[go: up one dir, main page]

RS63424B1 - Kvalifikacija hromatografske kolone u proizvodnim metodama za proizvodnju kompozicija anti-il12/il23 antitela - Google Patents

Kvalifikacija hromatografske kolone u proizvodnim metodama za proizvodnju kompozicija anti-il12/il23 antitela

Info

Publication number
RS63424B1
RS63424B1 RS20220647A RSP20220647A RS63424B1 RS 63424 B1 RS63424 B1 RS 63424B1 RS 20220647 A RS20220647 A RS 20220647A RS P20220647 A RSP20220647 A RS P20220647A RS 63424 B1 RS63424 B1 RS 63424B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
column
hetp
mobile phase
chromatographic
packing
Prior art date
Application number
RS20220647A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Randolph
Original Assignee
Janssen Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Biotech Inc filed Critical Janssen Biotech Inc
Publication of RS63424B1 publication Critical patent/RS63424B1/sr

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/16—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the fluid carrier
    • B01D15/166—Fluid composition conditioning, e.g. gradient
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B01D15/206—Packing or coating
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction, e.g. ion-exchange, ion-pair, ion-suppression or ion-exclusion
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/362—Cation-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction, e.g. ion-exchange, ion-pair, ion-suppression or ion-exclusion
    • B01D15/361—Ion-exchange
    • B01D15/363—Anion-exchange
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 and B01D15/30 - B01D15/36, e.g. affinity, ligand exchange or chiral chromatography
    • B01D15/3804—Affinity chromatography
    • B01D15/3809—Affinity chromatography of the antigen-antibody type, e.g. protein A, G or L chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
    • C07K16/065—Purification, fragmentation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8665—Signal analysis for calibrating the measuring apparatus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/00584—Control arrangements for automatic analysers
    • G01N35/00594—Quality control, including calibration or testing of components of the analyser
    • G01N35/00613—Quality control
    • G01N35/00623—Quality control of instruments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • G01N2030/562—Packing methods or coating methods packing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8831—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving peptides or proteins
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/889—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 monitoring the quality of the stationary phase; column performance

