[go: up one dir, main page]

RS62054B1 - Kompozicije za modulaciju ekspresije tau - Google Patents

Kompozicije za modulaciju ekspresije tau

Info

Publication number
RS62054B1
RS62054B1 RS20210805A RSP20210805A RS62054B1 RS 62054 B1 RS62054 B1 RS 62054B1 RS 20210805 A RS20210805 A RS 20210805A RS P20210805 A RSP20210805 A RS P20210805A RS 62054 B1 RS62054 B1 RS 62054B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
modified oligonucleotide
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
tau
wing segment
Prior art date
Application number
RS20210805A
Other languages
English (en)
Inventor
Holly Kordasiewicz
Eric E Swayze
Susan M Freier
Huynh-Hoa Bui
Original Assignee
Biogen Ma Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Biogen Ma Inc filed Critical Biogen Ma Inc
Publication of RS62054B1 publication Critical patent/RS62054B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/345—Spatial arrangement of the modifications having at least two different backbone modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] U ovom dokumentu opisane su kompozicije i postupci za redukciju ekspresije Tau iRNK i proteina kod životinje. Takvi postupci su korisni za lečenje, prevenciju, ili ublažavanje neurodegenerativnih bolesti, uključujući tauopatije, Alchajmerovu bolest, frontotemporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju i Dravetov sindrom, inhibicijom ekspresije Tau kod životinje.
Osnova pronalaska
[0002] Primarna funkcija Tau je vezivanje i stabilizacija mikrotubula, koji su važne strukturne komponente citoskeleta uključene u mitozu, citokinezu i vezikularni transport. Tau se nalazi u većem broju tkiva, ali je posebno zastupljen u aksonima neurona. Kod ljudi postoji šest izoformi Tau koje se generišu alternativnim splajsovanjem egzona 2, 3 i 10. Splajsovanje egzona 2 i 3 na N-kraju proteina dovodi do uključivanja nijednog, jednog ili dva aminokiselinska domena od 29 aminokiselina i naziva se 0N, 1N, odnosno 2N Tau. Uticaj ovih domena na funkciju Tau nije u potpunosti jasan, mada je moguće da igraju ulogu u interakcijama sa plazma-membranom. Uključivanje egzona 10 na C-kraj dovodi do uključivanja vezivnog domena za mikrotubule kodiranog egzonom 10. S obzirom da u drugim delovima Tau postoje 3 vezivna domena za mikrotubule, ova izoforma Tau (sa uključenim egzonom 10) naziva se 4R Tau, gde se "R" odnosi na broj ponavljanja vezivnih domena za mikrotubule. Tau bez egzona 10 naziva se 3R Tau. Budući da više vezivnih domena za mikrotubule (4R u poređenju sa 3R) povećava vezivanje za mikrotubule, 4R Tau verovatno značajno povećava vezivanje i sklapanje mikrotubula. Odnos 3R/4R Tau je razvojno regulisan, pri čemu fetalna tkiva eksprimiraju isključivo 3R Tau, a tkiva odraslih ljudi eksprimiraju približno jednake nivoe 3R/4R Tau. Odstupanja od normalnog odnosa 3R/4R Tau karakteristična su za neurodegenerativne FTD tauopatije. Nije poznato kako će promena odnosa 3R/4R Tau u kasnijoj fazi kod odrasle životinje uticati na Tau patogenezu.
[0003] Serin-treonin usmerena fosforilacija reguliše sposobnost vezivanja mikrotubula kod Tau. Hiperfosforilacija pospešuje odvajanje Tau od mikrotubula. Opisane su i druge posttranslacione modifikacije Tau; međutim njihov značaj nije jasan. Fosforilacija Tau je takođe razvojno regulisana većom fosforilacijom u fetalnim tkivima i mnogo nižom fosforilacijom kod odrasle jedinke. Jedna od karakteristika neurodegenerativnih poremećaja je aberantno povećana fosforilacija Tau.
[0004] Mreža mikrotubula uključena je u mnoge važne procese u ćeliji, uključujući strukturni integritet potreban za održavanje morfologije ćelija i upravljanje transportnom mašinerijom. Budući da vezivanje Tau za mikrotubule stabilizuje mikrotubule, Tau će verovatno biti ključni posrednik nekih od ovih procesa i poremećaj normalnog Tau u neurodegenerativnim bolestima može da naruši neke od ovih ključnih ćelijskih procesa.
[0005] Jedan od ranih pokazatelja važnosti Tau u neurodegenerativnim sindromima bilo je prepoznavanje da je Tau ključna komponenta neurofibrilarnih inkluzija u Alchajmerovoj bolesti. U stvari, neurofibrilarne inkluzije su agregati hiperfosforiliranog proteina Tau. Zajedno sa plakovima koji sadrže amiloid beta, neurofibrilarne inkluzije su obeležje Alchajmerove bolesti i značajno koreliraju sa kognitivnim oštećenjima.95% akumulacija Tau u AD javlja se u neuronskim procesima i naziva se neuritska distrofija. Proces/procesi pri kojima se ovaj protein povezan sa mikrotubulama odvaja od mikrotubula i formira nakupine proteina, i povezanost ove pojave sa toksičnošću za neurone, nisu sasvim jasni.
[0006] Neuronske inkluzije Tau su patološka karakteristika ne samo Alchajmerove bolesti, već i podskupa frontotemporalne demencije (FTD), PSP i CBD. Veza između Tau i neurodegeneracije učvrstila se otkrićem da mutacije u genu Tau uzrokuju podskup FTD. Ovi genetski podaci takođe su naglasili značaj odnosa 3R:4R Tau. Mnoge mutacije u Tau koje uzrokuju FTD dovode do promene u splajsovanju Tau što dovodi do preferencijalnog uključivanja egzona 10, a time i do povećanja 4R Tau. Ukupni nivoi Tau su normalni. Ostaje nepoznato da li neurodegeneraciju uzrokuje promena izoforme Tau ili promena u aminokiselinama, ili oboje. Najnoviji podaci sugerišu da je PSP takođe možda povezana sa povećanim odnosom 4R:3R Tau.
[0007] Da bi se razumeo uticaj odnosa Tau na neurodegeneraciju, generisan je mišji model zasnovan na jednoj od mutacija splajsovanja Tau (N279K) upotrebom minigena koji uključuje promotor Tau i bočne intronske sekvence egzona 10. Kao i kod ljudi, i kod ovih miševa javljaju se povećani nivoi 4R Tau u poređenju sa transgenim životinjama koje eksprimiraju WT (divlji tip) Tau i razvijaju poremećaje u ponašanju i motorici, kao i nakupine agregiranog Tau u mozgu i kičmenoj moždini.
[0008] Protein "Tau" povezan je sa nekoliko bolesti mozga, uključujući Alchajmerovu bolest, frontotemporalnu demenciju, progresivnu supranuklearnu paralizu, kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju, demenciju pugilistiku, parkinsonizam povezan sa hromozomom, bolest LyticoBodig, demenciju sa preovlađujućom neurofibrilarnom klubadi, gangliogliom, gangliocitom, meningioangiomatozu, subakutni sklerozirajući panencefalitis, olovnu encefalopatiju, tuberoznu sklerozu, Hallervorden-Spatz-ovu bolest, Pikovu bolest, bolest argirofilnih zrna, kortikobazalnu degeneraciju ili degeneraciju frontotemporalnog režnja, i druge. Poremećaji povezani sa Tau proteinom, poput AD, najčešći su uzrok demencije kod starijih osoba. AD pogađa oko 15 miliona ljudi širom sveta i 40% populacije starije od 85 godina. AD karakterišu dve patološke karakteristike: neurofibrilarne inkluzije Tau (NFT) i plakovi amiloida-P (Aβ).
[0009] WO2006/047673 opisuje sekvence nukleinske kiseline i proteine kodirane ovim sekvencama koji su uključeni u infekciju ili su na drugi način povezani sa životnim ciklusom patogena. US 2008/0249058 opisuje postupke za identifikovanje agenasa-kandidata za lečenje poremećaja povezanih sa ekscitotoksičnošću.
[0010] Trenutno nedostaju prihvatljive mogućnosti za lečenje takvih neurodegenerativnih bolesti. Stoga je cilj ovog dokumenta da obezbedi postupke za lečenje takvih bolesti.
Izlaganje suštine pronalaska
[0011] Pronalazak obezbeđuje modifikovani oligonukleotid, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida, pri čemu modifikovani oligonukleotid ima sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza nukleobazne sekvence SEQ ID NO: 1634, pri čemu je nukleobazna sekvenca modifikovanog oligonukleotida najmanje 90% komplementarna sa SEQ ID NO: 1 i pri čemu je modifikovani oligonukleotid sposoban da smanji ekspresiju Tau.
[0012] Pronalazak takođe obezbeđuje jednolančani modifikovani oligonukleotid, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, koji se sastoji od 18 povezanih nukleozida i koji ima sekvencu nukleobaza koja sadrži 18 uzastopnih nukleobaza nukleobazne sekvence SEQ ID NO: 1634, i gde modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, gde je najmanje jedna internukleozidna veza fosforotioatna internukleozidna veza, najmanje jedna internukleozidna veza je fosfodiestarska internukleozidna veza, a svaki citozin je 5-metilcitozin.
[0013] Dalji aspekti i primeri izvođenja pronalaska su definisani u zahtevima.
Kratak opis otkrića
[0014] Ovde su otkriveni postupci, jedinjenja i kompozicije za modulaciju ekspresije Tau iRNK i proteina. U određenim slučajevima, jedinjenja korisna za modulaciju ekspresije Tau iRNK i proteina su antisens jedinjenja. U određenim slučajevima, antisens jedinjenja su antisens oligonukleotidi.
[0015] U određenim slučajevima, modulacija može da se javi u ćeliji ili tkivu. U određenim slučajevima, ćelija ili tkivo je u životinji. U određenim slučajevima, životinja je čovek. U određenim slučajevima, nivoi iRNK Tau su smanjeni. U određenim slučajevima, nivoi Tau proteina su smanjeni. Takvo smanjenje može da se javi na način zavisan od vremena ili na način zavisan od doze.
[0016] Takođe su obezbeđena jedinjenja i kompozicije korisne za prevenciju, lečenje i ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja. U određenim primerima izvođenja, takve bolesti, poremećaji i stanja povezani sa Tau su neurodegenerativne bolesti. U određenim primerima izvođenja, takve neurodegenerativne bolesti, poremećaji i stanja uključuju tauopatije, Alchajmerovu bolest, fronto-temporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju i Dravetov sindrom.
[0017] Takve bolesti, poremećaji i stanja mogu da imaju jedan ili više zajedničkih faktora rizika, uzroka ili ishoda. Određeni faktori rizika i uzroci za razvoj neurodegenerativnog poremećaja uključuju starenje, ličnu ili porodičnu istoriju ili genetičku predispoziciju. Određeni simptomi i ishodi povezani sa razvojem neurodegenerativnog poremećaja obuhvataju, ali nisu ograničeni na: prisustvo hiperfosforilisanog Tau, prisustvo neurofibrilarnih inkluzija, smanjenje neurološke funkcije, smanjenu memoriju, smanjenu motoričku funkciju, smanjenu motoričku koordinaciju i konfuziju.
[0018] U određenim slučajevima, postupci za lečenje obuhvataju primenu Tau antisens jedinjenja kod individue kod koje postoji potreba za njim. U određenim slučajevima, postupci za lečenje obuhvataju primenu Tau antisens oligonukleotida kod individue kod koje postoji potreba za njim.
Detaljan opis
[0019] Potrebno je razumeti da su gore navedeni opšti opis i sledeći detaljan opis samo ilustrativni i eksplanatorni i nisu ograničavajući za pronalazak, kako je navedeno u patentnim zahtevima. Ovde, upotreba jednine obuhvata množinu, osim ukoliko nije specifično drugačije naznačeno. Kako se ovde koristio, upotreba "ili" označava "i/ili" osim ukoliko je navedeno drugačije. Dodatno, kako se ovde koristio, upotreba "i" označava "i/ili" osim ukoliko je navedeno drugačije. Pored toga, upotreba termina "uključujući" kao i drugi oblici, kao što su "obuhvata" i "obuhvaćen", nije ograničavajuća. Takođe, termini kao što su "element" ili "komponenta" obuhvataju oba elementa i komponente koje sadrže jednu jedinicu i elemente i komponente koji sadrže više od jedne podjedinice, osim ukoliko je specifično navedeno drugačije.
[0020] Podnaslovi delova prijave koji su ovde korišćeni su dati samo iz svrhe organizacije i ne bi ih trebalo tumačiti kao ograničavajuće za opisani predmet zaštite.
Definicije
[0021] Osim ukoliko su specifične definicije ovde obezbeđene, nomenklatura korišćena u vezi sa i postupci i tehnike, analitičke hemije, sintetičke organske hemije i medicinske i farmaceutske hemije opisane ovde je ona dobro poznata i uobičajeno korišćena u stanju tehnike. Standardne tehnike mogu biti korišćene za hemijsku sintezu i hemijsku analizu.
[0022] Osim ukoliko je drugačije naznačeno, sledeći termini imaju sledeća značenja:
"2'-O-metoksietil" (takođe 2'-MOE i 2'-OCH2CH2-OCH3i MOE) označava O-metoksietil modifikaciju 2' položaja furanoznog prstena. 2'-O-metoksietil modifikovani šećer je modifikovani šećer.
"2'-MOE nukleozid" (takođe 2'-O-metoksietil nukleozid) označava nukleozid koji sadrži 2'-MOE modifikovani šećerni fragment.
"2'-supstituisani nukleozid" označava nukleozid koji sadrži supstituent na 2'-položaju furanoznog prstena osim H ili OH. U određenim primerima izvođenja, 2' supstituisani nukleozidi obuhvataju nukleozide sa modifikacijama bicikličnih šećera.
"5-metilcitozin" označava citozin modifikovan metil grupom vezanom za 5 položaj.5-metilcitozin je modifikovana nukleobaza.
"Oko" označava unutar ±7% vrednosti. Na primer, ako je navedeno, "jedinjenja su postigla najmanje oko 70% inhibicije Tau", time je implicirano da su nivoi Tau inhibirani unutar opsega od 63% i 77%.
"Primenjen istovremeno" označava ko-primenu dva farmaceutska sredstva na bilo koji način u kojoj su farmakološki efekti oba istovremeno manifestovana u pacijentu. Istovremena primena ne zahteva da se oba farmaceutska sredstva primene u jednoj farmaceutskoj kompoziciji, u istom obliku doze, ili istim putem primene. Efekti oba farmaceutska sredstva ne moraju da se manifestuju sami po sebi istovremeno. Samo je potrebno da se efekti preklapaju tokom određenog vremenskog perioda i ne moraju da budu istovremeni.
"Primena" označava obezbeđivanje farmaceutskog sredstva životinji i obuhvata, ali bez ograničenja primenu od strane medicinskog radnika i auto-primenu.
"Ublažavanje" označava smanjenje, usporavanje, zaustavljanje ili reverziju najmanje jednog indikatora težine stanja ili bolesti. Težina indikatora može biti određena subjektivnim ili objektivnim merama, koje su poznate stručnjaku iz date oblasti tehnike.
"Životinja" označava čoveka ili ne-humanu životinju, uključujući, ali bez ograničenja na, miševe, pacove, zečeve, pse, mačke, svinje i nehumane primate, uključujući, ali bez ograničenja na majmune i šimpanze.
"Antitelo" označava molekul okarakterisan specifičnom reakcijom sa antigenom na neki način, gde su antitelo i antigen svaki definisani u odnosu na onog drugog. Antitelo može da označava kompletan molekul antitela ili bilo koji njegov fragment ili region, kao što je težak lanac, laki lanac, Fab region i Fc region.
"Antisens aktivnost" označava svu detektabilnu ili merljivu aktivnosti koja se može pripisati hibridizaciji antisens jedinjenja sa ciljnom nukleinskom kiselinom. U određenim primerima izvođenja, antisens aktivnost je smanjenje u količini ili ekspresiji ciljne nukleinske kiseline ili proteina kodiranog takvom ciljnom nukleinskom kiselinom.
"Antisens jedinjenje" označava oligomerno jedinjenje koje je sposobno da se podvrgne hibridizaciji sa ciljnom nukleinskom kiselinom preko vodonične veze. Primeri antisens jedinjenja obuhvataju jednolančana i dvolančana jedinjenja, kao što su, antisens oligonukleotidi, siRNA, shRNA, ssRNA i jedinjenja na bazi stepena zauzetosti.
"Antisens inhibicija" označava smanjenje nivoa ciljne nukleinske kiseline u prisustvu antisens jedinjenja komplementarnog ciljnoj nukleinskoj kiselini u poređenju sa nivoima ciljne nukleinske kiseline ili u odsustvu antisens jedinjenja.
"Antisens mehanizmi" su svi oni mehanizmi koji uključuju hibridizaciju jedinjenja sa ciljnom nukleinskom kiselinom, pri čemu je ishod ili efekat hibridizacije razgradnja ili zauzetost ciljnog molekula sa istovremenim zaustavljanjem ćelijske mašinerije uključujući, na primer, transkripciju ili splajsovanje.
"Antisens oligonukleotid" označava jednolančani oligonukleotid koji ima nukleobaznu sekvencu koja omogućava hibridizaciju sa odgovarajućim segmentom ciljne nukleinske kiseline.
"Komplementarnost baza" označava kapacitet za precizno bazno sparivanje nukleobaza antisens oligonukleotida sa odgovarajućim nukleobazama u ciljnoj nukleinskoj kiselini (tj., hibridizaciju) i posredovana je preko Watson-Crick, Hoogsteen ili obrnutog Hoogsteen vodoničnog vezivanja između odgovarajućih nukleobaza.
"Biciklični šećer" označava furanozni prsten modifikovan premošćavanjem dva atoma. Biciklični šećer je modifikovani šećer.
"Biciklični nukleozid" (takođe BNK) označava nukleozid koji ima šećerni fragment koji sadrži most koji povezuje dva atoma ugljenika šećernog prstena, čime se formira biciklični prstenasti sistem. U određenim primerima izvođenja, most povezuje 4’-ugljenik i 2’-ugljenik šećernog prstena.
"Struktura kape" ili "terminalni fragment kape" označava hemijske modifikacije, koje su ugrađene na bilo kom kraju antisens jedinjenja.
"cEt" ili "ograničeni etil" označava biciklični nukleozid koji ima šećerni fragment koji sadrži most koji povezuje 4'-ugljenik i 2'-ugljenik, pri čemu most ima formulu: 4'-CH(CH3)-O-2'.
"Ograničeni etil nukleozid" (takođe cEt nukleozid) označava nukleozid koji sadrži biciklični šećerni fragment koji sadrži 4'-CH(CH3)-O-2' most.
"Hemijski poseban region" označava region antisens jedinjenja koje je na neki način hemijski različit od drugog regiona istog antisens jedinjenja. Na primer, region koji ima 2'-O-metoksietil nukleozide je hemijski različit od regiona koji ima nukleozide bez 2'-O-metoksietil modifikacija.
"Himerno antisens jedinjenje" označava antisens jedinjenje koje ima najmanje dva hemijski posebna regiona, pri čemu svaki položaj ima veći broj podjedinica.
"Ko-primena" označava primenu dva ili više farmaceutskih sredstava kod individue. Dva ili više farmaceutskih sredstava mogu biti u jednoj farmaceutskoj kompoziciji ili mogu biti u posebnim farmaceutskim kompozicijama. Svako od dva ili više farmaceutskih sredstava može da se primeni istim ili različitim putevima primene. Koprimena obuhvata paralelnu ili sekvencijalnu primenu.
"Komplementarnost" označava kapacitet za sparivanje između nukleobaza prve nukleinske kiseline i druge nukleinske kiseline.
"Sadrže", "sadrži" i "koji sadrži" treba razumeti tako da impliciraju uključivanje navedenog koraka ili elementa ili grupe koraka ili elemenata, ali ne isključivanje bilo kog drugog koraka ili elementa ili grupe koraka ili elemenata.
"Uzastopne nukleobaze" označavaju nukleobaze koje su susedne.
"Dizajniranje" ili "dizajniran za" označava postupak dizajniranja oligomernog jedinjenja koje se specifično hibridizuje sa izabranim molekulom nukleinske kiseline. "Razblaživač" označava sastojak u kompoziciji kome nedostaje farmakološka aktivnost, ali je farmaceutski neophodan ili poželjan. Na primer, u lekovima koji su injektirani, razblaživač može biti tečnost, npr. fiziološki rastvor.
"Doza" označava naznačenu količinu farmaceutskog sredstva obezbeđenu u jednoj primeni ili u naznačenom vremenskom periodu. U određenim slučajevima, doza se može primenjivati u jednoj, dve ili više bolusa, tableta ili injekcija. Na primer, u određenim slučajevima gde je poželjna potkožna primena, željena doza zahteva zapreminu koja se ne smešta lako u jednu injekciju, prema tome, dve ili više injekcija se mogu koristiti za postizanje željene doze. U određenim slučajevima, farmakološko sredstvo je primenjivano infuzijom tokom produženog vremenskog perioda ili kontinuirano. Doze mogu biti navedene kao količina farmaceutskog sredstva na čas, dan, nedelju ili mesec.
"Efikasna količina" u kontekstu modulacije aktivnosti ili lečenja ili prevencije stanja označava primenu te količine farmaceutskog sredstva kod subjekta kod koga postoji potreba za takvom modulacijom, lečenjem ili profilaksom, u jednoj dozi, ili kao deo serije, koja je efikasna za modulaciju tog efekta, ili za lečenje ili profilaksu ili poboljšanje tog stanja. Efikasna količina može da varira među individuama u zavisnosti od zdravstvenog i fizičkog stanja individue koja se leči, taksonomske grupe individua koje se leče, formulacije kompozicije, procene medicinskog stanja individue i drugih relevantnih faktora.
"Efikasnost" označava sposobnost za proizvodnju željenog efekta.
"Ekspresija" obuhvata sve funkcije pomoću kojih se informacija koja je genski kodirana prevodi u strukture koje su prisutne i funkcionišu u ćeliji. Takve strukture obuhvataju, ali nisu ograničene na proizvode transkripcije i transplantacije.
"Potpuno komplementarno" ili "100% komplementarno" označava da svaka nukleobaza prve nukleinske kiseline ima komplementarnu nukleobazu u drugoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, prva nukleinska kiselina je antisens jedinjenje, a ciljna nukleinska kiselina je druga nukleinska kiselina.
"Gapmer" označava himerno antisens jedinjenje u kome je unutrašnji region koji ima više nukleozida koji podržavaju cepanje RNazom H, pozicioniran između spoljašnjih regiona koji imaju jedan ili više nukleozida, pri čemu su nukleozidi koji čine unutrašnji region hemijski različiti od jednog ili više nukleozida koji čine spoljašnje regione. Unutrašnji region može biti označen kao "gap" (praznina), a spoljašnji regioni mogu biti označeni kao "krila".
"Gap-suženi" označava himerno antisens jedinjenje koje ima segment praznine od 9 ili manje kontinuiranih 2'-dezoksiribonukleozida pozicioniran između i neposredno pored 5' i 3' krilnih segmenata koji imaju od 1 do 6 nukleozida.
"Gap-prošireni" označava himerno antisens jedinjenje koje ima segment praznine od 12 ili više kontinuiranih 2'-dezoksiribonukleozida pozicioniran između i neposredno pored 5' i 3' krilnih segmenata koji imaju od 1 do 6 nukleozida.
