[go: up one dir, main page]

RS62288B9 - Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa - Google Patents

Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa

Info

Publication number
RS62288B9
RS62288B9 RS20211054A RSP20211054A RS62288B9 RS 62288 B9 RS62288 B9 RS 62288B9 RS 20211054 A RS20211054 A RS 20211054A RS P20211054 A RSP20211054 A RS P20211054A RS 62288 B9 RS62288 B9 RS 62288B9
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
dcm
diyl
ethane
bis
lipid
Prior art date
Application number
RS20211054A
Other languages
English (en)
Inventor
Joseph E Payne
John A Gaudette
Zheng Hou
Mohammad Ahmadian
Lei Yu
Victor Knopov
Violetta Akopian
Priya Karmali
Richard P Witte
Neda Safarzadeh
Wenbin Ying
Jun Zhang
Original Assignee
Nitto Denko Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nitto Denko Corp filed Critical Nitto Denko Corp
Publication of RS62288B1 publication Critical patent/RS62288B1/sr
Publication of RS62288B9 publication Critical patent/RS62288B9/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/12—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
    • C07C235/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C235/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C235/08—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/08—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/16—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and unsaturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/18—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by doubly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C321/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides
    • C07C321/12—Sulfides, hydropolysulfides, or polysulfides having thio groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C321/14—Sulfides, hydropolysulfides, or polysulfides having thio groups bound to acyclic carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C333/00—Derivatives of thiocarbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C333/02—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof
    • C07C333/04—Monothiocarbamic acids; Derivatives thereof having nitrogen atoms of thiocarbamic groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/16—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/38—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/38—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D333/40—Thiophene-2-carboxylic acid
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2991—Coated
    • Y10T428/2998—Coated including synthetic resin or polymer

