RS60245B1

RS60245B1 - Kompozicije koje sadrže sojeve bakterija

Info

Publication number: RS60245B1
Application number: RS20200467A
Authority: RS
Inventors: George Grant; Angela Margaret Patterson; Imke Mulder; Seanin Mccluskey; Emma Raftis
Original assignee: 4D Pharma Res Ltd
Priority date: 2015-06-15
Filing date: 2016-06-15
Publication date: 2020-06-30
Also published as: ME03584B; EP3204025A1; CA2988686A1; LT3369425T; MD3549592T2; IL255783A; BR112017025003A2; SI3369425T1; HRP20200702T1; AU2016278069A1; PL3549592T3; EA201890049A1; KR20180012845A; MA41060B1; JP2018502551A; PT3369425T; CY1123196T1; US11433106B2; US20200138874A1; MA41060A

Description

Opis pronalaska

OBLAST TEHNIKE

[0001] Ovaj pronalazak je iz oblasti kompozicija koje sadrže bakterijske sojeve izolovane iz digestivnog trakta sisara i upotrebe takvih kompozicija u lečenju oboljenja.

STANJE TEHNIKE

[0002] Smatra se da je crevo ljudi sterilno in utero, ali i da se izlaže velikom broju različitih mikroba majke i okruženja odmah po rođenju. Nakon toga, odvija se dinamičan period kolonizacije i smena mikroba, koji je pod uticajem faktora kao što su način isporuke, okruženje, ishrana i genotip domaćina, pri čemu svi utiču na sastav mikrobioma creva, posebno tokom ranog života. Mikrobim se potom stabilizuje i postaje slična mikrobiomu odraslih [1]. Mikrobiom creva čoveka sadrži više od 500-1000 različitih filotipova koji suštinski spadaju u dva glavna razdela, Bacteroidetes i Firmicutes [2]. Uspešni simbiotski odnosi koji nastaju kolonizacijom creva čoveka bakterijama su doveli do širokog spektra metaboličkih, strukturnih, zaštitnih i drugih korisnih funkcija. Pojačane metaboličke aktivnosti kolonizovanog creva osiguravaju da se drugačije nesvarljive komponente hrane razgrade uz oslobađanje sporednih proizvoda, čime se obezbeđuju važni izvori nutritijenata za domaćina. Slično navedenom, prepoznata je i imunološka važnost mikrobioma creva, a primer su životinje oslobođene od mikroba koje imaju oštećen imuni sistemi koji se funkcionalno rekonstituiše nakon uvođenja komensalnih bakterija [3-5].

[0003] Dramatične promene u sastavu mikrobioma su dokumentovane u gastrointestinalnim poremećajima kao što je inflamatorna bolest creva (IBD). Na primer, nivoi Clostridium bakterija klastera XIVa su smanjeni kod IBD pacijenata, dok je povećan broj E. coli, što ukazuje na promenu ravnoteže simbionata i patobionata unutar creva [6-9]. Zanimlјivo je da je ovakva mikrobna disbioza takođe povezana sa disbalansima u populacijama T efektorskih ćelija.

[0004] U prepoznavanju mogućeg pozitivnog efekta koji određeni bakterijski sojevi mogu imati na creva životinja, predložena je upotreba raznih sojeva u lečenju raznih oboljenja (pogledati, na primer, [10-13]). Takođe, određeni sojevi su, uklјučujući uglavnom Lactobacillus i Bifidobacterium sojeve, predloženi za upotrebu u lečenju raznih inflamatornih i autoimunih oboljenja koja nisu direktno povezana sa crevima (za revijske preglede pogledati [14] i [15]). Ipak, veza između različitih oboljenja i različitih bakterijskih sojeva, kao i precizni efekti određenih bakterijskih sojeva na creva i na sistemski nivo, kao i na bilo koje određene tipove oboljenja, slabo su okarakterisani.

[0005] US 2014/147425 opisuje probiotske kompozicije i potencijalne režime lečenja infekcije sa C. difficile.

[0006] CN 104546934 opisuje upotrebu Parabacteroides merdae za lečenje autoimunih oboljenja.

[0007] Zitomersky i saradnici (2013); PLOS ONE; 8,6: e63686 opisuje mikrobiom creva kod pacijenata sa inflamatornom bolešću creva.

[0008] Kverka i saradnici (2011); Clin Exp Immunol; 163, 2: 250-259 opisuju efekte antigena Parabacteroides distasonis u eksperimentalnom kolitisu.

[0009] U oblasti tehnike postoji zahtev za novim postupcima lečenja inflamatornih i autoimunih oboljenja. Postoji takođe zahtev za karakterizacijom potencijalnih efekata crevnih bakterija da bi se, upravo upotrebom crevnih bakterija, mogle razviti nove terapije.

KRATKO IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0010] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera debelog creva.

[0011] Pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju inflamatornih i autoimunih oboljenja. Preciznije, pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju bolesti i stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem. Pronalazači su zapravo identifikovali da bakterijski sojevi iz roda Parabacteroides mogu biti efektivni u smanjenju Th17 inflamatornog odgovora. Kao što je opisano u primerima, oralna primena kompozicija koje sadrže Parabacteroides distasonis može smanjiti ozbilјnost inflamatornog odgovora, uklјučujući Th17 inflamatorni odgovor, u mišjim modelima astme, reumatoidnog artritisa i multiple skleroze. Takođe, kao što je opisano u primerima, oralna primena kompozicija koje sadrže Parabacteroides distasonis može smanjiti ozbilјnost inflamatornog odgovora, uklјučujući Th17 inflamatorni odgovor, u mišjem modelu uveitisa.

[0012] Pronalazači su identifikovali da lečenje bakterijskim sojevima iz ovog roda može redukovati nivoe citokina koji su deo Th17 puta, uklјučujući IL-17, da može ublažiti Th17 inflamatorni odgovor i da može obezbediti kliničke koristi u mišjim modelima inflamatornih i autoimunih oboljenja posredovanih sa IL-17 i sa Th17 putem.

[0013] U posebnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti ili stanja izabranog iz grupe koju čine: multipla skleroza; artritis, kao što je reumatoidni artritis, osteoartritis, psorijatični artritis ili juvenilni idiopatski artritis; očni neuromijelitis (Devikova bolest); ankilozni spondilitis; spondiloartritis; psorijaza; sistemski eritematozni lupus; inflamatorna bolest creva, kao što je Kronova bolest ili ulcerozni kolitis; celijakija; astma, kao što je alergijska astma ili neutrofilna astma; hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP); kancer, kao što je kancer dojke, kancer debelog creva, kancer pluća ili kancer jajnika; uveitis; skleritis; vaskulitis; Behčetova bolest; ateroskleroza; atopijski dermatitis; emfizem; periodontitis; alergijski rinitis; i odbacivanje alotransplantata. Efekat na Th17 inflamatorni odgovor koji je pokazan za bakterijske sojeve iz roda Parabacteroides može obezbediti terapijske koristi za oboljenja i stanja posredovana sa IL-17 i sa Th17 putem, kao što su ona koja su prethodno navedena.

[0014] U poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije astme, kao što je neutrofilna astma ili alergijska astma. Pronalazači su utvrdili da tretman sa Parabacteroides sojevima može smanjiti regrutovanje neutrofila i eozinofila u pluća, što može pomoći u lečenju ili prevenciji astme. Štaviše, pronalazači su ispitali i pokazali efikasnost Parabacteroides sojeva u mišjim modelima astme. U određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije neutrofilne astme ili eozinofilne astme. Efekat koji je pokazan za ovde opisane kompozicije na neutrofile i eozinofile ukazuje da oni mogu biti posebno efektivni u lečenju ili prevenciji neutrofilne astme i eozinofilne astme. Zaista, u određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu u postupku smanjenja neutrofilnog inflamatornog odgovora prilikom lečenja ili prevencije astme, ili je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja eozinofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili prevenciji astme. U poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis za upotrebu u lečenju astme, posebno neutrofilne astme. Za Parabacteroides distasonis je pokazano da je sa posebno izraženim efektom na neutrofile u modelima astme, kao i da tretman sa Parabacteroides distasonis može biti posebno efektivan u lečenju neutrofilne astme.

[0015] U dodatnim poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije reumatoidnog artritisa. Pronalazači su utvrdili da tretman sa Parabacteroides sojevima može obezbediti kliničke koristi u mišjem modelu reumatoidnog artritisa i da može smanjiti oticanje zglobova. U poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u lečenju reumatoidnog artritisa. Kompozicije u kojima se upotrebljava Parabacteroides distasonis mogu biti posebno efektivne u lečenju reumatoidnog artritisa.

[0016] U sledećim poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije multiple skleroze. Pronalazači su identifikovali da tretman sa Parabacteroides sojevima može smanjiti incidencu i ozbiljnost oboljenja u mišjem modelu multiple skleroze. U poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u lečenju multiple skleroze. Kompozicije u kojima se upotrebljava Parabacteroides distasonis mogu biti posebno efektivne u lečenju multiple skleroze.

[0017] U daljim poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije uveitisa, kao što je posteriorni uveitis. Pronalazači su utvrdili da tretman sa Parabacteroides sojevima može smanjiti incidencu i ozbiljnost oboljenja u mišjem modelu uveitisa i da može sprečiti ili smanjiti oštećenje mrežnjače. U poželјnim primerima izvođenja, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u lečenju uveitisa.

[0018] U drugim poželjnim izvođenjima, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera, kao što je kancer grudi, pluća ili jetre. Kompozicije koje sadrže bakteriski soj roda Parabacteroides mogu smanjiti rast tumora na modelu kacera grudi, pluća i jetre kod miša. U izvesnim izvođenjima, kompozicija je za upotrebu u postupku smanjenja veličine tumora ili sprečavanja rasta tumor pri lečenju kancera. U izvesnim izvođenjima, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u lečenju kancera.

[0019] U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u postupku smanjenja proizvodnje IL-17 ili smanjenja diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji oboljenja ili stanja koja su posredovana sa IL-17 ili sa Th17 putem. Preciznije, kompozicije koje su ovde opisane mogu biti upotrebljene za smanjenje proizvodnje IL-17 ili smanjenje diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji astme, reumatoidnog artritisa ili multiple skleroze, ili astme, reumatoidnog artritisa, multiple skleroze, uveitisa ili kancera. Poželјno je da pronalazak obezbeđuje kompozicije koje sadrže bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u smanjenju proizvodnje IL-17 ili smanjenju diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji astme, reumatoidnog artritisa ili multiple skleroze. Pronalazak takođe obezbeđuje kompozicije koje sadrže bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis za upotrebu u smanjenju proizvodnje IL-17 ili u smanjenju diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji uveitisa.

[0020] U određenim primerima izvođenja, kompozicija je za upotrebu kod pacijenata sa povišenim nivoom IL-17 ili Th17 ćelija. Efekat na Th17 inflamatorni odgovor koji je pokazan za Parabacteroides sojeve može biti posebno korisan za takve pacijente.

[0021] Bakterijski soj u kompoziciji je Parabacteroides distasonis. Mogu takođe biti upotrebljeni blisko srodni sojevi, kao što su bakterijski sojevi koji sadrže 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16s rRNK bakterijskog soja Parabacteroides distasonis. Poželјno je da bakterijski soj sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 9. Poželјno je i da je sekvenca identična SEQ ID NO: 9. Poželјno je dalje da bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je predstavlјena kao SEQ ID NO: 9.

[0022] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je za oralnu primenu. Oralna primena sojeva koji su ovde opisani može biti efektivna za lečenje oboljenja i stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem.

Takođe, oralna primena je pogodna za pacijente i medicinske radnike i omogućava isporuku do i/ili delimičnu ili potpunu kolonizaciju creva.

[0023] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatlјivih eksipijenasa ili nosača.

[0024] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska sadrži bakterijski soj koji je liofilizovan. Liofilizacija je efektivna i pogodna tehnika za pripremu stabilnih kompozicija koje omogućavaju isporuku bakterija.

[0025] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju koja je prethodno opisana.

[0026] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju tipa vakcine koja sadrži kompoziciju koja je prethodno opisana.

[0027] U razvoju predhodno navedenog pronalaska, pronalazači su identifikovali i okarakterisali bakterijski soj koji je posebno koristan za terapiju. Pokazano je da je soj Parabacteroides distasonis pronalaska efektivan za lečenje oboljenja koja su ovde opisana, kao što su artritis, astma, multipla skleroza i uveitis. Stoga, prema drugom aspektu, opis obezbeđuje ćeliju Parabacteroides distasonis soja koji je deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Opis takođe obezbeđuje kompozicije koje sadrže takve ćelije ili biološki čiste kulture takvih ćelija. Opis takođe obezbeđuje ćeliju Parabacteroides distasonis soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42382 za upotrebu u terapiji, posebno terapiji oboljenja koja su ovde opisana.

KRATAK OPIS NACRTA

[0028]

Slika 1: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine – Ukupan broj ćelija u BAL tečnosti.

Slika 2: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan broj eozinofila u BALF-u.

Slika 3: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Proporcija eozinofila u BALF-u.

Slika 4: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan broj makrofaga u BALF-u.

Slika 5: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Proporcija makrofaga u BALF-u.

Slika 6: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan broj neutrofila u BALF-u.

Slika 7: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Proporcija neutrofila u BALF-u.

Slika 8: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan broj limfocita u BALF-u.

Slika 9: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Proporcija limfocita u BALF-u.

Slika 10: Mišji model teške neutrofilne astme - Ukupan broj ćelija u BAL tečnosti.

Slika 11: Mišji model teške neutrofilne astme - Ukupan broj eozinofila u BALF-u.

Slika 12: Mišji model teške neutrofilne astme - Proporcija eozinofila u BALF-u.

Slika 13: Mišji model teške neutrofilne astme - Ukupan broj makrofaga u BALF-u.

Slika 14: Mišji model teške neutrofilne astme - Proporcija makrofaga u BALF-u.

Slika 15: Mišji model teške neutrofilne astme - Ukupan broj neutrofila u BALF-u.

Slika 16: Mišji model teške neutrofilne astme - Proporcija neutrofila u BALF-u.

Slika 17: Mišji model teške neutrofilne astme - Ukupan broj limfocita u BALF-u.

Slika 18: Mišji model teške neutrofilne astme - Proporcija limfocita u BALF-u.

Slika 19: Mišji model reumatoidnog artritisa – Telesne težine, Dani od -14 do 0. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost procenata ± SEM u odnosu na početne telesne težine (Dana -14).

Slika 20: Mišji model reumatoidnog artritisa - Telesne težine, Dani od 0 do 42. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost procenata ± SEM u odnosu na početne telesne težine (Dana 0). •••• p < 0.0001, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem.

Slika 21: Mišji model reumatoidnog artritisa – Rezultati kliničkog skora. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. **** p < 0,0001, poređenje sa Danom 21 u grupi koja je tretirana nosačem. ◆, O p < 0,05, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem određenog dana.

Slika 22: Mišji model reumatoidnog artritisa - Proliferativni odgovor splenocita na Kolagen II. Oduzeta je vrednost signala po minuti za medijum [stimulacija sa CII – signal medijuma] dobijena na osnovu ugradnje 3H-TdR. Svi podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. ***p < 0,001, poređenje sa grupom tretiranom nosačem.

Slika 23: Mišji model reumatoidnog artritisa - Nivoi IFNγ u supernatantima kulture tkiva. Linije predstavlјaju vrednosti medijane za grupu.

Slika 24: Mišji model reumatoidnog artritisa - Nivoi IL-17A u supernatantima kulture tkiva. Linije predstavlјaju vrednosti medijane za grupu.

Slika 25: Mišji model reumatoidnog artritisa - Nivoi IL-10 u supernatantima kulture tkiva. Linije predstavlјaju vrednosti medijane za grupu.

Slika 26: Mišji model reumatoidnog artritisa - Nivoi IL-6 u supernatantima kulture tkiva. Linije predstavlјaju vrednosti medijane za grupu.

Slika 27: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan IgE u serumu

Slika 28: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - IgG1 specifičan za HDM u serumu

Slika 29: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Ukupan IgE u BALF-u

Slika 30: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - IgG1 specifičan za HDM u BALF-u

Slika 31: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Histološka analiza – Srednja vrednost skora peribronhiolarne infiltracije

Slika 32: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Histološka analiza - Srednja vrednost skora perivaskularne infiltracije

Slika 33: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Histološka analiza - Srednja vrednost inflamatornog skora (prosek rezultata i peribronhiolarne i perivaskularne infiltracije)

Slika 34: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - Histološka analiza – Rezultat analize sluzi Slika 35: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-9 u tkivu pluća

Slika 36: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-1 u tkivu pluća

Slika 37: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IFNγ u tkivu pluća

Slika 38: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-17A u tkivu pluća

Slika 39: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-4 u tkivu pluća

Slika 40: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-5 u tkivu pluća

Slika 41: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo IL-1b u tkivu pluća

Slika 42: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo RANTES u tkivu pluća

Slika 43: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo MIP-1a u tkivu pluća

Slika 44: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo KC u tkivu pluća

Slika 45: Mišji model astme izazvane grinjama kućne prašine - nivo MIP-2 u tkivu pluća

Slika 46: Mišji model teške neutrofilne astme - IgG1 specifičan za HDM u serumu

Slika 47: Mišji model teške neutrofilne astme - IgG2a specifičan za HDM u serumu

Slika 48: Mišji model teške neutrofilne astme - IgG1 specifičan za HDM u BALF-u

Slika 49: Mišji model teške neutrofilne astme - IgG2a specifičan za HDM u BALF-u

Slika 50: Mišji model teške neutrofilne astme - Histološka analiza - Srednja vrednost skora peribronhiolarne infiltracije

Slika 51: Mišji model teške neutrofilne astme - Histološka analiza - Srednja vrednost skora perivaskularne infiltracije

Slika 52: Mišji model teške neutrofilne astme - Histološka analiza - Srednja vrednost inflamatornog skora (prosek rezultata i peribronhiolarne i perivaskularne infiltracije)

Slika 53: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo TNFα u tkivu pluća

Slika 54: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IL-1a u tkivu pluća

Slika 55: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IFNγ u tkivu pluća

Slika 56: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IL-17F u tkivu pluća

Slika 57: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IL-1b u tkivu pluća

Slika 58: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo RANTES u tkivu pluća

Slika 59: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo MIP-2 u tkivu pluća

Slika 60: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo KC u tkivu pluća

Slika 61: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IL-17A u tkivu pluća

Slika 62: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo MIP-1a u tkivu pluća

Slika 63: Mišji model teške neutrofilne astme - nivo IL-33 u tkivu pluća

Slika 64: Mišji model reumatoidnog artritisa - Vizualni obrazac histopatološkog sistema procene. Reprezentativne slike koje prikazuju objedinjene skorove za mišje tarzalne zglobove prilikom ispitivanja artritisa izazvanog kolagenom.

Slika 65: Mišov model reumatoidnog artritisa - Histopatologija: Rezultati inflamatornog skora. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. * p < 0,05, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem. Slika 66: Mišji model reumatoidnog artritisa - Histopatologija: Rezultati analize hrskavice. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. * p < 0,05, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem. Slika 67: Mišji model reumatoidnog artritisa - Histopatologija: Rezultati analize kostiju. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. * p < 0,05, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem. Slika 68: Mišji model reumatoidnog artritisa - Histopatologija: Ukupni skorovi. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM. * p < 0,05, poređenje sa grupom koja je tretirana nosačem.

Slika 69: Mišji model reumatoidnog artritisa - Histopatologija: Reprezentativne slike. Između zagrada su navedne ID oznake životinja (#n.n) i ekstremiteta (R za desni, L za levi). Leva slika (nosač): obimno oštećenje zglobova i kostiju sa inflamacijom i fibrozom koja se širi na okolna meka tkiva.

Slika 70: Mišji model multiple skleroze - klinički skor.

Slika 71: Mišji model multiple skleroze - incidenca oboljenja.

Slika 72: Mišji model uveitisa – rezultati TEFI skora u kontrolnoj grupi. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM.

