] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konj-HER-3 na 214 nm i 330 nm (specifično jedinjenje 3) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 3, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,78 molekula Jedinjenja 3 po antitelu.
[0688] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HER-3 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 94%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,14 mg / ml u 8,2 mL, dobijena masa ADC je 9,3 mg (prinos 62%).
Konj-R347-1
[0689] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 697 mikromola, 13,87 mL na 50 mM) u 44,36 mL rastvora R347 (1300 mg, 8,67 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Nakon hlađenja do sobne temperature, redukovano antitelo je zamenjeno puferom, preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) koristeći mPES, MidiKros® 30 kDa filter od vlakana sa 235 cm<2>površine, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA za uklonite sav višak redukcionog sredstva. Redukovano antitelo je centrifugirano 3 minuta 4000 o / min, a zatim je filtrirano upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 130 mikromola, 2,6 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od 5,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 86,7 mikromol, u 23,4 mL DMSO) u 330 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (1300 mg, 8,67 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (433 mikromola, 4,33 mL na 100 mM).
[0690] Višak slobodnog leka je uklonjen preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) korišćenjem mPES, MidiKros® 30 kDa filtera od vlakana sa 235 cm<2>površine, u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Nakon potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je formulisan na 25 mM histidina, 200 mM saharoze, pH 6,0. ADC
1 4
je filtriran korišćenjem 0,22 µm, Mustang filtera u sterilnoj atmosferi i zatim čuvan na -78°C.
[0691] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konj-R347-1 na 214 nm i 330 nm (specifično jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,82 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0692] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku ADC na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog Konj-R347-1 na 10,11 mg / ml u 113 mL, dobijena masa ADC je 1141 mg (prinos 88%).
Konj-R347-2
[0693] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 213 mikromola, 4,3 mL na 50 mM) u 13,7 mL rastvora R347 (400 mg, 2,67 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Nakon hlađenja do sobne temperature, redukovano antitelo je zamenjeno puferom, preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) koristeći mPES, MidiKros® 30 kDa filter od vlakana sa 115 cm<2>površine, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA za uklonite sav višak redukcionog sredstva. Redukovano antitelo je centrifugirano 3 minuta 4000 o / min, a zatim je filtrirano upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 40 mikromola, 0,8 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 2 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 26,7 mikromol, u 15,5 mL DMSO) u 330 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (400 mg, 2,67 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 1,5 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (125 mikromola, 1,25 mL na 100 mM).
[0694] Višak slobodnog leka je uklonjen preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) korišćenjem mPES, MidiKros® 30 kDa filtera od vlakana sa 115 cm<2>površine, u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Nakon potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je formulisan na 25 mM histidina, 200 mM saharoze, pH 6,0. ADC je filtriran korišćenjem 0,22 µm, Mustang filtera u sterilnoj atmosferi i zatim čuvan na -78°C.
[0695] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konj-R347-2 na 214 nm i 330 nm (specifično jedinjenje 2) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 2, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,8 molekula Jedinjenja 2 po antitelu.
[0696] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-R347-2 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 3,06 mg / ml u 93 mL, dobijena masa ADC je 284 mg (prinos 71%).
Konj-R347-3
[0697] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 240 mikromola, 4,8 mL na 50 mM) u 15,36 mL rastvora R347 (450 mg, 3,0 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Nakon hlađenja do sobne temperature, redukovano antitelo je zamenjeno puferom, preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) koristeći mPES, MidiKros® 30 kDa filter od vlakana sa 235 cm<2>površine, u
1
pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA za uklonite sav višak redukcionog sredstva. Redukovano antitelo je centrifugirano 3 minuta 4000 o / min, a zatim je filtrirano upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 45 mikromola, 0,9 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,5 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 3 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 30,0 mikromol, u 13,0 mL DMSO) u 330 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (450 mg, 3,0 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (150 mikromola, 1,5 mL na 100 mM).
[0698] Višak slobodnog leka je uklonjen preko jedinice za filtriranje tangencijalnog protoka (TFF) korišćenjem mPES, MidiKros® 30 kDa filtera od vlakana sa 235 cm<2>površine, u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Nakon potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je formulisan na 25 mM histidina, 200 mM saharoze, pH 6,0. ADC je filtriran korišćenjem 0,22 µm, Mustang filtera u sterilnoj atmosferi i zatim čuvan na -78°C.
[0699] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 3) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 3, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,82 molekula Jedinjenja 3 po antitelu.
[0700] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-R347-3 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 2,35 mg / ml u 174 mL, dobijena masa Konj-R347-3 je 409 mg (prinos 91%).
Konj-HLL2-1
[0701] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 53,3 mikromola, 1,07 mL na 50 mM) u 11,8 mL rastvora HLL2 (100 mg, 0,6 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 9 mikromola, 0,18 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,2 mikromol, u 0,58 mL DMSO) u 7 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (18 mg, 0,12 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (6 mikromola, 0,06 mL na 100 mM).
[0702] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0703] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18 150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konj-HLL2-1 na 214 nm i 330 nm (specifično jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,74 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0704] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti
1
sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HLL2-1 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,6 mg / ml u 7,5 mL, dobijena masa ADC je 12 mg (prinos 67%).
Konj-HLL2-2
[0705] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 53,3 mikromola, 1,07 mL na 50 mM) u 11,8 mL rastvora HLL2 (100 mg, 0,6 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 9 mikromola, 0,18 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 2 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,2 mikromol, u 0,58 mL DMSO) u 7 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (18 mg, 0,12 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (6 mikromola, 0,06 mL na 100 mM).
[0706] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0707] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 2) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 2, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,78 molekula Jedinjenja 2 po antitelu.
[0708] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HLL2-2 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,56 mg / ml u 4,6 ml, dobijena masa KonjE-HLL2-2 je 12,5 mg (prinos 69%).
Konj-HLL2-3
[0709] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 53,3 mikromola, 1,07 mL na 50 mM) u 11,8 mL rastvora HLL2 (100 mg, 0,6 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 9 mikromola, 0,18 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 3 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,2 mikromol, u 0,58 mL DMSO) u 7 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (18 mg, 0,12 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (6 mikromola, 0,06 mL na 100 mM).
[0710] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH
1
7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0711] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 3) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 3, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,79 molekula Jedinjenja 3 po antitelu.
[0712] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku KonjI-HLL2-3 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,73 mg / ml u 8,2 mL, dobijena masa Konj-HLL2-3 je 14,2 mg (prinos 79%).
Konj-CD79b-1
[0713] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 53,6 mikromola, 1,07 mL na 50 mM) u 13,9 mL rastvora CD79b (100 mg, 0,67 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 9 mikromola, 0,18 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 2,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,2 mikromol, u 1,0 mL DMSO) u 9,0 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (18 mg, 0,12 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 2 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (4,8 mikromola, 0,048 mL na 100 mM).
[0714] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0715] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,90 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0716] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku Konj-CD79b na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 2,00 mg / ml u 7,85 mL, dobijena masa Konj-CD79b-1 je 15,7 mg (prinos 79%).
Konj-CD79b-2
[0717] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 53,6 mikromola, 1,07 mL na 50 mM) u 13,9 mL rastvora CD79b (100 mg, 0,67 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih
1
ekvivalenta / antitelo, 9 mikromola, 0,18 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 2,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 2 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,2 mikromol, u 1,0 mL DMSO) u 9,0 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (18 mg, 0,12 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 2 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (4,8 mikromola, 0,048 mL na 100 mM).
[0718] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0719] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 2) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 2, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,87 molekula Jedinjenja 2 po antitelu.
[0720] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem sa 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku Konj-CD79b-2 na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 2,25 mg / ml u 5,9 mL, dobijena masa Konj-CD79b-2 je 13,3 mg (prinos 66%).
Konj-1C1-1
[0721] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent / antitelo, 75 mikromola, 1,5 mL na 50 mM) u 26,4 mL rastvora 1C1 (140 mg, 0,93 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 5,0 mg / mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 3,5 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o / min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodat je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 15 molarnih ekvivalenta / antitelo, 14 mikromola, 0,28 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o / min) pri koncentraciji antitela od ~ 3,0 mg / ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o / min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,3 mikromol, u 0,6 mL DMSO) u 6 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 0,133 mikromola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 4 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (6,65 mikromola, 0,067 mL na 100 mM).
[0722] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Nakon potpunog uklanjanja slobodnog leka, pufer je zamenjen sa 25 mM histidina, 200 mM saharoze, pH 6,0. ADC je filtriran korišćenjem 0,22 µm, Mustang filtera u sterilnoj atmosferi i zatim čuvan na -78°C.
[0723] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 1,86 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0724] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku ADC na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 98%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,49 mg / ml u 8,0 mL, dobijena masa ADC je 11,9 mg (prinos 60%).
1
Konj-HER-1++ (Visoki DAR)
[0725] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (100 molarni ekvivalent / antitelo, 6,7 mikromola, 0,13 mL na 50 mM) u 5 mL rastvora (10 mg, 67 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,0 mg / mL. Dobijena smeša je inkubirana na 25°C preko noći (ili dok se potpuna redukcija nije primećena pomoću UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz lagano mućkanje (60 rpm). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO vivaspin, u pufer za konjugaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog sredstva. Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (20 molarnih ekvivalenta / antitelo, 1,34 mikromol, u 0,4 mL DMSO) u 4,0 mL ovog redukovanog rastvora antitela (10 mg, 67 nanomola) za 10% (v / v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 1 sat na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa viškom N-acetil cisteinom (6,7 mikromola, 67 µL na 100 mM).
[0726] Dobijeni ADC je prečišćen preko kolone za isključivanje preparativne veličine (GE Sephadex 26/60) koja je postavljena na AKTA Start instrument korišćenjem PBS, pH 7,4 pufera. Frakcije su sakupljene i analizirane na sadržaj monomera korišćenjem Shimadzu Prominence sistema korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem sa 0,3 mL-filter SEC sterilnog filter pufer koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na 280 nm. Frakcije sa sadržajem monomera > 92% su sakupljene i zatim koncentrovane korišćenjem 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Stepen uklanjanja slobodnog leka je praćen pomoću UHPLC-RP korišćenjem čistog konjugata i nakon potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran korišćenjem 0,22 µm, Mustang filtera u sterilnoj atmosferi i zatim čuvan na 4°C.
