RS61435B1 - 8-[6-[3-(amino)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on derivati kao selektivni modulatori ataksija teleangiektazija mutirane (atm) kinaze za lečenje raka - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ova specifikacija se odnosi na jedinjenja supstituisanog imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Ova jedinjenja i soli selektivno moduliraju ataksija teleangiektazija mutiranu („ATM“) kinazu, te se specifikacija stoga takođe odnosi na jedinjenja supstituisanog imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i njihove soli za upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti posredovanih ATM-om, uključujući rak. Specifikacija se dalje odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenja supstituisanog imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i njihove farmaceutski prihvatljive soli; komplete koji sadrže takva jedinjenja i soli; postupke za proizvodnju takvih jedinjenja i soli; i intermedijere koji su korisni u takvoj proizvodnji.

POZADINA

[0002] ATM kinaza je serin treonin kinaza prvobitno identifikovana kao proizvod mutiranog gena kod ataksija teleangiektazije. Ataksija teleangiektazija je locirana u ljudskom hromozomu 11q22-23 i kodira veliki protein od oko 350 kDa koji karakteriše prisustvo domena serin/treonin kinaze sličnog fosfatidilinozitol 3-kinazi okruženog FRAP-ATM-TRRAP i FATC domenima koji moduliraju aktivnost i funkciju ATM kinaze. ATM kinaza je identifikovana kao značajan faktor odgovora na oštećenje DNK izazvano pucanjem dvostrukog lanca. Njena primarna funkcija u tranzicijama S/G2/M ćelijskog ciklusa i u urušenim replikacionim viljuškama je iniciranje kontrolnih tačaka ćelijskog ciklusa, modifikacije hromatina, popravke HR i signalnih kaskada za preživljavanje kako bi se održao ćelijski integritet nakon oštećenja DNK (Lavin, M. F.; Rev. Mol. Cell Biol.2008, 759-769).

[0003] Signalizacija ATM kinaze može grubo da se podeli u dve kategorije: kanonski put koji signalizira zajedno sa Mre11-Rad50-NBS1 kompleksom iz pucanja dvostrukog lanca i aktivira kontrolnu tačku oštećenja DNK, i nekoliko nekanonskih režima aktivacije, koji se aktiviraju drugim oblicima ćelijskog stresa (Cremona i sar. Oncogene 2013, 3351-3360).

[0004] ATM kinaza se ubrzano i robusno aktivira kao odgovor na pucanje dvostrukog lanca i navodno je sposobna da fosforiluje više od 800 supstrata (Matsuoka i sar. Science 2007, 1160-1166), uz koordinaciju više puteva odgovora na stres (Kurz i Lees Miller, DNA Repair 2004, 889-900). ATM kinaza je prevashodno prisutna u jedru ćelije u neaktivnom homodimernom obliku, ali se autofosforiluje na Ser1981 kada oseti pucanje dvostrukog lanca DNK (kanonski put), što dovodi do disocijacije u monomer sa kompletnom aktivnošću kinaze (Bakkenist i sar. Nature 2003, 499-506). To je ključni događaj aktivacije, te je ATM fosfo-Ser1981 stoga i direktni farmakodinamički agens i selekcioni biomarker pacijenta za zavisnost puta tumora.

[0005] ATM kinaza odgovara na direktno pucanje dvostrukog lanca koje izazivaju uobičajene antitumorske terapije, kao što su jonizujuće zračenje i inhibitori topoizomeraze-II (doksorubicin, etopozid), ali takođe i na inhibitore topoizomeraze-I (na primer, irinotekan i topotekan) putem konverzije pucanja jednostrukog lanca u pucanje dvostrukog lanca tokom replikacije. Inhibicija ATM kinaze može da pojača dejstvo bilo kog od ovih agenasa, te se usled toga očekuje da će inhibitori ATM kinaze biti korisni u lečenju raka.

[0006] CN102372711A objavljuje određena jedinjenja imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona koja su navedena kao dvojni inhibitori PI 3-kinaze α i mete rapamicin kinaze kod sisara („mTOR“). U jedinjenja objavljena u CN102372711A spadaju sledeća:

Neka jedinjenja prijavljena u CN102372711A

[0007] CN102399218A objavljuje određena jedinjenja imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona koja su navedena kao inhibitori PI 3-kinaze α. U jedinjenja objavljena u CN102399218A spadaju sledeća:

[0008] Iako je za jedinjenja iz CN102372711A i CN102399218A objavljeno da imaju aktivnost protiv PI 3-kinaze α i u nekim slučajevima mTOR kinaze, i dalje postoji potreba za razvojem novih jedinjenja koja su delotvornija protiv različitih enzima kinaze, kao što je ATM kinaza. Dalje postoji potreba za novim jedinjenjima koja deluju protiv određenih enzima kinaze, poput ATM kinaze, na veoma selektivan način (tj. putem modulacije ATM delotvornije od drugih bioloških ciljeva).

[0009] WO2015/084384A1 opisuje (2-amino-imidazo(1 ,2-b)piridazin-3-karbonil)-amino i (2-aminopirazolo(1,5-a)piridin-3-karbonil)-amino derivate kao inhibitore protein kinaze povezane sa ATM i Rad3. WO2015/170081A1 opisuje jedinjenja imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona kao inhibitore ATM kinaze.

[0010] Kako je pokazano na drugom mestu u ovoj specifikaciji (na primer, u testovima na bazi ćelija koji su opisani u eksperimentalnom odeljku), jedinjenja iz predmetne specifikacije uopšteno imaju veoma potentnu inhibitorsku aktivnost ATM kinaze, ali mnogo manje potentnu aktivnost protiv drugih enzima tirozin kinaze, kao što su PI 3-kinaza α, mTOR kinaza i ataksija teleangiektazija i Rad3-povezana protein („ATR“) kinaza. Tako, jedinjenja iz predmetne specifikacije ne samo da inhibiraju ATM kinazu, već se mogu smatrati veoma selektivnim inhibitorima ATM kinaze.

[0011] Usled njihove veoma selektivne prirode, očekuje se da će jedinjenja iz predmetne specifikacije biti naročito korisna u lečenju bolesti u kojima učestvuje ATM kinaza (na primer, u lečenju raka), ali kada je poželjno minimizovati dejstva ili toksičnost van mete koja se može javiti usled inhibicije drugih enzima tirozin kinaze, kao što je klasa PI 3-kinaze α, mTOR kinaze i ATR kinaze.

SAŽETAK PRONALASKA

[0012] Ukratko, ova specifikacija opisuje, delimično, jedinjenje Formule (I):

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time što:

R<1>je metil;

R<2>je hidro ili metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten;

R<3>je hidro ili fluor;

R<4>je hidro ili metil; i

R<5>je hidro ili fluor.

[0013] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0014] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.

[0015] Ova specifikacija takođe opisuje, delimično, jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju raka.

SLIKE

[0016]

Slika 1: Obrazac rendgenske difrakcije praha oblika A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

Slika 2: DSC termogram oblika A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

Slika 3: Obrazac rendgenske difrakcije praha oblika B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

Slika 4: DSC termogram oblika B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

OPIS ILUSTRATIVNIH OTELOTVORENJA

[0017] Mnoga otelotvorenja iz pronalaska su prikazana u specifikaciji i biće jasna čitaocu sa znanjem i veštinama u struci.

[0018] U prvom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što

R<1>je metil;

R<2>je hidro ili metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten;

R<3>je hidro ili fluor;

R<4>je hidro ili metil; i

R<5>je hidro ili fluor.

[0019] „Hidro“ grupa je ekvivalentna atomu vodonika. Atomi za koje je vezana hidro grupa mogu se smatrati nesupstituisanima.

[0020] Gde je pomenuto da „R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten“, to znači da su R<1>i R<2>grupe povezane putem kovalentne veze ugljenik-ugljenik kako bi gradile lanac nesupstituisanog alkilena odgovarajuće dužine radi nastanka odgovarajućeg prstena. Na primer, kada R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade pirolidinil prsten, R<1>i R<2>zajedno predstavljaju lanac nesupstituisanog butilena koji je povezan sa relevantnim atomom azota u Formuli (I) na oba terminalna ugljenika.

[0021] Termin „farmaceutski prihvatljivo“ se koristi da se naznači da je predmet (na primer, so, dozni oblik ili ekscipijens) pogodan za upotrebu na pacijentima. Spisak primera farmaceutski prihvatljivih soli može se naći u priručniku Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, P. H. Stahl i C. G. Wermuth, urednici, Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA, 2002. Odgovarajuća farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja Formule (I) je, na primer, kisela adiciona so. Kisela adiciona so jedinjenja Formule (I) može da se napravi dovođenjem jedinjenja u kontakt sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom u uslovima koji su poznati stručnjaku. Kisela adiciona so može, na primer, da se napravi koristeći neorgansku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline i fosforne kiseline. Kisela adiciona so može da se napravi koristeći organsku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline i para-toluensulfonske kiseline.

[0022] Stoga, u jednom otelotvorenju je obezbeđeno jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline ili para-toluensulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so metansulfonske kiseline. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što farmaceutski prihvatljiva so predstavlja so mono-metansulfonske kiseline, tj. stehiometrija jedinjenja Formule (I) prema metansulfonskoj kiselini je 1:1.

[0023] Dalje otelotvorenje pruža bilo koje od ovde definisanih otelotvorenja (na primer, otelotvorenje iz zahteva 1) uz uslov da je jedan ili više specifičnih Primera (na primer jedan, dva ili tri specifična Primera) odabranih iz grupe koja se sastoji od Primera 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 i 18 pojedinačno odbijeno.

[0024] Neke vrednosti varijabilnih grupa u Formuli (I) su sledeće. Takve vrednosti mogu da se koriste u kombinaciji sa bilo kojom od definicija, zahteva (na primer, zahtev 1) ili ovde definisanih otelotvorenja kako bi se obezbedila dalja otelotvorenja.

a) R<1>je metil.

b) R<2>je metil.

c) R<2>je hidro.

d) R<1>je metil i R<2>je hidro ili metil.

e) R<1>i R<2>su oba metil.

f) R<1>i R<2>su oba metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten.

g) R<1>i R<2>su oba metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade prsten azetidinila.

h) R<1>i R<2>su oba metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade prsten pirolidinila.

i) R<1>i R<2>su oba metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade piperidinil prsten.

j) R<1>i R<2>su oba metil.

k) R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten.

l) R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil prsten.

m) R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade pirolidinil prsten.

n) R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade piperidinil prsten.

o) R<3>i R<5>su oba hidro.

p) R<3>i R<5>su oba fluor.

q) R<3>je hidro.

r) R<3>je fluor.

s) R<4>je hidro.

t) R<4>je metil.

u) R<5>je hidro.

v) R<5>je fluor.

[0025] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što:

R<1>je metil;

R<2>je hidro ili metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten;

R<3>je hidro ili fluor;

R<4>je hidro ili metil; i

R<5>je hidro ili fluor.

[0026] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što:

R<1>je metil;

R<2>je hidro ili metil;

R<3>je hidro;

R<4>je hidro ili metil; i

R<5>je hidro.

[0027] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što je jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 1-izopropil-3-metil-8-[6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[2-fluor-6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

7-fluor-8-[2-fluor-6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

7-fluor-8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona;

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; i

7-fluor-1-izopropil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0028] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0029] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on.

[0030] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

1

[0031] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0032] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on.

[0033] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0034] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0035] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on.

[0036] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0037] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-oksidopiperidin-1-ijum-1-il)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0038] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-oksidopiperidin-1-ijum-1-il)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on.

[0039] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-oksidopiperidin-1-ijum-1-il)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0040] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu da postoje u solvatisanim oblicima i nesolvatisanim oblicima. Na primer, solvatisani oblik može biti hidratni oblik, kao što je hemihidrat, monohirdat, dihidrat, trihidrat ili njegova alternativna količina. Pronalazak obuhvata sve takve solvatisane i nesolvatisane oblike jedinjenja Formule (I), naročito u meri u kojoj takvi oblici imaju inhibitorsku aktivnost ATM kinaze, kako je, na primer, izmereno testovima koji su ovde opisani.

[0041] Atomi jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu da postoje kao njihovi izotopi. Pronalazak obuhvata sva jedinjenja Formule (I) u kojima je atom zamenjen sa jednim ili više svojih izotopa (na primer, jedinjenje Formule (I) gde je jedan ili više atoma ugljenika<11>C ili<13>C izotop ugljenika, ili gde je jedan ili više atoma vodonika<2>H ili<3>H izotop).

[0042] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu da postoje kao smeša tautomera.

„Tautomeri“ su strukturni izomeri koji postoje u ravnoteži nastaloj usled migracije atoma vodonika. Pronalazak obuhvata sve tautomere jedinjenja Formule (I), naročito u meri u kojoj takvi tautomeri imaju inhibitorsku aktivnost ATM kinaze.

[0043] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu biti kristalni, i mogu ispoljavati jedan ili više kristalnih oblika. Pronalazak obuhvata bilo koji kristalni ili amorfni oblik jedinjenja Formule (I), ili smešu takvih oblika, koji poseduje inhibitorsku aktivnost ATM kinaze.

[0044] Uopšteno je poznato da kristalne supstance mogu da se okarakterišu koristeći konvencionalne tehnike kao što su rendgenska difrakcija praha (XRPD), diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC), termogravimetrijska analiza (TGA), spektroskopija sa Furijeovom transformacijom difuzne refleksije infracrvenog zračenja (DRIFT), bliska infracrvena (NIR) spektroskopija, spektroskopija nuklearne magnetne rezonance rastvora i/ili čvrstog stanja. Sadržaj vode u kristalnim supstancama može da se utvrdi putem analize po Karl Fišeru.

[0045] Ovde opisani kristalni oblici pružaju XRPD obrasce suštinski iste kao XRPD obrasci koji su prikazani na slikama, i imaju različite vrednosti 2-teta, kako je prikazano u ovde datim tabelama. Stručnjak će razumeti da može da se dobije XRPD obrazac ili difraktogram koji ima jednu ili više grešaka u merenju u zavisnosti od uslova beleženja, kao što su oprema ili mašina koji se koriste. Slično tome, opšte je poznato da intenziteti u XRPD obrascu mogu da fluktuiraju u zavisnosti od uslova merenja ili pripreme uzorka kao posledica poželjne orijentacije. Osobe sa znanjem i veštinama u oblasti XRPD će dalje razumeti da relativni intenzitet pika takođe može biti pod uticajem, na primer, zrna većih od 30 µm i neuniformnih proporcija. Stručnjak će takođe shvatiti da na poziciju refleksije može da utiče precizna visina na kojoj uzorak naleže u difraktometru, kao i nulta kalibracija difraktometra. Planarnost uzorka takođe može malo da utiče.

[0046] Usled ovih razmatranja, podatke o obrascu difrakcije koji su predstavljeni ne treba uzeti kao apsolutne vrednosti (Jenkins, R i Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), 'Chemical Crystallography', Clarendon Press, London; Klug, H. P. i Alexander, L. E. (1974), 'X-Ray Diffraction Procedures'). Shodno tome, treba da bude jasno da čvrsti oblici nisu ograničeni na kristale koji pružaju XRPD obrasce identične XRPD obrascima koji su prikazani na slikama, i svi kristali koji daju XRPD obrasce suštinski iste kao oni koji su prikazani na slikama spadaju u opseg pronalaska. Osoba sa znanjem i veštinama u oblasti XRPD može da prosudi o suštinskoj identičnosti XRPD obrazaca. Generalno, greška merenja difrakcionog ugla kod XRPD je približno plus ili minus 0,2° 2-teta, i takav stepen greške merenja treba uzeti u obzir kod razmatranja podataka rendgenske difrakcije praha na slikama i prilikom čitanja podataka koji se nalaze u ovde uključenim tabelama.

[0047] Jedinjenje iz Primera 2 ispoljava kristalna svojstva, i jedan kristalni oblik je okarakterisan.

[0048] Stoga, u jednom otelotvorenju je obezbeđen oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0049] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje dva specifična pika na oko 2-teta = 3,7 i 14,8°.

[0050] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 3,7, 11,3, 13,1, 14,8, 18,0, 18,4, 19,4, 21,0, 22,3 i 23,2°.

[0051] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac

1

rendgenske difrakcije praha suštinski identičan obrascu rendgenske difrakcije praha koji je prikazan na slici 1.

[0052] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 3,7° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0053] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 14,8° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0054] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 3,7 i 14,8° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0055] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na 2-teta = 3,7, 11,3, 13,1, 14,8, 18,0, 18,4, 19,4, 21,0, 22,3 i 23,2° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0056] DSC analiza oblika A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona prikazuje endotermu topljenja koja počinje na 141,5 °C i ima pik na 144,2 °C (slika 2).

[0057] Stručnjak razume da će vrednost ili raspon vrednosti uočenih na DSC termogramu određenog jedinjenja pokazivati varijacije između šarži različitih čistoća. Stoga, iako za jedno jedinjenje raspon može biti mali, za drugo raspon može biti prilično veliki. Generalno, greška merenja difrakcionog ugla kod DSC termalnih događaja je približno plus ili minus 5 °C, i takav stepen greške merenja treba uzeti u obzir kod razmatranja podataka DSC koji su ovde uključeni.

[0058] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na oko 141,5 °C i pikom na oko 144,2 °C.

[0059] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na 141,5 °C plus ili minus 5 °C i pikom na 144,2 °C plus ili minus 5 °C.

[0060] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na oko 141,5 °C i pikom na oko 144,2 °C.

[0061] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik A 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC termogram suštinski kao što je prikazano na slici 2.

[0062] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.

[0063] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje dva specifična pika na oko 2-teta = 3,4 i 11,7°.

[0064] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na oko 2-teta = 3,4, 11,7, 13,1, 13,5, 17,5, 18,1, 19,0, 22,7, 23,4 i 24,0°.

[0065] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha suštinski identičan obrascu rendgenske difrakcije koji je prikazan na slici 3.

1

[0066] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 3,4° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0067] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje jednim specifičnim pikom na 2-teta = 11,7° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0068] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 3,4 i 11,7° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0069] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha sa specifičnim pikovima na 2-teta = 3,4, 11,7, 13,1, 13,5, 17,5, 18,1, 19,0, 22,7, 23,4 i 24,0° plus ili minus 0,2° 2-teta.

[0070] DSC analiza oblika B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona prikazuje endotermu topljenja koja počinje na 144,7 °C i ima pik na 145,8 °C (slika 4).

[0071] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na oko 144,7 °C i pikom na oko 145,8 °C.

[0072] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na 144,7 °C plus ili minus 5 °C i pikom na 145,8 °C plus ili minus 5 °C.

1

[0073] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC endotermu sa početkom topljenja na oko 144,7 °C i pikom na oko 145,8 °C.

[0074] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je kristalni oblik, oblik B 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima DSC termogram suštinski kao što je prikazano na slici 4.

[0075] Kada je navedeno da se jedinjenje odnosi na kristalni oblik, stepen kristalnosti može biti veći od oko 60%. U nekim otelotvorenjima, stepen kristalnosti je veći od oko 80%. U nekim otelotvorenjima, stepen kristalnosti je veći od oko 90%. U nekim otelotvorenjima, stepen kristalnosti je veći od oko 95%. U nekim otelotvorenjima, stepen kristalnosti je veći od oko 98%. Jedinjenja Formule (I) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja Formule (II):

ili njegove soli, naznačenim time što su R<3>, R<4>i R<5>kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, a X je odlazeća grupa (na primer, atom halogena ili alternativno atom fluora) sa jedinjenjem formule (III):

ili njegovom soli, naznačenim time što su R<1>i R<2>kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja. Reakcija se pogodno obavlja u odgovarajućem rastvaraču (na primer, DMF, DMA ili THF) i u prisustvu baze (na primer, natrijum hidrid) na odgovarajućoj temperaturi (na primer, temperatura u rasponu od oko 20–50 °C).