"Hibridizacija" označava spajanje komplementarnih molekula nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, komplementarni molekuli nukleinske kiseline obuhvataju, ali nisu ograničeni na antisens jedinjenje i ciljnu nukleinsku kiselinu. U određenim primerima izvođenja, komplementarni molekuli nukleinske kiseline obuhvataju, ali bez ograničenja, antisens oligonukleotid i ciljno mesto nukleinske kiseline.
"Identifikacija životinje koja ima bolest povezanu sa Tau" označava identifikaciju životinje kojoj je postavljena dijagnoza bolesti povezane sa Tau ili koja ima predispoziciju za razvoj bolesti povezane sa Tau. Individue sa predispozicijom za razvoj bolesti povezane sa Tau obuhvataju one koje imaju jedan ili više faktora rizika za razvoj bolesti povezane sa Tau, uključujući, starenje, ličnu ili porodičnu istoriju ili genetičku predispoziciju za jednu ili više bolesti povezanih sa Tau. Takva identifikacija se može postići pomoću bilo kog postupka uključujući procenu medicinske istorije individue i standardne kliničke testove ili procene, kao što je genetičko testiranje.
"Neposredno pored" označava da tu nema umetnutih elemenata između elemenata koji su neposredno jedan pored drugog.
"Individua" označava čoveka ili nehumanu životinju izabranu za lečenje ili terapiju.
"Inhibicija Tau" označava smanjenje nivoa ili ekspresije Tau iRNK i/ili proteina. U određenim primerima izvođenja, nivoi Tau iRNK i/ili proteina su inhibirani u prisustvu antisens jedinjenja koje ciljno deluje na Tau, uključujući antisens oligonukleotid koji ciljno deluje na Tau, u poređenju sa ekspresijom nivoima Tau
1
iRNK i/ili proteina u odsustvu Tau antisens jedinjenja, kao što je antisens oligonukleotid.
"Inhibicija ekspresije ili aktivnosti" označava smanjenje ili blokadu ekspresije ili aktivnosti i ne ukazuje neophodno na ukupnu eliminaciju ekspresije ili aktivnosti. "Internukleozidna veza" označava hemijsku vezu između nukleozida.
"Vezani nukleozidi" označavaju susedne nukleozide vezane zajedno internukleozidnom vezom.
"Zaključana nukleinska kiselina" ("locked nucleic acid") ili "LNA" ili "LNA nukleozidi" označava monomere nukleinske kiseline koji imaju most koji povezuje dva atoma ugljenika između 4' i 2' pozicije nukleozidne šećerne jedinice, formirajući time biciklični šećer. Primeri takvih bicikličnih šećera uključuju, ali nisu ograničeni na A) α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') LNA, (B) β-D-metilenoksi (4'-CH2-O-2') LNA, (C) etilenoksi (4'-(CH2)2-O-2') LNA, (D) aminooksi (4'-CH2-O-N(R)-2') LNA i (E) oksiamino (4'-CH2-N(R)-O-2') LNA, kao što je ispod prikazano.
[0023] Kako se ovde koristi, jedinjenja LNA uključuju, ali nisu ograničena na jedinjenja koja imaju najmanje jedan most između 4' i 2' pozicije šećera pri čemu svaki od mostova nezavisno sadrži 1 ili od 2 do 4 vezane grupe nezavisno odabrane od -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R1)2-, -S(=O)x- i -N(R1)-; pri čemu: x je 0, 1, ili 2; n je 1, 2, 3, ili 4; svaki R1i R2je, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksil, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, heteroaril, supstituisani heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisani C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1), ili sulfoksil (S(=O)-J1); i svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisani C1-C12aminoalkil ili zaštitna grupa.
[0024] Primeri 4'- 2' premošćujućih grupa obuhvaćenih definicijom LNA uključuju, ali nisu ograničeni na jednu od formula: -[C(R1)(R2)]n-, -[C(R1)(R2)]n-O-, -C(R1R2)-N(R1)-O- ili C(R1R2)-O-N(R1)-. Osim toga, druge premošćujuće grupe obuhvaćene definicijom LNA su 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R1)-2' i 4'-CH2-N(R1)-O-2'- mostovi, gde je svako R1i R2, nezavisno, H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil.
[0025] Takođe su u definiciju LNA prema pronalasku uključene LNA kod kojih je 2'-hidroksil grupa ribozilnog šećernog prstena povezana sa 4' atomom ugljenika u šećernom prstenu, čime se formira metilenoksi (4'-CH2-O-2') most za formiranje bicikličnog šećernog fragmenta. Most može takođe da bude metilenska (-CH2-) grupa koja povezuje 2' atom kiseonika i 4' atom ugljenika, za šta se koristi termin metilenoksi (4'-CH2-O-2') LNA. Osim toga; u slučaju bicikličnog šećernog fragmenta koji ima etilensku premošćujuću grupu na ovom položaju, koristi se termin etilenoksi (4'-CH2CH2-O-2') LNA. α -L- metilenoksi (4'-CH2-O-2'), izomer metilenoksi (4'-CH2-O-2') LNA je takođe obuhvaćen definicijom LNA, kako se ovde koristi.
"Nepoklapanje" ili "nekomplementarna nukleobaza" označava slučaj kada nukleobaza prve nukleinske kiseline nije sposobna da se spari sa odgovarajućom nukleobazom druge ili ciljne nukleinske kiseline.
"Modifikovana internukleozidna veza" označava supstituciju ili bilo koju promenu u odnosu na prirodnu internukleozidnu vezu (tj., fosfodiestarsku internukleozidnu vezu). "Modifikovana nukleobaza" označava bilo koju nukleobazu osim adenina, citozina, guanina, timidina ili uracila. "Nemodifikovana nukleobaza" označava purinske baze adenin (A) i guanin (G), i pirimidinske baze timin (T), citozin (C) i uracil (U).
"Modifikovani nukleozid" označava nukleozid koji ima, nezavisno, modifikovani šećerni fragment i/ili modifikovanu nukleobazu.
"Modifikovani nukleotid" označava nukleotid koji ima, nezavisno, modifikovani šećerni fragment, modifikovanu internukleozidnu vezu i/ili modifikovanu nukleobazu. "Modifikovani oligonukleotid" označava oligonukleotid koji sadrži najmanje jednu modifikovanu internukleozidnu vezu, modifikovani šećer i/ili modifikovanu nukleobazu.
"Modifikovani šećer" označava supstituciju i/ili svaku promenu u odnosu na prirodni šećerni fragment.
"Monomer" označava jednu jedinicu oligomera. Monomeri obuhvataju, ali bez ograničenja, nukleozide i nukleotide, bilo prirodne ili modifikovane.
"Motiv" označava obrazac nemodifikovanih i modifikovanih nukleozida u antisens jedinjenju.
"Prirodni šećerni fragment" označava šećerni fragment koji se nalazi u DNK (2'-H) ili RNK (2'-OH).
"Prirodna internukleozidna veza" označava fosfodiestarsku vezu 3' ka 5'.
"Nekomplementarna nukleobaza" označava par nukleobaza koje međusobno ne formiraju vodonične veze ili na drugi način podržavaju hibridizaciju.
"Nukleinska kiselina" označava molekule sastavljene od monomernih nukleotida. Nukleinska kiselina obuhvata, ali nije ograničena na, ribonukleinske kiseline (RNK), dezoksiribonukleinske kiseline (DNK), jednolančane nukleinske kiseline, dvolančane nukleinske kiseline, male interferirajuće ribonukleinske kiseline (siRNA) i mikroRNK (miRNA).
"Nukleobaza" označava heterociklični fragment sposoban za sparivanje sa bazom druge nukleinske kiseline.
"Komplementarnost nukleobaze" označava nukleobazu koja je sposobna za bazno sparivanje sa drugom nukleobazom. Na primer, u DNK, adenin (A) je komplementaran timinu (T). Na primer, u RNK, adenin (A) je komplementaran uracilu (U). U određenim primerima izvođenja, komplementarna nukleobaza označava nukleobazu antisens jedinjenja koja je sposobna za bazno sparivanje sa nukleobazom ciljne nukleinske kiseline. Na primer, ako je nukleobaza na određenom položaju antisens jedinjenja sposobna za vodonično vezivanje sa nukleobazom na određenom položaju ciljne nukleinske kiseline, tada se položaj vodonične veze između oligonukleotida i ciljne nukleinske kiseline smatra komplementarnim na tom nukleobaznom paru.
"Nukleobazna sekvenca" označava redosled kontinuiranih nukleobaza nezavisan od bilo kog šećera, veze i/ili nukleobazne modifikacije.
"Nukleozid" označava nukleobazu vezanu za šećer.
"Nukleozidni mimetik" obuhvata one strukture korišćene za zamenu šećera ili šećera i baze, a ne neophodno vezu na jednom ili više položaja oligomernog jedinjenja kao što su na primer nukleozidni mimetici koji imaju morfolino, cikloheksenil, cikloheksil, tetrahidropiranil, biciklo ili triciklo šećerne mimetike, npr., ne-furanozne šećerne jedinice. Nukleotidni mimetik obuhvata one strukture korišćene za zamenu nukleozida i veze na jednom ili više položaja oligomernog jedinjenja kao što su na primer peptidne nukleinske kiseline ili morfolino (morfolino vezani preko -N(H)-C(=O)-O-ili druge ne-fosfodiestarske veze). Surogat šećera se preklapa sa neznatno širim terminom nukleozidni mimetik, ali je predviđeno da označava samo zamenu šećerne
1
jedinice (furanozni pristen). Tetrahidropiranil prstenovi obezbeđeni ovde su ilustrativni primer šećernog surogata u kome je furanozna šećerna grupa zamenjena tetrahidropiranilnim prstenastim sistemom. "Mimetik" označava grupe koje su supstituisane za šećer, nukleobazu i/ili internukleozidnu vezu. Uopšteno, mimetik je korišćen umesto šećera ili kombinacije šećera-internukleozidne veze, a nukleobaza je zadržana za hibridizaciju sa izabranim ciljnim mestom.
"Nukleotid" označava nukleozid koji ima fosfatnu grupu kovalentno vezanu za šećerni deo nukleozida.
"Efekat van cilja" označava neželjeni ili štetan biološki efekat povezan sa modulacijom RNK ili proteinske ekspresije gena različitog od predviđene ciljne nukleinske kiseline.
"Oligomerno jedinjenje" ili "oligomer" označava polimer vezanih monomernih podjedinica koji je sposoban za hibridizaciju sa najmanje jednim regionom molekula nukleinske kiseline.
"Oligonukleotid" označava polimer vezanih nukleozida od kojih svaki može biti modifikovan ili nemodifikovan, međusobno nezavisno.
"Parenteralna primena" označava primenu preko injekcije (npr., bolus injekcije) ili infuzije. Parenteralna primena obuhvata subkutanu primenu, intravensku primenu, intramuskularnu primenu, intraarterijsku primenu, intraperitonealnu primenu, ili intrakranijalnu primenu, npr., intratekalnu ili intracerebroventrikularnu primenu.
"Peptid" označava molekul formiran vezivanjem najmanje dve aminokiseline amidnim vezama. Bez ograničenja, kako se ovde koristi, peptid označava polipeptide i proteine. "Farmaceutsko sredstvo" označava supstancu koja obezbeđuje terapeutsku korist kada se primeni na individuu. Na primer, u određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid koji ciljno deluje na Tau je farmaceutsko sredstvo.
"Farmaceutska kompozicija" označava smešu supstanci pogodnu za primenu kod subjekta. Na primer, farmaceutska kompozicija može da sadrži antisens oligonukleotid i sterilni vodeni rastvor.
"Farmaceutski prihvatljiv derivat" obuhvata farmaceutski prihvatljive soli, konjugate, prolekove ili izomere jedinjenja koja su ovde opisana.
"Farmaceutski prihvatljive soli" označavaju fiziološki i farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, tj., soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost ishodnog oligonukleotida i ne ispoljavaju neželjene toksikološke efekte.
"Fosforotioatna veza" označava vezu između nukleozida gde je fosfodiestarska veza modifikovana zamenom jednog od nepremošćujućih atoma kiseonika atomom sumpora. Fosforotioatna veza je modifikovana internukleozidna veza.
"Deo" označava definisani broj uzastopnih (tj., vezanih) nukleobaza nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, deo je definisani broj uzastopnih nukleobaza ciljne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, deo je definisani broj uzastopnih nukleobaza antisens jedinjenja.
"Sprečiti" ili "prevencija" označava odlaganje ili zadržavanje početka ili razvoja bolesti, poremećaja ili stanja tokom vremenskog perioda od više minuta do više dana, nedelja do meseci, ili neograničeno.
"Prolek" označava terapeutsko sredstvo koje je pripremljeno u neaktivnom obliku koji je preveden u aktivni oblik (tj., lek) unutar tela ili njegovih ćelija delovanjem endogenih enzima ili drugih hemikalija i/ili uslova.
"Profilaktički efikasna količina" označava količinu farmaceutskog sredstva koja obezbeđuje profilaktičku ili preventivnu korist životinji.
"Region" je definisan kao deo ciljne nukleinske kiseline koji ima najmanje jednu strukturu, funkciju ili karakteristiku koja se može identifikovati.
"Ribonukleotid" označava nukleotid koji ima hidroksi grupu na 2' položaju šećernog dela nukleotida. Ribonukleotidi mogu biti modifikovani bilo kojim od različitih supstituenata.
"Soli" označavaju fiziološki i farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, tj., soli koje zadržavaju željenu biološku aktivnost ishodnog oligonukleotida i ne ispoljavaju neželjene toksikološke efekte.
"Segmenti" su definisani kao manji ili pod-delovi regiona unutar ciljne nukleinske kiseline.
"Skraćene" ili "odsečene" verzije antisens oligonukleotida predstavljenih u ovom dokumentu imaju jedan, dva ili više deletiranih nukleozida.
"Sporedni efekti" označavaju fiziološke odgovore koji se mogu pripisati lečenju različitom od željenih efekata. U određenim primerima izvođenja, sporedni efekti obuhvataju, bez ograničenja, reakcije na mestu injekcije, test abnormalnosti funkcije jetre, abnormalnosti bubrežne funkcije, toksičnost za jetru, toksičnost za bubrege, abnormalnosti centralnog nervnog sistema i miopatije.
"Jednolančani oligonukleotid" označava oligonukleotid koji nije hibridizovan sa komplementarnim lancem.
1
"Mesta", kako se ovde koristi, definisana su kao jedinstveni položaju nukleobaza unutar ciljne nukleinske kiseline.
"Sporo napredovanje" označava smanjenje u razvoju navedene bolesti.
"Specifično hibridizujući" označava antisens jedinjenje koje ima dovoljan stepen komplementarnosti između antisens oligonukleotida i ciljne nukleinske kiseline za indukciju željenog efekta, uz ispoljavanje minimalnih efekata ili nikakvih efekata na ne-ciljne nukleinske kiseline pod uslovima u kojima je željeno specifično vezivanje, tj., pod fiziološkim uslovima u slučaju in vivo analiza i terapeutskih tretmana.
"Strogi uslovi hibridizacije" ili "strogi uslovi" označavaju uslove pod kojima će oligomerno jedinjenje da hibridizuje sa ciljnom sekvencom, ali sa minimalnim brojem drugih sekvenci.
"Subjekat" označava čoveka ili nehumanu životinju izabranu za lečenje ili terapiju.
"Ciljni/ciljno mesto" označava protein, čija modulacija je željena.
"Ciljni gen" označava gen koji kodira ciljno mesto.
"Ciljno delovanje" ili "na koji se ciljno deluje" označava postupak dizajniranja i selekcije antisens jedinjenja koje će specifično da hibridizuje sa ciljnom nukleinskom kiselinom i da indukuje željeni efekat.
"Ciljna nukleinska kiselina", "ciljna RNK" i "ciljni RNK transkript" i "ciljna nukleinska kiselina", svi označavaju nukleinsku kiselinu koja je sposobna da na nju ciljno deluju antisens jedinjenja.
"Ciljni region" označava deo ciljne nukleinske kiseline na koji je usmereno jedno ili više antisens jedinjenja.
"Ciljni segment" označava sekvencu nukleotida ciljne nukleinske kiseline na koju je usmereno antisens jedinjenje. "5' ciljno mesto" označava 5'-krajnji nukleotid ciljnog segmenta. "3' ciljno mesto" označava 3'-krajnji nukleotid ciljnog segmenta.
"Tau" označava sisarski protein tau povezan sa mikrotubulama (MAPT), uključujući humani protein tau povezan sa mikrotubulama (MAPT).
"Bolest povezana sa Tau" označava svaku bolest povezanu sa bilo kojom Tau nukleinskom kiselinom ili proizvodom njene ekspresije. Takve bolesti mogu da obuhvataju neurodegenerativnu bolest. Takve neurodegenerativne bolesti mogu da uključuju tauopatije, Alchajmerovu bolest, fronto-temporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku
1
encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju i Dravetov sindrom.
"Tau iRNK" označava svaku informacionu RNK kao proizvod ekspresije DNK sekvence koja kodira Tau.
"Tau nukleinska kiselina" označava bilo koju nukleinsku kiselinu koja kodira Tau. Na primer, u određenim primerima izvođenja, Tau nukleinska kiselina obuhvata DNK sekvencu koja kodira Tau, RNK sekvencu transkribovanu sa DNK koja kodira Tau (uključujući genomsku DNK koja sadrži introne i egzone), i sekvencu iRNK koja kodira Tau. "Tau iRNK" označava iRNK koja kodira Tau protein.
"Tau protein" označava polipeptidni proizvod ekspresije Tau nukleinske kiseline. "Terapeutski efikasna količina" označava količinu farmaceutskog sredstva koja obezbeđuje terapeutsku korist individui.
"Lečiti" ili "lečenje" ili "tretman" označava primenu kompozicije za postizanje promene ili poboljšanja bolesti ili stanja.
"Nemodifikovane nukleobaze" označavaju purinske baze adenin (A) i guanin (G), i pirimidinske baze timin (T), citozin (C) i uracil (U).
"Nemodifikovani nukleotid" označava nukleotid sastavljen od prirodnih nukleobaza, šećernih fragmenata i internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, nemodifikovani nukleotid je RNK nukleotid (tj. β-D-ribonukleozid) ili DNK nukleotid (tj. β-D-dezoksiribonukleozid).
"Krilni segment" označava više nukleozida modifikovanih tako da pruže oligonukleotidu osobine kao što su pojačana inhibitorna aktivnost, povećani afinitet vezivanja za ciljnu nukleinsku kiselinu ili rezistencija na razgradnju pomoću in vivo nukleaza.
Određeni primeri izvođenja
[0026] U ovom dokumentu opisani su postupci, jedinjenja i kompozicije za inhibiciju ekspresije iRNK i proteina Tau. Ovde su opisani postupci, jedinjenja i kompozicije za snižavanje nivoa iRNK i proteina Tau.
[0027] Ovde su opisana antisens jedinjenja koja ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau. U određenim primerima izvođenja, nukleinska kiselina Tau je sekvenca navedena u GENBANK sa pristupnim brojem. GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 1), GENBANK pristupni br. NM_001123066.3 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 2), GENBANK pristupni br.
1
NM_016841.4, varijanta sekvence iRNK bez egzona 3, 4, 6, 8, 10 i 12 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 3), GENBANK pristupni br. NT_010783.14 skraćena od nukleotida 2624000 do 2761000 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 4), GENBANK pristupni br. DR002467.1 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 5), GENBANK pristupni br. NM_001203251.1 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 6) i GENBANK pristupni br. NM _016835.4 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 7).
[0028] Ovde su opisani postupci za lečenje, prevenciju, ili ublažavanje bolesti, poremećaja i stanja povezanih sa Tau kod osobe kojoj je to potrebno. Obuhvaćeni su i postupci za pripremu leka za lečenje, prevenciju, ili ublažavanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanih sa Tau. Bolesti, poremećaji ili stanja povezani sa Tau obuhvataju neurodegenerativne bolesti. U određenim primerima izvođenja, bolesti povezane sa tau uključuju tauopatije, Alchajmerovu bolest, fronto-temporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju ili Dravetov sindrom.
[0029] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od sekvenci nukleobaza SEQ ID NOs: 20-2443 i SEQ ID NOs: 2478-2483. Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od sekvenci nukleobaza SEQ ID NOs: 2444-2477 i SEQ ID NOs: 2484-2565.
[0030] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza bilo koje od sekvenci nukleobaza SEQ ID NOs: 20-2565.
[0031] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i koja sadrže sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom jednake dužine nukleobaza 135783-135980 iz SEQ ID NO: 1.
1
[0032] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i koja sadrže sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom jednake dužine nukleobaza 135853-135872 iz SEQ ID NO: 1.
[0033] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i koja sadrže sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom jednake dužine nukleobaza 135783-135929 iz SEQ ID NO: 1.
[0034] Ovde su otkrivena jedinjenja, koja sadrže modifikovani oligonukleotid koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida i koja sadrže sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8, najmanje 9, najmanje 10, najmanje 11, najmanje 12, najmanje 13, najmanje 14, najmanje 15, najmanje 16, najmanje 17, najmanje 18, najmanje 19, ili najmanje 20 uzastopnih nukleobaza komplementarnih sa delom jednake dužine nukleobaza 135783-135914 iz SEQ ID NO: 1.
[0035] U određenim slučajevima, sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida je najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% komplementarna sa SEQ ID NO: 1.
[0036] U određenim primerima izvođenja, jedinjenje je jednolančani modifikovani oligonukleotid.
[0037] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedna internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je modifikovana internukleozidna veza.
[0038] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedna modifikovana internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0039] U određenim primerima izvođenja, svaka modifikovana internukleozidna veza je fosforotioatna internukleozidna veza.
[0040] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedna internukleozidna veza je fosfodiestarska internukleozidna veza.
[0041] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedna internukleozidna veza je fosforotioatna veza i najmanje jedna internukleozidna veza je fosfodiestarska veza.
[0042] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan nukleozid sadrži modifikovanu nukleobazu.
1
[0043] U određenim primerima izvođenja, modifikovana nukleobaza je 5-metilcitozin.
[0044] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži modifikovani šećer.
[0045] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan modifikovani šećer je biciklični šećer.
[0046] U određenim primerima izvođenja, biciklični šećer sadrži hemijsku vezu između 2' i 4' položaja u šećernom mostu 4'-CH2-N(R)-O-2', pri čemu je R, nezavisno, H, C1-C12 alkil, ili zaštitna grupa.
[0047] U određenim primerima izvođenja, biciklični šećer sadrži most 4'-CH2-N(R)-O-2', gde je R, nezavisno, H, C1-C12 alkil, ili zaštitna grupa.
[0048] U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan modifikovani šećer sadrži 2'-O-metoksietil grupu.
[0049] U određenim primerima izvođenja, modifikovani šećer sadrži 2'-O(CH2)2-OCH3grupu.
[0050] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0051] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 9 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0052] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 7 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0053] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
2
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0054] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 4 povezana nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0055] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 4 povezana nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
[0056] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 20 povezanih nukleozida.
[0057] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 19 povezanih nukleozida.
[0058] U određenim primerima izvođenja, modifikovani oligonukleotid se sastoji od 18 povezanih nukleozida.
[0059] Određeni primeri izvođenja obezbeđuju kompozicije koje sadrže bilo koje ovde opisano jedinjenje ili njegovu so i najmanje jedan od farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.
