RS59375B1 - 1-[2-(aminometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4h-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-oni kao inhibitori mijeloperoksidaze - Google Patents

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Oblast tehnike odnosi se na određena jedinjenja 1-[2-(aminometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona formule (I), na njihovu upotrebu u tretmanu bolesti ili stanja povezanih sa mijeloperoksidazom, na primer, srčana insufijencija i stanja povezanih sa koronarnom arterijom, i farmaceutske sastave koji ih sadrže.

STANJE TEHNIKE

[0002] Mijeloperoksidaza (MPO) je enzim koji sadrži hem koji se nalazi u neutrofilnim granulocitima (neutrofilima) i monocitima. MPO je jedan član raznovrsne porodice proteina sisarskih peroksidaza, koja takođe uključuje eozinofil peroksidazu (EPO), tiroidnu peroksidazu (TPO), pljuvačnu peroksidazu (SPS), laktoperoksidazu (LPO), prostaglandin H sintazu (PGHS) i druge. Zreli enzim je dimer identičnih polovina. Svaka polovina molekula sadrži kovalentno vezan hem koji pokazuje neobična spektralna svojstva odgovorna za karakterističnu zelenu boju MPO. Cepanjem disulfidnog mosta koji povezuje dve polovine MPO dobija se hemi-enzim koji pokazuje spektralna i katalitička svojstva koja se ne mogu razlikovati od netaknutih enzima. Enzim se aktivira vodonik peroksidom, čiji izvor može biti superoksid dismuatazom (SOD) katalitizovani superoksidni anjon dobijen iz NADPH i superoksidni anjon dobijen iz ksantin oksidaze, i vodonik peroksid nastao nakon oksidacije purina. Glavni fiziološki supstrati MPO su halogenidi (npr. Hlorid) i pseudohalidi (poput tiocijanata), koji formiraju mikrobicidne hipohalozne kiseline poput hipohloraste kiseline (izbeljivač) i hipotiocijaninske kiseline (J. Clin. Biochem. Nutr., 2011, 48, 8-19).

[0003] Neutrofili igraju važnu mikrobicidnu ulogu fagocitoziranjem (zahvatanjem) i ubijanjem mikroorganizama. Zahvaćen sadržaj je uključen u vakuole, nazvane fagozomima, koji se stapaju sa granulama koje sadrže mijeloperoksidazu i formiraju fagolizom. U fagolizomima enzimska aktivnost mieloperoksidaze dovodi do stvaranja hipohloraste kiseline, potentnog baktericidnog jedinjenja (Free Radical Biology & Medicine, 2010, 49, 1834-1845).

Hipohlorasta kiselina sama po sebi oksiduje i najjače reaguje sa tiolima i tioetrima, ali takođe pretvara amine u hloramine i hlorate u aromatske aminokiseline.

[0004] MPO se takođe može pustiti na spoljašnju stranu ćelija gde reakcija sa hloridom može izazvati oštećenje susednog tkiva. Pored ovog kontrolisanog oslobađanja MPO, neutrofili mogu takođe stvarati mreže dekondenzovane DNK isprepletene sa intracelularnim proteinima kao što je MPO u vanćelijski prostor, takozvane neutrofilne vanćelijske zamke (NET). Smatra se da ovi NET igraju ulogu u odbrani domaćina protiv vanćelijskih mikroba, i takođe se pretpostavlja da su važan patofiziološki mehanizam u akutnim upalnim bolestima kao što je imunotromboza koja se javlja tokom sepse (Nature Rev. Immunol, 2013, 13, 34) i kod autoimunosti, kao što je sistemski eritematozni lupus (SLE) (J. Immunol., 2011, 187, 538-552). Značajno, MPO je potreban za formiranje NET (Blood, 2011, 117, 953).

[0005] Sistemski nivoi MPO su dobro opisani faktor rizika za razne kardiovaskularne bolesti (npr. srčana insufijencija, akutni koronarni sindrom, infarkt miokarda, stabilna koronarna bolest i stanja vezana za aterosklerozu (Circulation, 2003, 108, 1440-1445; N. Engl. J. Med., 2003, 349,1595-604; J. Am. Coll. Cardiol., 2007, 49, 2364-70). Uloga MPO u ovim morbiditetima nije povezana samo sa oksidativnim oštećenjima koja uzrokuju enzimski proizvodi, već i zbog konzumiranja azotnog oksida, važnog regulatora vaskularne relaksacije i relaksacije kardiomiocita. Značajno, doprinos MPO kardiovaskularnim bolestima nije samo infiltracijom neutrofila i monocita u vaskulaturu i miokard, već i putem strateškog taloženja vanćelijskog MPO na proteoglikane na bazolateralnoj strani endotela (Science, 2002, 296, 2391).

[0006] Uzročna uloga MPO za razvoj kardiovaskularnih bolesti podržava i niži kardiovaskularni morbiditet kod pacijenata sa MPO defektom (Acta Haematol., 2000, 104, 10-15) i smanjene rezerve koronarnog protoka (J. Biomed. Sci., 2004, 11, 59-64) i povećani mortalitet kod pacijenata koji nose mutaciju dobijanja funkcije u MPO promotoru (New Engl. J. Med., 2004, 350, 517; Free Rad. Biol. & Med., 2009, 47, 1584; J. Biol. Chem., 1996, 271, 14412-14420). Direktan uticaj na vaskularni protok i opuštanje primećen je i nakon primene MPO kod svinja (Eur. Heart J., 2011, 33, 1625).

[0007] Povezanost MPO aktivnosti sa bolestima je stoga implicirana kod kardiovaskularnih bolesti sa mikrovaskularnom upalom i reaktivnom fibrozom, uključujući srčanu insufijenciju kao što je srčana insufijencija sa očuvanom ejekcionom frakcijom, srčana insufijencija sa redukovanom ejekcionom frakcijom, akutni koronarni sindrom, infarkt miokarda, stabilna bolest koronarne arterije i stanja povezana sa aterosklerozom.

[0008] Iako je postignut značajan napredak u razumevanju i tretmanu srčane insufijencije (SI), morbiditet i smrtnost zbog SI i dalje su visoki. Glavni uzrok srčanog preuređenja, koji je u osnovi razvoja SI, je povećani stres ventrikularnog zida kao rezultat trajne hipertenzije, infarkta miokarda, insuficijencije zalistaka ili drugih događaja. Srčanim preuređenjem naziva se svaka promena u srčanoj strukturi, dimenziji, masi ili funkciji i, mada je u početku kompenzacioni mehanizam za održavanje srčanog izlaza, može doći do dekompenzacije i razvoja SI (J. Am. Coll. Cardiol., 2000, 35, 569-582). Glavni procesi koji doprinose remodelaciji srca su hipertrofija kardiomiocita (rast), fibroza i upala (Nat. Rev. Mol. Cell. Biol., 2006, 7, 589-600; Circ. Res., 2010, 106, 47-57).

Trenutno osnova tretmana SI zasnovana je na smanjenju stresa ventrikularnog zida, i sastoji se uglavnom od upotrebe inhibitora renin-angiotenzin-aldosteron sistema, kao što su inhibitori enzima koji pretvaraju angiotenzin (ACE-I) od β-adrenergičkih blokatora i diuretika (Eur. Heart J., 2012, 14, 803-869). Uprkos tretmanu, smrtnost od SI još uvek je visoka i oko 50% svih pacijenata umre u roku od 5 godina nakon prve dijagnoze (J. Am. Coll. Cardiol., 1999, 33, 734-742). Zbog toga su hitno potrebne nove mogućnosti tretmana koje su direktno usmerene na glavne molekularne i ćelijske procese koji pokreću srčano preuređivanje. Srčana insufijencija se može podeliti u SI sa redukovanom ejekcionom frakcijom (HFrEF) i sa očuvanom ejekcionom frakcijom (HFpEF) (Curr. Heart Fail. Rep., 2012, 9, 363-368). HFrEF i HFpEF se razlikuju u smislu patofiziologije, kliničkih karakteristika i tretmana. HFrEF se često naziva sistolički SI, i tretman sa ACE inhibitorima, β-blokatorima i diureticima uspešno smanjuje stopu smrtnosti i morbiditeta kod pacijenata sa HFrEF. Suprotno tome, za HFpEF, koji se često označava kao dijastolički SI, do danas ne mora biti ubedljivo prikazan tretman koji smanjuje smrtnost ili morbiditet. Ovo je alarmantno, jer incidencija i prevalencija HFpEF raste, kako u apsolutnom smislu, tako i u odnosu na HFrEF (Eur. Heart J., 2013, 34, 1424-1431). Ključna karakteristika HFpEF je smanjena kontraktilnost i opuštanje ventrikularnog zida. Srčana fibroza daje veliki doprinos ovom ukočenju ventrikularnog zida. Ciljana srčana fibroza je stoga potencijalna terapijska strategija za pacijente sa HFpEF, ali i kod pacijenata sa HFrEF fibroza ima važnu ulogu. Štaviše, HFpEF može preći u srčanu dilataciju i u HFrEF. Zbog toga će biti važno istražiti da li farmakološko ciljanje srčane fibroze može zaustaviti ili oslabiti HFpEF i njegov potencijalni prelazak u HFrEF. Čini se da mikrovaskularna upala koja rezultuje intersticijskom fibrozom igra važnu ulogu u razvoju HFpEF (J. Am. Coll.

Cardiol., 2013, 62, 263-271) i pokazana je povezanost između SI i upalnog enzima, mijeloperoksidaze (MPO) (J. Am. Coll. Cardiol., 2007, 49, 2364-2370). U pogledu fibroze, postoje podaci koji sugerišu da je hipohlorasta kiselina (HOCl) MPO proizvoda važan regulatorni prekidač koji modulira proteine vanćelijskih matrica, uključujući metaloproteinaze (MMP) (J. Biol. Chem., 2001, 276, 41279-41287; J. Biol. Chem., 2003, 278, 28403-28409). Ovo je takođe podržano prigušivanjem atrijalne fibroze izazvane angiotenzinom II i smanjenom MMP aktivnošću koja je primećena u manjku MPO. Štaviše, dodavanje rekombinantnog MPO kod mpo-/-miševa rezultovalo je atrijalnom fibrizijom što ukazuje da je povećana MPO aktivnost dovoljna za indukciju fibroze (Nat. Med., 2010, 16, 470-474). U modelu post-miokardijalnog infarkta (MI), Mpo-/-miševi su takođe pokazali smanjeno preuređenje ventrikula i poboljšanu funkciju (J. Exp. Med., 2003, 197, 615-624). Ovi rezultati zajedno pokazuju da je MPO aktivnost ključni igrač za strukturno preuređivanje miokarda pod patološkim uslovima.

[0009] Farmakološka MPO inhibicija aktivnosti može oslabiti srčanu fibrozu i očuvati funkciju srca pod uslovima koji mogu pokrenuti (dijastolički) HFpEF i (sistolički) HFrEF. Naročito ukočenje srca kao rezultat opsežne fibroze može se sprečiti i sačuvati srčana funkcija.

[0010] Postoji potreba za oralno aktivnim inhibitorom MPO za tretman npr. srčana insufijencija i stanja povezanih sa koronarnom arterijom. Kako bi se povećao terapeutski indeks takvog leka, potrebno je dobiti MPO inhibitor koji je selektivan za MPO u odnosu na druge peroksidaze, kao što je na primer TPO, kako bi se smanjio rizik od štetnih događaja povezanih sa štitnom žlezdom. Smatra se da visoka selektivnost za MPO u odnosu na TPO može smanjiti rizik od rasta štitne žlezde (Pharm. Res., 2013, 30, 1513-24. Dalje, poželjno je da MPO inhibitor za upotrebu u kardiovaskularnoj terapiji ima ograničena svojstva prodiranja u krvno moždanu barijeru, kako bi se umanjio njegov efekat na centralni nervni sistem (CNS).

[0011] WO2003/089430, WO2005/037835, WO2007/120097, WO2007/120098 i WO2007/142576 obelodanjuje derivate tioksantina i njihovu upotrebu kao MPO inhibitori u terapiji.

[0012] WO2006/062465 i WO2007/142577 obelodanjuje derivate 2-tiokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona za koje se tvrdi da su MPO inhibitori. Navedeno je da jedinjenja mogu pokazati selektivnost prema srodnim enzimima kao što je TPO.

[0013] WO2009/025618 obelodanjuje derivate tioksantina i 2-tiokso-1,2,3,4-tetrahidropirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona i upotrebu MPO inhibitora za tretman atrofije više sistema (MSA) i Huntington-ove bolesti (HD) i za neuroprotekciju.