[0076] Jedinjenja Formule (II) i njihove soli su stoga korisna kao intermedijeri u pripremi jedinjenja Formule (I) i daju dalje otelotvorenje. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (II) ili njegova so, naznačeno time što:

1

R<3>je hidro ili fluor;

R<4>je hidro ili metil;

R<5>je hidro ili fluor; i

X je odlazeća grupa. U jednom otelotvorenju, X je atom halogena ili triflatna grupa. U jednom otelotvorenju, X je atom fluora.

[0077] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova so.

[0078] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova so.

[0079] U bilo kom od otelotvorenja u kojima se pominje jedinjenje Formule (II) ili njegova so, jasno je da takve soli ne moraju biti farmaceutski prihvatljive soli. Odgovarajuća so jedinjenja Formule (II) je, na primer, kisela adiciona so. Kisela adiciona so jedinjenja Formule (II) može da se napravi dovođenjem jedinjenja u kontakt sa odgovarajućom neorganskom ili organskom kiselinom u uslovima koji su poznati stručnjaku. Kisela adiciona so može, na primer, da se napravi koristeći neorgansku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline i fosforne kiseline. Kisela adiciona so može da se napravi koristeći organsku kiselinu izabranu iz grupe koja se sastoji od trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline i para-toluensulfonske kiseline.

[0080] Stoga, u jednom otelotvorenju je obezbeđeno jedinjenje Formule (II) ili njegova so, naznačeno time što so predstavlja so hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline, trifluorsirćetne kiseline, limunske kiseline, maleinske kiseline, oksalne kiseline, sirćetne kiseline, mravlje kiseline, benzojeve kiseline, fumarne kiseline, sukcinske kiseline, vinske kiseline, mlečne kiseline, piruvinske kiseline, metansulfonske kiseline, benzensulfonske kiseline ili para-toluensulfonske kiseline.

[0081] Jedinjenja Formule (II) mogu, na primer, da se pripreme reakcijom jedinjenja Formule (IV):

1

naznačenim time što su R<4>i R<5>kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, a X<1>je odlazeća grupa (na primer, atom joda, broma ili hlora ili triflatna grupa ili alternativno atom broma) sa jedinjenjem formule (V):

ili njegovom soli, naznačenim time što su R<3>i X kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, a Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat). Reakcija može da se izvede pod standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjacima, na primer, u prisustvu izvora paladijuma (na primer, tetrakis trifenilfosfin paladijum ili paladijum(II) acetat), opciono fosfinskog liganda (na primer, ksantfos ili S-fos) i odgovarajuće baze (na primer, cezijum karbonat ili trietilamin).

[0082] Jedinjenja Formule (IV) su stoga korisna kao intermedijeri u pripremi jedinjenja Formule (I) i daju dalje otelotvorenje. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (IV) ili njegova so, naznačeno time što:

R<4>je hidro ili metil;

R<5>je hidro ili fluor; i

X<1>je odlazeća grupa. U jednom otelotvorenju, X<1>je atom joda, broma ili hlora ili triflatna grupa. U jednom otelotvorenju, X<1>je atom broma.

[0083] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova so.

[0084] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je 8-brom-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova so.

1

[0085] Jedinjenja formule (IV) mogu da se pripreme postupcima koji su slični onima prikazanim u odeljku Primeri.

[0086] Jedinjenja Formule (I) mogu takođe da se pripreme reakcijom jedinjenja Formule (IV), kao što je prethodno opisano, sa jedinjenjem formule (VI):

naznačenim time što R<1>, R<2>i R<3>su kao što je definisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, i Y je boronska kiselina, estar boronske kiseline ili kalijum trifluorboratna grupa (na primer, boronska kiselina, pinakol estar boronske kiseline ili kalijum trifluorborat). Reakcija može da se izvede pod standardnim uslovima koji su dobro poznati stručnjacima, na primer, u prisustvu izvora paladijuma (na primer, tetrakis trifenilfosfin paladijum ili paladijum(II) acetat), opciono fosfinskog liganda (na primer, ksantfos ili S-fos) i odgovarajuće baze (na primer, cezijum karbonat ili trietilamin).

[0087] Jedinjenja formule (VI) mogu da se pripreme postupcima koji su slični onima prikazanim u odeljku Primeri.

[0088] U jednom otelotvorenju, obezbeđen je bilo koji od novih intermedijera koji su opisani u eksperimentalnom delu.

[0089] Usled njihove inhibitorske aktivnosti ATM kinaze, očekuje se da će jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli biti korisni u terapiji, na primer u lečenju bolesti ili zdravstvenih stanja posredovanih barem delimično ATM kinazom, uključujući rak.

[0090] Kada se pominje „rak/maligni tumor/karcinom“, to uključuje i nemetastatski rak ali i metastatski rak, tako da lečenje raka uključuje lečenje primarnih tumora kao i metastaza tumora.

[0091] „Inhibitorska aktivnost ATM kinaze“ odnosi se na smanjenje aktivnosti ATM kinaze kao direktan ili indirektan odgovor na prisustvo jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na aktivnost ATM kinaze u odsustvu jedinjenja Formule (I) ili

2

njegove farmaceutski prihvatljive soli. Takvo smanjenje aktivnosti može biti usled direktne interakcije jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa ATM kinazom ili usled interakcije jedinjenja Formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više drugih faktora koji zauzvrat utiču na aktivnost ATM kinaze. Na primer, jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može da smanji ATM kinazu putem direktnog vezivanja za ATM kinazu, izazivanjem (direktno ili indirektno) da drugi faktor smanji aktivnost ATM kinaze ili (direktnim ili indirektnim) smanjivanjem količine ATM kinaze prisutne u ćeliji ili organizmu.

[0092] Termin „terapija“ treba da ima svoje normalno značenje upravljanja bolešću kako bi se u potpunosti ili delimično ublažio jedan, neki ili svi njeni simptomi, ili kako bi se ispravila ili kompenzovala postojeća patologija. Termin „terapija“ takođe uključuje „profilaksu“, ako nije specifično drugačije naznačeno. Termin „terapeutski“ treba tumačiti na odgovarajući način.

[0093] Termin „profilaksa“ treba da ima svoje normalno značenje, i uključuje primarnu profilaksu za prevenciju razvoja bolesti i sekundarnu profilaksu kada se bolest već razvila i pacijent je privremeno ili trajno zaštićen od razbuktavanja ili pogoršanja bolesti ili razvoja novih simptoma povezanih sa bolešću.

[0094] Termin „lečenje“ se koristi naizmenično sa „terapija“. Slično tome, termin „lečiti“ može se razumeti kao „primenjivati terapiju“, pri čemu je „terapija“ kao što je ovde definisano.

[0095] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u terapiji.

[0096] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju bolesti posredovane ATM kinazom. U jednom otelotvorenju, navedena bolest posredovana ATM kinazom je rak. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma dojke, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća. U jednom otelotvorenju, navedeni rak je kolorektalni karcinom.

[0097] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka.

[0098] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju Hantingtonove bolesti.

[0099] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu kao neuroprotektivni agens.

[0100] „Neuroprotektivni agens“ je agens koji pomaže u relativnom očuvanju neuronske strukture i/ili funkcije.

[0101] U bilo kom otelotvorenju, bolest kod koje inhibicija ATM kinaze može biti korisna je Hantingtonova bolest.

[0102] Termin „terapeutski delotvorna količina“ odnosi se na količinu jedinjenja Formule (I), kako je opisano u bilo kom od ovde datih otelotvorenja, koja je delotvorna za pružanje

„terapije“ za ispitanika ili za „lečenje“ bolesti ili poremećaja kod ispitanika. U slučaju raka, terapeutski delotvorna količina može da izazove bilo koje promene koje mogu da se uoče ili izmere kod ispitanika, kako je opisano u prethodnoj definiciji za „terapiju“, „lečenje“ i

„profilaksu“. Na primer, delotvorna količina može da smanji broj ćelija raka ili tumora; smanji ukupnu veličinu tumora; inhibira ili zaustavi infiltraciju tumorskih ćelija u periferne organe uključujući, na primer, meko tkivo i kosti; inhibira i zaustavi metastazu tumora; inhibira i zaustavi rast tumora; ublaži u određenoj meri jedan ili više simptoma povezanih sa rakom, smanji morbiditet i mortalitet; poboljša kvalitet života; ili dovede do kombinacije takvih efekata. Delotvorna količina može biti količina koja je dovoljna za smanjenje simptoma bolesti koja reaguje na inhibiciju aktivnosti ATM kinaze. Kod lečenja raka, delotvornost in vivo može, na primer, da se izmeri procenom trajanja preživljavanja, vremena do progresije bolesti (TTP), stope odgovora (RR), trajanja odgovora i/ili kvaliteta života. Kao što znaju stručnjaci, delotvorne količine mogu da variraju u zavisnosti od načina primene, upotrebe ekscipijensa i zajedničke upotrebe sa drugim agensima. Na primer, kada se koristi kombinovana terapija, količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisanih u ovoj specifikaciji i količina drugih farmaceutski aktivnih agenasa su, u kombinaciji, zajedno delotvorne za lečenje ciljanog poremećaja kod životinje pacijenta. U ovom kontekstu, kombinovane količine su u „terapeutski delotvornoj količini“ ako su, kada se kombinuju, dovoljne za smanjenje simptoma bolesti koja reaguje na inhibiciju aktivnosti ATM kako je prethodno opisano. Uobičajeno, takve količine stručnjak može da utvrdi, na primer, počevši od doznog raspona koji je opisan u ovoj specifikaciji za jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i odobrenih ili na drugi način objavljenih doznih raspona drugih farmaceutski aktivnih jedinjenja.

[0103] „Toplokrvne životinje“ uključuju, na primer, ljude.

[0104] U bilo kom otelotvorenju u kome je rak spomenut u opštem smislu, navedeni rak može biti izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma dojke, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća. Navedeni rak takođe može biti izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata i karcinoma pluća.

[0105] U bilo kom otelotvorenju u kom se rak spominje u uopštenom smislu, mogu važiti sledeća otelotvorenja:

U jednom otelotvorenju, rak je kolorektalni karcinom.

[0106] U jednom otelotvorenju, rak je glioblastom.

[0107] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom želuca.

[0108] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom jednjaka.

[0109] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom jajnika.

2

[0110] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom endometrijuma.

[0111] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom grlića materice.

[0112] U jednom otelotvorenju, rak je difuzni limfom velikih B-ćelija.

[0113] U jednom otelotvorenju, rak je hronična limfocitna leukemija.

[0114] U jednom otelotvorenju, rak je akutna mijeloidna leukemija.

[0115] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata.

[0116] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom dojke. U jednom otelotvorenju, rak je trostruko negativni karcinom dojke.

[0117] „Trostruko negativni karcinom dojke“ je bilo koji karcinom dojke koji ne eksprimira gene za receptor estrogena, receptor progesterona i Her2/neu.

[0118] U jednom otelotvorenju, rak je hepatocelularni karcinom.

[0119] U jednom otelotvorenju, rak je karcinom pluća. U jednom otelotvorenju, rak pluća je mikrocelularni karcinom pluća. U jednom otelotvorenju, karcinom pluća je nemikrocelularni karcinom pluća.

[0120] U jednom otelotvorenju, rak je metastatski rak. U jednom otelotvorenju, metastatski rak obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0121] „Leptomeningealne metastaze“ se javljaju kada se rak proširi na moždane ovojnice, slojeve tkiva koji pokrivaju mozak i kičmenu moždinu. Metastaze mogu da se prošire na moždane ovojnice putem krvi ili mogu da putuju od moždanih metastaza, nošene cerebrospinalnom tečnošću (CSF) koja protiče kroz moždane ovojnice. U jednom otelotvorenju, rak je nemetastatski rak.

[0122] Antitumorsko lečenje opisano u ovoj specifikaciji može biti korisno kao jedina terapija, ili može obuhvatati, pored primene jedinjenja Formule (I), konvencionalnu hirurgiju, radioterapiju ili hemioterapiju, ili kombinaciju takvih dodatnih terapija. Takva konvencionalna hirurgija, radioterapija ili hemioterapija mogu da se primenjuju istovremeno, sekvencijalno ili odvojeno od lečenja jedinjenjem Formule (I).

[0123] Radioterapija može da uključuje jednu ili više sledećih kategorija terapije:

i. eksternu radioterapiju koristeći elektromagnetnu radijaciju, i intraoperativnu radioterapiju koristeći elektromagnetnu radijaciju;

ii. internu radioterapiju ili brahiterapiju; uključujući intersticijalnu radioterapiju ili intraluminalnu radioterapiju; ili

iii. sistemsku radioterapiju, uključujući, ali bez ograničenja, jod 131 i stroncijum 89.

[0124] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i radioterapija, za upotrebu u lečenju raka. U jednom otelotvorenju, rak je glioblastom. U jednom otelotvorenju, rak je metastatski rak. U jednom otelotvorenju, metastatski rak obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0125] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa radioterapijom. U jednom otelotvorenju, rak je glioblastom. U jednom otelotvorenju, rak je metastatski rak. U jednom otelotvorenju, metastatski rak obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0126] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i radioterapija, za upotrebu u istovremenom, sekvencijalnom ili zasebnom lečenju raka. U jednom otelotvorenju, rak je izabran od glioblastoma, karcinoma pluća (na primer, mikrocelularni karcinom pluća ili nemikrocelularni karcinom pluća), karcinoma dojke

2

(na primer, trostruko negativni karcinom dojke), karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma jednjaka, karcinoma grlića materice i karcinoma endometrijuma. U jednom otelotvorenju, rak je glioblastom. U jednom otelotvorenju, rak je metastatski rak. U jednom otelotvorenju, metastatski rak obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0127] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa radioterapijom. U jednom otelotvorenju, rak je izabran od glioblastoma, karcinoma pluća (na primer, mikrocelularni karcinom pluća ili nemikrocelularni karcinom pluća), karcinoma dojke (na primer, trostruko negativni karcinom dojke), karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma jednjaka, karcinoma grlića materice i karcinoma endometrijuma. U jednom otelotvorenju, rak je glioblastom. U jednom otelotvorenju, rak je metastatski rak. U jednom otelotvorenju, metastatski rak obuhvata metastaze centralnog nervnog sistema. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju moždane metastaze. U jednom otelotvorenju, metastaze centralnog nervnog sistema obuhvataju leptomeningealne metastaze.

[0128] U bilo kom otelotvorenju, radioterapija je izabrana iz grupe koja se sastoji od jedne ili više kategorija radioterapije koje su prethodno navedene pod tačkama (i)–(iii).

[0129] Hemioterapija može da uključuje jednu ili više od sledećih kategorija antitumorskih supstanci:

i. antineoplastični agensi i njihove kombinacije, kao što su DNK alkilujući agensi (na primer, cisplatin, oksaliplatin, karboplatin, ciklofosfamid, azotni iperiti poput ifosfamida, bendamustina, melfalana, hlorambucila, busulfana, temozolamida i nitrozouree poput karmustina); antimetaboliti (na primer, gemcitabin i antifolati kao što su fluoropirimidini kao što su 5-fluorouracil i tegafur, raltitreksed, metotreksat, citozin arabinozid i hidroksiurea); antitumorski antibiotici (na primer, antraciklini kao što su adriamicin, bleomicin, doksorubicin, lipozomski doksorubicin, pirarubicin, daunomicin, valrubicin, epirubicin, idarubicin, mitomicin-C, daktinomicin, amrubicin i mitramicin); antimitotski agensi (na primer, vinka

2

alkaloidi kao što su vinkristin, vinblastin, vindesin i vinorelbin, i taksoidi kao što su taksol i taksoter i inhibitori polokinaze); i inhibitori topoizomeraze (na primer, epipodofilotoksini kao što su etopozid i tenipozid, amsakrin, irinotekan, topotekan i kamptotecin); inhibitori mehanizama popravke DNK kao što je CHK kinaza; inhibitori DNK-zavisne protein kinaze; inhibitori poli (ADP-riboza) polimeraze (PARP inhibitori, uključujući olaparib); i inhibitori Hsp90 kao što su tanespimicin i retaspimicin, inhibitori ATR kinaze (kao što je AZD6738); i inhibitori WEE1 kinaze (kao što je AZD1775/MK-1775);

ii. antiangiogeni agensi poput onih koji inhibiraju dejstvo vaskularnog endotelnog faktora rasta, na primer, antitelo protiv vaskularnog endotelnog faktora rasta bevacizumab i na primer, inhibitor tirozin kinaze VEGF receptora kao što je vandetanib (ZD6474), sorafenib, vatalanib (PTK787), sunitinib (SU11248), aksitinib (AG-013736), pazopanib (GW 786034) i cediranib (AZD2171); jedinjenja poput onih objavljenih u Međunarodnim patentnim prijavama WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 i WO 98/13354; i jedinjenja koja deluju putem drugih mehanizama (na primer, linomid, inhibitori funkcije integrina αvβ3 i angiostatin), ili inhibitori angiopoetina i njihovih receptora (Tie-1 i Tie-2), inhibitori PLGF, inhibitori deltasličnog liganda (DLL-4);

iii. imunoterapeutski pristupi, uključujući na primer ex vivo i in vivo pristupe za povećanje imunogenosti ćelija pacijentovog tumora, kao što je transfekcija citokinima kao što je interleukin 2, interleukin 4 ili faktor stimulacije kolonija granulocita-makrofaga; pristupi za smanjenje T-ćelijske anergije ili funkcije regulatornih T-ćelija; pristup koji pojačava odgovor T-ćelija na tumore, kao što su blokirajuća antitela za CTLA4 (na primer, ipilimumab i tremelimumab), B7H1, PD-1 (na primer, BMS-936558 ili AMP-514), PD-L1 (na primer, MEDI4736) i agonistička antitela za CD137; pristupi koji koriste transficirane imunske ćelije kao što su citokinom transficirane dendritske ćelije; pristupi koji koriste citokinom transficirane ćelijske linije tumora, pristupi koji koriste antitela za antigene povezane sa tumorom, i antitela koja iscrpljuju ciljnu vrstu ćelija (npr. nekonjugovana anti-CD20 antitela kao što su rituksimab, radioobeležena anti-CD20 antitela bexxar i zevalin i anti-CD54 antitelo kampat); pristupi koji koriste antiidiotipska antitela; pristupi koji pojačavaju dejstvo ćelija prirodnih ubica; i pristupi koji koriste konjugate antitelo-toksin (npr. anti-CD33 antitelo milotarg); imunotoksini kao što je moksetumumab pasudotoks; agonisti zvonastog receptora 7 ili zvonastog receptora 9;

iv. pojačivači delotvornosti, kao što je leukovorin.

2

[0130] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca, za upotrebu u lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa dodatnom antitumorskom supstancom. U jednom otelotvorenju, koristi se jedna dodatna antitumorska supstanca. U jednom otelotvorenju, koriste se dve dodatne antitumorske supstance. U jednom otelotvorenju, koriste se tri ili više dodatnih antitumorskih supstanci.