Slika 73: Mišji model uveitisa - rezultati TEFI skora za Dan 28. Podaci su predstavlјeni kao srednja vrednost ± SEM.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Bakterijski sojevi

[0029] Kompozicije predmetnog pronalaska sadrže soj bakterija vrste Parabacteroides distasonis. Primeri pokazuju da su bakterije ove vrste korisne u lečenju ili prevenciji oboljenja i stanja posredovanih sa IL-17 ili Th17 putem.

[0030] Primeri vrsta Parabacteroides koji su ovde opisani uključuju Parabacteroides distasonis, Parabacteroides goldsteinii, Parabacteroides merdae i Parabacteroides johnsonii. Parabacteroides liče na Bacteroides - Gramnegativne su, obligatni anaerobi, ne obrazuju spore, nisu pokretne i štapićaste su, veličine 0,8-1,6X1,2-12µm. Parabacteroides distasonis je jedna od najčešćih vrsta u fecesima čoveka. Tip soja P. distasonis je JCM 5825<T>(= CCUG 4941<T>=DSM 20701<T>=ATCC 8503<T>) Pristupni brojevi u GenBank/EMBL/DDBJ za 16S rRNK genske sekvence P. distasonis sojeva JCM 5825T, JCM 13400, JCM 13401, JCM 13402, JCM 13403 i JCM 13404 i P. merdae sojeve JCM 9497T i JCM 13405 su AB238922-AB238929, tim redom (ovde su opisani kao SEQ ID NO: 1-8). Primeri sojeva su također opisani u [16].

[0031] Parabacteroides distasonis bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382 je ispitana u Primerima i ovde je takođe označena kao soj 755 ili MRX005. Sekvenca 16S rRNK ispitivanog soja 755 je obezbeđena kao SEQ ID NO: 9. Soj 755 je deponovan kod međunarodnog tela za deponovanje NCIMB, Ltd.

(Ferguson Building, Aberdeen, AB219IA, Škotska) od strane GT Biologics Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB252ZS, Škotska) 12. marta 2015. godine kao "Parabacteroides sp 755" i dodelјen mu je pristupni broj NCIMB 42382. GT Biologics Ltd. je nakon toga promenio naziv u 4D Pharma Research Limited.

[0032] Genomska sekvenca soja 755 je obezbeđena kao SEQ ID NO: 10 u listi sekvenci koja je objavljena u WO 2016/203220. Ova sekvenca je generisana upotrebom PacBio RS II platforme.

[0033] Očekuje se da su bakterijski sojevi koji su blisko srodni sa sojem koji je ispitivan u primerima, takođe efektivni u lečenju ili prevenciji bolesti i stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem. U određenim primerima izvođenja, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16s rRNK iz bakterijskog soja Parabacteroides distasonis. Poželјno je da bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 9. Poželјno je i da je sekvenca identična SEQ ID NO: 9. Poželјno je dalje da bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je predstavlјena kao SEQ ID NO: 9.

[0034] Očekuje se takođe da bakterijski sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem 42382, budu efektivni u lečenju ili prevenciji oboljenja i stanja posredovanih sa IL-17 ili Th17 putem. Biotip je blisko srodan soj koga karakterišu iste ili veoma slične fiziološke i biohemijske karakteristike.

[0035] Sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku mogu biti identifikovani sekvenciranjem drugih nukleotidnih sekvenci bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Na primer, suštinski ceo genom može biti sekvenciran i soj biotipa za upotrebu u pronalasku može biti najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identičan sekvenci duž najmanje 80% njegovog celokupnog genoma (npr. duž 85%, 90%, 95% ili 99% ili duž njegovog celokupnog genoma). Druge pogodne sekvence za upotrebu u identifikaciji biotipskih sojeva mogu uklјučivati hsp60 ili ponavlјajuće sekvence poput BOX, ERIC, (GTG)n ili REP ili [17]. Biotipski sojevi mogu biti sa sekvencom koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična odgovarajućoj sekvenci bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382.

[0036] U određenim slučajevima, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku je sa genomom čija je sekvenca identična SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220. U poželјnim slučajevima, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku je sa genomom koji je najmanje 90% identičan sekvenci (npr. najmanje 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identičan sekvenci) SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž najmanje 60% (npr. najmanje 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%) SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220. Na primer, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku može biti sa genomom koji je najmanje 90% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 70% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 90% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 80% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 90% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 90% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 90% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 100% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 95% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 70% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 95% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 80% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 95% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 90% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 95% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 100% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 98% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 70% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 98% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 80% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 98% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 90% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 ili najmanje 98% identičan sekvenci SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220 duž 100% SEQ ID NO: 10 iz WO 2016/203220.

[0037] Alternativno, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, mogu biti identifikovani upotrebom deponovanih podataka sa pristupnim brojem NCIMB 42382 i analizom restrikcionih fragmenta i/ili PCR analizom, na primer upotrebom fluorescentne analize polimorfizma u dužini restrikcionih fragmenata (FAFLP) i PCR analize ponavlјajućih DNK elemenata (rep – “fingerprinting”) ili na osnovu profilisanja proteina ili delimičnog sekvenciranja 16S ili 23s rDNA. U poželјnim primerima izvođenja, navedene tehnike mogu biti upotrebljene za identifikaciju drugih sojeva Parabacteroides distasonis.

[0038] U određenim primerima izvođenja, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, su sojevi koji obezbeđuju isti obrazac restrikcione analize amplifikovane ribozomalne DNK (ARDRA) kao i bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382, na primer, kada se upotrebljava restrikcioni enzim Sau3AI (za primere postupaka i uputstva pogledati, na primer, [18]). Alternativno, biotipski sojevi se identifikuju kao sojevi koji imaju iste obrasce fermentacije uglјenih hidrata kao bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382.

[0039] Ostali sojevi Parabacteroides koji su korisni u kompozicijama i postupcima pronalaska, kao što su biotipovi bakterija deponovanih pod pristupnim brojem NCIMB 42382, mogu biti identifikovani upotrebom bilo kog odgovarajućeg postupka ili strategije, uklјučujući analize opisane u primerima. Na primer, sojevi za upotrebu u pronalasku mogu biti identifikovani kultivisanjem u anaerobnom YCFA i/ili primenom bakterija u mišjem modelu artritisa indukovanog kolagenom tipa II i potom ispitivanjem nivoa citokina. Preciznije, bakterijski sojevi koji su sa sličnim obrascima rasta, sličnog metaboličkog tipa i/ili sa sličnim površinskim antigenima kao bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382, mogu biti od koristi u pronalasku. Korisni soj će biti sa imunomodulatornom aktivnošću koja je uporediva sa aktivošću soja NCIMB 42382. Preciznije, biotipski soj će ispoljiti uporedive efekte u modelima bolesti astme, artritisa, multiple skleroze i uveitisa, kao i na nivoe citokina sa efektima koji su prikazani u Primerima, a koji mogu biti identifikovani upotrebom kultivisanja i protokola primene koji su opisani u Primerima.

[0040] Posebno poželјan soj predmetnog pronalaska je soj Parabacteroides distasonis koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Ovo je soj 755 za primer, koji je ispitivan u primerima i za koga je pokazano da je efektivan u lečenju oboljenja. Stoga, opis obezbeđuje ćeliju, kao što je izolovana ćelija, Parabacteroides distasonis soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Opis takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži ćeliju Parabacteroides distasonis soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Opis takođe obezbeđuje biološki čistu kulturu Parabacteroides distasonis soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42382. Opis obezbeđuje i ćeliju Parabacteroides distasonis soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42382 za upotrebu u terapiji, posebno terapiji oboljenja koja su ovde opisana.

[0041] Derivat soja deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42382 može biti kćerka-soj (potomstvo) ili soj kultivisan (subkloniran) od originala. Izvedeni soj opisa može biti modifikovan, na primer na genetičkom nivou, bez poništavanja biološke aktivnosti. Preciznije, izvedeni soj opisa je terapijski aktivan. Izvedeni soj će biti sa imunomodulatornom aktivnošću koja je uporediva sa istom kod originalnog NCIMB 42382 soja. Preciznije, izvedeni soj će ispolјiti uporedive efekte u modelima bolesti astme, artritisa, multiple skleroze i uveitisa, kao i efekte na nivoe citokina koji su uporedivi sa efektima koji su prikazani u Primerima, a koji mogu biti identifikovani upotrebom protokola kultivisanja i primene koji su opisani u Primerima. Derivat NCIMB 42382 soja će u principu biti biotip soja NCIMB 42382.

[0042] Upućivanje na ćelije Parabacteroides distasonis soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42382, podrazumeva bilo koje ćelije koje su sa istim karakteristikama bezbednosti i terapijske efikasnosti kao soj koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42382 i takve ćelije su obuhvaćene opisom.

[0043] U poželјnim primerima izvođenja, bakterijski sojevi u kompozicijama pronalaska su vijabilni i sposobni da delimično ili potpuno kolonizuju creva.

Terapijske upotrebe

[0044] Kao što je pokazano u primerima, bakterijske kompozicije pronalaska su efektivne u smanjenju Th17 inflamatornog odgovora. Preciznije, lečenje kompozicijama pronalaska omogućava postižanje smanjenja nivoa IL-17A i drugih citokina Th17 puta, kao i postizanje kliničkih pobolјšanja u animalnim modelima stanja posredovanih sa IL-17 i Th17 putem. Shodno navedenom, kompozicije koje su ovde opisane mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju inflamatornih i autoimunih oboljenja, naročito oboljenja ili stanja posredovanih sa IL-17. Preciznije, kompozicije koje su ovde opisane mogu biti korisne za smanjenje ili prevenciju porasta IL-17 inflamatornog odgovora.

[0045] Th17 ćelije su podskup T pomoćnih ćelija koje proizvode, na primer, IL-17A, IL17-F, IL-21 i IL-22. IL-23 može pokrenuti diferencijaciju Th17 ćelija i ekspresiju IL-17. Ovi i drugi citokini čine važne delove Th17 puta, što je dobro ustanovljen inflamatorni signalni put koji doprinosi i u osnovi je brojnih inflamatornih i autoimunih oboljenja (kao što je opisano u, na primer, [19-24]). Bolesti u kojima je aktiviran Th17 put su bolesti posredovane Th17 signalnim putem. Bolesti posredovane Th17 putem mogu biti poboljšane ili ublažene represijom Th17 puta, što može biti postignuto smanjenjem diferencijacije Th17 ćelija ili smanjenjem njihove aktivnosti ili smanjenjem nivoa citokina Th17 puta. Bolesti posredovane Th17 putem mogu biti okarakterisane povećanim nivoom citokina koji proizvode Th17 ćelije, kao što su IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-26, IL-9 (revijski pregled u [25]). Bolesti posredovane Th17 putem mogu biti okarakterisane pojačanom ekspresijom gena povezanih sa Th-17, kao što su Stat3 ili IL-23R. Bolesti posredovane Th17 putem mogu biti povezane sa povećanim nivoima Th17 ćelija.

[0046] IL-17 je pro-inflamatorni citokin koji doprinosi patogenezi nekoliko inflamatornih i autoimunih oboljenja i stanja. IL-17 se, kako se ovde upotrebljava, može odnositi na bilo kog člana IL-17 familije, uklјučujući IL-17A, IL-17B, IL-17C, IL-17D, IL-17E i IL-17F. Bolesti i stanja posredovana sa IL-17 karakteriše visoka ekspresija IL-17 i/ili nakuplјanje ili prisustvo IL-17 pozitivnih ćelija u tkivu koje je zahvaćeno bolešću ili stanjem. Slično navedenom, bolesti i stanja posredovana sa IL-17 predstavlјaju bolesti i stanja koja se pogoršavaju visokim nivoima IL-17 ili porastom nivoa IL-17 i koja se ublažavaju niskim nivoima IL-17 ili smanjenjem nivoa IL-17. Inflamatorni odgovor sa IL-17 može biti lokalni ili sistemski.

[0047] Primeri oboljenja i stanja koja mogu biti posredovani sa IL-17 ili sa Th17 putem uključuju multiplu sklerozu; artritis, kao što je reumatoidni artritis, osteoartritis, psorijatični artritis ili juvenilni idiopatski artritis; i dalje očni neuromijelitis (Devikova bolest); ankilozni spondilitis; spondiloartritis; psorijazu; sistemski eritematozni lupus; inflamatornu bolest creva, kao što je Kronova bolest ili ulcerozni kolitis; celijakiju; astmu, poput alergijske astme ili neutrofilne astme; hroničnu opstruktivnu bolest pluća (HOBP); kancer, poput kancera dojke, kancera debelog creva, kancera pluća ili kancera jajnika; uveitis; skleritis; vaskulitis; Behčetovu bolest; aterosklerozu; atopijski dermatitis; emfizem; periodontitis; alergijski rinitis; i odbacivanje alotransplantata. U poželјnim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane se upotrebljavaju za lečenje ili prevenciju jednog ili više od ovih stanja ili bolesti. U daljim poželјnim primerima izvođenja, ova stanja ili bolesti su posredovani sa IL-17 ili sa Th17 putem.

[0048] U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u postupku smanjenja proizvodnje IL-17 ili smanjenja diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u lečenju ili prevenciji inflamatornog ili autoimunog oboljenja, pri čemu se navedeno lečenje ili prevencija postižu smanjenjem ili prevencijom porasta Th17 inflamatornog odgovora. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u lečenju pacijenta sa inflamatornim ili autoimunim oboljenjem, pri čemu je pacijent sa povišenim nivoom IL-17 ili povišenim Th17 ćelijama ili ispoljava Th17 inflamatorni odgovor. U određenim primerima izvođenja, pacijentu može biti postavljena dijagnoza hroničnog inflamatornog ili autoimunog oboljenja ili stanja, ili kompozicija koja je ovde opisana može biti za upotrebu u prevenciji inflamatornog ili autoimunog oboljenja ili stanja koje će preći u hronično inflamatorno ili autoimuno obolјenje ili stanje. U određenim primerima izvođenja, kod oboljenja ili stanja ne dolazi do odgovara prilikom tretmana inhibitorima TNF-α. Navedene upotrebe kompozicije koja je ovde opisana, mogu biti primenjene na bilo koju specifičnu bolest ili na stanja koja su navedena u prethodnom paragrafu.

[0049] IL-17 i Th17 put su često povezani sa hroničnim inflamatornim i autoimunim oboljenjima, tako da kompozicije koje su ovde opisane mogu biti posebno korisne za lečenje ili prevenciju hroničnih oboljenja ili stanja koja su prethodno navedena. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu kod pacijenata sa hroničnim oboljenjem. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u prevenciji razvoja hroničnog oboljenja.

[0050] Kompozicije koje su ovde opisane mogu biti korisne za lečenje bolesti i stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem i za dejstvo na Th17 inflamatorni odgovor, tako da kompozicije koje su ovde opisane mogu biti posebno korisne za lečenje ili prevenciju hroničnog oboljenja, lečenje ili prevenciju oboljenja kod pacijenata koji nisu reagovali na druge terapije (kao što je terapija inhibitorima TNF-α) i/ili za lečenje ili prevenciju oštećenja tkiva i simptoma povezanih sa IL-17 i sa Th17 ćelijama. Na primer, za IL-17 je poznato da aktivira propadanje matriksa u hrskavičnom i koštanom tkivu, dok IL-17 ispoljava inhibitorni efekat na proizvodnju matriksa u hondrocitima i osteoblastima, tako da su kompozicije koje su ovde opisane korisne za lečenje ili prevenciju erozije kostiju ili oštećenja hrskavice.

[0051] U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama pronalaska omogućava smanjenje ili prevenciju povećanja nivoa IL-17, naročito nivoa IL-17A. U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama pronalaska obezbeđuje smanjenje ili prevenciju povećanja nivoa IFN-γ, IL-1β ili IL-6. Ovakvo smanjenje ili prevencija povišenih nivoa ovih citokina može biti korisno u lečenju ili prevenciji inflamatornih i autoimunih oboljenja i stanja, naročito onih koja su posredovana sa IL-17 ili Th17 putem.

Astma

[0052] U poželјnim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u lečenju ili prevenciji astme. Primeri pokazuju da kompozicije ovde opisane postižu smanjenje stepena regrutovanja neutrofila i/ili eozinofila u disajne puteve nakon senzibilizacije i izlaganju ekstraktu grinja iz kućne prašine i da tako mogu biti korisne u lečenju ili prevenciji astme. Astma je hronična bolest koju karakterišu inflamacija i ograničena prohodnost disajnih puteva. Inflamacija u astmi može biti posredovana sa IL-17 i/ili sa Th17 ćelijama, tako da kompozicije ovde oisane mogu biti posebno efektivne u prevenciji ili lečenju astme. Inflamacija u astmi može biti posredovana eozinofilima i/ili neutrofilima.

[0053] U određenim primerima izvođenja, astma je eozinofilna ili alergijska astma. Eozinofilnu i alergijsku astmu karakteriše povećani broj eozinofila u perifernoj krvi i sekrecija u disajnim putevima, a patološki je povezana sa zadeblјanjem zone bazalne membrane i farmakološkim odgovorom na kortikosteroide [26]. Kompozicije koje smanjuju ili inhibiraju regrutovanje ili aktivaciju eozinofila mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju eozinofilne i alergijske astme.

[0054] U dodatnim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neutrofilne astme (ili astme koja nije eozinofilna). Visok broj neutrofila je povezan sa teškom astmom koja može biti neosetlјiva na lečenje kortikosteroidima. Kompozicije koje smanjuju ili inhibiraju regrutovanje ili aktivaciju neutrofila mogu biti korisne u lečenju ili prevenciji neutrofilne astme.

[0055] Eozinofilna i neutrofilna astma nisu međusobno isklјučiva stanja i lečenja koja pomažu u odgovoru eozinofila i neutrofila, mogu biti korisna za lečenje astme uopšte.

[0056] Povećan nivo IL-17 i aktivacija Th17 puta su povezani sa ozbiljnom astmom, tako da kompozicije ovde opisane mogu biti korisne za prevenciju razvoja teške astme ili za lečenje teške astme.

[0057] U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u postupcima smanjenja eozinofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili prevenciji astme ili su za upotrebu u postupcima smanjenja neutrofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili prevenciji astme. Kao što je prethodno navedeno, visoki nivoi eozinofila u astmi su patološki povezani sa zadeblјanjem zone bazalne membrane, tako da smanjivanje eozinofilnog inflamatornog odgovora u lečenju ili prevenciji astme može omogućiti specifično dejstvo na ovu karakteristiku bolesti. Takođe, povišeni neutrofili, bilo u kombinaciji sa povišenim eozinofilima ili u njihovom odsustvu, povezani su sa teškom astmom i hroničnim suženjem disajnih puteva. Stoga, smanjenje neutrofilnog inflamatornog odgovora može biti posebno korisno u lečenju ozbiljne astme.

[0058] U određenim primerima izvođenja, kompozicije smanjuju peribronhiolarnu infiltraciju u alergijskoj astmi ili su za upotrebu u smanjenju peribronhiolarne infiltracije u lečenju alergijske astme. U određenim primerima izvođenja, kompozicije smanjuju peribronhiolarnu i/ili perivaskularnu infiltraciju u neutrofilnoj astmi ili su za upotrebu u smanjenju peribronhiolarne i/ili perivaskularne infiltracije u lečenju alergijske neutrofilne astme.

[0059] U određenim primerima izvođenja, lečenje ovde opisanim kompozicijama obezbeđuje smanjenje ili prevenciju povećanja nivoa IL-1b ili IFNγ.

[0060] U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u postupku lečenja astme čiji je rezultat smanjenje eozinofilnog i/ili neutrofilnog inflamatornog odgovora. U određenim primerima izvođenja, pacijent koji će biti lečen je sa, ili mu je prethodno identifikovano da je sa, povišenim neutrofilima ili eozinofilima, što može biti identifikovano, na primer, uzorkovanjem krvi ili analizom isplјuvka.