[0014] J. Labelled Compounds and Radiopharmaceuticals, 2012, 55, 393-399, obelodanjuje neke tritisane,<13>C i<14>T označene derivate tioksantina, kao i<14>C označeno jedinjenje pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona. Za jedinjenja se navodi da su MPO inaktivatori.

[0015] J.Biol. Chem., 2011, 286, 37578-37589, obelodanjuje određene derivate tioksantina. Za jedinjenja je navedeno da inhibiraju MPO u plazmi i smanjuju hlorinaciju proteina u mišjem modelu. Za jedinjenja se takođe tvrdi da su loši TPO inhibitori.

[0016] WO2013/068875 obelodanjuje derivate tiopirimidona za koje se tvrdi da su MPO inhibitori.

[0017] Cilj je pružiti nove MPO inhibitore korisne u terapiji. Dalji cilj je pružiti nova jedinjenja koja imaju poboljšanu selektivnost za MPO enzim u odnosu na TPO enzim i/ili koja imaju ograničena svojstva prodiranja kroz krvno moždanu barijeru.

SAŽETAK

[0018] Dato je jedinjenje formule (I).

gde

R<1>je H, F, Cl ili CF3,

R<2>je H, CH3ili C2H5, i

R<3>je H, CH3, C2H5, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, ciklopropil, ciklopropilmetil, ciklobutil, ciklobutilmetil ili ciklopentil,

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.

[0019] Jedinjenja formule (I) su MPO inhibitori. Stoga se jedinjenja formule (I) mogu da se koriste kao lek, posebno za poremećaje, bolesti ili stanja odgovorna za MPO inhibiciju, tačnije kardiovaskularna stanja, uključujući koronarnu bolest arterija, srčana insufijencija (SI), srčana insufijencija sa redukovanom ejekcionom frakcijom (HFrEF) i srčana insufijencija sa očuvanom ejekcionom frakcijom (HFpEF), u kojima MPO ima ulogu.

[0020] Treba razumeti da kada je apsolutna konfiguracija (R ili S) pojedinačnog enantiomera jedinjenja koja su ovde obelodanjena navedena u ovoj specifikaciji, to je atom ugljenika za koji je R<2>vezan, koji je stereocentar (hiralni centar) o kome je reč.

KRATAK OPIS SLIKA

[0021]

Slika 1 prikazuje vrednosti opterećenja biomarkera povezanih sa MPO za predviđanje simptomatske ozbiljnosti HFpEF pacijenata (NYHA klasa). Radi jasnoće, vrednosti opterećenja preostalih promenljivih (n=240) su na slici izostavljene. Kako bi se prikazane vrednosti opterećenja postavile u perspektivi na ostatak podataka, maksimalne i minimalne vrednosti opterećenja u skupu podataka su označene isprekidanim linijama. Za poređenje je prikazana crna traka koja predstavlja vrednost opterećenja za NT-proBNP.

Slika 2 prikazuje dozno-zavisnu redukciju urinske kiseline MPO-inhibitorom AZD3241 kod zdravih volontera. Pacijenti su primali placebo ili naznačenu dnevnu dozu tokom 10 dana, i izračunata je razlika u nivou urata u plazmi u odnosu na početnu vrednost. Svaki simbol predstavlja jednog pacijenta.

Slika 3 prikazuje da aktivirani MPO pokreće proizvodnju urata in vitro. Aktivirani MPO je inkubiran sa ksantinom i titriranim količinama Primera 3: 1-{2-[(1R)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on tokom 80 minuta, nakon čega su nivoi urata kvantifikovani pomoću LC-MS. Tačkasta linija predstavlja urat koji je formiran u prisustvu neaktiviranog MPO.

Slika 4 prikazuje obrazac praškaste rendgenske difrakcije za Primer 3 (j): 1-{2-[(1R)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on.

Slika 5 prikazuje obrazac praškaste rendgenske difrakcije za Primer 7: 1-[2-(aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on.

DETALJAN OPIS

[0022] Kako bi se izbegla sumnja, podrazumeva se da kada je u ovoj specifikaciji grupa kvalifikovana sa „definisano iznad“, navedena grupa obuhvata prvu i najširu definiciju koja se pojavljuje, kao i svaku i sve ostale definicije za tu grupu.

[0023] U jednom aspektu, pružena su jedinjenja formule (I), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, gde R<1>predstavlja H, F, Cl ili CF3.

U daljem otelotvorenju, R<1>predstavlja Cl.

U jednom otelotvorenju, R<2>predstavlja H, CH3ili C2H5.

[0024] U daljem otelotvorenju, R<2>predstavlja CH3ili C2H5.

[0025] U narednom daljem otelotvorenju, R<2>predstavlja CH3.

U jednom otelotvorenju, R<3>predstavlja H, CH3, C2H5, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, ciklopropil, ciklopropilmetil, ciklobutil, ciklobutilmetil ili ciklopentil.

[0026] U daljem otelotvorenju, R<3>predstavlja H.

[0027] U narednom daljem otelotvorenju, atom ugljenika za koji je R<2>vezan ima R-konfiguraciju kada R<2>predstavlja CH3ili C2H5.

[0028] U jednom otelotvorenju jedinjenje formule (I) je izabrano iz grupe koju čine:

1-{2-[(1R)-1-aminopropil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-[2-(1-aminoetil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-(2-[(1R)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-{2-[(1S)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-{4-hloro-2-[1 -(metilamino)etil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-{4-hloro-2-[(etilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin1-[2-(aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{4-hloro-2-[(metilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-(2-{[(ciklobutilmetil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-(2-[(ciklobutilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-(2-[(ciklopentilamino)metil]benzil[-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-(2-{[(2-metilpropil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-(2-[(propan-2-ilamino)metil]benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-[2-(aminometil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on;

1-{2-[(metilamino)metil]-4-(trifluorometil)benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; i

njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0029] Treba napomenuti da bilo koje od ovih specifičnih jedinjenja može biti isključeno iz bilo kog od ovde navedenih otelotvorenja.

[0030] U jednom otelotvorenju je pružen postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I), i međuproizvodi koji se koriste u njihovoj pripremi.

[0031] Naredna otelotvorenja je proizvod koji se može dobiti bilo kojim od ovde opisanih procesa ili primera.

Dalje, zbog činjenice da je apsolutna konfiguracija enantiomera ovde opisanih jedinjenja određena spektroskopskom studijom, pre nego na primer rendgenskom studijom (pogledati radni Primer 3 (b)), treba razumeti da će R i S oznaka biti obrnuta ako se rezultati navedene spektroskopske studije iz nekog ili drugog razloga dokažu pogrešnim.

MEDICINSKA I FARMACEUTSKA UPOTREBA

[0032] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli su korisni jer poseduju farmakološku aktivnost kao inhibitori MPO enzima.

[0033] Jedinjenja formule (I) i njihove farmaceutski prihvatljive soli su naznačeni za upotrebu u tretmanu ili profilaksi bolesti ili stanja u kojima je poželjna modulacija aktivnosti enzima mieloperoksidaze (MPO). Konkretno, povezanost MPO aktivnosti sa bolešću uključena je kod kardiovaskularnih bolesti. Obelodanjena jedinjenja su posebno indikovana za upotrebu u tretmanu bolesti koronarnih arterija i stanja ili poremećaja srčana insufijencija kod sisara, uključujući čoveka. Dalje, obelodanjena jedinjenja su posebno indikovana za upotrebu u tretmanu hronične bolesti bubrega (CKD), kardiorenalnog sindroma (CRS), bezalkoholnog steatohepatitisa (NASH) i stanja ili poremećaja aritmije kod sisara, uključujući čoveka.

[0034] Stanja ili poremećaji koji se mogu posebno napomenuti uključuju koronarnu arterijsku bolest, akutni koronarni sindrom, srčana insufijencija, srčana insufijencija sa redukovanom ejekcionom frakcijom i srčana insufijencija sa očuvanom ejekcionom frakcijom.

[0035] Očekuje se da će profilaksa biti posebno relevantna za tretman osoba koje su pretrpele prethodnu epizodu ili se na drugi način smatra da su pod povećanim rizikom od bolesti ili stanja u pitanju. Osobe izložene riziku od razvoja određene bolesti ili stanja uglavnom uključuju osobe koje imaju porodičnu istoriju bolesti ili stanja, ili one koje su identifikovane genetskim testiranjem ili skriningom ili su identifikovane pomoću određenog uzorka biomarkera da su posebno podložne razvoju bolesti ili stanja.

[0036] Za gore navedene terapijske indikacije, primenjena doza će, naravno, varirati u zavisnosti od korišćenog jedinjenja, načina primene i željenog tretmana. Međutim, generalno, dobijeni su zadovoljavajući rezultati kada se jedinjenja primenjuju u čvrstom obliku između 1 mg i 2000 mg dnevno.

[0037] Jedinjenja formule (I) i njihovi farmaceutski prihvatljivi derivati, mogu se koristiti samostalno ili u obliku odgovarajućih farmaceutskih sastava u kojima su jedinjenje ili derivat u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Prema tome, drugi aspekt se odnosi na farmaceutski sastav koji sadrži novo jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so, u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem. Primena može biti, ali nije ograničena na, enteralni (uključujući oralni, sublingvalni ili rektalni), intranazalni, inhalacioni, intravenski, topički ili drugi parenteralni pute. Konvencionalni postupci za izbor i pripremu odgovarajućih farmaceutskih formulacija su opisani u, na primer, Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 2nd Ed.2002. Farmaceutski sastav poželjno sadrži manje od 80% i poželjnije manje od 50% jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0038] U jednom otelotvorenju je pruženo jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu kardiovaskularnih bolesti kod sisara, naročito čoveka.

[0039] U daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu stanja gde bi MPO inhibicija bila korisna.

[0040] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu bolesti koronarnih arterija kod sisara, naročito čoveka.

[0041] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu akutnog koronarnog sindroma kod sisara, posebno čoveka.

[0042] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije kod sisara, naročito čoveka.

[0043] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije sa redukovanom ejekcionom frakcijom kod sisara, naročito kod čoveka.

[0044] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije sa očuvanom ejekcionom frakcijom kod sisara, naročito kod čoveka.

[0045] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu CKD kod sisara, posebno čoveka.

[0046] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu CRS kod sisara, posebno čoveka.

[0047] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu NASH kod sisara, naročito čoveka.

[0048] U narednom daljem otelotvorenju pruženo je jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), za upotrebu u terapiji, posebno u prevenciji ili tretmanu aritmije kod sisara, naročito kod čoveka.

[0049] U jednom otelotvorenju je pružena farmaceutska formulacija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I) i farmaceutski prihvatljiv rastvarač, ekscipijent i/ili inertni nosač.

[0050] U narednom otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu stanja gde bi MPO inhibicija bila korisna.

[0051] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu bolesti koronarnih arterija kod sisara, naročito čoveka.

[0052] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu akutnog koronarnog sindroma kod sisara, naročito čoveka.

[0053] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I) ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije kod sisara, naročito čoveka.

[0054] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije sa redukovanom ejekcionom frakcijom kod sisara, naročito kod čoveka.

[0055] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu srčane insufijencije sa očuvanom ejekcionom frakcijom kod sisara, naročito kod čoveka.

[0056] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu CKD kod sisara, naročito čoveka.

[0057] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu CRS kod sisara, posebno čoveka.

[0058] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu NASH kod sisara, naročito čoveka.

[0059] U narednom daljem otelotvorenju pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja formule (I), u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem ili nosačem, za upotrebu u terapiji, naročito u prevenciji ili tretmanu aritmije kod sisara, naročito kod čoveka.

[0060] Takođe je pružen postupak za dobijanje takvog farmaceutskog preparata koji sadrži mešanje sastojaka.

[0061] U jednom aspektu, nivoi urata u plazmi mogu se koristiti kao sredstvo za stratifikaciju i farmakodinamički biomarker za tretman inhibitorom MPO.