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
POVEZANE REFERENCE SA POVEZANIM PRIJAVAMA
[0001] Ova prijava poziva se na prioritet US provizione patentne prijave Br.: 61/657,480 podnete 8 juna, 2012.
TEHNIČKA OBLAST
[0002] Ovaj pronalazak je usmeren na lipide koji mogu da se jonizuju za ojačavanje dostave terapeutskih agenasa.
POZADINA
[0003] Brojne tehnike dostupne su za dostavljanje terapeutskog agensa, na primer, siRNK, nukleinske kiseline, itd., u ćeliju. Ove tehnike uključuju virusne i ne-virusne transfekcione sisteme. Ne-virusni transfekcioni sistemi mogu da uključe, na primer, polimere, lipide, lipozome, micele, dendrimere, i nanomaterijali. Polimeri koji su ispitani za ćelijske transfekcije uključuju katjonske polimere kao što su, na primer, poli(L-lizin) ("PLL"), polietilenimin ("PEI"), hitozan, i poli(2-dimetilamino)etil metakrilat ("pDMAEMA").
[0004] Međutim ove virusne i ne-virusne transfekcione tehnike poseduju neke nedostatke. Na primer, virusni sistemi can dati visoku transfekcionu efikasnost, ali nekada nisu u potpunosti bezbedne.
Dodatno, virusni sistemi mogu biti komplikovani i/ili skupi za pripremanje.
[0005] Ne-virusni transfekcioni sistemi, na primer, oni koji upošljavaju katjonske polimere, prijavljeni su da transferuju plazmid DNA u ćelije. Katjonski polimeri, međutim, mogu biti nestabilni i toksični za ćelije.
[0006] Kao tako, postoji potreba za novim jedinjenjima, kompozicijama, i postupcima za upotrebu katjonske kompozicija za poboljšanje dostave terapeutskih agenasa do ćelija, tkiva, i organizama.
CA2800818 opisuje katjonske lipide koji olakšavaju uvođenje nukleinske kiseline u ćeliju.
KRATAK PREGLED
[0007] Ovaj pronalazak definisan je patentnim zahtevima. Bilo koja predmetna tema koja izlazi iz okvira patentnih zahteva obezbeđena je samo u informativne svrhe. Ovaj pronalazak usmeren je na jedinjenja lipida koji može da se jonizuje, formule I
gde n i m su nezavisno 1, 2, 3, ili 4; R1i R2su nezavisno C10-18alkil ili C12-18alkenil; X je -CH2-, S, O, N, ili ga nema; L je C1-4alkilen; -S-C1-4alkilen; - O-C1-4alkilen; -O-C(O)-C1-4alkilen; -S(O)2-C1-4alkilen;
ili njegov farmaceutski prihatljiv oblik soli. Kompozicije, farmaceutske formulacije, nosači leka, i postupci upotrebe jedinjenja formule I takođe su opisani.
KRATAK OPIS NACRTA
[0008]
FIG.1 prikazuje in vitro sinergističku efikasnost lipid koji može da se jonizuje:lipid koji može da se jonizuje primera izvođenja ovog pronalaska
FIG.2 prikazuje in vitro sinergističku efikasnost lipid koji može da se jonizuje:lipid koji može da se jonizuje primera izvođenja ovog pronalaska
FIG.3 prikazuje in vitro sinergističku efikasnost lipid koji može da se jonizuje: katjonski lipid primera izvođenja ovog pronalaska
FIG.4 prikazuje in vivo efikasnost lipid koji može da se jonizuje: katjonski lipid primera izvođenja ovog pronalaska
DETALJAN OPIS ILUSTRATIVNIH PRIMERA IZVOĐENJA
[0009] Ovaj pronalazak usmeren je na jedinjenja lipida koji može da se jonizuje, kao i njihova upotreba u dostavljanju do ćelija, tkiva, i organizama.
[0010] U okviru obima ovog pronalaska su jedinjenja lipida koji može da se jonizuje, formule I:
gde
n i m su nezavisno 1, 2, 3, ili 4;
R1i R2su nezavisno C10-18alkil ili C12-18alkenil;
X je -CH2-, S, O, N, ili ga nema;
L je C1-4alkilen; -S-C1-4alkilen; -O-C1-4alkilen; -O-C(O)-C1-4alkilen; -S(O)2-C1-4alkilen;
ili njegov farmaceutski prihatljiv oblik soli.
[0011] U okviru obima ovog pronalaska, n i m mogu biti isti ili različiti. U poželjnim primerima izvođenja, n i m su isti. Naročito poželjni su oni primeri izvođenja gde n i m su oba 1 ili n i m su oba 2.
[0012] U nekim primerima izvođenja ovog pronalaska, X predstavlja neku vezu. U drugim primerima izvođenja, X je -CH2-. U nekim drugim, X je S. Takođe poželjni su primeri izvođenja u kojima X je O. Primeri izvođenja gde X je N takođe su u okviru obima ovog pronalaska.
[0013] U nekim primerima izvođenja ovog pronalaska, L je C1-4alkilen. U drugim primerima izvođenja, L je -S-C1-4alkilen. U daljim primerima izvođenja, L je -O-C1-4alkilen. U još daljim primerima izvođenja, L je -O-C(O)-C1-4alkilen. Alternativno, L je -S(O)2-C1-4alkilen. Takođe u okviru obima ovog pronalaska su primeri izvođenja gde L je
[0014] U onim primerima izvođenja gde X predstavlja neku vezu, L je poželjno C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2CH2CH2-, i -CH2CH2CH2CH2-. U drugim primerima izvođenja gde X predstavlja neku vezu, L je
[0015] U onim primerima izvođenja gde X je -CH2-, L je poželjno -S-C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -S-CH2-, -S-CH2-CH2-, -S-CH2CH2CH2-, i -S-CH2CH2CH2CH2-.
[0016] U drugim primerima izvođenja gde X je -CH2-, L je poželjno -S(O)2-C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -S(O)2-CH2, -S(O)2-CH2-CH2, -S(O)2-CH2-CH2-CH2-, i S(O)2-CH2-CH2-CH2-CH2-.
[0017] U daljim primerima izvođenja gde X je -CH2-, L je -O-C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -O-CH2-, -O-CH2-CH2-, -O-CH2CH2CH2-, i -O-CH2CH2CH2CH2-.
[0018] U onim primerima izvođenja ovog pronalaska gde X je S, L je poželjno C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2CH2CH2-, i -CH2CH2CH2CH2-.
[0019] U onim primerima izvođenja gde X je O, L je poželjno C1-4alkilen. Takvi primeri L uključuju -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2CH2CH2-, i -CH2CH2CH2CH2-.
[0020] U okviru obima ovog pronalaska, R1i R2mogu biti isti ili različiti. Poželjno, R1i R2su isti. Poželjno, R1i R2su C10-18alkil. Takođe poželjno su primeri izvođenja gde the C10-18alkil je a straight-lanac C10-18alkil. Poželjniji su primeri izvođenja gde R1i R2su C12-18alkil. Takođe poželjno su primeri izvođenja gde R1i R2su C12-15alkil. U najpoželjnijim primerima izvođenja, R1i R2su oba C13alkil.
[0021] U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, R1i R2su C12-18alkenil. Poželjno, R1i R2su C13-17alkenil. Poželjnije, R1i R2su svaki oleil:
[0022] U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, R1i R2su C12-18alkenil. Poželjno, R1i R2su C13-17alkenil. Poželjnije, R1i R2su svaki linoleoil.
[0023] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su kompozicije koje obuhvataju jedinjenje formule I u lipozomu, gde lipozom obuhvata dvosloj lipidnih molekula. Dok jedinjenje formule I može da obuhvata bilo koji molarni procenat lipidnih molekula u takvim kompozicijama, poželjno je da je jedinjenje formule I oko 5 do oko 50 mol.% lipidnih molekula kompozicija ovog pronalaska.
[0024] Kompozicije ovog pronalaska koje obuhvataju jedinjenje formule I u lipozomu mogu da sadrže više od jednog jedinjenja formule I. U poželjnim primerima izvođenja, takve kompozicije ovog pronalaska uključuju dva jedinjenja formule I. U onim primerima izvođenja, poželjno je da molarni odnos ta dva jedinjenja formule I iznosi oko 10:30 do oko 30:10.
[0025] Kompozicije ovog pronalaska koje obuhvataju jedinjenje formule I u lipozomu mogu dalje da obuhvataju katjonski lipid. U takvim primeri izvođenja, katjonski lipid je oko 5 do oko 40 mol.% lipidnih molekula kompozicije. Takođe u ovim primerima izvođenja koji obuhvataju jedinjenje formule I u lipozomu sa katjonskim lipidom, molarni odnos jedinjenja formule I prema katjonskom lipidu je oko 5:35 do oko 35:5. Poželjnije, taj odnos je oko 10:30 do oko 30:10.
[0026] U okviru obima ovog pronalaska, bilo koje kompozicije ovog pronalaska mogu dalje da obuhvataju tečnu podlogu. Poželjno, tečna podloga je pogodna za injektovanje u živi organizam. U nekim primerima izvođenja, tečna podloga obuhvata neki organski rastvarač. Alternativno, tečna podloga koja se koristi u određenim primerima izvođenja ovog pronalaska obuhvata vodu i neki organski rastvarač. U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, tečna podloga može dalje da obuhvata nevodenu podlogu.
[0027] Takođe u okviru obima ovog pronalaska, bilo koje kompozicije ovog pronalaska mogu dalje da obuhvataju najmanje jedan fosfolipid.
[0028] U drugim primerima izvođenja ovog pronalaska, bilo koje kompozicije ovog pronalaska mogu dalje da obuhvataju najmanje jedan PEG-konjugovani lipid.
[0029] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su stelatno-ćelijski-specifični nosači leka. Primeri izvođenja ovog pronalaska uključuju bilo koju od prethodno pomenutih kompozicija, kao i stelatno ćelijsku specifičnu količinu ciljajućeg molekula koji se sastoji od (retinoid)n-linker-(retinoid)n, gde n=0, 1, 2 ili 3; i gde linker obuhvata polietilen glikol (PEG) ili PEG-u sličan molekul.
[0030] U poželjnim primerima izvođenja, nosači leka ovog pronalaska obuhvataće dalje siRNK molekul.
[0031] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su farmaceutske formulacije. Farmaceutske formulacije u okviru obima ovog pronalaska uključuju bilo koji od gore pomenutog nosača leka ovog pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili nosač. Poželjno je da u takvim formulacijama, siRNK je enkapsulirana lipozomom kompozicija ovog pronalaska.
[0032] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su postupci dostavljanja leka pacijentu kome je takav tretman potreban. Ovi postupci obuhvataju obezbeđivanje farmaceutske formulacije u okviru obima ovog pronalaska i davanje farmaceutske formulacije pacijentu.
Definicije
[0033] Sledeći izrazi korišćeni su kroz ovu specifikaciju.
[0034] Kako se ovde koristi, "katjonski lipid" odnosi se na jedinjenje koje uključuje najmanje jedan lipidni ostatak i pozitivno naelektrisan kvartarni azot povezan sa kontrajon. U stanju tehnike smatra se da su "lipidi" sastavljeni od hidrofobnog alkil ili alkenil ostatka i ostatka karboksilne kiseline ili estra. Poželjno katjonski lipidi za upotrebu u ovom pronalasku uključuju:
[0035] Kako se ovde koristi, "lipid koji može da se jonizuje" odnosi se na jedinjenje formule I u okviru obima ovog pronalaska. Ova jedinjenja su sposobna da formiraju naelektrisane vrste kada se dovedu u kontakt sa odgovarajućim kontrajon vrstama, na primer, vrste koje uključuju atom vodonika koji može da se jonizuje.
[0036] Kako se ovde koristi, "alkil" odnosi se na ravnu ili razgranatu potpuno zasićenu (bez dvostrukih ili trostrukih veza) ugljovodoničnu grupu, na primer, grupu sa opštom formulom - CnH2n+1. Alkil grupa mogu imati 1 do 50 atoma ugljenika (kada god se ovde pojavljuju, numerički opsezi kao što su "1 do 50" odnosi se na svaki ceo broj u datom opsegu; npr., "1 do 50 atoma ugljenika" znači da se alkil grupa može sastojati od 1 atoma ugljenika, 2 atoma ugljenika, 3 atoma ugljenika, itd., čak i uključujući 50 atoma ugljenika, iako ova definicija takođe pokriva javljanje izraza "alkil" u kojem nije određen numerički opseg). Alkil grupa može takođe da bude alkil srednje veličine sa 1 do 30 atoma ugljenika. Alkil grupa takođe može biti niži alkil sa 1 do 5 atoma ugljenika. Alkil grupa jedinjenja može biti označena kao "C1-4alkil" ili sličnih odrednica. Primera radi, "C1-4alkil" ukazuje da postoji jedan do četiri atoma ugljenika alkil lancu, tj., alkil lanac je odabran od grupe koja se sastoji od metila, etila, propila, izopropila, n-butila, izobutila, sec-butila, i t-butila. Tipične alkil grupe uključuju, ali se ne ograničavaju na, metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, tercijarni butil, pentil, heksil i slično.
[0037] Kako se ovde koristi, "alkilen" odnosi se na alkandiil funkcionalna grupa, na primer, -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, i slično.
[0038] Kako se ovde koristi, "alkenil" odnosi se na alkil grupu koja sadrži u ravnom ili razgranatom ugljovodoničnom lancu, jednu ili više dvostrukih veza. Alkenil grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana. Kada je supstituisana, supstituent(i) može se odabrati iz istih grupa koje su prethodno navedene u vezi sa supstitucijom alkil grupe, ukoliko nije drugačije naznačeno. Oleil je primer takve alkenil grupe.
[0039] Kako se ovde koristi, izraz "farmaceutski nosač" odnosi se na hemijsko jedinjenje koje olakšava uključivanje jedinjenja u ćelije ili tkiva. Na primer dimetil sulfoksid (DMSO) je uobičajeno korišćen nosač budući da olakšava preuzimanje mnogih organskih jedinjenja u ćelijama ili tkivima organizma
[0040] Kako se ovde koristi, izraz "nosač" odnosi se na hemijsko jedinjenja razblaženo u vodi koje rastvara formulaciju od interesa (npr., formulacija koja može da uključe jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) kao i stabiliše biološki aktivan oblik formulacije. Soli rastvorene u puferovanim rastvorima koriste se kao nosači u stanju tehnike. Jedan uobičajeno korišćeni puferovani rastvor je fosfatni puferovani slani rastvor jer imitira slane uslove ljudske krvi. Kako pufer soli mogu da kontrolišu pH rastvor pri niskim koncentracijama, puferovan nosač retko modifikuje biološku aktivnost formulacije. Kako se ovde koristi, "ekscipijens" odnosi se na inertnu supstancu koja je dodata formulaciji radi obezbeđivanja, bez ograničavanja, masu, konzistenciju, stabilnost, vezujuću sposobnost, podmazivanje, aposobnost dezintegracije, itd., u kompoziciji. "Nosač" je vrsta ekscipijensa.
[0041] "Organski rastvarači" koji se koriste u okviru obima ovog pronalaska poznati su u struci, per se. i uključuju, na primer, C1-4alkil alkohole, dimetil sulfoksid ("DMSO"), i slično.
[0042] Kako se ovde koristi, "terapeutski agens" odnosi se na jedinjenje koje, nakon davanja sisaru u terpeutski efektivnoj količini, obezbeđuje terapeutski benefit tom sisaru. Terapeutski agens ovde može biti označen kao lek. Stručnjaci iz ove oblasti ceniće da izraz "terapeutski agens" nije ograničen na lekove koji su regulativno odobreni. "Terapeutski agens" operativno može biti povezan sa jedinjenjem kakvo je ovde opisano, retinoid, i/ili drugi lipid. Na primer, drugi lipid kakav je ovde opisan može da obrazuje lipozom, a terapeutski agens može radno biti povezan sa lipozomom, npr., kako je ovde opisano.
[0043] Kako se ovde koristi, "retinoid" je član klase jedinjenja koje se sastoji od četiri izopreonidnih jedinica spojenih na glava-ka-repu način, videti G. P. Moss, "Biochemical Nomenclature i Related Documents," 2nd Ed. Portland Press, pp.247-251 (1992). "Vitamin A" je genetiški opisnik za retinoide koji ispoljavaju kvalitativno biološku aktivnost retinola. Kako se ovde koristi, retinoid se odnosi na prirodne i sintetičke retinoide koji uključuju prvu generaciju, drugu generaciju, i treću generaciju retinoida. Primeri prirodnih retinoida uključuju, ali nisu ograničeni na, (1) 11-cis-retinal, (2) sve-trans retinol, (3) retinil palmitat, (4) sve-trans retinoinska kiselina, i (5) 13-cis-retinoinske kiseline. Dalje, izraz "retinoid" obuhvata retinole, retinale, retinoinske kiseline, retinoide, i njihove derivate.
[0044] Kako se ovde koristi, "konjugat retinoida" odnosi se na molekul koji uključuje najmanje jedan ostatak retinoida. U poželjnim primerima izvođenja ovog pronalaska, konjugat retinoida prisutan je u koncentraciji od oko 0.3 do oko 30 masenih procenata, u odnosu na ukupnu masu kompozicije ili formulacije, koje je ekvivaolent do oko 0.1 do oko 10 mol.%, što je ekvivalent molarnom odnosu od oko 0.1 do oko 10. Poželjno, konjugat retinoida je retinoid-linker-lipidni molekul ili retinoid-linker-retinoid molekul.
[0045] Primer konjugata retinoida uključuju ona jedinjenja formule II:
gde q, r, i s su svaki nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili 10, i njihogi enantiomeri i diastereomeri.
[0046] Poželjno jedinjenja formule II uključuju ona u kojima q, r, i s su svaki nezavisno 1, 2, 3, 4, 5, 6, ili 7. Poželjnija su ona jedinjenja formule II gde q, r, i s su svaki nezavisno 3, 4, ili 5. Najpoželjnija su ona jedinjenja formule II gde q je 3, r je 5, i s je 3. Jedan primer jedinjenja formule II je
[0047] DiVA-PEG-DiVA uključuje stereocentre, a svi enantiomeri i diastereomeri smatraju se obuhvaćenim u okviru obima ovog pronalaska.
[0048] Kako se ovde koristi, "retinoid-linker-lipidni molekul" odnosi se na molekul koji uključuje najmanje jedan ostatak retinoida vezan za najmanje jedan lipidni ostatak kroz najmanje jedan linker kao što su, na primer, PEG ostatak.
[0049] Kako se ovde koristi, "retinoid linker-retinoid molekul" odnosi se na molekul koji uključuje najmanje jedan ostatak retinoida vezan za najmanje jedan drugi ostatak retinoida (koji može biti isti ili različit) kroz najmanje jedan linker kao što su, na primer, PEG ostatak.
[0050] Kako se ovde koristi, izrazi "lipid" i "liofilni" koriste se u njihovim uobičajenim značenjima kako ih shvataju stručnjaci iz ove oblasti. Neograničavajući primeri lipida i liofilnih grupa uključuju masne kiseline, sterole, C2-C50alkil, C2-C50heteroalkil, C2-C50alkenil, C2-C50heteroalkenil, C2-C50aril, C2-C50heteroaril, C2-C50alkinil, C2-C50heteroalkinil, C2-C50karboksialkenil, i C2-C50karboksiheteroalkenil. Masna kiselina je zasićena ili nezasićena monokarboksilna kiselina dugog lanca koja sadrži, na primer, 12 do 24 atoma ugljenika. Lipid je okarakterisan kao suštinski u vodi nerastvoran, sa rastvorljivošću u vodi manjoj
1
od manje oko 0.01% (na osnovu mase). Kako se ovde koristi, izrazi "lipidni ostatak" i "liofilni ostatak" odnosi se na lipid ili njegov deo koji je postao vezan za drugu grupu. Na primer, lipidna grupa može da postane vezana za drugo jedinjenje (npr., monomer) hemijskom reakcijom između funkcionalne grupe (kao što su grupa karboksilne kiseline) lipida u odgovarajućoj funkcionalnoj grupi monomera.
[0051] Kako se ovde koristi, "stelatna ćelija" odnosi se na neurone sa nekoliko dendrita koji zrače iz ćelijskog tela. Primeri stelatnih ćelija su inhibitorni interneuroni.
[0052] Kako se ovde koristi, "siRNK" odnosi se na malu međumešajuću RNK, takođe poznata u struci kao kratka međumešajuća RNK ili utišavajuća RNK. siRNK je klasa dvolančanih RNK molekula koji imaju razne efekte poznate u struci, pri čemu je najupečatljiviji mešanje sa ekspresijom specifičnih gena i ekspresijom proteina.
[0053] Izraz "lipozom" je ovde se koristi u svom uobičajenom značenju kakvog ga shvataju stručnjaci iz ove oblasti, i odnosi se na lipidnu dvoslojnu strukturu koja sadrži lipide vezan za polarne, hidrofilne grupe koje formiraju suštinski zatvorenu strukturu u vodenoj sredini. U nekim primerima izvođenja, lipozom može radno biti povezan sa jednim ili više jedinjenja, kao što su terapeutski agens i retinoid. Lipozom može biti obuhvaćen jednim lipidnim dvoslojem (tj., jednoslojem) ili može biti obuhvaćen sa dva ili više lipidnih dvosloja (tj., višeslojem). Dok se unutrašnjost lipozoma može sastojati od raznih jedinjenja, spoljašnjost lipozoma je pristupačna vodenoj formulaciji koja obuhvata lipozom. Lipozom može biti približno sferičnog ili elipsoidnog oblika.
[0054] U nekim primerima izvođenja, siRNK je enkapsulirana lipozomom tako da je siRNK nepristupačna vodenoj sredini. Kada se enkapsulira siRNK, lipozom ima čvrsto jezgro; takvi lipozomi koji enkapsuliraju siRNK i sa čvrstim jezgrom ovde se nazivaju "lipidne nanočestice". U drugim primerima izvođenja, siRNK nije enkapsulirana lipozomom. U takvim primerimas izvođenja, siRNK može biti kompleksovana na spoljnoj površini lipozoma mešanjem prethodno formiranih lipozoma sa RNK u vodenom rastvoru. U ovim primerima izvođenja, siRNK je pristupačna vodenoj sredini. Lipozomi sa siRNK koja se vezuje samo na njenoj spoljašnjoj površini nazivaju se "lipopleksi".