[0060] Ovde su otkriveni postupci koji obuhvataju primenu kod životinje bilo kog jedinjenja ili kompozicije koji su ovde opisani.
[0061] U određenim slučajevima, životinja je čovek.
[0062] U određenim slučajevima, primena jedinjenja sprečava, leči, ublažava, ili usporava napredovanje bolesti, poremećaja ili stanja povezanih sa tau.
[0063] U određenim primerima izvođenja, bolest, poremećaj ili stanje je tauopatija, Alchajmerova bolest, fronto-temporalna demencija (FTD), FTDP-17, progresivna supranuklearna paraliza (PSP), hronična traumatska encefalopatija (CTE), kortikobazalna ganglijska degeneracija (CBD), epilepsija ili Dravetov sindrom.
[0064] Ovde je otkrivena upotreba bilo kojih ovde opisanih jedinjenja ili kompozicija za proizvodnju leka za lečenje neurodegenerativnog poremećaja.
[0065] Ovde su otkrivena jedinjenja prema sledećoj formuli (Ia):
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Ovde su otkrivene farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Ia).
[0066] Ovde su otkrivena jedinjenja prema sledećoj formuli (IIa):
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Ovde su otkrivene farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (IIa).
[0067] Ovde su otkrivena jedinjenja prema sledećoj formuli (IIIa):
2
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Ovde su otkrivene farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (IIIa).
[0068] Određeni primeri izvođenja obezbeđuju jedinjenja prema sledećoj formuli (IVa):
ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so. U određenim primerima izvođenja, obezbeđene su farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (IVa).
[0069] Ovde su otkrivena jedinjenja prema sledećoj formuli (Va):
2
ili njihova farmaceutski prihvatljiva so. Ovde su otkrivene farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje formule (Va).
Antisens jedinjenja
[0070] Oligomerna jedinjenja obuhvataju, ali bez ograničenja oligonukleotide, oligonukleozide, oligonukleotidne analoge, oligonukleotidne mimetike, antisens jedinjenja, antisens oligonukleotide i siRNK. Oligomerno jedinjenje može biti "antisens" za ciljnu nukleinsku kiselinu, što znači da je sposobno da hibridizuje sa ciljnom nukleinskom kiselinom preko vodonične veze.
[0071] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenje ima nukleobaznu sekvencu koja, kada je napisana u 5' prema 3' smeru, sadrži reverzni komplement ciljnog segmenta ciljne nukleinske kiseline na koju je usmerena. U određenim takvim primerima izvođenja, antisens oligonukleotid ima nukleobaznu sekvencu koja, kada je napisana u 5' prema 3' smeru, sadrži reverzni komplement ciljnog segmenta ciljne nukleinske kiseline na koju je usmerena.
2
[0072] U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 12 do 30 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 12 do 25 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 12 do 22 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 14 do 20 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 15 do 25 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 18 do 22 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 19 do 21 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje ima dužinu od 8 do 80, 12 do 50, 13 do 30, 13 do 50, 14 do 30, 14 do 50, 15 do 30, 15 do 50, 16 do 30, 16 do 50, 17 do 30, 17 do 50, 18 do 30, 18 do 50, 19 do 30, 19 do 50 ili 20 do 30 vezanih podjedinica.
[0073] U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 12 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 13 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 14 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 15 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 16 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 17 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 18 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 19 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 20 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 21 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 22 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 23 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 24 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 25 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 26 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku
2
kiselinu Tau ima dužinu od 27 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 28 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 29 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 30 podjedinica. U određenim slučajevima, antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau ima dužinu od 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 ili 80 vezanih podjedinica, ili u opsegu definisanom sa bilo koje dve od gore navedenih vrednosti. U određenim slučajevima antisens jedinjenje je antisens oligonukleotid, a vezane podjedinice su nukleozidi.
[0074] U određenim primerima izvođenja, antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau mogu biti skraćeni ili isečeni. Na primer, jedna podjedinica može biti deletirana sa 5' kraja (5' skraćenje), ili alternativno sa 3' kraja (3' skraćenje). Skraćeno ili isečeno antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau može imati dve podjedinice deletirane sa 5' kraja, ili alternativno može imati dve podjedinice deletirane sa 3' kraja, antisens jedinjenja. Alternativno, deletirani nukleozidi mogu biti dispergovani u antisens jedinjenju, na primer, u antisens jedinjenju koje ima jedan nukleozid deletiran sa 5' kraja i jedan nukleozid deletiran sa 3' kraja.
[0075] Kada je jedna dodatna podjedinica prisutna u produženom antisens jedinjenju, dodatna podjedinica može biti locirana na 5' ili 3' kraju antisens jedinjenja. Kada su prisutne dve ili više dodatnih podjedinica, dodate podjedinice mogu biti međusobno susedne, na primer, u antisens jedinjenju koje ima dve podjedinice dodate na 5' kraj (5' adicija), ili alternativno na 3' kraj (3' adicija), antisens jedinjenja. Alternativno, dodate podjedinice mogu biti dispergovane u antisens jedinjenju, na primer, u antisens jedinjenju koje ima podjedinicu dodatu na 5' kraj i jednu podjedinicu dodatu na 3' kraj.
[0076] Moguće je povećati ili smanjiti dužinu antisens jedinjenja, kao što je antisens oligonukleotid i/ili uneti baze koje se ne poklapaju bez eliminacije aktivnosti. Na primer, u Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), serija antisens oligonukleotida dužine 13-25 nukleobaza je testirana za njihovu sposobnost za indukciju cepanja ciljne RNK u modelu injekcije oocite. Antisens oligonukleotidi dužine 25 nukleobaza sa 8 ili 11 nepoklapajućih baza blizu krajeva antisens oligonukleotida bili su sposobni da usmere specifično cepanje ciljne iRNK, iako u manjem stepenu od antisens oligonukleotida koji nisu sadržali nepoklapanja. Slično, ciljno specifično cepanje je postignuto upotrebom antisens oligonukleotida od 13 nukleobaza, uključujući one sa 1 ili 3 nepoklapanja.
2
[0077] Gautschi et al (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) su pokazali sposobnost oligonukleotida koji ima 100% komplementarnost sa iRNK bcl-2 i koji ima 3 nepoklapanja sa iRNK bcl-xL da smanji ekspresiju oba bcl-2 i bcl-xL in vitro i in vivo. Pored toga, ovaj oligonukleotid je pokazao snažnu anti-tumorsku aktivnost in vivo.
[0078] Maher i Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) testirali su seriju tandem antisens oligonukleotida od 14 nukleobaza i antisens oligonukleotida od 28 i 42 nukleobaza koji se sastoje od sekvence od dva ili tri tandem antisens oligonukleotida, respektivno, za njihovu sposobnost da zaustave translaciju humanog DHFR u analizi zečjih retikulocita. Svaki od tri antisens oligonukleotida od 14 nukleobaza pojedinačno bio je sposoban da inhibira translaciju, iako na skromnijem nivou od antisens oligonukleotida od 28 ili 42 nukleobaza..
Motivi antisens jedinjenja
[0079] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau imaju hemijski modifikovane podjedinice raspoređene u obrascima, ili motivima, za pružanje antisens jedinjenjima osobina kao što su pojačana inhibitorna aktivnost, povećani afinitet vezivanja za ciljnu nukleinsku kiselinu ili rezistencija na razlaganje in vivo nukleazama.
[0080] Himerna antisens jedinjenja sadrže najmanje jedan region modifikovan tako da pruži povećanu rezistenciju na razlaganje nukleazom, povećani ćelijski unos, povećani afinitet vezivanja za ciljnu nukleinsku kiselinu i/ili povećanu inhibitornu aktivnost. Drugi region himernog antisens jedinjenja može izborno da služi kao supstrat za ćelijsku endonukleazu RNazu H, koja cepa RNK lanac RNK:DNK dupleksa.
[0081] Antisens jedinjenja koja imaju gapmer motiv smatraju se himernim antisens jedinjenjima. U gapmeru unutrašnji region koji ima množinu nukleozida koji podržavaju cepanje RNazom H postavljen je između spoljašnjih regiona koji imaju množinu nukleotida koji su hemijski različiti od nukleozida unutrašnjeg regiona. U slučaju antisens oligonukleotida koji ima gapmer motiv, segment praznine generalno služi kao supstrat za cepanje endonukleazom, dok krilni segmenti sadrže modifikovane nukleozide. U određenim primerima izvođenja, regioni gapmera su diferencirani preko tipova šećernih fragmenata koje sadrže svaki poseban region. Tipovi šećernih fragmenata koje se koriste za diferencijaciju regiona gapmera mogu u nekim primerima izvođenja da obuhvataju β-D-ribonukleozide, β-D-dezoksiribonukleozide, 2'-modifikovane nukleozide (takvi 2'-modifikovani nukleozidi mogu da obuhvataju 2'-MOE i 2'-O-CH3, pored ostalih), i biciklične šećerne modifikovane
2
nukleozide (takvi biciklični nukleozidi sa modifikovanim šećerom mogu da obuhvataju one koji imaju 4'-(CH2)n-O-2' most, gde je n=1 ili n=2 i 4'-CH2-O-CH2-2'). U određenim primerima izvođenja, krila mogu da obuhvataju nekoliko modifikovanih šećernih fragmenata, uključujući, na primer 2'-MOE. U određenim primerima izvođenja, krila mogu da obuhvataju nekoliko modifikovanih i nemodifikovanih šećernih fragmenata. U određenim primerima izvođenja, krila mogu da obuhvataju različite kombinacije 2'-MOE nukleozida i 2'-dezoksinukleozida.
[0082] Svaki poseban region može da sadrži ujednačene šećerne fragmente, varijante ili naizmenične šećerne fragmente. Motiv krilo-praznina-krilo je često opisan kao "X-Y-Z", gde "X" predstavlja dužinu 5' krila, "Y" predstavlja dužinu praznine i "Z" predstavlja dužinu 3' krila. "X" i "Z" mogu da sadrže ujednačene, varijante ili naizmenične šećerne fragmente. U određenim primerima izvođenja, "X" i "Y" mogu da obuhvataju jedan ili više 2'-dezoksinukleozida. "Y" može da sadrži 2'-dezoksinukleozide. Kao što je ovde opisan, gapmer opisan kao "X-Y-Z" ima konfiguraciju tako da je praznina postavljena neposredno pored svakog od 5' krila i 3' krila. Na taj način, ne postoje nukleotidi između 5' krila i praznine ili praznine i 3' krila. Bilo koje od antisens jedinjenja opisanih ovde može imati gapmer motiv. U određenim primerima izvođenja, "X" i "Z" su isti; u drugim primerima izvođenja oni su različiti.
[0083] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 20-mere sa motivom 5-10-5.
[0084] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 19-mere sa motivom 5-9-5.
[0085] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 18-mere sa motivom 5-8-5.
[0086] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 18-mere sa motivom 4-8-6.
[0087] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 18-mere sa motivom 6-8-4.
[0088] U određenim primerima izvođenja, gapmeri koji su ovde obezbeđeni uključuju, na primer 18-mere sa motivom 5-7-6.
Ciljne nukleinske kiseline, ciljni regioni i nukleotidne sekvence
[0089] Nukleotidne sekvence koje kodiraju Tau uključuju, bez ograničenja, sledeće: GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 1), GENBANK pristupni br. NM_001123066.3 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 2), GENBANK pristupni br. NM_016841.4, varijantu sekvence iRNK bez egzona 3, 4, 6, 8, 10, i 12 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 3), GENBANK pristupni br. NT_010783.14 skraćena od nukleotida 2624000 do 2761000 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 4), GENBANK pristupni br. DR002467.1 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 5), GENBANK pristupni br. NM_001203251.1 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 6), i GENBANK pristupni br. NM_016835.4 (ovde uključena kao SEQ ID NO: 7).
[0090] Razume se da je sekvenca navedena u svakoj SEQ ID NO u primerima sadržanim ovde nezavisna od bilo koje modifikacije šećernog fragmenta, internukleozidne veze ili nukleobaze. Kao takva, antisens jedinjenja definisana sa SEQ ID NO mogu da sadrže, nezavisno, jednu ili više modifikacija šećernog fragmenta, internukleozidne veze ili nukleobaze. Antisens jedinjenja opisana preko Isis broja (ISIS br.) pokazuju kombinaciju sekvence nukleobaze i motiva.
[0091] U određenim slučajevima, ciljni region je strukturno definisan region ciljne nukleinske kiseline. Na primer, ciljni region može da obuhvata 3' UTR, 5' UTR, egzon, intron, egzon/intron spoj, kodirajući region, translacioni inicijacioni region, translacioni terminacioni region ili drugi definisani region nukleinske kiseline. Strukturno definisani regioni za Tau mogu biti dobijeni preko pristupnog broja iz baze podataka sekvenci kao što je NCBI. U određenim primerima izvođenja, ciljni region može da obuhvata sekvencu od 5' ciljnog mesta jednog ciljnog segmenta unutar ciljnog regiona do 3' ciljnog mesta drugog ciljnog segmenta unutar istog ciljnog regiona.
[0092] Ciljno delovanje obuhvata određivanje najmanje jednog ciljnog segmenta sa kojim se antisens jedinjenje hibridizuje, tako da se javlja željeni efekat. U određenim primerima izvođenja, željeni efekat je smanjenje u nivoima iRNK ciljne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, željeni efekat je smanjenje nivoa proteina kodiranog ciljnom nukleinskom kiselinom ili fenotipska promena povezana sa ciljnom nukleinskom kiselinom.
[0093] Ciljni region može da sadrži jedan ili više ciljnih segmenata. Višestruki ciljni segmenti unutar ciljnog regiona mogu da se preklapaju. Alternativno, oni mogu biti nepreklapajući. U određenim slučajevima, ciljni segmenti unutar ciljnog regiona su odvojeni sa ne više od oko 300 nukleotida. U određenim primerima izvođenja, ciljni segmenti unutar ciljnog regiona su odvojeni određenim brojem nukleotida to jest, to je oko, ne više od, ne više od oko, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ili 10 nukleotida na ciljnoj nukleinskoj kiselini ili je opseg definisan sa bilo koje dve od prethodnih vrednosti. U određenim slučajevima, ciljni segmenti unutar ciljnog regiona su odvojeni sa ne više od, ili ne više od oko, 5 nukleotida na
1
ciljnoj nukleinskoj kiselini. U određenim primerima izvođenja, ciljni segmenti su kontinuirani. Razmatrani su ciljni regioni definisani opsegom koji ima početnu nukleinsku kiselinu koja je bilo koja od 5' ciljnih mesta ili 3' ciljnih mesta navedenih ovde.
[0094] Pogodni ciljni segmenti se mogu naći unutar 5' UTR, kodirajućeg regiona, 3' UTR, introna, egzona ili egzon/intron spoja. Ciljni segmenti koji sadrže start kodon ili stop kodon su takođe pogodni ciljni segmenti. Pogodan ciljni segment može specifično da obuhvata određeni strukturno definisani region kao što je start kodon ili stop kodon.
[0095] Određivanje pogodnih ciljnih segmenata može da obuhvata poređenje sekvence ciljne nukleinske kiseline sa drugim sekvencama u genomu. Na primer, BLAST algoritam može biti korišćen za identifikaciju regiona sličnosti među različitim nukleinskim kiselinama. Ovo poređenje može da spreči selekciju sekvenci antisens jedinjenja koje mogu da se hibridizuju na nespecifičan način sa sekvencama osim izabrane ciljne nukleinske kiseline (tj., neciljnim ili vanciljnim sekvencama).
[0096] Može postojati varijacija u aktivnosti (npr., kao što je definisana preko procenta smanjenja nivoa ciljne nukleinske kiseline) antisens jedinjenja unutar aktivnog ciljnog regiona. U određenim primerima izvođenja, smanjenja u nivoima iRNK Tau su indikativna za inhibiciju ekspresije Tau. Smanjenja u nivoima Tau proteina su takođe indikativna za inhibiciju ekspresije ciljne iRNK. Smanjenje procenta ćelija koje se boje pozitivno na hiperfosforilisani Tau ukazuje na inhibiciju ekspresije Tau. Dalje, fenotipske promene su indikativne za inhibiciju ekspresije Tau. Poboljšanje u neurološkoj funkciji je indikativno za inhibiciju ekspresije Tau. Poboljšana memorija i motorna funkcija su indikativne za inhibiciju ekspresije Tau. Smanjenje neurofibrilarnih inkluzija je indikativno za inhibiciju ekspresije Tau.
Hibridizacija
[0097] U nekim slučajevima, hibridizacija se javlja između antisens jedinjenja otkrivenog ovde i nukleinske kiseline Tau. Najčešći mehanizam hibridizacije obuhvata vodoničnu vezu (npr., Watson-Crick, Hoogsteen ili reverznu Hoogsteen vodoničnu vezu) između komplementarnih nukleobaza molekula nukleinske kiseline.
[0098] Hibridizacija može da se javi pod različitim uslovima. Strogi uslovi su zavisni od sekvence i određeni su prirodnom i sastavom molekula nukleinske kiseline koji će hibridizovati.
[0099] Postupci za određivanje da li se sekvenca može specifično hibridizovati sa ciljnom nukleinskom kiselinom su dobro poznati u stanju tehnike. U određenim primerima izvođenja,
2
antisens jedinjenja obezbeđena ovde specifično mogu hibridizovati sa nukleinskom kiselinom Tau.
Komplementarnost
[0100] Antisens jedinjenje i ciljna nukleinska kiselina su međusobno komplementarni kada dovoljan broj nukleobaza antisens jedinjenja može da se veže vodoničnom vezom sa odgovarajućim nukleobazama ciljne nukleinske kiseline, tako da se javi željeni efekat (npr., antisens inhibicija ciljne nukleinske kiseline, kao što je nukleinska kiselina Tau).
[0101] Nekomplementarne nukleobaze između antisens jedinjenja i Tau nukleinske kiseline mogu biti tolerisane uz uslov da antisens jedinjenje ostaje sposobno da specifično hibridizuje sa ciljnom nukleinskom kiselinom. Pored toga, antisens jedinjenje može da hibridizuje preko jednog ili više segmenata Tau nukleinske kiseline tako da segmenti koji su između ili segmenti koji su susedni nisu uključeni u hibridizacioni događaj (npr., strukturu petlje, nepoklapanje ili strukturu ukosnice).
[0102] Antisens jedinjenja koja su ovde otkrivena ili njihov naznačeni deo, su, ili su najmanje, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% komplementarna sa nukleinskom kiselinom Tau, ciljnim regionom, ciljnim segmentom ili njihovim naznačenim delom. Procenat komplementarnosti antisens jedinjenja sa ciljnom nukleinskom kiselinom može biti određen upotrebom rutinskih postupaka.
[0103] Na primer, antisens jedinjenje u kome su 18 od 20 nukleobaza antisens jedinjenja komplementarne sa ciljnim regionom, i prema tome bi se specifično hibridizovale, predstavljalo bi 90 procenata komplementarnosti. U ovom primeru, preostale nekomplementarne nukleobaze mogu biti grupisane ili isprekidane komplementarnim nukleobazama i ne moraju biti međusobno ili sa komplementarnim bazama kontinuirane. Kao takvo, antisens jedinjenje koje je dužine 18 nukleobaza koje ima 4 (četiri) nekomplementarne nukleobaze koje se preklapaju sa dva regiona kompletne komplementarnosti sa ciljnom nukleinskom kiselinom imalo bi 77.8% ukupne komplementarnosti sa ciljnom nukleinskom kiselinom. Procenat komplementarnosti antisens jedinjenja sa regionom ciljne nukleinske kiseline može biti određen rutinski upotrebom BLAST programa (alati za pretraživanje osnovnog lokalnog poravnanja) i PowerBLAST programa poznatih u stanju tehnike (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649656). Procenat homologije, identičnosti ili komplementarnosti sekvenci, može biti određen preko, na primer, Gap programa (Wisconsin Sequence Analysis Package, verzija 8 za Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), upotrebom zadatih podešavanja, koji koristi algoritam autora Smith i Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482489).
[0104] U određenim primerima izvođenja, ovde obezbeđena antisens jedinjenja ili njihovi naznačeni delovi su potpuno komplementarni (tj., 100% komplementarni) sa ciljnom nukleinskom kiselinom ili njenim naznačenim delom. Na primer, antisens jedinjenje može biti potpuno komplementarno sa nukleinskom kiselinom Tau ili ciljnim regionom, ili ciljnim segmentom ili njihovom ciljnom sekvencom. Kako se ovde koristio, "potpuno komplementaran" označava svaku nukleobazu antisens jedinjenja koja je sposobna za precizno sparivanje baza sa odgovarajućim nukleobazama ciljne nukleinske kiseline. Na primer, antisens jedinjenje od 20 nukleobaza je potpuno komplementarno sa ciljnom sekvencom koja je dužine 400 nukleobaza, sve dok postoji odgovarajući deo od 20 nukleobaza ciljne nukleinske kiseline koji je potpuno komplementaran sa antisens jedinjenjem. Potpuna komplementarnost se takođe može koristiti u vezi sa naznačenim delom prve i/ili druge nukleinske kiseline. Na primer, deo od 20 nukleobaza antisens jedinjenja od 30 nukleobaza može biti "potpuno komplementaran" sa ciljnom sekvencom koja je dužine 400 nukleobaza. Deo od 20 nukleobaza od oligonukleotida od 30 nukleobaza je potpuno komplementaran sa ciljnom sekvencom ako ciljna sekvenca ima odgovarajući deo od 20 nukleobaza gde je svaka nukleobaza komplementarna sa delom od 20 nukleobaza antisens jedinjenja. Istovremeno, celo antisens jedinjenje od 30 nukleobaza može ili ne mora biti potpuno komplementarno sa ciljnom sekvencom, u zavisnosti od toga da li su preostalih 10 nukleobaza antisens jedinjenja takođe komplementarne sa ciljnom sekvencom.
[0105] Lokacija nekomplementarne nukleobaze može biti na 5' kraju ili 3' kraju antisens jedinjenja. Alternativno, nekomplementarna nukleobaza ili nukleobaze mogu biti na unutrašnjem položaju antisens jedinjenja. Kada su prisutne dve ili više nekomplementarnih nukleobaza, one mogu biti kontinuirane (tj., vezane) ili nekontinuirane. U jednom primeru izvođenja, nekomplementarna nukleobaza se nalazi u krilnom segmentu gapmer antisens oligonukleotida.
[0106] U određenim slučajevima, antisens jedinjenja koja su ili su do 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 nukleobaza u dužinu sadrže ne više od 4, ne više od 3, ne više od 2, ili ne više od 1 nekomplementarne nukleobaze u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu, kao što je nukleinska kiselina Tau ili njen naznačeni deo.
[0107] U određenim slučajevima, antisens jedinjenja koja su, ili su do 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ili 30 nukleobaza u dužinu sadrže ne više od 6, ne više od 5, ne više od 4, ne više od 3, ne više od 2, ili ne više od 1 nekomplementarnih
4
nukleobaza u odnosu na ciljnu nukleinsku kiselinu, kao što je nukleinska kiselina Tau ili njen naznačeni deo.
[0108] Antisens jedinjenja koja su ovde obezbeđena takođe obuhvataju ona koja su komplementarna delu ciljne nukleinske kiseline. Kako se ovde koristi, "deo" označava definisani broj uzastopnih (tj. vezanih) nukleobaza unutar regiona ili segmenta ciljne nukleinske kiseline. "Deo" takođe može da se odnosi na definisani broj kontinuiranih nukleobaza antisens jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 8 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 9 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 10 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 11 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 12 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 13 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 14 nukleobaza ciljnog segmenta. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja su komplementarna sa delom od najmanje 15 nukleobaza ciljnog segmenta. Takođe su razmatrana antisens jedinjenja koja su komplementarna sa delom od najmanje 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, ili više nukleobaza ciljnog segmenta, ili opsegom definisanim sa bilo koje dve od ovih vrednosti.