[0062] Kako bi se kontekstualizovao MPO u patofiziologiji HFpEF, skup biomarkera povezanih sa MPO kvantifikovan je u plazmi od pacijenata sa HFpEF, tj. KaRen kohorta (Eur. J. Heart Failure, 2009, 11, 198-204). Kohorta predstavlja pacijente sa dijagnozom HFpEF koji su praćeni zbog događaja 18 meseci nakon uključivanja u studiju. Pored podataka o EKG i ehokardiografiji pri uključivanju, registar uključuje i podatke o lekovima, anamnezi i podacima kliničke hemije. Pored nivoa MPO i njegove aktivnosti, kvantifikovani su naredni biomarkeri (mehanički razlog/veza unutar zagrade): kalprotektin, lipokalin-2 (NGAL), sTNFR1 (učešće neutrofila/monocita), arginin (Arg), asimetričan (ADMA) ) i simetričan (SDMA) dimetil arginin, endotelin-1 (vaskularno zdravlje); urat i alantoin (purinski katabolizam i oksidativni ton), TIMP-1, TIMP-4 i osteopontin (pregradnja tkiva).

[0063] Analiza glavne komponenta - ortogonalna projekcija na latentne strukture analiza parcijalnog najmanjeg kvadra (OPLS) - izvedena je kako bi se identifikovale i rangirale promenljive (n=256) objašnjavajući simptomatsku ozbiljnost bolesti (NYHA ocena (The Criteria Committee of the New York Heart Association. Nomenclature and Criteria for the Diagnosis of Diseases of the Heart and Great Vessels.9th ed. Boston, Mass: Little, Brown & Co; 1994: 253-256)). Podaci iz KaRen registra spojeni su sa podacima o biomarkerima vezanim za MPO, dobijenim iz plazme prikupljene prilikom uključivanja pacijenta u studiju. Svi podaci su skalirani na jednostruku varijansu i srednje vrednosti su centrirane. Pored toga, promenljive sa maksimalnim/srednjim odnosom> 10 transformisane su kako bi povećale jednak uticaj svih promenljivih. Ovo je generisalo matricu podataka koja se sastojala od 257 promenljivih kod 86 pacijenata koji su bili podvrgnuti analizi glavnih komponenti korišćenjem Simca 13 (Umetrics, Umeå, Sweden). U OPLS analizi, promenljive (opterećenja) koje doprinose predviđenom odgovoru, u ovom slučaju NYHA ocena, mogu se odvojiti od opterećenja koja se razlikuju nezavisno od odgovora, dakle ortogonalne promenljive.

Informativne promenljive mogu zauzvrat biti ili pozitivno ili negativno povezane sa odgovorom. Što je veća vrednost opterećenja (bilo pozitivna ili negativna), to je bolja korelacija sa predviđenim odgovorom. Model OPLS koji predviđa NYHA rezultat objasnio je 50% ( R2Y = 0,50) varijacije NYHA rezultata, sa Q2 vrednošću 0,26 nakon pune Jack knife cross validacije kako je implementirano u SIMCA softveru.

[0064] Kao što je naznačeno amplitudom vrednosti opterećenja prikazanim na Slici 1, većina biomarkera koji se odnose na MPO bili su dobri prediktori NYHA rezultata, uz tvrdnju da ti biomarkeri predstavljaju aktivno učešće u patofiziologiji, i nisu samo posmatrači (kao što bi to sugerisale vrednosti opterećenja blizu nule). Zanimljivo je da su svi biomarkeri osim osteopontina, Arg i ADMA, imali bolje rezultate nego NT-proBNP u predviđanju NYHA rezultata.

[0065] Ko-grupisanje biomarkera povezanih sa MPO sa uratom i njegovim oksidacionim alantoinom (takođe potvrđeno značajnom korelacijom između urata i svih pojedinačnih biomarkera kada se analizira na jedno-varijantni način, Tabela 1) sugeriše da urat može u stvari biti biomarker za upalu i hipoksiju tkiva zbog lošeg vaskularnog rada.

Tabela 1

[0066] Postuliramo da hipoksija tkiva, čiji će se stepen odrediti stepenom upale i vaskularnom funkcijom, utiče na koncentraciju urata u plazmi. Ishemija miokarda rezultuje ubrzanim gubitkom ATP i odgovarajućim nakupljanjem nivoa urata u srcima pacova (Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 2004, 286, H677-H684; J. Biol. Chem., 1995, 270, 18797-18803).

Štaviše, povećana proizvodnja urata u miokardu doprinosi sistemskom nivou urata i korelira sa NYHA klasom kod pacijenata sa srčanom insuficijencijom (Circ. J., 2006, 70, 1006-1011).

[0067] Pokazalo se da mijeloperoksidaza deponovana u vaskularnom zidu (J. Clin. Invest., 2001, 108, 1759-1770) pokreće vaskularne disfunkcije i kod zdravih (Eur. Heart J., 2012, 33, 1625-1634) i kod obolelih pojedinaca (Circulation, 2004, 110, 1134-1139; Circulation, 2006, 113, 1871-1878). Stoga sugerišemo da će inhibicija mijeloperoksidaze dovesti do poboljšanja vaskularne funkcije (kao što podržavaju podaci ljudi sa nedostatkom MPO, Eur. Heart J., 2012, 33, 1625-1634), što će poboljšati perfuziju tkiva i snabdevanje kiseonikom i tako smanjiti lokalnu proizvodnju, a time i sistemsku koncentraciju urata. Ovu hipotezu podržavaju i podaci iz kliničkih ispitivanja pomoću dva različita inhibitora mijeloperoksidaze (AZD5904 (http://openinnovation.astrazeneca.com/what-weoffer/compound/azd5904/?_sm_au_=isH0QKlbJkWQtMf7) i AZD3241 (Nuclear Medicine and Biology, 2015, 42, 555-560), od kojih oba na dozno-zavisan način smanjuju nivoe urata kod zdravih pacijenata (podaci prikazani za AZD3241 na Slici 2 (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT00914303).

[0068] Pored uloge MPO u održavanju povišenog nivoa urata usled loše perfuzije kao što je diskutovano iznad, takođe predlažemo da MPO per se može da stvara urat oksidacijom ksantina u kombinaciji sa ksantin oksidazom. Do toga dolazi kada aktivirani MPO naiđe na ksantin in vitro, i povećana proizvodnja urata može biti inhibirana koncentracijom Primera 3 (Slika 3).

[0069] U narednom otelotvorenju, nivo urata u plazmi može se upotrebiti kao sredstvo za stratifikaciju i farmakodinamički biomarker za tretman inhibitorom MPO u kombinaciji sa drugim biomarkerima ili kliničkim karakteristikama za identifikaciju pacijenata sa lošom vaskularnom funkcijom (i time visokim upalnim tonom prema OPLS analizi, iznad).

[0070] U još jednom narednom otelotvorenju, pružen je postupak identifikacije pacijenata pogodnih za tretman inhibitorom MPO koji obuhvata merenje nivoa urata u plazmi.

[0071] Jedinjenja formule (I), ovde prikazana primerom, kada se testiraju u testu za vezivanje MPO, na primer Test A opisan u nastavku, poželjno sa IC50manjim od 50 µM. Jedinjenja formule (I) takođe prikazuju obećavajuće farmakološke profile razdvajanjem željenih i neželjenih efekata in vivo.

[0072] Ove i druge realizacije su detaljnije opisane ovde u daljem tekstu, gde će dalji aspekti biti jasni stručnjaku iz čitanja ove specifikacije.

FARMAKOLOŠKA SVOJSTVA

[0073] Smatra se da su jedinjenja formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli korisni u prevenciji ili tretmanu kardiovaskularnih stanja, uključujući, ali ne ograničavajući se na koronarnu arterijsku bolest, akutni koronarni sindrom, srčana insufijencija, srčana insufijencija sa redukovanom ejekcionom frakcijom i srčana insufijencija sa očuvanom ejekcionom frakcijom kodu sisara, naročito ljudi.

[0074] Kako bi se izbegla sumnja, kako se ovde koristi, izraz „tretman“ uključuje terapeutski i/ili profilaktički tretman.

[0075] Kada se ovde opisano jedinjenje ili so primenjuju kao terapija za tretman poremećaja, „terapeutski efikasna količina“ je količina dovoljna da smanji ili potpuno ublaži simptome ili druge štetne efekte poremećaja, izleči poremećaj, preokrene, potpuno zaustavi ili uspori napredak poremećaja ili umanjiti rizik da se poremećaj pogorša.

[0076] Jedinjenja koja su ovde opisana su stoga naznačena i u terapijskom i/ili profilaktičkom tretmanu ovih stanja.

[0077] Ovde opisana jedinjenja imaju prednost u tome što mogu biti efikasnija, biti manje toksična, biti selektivnija, jača, proizvesti manje nuspojava, lakše se apsorbovati i/ili imati bolji farmakokinetički profil (npr. veća oralna bioraspoloživost i/ili niži klirens), nego jedinjenja poznata u struci.

KOMBINACIONA TERAPIJA

[0078] Jedinjenja formule (I) ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, takođe se mogu primeniti zajedno sa drugim jedinjenjima koja se koriste za tretman gore navedenih stanja.

[0079] U drugom otelotvorenju, postoji kombinovana terapija gde se jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i drugi aktivni sastojak primenjuju se istovremeno, jedno za drugim ili u smeši, za tretman jednog ili više gore navedenih stanja. Takva kombinacija se može koristiti u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih aktivnih sastojaka.

[0080] Jedinjenja koja su ovde opisana mogu biti korisna u tretmanu kardiovaskularnih, metaboličkih i bubrežnih bolesti u kombinaciji sa agensima koji su

• kardioterapije,

• antihipertenzivi,

• diuretici,

• periferni vazodilatatori,

• agensi za modifikaciju lipida,

• anti-dijabetici,

• protiv upalni, ili

• anti-koagulansi.

[0081] Primeri gore navedenog uključuju, ali nisu ograničeni na, digitalis glikozide, antiaritmike, antagoniste kalcijumovih kanala, ACE inhibitore, blokatore receptora za angiotenzin (npr. Valsartan), blokatore endotelinskog receptora, β-blokatore, tiazidne diuretike, diuretike petlje, sintezu holesterola inhibitore kao što su statini (npr. rosuvastatin), inhibitori apsorpcije holesterola, inhibitori holesterolesterskog transfernoog proteina (CETP), anti-dijabetički lekovi kao što su insulin i analozi, GLP-1 analozi, sulfonamidi, inhibitori dipeptidil peptidaze 4, tiazolidindioni, inhibitori SGLT-2, i anti-upalni lekovi, kao što su NSAID i CCR2 antagonisti, antikoagulansi poput heparina, inhibitori trombina i inhibitori faktora Xa, inhibitori agregacije trombocita, P2X7 antagonisti i inhibitori neprilisina (npr. Sakubitril).

[0082] Kada se koriste u kombinovanoj terapiji, podrazumeva se da se jedinjenja formule (I), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i ostali aktivni sastojci, mogu primenjivati u jednom sastavu, potpuno odvojenim sastavima ili njihovim kombinacijama. Takođe se predviđa da se aktivni sastojci mogu primenjivati istovremeno, simultano, sekvencijalno ili odvojeno.

Konkretni sastav i učestalost doziranja kombinovane terapije zavisiće od različitih faktora, uključujući, na primer, način primene, stanje koje se tretira, vrstu pacijenta i bilo kakve potencijalne interakcije između aktivnih sastojaka kombinovanih u jednom sastavu, bilo kakve interakcije između aktivnih sastojaka kada se primenjuju životinjskom pacijentu, i razni drugi faktori poznati lekarima (u kontekstu ljudskih pacijenata), veterinara (u kontekstu pacijenata koji nisu ljudi), i drugih stručnjaka u oblasti.

FARMACEUTSKI SASTAVI

[0083] Jedinjenja formule (I) obično će se primenjivati oralnim, topikalnim, parenteralnim, intravenskim, intramuskularnim, potkožnim ili na injekcijama na druge načine, bukalnim, rektalnim, vaginalnim, transdermalnim i/ili nazalnim putem i/ili inhalacijom, u obliku farmaceutskih preparata koji sadrže aktivni sastojak ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u farmaceutski prihvatljivom obliku doziranja. U zavisnosti od poremećaja i pacijenta koji se tretira i načina primene, sastavi se mogu primenjivati u različitim dozama. Konvencionalni postupci za izbor i pripremu odgovarajućih farmaceutskih formulacija su opisani u, na primer, kod Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 2nd Ed.2002.

[0084] Pogodne dnevne doze jedinjenja formule (I) u terapeutskom tretmanu ljudi su oko 0,0001-100 mg/kg telesne težine, poželjno 0,01-10 mg/kg telesne težine.

[0085] Oralne formulacije su poželjne, posebno tablete ili kapsule koje mogu da se formulišu postupcima poznatim stručnjacima, kako bi se pružile doze aktivnog jedinjenja u rasponu od 0,007 mg do 700 mg, na primer 1 mg, 3 mg, 5 mg, 10 mg, 25 mg, 50 mg, 100 mg i 250 mg.