[0061] Kompozicije ovde opisane mogu biti korisne za prevenciju razvoja astme kod novorođenčadi, kada se primenjuju novorođenčetu ili trudnici. Kompozicije mogu biti korisne za prevenciju razvoja astme kod dece. Kompozicije ovde opisane mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju astme koja počinje u odraslom dobu. Kompozicije ovde oisane mogu biti korisne za kontrolu ili ublažavanje astme. Kompozicije ovde opisane mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa astmom koje pogoršavaju alergeni, kao što su grinje iz kućne prašine.

[0062] Lečenje ili prevencija astme se može odnositi, na primer, na ublažavanje obziljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili opsega okidača koji su problem za pacijenta.

Artritis

[0063] U poželјnim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u lečenju ili prevenciji reumatoidnog artritisa (RA). Primeri pokazuju da kompozicije ovde opisane postižu smanjenje kliničkih znakova RA u mišjem modelu, da smanjuju oštećenje hrskavice i kostiju, kao i da smanjuju IL-17 inflamatorni odgovor i da tako mogu biti korisne u lečenju ili prevenciji RA. RA je sistemski inflamatorni poremećaj koji primarno pogađa zglobove. RA je povezan sa inflamatornim odgovorom čiji je rezultat oticanje zglobova, sinovijalna hiperplazija i propadanje hrskavice i kostiju. IL-17 i Th17 ćelije mogu biti sa ključnom ulogom u RA, na primer, pošto IL-17 inhibira proizvodnju matriksa u hondrocitima i osteoblastima i aktivira proizvodnju i funkciju matriksnih metaloproteinaza, kao i pošto je aktivnost RA oboljenja u korelaciji sa nivoima IL-17 i brojevima Th-17 ćelija [27,28], tako da kompozicije ovde opisane mogu biti posebno efektivne u prevenciji ili lečenju RA.

[0064] U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u snižavanju nivoa IL-17 ili prevenciji povišenja nivoa IL-17 u lečenju ili prevenciji RA. U određenim primerima izvođenja, lečenje sa kompozicijama ovde opisanin obezbeđuje smanjenje ili sprečava povećanje nivoa IL-17, posebno nivoa IL-17A. U određenim primerima izvođenja, lečenje kompozicijama ovde opisanim obezbeđuje smanjenje ili sprečava povećanje nivoa IFN-γ ili IL-6.

[0065] U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja ovde opisanim kompozicijama je smanjenje oticanja zglobova. U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu kod pacijenata sa otečenim zglobovima ili kod pacijenata kod kojih je utvrđen rizik oticanja zglobova. U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u postupku smanjenja oticanja zgloba u RA.

[0066] U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenje kompozicijama ovde opisanim je smanjenje oštećenja hrskavice ili oštećenja kostiju. U određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji oštećenja hrskavice ili kostiju u lečenju RA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju pacijenata sa teškim RA kod kojih je prisutan rizik oštećenja hrskavice ili kostiju.

[0067] Povećani nivoi IL-17 i brojeva Th17 ćelija su povezani sa propadanjem hrskavice i kostiju u RA [27,28]. Poznato je da IL-17 aktivira razaranje matriksa u tkivu hrskavice i kostiju, kao i da IL-17 ispoljava inhibitorni efekat na proizvodnju matriksa u hondrocitima i osteoblastima. Stoga, u određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za upotrebu u prevenciji erozije kostiju ili oštećenja hrskavice u lečenju RA. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju pacijenata kod kojih je prisutna erozija kostiju ili oštećenje hrskavice ili pacijenata kod kojih je identifikovan rizik od erozije kostiju ili oštećenja hrskavice.

[0068] TNF-α je takođe povezan sa RA, ali TNF-α nije uklјučen u patogenezu kasnijih stadijuma oboljenja. Nasuprot navedenom, IL-17 ima ulogu u svim fazama ovog hroničnog oboljenja [29]. Stoga, u određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju hroničnog RA ili RA kasnog stadijuma, kao što su oboljenja koja uključuju propadanje zglobova i gubitak hrskavice. U određenim primerima izvođenja, kompozicije ovde opisane su za lečenje pacijenata koji su prethodno primali anti-TNF terapiju. U određenim primerima izvođenja, pacijenti koji se leče su oni koji ne reaguju ili ne reaguju više na anti-TNF-α terapiju.

[0069] Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za modulisanje imunog sistema pacijenta, tako da su, u određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije za upotrebu u prevenciji RA kod pacijenta kod koga je identifikovan rizik RA ili kod koga je postavljena dijagnoza ranog RA. Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za prevenciju razvoja RA.

[0070] Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za kontrolu ili ublažavanje RA. Ovde opisane kompozicije mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa oticanjem zgloba ili oštećenjem kostiju. Lečenje ili prevencija RA se može odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili spektra okidača koji su problem za pacijenta.

Multipla skleroza

[0071] U poželјnim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju ili prevenciji multiple skleroze. Primeri pokazuju da ovde opisane kompozicije postižu smanjenje incidence oboljenja i ozbiljnosti oboljenja u mišjem modelu multiple skleroze (EAE model) i da tako mogu biti korisni u lečenju ili prevenciji multiple skleroze. Multipla skleroza je inflamatorni poremećaj povezan sa oštećenjem mijelinskih omotača neurona, posebno u mozgu i kičmenoj moždini. Multipla skleroza je hronična bolest koja dovodi do progresivnog onesposoblјavanja i koja se razvija u epizodama. IL-17 i Th17 ćelije mogu imati klјučnu ulogu kod multiple skleroze, na primer, pošto nivoi IL-17 mogu biti u korelaciji sa lezijama multiple skleroze i pošto IL-17 može poremetiti tesne veze endotelijalnih ćelija krvno-moždane barijere, dok Th17 ćelije mogu migrirati u centralni nervni sistem i prouzrokovati gubitak neurona [30,31]. Stoga, ovde opisane kompozicije mogu biti posebno efektivne u prevenciji ili lečenju multiple skleroze.

[0072] U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja ovde opisanim kompozicijama je smanjenje incidence oboljenja ili ozbiljnosti oboljenja. U određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u smanjenju incidence oboljenja ili ozbiljnosti oboljenja. U određenim primerima izvođenja, lečenje ovde opisanim kompozicijama sprečava pad motorne funkcije ili je rezultat lečenja poboljšanje motorne funkcije. U određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u prevenciji pada motorne funkcije ili su za upotrebu u pobolјšanju motorne funkcije. U određenim primerima izvođenja, lečenje ovde opisanim kompozicijama sprečava razvoj paralize. U određenim primerima izvođenja, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u prevenciji paralize prilikom lečenja multiple skleroze.

[0073] Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za modulisanje imunog sistema pacijenta, tako da su u određenim primerima izvođenja ovde opisane kompozicije za upotrebu u prevenciji multiple skleroze kod pacijenta kod koga je identifikovan rizik za multiplu sklerozu ili kome je postavljena dijagnoza multiple skleroze ranog stadijuma ili "relapsno-remitentne" multiple skleroze. Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za prevenciju razvoja skleroze. Zaista, primeri pokazuju da je primena ovde opisanih kompozicija sprečila razvoj bolesti kod mnogih miševa.

[0074] Ovde opisane kompozicije mogu biti korisne za kontrolu ili ublažavanje multiple skleroze. Ovde opisane kompozicije mogu biti posebno korisne za smanjenje simptoma povezanih sa multiplom sklerozom. Lečenje ili prevencija multiple skleroze se može odnositi, na primer, na ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili smanjenje učestalosti pogoršanja ili spektra okidača koji predstavlјaju problem za pacijenta.

Uveitis

[0075] U poželјnim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane za upotrebu u lečenju ili prevenciji uveitisa. Primeri pokazuju da kompozicije koje su ovde opisane postižu smanjenje incidence i ozbiljnosti oboljenja u životinjskom modelu uveitisa i da tako mogu biti korisne u lečenju ili prevenciji uveitisa. Uveitis je upala uvee i može dovesti do razaranja tkiva mrežnjače. Može biti prisutna u različitim anatomskim oblicima (anteriornom, intermedijernom, posteriornom ili difuznom) i biti rezultat različitih, ali srodnih uzroka, uklјučujući sistemske autoimune poremećaje. IL-17 i Th17 put su centralno uklјučeni u uveitis, tako da kompozicije koje su ovde opisane mogu biti posebno efektivne za prevenciju ili lečenje uveitisa. Reference [32-39] opisuje povišene nivoe interleukina-17A kod bolesnika sa uveitisom, specifičnu povezanost genetičkih varijanti IL17A sa panuveitisom, ulogu citokina povezanih sa Th17 u patogenezi eksperimentalnog autoimunskog uveitisa, neravnotežu između Th17 ćelija i regulatornih T ćelija za vreme monofaznog eksperimentalnog autoimunskog uveitisa, povećanu ekspresiju IL-17A kod pacijenata sa uveitisom i aktivnim Adamantiades-Behčetovom i Vogt-Kovanagi-Harada (VKH) bolestima, lečenje neinfektivnog uveitisa sa sekukinumabom (anti-IL-17A antitelo), kao i Th17 u uveitičnim očima.

[0076] U određenim primerima izvođenja, uveitis je posteriorni uveitis. Posteriorni uveitis primarno podrazumeva upalu mrežnjače i horoidee, a primeri pokazuju da su ovde opisane kompozicije efektivne u smanjenju inlfamacije i oštećenja mrežnjače.

[0077] U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja kompozicijama koje su ovde opisane je smanjenje oštećenja mrežnjače. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji oštećenja mrežnjače u lečenju uveitisa. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za upotrebu u lečenju pacijenata sa teškim uveitisom koji su sa rizikom oštećenja mrežnjače. U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja kompozicijama koje su ovde opisane je smanjenje upale optičkog diska. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji upale optičkog diska. U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja kompozicijama koje su ovde opisane je smanjenje infiltracije inflamatornih ćelija u tkivo mrežnjače. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u smanjenju infiltracije inflamatornih ćelija u tkivo mrežnjače. U određenim primerima izvođenja, rezultat lečenja kompozicijama koje su ovde opisane je održanje ili pobolјšanje vida. U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u održanju ili pobolјšanju vida.

[0078] U određenim primerima izvođenja, kompozicije koje su ovde opisane su za upotrebu u lečenju ili prevenciji uveitisa povezanog sa neinfektivnim ili autoimunim oboljenjem, kao što je Behčetova bolest, Kronova bolest, Fuhsov heterohromni iridociklitis, granulomatoza sa poliangiitisom, uveitis povezan sa HLA-B27, juvenilni idiopatski artritis, sarkoidoza, spondiloartritis, simpatička oftalmija, tubulointersticijski nefritis i uveitisni sindrom ili Vogt-Kovanagi-Harada sindrom. Pokazano se da je IL-17A uklјučen u, na primer, Behčetovu i Vogt-Kovanagi-Harada bolest.

[0079] Lečenje ili prevencija uveitisa se može odnositi na, na primer, ublažavanje ozbiljnosti simptoma ili prevenciju recidiva.

Kancer

[0080] Kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera debelog creva . IL-17 i Th17 put imaju centralne uloge u razvoju i napredovanju kancera, i prema tome kompozicije prema pronalasku mogu biti korisne u lečenju ili sprečavanju kancera.

[0081] Mada se uloge IL-17 i Th17 ćelija kod kancera ne razumeju potpuno, poznati su brojni pro-tumourni efekti IL-17 i Th17 ćelija. Na primer, Th17 ćelije i IL-17 mogu pospešivati angiogenezu, povećavati proliferaciju i preživljavanje ćelija tumora i transkripcionih faktora koji pospešuju aktiviranje tumora [40-42].

[0082] U izvesnim izvođenjima, lečenje sa kompozicijama prema pronalasku dovodi do smanjenja veličine tumora ili smanjenja rasta tumora. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora ili smanjenju rasta tumora. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne u smanjenju veličine ili rasta tumora. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu kod pacijenata sa čvrstim tumorom. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju ili prevenciji angiogeneze u lečenju kancera. IL-17 i Th17 ćelije imaju centralne uloge u angiogenezi. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u sprečavanju metastaza.

[0083] U izvesnim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera grudi. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne u lečenju kancera grudi, i IL-17 i Th17 ćelije imaju važne uloge u kanceru grudi [43]. U izvesnim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora ili smanjenju angiogeneze u lečenju kancera grudi. U poželjnim izvođenjima kancer je karcionom mlečnih žlezdi . U poželjnim izvođenjima kancer je kancer grudi IV stadijuma.

[0084] U izvesnim izvođenjima, opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne u lečenju kancera pluća, i IL-17 i Th17 ćelije imaju važne uloge u kanceru pluća [44]. U izvesnim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenja rasta tumora, ili smanjenja angiogeneze u lečenju tumora pluća. U poželjnim izvođenjima kancer je karcinom pluća.

[0085] Uizvesnim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera jetre. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne u lečenju kancera jetre, i IL-17 i Th17ćelije imaju važne uloge u kanceru jetre [45]. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u smanjenju veličine tumora, smanjenju rasta tumora, ili smanjenju angiogeneze u lečenju kancera jetre. U poželjnim izvođenjima kancer je hepatoma (hepatocelularni karcinom).

[0086] U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenju ili prevenciji karcinoma. Kompozicije prema pronalasku mogu biti naročito efikasne u lečenju karcinoma. U izvesnim izvođenjima, kompozicije prema pronalasku su za upotrebu u lečenje u neimunogenog kancera. Kompozicije prema pronalasku mogu biti efikasne u lečenju neimunogenih kancera.

[0087] U drigim izvođenjima, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju ili prevenciji akutne limfoblastične leukemije (ALL), akutne limfoidne leukemije, adrenokortikoidnog karcinoma, karcinoma bazalnih ćelija, kancera žučnih puteva, kancera bešike, tumora kostiju, osteosarkoma/malignog fibroznog histiocitoma, glioma moždanog stabla, tumora mozga, cerebelarnog astrocitoma, cerebralnog astrocitoma/malignog glioma, ependimoma, meduloblastoma, supratentorijalni primitivni neuroektodermalni tumori, kanceri grudi, bronhijalni adenomi/karcinoidi, Burkit-ov limfomi, karcinoidni tumor, cervikalni kancer, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, hronični mijeloproliferativni poremećaji, kancer debelog creva, limfom kutanoznih T-ćelija, endometrijalni kancer, ependimom, ezofagusni kancer, Evingov sarkom, intraokularni melanom, retinoblastom, kancer žučne kese, karcinom želudca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), tumor polnih ćelija, gliom, dečiji optički put i hipotalamičnost, Hodgkin-ov limfom, melanoma, karcinom ćelija ostrvaca, Kapošijev sarkom, kancer bubrežnih ćelija, laringalni kancer, leukemije, limfomi, mezotelijom, neuroblastom, ne-Hodgkinov limfom, orofaringealni kancer, osteosarkom, kancer jajnika, kancer pankreasa, paratireoidni kancer, kancer faringsa, adenom hipofize, neoplazija ćelija plazme, kancer prostate, karcinom bubrežnih ćelija, retinoblastom, sarkom, kancer testisa, tireoidni kancer, ili kancer uterusa.