[0131] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca za upotrebu u istovremenom, odvojenom ili sekvencijalnom lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa dodatnom antitumorskom supstancom.

[0132] U bilo kom otelotvorenju, dodatna antitumorska supstanca je izabrana iz grupe koja se sastoji od jedne ili više antitumorskih supstanci koje su prethodno navedene pod tačkama (i)– (iv).

[0133] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedan antineoplastični agens za upotrebu u lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa najmanje jednim antineoplastičnim agensom. U jednom otelotvorenju, antineoplastični agens je izabran sa spiska antineoplastičnih agenasa iz prethodne tačke (i).

[0134] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedan antineoplastični agens za upotrebu u istovremenom, odvojenom ili sekvencijalnom lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa najmanje jednim antineoplastičnim agensom. U

2

jednom otelotvorenju, antineoplastični agens je izabran sa spiska antineoplastičnih agenasa iz prethodne tačke (i).

[0135] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736, AZD1775 i AZD6738, za upotrebu u lečenju raka.

[0136] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, AZD1775 i AZD6738, za upotrebu u lečenju raka.

[0137] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736, AZD1775 i AZD6738.

[0138] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina i olapariba, za upotrebu u lečenju raka.

[0139] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom

2

antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina i olapariba.

[0140] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i najmanje jedna dodatna antitumorska supstanca izabrana iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana i bleomicina, za upotrebu u lečenju raka.

[0141] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana i bleomicina.

[0142] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, pirarubicina, amrubicina i epirubicina. U jednom otelotvorenju, rak je akutna mijeloidna leukemija. U jednom otelotvorenju, rak je karcinom dojke (na primer trostruko negativni karcinom dojke). U jednom otelotvorenju, rak je hepatocelularni karcinom.

[0143] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i irinotekan, za upotrebu u lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa irinotekanom. U jednom otelotvorenju, rak je kolorektalni karcinom.

[0144] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i FOLFIRI, za upotrebu u lečenju raka. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa FOLFIRI. U jednom otelotvorenju, rak je kolorektalni karcinom.

[0145] FOLFIRI je dozni režim koji obuhvata kombinaciju leukovorina, 5-fluorouracila i irinotekana.

[0146] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa olaparibom. U jednom otelotvorenju, rak je karcinom želuca.

[0147] U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa topotekanom. U jednom otelotvorenju, rak je mikrocelularni karcinom pluća. U jednom otelotvorenju, obezbeđeno je jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje u kombinaciji sa imunoterapijom. U jednom otelotvorenju, imunoterapiju predstavlja jedan ili više agenasa prethodno navedenih pod tačkom (iii). U jednom otelotvorenju, imunoterapija je anti-PD-L1 antitelo (na primer, MEDI4736).

[0148] U skladu sa daljim otelotvorenjem, obezbeđen je komplet koji sadrži:

a) jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so u prvom jediničnom doznom obliku;

b) dodatu antitumorsku supstancu u daljem jediničnom doznom obliku;

c) ambalažu koja sadrži pomenuti prvi i dalje jedinične dozne oblike; i opciono

d) uputstvo za upotrebu. U jednom otelotvorenju, antitumorska supstanca sadrži antineoplastični agens.

[0149] U bilo kom otelotvorenju u kom se pominje antineoplastični agens, antineoplastični agens je jedan ili više agenasa prethodno navedenih pod tačkom (i).

1

[0150] Jedinjenja Formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu da se primenjuju kao farmaceutske kompozicije koje sadrže jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

[0151] Stoga, u jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0152] Ekscipijensi izabrani za uključivanje u određenu kompoziciju će zavisiti od faktora kao što je način primene i oblik u kome je kompozicija obezbeđena. Odgovarajući farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi su dobro poznati stručnjacima i opisani su, na primer, u priručniku Handbook of Pharmaceutical Excipients, šesto izdanje, Pharmaceutical Press, čiji su urednici Rowe, Ray C; Sheskey, Paul J; Quinn, Marian. Farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi mogu da deluju, na primer, kao adjuvansi, diluenti, nosači, stabilizatori, arome, boje, punila, veziva, dezintegranti, lubrikansi, glidansi, agensi za zgušnjavanje i agensi za premazivanje. Kao što će stručnjacima biti jasno, određeni farmaceutski prihvatljivi ekscipijensi mogu imati više od jedne funkcije i mogu imati alternativne funkcije u zavisnosti od toga koliko ekscipijensa je prisutno u kompoziciji i koji drugi ekscipijensi su prisutni u kompoziciji.

[0153] Farmaceutske kompozicije mogu da budu u formi koja je prikladna za oralnu upotrebu (na primer, kao tablete, lozenge, tvrde i meke kapsule, vodene ili uljane suspenzije, emulzije, praškovi ili granule za disperziju, sirupi ili eliksiri), za topikalnu upotrebu (na primer, kremovi, masti, gelovi, ili vodeni ili uljani rastvori ili suspenzije), za primenu putem inhalacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak ili tečni aerosol), za primenu putem insuflacije (na primer, kao fino raspodeljeni prašak) ili za parenteralnu primenu (na primer, kao sterilni vodeni ili uljani rastvor za intravensko, supkutano, intramuskularno ili intramuskularno doziranje) ili kao supozitorija za rektalno doziranje. Kompozicije mogu da se dobiju uz pomoć konvencionalnih procedura koje su dobro poznate u struci. Kompozicije koje su namenjene za oralnu upotrebu mogu da sadrže dodatne komponente, na primer, jedan ili više agenasa za bojenje, zaslađivanje, ukus i/ili konzervisanje.

[0154] Jedinjenje Formule (I) će se uobičajeno primenjivati na toplokrvnoj životinji u jediničnoj dozi sa rasponom od 2,5–5000 mg/m<2>telesne površine životinje, ili oko 0,05–100 mg/kg, i uobičajeno pruža terapeutski efikasnu dozu. Jedinični dozni oblik poput tablete ili

2

kapsule uobičajeno sadrži, na primer 0,1–250 mg aktivnog sastojka. Dnevna doza obavezno varira u zavisnosti od domaćina koji se leči, konkretnog načina primene, svih terapija koje se zajedno primenjuju, i težine bolesti koja se leči. Shodno tome, lekar koji leči bilo kog konkretnog pacijenta može da odredi optimalnu dozu.

[0155] Farmaceutske kompozicije koje su ovde opisane sadrže jedinjenja Formule (I) ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so, te se stoga očekuje da će biti korisne u terapiji.

[0156] Tako, u jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u terapiji, koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0157] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju bolesti kod koje je korisna inhibicija ATM kinaze, koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0158] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju raka, koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0159] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju raka kod koga je korisna inhibicija ATM kinaze, koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

[0160] U jednom otelotvorenju, obezbeđena je farmaceutska kompozicija za upotrebu u lečenju kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma dojke, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća ili nemikrocelularnog karcinoma pluća, koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

PRIMERI

[0161] Različita otelotvorenja pronalaska su ilustrovana sledećim Primerima. Prilikom pripreme Primera, uopšteno:

i. Operacije se sprovode na sobnoj temperaturi, tj. u rasponu od oko 17 do 30 °C, i u atmosferi inertnog gasa, poput azota, ako nije drugačije navedeno;

ii. Uparavanje se sprovodi uz pomoć rotacionog uparavanja ili koristeći Genevac pod vakuumom, a procedure dorade se obavljaju nakon odstranjivanja rezidualnih čvrstih supstanci uz pomoć filtracije;

iii. Prečišćavanje fleš hromatografijom se obavlja na automatizovanom Armen Glider Flash: Spot II Ultimate (Armen Instrument, Saint-Ave, Francuska) ili automatizovanom instrumentu Presearch combiflash companions koristeći prethodno spakovane Merck Si60 silicijumske kertridže sa normalnom fazom (granulometrija: 15–40 ili 40–63 µm) nabavljene od Merck, Darmstad, Nemačka, silicycle silicijumske kertridže ili graceresolv silicijumske kertridže; iv. Preparativna hromatografija se obavlja na instrumentu Waters (600/2700 ili 2525) opremljenom ZMD ili ZQ ESCi masenim spektrometrima i Waters X-Terra ili Waters X-Bridge ili Waters SunFire reverzno faznom kolonom (C-18, silicijum dioksid 5 mikrona, prečnik 19 mm ili 50 mm, dužina 100 mm, protok 40 ml/minutu) koristeći kao eluente smeše opadajuće polarnosti vode (sa 1% amonijaka) i acetonitrila, ili smeše opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% mravlje kiseline) i acetonitrila;

v. Prinosi, kada su dati, nisu uvek maksimalni koji se mogu postići;

vi. Strukture krajnjih proizvoda Formule (I) potvrđene su nuklearnom magnetnom rezonantnom spektroskopijom (NMR), sa vrednostima hemijskog NMR pomaka izmerenim na delta skali. Spektri protonske magnetne rezonance su određeni koristeći instrument Bruker advance 700 (700 MHz), Bruker Avance 500 (500 MHz), Bruker 400 (400 MHz) ili Bruker 300 (300 MHz); 19F NMR su određeni na 282 MHz ili 376 MHz; 13C NMR su određeni na 75 MHz ili 100 MHz; merenja su obavljena na oko 20–30 °C, ako nije drugačije naznačeno; korišćene su sledeće skraćenice: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; dd, dublet dubleta; ddd, dublet dubleta dubleta; dt, dublet tripleta; bs, široki signal;

vii. Krajnji proizvodi Formule (I) takođe su okarakterisani masenom spektrometrijom nakon tečne hromatografije (LCMS); LCMS je obavljena koristeći Waters Alliance HT (2790 i 2795) opremljen Waters ZQ ESCi ili ZMD ESCi masenim spektrometrom i X Bridge 5 µm C-18 kolonom (2,1 x 50 mm) pri protoku od 2,4 ml/min, koristeći sistem rastvarača od 95% A 5% C do 95% B 5% C tokom 4 minuta, gde je A = voda, B = metanol, C = 1:1 metanol:voda (sa 0,2% amonijum karbonata); ili koristeći Shimadzu UFLC ili UHPLC kuplovan sa DAD detektorom, ELSD detektorom i 2020 EV masenim spektrometrom (ili ekvivalentom)

4

opremljenim kolonom Phenomenex Gemini-NX C183,0 x 50 mm, 3,0 µM ili ekvivalentnom (bazni uslovi) ili kolonom Shim pack XR - ODS 3,0 x 50 mm, 2,2 µM ili kolonom Waters BEH C18 2,1 x 50 mm, 1,7 µM ili ekvivalentnom, koristeći sistem rastvarača 95% D 5% E do 95% E 5% D tokom 4 minuta, gde je D = voda (sa 0,05% TFA), E = acetonitril (sa 0,05% TFA) (kiseli uslovi) ili sistem rastvarača 90% F 10% G do 95% G 5% F tokom 4 minuta, gde je F = voda (sa 6,5 mM amonijum hidrogen karbonatom i podešena na pH 10 dodatkom amonijaka), G = acetonitril (bazni uslovi);

viii. Intermedijeri nisu opšte uzeto potpuno okarakterisani, a čistoća je određena pomoću tankoslojne hromatografije, masene spektrometrije, HPLC i/ili NMR analize;

ix. Spektri rendgenske difrakcije praha su utvrđeni (koristeći analitički instrument Bruker D4) postavljanjem uzorka kristalne supstance na noseću pločicu Bruker od jednog kristala silicijuma (SSC) i raspoređivanjem uzorka u tanak sloj pomoću mikroskopske pločice. Uzorak je centrifugiran na 30 obrtaja u minuti (kako bi se poboljšali statistički podaci) i ozračen rendgenskim zracima koje proizvodi dugačka bakarna cev sa finim fokusom koja radi na 40 kV i 40 mA sa talasnom dužinom od 1,5418 angstrema. Kolimatizovani izvor rendgenskog zračenja je propušten kroz automatski promenljivi divergentni prorez podešen na V20, i odbijeno zračenje je usmereno kroz prorez protiv rasipanja od 5,89 mm i detektorski prorez od 9,55 mm. Uzorak je izložen tokom 0,03 sekunde po 0,00570° 2-teta inkrementu (režim neprekidnog skeniranja) u opsegu od 2 stepena do 40 stepeni 2-teta u teta-teta režimu. Vreme rada je bilo 3 minuta i 36 sekundi. Instrument je opremljen detektorom osetljivim na poziciju (Lynxeye). Beleženje kontrole i podataka je bilo putem Dell Optiplex 686 NT 4.0 radne stanice koja koristi Diffrac+ softver;

x. Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija je obavljena na TA Instruments Q1000 DSC. Uobičajeno, manje od 5 mg supstance sadržane u standardnom aluminijumskom sudu sa poklopcem je zagrevano u rasponu temperature od 25 °C do 300 °C sa konstantnom brzinom zagrevanja od 10 °C po minutu. Gas za pročišćavanje pomoću azota je korišćen sa protokom od 50 ml po minuti

xi. Korišćene su sledeće skraćenice: h = sat(i); r.t. = sobna temperatura (∼18–25 °C); konc. = koncentrovan; FCC = fleš hromatografija na koloni silika gela; DCM = dihlormetan; DIPEA = diizopropiletilamin; DMA = N,N-dimetilacetamid; DMF = N,N-dimetilformamid; DMSO = dimetilsulfoksid; Et2O = dietil etar; EtOAc = etil acetat; EtOH = etanol; K2CO3= kalijum karbonat; MeOH = metanol; MeCN = acetonitril; MTBE = metil tercbutil etar; MgSO4= anhidrovani magnezijum sulfat; Na2SO4= anhidrovani natrijum sulfat; THF = tetrahidrofuran; zas. = zasićeni vodeni rastvor; i

xii. IUPAC nazivi su generisani koristeći programe „Canvas“ ili „IBIS“ u vlasništvu kompanije AstraZeneca. Kao što je navedeno u uvodu, jedinjenja iz pronalaska sadrže jezgro imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona. Međutim, u određenim Primerima, IUPAC naziv opisuje jezgro kao imidazo[5,4-c]hinolin-2-on. Pa ipak, imidazo[4,5-c]hinolin-2-on i imidazo[5,4-c]hinolin-2-on jezgra su ista, dok je postupak imenovanja drugačiji zbog perifernih grupa.

Primer 1

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0162]

[0163] 3-(dimetilamino)propan-1-ol (0,433 ml, 3,66 mmol) je polako dodat u suspenziju natrijum hidrida (0,333 g, 8,33 mmol) u THF-u (10 ml) i rastvor je mešan na 0 °C tokom 30 minuta. Rastvor je dodat rastvoru 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (1,18 g, 3,33 mmol) u THF-u (20 ml). Reakcija je mešana na r.t. tokom 24 h i prekinuta vodom. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i ekstrahovan pomoću DCM-a (2 x 100 ml). Organske supstance su isprane vodom (50 ml), osušene iznad faznog separatora, i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, radi dobijanja željene supstance. Čvrsta supstanca je zagrevana u MeCN (15 ml) i ostavljena da se ohladi na r.t. preko noći. Bela čvrsta supstanca je filtrirana pod vakuumom i osušena u vakuum sušnici tokom 3 h radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (1,79 g, 41%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.65 (6H, d), 1.90 (2H, p), 2.17 (6H, s), 2.38 (2H, t), 3.50 (3H, s), 4.38 (2H, t), 5.29 (1H, hept), 6.99 (1H, dd), 7.92 (1H, d), 8.05 (1H, dt), 8.33 (1H, d), 8.50 (1H, dd), 8.91 (1H, s).

<1>HNMR (500MHz, CDCl3) δ 1.76 (6H, d), 1.96 - 2.06 (2H, m), 2.28 (6H, s), 2.44 - 2.51 (2H, m), 3.58 (3H, s), 4.44 (2H, t), 5.22 (1H, s), 6.89 (1H, dd), 7.86 - 7.92 (2H, m), 8.21 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.69 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 438.

[0164] Željena supstanca takođe može da se izoluje kao so metansulfonske kiseline, kako je opisano u nastavku: 1M metansulfonska kiselina u DCM-u (0,660 ml, 0,66 mmol) je u porcijama dodata u izolovanu slobodnu bazu (275 mg, 0,63 mmol) u DCM-u (5 ml) na sobnoj temperaturi u periodu od 1 minuta. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim koncentrovan pod vakuumom, i ostatak je osušen pod vakuumom radi dobijanja željene soli metansulfonske kiseline kao bele čvrste supstance (336 mg, 100%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.65 (6H, d), 2.05 - 2.21 (2H, m), 2.32 (3H, s), 2.76 (6H, s), 3.04 - 3.21 (2H, m), 3.51 (3H, s), 4.43 (2H, t), 5.29 (1H, hept), 7.02 (1H, dd), 7.93 (1H, d), 8.09 (1H, dt), 8.32 (1H, d), 8.53 (1H, dd), 8.92 (1H, s), 9.36 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 438.

Intermedijer A1: 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0165]

[0166] Dihlorbis(di-terc-butil(3-sulfopropil)fosfonio)paladat(II) (0,05 M rastvor u vodi, 11,83 ml, 0,59 mmol) dodat je u degasiranu smešu 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (4,0 g, 11,83 mmol), (6-fluorpiridin-3-il)boronske kiseline (2,0 g, 14,19 mmol) i 2 M rastvora kalijum karbonata (17,74 ml, 35,48 mmol) u 1,4-dioksanu (50 ml) i vodi (12,5 ml). Smeša je pročišćena azotom i zagrevana na 80 °C tokom 1 h, zatim ostavljena da se ohladi i koncentrovana pod sniženim pritiskom radi uklanjanja. Preostali rastvor je razblažen DCM-om (250 ml), ispran vodom (200 ml) i organski sloj je osušen pomoću kertridža za separaciju faza i uparen radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (3,70 g, 88%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.77 (6H, dd), 3.58 (3H, d), 5.20 (1H, s), 7.11 (1H, ddd), 7.93 (1H, d), 8.06 - 8.14 (1H, m), 8.22 (1H, d), 8.46 - 8.51 (1H, m), 8.72 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ =

[0167] Dihlorbis(di-terc-butil(3-sulfopropil)fosfonio)paladat(II) (0,05 M rastvor u vodi) može da se pripremi kako je opisano u nastavku:

Degasirana voda (30 ml) dodata je u natrijum tetrahlorpaladat(II) (0,410 g, 1,39 mmol) i 3-(diterc-butilfosfino)propan-1-sulfonsku kiselinu (0,748 g, 2,79 mmol) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Suspenzija je mešana tokom 5 minuta, zatim je čvrsta supstanca uklonjena filtracijom i odbačena ostavljajući željeni reagens kao crveno-smeđi rastvor.

Intermedijer A2: 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on [0168]

[0169] Rastvor natrijum hidroksida (11,29 g, 282,28 mmol) u vodi (600 ml) dodat je uz mešanje u smešu 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (61 g, 188,19 mmol), tetrabutilamonijum bromida (6,07 g, 18,82 mmol) i metil jodida (23,53 ml, 376,37 mmol) u DCM-u (1300 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 17 h. Isti proces je ponovljen u identičnoj razmeri, i reakcione smeše su kombinovane, koncentrovane i razblažene pomoću MeOH (750 ml). Talog je sakupljen filtracijom, ispran pomoću MeOH (500 ml), i čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (108 g, 85%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.76 (6H, d), 3.57 (3H, s), 5.13 (1H, t), 7.83 (1H, d), 8.41 (1H, d), 8.69 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 380.