[0086] Optimalna doza i učestalost primene zavisiće od određenog stanja koje se tretira i od njegove težine; vrste pacijenta; starosti, pola, veličine i težine, ishrane i opšteg fizičkog stanja određenog pacijenta; odnosa težine mozga i telesne mase; drugih lekova koje pacijent može uzimati; puta primene; formulacije; i raznih drugih faktora poznati lekarima i drugim stručnjacima u oblasti.

[0087] Prema dodatnom aspektu, pružena je farmaceutska formulacija koja sadrži jedinjenje formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive derivate, u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačem i/ili nosačem.

Jedinjenja formule (I) mogu biti prisutna u farmaceutskoj formulaciji u koncentraciji od 0,1 do 99,5%, kao što je od 0,5 do 95%, težinski od ukupne formulacije.

PRIPREMA JEDINJENJA

[0088] U drugom aspektu pružen je proces pripreme jedinjenja formule (I), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde proces obuhvata:

a) reagovanje jedinjenja formule (II) sa jedinjenjem formule (III):

gde su R<1>, R<2>i R<3>kako je definisano u formuli (I) i uslovi su takvi da reduktivna alkilacija jedinjenja formule (III) formira N-C vezu između atoma azota jedinjenja formule (III) i atoma ugljenika aldehidne grupe ili ketonske grupe jedinjenja formule (II), i kada je neophodno pretvaranje dobijenog jedinjenja formule (I) u njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i kada je poželjno razdvajanje dobijenog jedinjenja formule (I) na njegove pojedinačne optičke izomere; ili

b) reagovanje jedinjenja formule (II), gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I), sa hidroksilaminom ili njegovom soli, nakon čega se formirani oksim međuproizvod tretira redukcionim agensom, i uslovi su takvi da se formira jednostruka veza između atoma azota hidroksilamin jedinjenja i atoma ugljenika aldehidne grupe ili ketonske grupe, jedinjenja formule (II) i istovremeno je hidroksilna grupa, koja je vezana za atom azota, zamenjena atomom vodonika, i dobijeni primarni derivat amina opciono se pretvara u sekundarno jedinjenje amina kako bi se uneo supstituent R<3>, koji je definisana u formuli (I), konvencionalnim postupkom reduktivne alkilacije koristeći odgovarajuće jedinjenje aldehida ili ketona i redukcioni agens, i kada je neophodno pretvaranje rezultujućeg jedinjenja formule (I) u njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i kada je poželjno razdvajanje dobijenog jedinjenja formule (I) na njegove pojedinačne optičke izomere; ili

c) tretiranje jedinjenja formule (IV) sa reagensom za uklanjanje zaštite:

gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I) i PG<1>i PG<2>su zaštitne grupe koje mogu biti jednake jedna drugoj, i dobijeni primarni derivat amina opciono se pretvara u sekundarno jedinjenje amina u cilju uvođenja supstituenta R<3>, koji je definisana u formuli (I), konvencionalnim postupkom reduktivne alkilacije koristeći odgovarajuće jedinjenje aldehida ili ketona i redukcioni agens, i kada je neophodno pretvaranje rezultujućeg jedinjenja formule (I) u njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i kada je poželjno razdvajanje dobijenog jedinjenja formule (I) na njegove pojedinačne optičke izomere.

[0089] Jedinjenja formule (II) i (III) reaguju jedna sa drugima u uslovima reduktivne alkilacije. Reakcija se obično izvodi na ekstremnoj temperaturi, na primer 0-40°C, u značajno inertnom rastvaraču, na primer N-metilpirolidon. Reakciona smeša se takođe može zagrejati mikrotalasnim zračenjem na višoj temperaturi, na primer iznad 100°C. Tipični redukcioni agensi uključuju borohidride kao što je natrijum cijanoborohidrid. Reakcija redukcije se takođe može metalizovati korišćenjem metala, kao što je, na primer, tetraizopropoksititanijum.

[0090] Jedinjenja formule (II) i jedinjenje hidroksilamina reaguju jedni sa drugima u uslovima formiranja oksima praćenog redukcijom. Reakcija se obično izvodi na ekstremnoj temperaturi, na primer 20-70°C, u značajno inertnom rastvaraču, na primer HOAc. Tipična redukcioni agensi uključuju metale poput cinka.

[0091] Jedinjenja formule (IV) reaguju sa reagensom za uklanjanje zaštite pod uobičajenim uslovima za uklanjanje zaštitnih grupa. Tipično, zaštitne grupe su dve tercbutiloksikarbonilne grupe i tipični agensi za uklanjanje zaštite uključuju kiseline kao što je vodonik hlorid. Reakcija se obično izvodi na temperaturi od oko 30-50°C, u organskom rastvaraču, npr. MeOH.

[0092] Jedinjenja formule (II) mogu se pripremiti, na primer, reakcijom jedinjenja formule (V) sa benzoil izotiocijanatom:

gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I), i PG<3>i PG<4>su zaštitne grupe, koje mogu ali ne moraju biti jednake jedna drugoj, i koje mogu ali ne moraju biti povezane jedna sa drugom kako bi formirale prsten. Uslovi reakcije su takvi da se formira šestočlani 2-tiopirimidinonski prsten, i na kraju se rezultujući međuproizvod tretira sa reagensom za uklanjanje zaštite kako bi se uklonile zaštitne grupe PG<3>i PG<4>kako bi se dobilo jedinjenje formule (II).

[0093] Jedinjenja formule (III) su komercijalno dostupna, poznati u struci ili se mogu pripremiti na konvencionalan način koji zna stručnjak.

[0094] Jedinjenja formule (IV) mogu se pripremiti, npr. reakcijom jedinjenja formule (VI) sa benzoil izotiocijanatom:

gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I), i PG<1>i PG<2>su kao što je definisano u formuli (IV),i uslovi reakcije su takvi da se formira šestočlani 2-tiopirimidinonski prsten kako bi se dobilo jedinjenje formule (IV).

[0095] U reakcijama ciklizacije, ranije navedeno jedinjenje formule (V), ili jedinjenje formule (VI), i benzoil izotiocijanat, polako se dodaju jedni drugima u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je MeOH, i mešaju dok se reakcija ne završi, obično na sobnoj temperaturi između 5 minuta i 4 sata, i ako je potrebno i preko noći. Tipično se tipično dodaje baza, kao što je Cs2CO3, i smeša se može mešati na povišenoj temperaturi tokom dužeg vremena, kao što je, na primer, na 60°C tokom 3-4 sata. Nakon završetka reakcije, smeša se obično tretira sa kiselinom, kao što je HOAc, kako bi se dobilo traženo jedinjenje formule (II) ili formule (IV).

[0096] Jedinjenja formule (V) mogu se pripremiti, na primer, reakcijom etil 3-amino-lH-pirola-2-karboksilata sa jedinjenjem formule (VII):

gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I) i PG<3>i PG<4>su kao što je definisano u formuli (V), i reakcioni uslovi su uobičajeni uslovi reduktivne alkilacije. Obično se tretira jedinjenje amina, kao hlorovodonična so N, N-diizopropiletilamina i HOAc u organskom rastvaraču, npr. etanolu, i zatim se dodaje aldehidno jedinjenje formule (VII). Nakon što se smeša neko vreme meša, npr. na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, dodaje se redukcioni agens, kao što je natrijum cijanoborohidrid, i dobijena smeša se meša dok reakcija ne završi, npr. na sobnoj temperaturi 1-20 sata, kako bi se dobilo jedinjenje formule (V).

[0097] Jedinjenja formule (VI) mogu se pripremiti, na primer, reakcijom pod uslovima reduktivne alkilacije etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilata sa jedinjenjem formule (VIII):

gde su R<1>i R<2>kao što je definisano u formuli (I) i PG<1>i PG<2>su kao što je definisano u formuli (IV). Obično se aminsko jedinjenje uvodi kao hidrohloridna so, koja se zatim tretira sa viškom N, N-diizopropiletilamina pre dodavanja aldehidnog jedinjenja. Poželjno, reduktivni agens, kao što je natrijum cijanoborohidrid, dodaje se nakon što se smeša aminskog jedinjenja i aldehidnog jedinjenja meša na sobnoj temperaturi tokom dužeg vremena, kao što je npr. tokom 18 sati. Reakcija se obično izvodi u alkoholu kao rastvaraču, kao što je MeOH ili etanol, na sobnoj temperaturi i u prisustvu HOAc.

[0098] Jedinjenja formule (VII) mogu se pripremiti kao što je prikazano u Šemi 1 u nastavku i postupcima analognim onima opisanim u primerima.

Šema 1

[0099] Korak 1: Jedinjenje u skladu sa formulom (X), gde se R<1>, R<2>, PG<3>i PG<4>kako je prethodno definisano, mogu dobiti reakcijom jedinjenja sa formulom (IX) gde su R<1>i R<2>kao što je prethodno definisano, odgovarajućim alkoholom ili diolom, kao što je npr. etan-1,2-diol u prisustvu kiseline, kao što je npr. 4-metilbenzensulfonska kiselina, u odgovarajućem rastvaraču, kao što je npr. toluen. Jedinjenja formule (IX), gde su R<1>i R<2>kao što je prethodno definisano, poznati su u struci ili se mogu pripremiti na uobičajen način koji zna stručan hemičar.

[0100] Korak 2: Jedinjenje u skladu sa formulom (VII), gde se R<1>, R<2>, PG<3>i PG<4>kao što je prethodno definisano, mogu dobiti tretiranjem jedinjenja sa formulom (X) gde su R<1>, R<2>, PG<3>i PG<4>, kao što je prethodno definisano, sa jakom bazom, kao što je npr. butilitijum u inertnom rastvaraču, kao što je npr. THF, i zatim tretiranje dobijene smeše sa DMF. Reakcija se poželjno izvodi na niskoj temperaturi kao što je npr. na-78°C.

[0101] Jedinjenja formule (VIII) mogu se pripremiti kao što je prikazano u Šemi 2 u nastavku i postupcima analognim onima opisanim u primerima.

Šema 2

[0102] Korak 1: Jedinjenje u skladu sa formulom (XII) može se dobiti reakcijom jedinjenja sa formulom (XI), gde je R<1>je kao što je prethodno definisano, sa jednim od enantiomera 2-metilpropan-2-sulfinamida u prisustvu baze, kao što je npr. cezijum karbonat u organskom rastvaraču, kao što je npr. dihlorometan. Jedinjenja formule (XI) su poznata ili se mogu pripremiti na uobičajen način koji zna stručan hemičar.

[0103] Korak 2: Jedinjenje u skladu sa formulom (XIII), gde se R<1>i R<2>, kao što su prethodno definisani, mogu dobiti reakcijom jedinjenja sa formulom (XII) sa Grignard-ovim reagensom, kao što je npr. R<2>MgBr, gde je R<2>je kao što je prethodno definisano, u inertnom rastvaraču, kao što je npr. dihlorometan, i opciono odvajanjem dobivenog međuproizvoda na njegove dijastereomere uobičajenim postupcima, kao što je npr. hromatografijom na silika gelu.

[0104] Korak 3: Jedinjenje u skladu sa formulom (XIV), gde se R<1>i R<2>kao što su prethodno definisani, mogu se dobiti tretiranjem jedinjenja sa formulom (XIII) sa reagensom za uklanjanje zaštite, kao što je npr. vodonik hlorid u organskom rastvaraču, kao što je npr. MeOH. Obično se dodaje kiselina tokom hlađenja, i zatim se dobijeni rastvor meša sve dok reakcija nije završena, npr. na sobnoj temperaturi tokom 1-3 sata.

[0105] Korak 4: Jedinjenje u skladu sa formulom (XV), gde se R<1>, R<2>, PG<1>i PG<2>, kao što su prethodno definisani, mogu dobiti tretiranjem jedinjenja sa formulom (XIV) sa odgovarajućim reagensima za sekvencijalno uvođenje odgovarajućih zaštitnih grupa PG<1>i PG<2>. Obično se aminsko jedinjenje sukcesivno tretira sa dva dela di-terc-butil-dikarbonata u prisustvu N, N-dimetilpiridin-4-amina. Reakcija se obično izvodi u organskom rastvaraču, kao što je npr. dihlorometan ili 2-metiltetrahidrofuran, na temperaturi od oko sobne temperature do oko 80°C.