[0088] Kompozicije prema pronalasku mogu biti naročito efikasne kada se koriste u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvima. Imuno-modulatorni efekti kompozicija prema pronalasku mogu biti efikasni kada se kombinuju sa direktnim lekovima protiv kancera. Prema tome, u izvesnim izvođenjima, opis obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides i sredstvo protiv kancera. U poželjnim izvođenjima sredstvo protiv kancera je inhibitor imune kontrolne tačke, ciljana imunoterapija antitelom, terapija CAR-T ćelijama, onkolitični virus, ili citostatički lek. U poželjnim izvođenjima, kompozicija sadrži sredstvo protiv kancera izabrano iz grupe koju čine: Yervoy (ipilimumab, BMS); Keytruda (pembrolizumab, Merck); Opdivo (nivolumab, BMS); MEDI4736 (AZ/Medlmmune);MPDL3280A (Roche/Genentech); Tremelimumab (AZ/MedImmune); CT-011 (pidilizumab, CureTech); BMS-986015 (lirilumab, BMS); MEDI0680 (AZ/Medlmmune); MSB-0010718C (Merck); PF-05082566 (Pfizer); MEDI6469 (AZ/Medlmmune); BMS-986016 (BMS); BMS-663513 (urelumab, BMS); IMP321 (Prima Biomed); LAG525 (Novartis); ARGX-110 (arGEN-X); PF-05082466 (Pfizer); CDX-1127 (varlilumab; CellDex Therapeutics); TRX-518 (GITR Inc.); MK-4166 (Mer EP 3549592 B1 ck); JTX-2011 (Jounce Therapeutics); ARGX-115 (arGEN-X); NLG-9189 (indoximod, NewLink Genetics); INCB024360 (Incyte); IPH2201 (Innate Immotherapeutics/AZ); NLG-919 (NewLink Genetics); anti-VISTA (JnJ); Epacadostat (INCB24360, Incyte); F001287 (Flexus/BMS); CP 870893 (University of Pennsylvania); MGA271 (Macrogenix); Emactuzumab (Roche/Genentech); Galunisertib (Eli Lilly); Ulocuplumab (BMS); BKT140/BL8040 (Biokine Therapeutics); Bavituksimab (Peregrine Pharmaceuticals); CC 90002 (Celgene); 852A (Pfizer); VTX-2337 (VentiRx Pharmaceuticals); IMO- 2055 (Hybridon, Idera Pharmaceuticals); LY2157299 (Eli Lilly); EW-7197 (Ewha Women’s University, Korea); Vemurafenib (Plexxikon); Dabrafenib (Genentech/GSK); BMS-777607 (BMS); BLZ945 (Memorial Sloan-Kettering Cancer Centre); Unituxin (dinutuksimab, United Therapeutics Corporation); Blincyto (blinatumomab, Amgen); Cyramza (ramucirumab, Eli Lilly); Gazyva (obinutuzumab, Roche/Biogen); Kadcyla (adotrastuzumab emtansin, Roche/Genentech); Perjeta (pertuzumab, Roche/Genentech); Adcetris (brentuksimab vedotin, Takeda/Millennium); Arzerra (ofatumumab, GSK); Vectibix (panitumumab, Amgen); Avastin (bevacizumab, Roche/Genentech); Erbitux (cetuksimab, BMS/Merck); Bexxar (tositumomab-I131, GSK); Zevalin (ibritumomab tiuksetan, Biogen); Campath (alemtuzumab, Bayer); Mylotarg (gemtuzumab ozogamicin, Pfizer); Herceptin (trastuzumab, Roche/Genentech); Rituxan (rituksimab, Genentech/Biogen); volociksimab (Abbvie); Enavatuzumab (Abbvie); ABT-414 (Abbvie); Elotuzumab (Abbvie/BMS); ALX-0141 (Ablynx); Ozaralizumab (Ablynx); Actimab-C (Actinium); Actimab-P (Actinium); Milatuzumab-dox (Actinium); Emab-SN-38 (Actinium); Naptumonmab estafenatox (Active Biotech); AFM13 (Affimed); AFM11 (Affimed); AGS-16C3F (Agensys); AGS-16M8F (Agensys); AGS-22ME (Agensys); AGS-15ME (Agensys); GS-67E (Agensys); ALXN6000 (samalizumab, Alexion); ALT- 836 (Altor Bioscience); ALT-801 (Altor Bioscience); ALT-803 (Altor Bioscience); AMG780 (Amgen); AMG 228 (Amgen); AMG820 (Amgen); AMG172 (Amgen); AMG595 (Amgen); AMG110 (Amgen); AMG232 (adecatumumab, Amgen); AMG211 (Amgen/MedImmune); BAY20-10112 (Amgen/Bayer); Rilotumumab (Amgen); Denosumab (Amgen); AMP- 514 (Amgen); MEDI575 (AZ/MedImmune); MEDI3617 (AZ/MedImmune); MEDI6383 (AZ/MedImmune); MEDI551 (AZ/MedImmune); Moxetumomab pasudotox (AZ/Medlmmune); MEDI565 (AZ/Medlmmune); MEDI0639 (AZ/Medlmmune); MEDI0680 (AZ/Medlmmune); MEDI562 (AZ/Medlmmune); AV-380 (AVEO); AV203 (AVEO); AV299 (AVEO); BAY79-4620 (Bayer); Anetumab ravtansin (Bayer); vantictumab (Bayer); BAY94-9343 (Bayer); Sibrotuzumab (Boehringer Ingleheim); BI-836845 (Boehringer Ingleheim); B-701 (BioClin); BIIB015 (Biogen); Obinutuzumab (Biogen/Genentech); BI-505 (Bioinvent); BI-1206 (Bioinvent); TB-403 (Bioinvent); BT-062 (Biotest) BIL-010t (Biosceptre); MDX- 1203 (BMS); MDX-1204 (BMS); Necitumumab (BMS); CAN-4 (Cantargia AB); CDX-011 (Celldex); CDX1401 (Celldex); CDX301 (Celldex); U3-1565 (Daiichi Sankyo); patritumab (Daiichi Sankyo); tigatuzumab (Daiichi Sankyo); nimotuzumab (Daiichi Sankyo); DS-8895 (Daiichi Sankyo); DS-8873 (Daiichi Sankyo); DS-5573 (Daiichi Sankyo); MORab-004 (Eisai); MORab-009 (Eisai); MORab-003 (Eisai); MORab-066 (Eisai); LY3012207 (Eli Lilly); LY2875358 (Eli Lilly); LY2812176 (Eli Lilly); LY3012217(Eli Lilly); LY2495655 (Eli Lilly); LY3012212 (Eli Lilly); LY3012211 (Eli Lilly); LY3009806 (Eli Lilly); ciksutumumab (Eli Lilly); Flanvotumab (Eli Lilly); IMC-TR1 (Eli Lilly); Ramucirumab (Eli Lilly); Tabalumab (Eli Lilly); Zanolimumab (Emergent Biosolution); FG-3019 (FibroGen); FPA008 (Five Prime Therapeutics); FP-1039 (Five Prime Therapeutics); FPA144 (Five Prime Therapeutics); katumaksomab (Fresenius Biotech); IMAB362 (Ganymed); IMAB027 (Ganymed); HuMax-CD74 (Genmab); HuMax-TFADC (Genmab); GS-5745 (Gilead); GS-6624 (Gilead); OMP-21M18 (demcizumab, GSK); mapatumumab (GSK); IMGN289 (ImmunoGen); IMGN901 (ImmunoGen); IMGN853 (ImmunoGen); IMGN529 (ImmunoGen); IMMU-130 (Immunomedics); milatuzumab-dox (Immunomedics); IMMU-115 (Immunomedics); IMMU-132 (Immunomedics); IMMU-106 (Immunomedics); IMMU-102 (Immunomedics); Epratuzumab (Immunomedics); Clivatuzumab (Immunomedics); IPH41 (Innate Immunotherapeutics); Daratumumab (Janssen/Genmab); CNTO-95 (Intetumumab, Janssen); CNTO-328 (siltuximab, Janssen); KB004 (KaloBios); mogamulizumab (Kyowa Hakko Kirrin); KW-2871 (ecromeksimab, Life Science); Sonepcizumab (Lpath); Margetuximab (Macrogenics); Enoblituzumab (Macrogenics); MGD006 (Macrogenics); MGF007 (Macrogenics); MK-0646 (dalotuzumab, Merck); MK-3475 (Merck); Sym004 (Symphogen/Merck Serono); DI17E6 (Merck Serono); MOR208 (Morphosys); MOR202 (Morphosys); Xmab5574 (Morphosys); BPC-1C (ensituksimab, Precision Biologics); TAS266 (Novartis); LFA102 (Novartis); BHQ880 (Novartis/Morphosys); QGE031 (Novartis); HCD122 (lukatumumab, Novartis); LJM716 (Novartis); AT355 (Novartis); OMP-21M18 (Demcizumab, OncoMed); OMP52M51 (Oncomed/GSK); OMP-59R5 (Onomed/GSK); vantiktumab (Oncomed/Bayer); CMC-544 (inotuzumab ozogamicin, Pfizer); PF-03446962 (Pfizer); PF-04856884 (Pfizer); PSMA-ADC (Progenics); REGN1400 (Regeneron); REGN910 (nesvacumab, Regeneron/Sanofi); REGN421 (enoticumab, Regeneron/Sanofi); RG7221, RG7356, RG7155, RG7444, RG7116, RG7458, RG7598, RG7599, RG7600, RG7636, RG7450, RG7593, RG7596, DCDS3410A, RG7414 (parsatuzumab), RG7160 (imgatuzumab), RG7159 (obintuzumab), RG7686, RG3638 (onartuzumab), RG7597 (Roche/Genentech); SAR307746 (Sanofi); SAR566658 (Sanofi); SAR650984 (Sanofi); SAR153192 (Sanofi); SAR3419 (Sanofi); SAR256212 (Sanofi), SGN-LIV1A (lintuzumab, Seattle Genetics); SGN-CD33A (Seattle Genetics); SGN-75 (vorsetuzumab mafodotin, Seattle Genetics); SGN-19A (Seattle Genetics) SGN-CD70A (Seattle Genetics); SEA-CD40 (Seattle Genetics); ibritumomab tiuksetan (Spectrum); MLN0264 (Takeda); ganitumab (Takeda/Amgen); CEP-37250 (Teva); TB-403 (Thrombogenic); VB4-845 (Viventia); Xmab2512 (Xencor); Xmab5574 (Xencor); nimotuzumab (YM Biosciences); Carlumab (Janssen); NY-ESO TCR (Adaptimmune); MAGE-A-10 TCR (Adaptimmune); CTL019 (Novartis); JCAR015 (Juno Therapeutics); KTE-C19 CAR (Kite Pharma); UCART19 (Cellectis); BPX-401 (Bellicum Pharmaceuticals); BPX-601 (Bellicum Pharmaceuticals); ATTCK20 (Unum Therapeutics); CAR-NKG2D (Celyad); Onyx-015 (Onyx Pharmaceuticals); H101 (Shanghai Sunwaybio); DNX-2401 (DNAtrix); VCN-01 (VCN Biosciences); Colo-Adl (PsiOxus Therapeutics); ProstAtak (Advantagene); Oncos-102 (Oncos Therapeutics); CG0070 (Cold Genesys); Pexa-vac (JX-594, Jennerex Biotherapeutics); GL-ONC1 (Genelux); T-VEC (Amgen); G207 (Medigene); HF10 (Takara Bio); SEPREHVIR (HSV1716, Virttu Biologics); OrienX010 (OrienGene Biotechnology); Reolysin (Oncolytics Biotech); SVV-001 (Neotropix); Cacatak (CVA21, Viralytics); Alimta (Eli Lilly), cisplatin, oksaliplatin, irinotekan, folinska kiselina, metotreksat, ciklofosfamid, 5-fluorouracil, Zykadia (Novartis), Tafinlar (GSK), Xalkori (Pfizer), Iressa (AZ), Gilotrif (Boehringer Ingelheim), Tarceva (Astellas Pharma), Halaven (Eisai Pharma), Veliparib (Abbvie), AZD9291 (AZ), Alectinib (Chugai), LDK378 (Novartis), Genetespib (Synta Pharma), Tergenpumatucel-L (NewLink Genetics), GV1001 (Kael-GemVax), Tivantinib (ArQule); Citoksan (BMS); Onkovin (Eli Lilly); Adriamicin (Pfizer); Gemzar (Eli Lilly); Xeloda (Roche); Ixempra (BMS); Abraxane (Celgene); Trelstar (Debiopharm); Taxotere (Sanofi); Nexavar (Bayer); IMMU-132 (Immunomedics); E7449 (Eisai); Thermodox (Celsion); Cometriq (Exellxis); Lonsurf (Taiho Pharmaceuticals);Camptosar (Pfizer); UFT (Taiho Pharmaceuticals); i TS-1 (Taiho Pharmaceuticals).

Načini primene

[0089] Poželјno je da se kompozicije pronalaska primenjuju u gastrointestinalni trakt da bi se omogućili isporuka do i/ili delimična ili potpuna kolonizacija creva sa bakterijskim sojem pronalaska. U principu, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno, ali one mogu biti primenjene i rektalno, intranazalno ili bukalnim ili sublingvalnim načinima primene.

[0090] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti primenjene u vidu pene, spreja ili gela.

[0091] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska mogu biti primenjene kao supozitorije, kao što su rektalne supozitorije, na primer u vidu kompozicija sa teobromskim ulјem (kakao puterom), sintetskim tvrdim mastima (npr. sa Suppocire, Witepsol-om), glicero-želatinom, polietilen glikolom i sapunom glicerina.

[0092] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska se primenjuje u gastrointestinalni trakt putem cevčice, kao što je nazogastrična cev, orogastrična cev, gastrična cev, jejunostomska cev (J cev), perkutana endoskopska gastrostomska cev (PEG) ili kroz otvor, kao što je otvor u grudnom zidu koji obezbeđuje pristup želucu, jejunumu, ili kao što je neki drugi pogodan pristupni otvor.

[0093] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjene jednom ili mogu biti primenjene sekvencijalno, kao deo režima lečenja. U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za svakodnevnu primenu.

[0094] U određenim primerima izvođenja pronalaska, lečenje prema pronalasku je udruženo sa analizom mikrobioma creva pacijenta. Tretman može biti ponovljen ukoliko se ne postigne isporuka i/ili delimična ili potpuna kolonizacija sojem pronalaska tako da se uočava efikasnost, ili lečenje može biti prekinuto ukoliko je isporuka i/ili delimična ili potpuna kolonizacija uspešna i primeti se efikasnost.

[0095] U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska može biti primenjena životinjama tokom trudnoće, na primer, sisaru, kao što je čovek, da bi se sprečio razvoj inflamatornog ili autoimunog oboljenja kod deteta in utero i/ili nakon što se rodi.

[0096] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjene pacijentu kome je postavljena dijagnoza bolesti ili stanja posredovanog sa IL-17 ili sa Th17 putem ili kome je identifikovano da je sa rizikom razvoja bolesti ili stanja posredovanog sa IL-17 ili sa Th17 putem. Kompozicije takođe mogu biti primenjene kao profilaktička mera za prevenciju razvoja bolesti ili stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem kod zdravog pacijenta.

[0097] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjene pacijentu za koga je identifikovano da je sa poremećenom mikrobiotom creva. Na primer, pacijent može biti sa smanjenjem ili bez kolonizacije sa Parabacteroides, a posebno Parabacteroides distasonis.

[0098] Kompozicije pronalaska mogu biti primenjene u vidu prehrambenog proizvoda, kao što je dodatak ishrani.

[0099] U principu, kompozicije pronalaska su za lečenje lјudi, mada mogu biti upotrebljene za lečenje životinja uklјučujući monogastrične sisare, poput živine, svinja, mačaka, pasa, konja ili zečeva. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za povećanje rasta i performansi životinja. Ukoliko se primenjuju životinjama, može biti upotrebljena oralna gavaža.

Kompozicije

[0100] Generalno, kompozicija pronalaska sadrži bakterije. U poželјnim primerima izvođenja pronalaska, kompozicija je formulisana u obliku dobijenom sušenjem putem zamrzavanja. Na primer, kompozicija pronalaska može činiti granule ili želatinske kapsule, na primer tvrde želatinske kapsule, koje sadrže bakterijski soj pronalaska.

[0101] Poželјno je da kompozicija pronalaska sadrže liofilizovane bakterije. Liofilizacija bakterija je dobro ustanovljena procedura i odgovarajuće smernice su dostupne, na primer, u referencama [46-48].

[0102] Alternativno, kompozicija pronalaska može sadržavati živu, aktivnu bakterijsku kulturu.

[0103] U poželјnim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je inkapsulirana tako da se omogući isporuka bakterijskog soja u creva. Inkapsulacija štiti kompoziciju od razgradnje do isporuke na cilјnu lokaciju, na primer, putem rupture hemijskim ili fizičkim stimulusima poput pritiska, enzimske aktivnosti ili fizičkog razlaganja, koji mogu biti pokrenuti promenama pH. Može biti upotrebljen bilo koji odgovarajući postupak inkapsulacije. Pogodna tehnika inkapsulacije obuhvata ugradnju u porozni matriks, vezivanje ili apsorpciju na površine čvrstih nosača, autoagregaciju flokulacijom ili sredstvima za umrežavanje, kao i mehaničko zadržavanje iza mikroporozne membrane ili mikrokapsule. Smernice za inkapsulaciju koje mogu biti korisne za pripremanje kompozicija pronalaska su dostupne, na primer, u referencama [49] i [50].

[0104] Kompozicija može biti primenjena oralno i može biti u obliku tablete, kapsule ili praška. Inkapsulirani proizvodi su poželјniji, pošto su Parabacteroides anaerobi. Ostali sastojci (kao što je, na primer, vitamin C) mogu biti uključeni kao agensi za prikupljanje slobodnih radikala kiseonika i prebiotički supstrati, a radi pobolјšanja isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije i preživlјavanja in vivo. Alternativno, probiotička kompozicija pronalaska može biti primenjena oralno kao hrana ili prehrambeni proizvod, kao što je fermentisan proizvod na bazi mleka ili surutke, ili kao farmaceutski proizvod.

[0105] Kompozicija može biti formulisana kao probiotik.

[0106] Kompozicija pronalaska uključuje terapijski efektivnu količinu bakterijskog soja pronalaska. Terapijski efektivna količina bakterijskog soja je dovolјna da ispolji povoljan efekat kod pacijenta. Terapijski efektivna količina bakterijskog soja može biti dovolјna da rezultat bude isporuka do i/ili delimična ili potpuna kolonizacija creva pacijenta.

[0107] Pogodna dnevna doza bakterija, na primer, za odraslog čoveka, može biti od oko 1 x 10<3>do oko 1 x 10<11>jedinica obrazovanja kolonija (CFU); na primer, od oko 1 x 10<7>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<10>CFU.

[0108] U određenim primerima izvođenja, kompozicija sadrži soj bakterija u količini od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<11>CFU/g, uzimajući u obzir težinu kompozicije; na primer, od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<10>CFU/g. Doza može biti, na primer, 1 g, 3 g, 5 g i 10 g.

[0109] Uobičajeno je da se probiotik, kao što je kompozicija pronalaska, opciono kombinuje sa najmanje jednim pogodnim prebiotičkim jedinjenjem. Prebiotičko jedinjenje je obično nesvarivi uglјeni hidrat, kao što je oligo- ili polisaharid ili alkohol šećera koji se ne razgrađuje ili ne apsorbuje u gornjem digestivnom traktu. Poznati prebiotici uključuju komercijalne proizvode poput inulina i transgalakto-oligosaharida.

[0110] U određenim primerima izvođenja, probiotička kompozicija predmetnog pronalaska uključuje prebiotičko jedinjenje u količini od oko 1 do oko 30 težinskih% u odnosu na ukupnu težinu kompozicije (npr. od 5 do 20 težinskih%). Uglјeni hidrati mogu biti izabrani iz grupe koja se sastoji od: frukto-oligosaharida (ili FOS), frukto oligosaharida kratkog lanca, inulina, izomalt-oligosaharida, pektina, ksilo-oligosaharida (ili XOS), hitozanoligosaharida (ili COS), beta-glukana, skrobova modifikovanih gumom akacije i rezistentnih skrobova, polidekstroze, D-tagatoze, vlakna akacije, rogača, ovsa i citrusnih vlakna. Prema jednom aspektu, prebiotici su frukto-oligosaharidi kratkog lanca (radi jednostavnosti, u tekstu koji sledi su prikazani kao FOS-c.c); navedeni FOS-c.c nisu svarlјivi uglјeni hidrati, obično se dobijaju konverzijom šećera repe i uklјučuju molekul saharoze za koji su vezana tri molekula glukoze.

[0111] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatlјive ekscipijense ili nosače. Primeri takvih pogodnih pomoćnih sastojaka se mogu naći u referenci [51]. Prihvatlјivi nosači ili razblaživači za terapijsku upotrebu su dobro poznati u farmaceutskoj struci i opisani su, na primer, u referenci [52]. Primeri pogodnih nosača uklјučuju laktozu, skrob, glukozu, metil celulozu, magnezijum stearat, manitol, sorbitol i slične. Primeri pogodnih razblaživača uklјučuju etanol, glicerol i vodu. Izbor farmaceutskog nosača, ekscipijensa ili razblaživača može biti u skladu sa planiranim načinom primene i standardnom farmaceutskom praksom. Farmaceutske kompozicije mogu sadržavati kao nosač, eksipijens ili razblaživač, ili kao njihov dodatak, bilo koji pogodan/pogodne agens(e) za povezivanje, lubrikant(e), resuspendujući(e) agens(e), agens(e) za oblaganje, agens(e) za rastvaranje. Primeri pogodnih agenasa za povezivanje obuhvataju skrob, želatin, prirodne šećere poput glukoze, anhidrovane laktoze, laktoze dobre fluidnosti, beta-laktoze, zaslađivača kukuruza, kao i prirodne i sintetske gume kao što su guma akacije, tragakanta ili natrijum-alginata, i dalje karboksimetil celulozu i polietilen glikol. Primeri pogodnih lubrikanata obuhvataju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. U farmaceutskoj kompoziciji mogu biti obezbeđeni i konzervansi, stabilizatori, boje, pa čak i arome. Primeri konzervansa uklјučuju natrijum benzoat, sorbinsku kiselinu i estre p-hidroksibenzoeve kiseline. Antioksidansi i agensi za resuspendovanje takođe mogu biti upotrebljeni.

[0112] Kompozicije pronalaska mogu biti formulisane kao prehrambeni proizvod. Na primer, prehrambeni proizvod može obezbediti prehrambene koristi pored terapijskog efekta pronalaska, kao što to može biti slučaj sa dodatkom ishrani. Slično navedenom, prehrambeni proizvod može biti formulisan tako da se pojača ukus kompozicije pronalaska ili da se kompozicija učini privlačnijom za konzumiranje, time što je sličnija uobičajenom prehrambenom proizvodu, a ne farmaceutskoj kompoziciji. U određenim primerima izvođenja, kompozicija pronalaska je formulisana kao proizvod na bazi mleka. Izraz "proizvod na bazi mleka" označava bilo koji tečni ili polučvrsti proizvod na bazi mleka ili surutke koji je sa različitim sadržajem masti. Proizvod na bazi mleka može biti, na primer, kravlјe mleko, kozje mleko, ovčje mleko, obrano mleko, punomasno mleko, mleko dobijeno rastvaranjem iz mleka i surutke u prahu, bez ikakve prerade, ili prerađeni proizvod, kao što su jogurt, mleko nakon sirenja, surutka, kiselo mleko, punomasno kiselo mleko, mlečna pavlaka i ostali kiseli mlečni proizvodi. Druga važna grupa obuhvata mlečne napitke, kao što su napici od surutke, fermentisana mleka, kondenzovana mleka, mleka za odojčad i bebe; mleka sa ukusom, sladoled; hrana koja sadrži mleko, poput slatkiša.

[0113] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska sadrže jedan bakterijski soj ili vrstu i ne sadrže druge bakterijske sojeve ili vrste. Takve kompozicije mogu sadržavati samo de minimis ili biološki nerelevantne količine drugih bakterijskih sojeva ili vrsta. Ovakve kompozicije mogu predstavljati kulturu koja suštinski oslobođena od drugih vrsta organizama.

[0114] Kompozicije za upotrebu u skladu sa pronalaskom mogu ili ne moraju zahtevati odobrenje prodaje.

[0115] U određenim slučajevima, liofilizovan soj bakterija se rekonstituiše pre primene. U pojedinim slučajevima, rekonstitucija je upotrebom razblaživača koji je ovde opisan.

[0116] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatlјive ekscipijense, razblaživače ili nosače.