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Quality & Reliability (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na metodu kvalifikacije hromatografske kolone u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, na primer, anti-IL-12/IL-23p40 antitela STELARA<®>(ustekinumab), specifične farmaceutske kompozicije antitela i njihovih antigen vezujućih fragmenata.
STANJE TEHNIKE
[0002] Hromatografija na koloni je važna tehnika koja se koristi u procesima prečišćavanja za proizvodnju terapeutskih proteina. Performanse kolone se moraju održavati jer se proces povećava od laboratorije do proizvodnih pogona i tokom životnog veka kolone. Poteškoće u procedurama evaluacije kolone, potencijalne promene u integritetu zbijenih slojeva i logistike mogu nastati kako se prečnik kolone, oprema i potrošnja pufera povećavaju kako bi se proces povećao.
[0003] Trenutna metoda za kvalifikaciju hromatografske kolone izračunava visinu ekvivalentnu teorijskim pločama (HETP), meru disperzije nakon ubrizgavanja impulsa, procenom srednje vrednosti od maksimuma pika i standardne devijacije od š irine pika na polovini visine. Osnovno ograničenje ove metode je da ne obezbeđuje tačnu meru disperzije (tj. HETP) kada oblik pika odstupa od Gausove raspodele. Da bi se kompenzovao nedostatak osetljivosti, koristi se drugo merenje, Asimetrija, za procenu vršne asimetrije. Ova mera upoređuje širinu početnog i krajnjeg pika na 10% maksimalne visine pika. Ograničenja ovog pristupa rezultiraju nedostatkom osetljivosti na promene u performansama kolone i često rezultiraju ponovnim pakovanjem ili kondicioniranjem kolone, dok su performanse kolone zapravo prihvatljive. Predstavljene su i druge strategije za kvalifikaciju kolone. Ove strategije uključuju korišćenje Gausovih ili ne-Gausovih distribucija za modelovanje u procesnim tranzicijama (videti npr. Larson, et al., Use of Process Data to Assess Chromatographic Performance in Production-Scale Protein Purification Columns," Biotechnol. Prog. 19:485-492 (2003) i US patent br.: 9,047,438 od Belousova et al., i 8,410,928 od Ganguly). Gausovi pristupi imaju ista ograničenja u osetljivosti kao što je navedeno gore za metod ubrizgavanja, a prijavljeni ne-Gusovi pristupi zahtevaju složene proračune.
[0004] Potrebna je poboljšana kvalifikaciona procedura sa većom osetljivošću i racionalnije definisanim granicama da bi se pratile promene u performansama hromatografske kolone tokom ponovljene operacije i kako bi se procenila efikasnost za koju će kolona raditi tokom svog životnog veka. Ovaj pronalazak je usmeren na prevazilaženje ovog nedostatka u tehnici.
SUŠTINA PRONALASKA
[0006] Pronalazak obezbeđuje postupak rada hromatografske kolone u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, specifičnih farmaceutskih kompozicija antitela i njihovih antigen vezujućih fragmenata, pri čemu anti-IL-12/IL- 23p40 antitela obuhvataju aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koju čine: (i) teški lanac (HC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:10 i laki lanac (LC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR: 11; (ii) sekvence aminokiselina varijabilnog domena teškog lanca SEK ID BR:7 i sekvence aminokiselina varijabilnog domena lakog lanca SEK ID BR:8; i (iii) CDR sekvence aminokiselina teškog lanca SEK ID BR: 1, SEK ID BR: 2 i SEK ID BR: 3, i CDR sekvence aminokiselina lakog lanca SEK ID BR: 4, SEK ID BR: 5, i SEK ID BR:6, pomenuti postupak sadrži:
prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone; određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front
ili
pri čemu je C izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmere i pomeranja koji se koriste za definisanje krive; izračunavanje vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze korišćenjem formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi,
Pri čemu je:
L = dužina kolone; i
procena kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti.
[0007] Izvođenja pronalaska su definisana, respektivno, nezavisnim i zavisnim patentnim zahtevima koji su ovde priloženi. Druga izvođenja, karakteristike i prednosti različitih aspekata pronalaska su očigledne iz detaljnog opisa u nastavku razmatranog u vezi sa priloženim crtežima.
[0008] Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak rada hromatografske kolone u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, s specifičnih farmaceutskih kompozicija antitela i njihovih antigen vezujućih fragmenata, pri čemu anti-IL-12/IL -23p40 antitela obuhvataju aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koju čine: (i) teški lanac (HC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:10 i laki lanac (LC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:11; (ii) sekvence aminokiselina varijabilnog domena teškog lanca SEK ID BR:7 i sekvence aminokiselina varijabilnog domena lakog lanca SEK ID BR:8; i (iii) CDR sekvence aminokiselina teškog lanca SEK ID BR: 1, SEK ID BR: 2 i SEK ID BR: 3, i CDR sekvence aminokiselina lakog lanca SEK ID BR: 4, SEK ID BR: 5, i SEK ID BR:6. Ovaj postupak obuhvata prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone. Ovaj postupak dalje obuhvata određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front,
ili
pri čemu je C izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmere i pomeranja koji se koriste za definisanje krive; izračunavanje vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze korišćenjem Formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi,
Pri čemu je:
,
L = dužina kolone
[0009] Kvalitet pakovanja kolone za hromatografiju se ocenjuje na osnovu izračunate HETP vrednosti. Na osnovu ove procene, kolona za hromatografiju se ponovo koristi, kondicionira, zamenjuje ili ponovo pakuje.
[0010] Razvijena je nova metoda za procenu integriteta kolone, koji se ovde naziva Gama Distribution Transition Analyisis (GDTA). Nova metoda koristi matematički model da bi se uklopila kriva kroz podatke prelaznog fronta mobilne faze koji se generišu tokom redovnih koraka procesa rada kolone. Parametri modela krive se zatim koriste za izračunavanje disperzije preko sloja kolone kao mere kvaliteta kolone. Frontovi prelaza mobilne faze nastaju iz diskretnih koraka u procesu prečišćavanja hromatografijom gde se koriste procesni puferi/rastvori za ispirnje sa različitim svojstvima, kao što su provodljivost, pH i/ili gde se korsite komponente pufera. Metoda se generalno može primeniti na bilo koju mobilnu fazu ili više mobilnih fazna prelaznih frontova generisanih tokom normalne rada kolone.
[0011] Osnovna prednost GDTA metode je u tome što obezbeđuje osetljiviji merač disperzije kroz slojeve kolone u poređenju sa Gausovom HETP metodom procene. Korišćenjem GDTA, više nije potrebno meriti asimetriju, pošto GDTA model ispravno meri disperziju od uklapanja krive. Pored toga, upotreba funkcije gama distribucije olakšava analizu frontalnih prelaza u poređenju sa alternativnim ne-gausovim metodama koje su prethodno objavljene. Pored toga, upotreba funkcije gama distribucije olakšava analizu frontalnih prelaza u poređenju sa alternativnim ne-gausovim metodama koje su prethodno objavljene. Korišćenje prelaza mobilne faze koji su već prisutni u procesu hromatografije omogućava izostanak potrebe za dodatnim koracima van mreže. Štaviše, u mnogim slučajevima, podaci od ranije omogućavaju uspostavljanje opsega efikasnosti kolone pre implementacije. Konačno, GDTA metoda se može automatizovati da bi se obezbedila dosledna primena.
[0012] U određenjim izvođenjima, predstavljeni pronalazak obezbeđuje postupak rada hromatografske kolone u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, s specifičnih farmaceutskih kompozicija antitela i njihovih antigen vezujućih fragmenata, pri č emu anti-IL-12/IL -23p40 antitela obuhvataju aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koju čine: (i) teški lanac (HC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:10 i laki lanac (LC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:11; (ii) sekvence aminokiselina varijabilnog domena teškog lanca SEK ID BR:7 i sekvence aminokiselina varijabilnog domena lakog lanca SEK ID BR:8; i (iii) CDR sekvence aminokiselina teškog lanca SEK ID BR: 1, SEK ID BR: 2 i SEK ID BR: 3, i CDR sekvence aminokiselina lakog lanca SEK ID BR: 4, SEK ID BR: 5, i SEK ID BR:6, pomenuti postupak sadrži: prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone; određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front
ili
pri čemu je C izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmere i pomeranja koji se koriste za definisanje krive; izračunavanje vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze korišćenjem formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi,
Formula II
Pri čemu je:
L = dužina kolone; I
procena kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti.
[0013] U određenim izvođenjima, postupak dalje obuhvata: kondicioniranje, zamenu ili ponovno pakovanje hromatografske kolone na osnovu pomenutog procenjivanja.
[0014] U određenim izvođenjima, postupak dalje obuhvata:
prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala odgovarajućeg prelaznog fronta mobilne faze tokom jedne ili više narednih upotreba pakovanih hromatografskih kolona; izvođenje pomenutog određivanja i navedenog izračunavanja korišćenjem izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka prikupljenih tokom svake od jedne ili više narednih upotreba pakovanih hromatografskih kolona;
određivanje HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone tokom svake od pomenutih jedne ili više narednih upotreba na osnovu navedenog izvođenja;
sastavljanje trenda utvrđenih HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone za dve ili više sledećih upotreba; i
identifikaciju promene u kvalitetu pakovanja kolone za hromatografiju na osnovu navedenog sastavljenog trenda, pri čemu se pomenuto kondicioniranje, zamena ili ponovno pakovanje kolone za hromatografiju zasniva na pomenutoj identifikaciji.
[0015] U određenim izvođenjima, povećanje HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone u jednoj ili više narednih upotreba pomenutog pakovanja kolone u poređenju sa HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone u jednoj ili više ranijih upotreba pomenutog pakovanja kolone identifikuje smanjenje u kvalitetu pakovanja hromatografske kolone.
[0016] U određenim izvođenjima, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka dva ili više različita prelazna fronta mobilne faze tokom pomenute prvog pakovanja kolone se prikupljaju, a pomenuta metoda obuhvata:
izvođenje navedenog određivanja i izračunavanja korišćenjem izlaznog signala kolone i parametara akumuliranog protoka prikupljenih za svaki od dva ili više različitih prelaznih frontova mobilne faze da bi se izračunala HETP vrednost za svaki od dva različita prelazna fronta mobilne faze;
procenu kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu dve ili više izračunatih HETP vrednosti, pri čemu se pomenuto kondicioniranje, zamena ili ponovno pakovanje hromatografske kolone zasniva na pomenutoj proceni.
[0017] U određenim izvođenjima, hromatografska kolona je izabrana iz grupe koju čine: afinitetna hromatografska kolona za protein A, jonoizmenjivačka hromatografska kolona za katjone i jonoizmenjivačka hromatografska kolona za anjone.
[0018] U određenim izvođenjima, afinitetna hromatografska kolona za Protein A obuhvata MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A, jonoizmenjivačka hromatografska kolona za katjone obuhvata UNOsphere S™ jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone ili SP Sepharose XL jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone, i jonoizmenjivačka hromatografska kolona za anjone obuhvata Q Sepharose™ XSL jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za anjone.
[0019] U određenim izvođenjima, prelazni front mobilne faze u afinitetnoj hromatografskoj koloni za Protein A se generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju čine: front ispiranja generisan tokom prečišćavanja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, front koji se generiše tokom eluiranja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, front koji se generiše tokom čišćenja kolone sa Gvanidin HCl, front generisan tokom ispiranja kolone nakon čišćenja sa 0,1 M Natrijum Citratom, pH 3,5.
[0020] U određenim izvođenjima, prelazni front mobilne faze u jonoizmenjivačkoj hromatografskoj koloni za katjone se generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju čine: front koji se generiše tokom punjenja materijala tretiranog rastvaračem/deterdžentom (S/D) koji sadrži anti-IL -12/IL-23p40 antitela, front generisan tokom eluiranja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, i front generisan tokom skidanja sa kolone.
[0021] U određenim izvođenjima, prelazni front mobilne faze u jonoizmenjivačkoj hromatografskoj koloni za anjone se generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju č ine: front koji se generiše tokom č išćenja kolone natrijum hidroksidom i front koji se stvara tokom skidanja sa kolone.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0022]
Slike 1A-1B prikazuju grafikone primer uklapanja krive analize prelaza gama distribucije. Slika 1A je grafik koji prikazuje primer krive analize prelaza gama distribucije koja odgovara podacima o prelazu mobilne faze. Slika 1B je grafik koji prikazuje primer krive analize prelaza gama distribucije koja odgovara podacima o prelazu mobilne faze sa parametrima te krive koji se koriste za izračunavanje visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) kao mere efikasnosti kolone.
Slika 2 je dijagram koji prikazuje sistem kvalifikacije hromatografske kolone koji je ovde opisan.
Slika 3 je dijagram verovatnoće HETP za ravnotežni front bez transformacije hromatografske kolone za Protein A.
Slika 4 je dijagram verovatnoće zbira kvadrata (SS) za ravnotežni front bez transformacije hromatografske kolone za Protein A.
Slika 5 je dijagram verovatnoće HETP-a za front ispiranja bez transformacije hromatografske kolone za Protein A.
Slika 6 je dijagram verovatnoće SS za front ispiranja bez transformacije hromatografske kolone za Protein A.
Slika 7 je dijagram verovatnoće HETP za ravnotežni front sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A.
Slika 8 je dijagram verovatnoće SS za ravnotežni front sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A.
Slika 9 je dijagram verovatnoće HETP za front ispiranja sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A.
Slika 10 je dijagram verovatnoće SS za front ispiranja sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A.
Slika 11 je dijagram verovatnoće srednje vrednosti (Vm) za ravnotežni front hromatografske kolone za Protein A.
Slika 12 je dijagram verovatnoće srednje vrednosti (Vm) za front ispiranja hromatografske kolone za Protein A.
Slika 13 je kontrolni dijagram HETP-a za ravnotežni front sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A. UCL = gornja granica kontrole; LCL = donja granica kontrole. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove koji su očigledni u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 14 je dijagram vremenske serije HETP-a za ravnotežni front hromatografske kolone za Protein A. UCL je dobijen iz preračunatih podataka na Sl. 13.
Slika 15 je kontrolni dijagram SS za ravnotežni front sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove koji su očigledni u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 16 je dijagram vremenske serije SS za ravnotežni front hromatografske kolone za Protein A. UCL je dobijen iz preračunatih podataka na Sl. 15.
Slika 17 je kontrolni dijagram srednje vrednosti (Vm) za ravnotežni front hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 18 je kontrolni dijagram HETP-a za front ispiranja sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 19 je dijagram vremenske serije HETP-a za front ispiranja hromatografske kolone za protein A. UCL je izveden iz preračunatih podataka na Sl. 18.
Slika 20 je kontrolni dijagram SS za front ispiranja sa normlanom log (λ=0) transformacijom hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove koji su očigledni u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 21 je dijagram vremenske serije SS za front ispiranja hromatografske kolone za protein A. UCL je izveden iz preračunatih podataka na Sl. 20.
Slika 22 je kontrolni dijagram srednje vrednosti (Vm) za front ispiranja hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 23 je dijagram vremenske serije HETP rezultata za direktno hvatanje proizvoda (DPC) ravnotežnog fronta hromatografske kolone za Protein A grupisanih po pakovanju kolona.
Slika 24 je dijagram vremenske serije HETP rezultata za DPC fronta ispiranja hromatografske kolone za Protein A grupisanih po pakovanju kolone.
Slika 25 je dijagram vremenske serije HETP rezultata za DPC ravnotežnog fronta hromatografske kolone za Protein A grupisane po kliznim vrednostima.
Slika 26 je dijagram vremenske serije HETP rezultata za DPC fronta ispiranja hromatografske kolone za Protein grupisanih po kliznim vrednostima.
Slika 27 je dijagram koji prikazuje prosečan protok za DPC ravnotežnog fronta hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 28 je dijagram prosečnog pritiska pre stavljanja kolone tokom dovođenja u ravnotežu. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 29 je dijagram prosečnog protoka ispiranja za DPC fronta ispiranja hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 30 je dijagram prosečnog pritiska ispiranja za DPC fronta ispiranja hromatografske kolone za Protein A. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 31 je dijagram koji prikazuje HETP pre i posle promene protoka ispiranja. Numerisane tačke na grafikonu pokazuju odstupanja i/ili trendove očigledne u HETP rezultatima na osnovu Shewhartovih pravila 1, 2 i 3, tj. 1 predstavlja 1 tačku van kontrolnih granica, 2 predstavlja 8 tačaka na istoj strani središnje linije, a 3 predstavlja 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju.
Slika 32 je dijagram vremenske serije HETP za dva različita pakovanja hromatografske kolone za protein A kako je procenjeno na ravnotežnom frontu za 45 serija REMICADE<®>(infliksimab).
Slika 33 je dijagram vremenske serije HETP za SP-Sepharose High Performance (SPHP) ravnotežni front kolone. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 34 je dijagram vremenske serije HETP-a za SPHP kolonu WFI ispiranja fronta. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 35 je dijagram vremenske serije HETP za front skladištenja za kolonu SPHP. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 36 je dijagram vremenske serije HETP-a za Q2 ravnotežni front kolone. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 37 je dijagram vremenske serije HETP-a za Q2 ravnotežni front skidanja sa kolone. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 38 je dijagram vremenske serije HETP za front skladištenja za kolonu Q2. Kontrolne granice su izvedene iz podataka o normalnoj log Box-Cox transformaciji.
Slika 39 prikazuje pregled 10 faza procesa proizvodnje ustekinumaba.
Slika 40 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 3 MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A za ispiranje 2 fronta generisana tokom prečišćavanja STELARA<®>(ustekinumab).
Slika 41 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 3 MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A za front generisan tokom eluiranja STELARA<®>(ustekinumab).
Slika 42 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 3 MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A za front generisan tokom eluiranja SIMPONI<®>(golimumab). DPC se odnosi na Direktno Hvatanje Proizvoda SIMPONI<®>(golimumab) na MabSelect™ hromatografskoj koloni za Protein A.
Slika 43 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 3 MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A za front generisan tokom čišćenja sa Gvanidin HCl. DPC se odnosi na Direktno Hvatanje Proizvoda SIMPONI<®>(golimumab) na MabSelect™ hromatografskoj koloni za Protein A.
Slika 44 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 3 MabSelect™ afinitetnu hromatografsku kolonu za Protein A za front generisan, nakon čišćenja, tokom ispiranja sa 0,1 M Natrijum Citratom, pH 3.5. DPC se odnosi na Direktno Hvatanje Proizvoda SIMPONI<®>(golimumab) na MabSelect™ hromatografskoj koloni za Protein A.
Slika 45 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate ta Stage 6 UNOsphere S™ jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone za front generisan tokom punjenja kolone materijalom tretiranim rastvaračem/deterdžentom 0,1 M (S/D) koji sadrži SIMPONI® (golimumab). PS1 se odnosi na prvi korak poliranja za SIMPONI® (golimumab) na UNOsphere S™ koloni.
Slika 46 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 6 UNOsphere S™ jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone za front generisan tokom eluiranja SIMPONI® (golimumab). PS1 se odnosi na prvi korak poliranja za SIMPONI® (golimumab) na UNOsphere S™ koloni.
Slika 47 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 6 UNOsphere S™ jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone za front generisan tokom skidanja sa kolone. PS1 se odnosi na prvi korak poliranja za SIMPONI® (golimumab) na UNOsphere S™ koloni.
Slika 48 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 7 Q Sepharose™ XL jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone za front generisan tokom čišćenja kolone sa Natrijum Hidroksiodm. PS2 se odnosi na drugi korak poliranja za SIMPONI® (golimumab) na Q Sepharose™ XL colum.
Slika 49 je dijagram koji prikazuje HETP rezultate za Stage 7 Q Sepharose™ XL jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone za front generisan tokom skidanja sa kolone. PS2 se odnosi na drugi korak poliranja za SIMPONI® (golimumab) na Q Sepharose™ XL colum.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0023] Predstavljeni pronalazak se odnosi na poboljšanu kvalifikacionu proceduru za praćenje promena u slojevima pakovanih hromatografskih kolona tokom ponovljenog rada hromatografskih kolona u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, na primer, anti-IL-12/IL-23p40 antitela STELARA<®>(ustekinumab), i specifične farmaceutske kompozicije antitela. Ova metoda, nezavisno od razmera, pruža praktična sredstva za procenu efikasnosti za koju će kolona raditi tokom celog životnog veka kolone.
[0024] Efikasnost razdvajanja hromatografske kolone se često karakteriše korišćenjem teorijskog modela hromatografskih podova. Koristeći ovaj pristup, hromatografska kolona se percipira kao sastavljena od više faza ili teorijskih podova. Svaki teorijski pod je razdaljina na kojoj komponente uzorka postižu ravnotežu između mobilne i stacionarne faze (videti Van Deemter, Zuiderweg and Klinkenberg, "Longitudinal Diffusion and Resistance to Mass Transfer as Causes of Nonideality in Chromatography," Chem. Engng. Sci. 5: 271-289 (1956)). Efikasnost kolone se meri brojem teorijskih podova u koloni Np, pri čemu više teorijskih podova u koloni znači više ravnotežnih stanja, manju disperziju hromatografskih traka, uže pikove i bolje odvajanje. Što je veći broj teorijskih podova u datoj koloni, to je niža visina poda. Shodno tome, efikasnost kolone se takođe može meriti izračunavanjem visine ploče, koja se naziva "visina ekvivalentna teorijskoj ploči" ili HETP. Koristeći ovaj pristup, što je manja HETP vrednost to je veća efikasnost razdvajanja kolona.
[0025] HETP se izračunava deljenjem dužine hromatografske kolone L sa brojem teorijskih podova Np.
Broj teorijskih podova koje kolona poseduje istorijski je određen ispitivanjem hromatografskog pika nakon impulsne injekcije koristeći sledeću formulu:
gde je tRvreme zadržavanja i w1/2 je širina pika na polovini visine. Međutim, ovaj pristup ne pruža tačnu meru efikasnosti kolone kada oblik pika koji se koristi za izračunavanje Np odstupa od Gausove raspodele. Da bi se kompenzovao ovaj nedostatak osetljivosti, koristi se drugo merenje – Asimetrija – za procenu vršne asimetrije. Ova mera upoređuje širinu početnog i krajnjeg pika na 10% maksimalne visine pika. Kao što je objašnjeno gore, ovom modelu nedostaje osetljivost da otkrije promene u performansama kolone.
[0026] Metoda koja je ovde opisana obezbeđuje alternativnu i tačniju meru HETP koja se zasniva na gama distribuciji preko jednog ili više frontova mobilne faze koji se javljaju tokom rutinskog rada hromatografske kolone. Dakle, predstavljeni pronalazak je usmeren na metodu rada hromatografske kolone. Ova metoda uključuje prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone. Ova metoda dalje uključuje određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jednu mobilnu fazu prelaznog fronta koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front.