Intermedijer A3: 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0170]

[0171] Trietilamin (164 ml, 1173,78 mmol) je u jednoj porciji dodat u 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilnu kiselinu (128 g, 391,26 mmol) u DMF-u (1500 ml), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi tokom 30 minuta. Dodat je difenilfosforil azid (101 ml, 469,51 mmol) i rastvor je mešan još 30 minuta na sobnoj temperaturi, zatim 3 h na 60 °C. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu, talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (1 l) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao žute čvrste supstance (122 g, 96%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.62 (6H, d), 5.12-5.19 (1H, m), 7.92 (1H, d), 8.57 (1H, d), 8.68 (1H, s), 11.58 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 324.

[0172] 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on takođe može da se pripremi kako je opisano u nastavku.

[0173] 1,3,5-trihlor-1,3,5-triazinan-2,4,6-trion (5,91 g, 25,45 mmol) u porcijama je uz mešanje dodat u suspenziju 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksamida (16,6 g, 50,89 mmol) i 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-ena (15,22 ml, 101,79 mmol) u metanolu (200 ml) na 5 °C. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakcija je filtrirana i čvrsta supstanca je sušena u vakuum sušnici tokom 2 h radi dobijanja željene supstance kao bledožute čvrste supstance (14,18 g, 86%). Dodatna supstanca je dobijena nakon što je filtrat ostavljen da odstoji tokom 2 dana, a zatim filtriran. Dodatna izolovana čvrsta supstanca je zagrevana u EtOH (50 ml) tokom 30 minuta, zatim ostavljena da se ohladi i filtrirana radi dobijanja željene dodatne supstance kao bele čvrste supstance (2,6 mg). Analitički podaci su bili konzistentni sa onima koji su dobijeni iz prethodno opisanih alternativnih priprema.

[0174] Priprema velikog obima 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona je takođe obavljena na sledeći način. 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilna kiselina (3,910 kg, 11,15 mol, 93,3 mas.%) sipana je u sud pod azotom, nakon čega je dodat DMF (22 l). Dobijena suspenzija je mešana, i trietilamin (4,7 l) je dodat tokom 2 min. Dobijena smeša je mešana na 21–23 °C, zatim zagrejana na 56 °C. Dodavan je difenil fosforil azid (2,9 l, 13 mol, 99,5 mas.%) tokom 1 h, uz održavanje temperature smeše u opsegu od 56–61 °C variranjem brzine dodavanja i zadate vrednost omotača (egzotermna adicija – zadata vrednost omotača 50–57 °C). Adicioni sud je ispran u reaktoru sa DMF-om (0,75 l) i reakciona smeša je mešana na 55 °C tokom 1 h, zatim analizirana pomoću HPLC koja pokazuje završetak reakcije i dobijanje intermedijernog jedinjenja 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona. N,N-dimetilformamid dimetil acetal (7,29 l, 54,4 mol, 99,2 mas.%) je zatim dodat tokom 5 min. i smeša je zagrejana na 100 °C – taloženje je uočeno kada je temperatura dostigla 94 °C i brzina mešanja je povećana sa 150 na 300 o/min. Smeša je mešana tokom 24 h na 100 °C i analizirana putem HPLC koja pokazuje 1,2% površine intermedijera (cilj < 0,5% površine intermedijera), zagrevanje je nastavljeno na 99 °C još 16 h, nakon čega je procenjeno da je reakcija dostigla zadovoljavajući nivo završetka (preostala površina intermedijera 0,45%). Smeša je zatim ohlađena na 22 °C, i dodata je voda (23 l) tokom 25 minuta uz održavanje temperature ispod 30 °C (omotač inicijalno postavljen na 0–5 °C za prvi deo adicije koji je egzoterman – sadržaj suda održavan u opsegu od 22–26 °C tokom cele adicije). Dobijena suspenzija je mešana na 25–26 °C tokom 50 minuta, zatim filtrirana i dva puta isprana vodom (11,2 i 11,5 l) koja je dodata filter pogači putem reakcionog suda. Sakupljena čvrsta supstanca je osušena usisavanjem na filteru tokom 1 h, zatim prebačena u vakuum sušnicu i sušena pod vakuumom na 60 °C oko 26 h radi dobijanja željenog proizvoda (3,445 kg, 9,41 mol, 92,4 mas. %, prinos 84,4%).

Intermedijer A4: 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilna kiselina [0175]

[0176] 2 N rastvor natrijum hidroksida (833 ml, 1666,66 mmol) u porcijama je dodat u etil 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilat (148 g, 416,66 mmol) u THF-u (1500 ml) na 15 °C, i dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 5 h. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena vodom (2 l) i smeša je zakiseljena 2 M hlorovodoničnom kiselinom. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (1 l) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (128 g, 94%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.24-1.36(6H, m), 4.37(1H, s), 7.78(1H, t), 8.55(1H, s), 8.90(1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 327.

[0177] 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilna kiselina je takođe pripremljena u većem obimu prema sledećem postupku. Suspenzija etil 6-brom-4-hlor-7-fluorhinolin-3-karboksilata (4 kg, 12,00 mol, 99,8 mas. %) u THF-u (24 l) uz mešanje je zagrejana na 52 °C pod atmosferom azota. Izopropil amin (2,10 l, 25,60 mol, 99,9 mas. %) je zatim dodat tokom 1 h 30 min. Temperatura je porasla na 54 °C nakon što je dodata približno polovina izopropil amina, dodavanje je obustavljeno, primenjeno hlađenje i dodavanje je

4

nastavljeno kada je temperatura pala na 48 °C. Adicioni sud je ispran THF-om (4 l) i ispirak je dodat reakcionoj smeši. Smeša je mešana tokom 18,5 h na 50 °C i zatim analizirana pomoću HPLC koja pokazuje da je preostalo oko 4% polaznog hlorestra (cilj < 0,5%). Dodato je još izopropil amina (150 ml, 1,830 mol, 99,9 mas.%) i smeša je mešana još 22,5 h, nakon čega je procenjeno da je reakcija završena. Rastvor natrijum hidroksida (1,99 M u vodi, 13,3 l, 26,50 mol) sipan je u smešu tokom 5 min radi dobijanja bledožute smeše koja je zagrejana na 60 °C i mešana na toj temperaturi tokom 22,5 h, zatim analizirana pomoću HPLC koja pokazuje zadovoljavajuće okončanje hidrolize estra. Smeša je ohlađena na 18 °C, zatim odlivena iz suda u prijemni sud i ponovo sipana u reakcioni sud putem ugrađenog filtera. THF (12 l) je sipan u prijemni sud i prebačen u reaktor putem ugrađenog filtera. Temperatura omotača suda je postavljena na 15 °C i fosforna kiselina (1,250 l, 85 mas.%) je dodata tokom 1 h; temperatura smeše je bila 17–18 °C tokom dodavanja, što dovodi do taloženja sirovog proizvoda. Dobijena suspenzija je mešana tokom 20 h na 20 °C, zatim filtrirana i isprana vodom (2 x 20 l) koja je dodata filter pogači putem reakcionog suda. Sakupljena čvrsta supstanca je osušena usisavanjem na filteru, zatim prebačena u vakuum sušnicu i sušena pod vakuumom na 60 °C oko 52 h radi dobijanja željenog proizvoda (3,935 kg, 11,22 mol, 93,3 mas. %, prinos 93,5%).

Intermedijer A5: Etil 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilat

[0178]

[0179] DIPEA (154 ml, 884,07 mmol) je u porcijama dodata u propan-2-amin (39,2 g, 663,05 mmol) i etil 6-brom-4-hlor-7-fluorhinolin-3-karboksilat (147 g, 442,04 mmol) u DMA (600 ml) na sobnoj temperaturi, i dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je sipana u ledenu vodu, talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (1 l) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao svetlosmeđe čvrste supstance (148 g, 94%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.26-1.33 (9H, m), 4.17-4.25 (1H, m), 4.32-4.37 (2H, m), 7.28 (1H, d), 8.50 (1H, d), 8.59 (1H, d), 8.86 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 355.

Intermedijer A6: Etil 6-brom-4-hlor-7-fluorhinolin-3-karboksilat

[0181] DMF (0,535 ml, 6,91 mmol) dodat je u etil 6-brom-7-fluor-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-okso-hinolin-3-karboksilat (200 g, 460,56 mmol) u tionil hloridu (600 ml) na 10 °C u inertnoj atmosferi, i dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 3 h. Smeša je uparena do suva, a ostatak azeotropski destilisan sa toluenom (300 ml) radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen kristalizacijom iz heksana radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (147 g, 96%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.49 (3H, t), 4.51-4.56 (2H, m), 7.91 (1H, d), 8.71 (1H, d), 9.26 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 334.

[0182] Etil 6-brom-4-hlor-7-fluorhinolin-3-karboksilat je takođe pripremljen u većem obimu prema sledećem postupku. DMF (0,235 l, 2,56 mol) je dodat u etil 6-brom-7-fluor-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-okso-hinolin-3-karboksilat (13,53 kg, 30,43 mol, 97,7 mas. %) u toluenu (90 l) u inertnoj atmosferi. Dobijena suspenzija je mešana i zagrevana na 88 °C tokom 48 minuta. Rastvor tionil hlorida (3,32 l, 45,7 mol) u toluenu (1,65 l) je zatim dodavan smeši tokom 4 h 10 min. uz održavanje temperature smeše u rasponu od 89–91 °C. Smeša je održavana na 89 °C tokom 50 minuta, zatim analizirana pomoću HPLC koja pokazuje završetak reakcije (nema detektovane polazne supstance). Smeša je ohlađena na 20 °C tokom 1 h i održavana preko noći na ovoj temperaturi. Smeša je odlivena iz reakcionog suda, i sud je ispran toluenom (13 l). Ispirak je dodat glavnoj šarži. Šarža je podeljena na dve jednake polovine, i prva polovina je tretirana na sledeći način: uparena je do suva tokom približno 5 h na rotacionom uparivaču od 50 l (šarža dodata u porcijama u skladu sa napredovanjem uparavanja, temperatura kupke 60 °C, zadata vrednost vakuuma 50 mbar) i ostatak je tretiran heptanom (13,2 l) i uparen (temperatura kupke 60 °C, zadata vrednost vakuuma 100 mbar). Tretiranje heptanom (13,2 l) je ponovljeno radi dobijanja guste suspenzije koja je razblažena dodavanjem još heptana u porcijama (53 l), i heptanska suspenzija je u porcijama prebačena u čist sud. Druga polovina toluenske smeše je obrađena na isti način i kombinovana sa prvom polovinom radi dobijanja suspenzije sirovog proizvoda u heptanu (oko 106 l). Heptanska suspenzija je zagrevana na 91 °C tokom 2 h 20 minuta, što je bilo dovoljno vremena da se sirovi proizvod rastvori; smeša je zatim prebačena u čist, prethodno zagrejan (zadata vrednost omotača 90 °C) sud putem ugrađenog filtera radi uklanjanja čestica. Linijsko ispiranje heptanom (5 l) je zatim primenjeno putem izvornog suda. Vakuum (450 mbar) je primenjen na ciljni sud, i heptan (46 l) je uklonjen destilacijom (temperatura šarže 77–78 °C, glavna temperatura 72–73 °C). Vakuum je oslobođen azotom i sadržaj suda je ohlađen na 49 °C tokom 45 minuta, što je dovelo do kristalizacije proizvoda. Suspenzija je držana na 48–49 °C tokom 30 minuta, zatim je ohlađena na 20 °C tokom 1 h i držana na 20 °C preko noći. Suspenzija je filtrirana, i izvorni sud je ispiran heptanom (14 l) tokom 5 minuta, zatim je ispirak primenjen za ispiranje pogače proizvoda. Dalji ispirak i ispiranje heptanom (14 l) su zatim primenjeni, i pogača je osušena usisavanjem tokom 1 h. Sakupljena čvrsta supstanca je prebačena u vakuum sušnicu i osušena pod vakuumom na 50 °C radi dobijanja željene supstance kao beličaste čvrste supstance (8,915 kg, 26,75 mol, 99,8 mas. %, prinos 87,9%).

Intermedijer A7: Etil 6-brom-7-fluor-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-okso-hinolin-3-karboksilat

[0183]

[0184] DBU (76 ml, 506,32 mmol) je polako dodat u etil-2-(5-brom-2,4-difluor-benzoil)-3-[(4-metoksifenil)metilamino]prop-2-enoat (230 g, 506,32 mmol) u acetonu (800 ml) na 10 °C u periodu od 5 minuta u inertnoj atmosferi, i dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Talog je sakupljen filtracijom, ispran pomoću Et2O (3 x 500 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (166 g, 75%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.29 (3H, t), 3.72 (3H, s), 4.22-4.27 (21H, m), 5.57 (2H, s), 6.92-6.95 (2H, m), 7.24 (2H, d), 7.79 (1H, d), 8.40 (1H, d), 8.89 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 434.

Intermedijer A8: Etil-2-(5-brom-2,4-difluor-benzoil)-3-[(4-metoksifenil)metilamino]prop-2-enoat

[0185]

4

[0186] (E)-etil 3-(dimetilamino)akrilat (80 ml, 555,50 mmol) je ukapavanjem dodat u smešu DIPEA (132 ml, 757,50 mmol) i 5-brom-2,4-difluor-benzoil hlorida (129 g, 505,00 mmol) u toluenu (600 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Dobijeni rastvor je mešan na 70 °C tokom 17 h, zatim je ostavljen da se ohladi. (4-metoksifenil)metanamin (66,0 ml, 505,29 mmol) je u porcijama dodat u smešu, i reakcija je mešana tokom 3 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena DCM-om (2 l), redom isprana vodom (4 x 200 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli (300 ml), organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance kao svetlosmeđe čvrste supstance (230 g, 100%) koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.09 (3H, t), 3.82 (3H, s), 4.00-4.10 (2H, m), 4.55 (2H, t), 6.84-6.96 (3H, m), 7.20-7.29 (2H, m), 7.55 (1H, d), 8.18 (1H, t). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 454.

Intermedijer A9: 5-brom-2,4-difluor-benzoil hlorid

[0187]

[0188] Tionil hlorid (55,4 ml, 759,50 mmol) je u porcijama dodat smeši DMF-a (7,84 ml, 101,27 mmol) i 5-brom-2,4-difluorbenzojeve kiseline (120 g, 506,33 mmol) u toluenu (600 ml) na 15 °C u periodu od 5 minuta u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 4 h, zatim uparena do suva i ostatak je azeotropski destilisan sa toluenom radi dobijanja željene supstance kao smeđeg ulja (129 g, 100%) koja je neposredno korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.04-7.09 (1H, m), 8.34-8.42 (1H, m).

Intermedijer A10: 6-brom-7-fluor-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksamid

[0189]

[0190] Propan-2-amin (2,80 ml, 32,62 mmol) je dodat suspenziji 6-brom-4-hlor-7-fluorhinolin-3-karboksamida (10 g, 29,65 mmol) i kalijum karbonata (8,20 g, 59,31 mmol) u acetonitrilu (250 ml), i smeša je mešana na 95 °C tokom 4 h. Dodato je još propan-2-amina (2 ml), i smeša je mešana na 95 °C još 4 h, zatim na sobnoj temperaturi preko noći. U smešu je dodata voda, i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (8,25 g, 85%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.25 (6H, d), 4.17 (1H, d), 7.51 (1H, s), 7.69 (1H, d), 8.11 (2H, s), 8.61 (1H, s), 8.67 (1H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 236.

Intermedijer A11 6-brom-4-hlor-7-fluor-hinolin-3-karboksamid

[0191]

[0192] DMF (0,5 ml) uz mešanje je dodat u suspenziju 6-brom-7-fluor-4-okso-1H-hinolin-3-karboksilne kiseline (22,5 g, 78,66 mmol) u tionil hloridu (140 g, 1179,85 mmol), i smeša je zagrevana uz refluks tokom 2 h. Reakcija je ostavljena da se ohladi, koncentrovana pod vakuumom i ostatak je azeotropski destilisan sa toluenom dva puta radi dobijanja žute čvrste supstance. Čvrsta supstanca je u porcijama dodata u rastvor amonijum hidroksida (147 ml, 1179,85 mmol) na 0 °C. Bela suspenzija je mešana tokom 15 minuta, čvrsta supstanca je zatim filtrirana, isprana vodom i osušena pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (23,80 g, 100%) kao belog praha. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.92 (1H, s), 8.59 (1H, d), 8.21 (1H, s), 8.09 (1H, d), 7.98 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 304.8.

Intermedijer A12: 6-brom-7-fluor-4-okso-1H-hinolin-3-karboksilna kiselina

[0193]

4

[0194] Rastvor natrijum hidroksida (18,34 g, 458,44 mmol) u vodi (100 ml) uz mešanje je dodat u suspenziju etil 6-brom-7-fluor-4-okso-1H-hinolin-3-karboksilata (28,8 g, 91,69 mmol) u EtOH (500 ml) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim mešana na 75 °C tokom 2 h, ostavljena da se ohladi, i pH je podešen na 4 koristeći 2 N hlorovodoničnu kiselinu. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (23,30 g, 89%) kao belog praha. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 14.78 (1H, s), 13.45 (1H, s), 8.93 (1H, s), 8.46 (1H, d), 7.70 (1H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 287.8.

Intermedijer A13: Etil 6-brom-7-fluor-4-okso-1H-hinolin-3-karboksilat

[0195]

[0196] Rastvor dietil 2-[(4-brom-3-fluor-anilino)metilen]propandioata (90 g, 249,88 mmol) u difenil etru (600 ml, 3,79 mol) mešan je na 240 °C tokom 2,5 h. Smeša je ostavljena da se ohladi na 70 °C, čvrste supstance su sakupljene filtracijom i osušene u vakuum sušnici radi dobijanja željene supstance (50 g, 64%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6, (100°C)) δ 1.26 - 1.33 (3H, m), 4.25 (2H, q), 7.52 (1H, d), 8.37 (1H, d), 8.48 (1H, s), 12.05 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 314.

Intermedijer A14: Dietil 2-[(4-brom-3-fluor-anilino)metilen]propandioat

[0197]

[0198] Rastvor 4-brom-3-fluoranilina (56,6 g, 297,87 mmol) i 1,3-dietil 2-(etoksimetiliden)propandioata (72,45 g, 335,06 mmol) u EtOH (560 ml) mešan je na 80 °C

4

tokom 4 h. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi, čvrste supstance su sakupljene filtracijom i osušene u sušnici radi dobijanja željene supstance (90 g, 84%) kao beličaste čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.26 (6H, q), 4.14 (2H, q), 4.22 (2H, q), 7.18 - 7.25 (1H, m), 7.57 (1H, dd), 7.64 - 7.7 (1H, m), 8.33 (1H, d), 10.62 (1H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 360.

[0199] 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on takođe može da se pripremi neposredno od 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-ona koristeći postupak koji je opisan u nastavku.