[0117] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koji sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatlјiv ekscipijens, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini koja je dovoljna za lečenje poremećaja kada se primenjuje subjektu kome je lečenje potrebno; i pri čemu je poremećaj izabran iz grupe koja se sastoji od astme, alergijske astme, neutrofilne astme, osteoartritisa, psorijatičnog artritisa, juvenilnog idiopatskog artritisa, optičkog neuromielitisa (Devikove bolesti), ankiloznog spondilitisa, spondiloartritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, celijakije, hronične opstruktivne bolesti pluća (HOBP), kancera, kancera dojke, kancera debelog creva, kancera pluća, kancera jajnika, uveitisa, skleritisa, vaskulitisa, Behčetove bolesti, ateroskleroze, atopijskog dermatitisa, emfizema, periodontitisa, alergijskog rinitisa i odbacivanje alotranslplantata.

[0118] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatlјiv ekscipijens, nosač ili razblaživač; pri čemu je bakterijski soj u količini koja je dovolјna za lečenje ili prevenciju bolesti ili stanja posredovanog sa IL-17 ili sa Th17 putem. U poželјnim primerima izvođenja, navedna bolest ili stanje je izabrano iz grupe koja se sastoji od reumatoidnog artritisa, multiple skleroze, psorijaze, inflamatorne bolesti creva, Kronove bolesti, ulceroznog kolitisa, celijakije, astme, alergijske astme, neutrofilne astme, osteoartritisa, psorijatičnog artritisa, juvenilog idiopatskog artritisa, optičkog neuromijelitisa (Devikove bolesti), ankilozirajućeg spondilitisa, spondiloartritisa, sistemskog eritematoznog lupusa, hronične opstruktivne bolesti pluća (HOBP), kancera, kancera dojke, kancera debelog creva, kancera pluća, kancera jajnika, uveitisa, skleritisa, vaskulitisa, Behčetove bolesti, ateroskleroze, atopijskog dermatitisa, emfizema, periodontitisa, alergijskog rinitisa i odbacivanje alotranslplantata.

[0119] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je količina bakterijskog soja od 1 X 10<3>do oko 1 X 10<11>jedinica obrazovanja kolonija po gramu u odnosu na težinu kompozicije.

[0120] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje u dozi od 1 g, 3 g, 5 g ili 10 g.

[0121] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje postupkom izabranim iz grupe koja se sastoji od oralne, rektalne, subkutane, nazalne, bukalne i sublingvalne primene.

[0122] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži nosač izabran iz grupe koju čine laktoza, skrob, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, manitol i sorbitol.

[0123] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži razblaživač izabran iz grupe koja se sastoji od etanola, glicerola i vode.

[0124] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži ekscipijens izabran iz grupe koja se sastoji od skroba, želatina, glukoze, anhidrovane laktoze, laktoze dobre fluidnosti, beta-laktoze, zaslađivača kukuruza, akacije, tragakanta, natrijum alginata, karboksimetil celuloze, polietilen glikola, natrijum oleata, natrijum stearata, magnezijum stearata, natrijum benzoata, natrijum acetata i natrijum hlorida.

[0125] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju koja dalјe sadrži najmanje jedan konzervans, antioksidans i stabilizator.

[0126] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži konzervans izabran iz grupe koja se sastoji od natrijum-benzoata, sorbinske kiseline i estara phidroksibenzoeve kiseline.

[0127] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je navedeni bakterijski soj liofilizovan.

[0128] U određenim primerima izvođenja, pronalazak obezbeđuje prethodno opisanu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija skladišti u zaptivenoj posudi na oko 4°C ili oko 25°C i posuda za skladištenje se smešta u atmosferu sa relativnom vlažnošću od 50%, pri čemu najmanje 80% bakterijskog soja izmerenog u jedinicama obrazovanja kolonija ostaje nakon perioda od najmanje oko: 1 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine.

Postupci kultivisanja

[0129] Bakterijski sojevi za upotrebu u predmetnom pronalasku mogu biti kultivisani upotrebom standardnih mikrobioloških tehnika koje su detalјno opisane, na primer, u referencama [53-55].

[0130] Čvrsti ili tečni medijumi koji se upotrebljavaju za kulturu ćelija mogu biti YCFA agar ili YCFA medijum. YCFA medijum može sadržavati (na 100 ml, približne vrednosti): kaziton (1,0 g), ekstrakt kvasca (0,25 g), NaHCO3 (0,4 g), cistein (0,1 g), K2HPO4 (0,045 g), KH2PO4 (0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4 (0,09 g), MgSO4 · 7H2O (0,009 g), CaCl2 (0,009 g), resazurin (0,1 mg), hemin (1 mg), biotin (1 µg), kobalamin (1 µg), p-aminobenzoevu kiselinu (3 µg), folnu kiselinu (5 µg) i piridoksamin (15 µg).

Bakterijski sojevi za upotrebu u kompozicijama tipa vakcina

[0131] Pronalazači su identifikovali da su bakterijski sojevi pronalaska korisni u lečenju ili prevenciji bolesti ili stanja posredovanih sa IL-17 ili Th17 putem. Navedeno je verovatno rezultat dejstva koji bakterijski sojevi pronalaska imaju na imuni sistem domaćina. Stoga, kompozicije pronalaska mogu takođe biti korisne za prevenciju bolesti ili stanja posredovanih sa IL-17 ili sa Th17 putem kada se primenjuju kao kompozicije tipa vakcina. U određenim takvim primerima izvođenja, bakterijski sojevi pronalaska mogu biti ubijeni, inaktivirani ili oslabljeni. U određenim takvim primerima izvođenja, kompozicije mogu sadržavati ajduvans za vakcine. U određenim primerima izvođenja, kompozicije su za primenu putem injekcije, kao što je putem subkutane injekcije.

Opšte smernice

[0132] Praksa pronalaska će koristiti, ukoliko nije drugačije naznačeno, konvencionalne postupke hemije, biohemije, molekularne biologije, imunologije i farmakologije, odnosno mogućnosti ovih oblasti tehnike. Ovakve tehnike su u celosti objašnjene u literaturi. Pogledati, npr. reference [56] i [57-63] itd.

[0133] Izraz "koji sadrži" obuhvata "uklјučujući" kao i "koji se sastoji", npr. kompozicija "koja sadrži" X se može sastojati isklјučivo od X ili može sadržavati nešto dodatno, npr. X Y.

[0134] Termin "oko/otprilike" u odnosu na brojčanu vrednost x je opcion i označava, na primer, x±10%.

[0135] Reč "suštinski" ne isklјučuje "u potpunosti" npr. kompozicija koja je "suštinski oslobođena" od Y može biti potpuno oslobođena Y. Gde je potrebno, reč "suštinski" može biti izostavljena iz definicije pronalaska.

[0136] Upućivanje na procenat identiteta sekvence između dve nukleotidne sekvence označava da je, kada su poravnate, taj procenat nukleotida isti prilikom poređenja dve sekvence. Ovakvo poravnanje i procenat homologije ili identiteta sekvenci može biti određen upotrebom kompjuterskih programa koji su poznati u stanju tehnike, na primer onih koji su opisani u odelјku 7.7.18 reference [64]. Poželјno je da se poravnanje vrši Smith-Waterman-ovim algoritmom za pretraživanje homologije, upotrebom afine pretrage razmaka (praznina, engl. gap) sa ograničenjem za uvođenje praznine od 12 i ograničenjem dužine praznine od 2, kao i uz BLOSUM matricu od 62. Smith-Waterman-ov algoritmom za pretraživanje homologije je opisan u ref. [65].

[0137] Ukoliko nije izričito navedeno, proces ili postupak koji sadrži brojne korake može sadržavati dodatne korake na početku ili na kraju postupka ili može sadržavati dodatne korake intervencije. Takođe, koraci se mogu kombinovati, izostaviti ili izvoditi alternativnim redosledom, ukoliko je tako pogodno.

[0138] Ovde su opisani razni primeri izvođenja pronalaska. Potrebno je napomenuti da se karakteristike koje su navedene u svakom primeru izvođenja mogu kombinovati sa drugim određenim karakteristikama da bi se obezbedili dalji primeri izvođenja. Preciznije, primeri izvođenja koji su ovde istaknuti kao pogodni, obično se ili je poželjno da se mogu kombinovati jedni sa drugima (osim kada se međusobno isklјučuju).

PRIMERI

Primer 1 – Efikasnost bakterijskih inokula u mišjem modelu astme izazvane grinjama iz kućne prašine Kratak pregled

[0139] Miševima su primenjivane kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve predmetnog pronalaska, pa su naknadno izlagani ekstraktima grinja kućne prašine (HDM, od enlg. House Dust Mite) da bi se izazvao alergijski inflamatorni odgovor. Inflamatorni odgovor na HDM uklјučuje eozinofilne i neutrofilne komponente, posredovan je sa IL-17 i Th17 putem i predstavlјa model astme. Obim i karakteristike inflamatornog odgovora koji su ispoljili miševi miševi tretirani kompozicijama, bio je uporediv sa odgovorom koji je utvrđen kod kontrolnih grupa. Utvrđeno je naime da kompozicije pronalaska ublažavaju inflamatorni odgovor i smanjuju regrutovanje eozinofila i neutrofila, što ukazuje da one mogu biti korisne u lečenju stanja posredovanih sa IL-17 i Th17, kao što su eozinofilija, neutrofilija i astma.

Soj

755: Parabacteroides distasonis

Dizajn studije

[0140] Grupe:

1. Grupa negativne kontrole. Kontrolni tretman sa nosačem (oralna primena).

5. Tretman terapijskim bakterijskim inokulumom soja 755 (oralna primena).

7. Grupa pozitivne kontrole. Tretman deksametazonom (i.p.).

8. Netretirana kontrolna grupa.

Broj miševa po grupi = 5

[0141] Dani od -14 do 13: Svakodneva primena kontrolnog nosača oralnim putem (Grupa 1).

Dani od -14 do 13: Svakodneva primena terapijskog bakterijskog inokuluma oralnim putem (Grupa 2-6).

Dan 0, 2, 4, 7, 9, 11 Primena 15ug HDM (ekstrakt grinja kućne prašine - kataloški broj: XPB70D3A25, broj serije: 231897, Greer Laboratories, Lenoir, NC, SAD) u zapremini od 30ul PBS-a, nazalna primena (Grupa 1-8).

Dan 0, 2, 4, 7, 9, 11 Primena deksametazona (i.p., 3 mg/kg, Sigma-Aldrich, kataloški broj D1159) (Grupa 7). Dan 14. Žrtvovanje svih životinja radi analize.

Ukupan broj miševa = 40.

Završetak studije i analiza

[0143] Četrnaestog dana, životinje su žrtvovane letalnom intraperitonealnom injekcijom pentabarbitola (Streuli Pharma AG, Uznach, kat. br: 1170139A), nakon čega je odmah sledilo bronhoalveolarno ispiranje (lavaža; BAL).

[0144] Ćelije su izolovane iz BAL tečnosti (tečnosti bronhoalveolarne lavaže) i urađeno je diferencijalno brojanje ćelija (200 ćelija/uzorcima).

Materijal i metode

[0145] Miševi. Ženke BALB/c miševa stare 7 nedelja su nabavljene od firme Charles River Laboratories i nasumično su raspodeljene u kaveze tako da ukupno bude 5 miševa po kavezu (kavezi sa ventilacijom nabavljeni od firme Indulab AG, Gams, Švajcarska - tip kaveza: "The SealsafeTM - IVC cage". Broj proizvoda 1248L). Kavezi su obeleženi brojem studije, brojem grupe i datumom početka eksperimenta. Miševi su nadgledani nedeljno i aklimatizovani su na uslove odgajivačnice tokom 7 dana pre početka studije (Dan studije označen kao -14). Životinje su Dana -14 bile stare 8 nedelјa. Pitka voda i hrana su bili dostupni ad libitum. U kavezima je bila obezbeđena obogaćena sredina. Svakodnevna briga o životinjama je sprovođena u skladu sa lokalnom dozvolom broj 2283.1 (izdatom i odobrenom od strane: Service de la consommation et des affaires veterinaires du Canton de Vaud). Pitka voda i hrana su bili dostupni ad libitum i menjani su jedan put dnevno. U kavezima je bila obezbeđena obogaćena sredina. Poštovana je regulativa o dobrobiti životinja propisana od strane zvaničnih vlasti Švajcarske, uredbom 455.163 FVO (Federalna veterinarska kancelarija) o uzgoju laboratorijskih životinja, proizvodnji genetički modifikovanih životinja i postupcima eksperimentisanja na životinjama.

[0146] Kultivisanje bakterijskog inokuluma. Unutar sterilne radne stanice, bočice za krio-prezervaciju su otopljene zagrevanjem u ruci sa rukavicom, pa je ~0,7 ml sadržaja injecirano u Hangejtovu epruvetu (kat.br: 1020471, Glasgeratebau Ochs, Bovenden-Lenglern, Nemačka) koja je sadržavala 8 ml anaerobnog YCFA. Obično su pripremane dve epruvete po soju. Hangejtove epruvete su zatim inkubirane (statički) na 37°C tokom 16 h (za soj 755).

[0147] Kultivisanje kontrole sa nosačem. Hangejtova epruveta koja je sadržavala 8 ml anaerobnog YCFA je inkubirana (statički) na 37°C tokom 16 h.

[0148] Primena bakterijskog inokuluma ili kontrole sa nosačem. Svakog dana je primenjivano po 400ul kultivisanih bakterijskih inokuluma ili kontrole tipa nosača, oralnom gavažom.

[0149] Intranazalna senzibilizacija. Miševi su anestezirani i.p., injeciranjem 9,75 mg ksilazola i 48,75 mg ketazola po kg (Dr. E. Graeub AG, Bern, Švajcarska), nakon čega je primenjivano 15ug HDM-a (kataloški broj: XPB70D3A25, broj serije: 231897, Greer Laboratories, Lenoir, NC, SAD) u zapremini od 30ul PBS, nazalnim putem.

[0150] Priprema i primena pozitivnog kontrolnog jedinjenja, Deksametazona. Deksametazon-21-fosfat-u vidu soli dinatrijuma (Sigma-Aldrich, kataloški broj D1159, serija br. SLBD.1030V) je rastvoren u H2O i oralno je primenjen životinjama u dozi od 3mg/kg u zapremini od 200ul, danima koji su naznačeni u prethodno navedenom protokolu studije.

[0151] Terminalna procedura. Na Dan 14, životinje su žrtvovane letalnom i.p. injekcijom pentabarbitola (Streuli Pharma AG, Uznach, kat. br: 1170139A) i odmah je urađena bronhoalveolarna lavaža (BAL) sa 500 ul fiziološkog rastvora.

[0152] Merenje ćelijskih infiltrata u BAL. Ćelije su izolovane iz BAL tečnosti i urađeno je diferencijalno brojanje ćelija na osnovu standardnih morfoloških i citohemijskih kriterijuma.

[0153] Grafici i statistička analiza. Svi grafici su generisani upotrebom Graphpad Prism programa, verzije 6, i primenom jednofaktorskog ANOVA testa. Rezultati statističke analize su obezbeđeni u vidu tabela sa pojedinačnim podacima. Greške predstavlјaju standardnu grešku srednje vrednosti (SEM).

Rezultati i analize

[0154] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slikama 1-9.

[0155] Kod miševa koji su tretirani bakterijama ili nosačem nije utvrđen morbiditet ili mortalitet. Dve kontrole, tretirane nosačem (negativna kontrola) i deksametazonom (pozitivna kontrola), ponašale su se kao što je očekivano, a poremećaji tipa eozinofilije i neutrofilije su uočeni nakon tretmana sa deksametazonom.

[0156] Najvažniji rezultati ovog eksperimenta su prikazani na Slikama 6 i 7, gde je prijavljen ukupan broj i procenat neutrofila koji je detektovan pri bronhiolarnoj lavaži nakon primene HDM-a. Rezultat primene soja 755 je statistički značajno smanjenje ukupnih neutrofila i proporcije neutrofila u BAL u odnosu na broj kod kontrola koje su bile tretirane samo nosačem.

Primer 2 - Efikasnost bakterijskih inokula u mišjem modelu teške neutrofilne astme

Kratak pregled

[0157] Miševima su primenjene kompozicije koje su sadržavale bakterijske sojeve predmetnog pronalaska i potom je urađena senzibilizacija, subkutanim primenama ekstrakta grinja iz kućne prašine (HDM), kao i intranazalnom primenom HDM-a, da bi se uspostavio model inflamatornog odgovora teške neutrofilne astme. Obim i karakteristike inflamatornog odgovora koji je ispoljen kod miševa tretiranih kompozicijama pronalaska, upoređivani su sa kontrolnim grupama. Utvrđeno je da kompozicije pronalaska ublažavaju inflamatorni odgovor, odnosno da posebno smanjuju regrutovanje neutrofila na način koji je uporediv sa smanjenjem koje se uočava kod pozitivne kontrole kojoj su primenjivana anti-IL-17 antitela. Podaci stoga ukazuju da kompozicije pronalaska mogu biti korisne u lečenju stanja povezanih sa IL-17- i Th17, kao što su to neutrofilija i astma.

Soj

[0158] 755: Parabacteroides distasonis

Dizajn studije

Grupe:

[0159]

1. Grupa negativne kontrole. Kontrolni tretman sa nosačem (oralna primena).

5. Tretman terapijskim bakterijskim inokulumom soja 755 (oralna primena).

7. Grupa pozitivne kontrole. Tretman anti-IL-17 antitelima (i.p.).

8. Netretirana kontrolna grupa.

9: Zdravi miševi (bazalna vrednost).

Broj miševa po grupi (Grupa 1-8) = 5

[0160] Dani od -14 do 17: Svakodneva primena kontrolnog nosača oralnim putem (Grupa 1).

Dani od -14 do 17: Svakodneva primena terapijskih bakterijskih inokuluma oralnim putem (Grupa 2-6).

Dan 0: Senzibilizacija sa HDM-om u CFA (s.c.) (Grupa 1-8).

Dan 7: Senzibilizacija sa HDM-om u CFA (s.c.) (Grupa 1-8).

Dan 13, 15, 17: Primena anti IL-17 neutrališućih antitela (i.p.) (Grupa 7).

Dan 14, 15, 16, 17: Izlaganje HDM-u u 30ul PBS (nazalno) (Grupa 1-8).

Dan 18: Žrtvovanje svih životinja radi analize.

Završetak studije i analiza

[0161] Četrnaestog dana, životinje su žrtvovane letalnom intraperitonealnom injekcijom pentabarbitola (Streuli Pharma AG, Uznach, kat. br: 1170139A), nakon čega je odmah sledila bronhoalveolarna lavaža (BAL). Ćelije su izolovane iz BAL tečnosti i urađeno je diferencijalno brojanje ćelija (200 ćelija/uzorcima).

Materijal i metode

[0162] Miševi. Ženke BALB/c miševa stare 7 nedelja su nabavljene od firme Charles River Laboratories i nasumično su raspodeljene u kaveze tako da ukupno bude 5 miševa po kavezu (kavezi sa ventilacijom nabavljeni od firme Indulab AG, Gams, Švajcarska - tip kaveza: "The SealsafeTM - IVC cage". Broj proizvoda 1248L). Kavezi su obeleženi brojem studije, brojem grupe i datumom početka eksperimenta. Miševi su nadgledani nedeljno i aklimatizovani su na uslove odgajivačnice tokom 7 dana pre početka studije (Dan studije označen kao -14). Životinje su Dana -14 bile stare 8 nedelјa. Pitka voda i hrana su bili dostupni ad libitum. U kavezima je bila obezbeđena obogaćena sredina. Svakodnevna briga o životinjama je sprovođena u skladu sa lokalnom dozvolom broj 2283.1 (izdatom i odobrenom od strane: Service de la consommation et des affaires veterinaires du Canton de Vaud). Pitka voda i hrana su bili dostupni ad libitum i menjani su jedan put dnevno. U kavezima je bila obezbeđena obogaćena sredina. Poštovana je regulativa o dobrobiti životinja propisana od strane zvaničnih vlasti Švajcarske, uredbom 455.163 FVO (Federalna veterinarska kancelarija) o uzgoju laboratorijskih životinja, proizvodnji genetički modifikovanih životinja i postupcima eksperimentisanja na životinjama.