[0055] The formulacije ovog pronalaska takođe mogu da uključuju PEG-konjugovane lipide. PEG-konjugovani lipidi u okviru obima ovog pronalaska poznati su u struci per se. Pogodna PEG-lipidi uključuju PEG-fosfolipide i PEG-ceramid kao što su, na primer, PEG2000-DSPE, PEG2000-DPPE, PEG2000-DMPE, PEG2000-DOPE, PEG1000-DSPE, PEG1000-DPPE, PEG1000-DMPE, PEG1000-DOPE, PEG550-DSPE, PEG550-DPPE, PEG-550DMPE, PEG-1000DOPE, PEG-BML, PEG-Holestarol. PEG2000-Ceramid, PEG1000-Ceramid, PEG750-Ceramid, PEG550-Ceramid.
[0056] Prethodno pomenute kompozicije ovog pronalaska mogu da uključe jedan ili više fosfolipida kao što su, na primer, 1,2-distearoil-sn-glicero-3-fosfoholin ("DSPC"), dipalmitoilfosfatidilholin ("DPPC"), 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamin ("DPPE"), i 1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamin ("DOPE"). Poželjno, pomoćni lipid je DOPE.
[0057] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su farmaceutske formulacije koje uključuju bilo koji od prethodno pomenutih kompozicija pored farmaceutski prihvatljivog nosača ili vozila. Farmaceutske formulacije ovog pronalaska uključuju najmanje jedan terapeutski agens. Poželjno, terapeutski agens je siRNK. Predviđeno je da se bilo koji siRNK molekul može koristiti u okviru obima ovog pronalaska. Na primer, siRNK može da uključi:
Smisaonu (5'->3') GGACAGGCCUCUACAACUATT (SEQ. ID. NO.1)
Antismisaonu (3'->5') TTCCUGUCCGGAGAUGUUGAU (SEQ. ID. NO.2) i
Smisaonu (5'->3') GGACAGGCCUGUACAACUATT (SEQ. ID. NO.3)
Antismisaonu (3'->5') TTCCUGUCCGGACAUGUUGAU (SEQ. ID. NO.4)
[0058] U poželjnim formulacijama ovog pronalaska koje uključuju siRNK, siRNK je enkapsulirana lipozomom. U drugim primerima izvođenja, siRNK može biti izvan lipozoma. U takvim primerima izvođenja, siRNK može biti kompleksovana na spoljašnjosti lipozoma.
[0059] Takođe u okviru obima ovog pronalaska su postupci dostavljanja terapeutskog agensa pacijentu. Ove postupci obuhvataju obezbeđivanje farmaceutske formulacije koje uključuju bilo koju od prethodno pomenutih kompozicija i farmaceutski prihvatljiv nosač ili vozilo; i davanje farmaceutske formulacije pacijentu.
[0060] U još jednom aspektu, ovaj pronalazak odnosi se na farmaceutsku formulaciju koja obuhvata jedan ili više fiziološki prihvatljivih površinski aktivnih agenasa, farmaceutskih nosača, vozila, ekscipijenasa, i suspenzionih agenasa, ili njihovu kombinaciju; i ovde je opisana formulacija (npr., formulacija koja može da uključi jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens). Prihvatljivi dodatni farmaceutski nosači ili vozila za terapeutsku upotrebu dobro su poznati u oblasti farmaceutika, i opisani su, na primer, u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990). Prezervativi, stabilizatori, boje, i slično mogu se obezbediti u farmaceutskoj formulaciji. Na primer, natrijum benzoat, askorbinska kiselina i estri p-hidroksibenzojeve kiseline mogu se dodati kao prezervativi. Dodatno, antioksidansi i agensi za formiranje suspenzije mogu se koristiti. U raznim primerima izvođenja, alkoholi, estri, sulfatirani alifatični alkoholi, i slično mogu se koristiti kao površinski aktivni agensi; saharoza, glukoza, laktoza, skrob, kristalizobana celuloza, manitol, blago anhidrovani silikat, magnezijum aluminat, magnezijum metasilikatni aluminat, sintetički aluminijumski silikat, kalcijum karbonat, natrijum kiseli karbonat, kalcijum vodonični fosfat, kalcijum karboksimetil celuloza, i slično mogu se koristiti kao ekscipijensi; kokosovo ulje, maslinovo ulje, ulje susama, ulje kikirikija, soja mogu se koristiti kao suspenzioni agensi ili lubrikanti; celuloza acetat ftalat kao derivat karbohidrata kao što su celuloza ili šećer, ili metilacetat-metakrilat kopolimer kao derivat polivinila mogu se koristiti kao suspenzioni agensi; i plastifikatori kao što su estar ftalati i slično mogu se koristiti kao suspenzioni agensi.
[0061] Farmaceutske formulacije opisane ovde mogu se davati humanom pacijentu per se, ili u farmaceutskim formulacijama u kojima su umešane sa drugim aktivnim sastojcima, kao u kombinovanoj terapiji, ili pogodnim farmaceutskim nosačima ili ekscipijensom(ima). Tehnike za formulisanje i davanje jedinjenja ovog pronalaska mogu se naći u "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, 18th edition, 1990.
[0062] Pogodni putevi davanja mogu da uključe, na primer, parenteralnu dostavu, koja uključuju intramuskularne, subkutane, intravenozne, intramedularne injekcije, kao i intratekalne, direktne intraventrikularne, intraperitonealne, intranazalne, ili intraočne injekcije. Formulacija (npr., formulacija koja može da uključi jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) može se takođe davati u doznim oblicima sa održivim ili kontrolisanim oslobađanjem, koji uključuju depot injekcije, osmotske pumpe, i slično, za produženo i/ili tajmirano, pulsno davanje prethodno određenom vrzinom. Dodatno, put davanja može biti lokalni ili sistemski.
[0063] Farmaceutske formulacije mogu se proizvesti na način koji je sam po sebi poznat, npr., uobičajenim postupcima umešavanja, rastvaranja, granulisanja, pravljenja dražeja, pretvaranja u prah, emulzifikovanja, enkapsuliranja, obuhvatanja ili tabletiranja.
[0064] Farmaceutske formulacije mogu se formulisati na bilo koji uobičajeno način upotrebom jednog ili više fiziološki prihvatljivih farmaceutskih nosača koji obuhvataju ekscipijense i pomoćna sredstva koja olakšavaju obrađivanje aktivnih jedinjenja u pripravcima koji se mogu farmaceutski upotrebiti. Pravilna formulacija zavisna od odabranog puta davanja. Bilo koji od dobro poznatih tehnika, farmaceutskih nosača, i ekscipijenasa, mogu se koristiti kao pogodni i kao shavćeni u struci; npr., u prethodno pomenutoj Remington's Pharmaceutical Sciences.
1
[0065] Injekcije se mogu pripremiti u uobičajenim oblicima, bilo kao tečni rastvori ili suspenzije, čvrsti oblici pogodni za rastvaranja ili suspendovanje u tečnosti pre injektovanja, ili kao emulzije. Pogodni ekscipijensi su, na primer, voda, slani rastvor, dekstroza, manitol, laktoza, lecitin, albumin, natrijum glutamat, cistein hidrohlorid, i slično. Dodatno, ukoliko je poželjno, injektabilne farmaceutske formulacije mogu da sadrže manje količine netoksičnih pomoćnih supstanci, kao što agensi vlaženja, pH puferujući agensi, i slično. Fiziološki kompatibilni puferi uključuju, ali nisu ograničeni na, Hanks-ov rastvor, Ringer-ov rastvor, ili fiziološki slani pufer. Ukoliko je poželjno, mogu se koristiti pripravci koji poboljšavaju apsorbovanje.
[0066] Farmaceutske formulacije za parenteralno davanje, npr., bolus injekcijom ili kontinulanom infuzijom, uključuju vodene rastvore aktivne formulacije (npr., formulacija koja može da uključi jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) u vodo-rastvornom obliku. Dodatno, suspenzije aktivnih jedinjenja mogu se pripremiti kao pogodne uglne injekcione suspenzije. Vodene injekcione suspenzije mogu da sadrže supstance koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol, ili dekstran. Opciono, suspenzija takođe može da sadrži pobodne stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorljivost jedinjenja radi omogućavanja pripreme veoma koncentrovanih rastvora. Formulacije za injektovanje mogu biti prisutne u jediničnom doznom obliku, npr., u ampulama ili više-doznim kontejnerima, sa dodatim prezervativima. Te formulacije mogu biti u takvom obliku kao što su suspenzije, rastvori ili emulzije u uljnim ili vodenim vozilima, i mogu da sadrže formulacione agense kao što su suspenzujući, stabilišući i/ili dispergujući agensi. Alternativno, taj aktivan sastojak može biti u praškastom obliku za konstituisanje sa pogodnim vozilom, npr., sterilna voda bez pirogena, pre upotrebe.
[0067] Pored pripravaka opisanih prethodno, formulacije mogu takođe da budu formulisane kao depot pripravak. Takve dugodelujuće formulacije mogu se davati intramuskularnom injekcijom. Tako, na primer, formulacije (npr., formulacija koja može da uključi jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) može se formulisati sa pogodnim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primer kao emulzija u prihvatljivom ulju) ili jono izmenjivačkim smolama, ili kao umereno rastvorljivi derivati, na primer, kao umereno rastvorljiva so.
[0068] Kompozicije i formulacije ovog pronalaska mogu se takođe formulisati ta topikalnu dostavu i mogu se primeniti na subjektovu kožu upotrebom bilo kog pogodnog postupka nanošenja vozila za topikalnu dostavu. Na primer, formulacija se može naneti ručno, upotrebom aplikatora, ili postupkom koji obuhvata oba. Nakon nanošenja, formulacija se može aktivirati u koži subjekta, npr., utrljavanjem.
Nanošenja se mogu izvesti više puta dnevno ili na jednodnevnoj bazi. Na primer, formulacija se može primeniti na kožu subjekta jednom dnevno, dva puta dnevno, ili više puta na dan, ili se može naneti jednom svaka dva dana, jednom svaka tri dana, ili približno jednom svake nedelje, jednom svake dve nedelje, ili jednom svakih nekoliko nedelja.
[0069] Neki primeri izvođenja ovde su usmereni na postupak dostavljanja terapeutskog agensa do ćelije. Na primer, neki primeri izvođenja su usmereni na postupak dostavljanja terapeutskog agensa kao što su siRNK u ćeliju. Pogodne ćelije za upotrebu prema ovde opisanim postupcima uključuju prokariote, kvasac, ili više eukariotske ćelije, koje uključuju biljne i životinjske ćelije (npr., sisarske ćelije). U nekim primerima izvođenja, ćelije mogu biti humane fibrosarkom ćelije (npr., HT1080 ćelijska linija). U drugim primerima izvođenja, te ćelije mogu biti hepatične stelatne ćelije (LX2 ćelijska linija). U drugim primerima izvođenja, te ćelije ćelije kancera. U daljim primerima izvođenja, te ćelije mogu biti matične ćelije (pHSC ćelijska linija). Ćelijske linije koje su model sistemi za kancer, mogu se primeniti a koje uključuju, ali se ne ograničavaju na kancer dojke (MCF-7, MDA-MB-438 ćelijske linije), U87 glioblastom ćelijska linija, B16F0 ćelije (melanom), HeLa ćelije (rak grlića materice), A549 ćelije (kancer pluća), i pacovske tumor ćelijske linije GH3 i 9L. U ovim primerima izvođenja, formulacije opisane ovde mogu se primeniti za transfektovanje ćelija. Ovi primeri izvođenja mogu da uključe dovođenje u konatkt ćelije sa ovde opisanom formulacijom koja uključuje terapeutski agens, da bi na taj način dostavila terapeutski agens do ćelije.
[0070] Ovde su opisani postupci za lečenje stanja okarakterisanog abnormalnom fibrozom, koji mogu da uključe davanje terpeutski efektivne količine ovde opisane formulacije. Ta stanja okarakterisana abnormalnom fibrozom mogu da uključe kancer i/ili fibroznu bolest. Vrste kancera koji se mogu lečiti ili ublažiti ovde opisanom formulacijom uključuju, ali nisu ograničeni na, kancer pluća, kancer pankreasa, kancer dojke, kancer jetre, kancer želuca, i kancer kolona. U jednom primeru izvođenja, kancer koji se može lečiti ili ublažiti je kancer pankreasa. U još jednom primera izvođenja, kancer koji se može lečiti ili ublažiti je kancer pluća. Vrste fibrotične bolesti koji se može lečiti ili ublažiti ovde opisanom formulacijom uključuju, ali nisu ograničeni na, fibroza jetre, ciroza jetre, pankreatitis, fibroza pankreasa, cistična fibroza, pravljenje ožiljaka na glasnim žicama, fibroza glasnih žica, fibroza grkljana, fibroza pluća, idiopatska plućna fibroza, cistična fibroza, mijelofibroza, retroperitonealna fibroza, i nefrogena sistemska fibroza. U jednom primeru izvođenja, stanje koje se može lečiti ili ublažiti je fibroza jetre.
[0071] Ovde opisane formulacije ili farmaceutske kompozicije mogu se davati subjektu bilo kojim pogodnim sredstvom. Neograničavajući primeri postupaka davanja uključuju,između ostalog, (a) davanje putem injekcije, subkutano, intraperitonealno, intravenozno, intramuskularno, intradermalno,
1
intraorbitalno, intracapsularno, intraspinalno, intrasternalno, ili slično, što uključuje dostavu putem infuzione pumpe; (b) davanje lokalno kao što je injektovanje direktno u zonu bubrega ili srca, npr., depot implantacijom; kao i na način koji stručnjak iz ove oblasti smatra prikladnim za dovođenje aktivnog jedinjenja sa živim tkivom.
[0072] Farmaceutske kompozicije pogodna za davanje uključuju formulacije (npr., formulacija koje mogu da uključe jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) u kojima su sadržani aktivni sastojci u količini efektivnoj da se postigne nameravana svrha. Terpeutski efektivna količina ovde opisanih jedinjenja koje je potrebna kao doza zavisiće od puta davanja, vrste žvotinja, uključujući čoveka, koja se tretira, i fizičkih karakteristika specifične životinje koja je uzeta u obzir. Doza se može podesiti za postizanje željenog efekta, ali će zavisiti od takvih faktora kao što su masa, ishrana, konkurentni lekovi i drugi faktori koje stručnjaci iz oblasti medicine prepoznaju. Određenije, terpeutski efektivna količina znači količinu jedinjenja efektivna da spreči, zaobiđe ili ublaži simptome bolesti ili produži preživljavanje tretiranog subjekta. Određivanje terpeutski efektivne količine je dobro unutar sposobnosti stručnjaka iz ove oblasti, naročito u svetlu ovde detaljno obezbeđenog pronalaska.
[0073] Kako će biti očigledno stručnjaku iz ove oblasti, korisna in vivo doza koja se daje i određeni način davanja zavisiće od starosti, mase, vrste sisara koji se tretira, određenog jedinjenja koje se upošljava, i specifične upotrebe za koju se ova jedinjenja upošljavaju. Određivanje efektivnih doznih nivoa, što su dozni nivoi potrebi da se posigne željeni rezultat, može se postići od strane stručnjaka upotrebom rutinskih farmakoloških postupaka. Tipično, humane kliničke primene proizvoda započinju se nižim doznim nivoima, sa povećavanjem doznih nivoa do dostizanja željenog efekta. Alternativno, prihvatljiva in vitro ispitivanja mogu se primeniti za utvrđivanje korisnih doza i putevi davanja kompozicija identifikovanih ovih postupaka upotrebom utvrđenih farmakoloških postupaka.
[0074] U ne-humanim životinjskim ispitivanjima, primene potencijalnih proizvoda započinju se pri višim doznim nivoima, sa smanjivanjem doze do trenutka kada se više ne postiže željeni efekat ili kada nestanu štetni efekti. Doza može široko da varira, u zavisnosti od željenih efekata i terapeutske indikacije. Tipično, doze mogu biti oko 10 mikrograma/kg do oko 100 mg/kg telesne mase, poželjno oko 100 mikrograma/kg do oko 10 mg/kg telesne mase. Alternativno doze mogu biti bazirane i izračunate na osnovu površine pacijenta, što je jasno stručnjacima iz ove oblasti.
[0075] Precizna formulacija, put davanja i doza za farmaceutske kompozicije mogu biti odabrani od strane pojedinačnog fizijatra u pogledu stanja pacijenta. (Videti npr., Fingl et al.1975, u "The Pharmacological Basis of Therapeutics", sa posebnim pozivanjem na D.1, str.1). Tipično, dozni opseg
1
kompozicije koja se daje pacijentu može biti od oko 0.5 do oko 1000 mg/kg pacijentove telesne mase. Doza može biti jedna ili serije od dve ili više datih u toku od jednog ili više dana, kako je potrebno pacijentu. U slučajevima u kojima su humane doze za jedinjenja utvrđene za najmanje neko stanje, doza že biti približno ista, ili doze koje su oko 0.1% do oko 500%, poželjnije oko 25% do oko 250% utvrđenog humanog doziranja. Tamo gde humano doziranje nije utvrđeno, što je u slučaju novo-otkrivenih farmaceutskih kompozicija, pogodno humano doziranje može se zaključiti iz ED50 ili ID50 vrednosti, ili druge pogodne vrednosti izvedene iz in vitro ili in vivo ispitivanja, kao što je kvalifikovana ispitivanjima toksičnosti i ispitivanjima efikasnosti kod životinja.
[0076] Treba zapaziti da lekar treba da zna kako i kada da završi, prekine, ili podesi davanje zbog toksičnosti ili disfunkcije oragan. Nasuprot tome, lekar bi takođe trebao da zna da podesi lečenje na više dozne nivoe ukoliko klinički odgovor nije adekvatan (isključujući toksičnost). Jačina date doze u vođenju poremećaja od interesa zavisiće od ozbiljnosti stanja koje se tretira i puta davanja. Ozbiljnost stanja može se, na primer, proceniti, delom, standardnim postupcima prognostičke evaluacije. Dalje, doza i možda i frekventnost doziranja, takođe varira u zavisnosti od starosti, telesne mase, i odgovora pojedinačnog pacijenta. Program koji se može porediti sa gore razmatranim može biti onaj koji se koristi u veterinarskoj medicini.
[0077] Iako se tačna doza određuje na lek-za-lek bazi, u većini slučajeva, mogu se izvesti neke generalizacije u pogledu doze. Dnevni dozni režim za doraslog humanog pacijenta može biti, na primer, doza od oko 0.1 mg do 2000 mg svakog aktivnog sastojka, poželjno oko 1 mg do oko 500 mg, npr.5 do 200 mg. U drugim primerima izvođenja, koristi se intravenozna, subkutana, ili intramuskularna doza svakog aktivnog sastojka od oko 0.01 mg do oko 100 mg, poželjno oko 0.1 mg do oko 60 mg, npr. oko 1 do oko 40 mg. U slučajevima davanja farmaceutski prihvatljive soli, doze se mogu izračunati kao slobodna baza. U nekim primerima izvođenja, formulacija se daje 1 do 4 puta na dan. Alternativno formulacije se mogu davati kontinulanom intravenoznom infuzijom, poželjno na dozu svakog aktivnog sastojka čak do oko 1000 mg na dan. Kako će biti shvaćeno od strane stručnjaka, u određenim situacijama može biti potrebno da se ovde opisane formulacije daju u količinama u višku, ili čak dosta u višku u odnosu na, prethodno naveden, poželjan dozni opseg kako bi se efikasno i agrsivno lečile veoma agrsivne bolesti i infekcije. U nekim primerima izvođenja, formulacije se daju tokom perioda continualne terapije, na primer tokom nedelje ili više, ili tokom meseca ili godina.
[0078] Dozne količina i interval mogu se podesiti individualno kako bi se obezbedili plazma nivoi aktivnog ostatka koji je dovoljan da se održe modulacioni efekti, ili minimalna efektivna koncentracija (MEC). MEC varira za svako jedinjenje, ali se može proceniti iz in vitro podataka. Doze potrebne da se
1
posigne MEC zavisiće od pojedinačnih karakteristika i puta davanja. Međutim, HPLC ogledi ili bioogledi mogu se primeniti za određivanje plama koncentracija.
[0079] Dozni intervali se takođe mogu odrediti upotrebom MEC vrednosti. Kompozicije se mogu davati upotrebom režima koji održava plazma nivoe iznad MEC tokom 10-90% vremena, poželjno između 30-90% i najpoželjnije između 50-90%.
[0080] U slučajevima lokalnog davanja ili selektivnog preuzimanja, efektivna lokalna koncentracija leka ne mora biti povezana sa koncentracijom u plazmi.
[0081] Količina date formulacije može zavisiti od subjekta koji se tretira, težine subjekta, ozbiljnosti bola, načina davanja i procene nadležnog lekara.