Identičnost
[0109] Antisens jedinjenja koja su ovde obezbeđena takođe mogu imati definisani procenat identičnosti sa određenom nukleotidnom sekvencom, SEQ ID NO ili jedinjenjem predstavljenim specifičnim Isis brojem, ili njegovim delom. Kako se ovde koristio, antisens jedinjenje je identično sa sekvencom koja je ovde otkrivena ako ima istu sposobnost sparivanja nukleobaza. Na primer, RNK koja sadrži uracil umesto timidina u otkrivenoj DNK sekvenci smatrala bi se identičnom sa DNK sekvencom s obzirom na to da se i uracil i timidin sparuju sa adeninom. Takođe su razmatrane skraćene i produžene verzije antisens jedinjenja opisanih ovde kao i jedinjenja koja imaju neidentične baze u odnosu na ovde obezbeđena antisens jedinjenja. Neidentične baze mogu biti međusobno susedne ili dispergovane u antisens jedinjenju. Procenat identičnosti antisens jedinjenja je izračunat prema broju baza koje imaju identično sparivanja baza u odnosu na sekvencu sa kojom se poredi.
[0110] U određenim slučajevima, antisens jedinjenja ili njihovi delovi, su najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identični sa jednim ili više od antisens jedinjenja ili SEQ ID NOs, ili njihovim delom, koji su ovde otkriveni.
[0111] U određenim primerima izvođenja, deo antisens jedinjenja je upoređivan sa delom iste dužine ciljne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, deo od 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, ili 25 nukleobaza je upoređivan sa delom iste dužine ciljne nukleinske kiseline.
[0112] U određenim primerima izvođenja, deo antisens oligonukleotida je upoređivan sa delom iste dužine ciljne nukleinske kiseline. U određenim primerima izvođenja, deo od 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 ili 25 nukleobaza je upoređivan sa delom iste dužine ciljne nukleinske kiseline.
Modifikacije
[0113] Nukleozid je kombinacija baze-šećera. Nukleobazni (takođe poznat kao bazni) deo nukleozida je normalno heterociklični bazni fragment. Nukleotidi su nukleozidi koji dodatno obuhvataju fosfatnu grupu kovalentno vezanu za šećerni deo nukleozida. Za one nukleozide koji obuhvataju pentofuranozil šećer, fosfatna grupa može biti vezana za 2', 3' ili 5' hidroksi fragment šećera. Oligonukleotidi su formirani preko kovalentne međusobne veze susednih nukleozida, da bi se formirao linearni polimerni oligonukleotid. Unutar strukture oligonukleotida, fosfatne grupe su uobičajene označene tako da formiraju internukleozidne veze za oligonukleotid.
[0114] Modifikacije antisens jedinjenja obuhvataju supstitucije ili promene internukleozidnih veza, šećernih fragmenata ili nukleobaza. Modifikovana antisens jedinjenja su često poželjno u odnosu na nativne oblike zbog poželjnih osobina kao što su, na primer, pojačani ćelijski unos, pojačani afinitet za ciljnu nukleinsku kiselinu, povećanu stabilnost u prisustvu nukleaza ili povećanu inhibitornu aktivnost.
[0115] Hemijski modifikovani nukleozidi mogu takođe da se koriste za povećanje vezujućeg afiniteta skraćenog ili odsečenog antisens oligonukleotida za njegovu ciljnu nukleinsku kiselinu. Posledično, slični rezultati mogu često biti dobijeni sa kraćim antisens jedinjenjima koja imaju takve hemijski modifikovane nukleozide.
Modifikovane internukleozidne veze
[0116] Prirodna internukleozidna veza RNK i DNK je 3' ka 5' fosfodiestarska veza. Antisens jedinjenja koja imaju jednu ili više modifikovanih, tj. neprirodnih, internukleozidnih veza su često izabrana u odnosu na antisens jedinjenja koja imaju prirodne internukleozidne veze zbog poželjnih osobina kao što su, na primer, pojačani ćelijski unos, pojačani afinitet za ciljne nukleinske kiseline i povećana stabilnost u prisustvu nukleaza.
[0117] Oligonukleotidi koji imaju modifikovane internukleozidne veze obuhvataju internukleozidne veze koje zadržavaju atom fosfora kao i internukleozidne veze koje nemaju atom fosfora. Reprezentativne internukleozidne veze koje sadrže fosfor obuhvataju, ali bez ograničenja na, fosfodiestre, fosfortriestre, metilfosfonate, fosforamidat i fosforotioate. Dobro su poznati postupci za pripremu veza koje sadrže fosfor i koje ne sadrže fosfor.
[0118] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja koja ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau sadrže jednu ili više modifikovanih internukleozidnih veza. U određenim primerima izvođenja, modifikovane internukleozidne veze su raspoređene duž antisens jedinjenja. U određenim primerima izvođenja, modifikovane internukleozidne veze su fosforotioatne veze. U određenim primerima izvođenja, svaka internukleozidna veza antisens jedinjenja je fosforotioatna internukleozidna veza.
Modifikovani šećerni fragmenti
[0119] Antisens jedinjenja mogu izborno da sadrže jedan ili više nukleozida gde je šećerna grupa modifikovana. Takvi šećerni modifikovani nukleozidi mogu da pruže pojačanu stabilnost nukleaze, povećani afinitet vezivanja ili neku drugu korisnu biološku osobinu antisens jedinjenjima. U određenim primerima izvođenja, nukleozidi sadrže hemijski modifikovane fragmente ribofuranoznog prstena. Primeri hemijski modifikovanih ribofuranoznih prstenova obuhvataju bez ograničenja, dodavanje supstituišućih grupa (uključujući 5' i 2' supstituišuće grupe, premošćujući ne-geminalne atome prstena da bi se formirale biciklične nukleinske kiseline (BNK), zamena atoma kiseonika ribozil prstena sa S, N(R) ili C(R1)(R2) (R, R1i R2su svaki nezavisno H, C1-C12alkil ili zaštitna grupa) i njihove kombinacije. Primeri hemijski modifikovanih šećera obuhvataju 2'-F-5'-metil supstituisani nukleozid (videti PCT međunarodnu prijavu WO 2008/101157 objavljenu dana 8/21/08 za druge otkrivene 5',2'-bis supstituisane nukleozide) ili zamenu atoma kiseonika u ribozil prstenu sa S sa dodatnom supstitucijom na 2'-položaju (videti objavljenu SAD patentnu prijavu US2005-0130923, objavljenu 16.6.2005.) ili alternativno 5'-supstituciju BNK (videti PCT međunarodnu prijavu WO 2007/134181 objavljenu 11/22/07 gde je LNA supstituisan sa na primer 5'-metil ili 5'-vinil grupom).
[0120] Primeri nukleozida koji imaju modifikovane šećerne fragmente obuhvataju bez ograničenja nuleozide koji sadrže 5'-vinil, 5'-metil (R ili S), 4'-S, 2'-F, 2'-OCH3, 2'-OCH2CH3, 2'-OCH2CH2F i 2'-O(CH2)2OCH3supstituišuće grupe. Supstituent na 2' položaju takođe može biti izabran od alil, amino, azido, tio, O-alil, O-C1-C10alkil, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) i O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), gde je svaki Rl, Rmi Rn, nezavisno, H ili supstituisan ili nesupstituisan C1-C10alkil.
[0121] Kako se ovde koristio, "biciklični nukleozidi" označavaju modifikovane nukleozide koji sadrže biciklični šećerni fragment. Primeri bicikličnih nukleozida uključuju bez ograničenja nukleozide koji sadrže most između 4' i 2' atoma ribozilnog prstena. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja opisana ovde obuhvataju jedan ili više bicikličnih nukleozida koji sadrže most od 4' ka 2'. Primeri takvih 4' ka 2' premošćenih bicikličnih nukleozida, uključuju, ali nisu ograničeni na one formule: 4'-(CH2)-O-2' (LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-CH(CH3)-O-2' i 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (i njihove analoge, videti SAD patent 7,399,845, objavljen 15.7.2008.); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (i njegove analoge, videti objavljenu međunarodnu prijavu WO/2009/006478, objavljen 8.1.2009.); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (i njegove analoge, videti objavljenu međunarodnu prijavu WO/2008/150729, objavljenu 11.12.2008.); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (videti objavljenu SAD patentnu prijavu US2004-0171570, objavljenu 2.9.2004.); 4'-CH2-N(R)-O-2', gde R predstavlja H, C1-C12alkil, ili zaštitnu grupu (videti SAD patent 7,427,672, objavljenu 23.9.2008.); 4'-CH2-C(H)(CH3)-2' (videti Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); i 4'-CH2-C-(=CH2)-2' (i njegove analoge, videti objavljenu međunarodnu prijavu WO 2008/154401, objavljenu 8.12.2008.).
[0122] Dalji izveštaji vezani za biciklične nukleozide mogu se takođe naći u objavljenoj literaturi (videti na primer: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al, Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; i Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; SAD patente br.
6,268,490; 6,525,191; 6,670,461; 6,770,748; 6,794,499; 7,034,133; 7,053,207; 7,399,845; 7,5 47,684; i 7,696,345; SAD patentnu objavu br. US2008-0039618; US2009-0012281; objavljene PCT međunarodne prijave WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; i WO 2009/006478. Svaki od gore navedenih bicikličnih nukleozida može da se pripremi tako da ima jednu ili više stereohemijskih konfiguracija šećera uključujući, na primer, α-L-ribofuranozu i β-Dribofuranozu (videti PCT međunarodnu prijavu PCT/DK98/00393, objavljenu 25.3.1999. kao WO 99/14226).
[0123] U određenim primerima izvođenja, biciklični šećerni fragmenti BNK nukleozida uključuju, ali nisu ograničeni na jedinjenja koja imaju najmanje jedan most između 4' i 2' položaja u pentofuranozilnom šećernom fragmentu gde takvi mostovi nezavisno sadrže 1 ili od 2 do 4 povezane grupe nezavisno odabrane od - [C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=O)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x-, i -N(Ra)-; gde:
x je 0, 1 ili 2;
n je 1, 2, 3 ili 4;
svaki Rai Rbje, nezavisno, H, zaštitna grupa, hidroksil, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, heterocikličan radikal, supstituisani heterociklični radikal, heteroaril, supstituisani heteroaril, C5-C7aliciklični radikal, supstituisani C5-C7aliciklični radikal, halogen, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, CN, sulfonil (S(=O)2-J1) ili sulfoksil (S(=O)-J1); i
svaki J1i J2je, nezavisno, H, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C5-C20aril, supstituisani C5-C20aril, acil (C(=O)-H), supstituisani acil, heterociklični radikal, supstituisani heterociklični radikal, C1-C12aminoalkil, supstituisani C1-C12aminoalkil ili zaštitna grupa.
[0124] U određenim primerima izvođenja, most bicikličnog šećernog fragmenta je -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- ili -C(RaRb)-O-N(R)-. U određenim primerima izvođenja, most je 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' i 4'-CH2-N(R)-O-2'- gde je svako R, nezavisno, H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil.
[0125] U određenim primerima izvođenja, biciklični nukleozidi su dalje definisani izomernom konfiguracijom. Na primer, nukleozid koji sadrži 4'-2' metilenoksi most, može biti u α-L konfiguraciji ili u β-D konfiguraciji. Prethodno, α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNK su ugrađeni u antisens oligonukleotide koji su pokazali antisens aktivnost (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).
[0126] U određenim primerima izvođenja, biciklični nukleozidi uključuju, ali nisu ograničeni na, (A) α-L-metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNK, (B) β-D-metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNK, (C) etilenoksi (4'-(CH2)2-O-2') BNK, (D) aminooksi (4'-CH2-O-N(R)-2') BNK, (E) oksiamino (4'CH2-N(R)-O-2') BNK, i (F) metil(metilenoksi) (4'-CH(CH3)-O-2') BNK, (G) metilen-tio (4'-CH2-S-2') BNK, (H) metilen-amino (4'-CH2-N(R)-2') BNK, (I) metil karbocikličnu (4'-CH2-CH(CH3)-2') BNK, i (J) propilen karbocikličnu (4'-(CH2)3-2') BNK kao što je ispod prikazano.
gde je Bx bazni fragment i R je nezavisno H, zaštitna grupa ili C1-C12alkil.
[0127] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule I:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
-Qa-Qb-Qc- je -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O-ili -N(Rc)-O-CH2;
Rcje C1-C12alkil ili amino zaštitna grupa; i
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom.
4
[0128] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule II:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom;
Zaje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, supstituisani C1-C6alkil, supstituisani C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkinil, acil, supstituisani acil, supstituisani amid, tiol ili supstituisani tio.
[0129] U jednom primeru izvođenja, svaka od supstituisanih grupa, je, nezavisno, mono ili poli supstituisana sa supstituišućim grupama nezavisno izabranim od halogena, okso, hidroksila, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, i NJeC(=X)NJcJd, gde je svaki Jc, Jdi Je, nezavisno, H, C1-C6alkil ili supstituisani C1-C6alkil i X je O ili NJc.
[0130] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule III:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom;
Zbje C1-C6alkil, C2-C6alkenil, C2-C6alkinil, supstituisani C1-C6alkil, supstituisani C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkinil ili supstituisani acil (C(=O)-).
[0131] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule IV:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom;
Rdje C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisani C2-C6alkinil;
svaki qa, qb, qci qdje, nezavisno, H, halogen, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisani C2-C6alkinil, C1-C6alkoksil, supstituisani C1-C6alkoksil, acil, supstituisani acil, C1-C6aminoalkil ili supstituisani C1-C6aminoalkil;
[0132] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule V:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom;
qa, qb, qei qfsu svaki, nezavisno, vodonik, halogen, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C1-C12alkoksi, supstituisani C1-C12alkoksi, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJkili N(H)C(=S)NJjJk;
ili qei qfsu zajedno =C(qg)(qh);
qgi qhsu svaki, nezavisno, H, halogen, C1-C12alkil ili supstituisani C1-C12alkil.
[0133] Opisana je sinteza i priprema metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNK monomera adenina, citozina, guanina, 5-metil-citozina, timina i uracila, zajedno sa njihovom oligomerizacijom, i svojstvima prepoznatljivosti nukleinskih kiselina (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). BNK i njihova priprema takođe su opisani u WO 98/39352 i WO 99/14226.
[0134] Analozi metilenoksi (4'-CH2-O-2') BNK i 2'-tio-BNK, su takođe pripremljeni (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Priprema analoga zaključanih nukleozida koji sadrže oligodezoksiribonukleotidne duplekse u svojstvu supstrata za polimeraze nukleinskih kiselina takođe je opisana (Wengel et al., WO 99/14226). Osim toga, u stanju tehnike opisana je i sinteza 2'-amino-BNK, novog konformaciono ograničenog visokoafinitetnog oligonukleotidnog analoga (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Dodatno, pripremljene su 2'-amino- i 2'-metilamino-BNK i termalna stabilnost njihovih dupleksa sa komplementarnim lancima RNK i DNK je prethodno objavljena.
[0135] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su biciklični nukleozidi formule VI:
u kojoj:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno H, hidroksilna zaštitna grupa, konjugovana grupa, reaktivna fosforna grupa, fosforni fragment ili kovalentna veza sa potpornim medijumom;
svaki qi, qj, qki qlje, nezavisno, H, halogen, C1-C12alkil, supstituisani C1-C12alkil, C2-C12alkenil, supstituisani C2-C12alkenil, C2-C12alkinil, supstituisani C2-C12alkinil, C1-C12alkoksil, supstituisani C1-C12alkoksil, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJkili N(H)C(=S)NJjJk; i
qii qjili qli qksu zajedno =C(qg)(qh), gde su qgi qhsvaki nezavisno, H, halogen, C1-C12alkil ili supstituisani C1-C12alkil.
[0136] Opisani su jedan karbociklični biciklični nukleozid koji ima 4'-(CH2)3-2' most i most analoga alkenila 4'-CH=CH-CH2-2' (Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 i Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). Takođe je opisana sinteza i priprema karbociklilnih bicikličnih nukleozida zajedno sa njihovom oligomerizacijom i biohemijskim ispitivanjima (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007,129(26), 8362-8379).
4
[0137] Kako se ovde koristi, "4'-2' biciklični nukleozid" ili "4' ka 2' biciklični nukleozid" označava biciklični nukleozid koji sadrži furanozni prsten koji sadrži most koji povezuje dva atoma ugljenika furanoznog prstena povezuje 2' atom ugljenika i 4' atom ugljenika šećernog prstena.
[0138] Kako se ovde koristio, "monociklični nuleozidi" označavaju nukleozide koji sadrže modifikovane šećerne fragmente koje nisu biciklični šećerni fragmenti. U određenim slučajevima, šećerni fragment ili analog šećernog fragmenta nukleozida može da bude modifikovan ili supstituisan na bilo kom položaju.
[0139] Kako se ovde koristi, "2'-modifikovani šećer" označava furanozil šećer modifikovan na 2' položaju. U određenim primerima izvođenja, takve modifikacije obuhvataju supstituente izabrane od: halogenida, uključujući, ali bez ograničenja na supstituisani i nesupstituisani alkoksi, supstituisani i nesupstituisani tioalkil, supstituisani i nesupstituisani amino alkil, supstituisani i nesupstituisani alkil, supstituisani i nesupstituisani alil i supstituisani i nesupstituisani alkinil. U određenim primerima izvođenja, 2' modifikacije su izabrane od supstituenata uključujući, ali bez ograničenja na: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3i O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, gde su n i m od 1 do oko 10. Ostale 2'- supstiuišuće grupe takođe mogu biti izabrane od: C1-C12alkila, supstituisanog alkila, alkenila, alkinila, alkarila, aralkila, O-alkarila ili O-aralkila, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, heterocikloalkila, heterocikloalkarila, aminoalkilamino, polialkilamino, supstituisanog silila, grupe za cepanje RNK, reporter grupe, interkalatora, grupe za poboljšanje farmakokinetičkih osobina ili grupe za poboljšanje farmakodinamičkih osobina antisens jedinjenja, i drugih supstituenata koji imaju slične osobine. U određenim primerima izvođenja, modifikovani nukleozidi sadrže 2'-MOE bočni lanac (Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Takva 2'-MOE supstitucija je opisana kao da ima poboljšani afinitet vezivanja u poređenju sa nemodifikovanim nukleozidima i sa drugim modifikovanim nukleozidima, kao što je 2'- O-metil, O-propil i O-aminopropil. Takođe je pokazano da su oligonukleotidi koji imaju 2'-MOE supstituent antisens inhibitori genske ekspresije sa obećavajućim karakteristikama za in vivo upotrebu (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; i Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).
[0140] Kako se ovde koristi, "modifikovani tetrahidropiran nukleozid" ili "modifikovani THP nukleozid" označava nukleozid koji ima šestočlani tetrahidropiranski "šećer" supstituisan za pentofuranozilnu reziduu u normalnim nukleozidima (surogat šećera). Modifikovani THP nukleozidi uključuju, ali nisu ograničeni na, ono što se u struci naziva heksitol nukleinska kiselina (HNK), anitol nukleinska kiselina (ANK), manitol nukleinska kiselina (MNK) (videti Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854), fluoro HNK (F-HNK) ili ona jedinjenja koja imaju formulu VII:
u kojoj nezavisno za svaki od navedenog najmanje jednog tetrahidropiranskog nukleozidnog analoga formule VII:
Bx je heterociklični bazni fragment;
Tai Tbsu svaki, nezavisno, internukleozidna vezujuća grupa koja povezuje tetrahidropiranski nukleozidni analog sa antisens jedinjenjem ili je jedno od Tai Tbinternukleozidna vezujuća grupa koja povezuje tetrahidropiranski nukleozidni analog sa antisens jedinjenjem, a drugo od Tai Tbje H, hidroksilna zaštitna grupa, povezana konjugovana grupa ili 5' ili 3'-terminalna grupa;
q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7su svaki nezavisno, H, C1-C6alkil, supstituisani C1-C6alkil, C2-C6alkenil, supstituisani C2-C6alkenil, C2-C6alkinil ili supstituisani C2-C6alkinil; i svaki od R1i R2je odabran od vodonika, hidroksila, halogena, supstituisanog ili nesupstituisanog alkoksi, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2NJ3C(=X)NJ1J2i CN, pri čemu X predstavlja O, S ili NJ1i svaki J1, J2i J3je, nezavisno, H ili C1-C6alkil.
[0141] U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su modifikovani THP nukleozidi formule VII u kojoj je svaki q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7H. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je različit od H. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan od q1, q2, q3, q4, q5, q6i q7je metil. U određenim primerima izvođenja, obezbeđeni su THP nukleozidi formule VII u kojoj je jedan od R1i R2fluoro. U određenim primerima izvođenja, R1je fluoro i R2je H; R1je metoksi i R2je H, i R1je H i R2je metoksietoksi.
[0142] Kako se ovde koristio, "2'-modifikovani" ili "2'-supstituisani" označava nukleozid koji sadrži šećer koji sadrži supstituent na 2' položaju koji se razlikuje od H ili OH. 2'-modifikovani nukleozidi, obuhvataju, ali bez ograničenja na, biciklične nukleozide u kojima most koji povezuje dva atoma ugljenika šećernog prstena povezuje 2' ugljenik i drugi ugljenik
4
šećernog prstena; i nukleozide sa nepremošćujućim 2' supstituentima, kao što su alil, amino, azido, tio, O-alil, O-C1-C10alkil, -OCF3, O-(CH2)2-O-CH3, 2'-O(CH2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) ili O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn), gde je svaki Rmi Rn, nezavisno, H ili supstituisan ili nesupstituisan C1-C10alkil. 2'-modifikovani nukleozidi mogu dalje da sadrže ostale modifikacije, na primer na ostalim položajima šećera i/ili na nukleobazi.
[0143] Kako se ovde koristi, "2'-F" označava nukleozid koji sadrži šećer koji sadrži fluoro grupu na 2' položaju šećernog prstena.
[0144] Kako se ovde koristi, "2'-OMe" ili "2'-OCH3" ili "2'-O-metil" svaki se odnosi na nukleozid koji sadrži šećer koji sadrži -OCH3grupu na 2' položaju šećernog prstena.
[0145] Kako se ovde koristi, "MOE" ili "2'-MOE" ili "2'-OCH2CH2OCH3" ili "2'-O-metoksietil" svaki se odnosi na nukleozid koji sadrži šećer koji sadrži -OCH2CH2OCH3grupu na 2' položaju šećernog prstena.
[0146] Kako se ovde koristi, "oligonukleotid" označava jedinjenje koje sadrži mnoštvo vezanih nukleozida. U određenim primerima izvođenja, jedan ili više od mnoštva nukleozida je modifikovan. U određenim primerima izvođenja, oligonukleotid sadrži jedan ili više ribonukleozida (RNK) i/ili dezoksiribonukleozida (DNK). U struci su poznati i mnogi drugi biciklo i triciklo prstenasti sistemi kao surogati šećera koji mogu da se upotrebe za modifikovanje nukleozida za ugradnju u antisens jedinjenja (videti, na primer, pregledni članak: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-854). Takvi prstenasti sistemi mogu da se podvrgnu raznim dodatnim supstitucijama za poboljšanje aktivnosti.