[0727] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 7,41 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0728] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku ADC na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 95%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 1,44 mg / ml u 4,5 mL, dobijena masa ADC je 6,5 mg (prinos 65%).
Konj-HER-1+ (Srednji DAR)
[0729] 10 mM rastvor tris(2-karboksietil)fosfina (TCEP) u fosfatnom puferu pH 7,4 (PBS) je dodat (2 molarna ekvivalenta/antitelo, 0,134 mikromola, 13,3 µL na 10 mM) u rastvor antitela od 4 mM. (10 mg, 67 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Redukciona smeša je zagrevana na 37 °C tokom 2 sata u orbitalnom šejkeru uz lagano mućkanje (60 o/min). Jedinjenje 1 je dodato kao rastvor DMSO (15 molarnog ekvivalenta/antitelo, 1,0 mikromola, 0,1 mL 10 mM u 0,3 mL DMSO) i dobijena smeša je mućkana 1,5 sati na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (5 mikromola, 50 µL na 100 mM).
[0730] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO vivaspin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0731] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem kolone Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 × 2,1 mm eluiranjem sa gradijentom vode i acetonitrila na redukovanom uzorku Konjugat na 214 nm i 330 nm (specifično Jedinjenje 1) prikazuje mešavinu lakih i teških lanaca vezanih za nekoliko molekula Jedinjenja 1, u skladu sa odnosom lek-po-antitelu (DAR) od 4,2 molekula Jedinjenja 1 po antitelu.
[0732] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSW mAb HTP 4 µm 4,6 × 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 × 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml / minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v / v) na uzorku ADC na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog ADC na 2,05 mg / ml u 3,6 mL, dobijena masa ADC je 7,36 mg (prinos 74%).
11
Primer 7 - In Vitro testiranje
MTS postupak citotoksičnosti
[0733] Koncentracija i vitalnost ćelija iz sub-konfluentne (80-90% konfluentnosti) T75 bočice mere se bojenjem tripan plavim i izbrojavaju korišćenjem LUNA-II™ automatizovanog brojača ćelija. Ćelije su razblažene do 2×10<5>/ml, raspoređene (50 ul po udubljenju) u ploče sa ravnim dnom sa 96 udubljenja.
[0734] Osnovni rastvor (1 ml) konjugata leka antitela (ADC) koji se testira (20 µg/ml) je napravljen razblaživanjem filterom sterilisanog ADC u medijumu ćelijske kulture. Set od 8x 10-strukih razblaženja osnovnog ADC-a je napravljen u ploči sa 24 udubljenja serijskim transferom od 100 µl u 900 µl medijuma za ćelijsku kulturu. Razređeno ADC je dodato (50 µl / po udubljenju) u 4 ponovljena udubljenja ploče sa 96 udubljenja, koje su sadržavale 50 µl suspenzije ćelija prethodno zasejanih. U kontrolna udubljenja primljen je 50 µl medijuma ćelijske kulture. Ploča sa 96 udubljenja koja sadrži ćelije i ADC inkubirana je na 37°C u inkubatoru sa gasom CO2, tokom vremena izlaganja.
[0735] Na kraju perioda inkubacije, održivost ćelija je merena MTS testom. MTS (Promega) je doziran (20 µl po udubljenju) u svaku udubljenje i inkubiran 4 sata na 37°C u inkubatoru sa gasom CO2. Apsorbanca udubljenja je izmerena na 490 nm. Procenat preživljavanja ćelija izračunat je iz srednje apsorbancije u 4 udubljenja tretirane ADC-om u poređenju sa srednjom apsorbancijom u 4 kontrolne neobrađene udubljenja (100%). IC50je određen na osnovu podataka o dozi-odgovoru koristeći GraphPad Prism koristeći nelinearni algoritam prilagođavanja krive: sigmoidna kriva doza-odgovor sa promenljivim nagibom.
[0736] Vreme inkubacije ADC-a bilo je 4 dana sa SK-BR-3, MDA-MB-468, WSU-DLCL2 i SU-DHL-4, 5 dana za Granta-519, 6 dana za BJAB i 7 dana za NCI-N87. MDA-MB-468, NCI-N87, WSU-DLCL2 i SU-DHL-4 su kultivisani u RPMI 1640 sa Glutamaxom 10% (v/v) HyClone™ fetalnim goveđim serumom, Granta-519 u DMEM Glutamax sa 10% (v/v) HyClone™ fetalni goveđi serum, SK-BR-3 u McCois 5A sa 10% (v/v) HyClone™ fetalni goveđi serum i BJAB u RPMI 1640 Glutamax sa 20% (v/v) HyClone™ fetalnim goveđim serumom.
CellTiter-Glo citotoksični postupak
[0737] Koncentracija i vitalnost ćelija iz sub-konfluentne (80-90% konfluentnosti) T75 bočice mere se bojenjem tripan plavim i izbrojavaju korišćenjem LUNA-II™ automatizovanog brojača ćelija. Ćelije su razblažene i postavljene na 1500 ćelija po udubljenju (50 µl suspenzije po udubljenju) u bele ploče sa ravnim dnom sa 96 udubljenja.
[0738] Osnovni rastvor (1 mL) konjugata antitela leka (ADC) koji se testira (20 µg po ml) je napravljen razblaživanjem filterom sterilisanog ADC u medijumu ćelijske kulture. Set od 8x 10-strukih razblaženja osnovnog ADC-a je napravljen u ploči sa 24 udubljenja serijskim transferom od 100 µl u 900 µl medijuma za ćelijsku kulturu. Razređeno ADC je dodato (50 µl / po udubljenju) u 4 ponovljena udubljenja ploče sa 96 udubljenja, koje su sadržavale 50 µl suspenzije ćelija prethodno zasejanih. U kontrolna udubljenja primljen je 50 µl medijuma ćelijske kulture. Ploča sa 96 udubljenja koja sadrži ćelije i ADC inkubirana je na 37°C u inkubatoru sa gasom CO2, tokom vremena izlaganja.
[0739] Na kraju perioda inkubacije, održivost ćelija je merena CellTiter-Glo testom. CellTiter-Glo (Promega) je stavljen na 100 µl po udubljenju i mućkan 2 minuta pre 10 minuta stabilizacije na sobnoj temperaturi. Očitana je luminiscencija svakog udubljenja. Procenat preživljavanja ćelija izračunat je iz srednje apsorbancije u 4 udubljenja tretirane ADC-om u poređenju sa srednjom apsorbancijom u 4 kontrolne neobrađene udubljenja (100%). IC50je određen na osnovu podataka o dozi-odgovoru koristeći GraphPad Prism koristeći nelinearni algoritam prilagođavanja krive: sigmoidna kriva doza-odgovor sa promenljivim nagibom.
[0740] ADC vreme inkubacije za PC-3 je 6 dana. PC-3 je kultivisan u RPMI 1640 sa Glutamax 10% (v/v) HyClone™ fetalnim goveđim serumom.
Rezultati
[0741]
[0742] Ćelijske linije SU-DHL-4, GRANTA519, BJAB i WSU-DL-CL2 svi eksprimiraju CD79b.
[0743] Ćelijske linije SK-BR-3 i NCI-N87 eksprimiraju Her2. Ćelijska linija MDA-MB-468 eksprimira HER2.
Primer 8 - In vivo testovi
(i) Daudi
Testirani konjugati: Konj-HLL2-1; Konj-HLL2-2; Konj-HLL2-3
[0744] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti deset nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>Daudi ćelija subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 1500 mm<3>ili 60 dana, šta god je bilo pre.
[0745] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača.
[0746] Koncentracija ADC je podešena da bi se dobile sledeće doze:
[0747] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase.
[0748] Konj-HLL2-1: Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 27,8 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 32,2 dana (116%) za 60-dnevno ispitivanje. Jedan smrtni slučaj koji nije povezan sa lečenjem zabeležen je 28. dana, a ova životinja je isključena iz analize.
[0749] Režim od 0,6 mg/kg rezultirao je TGD od 48,1 dana (73%), što je bilo statistički značajno u odnosu na kontrolu (p < 0,001). Štaviše, ovaj režim je imao pet od devet odgovora sa 59 regresije koji se sastoje od dve delimične i tri potpune regresije. Šest životinja je postiglo krajnju tačku od 1500 mm<3>, ostavljajući 3 preživele posle 60 dana. Tri preživela su imala srednju zapreminu tumora od 221 mm<3>. Došlo je do jednog smrtnog slučaja koji nije povezan sa lečenjem i ova životinja je isključena iz analize.
[0750] Režim od 1,8 mg/kg rezultirao je maksimalno mogućim, značajnim TGD (u odnosu na kontrolne grupe, p <0,001), imao je osam od deset preživelih od 60 dana i proizveo je korist preživljavanja koja se statistički značajno razlikovala od kontrola koje su tretirane sredstvom za prenošenje (p < 0,001 ). Osam životinja je pokazalo potpunu regresiju. Pet od ovih životinja je bilo bez tumora nakon 60 dana.
[0751] Oba režima lečenja dala su statistički značajne koristi za preživljavanje u poređenju sa kontrolom (p < 0,001 za 0,6 i 1,8 mg/ml).
[0752] Konj-HLL2-2: Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 27,8 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 32,2 dana (116%) za 60-dnevno ispitivanje.
[0753] Režimi od 0,3 i 1 mg/kg su rezultirali maksimalno dostižnim TGD (32,2 dana, 116%). Oba ova rezultata su bila statistički značajna iz kontrola (p < 0,001 za svaki režim).
[0754] Osamdeset procenata životinja tretiranih sa 0,3 mg/kg pokazalo je regresijske odgovore koji se sastoje od dva delimična odgovora i šest potpunih odgovora, od kojih su četiri ostala bez tumora na kraju ispitivanja. Četiri životinje tretirane sa 0,3 mg/kg dostigle su krajnju tačku zapremine tumora ostavljajući šest preživelih u ispitivanju bez tumora na kraju ispitivanja.
[0755] Sto posto životinja tretiranih sa 1 mg/kg pokazalo je regresijske odgovore i sve životinje su bile bez tumora 60. dana.
[0756] Oba režima lečenja su rezultirala značajnim ukupnim razlikama u preživljavanju u odnosu na kontrolu (kontrole u odnosu na 0,3 ili 1 mg/kg, p < 0,0001).
[0757] Konj-HLL2-3: Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 27,8 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 32,2 dana (116%) za 60-dnevno ispitivanje.