[0027] U odnosu na formulu Ia i formulu Ib, C je izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmera i pomeranja koji se koriste za definisanje krive . Vrednost visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) izračunata je za najmanje jedan front tranzicije mobilne faze korišćenjem formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi, gde je
,
L = dužina kolone.
[0028] Kvalitet pakovanja hromatografske kolone se ocenjuje na osnovu izračunate HETP vrednosti. Na osnovu procene kvaliteta kolone, hromatografska kolona se utvrđuje da je prihvatljiva za kasniju upotrebu, ili se mora kondicionirati, zameniti ili ponovo pakovati.
[0029] Metoda kvalifikacije kolone koja je ovde otkrivena može se primeniti na bilo koju hromatografsku kolonu. Primeri hromatografskih kolona obuhvataju, bez ograničenja, one koje se koriste za tečnu hromatografiju, tečnu hromatografiju visokih performansi (HPLC), jonoizmenjivačkau hromatografiju, afinitetnu hromatografiju, molekularnu ekskluziju, superkritičnu tečnu hromatografiju, gasnu hromatografiju, ekskluzionu hromatografiju, reverzno faznu hromatografiju, dvodimenzionalnu hromatografiju, brzu proteinsku (FPLC) hromatografiju, protivstrujnu hromatografiju, hiralnu hromatografiju, normalno faznu vodenu hromatografiju (ANP), mešoviti
1
način hromatografije i pseudo-afinitetnu hromatografiju. Primer materijala za pakovanje kolone uključuje, bez ograničenja, materijal za pakovanje za afinitetnu hromatografiju (npr. materijal za pakovanje za afinitetnu hromatografiju proteina A ili proteina G), materijal za pakovanje za jonoizmenjivačku hromatografiju (npr. katjonsku izmenu (karboksimetil smole), anjonsku izmenu (amino etil smole), i materijal za pakovanje mešovite hromatografije za razmenu, materijal za pakovanje za adsorpcionu hromatografiju (npr. materijal za pakovanje silika gela ili aluminijum oksid), materijal za pakovanje za hromatografiju sa hidrofobnom interakcijom (npr. fenilsefaroza, aza-arenofilne smole ili m-aminofenilborne kiseline za pakovanje), materijal za pakovanje afinitetne hromatografije metalnih helata (npr. Ni(II)- i Cu(II)-afinitetni materijal), materijal za pakovanje za ekskluzionu hromatografiju (npr. materijal za pakovanje za gel elektroforezu ili kapilarnu elektroforezu) ili materijal za pakovanje za molekularnu ekskluzionu hromatografiju (npr. polistiren).
[0030] Ovde opisana metoda može se primeniti tokom rutinske hromatografskog rada na koloni, na primer, tokom izolacije, prečišćavanja ili identifikacije hemijskih ili bioloških entiteta u uzorku. Takva jedinjenja mogu da obuhvataju, na primer, ali bez ograničenja, proteine (npr. antitela i njihove fragmente), nukleinske kiseline, ugljene hidrate, lipide, male organske molekule, male neorganske molekule, viruse, lipozome i hibride ili varijante oblika bilo kog takvog jedinjenja.
[0031] Za razliku od prethodnih metoda kvalifikacije kolone za hromatografiju, koje zahtevaju da kolona bude isključena radi testiranja, na primer, metoda pulsnog ubrizgavanja, metoda kako je ovde opisana se sprovodi tokom rutinskog rada kolone. Ovaj metod koristi prednosti prelaza procesa mobilne faze koji uključuju procesne pufere i rastvore koji imaju različita svojstva, a koji se javljaju tokom rutinskog procesa prečišćavanja kolone.
[0032] U skladu sa metodom ovog pronalaska, "mobilna faza" je tečna faza u kolonskoj hromatografiji koja okružuje i kreće se kroz stacionarni hromatografski materijal pakovanja kolone za hromatografiju. Tokom rada hromatografske kolone, sastav i svojstva mobilne faze se često menjaju sa svakim korakom procesa, na primer, ekvilibracija, ispiranje, itd. Promene u svojstvima mobilne faze mogu se detektovati i meriti u eluentu, odnosno mobilnoj fazi koja se eluira iz kolone nakon prolaska kroz stacionarnu fazu. Kako se ovde koristi, "izlazni signal iz kolone" je signal fizičkog ili hemijskog svojstva eluenta iz mobilne faze koji se detektuje dok se eluent eluira sa kolone. Fizičko ili hemijsko svojstvo koje obezbeđuje izlazni signal kolone može biti bilo koje svojstvo, kao što je pH, provodljivost, apsorpcija svetlosti, fluorescencija, naelektrisanje, koncentracija soli, polarimetrija, indeks prelamanja, elektrohemijski odgovor, odnos mase i naelektrisanja, itd. koje se može meriti korišćenjem bilo kog tipičnog detektora za hromatografiju. Hromatografski detektori pogodni za merenje izlaznog signala kolone uključuju, bez ograničenja, maseni spektrometar, infracrveni spektrometar, vidljivi spektrometar, ultraljubičasti spektrometar, infracrveni spektrometar sa Furijeovom transformacijom, detektor jonizacije plamena, detektor raspršenja laserskog svetla niskog ugla, foto-diodni detektor, fluorescentni spektrometar, pH detektor, detektor provodljivosti, elektrohemijski detektor i detektor indeksa prelamanja.
[0033] Izlazni signal kolone se sakuplja iz eluenta. Pored toga, za prikupljanje izlaznog signala kolone, prikuplja se i "akumulirani protok". „Akumulirani protok“ je ukupna zapremina tečnosti koja je eluirana iz kolone tokom vremena. Ova vrednost se deli sa zapreminom kolone kako bi se izrazila u jedinicama zapremine kolone.
[0034] Prelazni front se generiše promenom izlaznog signala kolone preko akumuliranog protoka. Prelazni front nastaje uzastopnom primenom različitih mobilnih faza koje imaju jedno ili više različitih svojstava (npr. provodljivost, pH, itd.) na kolonu. U skladu sa metodom koja je ovde opisana, izlazni signal kolone preko prelaznog fronta može se normalizovati tako da ima maksimalnu vrednost od 1 i minimalnu vrednost od 0. Kao što je ovde navedeno, "opadajući prelazni front" je prelaz u mobilnoj fazi gde početna mobilna faza ima izlazni signal kolone, npr., provodljivost, koja je veća od izlaznog signala kolone sekvencijalno uvedene mobilne faze.
[0035] „Rastući prelazni front“ kako se ovde koristi je prelaz mobilne faze gde početna mobilna faza ima izlazni signal kolone, npr. provodljivost, koja je niža od izlaznog signala kolone sekvencijalno uvedene mobilne faze.
[0036] Prelazni front se stvara dodavanjem prve mobilne faze hromatografskoj koloni koja sadrži pakovanje kolone koje treba da bude kvalifikovano tokom rada kolone. U nekom trenutku nakon dodavanja prve mobilne faze, na primer, kada prva mobilna faza počne da se eluira, druga mobilna faza koja ima drugačiji izlazni signal koji se može detektovati u poređenju sa prvom mobilnom fazom se dodaje u kolonu za hromatografiju koja sadrži pakovanje kolone. Prelazni front se detektuje prikupljanjem izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala mobilne faze dok prelazi između prve i druge mobilne faze.
[0037] U jednom izvođenju, izlazni signal kolone za prvu i drugu mobilnu fazu razlikuje se u signalu za iznos koji premašuje šum signala. U jednom izvođenju, razlika u izlaznom signalu kolone između prve i druge mobilne faze je 5% iznad šuma pozadinskog signala. U drugom izvođenju, razlika u izlaznom signalu kolone između prve i druge mobilne faze je najmanje 10% iznad šuma pozadinskog signala. U drugom izvođenju, razlika u izlaznom signalu kolone između prve i druge mobilne faze je najmanje 15% iznad šuma pozadinskog signala.
[0038] U jednom izvođenju, izlazni signal kolone detektovan preko prelaznog fronta je provodljivost. U ovom izvođenju, izlazni signal kolone između prve i druge mobilne faze poželjno se razlikuje za najmanje 1 µs/cm, za najmanje 10 µs/cm, za najmanje 100 µs/cm, za najmanje 1 µs/cm, ili za više od 1 µs/cm.
[0039] U drugom izvođenju, izlazni signal kolone detektovan preko prelaznog fronta je pH. U ovom izvođenju, izlazni signal kolone između prve i druge mobilne faze poželjno se razlikuje za najmanje 0,05 pH jedinica, za najmanje 0,1 pH jedinice, za najmanje 1 pH jedinice, za najmanje 2 pH jedinice, ili za više od 2 pH jedinice.
[0040] U drugom izvođenju, izlazni signal kolone detektovan preko prelaznog fronta je UV-Vis apsorbanca. U ovom izvođenju, izlazni signal kolone između prve i druge mobilne faze poželjno se razlikuje za najmanje 0,01 jedinicu apsorpcije, za najmanje 0,1 jedinicu apsorpcije, za najmanje 0,5 jedinice apsorpcije, za najmanje 0,8 jedinice apsorpcije, ili za više od 0,8 jedinica apsorpcije.
[0041] U drugom izvođenju, izlazni signal kolone detektovan preko prelaznog fronta je infracrvena apsorbanca. U ovom izvođenju, izlazni signal kolone između prve i druge mobilne faze poželjno se razlikuje za najmanje 1 procenat propustljivosti, za najmanje 10 procenata propustljivosti, za najmanje 20 procenata propustljivosti, za najmanje 30 procenata propustljivosti, ili za više od 30 procenata propustljivosti.
[0042] U jednom izvođenju, front prelaza mobilne faze se generiše promenom iz mobilne faze koja sadrži denaturišući agens u mobilnu fazu koja sadrži agens koji nije denaturisan. U drugom izvođenju, front prelaza mobilne faze se generiše promenom iz mobilne faze koja sadrži agens koji nije denaturisan u mobilnu fazu koja sadrži agens za denaturisanje.
[0043] U drugom izvođenju, front prelaza mobilne faze se generiše promenom stanja alkalne mobilne faze u stanje neutralne ili više kisele mobilne faze. Alternativno, front prelaza mobilne faze se generiše promenom stanja kisele mobilne faze u stanje neutralne ili više alkalne mobilne faze.
[0044] U drugom izvođenju, prelazni front mobilne faze se generiše promenom iz mobilne faze koja sadrži organski rastvarač u vodenu mobilnu fazu. Alternativno, prelazni front mobilne faze se generiše promenom vodene mobilne faze u mobilnu fazu koja sadrži organski rastvarač.
[0045] Izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju u različitim intervalima tokom prelaznog fronta mobilne faze. Poželjno, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju tokom čitavog prelaznog fronta mobilne faze, od minimalnog izlaznog signala kolone do maksimalnog izlaznog signala kolone ili obrnuto. U jednom izvođenju, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju u neredovnim intervalima, npr. prikupljaju se kada se detektuje promena izlaznog signala kolone. U drugom izvođenju, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju u redovnim vremenskim intervalima tokom čitavog prelaznog fronta mobilne faze. Na primer, u jednom izvođenju, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju u intervalima od 1 sekunde tokom čitavog prelaznog fronta mobilne faze. U drugom izvođenju, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju u intervalima od 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 ili 60 sekundi tokom prelaznog fronta mobilne faze.
[0046] U jednom izvođenju, podaci izlaznog signala kolone se normalizuju kao što je opisano gore postavljanjem maksimalne vrednosti na 1 i minimalne vrednosti na 0 tokom perioda analize. Protok se takođe konvertuje u jedinicu zapremine kolone radi standardizacije za poređenje podataka između različitih pakovanja kolona. Koristeći ove podatke, funkcija kumulativne gama distribucije („CDF“) se koristi za generisanje krive koja najbolje odgovara prikupljenim podacima. Gama CDF je određen sa tri vrednosti: parametar oblika k; parametar skale θ (teta); i pomera parametar Vi koristeći sledeću formulu I:
[0047] U odnosu na formulu I, C je izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen sa zapreminom kolone. Formula la, koja je izvedena iz Formule I, koristi se za određivanje vrednosti funkcije gama distribucije duž rastuće prelazne fronte.
pri čemu je Γ gornja nepotpuna gama funkcija, a γ donja nepotpuna gama funkcija.
[0048] Alternativno, Formula Ib, koja je takođe izvedena iz Formule I, se koristi za određivanje vrednosti funkcije gama distribucije duž opadajućeg prelaznog fronta.
[0049] Slika 1A je grafikon koji prikazuje primer normalizovanog izlaznog signala kolone i podatke o zapremini kolone prikupljene preko prelaznog fronta kolone. Formula Ia je korišćena za generisanje krive koja odgovara podacima.
[0050] Najpovoljniji gama CDF parametri se određuju podešavanjem vrednosti k, θ i Vi da bi se pronašli parametri koji proizvode krivu modela sa najmanjim zbirom kvadrata odstupanja od podataka. Ova kriva se uklapa kroz podatke sa celog prelaznog fronta da bi se generisao model koji najbolje odgovara. Parametri k, θ i Vi iz ove krive se koriste za izračunavanje broja podova Np u koloni ili visini poda, tj. HETP, kao indikatora efikasnosti kolone.
[0051] Broj podova Np se izračunava na osnovu srednje vrednosti µ i varijanse σ<2>krive modela. Srednja vrednost i varijansa se izvode iz krive na sledeći način:
Srednja vrednost, µ = kθ Vi
Varijansa, σ<2>= kθ<2>
[0052] Broj podova se izračunava na osnovu srednje vrednosti i varijanse na sledeći način:
Broj podova, Np = µ<2>/ σ<2>
[0053] HETP se izračunava kao što je opisano gore na osnovu dužine kolone L u centimetrima podeljene sa brojem podova Np, kako sledi.
[0054] Slika 1B prikazuje isti grafikon kao što je prikazano na Slici 1A, sa definisanim parametrima srednje vrednosti m i varijanse σ<2>.
[0055] Da bi se procenilo da model odgovara podacima izračunatim kao što je ovde opisano, takođe se mogu odrediti srednja vrednost (Vm), zbir kvadrata (SS) i modus. SS je direktna mera odstupanja krive modela od podataka procesa na osnovu kojih je izvedena. Vrednost Vm je mera centralne tačke prelaza u jedinicama zapremine kolone. Ova vrednost bi trebalo da bude blizu jedan jer je obično potrebna jedna zapremina kolone za prelaz pufera. Na srednju vrednost obično ne utiče oblik fronta. Srednje vrednosti se koriste za proveru grešaka u automatskim proračunima. Na primer, niska vrednost može ukazivati na grešku u prikupljanju podataka i može zahtevati dalju istragu da bi se potvrdio rezultat. Modus odgovara zapremini gde je brzina promene najveća. Ova vrednost ć e biti jednaka srednjoj vrednosti kada je prelazna kriva simetrična. Tipično, prelazi su iskrivljeni, a modus je niži od srednje vrednosti.
[0056] Pored HETP-a, drugi faktori koji se mogu izračunati iz parametra k (oblik) uključuju iskrivljenost (γ1), mera koja je povezana sa asimetrijom, i spljoštenost (γ 2), mera koja opisuje oštrinu pika. Ovi faktori se mogu koristiti za identifikaciju promena u performansama kolone.
[0057] U skladu sa ovde opisanom metodom, izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka se prikupljaju za isti prelazni front mobilne faze svaki put kada se proces kolone pokrene na koloni da bi se izračunao HETP iz gama CDF. Istorijski podaci generisani na kolonama koje se koriste za isti korak procesa i istu skalu takođe se mogu povratit i koristiti za izračunavanje HETP. HETP podaci se sastavljaju da bi se identifikovali trendovi u HETP vrednostima odgovarajućih prelaza tokom istorijskih ili trenutnih operacija da bi se identifikovale gornje i donje kontrolne granice HETP vrednosti. Kontrolne granice su visoke i niske vrednosti HETP koje definišu opseg prihvatljivih HETP vrednosti, tj. HETP vrednosti koje odgovaraju prihvatljivoj efikasnosti kolone. Ove gornje i donje kontrolne granice mogu se postaviti na osnovu statističke procene. Na primer, u jednom izvođenju gornja i donja kontrolna granica se postavljaju izračunavanjem srednje vrednosti /- 2, 3 ili 4 standardne devijacije. U jednom izvođenju, gornja i donja kontrolna granica se postavljaju izračunavanjem srednje vrednosti /- 3 standardne devijacije kao što je opisano u Primerima ovde. U drugo izvođenju, gornja i donja kontrolna granica se mogu postaviti izračunavanjem intervala poverenja iz istorijskih podataka. U jednom izvođenju, gornja i donja
1
kontrolna granica se postavljaju izračunavanjem intervala poverenja od 95%, 96%, 97% ili 98% iz istorijskih podataka. U drugom izvođenju, gornja i donja kontrolna granica se postavljaju izračunavanjem intervala poverenja od 99% iz istorijskih podataka.
[0058] Gornja i donja kontrolna granica se koriste za identifikaciju promena efikasnosti kolone tokom vremena i tokom upotrebe kolone. Tipično, svako povećanje HETP-a koje prelazi gornju kontrolnu granicu može ukazivati na smanjenje efikasnosti kolone. Ako se tokom rutinskog praćenja kolone primeti negativan trend u HETP-u ili se prekorače kontrolne granice, treba proceniti kvalitet proizvoda eluenta, performanse procesa kolone i/ili treba proceniti podatke o uklanjanju nečistoća da bi se obezbedio kvalitet proizvoda za identifikovanu seriju. Ukoliko kvalitet proizvoda ili performanse kolone ne zadovoljavaju postavljene kriterijume, potrebno je izvršiti odgovarajuće korektivne mere, kao što je kondicioniranje, ponovno pakovanje ili zamena kolone i kvalifikacija pre puštanja u upotrebu za dalju upotrebu. Postupci kondicioniranja hromatografske kolone za redistribuciju napunjenog sloja će varirati u zavisnosti od kolone koja se koristi, ali su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti.
[0059] Praćenje performansi kolone tokom rada kolone može se zasnivati na jednoj ili više od jedne prelazne faze koje su rutinski uključene u protokol prečišćavanja. Poželjno, praćenje se zasniva na HETP vrednostima izračunatim na osnovu gama CDF za dve, tri ili više prelaznih faza tokom protokola prečišćavanja.
[0060] Kao što je navedeno u nastavku, izračunavanje HETP-a korišćenjem GDTA metode kako je ovde opisano za određivanje performansi kolone može se zasnivati na istorijskim podacima prikupljenim iz kolona koje se koriste za isti korak procesa i istu skalu. Podaci generisani iz kvalifikovanog umanjenog modela koraka procesa takođe se mogu koristiti za procenu. Ovo omogućava procenu kvaliteta performansi kolone u poređenju sa podacima o kvalifikacijama.
[0061] Faktori kao što su brzina protoka (Van Deemterov efekat), potencijalne interakcije pufera i dodatna zapremina kolone mogu uticati na rezultate GDTA metode kao što je ovde opisano i treba ih proceniti prilikom postavljanja kontrolnih granica za GDTA. Prelazni frontovi uključeni u GDTA poželjno ispunjavaju određene kriterijume kao što su oba merenja izlaznog signala kolone mobilne faze na skali, razlika merenja izlaznog signala kolone između mobilnih faza je iznad šuma pozadinskog signala, a interakcija između mobilne faze i smole je konzistentna i ponovljiva.
[0062] Uobičajeni kriterijumi za evaluaciju kolone koji se koriste za puštanje i praćenje tokom upotrebe određuju se procenom istorijskih podataka specifičnih za opremu i tip smole. Primeri rutinskih merenja kvaliteta proizvoda i performansi procesa koji se mogu koristiti za procenu odnosa između rezultata kvalifikacije kolone i performansi navedeni su u tabeli 1. Rutinska merenja kvaliteta i performansi procesa koja se koriste za evaluaciju nisu ograničena na ona navedena u Tabeli 1, ali lista treba da bude smernica i treba da se zasniva na specifičnim zahtevima projekta i koraka procesa koji se ocenjuje. Specifikacije i kriterijumi prihvatljivosti za kvalitet proizvoda i performanse procesa su specifični za projekat i biće određeni na osnovu zahteva procesa.
Tabela 1. Rutinske mere kvaliteta i mere performansi procesa
[0063] Metoda analize prelaza gama distribucije, kao što je ovde opisano, može se izvesti u realnom vremenu tokom rada kolone. Ovaj metod uključuje prikupljanje, pomoću računarskog uređaja za kvalifikaciju kolone za hromatografiju, izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog fronta mobilnog faznog prelaza tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone; određivanje, pomoću računarskog uređaja za kvalifikaciju kolone za hromatografiju, modela krive kumulativne distribucije gama na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front.
ili
[0064] U odnosu na formulu Ia i formulu Ib, C je izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmera i pomeranja koji se koriste za definisanje krive. Metoda dalje uključuje računanje, pomoću računarskog uređaja za kvalifikaciju kolone za hromatografiju, vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan front tranzicije mobilne faze korišćenjem formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi,
Pri čemu je
,
L = dužina kolone.
[0065] Metoda dalje uključuje procenu, korišćenjem računarskog uređaja za kvalifikaciju hromatografske kolone, kvaliteta pakovanja kolone za hromatografiju na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti. Na osnovu ove procene, operater hromatografske kolone može da utvrdi da li se kolona za hromatografiju može ponovo koristiti, ili treba da se zameni, ponovo pakuje ili kondicionira pre sledećeg rada kolone.
[0066] Slika 2 je dijagram koji daje pregled metode i sistema funkcionisanja hromatografske kolone i procene efikasnosti kolone u realnom vremenu kao što je ovde opisano. Kao što je prikazano na Slici 2 i opisano gore, sistem 10 uključuje hromatografsku kolonu 12 koja se koristi za odvajanje biomolekula uvedenih u kolonu kao složena smeša, tj. eluent 14, detektor 20 koji detektuje izlazni signal kolone u eluatu dok se eluira sa hromatografske kolone, komunikacioni interfejs 22 koji prenosi signal/podatke sa detektora 20, računarski uređaj za kvalifikaciju kolone 24 i server 26.
[0067] Hromatografska kolona 12 je ispunjena propusnim, polupropusnim ili nepropusnim materijalom čvrste faze za pakovanje kolone. Odgovarajuće hromatografske kolone i materijal za pakovanje kolone su gore opisani. Eluent 14 koji sadrži biomolekule od interesa se uvodi u hromatografsku kolonu 12. Mobilna faza 16 se takođe uvodi u hromatografsku kolonu 12. Mobilna faza 16 olakšava odvajanje biomolekula kroz stacionarnu fazu hromatografske kolone 12 i eluiranje biomolekula u eluatu kroz izlaz 18 hromatografske kolone. U skladu sa metodom kao što je ovde opisano, mobilna faza 16 sadrži sekvencijalno uvedene kolonske pufere i/ili reagense za ispiranje koji se razlikuju u jednom ili više fizičkih ili hemijskih svojstava jedan od drugog kao što je opisano dole, npr. pH, provodljivost, koncentracija soli. Ove razlike u jednom ili više fizičkih ili hemijskih svojstava detektuju se u eluatu pomoću detektora 20.
[0068] Detektor 20 je povezan sa izlazom 18 hromatografske kolone 12. Shodno tome, detektor 20 prati i prikuplja izlazni signal kolone preko eluata hromatografske kolone 12. Odgovarajući detektori i svojstva eluata, tj. detektovani izlazni signal kolone su gore opisani. Detektor je povezan sa komunikacionim interfejsom 22 koji prenosi podatke prikupljene od detektora 20 (npr. izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka) na računarski uređaj 24 za kvalifikaciju kolone za obradu podataka i/ili server 26 za skladištenje.
[0069] Računski uređaj za kvalifikaciju kolone 24 sistema koji je ovde opisan može biti bilo koji računarski uređaj, na primer, računar, lični računarski uređaj, pametni telefon, itd. koji uključuje centralnu procesorsku jedinicu (CPU) ili procesor 32, memoriju 30, mrežni interfejs 28 i korisnički interfejs 34 koji su zajedno spojeni sabirnicom 36 ili drugom vezom. Računarski uređaj 24 za kvalifikaciju kolone može uključivati druge tipove i/ili brojeve komponenti i elemenata u drugim konfiguracijama.
[0070] Procesor 32 u računarskom uređaju 24 za kvalifikaciju kolone izvršava program sačuvanih instrukcija za jedan ili više aspekata analize prelaza gama distribucije opisanih i ilustrovanih pomoću primera ovde, iako se
1
mogu koristiti i drugi tipovi i/ili brojevi uređaja za obradu i procesor 32 može da izvrši druge tipove i/ili brojeve programiranih instrukcija. U jednom izvođenju, procesor 32 se nalazi isključivo u računarskom uređaju 24 za kvalifikaciju kolone. U drugom izvođenju, procesor je raspoređen između detektora 20 i računarskog uređaja 24 za kvalifikaciju kolone. Na primer, u jednom izvođenju, procesor 32 u računarskom uređaju 24 za kvalifikaciju kolone sadrži mikrokontroler koji je povezan sa detektorom.
[0071] Memorija 30 u računarskom uređaju 24 za kvalifikaciju kolone čuva ove programirane instrukcije za jedan ili više aspekata GDTA kao što je ovde opisano. Različiti tipovi memorijskih uređaja za skladištenje, kao što su memorija sa slučajnim pristupom (RAM) i/ili memorija samo za č itanje (ROM) u procesoru ili flop disk, hard disku, CD ROM, DVD ROM ili drugi računar sa čitljivim medijumom koji se čita sa i upisuje pomoću magnetnog, optičkog ili drugog sistema za čitanje i pisanje koji je povezan sa procesorom 32 u računarskom uređaju 24 za kvalifikaciju kolone, može se koristiti za memoriju 30.
[0072] Mrežni interfejs 28 računarskog uređaja 24 za kvalifikaciju kolone operativno spaja i olakšava komunikaciju između računarskog uređaja 24 za kvalifikaciju kolone i detektora 20, iako se mogu koristiti i drugi tipovi i/ili brojevi komunikacionih mreža ili sistema sa drugim tipovima i /ili brojevima veza i konfiguracija.
[0073] Računarski uređaj 24 za kvalifikaciju kolone može dalje da sadrži korisnički interfejs 34, kao što je, na primer, grafički korisnički interfejs, korisnički interfejs osetljiv na dodir ili korisnički interfejs zasnovan na vebu. Korisnički interfejs je konfigurisan da korisniku prikaže informacije u vezi sa parametrima kvalifikacije kolone za hromatografiju. Korisnički interfejs je takođe konfigurisan da prima podatke od korisnika u vezi sa parametrima hromatografske kolone.
[0074] Server 26 prikazan na Slici 2 može biti jedan ili više računarskih uređaja od kojih svaki uključuje CPU ili procesor, memoriju i mrežni interfejs, koji su zajedno povezani sabirnicom ili drugom vezom sličnom onoj opisanoj za računarski uređaj 24 za kvalifikaciju kolone. Server 26 može uključivati druge tipove i/ili brojeve komponenti i elemenata u drugim konfiguracijama.