[0200] 3-(di-terc-butilfosfino)propan-1-sulfonska kiselina (0,467 mg, 1,77 mmol) dodata je u monopaladijum(IV) dinatrijum tetrahlorid (0,261 g, 0,89 mmol) u vodi (50 ml) u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta, zatim je reakciona smeša dodata u jednoj porciji u 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on, N,N-dimetil-3-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il]oksipropan-1-amin (42,4 g, 110,89 mmol) i kalijum karbonat (36,8 g, 266,13 mmol) u dioksanu (500 ml) i vodi (100 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Dobijeni rastvor je mešan na 80 °C tokom 2 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i razblažen DCM-om. Organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i uparena radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 2% MeOH (7 M amonijak u MeOH) u DCM-u, radi dobijanja čvrste supstance koja je triturirana sa MeCN radi dobijanja željene supstance kao žute čvrste supstance (25,00 g, 64,4%). Čista supstanca je kombinovana sa dodatnom supstancom pripremljenom na analogan način (38,6 g ukupno) i zagrevana je u MeCN (100 ml) tokom 10 min, zatim ostavljena da se ohladi na 0 °C i mešana tokom 2 h. Čvrsta supstanca je filtrirana pod vakuumom i sušena u vakuum sušnici tokom 16 h radi dobijanja željene supstance kao bledožute kristalne čvrste supstance (35,5 g). Analitički podaci su bili konzistentni sa onima od prethodno pripremljene supstance.

Intermedijer B1: N,N-dimetil-3-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il]oksipropan-1-amin

[0201]

4

[0202] n-Butillitijum (2,5 M, 0,147 l, 368,21 mmol) ukapan je u 3-(5-brompiridin-2-il)oksi-N,N-dimetilpropan-1-amin (73,4 g, 283,24 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (68,5 g, 368,21 mmol) u THF-u (1 l), ohlađen na -78 °C u periodu od 10 minuta u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 ml). Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i razblažen pomoću EtOAc (2 l), organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance kao žutog ulja (98 g, 113%). Proizvod je neposredno korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.30 (12H, s), 1.93 - 2.09 (2H, m), 2.33 (6H, s), 2.49 - 2.61 (2H, m), 4.37 (2H, t), 6.69 (1H, dd), 7.91 (1H, dd), 8.51 (1H, d).

Intermedijer B2: 3-(5-brompiridin-2-il)oksi-N,N-dimetilpropan-1-amin

[0203]

[0204] Natrijum hidrid (17,05 g, 426,17 mmol) u porcijama je dodat u 3-(dimetilamino)propan-1-ol (35,2 g, 340,94 mmol) u THF-u (500 ml) na 5 °C i smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Dodat je 5-brom-2-fluorpiridin (50 g, 284,11 mmol) i rastvor je mešan na 50 °C tokom 2 h. Reakcioni rastvor je pažljivo dodat u ledenu vodu i vodena faza je ekstrahovana DCM-om (3 x 700 ml). Organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i uparena radi dobijanja željene supstance kao žutog ulja (73,6 g, 100%). Supstanca je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.92 - 2.01 (2 H, m), 2.28 (6 H, s), 2.45 (2 H, t), 4.33 (2 H, t), 6.67 (1 H, dd), 7.65 (1 H, dd), 8.20 (1 H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 259.

Primer 2

4

7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil[imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0205]

[0206] 3-(piperidin-1-il)propan-1-ol (1,051 g, 7,34 mmol) u THF-u (15 ml) polako je dodat u suspenziju natrijum hidrida (0,587 g, 14,67 mmol) u THF-u (15 ml), i rastvor je mešan na 50 °C tokom 40 minuta. Dodata je smeša 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (2,0 g, 5,64 mmol) u THF-u (15 ml) i reakcija je mešana tokom 6 h na 50 °C, zatim ostavljena da se ohladi na r.t. i prekinuta vodom. Čvrsti talog je uočen nakon stajanja, i sakupljen je filtracijom. Supstanca je prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, zatim preparativnom HPLC (kolona redisep gold C18, 80 g) koristeći smeše opadajuće polarnosti vode (sa 0,1% amonijakom) i MeCN kao eluente radi dobijanja željene supstance. Proizvod je prekristalisan iz ključalog EtOH radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (1,512 g, 56,1%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.34 - 1.44 (2H, m), 1.50 (4H, p), 1.65 (6H, d), 1.91 (2H, p), 2.29 -2.37 (4H, m), 2.39 (2H, q), 3.51 (3H, s), 4.37 (2H, t), 5.29 (1H, p), 6.99 (1H, dd), 7.92 (1H, d), 8.05 (1H, dt), 8.33 (1H, d), 8.50 (1H, s), 8.91 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 478.

[0207] Željena supstanca takođe može da se izoluje kao so metansulfonske kiseline na sledeći način. Metansulfonska kiselina (0,026 g, 0,27 mmol) u DCM-u (0,5 ml) dodata je u izolovanu slobodnu bazu (127 mg, 0,27 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta, zatim koncentrovan pod vakuumom, i ostatak je osušen pod vakuumom radi dobijanja željene soli metansulfonske kiseline kao bele čvrste supstance (336 mg, 100%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.78 (6H, d), 1.86 - 1.99 (4H, m), 2.11 - 2.25 (2H, m), 2.37 - 2.48 (2H, m), 2.6 - 2.74 (2H, m), 2.84 (3H, s), 3.22 - 3.31 (2H, m), 3.59 (3H, s), 3.69 (2H, d), 4.48 - 4.56 (2H, m), 5.17 - 5.27 (1H, m), 6.90 (1H, dd), 7.90 (1H, dt), 7.96 (1H, d), 8.23 (1H, d), 8.39 (1H, d), 8.76 (1H, s), 10.75 (1H, s).

Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 478.

4

[0208] 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on takođe može da se pripremi neposredno od 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-ona koristeći postupak koji je opisan u nastavku.

[0209] 3-(di-terc-butilfosfino)propan-1-sulfonska kiselina (0,555 mg, 2,07 mmol) dodata je u monopaladijum(IV) dinatrijum tetrahlorid (0,304 g, 1,03 mmol) u vodi (12 ml) u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, zatim je reakciona smeša dodata u jednoj porciji u 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (35,0 g, 103,50 mmol), 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (62,2 g, 129,37 mmol) i kalijum karbonat (42,9 g, 310,49 mmol) u dioksanu (450 ml) i vodi (90 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Dobijeni rastvor je mešan na 80 °C tokom 16 h i reakcija je uparena. Sirova supstanca je rastvorena u DCM-u (500 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 100 ml), organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i uparena. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 10% (0,1% amonijak u MeOH) u DCM-u, radi dobijanja željene supstance kao smeđe čvrste supstance (40,5 g, 82%). Supstanca je kombinovana sa supstancom dobijenom iz analognih priprema (ukupno 51,3 g) i suspendovana u MeCN (100 ml). Talog je sakupljen filtracijom, ispran pomoću MeCN (100 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (32,0 g, 62,4%). Analitički podaci su bili konzistentni sa onima od prethodno pripremljenih uzoraka.

[0210] Pokazalo se da je supstanca dobijena iz suspenzije MeCN kristalni oblik A iz Primera 2. Oblik A iz Primera 2 je okarakterisan time što daje obrazac rendgenske difrakcije praha suštinski kao što je prikazan na slici 1. Deset pikova rendgenske difrakcije praha je prikazano u tabeli 1.

Tabela 1: Karakteristični pikovi rendgenske difrakcije praha za oblik A iz Primera 2, 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0211] Oblik A iz Primera 2 prikazuje endotermu topljenja sa početkom topljenja na 141,5 °C i pikom na 144,2 °C kada se analizira diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC) sa brzinom skeniranja od 10 °C/min (slika 2).

Dalji postupak pripreme 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona je sledeći. Balon od 250 ml je tri puta produvan azotom. Sipani su natrijum tetra-hlorpaladat (2,51 g, 8,5 mmol.), 3-(di-terc-butilfosfino)propan-1-sulfonska kiselina (4,36 g, 16,2 mmol.) i voda (95 ml). Smeša fosfinskog liganda je ostavljena da se meša u atmosferi azota na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Balon od 10 l sa prirubnicom je tri puta produvan azotom. 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (281,3 g, 0,83 mol), 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (360,0 g, 1,04 mol.), kalijum karbonat (347,2 g, 2,51 mol.), dioksan (3,6 l, 12,9 zap.) i voda (720 ml, 2.6 zap.) sipani su u balon sa prirubnicom. Prethodno pomešana smeša katalizatora fosfinskog liganda je brzo sipana u reakcionu smešu (balon od 10 l sa prirubnicom) u azotu. Reakciona smeša je zatim zagrejana na 80 °C u atmosferi azota i praćena pomoću HPLC. Nakon 2 h, analiza je pokazala da je reakcija završena uz malu količinu (0,30%) preostale polazne supstance. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu (20 °C) u atmosferi azota, zatim koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak je prenet u DCM (4 l, 14,3 zap.), dajući tamnosmeđi / zeleni rastvor. Rastvor je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 780 ml), i organski sloj je razdvojen. Vodeni sloj je povratno ekstrahovan dihlormetanom (1250 ml, 4,5 zap.) i kombinovani organski sloj je filtriran radi uklanjanja zelenog čvrstog taloga (za koji se pretpostavlja da su nečistoće povezane sa katalizatorom), pre nego što je osušen iznad natrijum sulfata (782,7 g) i koncentrovan pod

1

vakuumom radi dobijanja dihlormetanske vlažne žute čvrste supstance. Sirova supstanca je osušena pod vakuumom u sušnici na 40 °C preko noći radi dobijanja 492,7 g (335,0 g aktivnog) sirovog proizvoda. Analiza je pokazala da je supstanca bila 95,0% čista putem HPLC i 68% aktivna putem NMR testa. Druga šarža je napravljena u istom obimu kako bi se dobilo još 494,2 g (326,2 g aktivnog) sirovog proizvoda. Analiza je pokazala da je supstanca bila 88,0% čista putem HPLC i 66% aktivna putem NMR testa. Dve šarže su kombinovane radi dobijanja ukupne sirove mase od 968,4 g (661 g aktivne) koja je propuštena kroz silika gel (12 kg) koristeći kao elucioni gradijent smešu DCM-a sa metanolom (0–40%) i amonijakom (0–0,2%) (ukupna upotreba rastvarača: 285 litara). Frakcije koje sadrže proizvod (>97% putem tečne hromatografije) kombinovane su i koncentrovane pod vakuumom, suspendovane u metanolu (2 zapremine) preko noći i osušene pod vakuumom na 50 °C radi dobijanja bele čvrste supstance, 392,9 g, 49,5% prinosa. Frakcije koje sadrže proizvod (<97% putem tečne hromatografije) kombinovane su i koncentrovane pod vakuumom i suspendovane u etil acetatu tokom 2 h. Dobijena čvrsta supstanca je zatim suspendovana u metanolu (2 zapremine) radi dobijanja još 111,3 g proizvoda. Obe šarže su kombinovane i suspendovane u heptanu (5 zap.) tokom 1 h 30 min, pre filtracije i sušenja pod vakuumom u sušnici na 50 °C preko noći. To je dalo ukupni prinos od 487,2 g (61%) sa čistoćom od 96% putem<1>H NMR testa.

[0212] Pokazalo se da je supstanca dobijena iz prethodne pripreme kristalni oblik B iz Primera 2. Oblik B iz Primera 2 je okarakterisan time da pruža obrazac rendgenske difrakcije praha suštinski kao što je prikazan na slici 3. Deset pikova rendgenske difrakcije praha je prikazano u tabeli 2.

Tabela 2: Karakteristični pikovi rendgenske difrakcije praha za oblik B iz Primera 2, 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on Ugao 2-teta (20) % intenziteta

2

[0213] Oblik B iz Primera 2 prikazuje endotermu topljenja sa početkom topljenja na 144,7 °C i pikom na 145,8 °C kada se analizira diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC) sa brzinom skeniranja od 10 °C/min (slika 4).

[0214] 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on može da se pripremi u velikom obimu koristeći sledeću proceduru. Pod atmosferom azota, 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (0,800 kg, 2,31 mol, 97,6 mas.%) sipan je u sud, a zatim su dodati 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (0,879 kg, 2,54 mol) i kalijum karbonat (0,960 kg, 6,95 mol). Zatim su dodati THF (8 l) i voda (3,9 l), i mešanje smeše je započelo. Vakuum je polako primenjivan sve dok THF nije počeo da ključa (135 mbar), a zatim je otpušten azotom. Postupak pročišćavanja pod vakuumom je ponovljen još dva puta (oko 0,5 l THF ostalo u prijemnom sudu) i sporo kapanje azota je primenjeno na sud. Dodat je dihlor[1,1'- bis(ditercbutilfosfino)ferocen]paladijum(II) (Pd-118, 15 g, 0,023 mol) preko balona sa rukavicama, i smeša je zagrevana na 63–64 °C i držana na toj temperaturi tokom 2 h, zatim analizirana putem HPLC-a koji je pokazao prihvatljivu konverziju u željeni proizvod. Smeša je ohlađena na 20 °C, mešanje je zaustavljeno i smeša je ostavljena da se razdvoji, i donja vodena faza je ispuštena u otpad. Zasićeni vodeni rastvor soli sačinjen od vode (3,45 l) i natrijum hlorida (0,586 kg) sipan je u organsku fazu u sudu, i smeša je mešana tokom 10 minuta i ostavljena da se razdvoji. Vodena faza je ispuštena u otpad, a organska faza je filtrirana kroz sloj celita (150 g). Sud je ispran THF-om (800 ml), i ispirak je propušten kroz pogaču celita i dodat organskom filtratu. Kombinovani THF filtrat (oko 9,5 l) sipan je u čisti sud i dodato je pomoćno sredstvo za uklanjanje metala Phosphonics SPM 32 (780 g). Smeša je mešana na 21 °C tokom 16 h, a zatim filtrirana da se ukloni nerastvorno pomoćno sredstvo za uklanjanje metala. Reaktorski sud je ispran pomoću THF (1,6 l) koji je zatim propušten kroz filter. Kombinovani filtrat i ispirak su zatim preneti u čisti sud i rastvarač (6,9 l) je uklonjen destilacijom pod sniženim pritiskom (23–24 °C, 150 mbar). U ostatak u reaktoru dodat je izopropanol (11 l), i dodatna količina rastvarača (9,2 l) je uklonjena destilacijom pod sniženim pritiskom (40–43 °C temperatura šarže, 150 mbar). Koncentrovana smeša u sudu je zagrejana na 80 °C i brzina mešanja je povećana da se spere i rastvori proizvod koji je iskristalisao na zidovima suda. Vreo rastvor je prenet preko ugrađenog filtera u čist i suv, prethodno zagrejan prijemni sud (temperatura omotača 80 °C), opremljen sondom Lasentec FBRM. Preneti rastvor je ohlađen na 60 °C i zasejan željenim proizvodom (oblik B, 0,44 g) i mešan na 58–60 °C tokom 5 h, zatim hlađen na 20 °C tokom 14 h da bi proizvod kristalisao. Suspenzija je uzorkovana i analizirana putem XRPD, što je pokazalo da je u pitanju smeša polimorfa (oblik B i oblik A – glavna komponenta). Smeša je zagrejana na 48–50 °C i ponovo uzorkovana, i procenjeno je da je još uvek smeša polimorfa. Suspenzija je onda razblažena izopropanolom (1,5 l), i mešana i zagrevana na 50 °C oko 67 h, do kada je količina željenog oblika B povećana na oko 50%.2 l smeše je uklonjeno da bi se izvela laboratorijska ispitivanja, i preostala ukupna suspenzija je onda zagrevana na 56 °C još oko 21 h, do kada je prešla u oblik B. Suspenzija je zatim hlađena na 10 °C tokom 20 h i držana na 10–11 °C oko 5 h, a zatim filtrirana. Na pogaču proizvoda primenjeno je ispiranje izopropanolom (2,2 l) preko kristalizacionog suda. Pogača je sušena usisavanjem tokom 20 min, a zatim je sušena pod vakuumom na 50 °C oko 22 h, dajući željeni proizvod kao njegov polimorf oblik B (824 g, 1,729 mol, 100 mas.%, prinos 74,9%).

Intermedijer C1: 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[0215]

[0216] n-Butillitijum (139 ml, 347,59 mmol) je ukapavanjem dodat u 5-brom-2-[3-(1-piperidil)propoksi]piridin (80 g, 267,37 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (64,7 g, 347,59 mmol) u THF-u (400 ml), ohlađen na -78 °C u periodu od 10 minuta u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana tokom 12 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (100 ml) i smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Smeša je ekstrahovana

4

pomoću EtOAc (2 x 500 ml), organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (2 x 100 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance kao žutog ulja (92 g, 99%). Proizvod je neposredno korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.34 (12H, s), 1.60 (5H, p), 1.93 - 2.08 (3H, m), 2.39 - 2.53 (6H, m), 4.34 (2H, dt), 6.67 - 6.77 (1H, m), 7.92 (1H, dd), 8.50 - 8.56 (1H, m). Intermedijer C2: 5-brom-2-[3-(1-piperidil)propoksi]piridin

[0217]

[0218] Natrijum hidrid (20,91 g, 522,77 mmol) je u porcijama dodat 3-(piperidin-1-il)propan-1-olu (35,8 g, 250,02 mmol) u THF-u (400 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Dobijena suspenzija je mešana na 50 °C tokom 30 minuta, zatim ostavljena da se ohladi i dodat je 5-brom-2-fluorpiridin (40,0 g, 227,29 mmol). Rastvor je mešan na 50 °C tokom 2 h, zatim je ostavljen da se ohladi. Reakcija je ponovljena na analogan način koristeći natrijum hidrid (5,23 g, 130,69 mmol), 3-(piperidin-1-il)propan-1-ol (8,95 g, 62,50 mmol), THF (100 ml) i 5-brom-2-fluorpiridin (10 g, 56,82 mmol). Dve reakcione smeše su kombinovane i sipane u led/vodu (1000 ml). Rastvarač je koncentrovan pod sniženim pritiskom i ekstrahovan pomoću DCM-a (3 x 150 ml), organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (3 x 150 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance kao žutog ulja (96 g, 113%). Supstanca je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.43 - 1.49 (2H, m), 1.61 (5H, p), 1.99 (2H, dq), 2.46 (6H, dd), 4.31 (2H, t), 6.65 (1H, d), 7.64 (1H, dd), 8.19 (1H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 299.

Primer 3

7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil] imidazo [4,5-c] hinolin-2-on

[0219]

[0220] 3-(pirolidin-1-il)propan-1-ol (62,0 mg, 0,48 mmol) je dodat u natrijum hidrid (13,54 mg, 0,56 mmol) u THF-u (5 ml) na r.t. u inertnoj atmosferi i reakcija je mešana tokom 20 minuta. Dodat je 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (100 mg, 0,28 mmol) i reakcija je mešana tokom 16 h. Reakciona smeša je ugašena zasićenim NH4Cl (15 ml), ekstrahovana DCM-om (3 x 15 ml), organski sloj je osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika gel, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći smeše opadajuće polarnosti vode (sadrži 0,1% mravlju kiselinu) i MeCN kao eluente radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (85 mg, 61,9%). NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.78 (6H, d), 1.99 - 2.10 (4H, m), 2.31 (2H, dt), 3.03 -3.15 (6H, m), 3.59 (3H, s), 4.47 (2H, t), 5.23 (1H, s), 6.85 - 6.94 (1H, m), 7.85 - 7.97 (2H, m), 8.21 (1H, d), 8.41 (1H, s), 8.71 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 464.

[0221] Sledeće jedinjenje je pripremljeno na analogan način.

[0222] Primer 4: NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.75 - 1.78 (6 H, s), 2.08 - 2.15 (2 H, q), 2.40 - 2.50 (2 H, m), 3.08 - 3.14 (2 H, m), 3.59 (3 H, s), 3.87 - 3.92 (4 H, t), 4.42 -4.46 (2 H, t), 5.18 - 5.26 (1 H, m), 6.88- 6.91 (1 H, m), 7.87 - 7.93 (2 H, m), 8.21 (1 H, d), 8.41 (1 H, s), 8.71 (1 H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 450.