[0147] Postupci za pripremu modifikovanih šećera su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti.
[0148] U nukleotidima koji imaju modifikovane šećerne fragmente, fragmenti nukleobaza (prirodni, modifikovani ili njihova kombinacija) obezbeđuju hibridizaciju sa odgovarajućom ciljnom nukleinskom kiselinom.
[0149] U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja sadrže jedan ili više nukleozida koji imaju modifikovane šećerne fragmente. U određenim primerima izvođenja, modifikovani šećerni fragment je 2'-MOE. U određenim primerima izvođenja, 2'-MOE modifikovani nukleozidi su raspoređeni u motivu gapmera. U određenim primerima izvođenja, modifikovani šećerni fragment je biciklični nukleozid koji ima (4'-CH(CH3)-O-2') premošćujuću grupu. U određenim primerima izvođenja, (4'-CH(CH3)-O-2') modifikovani nukleozidi su raspoređeni u krilima motiva gapmera.
Kompozicije i postupci za formulaciju farmaceutskih kompozicija
4
[0150] Antisens oligonukleotidi mogu biti mešani sa farmaceutski prihvatljivim aktivnim ili inertnim supstancama za pripremu farmaceutskih kompozicija ili formulacija. Kompozicije i postupci za formulaciju farmaceutskih kompozicija su zavisni od broja kriterijuma, uključujući, ali bez ograničenja na, put primene, težinu bolesti ili dozu koja se primenjuje.
[0151] Antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau može biti korišćeno u farmaceutskim kompozicijama kombinovanjem antisens jedinjenja sa pogodnim farmaceutski prihvatljivim razblaživačem ili nosačem. Farmaceutski prihvatljiv razblaživač obuhvata fosfatno-puferisani fiziološki rastvor (PBS). PBS je razblaživač pogodan za upotrebu u kompozicijama za parenteralnu isporuku. Prema tome, u postupcima opisanim ovde korišćena je farmaceutska kompozicija koja sadrži antisens jedinjenje koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau i farmaceutski prihvatljiv razblaživač. U određenim primerima izvođenja, farmaceutski prihvatljiv razblaživač je PBS. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenje je antisens oligonukleotid.
[0152] Farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenja obuhvataju bilo koje farmaceutski prihvatljive soli, estre ili soli takvih estara, ili bilo koji drugi oligonukleotid koji, je posle primene na životinju, uključujući čoveka, sposoban da obezbedi (direktno ili indirektno) svoj biološki aktivni metabolit ili ostatak. Prema tome, na primer, otkrivene su farmaceutski prihvatljive soli antisens jedinjenja, prolekovi, farmaceutski prihvatljive soli takvih prolekova i drugi bioekvivalenti. Pogodne farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, ali bez ograničenja na soli natrijuma i kalijuma.
[0153] Prolek može da obuhvata ugradnju dodatnih nukleozida na jednom ili oba kraja antisens jedinjenja koji su skraćeni pomoću endogenih nukleaza unutar tela, da bi se formiralo aktivno antisens jedinjenje.
Konjugovana antisens jedinjenja
[0154] Antisens jedinjenja mogu biti kovalentno vezana za jednu ili više fragmenata ili konjugata koji pojačavaju aktivnost, ćelijsku raspodelu ili ćelijski unos rezultujućih antisens oligonukleotida. Tipične grupe konjugata obuhvataju fragmente holesterola i lipidne fragmente. Dodatne grupe konjugata obuhvataju ugljene hidrate, fosolipide, biotin, fenazin, folat, fenantridin, antrahinon, akridin, fluoresceine, rodamine, kumarine i boje.
[0155] Antisens jedinjenja mogu takođe biti modifikovana tako da imaju jednu ili više stabilizujućih grupa koje su generalno vezane za jedan ili oba terminusa antisens jedinjenja da bi se pojačale osobine kao što je, na primer, stabilnost na nukleazu. Uključene u stabilizujuće grupe su strukture u obliku kape. Ove terminalne modifikacije štite antisens jedinjenje koje
4
ima terminalnu nukleinsku kiselinu iz razlaganja egzonukleazom, i mogu da pomognu u isporuci i/ili lokalizaciji unutar ćelije. Kapa može biti prisutna na 5'-terminusu (5'-kapa), ili na 3'-terminusu (3'-kapa), ili može biti prisutna na oba terminusa. Strukture kape su dobro poznate u stanju tehnike i obuhvataju, na primer, invertovane dezoksi kape bez baza. Dodatne 3' i 5'-stabilizuje grupe koje se mogu koristiti kao kapa na jednom ili oba kraja antisens jedinjenja za pružanje stabilnosti na nukleazu obuhvataju one otkrivene u WO 03/004602 objavljenom 16.1.2003.
Ćelijska kultura i tretman antisens jedinjenjima
[0156] Efekti antisens jedinjenja na nivo, aktivnost ili ekspresiju nukleinskih kiselina Tau mogu biti testirani in vitro u različitim ćelijskim tipovima. Ćelijski tipovi korišćeni za takve analize su dostupni od komercijalnih nabavljača (npr. Američka kolekcija tipova kultura, Manassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD) i kultivisani su prema uputstvima nabavljača upotrebom komercijalno dostupnih reagenasa (npr. Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA). Ilustrativni ćelijski tipovi obuhvataju, ali bez ograničenja, HepG2 ćelije, Hep3B ćelije i primarne hepatocite.
In vitro testiranje antisens oligonukleotida
[0157] Ovde su opisani postupci za tretman ćelija antisens oligonukleotidima, koji mogu biti odgovarajuće modifikovani za tretman drugim antisens jedinjenjima.
[0158] Ćelije mogu biti tretirane antisens oligonukleotidima kada ćelije dostignu približno 60-80% konfluentnosti u kulturi.
[0159] Jedan reagens uobičajeno korišćen za uvođenje antisens oligonukleotida u kultivisane ćelije obuhvata katjonski lipidni transfekcioni reagens LIPOFECTIN (Invitrogen, Carlsbad, CA). Antisens oligonukleotidi mogu biti mešani sa LIPOFECTIN u OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) da bi se postigla željena finalna koncentracija antisens oligonukleotida i koncentracija LIPOFECTIN-a koja može biti u opsegu od 2 do 12 ug/mL na 100 nM antisens oligonukleotida.
[0160] Sledeći reagens korišćen za uvođenje antisens oligonukleotida u kultivisane ćelije obuhvata LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Carlsbad, CA). Antisens oligonukleotid je mešan sa medijumom LIPOFECTAMINE u OPTI-MEM 1 sa redukovanim serumom (Invitrogen, Carlsbad, CA) da bi se postigla željena koncentracija antisens oligonukleotida i koncentracija LIPOFECTAMINE-a koja može biti u opsegu od 2 do 12 ug/mL na 100 nM antisens oligonukleotida.
4
[0161] Sledeća tehnika korišćena za uvođenje antisens oligonukleotida u kultivisane ćelije obuhvata elektroporaciju.
[0162] Ćelije su tretirane antisens oligonukleotidima pomoću rutinskih postupaka. Ćelije mogu biti sakupljene 16-24 časova posle tretmana antisens oligonukleotidom, kada su nivoi RNK ili proteina ciljnih nukleinskih kiselina mereni pomoću postupaka poznatih u stanju tehnike i opisanih ovde. Uopšteno, kada su tretmani izvedeni u višestrukim ponavljanjima, podaci su predstavljeni kao srednja vrednost ponovljenih tretmana.
[0163] Koncentracija korišćenih antisens oligonukleotida varira od ćelijske linije do ćelijske linije. Postupci za određivanje optimalne koncentracije antisens oligonukleotida za određenu ćelijsku liniju su dobro poznati u stanju tehnike. Antisens oligonukleotidi su tipično korišćeni u koncentracijama u opsegu od 1 nM do 300 nM kada su transficirani sa LIPOFECTAMINE. Antisens oligonukleotidi su korišćeni u višim koncentracijama u opsegu od 625 do 20000 nM kada su transficirani upotrebom elektroporacije.
Izolacija RNK
[0164] Analiza RNK može biti izvedena na ukupnoj ćelijskoj RNK ili poli(A)+ iRNK. Postupci izolacije RNK su dobro poznati u stanju tehnike. RNK je pripremljena upotrebom postupaka koji su dobro poznati u stanju tehnike, na primer, upotrebom TRIZOL reagensa (Invitrogen, Carlsbad, CA) prema protokolima preporučenim od strane proizvođača.
Analiza inhibicije ciljnih nivoa ili ekspresije
[0165] Inhibicija nivoa ili ekspresije nukleinske kiseline Tau može biti analizirana na različite načine poznate u stanju tehnike. Na primer, nivoi ciljne nukleinske kiseline mogu biti kvantitativno određeni pomoću, npr., Northern blot analize, kompetetivne reakcije lančane polimeraze (PCR) ili kvantitativne PCR analize u realnom vremenu. Analiza RNK može biti izvedena na ukupnoj ćelijskoj RNK ili poli(A)+ iRNK. Postupci za izolaciju RNK su dobro poznati u stanju tehnike. Northern blot analiza je takođe rutinska u stanju tehnike. Kvantitativni PCR u realnom vremenu može biti pogodno postignut upotrebom komercijalno dostupnog ABI PRISM 7600, 7700 ili 7900 sistema za detekciju sekvence, dostupnog kod PE-Applied Biosystems, Foster City, CA i korišćen prema uputstvima proizvođača.
Kvantitativna PCR analiza u realnom vremenu nivoa ciljne RNK
[0166] Kvantitativno određivanje nivoa ciljne RNK može se postići pomoću kvantitativne PCR analize u realnom vremenu upotrebom ABI PRISM 7600, 7700 ili 7900 sistema za
4
detekciju sekvence (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA) prema uputstvima proizvođača. Postupci za kvantitativan PCR u realnom vremenu su dobro poznati u stanju tehnike.
[0167] Pre PCR analize u realnom vremenu, izolovana RNK je podvrgnuta reakciji reverzne transkriptaze (RT), koja proizvodi komplementarnu DNK (cDNK) koja se zatim koristi kao supstrat za PCR amplifikaciju u realnom vremenu. Reakcije RT i PCR u realnom vremenu izvedene su uzastopno u istom bunarčiću sa uzorkom. Reagensi za RT i PCR u realnom vremenu mogu se dobiti kod Invitrogen (Carlsbad, CA). Reakcije RT i PCR u realnom vremenu su izvedene pomoću postupaka koji su dobro poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike.
[0168] Ciljne količine gena (ili RNK) dobijene pomoću PCR analize u realnom vremenu su normalizovane upotrebom ekspresionog nivoa gena čija ekspresija je konstantna, kao što je ciklofilin A ili kvantitativnim određivanjem ukupne RNK upotrebom RIBOGREEN (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA). Ekspresija ciklofilina A je kvantitativno određena pomoću PCR analize u realnom vremenu, ispitivanjem istovremeno sa ciljnim mestom, multipleksiranjem ili odvojeno. Ukupna RNK je kvantitativno određena upotrebom RIBOGREEN reagensa za kvantitativno određivanje RNK (Invetrogen, Inc. Eugene, OR). Postupci za kvantitativno određivanje RNK pomoću RIBOGREEN prikazani su u Jones, L.J., et al, (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). CYTOFLUOR 4000 instrument (PE Applied Biosystems) je korišćen za merenje RIBOGREEN fluorescencije.
[0169] Probe i prajmeri su dizajnirani za hibridizaciju nukleinske kiseline Tau. Postupci za dizajniranje PCR proba i prajmera u realnom vremenu su dobro poznati u stanju tehnike i mogu da obuhvataju upotrebu softvera kao što je PRIMER EXPRESS softver (Applied Biosystems, Foster City, CA).
Analiza nivoa proteina
[0170] Antisens inhibicija nukleinskih kiselina Tau može se proceniti merenjem nivoa Tau proteina. Nivoi proteina Tau mogu biti procenjivani ili kvantitativno određivani na različite načine koji su dobro poznati u stanju tehnike, kao što je imunoprecipitacija, Western blot analiza (imunobloting), enzimski-vezana imunosorbentna analiza (ELISA), kvantitativne analize proteina, analize aktivnosti proteina (na primer, analize aktivnosti kaspaze), imunohistohemija, imunocitohemija ili fluorescencijom-aktivirano ćelijsko sortiranje (FACS). Antitela usmerena ka ciljnom mestu mogu biti identifikovana i dobijena iz različitih izvora, kao što je MSRS katalog antitela (Aerie Corporation, Birmingham, MI) ili mogu biti pripremljena preko konvencionalnih postupaka pripreme monoklonskih ili poliklonskih antitela koji su dobro poznati u stanju tehnike.
In vivo ispitivanje antisens jedinjenja
[0171] Antisens jedinjenja, na primer, antisens oligonukleotidi, ispituju se na životinjama da bi se ocenila njihova sposobnost da inhibiraju ekspresiju Tau i dovedu do fenotipskih promena, kao što je, poboljšana kognicija i motorna funkcija. U određenim primerima izvođenja, kognicija se meri prepoznavanjem novih predmeta i aktivnošću gradnje gnezda. U određenim primerima izvođenja, motorna funkcija se meri analizom započinjanja hodanja, testom na rotirajućem štapu, jačinom stiska, testom penjanja na stub, ponašanja u testu otvorenog polja, testom balansiranja na gredi, ispitivanjem otiska zadnje šape kod životinje. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja, na primer, antisens oligonukleotidi, ispituju se na životinjama kako bi se procenila njihova sposobnost da redukuju hiperfosforilisani tau i neurofibrilarnu klubad. U određenim primerima izvođenja, antisens jedinjenja, na primer, antisens oligonukleotidi, se ispituju za procenu njihove sposobnosti da spreče, i/ili redukuju ozbiljnost, konvulzija u modelu konvulzija izazvanih pentilentetrazolom (PTZ).
[0172] Ispitivanje može da se sprovede na normalnim životinjama, ili u eksperimentalnim modelima bolesti. Z primenu kod životinja, antisens oligonukleotidi su formulisani u farmaceutski prihvatljivom razblaživaču, kao što je fosfatno-puferisani fiziološki rastvor. Primena uključuje parenteralne puteve primene, kao što su intraperitonealni, intravenski i subkutani. Obračun doziranja antisens oligonukleotida i učestalosti doziranja je u okviru sposobnosti stručnjaka u datoj oblasti tehnike, i zavisi od faktora kao što je put primene i telesna težina životinje. Nakon perioda tretmana antisens oligonukleotidima, RNK se izoluje iz tkiva CNS ili cerebrospinalne tečnosti i mere se promene u ekspresiji nukleinske kiseline Tau.
Određene indikacije
[0173] Ovde su otkriveni postupci, jedinjenja i kompozicije za lečenje individue koji sadrže primenu jedne ili više farmaceutskih kompozicija koje su ovde opisane. U određenim slučajevima, individua ima neurodegenerativnu bolest. U određenim slučajevima, individua je u riziku od razvoja neurodegenerativne bolesti, uključujući, ali bez ograničenja tauopatiju, Alchajmerovu bolest, fronto-temporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu
1
ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju i Dravetov sindrom. U određenim slučajevima, individua je identifikovana tako da ima bolest povezanu sa Tau. Ovde su otkriveni postupci za profilaktično smanjenje ekspresije Tau kod individue. Određeni slučajevi obuhvataju lečenje individue kod koje postoji potreba za tim primenom kod individue terapeutski efikasne količine antisens jedinjenja koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau.
[0174] U jednom slučaju, primena terapeutski efikasne količine antisens jedinjenja koje ciljno deluje na Tau je praćena monitoringom nivoa Tau u invidui, da bi se odredio odgovor individue na primenu antisens jedinjenja. Odgovor individue na primenu antisens jedinjenja može biti korišćen od strane lekara da bi se odredila količina i trajanje terapeutske intervencije.
[0175] U određenim slučajevima, primena antisens jedinjenja koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau rezultuje u smanjenju ekspresije Tau za najmanje 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100%, ili u opsegu definisanom sa bilo koje dve od ovih vrednosti. U određenim slučajevima, primena antisens jedinjenja koje ciljno deluje na nukleinsku kiselinu Tau rezultuje u poboljšanoj motornoj funkciji kod životinje. U određenim slučajevima, primena Tau antisens jedinjenja poboljšava motornu funkciju za najmanje 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100%, ili za opseg definisan sa bilo koje dve od ovih vrednosti.
[0176] U određenim slučajevima, farmaceutske kompozicije koje sadrže antisens jedinjenje koje ciljno deluje na Tau su korišćene za pripremu leka za lečenje pacijenta koji pati od ili je podložan neurodegenerativnoj bolesti uključujući tauopatiju, Alchajmerovu bolest, frontotemporalnu demenciju (FTD), FTDP-17, progresivnu supranuklearnu paralizu (PSP), hroničnu traumatsku encefalopatiju (CTE), kortikobazalnu ganglijsku degeneraciju (CBD), epilepsiju i Dravetov sindrom.
Određeni regioni sa vrućim tačkama mutacija ("hotspot")
1. Nukleobaze 135783-135980 SEQ ID NO: 1
[0177] Ovde su otkriveni antisens oligonukleotidi konstruisani tako da ciljno deluju na nukleobaze 135783-135980 sekvence SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000). U određenim
2
slučajevima, nukleobaze 135783-135980 su region sa vrućim tačkama mutacija. U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135980 su ciljna mesta delovanja antisens oligonukleotida. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su dugi 18, 19, ili 20 nukleobaza. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su gapmeri. U određenim slučajevima, gapmeri su 5-10-5 MOE gapmeri, 5-9-5 MOE gapmeri, 5-7-6 MOE gapmeri, i 5-8-5 MOE gapmeri. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleotidnim vezama (npr., antisens oligonukleotidi imaju "mešane osnovne lance").
[0178] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135980 predstavljaju ciljeve za sledeće ISIS brojeve: 424879, 424880, 548937, 613114-613120, 622096-622150, 623988-623996, 664511-664542, i 664661-664819.
[0179] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135980 predstavljaju ciljeve za sledeće SEQ ID NOs: 56, 57, 248, 462-467, 1668-1698, 2025-2048, 2301-2309, 2331- 2443, i 2478-2483.
[0180] U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleobaze 135783-135980 ostvaruju snižavanje od najmanje 12%, najmanje 13%, najmanje 14%, najmanje 15%, najmanje 16%, najmanje 17%, najmanje 18%, najmanje 19%, 20%, najmanje 21%, najmanje 22%, najmanje 23%, najmanje 24%, najmanje 25%, najmanje 26%, najmanje 27%, najmanje 28%, najmanje 29%, najmanje 30%, najmanje 31%, najmanje 32%, najmanje 33%, najmanje 34%, najmanje 35%, najmanje 36%, najmanje 37%, najmanje 38%, najmanje 39%, najmanje 40%, najmanje 41%, najmanje 42%, najmanje 43%, najmanje 44%, najmanje 45%, najmanje 46%, najmanje 47%, najmanje 48%, najmanje 49%, najmanje 50%, najmanje 51%, najmanje 52%, najmanje 53%, najmanje 54%, najmanje 55%, najmanje 56%, najmanje 57%, najmanje 58%, najmanje 59%, najmanje 60%, najmanje 61%, najmanje 62%, najmanje 63%, najmanje 64%, najmanje 65%, najmanje 66%, najmanje 67%, najmanje 68%, najmanje 69%, najmanje 70%, najmanje 71%, najmanje 72%, najmanje 73%, najmanje 74%, najmanje 75%, najmanje 76%, najmanje 77%, najmanje 78%, najmanje 79%, najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, ili najmanje 93% nivoa Tau iRNK i/ili proteina in vitro i/ili in vivo.
2. Nukleobaze 135853-135872 SEQ ID NO: 1
[0181] Ovde su otkriveni antisens oligonukleotidi konstruisani tako da ciljno deluju na nukleobaze 135853-135872 sekvence SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000). U određenim slučajevima, nukleobaze 135853-135872 su region sa vrućim tačkama mutacija. U određenim slučajevima, nukleobaze 135853-135872 su ciljna mesta delovanja antisens oligonukleotida. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su dugi 18, 19, ili 20 nukleobaza. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su gapmeri. U određenim slučajevima, gapmeri su 5-10-5 MOE gapmeri, 5-9-5 MOE gapmeri, 5-7-6 MOE gapmeri, ili 5-8-5 MOE gapmeri. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleotidnim vezama (npr., antisens oligonukleotidi imaju „mešane osnovne lance“).
[0182] U određenim slučajevima, nukleobaze 135853-135872 predstavljaju ciljeve za sledeće ISIS brojeve: 424879, 424880, 613117, 613118, 622114-622125, 623993-623996, 664522-664542, 664676-664713, 664729-664766, i 664783-664819.
[0183] U određenim slučajevima, nukleobaze 135853-135872 predstavljaju ciljeve za sledeće SEQ ID NOs: 56, 57, 248, 464-465, 1668-1673, 2039-2048, 2306-2309, 2345-2443, i 2478-2483.
[0184] U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleobaze 135853-135872 ostvaruju snižavanje od najmanje 36%, najmanje 37%, najmanje 38%, najmanje 39%, najmanje 40%, najmanje 41%, najmanje 42%, najmanje 43%, najmanje 44%, najmanje 45%, najmanje 46%, najmanje 47%, najmanje 48%, najmanje 49%, najmanje 50%, najmanje 51%, najmanje 52%, najmanje 53%, najmanje 54%, najmanje 55%, najmanje 56%, najmanje 57%, najmanje 58%, najmanje 59%, najmanje 60%, najmanje 61%, najmanje 62%, najmanje 63%, najmanje 64%, najmanje 65%, najmanje 66%, najmanje 67%, najmanje 68%, najmanje 69%, najmanje 70%, najmanje 71%, najmanje 72%, najmanje 73%, najmanje 74%, najmanje 75%, najmanje 76%, najmanje 77%, najmanje 78%, najmanje 79%, najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, ili najmanje 87% nivoa Tau iRNK i/ili proteina in vitro i/ili in vivo.
3. Nukleobaze 135783-135929 SEQ ID NO: 1
4
[0185] Ovde su otkriveni antisens oligonukleotidi konstruisani tako da ciljno deluju na nukleobaze 135783-135929 sekvence SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000). U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135929 su region sa vrućim tačkama mutacija. U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135929 su ciljna mesta delovanja antisens oligonukleotida. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su dugi 18, 19, ili 20 nukleobaza. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su gapmeri. U određenim slučajevima, gapmeri su 5-10-5 MOE gapmeri, 5-9-5 MOE gapmeri, 5-7-6 MOE gapmeri, ili 5-8-5 MOE gapmeri. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleotidnim vezama (npr., antisens oligonukleotidi imaju „mešane osnovne lance“).
[0186] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135929 predstavljaju ciljeve za sledeće ISIS brojeve: 424879, 424880, 548937, 613114-613119, 622096-622138, 623988-623996, 664511-664542, i 664661-664819.
[0187] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135929 predstavljaju ciljeve za sledeće SEQ ID NOs: 56, 57, 248, 462-466, 1668-1686,2025-2048, 2301-2309, 2331-2443, i 2478-2483.