[0075] Komunikacioni interfejs(i) 22 sistema opisanog ovde može uključivati jednu ili više lokalnih mreža (LAN) i/ili mreža šireg područja (WAN). Samo kao primer, komunikacioni interfejs(i) 22 može da koristi TCP/IP preko Eterneta i industrijske standardne protokole, uključujući protokol za prenos hiperteksta (HTTP) i/ili bezbedan HTTP (HTTPS), iako drugi tipovi i/ili brojevi komunikacije mreže se mogu koristiti.
[0076] Drugi aspekt se odnosi na neprolazni računarski čitljiv medijum koji ima sačuvana uputstva za kvalifikaciju hromatografske kolone korišćenjem analize prelaza gama distribucije. Ove instrukcije sadrže izvršni kod koji, kada se izvrši od strane procesora, uzrokuje da procesor izvrši korake koji se sastoje od prikupljanja izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja se sastoji od pakovanje kolone; određivanja modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći Formulu Ia kao što je opisano gore za rastući prelazni front ili Formula Ib kao š to je opisano gore za opadajući prelazni front; izračunavanja vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći Formulu II kao što je opisano gore i parametare modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi kao što je ovde opisano; i procene kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti.
[0077] Drugi aspekt ovog pronalaska je usmeren na uređaj za kvalifikaciju hromatografske kolone. Ovaj uređaj se sastoji od procesora i memorije povezane sa procesorom. Memorija je konfigurisana da izvršava programirane instrukcije sačuvane u memoriji. Ova uputstva uključuju: prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja se sastoji od pakovanje kolone; određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći Formulu Ia kao što je opisano gore za rastući prelazni front ili Formula Ib kao što je opisano gore za opadajući prelazni front; izračunavanje vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći Formulu II kao što je opisano gore i parametare modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi kao što je ovde opisano; i procenu kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti.
PRIMERI
Primer 1 – Primena prelazne analize gama distribucije za kvalifikaciju kolone hromatografskih kolona proteina A koje se koriste u proizvodnji REMICADE® (infliksimaba)
Pregled:
<[0078] Proces proizvodnje terapeutskog antitela, REMICADE®>(infliksimab), uključuje nekoliko faza, od kojihčetiri uključuju hromatografsko prečišćavanje. Analiza prelaza gama distribucije (GDTA) za kvalifikaciju kolone primenjena je na dva ili tri prelaza tokom svakog od ovih kolonskih koraka. Ovaj primer opisuje primenu GDTA
1
metode za korak prečišćavanja hromatografske kolone proteina A koji se koristi tokom proizvodnje REMICADE<®>(infliksimab). Proces prečišćavanja uključuje dva prelazna fronta, tj. ekvilibraciju i među korak ispiranja, koji su odgovarajući za GDTA kao što je ovde opisano.
[0079] GDTA je sproveden na 129 frontova uzastopnim prečišćavanjem 69 serija REMICADE<®>(infliksimab), uključujući 60 ravnotežnih frontova i 69 frontova za ispiranje. Analiza distribucije gama fronta je vršena istovremeno sa proizvodnjom i nije uticala na proizvodni proces. Sva proizvodnja, praćenje i kontrole su obavljeni korišćenjem aktuelnih, efikasnih procedura. Tokom prečišćavanja REMICADE<®>(infliksimab) kolonskom hromatografijom, zabeleženi su provodljivost (tj. izlazni signal kolone) i protok eluenta (tj. akumulirani protok).
[0080] Pored primene GDTA na rad kolone u realnom vremenu, istorijski podaci za 285 serija obrađenih tokom prethodne četiri godine takođe su prikupljeni i analizirani kako je ovde opisano. Skup podataka je uključivao 253 ravnotežna fronta i 285 frontova ispiranja, za ukupno 538 istorijskih frontova. Ravnotežni frontovi nisu generisani za 32 serije u kojima je izvršeno ispiranje pre upotrebe. Ovaj skup podataka je odabran da obezbedi ravnomernu distribuciju kroz životni vek kolona i predstavlja 11 pakovanja kolone.
GDTA Protokol:
[0081] Za svaki prelazni front tokom prečišćavanja hromatografske kolone za protein A, tj. ispiranja i ekvilibracije, zabeleženi su provodljivost i akumulirani protok. Određivanje početne tačke je postignuto procenom trendova provodljivosti i pritiska pre stavljanja kolone da bi se identifikovala tačka na kojoj je kolona postavljena u liniji. Tabela je kreirana i podešena za preuzimanje podataka o protoku i provodljivosti sa servera koristeći izračunati interval od 10 sekundi za vreme trajanja fronta.
[0082] Podaci o provodljivosti su normalizovani postavljanjem maksimalne vrednosti na 1 i minimalne vrednosti na 0 i proporcionalnim skaliranjem ostalih tačaka. Pored toga, protok je pretvoren u jedinicu zapremine kolone.
[0083] Početni gama CDF je izračunat korišćenjem istih početnih k, θ, Vi parametara kao i PI modul. Vi je oduzet od svake zapreminske vrednosti u x članu funkcije gama distribucije. Da bi se normalizovala provodljivost, koja se povećavala tokom prečišćavanja, vrednosti provodljivosti su postavljene na 0 za zapremine manje od Vi, a maksimum je postavljen na 1.
[0084] Izračunata je razlika (greška) između svake vrednosti provodljivosti i uklapanja modela za svaku zapreminsku tačku. Dodatno, izračunat je zbir kvadrata za grešku između 0,5 i 1,8 CV. Najpovoljniji gama CDF parametri su izračunati korišćenjem Solver-a (programsklog dodatka u Excel) da bi se pronašli parametri k, θ i Vi koji su proizveli model krivu sa minimalnom vrednošću za zbir kvadrata koristeći
[0085] Solver je pokrenut tokom 10.000 ponavljanja korišćenjem GRG nelinearne metode sa ograničenjima od k ≥ 0,0001 i Vi ≥ 0 da bi se osiguralo da je postignuto najbliže uklapanje.
[0086] Sledeći parametri su izračunati iz konačnih vrednosti k, θ i Vi:
Srednja vrednost
Varijansa, σ<2>(sigma na kvadrat) = kθ<2>
[0087] Prosečna brzina protoka i pritisak pre stavljanja kolone su izračunati za period od 0,5 do 1,8 CV za svaki front.
Analiza i evaluacija kriterijuma prihvatljivosti:
Normalnost
[0088] Rezultati za HETP i SS i za ravnotežni front i za front ispiranja su procenjeni na normalnost kreiranjem dijagrama verovatnoće. U dijagramima verovatnoće (Slike 3-12) podaci (rezultati za HETP ili SS) predstavljaju stvarnu kumulativnu distribuciju uočenu u uzorku. Linije predstavljaju prilagođenu kumulativnu distribuciju i
1
gornji i donji interval poverenja na osnovu normalne distribucije korišćenjem parametara procenjenih iz uzorka. Percentilni rang se transformiše tako da uklopljena distribucija formira pravu liniju. HETP i SS skupovi podataka su ograničeni sa 0 na donjem kraju, međutim, model normalne distribucije sugeriše negativne vrednosti. Dobijeni dijagrami verovatnoće pokazuju zakrivljeni oblik. Videti Slike 3-6. Dakle, rezultati se bolje uklapaju korišćenjem log transformacije. Videti Slike 7-10 za dijagram verovatnoće log transformisanih podataka.
[0089] Podaci za srednju vrednost (Vm) su takođe procenjeni na normalnost. Slika 11 i Slika 12 pokazuju da podaci odgovaraju normalnoj distribuciji, sa samo nekoliko odstupanja. Dakle, transformacija nije bila potrebna. Ovaj parametar nije naveden u protokolu, ali pruža korisnu garanciju da je uklapanje krive validno. Kontrolne granice za ovaj parametar će takođe biti generisane iz ove analize.
Identifikacija Autlajer i Uzroka Varijacija.
[0090] Da bi se identifikovali autlajeri (ekstremne vrednosti) i procenila varijabilnost u rezultatima, generisane su kontrolne karte za svaki parametar. Videti Slike 13-22. Kontrolne karte su koristile transformisane podatke za HETP i SS, gde je primenjena neutralna log transformacija. Podaci se takođe crtaju u grafikonu vremenske serije sa transformisanom gornjom granicom kontrole za svaki od ovih parametara.
[0091] HETP: Brojni autlajeri i trendovi su očigledni u HETP rezultatima za ravnotežne frontove i frontove ispiranja. Dodatno, Slika 13 i Slika 18 prikazuje trendove u podacima zasnovanim na Shewhart pravilima 1, 2 i 3, predstavljenim kvadratima na slikama i numerisanim prema sledećem.
Test Pravilo
1 1 tačka van kontrolnih granica
2 8 tačaka na istoj strani središnje linije
3 6 uzastopnih tačaka koje se stalno povećavaju ili smanjuju
[0092] Serije povezane sa ovim pravilom nisu isključene iz analize jer predstavljaju prihvatljiv proces.
[0093] Obe kontrolne karte (Slika 13 i Slika 18) pokazuju broj kršenja Shewhartovg prvog pravila, što takođe prelazi kontrolne granice. U svakom slučaju problemi su identifikovani i ispravljeni obnavljanjem kolona.
[0094] Kao što se očekivalo, određeni broj serija je ispunio kriterijume za pravilo 2 i 3 zbog varijacija u pakovanju kolona. Da bi se dalje procenili trendovi, grafikoni vremenskih serija su pripremljeni sa podacima grupisanim po pakovanju kolone (Slike 23-24) i skidanju sa iste (Slike 25-26). Ovi grafikoni pokazuju da se veliki deo varijacija posebnog uzroka pripisuje degradaciji kolone i nekim izolovanim slučajevima. Trendovi povećanja HETP-a su očigledni za svaku kolonu tokom vremena za ravnotežni front (Slika 23). Odstupanje primećeno za front ispiranja i zgleda da su izolovane na jednom ili drugom klizaču u različito vreme (Slika 26), što sugeriše da može postojati izvor varijabilnosti performansi kolone u klizaču.
[0095] Zbir kvadrata (SS): Zbir kvadrata je mera koliko dobro gama distribucija odgovara podacima procesa. Ova mera će obezbediti proveru da bi se osiguralo da je HETP rezultat validan. Kontrolni grafikoni za transformisane podatke su prikazani na Slici 15 i Slici 20 za ekvilibraciju i ispiranje, respektivno. Ova mera ima samo gornju kontrolnu granicu. Slika 15 pokazuje 6 tačaka gde je prekoračena gornja kontrolna granica. Četiri od njih su povezane sa višim HETP. Serija 880572M imala je poremećaj protoka tokom fronta, što je dovelo do toga da SS bude visok, ali nije uticao na HETP.
Procena protoka i pritiska
[0096] Prosečna brzina protoka i pritisak pre stavljanja kolone za skup podataka su procenjeni da bi se identifikovali bilo kakvi autlajeri. Procenjena je veza između identifikovanih razlika i rezultata.
[0097] Brzina protoka i pritisak pritisak pre stavljanja kolone su prikazani na Sl. 27-30. Grafikoni pokazuju odličnu kontrolu brzine protoka za svaki od koraka. Brzina protoka ispiranja je promenjena tokom ove procene. Pritisak pre stavljanja kolone pokazuje varijacije u vezi sa klizačem i kolonom, ali je pritisak generalno stabilan unutar opsega. Slika. 31 pokazuje da na vrednost HETP ne utiče značajno promena brzine protoka ispiranja.
Kontrolne granice za hromatografsku kolonu za protein A
HETP:
[0098] HETP je direktno povezan sa performansama kolone i na njega utiču i drugi faktori u sistemu koji mogu povećati disperziju. Rezultat mora biti >0. Kontrolne granice za HETP se najbolje određuju korišćenjem normalne log Box-Cox transformacije (l=0), kao što je prikazano na Sl. 13 za ravnotežni front i Sl. 18 za front ispiranja. Kontrolni dijgaram pokazuju kontrolne granice za transformisane podatke izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije (pogledajte takođe Tabelu 2 ispod). Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 100 je izabran da se uzme u obzir varijacije u
1
performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Gornja i donja kontrolna granica se reverzno transformišu (npr.) da bi se odredile kontrolne granice za netransformisane podatke.
[0099] Dijagram vremenske serije za HETP rezultate i kontrolne granice svakog fronta je prikazan na Slici 14 i Slici 19. Očekuje se da će rad unutar ovih granica proizvesti prihvatljive hromatografske performanse na osnovu ovog istorijskog pregleda. Vrednosti iznad gornjih kontrolnih granica mogu ukazivati na probleme sa protokom u koloni i treba ih dalje procenjivati. Vrednosti ispod donjih kontrolnih granica mogu ukazivati na grešku u proračunu.
Zbir kvadrata (SS):
[0100] SS je mera koliko dobro model gama distribucije odgovara podacima. Ova mera se koristi da bi se osiguralo da HETP vrednosti izračunate korišćenjem GDTA metode predstavljaju podatke procesa. Ne postoji donja granica i rezultat mora biti >0. Gornju kontrolnu granicu za SS najbolje je odrediti korišćenjem normalne log Box-Cox transformacije (l=0), kao što je prikazano na Sl. 15 za ravnotežni front i Sl. 20 za front ispiranja. Kontrolni dijagrami pokazuju kontrolne granice za transformisane podatke izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije. Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 100 je izabran da se uzme u obzir varijacije u performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Kontrolni dijagrami pokazuju gornje kontrolne granice za transformisane podatke koji su obrnuto transformisani da bi se dobilo 0,050 i 0,989 za frontove ekvilibracije i ispiranja, respektivno (videti tabelu 2). Dijagram vremenske serije za SS rezultate i kontrolne granice svakog fronta je prikazan na Slici 16 i Slici 20. Rezultati unutar granica će osigurati da model odgovara podacima kao i istorijskim rezultatima. Ako je rezultat izvan ovog opsega, uzrok tome je verovatno poseban.
Srednja vrednost:
[0101] Srednja vrednost je dodata kao druga mera tačnosti modela gama distribucije. Srednja vrednost predstavlja teoretski centar mase za front i uvek bi trebalo da bude blizu vrednosti zapremine kolone od 1 osim ako postoje drugi faktori u sistemu koji uzrokuju njegovo pomeranje, kao što je velika dodatna zapremina kolone ili interakcija između mobilne faze i smole. Srednje vrednosti i za ravnotežni front i za front ispiranja su otprilike normalno raspoređene i ne zahtevaju transformaciju, videti Sliku 11 i Sliku 12. Srednja vrednost za ravnotežni front je čvrsto raspoređena oko 1,07 CV sa nekim vrednostima autlajerima prisutnim na obe strane i raspoređenim oko vrednosti 1,2 na visokoj strani, videti Sliku 17. Front ispiranja pokazuje nešto više varijacija i centrirana je na 0,99 CV sa nekoliko niskih vrednosti autlajera koje se približavaju 0,8, videti Sliku 22. Preporučuje se primena kontrolnih granica od 0,80 do 1,20 CV za srednju vrednost za oba fronta (videti tabelu 2). Ovo je prikladno jer srednja vrednost nije mera performansi kolone, već se koristi kao provera da bi se osiguralo da je analiza bila odgovarajuća. Strože kontrolne granice dovele bi do nepotrebne osetljivosti za ovakvu proveru.
Tabela 2. Preporučene HETP, SS i srednje kontrolne granice za prečišćavanje hromatografske kolone za protein A tokom proizvodnje REMICADE® (infliksimaba)
Primer 2 – Primena tranzicione analize gama distribucije za detekciju suboptimalnih performansi hromatografskih kolona za protein A koje se koriste u proizvodnji REMICADE® (infliksimaba)
[0102] Proces proizvodnje terapeutskog antitela, REMICADE<®>(infliksimab), uključuje nekoliko faza, od kojih četiri uključuju hromatografsko prečišćavanje. Analiza prelaza gama distribucije (GDTA) za kvalifikaciju kolone primenjena je na dva ili tri prelaza tokom svakog od ovih koraka kolone. Ovaj primer opisuje primenu GDTA metode na korak prečišćavanja hromatografske kolone za proteina A koja se koristi u proizvodnji REMICADE® (infliksimaba). Proces prečišćavanja uključuje dva prelazna fronta, tj. ravnotežni i međukorak ispiranja, koji su odgovarajući za GDTA kao što je ovde opisano.
1
[0103] GDTA je izveden na 45 ravnotežna fronta uzastopnim prečišćavanjem 45 serija REMICADE<®>(infliksimab), koje se sastoje od 23 serije obrađenih na pakovanim kolonama 883333M001 i 22 serije obrađenih na pakovanim kolonama 8851473M001. Analiza distribucije gama fronta je vršena istovremeno sa proizvodnjom i nije uticala na proizvodni proces. Sva proizvodnja, praćenje i kontrole su obavljeni korišćenjem aktuelnih, efikasnih procedura. Tokom prečišćavanja REMICADE<®>(infliksimab) kolonskom hromatografijom, zabeleženi su provodljivost (tj. izlazni signal kolone) i protok eluenta (tj. akumulirani protok).
[0104] Trend rezultata HETP ravnoteže za 45 serija, videti Sliku 32, pokazao je značajnu razliku između pakovanja kolona. Trenutne kontrole za evaluaciju kolona nisu identifikovale nikakvu razliku između dva pakovanja kolona. Procena prinosa serije pokazala je značajnu (p = 0,001) razliku između serija obrađenih na dva pakovanja kolona, procenjenu na 4,3% nižu vrednost za pakovanje kolona sa višim HETP vrednostima. Ostali potencijalni faktori su procenjeni i nisu pokazali korelaciju sa razlikom prinosa. Dakle, zaključak iz ove analize je da je razlika u performansama kolone prouzrokovala manji prinos. Na osnovu ovog zaključka, kolona nižeg prinosa je bila uslovljena da poboljša pakovanje kolone pre nastavka upotrebe. Ovaj primer pokazuje osetljivost GDTA metode u proceni kvaliteta hromatografske kolone.
Primer 3 – Primena prelazne analize gama distribucije za kvalifikaciju kolone SP-Sepharose hromatografske kolone visokih performansi koje se koriste u proizvodnji REMICADE<®>(infliksimaba)
Pregled:
[0105] Kao što je gore objašnjeno, proces proizvodnje REMICADE<®>(infliksimaba) uključuje nekoliko faza, od kojih č etiri uključuju prečišćavanje hromatografijom. Ovaj primer opisuje primenu GDTA metode na koloni SPSepharose High Performance (SPHP) za korak prečišćavanja kolone koje se koriste u proizvodnji REMICADE<®>(infliksimab). SPHP kolona je jonoizmenjivačka hromatografska kolona za katjone. Proces prečišćavanja uključuje tri prelazna fronta, tj. ravnotežni, WFI ispiranje i frontove skladištenja, koji su odgovarajući za GDTA kao što je ovde opisano.
[0106] GDTA je izveden na 69 frontova tokom prečišćavanja 23 serije REMICADE<®>(infliksimaba), uključujući 23 ravnotežna fronta, fronta ispiranje WFI i fronta skladištenja. Analiza distribucije gama fronta je vršena istovremeno sa proizvodnjom i nije uticala na proizvodni proces. Sva proizvodnja, praćenje i kontrole su obavljeni korišćenjem aktuelnih, efikasnih procedura. Tokom prečišćavanja REMICADE<®>(infliksimaba) kolonskom hromatografijom, zabeleženi su provodljivost (tj. izlazni signal kolone) i protok eluenta (tj. akumulirani protok).
[0107] Pored primene GDTA na rad kolone u realnom vremenu, istorijski podaci za 189 prelaznih frontova koji su obrađeni tokom prethodne č etiri godine takođe su prikupljeni i analizirani kako je ovde opisano. Skup podataka je uključivao 64 ravnotežna fronta, 63 fronta za ispiranje WFI i 62 fronta za skladištenje. Ovaj skup podataka je izabran da obezbedi ravnomernu distribuciju kroz životni vek kolona i predstavlja 6 pakovanja kolona.
[0108] GDTA za frontove SPHP kolone je izvedena kao što je gore opisano u Primeru 1. Ova analiza je proizvela merenja za HETP, SS i srednju vrednost za svaki front. Kontrolne granice koje su izvedene za svaki od ova tri parametra na osnovu statističke evaluacije su navedene u tabeli 3 ispod.
Kontrolne granice za SPHP kolonu:
HETP:
[0109] HETP je direktno povezan sa performansama kolone i na njega utiču i drugi faktori u sistemu koji mogu povećati disperziju. Rezultat mora biti >0. Kontrolne granice za HETP se najbolje određuju korišćenjem normalne log Bok-Cok transformacije (l=0). Kontrolne granice za transformisane podatke su izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije. Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 25 obuhvata varijacije u performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Gornja i donja kontrolna granica se reverzno transformišu (npr.) da bi se odredile kontrolne granice za netransformisane podatke. Dijagram vremenske serije za HETP rezultate i kontrolne granice svakog fronta je prikazan na Sl. 33 (front ravnoteže), Sl. 34 (WFI front ispiranja), i Sl. 35 (front skladištenja). Očekuje se da će rad unutar ovih granica proizvesti prihvatljive hromatografske performanse na osnovu ovog istorijskog pregleda. Vrednosti iznad gornjih kontrolnih granica mogu ukazivati na probleme sa protokom u koloni i treba ih dalje procenjivati. Vrednosti ispod donjih kontrolnih granica mogu ukazivati na grešku u proračunu.
Zbir kvadrata (SS):
[0110] SS je mera koliko dobro model gama distribucije odgovara podacima. Ova mera će se koristiti da bi se osiguralo da HETP vrednosti izračunate korišćenjem GDTA metode predstavljaju podatke procesa. Ne postoji donja granica i rezultat mora biti >0. Gornju kontrolnu granicu za SS najbolje je odrediti korišćenjem normalne
2
log Box-Cox transformacije (l=0). Kontrolne granice za transformisane podatke su izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije. Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 100 obuhvata varijacije u performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Gornje kontrolne granice za transformisane podatke su reverzno transformisane da bi se dobilo 0,110 za front ravnoteže, 0,027 za front ispiranja WFI i 0,073 za front skladištenja (videti tabelu 3). Rezultati unutar granica će osigurati da model odgovara podacima kao i istorijskim rezultatima. Ako je rezultat izvan ovog opsega, verovatan je poseban uzrok.
Srednja vrednost:
[0111] Srednja vrednost je dodata kao druga mera tačnosti modela gama distribucije. Srednja vrednost predstavlja teoretski centar mase za front i uvek bi trebalo da bude blizu vrednosti zapremine kolone od 1 osim ako postoje drugi faktori u sistemu koji uzrokuju njegovo pomeranje, kao što je velika dodatna zapremina kolone ili interakcija između mobilne faze i smole. Srednje vrednosti za ravnotežni front, front ispiranja WFI i frontove skladištenja imaju nepravilnu distribuciju i nemaju koristi od transformacije. Preporučljivo je primeniti kontrolne granice od 0,80 do 1,20 CV za srednju vrednost za svaki od frontova (videti tabelu 3). Ovo je prikladno jer srednja vrednost nije mera performansi kolone, već se koristi kao provera da bi se osiguralo da je analiza bila odgovarajuća. Očekuje se da će ova ograničenja biti dovoljna da identifikuju značajna odstupanja od očekivanih rezultata proračuna. Strože granice kontrole dovele bi do nepotrebne osetljivosti za ovu proveru, za koju se vidi da varira sa svakim pakovanjem kolone.
Tabela 3. Preporučene HETP, SS i srednje kontrolne granice za prečišćavanje SPHP kolone tokom proizvodnje REMICADE® (infliksimaba)
Primer 4 – Primena prelazne analize gama distribucije za kvalifikaciju kolone Q2 hromatografskih kolona koje se koriste u proizvodnji REMICADE<®>(infliksimaba)
Pregled:
[0112] Ovaj primer opisuje primenu GDTA metode za korak prečišćavanja kolone sa sekundarnom anjonskom razmenom (Q2) koje se koristi proizvodnju REMICADE<®>(infliksimaba). Kolona Q2 je jonoizmenjivačke hromatografska kolona za anjone. Proces prečišćavanja uključuje tri prelazna fronta, tj. favnotežni front, front za skidanje i front za skladištenje, koji su odgovarajući za GDTA kako je ovde opisano.
[0113] GDTA je izveden na 68 frontova, uključujući 23 ravnotežna fronta i fronta za skidanje, i 22 fronta skladištenja. Analiza distribucije gama fronta je vršena istovremeno sa proizvodnjom i nije uticala na proizvodni proces. Sva proizvodnja, praćenje i kontrole su obavljeni korišćenjem aktuelnih, efikasnih procedura. Tokom prečišćavanja REMICADE<®>(infliksimaba) kolonskom hromatografijom, zabeleženi su provodljivost (tj. izlazni signal kolone) i protok eluenta (tj. akumulirani protok).
[0114] Pored primene GDTA na rad kolone u realnom vremenu, istorijski podaci za 324 prelazna fronta obrađeni tokom prethodne četiri godine takođe su prikupljeni i analizirani kako je ovde opisano. Skup podataka je uključivao 121 ravnotežni front, 124 fronta za skidanje i 79 frontova za skladištenje. Ovaj skup podataka je odabran da obezbedi ravnomernu distribuciju kroz životni vek kolona i predstavlja 10 pakovanja kolone.
[0115] GDTA za frontove kolone Q2 je izvedena kao što je opisano iznad u Primeru 1. Ova analiza je proizvela merenja za HETP, SS i srednju vrednost za svaki front. Kontrolne granice koje su izvedene za svaki od ova tri parametra na osnovu statističke evaluacije navedene u tabeli 4 ispod.
Kontrolne granice za Q2 kolonu:
HETP:
[0116] HETP je direktno povezan sa performansama kolone i na njega utiču i drugi faktori u sistemu koji mogu povećati disperziju. Rezultat mora biti >0. Kontrolne granice za HETP se najbolje određuju korišćenjem normalne log Box-Cox transformacije (l=0). Kontrolne granice za transformisane podatke su izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije. Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 100 obuhvata varijacije u performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Gornja i donja kontrolna granica se reverzno transformišu (npr.) da bi se odredile kontrolne granice za netransformisane podatke.
[0117] Dijagram vremenske serije za HETP rezultate i kontrolne granice svakog fronta je prikazan na Slici 36 (ravnotežni front), Slici 37 (front za skidanje), i Sl. 38 (front za skladištenje). Očekuje se da će rad unutar ovih granica proizvesti prihvatljive hromatografske performanse na osnovu ovog istorijskog pregleda. Vrednosti iznad gornjih kontrolnih granica mogu ukazivati na probleme sa protokom u koloni i treba ih dalje procenjivati. Vrednosti ispod donjih kontrolnih granica mogu ukazivati na grešku u proračunu.