[0163] Kultivisanje bakterijskog inokuluma. Unutar sterilne radne stanice, bočice za krio-prezervaciju su otopljene zagrevanjem u ruci sa rukavicom, pa je ~0,7 ml sadržaja injecirano u Hangejtovu epruvetu (kat.br.

1020471, Glasgeratebau Ochs, Bovenden-Lenglern, Nemačka) koja je sadržavala 8 ml anaerobnog YCFA. Obično su pripremane dve epruvete po soju. Hangejtove epruvete su zatim inkubirane (statički) na 37°C tokom 16 h (za soj 755).

[0164] Kultivisanje kontrole sa nosačem. Hangejtova epruveta koja je sadržavala 8 ml anaerobnog YCFA je inkubirana (statički) na 37°C tokom 16 h.

[0165] Primena bakterijskog inokuluma ili kontrole sa nosačem. Svakog dana je primenjivano po 400ul kultivisanih bakterijskih inokuluma ili kontrole tipa nosača, oralnom gavažom.

[0166] Senzibilizacija sa HDM. 50 µg HDM-a (kataloški broj: XPB70D3A25, serijski broj: 231897, Greer Laboratories, Lenoir, NC, SAD) u PBS-u je emulgovano u jednakoj količini kompletnog Frojndovog adjuvansa (CFA Chondrex Inc. Washington, SAD), pa je subkutano primenjeno u zapremini od 200 µl, dva puta tokom dve nedelјe, injeciranjem u suprotne bočne strane tela. Nedelju dana nakon druge imunizacije, miševi su anestezirani, i.p. injeciranjem 9,75 mg ksilazola i 48,75 mg ketazola po kg (Dr. E. Graeub AG, Bern, Švajcarska), a zatim je intranazalno primenjeno 15 µg HDM-a u zapremini od 30ul PBS-a, 4 dana zaredom. Analiza je rađena jedan dan nakon finalnog izlaganja.

[0167] Priprema i primena anti-IL-17 antitela kao pozitivnog kontrolnog jedinjenja. Neutrališuće anti-IL-17 antitelo je nabavljeno od firme Bio X Cell i čuvano je na 4°C (klon 17F3, kat. br: BE0173, Bio X Cell), pa je primenjeno i.p., u dozi od 12,5 mg/kg, danima koji su navedeni u prethodno opisanom protokolu studije.

[0168] Terminalna procedura. Dana 18, životinje su žrtvovane letalnom i.p. injekcijom pentabarbitola (Streuli Pharma AG, Uznach, kat. br: 1170139A), a zatim je odmah urađena bronhoalveolarna lavaža (BAL) sa 500 ul fiziološkog rastvora.

[0169] Merenje ćelijskih infiltrata u BAL. Ćelije su izolovane iz BAL tečnosti i urađeno je diferencijalno brojanje ćelija na osnovu standardnih morfoloških i citohemijskih kriterijuma.

[0170] Grafici i statistička analiza. Svi grafici su generisani upotrebom Graphpad Prism programa, verzije 6, i primenom jednofaktorskog ANOVA testa. Rezultati statističke analize su obezbeđeni u vidu tabela sa pojedinačnim podacima. Greške predstavlјaju standardnu grešku srednje vrednosti (SEM).

Rezultati i analize

[0171] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slikama 10-18.

[0172] Kod miševa koji su tretirani bakterijama ili nosačem nije utvrđen morbiditet ili mortalitet. Kao što je prikazano na Slikama 15 i 16, soj 755 je bio veoma efikasan u ublažavanju obima neutrofilnog inflamatornog odgovora. Dodatno, soj 755 je smanjio broj eozinofila u odnosu na kontrole, kao što je prikazano na Slikama 11 i 12.

Materijali i metode

Soj

[0173] 755: Parabacteroides distasonis

Bakterijske kulture

[0174] Bakterijske kulture za primenu su gajene u anaerobnim radnim stanicama (Don Whitley Scientific).

[0175] Bakterijski soj #755 je uzgajan upotrebom koncentrovanih rastvora glicerola. Koncentrovani rastvor glicerola je čuvan na -80°C. Tri puta nedelјno, osnovni rastvor glicerola je odmrzavan na sobnoj temperaturi i nanošen je na YCFA ploče. Svaki put je upotrebljen nov alikvot koncentrovanog rastvora glicerola. Bakterijama je dozvoljeno da rastu na navednoj ploči do 72 sata.

[0176] Rastvori koji su primenjivani životinjama su pripremani dva puta dnevno, uz interval između jutarnjeg (AM) i popodnevnog (PM) tretmana od 8 sati. Kolonija bakterija je uzeta sa zasejane ploče i prebačena je u epruvetu koja je sadržavala YCFA medijum. Bakterijski soj #755 je ostavljen da raste tokom 24 sata pre AM primene. Bakterije su subkultivisane za PM primenu kao 1%, u YCFA medijumu. Vrednosti OD su beležene za svaki soj nakon pripreme jutarnjih i popodnevnih tretmana.

Mišji model artritisa indukovan kolagenom tipa II

[0177] Odrasli mužjaci DBA/1 miševa su nasumično raspoređeni u eksperimentalne grupe i ostavlјeni da se aklimatizuju tokom dve nedelјe. Dana 0, životinjama je subkutanim injeciranjem primenjeno po 100 mikrolitara emulzije koja je sadržavala 100 mikrograma kolagena tipa II (CII) u nekompletnom Frojndovom adjuvansu i u koji je bilo dodato i 4 mg/ml Mycobacterium tuberculosis H37Ra. Dana 21, životinjama je primenjena subkutana injekcija sa buster emulzijom koja je sadržavala 100 µg kolagena tipa II u nekompletnom Frojndovom adjuvansu.

[0178] Tretmani su primenjivani u skladu sa rasporedom primene koji je naveden u tekstu koji sledi. Od Dana -14 do kraja eksperimenta (Dana 45), životinjama je tri puta nedelјno merena telesna težina. Od Dana 21 do kraja eksperimenta, kod životinja su tri puta nedelјno praćeni i klinički znaci artritisa koji su podrazumevali oticanje zadnjih i prednjih šapa, radiokarpalnih zglobova (prednjih šapa) i tibio-tarzalnih zglobova (gležnjeva).

[0179] Dana 45, miševi su isključeni iz studije i prikupljeni su terminalni uzorci krvi za analizu citokina.

[0180] Dana -14, Dana 0 i Dana 45 su prikupljeni i uzorci fecesa za mikrobiološku analizu koji su odmah zamrznuti i čuvani na -80°C.

[0181] Mišji model artritisa izazvan kolagenom (CIA) je dobro uspostavljen mišji model reumatoidnog artritisa [66]. Imunizacija sa CII izaziva patogenezu koja uklјučuje nekoliko važnih patoloških karakteristika reumatoidnog artritisa, uklјučujući sinovijalnu hiperplaziju, infiltraciju mononuklearnih ćelija i razgradnju hrskavice. Značajno je da je razvoj CIA posredovan Th17 ćelijama putem sekrecije IL-17A [67]. Imuni odgovor u osnovi modela artritisa je pojačavan upotrebom Frojndovog adjuvansa u koji je dodavan Mycobacterium tuberculosis.

[0182] Dana 21, prikuplјene su slezine iz tri dodatne životinje u okviru svake grupe. Ćelije su gajene tokom 72 sata u prisustvu ili odsustvu kolagena tipa II. Citokini, uklјučujući TNF-α, IL-6, IFN-γ, IL-4, IL-10 i IL-17, su kvantifikovani u supernatantima kulture i terminalnom serumu upotrebom Luminex analize. Proliferacija ćelija je kvantifikovana upotrebom postupka ugradnje timidina koji je bio obeležen tricijumom.

Grupe i doze tretmana

[0183] Sve grupe su bile sa n=15 (n=12 za glavnu studijsku grupu i n=3 za dodatne grupe)

[0184] Nosač upotrebljen za bioterapeutike je bio medijum sa ekstraktom kvasca, kazitonom i sa masnim kiselinama (YCFA, od engl. Yeast extract-Casitone-Fatty Acids).

Telesne težine

[0185] Od Dana -14 do kraja eksperimenta, životinjama je tri puta nedeljno merena telesna težina. Podaci su predstavljeni u vidu grafikona (srednja vrednost ± SEM).

Nespecifična klinička zapažanja

[0186] Od Dana -14 do kraja eksperimenta, kod životinja je svakodnevno praćeno prisustvo nespecifičnih kliničkih znaka, uklјučujući odstupanje u držanju (zgrčenost), abnormalno stanje dlake (piloerekciju) i abnormalne nivoe aktivnosti (smanjenu ili povećanu aktivnost).

Klinička zapažanja

[0187] Od Dana 21 do kraja eksperimenta, Dana 45, životinjama su tri puta nedelјno određivani klinički znaci artritisa koji su obuhvatali oticanje zadnjih i prednjih šapa, radiokarpalnih zglobova (prednjih šapa) i tibiotarzalnih zglobova (gležnja zadnjih šapa). Svaki ekstremitet je ocenjivan upotrebom sledeće skale: (0) normalno, (1) neznatno oticanje, (2) blago oticanje, (3) umereno oticanje i (4) jako oticanje. Klinički rezultat je izračunat sabiranjem svih rezultata za svaki ud. Maksimum mogućeg kliničkog skora za životinju je iznosio (16). Životinje sa skorom jednakim (12) u dva uzastopna pregleda i životinje sa skorom većim od (12) u bilo kojoj prilici, bile su isključivane iz dalje analize. Podaci su prikazani u vidu grafika (srednja vrednost ± SEM).

Analiza ćelijske proliferacije

[0188] Dana 21, po tri tzv. dodatne životinje po grupi su isključene iz studije i disekovane su im sležine. Ćelije slezine su gajene u kulturi tokom 72 sata u prisustvu ili odsustvu kolagena tipa II. Nakon 72 sata, ćelije su izložene dejstvu timidina obeleženog tricijumom. Proliferacija ćelije je kvantifikovana merenjem ugradnje timidina. Podaci su prikazani u vidu grafikona (srednja vrednost ± SEM). Zatim su uzeti supernatanti i ispitano je prisustvo klјučnih citokina.

Analiza citokina

[0189] Terminalni supernatanti iz kultura ćelije slezine su ispitani da bi se kvantifikovali TNF-α, IL-6, IFN-γ, IL-4, IL-10 i IL-17 upotrebom Luminex analize. Podaci su prikazani u vidu grafikona (srednja vrednost ± SEM).

Mikrobiološka analiza

[0190] Dana -14, Dana 0 i Dana 45, od svake životinje su prikupljeni uzorci fecesa koji su odmah zamrznuti i čuvani na -80° C. Slepo crevo (uklјučujući sadržaj) je trenutno smrznuto i čuvano na -80° C. Test za identifikaciju bakterija je rađen svakodnevno, zasejavanjem bakterija.

Histopatologija

[0191] Na kraju eksperimenta, zadnje šape su ubačene u fiksativ za tkiva. Uzorci su zatim preneti u rastvor za dekalcifikaciju. Uzorci tkiva su obrađeni, isečeni i obojeni hematoksilinom i eozinom. Preseci su analizirani od strane kvalifikovanog histopatologa koji nije bio upoznat sa dizajnom eksperimenta i procenjivani su znaci artritisa koji su uključivali inflamaciju, oštećenje hrskvice zglobova i oštećenja metafizne kosti koja se nalazila ispod. Upotreblјen je detalјan sistem bodovanja (pogledati ispod). Podaci su prikazani u vidu grafika (srednja vrednost ± SEM). Navedeni su sirovi i analizirani podaci, kao i reprezentativne slike.

Tabela 1: Sistem histopatološkog bodovanja

Gradus Opis

Inflamacija

0 Normalan zglob

1 Blaga sinovijalna hiperplazija sa upalom u kojoj dominiraju neutrofili. Nizak broj neutrofila i makrofaga u prostoru zgloba.

2 Sinovijalna hiperplazija sa umerenom do izraženom inflamacijom koja uključuje i neutrofile i makrofage. Neutrofili i makrofagi u prostoru zgloba; može biti prisutno nešto debrisa nekrotičnog tkiva.

3 Sinovijalna hiperplazija sa izraženom inflamacijom koja uklјučuje i neutrofile i makrofage.

Gubitak sinovocitne ovojnice. Inflamacija može biti proširena sa sinovijuma na okolno tkivo, uklјučujući mišić. Brojni neutrofili i makrofagi u prostoru zgloba, zajedno sa značajnim debrisom nekrotičnog tkiva.

Oštećenje zglobnih hrskavica

0 Normalan zglob

1 Samo blaga degenerativna promena zglobne hrskavice. Periferno mogu biti obrazovane rane promene tipa fibroznog/granulacionog tkiva (pannus-i).

2 Umerena degenerativna promena i prisustvo žarišta gubitka zglobne hrskavice. Formacije pannus-a su prisutne fokalno.

3 Značajan poremećaj i gubitak zglobne hrskavice, uz obimno prisustvo pannus-a.

Oštećenje metafizne kosti u osnovi

0 Normalan zglob

1 Bez promene metafizne kosti koja se nalazi ispod.

2 Mogu biti prisutna žarišta nekroze ili fibroze metafizne kosti.

3 Remećenje ili kolaps metafizne kosti. Obimna inflamacija, nekroza ili fibroza koje se protežu do medularnog prostora metafize.

Rezultati i analize

Preživlјavanje i nespecifična klinička zapažanja

[0192] Pojedine životinje su isključene pre planiranog završetka studije zbog ozbilјnosti kliničkih znaka artritisa ili zbog težine nespecifičnih kliničkih zapažanja.

[0193] Tri životinje su isključene iz sudije ili su nađene uginulima tokom perioda koji je prethodio tretmanu (od Dana -14 do Dana 0): jedna životinja iz Grupe 1 (tretirana nosačem; životinja je stigla od dobavlјača sa slomlјenom nogom i zbog toga je isključena iz studije) i dve životinje iz Grupe 5 (tretirane bioterapeutikom #755).

[0194] Sedam životinja je isključeno iz sudije zbog ozbilјnosti kliničkih znaka artritisa: pet životinja iz Grupe 1 (tretiranih nosačem) i dve životinje iz Grupe 5 (tretirane bioterapeutikom #755).

[0195] Tri životinje iz Grupe 1 (tretirane nosačem) su isključene iz sudije zbog ozbilјnosti nespecifičnih kliničkih znaka, uklјučujući poremećaj držanja (zgrčenost), abnormalno stanje dlake (piloerekciju) i abnormalne nivoe aktivnosti (smanjena aktivnost).

Telesne težine

[0196] Podaci o telesnoj težini su beleženi od Dana -14 do Dana 0 i izraženi su u procentima početne (Dana -14) telesne težine, što je potom analizirano dvofaktorskim ANOVA testom, praćenim ds Dunnett-ovim post-testom za višestruka poređenja sa Danom -14, a potom je urađeno i višestruko poređenje sa grupom tretiranom nosačem. Podaci su prikazani na Slici 19. Podaci za životinje koje su udaljene iz studije pre predviđenog kraja eksperimenta su izuzeti iz analize.

[0197] Poređenje rezultata dobijenih nakon oralne gavaže dva puta dnevno, u odnosu na Dan -14, ukazalo je na značajan gubitak telesne težine u grupi koja je bila tretirana nosačem, Dana -9 i Dana -7.

[0198] Podaci o telesnoj težini su beleženi od Dana 0 do Dana 28 i izraženi su u procentima početne (Dana 0) telesne težine, što je potom analizirano dvofaktorskim ANOVA testom, praćenim Dunnett-ovim testom za višestruka poređenja sa Danom 0 u grupi tretiranoj nosačem, a zatim je urađeno i višestruko poređenje sa grupom tretiranom nosačem. Podaci su prikazani na Slici 20. Podaci za životinje koje su udaljene iz studije pre predviđenog kraja eksperimenta su izuzeti iz analize. Podaci za Dan 28, Dan 35 i Dan 42 su dalјe analizirani jednofaktorskim ANOVA testom, praćenim Dunnettovim testom za višestruko poređenje, sa grupom koja je tretirana nosačem.

[0199] Pojava kliničkih znaka artritisa je bila povezana sa značajnim gubitkom telesne težine Dana 26 i Dana 28 (p < 0.0001) prilikom poređenja sa danom 0 u grupi koja je bila tretirana nosačem.

[0200] U poređenju sa grupom koja je bila tretirana nosačem, telesna težina je bila značajno veća u Grupi 5 (tretiranoj bioterapeutikom #755) Dana 28 (< 0,0001).

Klinička zapažanja

[0201] Podaci o kliničkim rezultatima analizirani su dvofaktorskim ANOVA testom, praćenim Dunnettovim posttestom za višestruko poređenje između dana u grupi koja je bila tretirana nosačem, a zatim je urađeno višestruko poređenje između eksperimentalnih grupa i grupe tretirane nosačem, za svaki dan pojedinačno. Podaci su prikazani na Slici 21. Podaci za životinje koje su udaljene iz studije pre predviđenog kraja eksperimenta su izuzeti iz analize. Kada su životinje isključene zbog težine kliničkih znaka artritisa, poslednji zabeleženi rezultat je unošen i za naredne dane i upotrebljen u statističkim analizama.

[0202] Značajan porast kliničkih skorova je uočen u grupi koja je bila tretirana nosačem od Dana 28 do Dana 45 (p < 0.0001) u poređenju sa Danom 21.

[0203] Bioterapeutik br. 755 je izazvao smanjenje kliničkih skorova prilikom poređenja sa grupom koja je bila tretirana nosačem od Dana 28 do Dana 45. Smanjenje je bilo statistički značajno Dana 31 i Dana 38 (p < 0,05).

Analiza ćelijske proliferacije

[0204] Radi validacije analize, splenociti su kultivisani u prisustvu solubilnog anti-CD3 i anti-CD28 (anti-CD3/CD28) kao pozitivnih kontrolnih stimulusa, da bi se potvrdio proliferativni potencijal ćelija.

[0205] Snažan proliferativni odgovor na anti-CD3/CD28 je uočen u svim eksperimentalnim grupama, što je pokazalo da su ćelije zdrave, vijabilne i sposobne da reaguju na signale aktivacije.

[0206] Da bi se ispitao proliferativni odgovor u prisustvu kolagena II (CII), splenociti su kultivisani u prisustvu CII u koncentraciji od 50 µg/ml. Proliferativni odgovor splenocita na CII je analiziran dvofaktorskim ANOVA testom, nakon čega je rađen Sidakov post-test za višestruka poređenja između nestimulisanih i splenocita stimulisanih sa CII, dok je jednofaktorski ANOVA test, praćen Dunnett-ovim post-testom upotrebljen za poređenja odgovora stimulisanog sa CII-om u različitim eksperimentalnim grupama sa grupom tretiranom nosačem. Podaci su prikazani na Slici 22.

[0207] CII je izazvao veoma značajan porast ugradnje<3>H-timidina (cpm) u odnosu na nestimulisane splenocite u grupi koja je tretirana nosačem (p < 0,0001).

[0208] Grupe tretirane bioterapeutikom br. 755 su pokazale značajno niže nivoe proliferacije splenocita indukovane sa CII u odnosu na grupu koja je bila tretirana nosačem.

Nivo citokina u supernatantima kulture tkiva

[0209] Nivoi svakog citokina su mereni u supernatantima kulture tkiva koji su dobijeni nakon stimulacije sa anti-CD3/CD28, Luminex analizom. Analize su ukazale na robusne odgovore, za sve izmerene citokine (srednji nivoi u grupi tretiranoj nosačem su bili sledeći: IL-4 = 6,406 pg/ml; IL-6 = 306 pg/ml; IL-10 = 10,987 pg/ml; IL-17A = 11,447 pg/ml; IFN-γ = 15,581 pg/ml; TNF-α = 76 pg/ml).