[0188] U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleobaze 135783-135929 ostvaruju snižavanje od najmanje 12%, najmanje 13%, najmanje 14%, najmanje 15%, najmanje 16%, najmanje 17%, najmanje 18%, najmanje 19%, 20%, najmanje 21%, najmanje 22%, najmanje 23%, najmanje 24%, najmanje 25%, najmanje 26%, najmanje 27%, najmanje 28%, najmanje 29%, najmanje 30%, najmanje 31%, najmanje 32%, najmanje 33%, najmanje 34%, najmanje 35%, najmanje 36%, najmanje 37%, najmanje 38%, najmanje 39%, najmanje 40%, najmanje 41%, najmanje 42%, najmanje 43%, najmanje 44%, najmanje 45%, najmanje 46%, najmanje 47%, najmanje 48%, najmanje 49%, najmanje 50%, najmanje 51%, najmanje 52%, najmanje 53%, najmanje 54%, najmanje 55%, najmanje 56%, najmanje 57%, najmanje 58%, najmanje 59%, najmanje 60%, najmanje 61%, najmanje 62%, najmanje 63%, najmanje 64%, najmanje 65%, najmanje 66%, najmanje 67%, najmanje 68%, najmanje 69%, najmanje 70%, najmanje 71%, najmanje 72%, najmanje 73%, najmanje 74%, najmanje 75%, najmanje 76%, najmanje 77%, najmanje 78%, najmanje 79%, najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, ili najmanje 93% nivoa Tau iRNK i/ili proteina in vitro i/ili in vivo.
4. Nukleobaze 135783-135914 SEQ ID NO: 1
[0189] Ovde su otkriveni antisens oligonukleotidi konstruisani tako da ciljno deluju na nukleobaze 135783-135914 sekvence SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000). U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 su region sa vrućim tačkama mutacija. U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 su ciljna mesta delovanja antisens oligonukleotida. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su dugi 18, 19, ili 20 nukleobaza. U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi su gapmeri. U određenim slučajevima, gapmeri su 5-10-5 MOE gapmeri, 5-9-5 MOE gapmeri, 5-7-6 MOE gapmeri, ili 5-8-5 MOE gapmeri. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosfodiestarskim internukleozidnim vezama. U određenim slučajevima, nukleozidi antisens oligonukleotida su povezani fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleotidnim vezama (npr., antisens oligonukleotidi imaju „mešane osnovne lance“).
[0190] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 predstavljaju ciljeve za sledeće ISIS brojeve: 424879, 424880, 548937, 613114-613119, 622096-622133, 623988-623996, 664511-664542, 664661-664819.
[0191] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 predstavljaju ciljeve za sledeće SEQ ID NOs: 56, 57, 248, 462-466, 1668-1681,2025-2048, 2301-2309, 2331-2443, i 2478-2483.
[0192] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 predstavljaju ciljeve za sledeće ISIS brojeve: 424879, 424880, 548937, 613114-613119, 622096- 622133, i 623988-623996.
[0193] U određenim slučajevima, nukleobaze 135783-135914 predstavljaju ciljeve za sledeće SEQ ID NOs: 56, 57, 248, 462-466, 1668-1681, 2025-2048, i 2301-2309.
[0194] U određenim slučajevima, antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleobaze 135783-135914 ostvaruju snižavanje od najmanje 12%, najmanje 13%, najmanje 14%, najmanje 15%, najmanje 16%, najmanje 17%, najmanje 18%, najmanje 19%, 20%, najmanje 21%, najmanje 22%, najmanje 23%, najmanje 24%, najmanje 25%, najmanje 26%, najmanje 27%, najmanje 28%, najmanje 29%, najmanje 30%, najmanje 31%, najmanje 32%, najmanje 33%, najmanje 34%, najmanje 35%, najmanje 36%, najmanje 37%, najmanje 38%, najmanje 39%, najmanje 40%, najmanje 41%, najmanje 42%, najmanje 43%, najmanje 44%, najmanje 45%, najmanje 46%, najmanje 47%, najmanje 48%, najmanje 49%, najmanje 50%, najmanje 51%, najmanje 52%, najmanje 53%, najmanje 54%, najmanje 55%, najmanje 56%, najmanje 57%, najmanje 58%, najmanje 59%, najmanje 60%, najmanje 61%, najmanje 62%, najmanje 63%, najmanje 64%, najmanje 65%, najmanje 66%, najmanje 67%, najmanje 68%, najmanje 69%, najmanje 70%, najmanje 71%, najmanje 72%, najmanje 73%, najmanje 74%, najmanje 75%, najmanje 76%, najmanje 77%, najmanje 78%, najmanje 79%, najmanje 80%, najmanje 81%, najmanje 82%, najmanje 83%, najmanje 84%, najmanje 85%, najmanje 86%, najmanje 87%, najmanje 88%, najmanje 89%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, ili najmanje 93% nivoa Tau iRNK i/ili proteina in vitro i/ili in vivo.
PRIMERI
Neograničavajuće otkriće
[0195] Iako su određena ovde opisana jedinjenja, kompozicije i postupci opisani sa specifičnošću u skladu sa određenim primerima izvođenja, sledeći primeri služe samo za ilustraciju ovde opisanih jedinjenja i nisu namenjeni da ih ograniče.
Primer 1: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama HepG2 pomoću MOE gapmera
[0196] Antisens oligonukleotidi su konstruisani tako da ciljno deluju na nukleinsku kiselinu tau i njihovo delovanje na tau iRNK ispitano je in vitro. Kultivisane ćelije HepG2 su transficirane upotrebom reagensa Lipofektin sa 100 nM antisens oligonukleotida. Nakon tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 (direktna sekvenca AAGATTGGGTCCCTGGACAAT, ovde označena kao SEQ ID NO: 10; reverzna sekvenca AGCTTGTGGGTTTCAATCTTTTTATT, ovde označena kao SEQ ID NO: 11; sekvenca probe CACCCACGTCCCTGGCGGA, ovde označena kao SEQ ID NO: 12) upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK podešeni su prema ukupnom sadržaju RNK, mereno primenom RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na kontrolne netretirane ćelije.
[0197] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima sa 5' kraja i 3' kraja koji sadrži po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5' krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3' krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su fosforotioatne veze. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabeli 1 ispod ciljno deluje na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000) ili na humanu tau iRNK sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3). 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti. Sekvence navedene u tabeli 2 nisu usmerene na SEQ ID NO: 1 ili 2 sa 100% komplementarnosti, već ciljno deluju na SEQ ID NO: 3 (GENBANK pristupni br. NM_016841.4, varijanta iRNK sekvence bez egzona 3, 4, 6, 8, 10, i 12) ili SEQ ID NO: 4 (GENBANK pristupni br. NT_010783.14 skraćena od nukleotida 2624000 do 2761000).
Tabela 1
Inhibicija Tau iRNK pomoću 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NOs: 1 i 2
Inhibicija Tau iRNK pomoću 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NOs: 1 i 2
1
ć
2 Inhibicija Tau iRNK pomoću 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NOs: 1 i 2
Tabela 2
Primer 2: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog tau u ćelijama HepG2 primenom 5-10-5 MOE gapmera
[0198] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibiciju Tau iRNK odabrani su i ispitani u različitim dozama u ćelijama HepG2. Ćelije su zasejane pri gustini od 10 000 ćelija po bunarčiću i transficirane upotrebom reagensa Lipofektin sa koncentracijama od 12.5 nM, 25.0 nM, 50.0 nM, 100.0 nM, ili 200.0 nM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabeli ispod. Posle tretmana od približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su izmereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK prilagođeni su prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK su značajno redukovani na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens oligonukleotidom.
Tabela 3
4
Primer 3: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE gapmera
[0199] Konstruisani su dodatni antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau i ispitivana su njihova dejstva na Tau iRNK in vitro. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama prikazanim ispod. Kultivisane ćelije SH-SY5Y transficirane su elektroporacijom sa 7000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0200] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5' kraju i 3' kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5' krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3' krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su fosforotioatne veze. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabeli 1 ispod ciljno deluje na humanu Tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000) ili na humanu Tau iRNK sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3). 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na tu određenu gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti.
Tabela 4
Tabela 5
1
2
4
Primer 4: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE gapmera
[0201] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibiciju Tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY-5Y. Ćelije su zasejane pri gustini od 20000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 1.25 µM, 2.50 µM, 5.00 µM, 10.00 µM, i 20.00 µM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabeli ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 6
Primer 5: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE gapmera
[0202] Konstruisani su dodatni antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na nukleinsku kiselinu Tau i ispitivana su njihova dejstva na Tau iRNK in vitro. Kultivisane ćelije SH-SY5Y su zasejane pri gustini od 20 000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa 6 000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0203] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5' kraju i 3' kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5' krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3' krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su fosforotioatne veze. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabelama ispod ciljno deluje na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000).
Tabela 7
1
2
4
Primer 6: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE gapmera
[0204] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibiciju Tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY-5Y. Ćelije su zasejane pri gustini od 20 000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 0.625 µM, 1.25 µM, 2.500 µM,5.00 µM, 10.00 µM, i 20.00 µM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabeli ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 8
ISIS No 0.625 µM 1.25 µM 2.50 µM 5.00 µM 10.00 µM 20.00 µM
Primer 7: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom MOE gapmera sa fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleozidnim vezama
[0205] Konstruisani su antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na tau nukleinsku kiselinu i ispitana su njihova dejstva na tau iRNK in vitro. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Kultivisane ćelije SH-SY5Y su transficirane elektroporacijom sa 8 000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0206] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su ili fosforotioatne veze ili fosfodiestarske veze. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. Kolona „hemija“ opisuje internukleozidne veze svakog oligonukleotida. 's' označava fosforotioatnu vezu, a 'o' označava fosfodiestarsku vezu. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci.
[0207] Svaki gapmer naveden u tabeli 1 ispod ciljno deluje na humanu Tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000), humane Tau iRNK sekvence, ovde označene kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3) ili SEQ ID NO: 3 (GENBANK pristupni br. NM_016841.4). Nekoliko oligonukleotida, prikazanih u tabelama 10, 12, i 16, ciljno deluju na varijante iRNK sekvenci, ovde označene kao SEQ ID NO: 5 (GENBANK pristupni br. DR002467.1), SEQ ID NO: 6 (GENBANK pristupni br. NM_001203251.1) ili SEQ ID NO: 7 (GENBANK pristupni br. NM_016835.4). Oligonukleotidi su prikazani u različitim tabelama prema glavnoj genskoj sekvenci na koju ciljno deluju sa 100% komplementarnosti. 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na tu određenu gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti.
9 aleab T
I6 6 6 6 6 6
IN 6 6 6
Primer 8: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE gapmera sa fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleozidnim vezama
[0208] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibiciju tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY-5Y. Ćelije su zasejane pri gustini od 20000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 1.25 µM, 2.500 µM,5.00 µM, 10.00 µM, i 20.00 µM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabeli ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 17
12
Tabela 18
Primer 9: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-10-5 MOE, 5-8-5 MOE, 4-8-6 MOE, ili 6-8-4 MOE gapmera
[0209] Antisens oligonukleotidi su konstruisani tako da ciljno deluju na tau nukleinsku kiselinu i ispitivana su njihova dejstva na Tau iRNK in vitro. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. ISIS 613412 je takođe uključen u ispitivanje. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Ćelije SH-SY5Y kultivisane pri gustini od 20 000 ćelija po bunarčiću
12
transficirane su elektroporacijom sa 8000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi Tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0210] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-8-5 MOE, 4-8-6 MOE, ili 6-8-4 MOE gapmeri. Gaptameri 5-8-5 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gaptameri 4-8-6 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže četiri, odnosno šest nukleozida. Gaptameri 6-8-4 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže šest, odnosno četiri nukleozida. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Motiv internukleozidne veze u svakom gapmeru u tabelama ispod, osim kod ISIS 613412, je 5'-sooosssssssssooss-3', pri čemu svako "s" predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, a svako "o" predstavlja fosfodiestarsku internukleozidnu vezu. Motiv internukleozidne veze za ISIS 613412 je 5'-soooossssssssssooss-3', pri čemu svako "s" predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, a svako "o" predstavlja fosfodiestarsku internukleozidnu vezu. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabelama ispod ciljno deluje ili na SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000), SEQ ID NO: 4 (GENBANK pristupni br. NT_010783.14 skraćena od nukleotida 2624000 do 2761000), SEQ ID NO: 5 (GENBANK pristupni br. DR002467.1), ili SEQ ID NO: 6 (GENBANK pristupni br. NM_001203251.1). 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na tu određenu gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti.
12
19 ael ab T
Tabela 20
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO:
1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO:
1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO:
1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO:
Tabela 21
14
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO: 1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO: 1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO: 1
14
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na
SEQ ID NO: 1
Tabela 22
14
14
14
14
Tabela 23
14
1
11
12
Tabela 24
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ
ID NO: 1
1
14
1
1
Tabela 25
1
1
1
1
Tabela 26
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ
ID NO: 1
1 1
12
1
14
Tabela 27
1
1
1
1
1
Tabela 30
1
14
1
Tabela 31
1 Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 i 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ
ID NO: 1
1
1
1
Tabela 32
1
11
12
1
33ela ab T
Tabela 38
Inhibicija tau iRNK primenom 5-8-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
22
22
22
Tabela 39
22
22
2
21
Primer 11: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y
[0211] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro Inhibicija tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY5Y. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Ćelije su zasejane pri gustini od 20000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 0.938 µM, 0.1.875 µM, 3.750 µM, 7.500 µM i 15.00 µM antisens oligonukleotida, kako je navedeno u tabelama ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su
2 2
prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 40
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
2
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Tabela 42
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
2 4
Tabela 43
Tabela 44
2 ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Tabela 45
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
2
Tabela 46
Tabela 47
2 ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Primer 12: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama HepG2 primenom 5-10-5 MOE, 5-8-5 MOE, 4-8-6 MOE, ili 6-8-4 MOE gapmera
[0212] Konstruisani su antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na tau nukleinsku kiselinu i ispitivana su njihova dejstva na tau iRNK in vitro. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. ISIS 613412 je takođe uključen u ispitivanje. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Ćelije HepG2 kultivisane pri gustini od 20 000 ćelija po bunarčiću transficirane su elektroporacijom sa 8 000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0213] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-8-5 MOE, 4-8-6 MOE, ili 6-8-4 MOE gapmeri. Gapmeri 5-8-5 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim
2
segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gapmeri 4-8-6 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozidi i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže četiri, odnosno šest nukleozida. Gapmeri 6-8-4 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže šest, odnosno četiri nukleozida. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Motiv internukleozidne veze duž svakog gapmera u tabelama ispod, osim za ISIS 613412, je 5'-sooosssssssssooss-3', gde svako „s“ predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, a svako "o" predstavlja fosfodiestarsku internukleozidnu vezu. Motiv internukleozidne veze za ISIS 613412 je 5'-soooossssssssssooss-3', gde svako „s“ predstavlja fosforotioatnu internukleozidnu vezu, a svako "o" predstavlja fosfodiestarsku internukleozidnu vezu. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabelama ispod ciljno deluje na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000).
Tabela 48
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
2
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
24
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
24
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
24
Tabela 49
Inhibicija tau iRNK primenom 5-10-5 MOE, 5-8-5 MOE, 4-8-6 MOE, i 6-8-4 gapmera koji ciljno deluju na SEQ ID NO: 1
24
24
24
24
2
Primer 13: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog tau u ćelijama SH-SY5Y primenom MOE gapmera
[0214] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibiciju tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY5Y. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Ćelije su zasejane pri gustini od 20 000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 0.938 µM, 0.1.875 µM, 3.750 µM, 7.500 µM, i 15.00 µM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabelama ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 50
2 1
Tabela 51
22 ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Tabela 52
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Tabela 53
2
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Tabela 54
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
2 4
ISIS No 0.938 µM 1.875 µM 3.750 µM 7.500 µM 15.00 µM
Primer 14: Dizajn 5-7-6 MOE, 5-8-5 MOE, 5-9-5 MOE i 5-10-5 MOE gapmera sa fosforotioatnim i fosfodiestarskim internukleozidnim vezama u regionu vrućih tačaka mutacija humanog Tau
[0215] Konstruisani su antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na tau nukleinsku kiselinu u regionu koji je u gore opisanim studijama identifikovan kao region 'vrućih tačaka' mutacija.
[0216] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabeli ispod konstruisani su kao 5-7-6 MOE, 5-8-5 MOE, 5-9-5 MOE, ili 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri 5-7-6 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži sedam 2'-dezoksinukleozida i oivičen
2
je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže pet, odnosno šest nukleozida. Gapmeri 5-8-5 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gapmeri 5-9-5 MOE su dugi 19 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži devet 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gapmeri 5-10-5 MOE su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su ili fosforotioatne veze ili fosfodiestarske veze. Kolona „hemija“ opisuje internukleozidne veze svakog oligonukleotida. 's' označava fosforotioatnu vezu, a 'o' označava fosfodiestarsku vezu. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini.
[0217] "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabeli ispod ciljno deluje ili na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000) ili na humanu Tau iRNK sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3). 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na tu određenu gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti.
2
Primer 15: Intracerebroventrikularna primena antisens oligonukleotida protiv humane tau iRNK kod hTau miševa
[0218] Ispitivana je efikasnost odabranih jedinjenja ICV primenom kod miševa transgenih za humani tau (Duff et al., Neurobiology of Disease 7:87-98, 2000).
Tretman i hirurška intervencija
[0219] Svakoj životinji u grupi od 4 miša dat je ISIS 613255, ISIS 613329, ISIS 613344, ISIS 613361, ISIS 613369, ISIS 613370, ISIS 613397, ISIS 613045, ISIS 613099, ISIS 613118, ISIS 613136 u dozi od 200 µg dostavljenoj ICV bolus injekcijom. Kontrolna grupa od 2 miša je slično tretirana primenom ISIS 424880, a kontrolna grupa od 4 miša je slično tretirana primenom PBS. Sve procedure su sprovedene pod anestezijom izofluranom i u skladu sa regulativama IACUC. Pri ubrizgavanju ICV bolus injekcije miševima, antisens oligonukleotid je injektiran u desnu bočnu moždanu komoru miševa transgenih za humani tau. Deset mikrolitara rastvora koji sadrži 300 µg oligonukleotida u PBS injektirano je tokom približno 10 sekundi. Tkivo je sakupljeno 14 dana posle primene oligonukleotida.
RNK analiza
[0220] Na dan 14 posle primene oligonukleotida, RNK je ekstrahovana iz hipokampusa, kičmene moždine i korteksa za PCR analizu u realnom vremenu nivoa tau iRNK. Nivoi humane tau iRNK su mereni upotrebom seta humanih prajmera RTS3104. Rezultati su izračunati kao procenat inhibicije ekspresije humane tau iRNK u poređenju sa kontrolom. Svi antisens oligonukleotidi ostvarili su značajnu inhibiciju nivoa humane tau iRNK.
Tabela 57
2
Primer 16: Antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y primenom 5-7-6 MOE, 5-8-5 MOE, 5-9-5 MOE i 5-10-5 MOE gapmera
[0221] Antisens oligonukleotidi opisani u primerima iznad, kao i novodizajnirani antisens oligonukleotidi koji ciljno deluju na humanu tau nukleinsku kiselinu, ispitani su u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Kultivisane ćelije SH-SY5Y transficirane su elektroporacijom sa 8 000 nM antisens oligonukleotida. Posle tretmana tokom približno 24 časa, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije.
[0222] Novodizajnirani himerni antisens oligonukleotidi u tabelama ispod konstruisani su kao 5-7-6 MOE, 5-8-5 MOE, 5-9-5 MOE, ili 5-10-5 MOE gapmeri. Gapmeri 5-7-6 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži sedam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže pet, odnosno šest nukleozida. Gapmeri 5-8-5 MOE su dugi 18 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži osam 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gapmeri 5-9-5 MOE su dugi 19 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži devet 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Gapmeri 5-10-5 MOE su dugi 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim
2
segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Internukleozidne veze u svakom gapmeru su ili fosforotioatne veze ili fosfodiestarske veze. Kolona 'Hemija veze' opisuje internukleozidne veze svakog oligonukleotida. 's' označava fosforotioatnu vezu i 'o' označava fosfodiestarsku vezu. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini.
[0223] "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid nukleozida na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabeli ispod ciljno deluje ili na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000) ili na humanu Tau iRNK sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3). 'n/a' označava da oligonukleotid nije usmeren na tu određenu gensku sekvencu sa 100% komplementarnosti.
2
6 6 6 Primer 17: Dozno-zavisna antisens inhibicija humanog Tau u ćelijama SH-SY5Y
[0224] Gapmeri iz gore opisanih studija koji ispoljavaju značajnu in vitro inhibicija tau iRNK su izabrani i ispitivani u različitim dozama u ćelijama SH-SY5Y. Antisens oligonukleotidi su ispitivani u serijama eksperimenata u sličnim uslovima kultivacije. Rezultati svakog eksperimenta prikazani su u posebnim tabelama datim ispod u tekstu. Ćelije su zasejane pri gustini od 20000 ćelija po bunarčiću i transficirane elektroporacijom sa koncentracijama od 0.247 µM, 0.741 µM, 2.22 µM, 6.67 µM i 20.00 µM antisens oligonukleotida, kao što je navedeno u tabelama ispod. Posle tretmana tokom približno 16 časova, RNK je izolovana iz ćelija i nivoi tau iRNK su mereni kvantitativnom PCR analizom u realnom vremenu. Set humanih prajmera RTS3104 upotrebljen je za merenje nivoa iRNK. Nivoi Tau iRNK su prilagođeni prema ukupnom sadržaju RNK, mereno pomoću RIBOGREEN<®>. Rezultati su prikazani kao procenat inhibicije tau, u odnosu na netretirane kontrolne ćelije. Nivoi Tau iRNK bili su značajno sniženi na dozno-zavisan način u ćelijama tretiranim antisens nukleotidom.
Tabela 62
)
1
ISIS No 0.247 µM 0.741 µM 2.22 µM 6.67 µM 20.00 µM IC50(µM)
Tabela 63
ISIS No 0.247 µM 0.741 µM 2.22 µM 6.67 µM 20.00 µM IC50(µM)
Tabela 64
ISIS No 0.247 µM 0.741 µM 2.22 µM 6.67 µM 20.00 µM IC50(µM)
11
ISIS No 0.247 µM 0.741 µM 2.22 µM 6.67 µM 20.00 µM IC50(µM)
Primer 18: Intracerebroventrikularna primena antisens oligonukleotida protiv humane tau iRNK u hTau miševima
[0225] Ispitivana je efikasnost odabranih jedinjenja ICV primenom kod miševa transgenih za humani tau (Duff et al., Neurobiology of Disease 7:87-98, 2000).
Tretman i hirurška intervencija
[0226] Svakoj životinji u grupi od 4 miša dat je ISIS 613099, ISIS 613361, ISIS 613370, ISIS 623782, ili ISIS 623996 u dozi od 200 µg dostavljenoj ICV bolus injekcijom. Kontrolna grupa od 2 miša je slično tretirana primenom ISIS 424880, a kontrolna grupa od 4 miša je slično tretirana primenom PBS. Sve procedure su sprovedene pod anestezijom izofluranom i u skladu sa regulativama IACUC. Pri ubrizgavanju ICV bolus injekcije miševima, antisens oligonukleotid je injektiran u desnu bočnu moždanu komoru miševa transgenih za humani tau. Deset mikrolitara rastvora koji sadrži 200 µg oligonukleotida u PBS injektirano je tokom približno 10 sekundi. Tkivo je sakupljeno 14 dana posle primene oligonukleotida.