[0758] Režimi od 0,1 i 0,3 mg/kg rezultirali su TGD od 12,9 dana (46%) i 24,6 dana (88%). Oba ova rezultata su bila statistički značajna iz kontrola (p < 0,001 za svaki režim).
[0759] Trideset procenata regresijskih odgovora je primećeno kod životinja tretiranih režimom od 0,1 mg/ml sa tri delimična odgovora. Sve životinje u ovoj grupi dostigle su krajnju tačku zapremine tumora do 60. dana.
[0760] Sedamdeset procenata životinja tretiranih sa 0,3 mg/kg pokazalo je regresijske odgovore koji se sastoje od tri delimična odgovora i četiri potpuna odgovora, od kojih je jedan ostao bez tumora na kraju ispitivanja. Četiri životinje tretirane sa 0,3 mg/kg dostigle su krajnju tačku zapremine tumora ostavljajući šest preživelih u ispitivanju bez tumora na kraju ispitivanja. Sedam životinja u ovoj grupi dostiglo je krajnju tačku zapremine tumora ostavljajući tri preživela od 60 dana sa MTV od 750 mm<3>na kraju ispitivanja.
[0761] Oba režima lečenja su rezultirala značajnim ukupnim razlikama u preživljavanju u odnosu na kontrolu (kontrole u odnosu na 0,1 ili 0,13 mg/kg, p < 0,0001).
(ii) JIMT-1
Testirani konjugat: Konj-Her-3
[0762] Ženke CB,17 SCID miševa, starosti 10 nedelja, ubrizgane su sa 0,1 ml 1 × 10<7>JIMT-1 ćelija u 50% Matrigel subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 1000 mm<3>ili 59 dana, šta god je bilo pre.
[0763] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača. Koncentracija ADC je podešena tako da daje 1 ili 3 mg ADC/kg telesne mase u jednoj dozi.
[0764] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase. Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 48,4 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 10,6 dana (22%) za 59-dnevno ispitivanje.
[0765] Primećen je efekat zavisan od doze gde je kod životinja koje su primale dozu od 1 mg/kg srednja zapremina tumora ostao statičan do 34. dana, a zatim je napredovao, dok je kod životinja tretiranih sa 3 mg/kg došlo do malog smanjenja veličine tumora do MTV od 81 mm<3>. Oba režima doziranja su rezultirala maksimalnim TGD od 10,6 dana (22%) u odnosu na kontrolnu grupu (p < 0,001 za obe tretirane grupe).
[0766] Režim od 1 mg/kg je rezultirao sa devet preživelih u ispitivanju sa MTV od 650 mm<3>i bez objektivnih regresijskih odgovora.
[0767] Režim od 3 mg/kg je rezultirao sa devet preživelih u ispitivanju sa 20% objektivnih regresijskih odgovora koji se sastoje od dva delimična odgovora. MTV preživelih u ispitivanju bio je 108 mm<3>. Režimi lečenja se nisu značajno razlikovali jedan od drugog (p > 0,05).
[0768] Oba režima lečenja su rezultirala značajnim ukupnim razlikama u preživljavanju u odnosu na kontrolu (kontrole u odnosu na 1 ili 3 mg/kg, p < 0,0001).
(iii) NCI-N87
Testirani konjugat: Konj-Her-3
11
[0769] Ženke CB,17 SCID miševa, starosti deset nedelja, ubrizgane su sa 0,1 ml 1 × 10<7>NCI-N87 ćelija u 50% Matrigel subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 800 mm<3>ili 81 dana, šta god je bilo pre.
[0770] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača. Koncentracija ADC je podešena tako da daje 0,3 ili 1 mg ADC/kg telesne mase u jednoj dozi.
[0771] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase. Šest od deset kontrolnih tumora dostiglo je 800 mm<3>, sa vremenom do krajnjih tačaka (TTE) u rasponu od 36,8 do 81,0 dana. Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 77 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 4 dana (5%) za 81-dnevno ispitivanje. Četiri kontrolne životinje su preživele sa srednjom zapreminom tumora (MTV) od 696 mm<3>.
[0772] Režimi od 0,3 i 1 mg/kg rezultirali su TGD od 0,5 (1%) i 4,0 dana (5%) respektivno. Oba ova rezultata nisu bila statistički značajna u odnosu na kontrolu, a ne jedan od drugog (p > 0,05). Ni u jednoj grupi nije bilo objektivnih regresija. Pet 0,3 mg/kg i sedam životinja tretiranih sa 1 mg/kg preživelo je sa MTV od 550 mm<3>u obe grupe.
[0773] Nijedan režim lečenja nije doveo do statistički značajne koristi za preživljavanje u poređenju sa kontrolom (p > 0,05 za obe tretirane grupe), a nije bilo značajne razlike između grupa koje su bile tretirane (p > 0,05).
(iv) NCI-N87
Testirani konjugati: Konj-Her-1, Konj-Her-3
[0774] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti osam nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>NCI-N87 u 50% Matrigel ćelija subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 800 mm<3>ili 78 dana, šta god je bilo pre.
[0775] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača.
[0776] Koncentracija ADC je podešena da bi se dobile sledeće doze:
[0777] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase.
[0778] Konj-Her-1; Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 42 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 36 dana (86%) za 60-dnevno ispitivanje.
[0779] Režimi od 0,6 i 1 mg/kg rezultirali su TGD od 9,9 (24%) i 11,6 dana (28%) respektivno. Nijedan od ovih rezultata nije bio statistički značajan u odnosu na kontrolu (p > 0,05). Sve životinje u obe grupe su postigle krajnju tačku od 800 mm<3>.
[0780] Režim od 6 mg/kg rezultirao je maksimalno mogućim, značajnim TGD (u odnosu na kontrolne grupe, p <0,001), imao je osam od deset preživelih od 60 dana i proizveo je korist preživljavanja koja se statistički značajno razlikovala od kontrola koje su tretirane sredstvom za prenošenje (p < 0,0001 ). Jedna životinja je dostigla krajnju tačku od 800 mm<3>78. dana, ostavljajući devet preživelih sa srednjim zapreminama tumora od 550 mm<3>.
[0781] Nije bilo uočljivih regresijskih odgovora sa režimima od 1, 3 ili 6 mg/kg.
[0782] Konj-Her-3; Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 42,0 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 36,0 dana (86%) za 78-dnevno ispitivanje.
[0783] TGD za 0,3, 1 i 3 mg/kg bile su 15,1 (36%), 30,6 (73%) i 36,0 (86%) dana respektivno. Postojale su značajne razlike za 1 i 3 mg/kg u odnosu na kontrolu (p < 0,001 za obe tretirane grupe, ali ne i 0,3 mg/kg (p > 0,05). Nisu primećeni regresivni odgovori kod životinja tretiranih sa 0,3 i 1 mg/kg ADC. Devedeset procenata regresijskih odgovora je primećeno kod životinja tretiranih sa 3 mg/kg. Ovo se sastojalo od osam delimičnih odgovora i jednog potpunog odgovora, koji je ostao bez tumora na kraju ispitivanja. Sve životinje tretirane sa 0,3 mg/kg dostigle su krajnju tačku od 800 mm<3>. Pet životinja tretiranih sa 1 mg/kg postiglo je krajnju tačku ostavljajući pet preživelih od 78 dana. Ovi su imali MTV od 486 mm<3>. Svih deset životinja tretiranih sa 3 mg/kg preživelo je ispitivanje sa MTV od 63 mm<3>.
[0784] Režimi od 1 i 3 mg/kg su rezultirali značajnim razlikama u preživljavanju u odnosu na kontrolu (p < 0,001 za obe grupe tretmana). Grupa koja je primala 0,3 mg/kg nije bila statistički značajna u odnosu na kontrolnu grupu (p > 0,05). I tretman sa 1 i 3 mg/kg značajno se razlikovao od grupe od 0,3 mg/kg (p < 0,001 i p < 0,0001).
(v) NCI-N87
Testirani konjugat: Konj-Her-2
[0785] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti osam nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>NCI-N87 ćelije u 50% Matrigel subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 800 mm<3>ili 79 dana, šta god je bilo pre.
[0786] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača. Koncentracija ADC je podešena tako da daje 1 ili 2 mg ADC/kg telesne mase u jednoj dozi.
[0787] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase. Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 49,6 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 29,4 dana (59%) za 79-dnevno ispitivanje.
[0788] Režimi od 1 i 2 mg/kg rezultirali su TGD od 7,6 (15%) i 23,6 dana (48%) respektivno. Oba ova rezultata su bila statistički značajna u odnosu na kontrolu (p < 0,05 i p < 0,001 respektivno).
[0789] Osam životinja tretiranih režimom od 1 mg/kg postiglo je krajnju tačku od 800 mm<3>ostavljajući dve preživele od 79 dana sa MTV od 694 mm<3>. Sedam životinja u grupi tretiranoj sa 2 mg/ml dostiglo je krajnju tačku zapremine tumora do 79. dana ostavljajući tri preživele na kraju studije sa MTV od 600 mm<3>.
[0790] Oba režima lečenja su rezultirala značajnim ukupnim razlikama u preživljavanju u odnosu na kontrolu (kontrole naspram 1 mg/kg, p < 0,05; kontrole u odnosu na 2 mg/kg, p < 0,001).
[0791] Regresijski odgovori nisu zabeleženi ni kod jednog režima.
(vi) NCI-N87
Testirani konjugati: Konj-Her-1, Konj-Her-1++
[0792] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti osam nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>NCI-N87 u 50% Matrigel ćelija subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 800 mm<3>ili 81 dana, šta god je bilo pre.
[0793] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača.
[0794] Koncentracija ADC je podešena da bi se dobile sledeće doze:
[0795] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase.
[0796] Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 40,2 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 40 dana (86%) za 80-dnevno ispitivanje.
[0797] Konj-Her-1; Režimi jednokratne doze od 6 i 18 mg/kg doveli su do maksimalnog mogućeg kašnjenja rasta tumora. U režimu jednokratne doze od 6 mg/kg, srednja zapremina tumora za 5 miševa bila je 600 mm<3>, bez uočljivih regresijskih odgovora. U režimu jednokratne doze od 18 mg/kg bilo je deset preživelih sa
11
prosečnom zapreminom tumora od 36 mm<3>. Bilo je 4 delimične regresije i 6 potpunih regresija.