[0210] Odeljci koji slede sumiraju podatke dobijene u kulturama koje su bile stimulisane sa kolagenom II. Kada je bilo primenljivo, statističke analize razlika između nivoa citokina u supernatantima nestimulisanih i splenocita stimulisanih sa CII su urađene upotrebom dvofaktorskog ANOVA testa, praćenog Sidakovim post-testom za višestruka poređenja, dok je jednofaktorska ANOVA praćena Dunnett-ovim post-testom upotrebljavana za poređenje odgovora stimulisanog sa CII u grupama tretiranim bioterapeutikom sa grupom koja je tretirana nosačem. U oba slučaja, nisu utvrđene značajne razlike u nivoima citokina između grupa. Navedeno je verovatno posledica male veličine uzorka koji je korišćen (n=3).

[0211] Da bi se tačnije predstavila distribucija podataka za citokine uz značajno rasipanje podataka, rezultati su predstavlјeni kao dijagrami rasipanja.

[0212] Srednje vrednosti IL-4 po grupama, u supernatantima kulture tkiva nakon stimulacije sa CII, iznosile su < 5 pg/ml. Promene nisu smatrane biološki značajnima i nisu ovde uklјučene. Srednje vrednosti TNF-α po grupama, u supernatantima kulture tkiva nakon stimulacije kolagenom, bile su ispod granice kvantitacije.

Nivoi IFN-γ u supernatantima (Slika 23)

[0213] Zajedno sa IL-17, IFN-γ je glavni citokin koji dovodi do razvoj bolestia u CIA modelu. Dijagram rasipanja na Slici 23 pokazuje nivoe IFN-γ nakon stimulacije sa CII, pri čemu je medijana grupe bila viša kod grupe tretirane nosačem u odnosu na grupu tretiranu bioterapeutikom.

Nivoi IL-17A u supernatantima (Slika 24)

[0214] U grupi koja je bila tretirana nosačem, u kulturama stimulisanim sa CII, nivoi IL-17A su iznosili 50 pg/ml. Deluje da su nivoi ovog citokina bili niži u grupi tretiranoj bioterapeutikom u odnosu na grupu tretiranu nosačem.

Nivoi IL-10 u supernatantima (Slika 25)

[0215] Nivoi IL-10 u grupi koja je bila tretirana nosačem su iznosili 13 pg/ml i 2,1 pg/ml u kulturama stimulisanim sa CII i kontrolnim kulturama samo sa medijumom, tim redom. Viši nivoi IL-10 (koji je anti-inflamatorni citokin) u grupi koja je tretirana nosačem mogu biti očekivani, pošto inflamacija i indukcija proinflamatornih citokina može biti udružena sa mehanizmom anti-inflamatorne povratne sprege.

Nivoi IL-6 u supernatantima (Slika 26)

[0216] Inflamatorni citokini poput IL-6 i TNF-α se obično ne proizvode u visokim nivoima u anti-CII kulturama. Međutim, njihovi nivoi mogu biti izmenjeni kao rezultat imune modulacije. Nivoi IL-6 u kulturama stimulisanim sa CII su bili skromni i dostizali su 10 pg/ml. Iako je nivo bio veći nego u kontrolnim kulturama koje su sadržavale samo medijum, ove razlike su bile previše male da bi se obezbedila opravdanost uvođenja statističkih analiza.

Mikrobiološka analiza

[0217] Rast bakterija je potvrđivan merenjem optičke gustine na 600 nm, upotrebom spektrofotometra. Identitet bakterija je potvrđivan poređenjem slika zasejanih ploča sa referentnim slikama.

[0218] Nakon primene poboljšanog postupka pripreme bakterija, konstantno su primenjivane visoke doze bakterijskog soja od Dana -2 do Dana 3, što je potvrđivano izmerenim, visokim OD vrednostima.

[0219] Uzorci fecesa su prikupljani i trenutno smrzavani Dana -14, Dana 0 i na kraju eksperimenta.

Histopatologija

[0220] Rezultati histopatologije su prikazani na Slikama 65-69. Kao što je očekivano za ovaj model, uočeno je prisustvo intra-individualne i inter-individualne varijabilnosti u pogledu prisusva/odsustva artritisa ili ozbiljnosti prisutne promene.

[0221] Priroda patologije je bila kao što je očekivano za ovaj model, sa obimnom mešovitom hronično-aktivnom inflamacijom sinovijuma i burse koja se širila na okolna meka tkiva (mišić, masno tkivo, dermalni kolagen). U najteže pogođenim zglobovima je došlo do degeneracije i gubitka hrskavice zgloba, uz prisustvo debrisa unutar prostora zgloba i inflamacije, kao i do remećenja strukture zgloba i kosti usled prisustva fibroze i inflamacije.

[0222] Incidenca histopatoloških promena je bila sledeća: nosač - 80% (16/20); bioterapeutik br. 755 - 41% (9/22). Tretman bioterapeutikom br.755 je smanjio incidencu histopatoloških rezultata u zadnjim udovima miša, u odnosu na grupu koja je bila tretirana nosačem (pogledati Slike 65-68). Rezultati histopatologije su analizirani jednofaktorskim ANOVA testom za neparametrijsku distribuciju (Kruskal-Wallis-ov test), nakon čega je urađen Dunn-ov post-test za višestruka poređenja sa grupom tretiranom nosačem. Bioterapeutik br. 755 je izazvao značajno smanjenje skora inflamacije zgloba koji je dobijen histopatološkom analizom, a u odnosu na grupu koja je bila tretirana nosačem (p < 0,05). Bioterapeutik br. 755 je izazvao značajno smanjenje skora oštećenja hrskavice koji je dobijen histopatološkom analizom, u odnosu na oštećenje koje je uočeno kod grupe koja je bila tretirana nosačem (p < 0,05). Bioterapeutik br.755 je izazvao značajno smanjenje skora oštećenja kostiju koji je dobijen histopatološkom analizom, u odnosu na oštećenje koje je uočeno kod grupe koja je bila tretirana nosačem (p < 0,05). Bioterapeutik br. 755 izazvao je značajno smanjenje ukupnih histopatoloških skorova u odnosu na grupu koja je bila trtirana nosačem (p < 0,05).

Pregled rezultata

[0223] Povećani klinički skorovi su uočeni nakon Dana 28 do prve primene kolagena tipa II, kao što je i očekivano u ovom modelu artritisa kod DBA/1 miševa. Pokazano je da je bioterapeutik #755 efektivan u lečenju artritisa u ovom modelu. Bioterapeutik br. 755 je bio efektivan u smanjenju ozbiljnosti kliničkih skorova i smanjenju patološkog oboljenja u zglobovima, što je pokazano histopatološkom analizom.

[0224] Ponovljeni proliferativni odgovori na kolagen II su uočeni u kulturama splenocita iz svih eksperimentalnih grupa. Odgovor koji je bio specifičan za kolagen je bio značajno smanjen nakon tretmana sa bioterapeutikom br.

755 (Grupa 5).

[0225] U grupi životinja tretiranih nosačem, za većinu ispitivanih citokina T ćelija je utvrđeno detektabilno povećanje između uslova stimulacije sa kolagenom II i kontrolnih uslova u kojima je bio prisutan samo medijum. Ovakva povećanja nisu bila tako očigledna u grupi koja je bila tretirana bioterapeutikom. Navedeno široko podržava činjenicu ponovnog proliferativnog odgovora na kolagen II koji je prethodno opisan.

[0226] Dobijeni su i dokazi supresije Th1/Th17 ose, što predstavlja patogeni odgovor i u ovom modelu i kod humanog RA. Povezanost smanjenih nivoa citokina sa smanjenom proliferacijom sugeriše imunološku modulaciju. Nije bilo dokaza da je ovakva modulacija rezultat bilo povećanih nivoa IL-4 koji je poreklom od Th2 ili povećanja imunomodulatornog citokina, IL-10.

Primer 4 – Dalja analiza dejstva bakterijskih inokula u mišjem modelu astme izazvane grinjama kućne prašine [0227] Miševi ispitani u Primeru 1 su podvrgavani dalјim analizama da bi se dodatno okarakterisao efekat kompozicija pronalaska na inflamatorni odgovor alergijske astme.

Materijali i metode

[0228] Uzorkovanje krvi i priprema seruma na Dan 14. Uzorci krvi životinja su prikuplјeni punkcijom srca. Serum je izolovan iz uzorka krvi, centrifugiranjem tokom 5 minuta na 14000g, nakon čega je čuvan na -20° C.

[0229] Uklanjanje organa - Dan 14. Za naknadnu histološku analizu, levi režanj pluća je stavljen u formalin. Desni režanj pluća (svi preostali režnjevi) i serum su trenutno zamrznuti i naknadno analizirani. Preostala BAL tečnost je brzo zamrznuta radi dalјe analize.

Merenje nivoa antitela u serumu i BAL tečnosti

[0230] ELISA testom je izmerena proizvodnja ukupnog IgE i IgG1 antitela specifičnog za grinje kućne prašine (HDM) u BAL i serumu.

Izolacija pluća i histološka analiza

[0231] Levi režnjevi pluća su fiksirani u formalinu nakon čega su parafinizovani, isečeni i obojeni hematoksilinom i eozinom i PAS reagensom. Naknadna histološka analiza je urađena objektivno (bez pristrasnosti – analiza na slepo), na sledeći način: Na pet nasumice odabranih vidnih polјa po uzorku, procenjivani su inflamacija (peribronhijalna infiltracija i perivaskularna infiltracija) i proizvodnja sluzi. Inflamatorna infiltracija je procenjivana na osnovu sledećeg sistema bodovanja:

0 - normalno

1 - neznatni inflamatorni infiltrati

2 - umereni inflamatorni infiltrati

3 - izraženi inflamatorni infiltrati

4 - obimni inflamatorni infiltrati

5 – veoma obimni inflamatorni infiltrati

[0232] U svakom vidnom polјu je merena veličina disajnih puteva i kvantifikovan je broj mukoznih ćelija/um.

Merenje inflamatornih medijatora u tkivu pluća

[0233] Desni režnjevi pluća (svi preostali režnjevi) su izolovani za kvantifikaciju inflamatornih medijatora i trenutno su zamrznuti za naknadno merenje CCL11, IFN-gama, IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-4, IL-5, IL-9, IL -17A, CXCL1, CCL3, CXCL2 i CCL5 komercijalno dostupnim multipleks testom (Merck-Millipore). Analiza je rađena prema uputstvima proizvođača.

Rezultati i analize

[0234] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slikama 27-45.

[0235] U prilog nalazima koji su opisani u Primeru 1, analiza ćelijskih infiltrata u tkivu pluća miševa koji su tretirani sojem 755 je pokazala značajno i statistički značajno smanjenje prosečnog inflamatornog skora (pogledati Slike 31 i 33).

[0236] Analizirani su nivoi antitela u BAL tečnosti i serumu (pogledati Slike 27-30). Nije uočen jasan efekat bakterijskog tretmana na nivo antitela u serumu. To može biti odraz neuspešnosti eksperimenta, pošto su za svaki tretman uočeni rasipanje podataka i velike greške i delovalo je da se pozitivne i negativne kontrole ne ponašaju onako kako bi se očekivalo. Takođe, bazalni nivo antitela u serumu je mogao da prikrije bilo kakve promene.

[0237] Slično navedenom, nije uočen jasan efekat tremana sa bakterijama na nivou citokina u tkivu pluća (pogledati Slike 35-45). Ponovo, navedeno može biti rezultat neuspešnosti eksperimenta i prisustva rasipanja podataka i velike greške u svakoj od grupa tretmana, kao i zbog utiska da se pozitivne i negativne kontrole ne ponašaju onako kako bi se očekivalo. Moguće je takođe da su mehanizmi dejstva bili pod uticajem ranijih odgovora citokina koji više nisu mogli biti detektabilni Dana 4, nakon finalnog izlaganja disajnih puteva dejstvu HDM-a. U ovoj studiji je stoga potrebno tumačiti podatke za citokine uz oprez, upravo zbog varijabilnosti detektovanih nivoa. Ovakva varijabilnost može biti delimično objašnjena činjenicom da su tkiva pluća razdvojena za različite analize i da time jedan režanj pluća možda nije u potpunosti reprezentativan ili uporediv sa istim režnjem kod drugih miševa zbog nejasne distribucije inflamacije.

Primer 5 – Dalja analiza efekata bakterijskih inokula u mišjem modelu teške neutrofilne astme

[0238] Miševi ispitani u Primeru 2 su podvrgnuti dalјim analizama da bi se dodatno okarakterisao efekat kompozicija pronalaska na odgovor neutrofila koji je udružen sa ozbiljnom astmom.

Materijali i metode

[0239] Uklanjanje organa Dana 18. Za naknadnu histološku analizu, levi režanj pluća je stavljen u formalin. Desni režanj pluća (svi preostali režnjevi) i serum su trenutno zamrznuti i naknadno analizirani. Preostala BAL tečnost je brzo zamrznuta radi dalјe analize.

[0240] Merenje inflamatornih medijatora u tkivu pluća (naknadna analiza). Desni plućni režnjevi (svi preostali režnjevi) su izolovani za kvantifikaciju inflamatornih medijatora i trenutno su zamrznuti za naknadno merenje IFN-gama, IL-1 alfa, IL-1 beta, CXCL1, CCL3, CXCL2, CCL5, IL-17A, TNF-alfa, IL-17F, IL-23 i IL-33 komercijalno dostupnim multipleks testom (Merck-Millipore). Analiza je rađena prema uputstvima proizvođača.

[0241] Merenje nivoa antitela u serumu i BAL tečnosti (naknadna analiza). ELISA testom je merena proizvodnja IgG1 i IgG2a antitela specifičnih za grinje kućne prašine (HDM) u BAL i u serumu.

[0242] Izolacija pluća i histološka analiza (naknadna analiza). Levi režnjevi pluća su fiksirani u formalinu nakon čega su parafinizovani, isečeni i obojeni hematoksilinom i eozinom i PAS reagensom. Naknadna histološka analiza je urađena objektivno, na sledeći način: Na pet nasumice odabranih vidnih polјa po uzorku, procenjivani su inflamacija (peribronhijalna infiltracija i perivaskularna infiltracija) i proizvodnja sluzi. Inflamatorna infiltracija je procenjivana sledećim sistemom bodovanja:

0 - normalno

1 - neznatni inflamatorni infiltrati

2 - umereni inflamatorni infiltrati

3 - izraženi inflamatorni infiltrati

4 - obimni inflamatorni infiltrati

5 – veoma obimni inflamatorni infiltrati

Rezultati i analize

[0243] Rezultati eksperimenata su prikazani na Slikama 46-63.

[0244] Dalјa analiza nivoa antitela je ukazala da se efikasnonst bakterijskog soja 755 takođe ogledala i u smanjenim nivoima IgG1 specifičnog za HDM u BAL tečnosti i serumu (pogledati Slike 46 i 48). Čvrsti zaklјučci u pogledu uticaja na nivoe IgG2a nisu mogli biti izvedeni. Sveukupno, podaci iz analize antitela ukazuju na smanjenje koje je povezano sa ukupnim smanjenjem inflamatornog odgovora, za razliku od selektivnog efekta na konverziju izotipa antitela.

[0245] Histološka analiza je podržala diferencirani broj ćelija iz BAL tečnosti, pokazujući redukovanu ćelijsku infiltraciju kod miševa koji su tretirani sojem 755 (pogledati Slike 50-52).

[0246] Za nivoe citokina, kao u Primeru 4, rasipanje podataka i greške su bile velike za svaki tretman i delovalo je da se pozitivne i negativne kontrole nisu ponašale kao što bi se očekivalo. Moguće je takođe da su mehanizmi dejstva bili pod uticajem ranijih odgovora citokina koji više nisu mogli biti detektabilni Dana 4, nakon finalnog izlaganja disajnih puteva dejstvu HDM-a. U ovoj studiji je stoga potrebno tumačiti podatke za citokine uz oprez, upravo zbog varijabilnosti detektovanih nivoa. Ovakva varijabilnost može biti delimično objašnjena činjenicom da su tkiva pluća razdvojena za različite analize i da time jedan režanj pluća možda nije u potpunosti reprezentativan ili uporediv sa istim režnjem kod drugih miševa zbog nejasne distribucije inflamacije. Uprkos ovoj varijabilnosti, pokazan je jasan anti-inflamatorni efekat na nivoe citokina za soj 755, dok se pozitivna kontrola tretirana anti-IL-17 At ponašala kao što je i očekivano.

[0247] Uz prethodno navedena ograničenja, podaci na Slikama 55 i 57 ukazuju da se tretmanom sa sojem 755 može postići smanjenje nivoa IL-1b i IFNγ, što može ukazivati na mehanizam delovanja koji je povezan sa uticajem na oslobađanje hemokina (i time regrutovanje ćelija) od strane stromalnih i ćelija urođenog imunog odgovora. Ovi citokini su deo Th17 puta. Uzimajući navedene podatke u obzir, može se izvući jasan zaklјučak da je soj 755 bio veoma efektivan u zaštiti miševa od inflamacije u ovom mišjem modelu teške neutrofilne astme.

Primer 6 – Efikasnost bakterijskih inokula u mišjem modelu multiple skleroze

Kratak pregled

[0248] Miševima su primenjivane kompozicije koje su sadržavale bakterijske sojeve pronalaska i miševi su potom imunizovani glikoproteinom iz mijelinskih oligodendrocita da bi se indukovao eksperimentalni autoimuni encefalomielitis (EAE). EAE je najčešće korišćen eksperimentalni model humane multiple skleroze. Utvrđeno je da kompozicije pronalaska imaju snažan efekat na incidencu i ozbiljnost oboljenja.

Soj

[0249] 755: bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43282

Dizajn studija

[0250] Grupe:

1. Grupa negativne kontrole. Kontrolni tretman sa nosačem (oralna primena).

5. Tretman terapijskim bakterijskim inokulumom soja 755 (oralna primena).

9. Grupa pozitivne kontrole. Tretman deksametazonom (i.p.).

10. Netretirana kontrolna grupa.

Broj miševa po grupi = 10

[0251] Dani od -14 do 13: Svakodneva primena kontrolnog nosača oralnim putem (Grupa 1).

Dani 0-28: primena deksametazona (i.p.) tri puta nedelјno (Grupa 9)

Dan 0: MOG35-55 (glikoprotein mijelinskih oligodendrocita - 2 mg/ml) i CFA (2 mg/ml MTB) su pomešani u odnosu 1:1 i tako je dobijen rastvor koncentracije 1 mg/ml.100 µl smeše peptida i CFA je supkutano injecirano u svaku zadnju nogu. Intraperitonealno je primenjen pertusis toksin (300ng).

Dan 1: Intraperitonealna primena pertusis toksina (300ng).

Dan 7 i nadalјe: Merenje incidence i ozbiljnosti oboljenja, tri puta nedelјno.

Završetak studije i analiza

[0252] Kod miševa su tri puta nedeljeno analizirani incidenca i ozbiljnost oboljenja. Procena je rađena na objektivan način. Ozbilјnost bolesti je ocenjivana upotrebom sistema kliničke procene od 0 do 5, pri čemu 5 ukazuje na mrtvog miša (pogledati sistem kliničkog skora ispod).

Praćenje

[0253] Dana koji su naznačeni, merene su telesne težine miševa i praćen je skor aktivnosti oboljenja i incidence oboljenja.

[0254] Sistem bodovanja aktivnosti oboljenja:

0 - Nema očiglednih promena u motornim funkcijama u odnosu na miša koji nije imunizovan.

0,5 - Vrh repa je opušten.

1,0 - Distonija repa.

1,5 - Distonija repa i inhibicija zadnje noge.

2,0 - Distonija repa i slabost zadnjih nogu.

ILI – Uočavaju se jasni znaci klimanja glavom prilikom hoda. Slaba ravnoteža.

2,5 - Distonija repa i povlačenje zadnjih nogu.

- ILI – Prisutno je snažno klimanje glave zbog koga miš povremeno pada.

3,0 - Distonija repa i potpuna paraliza zadnjih nogu.

3,5 - Distonija repa i potpuna paraliza zadnjih nogu.

Dodno je prisutno: Miš se kreće unutar kaveza, ali kada se postavi na stranu, ne može se podigne.