[0082] Ovde opisane formulacije (npr., formulacija koje mogu da uključe jedinjenje, retinoid, drugi lipid, stabilišući agens, i/ili terapeutski agens) mogu se proceniti za efikasnost i toksičnost upotrebom poznatih postupaka. Na primer, toksičnost određenog jedinjenja, ili podskupa jedinjenja, koje deli određene hemijske ostatke, mogu se utvrditi određivanjem in vitro toksičnosti prema ćelijskoj liniji, kao što su sisar, a poželjno čovek, ćelijska linija. Rezultati takvih ispitivanja često predviđaju toksičnost kod životinja, kao što su sisari, ili određenije, ljudi. Alternativno, toksičnost određenog jedinjenja u životinjskom modelu, kao što su miševi, pacovi, zečevi, ili majmuni, može se odrediti upotrebom poznatih postupaka. Efikasnost određenog jedinjenja može se utvrditi upotrebom nekoliko poznatih postupaka, kao što su in vitro postupci, životinjski modeli, ili humana klinička ispitivanja. Poznati in vitro modeli postoje za skoro svaku klasu stanja, koje uključuju, ali se ne ograničavaju na kancer, kardiovaskularnu bolest, i razne imunološke disfunkcije. Slično, prihvatljivi životinjski modeli mogu se koristiti za doređivanje efikasnosti hemikalija za lečenje takvih stanja. Kada se bira model za određivanje efikasnosti, stričnjak se može voditi stanjem tehnike radi biranja pogodnog modela, doze, i puta davanja, i režima. Naravno, humana klinička ispitivanja takođe se mogu koristiti za određivanje efikasnosti jedinjenja kod ljudi.
[0083] Te formulacije mogu, ukoliko je poželjno, biti u pakovanju ili uređaju za ispuštanje koji može da sadrži jednu ili više jediničnih doznih oblika koji sadrže aktivan sastojak. To pakovanje može na primer da obuhvata metalnu ili plastičnu foliju, kao što je blister pakovanje. To pakovanje ili uređaj za ispuštanje može biti obezbeđen sa instrukcijama za davanje. To pakovanje ili uređaj za ispuštanje može takođe biti obezbeđeno sa napomenom povezanom kontejnerom u obliku prepisanom od strane državne agencije koja reguliše proizvodnju, upotrebu, ili prodaju farmaceutika, koja napomena ukazuje
1
odobrenje agencije u obliku leka za humano ili veterinarsko davanje. Takva napomena, na primer, može biti etiketa odobrena od strane U.S. Food i Drug Administration for prescription drugs, ili odobreni umetak proizvoda. Kompozicije koje obuhvataju jedinjenje formulisano u kompatibilnom farmaceutskom nosaču takođe se mogu pripremiti, smestiti u odgovarajući kontejner, i obeležiti za lečenje indikovanog stanja.
[0084] Podrazumeva se da, kod bilo kog ovde opisanog jedinjenja sa jednim ili više stereocentara, ukoliko apsolutna stereohemija nije ekspresno indikovana, tada svaki centar može nezavisno biti R-konfiguracija ili S-konfiguracija ili njihova mešavina. Tako, ovde obezbeđena jedinjenja mogu biti enantiomerno čiste ili stereoizomerne mešavine. Dodatno se podrazumeva da, kod bilo kog jedinjenja sa jednom ili više dvostrukih veza(a) generisanje geometrijskih izomera može da se definiše kao E ili Z pri čemu svaka dvostruka veza može nezavisno da bude E ili Z njihova mešavina. Slično tome, svi tautomerni oblici takođe se mogu uključiti.
[0085] Poželjno jedinjenja formule I u okviru obima ovog pronalaska navedena su u Tabeli 1. In vitro i in vivo podaci (videti niže) takođe su dati u Tabeli 1.
Tabela 1
1
2
[0086] Ovaj pronalazak može dalje biti objašnjen primerima pozivanjem na te primere. Ovi primeri su ilustrativni, samo, i nisu namenjeni da ograniče ovaj pronalazak.
EKSPERIMENTALNI DEO
Pripremanje ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoata (i-Pr-DC) [0087]
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol)
[0089] Mešavina 3-amino-1-propanola (14.5 mL, 19.0 mmol), 1-hloro-3-hidroksi propana (8.00 mL, 95.6 mmol) i H2O (∼50mL) refluksovana je preko 24 sata. Kalijum hidroksid (5.40 g) zatim je dodat. Nakon rastvaranja, sva voda je uparena kako bi ostalo viskozno ulje i velika količina kalijum hlorida. Oni su filtrirani i oprani suvim acetonom i dihlorometanom. Organska faza osušena je preko Na2SO4, filtrirana i uparena da bi ostalo ulje. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol) (12.5g).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat
[0090]
[0091] 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol) (12.5 g, 95.4 mmol) razblažen je u DCM (25 mL). Rastvor di-tertbutil dikarbonata (26.0 g, 119 mmol) u DCM (25 mL) polako je dodat uz umešavanjem pod pokrivačem gasa argona. Reakcija je ostavljena da se umešava preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat.
Faza 3: Pripremanje Intermedijera 3: ((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat
[0092]
[0093] Tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat (4.00 g, 17.3 mmol), Et3N (4.8 mL, 34.6 mmol) i DMAP (529 mg, 4.33 mmol) rastvoreni su hloroformu (50 mL). Dok je mešan u ledenoj kupki, rastvor miristoil hlorida dodat je tokom 15 min. Dodavanje je izvedeno na takav način da temperatura reakcije nije prelazila 30°C. Reakcija je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, MeOH (50 mL) i 0.9% slani rastvor (50 mL) dodat je radi gašenja reakcije. Organski sloj je odvojen i opran sa 1M NaHCO3. Rastvarač je osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio ((tert-
2
butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat kao ulje koje je upotrebljeno dalje bez dajeg prečišćavanja.
Faza 4: Pripremanje Intermedijera 4: azanediilbis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat TFA so
[0094]
[0095] ((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat (11.3 g, 17.3 mmol) rastvoren je u TFA/CHCl3 (1:1, 20 mL) i mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Materijal je zatim koncentrovan u vakuumu. To je ponovljeno drugi put. Materijal je zatim rastvoren u DCM i opran sa H2O, osušen sa Na2SO4, koncentrovan u vakuumu i osušen potpuno preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje azanediilbis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat TFA so (7.5 g).
Faza 5: Pripremanje i-Pr-DC: ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat [0096]
[0097] Azanediilbis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat TFA so (750 mg, 1.35 mmol) razblažena je sa DCM (5 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini N,N-dimetilglicina (154 mg, 1.49 mmol), HATU (616 mg, 1.62 mmol) i DIEA (495 uL, 2.84 mmol) u DCM (5 mL). Boca je prozračena argonom i ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) ditetradekanoat (465 mg). QTOF MS ESI+: m/z 639.6 (M H).
Pripremanje (Z)-((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil)dioleat
(i-Pr-DODC)
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol
[0099]
[0100] Mešavina 3-amino-1-propanola (14.5 mL, 19.0 mmol), 1-hloro-3-hidroksi propana (8.00 mL, 95.6 mmol) i vode (50 mL) refluksovana je preko 24 sata. Kalijum hidroksid (5.40 g) zatim je dodat. Nakon rastvaranja, sva voda je uparena kako bi ostalo viskozno ulje i velika količina kalijum hlorida. Oni su filtrirani i oprani suvim acetonom i dihlorometanom. Organska faza osušena je preko Na2SO4, filtrirana i uparena da bi ostalo ulje. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol) (12.5g).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat
[0101]
[0102] 3,3'-azanediilbis(propan-1-ol) (12.5 g, 95.4 mmol) razblažen je u DCM (25 mL). Rastvor di-tertbutil dikarbonata (26.0 g, 119 mmol) u DCM (25 mL) polako je dodat uz umešavanjem pod pokrivačem Ar gasa. Reakcija je ostavljena da se umešava preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana.
Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat.
Faza 3: Pripremanje Intermedijera 3: (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) dioleat [0103]
[0104] tert-butil bis(3-hidroksipropil)karbamat, trietilamin i DMAP rastvoreni su hloroformu. Dok je
2
mešan u ledenoj kupki, rastvor oleil hlorida dodat je tokom 15 minuta. Dodavanje je izvedeno na takav način da temperatura reakcije nije prelazila 30°C. Reakcija je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, MeOH (50 mL) i 0.9% slani rastvor (50mL) dodat je radi gašenja reakcije. Organski sloj je odvojen i opran sa 1M NaHCO3. Rastvarač je osušen sa Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) dioleat kao ulje koje je upotrebljeno dalje bez dajeg prečišćavanja.
Faza 4: Pripremanje Intermedijera 4: (Z)-azanediilbis(propan-3,1-diil) dioleat TFA so
[0105]
[0106] (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) dioleat (13.2 g, 17.3 mmol) rastvoren je u TFA/CHCl3 (1:1, 20 mL) i mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta. Materijal je zatim koncentrovan u vakuumu. To je ponovljeno drugi put. Materijal je zatim rastvoren u DCM i opran sa H2O, osušen sa Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje (Z)-azanediilbis(propan-3,1-diil) dioleat TFA so.
Faza 5: Pripremanje i-Pr-DODC: (Z)-((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) dioleat [0107]
[0108] (Z)-azanediilbis(propan-3,1-diil) dioleat TFA so (750 mg, 1.13 mmol) razblažena je sa DCM (5 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini N,N-dimetilglicina (128mg, 1.24mmol), HATU (517mg, 1.36mmol) i DIEA (413uL, 2.37mmol) u DCM (5mL). Boca je prozračena argonom i ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom daje (Z)-((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(propan-3,1-diil) dioleat (450 mg). QTOF MS ESI+: m/z 747.7 (M H).
Pripremanje ((2-(dimetilammo)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat, (i-DC)
2
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: ((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
[0110]
[0111] N-Boc dietanolamin (MW 205.25; 8.4 g, 0.041 mol), trietilamin (MW 101.19; 11.5 ml, 0.083 mol) i 4-(dimetilamino)piridin (MW 122.17; 1.3 g, 0.011 mol) rastvoreni su hloroformu (170 mL). Dok je mešan u kupki led/voda, rastvor miristoil hlorida (MW 246.82; 22 mL, 80.9 mmol) u 100 mL hloroforma dodat je ukapavanjem. Reakciona mešavina je zatim izvađena iz ledene kupke, i umešavanje je nastavljeno na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Mešavina 200 mL metanola i 200 ml 0.9% slanog rastvora dodata je radi gašenja reakcije. Umešavanje je zaustavljeno i organski sloj je izolovan. Rastvarač je uklonjen rotacionim uparavanjem da bi se dobio ((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat kao bezbojno ulje (25.7 g) koje je upotrebljeno dalje bez dajeg prečišćavanja.
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so
[0112]
[0113] Rastvoru ((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata (33.0 g, 0.053 mol) u 100 ml hloroforma dodata je trifluorosirćetna kiselina (150 mL, 2.02 mol). Reakciona mešavina mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Kada je rastvarač uklonjen rotacionim uparavanjem, dobijena meka čvrsta materija je rekristalizovana iz 80 ml metanola da bi se dobila azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (16.6 g) kao bela čvrsta materija.
Faza 3: Pripremanje i-DC: ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
2
[0115] Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so(10g, 16 mmol) razblažen je sa dimetilglicinom (42.5g, 25 mmol), DCC (4.7 g, 23 mmol) i DIEA (6.33 mL, 40 mmol) u Piridinu (20 mL). Boca sa okruglim dnom je isprana argon gasom i reakciona mešavina je zagrevana na 55°C preko noći. Sledećeg dana, reakciona mešavina je koncentrovana. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane frakcije koncentrovane su da bi se dobio ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat.
Pripremanje ((3-(dimetilamino)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (i-Et-DC, ovde takođe označen kao Et104)
[0116]
Pripremanje i-Et-DC: ((3-(dimetilamino)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat [0117]
[0118] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (1.50 g, 2.85 mmol) razblažena je sa DCM (10 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini HCl soli 3-(dimetilamino)propionske kiseline (482 mg, 3.14 mmol), HATU (1.30 g, 3.42 mmol) i DIEA (1.04 mL, 5.98 mmol) u DCM (10 mL). Boca sa okruglim dnom je isprana gasom argona i reakciona mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane frakcije koncentrovane su i umešan u DCM (20 mL) i 10% K2CO3(20 mL) na 0-5°C tokom 30 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje ekstraktovan sa DCM (2 x10 mL). Kombinovane organske materije umešane su sa MgSO4tokom 30 min na 0-5°C, filtrirane, oprane sa
2
DCM, i koncentrovane da bi se dobio ((3-(dimetilamino)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (1.01 g). QTOF MS ESI+: m/z 625.6 (M H).
Pripremanje (Z)-((3-(dimetilammo)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat
i-Et-DODC
[0119]
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat [0120]
[0121] N-Boc dietanolamin (17.8 g, 0.087 mol), trietilamin (24.4 mL, 0.176 mol) i 4-(dimetilamino)piridin (2.76 g, 0.023 mol) rastvoreni su u 350 ml hloroforma. Dok je mešan, rastvor oleil hlorida (61.6 g, 0.174 mol) u 100 ml hloroforma dodat je tokom 10 min (Alternativno, hloroform rastvor N-Boc dietanolamina uronjen je u kupku led/voda dok je dodavan oleil hlorid). Dodavanje je izvedeno na takav način da temperatura reakcione mešavine ne prelazi 50°C. Reakciona mešavina mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Mešavina 200 ml metanola i 200 ml 0.9% slanog rastvora dodata je radi gašenja reakcije. Organski sloj je odvojen i opran sa 2 × 100 ml razblaženog vodenog natrijum bikarbonata. Rastvarač je uklonjen rotacionim uparavanjem da bi se dobio (Z)-((tertbutoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat kao bledo žuto ulje (59.5 g). Ovaj materijal upotrebljen je u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.1H NMR (400 MHz, CDCl3) 0.87 (t,6H, CH3), 1.20-1.40 (m, 40H, CH2), 1.45 (s, 9H, tBu CH3), 1.59 (m, 4H, CH2CH2C(=O)), 2.00(m, 8H, CH2CH=CH), 2.33 (t, 4H, CH2C(=O)), 3.48 (m, 4H, NCH2CH2O), 4.18 (m, 4H,NCH2CH2O), 5.33 (m, 4H, CH=CH).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so
2
[0123] (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (59.5 g, 0.081 mol) dvaput je tretiran sa 100 ml trifluorosirćetne kiseline (100 mL, 1.35 mol) i 100 ml hloroforma. Svako sesastojalo od mešanja na sobnoj temperaturi tokom 10 min, a rastvarač je uklonjen rotacionim uparavanjem na kraju svakog tretmana. Ostatak je rastvoren u 200 ml metilen hlorida, a mešavina je oprana sa 100 ml vode dva puta. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu upotrebom mešavine metanola i metilen hlorida kao eluenta da bi se dobila (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so (44.0 g).1H NMR (400 MHz, CDCl3) 0.87 (t, 6H, CH3), 1.20-1.40 (m, 40H, CH2), 1.59 (m, 4H, CH2CH2C(=O)),2.00 (m, 8H, CH2CH=CH), 2.33 (t, 4H, CH2C(=O)), 3.31 (m, 4H, NCH2CH2O), 4.38 (m, 4H, NCH2CH2O), 5.33 (m, 4H, CH=CH).
Faza 3: Pripremanje i-Et-DODC: (Z)-((3-(dimetilamino)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata [0124]
[0125] (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so (1.50 g, 2.37 mmol) razblažena je sa DCM (10 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini HCl soli 3-(dimetilamino)propionske kiseline (383mg, 2.49 mmol), HATU (1.03 g, 2.72 mmol) i DIEA (831 uL, 4.77 mmol) u DCM (10 mL). Boca sa okruglim dnom je isprana gasom argona i reakciona mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane frakcije koncentrovane su i umešane u DCM (20 mL) i 10% K2CO3(20 mL) na 0-5°C tokom 30 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje ekstraktovan sa DCM (2 x10 mL). Kombinovane organske materije umešane su sa MgSO4tokom 30 min na 0-5°C, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio (Z)-((3-(dimetilamino)propanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat. QTOF MS ESI+: m/z 733.6 (M H).
Pripremanje ((4-(dimetilamino)butanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata [i-Prop-DC (ovde takođe označen kao Pr104)]
[0127] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (1.00 g, 1.90 mmol) razblažena je sa DCM (5 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini HCl soli 4-(Dimetilamino) buterne kiseline (382 mg, 2.28mmol), HATU (867 mg, 2.28 mmol) i DIEA (728 uL, 4.18 mmol) u DCM (5 mL). Boca sa okruglim dnom je isprana gasom argona i reakciona mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane frakcije koncentrovane su i umešane u DCM (20 mL) i 10% K2CO3(20 mL) na 0-5°C tokom 30 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje ekstraktovan sa DCM (2 x10 mL).
Kombinovane organske materije umešane su sa MgSO4tokom 30 min na 0-5oC, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio ((4-(dimetilamino)butanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat. LCMS ESI+: m/z 639.6 (M H).
Pripremanje (Z)-((4-(dimetilammo)butanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata
[i-Prop-DODC (ovde takođe označen kao Pr104-DO)]
[0128]
1
[0129] Sinteza (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA soli prethodno je opisana. (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so (1.00 g, 1.58 mmol) razblažena je sa DCM (5 mL) i dodata prethodno aktiviranoj mešavini HCl soli 4-(Dimetilamino) buterne kiseline (317 mg, 1.89 mmol), HATU (719 mg, 1.89 mmol) i DIEA (606 uL, 3.48 mmol) u DCM (5 mL). Boca sa okruglim dnom je isprana gasom argona i reakciona mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane frakcije koncentrovane su i umešane u DCM (20 mL) i 10% K2CO3(20 mL) na 0-5°C tokom 30 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje ekstraktovan sa DCM (2 x10 mL). Kombinovane organske materije umešane su sa MgSO4tokom 30 min na 0-5°C, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio (Z)-((4-(dimetilamino)butanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat. LCMS ESI+: m/z 747.7 (M H).
Pripremanje (Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata (S104-DO) [0130]
[0131] Sinteza (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA soli prethodno je opisana. (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so (4.06 g, 6.41 mmol) mešana je u DCM (60 mL) sa 10% K2CO3(30 mL) na 0-5°C. Nakon 30 min, organska faza je odvojena , a vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (30 mL).
Kombinovane organske faze umešane su sa MgSO4tokom perioda od 30 min na 0-5°C, filtriran i oprane sa DCM (∼30 mL). Kombinovanim filtratima dodati su 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetna kiselina (1.26 g, 7.70 mmol), EDC HCl so (1.84 g, 9.62 mmol), DMAP (78.3 mg, 0.64 mmol) i tanka suspenzija mešana je preko noći na sobnoj temperaturi. Sledećeg dana, H2O (60 mL) i MeOH (30 mL) su dodati i nakon mešanja tokom 10 min, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM . Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani. Sirovi materijal filtriran je kroz čep silicijum dioksida i preuzet u DCM (40 mL), a PBS (pH=11, 50mL) je dodat. Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom ∼10 min. Naknadno, organska faza je odvojena, a vodena faza ekstraktovana je ponovo sa DCM (15 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4) tokom 30 min, filtrirane, oprane sa DCM, i
2
koncentrovane da bi se dobio (Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (3.44 g). LCMS ESI+: m/z 780.2 (M H).
Pripremanje ((5-(dimetilamino)pentanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata (C104)
[0132]