[0106] Korak 5: Jedinjenje u skladu sa formulom (VIII), gde se R<1>, R<2>, PG<1>i PG<2>, kao što su prethodno definisani, mogu dobiti tretiranjem jedinjenja sa formulom (XV) sa sinteznim gasom u prisustvu katalizatora, koji može biti npr. mešavina diacetoksipaladijuma, di((3S,5S,7S)-adamantan-1-il)(butil)-fosfina i tetrametiletilendiamin, u organskom rastvaraču, kao što je toluen. Obično se reakcija izvodi na oko 5 bara i na oko 100°C tokom oko 21 sata. Alternativno, jedinjenje sa formulom (XV) tretira se ugljen-monoksidom u prisustvu dihlorbis (p-dimetilamino fenilditbutilfosfin) paladijuma (II), trietilsilana i baze, kao što je na primer N,N-diizopropiletilamin. Ta se reakcija obično izvodi u DMSO kao rastvaraču i obično se izvodi na povišenoj temperaturi i pri povišenom pritisku tokom dužeg vremena, kao što je npr. na temperaturi od 90°C ili više, pri pritisku od oko 4-5 bara i tokom 24 sata.

[0107] Zaštita i uklanjanje zaštite funkcionalnih grupa je opisano u Protective Groups in Organic Synthesis, 4th Ed, T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience (2006) i Protecting Groups, 3rd Ed, P.J. Kocienski, Georg Thieme Verlag (2005).

[0108] Naredna otelotvorenja obuhvataju farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I).

[0109] So jedinjenja formule (I) može biti korisna zbog jednog ili više svojih hemijskih ili fizičkih svojstava, kao što su stabilnost pri različitim temperaturama i vlagama ili poželjna rastvorljivost u H2O, ulju ili drugom rastvaraču. U nekim slučajevima, so se može koristiti da pomogne u izolaciji ili prečišćavanju jedinjenja. U nekim otelotvorenjima (posebno gde je so namenjena primeni na životinji, npr. čoveku, ili je reagens za upotrebu u pravljenju jedinjenja ili soli namenjene primeni na životinji), so je farmaceutski prihvatljiva.

[0110] Izraz „farmaceutski prihvatljiv“ koristi se za karakterizaciju dela (npr. soli, doznog oblika ili ekscipijenta) kao pogodnog za upotrebu u skladu sa zdravstvenom medicinskom procenom. Generalno, farmaceutski prihvatljiv deo ima jednu ili više prednosti koje prevazilaze bilo kakav štetan uticaj koji taj deo može da ima. Štetni efekti mogu uključivati, na primer, preteranu toksičnost, iritaciju, alergijsku reakciju i druge probleme i komplikacije.

[0111] Ako je jedinjenje dovoljno bazno, farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali nisu ograničene na, neorganske ili organske adicione soli.

[0112] Za preglede pogodnih soli, pogledati Berge i dr., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 ili Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, selection and use, P.H. Stahl, P.G. Vermuth, IUPAC, Wiley-VCH, 2002.

[0113] Kada je kiseli ko-former čvrst na sobnoj temperaturi, i nema ili ima samo delimičnog prenosa protona između jedinjenja formule (I), i takav kiseli ko-former, ko-kristal ko-formera i jedinjenje formule (I) može da bude rezultat pre nego so. Svi takvi ko-kristalni oblici jedinjenja formule (I) su obuhvaćeni ovde.

[0114] Takođe treba razumeti da neka jedinjenja formule (I) mogu postojati u solvatiranom obliku, npr. hidrati, uključujući solvate farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I).

[0115] U narednom otelotvorenju, određena jedinjenja formule (I) mogu postojati kao racemati i racemične smeše, pojedinačni enantiomeri, pojedinačni dijastereomeri i dijastereomerne smeše. Određena jedinjenja formule (I) mogu takođe da sadrže veze (npr. ugljenik-ugljenik veze, ugljenik-azot veze, kao što su amidne veze) gde je rotacija veze ograničena na tu određenu vezu, npr. ograničenje koje proizilazi iz prisustva prstenaste veze ili dvostruke veze. Stereoizomeri se mogu razdvojiti konvencionalnim tehnikama, npr. hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom, ili se stereoizomeri mogu proizvesti stereoselektivnom sintezom.

[0116] U narednom otelotvorenju, jedinjenja formule (I) obuhvataju sve izotopno označene (ili „radio-označene“) derivate jedinjenja formule (I). Takav derivat je derivat jedinjenja formule (I) gde je jedan ili više atoma zamenjen atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi uključuju<2>H (takođe se označava kao „D“ za deuterijum).

[0117] U narednom otelotvorenju, jedinjenja formule (I) mogu se primenjivati u obliku proleka koji se razgrađuje u ljudskom ili životinjskom telu kako bi se dobilo jedinjenje formule (I).

[0118] U struci su poznati različiti oblici prolekova. Za primere derivata prolekova, pogledati: Nature Reviews Drug Discovery 2008, 7, 255 i reference koje su tamo navedene.

Jedinjenja međuproizvodi mogu takođe postojati u enantiomernim oblicima i mogu se koristiti kao prečišćeni enantiomeri, dijastereomeri, racemati ili smeše.

FARMAKOLOŠKA AKTIVNOST

[0119] Postupci za određivanje MPO inhibicione aktivnosti su obelodanjeni u WO 02/090575. Farmakološka aktivnost jedinjenja koja su ovde opisana testirana je na sledećem skriningu (Test A) u kom su jedinjenja testirana u prisustvu askorbata, koji reaguje sa hipohlorastodičnom kiselinom dobijenom od MPO (HOCl) kako bi se formirao dehidroaskorbat. Gubitak askorbata je praćen merenjem apsorbancije na 260 nm.

[0120] Pufer za ispitivanje: 100 µM dietil-triamin penta sirćetne kiseline (DTPA) u puferu koji se sastoji od 10 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 3 mM KCl u 140 mM NaCl, pH 7,4.

[0121] Rastvor enzima: MPO prečišćen iz ljudske ćelijske linije HL60, 1,38 nM (konačna koncentracija 0,7 nM) i L-askorbata, 100 µM (konačna koncentracija 50 µM) u test puferu Rastvor supstrata: H2O2, 98 µM (konačna koncentracija 49 µM) Četrdeset µL rastvora enzima dodato je 0,6 µL jedinjenja serijski razređenog u DMSO. Apsorbancija je izmerena na 260 nm kako bi se dobila prazna vrednost jedinjenja. Nakon dodatnih 10 minuta, dodato je 40 µL rastvora supstrata i zabeležena apsorbancija na 260 nm između 4 i 40 minuta kako bi se dobila kinetička očitavanja aktivnosti enzima. IC50 vrednosti testiranih jedinjenja dobijene su korišćenjem snimaka apsorpcije na 260 nm 20 minuta nakon dodavanja supstrata i izračunati su koristeći standardne postupke.

[0122] Kako bi se detektovala inhibitorna aktivnost tiroidne peroksidaze (TPO), proizvodnja hipojodaste kiseline (HOI) je kvantifikovana. HOI je detektovana reakcijom sa metioninom, koji se pretvara u dehidro-metionin, što se zauzvrat detektuje reakcijom sa viškom jodida pri kiselom pH. Reakcija pretvara I<->u I3<->koji ima apsorbanciju na 353 nm. Ukratko, 0,6 µL jedinjenja serijski razređenog u DMSO dodato je u 25 µL 50 nM bakomovirus-eksprimiranog humanog TPO (dobijeno od RSR Ltd, Cardiff, UK) u puferu za analizu (100 mM Na2HPO4/NaH2PO4, pH 7,4), nakon čega je očitana apsorbancija na 353 nm kako bi se dobila prazna vrednost. Enzimska reakcija je inicirana dodavanjem 25 µL smeše koja se sastoji od 2 mM metionina, 20 µM NaI i 100 µM H2O2u puferu za ispitivanje, i zaustavljena je dodavanjem 10 µL katalaze, 0,25 mg/mL. Nakon dodatnih 5 minuta, dodato je 25 µL 600 mM sumporne kiseline, zatim 25 µL 100 mM KI, i apsorbancija na 353 nm je očitana 5 minuta nakon ovog dodavanja. IC50 vrednosti testiranih jedinjenja dobijene su korišćenjem standardnih postupaka.

[0123] Uopšteno, ovde obelodanjena jedinjenja koja su testirana imala su iznenađujuće visoku selektivnost za MPO enzim u odnosu na TPO enzim u opsegu 220-1600 za IC50(TPO)/IC50(MPO) odnos. Većina jedinjenja (80%) je pokazala odgovarajući odnos IC50vrednosti navedenih enzima koje su bile veće od 500. S druge strane, jedinjenja poznata u struci prema WO 2006/062465, koja su testirana, pokazala su odgovarajući odnos u opsegu od 1 do 92, i većina tih jedinjenja (92%) je imala odnos manji od 50. Prema tome, jedinjenja koja su ovde obelodanjena približno su pokazala deset puta veću MPO/TPO selektivnost u poređenju sa selektivnošću jedinjenja iz prethodnog stanja tehnike prema WO 2006/062465.

[0124] IC50vrednosti (MPO i TPO) za jedinjenja iz primera su navedene u Tabeli 2 u nastavku. Takođe, odnos TPO prema MPO, koji pokazuje selektivnost za MPO nad TPO, za svako Primer jedinjenja, je dat u Tabeli 2.

Tabela 2

PRIMERI

[0125] Naredni primeri su neograničavajući primeri.

Naredne skraćenice su ovde korišćene:

APCI hemijska jonizacija na atmosferskom pritisku aq vodeni

Cs2CO3cezijum karbonat

CH2Cl2dihlorometan

DIPEA N,N-diizopropiletilamin

DMAP N,N-dimetilpiridin-4-amin

DMF N,N-dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

Et2O dietil eter

EtOAc etil acetat

EtOH etanol

FA mravlja kiselina

h sat

HOAc sirćetna kiselina

HPLC tečna hromatografija visokih performansi HCl hlorovodonik

KHSO4kalijum hidrogensulfat

K2CO3kalijum karbonat

MeCN acetonitril

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

min minut

MS maseni spektar

Na2SO4natrijum sulfat

NaHCO3natrijum bikarbonat

NMP N-metilpirolidon

NH3amonijak

NH4Oac amonijum acetat

NMR nuklearna magnetna rezonanca

r.t. sobna temperatura

sat. zasićeno

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TMEDA tetrametiletilendiamin

[0126] Korišćeni su naredni opšti eksperimentalni postupci:

(i) Fazni separatori koji se koriste u eksperimentu su ISOLUTE® Phase Separator kolone. (ii) Fleš hromatografija ravne faze izvedena je korišćenjem SP1™ sistema pročišćavanja kompanije Biotage™ korišćenjem normalne faze silika FLASH+™ (40M, 25M ili 12M) ili SNAPTM KP-Sil kertridža (340, 100, 50 ili 10).

(iii) Pročišćavanje reverzne faze preparativne HPLC je izvršeno korišćenjem

Kromasil® prep C810 µM 250x50 mm kolone obično koristeći gradijent MeCN u vodi/MeCN/HOAc 95/5/0,2 kao pokretnu fazu, ili

SunFire™ Prep C185 µM OBD 19x150 mm kolonu koristeći gradijent MeCN u vodi/MeCN/FA 95/5/0,2 kao pokretnu fazu ili koristeći gradijent MeCN u vodi/MeCN/0,1 M NH4OAc kao mobilnu fazu.

(iv)<1>H NMR merenja su izvršena na Varian INOVA 400, 500 i 600 spektrometrima ili Bruker Avance 400, 500 i 600 spektrometrima koji rade na<1>H frekvencijama od 400, 500 i 600 MHz, respektivno. Eksperimenti su tipično zabeleženi na 25°C.

(v) Uopšteno, svi korišćeni rastvarači su analitičkog kvaliteta, i komercijalno dostupni nevodeni rastvarači rutinski su korišćeni za reakcije.

[0127] Rendgenska difrakciona analiza izvedena je prema standardnim postupcima, koje se mogu naći kod npr. Kitaigorodsky, A.I. (1973), Molecular Crystals and Molecules, Academic Press, New York; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; or Klug, H.P. & Alexander, L.E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley & Sons, New York.

Podaci praškaste rendgenske difrakcije su mereni pomoću Corundum kao unutrašnje reference. Obrazac praškaste rendgenske difrakcije (koja se ovde naziva XRPD) određen je postavljanjem uzorka na nosač nulte pozadine, jednim kristalom silicijuma i širenjem uzorka u tankom sloju.