[0798] Režimi doze od 6 i 8 mg/kg tri nedelje takođe su doveli do maksimalnog mogućeg kašnjenja rasta tumora. U režimu doziranja od 6 mg/kg tri nedelje, srednja zapremina tumora za 9 miševa na kraju studije bila je 245 mm<3>, sa dve delimične regresije. U režimu doze od 8 mg/kg tri nedelje bilo je deset preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 92 mm<3>. Bilo je 7 delimičnih regresija, 3 potpune regresije i 2 preživela bez tumora.
[0799] Konj-Her-1++: Režim jedne doze od 6 mg/kg rezultirao je maksimalno mogućim kašnjenjem rasta tumora. Bilo je deset preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 161 mm<3>. Bilo je 5 delimičnih regresija, 5 potpune regresije i 2 preživela bez tumora.
(vii) NCI-N87
Testirani konjugati: Konj-Her-1, Konj-Her1+, Konj-Her-1++
[0800] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti osam nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>NCI-N87 u 50% Matrigel ćelija subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 800 mm<3>ili 83 dana, šta god je bilo pre.
[0801] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača.
[0802] Koncentracija ADC je podešena da bi se dobile sledeće doze:
[0803] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase.
[0804] Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 36,8 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 46,2 dana (126%) za 80-dnevno ispitivanje.
[0805] Konj-Her-1; Režimi od 6 i 18 mg/kg doveli su do kašnjenja rasta tumora od 45,9 dana (125%) i 46,2 dana (126%). U režimu od 6 mg/kg srednja zapremina tumora za 4 miša bila je 564 mm<3>, bez uočljivih regresijskih odgovora. U režimu od 18 mg/kg bilo je devet preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 108 mm<3>. Bilo je 9 delimične regresije i 1 potpunih regresija.
[0806] Konj-Her-1++: Režim od 1,5 i 3 mg/kg dovodi su do kašnjenja rasta tumora od 45,9 dana (125%) i 46,2 dana (126%). U režimu od 1,5 mg/kg bila su dva preživela sa prosečnom zapreminom tumora od 634 mm<3>. U režimu od 3 mg/kg bilo je deseti preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 451 mm<3>.
[0807] Konj-Her-1+: Režimi od 3 i 6 mg/kg doveli su do maksimalnog kašnjenja rasta tumora od 46,2 dana (126%). U režimu od 3 mg/kg bilo je sedam preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 600 mm<3>. U režimu od 6 mg/kg bilo je deseti preživelih sa prosečnom zapreminom tumora od 256 mm<3>. Postojale su dve delimične regresije.
(viii) JIMT1
Testirani konjugati: Konj-Her-1, Konj-Her-1++
[0808] Ženkama CB,17 SCID miševa, starosti osam nedelja, ubrizgano je 0,1 ml 1 × 10<7>JIMT1 u 50% Matrigel ćelija subkutano u desni bok. Kada su tumori dostigli prosečnu veličinu od 100 - 150 mm<3>, počelo je lečenje. Miševi su mereni dva puta nedeljno. Veličina tumora je merena dva puta nedeljno. Životinje su praćene pojedinačno. Krajnja tačka eksperimenta bila je zapremina tumora od 1000 mm<3>ili 60 dana, šta god je bilo pre.
[0809] Grupama od 10 ksenograftovanih miševa je ubrizgano i.v. sa 0,2 ml na 20 g telesne težine konjugata antitela leka (ADC) u fosfatnom puferu (sredstvu za prenošenje) ili sa 0,2 ml na 20 g telesne mase samog nosača.
[0810] Koncentracija ADC je podešena da bi se dobile sledeće doze:
11
[0811] Svi režimi su prihvatljivo tolerisani sa malim gubitkom telesne mase.
[0812] Srednje vreme do krajnje tačke (TTE) za kontrole tretirane nosačem je 37,5 dana, čime je ustanovljeno maksimalno moguće kašnjenje rasta tumora (TGD) od 22,5 dana (60%) za 60-dnevno ispitivanje.
[0813] Konj-Her-1; Režimi od 18 i 24 mg/kg doveli su do kašnjenja rasta tumora od 5,3 dana (14%) i 3,2 dana (9%). U režimu od 18 mg/kg sve životinje su dostigle krajnju tačku od 1000 mm<3>. U režimu od 24 mg/kg postojao je jedan preživeli sa zapreminom tumora od 968 mm<3>. Oba režima su rezultirala značajnom ukupnom razlikom u preživljavanju u odnosu na kontrolu (P<0,01).
[0814] Konj-Her-1++: Režim od 4, 6 i 8 mg/kg rezultirao je kašnjenjem rasta tumora od 4,4 dana (12%).6,9 dana (18%) i 17,7 dana (47%). U režimu od 4 mg/kg sve životinje su dostigle krajnju tačku od 1000 mm<3>. U režimu od 6 mg/kg postojao je jedan preživeli sa zapreminom tumora od 650 mm<3>. U režimu od 8 mg/kg postojao je jedan preživeli sa zapreminom tumora od 847 mm<3>. Svi režimi su rezultirali značajnom ukupnom razlikom u preživljavanju u odnosu na kontrolu (P<0,01).
Primer 9 - Toksikološki test
[0815] Ispitivanje toksičnosti pojedinačne doze neGLP korišćena je da bi se odredila maksimalna tolerisana doza (MTD) i bezbednosni profil testiranih ADC, koji su bili: Konj-R347-1; Konj-R347-2; Konj-R347-3.
[0816] Mužjaci Sprague Dawley pacova (Envigo, Inc.) su jednom dozirani sporom bolus intravenskom injekcijom preko repne vene sa ADC. Upotrebljeni nosač za razblaživanje je 25 mM Histidin-HCl, 7% saharoza, 0,02% polisorbat 80, pH 6,0. Parametri procenjeni tokom studije obuhvatali su smrtnost, fizičke preglede, posmatranje u kavezu, telesnu težinu, promene telesne težine, kliničku patologiju (klinička hemija, hematologija i koagulacija) i grube nalaze patologije. Sve životinje su prekinute na 29. dan ispitivanja (SD).
Konj-R347-1
[0817]
[0818] Podnošljivost je određena na osnovu krajnjih tačaka toksičnosti, uključujući blago smanjenje hematoloških parametara, mikroskopske procene i supresiju koštane srži. Na osnovu mikroskopskih promena kod životinja koje su primile najvišu dozu, utvrđeno je da maksimalna tolerantna doza (MTD) kod pacova nakon jedne doze iznosi 25 mg/kg.
Konj-R347-2
[0819]
[0820] Podnošljivost je određena na osnovu krajnjih tačaka toksičnosti. ADC je tolerisan do 8 mg/kg kod pacova posle jedne doze. Nalazi su uključivali smanjenje telesne mase zavisno od doze i supresiju koštane srži.
Konj-R347-3
[0821]
11
[0822] Podnošljivost je određena na osnovu krajnjih tačaka toksičnosti. ADC je tolerisan do 4mg/kg kod pacova posle jedne doze. Nalazi su uključivali gubitak telesne mase zavisno od doze i supresiju koštane srži.
Terapijski indeks
[0823] Terapijski indeks svakog povezivača ADC/lek je izračunat korišćenjem sledeće jednačine:
11

Claims (25)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I:
    i njegove soli i solvati, pri čemu: su R<6>i R<9>nezavisno izabrani iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa; je R<7>nezavisno izabran iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa; su Y i Y' izabrani između O, S ili NH; su R<6'>, R<7'>, R<9'>izabrani iz iste grupe kao i R<6>, R<7>i R<9>respektivno; je R<11b>izabran iz OH, OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil; i je R<L>veznik za vezivanje sa sredstvom za vezivanje ćelije, koji se bira između: (iiia):
    gde je Q:
    gde je Q<X>takav da je Q aminokiselinski ostatak, dipeptidni ostatak ili tripeptidni ostatak; je X:
    gde su a = 0 do 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5; G<L>je veznik za vezivanje sa ligandnom jedinicom; i (iiib):
    , gde su R<L1>i R<L2>nezavisno izabrani između H i metila, ili zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilen ili ciklobutilen grupu; i e je 0 ili 1; bilo (a) R<20>je H, i R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil; ili (b) R<20>i R<21>formiraju dvostruku vezu azot-ugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezani; ili (c) R<20>je H i R<21>je SOzM, gde je z 2 ili 3 i M je monovalentni farmaceutski prihvatljiv katjon; ili (d) R<20>je H i R<21>je H; ili (e) R<21>je OH ili OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil i R<20>izabran iz:
    gde je R<Z>izabran iz:
    (z-ii) OC(=O)CH3; (z-iii) NO2; (z-iv) OMe; (z-v) glukuronid; (z-vi) -C(=O)-X1-NHC(=O)X2-NH-R<ZC>, gde -C(=O)-X1-NH- i -C(=O)-X2-NH- predstavljaju prirodne aminokiselinske ostatke i R<ZC>se bira između Me, OMe, OCH2CH2OMe.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde su i Y i Y' O i R" je: (a) C3-7alkilen; ili (b) grupa formule:
    gde je r 1 ili 2.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde je R<9>H i R<6>je H.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, gde je R<7>C1-4alkiloksi grupa.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde je R<6'>ista grupa kao R<6>, R<7'>je ista grupa kao R<7>, R<9'>je ista grupa kao R<9>i Y' je ista grupa kao Y.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, gde R<20>i R<21>formiraju dvostruku vezu azotugljenik između atoma azota i ugljenika za koje su vezani.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je prema formuli la, Ib ili Ic:
    gde je R<1a>odabran između metila i benzila; R<L>i R<11b>su kao što su definisani u patentnom zahtevu 1.
  8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, gde je R<11b>OH.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, gde je R<L>formule IIIa, a Q je dipeptidni ostatak izabran između: <CO>-Phe-Lys-<NH>, <CO>-Val-Ala-<NH>, <CO>-Val-Lys-<NH>, <CO>-Ala-Lys-<NH>, <CO>-Val-Cit-<NH>, <CO>-Phe-Cit-<NH>, <CO>-Leu-Cit-<NH>, <CO>-Ile-Cit-<NH>, <CO>-Phe-Arg-<NH>, i <CO>-Trp-Cit-<NH>.
  10. 10. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9, gde je R<L>prema formuli IIIa, i a je 0.