[0133] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (730 mg, 1.14 mmol) mešana je u DCM (20 mL) sa 10% K2CO3(10 mL) na 0-5 °C. Nakon 30 min, organska faza je odvojena, a vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (10 mL). Kombinovane organske faze umešane su sa MgSO4tokom perioda od 30 minuta na 0-5°C, filtrirane i oprane sa DCM (10 mL). Kombinovanim filtratima su dodati 5-(dimetilamino)pentanska kiselina (248 mg, 1.37 mmol), EDC HCl so (328 mg, 1.71 mmol), DMAP (14 mg, 0.114 mmol) i tanka suspenzija mešana je preko noći na sobnoj temperaturi, nakon čega rastvor postaje bistar. Sledećeg dana, H2O (20mL) i MeOH (10mL) su dodati i nakon mešanja tokom 10 min, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM . Kombinovani organski ekstrakti su koncentrovani. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 100% etil acetatom praćeno sa 10% MeOH/DCM, prečišćenio ostatak preuzet je u DCM (25mL) i PBS (pH=11, 25mL).
Mešavina mešana je na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Naknadno, organska faza je izdvojena, a vodena faza ekstraktovana ponovo sa DCM (15 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4) tokom 30 min, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio ((5-(dimetilamino)pentanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (405 mg). LCMS ESI+: m/z 654.1 (M H).
Pripremanje ((2-((2-(dimetilamino)etil)sulfonil)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetra- dekanoata
(SO2-S104)
[0135] Sinteza ((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata, takođe poznatog kao S104, opisana je. U ((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat u boci sa okruglim dnom, prozračena argonom dodat je DCM (10 mL). Rastvor je ohlađen ledeno hladnom kupkom. U to, dodaje se mCPBA (rastvor u DCM) polako tokom 5 min. Ledena kupka je uklonjena nakon dodavanja, a reakcija je ostavljena da se umešava preko noći na sobnoj temperaturi. Nakon 3.5 sata, 2M DMA/THF (4.55 mL) polako je dodat i reakciona mešavina je ostavljena da se umešava preko noći. Reakciona mešavina je zatim razblažena sa DCM to 75 mL. Oprana sa H2O (2 x 50 mL) i 10% K2CO3(50 mL). Ponovo su ekstraktovana sva vodena pranja sa DCM (40 mL).
Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4), filtrirane, i koncentrovane da bi se dobilo bezbojno ulje. Reakciona mešavina je koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa etil acetat/MeOH gradijentom daje ((2-((2-(dimetilamino)etil)sulfonil)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (540 mg). LCMS ESI+: m/z 704.0 (M H).
Pripremanje ((((2-(dimetilamino)etil)tio)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata (TU104)
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
4
[0138] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so rastvorena je u DCM (50 mL) i PBS (pH=11, 50mL) je dodat. Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Naknadno, organska faza je odvojena, a vodena faza ekstraktovana ponovo sa DCM (25 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4) tokom 30 min, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat kao slobodna baza.
Faza 2: Pripremanje TU104: ((((2-(dimetilamino)etil)tio)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata
[0139]
[0140] Trihlorometil hloroformat (takođe poznat kao difosgen) (257 uL, 2.13 mmol) dodat je rastvoru 2-(dimetilamino)etantiol HCl soli (302 mg, 2.13 mmol) u suvom DCM (20 mL) i umešan pod pokrivačem argona na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Naknadno, DCM i višak difosgena uklonjeni su u vakuumu. Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat slobodna baza (1068 mg, 2.03 mmol), DCM (20 mL) i trietilamin (580 uL, 4.16 mmol) zatim su dodati. Nakon 16 h na sobnoj temperaturi reakciona mešavina razblažena je sa DCM i oprana sa 1M HCl (75 mL), H2O (75 mL) i PBS (pH=11, 75mL), osušena (MgSO4), filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem etil acetatom praćeno sa DCM/MeOH gradijentom daje ((((2-(dimetilamino)etil)tio)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (120 mg). LCMS ESI+: m/z 657.5 (M H).
Pripremanje ((2-(2-(dimetilammo)etoksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata (O104)
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: ((2-bromoacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat [0142]
[0143] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (1500mg, 2.34mmol) rastvorena je u DCM (20mL) i smeštena u ledenu kupku. Bromoacetil bromid (214uL, 2.46mmol) dodat je praćeno trietilaminom (685uL, 4.91 mmol). Ledena kupka je uklonjena, a reakcija ostavljena da se umešava preko noći na sobnoj temperaturi pod pokrivačem inertnog gasa. Sledećeg dana, razblažena sa je DCM do 100mL. Opran sa 1M HCl(75mL), H2O (75ml), zasićenim NaHCO3rastvorom (75mL) i zasićenim fiziološkim rastvorom (75mL). Ponovo su ekstraktovana sva vodena pranja sa DCM (25mL). Organske materije osušene su sa MgSO4, filtrirane i koncentrovane u vakuumu. Prečišćene hromatografijom na silika gelu i eluirane sa 100% etil acetatom. Grupisane su i koncentrovane frakcije da bi se dobio ((2-bromoacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (1220mg).
Faza 2: Pripremanje O104: ((2-(2-(dimetilamino)etoksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
[0144]
[0145] U bocu sa okruglim dnom opremljena sa mešačem, dodat je ((2-bromoacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (1.22 g, 1.87 mmol), N,N-dimetiletanolamin (197 uL, 1.96 mmol), kalijum jodid (6.2 mg, 0.0374 mmol) i suvi THF (25 mL). Dobijeni rastvor je ohlađen do -40°C. DBU (588 uL, 3.93 mmol) dodat je ukapavanjem preko 5 min i reakcija je zagrejana na 0°C tokom 2 sata. Reakciona mešavina je koncentrovana. Ostatak je preuzet sa DCM , 1M HCl (12 mL) dodat je, i bifazna mešavina umešane je tokom 15 min. Zatim je bazifikovana upotrebom PBS (pH=11). Organski sloj je izolovan, osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa 100% etil acetatom praćeno sa DCM/MeOH gradijentom daje ((2-(2-(dimetilamino)etoksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (53 mg). LCMS ESI+: m/z 655.6 (M H).
Pripremanje ((2-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetra-dekanoata (HEDC-M1)
[0146]
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: ((2-(benziloksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat [0147]
[0148] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so mešana je u DCM (25 mL) sa 10% K2CO3(12.5 mL) na 0-5°C. Nakon 30 min, organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje je ekstraktovan sa DCM (12 mL). Kombinovane organske faze umešane su sa MgSO4tokom 30 min na 0-5°C, filtrirane, oprane sa DCM (12 mL). Kombinovanim filtratima su dodati benziloksi sirćetna kiselina (402 uL, 2.81 mmol), EDC HCl so (673 mg, 3.51 mmol), i DMAP (29 mg, 0.234 mmol). Suspenzija je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, H2O (25 mL) i MeOH (12 mL) dodat je i nakon mešanja tokom 10 min izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM (25 mL).
Kombinovani organski ekstrakti osušeni su sa MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa heksanima/etil acetat gradijentom daje ((2-(benziloksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (1.28 g).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: ((2-hidroksiacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
[0150] ((2-(benziloksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (1.28 g, 1.80 mmol) rastvoren je u boci sa okruglim dnom sa MeOH (20 mL). Boca je začepljena i prozračena argonom.10% Pd/C (135 mg) dodat je i boca je još jednom prozračena argonom. Sav vazduh uklonjen je vakuum pumpom, a zatim 8" balon ispunjen H2gasom je dodat. Reakcija je ostavljena da se umešava energično na sobnoj temperaturi. Nakon 30 min, reakciona mešavina je filtrirana (celit), oprana metanolom, koncentrovana do ostatka, preuzeta u DCM (25mL) i 10% K2CO3(25mL). Mešavina je mešana tokom 15 min, a zatim je izolovan organski sloj. Vodeno pranje ponovo je ekstraktovana sa DCM (15 mL). Kombinovane organske materije osušene su sa MgSO4, filtrirane i koncentrovane da bi se dobio ((2-hidroksiacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (990 mg).
Faza 3: Pripremanje HEDC-M-1: ((2-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) di-tetradekanoat
[0151]
[0152] ((2-hidroksiacetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (990 mg, 1.70 mmol) mešana je u DCM (20 mL) i 4-Dimetilamino-buterne kiseline (268mg), EDC HCl so (487mg) i DMAP (21mg) dodat je. Suspenzija je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, H2O (20mL) i MeOH (10mL) dodati su i nakon mešanja tokom 10 minuta izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM (20 mL). Kombinovani organski ekstrakti osušeni su sa MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom. Grupisane i koncentrovan frakcije koncentrovane su i preuzete sa DCM (25 mL) i PBS (pH = 11, 25 mL). Mešavina mešana je na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Naknadno, organska faza je izolovana, a vodena faza ekstraktovana je ponovo sa DCM (25 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane, i koncentrovane da bi se dobio ((2-((4-(dimetilamino)butanoil)oksi)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (672 mg). LCMS ESI+: m/z 697.6 (M H).
Pripremanje (Z)-((5-(dimetilammo)pentanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (C104-DO)
[0153]
[0154] Sinteza (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA soli prethodno je opisana. (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat TFA so (1.50 g, 2.37 mmol) mešana je u DCM (20 mL) sa 10% K2CO3(10 mL) na 0-5°C. Nakon 30 min, organska faza je izolovana, a vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (10 mL).
Kombinovane organske faze umešane su sa MgSO4tokom perioda od 30 min na 0-5°C, filtrirane i oprane sa DCM (15 mL). Kombinovanim filtratima su dodati 5-(dimetilamino)pentanska kiselina (516 mg, 2.84 mmol), EDC HCl so (681 mg, 3.55 mmol), DMAP (29 mg, 0.237 mmol), a suspenzija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, nakon čega se obrazuje u bistar rastvor. Sledećeg dana, H2O (20 mL) i MeOH (10 mL) dodati su i nakon mešanja tokom 10 min, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM . Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovane. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom, grupisane i koncentrovane frakcije su preuzete sa DCM (25 mL) i PBS (pH=11, 25mL). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom ∼10 min. Naknadno, organska faza je izolovana , a vodena faza ekstraktovana je ponovo sa DCM (15 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4), filtrirane, i koncentrovane da bi se dobio (Z)-((5-(dimetilamino)pentanoil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (1.10 g). LCMS ESI+: m/z 761.7 (M H).
Pripremanje ((5-((dimetilamino)metil)tiofen-2-karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) di-tetradekanoata (T104)
[0156] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (1004 mg, 1.57 mmol) mešana je u DCM (20 mL) sa 10% K2CO3(20mL) na 0-5°C. Nakon 30 min, organska faza je izolovana, a vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (10 mL). Kombinovane organske materije su osušene sa MgSO4tokom 30 min na 0-5°C, filtrirane i oprane sa DCM (10 mL). Kombinovanim filtratima dodati su ((dimetilamino)metil)tiofen-2-karboksilna kiselina (350 mg, 1.89 mmol), EDC HCl so (452 mg, 2.36 mmol), i DMAP (19.2 mg, 0.157 mmol). Suspenzija je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, H2O (20 mL) i MeOH (10 mL) dodati su i nakon mešanja tokom 10 min, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM (25 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4), filtrirane, i koncentrovane. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa heksanima/etil acetat gradijentom, grupisane i koncentrovan frakcije preuzet su sa DCM (20 mL) i PBS (pH=11, 20mL). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom ∼10 min. Naknadno, organska faza je izolovana, a vodena faza ekstraktovana je ponovo sa DCM (15 mL). Kombinovane organske materije su osušene (MgSO4) tokom perioda od 30 min, filtrirane, oprane sa DCM, i koncentrovane da bi se dobio ((5-((dimetilamino)metil)tiofen-2-karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (482 mg). LCMS ESI+: m/z 693.6 (M H).
Pripremanje (Z)-((((2-(dimetilamino)etil)tio)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata (TU104-DO)
[0157]
4
[0158] Sinteza (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata prethodno je opisana. (Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (4.20 g, 5.72 mmol) rastvoren je u DCM (20 mL) i ohlađen do 0°C u ledenoj kupki. TFA (20 mL) dodat je i mešavina je ostavljena da se umešava pod pokrivačem inertnog gasa tokom 20 min. Naknadno, reakciona mešavina je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je pdoeljen između 10% K2CO3(20 mL) i DCM (20 mL), i umešan u ledenoj kupki tokom 20 min. Organski sloj je izolovan, osušen (MgSO4), i filtriran. Difosgen (1.38 mL, 11.4 mmol) dodat je u (Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) dioleat materijal u DCM i umešan pod pokrivačem inertnog gasa na sobnoj temperaturi. Sledećeg dana, DCM i višak difosgena uklonjeni su u vakuumu.2-(dimetilamino)etan tiol HCl so (4.05 g, 28.6 mmol) je preuzeta u DCM (50 mL) i trietilaminu (5.2 mL, 37.2 mmol) i dodata (Z)-((hlorokarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleatnom ostatku. Materijal je ostavljen da se umešava preko noći na sobnoj temperaturi. Sledećeg dana, razblažen je sa DCM i opran sa 0.3M HCl (75 mL), H2O (75 mL) i 10% K2CO3(75 mL). Ponovo su ekstraktovana sva vodena pranja sa DCM (25 mL).
Kombinovane organske materije osušene su preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM /MeOH gradijentom daje (Z)-((((2-(dimetilamino)etil)tio)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleat (1.90 g). LCMS ESI+: m/z 765.7 (M H).
Pripremanje (((3-(dimetilamino)propoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradeka-noata (CB104)
[0159]
[0160] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata prethodno je opisana. Difosgen (266 uL, 2.2 mmol) dodat je dimetilaminopropanolu (413 mg, 4.00 mmol) u DCM (10 mL) i umešan pod pokrivačem inertnog gasa na sobnoj temperaturi tokom 4 h. DCM i višak difosgena je uklonjen u vakuumu i azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat dodat je. Boca okruglog dna je prozračena argonom i DCM (10 mL) i trietilamin (859 uL, 6.16 mmol) su dodati. Materijal je ostavljen da se umešava preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona mešavina je zatim razblažena sa DCM i oprana sa 0.3M HCl (75 mL), H2O (75 mL) i 10% K2CO3(75 mL). Ponovo su ekstraktovana sva vodena pranja sa DCM (25 mL).
Kombinovane organske materije osušene su preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM /MeOH gradijentom daje (((3-(dimetilamino)propoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (87 mg).). LCMS ESI+: m/z 655.59 (M H).
Pripremanje (((2-(dimetilamino)etoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (CA104)
[0161]
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: (((4-nitrophenoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradeka-noata
[0162]
[0163] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so rastvorena je u suvom DCM (10 mL) i trietilamin (654 uL, 4.69 mmol) je dodat. Reakciona posuda prozračena je inertnim gasom i dodat je 4-nitrofenil hloroformat. Materijal je ostavljen da se umešava na RT preko noći. Reakciona mešavina ugašena je vodom (50 mL) i DCM (50 mL). Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj ekstraktovana dalje sa DCM (2 x 50 mL). Kombinovane organske materije osušene su preko MgSO4, filtrirane i koncentrovane.
Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa heksanima/etil acetat gradijentom daje (((4-nitrophenoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat.
Faza 2: Pripremanje CA104: (((2-(dimetilamino)etoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata
[0164]
[0165] (((4- nitrophenoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoatu, dodat je 2-dimetilaminoetanol (2 mL) i zagrevana na 140°C kondenzacionom kolonom tokom 20 min. Naknadno, sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH gradijentom da bi se dobio (((2-(dimetilamino)etoksi)karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (38 mg). LCMS ESI+: m/z 641.7 (M H).
Pripremanje ((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata (INT-4)
[0166]
[0167] Sinteza (Z)-((2-(dimetilamino)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) dioleata pripremljena je na sličan način kao i i-Prop-DODC uz supstituciju dimetilglicina sa 3-(dimetilamino)propionskom kiselinom. QTOF MS ESI+: m/z 720.1 (M H).
Pripremanje ((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradeka-noata (S104)
[0168]
Faza 1: Pripremanje intermedijera 1: hidrohlorid 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetne kiseline:
[0169]
[0170] Etanol (500 mL) je degaziran tri puta ponovljenom evakuacijom na 60 mBar tokom 1-2 minuta i ponovnim komprimovanjem azotom. Hlorosirćetna kiselina (36.9 g, 0.391 mol) dodata je, a je formiran bistar rastvor nakon umešavanja tokom 5 minuta na 17-20°C.2-(Dimetilamino)-etantiol hidrohlorid
4
(52.7 g, 0.372 mol) je dodat, a je formiran bistar rastvor nakon umešavanja tokom 20 minuta na 25°C. Čvrsti natrijum hidroksid (47.7 g, 1.19 mol) dodat je u porcijama tokom perioda od 20 minuta uz hlađenje radi održavanja temperature ispod 35°C – primećen je kratak period na 44°C. Primećeno je gotovo trenutno taloženje. Reakciona mešavina je podjednako zagrejana i umešana na 40°C tokom perioda od dva sata, na kojim tačkama je TLC pokazala završetak reakcije. Celit 545 (74 g) je dodat, a mešavina filtrirana kroz G3 staklom sinterovanu ploču tokom 6 minuta, opran etanolom (2 x 105 mL). Kombinovani mutni filtrati su upareni iz 50°C kupke kako bi se dobilo 110 g bele čvrste materije. Čvrsta materija rastvorena je u vodi (250 mL) zatim je pH podešena od 13.1 (temp.30°C) do 10.5 (temp 31°C), upotrebom koncentrovane HCl (5.5 mL) kako bi se dobio veoma bled žuti rastvor. Vodena faza je opran sa DCM (3x 100 mL) radi uklanjanja disulfidne nečistoće (sva 3 pranja su potreba). Koncentrovana HCl dodata je vodenoj fazi (pH 10.7, temp.22°C) dok pH nije bila 1.4 (57.5 mL dodati, temp.35°C). Vodena faza oprana je sa DCM (100 mL) i zatim koncentrovana do suvoće (temperatura kupke 55°C). Toluen (250 mL) je dodat, mešavina je koncentrovana do suvoće (temperatura kupke 55°C) i to je ponovljeno jednom kako bi se dobila vlažna bela čvrsta materija (98 g). Acetonitril (750 mL) je dodat čvrstoj materiji, mešavina je mešana na 55°C tokom perioda od 45 minuta, a zatim je filtrirana kroz G3 staklom sinterovanu ploču. Acetonitril (250 mL) je dodat filter kolaču, mešavina je mešana na 55°C tokom perioda od 25 minuta i zatim filtrirana kroz G3 staklom sinterovanu ploču, oprana acetonitrilom (50 mL). Kombinovani filtrati su koncentrovani do 300 mL, dajući težak, beli talog. Mešavina je ohlađena pod azotom i umešana na 0°C tokom perioda od 30 minuta. Talog je izolovan filtriranjem kroz G3 staklom sinterovanu ploču, a filter kolač opran je hladnim acetonitrilom (100 mL). Sušenje pod sniženim pritiskom tokom 3 dana daje 47.0 g (63%) hidrohlorida 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetne kiseline