Zadnje noge su zajedno na jednoj strani tela.

4,0 - Distonija repa, poptuna paraliza zadnjih nogu i delimična paraliza prednjih nogu.

- Miš se minimalno kreće po kavezu, ali deluje budno i hrani se

4,5 - Potpuna paraliza zadnjih nogu i delimična paraliza prednjih nogu, bez kretanja unutar kaveza.

Miš se odmah eutanazira i uklanja iz kaveza.

5,0 Miš je eutanaziran zbog teške paralize.

[0255] Kada je životinja sa ocenom aktivnosti oboljenja koja je jednaka ili veća od 1, smatra se da je sa pozitivnim skorom incidence oboljenja.

Rezultati

[0256] Rezultati studije su prikazani na Slikama 70 i 71.

[0257] Indukcija bolesti u grupama negativnih kontrola je uspešna i pokazane su visoke vrednosti skora kod grupa tretiranih nosačem i kod negativnih kontrola. Efekat tretmana sojem 755 je bio upečatlјiv i miševi koji su tretirani sojem 755 su pokazali značajno smanjenu incidencu i ozbiljnost oboljenja. Smanjenje incidence i ozbiljnosti oboljenja je bilo uporedivo sa grupom pozitivnih kontrola. Navedeni podaci ukazuju da soj 755 može biti koristan za lečenje ili prevenciju multiple skleroze.

Primer 7 – Efikasnost bakterijskih inokula u mišjem modelu uveitisa

Kratak pregled

[0258] U ovom istraživanju je upotrebljen mišji model uveitisa izazvan proteinom koji vezuje interfotoreceptore mrežnjače (IRBP), da bi se ispitali efekti primene bakterija na uveitis. Uveitis je stanje koje je opasno za vid i posledica je inflamacije unutar oka i propadanja mrežnjače. Ova bolest se može istraživati u modelu eksperimentalnog autoimunog uveoretinitisa (EAU) na glodarima [68]. EAU je poremećaj specifičan za organ, gde su Th1/Th17 ćelije usmerene na retinalne antigene i proizvode citokine koji aktiviraju rezidentne i infiltrirajuće mononuklearne ćelije, što zatim dovodi do uništenja tkiva. EAU kod miševa može biti indukovan izlaganjem retinalnim antigenima, uklјučujući peptid proteina koji se vezuje za interfotoreceptore mrežnjače (IRBPp). Pojava bolesti se obično javlјa od 8. do 9. dana, a pik bolesti je od 14. do 15. dana. Znaci kliničke bolesti mogu biti praćeni upotreom lokalnog endoskopskog snimanja očnog dna (TEFI, od engl. topical endoscopic fundal imaging).

Soj

[0259] MRX005: Parabacteroides distasonis, bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382.

[0260] Bioterapeutik je obezbeđen u koncentrovanom rastvoru glicerola. Za kultivisanje agensa je upotrebljen mikrobiološki medijum za rast (YCFA).

Miševi

[0261] Miševi su bili soja C57BL/6 i na početku studije su bili stari preko 6 nedelјa. Upotrebljena su 72 miša (+ 36 dodatnih životinja). Životinje koje nisu bile zdrave su isklјučene iz studije. Životinje su gajene u specifičnim uslovima, bez patogena (spf), u prostoriji pod termostatskom kotrolom (22 ± 4° C). Životinjama je pre upotrebe dozvolјeno da se aklimatizuju na standardne uslove odgajivačnice za životinje, tokom najmanje jedne nedelјe. Tokom ovog perioda je praćeno zdravstveno stanje životinja i pre početka ispitivanja je procenjivana pogodnost svake životinje za eksperimentalnu upotrebu. Miševi su tokom trajanja studije gajeni u grupama do 10 životinja po kavezu. Peleti za ishranu, sterilisani zračenjem (Lab diet, EU, Rodent diet 22%, 5LF5), i voda su tokom perioda aklimatizacije i ispitivanja bili dostupni ad libitum. Malo je verovatno da je bilo koji sastojak ishrane ili vode ometao ispitivanje.

Dizajn eksperimenta

[0262] Odrasle ženke C57BL/6 miševa su nasumično raspoređene u eksperimentalne grupe i dozvolјena im je aklimatizacija tokom jedne nedelјe. Tretmani su primenjivani po rasporedu koji je naveden ispod. Dana 0, životinjama je supkutanom injekcijom primenjena emulzija koja je sadržavala 200 µg peptida 1-20 iz proteina koji vezuje interfotoreceptore mrežnjače (IRBP p1-20) u kompletnom Frojndovom adjuvansu (CFA), u koji je bilo dodato i 2,5 mg/ml Micobacterium tuberculosis H37 Ra. Takođe Dana 0, životinjama je primenjen i 1,5 µg Bordetella Pertussis toksina, intraperitonealnom injekcijom. Od Dana -14, životinjama je tri puta nedelјno merena telesna težina. Od Dana -1 do kraja eksperimenta (Dan 42), kod životinja je dva puta nedeljno praćeno prisustvo kliničkih znaka uveistisa upotrebom lokalnog endoskopskog snimanja očnog dna (TEFI).

Raspored primene

[0263] Sve grupe su bile sa n=12

[0264] Nosač za oralnu primenu je bio YCFA medijum.

[0265] Zapremina za oralnu primenu dva puta dnevno je iznosila 5 ml/kg.

Očitavanja

[0266] Telesne težine. Od Dana -14, životinjama je tri puta nedeljno merena telesna težina. Životinje sa gubitkom telesne težine koji je bio jednak ili veći od 15% njihove početne telesne težine (Dana 0) prilikom dva uzastopna pregleda, isključene su iz studije.

[0267] Nespecifična klinička zapažanja. Od Dana 14 do kraja eksperimenta, životinje su svakodnevno proveravane, da bi se utvrdili nespecifični klinički znaci, uklјučujući odstupanje u držanju tela (ukočeno), abnormalno stanje dlake (piloerekcija) i abnormalne nivoe aktivnosti (smanjena ili povećana aktivnost).

[0268] Klinički rezultati: Snimanje mrežnjače lokalnim endoskopskim snimanjem očnog dna (TEFI). Od Dana -1 do kraja eksperimenta, životinje su dva puta nedelјno pregledane na pojavu kliničkih znakova uveitisa. Slike mrežnjače su snimane upotrebom TEFI kod neanesteziranih, ali vezanih životinja nakon dilatacije zenica upotrebom tropikamida od 1%, a zatim i fenilefrin hidrohlorida od 2,5%. Slike mrežnjače su analizirane upotrebom sistema koji je naveden ispod. Maksimalan kumulativni skor je 20.

Rezultati

[0269] Rezultati studije su prikazani na Slikama 72 i 73.

[0270] Klinički rezultati: Snimanje mrežnjače lokalnim endoskopskim snimanjem očnog dna (TEFI). Podaci TEFI skora su mereni u kontrolnoj grupi od Dana 0 do Dana 28 i analizirani su Kruskal-Wallis-ovim testom za neparametarske podatke, nakon čega je sledio Dunn-ov post-test za višestruko poređenje između eksperimentalnih dana. Primena IRBP-a je izazvala značajno povećanje TEFI skorova izmerenih od Dana 14 (p < 0.01) i Dana 28 (p < 0.0001) u odnosu na Dan 0 u kontrolnoj grupi (Slika 72).

[0271] TEFI rezultati mereni u eksperimentalnim grupama Dana 28 su analizirani upotrebom jednofaktorske ANOVA. Kao što je i očekivano, uočen je značajan pad u skoru kod grupe pozitivnih kontrola tretiranih ciklosporinom A. Takođe je bio prisutan statistički značajan pad u skorovima grupe tretirane sa MRX005 (p < 0,01), u odnosu na negativnu kontrolu (Slika 73).

[0272] Zaklјučci. Klinički rezultati koji su dobijeni upotrebom TEFI su ukazali na povećanje od Dana 14, što je i očekivano u ovom modelu uveitisa izazavanog sa IRBP-om. Do Dana 28 je uočen upečatlјiv i statistički značajan pad incidence i ozbiljnosti oboljenja u grupi koja je bila tretirana sa MRX005, što je bilo uporedivo sa padom u grupi pozitivnih kotrola. Preciznije, navedeni podaci ukazuju da je tretman sojem MRX005 smanjio oštećenje mrežnjače, inflamaciju optičkog diska i/ili infiltraciju inflamatornih ćelija u tkivo mrežnjače (pogledati prethodno naveden sistem procene TEFI skora na osnovu slika mrežnjače). Navedeni podaci ukazuju da soj MRX005 može biti koristan u lečenju ili prevenciji uveitisa.

Primer 8 - Ispitivanje stabilnosti

[0273] Kompozicija koja je ovde opisana i koja je sadržavala najmanje jedan bakterijski soj koji je ovde opisan, čuvana je u zaptivenoj posudi na 25°C ili 4°C, a posuda za skladištenje je bila smeštena u atmosferu sa relativnom vlažnošću od 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% ili 95%. Potrebno je da nakon jednog meseca, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine preostane najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% bakterijskog soja u vidu jedinica obrazovanja kolonija, što se određuje standardnim protokolima.

Sekvence

[0274]

REFERENCE

[0276]

[1] Spor i saradnici (2011) Nat Rev Microbiol.9(4):279-90.

[2] Eckburg i saradnici (2005) Science.10; 308(5728):1635-8.

[3] Macpherson i saradnici (2001) Microbes Infect.3(12):1021-35 [4] Macpherson i saradnici (2002) Cell Mol Life Sci.59(12):2088-96.

[5] Mazmanian i saradnici (2005) Cell 15;122(1):107-18.

[6] Frank i saradnici (2007) PNAS 104(34):13780-5.

[7] Scanlan i saradnici (2006) J Clin Microbiol.44(11):3980-8.

[8] Kang i saradnici (2010) Inflamm Bovel Dis.16(12):2034-42.

[9] Machiels i saradnici (2013) Gut.63(8):1275-83.

[10] WO 2013/050792

[11] WO 03/046580

[12] WO 2013/008039

[13] WO 2014/167338

[14] Goldin i Gorbach (2008) Clin Infect Dis.46 Suppl 2:S96-100.

[15] Azad i saradnici (2013) BMJ.347:f6471.

[16] Sakamoto and Benno (2006) Int J Sist Evol Microbiol.56(Pt 7):1599-605.

[17] Masco i saradnici (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.

[18] Srutkova i saradnici (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1):10-6.

[19] Ye i saradnici (2015) PLoS One.10(1):e0117704.

[20] Fabro i saradnici (2015) Immunobiology.220(1):124-35.

[21] Yin i saradnici (2014) Imunogenetics.66(3):215-8.

[22] Cheluvappa i saradnici (2014) Clin Exp Immunol.175(2):316-22.

[23] Schieck i saradnici (2014) J Allergy Clin Immunol.133(3):888-91.

[24] Balato i saradnici (2014) J Eur Acad Dermatol Venereol.28(8):1016-24.

[25] Monteleone i saradnici (2011) BMC Medicinw.2011, 9:122.

[26] Fahy (2009) Proc Am Thorac Soc 6.256-259

[27] Miossec i Kolls (2012) Nat Rev Drug Discov.11(10):763-76.

[28] Yang i saradnici (2014) Trends Pharmacol Sci.35(10):493-500.

[29] Koenders i saradnici (2006) J. Immunol.176:6262-6269.

[30] Amedei i saradnici (2012) Int J MolSci.13(10):13438-60.

[31] Shabgah i saradnici (2014) Postepy. Dermatol. Alergol.31(4):256-61.

[32] Zhang (2015) Inflammation.23. avg.

[33] Sun i saradnici (2015) Cytokine.74(1):76-80.

[34] Mucientes i saradnici (2015) Br J Ophthalmol.99(4):566-70.

[35] Jawad i saradnici (2013) Ocul Immunol Inflamm.21(6):434-9.

[36] Maya i saradnici (2014) J. Ophthalmology.310329

[37] Chi i saradnici (2007) J. Allergy and Clinical Immunology.119(5):1218-1224.

[38] Chi i saradnici (2008) Investigative Ophthalmology & Visual Science.49(7):3058-3064.

[39] Luger i Caspi (2008) Semin. Immunopathol.30(2):134-143.

[46] Miyamoto-Shinohara i saradnici (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.

[47] Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols, urednici Day and McLellan, Humana Press.

[48] Leslie i saradnici (1995) Appl. Environ. Microbiol.61, 3592-3597.

[49] Mitropoulou i sar. (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.

[50] Kailasapathy i saradnici (2002) Curr Issues Intest Microbiol.3(2):39-48.

[51] Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2. izdanje (1994.), urednici A Wade i PJ Weller

[52] Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (ur. A. R. Gennaro, 1985)

[53] Handbook of MicrobiologicalMedia, 4. izdanje (2010) Ronald Atlas, CRC Press.

[54] Maintaining Cultures for Biotechnology and Industry (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press [55] Strobel (2009) Metods Mol Biol.581:247-61.

[56] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy.20. izdanje, ISBN: 0683306472.

[57] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream i saradnici, izd., 1998, Academic Press).

[58] Methods In Enzimology (ur. S. Colowick i N. Kaplan, Academic Press, Inc.)

[59] Handbook of Experimental Immunology, Vol. I-IV (ur. D.M. Weir i C.C. Blackwell, 1986, Blackwell Scientific Publications)

[60] Sambrook i saradnici (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3. izdanje (Cold Spring Harbor Laboratory Press).

[61] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (ur. Birdi K.S., CRC Press, 1997)

[62] Ausubel i saradnici (ur.) (2002) Short protocols in molecular biology, 5. izdanje (Current Protocols).

[63] PCR ((Introduction to Biotechniques Series), 2. izd. (ur. Newton & Graham, 1997, Springer Verlag) [64] Current Protocols in Molecular Biology (ur. F.M. Ausubel i saradnici, izd.1987) Dodatna sveska 30 [65] Smith & Waterman (1981) Adv. Appl. Math.2: 482-489.

[66] Brand i saradnici (2007) Nature Protocols.2(5):1269-1275

[67] Jiao i saradnici (2014) Imunopatology and Infectious Diseases.184(4):1085-93.

[68] Caspi (2003) Curr Protoc Immunol. Poglavlјe 15: Jedinica 15.6.

[0277] Opis takođe obezbeđuje sledeća numerisana izvođenja:

1. Kompozicija koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti ili stanja posredovane IL-17 ili Th17 putem.

2. Kompozicija prema izvođenju 1, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije bolesti ili stanja izabranog iz grupe koju čine astma, kao što je alergijska astma ili neutrofilna astma; artritis, kao što je reumatoidni artritis, osteoartritis, psorijatični artritis ili juvenilni idiopatski artritis; multiple skleroza; očni neuromijelitis (Devikova bolest); ankilozni spondilitis; spondiloartritis; psorijaza; sistemski eritematozni lupus; inflamatorna bolest creva, kao što je Kronova bolest ili ulcerozni kolitis; celijakija; hronična opstruktivna bolest pluća (HOBP); kancer, kao što je kancer dojke, kancer debelog creva, kancer pluća ili kancer jajnika; uveitis; skleritis; vaskulitis; Behčetova bolest; ateroskleroza; atopijski dermatitis; emfizem; periodontitis; alergijski rinitis; i odbacivanje alotransplantata.

3. Kompozicija prema izvođenju 2, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije astme, kao što je neutrofilna astma ili alergijska astma.

4. Kompozicija prema izvođenju 3, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja neutrofilije ili eozinofilije u lečenju astme.

5. Kompozicija prema izvođenju 2, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije reumatoidnog artritisa.

6. Kompozicija prema izvođenju 5, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja naticanja zglobova kod reumatoidnog artritisa.

7. Kompozicija prema izvođenju 2, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije multiple skleroze.

8. Kompozicija prema izvođenju 7, gde je kompozicija za upotrebu u postupaku smanjenja javljanja bolesti ili intenziteta bolesti.

9. Kompozicija prema izvođenju 2, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije uveitisa. 10. Kompozicija prema izvođenju 9, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja ili sprečavanja bubrežnog oštećena kod uveitisa.

11. Kompozicija prema izvođenju 2, gde je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja kancera, kao što je kancer pluća, kancer grudi ili kancer jetre.

12. Kompozicija prema izvođenju 11, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja veličine tumora, smanjenja rasta tumora, spečavanja metastaza ili sprečavanja angiogeneze.

13. Kompozicija prema bilo kom prethodnom izvođenju, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja proizvodnje IL- 17 ili smanjenja diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevencije bolesti ili stanja posredovanih IL-17 ili Th17 putem.

14. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih izvođenja, gde je kompozicija za upotrebu kod pacijenata sa povećanim nivoima IL- 17 ili Th17 ćelijama.

15. Kompozicija prema bilo kom prethodnom izvođenju, gde je bakterijski soj Parabacteroides distastonis.

16. Kompozicija prema bilo kom prethodnom izvođenju, gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je bar 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična sa 16s rRNK sekvencom bakterijskog soja Parabacteroides distastonis.

17. Kompozicija prema bilo kom od izvođenja 1-15, gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je bar 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična sa SEQ ID NO:1, 2, 3, 4, 5, 6, 78 ili 9.

18. Kompozicija prema izvođenju 17, gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je bar 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična sa SEQ ID NO:9, ili gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je predstavljena sa SEQ ID NO:9.

19. Kompozicija prema izvođenju 1, gde kompozicija sadrži bakterijski soj Parabacteroides distastonis, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja reumatoidnog artritisa.

20. Kompozicija prema izvođenju 1, gde kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distastonis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije astme, kao što je neutrofilna astma ili alergijska astma.

21. Kompozicija prema izvođenju 1, gde kompozicija sadrži bakterijski soj vrsta Parabacteroides distastonis, za upotrebu u postupaku lečenja ili prevencije multiple skleroze.

22. Kompozicija prema izvođenju 1, gde kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distastonis, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja uveitisa.

23. Kompozicija prema izvođenju 1, gde kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distastonis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera.

24. Kompozicija prema bilo kom od prethodnom izvođenju, gde je kompozicija za oralno davanje.

25. Kompozicija prema bilo kom od prethodnom izvođenju, gde kompozicija sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata ili nosača.

26. Kompozicija prema bilo kom od prethodnom izvođenju, gde je bakterijski soj liofilizovan.

27. Prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju prema bilo kom od prethodnom izvođenju, za upotrebu prema bilo kom od prethodnih izvođenja.

28. Kompozicija vakcine koja sadrži kompoziciju prema bilo kom od prethodnom izvođenju, za upotrebu prema bilo kom od prethodnih izvođenja.

29. Postupak lečenja ili prevencije bolesti ili stanja posredovane IL-17 ili Th17 putem, koji obuhvata davanje kompozicije koja sadrži bakterijski soj roda Parabacteroides pacijentu kome je to potrebno.

30. Ćelija soja Parabacteroides distastonis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42382, ili njen derivat.

31. Kompozicija koja sadrži ćeliju prema izvođenju 30.

32. Kompozicija prema izvođenju 31, koja sadrži farmaceutski prihvatljive nosače ili ekscipijente.

33. Biološki čista kultura soja Parabacteroides distastonis deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42382, ili njegov derivat.

34. Ćelije soja Parabacteroides distastonis deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42382, ili njeni derivati za upotrebu u terapiji.

35. Ćelija prema izvođenju 34, gde je ćelija za upotrebu u postupku definisanom prema bilo kom od izvođenja 1-14.

Claims

Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja sadrži bakterijski soj vrste Parabacteroides distasonis, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja kancera debelog creva.

2. Kompozicija za upotrebu prema zahtevu 1, gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je bar 98%, 99%, 99.5% ili 99.9% identična sa SEQ ID NO:9.

3. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom prethodnom zahtevu, gde je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja proizvodnje IL-17 ili smanjenja diferencijacije Th17 ćelija u lečenju ili prevenciji kancera debelog creva.

4. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom prethodnom zahtevu, gde je kompozicija za upotrebu kod pacijenata sa povećanim nivoima IL-17 ili Th17 ćelija.