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, gde je R<L>prema formuli IIIa, i b je 0 do 8.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, gde je R<L>prema formuli IIIa, i d je 2.
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 12, gde je R<L>prema formuli IIIa i G<L>se bira između:
    gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu.
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 13, gde je G<L>G<L1-1>.
  15. 15. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje prema formuli Id:
    gde se Q bira između: (a) -CH2-; (b) -C3H6-; i (c)
  16. 16. Konjugat formule II: L - (D<L>)p(II) gde je L jedinica liganda, D<L>je jedinica povezivanja leka formule I':
    gde su R<6>, R<7>, R<9>, R<11b>, Y, R", Y', R<6'>, R<7'>, R<9'>, R<20>i R<21>kao što je definisano u bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 8; R<LL>je veznik za povezivanje sa vezujućim sredstvom ćelije, koji se bira između: (iiia):
    12 gde su Q i X kao što su definisani u bilo kom od patentnih zahteva 1 i 9 do 12 i G<LL>je veznik povezan sa ligandnom jedinicom; i (iiib):
    gde su R<L1>i R<L2>kao što su definisani u patentnom zahtevu 1; pri čemu je p ceo broj od 1 do 20.
  17. 17. Konjugat prema patentnom zahtevu 16, gde je G<LL>izabran između:
    gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu.
  18. 18. Konjugat prema patentnom zahtevu 17, gde je G<LL>G<LL1-1>.
  19. 19. Konjugat prema patentnom zahtevu 16, gde je D<L>prema formuli (Id'):
    gde se Q bira između: (a) -CH2-; (b) -C3H6-; i (c)
  20. 20. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 19, gde je ligandna jedinica antitelo ili njegov aktivni fragment koji se vezuje za jedan ili više antigena povezanih sa tumorom ili receptora na površini ćelije odabranih iz (1)-(88): (1) BMPR1B; (2) E16; (3) STEAP1; (4) 0772P; (5) MPF; (6) Napi3b; (7) Šema 5b; (8) PSCA hlg; (9) ETBR; (10) MSG783; (11) STEAP2; (12) TrpM4; (13) CRIPTO; (14) CD21; (15) CD79b; (16) FcRH2; (17) HER2; (18) NCA; (19) MDP; (20) IL20R-alfa; (21) Brevican; (22) EphB2R; (23) ASLG659; (24) PSCA; (25) GEDA; (26) BAFF-R; (27) CD22; (28) CD79a; (29) CXCR5; (30) HLA-DOB; 12 (31) P2X5; (32) CD72; (33) LY64; (34) FcRH1; (35) IRTA2; (36) TENB2; (37) PSMA - FOLH1; (38) SST; (38,1) SSTR2; (38,2) SSTR5; (38,3) SSTR1; (38,4) SSTR3; (38,5) SSTR4; (39) ITGAV; (40) ITGB6; (41) CEACAM5; (42) MET; (43) MUC1; (44) CA9; (45) EGFRvIII; (46) CD33; (47) CD19; (48) IL2RA; (49) AXL; (50) CD30 - TNFRSF8; (51) BCMA - TNFRSF17; (52) CT Ags - CTA; (53) CD174 (Lewis Y) - FUT3; (54) CLEC14A; (55) GRP78 - HSPA5; (56) CD70; (57) Antigeni specifični za matične ćelije; (58) ASG-5; (59) ENPP3; (60) PRR4; (61) GCC - GUCY2C; (62) Liv-1 - SLC39A6; (63) 5T4; (64) CD56 - NCMA1; 12 (65) CanAg; (66) FOLR1; (67) GPNMB; (68) TIM-1 - HAVCR1; (69) RG-1/Cilj tumora prostate Mindin - Mindin/RG-1; (70) B7-H4 - VTCN1; (71) PTK7; (72) CD37; (73) CD138 - SDC1; (74) CD74; (75) Claudins - CLs; (76) EGFR; (77) Her3; (78) RON - MST1R; (79) EPHA2; (80) CD20 - MS4A1; (81) Tenascin C - TNC; (82) FAP; (83) DKK-1; (84) CD52; (85) CS1 - SLAMF7; (86) Endoglin - ENG; (87) Aneksin A1 - ANXA1; (88) V-CAM (CD106) - VCAM1.
  21. 21. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 20, gde je p ceo broj od 1 do 8.
  22. 22. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 21, za upotrebu u terapiji.
  23. 23. Farmaceutski sastav koji sadrži konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 21, i farmaceutski prihvatljiv razblaživač, nosač ili ekscipijens.
  24. 24. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 16 do 21 ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 23, za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti kod ispitanika.
  25. 25. Konjugat za upotrebu prema patentnom zahtevu 24, pri čemu je bolest koja se leči rak. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 12
RS20220775A 2017-04-18 2018-04-18 Konjugati pirolobenzodiazepina RS63502B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1706133.4A GB201706133D0 (en) 2017-04-18 2017-04-18 Pyrrolobenzodiazepine conjugates
GBGB1721337.2A GB201721337D0 (en) 2017-12-19 2017-12-19 Pyrrolobenzodiazepine conjugates
PCT/EP2018/059846 WO2018192944A1 (en) 2017-04-18 2018-04-18 Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP18718452.8A EP3612537B1 (en) 2017-04-18 2018-04-18 Pyrrolobenzodiazepine conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63502B1 true RS63502B1 (sr) 2022-09-30

Family

ID=62002665

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220775A RS63502B1 (sr) 2017-04-18 2018-04-18 Konjugati pirolobenzodiazepina

Country Status (21)

Country Link
US (1) US11370801B2 (sr)
EP (1) EP3612537B1 (sr)
JP (2) JP2020517609A (sr)
KR (1) KR102189731B1 (sr)
CN (1) CN110582505B (sr)
AU (1) AU2018255876B2 (sr)
CA (1) CA3059519C (sr)
DK (1) DK3612537T3 (sr)
ES (1) ES2926144T3 (sr)
HR (1) HRP20221063T1 (sr)
HU (1) HUE059828T2 (sr)
IL (1) IL269945B (sr)
LT (1) LT3612537T (sr)
MX (1) MX385017B (sr)
PL (1) PL3612537T3 (sr)
PT (1) PT3612537T (sr)
RS (1) RS63502B1 (sr)
SI (1) SI3612537T1 (sr)
SM (1) SMT202200490T1 (sr)
WO (1) WO2018192944A1 (sr)
ZA (1) ZA201906675B (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3064804A1 (en) * 2017-06-14 2018-12-20 Adc Therapeutics Sa Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc
WO2020141923A2 (ko) * 2019-01-03 2020-07-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
MX2021010477A (es) * 2019-03-15 2021-10-01 Medimmune Ltd Dimeros de azetidobenzodiazepina y conjugados que los comprenden para uso en el tratamiento de cancer.
MX2022001812A (es) 2019-08-12 2022-03-11 Regeneron Pharma Variantes del receptor estimulante de macrofagos 1 (mst1r) y sus usos.
WO2021080608A1 (en) 2019-10-25 2021-04-29 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
IL301285A (en) 2020-09-10 2023-05-01 Precirix N V A portion of an antibody against FAP
GB202015226D0 (en) 2020-09-25 2020-11-11 Adc Therapeutics S A Pyrrol obenzodiazepine-antibody conugates and uses thereof
JP7702284B2 (ja) 2021-06-29 2025-07-03 株式会社フジミインコーポレーテッド 表面修飾コロイダルシリカおよびこれを含む研磨用組成物
WO2023203135A1 (en) 2022-04-22 2023-10-26 Precirix N.V. Improved radiolabelled antibody
WO2023213801A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Precirix N.V. Pre-targeting
US20250367307A1 (en) 2022-06-30 2025-12-04 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention

Family Cites Families (418)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361742A (en) 1964-12-07 1968-01-02 Hoffmann La Roche 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides
US3523941A (en) 1967-03-06 1970-08-11 Hoffmann La Roche Benzodiazepine compounds and process for their preparation
US3524849A (en) 1967-10-27 1970-08-18 Hoffmann La Roche Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein
DE1965304A1 (de) 1968-12-30 1970-07-23 Fujisawa Pharmaceutical Co Benzdiazepinon-Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
JPS4843755B1 (sr) 1969-06-26 1973-12-20
IL33558A (en) 1968-12-30 1973-10-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production
JPS585916B2 (ja) 1977-12-27 1983-02-02 株式会社ミドリ十字 新規ベンゾジアゼピン系化合物
JPS5615289A (en) 1979-07-17 1981-02-14 Green Cross Corp:The Novel benzodiazepinnbased compound 3
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
CA1184175A (en) 1981-02-27 1985-03-19 Walter Hunkeler Imidazodiazepines
CA1173441A (en) 1981-02-27 1984-08-28 Hoffmann-La Roche Limited Imidazodiazepines
CA1185602A (en) 1981-02-27 1985-04-16 Emilio Kyburz Imidazodiazepines
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4427587A (en) 1982-11-10 1984-01-24 Bristol-Myers Company Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B
JPS59152329A (ja) 1983-02-17 1984-08-31 Green Cross Corp:The 局所障害抑制剤
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
FR2586683B1 (fr) 1985-08-29 1988-07-01 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
JP2660201B2 (ja) 1988-08-05 1997-10-08 塩野義製薬株式会社 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬
CA2023779A1 (en) 1989-08-23 1991-02-24 Margaret D. Moore Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
AU9016591A (en) 1990-10-25 1992-05-26 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on B cells
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
WO1992017497A1 (en) 1991-03-29 1992-10-15 Genentech, Inc. Human pf4a receptors and their use
FR2676058B1 (fr) 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
FR2676230B1 (fr) 1991-05-07 1993-08-27 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant.
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US6011146A (en) 1991-11-15 2000-01-04 Institut Pasteur Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
FR2696176B1 (fr) 1992-09-28 1994-11-10 Synthelabo Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
GB9316162D0 (en) 1993-08-04 1993-09-22 Zeneca Ltd Fungicides
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
NZ332598A (en) 1996-05-17 2000-04-28 Schering Corp Human BAS-1 protein, and use as an antagonist for modulating physiology or development of a cell
AU739028B2 (en) 1996-09-27 2001-10-04 Bristol-Myers Squibb Company Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
AU739407C (en) 1997-03-10 2002-08-08 Regents Of The University Of California, The PSCA: prostate stem cell antigen
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6890749B2 (en) 1997-05-15 2005-05-10 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
ES2313779T3 (es) 1998-03-13 2009-03-01 The Burnham Institute Moleculas que migran a diversos organos o tejidos seleccionados.