Faza 2: Pripremanje S104: ((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata
[0171]
[0172] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (152 g, 238 mmol) mešana je sa DCM (2.3 L) i 10% kalijum bikarbonatom (1.15 L) na 0-5°C. Organska faza je odvojena, a vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (1.15 L). Kombinovane organske faze umešane su sa hidratom magnezijum sulfata (236 g) tokom perioda od 30 minuta na 0-5°C, filtrirane i oprane sa DCM (1.15 L). Kombinovanim filtratima dodat je hidrohlorid 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetne kiseline (57.0 g, 285 mmol), EDC hidrohlorid (68.4 g, 357 mmol) i DMAP (2.91 g, 23.8 mmol), i tanka suspenzija mešana je preko noći na sobnoj temperaturi, nakon kog perioda je formiran bistar rastvor. Voda (2.3 L) i metanol (460 mL) su dodati i nakon umešavanja tokom perioda od 10 minuta bistra organska faza je odvojena. Mutna vodena faza (pH 3.0) ekstraktovana je sa DCM (575 mL). Kombinovani organski ekstrakti koncentrovani su dajući 143 g sirovog materijala kao hidrohloridna so. Sirovi materijal (142.6g) transferovan je u destilacionu bocu sa DCM (500 mL), i dodat je etil acetat (1 L). Rastvor je zagrejan do destilacije na atmosferskom pritisku, i destilacija je nastavljena tokom perioda od 70 minuta radi obezbeđivanja temperature ostatka od 76°C. Ukupna zapremina od 1.4 L dobijena je dodavanjem etil acetata (800 mL), i dodat je etanol (70 mL). Bistar rastvor na 50°C je ohlađen do 37°C i zasejani kristali su dodati. Sa primećenim započinjanjem značajne kristalizacije tokom perioda od 10 minuta na 37-35°C, suspenzija je ohlađena i umešana na 0°C preko noći i talog je izolovan filtriranjem, i opran sa hladnim etil acetatom (210 mL). Sušenje do konstantne mase na sobnoj temperatura u uljnoj vakuum pupmi tokom perioda od 4.5 sata daje 134 g rekristalizovanog materijala kao hidrohloridne soli, bele čvrste materije.
[0173] Trikalijum fosfat (85 g, 0.40 mol) i dikalijum vodonik fosfat (226 g, 1.30 mol) dodati su prečišćenoj vodi (1.7 L), i formirani rastvor sa pH 10.9 je ohlađen do 18-20°C. DCM (1.3 L) i rekristalizovan S104 hidrohlorid (133.0 g, 0.188 mol) su dodati, a mešavina je mešana tokom perioda od 10 min minuta. Bistra organska faza je odvojena pri umerenoj brzini (tokom perioda od 35 minuta), i mutna vodena faza dalje je ekstraktovana sa DCM (650 mL). Kombinovane organske faze umešane su sa hidratom magnezijum sulfata (65 g) tokom perioda od 40 minuta, i mešavina je filtriran, oprana sa DCM (200 mL). Kombinovani filtrati upareni su iz 50°C vodene kupke pod sniženim pritiskom (do 20 mBar, na kom pritisku je nastavljeno uparavanje tokom jednog sata). Dodatno uparavanje iz 15-20°C vodene kupke na uljnoj vakuum pupmi, dalo je 126 g delimično čvrstog ulja. Hlađenje u kupki za hlađenje na -20°C daje potpuno očvršćavanje, a nakon sušenje na -20°C pod vakuumom tokom dva dana, dobija se 126 g ((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoata, takođe poznat kao S104. HPLC ukazuje 98.1% čistoću. QTOF MS ESI+: m/z 671.6 (M H).
Pripremanje (9Z,9'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanedil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoata) (S104-DMO)
[0174]
4
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: (9Z,9'Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoat)
[0175]
[0176] N-Boc-dietanolamin (454 mg, 2.21 mmol), miristolna kiselina (1000 mg, 4.42 mmol) i DMAP (54 mg, 0.442 mmol) rastvoren je u DCM (25 mL) i smešten u vodenoj kupki na sobnoj temperatura u bocu sa okruglim dnom prozračenom inertnim gasom. EDC HCl so (932 mg, 4.86 mmol) dodata je u 3 porcije preko 5 min. Reakcija je ostavljena da se umešava preko noći na sobnoj temperaturi pod pokrivačem inertnog gasa. Sledećeg dana, dodata je H2O (25 mL) i umešana tokom 10 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje je ekstraktovan sa DCM (50 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4) tokom 10 min, filtrirane i koncentrovane. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa heksanom/etil acetat gradijentom daje (9Z,9'Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoat) (1.10 g).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: (9Z,9'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoat)
[0177]
[0178] (9Z,9'Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoatu) (1100 mg, 1.77 mmol) u boci sa okruglim dnom dodat je DCM (10 mL) i smešten u ledenu kupku. TFA (10 mL) je dodat i mešavina je ostavljena da se umešava tokom 20 min. Reakciona mešavina je zatim koncentrovana. Toluen dodat je ostatku da pomogne u azeotropiji viška TFA. Ostatak je vraćen u ledenu kupku i PBS (pH=11, 25mL) i DCM (25mL) su dodati. Mešavina je mešana tokom 15 min, a organski sloj je zatim izolovan. Mutan vodeni sloj ekstraktovana je sa DCM (10 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4) na 0°C tokom 15 min, filtrirane i koncentrovane da bi se dobio (9Z,9'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoat) (923 mg).
Faza 3: Pripremanje S104-DMO: (9Z,9'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoata)
4
[0180] Mešavina (9Z,9'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoata) (923 mg, 1.77 mmol), 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetne kiseline (346 mg, 2.12 mmol) i EDC HCl so (509 mg, 2.66 mmol) suspendovani su u DCM (10 mL). DMAP (21.6 mg, 0.177 mmol) dodat je i mešavina je ostavljena da se umešava na sobnoj temperaturi preko noći. Sledećeg dana, H2O (10 mL) i MeOH (10 mL) su dodati i nakon mešanja tokom 10 min, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM (2 x 20 mL). Kombinovani organski ekstrakti su osušeni sa MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Posle prečišćavanja hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa DCM/MeOH, grupisane i koncentrovane frakcije preuzete su u DCM (25 mL) i PBS (pH=11, 25mL). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom ∼10 min. Naknadno, organska faza je izolovana, a vodena faza ekstraktovana je ponovo sa DCM (2 x 15 mL). Kombinovane organske faze su osušene (MgSO4), filtrirane, i koncentrovane da bi se dobio (9Z,9'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(tetradek-9-enoat) (589 mg). LCMS ESI+: m/z 667.6 (M H).
Pripremanje (R)-((1-metilpirolidin-2-karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat (Pro-DC) [0181]
Faza 1: Pripremanje Pro-DC: (R)-((1-metilpirolidin-2-karbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat
[0182]
[0183] Sinteza azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA soli prethodno je opisana.
Azanediilbis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat TFA so (1000 mg, 1.56 mmol) mešana je sa DCM (10 mL), a
4
N-Metil-L-Prolin (228 mg, 1.77 mmol), HOBt·H2O (239 mg, 1.77 mmol) su dodati. NMM (365 uL, 3.32 mmol) dodat je, a a rastvor postaje uglavnom bistar. Suspenzija EDC hidrohlorida (518 mg, 2.70 mmol), NMM (257 uL, 2.34 mmol) i DMAP (19 mg, 0.156 mmol) u DCM (10 mL) dodata je i mešavina je mešana tokom oko 12 sati na sobnoj temperaturi, nakon kog perioda je formiran bistar rastvor. Nakon toga, mešavina je razblažena sa DCM (50 mL) i oprana sa 10% K2CO3, vodena (60 mL). Organske materije su osušene sa MgSO4, filtrirane i koncentrovane. Dobijeno jedinjenje je prečišćeno sirovo hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa (0-10)% metanolom u DCM gradijentu da bi se dobio (R)-((1-metilpirolidin-2-karbonl)azanediil)bis(etan-2,1-diil) ditetradekanoat. LCMS ESI+: m/z 637.6 (M H).
Pripremanje (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilammo)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat) (S104-DLin)
[0184]
Faza 1: Pripremanje Intermedijera 1: (9Z,9Z,12Z,12'Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata)
[0185]
[0186] N-Boc-dietanolamin (5 g, 24.4 mmol), linoleinska kiselina (14.4 g, 51.2 mmol) i rastvoreni u DCM (100 mL). EDC HCl so (10.3 g, 53.7 mmol) dodata je praćeno sa DMAP (596 mg, 4.88 mmol). Reakcija je ostavljena da se umešava tokom oko 12 sati na sobnoj temperaturi pod pokrivačem inertnog gasa. Nakon toga, 50 mL vode i 50 mL metanola dodati su, a mešavina je mešana tokom 10 min. Organski sloj je izolovan, a vodeni sloj dalje je ekstraktovan sa DCM (150 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4) tokom 10 min, filtrirane i koncentrovane. Prečišćavanja hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa heksanom/etil acetat gradijentom daje (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((tertbutoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat) (15.9 g).
Faza 2: Pripremanje Intermedijera 2: (9Z,9Z,12Z,12'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat)
4
[0188] (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((tert-butoksikarbonil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoatu) (5.33 g, 7.30 mmol) u boci sa okruglim dnom dodat je DCM (50 mL) i smešten u ledenu kupku. TFA (50 mL) je dodat, a mešavina je ostavljena da se umešava tokom 30 min. Reakciona mešavina je zatim koncentrovana. Toluen je dodat ostatku da pomogne u azeotropiji viška TFA. Ostatak je vraćen u lenedu kupku i 10% K2CO3(50mL) i DCM (50mL) su dodati. Mešavina je mešana tokom 15 min, a organski sloj izolovan. Mutan vodeni sloj ekstraktovan je sa DCM (20 mL). Kombinovane organske materije osušene su (MgSO4), filtrirane i koncentrovane da bi se dobio (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat) (Kvantitativna).
Faza 3: Pripremanje S104-DLin: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata)
[0189]
[0190] Mešavina (9Z,9’Z,12Z,12’Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata) (4.68 g, 7.30 mmol), 2-((2-(dimetilamino)etil)tio)sirćetne kiseline (1.43 g, 8.76 mmol) i EDC HCl soli (2.10 g, 10.95 mmol) suspendovana je u DCM (100 mL). DMAP (89 mg, 0.73 mmol) je dodat, umešan na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. Pedeset mL svakog od vode i metanola su dodati i, nakon mešanja tokom 10 minuta, izolovana je bistra organska faza. Mutna vodena faza ekstraktovana je sa DCM (2 x 20 mL) i oprani kombinovani organski ekstrakti sa PBS (pH=11, 100mL). Proizvod je osušen sa MgSO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje je izvedeno hromatografijom na silika gelu eluiranjem sa MeOH u DCM gradijentom. Grupisane i koncentrovane frakcije dale su (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat) (4.3 g). LCMS ESI+: m/z 775.9 (M H).
Pripremanje (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil)bis(oktadeka-9,12-dienoata) (TU104-DLin)
4
Faza 1: Pripremanje TU104-Dlin: (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata)
[0192]
[0193] Sinteza (9Z,9’Z,12Z,12’Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata) prethodno je opisana. Trihlorometil hloroformat (takođe poznat kao difosgen) (740 uL,) dodat je rastvoru (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-azanediilbis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoata) (2.6 g) u suvom DCM (40 mL) i umešan pod pokrivačem argona na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. DCM i višak difosgena uklonjeni su u vakuumu.2-(dimetilamino)etan tiol HCl so (2.9 g), DCM (40 mL) i trietilamin (3.7 mL) zatim su dodati. Nakon 16 h na sobnoj temperaturi reakciona mešavina razblažena je sa DCM i oprana sa 10% K2CO3(75mL), osušena (MgSO4), filtrirana, i koncentrovana. Prečišćavanje je izvedena hromatografijom na silika gelu eluiranjem etil acetatom praćeno sa DCM/MeOH gradijentom da bi se dobio (9Z,9'Z,12Z,12'Z)-((2-((2-(dimetilamino)etil)tio)acetil)azanediil)bis(etan-2,1-diil) bis(oktadeka-9,12-dienoat) (850 mg). LCMS ESI+: m/z 761.9 (M H).
[0194] Formiranje ne-diVA siRNK koja sadrži lipozome. Lipid koji može da se jonizuje, DOPE, holestarol, i PEG-konjugovani lipid rastvoreni su u apsolutnom EtOH (200 dokaz) pri finalnoj masenoj koncentraciji od ∼4.4 mg/mL. siRNK rastvorena je u citratnom puferu pri koncentraciji ∼0.26 mg/mL i temperatura je podešena na 35-40°C. Etanol/lipid mešavina zatim je dodats siRNK-sadržavajućem puferu dok mešanje nije sponatno fomiralo siRNK uvedene lipozome. Lipidi su kombinovani sa siRNK radi dostizanja finalnog ukupnog lipid prema siRNK odnosa od 7:1 prema 14:1 (masa:masa). siRNK uvedeni lipozomi diafiltrirani su u 10x zapreminama PBS radi uklanjanja etanola i izmene pufera. Finalni proizvod filtriran je kroz 0.22 µm, sterilišući razred, filter za smanjenje bioštete. Ovaj proces daje lipozome prečnika srednje veličine čestica od 40-100 nm, PDI <0.2, i >85% RNK enkapsulacione (hvatajuće) efikasnosti.
[0195] Formiranje siRNK koja sadrži lipozome koja se može rastvoriti zajedno sa diVA. siRNK-diVA-Lipozom formulacije pripremljene su upotrebom prethodno opisanog postupka. diVA-PEG-diVA bila je korastvorljiva u apsolutnom etanolu sa drugim lipidima (lipid koji može da se jonizuje, DOPE, holestarol, i PEG-konjugovani lipidi) pre dodavanja u siRNK sadržavajući pufer. Molarni sadržaj diVA-PEG-diVA kreće se od 0.1 do 5 mol%. Ovaj proces daje lipozome prečnika srednje veličine čestica od 40-100 nm, PDI <0.2, i >85% hvatajuće efikasnosti.
[0196] Formiranje siRNK koja sadrži lipozome sa lipidima koji mogu da se jonizuju i katjonskim lipidide. siRNK-diVA-Lipozom formulacije i siRNK-Lipozom formulacije pripremljene su upotrebom prethodno opisanog postupka. Katjonski lipid zajedno je rastvoren u apsolutnom etanolu sa ostalim lipidima (lipid koji može da se jonizuje, DOPE, holestarol, PEG-konjugovani lipidi, i diVA-PEG-diVA) pre dodavanja u siRNK sadržavajući pufer. Molarni sadržaj katjonskog lipida kretao se od 5 do 40 mol%. Ovaj postupak daje lipozome sa prečnimo srednje veličine čestica od 40-100 nm, PDI <0.2, i >85% hvatajuće efikasnosti.
In vitro (pHSC, gp46 KD @ 20 nM) efikasnost
[0197] PHSCs u ploči sa 96 bazenčića inkubisani su sa formulacijom koja je sastavljena bilo od formulacije C104 lipida koji može da se jonizuje, formulacije Tu104 lipida koji može da se jonizuje, ili kombinovane formulacije sa različitim odnosom lipida koji može da se jonizuje (C104:Tu104). Nakon 30 minuta, podloga je zamenjena svežom podlogom za rast. Četrdeset osam sati kasnije, ćelije su lizirane i gp46 i GAPDH mRNK nivoi izmereni kvantitativna RT-PCR (TaqMan®) ogledom, a gp46 nivoi su normalizovani na GAPDH nivoe. Normalizovani gp46 nivoi izraženi su kao procenat lažnih kontrolnih ćelija. Stubići greške ukazuju na standardne evijacije (n=3). Rezultati su prikazani na FIG.1. Kako pokazuju rezultati, kombinacija dva lipida koji mogu da se jonizuju prema ovom pronalasku rezultira u primećenoj sinergističkoj redukciji genske ekspresije.
[0198] Slični eksperimenti izvedeni su sa drugim lipid koji može da se jonizuje:lipid koji može da se jonizuje i lipid koji može da se jonizuje:katjonski lipid kombinacijama. Rezultati za S104-DO:Tu104-DO kombinacije su prikazani na FIG.2. Rezultati za HEDODC:Tu104 kombinacije su prikazani na FIG.3.
Kombinacije oba i lipidi koji mogu da se jonizuju i koji mogu da se jonizuju:katjonski lipidi ponovo rezultuju kao sinergistička redukcija u genskoj ekspresiji.
In vivo (DMNQ) efikasnost:
[0199] In vivo aktivnost ciljane formulacije procenjena je u modelu kratkoročnog oštećenja jetre (naznav Brzi model ili DMNQ). U ovom modelu, kratkoročno oštećenje jetre indukovano je tretiranjem sa hepatotoksičnim agensom kao što je dimetilnitrosamin (DMN) praćeno povećavanjem gp46 mRNK nivoa. Kako bi se indukovale ove promene, mužijacima Sprague-Dawley pacova injektovan je intraperitonealno DMN tokom šest uzastopnih dana. Na kraju perioda tretiranja sa DMN, životinje su
1
nasumično raspoređene u grupe na osnovu pojedinačne životinjske telesne mase. Formulacije su date kao jedna IV doza, jedan sat nakon poslednjeg injektovanja DMN. Dvadeset četiri sata kasnije, odsečeni su režnjevi jetre i oba gp46 i MRPL19 mRNK nivoi određeni su ogledom kvantitativne RT-PCR (TaqMan). mRNK nivoi za gp46 su normalizovani na MRPL19 nivoe. Rezultati su prikazani na FIG.4. Nekoliko kombinacija jonizujućih:katjonskih lipida dostiglo je 50% redukcije u gesnkoj ekspresiji za jednu, 0.5 mg po kg životinjske telesne mase, dozu enkapsulirane siRNK.
In vitro toksikološki podaci, in vitro citotoksičnost (HepG2 @ 200 nM)
[0200] Dodavanje 20 mol.% S104 u formulacije ovog pronalaska poboljšalo je ćelijsku vijabilnost u ogledu HepG2 citotoksičnosti poboljšano od 27 % do 52 %.
Opis ogleda HepG2 citotoksičnosti:
[0201] HepG2 ćelije, adherentna ćelijska linija izvedena iz humanog hepatocelularnog karcinoma, uzgajana je u MEM/EBSS (Hyclone, Logan, Utah, Kat# SH30024.01) dopunjen sa 10% FBS (Hyclone, Logan, Utah Cat# SH30910). HepG2 ćelije su zasejane u Optilux crne ploče sa 96 bazenčića (BD Falcon, Kat# BD353220) pri 5000 ćelija/bazenčić preko noći. Formulacije su dodate u svaki bazenčić to konačne pokazane siRNK koncentracije (n=3).48 h posle dodavanja formulacija, određena je ćelijska vijabilnost upotrebom kompleta za ogled CellTiter-Glo Luminescentne ćelijske vijabilnosti (Promega, Cat #G7572) u skladu sa uputstvom proizvođača. Hemiluminescentni signali izmereni su na Clarity Luminescencionom čitaču mikroploča (502-Biotek, Winooski, Vermont). Vijabilnost je izračunata na bazi % hemiluminescentnog signala u formulacijom tretiranom bazenčiću normalizovani u odnosu na lažno tretirane bazenčiće.
In vivo toksikološki podaci
[0202] HEDC:S104 (20:20) formulacija ovog pronalaska se izuzetno dobro toleriše što je pokazano u ispitivanjima toksičnosti. Toksičnost nije primećena kada je formulacija injektovana intravenozno pacovima i majmunima pri dozama čak do 25 mg/kg i 12 mg/kg, respektivno, što je za stručnjake iz ove oblasti superiorno.
Transfekcija sa formulacijama ovog pronalaska:
2
[0203] Transfekcioni postupak je isti LX-2 i pHSCs. Lipozomske formulacije ili lipopleks formulacije ovog pronalaska umešane su sa podlogom za rast pri željenim konventracijama.100 µl mešavine dodato je ćelijama u ploči sa 96 bazenčića i ćelije su inkubisane tokom 30 min na 37 °C u inkubatoru sa 5% CO2. Nakon 30 min, podloga je zamenjena svežom podlogom za rast. Nakon 48 h transfekcije, ćelije su obrađene upotrebom ćelija-ka-ct liziji reagensa (Applied Biosistemi) prema instrukcijama proizvođača.
Kvantitativna (q) RT-PCR za merenje HSP47 mRNK ekspresije
[0204] HSP47 i GAPDH TaqMan® ® ogledi i Jedno-Fazni RT-PCR master miks kupljeni su od Applied Biosystems. Svaka PCR reakcija sadržala je sledeću kompoziciju: Jedno-fazni RT-PCR miks 5 µl, TaqMan® RT enzim miks 0.25 µl, sonda za ogled TaqMan® genske ekspresije (HSP47) 0.25 µl, sonda za ogled TaqMan® gene ekspresija (GAPDH) 0.5 µl, RNaza slobodna voda 3.25 µl, ćelijski lizat 0.75 µl, Ukupna zapremina od 10 µl. GAPDH je upotrebljen kao endogena kontrola za relativnu kvantifikaciju HSP47 mRNK nivoa. Kvantitativna RT-PCR izvedena je u ViiA 7 PCR sistemu koji radi u realnom vremenu (Applied Biosciences). Sve vrednosti su normalizovane na prosečnu HSP47 ekspresiju lažno transfektovanim ćelijama i izražene kao procenat HSP47 ekspresije u poređenju sa lažnom.