Intermedijer D1: 3-(azetidin-1-il)propan-1-ol

[0223]

[0224] Rastvor litijum aluminijum hidrida (2,0 M u THF-u) (8,38 ml, 16,76 mmol) razblažen u još THF-a (20 ml) je dodat smeši metil 3-(azetidin-1-il)propanoata (2 g, 13,97 mmol) u THF-u (5 ml) ukapavanjem na 0 °C u inertnoj atmosferi. Dobijeni rastvor je mešan na 0 °C tokom 1 h, zatim je reakciona smeša tretirana natrijum sulfat dekahidratom i mešana tokom 30 minuta. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i odbačena i filtrat je uparen radi dobijanja željene supstance (1,240 g, 77%) kao bezbojnog ulja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.51 - 1.57 (2H, m), 2 - 2.07 (2H, m), 2.6 - 2.66 (2H, m), 3.20 (4H, t), 3.7 - 3.76 (2H, m). Intermedijer D2: Metil 3-(azetidin-1-il)propanoat

[0225]

[0226] Metil akrilat (2,082 ml, 23,12 mmol) je dodat rastvoru azetidina (1,2 g, 21,02 mmol) u DCM-u i dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi tokom 16 h. Reakciona smeša je uparena i sirovi proizvod je prečišćen putem FCC, eluiranje sa 25% EtOAc u DCM-u, radi dobijanja željene supstance (2,0 g, 66,5%) kao bezbojnog ulja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 1.97 - 2.1 (2H, m), 2.33 (2H, d), 2.67 (2H, d), 3.18 (4H, t), 3.67 (3H, s).

Primer 5

1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0227]

[0228] 3-(piperidin-1-il)propan-1-ol (0,135 ml, 0,89 mmol) dodat je ukapavanjem uz mešanje u suspenziju natrijum hidrida (0,071 g, 1,78 mmol) u THF-u (0,5 ml) na r.t. i dobijena suspenzija je mešana na r.t. tokom 10 minuta u inertnoj atmosferi. Dodat je 8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (0,15 g, 0,45 mmol) u DMF-u (1,5 ml) i reakciona smeša je mešana na r.t. tokom jednog h. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (40 ml), dva puta isprana vodom (20 ml), zatim je organski sloj osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 3% 2 N metanolni amonijak u DCM-u, radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (0,154 g, 75%). NMR spektar:<1>HNMR (500MHz, CDCl3) δ 1.39 - 1.51 (2H, m), 1.60 (4H, p), 1.79 (6H, d), 2.03 (2H, dt), 2.42 (4H, s), 2.47 - 2.58 (2H, m), 3.59 (3H, s), 4.42 (2H, t), 5.19 - 5.41 (1H, m), 6.89 (1H, d), 7.78 (1H, dd), 7.90 (1H, dd), 8.22 (1H, d), 8.32 (1H, s), 8.50 (1H, d), 8.70 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 460.

[0229] Prethodna supstanca takođe može da se izoluje kao so metansulfonske kiseline uzimanjem supstance kako je prethodno pripremljena i njenim podvrgavanjem sledećim reakcionim uslovima.

[0230] 1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (133 mg, 0,29 mmol) rastvoren je u DCM-u (2 ml) i tretiran 1 M metansulfonskom kiselinom (0,3 ml, 0,30 mmol) u DCM-u, zatim je smeša uparena do suva. Ostatak je trituriran dietil etrom radi dobijanja soli metansulfonske kiseline kao bledožute čvrste supstance (162 mg). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.31 - 1.5 (1H, m), 1.68 (9H, d), 1.83 (2H, d), 2.13 - 2.26 (2H, m), 2.32 (3H, s), 2.84 - 3.01 (2H, m), 3.24 (2H, dt), 3.52 (5H, s), 4.43 (2H, t), 5.38 (1H, p), 7.00 (1H, d), 7.99 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.24 (1H, dd), 8.43 (1H, s), 8.69 (1H, d), 8.95 (1H, s), 9.04 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 460.

[0231] Sledeća jedinjenja su pripremljena na analogan način od 8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona ili 7-fluor-8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i odgovarajućeg alkohola.

[0232] Primer 6: (Slobodna baza) NMR spektar:<1>HNMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.68 (6H, d), 1.89 (2H, p), 2.16 (6H, s), 2.37 (2H, t), 3.51 (3H, s), 4.37 (2H, t), 5.36 (1H, p), 6.98 (1H, dd), 7.93 (1H, dd), 8.14 (1H, d), 8.18 (1H, dd), 8.40 (1H, d), 8.66 (1H, dd), 8.88 (1H, s). (So metansulfonske kiseline) NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.68 (6H, d), 2.07 -2.25 (2H, m), 2.33 (3H, s), 2.80 (6H, s), 3.15 - 3.24 (2H, m), 3.51 (3H, s), 4.42 (2H, t), 5.35 (1H, p), 7.00 (1H, dd), 7.94 (1H, dd), 8.15 (1H, d), 8.23 (1H, dd), 8.40 (1H, d), 8.68 (1H, dd), 8.89 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 420.

[0233] Primer 7: (Slobodna baza) NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.61 - 1.77 (10H, m), 1.93 (2H, p), 2.43 - 2.49 (4H, m), 2.53 - 2.59 (2H, m), 3.51 (3H, s), 4.38 (2H, t), 5.29 - 5.43 (1H, m), 6.97 (1H, dd), 7.93 (1H, dd), 8.13 (1H, d), 8.18 (1H, dd), 8.40 (1H, d), 8.65 (1H, dd), 8.88 (1H, s). (So metansulfonske kiseline) NMR spektar:<1>HNMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.68 (6H, d), 1.88 (4H, s), 2.11 - 2.23 (2H, m), 2.32 (3H, s), 3.08 (2H, s), 3.32 (2H, s), 3.51 (3H, s), 3.60 (2H, s), 4.44 (2H, t), 5.36 (1H, p), 7.01 (1H, d), 7.94 (1H, dd), 8.15 (1H, d), 8.23 (1H, dd), 8.40 (1H, d), 8.68 (1H, d), 8.89 (1H, s), 9.50 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 446.

Intermedijer E1: 8-(6-fluor-3-piridil)-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0234]

[0235] 8-brom-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (4,57 g, 14,27 mmol), (6-fluorpiridin-3-il)boronska kiselina (2,61 g, 18,55 mmol) i 2 M kalijum karbonat (22 ml, 44,00 mmol) suspendovani su u 1,4-dioksanu (90 ml). Smeša je degasirana, zatim je dodat dihlor [1,1'- bis(di-tercbutilfosfino)ferocen] paladijum(II) (0,465 g, 0,71 mmol) i reakcija na 80 °C tokom 2 h u inertnoj atmosferi. Smeša je ostavljena da se ohladi, razblažena pomoću EtOAc (200 ml), zatim isprana vodom (50 ml), zasićenim vodenim rastvorom soli, i organska faza je osušena iznad MgSO4, filtrirana i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 5% MeOH u DCM-u, radi dobijanja supstance koja je zatim triturirana dietil etrom radi dobijanja željene supstance kao beličaste čvrste supstance (4,46 g, 93%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.66 (6H, d), 3.50 (3H, s), 5.36 (1H, p), 7.36 (1H, dd), 7.95 (1H, dd), 8.15 (1H, d), 8.39 - 8.52 (2H, m), 8.72 (1H, d), 8.90 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 337.

Intermedijer E2: 8-brom-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0236]

[0237] N,N-dimetilformamid dimetil acetal (54,2 ml, 408,29 mmol) dodat je rastvoru 8-brom-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona (25,00 g, 81,66 mmol) u DMF-u (375 ml). Smeša je zagrevana na 80 °C tokom 3 h, zatim ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i mešana tokom 16 h. Talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (4 x 300 ml) i osušen pod vakuumom na 50 °C radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (23,82 g, 91%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.63 (6H, d), 3.49 (3H, s), 5.15 - 5.23 (1H, m), 7.75 (1H, dd), 7.99 (1H, d), 8.44 (1H, d), 8.91 (1H, s).

Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 320.

Intermedijer E3: 8-brom-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0238]

[0239] Trietilamin (45,3 ml, 332,06 mmol) dodat je u 6-brom-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilnu kiselinu (34,22 g, 110,69 mmol) u DMF-u (342 ml) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, dodat je difenil fosforazidat (26,2 ml, 121,76 mmol) i dobijena smeša je mešana na 60 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je sipana u vodu (1500 ml); talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (2 x 700 ml) i osušen pod vakuumom na 50 °C radi dobijanja željene supstance kao bež čvrste supstance (29,6 g, 87%) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.64 (6H, d), 5.06 - 5.21 (1H, m), 7.75 (1H, d), 7.98 (1H, d), 8.43 (1H, s), 8.69 (1H, s), 11.57 (1H, s).

Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 306.

Intermedijer E4: 6-brom-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilna kiselina

[0240]

[0241] Etil 6-brom-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilat (38,0 g, 112,69 mmol) suspendovan je u metanolu (800 ml) i vodi (200 ml). Dodat je 10 M rastvor natrijum hidroksida (33,8 ml, 338,07 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Dodat je THF (200 ml) i dobijena smeša je mešana tokom 16 h. Dodata je voda (400 ml) i organske supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Dobijeni vodeni rastvor je zakiseljen do pH 4–5 dodatkom 2 M HCl, i talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (34,7 g, 100%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.33 (6H, d), 4.39 (1H, s), 7.78 (1H, d), 7.92 (1H, dd), 8.38 (1H, d), 8.88 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 309.

Intermedijer E5: Etil 6-brom-4-(izopropilamino)hinolin-3-karboksilat

[0242]

1

[0243] Propan-2-amin (11,00 ml, 128,02 mmol) dodat je u suspenziju etil 6-brom-4-hlorhinolin-3-karboksilata (36,61 g, 116,38 mmol) i kalijum karbonata (32,2 g, 232,77 mmol) u acetonitrilu (250 ml) na 0 °C. Smeša je mešana na 54 °C pod refluksom tokom 3 h. Dodato je još kalijum karbonata (10,7 g, 77,6 mmol) i propan-2-amina (3,6 ml, 42,7 mmol) i mešanje je nastavljeno na 48 °C još 16 h. Rastvarači su uklonjeni pod vakuumom, i dobijeni ostatak je raspodeljen između DCM-a (400 ml) i vode (500 ml). Vodeni sloj je ponovo ekstrahovan DCM-om (2 x 200 ml); kombinovani organski slojevi su propušteni kroz papir za separaciju faza i koncentrovani pod sniženim pritiskom radi dobijanja željene supstance kao bež čvrste supstance (38,6 g, 98%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 1.40 (6H, d), 1.43 (3H, t), 4.32 - 4.37 (1H, m), 4.40 (2H, q), 7.72 (1H, dd), 7.81 (1H, d), 8.29 (1H, d), 8.95 (1H, d), 9.10 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 337.

Intermedijer E6: Etil 6-brom-4-hlorhinolin-3-karboksilat

[0244]

[0245] DMF (0,119 ml, 1,54 mmol) dodat je u etil 6-brom-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-oksohinolin-3-karboksilat (160 g, 384,37 mmol) u tionil hloridu (800 ml) na sobnoj temperaturi pod vazduhom. Dobijena smeša je mešana na 75 °C tokom 16 h, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Dobijena smeša je dva puta azeotropski destilisana sa toluenom, zatim je dodat n-heksan (500 ml). Talog je sakupljen filtracijom, ispran n-heksanom (200 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (100 g, 83%) kao smeđe čvrste supstance. NMR spektar:<1>HNMR (400MHz, CDCl3) δ 1.47 (3H, t), 4.51 (2H, q), 7.95 (1H, dd), 8.11 (1H, d), 8.60 (1H, d), 9.24 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 314, 316.

[0246] U većem obimu, etil 6-brom-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-oksohinolin-3-karboksilat (5765 g, 13,85 mol) sipan je u sud sa tionil hloridom (28,8 l). Uočena je egzoterma od 20– 26 °C. Dodat je DMF (4,4 ml) bez uočene egzoterme i šarža je zagrejana na 75 °C i mešana tokom 17 h. HPLC pokazuje da je preostalo 1,3% polazne supstance sa 98,0% proizvoda. Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je azeotropski destilisan sa toluenom (25 l). Dobijena čvrsta supstanca je suspendovana u heptanu (18,5 l) tokom 2,5 h, filtrirana i isprana heptanom (3 x 4 l). Čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom na 35 °C dajući 4077 g željene

2

supstance (93% sirovog prinosa) koja sadrži ∼5% etil 6-brom-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-oksohinolin-3-karboksilata pored ∼4% proizvoda hidrolize putem HPLC (90% čisto). Sirova supstanca (4077 g) je vraćena u sud i ponovo obrađena tionil hloridom (14,5 l) i DMF-om (2,2 ml). Smeša je zagrevana na 75 °C tokom 40 h. Tionil hlorid je uklonjen pod vakuumom, i ostatak je azeotropski destilisan sa toluenom (10 l). Ostatak je suspendovan u heptanu (18 l) tokom ∼16 h na 20 °C. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, jedna porcija je filtrirana pod azotom i isprana heptanom (3 l) radi dobijanja 2196 g željene supstance (90% NMR test, 99% putem HPLC). Ostatak šarže je filtriran pod vazduhom i ispran heptanom (3 l) radi dobijanja 1905 g željene supstance (88% NMR test, 99% putem HPLC). Žute čvrste supstance su kombinovane radi dalje obrade (4101 g, 3653 g aktivno, 83% prinosa, 99% putem HPLC).

Intermedijer E7: Etil 6-brom-1-[(4-metoksifenil)metil]-4-oksohinolin-3-karboksilat

[0247]

[0248] DBU (102 ml, 679,62 mmol) je ukapavanjem dodat u etil 2-(5-brom-2-fluorbenzoil)-3-[(4-metoksifenil)metilamino]prop-2-enoat (296,5 g, 679,62 mmol) u acetonu (1,2 l) na sobnoj temperaturi u periodu od 2 minuta. Dobijeni rastvor je mešan tokom 16 h, zatim je čvrsta supstanca uklonjena filtracijom i isprana pomoću MTBE radi dobijanja željene supstance (180 g, 64%) kao svetložute čvrste supstance. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.30 (3H ,t), 3.71 (3H, s), 4.25 (2H ,q), 5.60 (2H, s), 6.90-6.95 (2H, m), 7.12-7.25 (2H, m), 7.67 (1H, d), 7.80-7.90 (1H, m), 8.30 (1H, d), 8.92 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 418.

[0249] U većem obimu, etil 2-(5-brom-2-fluorbenzoil)-3-[(4-metoksifenil)metilamino]prop-2-enoat (8434 g, (7730 g pretpostavljeno aktivno), 17,71 mol) sipan je u sud sa acetonom (23,2 l) na 15 °C. Dodat je DBU (2,8 l, 18,72 mol) tokom 25 minuta uz uočenu egzotermu od 18– 23 °C tokom dodavanja. Talog je nastao posle ∼25 minuta i šarža je nastavila egzotermu dostižući maksimum od 37 °C nakon 1 h. Reakcija je mešana na 20 °C tokom 16,5 h, kada je HPLC pokazao potrošnju polazne supstance i 96,5% proizvoda. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispiranjem pomoću TBME (4 x 3,4 l). Čvrsta supstanca je zatim osušena pod vakuumom na 40 °C radi dobijanja 6033 g željene supstance kao bele čvrste supstance (81,6% prinosa u 3 koraka, 99,8% čistoće putem HPLC). Analitički podaci su bili konzistentni sa onima dobijenim za prethodne šarže.

Intermedijer E8: Etil 2-(5-brom-2-fluorbenzoil)-3-[(4-metoksifenil)metilamino]prop-2-enoat

[0250]

[0251] (E)-etil 3-(dimetilamino)akrilat (98 g, 685,00 mmol) u porcijama je dodat u 5-brom-2-fluorbenzoil hlorid (163 g, 685 mmol) i DIPEA (120 ml, 685,00 mmol) u toluenu (800 ml) na 10 °C u periodu od 10 minuta. Dobijeni rastvor je mešan na 70 °C tokom 16 h, zatim je ostavljen da se ohladi. (4-metoksifenil)metanamin (94 g, 685 mmol) dodat je smeši u periodu od 20 minuta na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan tokom 3 h, zatim je reakciona smeša razblažena DCM-om (4 l) i isprana vodom (3 x 1 l). Organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i uparena radi dobijanja željene supstance (300 g, 100%) kao smeđeg ulja koje je neposredno korišćeno u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 436.

[0252] U većem obimu, 5-brom-2-fluorbenzoil hlorid (4318 g, 4205 g aktivno, 17,71 mol) sipan je u sud kao rastvor u toluenu (7,5 l). Dodat je DIPEA (3150 ml, 18,08 mol) bez uočene egzoterme. Etil-3-(dimetilamino)akrilat (2532 g, 17,71 mol) je u porcijama dodat tokom 30 minuta uz održavanje temperature šarže <40 °C. Uočena je egzoterma od 21–24 °C tokom 30 minuta dodavanja uz dodatni spori rast do 38 °C tokom 1 h. Reakcija je mešana na 20–30 °C tokom 16,5 h.4-metoksibenzilamin (2439 g, 17,78 mol) dodat je u porcijama tokom 30 minuta uz održavanje temperature šarže <40 °C. Egzoterma od 25–30 °C je uočena tokom dodavanja uz hlađenje obezbeđeno smanjenom temperaturom omotača od 15 °C. Reakcija je mešana tokom 4 h na 20–30 °C nakon čega je HPLC pokazao 93,2% željene supstance. Šarža je podeljena radi obrade, pri čemu su obe polovine smeše razblažene DCM-om (28,6 l) i isprane vodom (3 x 7,8 l). Organske supstance su osušene iznad MgSO4 (∼550 g) i filtrirane, uz

4

ispiranje DCM-om (4 l). Kombinovane organske supstance su onda koncentrovane radi dobijanja 8444 g željene supstance kao ulja (8434 g, 106% prinosa, 94,7% čistoće putem HPLC). Analitički podaci su bili konzistentni sa onima dobijenim iz prethodnih šarži.

Intermedijer E9: 5-brom-2-fluorbenzoil hlorid

[0253]

[0254] Tionil hlorid (75,0 ml, 1027,36 mmol) ukapavanjem je dodat u 5-brom-2-fluorbenzojevu kiselinu (150 g, 684,91 mmol) u toluenu (1,2 l) i DMF-u (12 ml) na sobnoj temperaturi u periodu od 1 h. Dobijena smeša je mešana na 70 °C tokom 16 h, zatim je smeša ostavljena da se ohladi i koncentrovana pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (160 g, 98%) kao svetložutog ulja koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 7.26 - 7.31 (1H, m), 7.83 (1H, dd), 8.02 (1H, d).

[0255] U većem obimu, 3-brom-6-fluorbenzojeva kiselina (3888 g, 17,75 mol) sipana je u sud na 20 °C praćena toluenom (29,2 l). Dodat je tionil hlorid (1950 ml, 26,88 mol), praćen DMF-om (310 ml) bez uočene egzoterme. Smeša je zagrejana na 65–75 °C (prethodno dobijeni rastvor ∼45 °C) bez uočene egzoterme i uz blago razvijanje gasa. Reakcija je mešana tokom 40 h na ovoj temperaturi, nakon čega je HPLC analiza pokazala 87,6% proizvoda, 3,4% polazne supstance. Reakcija je koncentrovana pod vakuumom i azeotropski destilisana sa toluenom (18 l) radi dobijanja 4328 g željene supstance (103% prinosa, 87,3% putem HPLC).