WO1999058658A2 (en) 1998-05-13 1999-11-18 Epimmune, Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
KR100581443B1 (ko) 1998-05-22 2006-05-23 다이이찌 세이야꾸 가부시기가이샤 약물복합체
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
WO2002016429A2 (en) 2000-08-24 2002-02-28 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
ATE349722T1 (de) 1998-07-08 2007-01-15 E Ink Corp Verbesserte farbige mikroverkapselte elektrophoretische anzeige
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
DE69907977T2 (de) 1998-08-27 2004-07-22 Spirogen Ltd., Ryde Pyrrolobenzodiazepine
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
AU5963699A (en) 1998-10-02 2000-04-26 Mcmaster University Spliced form of (erb)b-2/neu oncogene
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030187196A1 (en) 1998-12-30 2003-10-02 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
HK1041009B (en) 1998-12-30 2009-05-08 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Characterization of the soc/crac calcium channel protein family
ES2348708T3 (es) 1999-01-29 2010-12-13 Corixa Corporation Proteinas de fusion de her-2/neu.
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6268488B1 (en) 1999-05-25 2001-07-31 Barbas, Iii Carlos F. Prodrug activation using catalytic antibodies
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
PT2283866E (pt) 1999-06-25 2015-07-20 Genentech Inc Métodos de tratamento utilizando conjugados de anticorpo anti-erbb-maitansinóide
US6302318B1 (en) 1999-06-29 2001-10-16 General Electric Company Method of providing wear-resistant coatings, and related articles
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
JP3951035B2 (ja) 1999-09-01 2007-08-01 ジェネンテック・インコーポレーテッド 分泌及び膜貫通ポリペプチドとそれをコードしている核酸
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
AU778199B2 (en) 1999-10-29 2004-11-25 Genentech Inc. Anti-prostate stem cell antigen (PSCA) antibody compositions and methods of use
EP2363403B1 (en) 1999-11-29 2016-04-20 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
CA2392510A1 (en) 1999-11-30 2001-06-07 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
WO2001041787A1 (en) 1999-12-10 2001-06-14 Epimmune Inc. INDUCING CELLULAR IMMUNE RESPONSES TO HER2/neu USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID COMPOSITIONS
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
EP1743648B1 (en) 1999-12-23 2010-03-03 ZymoGenetics, Inc. Method for treating inflammation
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
DE60040240D1 (de) 1999-12-23 2008-10-23 Zymogenetics Inc Löslicher interleukin-20 rezeptor
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
AU784285B2 (en) 1999-12-24 2006-03-02 Genentech Inc. Methods and compositions for prolonging elimination half-times of bioactive compounds
US7294695B2 (en) 2000-01-20 2007-11-13 Genentech, Inc. PRO10268 polypeptides
AU2001234493A1 (en) 2000-01-21 2001-07-31 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
AU2001243142A1 (en) 2000-02-03 2001-08-14 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030104562A1 (en) 2000-02-11 2003-06-05 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
WO2001062794A2 (en) 2000-02-22 2001-08-30 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040052793A1 (en) 2001-02-22 2004-03-18 Carter Paul J. Caspase activivated prodrugs therapy
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
CA2402293A1 (en) 2000-03-07 2001-09-13 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
AU4941101A (en) 2000-03-24 2001-10-08 Fahri Saatcioglu Novel prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides,and diagnostic and therapeutic methods
WO2001072830A2 (de) 2000-03-31 2001-10-04 Ipf Pharmaceuticals Gmbh Diagnostik- und arzneimittel zur untersuchung des zelloberflächenproteoms von tumor- und entzündungszellen sowie zur behandlung von tumorerkrankungen und entzündlichen erkrankungen vorzugsweise mit hilfe einer spezifischen chemokinrezeptor-analyse und der chemokinrezeptor-ligand-interaktion
AU2001253140A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
IL152136A0 (en) 2000-04-07 2003-05-29 Arena Pharm Inc Non-endogenous, constitutively activated known g protein-coupled receptors
AU2001263105A1 (en) 2000-05-18 2001-11-26 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
WO2001090304A2 (en) 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001094641A2 (en) 2000-06-09 2001-12-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
CA2409776A1 (en) 2000-06-16 2001-12-27 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
JP2004528003A (ja) 2000-06-30 2004-09-16 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド 細胞外マトリクスおよび細胞接着分子
AU2001271714A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US20020165347A1 (en) 2000-06-30 2002-11-07 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
AU2002214531A1 (en) 2000-07-03 2002-01-30 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2001283507A1 (en) 2000-07-27 2002-02-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
EP1366158B1 (en) 2000-07-28 2008-05-21 Ulrich Wissenbach Trp8 markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
AU2001283360A1 (en) 2000-08-14 2002-02-25 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
JP2004522412A (ja) 2000-08-14 2004-07-29 コリクサ コーポレイション Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ−関連悪性腫瘍の治療および診断のための組成物および方法
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP1346040A2 (en) 2000-09-11 2003-09-24 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7582293B2 (en) 2000-09-15 2009-09-01 Genentech, Inc. Anti-PRO6308 antibodies
ATE333888T1 (de) 2000-09-15 2006-08-15 Zymogenetics Inc Verwendung eines polypeptids, welches die extrazelluläre domäne von il-20ra und il-20rb enthält, zur behandlung von entzündungen
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
CA2422814A1 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
JP5010089B2 (ja) 2000-09-19 2012-08-29 スピロジェン リミテッド Ｃｃ−１０６５およびデュオカルマイシンのアキラルアナログの組成物およびその使用方法
AU2002215345A1 (en) 2000-10-13 2002-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of prostate cancer, compositions and methods of screening for modulators of prostate cancer
ATE432986T1 (de) 2000-11-07 2009-06-15 Zymogenetics Inc Menschlicher rezeptor für tumor necrosis factor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
AU2002243495A1 (en) 2001-01-12 2002-07-24 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119125A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
WO2002059377A2 (en) 2001-01-24 2002-08-01 Protein Design Labs Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
AU2002251841A1 (en) 2001-01-30 2002-08-12 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002064775A1 (en) 2001-02-12 2002-08-22 Bionomics Limited Identification of genes involved in the tumourigenic process
US20030087250A1 (en) 2001-03-14 2003-05-08 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
US20040236091A1 (en) 2001-03-28 2004-11-25 Chicz Roman M. Translational profiling
US6362331B1 (en) 2001-03-30 2002-03-26 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of antitumor agents
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
AU2002254615A1 (en) 2001-04-17 2002-10-28 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Repeat sequences of the ca125 gene and their use for diagnostic and therapeutic interventions
JP2005527180A (ja) 2001-04-18 2005-09-15 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド 肺がんの診断方法、肺がんの修飾因子の組成及びスクリーニングの方法
HUP0501113A3 (en) 2001-04-26 2007-12-28 Biogen Idec Inc Cripto blocking antibodies and uses thereof
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
JP2005504513A (ja) 2001-05-09 2005-02-17 コリクサ コーポレイション 前立腺癌の治療及び診断のための組成物及び方法
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
ATE446771T1 (de) 2001-05-24 2009-11-15 Zymogenetics Inc Taci-immunoglobulin-fusionsproteine
US7157558B2 (en) 2001-06-01 2007-01-02 Genentech, Inc. Polypeptide encoded by a polynucleotide overexpresses in tumors
WO2003000842A2 (en) 2001-06-04 2003-01-03 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
WO2002099140A1 (en) 2001-06-05 2002-12-12 Exelixis, Inc. GLRAs AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
EP1572872A2 (en) 2001-06-05 2005-09-14 Exelixis, Inc. Igs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
US7125663B2 (en) 2001-06-13 2006-10-24 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
CA2451465A1 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
US7705120B2 (en) 2001-06-21 2010-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20030108958A1 (en) 2001-06-28 2003-06-12 Rene De Waal Malefyt Biological activity of AK155
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
US7446185B2 (en) 2001-07-18 2008-11-04 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
US20030108963A1 (en) 2001-07-25 2003-06-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kit, and methods for identification, assessment, prevention and therapy of prostate cancer
EA007984B1 (ru) 2001-08-03 2007-02-27 Дженентек, Инк. ПОЛИПЕПТИДЫ TACIs И BR3 И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
WO2003016475A2 (en) 2001-08-14 2003-02-27 The General Hospital Corporation Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
AU2002313559A1 (en) 2001-08-23 2003-03-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
WO2003029262A2 (en) 2001-08-29 2003-04-10 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
EP1429793B1 (en) 2001-09-06 2015-02-25 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled steap-1 useful in treatment and detection of cancer
AU2002330039A1 (en) 2001-09-17 2003-04-01 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
EP2143438B1 (en) 2001-09-18 2011-07-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumors
IL160933A0 (en) 2001-09-18 2004-08-31 Proteologics Inc Methods and compositions for treating ?cap associated diseases
CA2460621A1 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
AU2002327792A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in cd72
WO2003029421A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Origene Technologies, Inc. Regulated breast cancer genes
AU2002362436A1 (en) 2001-10-03 2003-04-14 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
CA2675409A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US20040241703A1 (en) 2002-08-19 2004-12-02 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
EP1525213B1 (en) 2001-10-24 2012-06-27 National Jewish Health Three-dimensional structures of tall-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
US7405192B2 (en) 2001-10-31 2008-07-29 Alcon, Inc. Bone morphogenic proteins (BMP), BMP receptors and BMP binding proteins and their use in the diagnosis and treatment of glaucoma
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
US20050123536A1 (en) 2001-11-20 2005-06-09 Che-Leung Law Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies
EP1448226A1 (en) 2001-11-29 2004-08-25 Genset S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
WO2003048202A2 (en) 2001-12-03 2003-06-12 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
PT1461428E (pt) 2001-12-03 2012-05-29 Alexion Pharma Inc Método para produção de anticorpos híbridos
WO2003054152A2 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003057730A1 (en) 2002-01-07 2003-07-17 Euroscreen S.A. Ligand for g-protein coupled receptor gpr43 and uses thereof
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
JP4133832B2 (ja) 2002-01-16 2008-08-13 独立行政法人科学技術振興機構 カラー動画ホログラフィ再生装置
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
CN1646161A (zh) 2002-02-21 2005-07-27 杜克大学 自身免疫疾病的药剂和治疗方法
JP2005535290A (ja) 2002-02-22 2005-11-24 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫関連疾患の治療のための組成物と方法
WO2003074662A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Exelixis, Inc. SCDs AS MODIFIERS OF THE p53 PATHWAY AND METHODS OF USE
WO2003101400A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
CA2486490A1 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
EP1579186A4 (en) 2002-03-21 2008-10-08 Sunesis Pharmaceuticals Inc IDENTIFYING KINASE INHIBITORS
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP1494693B1 (en) 2002-03-22 2010-12-08 Biogen Idec MA Inc. Cripto-specific antibodies
EP1490085A2 (en) 2002-03-25 2004-12-29 Uab Research Foundation Fc receptor homolog, reagents, and uses thereof
WO2003083074A2 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
CA2481503A1 (en) 2002-04-05 2003-10-23 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
WO2003087768A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
AU2003230874A1 (en) 2002-04-16 2003-11-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2003089904A2 (en) 2002-04-17 2003-10-30 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
AU2003228869A1 (en) 2002-05-03 2003-11-17 Incyte Corporation Transporters and ion channels
EP1572925A4 (en) 2002-05-15 2007-08-15 Avalon Pharmaceuticals CANCER-ASSOCIATED GENE AS A TARGET FOR CHEMOTHERAPY
AU2003232453A1 (en) 2002-05-30 2003-12-19 David K. Bol Human solute carrier family 7 member 11 (hslc7a11)
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
AU2003242633A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Molecular Engines Laboratories Dudulin genes, non-human animal model: uses in human hematological disease
AU2003241179C1 (en) 2002-06-06 2010-11-25 Oncotherapy Science, Inc. Genes and polypeptides relating to human colon cancers
AU2003249691A1 (en) 2002-06-07 2003-12-22 Avalon Pharmaceuticals, Inc Cancer-linked gene as target for chemotherapy
AU2003245441A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
JP2005533794A (ja) 2002-06-18 2005-11-10 アーケミックス コーポレイション アプタマー−毒素分子およびこれを使用する方法
US7304149B2 (en) 2002-06-20 2007-12-04 Washington University In St. Louis BTLA nucleic acids
EP1534331B1 (en) 2002-06-21 2014-10-29 Johns Hopkins University School of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
DE10229834A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Zinser Textilmaschinen Gmbh Streckwerk für Spinnmaschinen mit nachgeordneter Verdichtungsvorrichtung
AU2003281515A1 (en) 2002-07-19 2004-02-09 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
MXPA05000940A (es) 2002-07-25 2005-05-16 Genentech Inc Anticuerpos taci y su uso.