Zbir kvadrata (SS):
[0118] SS je mera koliko dobro model gama distribucije odgovara podacima. Ova mera se koristi da bi se osiguralo da HETP vrednosti izračunate korišćenjem GDTA metode predstavljaju podatke procesa. Ne postoji donja granica i rezultat mora biti >0. Gornju kontrolnu granicu za SS najbolje je odrediti korišćenjem normalne log Box-Cox transformacije (l=0) Kontrolni dijagrami pokazuju kontrolne granice za transformisane podatke izračunate pomoću Minitab koristeći srednje /- 3 standardne devijacije. Standardna devijacija se utvrđuje na osnovu prosečnog raspona kretanja. Pokretni opseg od 100 je izabran da se uzme u obzir varijacije u performansama kolone tokom veka trajanja kolone. Standardna devijacija je određena iz zbirnih podataka za front skladištenja, pošto je metoda pokretnog opsega proizvela veću standardnu devijaciju. Kontrolne granice su prikazane u tabeli 4 ispod. Rezultati unutar granica će osigurati da model odgovara podacima kao i istorijskim rezultatima. Ako je rezultat izvan ovog opsega, uzrok tome je verovatno poseban.
[0119] Srednja vrednost je dodata kao druga mera tačnosti modela gama distribucije. Srednja vrednost predstavlja teoretski centar mase za front i uvek bi trebalo da bude blizu vrednosti zapremine kolone od 1 osim ako postoje drugi faktori u sistemu koji uzrokuju njegovo pomeranje, kao što je velika dodatna zapremina kolone ili interakcija između mobilne faze i smole. Srednje vrednosti za ravnotežni front, front skidanja i frontove skladištenja imaju nepravilnu distribuciju i nemaju koristi od transformacije. Preporučljivo je primeniti kontrolne granice od 0,80 do 1,20 CV za srednju vrednost za svaki od frontova (videti tabelu 4). Ovo je prikladno jer srednja vrednost nije mera performansi kolone, već se koristi kao provera da bi se osiguralo da je analiza bila odgovarajuća. Očekuje se da će ova ograničenja biti dovoljna da identifikuju značajna odstupanja od očekivanih rezultata proračuna. Strože granice kontrole dovele bi do nepotrebne osetljivosti za ovu proveru, za koju se vidi da varira sa svakim pakovanjem kolone.
Tabela 3. Preporučene HETP, SS i srednje kontrolne granice za prečišćavanje Q2 kolone tokom proizvodnje REMICADE® (infliksimaba)
Primer 5 – Proizvodni procesi za proizvodnju STELARA® (ustekinumab)
Pozadina
[0120] STELARA® (ustekinumab) je potpuno ljudsko G1 kapa monoklonsko antitelo koje se vezuje sa visokim afinitetom i specifičnošću za zajedničku p40 podjedinicu humanog interleukina (IL)-12 i IL-23 citokina.
Ustekinumab sadrži teški lanac aminokiselinske sekvence SEK ID BR:10 i laki lanac aminokiselinske sekvence SEK ID BR:11; sekvencu aminokiselina varijabilnog domena teškog lanca SEK ID BR:7 i sekvencu aminokiselina varijabilnog domena lakog lanca SEK ID BR:8; CDR sekvence aminokiselina teškog lanca SEK ID BR:1, SEK ID BR:2 i SEK ID BR:3; i CDR sekvence aminokiselina lakog lanca SEK ID BR:4, SEK ID BR:5 i SEK ID BR:6. Vezivanje ustekinumaba za podjedinicu IL-12/23p40 blokira vezivanje IL-12 ili IL-23 za IL-12Rb1 receptor na površini ćelija ubica i CD4+ T ćelija, inhibirajući IL-12- i IL-23- specifičnu intracelularnu signalizaciju i naknadnu aktivaciju i proizvodnju citokina. Abnormalna regulacija IL-12 i IL-23 povezana je sa višestrukim imunološki posredovanim bolestima.
[0121] Do danas, ustekinumab je dobio marketinško odobrenje širom sveta, uključujući zemlje u Severnoj Americi, Evropi, Južnoj Americi i azijsko-pacifičkom regionu, za lečenje odraslih pacijenata, uključujući one sa hroničnom umerenom do teškom plak psorijazom i/ili aktivnim psorijatičnim artritisom i Kronovom bolešću (CD). Ustekinumab se takođe procenjuje u 3. fazi studije za lečenje aktivnog sistemskog eritematoznog lupusa (SLE).
Sekvence
Primer sekvenci anti-IL-12/IL-23p40 antitela - STELARA® (ustekinumab)
[0122]
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona teškog lanca 1 (CDRH1): (SEK ID BR:1)
TYWLG
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona teškog lanca 2 (CDRH2): (SEK ID BR:2)
IMSPVDSDIRYSPSFQG
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona teškog lanca 3 (CDRH3): (SEK ID BR:3)
RRPGQGYFDF
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona lakog lanca 1 (CDRL1): (SEK ID BR:4)
RASQGISSWLA
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona lakog lanca 2 (CDRL2): (SEK ID BR:5)
AASSLQS
Aminokiselinska sekvenca anti-IL-12/IL-23p40 antitela koja određuje komplementarnost regiona lakog lanca 3 (CDRL3): (SEK ID BR:6)
QQYNIYPYT
Aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona teškog lanca anti-IL-12/IL-23p40 antitela (CDR-ovi podvučeni): (SEK ID BR:7)
Aminokiselinska sekvenca varijabilnog regiona lakog lanca anti-IL-12/IL-23p40 antitela (CDR-ovi podvučeni): (SEK ID BR:8)
Aminokiselinska sekvenca teškog lanca anti-IL-12/IL-23p40 antitela (CDR-ovi podvučeni): (SEK ID BR:10)
2
Aminokiselinska sekvenca lakog lanca anti-IL-12/IL-23p40 antitela (CDR-ovi podvučeni): (SEK ID BR:11)
Aminokiselinska sekvenca IL-12
[0123] Aminokiselinska sekvenca humanog interleukina (IL)-12 sa alfa i beta podjedinicama: (SEK ID BR:9)
Rekombinantne ekspresione kasete
[0124] Sekvenca nukleinske kiseline, na primer, cDNK ili genomska sekvenca koja kodira antitelo koje se koristi u postupku ovog pronalaska, može se koristiti za konstruisanje rekombinantne ekspresione kasete koja se može uvesti u najmanje jednu željenu ćeliju domaćina. Rekombinantna ekspresiona kaseta će tipično sadržati polinukleotid koji je operativno vezan za regulatorne sekvence inicijacije transkripcije koje ć e usmeravati transkripciju polinukleotida u namenjenu ćeliju domaćina. Za direktnu ekspresiju nukleinskih kiselina mogu se koristiti i heterologni i neheterologni (tj. endogeni) promoteri.
[0125] Izolovane nukleinske kiseline koje služe kao promoteri, pojačivači ili drugi elementi mogu se uvesti u odgovarajuću poziciju (uzvodno, nizvodno ili u intron) neheterolognog oblika polinukleotida ovog pronalaska tako da se poveća ili smanji regulacija ekspresije polinukleotida. Na primer, endogeni promoteri mogu biti izmenjeni in vivo ili in vitro mutacijom, brisanjem i/ili supstitucijom.
Vektori i ćelije domaćini
[0126] Polinukleotidi se opciono mogu spojiti za vektor koji sadrži selektabilni marker za razmnožavanje u domaćinu. Generalno, plazmidni vektor se uvodi u talog, kao što je precipitat kalcijum fosfata, ili u kompleks sa naelektrisanim lipidom. Ako je vektor virus, on se može upakovati in vitro korišćenjem odgovarajuće ćelijske linije za pakovanje, a zatim transducirati u ćelije domaćina.
[0127] DNK umetak treba da bude operativno povezan sa odgovarajućim promoterom. Ekspresioni konstrukti će dalje sadržati mesta za inicijaciju, terminaciju transkripcije i, u transkribovanom regionu, mesto vezivanja ribozoma za translaciju. Kodirajući deo zrelih transkripata eksprimiranih konstruktima će poželjno uključivati translaciju koja počinje na početku i terminacioni kodon (npr. UAA, UGA ili UAG) na odgovarajući način pozicioniran na kraju iRNK koja će biti translatovana, pri čemu se preferiraju UAA i UAG za ekspresiju ćelija sisara ili eukariota.
[0128] Ekspresioni vektori će poželjno, ali opciono, uključiti najmanje jedan selektabilni marker. Takvi markeri uključuju, npr., ali nisu ograničeni na, metotreksat (MTKS), dihidrofolat reduktazu (DHFR, US Pat. Nos.
4,399,216; 4,634,665; 4,656,134; 4,956,288; 5,149,1617,149,617,14,149,5,617,1,7,1,4,6,6,288; glutamin sintetaza (GS) (U.S. Patent Nos.: 5,122,464; 5,770,359; 5,827,739) rezistenciju na eukariotsku ćelijsku kulturu i gene otpornosti na tetraciklin ili ampicilin za kultivisanje u E. coli i drugim bakterijama ili prokariotima.
[0129] Odgovarajući medijumi kulture i uslovi za gore opisane ćelije domaćina su poznati u tehnici. Pogodni vektori će biti očigledni kvalifikovanom stručnjaku. Na uvođenje vektorske konstrukcije u ćeliju domaćina može uticati transfekcija kalcijum fosfatom, transfekcija posredovana DEAE-dekstranom, transfekcija posredovana katjonskim lipidima, elektroporacija, transdukcija, infekcija ili druge poznate metode. Takve metode su dobro poznate i dobro opisane u tehnici.
[0130] Najmanje jedno antitelo koje se koristi u postupku ovog pronalaska može biti eksprimirano u modifikovanom obliku, kao što je fuzioni protein, i može uključivati ne samo signale sekrecije, već i dodatne heterologne funkcionalne regione. Na primer, region dodatnih aminokiselina, posebno naelektrisanih amino kiselina, može se dodati na N-terminus antitela da bi se poboljšala stabilnost i postojanost u ćeliji domaćinu, tokom prečišćavanja ili tokom naknadnog rukovanja i skladištenja. Takođe, peptidni delovi se mogu dodati antitelu ovog pronalaska da bi se olakšalo prečišćavanje. Takvi regioni se mogu ukloniti pre finalne pripreme antitela ili najmanje jednog njegovog fragmenta. Takve metode su opisane u mnogim standardnim laboratorijskim priručnicima, a metode su dobro poznate i dobro opisane u tehnici.
[0131] Oni sa iskustvom u ovoj oblasti su upoznati sa brojnim ekspresionim sistemima dostupnim za ekspresiju nukleinske kiseline koja kodira protein koji se koristi u postupku ovog pronalaska. Alternativno, nukleinske kiseline se mogu eksprimirati u ć eliji domaćinu uključivanjem (manipulacijom) u ć eliji domaćinu koja sadrži endogenu DNK koja kodira antitelo. Takvi postupci su dobro poznati u tehnici, npr., kao što je opisano u US patentima br.: 5,580,734, 5,641,670, 5,733,746 i 5,733,761.
[0132] Ćelije korisne za proizvodnju antitela, određenih delova antitela ili njihove varijante, uključuju ćelije sisara. Ćelijski sistemi sisara će se često uzgajati u obliku monoslojeva ćelija, ali ćelije se takođe mogu prilagoditi da rastu u suspenziji, na primer, u posudama za mućkanje ili bioreaktorima. U struci je razvijen veliki broj pogodnih ćelijskih linija domaćina sposobnih da eksprimiraju intaktne glikozilovane proteine i uključuju, na primer, COS-1 (npr. ATCC® CRL1650), COS-7 (npr. ATCC® CRL-1651), HEK293 , BHK21 (npr. ATCC® CCL-10), BSC-1 (npr. ATCC® CCL-26), jajnik kineskog hrčka (CHO), Hep G2, P3X63Ag8.653, Sp2/0-Ag14, HeLa i slično, koji su lako dostupni u, na primer, American Tipe Culture Collection, Manassas, Va (vvv. atcc.org). Ćelije domaćini uključuju CHO ćelije i ćelije limfoidnog porekla, kao što su ćelije mijeloma i limfoma, na primer ćelije CHO-K1, ćelije P3X63Ag8.653 (ATCC® CRL-1580) i Sp2/0-Ag14 ćelije (ATCC® CRL-1581) .
[0133] Ekspresioni vektori za ove ćelije mogu uključiti jednu ili više od sledećih sekvenci za kontrolu ekspresije, kao što je, ali bez ograničenja, poreklo replikacije; promoter (npr. kasni ili rani SV40 promoteri, CMV promoter (U.S. Pat. br.: 5,168,062; 5,385,839), HSV tk promoter, pgk (fosfoglicerat kinaza) promoter, EF-1 alfa promoter U.S. Pat. br. .: 5,266,491), najmanje jedan promotor humanog imunoglobulina; mesta za pojačivače i/ili informacije za obradu, kao što su mesta vezivanja ribozoma, mesta spajanja RNK, mesta poliadenilacije (npr. SV40 veliko T Ag poli A adiciono mesto) i sekvence terminatora transkripcije. Druge ćelije korisne za proizvodnju nukleinskih kiselina ili proteina ovog pronalaska su poznate i/ili dostupne, na primer, iz kataloga American Tipe Culture Collection of Cell Lines and Hibridomas Catalog of Cell Lines and Hibridomas (vvv.atcc.org) ili iz drugih poznatih ili komercijalnih izvora.
[0134] Kada se koriste eukariotske ćelije domaćini, sekvence terminatora poliadenliacije ili transkripcije se tipično inkorporiraju u vektor. Primer terminatorske sekvence je sekvenca poliadenijacije iz gena goveđeg hormona rasta. Sekvence za tačno spajanje transkripta takođe mogu biti uključene. Primer sekvence spajanja je VP1 intron iz SV40 (Sprague, et al., "Expression of a recombinant DNA gene coding for the vesicular stomatitis virus nucleocapsid protein." J. Virol. 45:773-781 (1983)). Pored toga, sekvence gena za kontrolu replikacije u ćeliji domaćinu mogu biti ugrađene u vektor, kao što je poznato u tehnici.
CHO ćelijske linije
[0135] Uprkos dostupnosti nekoliko drugih ćelijskih linija sisara, većina rekombinantnih terapijskih proteina proizvedenih danas se pravi u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO) (Jayapal KP, et al. Recombinant protein therapeutics from CHO cells-20 years and counting. Chem Eng Prog. 2007; 103:40-47; Kunert R, Reinhart D. Advances in recombinant antibody manufacturing. Appl Microbiol Biotechnol. 2016;100(8):3451-61). Njihove prednosti uključuju, na primer, snažan rast kao adherentne ćelije ili u suspenziji, prilagodljivost medijumima bez seruma i hemijski definisanim medijima, visoku produktivnost i utvrđenu istoriju regulatornog odobrenja za proizvodnju terapeutskog rekombinantnog proteina. Oni su takođe veoma podložni genetskim modifikacijama, a metode za transfekciju ćelija, ekspresiju rekombinantnog proteina i selekciju klonova su dobro okarakterisane. CHO ćelije takođe mogu da obezbede post-translacione modifikacije kompatibilne sa ljudima. Kako se ovde koristi, "CHO ćelije" uključuju, ali nisu ograničene na, npr., CHO-DG44, CHO-Kl, CHO-M, CHO-S, CHO GS nokaut, i njihove modifikacije i derivate.
Kloniranje i ekspresija u CHO ćelijama
[0136] Jedan vektor koji se obično koristi za ekspresiju u CHO ćelijama je pC4. Plazmid pC4 je derivat plazmida pSV2-dhfr (ATCC® 37146). Plazmid sadrži mišji DHFR gen pod kontrolom ranog promotera SV40. Ćelije jajnika kineskog hrčka ili druge ć elije koje nemaju dihidrofolatnu aktivnost koje su transfektovane ovim plazmidima mogu se odabrati uzgajanjem ćelija u selektivnom medijumu (npr. alfa minus MEM, Life Technologies,
2
Gaithersburg, MD) sa dodatkom hemoterapeutskog sredstva metotreksata. Amplifikacija DHFR gena u ćelijama otpornim na metotreksat (MTKS) je dobro dokumentovana (videti, na primer, F. W. Alt, et al., "Selective multiplication of dihydrofolate reductase genes in methotrexate-resistant variants of cultured murine cells." J. Biol. Chem. 253:1357-1370 (1978); and M. J. Page and M. A. Sydenham, "High level expression of the humanized monoclonal antibody Campath-1H in Chinese hamster ovary cells." Biotechnology 9:64-68 (1991)). Ćelije uzgajane u rastućim koncentracijama MTKS razvijaju otpornost na lek prekomernom proizvodnjom ciljnog enzima, DHFR, kao rezultat amplifikacije DHFR gena. Ako je drugi gen vezan za DHFR gen, on je obično koamplifikovan i prekomerno eksprimiran. Poznato je u tehnici da se ovaj pristup može koristiti za razvoj ćelijskih linija koje nose više od 1000 kopija amplifikovanog(ih) gena(a). Nakon toga, kada se metotreksat povuče, dobijaju se ćelijske linije koje sadrže amplifikovani gen integrisan u jedan ili više hromozoma ćelije domaćina.
[0137] Plazmid pC4 sadrži za ekspresiju gena od interesa snažan promoter dugog terminalnog ponavljanja (LTR) virusa Rous sarkoma (Cullen, et al., "Functional analysis of the transcription control region located within the avian retroviral long terminal repeat." Mol. Cell. Biol. 5:438-447 (1985)) plus fragment izolovan iz pojačivača neposrednog ranog gena humanog citomegalovirusa (CMV) (Boshart, et al., "A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human cytomegalovirus." Cell 41:521-530 (1985)). Nizvodno od promotera su BamHI, XbaI i Asp718 mesta cepanja restrikcijskih enzima koja omogućavaju integraciju gena. Iza ovih mesta za kloniranje, plazmid sadrži 3' intron i mesto poliadenilacije gena za preproinsulin pacova. Drugi promotori visoke efikasnosti se takođe mogu koristiti za ekspresiju, na primer, humani beta-aktin promoter, SV40 rani ili kasni promoteri ili dugi terminalni ponavljači iz drugih retrovirusa, na primer, HIV i HTLVI. Clontech-ovi Tet-Off i Tet-On sistemi za ekspresiju gena i slični sistemi se takođe mogu koristiti za ekspresiju proteina na regulisan način u ćelijama sisara (M. Gossen, and H. Bujard, "Tight control of gene expression in mammalian cells by tetracycline-responsive promoters." Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5547-5551 (1992)). Za poliadenilaciju mRNK mogu se koristiti i drugi signali, na primer, iz humanog hormona rasta ili globinskih gena. Stabilne ćelijske linije koje nose gen od interesa integrisan u hromozome takođe mogu biti odabrane nakon ko-transfekcije sa selektivnim markerom kao š to je gpt, G418 ili higromicin. Poželjno je koristiti više od jednog selektabilnog markera na početku, na primer, G418 plus metotreksat.
Opšte metode prečišćavanja
[0138] Anti-IL-12/IL-23p40 ili IL-23 antitelo može da se dobije i prečisti iz rekombinantnih ćelijskih kultura dobro poznatim metodama uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, prečišćavanje proteina A, taloženje amonijum sulfatom ili etanolom, ekstrakciju kiselinom, jonoizmenjvačku hromatografiju, hromatografiju na fosfocelulozi, hromatografiju zasnovanoj na hidrofobnim interakcijama, afinitetnu hromatografiju, hromatografiju sa hidroksilapatitom i hromatografiju sa lektinom. Tečna hromatografija visokih performansi ("HPLC") takođe se može koristiti za prečišćavanje.
[0139] Kako se ovde koristi, termini „antitelo“ ili „antitela“ obuhvataju molekule biosličnih antitela odobrene u skladu sa Zakonom o konkurenciji i inovacijama bioloških proizvoda iz 2009. (BPCI Act) i sličnim zakonima i propisima širom sveta. Prema BPCI zakonu, može se pokazati da je antitelo bioslično ako podaci pokazuju da je „veoma slično” referentnom proizvodu, bez obzira na manje razlike u klinički neaktivnim komponentama i da se „očekuje” da proizvede isti klinički rezultat kao referentni proizvod u smislu sigurnosti, č istoće i potencije (R. Dolinar, F. Lavernia, and S. Edelman. "A GUIDE TO FOLLOW-ON BIOLOGICS AND BIOSIMILARS WITH A FOCUS ON INSULIN." Endocrine Practice: February 2018, Vol. 24, No. 2, pp. 195-204). Ovi molekuli biosličnih antitela dobijaju skraćeni put za odobrenje, pri čemu se podnosilac zahteva oslanja na kliničke podatke inovatora referentnog proizvoda da bi obezbedio regulatorno odobrenje. U poređenju sa originalnim inovatorskim referentnim antitelom koje je odobrila FDA na osnovu uspešnih kliničkih ispitivanja, molekul biosličnog antitela se ovde naziva „biološki lek koji sledi“. Kao što je ovde predstavljeno, STELARA<®>(ustekinumab) je originalnoinovatorsko referentno anti-IL-12/23p40 antitelo koje je odobrila FDA na osnovu uspešnih kliničkih ispitivanja. Ustekinumab je u prodaji u Sjedinjenim Državama od 2009. godine.
[0140] Kako se ovde koristi, termin "fragment koji se vezuje za antigen" odnosi se na fragment antitela kao što je, na primer, diatelo, Fab, Fab', F(ab')2, Fv fragment, Fv fragment stabilizovan disulfidom (dsFv), a (dsFv)2, bispecifični dsFv (dsFv-dsFv'), disulfidno stabilizovano diatelo (ds diabody), jednolančani molekul antitela (scFv), jednodomensko antitelo (sdab) i scFv dimer (bivalentno dijatelo), multispecifično antitelo formirano od dela antitela koji sadrži jedan ili više CDR-ova, jednodomensko antitelo sa kamelizom, nanotelo, antitelo domena, antitelo bivalentnog domena ili bilo koji drugi fragment antitela koji se vezuje za antigen, ali ne sadrži kompletnu strukturu antitela. Fragment koji se vezuje za antigen je sposoban da se veže za isti antigen za koji se vezuje roditeljsko antitelo ili roditeljski fragment antitela. Prema posebnim izvođenjima, fragment koji se vezuje za antigen sadrži varijabilni region lakog lanca, konstantni region lakog lanca i Fd segment (tj. deo teškog lanca koji je uključen u Fab fragment). Prema drugim posebnim izvođenjima, fragment koji se vezuje za antigen sadrži Fab i F(ab’).
2
Pregled procesa proizvodnje
[0141] STELARA<®>(ustekinumab) se proizvodi u 10-stepenom procesu koji uključuje kontinuiranu perfuzionu ćelijsku kulturu nakon čega sledi prečišćavanje. Pregled procesa proizvodnje je dat na Sl. 39.
[0142] Kako se ovde koristi, termini "kultura", "kultivisanje", "kultivisan" i "ćelijska kultura" odnose se na ćelijsku populaciju koja je suspendovana u medijumu pod uslovima pogodnim za preživljavanje i/ili rast ćelijske populacije. Kao što će biti jasno iz konteksta stručnjacima u ovoj oblasti, ovi termini kako se ovde koriste takođe se odnose na kombinaciju koja sadrži ćelijsku populaciju i medijum u kome je populacija suspendovana. Ćelijska kultura uključuje, na primer, ćelije uzgajane serijskim, hranjene šaržnim ili perfuzionim metodama ćelijske kulture i slično. Ćelijska kultura može biti kultura ćelija sisara.
[0143] Ćelijske linije uključuju ćelijske linije sisara uključujući, ali ne ograničavajući se na, ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO ćelije), ćelije ljudskog embriona bubrega (HEK ćelije), ćelije bubrega beba hrčaka (BHK ćelije), ćelije mijeloma miša (npr. NS0 ćelije i Sp2 /0 ćelije), i ljudske retinalne ćelije (npr. ćelije PER.C6).
[0144] Kako se ovde koristi, termini „hemijski definisani medijum”, „hemijski definisani medijumi”, „hemijski definisani hibridomski medijum” ili „hemijski definisani hibridomski medijum” odnose se na sintetički medijum za rast u kome su poznati identitet i koncentracija svih komponenti. Hemijski definisani medijumi ne sadrže bakterijske, kvasne, životinjske ili biljne ekstrakte, životinjski serum ili plazmu, iako mogu, ali ne moraju da sadrže pojedinačne komponente biljnog ili ž ivotinjskog porekla (npr. proteine, polipeptide, itd.). Hemijski definisani medijumi mogu sadržati neorganske soli kao što su fosfati, sulfati i slične soli potrebne za podržavanje rasta. Izvor ugljenika je definisan i obično je šećer kao što je glukoza, laktoza, galaktoza i slično, ili druga jedinjenja kao što su glicerol, laktat, acetat i slično. Dok određeni hemijski definisani medijumi takođe koriste fosfatne soli kao pufer, mogu se koristiti i drugi puferi kao što su citrat, trietanolamin i slično. Primeri komercijalno dostupnih hemijski definisanih medijuma uključuju, ali nisu ograničeni na, ThermoFisher’s CD Hybridoma Medium i CD Hibridoma AGT™ Medium, različite Ham’s Nutrient Mixture (Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc (DME) medijume (Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc), Ham’s Nutrient Mixture (Sigma-Aldrich Co; SAFC Biosciences, Inc), njihove kombinacije i slično. Postupci za pripremu hemijski definisanih medijuma su poznati u tehnici, na primer u U.S. br. 6,171,825 i 6,936,441, VO 2007/077217 i U.S. Pat. App. Pub. Nos. 2008/0009040 and 2007/0212770.
[0145] Termin "bioreaktor" kako se ovde koristi odnosi se na bilo koju posudu korisnu za rast ćelijske kulture. Bioreaktor može biti bilo koje veličine sve dok je koristan za kultivisanje ćelija. Takve ćelije mogu biti ćelije sisara. Tipično, bioreaktor će biti najmanje 1 litar i može biti 10, 100, 250, 500, 1.000, 2.500, 5.000, 8.000, 10.000, 12.000 litara ili više, ili bilo koja zapremina između. Unutrašnji uslovi bioreaktora, uključujući, ali ne ograničavajući se na pH i temperaturu, opciono se kontrolišu tokom perioda kultivisanja. Bioreaktor može biti sastavljen od bilo kog materijala koji je pogodan za držanje kultura ćelija sisara suspendovanih u medijumu u uslovima kulture, uključujući staklo, plastiku ili metal. Termin "proizvodni bioreaktor" kako se ovde koristi odnosi se na finalni bioreaktor koji se koristi u proizvodnji polipeptida ili glikoproteina od interesa. Zapremina proizvodnog bioreaktora je obično najmanje 500 litara i može biti 1.000, 2.500, 5.000, 8.000, 10.000, 12.000 litara ili više, ili bilo koja zapremina između. Stručnjak sa iskustvom u tehnici ove oblasti će biti svestan i moći će da izabere odgovarajuće bioreaktore za upotrebu u primeni ovog pronalaska.
[0146] Prekultura, ekspanzija i proizvodnja ustekinumaba se izvode u Fazi 1 i Fazi 2. U Fazi 1, predkultura se inicira iz jedne ili više bočica radne banke ćelija transficiranih Sp2/0 ćelija koje eksprimiraju HC i LC sekvence ustekinumaba i ekspandira u posude za kultivisanje, jedokratne kese za kultivisanje i bioreaktor za zasejavanje od 100 L. Ćelije se kultivišu dok se ne dobiju gustina ćelija i zapremina potrebni za inokulaciju proizvodnog bioreaktora od 500 L. U fazi 2, ćelijska kultura se perfuzira u proizvodnom bioreaktoru od 500 L korišćenjem sistema za zadržavanje ć elija pomoću filtera sa šupljim vlaknima sa naizmeničnim tangencijalnim protokom (ATF). Permeat ćelijske kulture se sakuplja iz ATF sistema dok se ćelije zadržavaju u bioreaktoru i kultura se dopunjava svežim medijumom. Prikupljene ćelije iz jednog ili više proizvodnih bioreaktora od 500 L može se kombinovati u Fazi 3. Prikupljene ćelije se prečišćavaju korišćenjem afinitetne hromatografije na smoli MabSelect Protein A. Dobijeni eluat direktnog hvatanja proizvoda (DPC) se zamrzava do dalje obrade.