Praškasta rendgenska difrakcija je zabeležena sa Theta-Theta PANalytical X'Pert PRO (talasna dužina rendgenskih zraka 1,5418 Å nikl-filtrirano Cu zračenje, napon 45 kV, emisija filamenta 40 mA). Korištene su automatske varijabilne divergencije i anitscatter prorezi i uzorci su rotirani tokom merenja. Uzorci su skenirani sa 2-50°2-theta koristeći širinu koraka 0,013° i vreme odbrojavanja 44,37 sekundi, zajedno sa PIXCEL detektorom (aktivna dužina 3,35° 2-teta).

Obrazac praškaste rendgenske difrakcije (XRPD) dobijena je u Bragg-Brentano geometriji. Poznato je da se može dobiti obrazac praškaste rendgenske difrakcije koji ima jednu ili više grešaka u merenju u zavisnosti od uslova merenja, kao što su oprema ili upotrebljena mašina (Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures). Stručnjaci u oblasti difrakcije praškaste rendgenske drifrakcije razumeće da se na relativni intenzitet vrhova može uticati, na primer, zrno veličine veće od 30 mikrona i ne unitarni odnosi slike koji mogu uticati na analizu uzoraka. Dalje, treba shvatiti da intenziteti mogu varirati u zavisnosti od uslova eksperimenta i pripreme uzorka (npr. poželjna orijentacija). Naredne definicije su korišćene za relativni intenzitet (%): 25-100%, vs (vrlo jak); 10-25%, s (jak); 3-10%, m (srednji); 1-3%, v (slab).

Stručnjak će takođe razumeti da na položaj refleksija može uticati tačna visina na kojoj uzorak stoji u difraktometru, i nulta kalibracija difraktometra. Površinska ravnina uzorka takođe može imati mali efekat. Stoga predstavljene podatke difrakcionog uzorka ne treba uzimati kao apsolutne vrednosti. Generalno, greška merenja difrakcionog ugla u praškastom rendgenskom difraktogramu može biti približno plus ili minus 0,2° 2-teta, i takav stepen greške merenja treba uzeti u obzir kada se uzimaju u obzir podaci o difrakciji rendgenskog praha.

[0128] Hemijski IUPAC nazivi su generisani softverom ACD/Labs 2012 koji je pružen od strane Advanced Chemistry Development, Inc. Toronto, Ontario, Canada M5C 1B5.

Primer 1

1-{(2-[(1R)-1-Aminopropil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2d]pirimidin-4-on

[0129]

(a) Terc-Butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)propil]karbamat

[0130] Rastvoru (R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)propan-1-amin hidrohlorida (dobijen na sličan način kao što je međuproizvod (R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etanamin dobijen u Primeru 3(c) ali koristeći etilmagnezijum bromid umesto metilmagnezijum bromida) (0,97 g, 3,40 mmol) u CH2Cl2(15 mL) je dodat TEA (1,42 mL, 10,21 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (0,82 g, 3,74 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim oprana sa vodenim rastvorom KHSO4. Vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(20 mL) i kombinovani organski rastvori su koncentrisani u vakuumu. Ostatak je pročišćen na silika gel koloni koristeći smešu heptana i EtOAc (gradijent, 0 do 15% EtOAc) kao eluent, čime se dobilo 1,42 g (kvantitativni prinos) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca. MS (APCI+) m/z 349[M+H]<+>.

(b) Di-terc-butil[1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)propil]imidodikarbonat

[0131] Rastvoru terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)propil]karbamata (1,19 g, 3,40 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (32 mL) dodati su di-terc-butil dikarbonat (1,49 g, 6,81 mmol) i DMAP (0,83 g, 6,81 mmol). Smeša je mešana na 50°C i zatim di-terc-butil dikarbonat (0,75 g, 3,40 mmol) i drugi deo DMAP (0,42 g, 3,40 mmol) su dodati. Nakon još 4 sata mešanja na 50°C, još jedan deo di-terc-butil dikarbonata (0,37 g, 1,70 mmol) je dodat i smeša je mešana na 50°C preko noći. Još di-terc-butil dikarbonata (0,75 g, 3,40 mmol) i DMAP (0,42 g, 3,40 mmol) je dodato i mešanje je nastavljeno tokom 30 minuta. Smeša je oprana sa vodenim rastvorom KHSO4(1 M), osušena kroz fazni separator i zatim isparena. Sirov proizvod je pročišćen na silika gel koloni koristeći smešu koja sadrži heptan i EtOAc kao eluent (gradijent, 0 do 12% EtOAc). Tako je dobijeno 1,10 g (72%) jedinjenja iz naslova kao bezbojno ulje.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0,93 (t, 3H), 1,37 (d, 18H), 1,8 - 2,19 (m, 2H), 5,17 (dd, 1H), 7,33 (dd, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,65 (d, 1H).

(c) Di-terc-butil[(1R)-1-(5-hloro-2-formilfenil)propil]imidodikarbonat

[0132] Smeša di-terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)propil]-imidodikarbonata (1,05 g, 2,34 mmol), diacetoksipaladijuma (0,053 g, 0,23 mmol), di((3S,5S,7S)-adamantan-1-il)(butil)fosfina (0,26 g, 0,70 mmol) i TMEDA (0,26 mL, 1,75 mmol) rastvorena je u toluenu (4 mL) i rezultujući rastvor je zapečaćen u autoklavu. Autoklav je napunjen sa gasom za sintezu (ugljen monoksid/vodonik, 1:1) na 5 bara i zatim je zagrejan u uljanoj kadi tokom 21 sata na 100°C. Sirov proizvod je pročišćen silika gel hromatografijom koristeći gradijent heptana i EtOAc kao eluent (0 do 18% EtOAc) kako bi se dobilo 0,53 g (57%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0,95 (t, 3H), 1,35 (s, 18H), 1,85 - 2,02 (m, 1H), 2,03 - 2,19 (m, 1H), 5,90 (dd, 1H), 7,60 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 10,22 (s, 1H).

(d) Etil 3-[(2-{(1R)-1-[bis(terc-butoksiugljenil)amino]propil}-4-hlorobenzil)amino]-1H-pirol-2-karboksilat

[0133] Smeši etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida (0,29 g, 1,53 mmol) i EtOH (99,5%, 4 mL) dodati su DIPEA (0,46 mL, 2,66 mmol) i di-terc-butil[(1R)-1-(5-hloro-2-formilfenil)propil]-imidodikarbonat (0,53 g, 1,33 mmol) rastvoren u EtOH (99,5%, 2,5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. HOAc (0,23 mL, 4,00 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata kada je natrijum cijanotrihidroborat (0,088 g, 1,40 mmol) dodat iz delova tokom perioda od 3 minuta. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta i zatim rastvorena sa vodom. Nakon ekstrahovanja dvaput sa EtOAc, organski rastvori su kombinovani i zatim oprani dvaput sa vodenim rastvorom limunske kiseline (0,5 M), dvaput sa vodenim rastvorom bikarbonata i konačno sa rasolom (polu-zasićen). Rastvor je osušen preko MgSO4i rastvarač je uklonjen isparavanjem kako bi se dobilo 0,68 g (95%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0,91 (t, 3H), 1,27 (t, 3H), 1,32 (s, 18H), 1,98 - 2,05 (m, 1H), 2,09 - 2,23 (m, 1H), 4,16 - 4,28 (m, 3H), 4,41 (dd, 1H), 5,26 - 5,33 (m, 1H), 5,43 (s, 1H), 5,82 (bs, 1H), 6,68 (t, 1H), 7,32 (s, 2H), 7,42 (s, 1H), 10,77 (s, 1H).

(e) Di-terc-butil[(1R)-1-{5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]fenil}propil]imidodikarbonat

[0134] Benzoil izotiocijanat (0,20 mL, 1,51 mmol) je dodat kapanjem rastvoru etil 3-[(2-{(1R)-1-[bis(terc-butoksiugljenil)amino]propil}-4-hlorobenzil)amino]-1H-pirol-2-karboksilata (0,68 g, 1,26 mmol) u MeOH (4 mL) je dodat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata i zatim Cs2CO3(0,86 g, 2,64 mmol) je dodat. Smeša je zagrejana na 65°C tokom 2 sata i zatim ohlađena do 10°C. HOAc (0,32 mL, 5,67 mmol) je polako dodat praćen sporim dodavanjem vode (8 mL). Smeša je ekstrahovana sa EtOAc i organski rastvor je osušen (Na2SO4). Rastvarač je uklonjen isparavanjem i tako je dobijeno 0,94 g (kvantitativni prinos) jedinjenja iz naslova.

[0135] Sirovoj smeši di-terc-butil[(1R)-1-{5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]fenil}propil]imidodikarbonata (0,69 g, 1,26 mmol) je dodat HCl (1,25 M u MeOH, 7,05 mL, 8,81 mmol). Smeša je mešana na 50°C tokom 1 sata i zatim ohlađena do 10°C. Voda (2 mL) i zatim vodeni rastvor NH3(25%, 0,63 mL, 8,81 mmol) su polako dodati kako bi se pH prilagodio na 9,2. Formirani talog je prikupljen filtriranjem i opran sa smešom vode i MeOH (2:1, 2 mL). Tako je dobijeno 0,15 g (34,6%) jedinjenja iz naslova sa enantiomernim viškom od 98,8%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 0,91 (t, 3H), 1,52 - 1,72 (m, 2H), 4,08 (t, 1H), 5,73 (dd, 2H), 6,03 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 7,11 (dd, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,58 (d, 1H).[α]D<20>= 37,2° (c=0,5, EtOH). MS (APCI+) m/z 349[M+H]<+>.

Primer 2

1-[2-(1-Aminoetil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0136]

(a) 2-(2-Bromo-5-hlorofenil)-2-metil-1,3-dioksolan

[0137] 1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etanon (8,29 g, 35,50 mmol) rastvoren je u toluenu (180 mL) u boci sa okruglim dnom opremljenoj sa Dean-Stark aparatom. Etan-1,2-diol (5,96 mL, 106,51 mmol) i 4-metilbenzensulfonska kiselina (0,67 g, 3,91 mmol) dodati su i reakciona smeša je zagrejana do refluksa tokom 3,5 sata. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, vodeni rastvor K2CO3(1 M) je dodat i slojevi su razdvojeni. Vodena faza je ekstrahovana sa toluenom i kombinovani organski slojevi su oprani sa vodom i sa rasolom. Rastvor je osušen (MgSO4), filtriran i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo 9,29 g (94%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,80 (s, 3H), 3,78 (m, 2H), 4,08 (m, 2H), 7,13 (m, 1H), 7,52 (m, 1H), 7,66 (m, 1H).

(b) 4-hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehid

[0138] Pod atmosferom azota i na -78°C, butilitijum (2,5 M u heksanu, 14,73 mL, 36,82 mmol) je dodat kapanjem rastvoru 2-(2-bromo-5-hlorofenil)-2-metil-1,3-dioksolana (9,29 g, 33,47 mmol) u THF (100 mL) tokom 30 minuta i rezultujući rastvor je mešan na -78°C tokom 30 minuta. DMF (3,87 mL, 50,21 mmol) je dodat kapanjem na -78°C. Nakon što je dodavanje završeno, reakciji je omogućeno da se zagreje do sobne temperature i mešanje je nastavljeno tokom 10 minuta. Reakciona smeša je ugašena sa vodenim rastvorom NH4Cl (zasićen) i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana dvaput sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni (MgSO4) i rastvarači su uklonjeni pod redukovanim pritiskom. Proizvod je pročišćen fleš hromatografijom (silika gel, eluiranje sa gradijentom od EtOAc i heptana 10% do 20%) kako bi se dobilo 5,95 (78%) jedinjenja iz naslova kao providno bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,68 (s, 3H), 3,64 - 3,66 (m, 2H), 3,94 - 3,97 (m, 2H), 7,24 - 7,28 (m, 1H), 7,52 - 7,54 (m, 1H), 7,74 - 7,77 (m, 1H), 10,52 - 10,53 (m, 1H).