Claims (14)

  1. Patentni zahtevi 1. Kompozicija odabrana od (i) kompozicije koja obuhvata lipid koji može da se jonizuje, formule I, i katjonski lipid u lipozomu koji obuhvata dvosloj lipidnih molekula; i (ii) kompozicije koja obuhvata više od jednog lipida koji može da se jonizuje, formule I, u lipozomu koji obuhvata dvosloj lipidnih molekula, pri čemu 4 lipid koji može da se jonizuje, formule I, ima sledeću strukturu:
    u kojoj n i m su nezavisno 1, 2, 3, ili 4; R1i R2su nezavisno C10-18alkil ili C12-18alkenil; X je -CH2-, S, O, ili ga nema;
    ili njegov farmaceutski prihvatljiv oblik soli.
  2. 2. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj n i m predstavljaju 1 ili 2 ili u kojoj X nema, a L je poželjno C1-4alkilen, a poželjnije odabran iz grupe koju čine -CH2-, -CH2-CH2-, -CH2-CH2CH2-, i -CH2-CH2CH2CH2- ili L predstavlja
    predstavlja
    a poželjno L je
  3. 3. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj X je -CH2-, a L je poželjno odabrano iz grupe koju čine (a) -S-C1-4alkilen, a poželjno -S-CH2- ili -S-CH2-CH2-, (b) -S(O)2-C1-4alkilen, a poželjno -S(O)2-CH2-CH2-, (c) L je -O-C1-4alkilen, a poželjno -O-CH2-CH2- ili -O-CH2-CH2-CH2-, i (d) L je -O-C(O)-C1-4alkilen, a poželjno -O-C(O)-CH2-CH2-CH2-.
  4. 4. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj X je S, a L je poželjno C1-4alkilen, a poželjnije -CH2-CH2-.
  5. 5. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj X je O, a L je poželjno C1-4alkilen, a poželjnije -CH2-CH2- ili -CH2-CH2-CH2-.
  6. 6. Kompozicija prema zahtevu 1, u kojoj R1i R2su svaki C10-18alkil, a poželjno svaki C13alkil, ili u kojoj R1i R2su svaki C12-18alkenil, a poželjno svaki C13-17alkenil, a poželjnije svaki oleil ili linoleil.
  7. 7. Kompozicija prema zahtevu 1, način ostvarivanja (ii), u kojoj jedinjenje formule I je 5 do 50 mol % lipidnih molekula i (ii-1) kompozicija koja poželjno obuhvata dva jedinjenja formule I i u kojoj molarni odnos dva jedinjenja iznosi oko 10:30 do oko 30:10 ili (ii-2) kompozicija koja poželjno dalje obuhvata katjonski lipid, pri čemu je taj katjonski lipid poželjnije
    ili
  8. 8. Kompozicija prema zahtevu 7, način ostvarivanja (ii-2), u kojoj katjonski lipid je 5 do 40 mol % lipidnih molekula i u kojoj molarni odnos lipida koji može da se jonizuje i katjonskog lipida iznosi poželjno oko 5:35 do oko 35:5.
  9. 9. Kompozicija prema zahtevu 1, način ostvarivanja (ii), koja dalje obuhvata tečnu podlogu, pri čemu je ta tečna podlogu poželjno pogodna za ubrizgavanje u živi organizam, ili pri čemu ta tečna podloga poželjno obuhvata organski rastvarač, ili pri čemu ta tečna podloga poželjno obuhvata vodu i organski rastvarač.
  10. 10. Kompozicija prema zahtevu 1, način ostvarivanja (ii), koja dalje obuhvata nevodenu podlogu ili najmanje jedan fosfolipid ili najmanje jedan PEG-konjugovani lipid.
  11. 11. Stelatno-ćelijski-specifični nosač leka koji obuhvata kompoziciju prema zahtevu 1, način ostvarivanja (ii), i stelatno ćelijsku specifičnu količinu ciljajućeg molekula koji se sastoji strukture (retinoid)n-linker-(retinoid)n, u kojoj n=0, 1, 2 ili 3; i u kojoj linker obuhvata polietilen glikol (PEG) ili PEG-u sličan molekul.
  12. 12. Nosač leka prema zahtevu 11, koji dalje obuhvata siRNK molekul.
  13. 13. Farmaceutska formulacija koja obuhvata nosač leka prema zahtevu 12 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
  14. 14. Farmaceutska formulacija prema zahtevu 13, u kojoj je siRNK enkapsulirana lipozomom.
RS20211054A 2012-06-08 2013-06-07 Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa RS62288B9 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261657480P 2012-06-08 2012-06-08
EP18200656.9A EP3489220B9 (en) 2012-06-08 2013-06-07 Lipids for therapeutic agent delivery formulations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RS62288B1 RS62288B1 (sr) 2021-09-30
RS62288B9 true RS62288B9 (sr) 2021-12-31