[0147] Prečišćavanje ustekinumaba iz DPC-a se izvodi u Fazi 4 do Faze 8 pomoću koraka jonoizmenjivačke hromatografije i drugih koraka za inaktivaciju ili uklanjanje potencijalne kontaminacije virusom (tretman rastvaračem/deterdžentom [S/D] i filtracija za uklanjanje virusa). DPC eluati se odmrzavaju, skupljaju i filtriraju u Fazi 4 i inkubiraju sa tretmanom Tri-n-butil fosfatom (TNBP) i polisorbatom 80 S/D u Fazi 5 da bi se inaktivirali svi prisutni virusi sa omotačem lipida. TNBP i polisorbat 80 reagensi, agregati i nečistoće su uklonjeni iz ustekinumaba u Fazi 6, korišćenjem jonoizmenjivačke hromazografije sa SPKSL<®>sefaroznon smolom za izmenukatjona. Ustekinumab se dalje prečišćava korišćenjem jonoizmenjivačke hromazografije QXL<®>sefarozne smole za izmenu anjona u Fazi 7 da bi se uklonili DNK, virusi i nečistoće. U fazi 8, prečišćeni ustekinumab se razblaži i filtrira kroz filter za zadržavanje virusa (NFP®).
[0148] Priprema ustekinumaba, unapred formulisane količine ustekinumaba (PFB) i formulisane količine ustekinumaba (FB) se izvodi u fazama 9 i 10, respektivno. U fazi 9, korak ultrafiltracije koncentriše ustekinumab,
2
a korak dijafiltracije dodaje ekscipijente formulacije i uklanja soli pufera u procesu. Polisorbat 80 se dodaje u ustekinumab PFB u fazi 10 da bi se dobio FB. FB se filtrira u polikarbonatne posude za zamrznuto skladištenje. Zamrznuti FB se pakuje u izolovane posude sa suvim ledom za transport do mesta proizvodnje leka.
Detaljan opis procesa proizvodnje velikih razmera
Faza 1 – Predkultura i ekspanzija
[0149] Prva faza u proizvodnji ustekinumaba je iniciranje predkulture iz bočice radne banke ćelija (VCB) transficiranih Sp2/0 ćelija koje eksprimiraju HC i LC sekvence ustekinumaba i ekspandiranje u posude za kultivisanje, jedokratne kese za kultivisanje i bioreaktor za zasejavanje od 100 L. Ćelije se kultivišu dok se ne dobiju gustina ćelija i zapremina potrebni za inokulaciju proizvodnog bioreaktora od 500 L.
Procedura proizvodnje
[0150] Jedna ili više kriokonzerviranih bočica VCB se odmrzavaju i razblažuju sa CD (hemijski definisanim) hibridomskim medijumom sa dodatkom 6 mM L-glutamina, 0,5 mg/L mikofenolne kiseline, 2,5 mg/L hipoksantina i 50 mg/L ksantina (CDH-A ). Vijabilnost kulture mora biti ≥ 45%. Ćelije su dalje razblažene sa CDH-A u posudi za kulturu do gustine zasejavanja od 0,2 do 0,5x10<6>vitalnih ćelija (VC)/mL. Predkultura se održava u vlažnom CO2inkubatoru, sa temperaturom, koncentracijom CO2i mešanjem kontrolisanim unutar opsega definisanih u zapisu serije. Predkultura se inkubira ≤ 3 dana dok se ne dobije minimalna gustina ćelija od ≥ 0,6x10<6>VC/mL i održivost kulture ≥ 50%. Predkultura se proširuje sekvencijalno u seriju posuda za kultivisanje, a zatim u jedokratne za kultivisanje kao mehanizam za povećanje za inokulaciju bioreaktora za zasejavanje od 100 L. Tokom faze ekspanzije kulture, svaki korak inkubacije traje ≤ 3 dana da bi se postigli uslovi pasaža, koji zahtevaju gustinu ćelija od ≥ 0,6x10<6>VC/mL i održivost kulture ≥ 80%. Gustina zasijavanja za svaki pasaž je 0,2 do 0,5x10<6>VC/mL u posudama za kultivisanje i 0,2 do 0,6x10<6>VC/mL u jedokratnim kesama za kultivisanje. Svaki pasaž se uzorkuje za gustinu održivih ćelija (VCD), održivost kulture i mikroskopski pregled. Pre inokulacije bioreaktora za zasejavanje od 100 L, predkultura se uzorkuje za bioopterećenje.
[0151] Ekspanzije predkulture mogu se održavati najviše 30 dana nakon odmrzavanja. Predkulture koje se ne koriste u roku od 30 dana se odbacuju. Rezervne predkulture, proširene kao što je gore opisano i koje podležu istim nadzorom u procesu, kontrolnim testovima i parametrima procesa kao primarne predkulture, mogu se održavati i koristiti za inokulaciju drugog bioreaktora za zasejavanje od 100 L po potrebi.
[0152] Kada predkultura ispuni kriterijume inokuluma, sadržaj kese(a) za kultivisanje se prenosi u bioreaktor za zasejavanje od 100 L koji sadrži CDH-A da bi se ciljala gustina zasejavanja od ≥ 0,3x10<6>VC/mL. PH, temperatura i koncentracija rastvorenog kiseonika kulture bioreaktora za zasejavanje se kontrolišu unutar opsega definisanih u zapisu serije. Kultura se širi dok se ne dobije gustina ćelija od ≥ 1,5x10<6>VC/mL i vitalnost kulture od ≥ 80%. Kultura se uzorkuje na VCD, održivost kulture i mikroskopsko ispitivanje tokom procesa bioreaktora za zasejavanje. Pre inokulacije proizvodnog bioreaktora od 500 L, kultura se uzorkuje za bioopterećenje.
[0153] Kada VCD kulture bioreaktora za zasejavanje dostigne ≥ 1,5x10<6>VC/mL, kultura se može koristiti za inokulaciju proizvodnog bioreaktora od 500 L. Alternativno, deo kulture se može uzeti iz bioreaktora za zasejavanje od 100 L, a preostala kultura se razblaži svežom podlogom. Nakon ovog procesa „izvlačenje i punjenje“, kulturi se dozvoljava da se proširi do dovoljne gustine ćelija za inokulaciju proizvodnog bioreaktora od 500 L. Maksimalno trajanje bioreaktorske kulture semena od 100 L je 9 dana nakon inokulacije.
Faza 2 - Proizvodnja bioreaktora
[0154] U fazi 2, ćelijska kultura se kontinuirano perfuzira u proizvodnom bioreaktoru od 500 L korišćenjem sistema za zadržavanje ć elija pomoću filtera sa šupljim vlaknima sa naizmeničnim tangencijalnim protokom (ATF). Permeat ćelijske kulture se sakuplja iz ATF sistema dok se ćelije vraćaju u bioreaktor, a kultura se dopunjava svežim medijumom.
Procedura proizvodnje
[0155] Inokulacija proizvodnog bioreaktora od 500 L se vrši prebacivanjem sadržaja bioreaktora za zasejavanje od 100 L u proizvodni bioreaktor od 500 L koji sadrži CD (hemijski definisan) medijum hibridoma sa dodatkom 6 mM L-glutamina, 0,5 mg/L mikofenolne kiseline, 2. mg/L hipoksantina i 50 mg/L ksantina (CDH-A). Preneti volumen mora biti dovoljan da cilja gustinu zasejavanja od ≥ 0,3x10<6>živih ćelija (VC)/mL. Kultura se održava na temperaturi od 34 do 38°C, pH od 6,8 do 7,6 i koncentraciji rastvorenog kiseonika (DO) od 1 do 100%.
[0156] Pokreće se kontinuirana perfuzija, a kultura se izvlači iz bioreaktora od 500 L u ATF sistem da bi se ćelije odvojile od permeata. Permeat se filtrira kroz ATF filter od 0,2 mm i sakuplja se u vidu prikupljenih ćelija u kontejnerima za bioproces (BPC). Ćelije se vraćaju u bioreaktor, a svež CDH-A se isporučuje za održavanje
2
konstantne zapremine kulture. Gustina održivih ć elija (VCD), održivost kulture, pH, DO (koncentracija rastvorenog kiseonika), temperatura i sadržaj imunoglobulina G (IgG) se prate tokom proizvodnog ciklusa. Brzina perfuzije se postepeno povećava proporcionalno VCD dok se ne postigne ciljna brzina od približno jedne zapremine bioreaktora dnevno. Brzina perfuzije se kontroliše, da ne prelazi 1,20 zapremine bioreaktora dnevno. Zadržavanje ATF sistema se prati kako bi se olakšalo gašenje ATF filtera pre nego što zadržavanje IgG u filteru pređe 50%.
[0157] Kada VCD u bioreaktoru od 500 L dostigne 8,0x10<6>VC/mL ili 10. dana, šta god nastupi prvo, ciljni pH se snižava sa 7,2 na 7,1. Uklanjanje biomase počinje ili 20. dana ili kada se dostigne VCD od 12,0x10<6>VC/mL, šta god nastupi prvo. Biomasa se uklanja iz proizvodnog bioreaktora od 500 L u BPC brzinom do 20% zapremine bioreaktora dnevno. Sve prikupljene ćelije se uzorkuju za bioopterećenje.
[0158] Kontinuirani rad perfuzione ćelijske kulture u proizvodnom bioreaktoru od 500 L nastavlja se do 46 dana nakon inokulacije. Na kraju proizvodnje, kultura se uzorkuje za testiranje na mikoplazmu i slučajne viruse. Prikupljene ćelije se mogu čuvati ≤ 30 dana na temperaturi od 2 do 8°C nakon isključivanja iz bioreaktora.
Faza 3 – Direktno hvatanje proizvoda (DPC)
[0159] U fazi 3, rikupljene ćelije iz jednog ili više proizvodnih bioreaktora od 500 L se pročišćava i prečišćava pomoću MabSelect™ (GE Healthcare Bio-Sciences, Pittsburgh, PA, USA) afinitetne hromatografske kolone za protein A koristeći automatizovani hromatografski klizač. Ustekinumab se hvata iz prikupljenih ćelija, a nečistoće ćelijske kulture, uključujući nečistoće ćelije domaćina, se uklanjaju. Dobijeni DPC eluat je zamrznut do dalje obrade.
Priprema i regeneracija hromatografske kolone za protein A
[0160] Pre prikupljanja prinosa, upakovana MabSelect™ afinitetna hromatografska kolona za Protein A je uravnotežena sa 50 mM natrijum fosfata, 150 mM NaCl, 0,1% polisorbatom 80, puferom pH 7,3 (pufer za ravnotežu). Provodljivost i pH se prate kako bi se osiguralo da je kolona potpuno uravnotežena. Uzimaju se uzorci efluenta kolone i prate se da bi se osigurala mikrobna kontrola. Nakon upotrebe, kolona se očisti, a zatim ispere i skladišti, ako je primenljivo, u odgovarajućim uslovima skladištenja.
Procedura proizvodnje
[0161] Prikupljene ćelije se uzorkuju na sadržaj bioopterećenja, endotoksina i imunoglobulina G. 0,1 M etilendiamintetraektičke kiseline (EDTA), pufer pH 8,0 se dodaje u prikupljene ćelije da bi se postigla konačna koncentracija od 5 do 30 mM EDTA. Prikupljene ćelije se filtriraju 0,2 mm i dodaju na hromatografsku kolonu za Protein A pri odnosu opterećenja od 14 do 41 g/L i brzini protoka od 300 do 500 cm/h. Kolona se ispere puferom za ekvilibraciju pri brzini protoka od 300 do 500 cm/h dok se UV apsorbanca na 280 nm (A280) ne vrati na ≤ 100 mAU/mm, a zatim se ispere sa najmanje dve dodatne zapremine kolone (CV) ravnotežnog pufera. Vezani ustekinumab je ispran sa najmanje 4,5 CV 0,1 M natrijum citrata, pH 5,0 pufera pri brzini protoka od 300 do 500 cm/h.
[0162] Ustekinumab se eluira upotrebom 0,1 M citrata, pH 3,5 pri brzini protoka od 300 do 500 cm/h.<Sakupljanje eluiranog proizvoda počinje pri rastućem A>280-signalu od ≥ 50 mAU/mm dužine putanje i zaustavljase na opadajućem A280-signalu od ≥ 50 mAU/mm dužine putanje.
[0163] Nakon sakupljanja, pH DPC eluata je podešen na 5,8 do 6,2 dodavanjem 1,0 M Trinatrijumcitratnog pufera i/ili 0,1 M Trinatrijumcitratnog pufera po potrebi. Tokom podešavanja pH, DPC eluat se meša da bi se obezbedila homogenost rastvora. DPC eluat sa podešenim pH se uzorkuje za bioopterećenje pre filtracije.
[0164] DPC eluat sa podešenim pH je filtriran korišćenjem završnog filtera od 0,2 mm. DPC eluat se deli u polikarbonatne posude. Filtrirani DPC eluat se uzima za analizu sadržaja monomera, bioopterećenja, endotoksina i koncentracije proteina (iz čega se izračunava prinos koraka i očekuje se da bude ≥ 60%). Filtrirani DPC eluat se može držati kumulativno ≤ 48 sati na sobnoj temperaturi i ≤ 240 sati na 2 do 8°C pre skladištenja na ≤ -40°C. DPC eluat se može čuvati zamrznut.
Faza 4 – Odmrzavanje i sakupljanje eluata direktnog hvatanja proizvoda (DPC).
[0165] U fazi 4, DPC eluati se odmrzavaju i filtriraju pre inaktivacije virusa rastvaračem/deterdžentom.
Procedura proizvodnje
[0166] Zamrznuti DPC eluati se odmrzavaju na sobnoj temperaturi. Odmrzavanje je završeno kada eluati ne sadrže led; odmrzavanje ne sme biti duže od 120 sati. Odmrznuti eluati se sakupe i 0,2 mm filtriraju u zatvoreni
2
sud da se dobije 2,7 do 5,4 kg proteina. Filtrirani eluat se meša da bi se obezbedila homogenost rastvora. Uzimaju se uzorci za koncentraciju proteina, endotoksin, bioopterećenje i pH. Izmerena je koncentracija proteina od 4,5 do 59 g/L. pH se zatim podešava na 5,5 do 6,5 dodavanjem ili 1,0 M Tris ili 1,0 M limunske kiseline, po potrebi. Sakupljeni DPC eluati mogu da se čuvaju do 48 sati na sobnoj temperaturi pre dalje obrade u Fazi 5.
Faza 5 – Tretman rastvorom/deterdžentom (S/D) objedinjenih eluata nakon direktnog hvatanja proizvoda (DPC)
[0167] U fazi 5, prikupljeni DPC eluati se inkubiraju sa Tri-n-butil fosfatom (TNBP) i polisorbatom 80 (tretman rastvaračem/deterdžentom [S/D]) da bi se inaktivirali potencijalno prisutni virusi sa omotačem lipida.
Procedura proizvodnje
[0168] S/D osnovni rastvor koji sadrži 2% TNBP/10% polisorbata 80 (v/v) se prenosi u posudu koja sadrži objedinjene DPC eluate u odnosu od 0,08 do 0,12 (v/v) da bi se dobila konačna koncentracija od 0,2% TNBP/1% polisorbat 80 (v/v). Rastvor se meša da bi se obezbedila homogenost rastvora, a zatim se prebacuje u posudu za inaktivaciju. Reagensi za tretman ustekinumaba i S/D se inkubiraju na ≥ 15°C uz kontinuirano mešanje. Inaktivacija počinje kada se ustekinumab tretiran S/D potpuno prenese u posudu za inaktivaciju i završava kada započne punjenje jonoizmenjivačke hromatografske kolone za katjone u Fazi 6. Ukupno vreme inaktivacije je ≥ 60 minuta. Ukupno vreme od početka dodavanja S/D reagensa do kraja faze punjenja kolone u Fazi 6 je ≤ 36 sati.
Faza 6 – Katjonska jonoizmenjvačka hromatografija
[0169] U fazi 6, ustekinumab tretiran rastvaračem/deterdžentom (S/D) je vezan za SP Sepharose XL (GE Healthcare Bio-Sciences, Pittsburgh, PA, USA) jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za katjone koja je povezana sa automatizovanim hromatografskim klizačem. Tri-n-butil fosfat (TNBP) i polisorbat 80 reagensi, agregati i nečistoće se uklanjaju.
Priprema i regeneracija katjonske jonoizmenjvačke hromatografske kolone
[0170] Pre upotrebe, upakovana SP Sepharose XL katjonska jonoizmenjvačka hromatografska kolona je dovedena u ravnotežno stanje sa 30 mM natrijum fosfata, pH 6,5 pufera (ravnotežni pufer). Provodljivost i pH se prate kako bi se osiguralo da je kolona potpuno uravnotežena. Uzimaju se uzorci efluenta kolone i prate se da bi se osigurala mikrobna kontrola. Posle upotrebe, kolona se uklanja od zaostalih proteina, regeneriše i očisti i čuva u odgovarajućem rastvoru za skladištenje.
Procedura proizvodnje
[0171] Ustekinumab tretiran S/D se razblaži u vodi da bi se održala provodljivost na 2,4 do 3,4 µs/cm i injektuje se u ravnotežnu katjonsku jonoizmenjvačku hromatografsku SP Sepharose XL kolonu. Sve brzine protoka punjenja, ispiranja i eluiranja su 100 do 300 cm/h. Odnos opterećenja proizvoda i smole je 45,5 do 90,9 g ustekinumaba/L smole. Kolona je isprana sa ≥ 3 zapremine kolone pufera za ekvilibraciju. Ustekinumab se zatim eluira iz katjonske jonoizmenjvačke hromatografske kolone korišćenjem 30 mM natrijum fosfata, 50 mM natrijum hlorida, pufera pH 6,5. Sakupljanje proizvoda počinje kada UV apsorbanca efluenta kolone na 280 nm (A280) poraste na minimum 25 mAU/mm. A280pik se prati, a sakupljanje se prekida kada se efluent smanji na najmanje 150 mAU/mm. Eluirani proizvod se uzorkuje za analizu bioopterećenja.
[0172] Eluat se filtrira kroz filter od 0,2 mm u zatvoreni sud. Ustekinumab prečišćen izmenom katjona se zatim meša i uzimaju se uzorci za bioopterećenje i endotoksin. Prinos se prati i očekuje se da bude ≥ 85%. Ustekinumab se može držati na sobnoj temperaturi do 72 sata i na 2 do 8°C do 7 dana pre dalje obrade.
Faza 7 – Anjonska jonoizmenjvačka hromatografija
[0173] U fazi 7, ustekinumab se dalje prečišćava pomoću Q Sepharose™ XL (GE Healthcare Bio-Sciences, Pittsburgh, PA, USA) jonoizmenjivačke hromatografske kolone za anjone koja je povezana sa automatizovanim hromatografskim klizačem. Ustekinumab protiče kroz smolu dok se DNK, druge nečistoće i virusi zadržavaju.
Priprema i regeneracija anjonske jonoizmenjvačke hromatografske kolone
[0174] Regeneracija pre upotrebe, upakovana Q Sepharose™ XL jonoizmenjivačka hromatografska kolona za anjone je uravnotežena sa 50 mM Tris, 50 mM natrijum hlorida, pH 8,0 (ravnotežni pufer). Provodljivost i pH se prate kako bi se osiguralo da je kolona potpuno uravnotežena. Uzimaju se uzorci efluenta kolone i prate se da bi se osigurala mikrobna kontrola. Nakon upotrebe, kolona se uklanja od zaostalih proteina, regeneriše, očisti i čuva u odgovarajućem rastvoru.
Procedura proizvodnje
[0175] Pre punjenja, pH eluata katjonske izmene se podešava dodavanjem 1,0 M Tris ili 1,0 M limunske kiseline po potrebi dok pH ne bude 7,5 do 8,0. Eluat se meša da bi se obezbedila homogenost rastvora. Ustekinumab pri podešenoj pH se dodaje na Q Sepharose™ XL jonoizmenjivačku hromatografsku kolonu za anjone pri brzini protoka od 50 do 250 cm/h. Odnos opterećenja proizvoda i smole je 45,5 do 136,4 g ustekinumaba/L smole.
[0176] Ustekinumab protiče kroz smolu bez vezivanja i sakuplja se kada UV apsorbanca na 280 nm (A280) poraste na minimum od 30 mAU/mm. Nakon što je ustekinumab napunjen, kolona je isprana puferom za ekvilibraciju pri brzini protoka od 50 do 250 cm/h. A280pik se prati, a sakupljanje se prekida kada se efluent smanji na najmanje 50 mAU/mm. Eluirani proizvod se uzorkuje za analizu bioopterećenja.
[0177] Ustekinumab se filtrira kroz filter od 0,2 mm u zatvorenu posudu, meša i uzima uzorke na bioopterećenje i endotoksin. Prinos se prati i očekuje se da bude ≥ 85%. Ustekinumab prečišćen anjonskom izmenom može da se drži na sobnoj temperaturi do 72 sata ili na 2 do 8°C do 7 dana pre dalje obrade u Fazi 8.
Faza 8 – Filtracija za uklanjanje virusa
[0178] U fazi 8, ustekinumab prečišćen anjonskom izmenom je razblažen sa 50 mM Tris, 50 mM NaCl, puferom pH 8,0 i filtriran kroz filter za zadržavanje virusa (NFP<®>) da bi se uklonili svi potencijalno prisutni virusi.
[0179] Pre upotrebe, autoklavirani NFP filteri za jednokratnu upotrebu se instaliraju na očišćeni NFP sistem filtracije i isperu vodom za injektovanje (WFI), a zatim se testiraju na vodopropusnost. Filteri su ekvilibrisani sa 50 mM Tris, 50 mM NaCl, pH 8,0 puferom (ravnotežni pufer). Provodljivost i pH se prate kako bi se osiguralo da je sistem potpuno uravnotežen. Uzimaju se uzorci od ispiranja pufera i prate se da bi se osigurala mikrobna kontrola. NFP sistem filtracije se očisti nakon upotrebe i čuva u odgovarajućem rastvoru za skladištenje.
Procedura proizvodnje
[0180] Pre filtracije, ustekinumab prečišćen anjonskom izmenom je razblažen ravnotežnim puferom do koncentracije od ≤ 8,2 g/L. Razblaženi ustekinumab se zatim filtrira kroz NFP filtere, a NFP filtrat se sakuplja u posudu od nerđajućeg čelika. Početna brzina protoka se određuje u roku od 5 minuta od početka filtracije, a opadanje fluksa se prati kako bi se osiguralo da opadanje fluksa od početnog fluksa (definisano kao 0% opadanja fluksa) ne prelazi 85%. Kada je NFP filtracija završena, klizač se ispere ravnotežnim puferom, a preostali proizvod se sakuplja u posudu od nerđajućeg čelika gde se meša i uzorkuje za određivanje koncentracije endotoksina, bioopterećenja i proteina. Prinos se prati i očekuje se da bude ≥ 85%. Ustekinumab NFP-filtrat se može držati na sobnoj temperaturi do 72 sata i na 2 do 8°C do 7 dana pre dalje obrade u Fazi 9.
Faza 9 - Koncentracija i dijafiltracija
[0181] U fazi 9, korak ultrafiltracije koncentriše ustekinumab, a korak dijafiltracije dodaje ekscipijente formulacije i uklanja soli pufera u procesu.
Priprema sistema za ultrafiltraciju
[0182] Pre upotrebe, sistem je ekvilibrisan sa 50 mM Tris, 50 m M NaCl, pH 8,0 pufera. Provodljivost i pH se prate kako bi se osiguralo da je sistem potpuno uravnotežen. Uzimaju se uzorci od ispiranja pufera i prate se da bi se osigurala mikrobna kontrola. Nakon upotrebe, ultrafiltracijski sistem se očisti. WFI se ispira kroz sistem i vrši se normalizovani test vodopropusnosti. Ako je potrebno, sistem ultrafiltracije se čuva u odgovarajućem rastvoru za skladištenje.
Procedura proizvodnje
[0183] Filtrat za zadržavanje virusa ustekinumaba je prethodno koncentrovan na 36 do 82 g/L. Proizvod se zatim dijafiltrira sa 10 mM histidina, 8,5% saharoze, pH 5,7 pufera za ≥ 8 dijazapremina, sve dok pH i provodljivost permeata ne budu unutar 5,5 do 5,9 i 400 do 700 µs/cm, redom. Ustekinumab se dalje koncentriše na ne više od 180 g/L. Tokom celog procesa, transmembranski pritisak se prati i kontroliše. Proizvod je regenerisan sa puferom za ispiranje korišćenjem 10 mM histidina, 8,5% saharoze, pH 5,7 pufera. Konačna koncentracija ustekinumaba je podešena sa ovim istim puferom na koncentraciju proteina od 86,7 do 95,8 g/L i naziva se pre-formulisana masa (PFB). Prinos za Fazu 9 se prati i očekuje se da bude ≥ 85%. Ako je potrebno,
1
ustekinumab se može ponovo obraditi da bi se dobila tačna koncentracija proteina ponavljanjem koraka koncentrovanja kroz sistem ultrafiltracije. Proizvod se meša kako bi se obezbedila homogenost rastvora. Ustekinumab PFB se čuva na sobnoj temperaturi ili na 2 do 8°C do 48 sati.
Faza 10 - Priprema formulisane mase
[0184] U Fazi 10, polisorbat 80 se dodaje u prethodno formulisanu masu ustekinumaba (PFB) da bi se dobila formulisana masa (FB). FB se filtrira u polikarbonatne posude za zamrznuto skladištenje.
Procedura proizvodnje
[0185] Jedan procenat polisorbata 80 se dodaje u odnosu od 0,003 do 0,005 kg/L ustekinumab PFB u zatvorenoj posudi za PFB i meša da se dobije FB rastvor. FB rastvor se meša u skladu sa validovanim parametrima da bi se obezbedila homogenost rastvora. FB rastvor se može čuvati na sobnoj temperaturi ili na 2 do 8°C do 48 sati pre filtracije. FB rastvor se filtrira pomoću predfiltera za jednokratnu upotrebu u FB posudu, a zatim se meša. Pomešani FB se zatim filtrira 0,2 mm u polikarbonatne posude. Uzimaju se uzorci za testiranje oslobađanja. Ustekinumab FB posude se čuvaju na ≤ -40°C.
Primer 6 – Primena metode Gama distribucije prelazne analize (GDTA) za hromatografske kolone koje se koriste u proizvodnji STELARA<®>(ustekinumab)
[0186] Ovaj primer opisuje primenu GDTA metode na hromatografske kolone u koraku prečišćavanja tokom proizvodnje anti-TNF antitela, na primer, anti-TNFa antitela SIMPONI<®>(golimumab), na primer, kolona za afinitetnu hromatografiju za protein A koja se koristi tokom Faze 3 proizvodnje.
Faza 3 – kolona za afinitetnu hromatografiju za protein A
[0187] Za Fazu 3, korišćenjem MabSelect™ kolone za afinitetnu hromatografiju za Protein A, analizirani prelazni frontovi su uključivali, na primer, front ispiranja 2 (Slika 40) i front koji je generisan tokom eluiranja (Slika 41). Dodatni frontovi generisani tokom čišćenja kolone nakon dezinfekcije i tokom skladištenja nakon koraka ispiranja i ekvilibracije se takođe trenutno procenjuju za MabSelect™ kolonu za afinitetnu hromatografiju za Protein A. Prikazani rezultati predstavljaju analizu serija obrađenih na 13 različitih pakovanja kolona koji se koriste za proizvodnju STELARA<®>(ustekinumab). Preliminarna procena trendova pokazuje očigledan pomak u performansama kolona i neke razlike uočene između pakovanja kolona. Potpuna analiza ovih podataka, uključujući poređenje sa drugim dostupnim informacijama o šarži i podacima o performansama kolone biće završena kako bi se uspostavile kontrolne granice za upotrebu u budućoj primeni GDTA metode za praćenje procesa u realnom vremenu.
Primer 7 – Primena metode Gama distribucije prelazne analize (GDTA) za hromatografske kolone koje se koriste u proizvodnji SIMPONI<®>(golimumaba)
[0188] Ovaj primer opisuje primenu GDTA metode na hromatografske kolone u koraku prečišćavanja tokom proizvodnje anti-TNFa antitela SIMPONI<®>(golimumab), npr., kolona za afinitetnu hromatografiju za protein A u Fazi 3, kolona za katjonoizmenjivačku hromatografiju u Fazi 6, i kolona za anjonoizmenjivačku hromatografiju u Fazi 7. Ove faze i kolone koje se koriste u metodama za proizvodnju SIMPONI<®>(golimumab) su uporedive sa onima koje se koriste za proizvodnju STELARA<®>(ustekinumab).
Faza 3 – kolona za afinitetnu hromatografiju za protein A
[0189] Za Fazu 3, korišćenjem MabSelect™ kolone za afinitetnu hromatografiju za Protein A, analizirani prelazni frontovi su uključivali, na primer, front eluiranja (Slika 42) i front koji je generisan tokom čišćenja sa gvanidin HCl (slika 43) i front generisan tokom ispiranja nakon čišćenja sa 0,1 M natrijum citratom, pH 3,5 (Slika 44). Prikazani rezultati predstavljaju analizu 160 serija SIMPONI<®>(golimumab). Preliminarna procena trendova pokazuje očigledan pomak u performansama kolona i neke razlike uočene između pakovanja kolona. Potpuna analiza ovih podataka, uključujući poređenje sa drugim dostupnim informacijama o šarži i podacima o performansama kolone biće završena kako bi se uspostavile kontrolne granice za upotrebu u budućoj primeni GDTA metode za praćenje procesa u realnom vremenu.
Faza 6 - Kolona za katjonsku jonoizmenjvačku hromatografiju
2
[0190] Za Fazu 6, korišćenjem UNOsphere S™ kolone za hromatografsku izmjenu katjona, analizirani prelazni frontovi su uključivali, npr., front generisan tokom punjenja materijala tretiranog rastvaračem/deterdžentom (S/D) (Slika 45), front generisan tokom eluiranja (Sl. 46), i front generisan tokom skidanja (Sl. 47). Prikazani rezultati predstavljaju analizu 72 serije SIMPONI<®>(golimumab). Preliminarna procena trendova pokazuje očigledan pomak u performansama kolona i neke razlike uočene između pakovanja kolona. Potpuna analiza ovih podataka, uključujući poređenje sa drugim dostupnim informacijama o šarži i podacima o performansama kolone biće završena kako bi se uspostavile kontrolne granice za upotrebu u budućoj primeni GDTA metode za praćenje procesa u realnom vremenu.
Faza 7 – Kolona za anjonsku jonoizmenjvačku hromatografiju
[0191] Za Fazu 7, koristeći Q Sepharose™ XL kolonu za hromatografsku izmjenu anjona, analizirani prelazni frontovi su uključivali, na primer, front koji je generisan tokom čišćenja natrijum hidroksidom (Slika 48) i front generisan tokom skidanja (Slika 49). Prikazani rezultati predstavljaju analizu 71 serije SIMPONI<®>(golimumab). Preliminarna procena trendova pokazuje očigledan pomak u performansama kolona i neke razlike uočene između pakovanja kolona. Potpuna analiza ovih podataka, uključujući poređenje sa drugim dostupnim informacijama o šarži i podacima o performansama kolone biće završena kako bi se uspostavile kontrolne granice za upotrebu u budućoj primeni GDTA metode za praćenje procesa u realnom vremenu.
4
4