(c) Etil 3-{[4H-hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat [0139] Etil 3-amino-1H pirol-2-karboksilat hidrohlorid (3,65 g, 19,17 mmol) je rastvoren u EtOH (99,5%, 100 mL) i rastvoru je dodat DIPEA (3,34 mL, 19,17 mmol) praćen sa HOAc (1,99 mL, 34,85 mmol). Reakciona smeša je ohlađena do 10°C i zatim je dodat 4-hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzaldehid (3,95 g, 17,43 mmol) rastvoren u EtOH (99,5%, 10 mL). Reakcionoj smeši je omogućeno da dostigne sobnu temperaturu tokom 1 sata. Natrijum cijanotrihidroborat (1,31 g, 20,91 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je ugašena sa vodom (50 mL) i pH je prilagođen do ∼11 sa NaOH. Smeša je ekstrahovana trice sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni (MgSO4) i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Proizvod je pročišćen fleš hromatografijom (izokratski, heptan/ EtOAc, 90/10) kako bi se dobilo 4,61 g (72%) jedinjenja iz naslova kao bezbojna guma.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1,3 - 1,37 (m, 3H), 1,71 (s, 3H), 3,79 - 3,85 (m, 2H), 4,05 - 4,1 (m, 2H), 4,25 - 4,35 (m, 2H), 4,51 - 4,57 (m, 2H), 5,64 - 5,71 (m, 1H), 6,66 - 6,73 (m, 1H), 7,2 - 7,24 (m, 1H), 7,4 - 7,45 (m, 1H), 7,57 -7,6 (m, 1H).

(d) 1-[4-hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0140] Benzoil izotiocijanat (1,70 mL, 12,64 mmol) je dodat kapanjem rastvoru etil 3-{[4hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilata (4,61 g, 12,64 mmol) u MeOH (14 mL) i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta. Dodatni deo benzoil izotiocijanata (0,17 mL, 1,26 mmol) je dodat i reakcija je mešana tokom 30 minuta. Cs2CO3(8,85 g, 27,17 mmol) je dodat i smeša je mešana na 60°C tokom 1,5 sata. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Voda (30 mL) i EtOAc (70 mL) su dodati i talog koji je formiran u organskoj fazi je izolovan filtriranjem. Nakon pranja čvrste supstance sa Et2O, dobijeno je 4,71 g (99 %) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 1,75 (s, 3H), 3,78 - 3,83 (m, 2H), 4,05 - 4,11 (m, 2H), 5,63 - 5,67 (m, 1H), 6,56 - 6,63 (m, 1H), 6,93 - 6,98 (m, 1H), 7,17 - 7,22 (m, 1H), 7,45 - 7,5 (m, 1H). MS (APCI-) m/z 376[M-H]-.

(e) 1-(2-Acetil-4-hlorobenzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on [0141] Suspenziji 1-[4-hloro-2-(2-metil-1,3-dioksolan-2-il)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (4,71 g, 12,47 mmol) u CH2Cl2(25 mL) je dodat TFA (9,26 mL, 124,65 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i zatim je vodeni rastvor NaOH (3,8 M) dodat dok nije dostignu pH od otprilike 11. Formirana čvrsta supstanca je izolovana filtriranjem i proizvod je opran sa CH2Cl2i zatim sa Et2O. Tako je dobijeno 3,49 g (84%) jedinjenja iz naslova kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 2,69 (s, 3H), 5,63 - 5,7 (m, 1H), 5,79 - 5,83 (m, 2H), 6,79 - 6,86 (m, 1H), 6,89 -6,95 (m, 1H), 7,4 - 7,5 (m, 1H), 7,96 - 8,04 (m, 1H). MS (APCI-) m/z 332[M-H]-.

(f) 1-[2-(1-Aminoetil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0142] Smeši 1-(2-acetil-4-hlorobenzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (3,39 g, 10,16 mmol), HOAc (20 mL) i NMP (40 mL) je dodat hidroksilamin hidrohlorid (0,78 g, 11,18 mmol) i smeša je zatim mešana na 60°C tokom 18 sati. Cink (1,02 g, 15,59 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 4 sata. Dodatni deo cinka (1 g, 15,30 mmol) je dodat i smeša je zatim mešana na 60°C tokom dodatna 4 sata. Drugi deo cinka (1 g, 15,30 mmol) je dodat i nakon dodatnih 20 sata mešanja na 80°C još jedan deo cinka (3 g, 45,89 mmol) je dodat. Smeša je zatim mešana na 80°C tokom 40 sata i preostale čvrste supstance su filtrirane. Proizvod je pročišćen preparativnom HPLC (3 injekcije) na C8 koloni koristeći gradijent od 0-70% MeCN u smeši voda/MeCN/HOAc (95/5/0,2) tokom 15 minuta (eluiranje je počelo sa 0% MeCN tokom 5 minuta). Tako je dobijeno 0,86 g (25%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6, 40°C): δ 1,33 - 1,37 (m, 3H), 4,38 - 4,45 (m, 1H), 5,64 - 5,85 (m, 2H), 6,01 - 6,05 (m, 1H), 6,59 - 6,64 (m, 1H), 7,1 - 7,15 (m, 1H), 7,27 - 7,31 (m, 1H), 7,64 - 7,66 (m, 1H). MS (APCI-) m/z 333[M-H]-.

Primer 3

1-{2-[(1R)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0143]

(a) S-(E ili Z)-N-(2-Bromo-5-hlorobenziliden)-2-metilopropan-2-sulfinamid

[0144] 2-Bromo-5-hlorobenzaldehid (4 g, 18,23 mmol) rastvorena je u CH2Cl2(130 mL) i rastvoru je dodat (S)-2-metilpropan-2-sulfinamid (2,32 g, 19,14 mmol) praćen sa cezijum karbonatom (5,94 g, 18,23 mmol). Smeša je refluksovana tokom noći i zatim rastvorena sa rasolom i CH2Cl2. Organski sloj je osušen kroz fazni separator i zatim isparen. Proizvod je pročišćen silika gel hromatografijom koristeći smešu koja sadrži EtOAc i heptan kao eluent (gradijent, 0%-25% EtOAc) kako bi se dobilo 5,60 g (95%) jedinjenja iz naslova kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,21 (s, 9H), 7,61 (dd, 1H), 7,84 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 8,75 (s, 1H).

(b) (S)-N-[(1R)-1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etil]-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0145] S-(E ili Z)-N-(2-Bromo-5-hlorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (5,41 g, 16,78 mmol) rastvorena je u CH2Cl2(200 mL) pod atmosferom azota i rezultujućem rastvoru je dodat metilmagnezijum bromid (11,18 mL, 33,55 mmol) na -45°C. Smeša je mešana između -40°C i -50°C tokom 4 sata i zatim joj je polako omogućeno da dostigne sobnu temperaturu tokom noći. Rastvor NH4Cl (zasićen, 50 mL) je dodat praćen sa vodom (100 mL). Slojevi su razdvojeni koristeći fazni separator i vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa CH2Cl2(150 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrisani u vakuumu. Ostatak je pročišćen silika gel hromatografijom koristeći smešu koja sadrži heptan i EtOAc (gradijent, 10% do 60% EtOAc). Fragmenti koji sadrže veliki dijastereomer – koji je poslednji eluiran iz kolone - su prikupljeni i rastvarač uklonjen isparavanjem. Tako je dobijeno 5,28 g (93%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,15 (s, 9H), 1,30 (d, 3H), 4,65 (m, 1H), 6,10 (d, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,65 (d, 1H), 7,70 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 340[M+H]<+>.

[0146] Apsolutna konfiguracija jedinjenja iz naslova određena je spektroskopijom vibracionog cirkularnog dihroizma (VCD) koristeći materijal koji je dobijen iz sličnog eksperimenta kao u Primeru 3(b). Na osnovu rezultata poređenja eksperimentalnog spektra sa simulirani spektrima dva moguća dijastereomera koristeći izračunavanja gustine funkcionalne teorije, postoji jasno poklapanje između eksperimentalnog spektra i simuliranog spektra dijastereomera koji ima R-konfiguraciju na asimetričnom atomu ugljenika.

(c) (R)-1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etanamin

[0147] (S)-N-[(1R)-1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etil]-2-metilpropan-2-sulfinamid (5,25 g, 15,50 mmol) je tretiran sa MeOH rastvorom HCl (1,25 M,150 mL, 187,50 mmol) na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. Rastvarač je uklonjen isparavanjem. Ostatak rastvorena je u CH2Cl2(200 mL) i rastvor je opran sa vodenim NaHCO3(100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(200 mL) i kombinovani organski slojevi su koncentrisani u vakuumu, kako bi se dobilo 4,02 g (kvantitativni prinos) jedinjenja iz naslova, koje je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1,40 (d, 3H), 4,40 (q, 1H), 7,10 (d, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,60 (s, 1H).

(d) Terc-Butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]karbamat

[0148] Rastvoru (R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etanamina (3,64 g, 15,52 mmol) u CH2Cl2(150 mL) je dodat TEA (2,58 mL, 18,63 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (3,73 g, 17,07 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3,5 sata i zatim oprana sa vodenim rastvorom KHSO4(1M, 100 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(100 mL) i kombinovani organski rastvori su koncentrisani u vakuumu kako bi se dobilo 5,83 g (kvantitativni prinos) sirovog jedinjenja iz naslova.1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1,25-1,50 (d, 3H), 1,60 (s, 9H), 4,75-5,00 (m, 1H), 7,10 (dd, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,50 (d, 1H).

(e) Di-terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]imidodikarbonat

[0149] Rastvoru terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]karbamata (5,19 g, 15,51 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (150 mL) su dodati di-terc-butil dikarbonat (5,08 g, 23,26 mmol) i DMAP (2,84 g, 23,26 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati kada je dodato još di-terc-butil dikarbonat (1,69 g, 7,75 mmol) i DMAP (0,95 g, 7,75 mmol). Smeša je mešana na 50°C tokom 4,5 sata i zatim je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u CH2Cl2(150 mL) i rastvor je opran sa KHSO4(1M, 100 mL) koristeći fazni separator.

Vodena faza je ekstrahovana sa CH2Cl2(100 mL) i kombinovani organski rastvori su koncentrisani u vakuumu. Sirov proizvod je pročišćen dvaput hromatografijom na silika gelu koristeći smešu heptana i EtOAc kao eluent (gradijent, 30% do 70% od EtOAc). Tako je dobijeno 5,05 g (75%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,2-1,4 (m, 21H), 4,70 (m, 1H), 7,25 (dd, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,65 (d, 1H).

(f) Di-terc-butil[(1R)-1-(5-hloro-2-formilfenil)etil]imidodikarbonat

[0150] Di-terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]imidodikarbonat (4,27 g, 9,83 mmol), diacetoksipaladijum (0,22 g, 0,98 mmol), di((3S,5S,7S)-adamantan-1-il)(butil)fosfin (1,06 g, 2,95 mmol) i TMEDA (1,10 mL, 7,37 mmol) su rastvoreni u toluenu (18 mL) i rezultujući rastvor je zapečaćen u autoklavu. Autoklav je napunjen sa gasom za sintezu (ugljen monoksid/vodonik, 1:1) na 5 bara i zatim je zagrejan u uljanoj kadi tokom 21 sata na 100°C. Sirov proizvod je pročišćen silika gel hromatografijom koristeći gradijent heptana i EtOAc kao eluent (0 do 20% EtOAc) kako bi se dobilo 2,15 g (57%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,34 (s, 18H), 1,58 (d, 3H), 6,06 (q, 1H), 7,61 (dd, 1H), 7,67 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 10,14 (s, 1H).

(g) Etil 3-[(2-{(1R)-1-[bis(terc-butoksiugljenil)amino]etil}-4-hlorobenzil)amino]-1H-pirol-2-karboksilat

[0151] Smeši etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida (1,14 g, 5,99 mmol) i EtOH (99,5%, 20 mL) je dodat N-etil-N-izopropilpropan-2-amin (1,82 mL, 10,42 mmol) praćen sa di-terc-butil[(1R)-1-(5-hloro-2-formilfenil)etil]-imidodikarbonatom (2,00 g, 5,21 mmol) rastvorenim u EtOH (99,5%, 5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. HOAc (0,90 mL, 15,63 mmol) je dodat i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 sati kada je natrijum cijanotrihidroborat (0,34 g, 5,47 mmol) dodat iz delova tokom perioda od 3 minuta. Reakciona smeša je zatim mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i zatim rastvorena sa vodom. Nakon ekstrahovanja sa smešom EtOAc (25 mL) i toluenom (25 mL), vodeni rastvor je ekstrahovan sa EtOAc (25 mL). Kombinovani organski rastvori su oprani dvaput sa vodenim rastvorom limunske kiseline (0,5 M, 25 mL), dvaput sa vodenim rastvorom bikarbonata i konačno sa rasolom (polu-zasićen). Rastvor je osušen preko MgSO4i zatim je rastvarač uklonjen isparavanjem na 40°C kako bi se dobilo 2,93 g (kvantitativni prinos) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,27 (t, 3H), 1,31 (s, 18H), 1,59 (d, 1H), 4,21 (m, 3H), 4,37 (dd, 1H), 5,43 (m, 1H), 5,51 (q, 1H), 5,82 (bs, 1H), 6,69 (t, 1H), 7,32 (s, 2H), 7,43 (s, 1H), 10,79 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 522[M+H]<+>.