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
EP2353611B1 (en) 2002-07-31 2015-05-13 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
WO2004020583A2 (en) 2002-08-27 2004-03-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide predictor set for identifying protein tyrosine kinase modulators
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
AU2003256038A1 (en) 2002-08-30 2004-03-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
EP1545610A4 (en) 2002-09-06 2006-11-08 Mannkind Corp EPITOPE SEQUENCES
WO2004040000A2 (en) 2002-09-09 2004-05-13 Nura, Inc G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
CA2500978A1 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill University Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
US20060183120A1 (en) 2002-10-04 2006-08-17 Teh Bin T Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US20040138269A1 (en) 2002-10-11 2004-07-15 Sugen, Inc. Substituted pyrroles as kinase inhibitors
EP1581169A4 (en) 2002-11-08 2008-09-17 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF DISEASES RELATED TO NATURAL KILLER CELLS
WO2004044178A2 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
AU2003282624A1 (en) 2002-11-14 2004-06-03 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
WO2004045520A2 (en) 2002-11-15 2004-06-03 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
MXPA05005237A (es) 2002-11-15 2005-08-16 Univ Arkansas Gen ca125 y su uso para diagnostico e intervenciones terapeuticas.
AU2003297300A1 (en) 2002-11-20 2004-06-15 Biogen Idec Inc. Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of carcinomas
US7557092B2 (en) 2002-11-21 2009-07-07 University Of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
AU2003298786A1 (en) 2002-11-26 2004-06-18 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
AU2003302774A1 (en) 2002-12-06 2004-06-30 Diadexus, Inc. Compositions, splice variants and methods relating to ovarian specific genes and proteins
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
EP1581171B1 (en) 2002-12-20 2012-06-27 Abbott Biotherapeutics Corp. Antibodies against gpr64 and uses thereof
AU2003299819A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
JP2007520995A (ja) 2003-01-08 2007-08-02 ブリストル−マイヤーズ　スクイブ　カンパニー 上皮増殖因子受容体モデュレーターに対する感受性を決定するためのバイオマーカーおよび方法
WO2004063355A2 (en) 2003-01-10 2004-07-29 Protein Design Labs, Inc. Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of matastatic cancer
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20040171823A1 (en) 2003-01-14 2004-09-02 Nadler Steven G. Polynucleotides and polypeptides associated with the NF-kappaB pathway
JP2007520996A (ja) 2003-01-15 2007-08-02 ミレニアム・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ４４３９０、５４１８１、２１１、５６８７、８８４、１４０５、６３６、４４２１、５４１０、３０９０５、２０４５、１６４０５、１８５６０、２０４７、３３７５１、５２８７２、１４０６３、２０７３９、３２５４４、４３２３９、４４３７３、５１１６４、５３０１０、１６８５２、１５８７、２２０７、２２２４５、２３８７、５２９０８、６９１１２、１４９９０、１８５４７、１１５、５７９、１５９８５、１５６２５、７６０、１８６０３、２３９５、２５５４、８６７５、３２７２０、４８０９、１４３０３、１６８１６、１７８２７、３２６２０、５７７、６１９、１４２３、２１５８、８２６３、１５４０２、１６２０９、１６３８６、２１１６５、３０９１１、４１８９７、１６４３、２５４３、９６２６、１３２３１、３２４０９、８４２６０、２８８２、８２０３、３２６７８または５５０５３を用いて泌尿器科障害を処置するための方法および組成物
EP1594893A2 (en) 2003-02-14 2005-11-16 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
DE60326060D1 (de) 2003-03-31 2009-03-19 Council Scient Ind Res Nichtvernetzende pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepine als potentielle antitumor-agentien und ihre herstellung
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
ATE516288T1 (de) 2003-10-22 2011-07-15 Us Gov Health & Human Serv Pyrrolobenzodiazepinderivate, zusammensetzungen, die diese enthalten, und damit in zusammenhang stehende verfahren
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
PT2489364E (pt) 2003-11-06 2015-04-16 Seattle Genetics Inc Compostos de monometilvalina conjugados com anticorpos
AU2005214988A1 (en) 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
CA2556752C (en) 2004-02-23 2016-02-02 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
GB0404577D0 (en) * 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP1720881B9 (en) 2004-03-01 2013-04-17 Spirogen Sàrl 11-hydroxy-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one derivatives as key intermediates for the preparation of c2 substituted pyrrolobenzodiazepins
DE102004010943A1 (de) 2004-03-03 2005-09-29 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten
US7528126B2 (en) 2004-03-09 2009-05-05 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
EP1750614B1 (en) 2004-05-11 2017-09-27 The General Hospital Corporation Methods for making oxidation resistant polymeric material
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
NZ553500A (en) 2004-09-23 2009-11-27 Genentech Inc Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates withCysteine engineered antibodies and conjugates with a free cysteine amino acid in the heavy chain a free cysteine amino acid in the heavy chain
AU2005316844A1 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
EP1831418A2 (en) 2004-12-24 2007-09-12 Showa Denko Kabushiki Kaisha Production method of thermoelectric semiconductor alloy, thermoelectric conversion module and thermoelectric power generating device
ES2417133T3 (es) 2005-02-03 2013-08-06 Antitope Limited Anticuerpos y proteínas humanas
EP2511299A1 (en) 2005-04-19 2012-10-17 Seattle Genetics, Inc. Humanized anti-CD70 binding agents and uses thereof
GB0508084D0 (en) 2005-04-21 2005-06-01 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
EP1879901B1 (en) 2005-04-21 2009-12-23 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
WO2007039752A1 (en) 2005-10-05 2007-04-12 Spirogen Limited Alkyl 4- [4- (5-oxo-2, 3, 5, 11a-tetrahyd0-5h-pyrr0l0 [2, 1-c] [1, 4] benzodiazepine-8-yloxy) -butyrylamino]-1h-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease
SI1934174T1 (sl) 2005-10-07 2011-08-31 Exelixis Inc Inhibitorji MEK in postopki za njihovo uporabo
EP1813614B1 (en) 2006-01-25 2011-10-05 Sanofi Cytotoxic agents comprising new tomaymycin derivatives
WO2008010101A2 (en) 2006-07-18 2008-01-24 Sanofi-Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
HRP20140331T1 (hr) 2006-08-14 2014-05-09 Xencor, Inc. Optimizirana antitijela usmjerena na cd19
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
PT2099823E (pt) 2006-12-01 2014-12-22 Seattle Genetics Inc Agentes de ligação ao alvo variantes e suas utilizações
CL2008001334A1 (es) 2007-05-08 2008-09-22 Genentech Inc Anticuerpo anti-muc16 disenado con cisteina; conjugado que lo comprende; metodo de produccion; formulacion farmaceutica que lo comprende; y su uso para tratar el cancer.