Claims (9)

  1. Patentni zahtevi 1. Postupak rada hromatografske kolone u postupcima proizvodnje za proizvodnju anti-IL-12/IL-23p40 antitela, specifičnih farmaceutskih kompozicija antitela i njihovih fragmenata koji se vezuju za antigen, pri čemu anti-IL-12/IL-23p40 antitela obuhvataju aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koju č ine: (i) teški lanac (HC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:10 i laki lanac (LC) koji sadrži sekvencu aminokiselina SEK ID BR:11; (ii) sekvence aminokiselina varijabilnog domena teškog lanca SEK ID BR:7 i sekvence aminokiselina varijabilnog domena lakog lanca SEK ID BR:8; i (iii) CDR sekvence aminokiselina teškog lanca SEK ID BR: 1, SEK ID BR: 2 i SEK ID BR: 3, i CDR sekvence aminokiselina lakog lanca SEK ID BR: 4, SEK ID BR: 5, i SEK ID BR:6, pomenuti postupak sadrži: prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala od najmanje jednog prelaznog fronta mobilne faze tokom prvog rada hromatografske kolone koja sadrži pakovanje kolone; određivanje modela krive kumulativne gama distribucije na osnovu prikupljenog izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka za najmanje jedan prelazni front mobilne faze koristeći formulu Ia za rastući prelazni front ili formulu Ib za opadajući prelazni front
    ili
    pri čemu je C izlazni signal kolone za dati V, V je akumulirani protok podeljen zapreminom kolone, a k, θ i Vi su parametri oblika, razmere i pomeranja koji se koriste za definisanje krive; izračunavanje vrednosti visine ekvivalentne teorijskim pločama (HETP) za najmanje jedan prelazni front mobilne faze korišćenjem formule II i parametara modela krive kumulativne gama distribucije k, θ i Vi,
    Formula II pri čemu je:
    L = dužina kolone; i procena kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu pomenute izračunate HETP vrednosti.
  2. 2. Postupak prema patentnom zahtevu 1, koji dalje obuhvata: kondicioniranje, zamenu ili ponovno pakovanje hromatografske kolone na osnovu pomenute procene.
  3. 3. Postupak prema patentnom zahtevu 2, koji dalje obuhvata: prikupljanje izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka u dva ili više intervala odgovarajućeg prelaznog fronta mobilne faze tokom jedne ili više narednih upotreba pakovanih hromatografskih kolona; izvođenje pomenutog određivanja i navedenog izračunavanja korišćenjem izlaznog signala kolone i akumuliranih parametara protoka prikupljenih tokom svake od jedne ili više narednih upotreba pakovanih hromatografskih kolona; određivanje HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone tokom svake od pomenutih jedne ili više narednih upotreba na osnovu navedenog izvođenja; sastavljanje trenda utvrđenih HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone za dve ili više sledećih upotreba; i identifikaciju promene u kvalitetu pakovanja kolone za hromatografiju na osnovu navedenog sastavljenog trenda, pri čemu se pomenuto kondicioniranje, zamena ili ponovno pakovanje kolone za hromatografiju zasniva na pomenutoj identifikaciji.
  4. 4. Postupak prema patentnom zahtevu 3, pri čemu se povećanje HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone u jednoj ili više narednih upotreba pomenutog pakovanja kolone u poređenju sa HETP vrednosti pakovanja hromatografske kolone u jednoj ili više ranijih upotreba pomenutog pakovanja kolone identifikuje smanjenje u kvalitetu pakovanja hromatografske kolone.
  5. 5. Postupak prema patentnom zahtevu 2, pri čemu izlazni signal kolone i akumulirani parametri protoka dva ili više različita prelazna fronta mobilne faze tokom pomenute prvog pakovanja kolone se prikupljaju, a pomenuti postupak obuhvata: izvođenje navedenog određivanja i izračunavanja korišćenjem izlaznog signala kolone i parametara akumuliranog protoka prikupljenih za svaki od dva ili više različitih prelaznih frontova mobilne faze da bi se izračunala HETP vrednost za svaki od dva različita prelazna fronta mobilne faze; procenu kvaliteta pakovanja hromatografske kolone na osnovu dve ili više izračunatih HETP vrednosti, pri čemu se pomenuto kondicioniranje, zamena ili ponovno pakovanje hromatografske kolone zasniva na pomenutoj proceni.
  6. 6. Postupak prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu je hromatografska kolona izabrana iz grupe koju čine: kolona za afinitetnu hromatografiju za protein A, jonoizmenjivačka hromatografska kolona za katjone i jonoizmenjivačka hromatografska kolona za anjone.
  7. 7. Postupak prema patentnom zahtevu 6, pri čemu se prelazni front mobilne faze u koloni afinitetne hromatografije za protein A generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju čine: front ispiranja generisan tokom prečišćavanja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, front generisan tokom eluiranja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, front generisan tokom č išćenja kolone pomoću gvanidin HCl, i front generisan tokom ispiranja kolone nakon čišćenja sa 0,1 M natrijum citratom, pH 3,5.
  8. 8. Postupak prema patentnom zahtevu 6, pri čemu se prelazni front mobilne faze u jonoizmenjivačkoj hromatografskoj koloni za katjone generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju čine: front koji generisan tokom punjenja materijala tretiranog rastvaračem/deterdžentom (S/D) koji sadrži anti-IL-12/IL-23p40 antitela, front generisan tokom eluiranja anti-IL-12/IL-23p40 antitela, i front generisan tokom skidanja sa kolone.
  9. 9. Postupak prema patentnom zahtevu 6, pri čemu se prelazni front mobilne faze u jonoizmenjivačkoj hromatografskoj koloni za anjone generiše iz jednog ili više frontova izabranih iz grupe koju čine: front generisan tokom čišćenja kolone natrijum hidroksidom i front generisan tokom skidanja sa kolone. 4
RS20220647A 2018-04-20 2019-04-19 Kvalifikacija hromatografske kolone u proizvodnim metodama za proizvodnju kompozicija anti-il12/il23 antitela RS63424B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862660340P 2018-04-20 2018-04-20
PCT/US2019/028332 WO2019204734A1 (en) 2018-04-20 2019-04-19 Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions
EP19722993.3A EP3781943B1 (en) 2018-04-20 2019-04-19 Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS63424B1 true RS63424B1 (sr) 2022-08-31