RNK analiza
12
[0227] Na dan 14 posle primene oligonukleotida, RNK je ekstrahovana iz hipokampusa, kičmene moždine i korteksa za PCR analizu u realnom vremenu nivoa tau iRNK. Nivoi humane tau iRNK su mereni upotrebom seta humanih prajmera RTS3104. Rezultati su izračunati kao procenat inhibicije ekspresije humane tau iRNK u poređenju sa kontrolom. Svi antisens oligonukleotidi ostvarili su značajnu inhibiciju nivoa humane tau iRNK.
Tabela 65
Primer 19: Konstruisanje oligonukleotida koji ciljno deluju na humani Tau
[0228] Konstruisan je ISIS No. 603054 za ciljno delovanje na humani Tau. Sekvenca nukleobaza i hemija veze za ISIS No.603054 data je u tabeli 66 ispod. ISIS No.603054 je 5-10-5 MOE gapmer. ISIS No. 603054 je dug 20 nukleozida, pri čemu centralni segment praznine sadrži deset 2'-dezoksinukleozida i oivičen je krilnim segmentima na 5’ kraju i 3’ kraju koji sadrže po pet nukleozida svaki. Svaki nukleozid u 5’ krilnom segmentu i svaki nukleozid u 3’ krilnom segmentu ima 2'-MOE modifikaciju. Sve citozinske rezidue u svakom gapmeru su 5-metilcitozini. "Mesto inicijacije" označava 5’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. "Mesto terminacije" označava 3’-krajnji nukleozid na koji gapmer ciljno deluje u humanoj genskoj sekvenci. Svaki gapmer naveden u tabeli 1 ispod ciljno deluje ili na humanu tau genomsku sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 1 (GENBANK pristupni br. NT_010783.15 skraćena od nukleotida 9240000 do 9381000) ili na humanu Tau iRNK sekvencu, ovde označenu kao SEQ ID NO: 2 (GENBANK pristupni br. NM_001123066.3).
1
Primer 20: In vivo analiza oligonukleotida koji ciljno deluju na humani Tau na miševima
[0229] Oligonukleotidi, prikazani u tabeli ispod, konstruisani su da ciljno deluju na Tau. Miševi, bilo miševi transgeni za humani tau "hTau" (Duff et al., Neurobiology of Disease 7:87-98, 2000; Davies et al. J. Neurochem. (2003) 86, 582-590) ili miševi WT C57B16 divljeg tipa odvojeni su u grupe od po 3 ili 4 miša. Svakom mišu u svakoj grupi data je jedna ICV doza oligonukleotida u tabeli ispod od 300 ug ili 200 ug svaka. Posle 3 časa od davanja injekcije, svaki miš je ocenjivan na osnovu 7 različitih kriterijuma. Tih 7 kriterijuma su (1) miš je bio bistar, oprezan i responsivan; (2) miš je stajao ili se savio bez stimulusa; (3) miš pokazuje bilo kakvo kretanje bez stimulusa (4) miš pokazuje kretanje unapred pošto je podignut; (5) miš pokazuje bilo kakav pokret pošto je podignut; (6) miš odgovara na štipanje repa; (7) pravilno disanje. Za svaki od 7 različitih kriterijuma, svaki miš je dobio pod-ocenu od 0 ako je ispunio kriterijum ili 1 ako nije. Nakon procene svih 7 kriterijuma, pod-ocene su sabrane za svakog miša i zatim je određena srednja vrednost za svaku grupu. Na primer, ako je miš bio bistar, oprezan i responsivan 3 časa posle ICV doze od 300 µg, i ispunjavao sve druge kriterijume, njemu bi bila pripisana zbirna ocena 0. Ako drugi miš nije bio bistar, oprezan i responsivan 3 časa posle ICV doze od 300 µg, ali je ispunjavao sve druge kriterijume, njemu bi bila pripisana ocena 1. Miševima tretirani fiziološkim rastvorom uopšteno je pripisana ocena 0. Rezultati su prikazani kao prosečna ocena za svaku tretmansku grupu u tabeli 67 ispod. "ND" znači da nema podataka. Ovi rezultati pokazuju da su ISIS 613099, ISIS 613361, ISIS 613370, ISIS 623782, ISIS 623996, ISIS 424880 i ISIS 603054 dobro podnošljivi.
Tabela 67
1
Primer 20: In vivo analiza oligonukleotida koji ciljno deluju na humani Tau na pacovima
[0230] Pacovi Sprague Dawley su podeljeni u grupe od 4 pacova svaka. Svakom pacovu u svakoj grupi data je jedna intratekalna (IT) doza od 1 mg ili jedna intratekalna (IT) doza od 3 mg ISIS 613099, ISIS 613361, ISIS 613370, ISIS 623782, ISIS 623996, ISIS 424880, ili ISIS 603054. 3 časa posle davanja injekcije, pokretljivost 7 različitih delova tela ocenjivana je kod svakog pacova. Tih 7 delova tela su (1) rep pacova; (2) stav zadnjeg dela tela pacova; (3) zadnji ekstemiteti pacova; (4) zadnje šape pacova; (5) prednje šape pacova; (6) stav prednjeg dela tela pacova; i (7) glava pacova. Za svaki od 7 različitih delova tela, svakom pacovu je dodeljena pod-ocena 0 ako je taj deo tela pokretljiv ili 1 ako je taj deo tela paralizovan. Nakon procene svakog od 7 delova tela, pod-ocene su sabrane za svakog pacova, a zatim je izračunata srednja vrednost za svaku grupu. Na primer, ako se rep, glava i svi drugi ocenjivani delovi tela pacova pomeraju 3 časa posle IT doze od 3 mg, njemu će biti pripisana ukupna ocena 0. Ako drugi pacov ne pomera rep 3 časa posle IT doze od 3 mg, ali su mu svi drugi ocenjivani delovi tela pokretljivi, njemu će biti pripisana ocena 1. Pacovima tretiranim fiziološkim rastvorom uopšteno je dodeljivana ocena 0. Ocena na gornjem kraju opsega ukazuje na toksičnost. Rezultati su prikazani kao prosečna ocena za svaku tretmansku grupu u tabeli 68 ispod.
Tabela 68
1
1

Claims (27)

Patentni zahtevi
1. Modifikovani oligonukleotid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koji se sastoji od 12 do 30 povezanih nukleozida, naznačen time, što modifikovani oligonukleotid ima sekvencu nukleobaza koja sadrži najmanje 8 uzastopnih nukleobaza sekvence nukleobaza SEQ ID NO: 1634, pri čemu je sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida najmanje 90% komplementarna sa SEQ ID NO: 1 i pri čemu modifikovani oligonukleotid ima sposobnost da snižava ekspresiju Tau.
2. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što se modifikovani oligonukleotid:
(i) sastoji od 20 povezanih nukleozida;
(ii) sastoji od 19 povezanih nukleozida; ili
(iii) sastoji od 18 povezanih nukleozida.
3. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida sadrži sekvencu nukleobaza SEQ ID NO: 1634.
4. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što se sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida sastoji od sekvence nukleobaza SEQ ID NO: 1634.
5. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 1, naznačen time, što je sekvenca nukleobaza modifikovanog oligonukleotida najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% komplementarna sa SEQ ID NO: 1.
6. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koji je gapmer.
7. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koji je jednolančani modifikovani oligonukleotid.
8. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time, što je najmanje jedna internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida modifikovana internukleozidna veza.
9. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 8, naznačen time, što je (a) najmanje jedna modifikovana internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida fosforotioatna internukleozidna veza; i/ili (b) najmanje jedna internukleozidna veza modifikovanog oligonukleotida je fosfodiestarska internukleozidna veza.
10. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time, što najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži modifikovanu nukleobazu, gde je opciono modifikovana nukleobaza 5-metilcitozin.
11. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time, što najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži modifikovani šećer, gde je opciono (a) najmanje jedan modifikovani šećer biciklični šećer; ili (b) najmanje jedan modifikovani šećer sadrži 2'-O-metoksietil grupu ili 2'-O-metil grupu.
12. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 11, naznačen time, što biciklični šećer sadrži:
(a) hemijski most 4'-CH2-N(R)-O-2' gde je R nezavisno odabrano od H i C1-C6alkil; ili
(b) hemijski most 4'-CH(R)-O-2' gde je R metil, H ili -CH2-O-CH3.
13. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, naznačen time, što najmanje jedan nukleozid modifikovanog oligonukleotida sadrži surogat šećera, gde je opciono najmanje jedan surogat šećera morfolino ili peptidna nukleinska kiselina.
14. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koji sadrži:
a) segment praznine koji se sastoji od 10 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer; b) segment praznine koji se sastoji od 9 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
1
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5’ krilnog segmenta i 3’ krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer; c) segment praznine koji se sastoji od 7 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer; d) segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer; e) segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 4 povezana nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer; ili f) segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 6 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 4 povezana nukleozida;
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta i gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži modifikovani šećer.
15. Farmaceutski prihvatljiva so modifikovanog oligonukleotida prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koja je natrijumova so.
16. Jednolančani modifikovani oligonukleotid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, koji se sastoji od 18 povezanih nukleozida i ima sekvencu nukleobaza koja sadrži 18 uzastopnih nukleobaza sekvence nukleobaza SEQ ID NO: 1634, i gde modifikovani oligonukleotid sadrži:
segment praznine koji se sastoji od 8 povezanih dezoksinukleozida;
5' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida; i
3' krilni segment koji se sastoji od 5 povezanih nukleozida;
2
pri čemu je segment praznine postavljen između 5' krilnog segmenta i 3' krilnog segmenta, gde svaki nukleozid svakog krilnog segmenta sadrži 2'-O-metoksietil šećer, gde je najmanje jedna internukleozidna veza fosforotioatna internukleozidna veza, najmanje jedna internukleozidna veza je fosfodiestarska internukleozidna veza, i svaki citozin je 5-metilcitozin.
17. Farmaceutski prihvatljiva so jednolančanog modifikovanog oligonukleotida prema patentnom zahtevu 16, koja je natrijumova so.
18. Konjugovano antisens jedinjenje koje sadrži modifikovani oligonukleotid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 15, ili jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema patentnim zahtevima 16 ili 17.
19. Kompozicija koja sadrži modifikovani oligonukleotid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 15, ili jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema patentnim zahtevima 16 ili 17, ili konjugovano antisens jedinjenje prema patentnom zahtevu 18, i najmanje jedno od farmaceutski prihvatljivog nosača ili razblaživača, gde je opciono farmaceutski prihvatljiv razblaživač fosfatno puferisani fiziološki rastvor (PBS).
20. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 15, ili jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnim zahtevima 16 ili 17, ili konjugovano antisens jedinjenje prema patentnom zahtevu 18, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19, za upotrebu u terapiji.
21. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 15, ili jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 16 ili 17, ili konjugovano antisens jedinjenje prema patentnom zahtevu 18, ili kompozicija prema patentnom zahtevu 19, za upotrebu u lečenju neurodegenerativne bolesti, poremećaja ili stanja.
22. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, naznačeni time, što je neurodegenerativna bolest, poremećaj ili stanje tauopatija.
21
23. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, naznačeni time, što je neurodegenerativna bolest, poremećaj ili stanje Alchajmerova bolest, frontotemporalna demencija, FTDP-17, progresivna supranuklearna paraliza, hronična traumatska encefalopatija, kortikobazalna ganglijska degeneracija, epilepsija ili Dravetov sindrom.
24. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, naznačeni time, što je neurodegenerativna bolest, poremećaj ili stanje Alchajmerova bolest.
25. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, naznačeni time, što je neurodegenerativna bolest, poremećaj ili stanje frontotemporalna demencija.
26. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 21, naznačeni time, što je neurodegenerativna bolest, poremećaj ili stanje progresivna supranuklearna paraliza.
27. Modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 20 do 26, naznačeni time, što se modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, jednolančani modifikovani oligonukleotid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, konjugovano antisens jedinjenje, ili kompozicija primenjuju intratekalnom primenom.
Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
22
RS20210805A 2013-07-19 2014-07-21 Kompozicije za modulaciju ekspresije tau RS62054B1 (sr)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361856551P 2013-07-19 2013-07-19
US201361879621P 2013-09-18 2013-09-18
US201361885371P 2013-10-01 2013-10-01
US201462014486P 2014-06-19 2014-06-19
EP14826839.4A EP3022217B1 (en) 2013-07-19 2014-07-21 Compositions for modulating tau expression
PCT/US2014/047486 WO2015010135A2 (en) 2013-07-19 2014-07-21 Compositions for modulating tau expression

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62054B1 true RS62054B1 (sr) 2021-07-30

Family

ID=52346860

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210805A RS62054B1 (sr) 2013-07-19 2014-07-21 Kompozicije za modulaciju ekspresije tau

Country Status (25)

Country Link
US (4) US9683235B2 (sr)
EP (2) EP3910060A1 (sr)
JP (4) JP6684707B2 (sr)
KR (6) KR102526525B1 (sr)
CN (3) CN120796262A (sr)
AU (2) AU2014290395B2 (sr)
BR (1) BR112016000654B1 (sr)
CA (2) CA3149282C (sr)
CY (1) CY1124292T1 (sr)
DK (1) DK3022217T3 (sr)
ES (1) ES2871533T3 (sr)
HR (1) HRP20211051T1 (sr)
HU (1) HUE055144T2 (sr)
IL (4) IL279572B2 (sr)
LT (1) LT3022217T (sr)
MX (2) MX379535B (sr)
NZ (2) NZ755605A (sr)
PL (1) PL3022217T3 (sr)
PT (1) PT3022217T (sr)
RS (1) RS62054B1 (sr)
RU (1) RU2735551C2 (sr)
SI (1) SI3022217T1 (sr)
SM (1) SMT202100371T1 (sr)
TW (4) TWI772856B (sr)
WO (1) WO2015010135A2 (sr)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5645840B2 (ja) 2008-12-02 2014-12-24 株式会社Ｗａｖｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｊａｐａｎ リン原子修飾核酸の合成方法
EP2451461A4 (en) 2009-07-06 2013-05-29 Ontorii Inc NOVEL NUCLEIC ACID PRODRUGS AND METHOD OF USE THEREOF
US10428019B2 (en) 2010-09-24 2019-10-01 Wave Life Sciences Ltd. Chiral auxiliaries
WO2013012758A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Ontorii, Inc. Methods for the synthesis of functionalized nucleic acids
AU2013202595B2 (en) 2012-03-30 2016-04-21 Biogen Ma Inc. Methods for modulating Tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
WO2013159108A2 (en) * 2012-04-20 2013-10-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds comprising bicyclic nucleotides and uses thereof
SG11201500232UA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Wave Life Sciences Pte Ltd Chiral control
RU2693381C2 (ru) 2012-07-13 2019-07-02 Уэйв Лайф Сайенсес Лтд. Асимметричная вспомогательная группа
SG11201500243WA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Shin Nippon Biomedical Lab Ltd Chiral nucleic acid adjuvant
US9644207B2 (en) 2013-03-14 2017-05-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating Tau expression
TWI772856B (zh) 2013-07-19 2022-08-01 美商百健Ｍａ公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
JPWO2015108048A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤
WO2015108046A1 (ja) 2014-01-15 2015-07-23 株式会社新日本科学 抗アレルギー作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗アレルギー剤
JPWO2015108047A1 (ja) 2014-01-15 2017-03-23 株式会社新日本科学 免疫誘導活性を有するキラル核酸アジュバンド及び免疫誘導活性剤
ES2917473T3 (es) 2014-01-16 2022-07-08 Wave Life Sciences Ltd Diseño quiral
US11761951B2 (en) 2015-02-04 2023-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Methods of selecting therapeutic molecules
BR112017016663A2 (pt) * 2015-02-04 2018-04-10 Hoffmann La Roche oligômero, conjugado, composição, kit, e, métodos para inibir ou reduzir a expressão de proteína tau em uma célula e para tratar ou prevenir um distúrbio neurológico
ES2820713T3 (es) * 2015-03-25 2021-04-22 Univ Degli Studi Di Trento Terapia mediada por ARN interferente para enfermedades neurodegenerativas
US20180312845A1 (en) * 2015-07-10 2018-11-01 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2)
KR20180056766A (ko) 2015-10-09 2018-05-29 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 뉴클레오티드 조성물 및 이의 방법
WO2017087282A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Antisense compounds targeting leucine-rich repeat kinase 2 (lrrk2) for the treatment of parkinsons disease
US10370667B2 (en) 2015-11-18 2019-08-06 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Antisense compounds targeting leucine-rich repeat kinase 2 (LRRK2) for the treatment of parkinsons disease
JOP20200228A1 (ar) 2015-12-21 2017-06-16 Novartis Ag تركيبات وطرق لخفض تعبير البروتين tau
WO2017192820A1 (en) 2016-05-06 2017-11-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Glp-1 receptor ligand moiety conjugated oligonucleotides and uses thereof
JOP20190065A1 (ar) * 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
WO2018102397A1 (en) 2016-11-29 2018-06-07 PureTech Health LLC Exosomes for delivery of therapeutic agents
US11504389B2 (en) 2016-12-01 2022-11-22 Sangamo Therapeutics, Inc. Tau modulators and methods and compositions for delivery thereof
AU2019233612A1 (en) * 2018-03-13 2020-09-10 Janssen Pharmaceutica Nv Modified oligonucleotides for use in treatment of tauopathies
PE20211397A1 (es) * 2018-05-22 2021-07-27 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de la expresion de apol1
JP7557378B2 (ja) * 2018-06-14 2024-09-27 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド Ｓｔｍｎ２発現を増加させるための化合物及び方法
TWI833770B (zh) * 2018-06-27 2024-03-01 美商Ionis製藥公司 用於減少 lrrk2 表現之化合物及方法
TWI862501B (zh) 2018-07-03 2024-11-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於調制 Tau 表現之寡核苷酸
JP7340794B2 (ja) * 2018-07-04 2023-09-08 学校法人 愛知医科大学 タウのスプライシングを制御するアンチセンスオリゴヌクレオチド及びその用途
TWI856973B (zh) 2018-09-19 2024-10-01 美商Ionis製藥公司 Pnpla3表現之調節劑
EP3860618B1 (en) 2018-10-02 2026-02-04 Sangamo Therapeutics, Inc. Compositions for treating tauopathy
BR112021015494A2 (pt) * 2019-03-15 2021-10-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compostos e métodos para reduzir a expressão de kcnt1
CA3169252A1 (en) * 2020-03-01 2021-09-10 Abbie Madeline MAGUIRE Oligonucleotide compositions and methods thereof
MX2022011516A (es) * 2020-03-18 2023-01-04 Univ Massachusetts Oligonucleotidos para la modulacion de mapt.
JP2023521604A (ja) * 2020-03-30 2023-05-25 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）ｉＲＮＡ剤組成物およびその使用方法
AU2021264010A1 (en) * 2020-05-01 2022-12-08 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating ATXN1
US11795158B2 (en) 2020-06-25 2023-10-24 Astrazeneca Ab Chemical compounds
WO2022125984A1 (en) * 2020-12-11 2022-06-16 Eisai R&D Management Co., Ltd. Tau-targeting oligonucleotide gapmers
AR125267A1 (es) 2021-04-01 2023-06-28 Biogen Ma Inc Administración de ácido nucleico al sistema nervioso central
KR20240067943A (ko) * 2021-09-24 2024-05-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 미소관 연관 단백질 타우(MAPT) iRNA 제제 조성물 및 이의 사용 방법
AU2023236610A1 (en) * 2022-03-16 2024-10-31 Janssen Pharmaceutica Nv MAPT siRNA AND USES THEREOF
CA3246379A1 (en) * 2022-05-13 2023-11-16 Julius-Maximilians-Universität Würzburg METHOD AND MOLECULES FOR REDUCING AXONAL TAU PROTEIN ACCUMULATION BY BLOCKING HNRNP R-MEDICATED MRNA TRANSPORT FOR THE TREATMENT OF ALZHEIMER'S DISEASE
IL320511A (en) * 2022-12-29 2025-06-01 Voyager Therapeutics Inc Compositions and methods for regulating MAPT
TW202434730A (zh) * 2023-02-10 2024-09-01 日商大塚製藥股份有限公司 Tau剪接轉換寡核苷酸及用於治療或預防tau相關疾病之醫藥組合物
CN121285630A (zh) * 2023-04-20 2026-01-06 阿达尔克斯制药有限公司 Mapt调节组合物及其使用方法
CN121511304A (zh) * 2023-08-01 2026-02-10 上海拓界生物医药科技有限公司 靶向MAPT的dsRNA及其医药用途
TW202515584A (zh) * 2023-10-11 2025-04-16 大陸商上海舶望製藥有限公司 用於抑制微管相關蛋白ｔａｕ（ｍａｐｔ）表達的組合物和方法
WO2025188990A1 (en) 2024-03-08 2025-09-12 Eli Lilly And Company Mapt antisense oligonucleotide

Family Cites Families (187)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1027347A (en) 1910-11-23 1912-05-21 Columbus K Lassiter Multiple-spindle drill.