Primer 8

8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0256]

[0257] Hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) (24,55 mg, 0,03 mmol) dodat je u 8-brom-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-on (100 mg, 0,31 mmol), 2-(3-(azetidin-1-il)propoksi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (149 mg, 0,47 mmol) i cezijum karbonat (204 mg, 0,62 mmol) u 1,4-dioksanu (4 ml), vodi (1 ml) na r.t. u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je mešana na 100 °C tokom 2 h, zatim je ostavljena da se ohladi i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC (kolona XSelect CSH Prep C18 OBD, 5µ silika gel, prečnik 19 mm, dužina 150 mm), koristeći smeše opadajuće polarnosti vode (sadrži 0,1% mravlje kiseline) i MeCN kao eluente radi dobijanja željene supstance kao bele čvrste supstance (30,0 mg, 21%). NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 1.72 (8H, dd), 1.97 (2H, p), 2.50 (2H, s), 3.14 (4H, dd), 3.51 (3H, s), 4.34 (2H, t), 5.36 (1H, p), 6.97 (1H, d), 7.94 (1H, dd), 8.10 - 8.23 (2H, m), 8.40 (1H, d), 8.66 (1H, d), 8.89 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 432.

Intermedijer F1: 2-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[0258]

[0259] n-Butil litijum (4,65 ml, 11,62 mmol) dodat je u 2-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-5-brompiridin (2,1 g, 7,74 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan (2,161 g, 11,62 mmol) u THF-u (50 ml) na -78 °C u periodu od 10 minuta, i dobijeni rastvor je mešan na -78 °C tokom 1 h. Reakcija je prekinuta zas. vodenim rastvorom natrijum hidrogen karbonata (10 ml) i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u DCM-u (100 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance (2,00 g, 81%) kao bele čvrste supstance.

Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 319

Intermedijer F2: 2-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-5-brompiridin

[0260]

[0261] Natrijum hidrid (1,364 g, 56,82 mmol) dodat je u 3-(azetidin-1-il)propan-1-ol (2,62 g, 22,73 mmol) u THF-u (20 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi, i reakcija je mešana tokom 10 minuta. Dodat je 5-brom-2-fluorpiridin (2,0 g, 11,36 mmol) i dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h pre nego što je ugašen vodom (20 ml) i ekstrahovan pomoću EtOAc (5 x 50 ml). Organske supstance su kombinovane, osušene iznad Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (3,75 g, 122%) kao bele čvrste supstance. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1.80 (2H, m), 2.11 (2H, m), 2.55 (2H, t), 3.18 (4H, t), 4.328 (2H, t),6.64 (1H, d), 7.62 (1H, dd), 8.16 (1H, d). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 271.

Primer 9

8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0262]

[0263] Hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) (45,6 mg, 0,06 mmol) dodat je u 2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin (pretpostavlja se da sirova reakciona smeša sadrži 232 mg, 0,64 mmol), 8-brom-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (186 mg, 0,58 mmol) i cezijum karbonat (567 mg, 1,74 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) i vodi (2,5 ml). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom tri h, zatim je ostavljena da se ohladi. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (50 ml), dva puta isprana vodom (25 ml), organski sloj je osušen iznad MgSO4, filtriran i uparen radi dobijanja sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću fleš hromatografije na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 4% 2 N metanolni amonijak u DCM-u, radi dobijanja željene supstance kao beličaste čvrste supstance (168 mg, 61%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.37 (2H, d), 1.48 (4H, p), 1.64 (6H, d), 1.88 (2H, p), 2.22 - 2.44 (6H, m), 3.49 (3H, s), 4.30 (2H, t), 5.26 (1H, h), 6.93 (1H, dd), 7.80 (1H, dd), 8.12 (1H, d), 8.21 (1H, dd), 8.42 (1H, s), 8.89 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 478.

[0264] Prethodna supstanca takođe može da se izoluje kao so metansulfonske kiseline uzimanjem supstance kako je prethodno pripremljena i njenim podvrgavanjem sledećim reakcionim uslovima. 8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-on (162 mg, 0,34 mmol) rastvoren je u DCM-u (4 ml) i tretiran 1 M metansulfonskom kiselinom (0,35 ml, 0,36 mmol) u DCM-u, zatim je smeša uparena do suva. Ostatak je trituriran dietil etrom radi dobijanja soli metansulfonske kiseline kao bele čvrste supstance (184 mg). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.22 - 1.98 (12H, m), 2.06 - 2.24 (2H, m), 2.31 (3H, s), 2.90 (2H, s), 3.19 (2H, s), 3.50 (5H, s), 4.37 (2H, t), 5.25 (1H, p), 6.96 (1H, d), 7.80 (1H, d), 8.13 (1H, d), 8.26 (1H, dd), 8.42 (1H, s), 8.90 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 478.

[0265] Sledeća jedinjenja su pripremljena na analogan način od 8-brom-1-izopropil-3-metilimidazo[4,5-c]hinolin-2-ona ili 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i odgovarajućeg estra boronske kiseline.

[0266] Primer 10: NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 1.77 (6H, d), 1.98 - 2.10 (2H, m), 2.34 (6H, s), 2.54 - 2.63 (2H, m), 3.61 (3H, s), 4.41 (2H, t), 5.36 (1H, p), 6.88 (1H, dd), 7.87 (1H, dt), 8.08 - 8.21 (2H, m), 8.53 (1H, s), 8.83 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 438.

[0267] Primer 11: NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 1.74 (6H, d), 2.04 (2H, ddt), 2.34 (6H, s), 2.54 - 2.63 (2H, m), 3.60 (3H, s), 4.42 (2H, t), 5.30 (1H, p), 6.88 (1H, dd), 7.84 (1H, d), 8.03 (1H, ddd), 8.42 (1H, d), 8.85 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 456.

[0268] Primer 12: NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, MeOH-d4) δ 1.76 (6H,d), 2.12-2.30 (4H,m), 2.31-2.35 (2H,m), 2.38-3.47 (6H,m), 3.62 (3H,s),4.50 (2H,t), 5.32-5.41 (1H,m), 6.92-6.95 (1H,m), 7.89 (1H,d), 8.15-8.20 (2H,m), 8.41 (1H,s),8.85 (1H,s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 464.

[0269] Primer 13: NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 1.74 (6H, d), 2.08 - 2.20 (4H, m), 2.24 - 2.36 (2H, m), 3.39 - 3.48 (6H, m), 3.61 (3H, s), 4.51 (2H, t), 5.30 (1H, t), 6.93 (1H, d), 7.86 (1H, d), 8.08 (1H, t), 8.42 (1H, d), 8.87 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 482.

[0270] Primer 14: NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.39 (2H, d), 1.51 (5H, p), 1.60 (6H, d), 1.93 (2H, q), 2.43 (6H, d), 3.49 (3H, s), 4.32 (2H, t), 5.24 (1H, q), 6.96 (1H, dd), 7.92 (1H, d), 8.07 - 8.22 (2H, m), 8.38 (1H, d), 8.93 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 496.

[0271] Primer 15: NMR spektar:<1>H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 1.64 (6H, d), 1.73 (2H, t), 1.96 (2H, p), 2.46-2.51(2H, t),3.12 (4H, t), 3.50 (3H, s), 4.28 (2H, t), 5.28 (1H, q), 6.94 (1H, dd), 7.76 - 7.86 (1H, m), 8.08 - 8.29 (2H, m), 8.43 (1H, s), 8.90 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 450

[0272] Primer 16: NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.60 (6H, d), 1.70 - 1.81 (2H, m), 1.96 - 2.04 (2H, m), 2.55 (2H, s), 3.19 (4H, dt), 3.49 (3H, s), 4.30 (2H, t), 5.22 (1H, q), 6.95 (1H, dd), 7.92 (1H, d), 8.08 - 8.17 (1H, m), 8.38 (1H, d), 8.93 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 468.

Intermedijer G1: 3-[[6-fluor-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-piridil]oksi]-N,N-dimetil-propan-1-amin

[0273]

[0274] Rastvor n-butillitijuma (0,693 g, 10,83 mmol) u n-heksanu (4,33 ml) dodat je uz mešanje u smešu 3-(5-brom-6-fluorpiridin-2-il)oksi-N,N-dimetilpropan-1-amina (2 g, 7,22 mmol) i 2-izopropoksi-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolana (2,014 g, 10,83 mmol) u THF-u (20 ml) na -78 °C u periodu od 20 minuta u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana tokom 2 h. Reakciona smeša je ugašena zas. rastvorom NaHCO3 i koncentrovana pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću FCC, elucioni gradijent 0 do 10% MeOH u DCM-u, radi dobijanja željene supstance (2,50 g, 107%). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 325.

Intermedijer G2: 3-(5-brom-6-fluorpiridin-2-il)oksi-N,N-dimetilpropan-1-amin

[0275]

[0276] (E)-diizopropil diazen-1,2-dikarboksilat (15,80 g, 78,13 mmol) je ukapavanjem dodat u 3-(dimetilamino)propan-1-ol (8,06 g, 78,13 mmol), 5-brom-6-fluorpiridin-2-ol (10 g, 52,09 mmol) i trifenilfosfin (20,49 g, 78,13 mmol) u DCM-u (150 ml) ohlađenom na 0–5 °C u inertnoj atmosferi. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 h, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren pomoću EtOAc (50 ml) i čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i odbačena. Filtrat je zakiseljen hlorovodonikom u dioksanu. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, zatim rastvorena u zas. vodenom rastvoru Na2CO3(200 ml) i ekstrahovana pomoću EtOAc (3 x 100 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani vodom, zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad Na2SO4 i koncentrovani pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (9,00 g, 62,3%). NMR spektar:<1>HNMR (300MHz, CDCl3) δ 1.89 - 1.98 (2H, m), 2.26 (6H, s), 2.34 (2H, t), 4.30 (2H, t), 6.53 (1H, d), 7.74 (1H, t). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 277.

Intermedijer G3: 5-brom-6-fluorpiridin-2-ol

1

[0278] Rastvor natrijum nitrita (21,67 g, 314,13 mmol) u vodi (150 ml) ukapavanjem je dodat uz mešanje u smešu 5-brom-6-fluorpiridin-2-amina (50 g, 261,78 mmol) i sumporne kiseline (1,2 ml, 22,51 mmol) u vodi (750 ml) na 0–5 °C. Dobijena suspenzija je mešana tokom 48 h na sobnoj temperaturi, zatim je talog sakupljen filtracijom, ispran vodom (200 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (40,0 g, 80%) kao bledožute čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 6.55 (1H, d), 8.00 (1H, t), 11.71 (1H, bs). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 192.

Intermedijer G4: 5-brom-6-fluorpiridin-2-amin

[0279]

[0280] NBS (50,0 g, 280,99 mmol) je polako dodat u 6-fluorpiridin-2-amin (30 g, 267,61 mmol) u MeCN (300 ml) ohlađen na 10–20 °C u periodu od 30 minuta. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen vodom, talog je sakupljen filtracijom, ispran vodom (200 ml) i osušen pod vakuumom radi dobijanja željene supstance (50,0 g, 98%) kao bele čvrste supstance koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 6.29 (1H, d), 6.57 (2H, bs), 7.65 (1H, t). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 191.

Intermedijer H1: 2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin

[0281]

2

[0282] PdCl2(dppf) (0,692 g, 0,95 mmol) dodat je u 3-brom-2-fluor-6-(3-(piperidin-1-il)propoksi)piridin (3 g, 9,46 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (3,60 g, 14,19 mmol) i kalijum acetat (1,856 g, 18,92 mmol) u 1,4-dioksanu (60 ml) na sobnoj temperaturi u inertnoj atmosferi. Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 16 h, zatim je ohlađena i rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 0 do 100% EtOAc u petrol etru, radi dobijanja željene supstance kao crvene tečnosti (0,90 g, 26%) koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 365.

[0283] Sledeći intermedijeri boron estra su pripremljeni na analogan način od odgovarajućih bromida.

* Supstanca je korišćena bez prečišćavanja. ;* Reakcija je mešana na 100 °C tokom 16 h i supstanca je korišćena bez

[0284] Intermedijer I1: Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 337.

[0285] Intermedijer J1: Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 351.

Intermedijer H2: 3-brom-2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]piridin

[0287] (E)-di-terc-butil diazen-1,2-dikarboksilat (7,20 g, 31,25 mmol) dodat je u 3-(piperidin-1-il)propan-1-ol (4,48 g, 31,25 mmol), trifenilfosfin (8,20 g, 31,25 mmol) i 5-brom6-fluorpiridin-2-ol (4,0 g, 20,83 mmol) u DCM-u (50 ml). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h, zatim je rastvarač uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je trituriran pomoću EtOAc (100 ml) i filtriran radi uklanjanja čvrste supstance. U filtrat je dodat rastvor 20 ml HCl(gas) u dioksanu. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Čvrsta supstanca je rastvorena u vodi (100 ml), zalužena zasićenim vodenim rastvorom Na2CO3i ekstrahovana pomoću EtOAc (200 ml). Organski sloj je odvojen i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušen iznad Na2SO4, filtriran i uparen radi dobijanja željene supstance kao žutog ulja (1,50 g, 22,70%) koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. NMR spektar:<1>H NMR (300MHz, DMSO-d6) δ 1.46-1.51 (6H,m), 1.82-1.89 (2H,m), 2.30-2.51 (6H,m), 4.21 (2H,t), 6.74 (1H,d), 8.07 (1H,t).Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 317.

[0288] Sledeći bromidi su napravljeni na analogan način od 5-brom-6-fluorpiridin-2-ola i odgovarajućeg alkohola.

4

[0289] Intermedijer I2: NMR spektar:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.63 - 1.92 (2H, m), 2.08 (2H, p), 2.53 (2H, t), 3.20 (4H, t), 4.27 (2H, t), 6.53 (1H, dd), 7.61 - 7.81 (1H, m); Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 291

[0290] Intermedijer J2: Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 303.

Primer 17

8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0291]

[0292] Hlor(2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladijum(II) (149 mg, 0,19 mmol) dodat je u N,N-dimetil-3-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il]oksipropan-1-amin (680 mg, 2,22 mmol), 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (600 mg, 1,85 mmol) i Cs2CO3(1508 mg, 4,63 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) i vodi (0,5 ml). Dobijena smeša je mešana na 80 °C tokom 5 h. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu, elucioni gradijent 10 do 20% MeOH u DCM-u, čiste frakcije su kombinovane i uparene do suva. Proizvod je dalje prečišćen pomoću fleš hromatografije na koloni C18-fleš, elucioni gradijent 5 do 40% MeCN u vodi, radi dobijanja željene supstance kao žute čvrste supstance (260 mg, 33,2%). NMR spektar:<1>HNMR (300MHz, CDCl3) δ 0.72 (6H,d), 2.00-2.15 (2H,m), 2.37 (6H,s), 2.61-2.66 (2H,m), 4.42 (2H,t), 5.27-5.31 (1H,m), 6.94 (1H,d), 7.79 (1H,d), 8.02 (1H,d), 8.32 (1H,d), 8.43 (1H,s), 8.65 (1H,s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 424.

[0293] Sledeća jedinjenja su pripremljena na analogan način od 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona i 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina.

[0294] Priprema 8-brom-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, N,N-dimetil-3-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il]oksipropan-1-amina i 2-[3-(1-piperidil)propoksi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridina je prethodno opisana.

Metabolit A

7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-oksidopiperidin-1-ijum-1-il)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on

[0295]

[0296] pH rastvora kalijum fosfata, dvobaznog (1,74 g, 9,99 mmol) u vodi (100 ml) podešen je na pH 9 dodatkom 2 M hlorovodonične kiseline. Deo ovog pripremljenog rastvora (23 ml) je zatim dodat u sud koji sadrži 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on (0,27 g, 0,565 mmol). Propan-2-ol (3,9 ml) je dodat u reakcioni sud praćen dodatkom BVMPO-P1-D08 (0,27 g, 0,000540 mmol), KRED-P1-H10 (54 mg, 0,0011 mmol) i dinatrijumove soli beta-nikotinamid adenin dinukleotid fosfata (27 mg, 0,034291 mmol). Reakcija je zagrejana na 32 °C uz žustro mešanje (300 o/min) i komprimovani vazduh je neprekidno uduvavan u glavni prostor suda. Dodato je još propan-2-ola (3,9 ml) i vode (∼10 ml). Reakciona smeša je mešana na 30 °C uz mešanje (300 o/min) još 3 dana, a zatim je razblažena acetonitrilom (40,5 ml), filtrirana i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom dok preostala zapremina nije bila ∼25 ml. Dodat je natrijum hlorid (∼2 g) i smeša je ekstrahovana butan-1-olom (2 x 24,3 ml). Ekstrakti su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4i koncentrovani radi dobijanja smeđe čvrste supstance. Sirova supstanca je prečišćena hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje smešom DCM/MeOH/cNH3(125:10:1), radi dobijanja željene supstance kao beličaste čvrste supstance (0,040 g, 14%). NMR spektar:<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 1.2 - 1.31 (1H, m), 1.44 (2H, d), 1.56 (1H, d), 1.63 (6H, d), 2.04 - 2.17 (2H, m), 2.25 - 2.33 (2H, m), 2.91 (2H, d), 3.10 (2H, td), 3.19 - 3.26 (2H, m), 3.49 (3H, s), 4.44 (2H, t), 5.27 (1H, p), 6.98 (1H, dd), 7.91 (1H, d), 8.05 (1H, dt), 8.31 (1H, d), 8.50 (1H, s), 8.90 (1H, s). Maseni spektar: m/z (ES+)[M+H]+ = 494.

BIOLOŠKI TESTOVI

[0297] Sledeći testovi su korišćeni za merenje dejstva jedinjenja iz predmetnog pronalaska: a) test potentnosti ATM ćelija; b) test potentnosti PI3K ćelija; c) test potentnosti mTOR ćelija; d) test potentnosti ATR ćelija. Prilikom opisa testova, generalno:

i. Korišćene su sledeće skraćenice: 4NQO = 4-nitrohinolin N-oksid; Ab = antitelo; BSA = albumin goveđeg seruma; CO2= ugljen dioksid; DMEM = Dulbekov modifikovani Iglov medijum; DMSO =dimetil sulfoksid; EDTA = etilendiamintetrasirćetna kiselina; EGTA = etilene glikol tetrasirćetna kiselina; ELISA = ELISA test sa imunosorbentom vezanim za enzim; EMEM = Iglov minimalni esencijalni medijum; FBS = fetalni goveđi serum; h = sat(i); HRP = peroksidaza rena; i.p. = intraperitonealno; PBS = fiziološki rastvor puferovan fosfatom; PBST = fiziološki rastvor puferovan fosfatom / Tween; TRIS = Tris(hidroksimetil)aminometan; MTS reagens: [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-karboksimetoksifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazolijum, unutrašnja so i reagens za kuplovanje elektrona (fenazin metosulfat) PMS; s.c. = supkutano.

ii. Vrednosti IC50su izračunate koristeći smart model za iscrtavanje u Genedata. IC50vrednost je koncentracija testiranog jedinjenja koja inhibira 50% biološke aktivnosti.