Family

ID=66429636

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20220647A RS63424B1 (sr) 2018-04-20 2019-04-19 Kvalifikacija hromatografske kolone u proizvodnim metodama za proizvodnju kompozicija anti-il12/il23 antitela

Country Status (23)

Country Link
US (6) US11225516B2 (sr)
EP (4) EP3781942B1 (sr)
JP (3) JP7268054B2 (sr)
KR (3) KR102853122B1 (sr)
CN (3) CN112041674B (sr)
AU (2) AU2019256647B2 (sr)
BR (1) BR112020021108A2 (sr)
CA (3) CA3096902A1 (sr)
CY (1) CY1125296T1 (sr)
DK (1) DK3781943T3 (sr)
EA (4) EA039018B1 (sr)
ES (1) ES2914987T3 (sr)
HR (1) HRP20220676T1 (sr)
HU (1) HUE058711T2 (sr)
IL (2) IL278025B2 (sr)
LT (1) LT3781943T (sr)
PL (1) PL3781943T3 (sr)
PT (1) PT3781943T (sr)
RS (1) RS63424B1 (sr)
SG (1) SG11202010019YA (sr)
SI (1) SI3781943T1 (sr)
SM (1) SMT202200264T1 (sr)
WO (3) WO2019204721A1 (sr)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3824906A1 (en) 2016-12-21 2021-05-26 Amgen Inc. Anti-tnf alpha antibody formulations
CN112740030B (zh) * 2018-09-21 2024-02-13 株式会社日立高新技术 具有液相色谱仪的分析装置以及液相色谱仪的分析方法
GB2616385B (en) * 2020-11-17 2024-12-18 Agilent Technologies Inc Gas chromatography systems and methods with diagnostic and predictive module
EP4367136A1 (en) * 2021-07-09 2024-05-15 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
CA3247416A1 (en) * 2022-04-08 2023-10-12 Csl Behring Ag PROCESSES FOR DISINFECTION AND/OR REGENERATION OF A CHROMATOGRAPHIC MEDIUM
AU2023367292A1 (en) * 2022-10-28 2025-04-03 Amgen Inc. Compositions of anti-interleukin 12/interleukin 23 antibody
CN116577449A (zh) * 2023-05-16 2023-08-11 无锡药明生物技术股份有限公司 一种在线评估层析柱性能的方法及其应用
CN116369936B (zh) * 2023-05-31 2023-10-03 深圳市奋达智能技术有限公司 一种心电信号处理方法、系统、装置及存储介质
CN116966875B (zh) * 2023-07-31 2025-07-08 中国农业科学院郑州果树研究所 一种用于反向色谱柱中霜霉威检测的碳纳米材料的制备方法及应用
CN117907511B (zh) * 2024-03-20 2024-06-14 浙江灵析精仪科技发展有限公司 一种多组分重叠峰的自动化解析方法、装置及电子设备
CN118243822A (zh) * 2024-04-24 2024-06-25 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种基于lc-ms/ms的乌司奴单抗的检测方法

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US894395A (en) 1908-02-19 1908-07-28 George K Reid Curtain-stretching pin.
FR1353739A (fr) * 1963-03-06 1964-02-28 Gulf Research Development Co Appareil de chromatographie
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5266491A (en) 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
US5580734A (en) 1990-07-13 1996-12-03 Transkaryotic Therapies, Inc. Method of producing a physical map contigous DNA sequences
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5733761A (en) 1991-11-05 1998-03-31 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5410928A (en) 1993-10-27 1995-05-02 The Whitaker Corporation Scrap removal system for a stamping and forming machine
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
US6475725B1 (en) 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
GB2382039B (en) * 2000-07-28 2004-04-14 Euroflow Chromtography methods and chromatography apparatus
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
US20070021277A1 (en) 2005-07-21 2007-01-25 Kuo Hai P Upper and lower body exerciser
ES2439641T3 (es) * 2005-12-20 2014-01-24 Bristol-Myers Squibb Company Composiciones y procedimientos de producción de una composición
US8833589B2 (en) 2005-12-21 2014-09-16 Pactiv Packaging Inc. Enhanced tamper evident bowl with blocked tab
WO2007077217A2 (en) 2006-01-04 2007-07-12 Baxter International Inc. Oligopeptide-free cell culture media
US20070215548A1 (en) * 2006-01-05 2007-09-20 Zhou Joe Xin H Systems and methods for packing chromatography columns
SG170837A1 (en) * 2006-04-05 2011-05-30 Abbott Biotech Ltd Antibody purification
US8028562B2 (en) * 2007-12-17 2011-10-04 Schlumberger Technology Corporation High pressure and high temperature chromatography
US8568586B2 (en) 2008-01-25 2013-10-29 Biogen Idec Ma Inc. Automated system and method for monitoring chromatography column performance, and applications thereof
US20090277254A1 (en) * 2008-05-09 2009-11-12 Medlmmune, Llc Methods of improving packed-bed chromatography performance
US8563697B2 (en) * 2008-08-14 2013-10-22 Cephalon Australia Pty. Ltd. Anti-IL-12/IL-23 antibodies
WO2010019814A1 (en) * 2008-08-15 2010-02-18 Biogen Idec Ma Inc. Methods for evaluating chromatography column performance
RU2520838C2 (ru) * 2008-10-20 2014-06-27 Эббви Инк Выделение и очистка антител с использованием аффинной хроматографии на основе белка а
US7983852B2 (en) 2008-10-21 2011-07-19 Thermo Finnigan Llc Methods of automated spectral peak detection and quantification without user input
WO2010127069A1 (en) * 2009-04-29 2010-11-04 Schering Corporation Antibody purification
JP5738285B2 (ja) * 2009-06-24 2015-06-24 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 再使用可能なクロマトグラフィー装置の特徴決定方法
JP5651176B2 (ja) 2009-08-20 2015-01-07 スペクトロセンス リミテッド ガスクロマトグラフ分析方法およびシステム
CN104634955B (zh) * 2009-10-26 2016-09-14 雀巢产品技术援助有限公司 检测抗-tnf药物和自身抗体的试验
JP5621052B2 (ja) 2010-12-21 2014-11-05 エフ．ホフマン−ラ ロシュアーゲーＦ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ クロマトグラフィー装置の特徴決定
FR2973880B1 (fr) 2011-04-06 2013-05-17 Commissariat Energie Atomique Procede et dispositif d'estimation de parametres biologiques ou chimiques dans un echantillon, procede d'aide au diagnostic correspondant
US9150645B2 (en) * 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
CN103163237B (zh) * 2013-02-03 2014-06-11 大连理工大学 获得有机化合物在碳纳米管上保留的热力学参数和吸附等温线的方法
EP3754012A1 (en) * 2013-03-15 2020-12-23 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibody purification and purity monitoring
US10099156B2 (en) * 2013-04-08 2018-10-16 Chromacon Ag Chromatographic purification method
WO2015052721A1 (en) 2013-10-09 2015-04-16 Spectrosense Ltd. Modified data representation in gas chromatographic analysis
US8946395B1 (en) * 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
EP3221693B1 (en) * 2014-11-17 2018-11-14 GE Healthcare Bio-Sciences AB A method and apparatus for performing liquid chromatography purification
FR3040215B1 (fr) 2015-08-20 2019-05-31 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Procede d’estimation d’une quantite de particules reparties en classes, a partir d’un chromatogramme.
US10465003B2 (en) 2016-02-05 2019-11-05 Janssen Biotech, Inc. Anti-TNF antibodies, compositions, methods and use for the treatment or prevention of type 1 diabetes
WO2018024770A1 (en) * 2016-08-03 2018-02-08 Formycon Ag Production of biosimilar ustekinumab in cho cells
IL289895B (en) * 2016-10-25 2022-09-01 Regeneron Pharma Methods and systems for analysis of chromatography data

Also Published As

Publication number Publication date
HUE058711T2 (hu) 2022-09-28
WO2019204734A1 (en) 2019-10-24
AU2019256635B2 (en) 2024-09-12
CN112313511B (zh) 2024-08-09
US11225516B2 (en) 2022-01-18
PL3781943T3 (pl) 2022-08-01
IL278025B (en) 2022-11-01
AU2019256647B2 (en) 2024-08-15
US20190322736A1 (en) 2019-10-24
CN112041674A (zh) 2020-12-04
US20190324000A1 (en) 2019-10-24
EP3781942B1 (en) 2022-06-01
US20190321752A1 (en) 2019-10-24
EA202092510A1 (ru) 2020-12-22
IL278025B2 (en) 2023-03-01
CA3097559A1 (en) 2019-10-24
BR112020020480A2 (pt) 2021-01-12
KR20210003830A (ko) 2021-01-12
SG11202010019YA (en) 2020-11-27
EP3781943B1 (en) 2022-04-27
HRP20220676T1 (hr) 2022-07-22
AU2019256647A1 (en) 2020-10-22
DK3781943T3 (da) 2022-06-20
EP3781942A1 (en) 2021-02-24
AU2019256635A1 (en) 2020-10-15
SI3781943T1 (sl) 2022-07-29
KR102853122B1 (ko) 2025-09-01
ES2914987T3 (es) 2022-06-20
JP7344902B2 (ja) 2023-09-14
IL278039B1 (en) 2025-11-01
EA039018B1 (ru) 2021-11-23
CY1125296T1 (el) 2025-03-28
JP2021522471A (ja) 2021-08-30
US12234283B2 (en) 2025-02-25
CA3096902A1 (en) 2019-10-24
CN112313511A (zh) 2021-02-02
SMT202200264T1 (it) 2022-07-21
US12018075B2 (en) 2024-06-25
CA3097776C (en) 2024-10-29
US20250171529A1 (en) 2025-05-29
JP7268054B2 (ja) 2023-05-02
CN112041673A (zh) 2020-12-04
EP4063850A1 (en) 2022-09-28
IL278039A (en) 2020-11-30
KR20210003824A (ko) 2021-01-12
CN112041674B (zh) 2024-04-02
EA202192301A1 (ru) 2022-03-31
US20210332124A1 (en) 2021-10-28
US20220089716A1 (en) 2022-03-24
KR20210003825A (ko) 2021-01-12
EA202092511A1 (ru) 2020-12-29
BR112020021108A2 (pt) 2021-02-17
JP2021522477A (ja) 2021-08-30
IL278025A (en) 2020-11-30
WO2019204747A1 (en) 2019-10-24
CA3097776A1 (en) 2019-10-24
EA202192300A1 (ru) 2022-03-31
WO2019204721A1 (en) 2019-10-24
EP3781941B1 (en) 2026-01-14
LT3781943T (lt) 2022-07-11
KR102837419B1 (ko) 2025-07-23
US11079361B2 (en) 2021-08-03
PT3781943T (pt) 2022-08-05
EP3781941A1 (en) 2021-02-24
JP2021522204A (ja) 2021-08-30
CA3097559C (en) 2024-11-12
EA039041B1 (ru) 2021-11-25
EP3781943A1 (en) 2021-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250171529A1 (en) Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/23 antibody compositions
US20220235312A1 (en) Automated biomanufacturing systems, facilities, and processes
US11407981B2 (en) Methods for continuously inactivating a virus during manufacture of a protein
HK40045539A (en) Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions
HK40045539B (en) Chromatography column qualification in manufacturing methods for producing anti-il12/il23 antibody compositions
BR112020020480B1 (pt) Método para operação de uma coluna cromatográfica em métodos de fabricação para produzir anticorpos anti-il-12/il-23p40
CA3230984A1 (en) Systems and methods of ph modeling and control