US3687808A (en) 1969-08-14 1972-08-29 Univ Leland Stanford Junior Synthetic polynucleotides
US4880635B1 (en) 1984-08-08 1996-07-02 Liposome Company Dehydrated liposomes
US5367066A (en) 1984-10-16 1994-11-22 Chiron Corporation Oligonucleotides with selectably cleavable and/or abasic sites
FR2575751B1 (fr) 1985-01-08 1987-04-03 Pasteur Institut Nouveaux nucleosides de derives de l'adenosine, leur preparation et leurs applications biologiques
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US4921757A (en) 1985-04-26 1990-05-01 Massachusetts Institute Of Technology System for delayed and pulsed release of biologically active substances
US4920016A (en) 1986-12-24 1990-04-24 Linear Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
JPH0825869B2 (ja) 1987-02-09 1996-03-13 株式会社ビタミン研究所 抗腫瘍剤包埋リポソ−ム製剤
US4911928A (en) 1987-03-13 1990-03-27 Micro-Pak, Inc. Paucilamellar lipid vesicles
US4917951A (en) 1987-07-28 1990-04-17 Micro-Pak, Inc. Lipid vesicles formed of surfactants and steroids
EP0366685B1 (en) 1987-06-24 1994-10-19 Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine Nucleoside derivatives
US5175273A (en) 1988-07-01 1992-12-29 Genentech, Inc. Nucleic acid intercalating agents
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
US5130302A (en) 1989-12-20 1992-07-14 Boron Bilogicals, Inc. Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same
US5859221A (en) 1990-01-11 1999-01-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US6005087A (en) 1995-06-06 1999-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-modified oligonucleotides
US5459255A (en) 1990-01-11 1995-10-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-2 substituted purines
US5457191A (en) 1990-01-11 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5681941A (en) 1990-01-11 1997-10-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted purines and oligonucleotide cross-linking
US5587470A (en) 1990-01-11 1996-12-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 3-deazapurines
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
US5614617A (en) 1990-07-27 1997-03-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant, pyrimidine modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5432272A (en) 1990-10-09 1995-07-11 Benner; Steven A. Method for incorporating into a DNA or RNA oligonucleotide using nucleotides bearing heterocyclic bases
US6582908B2 (en) 1990-12-06 2003-06-24 Affymetrix, Inc. Oligonucleotides
US5948903A (en) 1991-01-11 1999-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Synthesis of 3-deazapurines
US5594121A (en) 1991-11-07 1997-01-14 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
JP3739785B2 (ja) 1991-11-26 2006-01-25 アイシス ファーマシューティカルズ，インコーポレイティド 修飾されたピリミジンを含有するオリゴマーを使用する増強された三重らせんおよび二重らせんの成形
US5484908A (en) 1991-11-26 1996-01-16 Gilead Sciences, Inc. Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines
TW393513B (en) 1991-11-26 2000-06-11 Isis Pharmaceuticals Inc Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified pyrimidines
US20040054156A1 (en) 1992-05-14 2004-03-18 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication
US5434257A (en) 1992-06-01 1995-07-18 Gilead Sciences, Inc. Binding compentent oligomers containing unsaturated 3',5' and 2',5' linkages
WO1994014226A1 (en) 1992-12-14 1994-06-23 Honeywell Inc. Motor system with individually controlled redundant windings
JPH06329551A (ja) * 1993-03-22 1994-11-29 Mitsubishi Kasei Corp アルツハイマー病の予防または治療薬およびそのスクリーニング方法
CA2116460A1 (en) 1993-03-02 1994-09-03 Mitsubishi Chemical Corporation Preventive or therapeutic agents for alzheimer's disease, a screening method of alzheimer's disease and tau-protein kinase i originated from human being
KR940021073A (ko) 1993-03-02 1994-10-17 미야베 요시가즈 알쯔하이머병의 예방 또는 치료제, 그 스크리닝 방법 및 인간 유래의 타우 단백질 키나아제 i
US5502177A (en) 1993-09-17 1996-03-26 Gilead Sciences, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
US5801154A (en) 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
GB9323483D0 (en) 1993-11-13 1994-01-05 Cerestar Holding Bv Edible composition and a process for its preparation
US5457187A (en) 1993-12-08 1995-10-10 Board Of Regents University Of Nebraska Oligonucleotides containing 5-fluorouracil
US5596091A (en) 1994-03-18 1997-01-21 The Regents Of The University Of California Antisense oligonucleotides comprising 5-aminoalkyl pyrimidine nucleotides
US5525711A (en) 1994-05-18 1996-06-11 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes
US6770748B2 (en) 1997-03-07 2004-08-03 Takeshi Imanishi Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue
JP3756313B2 (ja) 1997-03-07 2006-03-15 武 今西 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体
USRE44779E1 (en) 1997-03-07 2014-02-25 Santaris Pharma A/S Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogues
US6617162B2 (en) * 2001-12-18 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of estrogen receptor alpha expression
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
DE69829760T3 (de) 1997-09-12 2016-04-14 Exiqon A/S Bi- und tri-zyklische - nukleosid, nukleotid und oligonukleotid-analoga
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US5942275A (en) 1997-10-27 1999-08-24 The Procter & Gamble Company Flavored nut spreads having milk chocolate flavor and creamy soft texture
US20030228597A1 (en) 1998-04-13 2003-12-11 Cowsert Lex M. Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation
WO1999062548A1 (en) 1998-06-01 1999-12-09 Advanced Research And Technology Institute Methods and compositions for diagnosing tauopathies
WO2000047599A1 (en) 1999-02-12 2000-08-17 Sankyo Company, Limited Novel nucleosides and oligonucleotide analogues
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
JP2002542263A (ja) 1999-04-21 2002-12-10 ワイス ポリヌクレオチド配列の機能を阻害するための方法および組成物
AU776362B2 (en) 1999-05-04 2004-09-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S L-ribo-LNA analogues
US6525191B1 (en) 1999-05-11 2003-02-25 Kanda S. Ramasamy Conformationally constrained L-nucleosides
JP4151751B2 (ja) 1999-07-22 2008-09-17 第一三共株式会社 新規ビシクロヌクレオシド類縁体
EP1097941A1 (en) 1999-11-05 2001-05-09 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Substance capable of controlling the inclusion of exon 10 of the tau gene, and its therapeutic use against tauopathies
KR20020062956A (ko) 1999-12-08 2002-07-31 싸이트 테라피스 인코포레이티드 면역억제제로서 사용하기 위한 뎁시펩티드 및 이의 동류물
CA2400573A1 (en) 2000-03-28 2001-10-04 Isis Pharmaceuticals Inc. Alteration of cellular behavior by antisense modulation of mrna processing
WO2001077384A2 (de) 2000-04-07 2001-10-18 Epigenomics Ag DETEKTION VON SNPs UND CYTOSIN-METHYLIERUNGEN
KR20030066813A (ko) 2001-01-16 2003-08-09 쟝세 Ｄ-아미노산 산화효소와 ｄ-아스파르테이트 산화효소길항제를 이용한 ｃｎｓ 질환의 치료
CA2442092A1 (en) 2001-03-26 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
US20050019915A1 (en) 2001-06-21 2005-01-27 Bennett C. Frank Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
EP1404698A4 (en) 2001-06-21 2004-12-22 Isis Pharmaceuticals Inc ANTISENSE MODULATION OF SUPEROXIDE DISISMUTASE 1, EXPRESSION IN SOLUTION
US20030175906A1 (en) 2001-07-03 2003-09-18 Muthiah Manoharan Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
EP1499627A2 (en) 2001-07-03 2005-01-26 ISIS Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20030158403A1 (en) 2001-07-03 2003-08-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20040142325A1 (en) 2001-09-14 2004-07-22 Liat Mintz Methods and systems for annotating biomolecular sequences
WO2003054143A2 (en) 2001-10-25 2003-07-03 Neurogenetics, Inc. Genes and polymorphisms on chromosome 10 associated with alzheimer's disease and other neurodegenerative diseases
WO2003056030A2 (en) 2001-11-08 2003-07-10 The Johns Hopkins University Methods and systems of nucleic acid sequencing
US20070203333A1 (en) 2001-11-30 2007-08-30 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153336A1 (en) 2002-03-29 2005-07-14 Bennett C. F. Compositions and their uses directed to nucleic acid binding proteins
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
US20040110149A1 (en) * 2002-12-10 2004-06-10 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of BUB1-beta expression
WO2004011613A2 (en) 2002-07-29 2004-02-05 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. Composition & methods for treatment and screening
US20050106731A1 (en) 2002-08-05 2005-05-19 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing with viral vectors
US20040241854A1 (en) 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
AU2003255435A1 (en) * 2002-08-14 2004-03-03 Universitat Zurich A cellular assay system for neurofibrillary tangle formation
AU2003284323A1 (en) 2002-10-18 2004-05-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc Double-stranded rna structures and constructs, and methods for generating and using the same
AU2003295387A1 (en) 2002-11-05 2004-06-03 Isis Parmaceuticals, Inc. Modified oligonucleotides for use in rna interference
EP1562971B1 (en) 2002-11-05 2014-02-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US20080318210A1 (en) 2003-08-27 2008-12-25 Rosetta Genomics Bioinformatically detectable group of novel regulatory viral and viral associated oligonucleotides and uses thereof
JP2004187609A (ja) * 2002-12-12 2004-07-08 Sankyo Co Ltd 最適アンチセンス配列の決定法
US6673661B1 (en) 2002-12-20 2004-01-06 Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. Self-aligned method for forming dual gate thin film transistor (TFT) device
MXPA05007043A (es) 2002-12-31 2005-08-18 Axaron Bioscience Ag Metodos para tratar condiciones neurologicas con factores de crecimiento hematopoyetico.
WO2004106356A1 (en) 2003-05-27 2004-12-09 Syddansk Universitet Functionalized nucleotide derivatives
US8969314B2 (en) 2003-07-31 2015-03-03 Regulus Therapeutics, Inc. Methods for use in modulating miR-122a
AU2003904328A0 (en) 2003-08-13 2003-08-28 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis and treatment of neurodegenerative disorders
ES2382807T3 (es) 2003-08-28 2012-06-13 Takeshi Imanishi Nuevos ácidos nucleicos artificiales del tipo de enlace N-O con reticulación
AU2004274021B2 (en) 2003-09-18 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. 4'-thionucleosides and oligomeric compounds
US20050108783A1 (en) 2003-09-23 2005-05-19 Chihiro Koike Porcine invariant chain protein, full length cDNA, genomic organization, and regulatory region
US8012944B2 (en) 2003-10-30 2011-09-06 Pharmascience Inc. Method for treating cancer using IAP antisense oligomer and chemotherapeutic agent
US20050244851A1 (en) 2004-01-13 2005-11-03 Affymetrix, Inc. Methods of analysis of alternative splicing in human
CN100410383C (zh) 2004-05-11 2008-08-13 中国农业科学院生物技术研究所 一种昆虫杆状病毒生物反应器的制备方法
CN101052717A (zh) 2004-05-11 2007-10-10 α基因株式会社 诱发rna干扰的多核苷酸以及使用该多核苷酸的基因表达抑制方法
US8367360B2 (en) * 2004-06-21 2013-02-05 Proteome Sciences Plc Method of screening for inhibitors of tau protein phosphororylation by tyrosine kinase c-Abl
CA2585970A1 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Vanderbilt University Mammalian genes involved in infection
US20080003570A1 (en) 2004-12-22 2008-01-03 The General Hospital Corporation Translation enhancer elements of genes encoding human Tau protein and human alpha-synuclein protein
EP1866130B1 (en) 2005-03-21 2010-08-18 Koninklijke Philips Electronics N.V. Appliance for personal care with automatic fluid dispenser
US20060216722A1 (en) 2005-03-25 2006-09-28 Christer Betsholtz Glomerular expression profiling
US20090176725A1 (en) 2005-08-17 2009-07-09 Sirna Therapeutics Inc. Chemically modified short interfering nucleic acid molecules that mediate rna interference
WO2007025987A1 (en) 2005-08-30 2007-03-08 Novo Nordisk A/S Expression of proteins in e.coli
RU2448974C2 (ru) * 2005-11-01 2012-04-27 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. РНКи-ИНГИБИРОВАНИЕ РЕПЛИКАЦИИ ВИРУСА ГРИППА
JP2009524430A (ja) 2006-01-26 2009-07-02 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ 治療的使用のためのｒｎａ干渉剤
ES2516815T3 (es) 2006-01-27 2014-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en la posición 6
US7569686B1 (en) 2006-01-27 2009-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for synthesis of bicyclic nucleic acid analogs
US8178503B2 (en) 2006-03-03 2012-05-15 International Business Machines Corporation Ribonucleic acid interference molecules and binding sites derived by analyzing intergenic and intronic regions of genomes
GB0605337D0 (en) 2006-03-17 2006-04-26 Genomica Sau Treatment of CNS conditions
US8143230B2 (en) 2006-05-05 2012-03-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating expression of PCSK9
US7547684B2 (en) 2006-05-11 2009-06-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5′-modified bicyclic nucleic acid analogs
US7666854B2 (en) 2006-05-11 2010-02-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bis-modified bicyclic nucleic acid analogs
WO2008043561A2 (en) 2006-10-11 2008-04-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Influenza targets
JP2010507387A (ja) * 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
US20100190837A1 (en) 2007-02-15 2010-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 5'-Substituted-2-F' Modified Nucleosides and Oligomeric Compounds Prepared Therefrom
JP5721426B2 (ja) 2007-04-05 2015-05-20 ザ ジェイ．ディヴィッド グラッドストン インスティテューツ 神経の過度な興奮を緩和する薬剤を識別する方法
KR20170056032A (ko) 2007-05-01 2017-05-22 로슈 이노베이션 센터 코펜하겐 에이/에스 Ｔｎｆ 슈퍼패밀리 수용체에 대한 스플라이스 스위칭 올리고머 및 질병 치료에 있어서의 그의 용도
AU2008260277C1 (en) 2007-05-30 2014-04-17 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
US20100261175A1 (en) 2007-06-15 2010-10-14 Exiqon A/S Use of short oligonucleotides for reagent redundancy experiments in rna functional analysis
EP2176280B2 (en) 2007-07-05 2015-06-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-disubstituted bicyclic nucleic acid analogs
JP5572090B2 (ja) 2007-08-15 2014-08-13 アイシス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッド テトラヒドロピラン核酸類似体
US20090076725A1 (en) 2007-09-14 2009-03-19 Kulvir Singh Bhogal Conveyance mode aware navigation device
EP2227545A2 (en) 2007-11-09 2010-09-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of factor 7 expression
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
WO2009100320A2 (en) 2008-02-07 2009-08-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexitol nucleic acid analogs
AU2009235941A1 (en) 2008-04-07 2009-10-15 Riken RNA molecules and uses thereof
BRPI0801674B1 (pt) 2008-06-04 2015-08-18 Luiz Carmine Giunti De Oliveira Formulação de creme de alfarroba com avelã sem adição de açúcar, sem lactose e sem glúten
EP2356129B1 (en) 2008-09-24 2013-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Substituted alpha-l-bicyclic nucleosides
WO2010048497A1 (en) 2008-10-24 2010-04-29 Genizon Biosciences Inc. Genetic profile of the markers associated with alzheimer's disease
BRPI0901526A2 (pt) 2009-05-19 2011-01-18 Laerte Casoni José formulação de pasta de avelã sem adição de sacarose, enriquecida com fibras
KR101965868B1 (ko) 2009-06-17 2019-04-05 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 대상에게서 ｓｍｎ２ 스플라이싱을 조정하기 위한 조성물 및 방법
JP2014501097A (ja) 2009-07-06 2014-01-20 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 生物由来物質の産生を高めるための組成物及び方法
EP2451476A4 (en) 2009-07-06 2013-07-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc BIOTRAITEMENT BASED ON CELLS
US20110041191A1 (en) 2009-07-09 2011-02-17 Bettina Platt Animal model, and products and methods useful for the production thereof
EP2462153B1 (en) 2009-08-06 2015-07-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Bicyclic cyclohexose nucleic acid analogs
CA2771228C (en) 2009-08-21 2020-12-29 Opko Curna, Llc Treatment of 'c terminus of hsp70-interacting protein' (chip) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to chip
CA2931725C (en) * 2009-09-11 2021-10-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of huntingtin expression
EP2515947B1 (en) 2009-12-23 2021-10-06 CuRNA, Inc. Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2
EP3421040A1 (en) * 2010-01-08 2019-01-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression
DK2534248T3 (en) 2010-02-08 2018-11-19 Ionis Pharmaceuticals Inc SELECTIVE REDUCTION OF ALLELVARIANS
GB2471149B (en) 2010-03-04 2011-06-08 Eger Olive Oil Products Industry Ltd Dr Olive oil based flavoured spreads
US9102938B2 (en) 2010-04-01 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 2′ and 5′ modified monomers and oligonucleotides
EP2560687B1 (en) 2010-04-19 2017-05-24 Nlife Therapeutics S.L. Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neuron types
WO2011133876A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
CN103154014B (zh) 2010-04-28 2015-03-25 Isis制药公司 修饰核苷、其类似物以及由它们制备的寡聚化合物
WO2012005898A2 (en) 2010-06-15 2012-01-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chinese hamster ovary (cho) cell transcriptome, corresponding sirnas and uses thereof
WO2012018881A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the regulation of rna
US20140155462A1 (en) 2011-04-22 2014-06-05 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibitions of egfr by double-stranded rna
JP6457263B2 (ja) 2011-05-20 2019-01-23 オリゴメリックス インコーポレイテッド タウプロテアーゼ組成物および使用方法
WO2012177639A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines
US8906441B2 (en) 2011-09-22 2014-12-09 Hormel Foods Corporation Peanut spread
WO2013066721A2 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of met by double-stranded rna
EP2782571A4 (en) * 2011-11-23 2015-04-01 Intellikine Llc HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND USES THEREOF
BE1020640A3 (nl) 2011-12-03 2014-02-04 Cavalier Nv Een met vezels verrijkte vulsamenstelling voor een chocoladeproduct.
AU2013202595B2 (en) 2012-03-30 2016-04-21 Biogen Ma Inc. Methods for modulating Tau expression for reducing seizure and modifying a neurodegenerative syndrome
WO2013173647A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Rana Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating apoa1 and abca1 expression
SG11201500232UA (en) 2012-07-13 2015-04-29 Wave Life Sciences Pte Ltd Chiral control
EP3693460A1 (en) 2012-07-27 2020-08-12 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of renin-angiotensin system (ras) related diseases by angiotensinogen
GB201301233D0 (en) 2013-01-24 2013-03-06 Queen Mary & Westfield College Method
ITGE20130015A1 (it) 2013-02-01 2014-08-02 Microtem Di Mattia Chiodetti E Savi No Larocca Snc Dispositivo di tenuta meccanica, in particolare per alberi di trasmissione in navi, natanti o simili
US9644207B2 (en) 2013-03-14 2017-05-09 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating Tau expression
KR20160002977A (ko) 2013-05-01 2016-01-08 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 조성물 및 방법
ES2772722T3 (es) 2013-06-10 2020-07-08 Cargill Inc Sistema de grasas estructuradas
TWI772856B (zh) 2013-07-19 2022-08-01 美商百健Ｍａ公司 用於調節τ蛋白表現之組合物
DE102013108693B3 (de) 2013-08-12 2014-12-24 Mars Inc. Schale
ES2747260T3 (es) 2013-10-14 2020-03-10 Ionis Pharmaceuticals Inc Métodos para modular la expresión de transcrito antisentido C9ORF72
DK3068233T3 (en) 2013-11-15 2019-04-08 Aak Ab Publ COCOA BREAST STABILIZING VEGETABLE FAT COMPOSITION
WO2015106128A2 (en) 2014-01-09 2015-07-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. MODIFIED RNAi AGENTS
US20170211064A1 (en) 2014-07-29 2017-07-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating tau expression
BR112017016663A2 (pt) 2015-02-04 2018-04-10 Hoffmann La Roche oligômero, conjugado, composição, kit, e, métodos para inibir ou reduzir a expressão de proteína tau em uma célula e para tratar ou prevenir um distúrbio neurológico
EP3253871A1 (en) 2015-02-04 2017-12-13 Bristol-Myers Squibb Company Lna oligonucleotides with alternating flanks
ES2820713T3 (es) 2015-03-25 2021-04-22 Univ Degli Studi Di Trento Terapia mediada por ARN interferente para enfermedades neurodegenerativas
MA43072A (fr) 2015-07-22 2018-05-30 Wave Life Sciences Ltd Compositions d'oligonucléotides et procédés associés
PL3355703T3 (pl) 2015-09-29 2021-08-30 Bunge Loders Croklaan B.V. Tolerancyjny temperaturowo czekoladowy produkt do rozsmarowywania lub nadzienie oraz sposób wytwarzania
JOP20200228A1 (ar) 2015-12-21 2017-06-16 Novartis Ag تركيبات وطرق لخفض تعبير البروتين tau
AR109750A1 (es) 2016-09-29 2019-01-23 Ionis Pharmaceuticals Inc Compuestos y métodos para reducir la expresión de tau
JOP20190065A1 (ar) 2016-09-29 2019-03-28 Ionis Pharmaceuticals Inc مركبات وطرق لتقليل التعبير عن tau
AU2019233612A1 (en) 2018-03-13 2020-09-10 Janssen Pharmaceutica Nv Modified oligonucleotides for use in treatment of tauopathies
TWI862501B (zh) 2018-07-03 2024-11-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 用於調制 Tau 表現之寡核苷酸
IL287798B2 (en) 2019-05-08 2025-09-01 Biogen Ma Inc Convergent Syntheses of Oligonucleotides in Liquid Phase
EP4496025A4 (en) 2022-03-18 2025-10-08 Panasonic Energy Co Ltd NON-AQUEOUS ELECTROLYTE SECONDARY BATTERY

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015010135A3 (en) 2015-04-02
JP2016528891A (ja) 2016-09-23
BR112016000654B1 (pt) 2022-08-09
KR20230062658A (ko) 2023-05-09
TWI772856B (zh) 2022-08-01
TW202246503A (zh) 2022-12-01
US20210071176A1 (en) 2021-03-11
US9683235B2 (en) 2017-06-20
KR20250091306A (ko) 2025-06-20
IL279572A (en) 2021-03-01
US20180094261A1 (en) 2018-04-05
CN113667667B (zh) 2026-02-10
EP3022217B1 (en) 2021-04-07
AU2014290395A1 (en) 2016-02-04
CN108064227A (zh) 2018-05-22
RU2735551C2 (ru) 2020-11-03
HRP20211051T1 (hr) 2021-10-01
CA3149282C (en) 2025-07-08
LT3022217T (lt) 2021-07-12
EP3022217A2 (en) 2016-05-25
BR112016000654A2 (pt) 2017-12-12
IL243609B (en) 2018-08-30
KR102273926B1 (ko) 2021-07-09
RU2016104824A (ru) 2017-08-24
HUE055144T2 (hu) 2021-11-29
KR20160034340A (ko) 2016-03-29
KR20210084698A (ko) 2021-07-07
KR102424991B1 (ko) 2022-07-25
US10793856B2 (en) 2020-10-06
DK3022217T3 (da) 2021-06-28
EP3022217A4 (en) 2017-08-09
SI3022217T1 (sl) 2021-08-31
TW202043475A (zh) 2020-12-01
CA2918600A1 (en) 2015-01-22
TW201503892A (zh) 2015-02-01
MX379535B (es) 2025-03-11
KR102526525B1 (ko) 2023-04-28
KR20220108196A (ko) 2022-08-02
US12091662B2 (en) 2024-09-17
AU2020250262A1 (en) 2020-11-05
IL302146A (en) 2023-06-01
JP2022103192A (ja) 2022-07-07
US20160145617A1 (en) 2016-05-26
PT3022217T (pt) 2021-05-28
US11591595B2 (en) 2023-02-28
JP6684707B2 (ja) 2020-04-22
JP7354342B2 (ja) 2023-10-02
MX2021001207A (es) 2021-04-12
US20230323351A1 (en) 2023-10-12
ES2871533T3 (es) 2021-10-29
TW201936200A (zh) 2019-09-16
CY1124292T1 (el) 2022-07-22
TWI657819B (zh) 2019-05-01
EP3910060A1 (en) 2021-11-17
WO2015010135A2 (en) 2015-01-22
JP2023164642A (ja) 2023-11-10
IL279572B1 (en) 2023-06-01
IL260378B (en) 2021-01-31
MX2016000782A (es) 2016-06-28
HK1223626A1 (en) 2017-08-04
JP2020141670A (ja) 2020-09-10
NZ755605A (en) 2022-01-28
CN120796262A (zh) 2025-10-17
KR20240093742A (ko) 2024-06-24
SMT202100371T1 (it) 2021-07-12
CN113667667A (zh) 2021-11-19
CN108064227B (zh) 2021-07-06
PL3022217T3 (pl) 2021-10-18
CA2918600C (en) 2022-05-03
AU2020250262B2 (en) 2023-01-12
CA3149282A1 (en) 2015-01-22
NZ715828A (en) 2022-07-01
IL279572B2 (en) 2023-10-01
AU2014290395B2 (en) 2020-07-30
TWI702046B (zh) 2020-08-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12091662B2 (en) Compositions for modulating tau expression
US9963699B2 (en) Methods for modulating C9ORF72 expression
EP3283080B1 (en) Compositions for modulating c9orf72 expression
RU2702838C2 (ru) Композиции для модуляции экспрессии атаксина 2
US20200239882A1 (en) Compositions for modulating c9orf72 expression
RS60707B1 (sr) Kompozicije za modulaciju ekspresije sod-1
HK40063379A (en) Compositions for modulating tau expression
HK40039446A (en) Compositions for modulating c9orf72 expression
HK1223626B (en) Compositions for modulating tau expression
HK1250255B (en) Compositions for modulating c9orf72 expression
HK1232251B (en) Compositions for modulating ataxin 2 expression