Test a): Potentnost ATM ćelija

Obrazloženje:

[0298] Ozračivanje ćelija uzrokuje pucanje dvostrukog lanca DNK i ubrzanu međumolekulsku autofosforilaciju serina 1981 koja izaziva disocijaciju dimera i započinje aktivnost ćelijske ATM kinaze. Većina molekula ATM u ćeliji je ubrzano fosforilovana na ovom mestu nakon doza radijacije koje mogu biti i samo 0,5 Gy, i vezujuće fosfospecifično antitelo može da se detektuje nakon uvođenja samo nekoliko pucanja dvostrukog lanca DNK u ćeliji.

[0299] Svrha testa pATM je identifikovanje inhibitora ATM u ćelijama. HT29 ćelije su inkubirane sa testiranim jedinjenjima tokom 1 h pre rendgenskog ozračivanja.1 h kasnije, ćelije su fiksirane i obojene za pATM (Ser1981). Fluorescencija je očitana na platformi za skeniranje niza.

Detalji postupka:

[0300] HT29 ćelije (ECACC br.85061109) zasejane su u test ploče sa 384 bunarčića (Costar br. 3712) sa gustinom od 3500 ćelija / bunarčiću u 40 µl EMEM medijuma sa 1% L glutamina i 10% FBS, i ostavljene su da se zalepe preko noći. Narednog jutra, jedinjenja Formule (I) u 100% DMSO su dodata test pločama putem akustične raspodele. Nakon 1 h inkubacije na 37 °C i 5% CO2, ploče (do 6 odjednom) su ozračene koristeći instrument X-RAD 320 (PXi) sa ekvivalentom ∼600 cGy. Ploče su vraćene u inkubator još 1 h. Ćelije su zatim fiksirane dodatkom 20 µl 3,7% formaldehida u rastvoru PBS i inkubirane tokom 20 minuta na r.t. pre ispiranja sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče. Zatim je dodato 20 µl 0,1% Triton X100 u PBS-u i inkubirano tokom 20 minuta na r.t. radi permeabilizacije ćelija. Ploče su zatim jednom isprane sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče.

[0301] Fosfo-ATM Ser1981 antitelo (Millipore br. MAB3806) je 10.000 puta razblaženo u PBS-u koji sadrži 0,05% polisorbata/Tween i 3% BSA i 20 µl je dodato svakom bunarčiću i inkubirano preko noći na r.t. Narednog jutra, ploče su isprane tri puta sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče, a zatim je dodato 20 µl rastvora sekundarnog antitela koji sadrži 500-struko razblaženi Alexa Fluor® 488 kozji anti-zečji IgG (Life Technologies, A11001) i 0,002 mg/ml Hehst boje (Life technologies br. H-3570), u PBS-u koji sadrži 0,05% polisorbata/Tween i 3% BSA. Nakon 1 h inkubacije na r.t., ploče su isprane tri puta sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče, i ploče su zaptivene i čuvane u PBS-u na 4 °C do očitavanja. Ploče su očitane koristeći instrument Array Scan VTI, koristeći XF53 filter sa objektivom od 10X. Postavka sa dva lasera je korišćena za analizu bojenja jedara sa Hehst (405 nm) i bojenja pSer1981 (488 nm) sekundarnim antitelom.

Test b): Potentnost ATR ćelija

Obrazloženje:

[0302] ATR je kinaza srodna PI 3-kinazi koja fosforiluje više supstrata na serinskim ili treoninskim ostacima kao odgovor na oštećenje DNK tokom replikacije blokova. Chk1, nishodna protein kinaza ATR, ima ključnu ulogu u kontrolnoj tački oštećenja DNK. Aktiviranje Chk1 uključuje fosforilaciju Ser317 i Ser345 (drugi se smatra preferencijalnim ciljem za fosforilaciju/aktivaciju putem ATR). To je test na bazi ćelija za merenje inhibicije ATR kinaze putem merenja smanjenja fosforilacije Chk1 (Ser 345) u HT29 ćelijama, nakon tretiranja jedinjenjem Formule (I) i mimetikom UV 4NQO (Sigma br. N8141).

Detalji postupka:

[0303] HT29 ćelije (ECACC br.85061109) su zasejane u test ploče sa 384 bunarčića (Costar br. 3712) sa gustinom od 6000 ćelija / bunarčiću u 40 µl EMEM medijuma sa 1% L glutamina i 10% FBS i ostavljene su da se zalepe preko noći. Narednog jutra, jedinjenje Formule (I) u 100% DMSO dodato je test pločama putem akustične raspodele. Nakon 1 h inkubacije na 37 °C i 5% CO2, 40 nl 3 mM 4NQO u 100% DMSO je dodato u sve bunarčiće putem akustične raspodele, osim bunarčića za kontrolu minimuma koji su ostali netretirani sa 4NQO kako bi se dobila kontrola sa nultim odgovorom. Ploče su vraćene u inkubator još 1 h. Ćelije su fiksirane dodatkom 20 µl rastvora 3,7% formaldehida u PBS-u i inkubiranjem tokom 20 minuta na r.t. Zatim je dodato 20 µl 0,1% Triton X100 u PBS-u i inkubirano tokom 10 minuta na r.t. radi permeabilizacije ćelija. Ploče su zatim jednom isprane sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče.

[0304] Fosfo-Chkl Ser 345 antitelo (Cell Signalling Technology br. 2348) je 150-struko razblaženo u PBS-u koji sadrži 0,05% polisorbata/Tween i 15 µl je dodato svakom bunarčiću i inkubirano preko noći na r.t. Narednog jutra, ploče su isprane tri puta sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče, a zatim je dodato 20 µl rastvora sekundarnog antitela koji sadrži 500-struko razblaženi Alexa Fluor 488 kozji anti-zečji IgG (Molecular Probes br. A-11008) i 0,002 mg/ml Hehst boje (Molecular Probes br. H-3570) u PBST-u. Nakon 2 h inkubacije na r.t., ploče su isprane tri puta sa 50 µl / bunarčiću PBS-a, koristeći Biotek EL405 perač za ploče i ploče su zatim zaptivene crnim zaptivkama za ploče do očitavanja. Ploče su očitane koristeći ArrayScan VTI instrument, koristeći XF53 filter sa objektivom od 10X. Postavka sa dva lasera je korišćena za analizu bojenja jedara sa Hehst (405 nm) i bojenja pChk1 (488 nm) sekundarnim antitelom.

Test c): Potentnost PI3K ćelija

Obrazloženje:

[0305] Ovaj test je korišćen za merenje inhibicije PI3K-α u ćelijama. PDK1 je identifikovan kao kinaza petlje ushodne aktivacije protein kinaze B (Akt1), koja je ključna za aktivaciju PKB. Aktivacija lipid kinaze fosfoinozitid 3 kinaze (PI3K) je ključna za aktivaciju PKB putem PDK1.

[0306] Nakon stimulacije liganda receptorskih tirozin kinaza, PI3K je aktiviran, što konvertuje PIP2 u PIP3, koji je vezan PH domenom PDK1 što dovodi do regrutovanja PDK1 u membranu plazme gde fosforiluje AKT na Thr308 u aktivacionoj petlji.

[0307] Cilj ovog režima dejstva na bazi ćelija je da se identifikuju jedinjenja koja inhibiraju PDK aktivnost ili regrutaciju PDK1 u membranu putem inhibiranja aktivnosti PI3K. Fosforilacija fosfo-Akt (T308) u BT474c ćelijama nakon tretmana jedinjenjima tokom 2 h je neposredna mera PDK1 i posredna mera PI3K aktivnosti.

Detalji postupka:

[0308] BT474 ćelije (ljudski duktalni karcinom dojke, ATCC HTB-20) su zasejane u crne test ploče sa 384 bunarčića (Costar br.3712) sa gustinom od 5600 ćelija / bunarčiću u DMEM koji sadrži 10% FBS i 1% glutamina i ostavljene su da se zalepe preko noći.

[0309] Narednog jutra, jedinjenja u 100% DMSO su dodata test pločama putem akustične raspodele. Nakon 2 h inkubacije na 37 °C i 5% CO2, medijum je usisan i ćelije su lizirane puferom koji sadrži 25 mM Tris, 3 mM EDTA, 3 mM EGTA, 50 mM natrijum fluorid, 2 mM natrijum ortovanadat, 0,27 M saharozu, 10 mM β-glicerofosfat, 5 mM natrijum pirofosfat, 0,5% Triton X-100 i kompletan koktel tableta inhibitora proteaze (Roche br.04693 116 001, koristi se 1 tab na 50 ml pufera za lizu).

[0310] Nakon 20 minuta, ćelijski lizati su prebačeni u ELISA ploče (Greiner br.781077) koje su prethodno obložene anti totalnim-AKT antitelom u PBS puferu i nespecifično vezivanje je blokirano sa 1% BSA u PBS-u koji sadrži 0,05% Tween 20. Ploče su inkubirane preko noći na 4 °C. Sledećeg dana, ploče su isprane PBS puferom koji sadrži 0,05% Tween 20 i dalje inkubirane sa mišjim monoklonskim anti-fosfo AKT T308 tokom 2 h. Ploče su ponovo isprane kao u prethodnom delu pre dodavanja sekundarnog antitela konjugovanog sa konjskim antimišjim-HRP. Nakon 2 h inkubacije na r.t. ploče su isprane i radni rastvor supstrata QuantaBlu (Thermo Scientific br. 15169, pripremljen prema uputstvu dobavljača) dodat je u svaki bunarčić. Razvijeni fluorescentni proizvod je zaustavljen nakon 60 minuta dodatkom stop rastvora u bunarčiće. Ploče su očitane koristeći Tecan Safire čitač ploča koristeći talasne dužine ekscitacije i emisije od 325 nm, odnosno 420 nm. Osim kada je naznačeno, reagensi koji sadrže Path Scan Phospho AKT (Thr308) komplet za sendvič ELISA od Cell Signalling (br. 7144) korišćeni su u ovom ELISA testu.

Test d): Potentnost mTOR ćelija

Obrazloženje:

[0311] Ovaj test je korišćen za merenje inhibicije mTOR u ćelijama. Cilj testa mehanizma dejstva fosfo-AKT na bazi ćelija koristeći Acumen Explorer je identifikovanje inhibitora PI3Kα ili mTOR-Rictor (pratilac mTOR neosetljiv na rapamicin). To se meri bilo kojim smanjenjem fosforilacije Akt proteina na Ser473 (AKT se nalazi nishodno od PI3Kα na putu transdukcije signala) u MDA-MB-468 ćelijama nakon tretiranja jedinjenjem.

Detalji postupka:

[0312] MDA-MB-468 ćelije (humani adenokarcinom dojke br. ATCC HTB 132) zasejane su sa 1500 ćelija / bunarčiću u 40 µl DMEM koji sadrži 10% FBS i 1% glutamina u Greiner crnim pločama sa ravnim dnom i 384 bunarčića. Ploče sa ćelijama su inkubirane tokom 18 h u inkubatoru na 37 °C pre doziranja jedinjenjima Formule (I) u 100% DMSO koristeći akustičnu raspodelu. Jedinjenja su dozirana u opsegu koncentracija sa 12 tačaka u randomizovanu mapu ploča. Kontrolni bunarčići su dobijeni doziranjem 100% DMSO (maksimalni signal) ili dodatkom referentnog jedinjenja (inhibitor PI3K-β) koje u potpunosti eliminiše signal pAKT (min. kontrola). Jedinjenja su zatim testirana jednim od dva test protokola A ili B:

Protokol A:

[0313] Ploče su inkubirane na 37 °C tokom 2 h; ćelije su zatim fiksirane dodatkom 10 µl rastvora 3,7% formaldehida. Nakon 30 minuta, ploče su isprane PBS-om koristeći Tecan PW384 perač za ploče. Bunarčići su blokirani i ćelije permeabilizovane dodatkom 40 µl PBS-a koji sadrži 0,5% Tween20 i 1% Marvel™ (osušeno mleko u prahu) i inkubirani tokom 60 minuta na r.t. Ploče su isprane PBS-om koji sadrži 0,5% (V/V) Tween20 i 20 µl zečjeg antifosfo AKT Ser473 (Cell Signalling Technologies, br. 3787) u istom PBS-Tween 1% Marvel™ je dodato i inkubirano preko noći na 4 °C.

1

[0314] Ploče su isprane 3 puta sa PBS 0,05% Tween 20 koristeći Tecan PW384. 20 µl sekundarnog antitela Alexa Fluor 488 anti-zečjeg (Molecular Probes, br. A11008) razblaženog u PBS 0,05% Tween20 koji sadrži 1% Marvel™ dodato je u svaki bunarčić i inkubirano tokom 1 h na r.t. Ploče su isprane tri puta kao pre, zatim je 20 µl PBS-a dodato svakom bunarčiću i ploče su zaptivene crnom zaptivkom za ploču.

[0315] Ploče su očitane na Acumen čitaču ploča čim je to moguće, mereći zelenu fluorescenciju nakon ekscitacije laserom na 488 nm. Koristeći ovaj sistem, dobijene su vrednosti IC50i kvalitet ploča je utvrđen pomoću kontrolnih bunarčića. Referentna jedinjenja su korišćena svaki put za praćenje performansi testa.

Protokol B:

[0316] Ploče sa ćelijama su zatim inkubirane tokom 2 h na 37 °C pre nego što su fiksirane dodatkom 20/µl 3,7% formaldehida u PBS/A (1,2% finalna koncentracija), nakon čega sledi 30 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, a zatim 2x ispiranje sa 150 µl PBS/A koristeći BioTek ELx406 perač za ploče. Ćelije su permeabilizovane i blokirane sa 20 µl test pufera (0,1% Triton X-100 u PBS/A 1% BSA) tokom 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim isprane 1x sa 50 µl PBS/A. Primarno fosfo-AKT (Ser473) D9E XP® zečje monoklonsko antitelo (br.4060, Cell Signaling Technology) razblaženo je 1:200 u test puferu, dodato je 20 µl po bunarčiću i ploče su inkubirane na 4 °C preko noći. Ploče sa ćelijama su isprane 3x sa 200 µl PBS/T, zatim je dodato 20 µl razblaženja 1:750 u test puferu Alexa Fluor® 488 kozjeg anti-zečjeg IgG sekundarnog antitela (br. A11008, Molecular Probes, Life Technologies), sa razblaženjem 1:5000 Hehst 33342 po bunarčiću. Nakon 1 h inkubacije na sobnoj temperaturi, ploče su isprane 3x sa 200 µl PBS/T i 40 µl PBS bez Ca, Mg i Na bikarb (Gibco br. 14190-094) je dodato po bunarčiću.

[0317] Ploče sa obojenim ćelijama su pokrivene crnim zaptivkama i zatim očitane na Cell Insight platformi za snimanje (Thermo Scientific) sa objektivom 10x. Primarni kanal (Hehst plava fluorescencija 405 nM, BGRFR_386_23) korišćen je za Autofocus i prebrojavanje broja događaja (to je dalo informacije o citotoksičnosti testiranih jedinjenja). Sekundarni kanal (Green 488 nM, BGRFR_485_20) merio je pAKT bojenje. Podaci su analizirani i IC50su izračunate koristeći softver Genedata Screener®.

2

[0318] Tabela 2 prikazuje rezultate testiranja primera u testovima a) b) c) i d). Rezultati mogu biti geometrijska sredina nekoliko testova.

Tabela 2: Podaci o potentnosti za Primere 1–18 u testovima a)–d)

[0319] Tabela 3 prikazuje komparativne podatke za određena jedinjenja CN102399218A i CN102372711A u testovima a) b) c) i d). Rezultati mogu biti geometrijska sredina nekoliko testova.

Tabela 3: Podaci o potentnosti za određena jedinjenja CN102399218A i CN102372711A u testovima a)–d)

[0320] Tabela 4 prikazuje rezultate testiranja metabolita A u testovima a) b) c) i d). Rezultati mogu biti geometrijska sredina nekoliko testova.

Tabela 4: Podaci o potentnosti za metabolit A u testovima a)–d)

4

Claims (21)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time što: R<1>je metil; R<2>je hidro ili metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten; R<3>je hidro ili fluor; R<4>je hidro ili metil; i R<5>je hidro ili fluor.
2. 2. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što su R<1>i R<2>oba metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten.
3. 3. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačeno time što R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten.
4. 4. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od prethodnih zahteva, naznačeno time što je R<3>hidro.
5. 5. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od prethodnih zahteva, naznačeno time što je R<4>metil.
6. 6. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od prethodnih zahteva, naznačeno time što je R<5>fluor.
7. 7. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što: R<1>je metil; R<2>je metil; ili R<1>i R<2>zajedno sa atomom azota za koji su vezani grade azetidinil, pirolidinil ili piperidinil prsten; R<3>je hidro ili fluor; R<4>je metil; i R<5>je hidro ili fluor.
8. 8. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od: 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 1-izopropil-3-metil-8-[6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[2-fluor-6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 7-fluor-8-[2-fluor-6-(3-pirolidin-1-ilpropoksi)-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 7-fluor-8-[2-fluor-6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(azetidin-1-il)propoksi]-2-fluor-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona; i 7-fluor-1-izopropil-8-[6-[3-(1-pipendil)propoksi]-3-piridil]-3H-imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.
9. 9. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. 10. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-on.
11. 11. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje farmaceutski prihvatljiva so 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona.
12. 12. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje 8-[6-[3-(dimetilamino)propoksi]-3-piridil]-7-fluor-1-izopropil-3-metil-imidazo[4,5-c]hinolin-2-on ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
13. 13. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, koje je kristalni oblik 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha (dobijen koristeći zračenje bakra) sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 3,7 i 14,8° plus ili minus 0,2° 2-teta.
14. 14. Jedinjenje Formule (I) kako je prijavljeno u zahtevu 1, koje je kristalni oblik 7-fluor-1-izopropil-3-metil-8-[6-[3-(1-piperidil)propoksi]-3-piridil]imidazo[4,5-c]hinolin-2-ona, koji ima obrazac rendgenske difrakcije praha (dobijen koristeći zračenje bakra) sa najmanje dva specifična pika na 2-teta = 3,4 i 11,7° plus ili minus 0,2° 2-teta.
15. 15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 14, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
16. 16. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 14, za upotrebu u terapiji.
17. 17. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kako je prijavljeno u bilo kom od zahteva 1 do 14, za upotrebu u lečenju raka.
18. 18. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka prema zahtevu 17, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa radioterapijom.
19. 19. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka prema zahtevu 17, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuje istovremeno, odvojeno ili sekvencijalno sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od doksorubicina, irinotekana, topotekana, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana i bleomicina.
20. 20. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka prema zahtevu 17, naznačeno time što se jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so primenjuju u kombinaciji sa najmanje jednom dodatnom antitumorskom supstancom izabranom iz grupe koja se sastoji od cisplatina, oksaliplatina, karboplatina, valrubicina, idarubicina, doksorubicina, pirarubicina, irinotekana, topotekana, amrubicina, epirubicina, etopozida, mitomicina, bendamustina, hlorambucila, ciklofosfamida, ifosfamida, karmustina, melfalana, bleomicina, olapariba, MEDI4736, AZD1775 i AZD6738.
21. 21. Jedinjenje Formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju raka prema bilo kom od zahteva 17 do 20, naznačeno time što je navedeni rak izabran iz grupe koja se sastoji od kolorektalnog karcinoma, glioblastoma, karcinoma želuca, karcinoma jajnika, difuznog limfoma velikih B-ćelija, hronične limfocitne leukemije, akutne mijeloidne leukemije, karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata, karcinoma dojke, hepatocelularnog karcinoma, mikrocelularnog karcinoma pluća i nemikrocelularnog karcinoma pluća.