Family

ID=48626705

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181385A RS58108B9 (sr) 2012-06-08 2013-06-07 Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa
RS20211054A RS62288B9 (sr) 2012-06-08 2013-06-07 Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20181385A RS58108B9 (sr) 2012-06-08 2013-06-07 Lipidi za formulacije za dostavu terapeutskih agenasa

Country Status (23)

Country Link
US (3) US9308267B2 (sr)
EP (2) EP2858974B9 (sr)
JP (1) JP5873604B2 (sr)
KR (1) KR102102801B1 (sr)
CN (1) CN104640841B (sr)
AU (1) AU2013270685B2 (sr)
BR (1) BR112014030714B1 (sr)
CA (1) CA2876148C (sr)
CY (2) CY1120929T1 (sr)
DK (2) DK3489220T3 (sr)
ES (2) ES2697680T3 (sr)
HR (2) HRP20211424T2 (sr)
HU (2) HUE056014T2 (sr)
LT (2) LT3489220T (sr)
PL (2) PL2858974T3 (sr)
PT (2) PT3489220T (sr)
RS (2) RS58108B9 (sr)
RU (1) RU2658007C2 (sr)
SI (2) SI3489220T1 (sr)
SM (2) SMT201800606T1 (sr)
TR (1) TR201816986T4 (sr)
TW (1) TWI654997B (sr)
WO (1) WO2013185116A1 (sr)

Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120141576A1 (en) * 2007-03-15 2012-06-07 Benjamin Johnson Treatment of Dermatologic Skin Disorders
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN104531812A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
US8710200B2 (en) 2011-03-31 2014-04-29 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids encoding a modified erythropoietin and their expression
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112014007852B1 (pt) 2011-10-03 2021-11-03 Moderna Therapeutics, Inc Polinucleotídeo isolado modificado e composição farmacêutica
PL2791160T3 (pl) 2011-12-16 2022-06-20 Modernatx, Inc. Kompozycje zmodyfikowanego mrna
US10501512B2 (en) 2012-04-02 2019-12-10 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
HK1206779A1 (en) 2012-04-02 2016-01-15 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
DK3489220T3 (da) 2012-06-08 2021-09-06 Nitto Denko Corp Lipider til terapeutisk middel-leveringsformuleringer
DK2922554T3 (en) 2012-11-26 2022-05-23 Modernatx Inc Terminalt modificeret rna
EP2971010B1 (en) 2013-03-14 2020-06-10 ModernaTX, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
US10023626B2 (en) 2013-09-30 2018-07-17 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US9365610B2 (en) 2013-11-18 2016-06-14 Arcturus Therapeutics, Inc. Asymmetric ionizable cationic lipid for RNA delivery
CN105873902B (zh) 2013-11-18 2019-03-08 阿克丘勒斯治疗公司 用于rna递送的可电离的阳离子脂质
US9976142B2 (en) 2014-04-02 2018-05-22 Nitto Denko Corporation Targeting molecule and a use thereof
PL3981437T3 (pl) 2014-04-23 2025-02-24 Modernatx, Inc. Szczepionki z kwasem nukleinowym
LT3221293T (lt) * 2014-11-18 2023-03-27 Arcturus Therapeutics, Inc. Jonizuojamas katijoninis lipidas, skirtas rnr pristatymui
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US20180002702A1 (en) 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
WO2016134146A2 (en) * 2015-02-19 2016-08-25 Nitto Denko Corporation Rna interference therapeutics against ebola virus
CA2990668C (en) * 2015-06-24 2024-07-02 Nitto Denko Corporation IONIZABLE COMPOUNDS AND RELATED COMPOSITIONS AND USES
AU2016285852B2 (en) * 2015-06-29 2020-12-17 Acuitas Therapeutics Inc. Lipids and lipid nanoparticle formulations for delivery of nucleic acids
DK3324932T3 (da) 2015-07-22 2021-04-06 Nitto Denko Corp Sammensætninger og fremgangsmåder for nanopartikel lyofile former
US11564893B2 (en) 2015-08-17 2023-01-31 Modernatx, Inc. Methods for preparing particles and related compositions
ES2969082T3 (es) 2015-09-17 2024-05-16 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administración intracelular de agentes terapéuticos
LT3386484T (lt) 2015-12-10 2022-06-10 Modernatx, Inc. Gydomųjų medžiagų sudėtis ir pristatymo metodai
US10799463B2 (en) 2015-12-22 2020-10-13 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
CA3008909C (en) 2015-12-23 2023-10-03 The University Of British Columbia Lipid-linked prodrugs
US9834510B2 (en) 2015-12-30 2017-12-05 Arcturus Therapeutics, Inc. Aromatic ionizable cationic lipid
JP6833456B2 (ja) 2016-11-02 2021-02-24 日東電工株式会社 皮膚線維症処置剤
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
US10975388B2 (en) 2016-12-14 2021-04-13 Ligandal, Inc. Methods and compositions for nucleic acid and protein payload delivery
US10526284B2 (en) 2016-12-21 2020-01-07 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
US10383952B2 (en) * 2016-12-21 2019-08-20 Arcturus Therapeutics, Inc. Ionizable cationic lipid for RNA delivery
CA3055653A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
MX2019011004A (es) 2017-03-15 2020-08-10 Modernatx Inc Compuestos y composiciones para la administracion intracelular de agentes terapeuticos.
DK3596042T3 (da) 2017-03-15 2022-04-11 Modernatx Inc Krystalformer af aminolipider
US11905525B2 (en) 2017-04-05 2024-02-20 Modernatx, Inc. Reduction of elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US12077501B2 (en) 2017-06-14 2024-09-03 Modernatx, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of agents
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
US11298371B2 (en) 2017-10-11 2022-04-12 Nitto Denko Corporation Regulation of nucleic acid molecule expression
WO2019090359A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Nitto Denko Corporation Fusogenic compounds for delivery of biologically active molecules
CN108148870B (zh) * 2018-01-12 2021-09-21 中国人民解放军第四军医大学 一种提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法
JP7640452B2 (ja) 2018-09-19 2025-03-05 モデルナティエックス インコーポレイテッド 高純度ｐｅｇ脂質及びそれらの使用
CA3113025A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Modernatx, Inc. Peg lipids and uses thereof
EP3853202A1 (en) 2018-09-19 2021-07-28 ModernaTX, Inc. Compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
CA3113651A1 (en) 2018-09-20 2020-03-26 Modernatx, Inc. Preparation of lipid nanoparticles and methods of administration thereof
KR20210093232A (ko) 2018-10-09 2021-07-27 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 유기용매와 세제가 없는 형질감염 적격 소포를 포함하는 조성물과 시스템 및 관련 방법
JP7638972B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-04 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療薬の細胞内送達のための分岐状尾部脂質化合物及び組成物
AU2021296801A1 (en) * 2020-06-24 2023-02-23 Bristol-Myers Squibb Company Process for synthesizing lipids
CA3183536A1 (en) * 2020-06-24 2021-12-30 Gregory Louis Beutner Process for synthesizing cationic lipids
AU2021328980A1 (en) * 2020-08-20 2023-03-09 Suzhou Abogen Biosciences Co., Ltd. Lipid compounds and lipid nanoparticle compositions
CA3205455A1 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 Etherna Immunotherapies Nv Ionizable lipids
US11524023B2 (en) 2021-02-19 2022-12-13 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle compositions and methods of formulating the same
JP2024533865A (ja) * 2021-09-14 2024-09-12 レナゲード セラピューティクス マネージメント インコーポレイテッド 環状脂質及びその使用方法
WO2023205424A2 (en) * 2022-04-21 2023-10-26 Greenlight Biosciences, Inc. Lipid compositions and methods for nucleic acid delivery
TW202400189A (zh) * 2022-05-20 2024-01-01 比利時商ｅＴｈｅＲＮＡ免疫治療公司 可離子化脂質
EP4626859A1 (en) * 2022-12-02 2025-10-08 Prime Medicine, Inc. Lipid nanoparticle (lnp) delivery systems and formulations
WO2024162304A1 (ja) * 2023-01-31 2024-08-08 アステラス製薬株式会社 環状アミンを有するカルバモイル脂質又はウレア脂質、それを含む脂質ナノ粒子、及び医薬組成物
CN118666726A (zh) * 2023-03-17 2024-09-20 尧唐(上海)生物科技有限公司 递送治疗剂的脂质化合物及其制备方法与应用
US12311033B2 (en) 2023-05-31 2025-05-27 Capstan Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle formulations and compositions
WO2025064475A2 (en) * 2023-09-18 2025-03-27 Flagship Pioneering Innovations Vii, Llc Ionizable lipidoid compositions and therapeutic uses thereof
WO2025129201A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Capstan Therapeutics, Inc. Humanized anti-cd8 antibodies and uses thereof
WO2026003582A2 (en) 2024-06-27 2026-01-02 Axelyf ehf. Lipids and lipid nanoparticles

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5264618A (en) * 1990-04-19 1993-11-23 Vical, Inc. Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules
US5650386A (en) * 1995-03-31 1997-07-22 Emisphere Technologies, Inc. Compositions for oral delivery of active agents
US5994317A (en) * 1996-04-09 1999-11-30 Vical Incorporated Quaternary cytofectins
CN1277024A (zh) * 1999-06-11 2000-12-20 克林诺斯生物药品工业有限公司 阳离子脂质体和多脱氧核糖核苷酸的复合物作为药剂的用途
CN101163796B (zh) * 2004-06-07 2012-08-29 普洛体维生物治疗公司 阳离子脂质及应用方法
CN101102795B (zh) 2004-12-22 2011-12-07 日东电工株式会社 用于抑制纤维化的药物载体和药物载体试剂盒
US9393315B2 (en) 2011-06-08 2016-07-19 Nitto Denko Corporation Compounds for targeting drug delivery and enhancing siRNA activity
JP2006254877A (ja) * 2005-03-18 2006-09-28 Fukuoka Prefecture 糖脂質を含んだキャリア及びそれを用いた遺伝子導入法
JP5902616B2 (ja) * 2010-04-28 2016-04-13 協和発酵キリン株式会社 カチオン性脂質
TWI658830B (zh) 2011-06-08 2019-05-11 日東電工股份有限公司 Ｈｓｐ47表現調控強化用類視色素脂質體
US9011903B2 (en) 2011-06-08 2015-04-21 Nitto Denko Corporation Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
US10196637B2 (en) 2011-06-08 2019-02-05 Nitto Denko Corporation Retinoid-lipid drug carrier
CN103857654B (zh) * 2011-06-08 2017-03-15 日东电工株式会社 用于定向药物输送和增强siRNA活性的化合物
JP6133883B2 (ja) 2011-11-04 2017-05-24 日東電工株式会社 薬物送達用の脂質ナノ粒子の生成方法
US9579338B2 (en) 2011-11-04 2017-02-28 Nitto Denko Corporation Method of producing lipid nanoparticles for drug delivery
TWI554244B (zh) 2011-12-19 2016-10-21 愛爾康眼科手術激光股份有限公司 用於雷射白內障程序之手術內光學同調斷層掃描成像的影像處理器
DK3489220T3 (da) 2012-06-08 2021-09-06 Nitto Denko Corp Lipider til terapeutisk middel-leveringsformuleringer

Also Published As

Publication number Publication date
CY1120929T1 (el) 2019-12-11
US11103583B2 (en) 2021-08-31
ES2697680T3 (es) 2019-01-25
PT3489220T (pt) 2021-10-22
CY1124499T1 (el) 2022-07-22
SMT201800606T1 (it) 2019-01-11
PL3489220T3 (pl) 2021-11-02
LT3489220T (lt) 2021-09-27
TWI654997B (zh) 2019-04-01
HRP20181855T1 (hr) 2018-12-28
US20200085957A1 (en) 2020-03-19
RS62288B1 (sr) 2021-09-30
US9308267B2 (en) 2016-04-12
CN104640841A (zh) 2015-05-20
SI2858974T1 (sl) 2019-01-31
RU2658007C2 (ru) 2018-06-19
CA2876148A1 (en) 2013-12-12
JP5873604B2 (ja) 2016-03-01
PL2858974T3 (pl) 2019-03-29
BR112014030714A2 (pt) 2017-06-27
EP2858974A1 (en) 2015-04-15
SMT202100528T1 (it) 2021-11-12
US10441659B2 (en) 2019-10-15
CN104640841B (zh) 2018-04-13
HRP20211424T2 (hr) 2022-02-18
AU2013270685B2 (en) 2017-11-30
RU2014153658A (ru) 2016-07-27
EP3489220B1 (en) 2021-08-18
JP2015523990A (ja) 2015-08-20
EP3489220B9 (en) 2021-11-10
BR112014030714B1 (pt) 2020-12-22
ES2697680T9 (es) 2022-10-17
KR102102801B1 (ko) 2020-04-22
SI3489220T1 (sl) 2021-11-30
EP3489220A1 (en) 2019-05-29
PT2858974T (pt) 2018-11-29
CA2876148C (en) 2021-01-12
US20160074514A1 (en) 2016-03-17
EP2858974B1 (en) 2018-10-17
WO2013185116A1 (en) 2013-12-12
HUE056014T2 (hu) 2022-01-28
DK3489220T3 (da) 2021-09-06
RS58108B9 (sr) 2022-11-30
LT2858974T (lt) 2018-12-10
ES2897216T3 (es) 2022-02-28
RS58108B1 (sr) 2019-02-28
HUE041882T2 (hu) 2019-06-28
KR20150021566A (ko) 2015-03-02
US20130330401A1 (en) 2013-12-12
AU2013270685A1 (en) 2015-01-29
HRP20211424T1 (hr) 2022-02-04
DK2858974T3 (en) 2018-12-03
TR201816986T4 (tr) 2019-01-21
EP2858974B9 (en) 2022-07-20
TW201402146A (zh) 2014-01-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3489220B1 (en) Lipids for therapeutic agent delivery formulations
US11084779B2 (en) Cationic lipids for therapeutic agent delivery formulations
AU2017203075B2 (en) Compounds for targeting drug delivery and enhancing sirna activity