PT2019104E (pt) 2007-07-19 2013-12-03 Sanofi Sa Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina e sua utilização terapêutica
WO2009016647A1 (en) 2007-08-01 2009-02-05 Council Of Scientific & Industrial Research Pyrrolo [2,1-c][1, 4] benzodiazepine-glycoside prodrugs useful as a selective anti tumor agent
AU2008312457B2 (en) 2007-10-19 2014-04-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
PL2265283T3 (pl) 2008-03-18 2015-03-31 Seattle Genetics Inc Koniugaty aurystatyny lek łącznik
EP2109244A1 (de) 2008-04-09 2009-10-14 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren zur sicherheitsgerichteten Übertragung Sicherheitsschaltgerät und Kontrolleinheit
CN104524590B (zh) 2008-04-30 2019-06-21 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
AU2009271401A1 (en) 2008-06-16 2010-01-21 Immunogen Inc. Novel synergistic effects
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
AU2010210646B2 (en) 2009-02-05 2015-10-29 Immunogen, Inc. Novel benzodiazepine derivatives
KR20110122859A (ko) 2009-02-23 2011-11-11 그렌마크 파머수티칼스 에스. 아. Ｃｄ１９에 결합하는 인간화된 항체 및 그것의 용도
JP5382792B2 (ja) 2009-08-14 2014-01-08 独立行政法人理化学研究所 光２次非線形薄膜における１次及び２次光感受率異方性同時測定方法、当該方法を実行する装置及び当該方法をコンピュータに実行させるプログラム
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
NZ598929A (en) 2009-09-01 2014-05-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
EP2480230A4 (en) 2009-09-24 2015-06-10 Seattle Genetics Inc DR5 Ligand-HEILMITTELKONJUGATE
US9040526B2 (en) 2010-02-09 2015-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Benzylpyrrolidinone derivatives as modulators of chemokine receptor activity
WO2011100398A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc. Cd20 antibodies and uses thereof
KR20130009760A (ko) 2010-02-10 2013-01-23 이뮤노젠 아이엔씨 Ｃｄ２０ 항체 및 이의 용도
MA34277B1 (fr) 2010-04-15 2013-06-01 Spirogen Developments Sarl Pyrrolobenzodiazépines et conjugués de celles-ci
JP5870400B2 (ja) 2010-04-15 2016-03-01 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド 標的化ピロロベンゾジアゼピンコンジュゲート
WO2011130615A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. Preparation of lacosamide
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
CN106749665B (zh) 2010-04-21 2021-03-26 辛塔佳有限公司 Cc-1065类似物和双功能接头的缀合物
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
JP6014596B2 (ja) 2010-11-09 2016-10-25 メディミューン，エルエルシー 均一コンジュゲーションのための抗体足場
MY183977A (en) 2011-02-15 2021-03-17 Immunogen Inc Cytotoxic benzodiazepine derivatives
US9135118B2 (en) 2011-03-07 2015-09-15 Aptare, Inc. System to catalog and search point-in-time instances of a file system
WO2013041606A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
DK2750713T3 (en) * 2011-10-14 2015-12-21 Medimmune Ltd PYRROLOBENZODIAZEPINS AND CONJUGATES THEREOF
AU2012322613B2 (en) 2011-10-14 2016-04-21 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
JP6393617B2 (ja) 2011-10-14 2018-09-19 シアトル ジェネティクス，インコーポレーテッド ピロロベンゾジアゼピンおよび標的コンジュゲート
US9102704B2 (en) 2011-10-14 2015-08-11 Spirogen Sarl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
EP2751111B1 (en) 2011-10-14 2017-04-26 MedImmune Limited Asymmetrical bis-(5H-Pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one) derivatives for the treatment of proliferative or autoimmune diseases
WO2013053871A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
JP2013194140A (ja) 2012-03-19 2013-09-30 Fuji Xerox Co Ltd トナー用ポリエステル樹脂、静電荷像現像用トナー、静電荷像現像剤、トナーカートリッジ、プロセスカートリッジ、画像形成装置及び画像形成方法
BR112014027143B1 (pt) 2012-04-30 2020-06-09 Medimmune Ltd pirrolobenzodiazepinas
IN2014MN02175A (sr) 2012-04-30 2015-08-28 Ucl Business Plc
AU2013256596A1 (en) * 2012-05-01 2014-10-09 Genentech, Inc. Anti-PMEL17 antibodies and immunoconjugates
US9062577B2 (en) 2012-05-14 2015-06-23 Southwest Research Institute Diesel engine operation for fast transient response and low emissions
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
KR20150027829A (ko) 2012-07-09 2015-03-12 제넨테크, 인크. 항-cd22 항체를 포함하는 면역접합체
SG11201500093TA (en) 2012-07-09 2015-02-27 Genentech Inc Immunoconjugates comprising anti-cd79b antibodies
US9464141B2 (en) 2012-08-02 2016-10-11 Genentech, Inc. Anti-ETBR antibodies and immunoconjugates
HK1211208A1 (zh) 2012-08-22 2016-05-20 Immunogen, Inc. 細胞毒性苯並二氮呯衍生物
WO2014057114A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates
KR101995621B1 (ko) 2012-10-12 2019-07-03 에이디씨 테라퓨틱스 에스에이 피롤로벤조디아제핀-항-cd22 항체 컨주게이트
EP2906296B1 (en) 2012-10-12 2018-03-21 ADC Therapeutics SA Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP6270859B2 (ja) 2012-10-12 2018-01-31 エイディーシー・セラピューティクス・エス・アー・エール・エルＡｄｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｓａｒｌ ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
EP2906249B1 (en) 2012-10-12 2018-06-27 MedImmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
DK2906248T3 (en) 2012-10-12 2019-03-04 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and their conjugates
CN104955485B (zh) 2012-10-12 2018-01-30 Adc疗法责任有限公司 吡咯并苯并二氮杂卓‑抗her2抗体结合物
US10695433B2 (en) 2012-10-12 2020-06-30 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9931414B2 (en) 2012-10-12 2018-04-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
JP5993093B2 (ja) 2012-10-12 2016-09-14 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン類およびその複合体
JP6133431B2 (ja) 2012-11-24 2017-05-24 ハンジョウ ディーエーシー バイオテック シーオー．，エルティディ．Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｄａｃ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 親水性連結体及び薬物分子と細胞結合分子との共役反応における親水性連結体の使用
AU2013366493B2 (en) 2012-12-21 2017-08-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
HK1216176A1 (zh) 2012-12-21 2016-10-21 Medlmmune Limited 用於治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
SMT201900339T1 (it) 2013-02-22 2019-07-11 Medimmune Ltd Coniugati anticorpo anti-dll3/pbd e loro usi
AU2014229529B2 (en) 2013-03-13 2018-02-15 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
AU2014230735B2 (en) 2013-03-13 2018-03-15 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014159981A2 (en) 2013-03-13 2014-10-02 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2016518382A (ja) 2013-04-26 2016-06-23 ピエール、ファーブル、メディカマン Ａｘｌ抗体薬物複合体および癌の治療のためのその使用
CA2922544A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Stemcentrx, Inc. Engineered anti-dll3 conjugates and methods of use
NL2011583C2 (en) 2013-10-10 2015-04-13 Wwinn B V Module, system and method for detecting acoustical failure of a sound source.
GB201317982D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
GB201318069D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Maersk Olie & Gas Seismic data processing method and apparatus
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2015052533A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9956299B2 (en) 2013-10-11 2018-05-01 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates
DE102013220528B4 (de) 2013-10-11 2015-05-07 Continental Automotive Gmbh Einspritzventil und Verfahren zum Betreiben eines Einspritzventils
US20160355875A1 (en) 2013-10-11 2016-12-08 Cellectis Methods and kits for detecting nucleic acid sequences of interest using dna-binding protein domain
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054985B1 (en) 2013-10-11 2018-12-26 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
BR112016014126B1 (pt) 2013-12-16 2023-02-14 Medimmune Limited Composto não-peptídico, conjugados de anticorpo-fármaco do mesmo, uso dos ditos conjugados para o tratamento de câncer e composição farmacêutica que compreende os mesmos
WO2015112822A1 (en) 2014-01-24 2015-07-30 Kolltan Pharmaceuticals, Inc. Antibody-drug conjugates targeting kit receptor and uses thereof
GB201406767D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
CN106687141A (zh) 2014-09-10 2017-05-17 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓及其缀合物
BR112017004802A2 (pt) 2014-09-12 2017-12-12 Genentech Inc anticorpos anti-cll-1 e imunoconjugados
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG11201702079UA (en) * 2014-09-17 2017-04-27 Genentech Inc Pyrrolobenzodiazepines and antibody disulfide conjugates thereof
WO2016053107A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 Synaffix B.V. Sulfamide linker, conjugates thereof, and methods of preparation
GB201506409D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Williams David G And Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Humanized anti-axl antibodies and their conjugates
GB201506388D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Cancer Res Technology Ltd And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506393D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506402D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506399D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201506407D0 (en) 2015-04-15 2015-05-27 Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W Site-specific antibody-drug conjugates
GB201617466D0 (en) * 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190140930A (ko) 2019-12-20
PT3612537T (pt) 2022-08-29
US11370801B2 (en) 2022-06-28
CN110582505A (zh) 2019-12-17
ES2926144T3 (es) 2022-10-24
AU2018255876B2 (en) 2020-04-30
SI3612537T1 (sl) 2022-10-28
JP2021107392A (ja) 2021-07-29
WO2018192944A1 (en) 2018-10-25
HUE059828T2 (hu) 2023-01-28
IL269945B (en) 2021-05-31
CN110582505B (zh) 2021-04-02
CA3059519C (en) 2021-03-23
KR102189731B1 (ko) 2020-12-11
AU2018255876A1 (en) 2019-11-07
BR112019021942A2 (pt) 2020-05-05
US20200115390A1 (en) 2020-04-16
EP3612537B1 (en) 2022-07-13
CA3059519A1 (en) 2018-10-25
DK3612537T3 (da) 2022-08-08
EP3612537A1 (en) 2020-02-26
ZA201906675B (en) 2023-02-22
HRP20221063T1 (hr) 2022-11-11
LT3612537T (lt) 2022-10-10
SMT202200490T1 (it) 2023-01-13
MX385017B (es) 2025-03-14
JP2020517609A (ja) 2020-06-18
PL3612537T3 (pl) 2022-11-07
MX2019012467A (es) 2019-12-11
JP7309764B2 (ja) 2023-07-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3525830B1 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
JP7309764B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン複合体
JP2016505586A (ja) 増殖性疾患および自己免疫疾患の治療に使用するための非対称ピロロベンゾジアゼピンニ量体
RS62928B1 (sr) Konjugati pirolobenzodiazepina
US10392393B2 (en) Pyrrolobenzodiazepines
WO2019096788A1 (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
BR112019021942B1 (pt) Compostos, conjugados de pirrolobenzodiazepina, composição farmacêutica que compreende os ditos conjugados e uso dos mesmos para o tratamento de câncer
EA038267B1 (ru) Пирролобензодиазепиновые конъюгаты
HK40016994B (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
HK40016994A (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
HK40007607B (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
HK40007607A (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
BR112019007612B1 (pt) Compostos e conjugados de pirrolobenzodiazepina, composições que compreendem ditos conjugados e uso dos mesmos para tratar uma doença proliferativa