(h) Di-terc-butil[(1R)-1-{5-hloro-2[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]fenil}etil]imidodikarbonat

[0152] Rastvoru etil 3-[(2-{(1R)-1-[bis(terc-butoksiugljenil)amino]etil}-4-hlorobenzil)amino]-1H-pirol-2-karboksilata (2,79 g, 4,01 mmol) u MeOH (12 mL) je dodat benzoil izotiocijanat (0,79 g, 4,81 mmol) kapanjem. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim je dodat Cs2CO3(2,74 g, 8,42 mmol). Smeša je zagrejana na 60°C tokom 3 sata i zatim je ohlađena do 10°C. HOAc (1,03 mL, 18,05 mmol) je dodat polako praćen sporim dodavanjem vode (24 mL). Formirani talog je prikupljen filtriranjem i zatim opran sa MeOH kako bi se dobilo 2,09 g (97%) jedinjenja iz naslova kao bež čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,33 (s, 18H), 1,67 (d, 3H), 5,48 - 5,7 (m, 3H), 5,91 (d, 1H), 6,67 (d, 1H), 7,25 (dd, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,48 (d, 1H), 12,43 (s, 2H).

MS (APCI+) m/z 533[M-H]-.

(i) 1-{2-[(1R)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0153] Sirovoj smeši di-terc-butil[(1R)-1-{5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]fenil}etil]imidodikarbonata (1,67 g, 1,74 mmol) je dodat HCl (1,25 M, 24,37 mL, 30,46 mmol). Smeša je mešana na 50°C tokom 1 sata i zatim ohlađena sa ledenom kadom. Voda (3 mL) je dodata i vodeni rastvor NH3(25%) je dodat polako do pH 9,3. Formirani talog je prikupljen filtriranjem kako bi se dobilo 0,39 g (67%) jedinjenja iz naslova kao bež čvrsta supstanca sa enantiomernim viškom od 99,9%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,32 (d, 3H), 4,36 (m, 1H), 5,74 (dd, 1H), 6,04 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 7,11 (dd, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,65 (d, 1H).[α]D<20>= 76,8° (c=0,3, MeOH).

MS (APCI+) m/z 335[M+H]<+>.

(j) 1-{2-[(1R)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on (Primer 3j, pripremljen kako je opisano iznad) (690 g, 2,06 mol), etanol (11040 mL) i voda (2760 mL) su dodat 50 L posudi pod azotom. Mobilna i slobodno krećuća suspenzija je zagrejana do 70°C tokom 2,5 sata. Reakcija je ohlađena do sobne temperature nakon mešanja na 70°C tokom 2,5 sata. Smeša je filtrirana (trajalo je otprilike 2 sata da se filtrira) i zatim oprana sa 20% voda/etanolom (690 mL/2760 mL). Čvrsta supstanca je zatim osušena u peći pod vakuumom na 50°C tokom 3 dana kako bi se dobilo 633 g (91% prinos).

<1>H NMR ukazuje na čistoću od >95%.<1>H NMR test ukazuje na čistoću od 101% /-2%, LC ukazuje na čistoću od 99,7%, Karl Fischer titracija ukazuje na 0,86% vode, Pd sadržaj ukazuje na 3 ppm i hiralna čistoća ukazuje na 99,9% ep.

[0154] Pomoću XRPD otkriveno je da je čvrsti ostatak kristalni, i tipični difraktogram je prikazan na Slici 4. Karakteristični položaji vrha su dati u nastavku.

[0155] XRPD obrazac 2-teta (°) 7,4 (vs), 9,0 (s), 10,8 (vs), 14,8 (vs), 20,2 (vs), 22,7 (vs), 23,5 (vs), 25,0 (vs), 30,7 (vs).

[0156] Apsolutna konfiguracija jedinjenja iz naslova potvrđena je jednom kristalnom analizom rendgenskim zracima mesilat soli Primera 3.

Primer 3, alternativna priprema

1-{2-[(1R)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0157]

(a) S-(E ili Z)-N-(2-Bromo-5-hlorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0158] Suspenzija cezijum karbonat< (148,5 g, 0,46 mol), 2-bromo-5-hlorobenzaldehida (100,0 g, 0,46 mmol) i (S)-2-metilpropan-2-sulfinamida (55,1 g, 0,46 mol) u toluenu (600 mL) je mešana tokom 2 sata na 40±5°C zatim ohlađena do 30±5°C. Smeša je filtriran i kolač je opran sa toluenom (200 mL). Filtrati su kombinovani i koncentrovani pod vakuumom. Heptan (1 L) je dodat i smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je ponavljano dokle god je sadržaj toluena bio iznad 15,0%. Rastvor je ohlađen do 15±5°C i mešan tokom 1 sata. Smeša je filtriran i kolač je opran sa heptanom. Čvrsta supstanca je osušena pod vakuumom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (141,0 g, 95,2%).

(b) (S)-N-[(1R)-1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etil]-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0159] Rastvoru S-(E ili Z)-N-(2-bromo-5-hlorobenziliden)-2-metilpropan-2-sulfinamida (100,0 g, 0,31 mol) u DCM (1,5 L) na 0±5°C je sipan MeMgBr (2,8 M u 2-MetF, 0,34 mmol) tokom 12 sati. Nakon dodatnih 14 sati vodeni amonijum hlorid (20% težine, 2 L) je dodat na 0±10°C. Organski sloj je opran dvaput a zasićenim NaCl rastvorom (500 mL) i koncentrovan je pod vakuumom. Heptan (500 mL) je sipan i smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovo je ponavljano dokle god je sadržaj oba DCM i 2-MetF bio iznad 5,0%. Petrolej etar 60-90°C (800 mL) je dodat i sadržaj je zagrejan do 70-80°C i zatim ohlađena do 31-35°C. Smeša je filtrirana i oprana sa petrolej etrom 60-90°C (100 mL). Nakon sušenja pod vakuumom na 40°C dobijeno je 74,0 g, (70,5%) jedinjenja iz naslova.

(c) Terc-Butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]karbamat

[0160] (S)-N-[(1R)-1-(2-Bromo-5-hlorofenil)etil]-2-metilpropan-2-sulfinamidu (720 g, 2,1 mol) i 2-MetF (3,6 L) je dodat koncentrovani HCl (574,0 mL, 6,8 mol) tokom 1 sata na 25±5°C. Rastvor je mešan tokom 2 sata, zatim je vodeni NaOH (15% težine, 1,8 L) dodat dok pH nije dostigao 9. BOC2O (485,3 g, 2,2mol) je dodat na 20±10°C i smeša je mešana tokom 4 sata. Smeša je razdvojena i organski sloj je opran sa vodenim NaOH (4% težine, 2,0 L) zatim sa vodenim NaCl (20% težine, 2,0 L), dvaput. Organska materija je koncentrovana pod vakuumom i heptan (3,6 L) je dodat. Smeša je koncentrovana opet. Ovaj proces je ponavljan dokle god je sadržaj 2-MetF bio iznad 5,0%. Rastvor je ohlađen do 10±5°C. Smeša je filtrirana i oprana sa heptanom. Nakon sušenja pod vakuumom na 40°C dobijeno je 645,0 g (90,7%) jedinjenja iz naslova.

(d) Di-terc-butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]imidodikarbonat

[0161] Terc-Butil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]karbamat (640 g 1,913 mol), DMAP (350,1 g, 2,870 mol) i 2-MetF (3,8 L) je zagrejana do 75-80°C. BOC2O (542,1 g, 2,487 mol) je dodat kapanjem. Rastvor je mešan na 75-80°C tokom 4 sata zatim ohlađen do 25-30°C. Organski sloj je opran sa vodenim NaOH (4% težine, 2 L) zatim dvaput sa vodenim NaCl (20% težine, 2 L). Organski sloj je koncentrovani pod vakuumom zatim je dodat EtOH (3,2 L). Smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ovaj proces je ponavljan dokle god je sadržaj 2-MetF bio iznad 5,0%. Rastvor je zagrejan do 40±5°C i voda (1,6 L) je dodata. Smeša je ohlađena do 10±5°C. Smeša je filtrirana i oprana sa EtOH:vodom 1:1 (1,9 L). Nakon sušenja pod vakuumom dobijeno je jedinjenje iz naslova, 770,0 g, (92,0%).

(e) Di-terc-butil[(1R)-1-5-hloro-2-formilfenil)etil]imidodikarbonat

[0162] Smeša DMSO (800 mL), N-etil-N-izopropil-propan-2-amina (48,1 mL, 276,0 mmol) i trietilsilana (103 mL, 644,0 mmol) je pobuđena i smeštena pod vakuum (100 mbar) i ponovo stavljena po pritisak sa azotom, tri puta. Smeša je prebačena u posudu koja sadrži di-tercbutil[(1R)-1-(2-bromo-5-hlorofenil)etil]imidodikarbonat (80,00 g, 184,0 mmol). Bis(di-tercbutil(4-dimetilaminofenil)fosfine)dihloropaladijum(II) 6,514 g, 9,20 mmol) je dodat. Sadržaj je stavljen pod pritisak sa azotom do 2 bara i oslobođen nazad na atmosferski pritisak tri puta, zatim stavljen pod pritisak sa ugljen monoksidom do 2 bara i oslobođen nazad na atmosferski pritisak tri puta. Posuda je stavljena pod pritisak do 4 bara sa ugljen monoksidom, pobuđivanje je počelo i zatim je zagrejana do 90°C tokom 24 sata. Sadržaj je ohlađena do 20°C i filtriran. Donji sloj je uklonjen i dodat smeši heptana (400 mL) i vode (400 mL).

Gornji sloj je zadržan i donji sloj je ekstrahovan sa heptanom (200 mL). Donji sloj je uklonjen. Dva gornja sloja su kombinovana i oprana sa vodom (400 mL), zatim koncentrovani do ulja koje sadrži jedinjenje iz naslova, (66,5 g, 94,0%).

(f) 1-{2-[(1R)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0163] Suspenziji di-terc-butil[(1R)-1-{5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]fenil}etil]imidodikarbonata (30,0 g, 52,1 mmol) u metanolu (200 mL) na 40-45°C je dodat 4,0 M HCl u metanolu (79,2 mL, 316,8 mmol). Smeša je mešana na 40-45°C tokom 1 sata zatim ohlađena do 20-25°C. Voda (96,5 mL) je dodata. Rastvor je ohlađen do 0-10°C i amonijum hidroksid (56,6%, 31,5 mL, 448 mmol) je dodat do pH 8,5-10. Suspenzija je filtrirana i oprana sa metanolom (60 mL) zatim vodom (60 mL) zatim metanolom (60 mL). Nakon sušenja na 70°C pod vakuumom dobijeno je 16,14 g (92,2%) jedinjenja iz naslova.

Primer 4a

1-{2-[(1S)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0164]

[0165] Dva enantiomera 1-[2-(1-aminoetil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (Primer 2) su dobijena hiralnom hromatografijom koristeći Chiralpak® IA kolonu (250×4,6 mm, 5 µm) koristeći mobilnu fazu koja sadrži heptan, EtOH i TEA (80/20/0,1). Počevši sa 0,66 g od racemskog jedinjenja prema Primeru 2, dobijeno je 0,28 g jedinjenja iz naslova sa enantiomernim viškom od 84%. [α]D<20>= -14,9° (c=0,5, MeOH).

Primer 4b

1-{2-[(1S)-1-Aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0166]

[0167] Počevši sa 2,0 g 2-bromo-5-hlorobenzaldehida i koristeći sličan protokol kao što je opisano u Primeru 3 ali koristeći R-enantiomer 2-metilpropan-2-sulfinamida umesto S-enantiomera dalo je 0,40 g jedinjenja iz naslova sa enantiomernim viškom od 99,2%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,34 (d, 3H), 1,91 (s, 3H), 4,41 (q, 1H), 5,57 - 5,87 (m, 2H), 6,04 (d, 1H), 6,60 (d, 1H), 7,13 (dd, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,66 (d, 1H).

[α]D<20>= -43,9° (c=0,5, MeOH).

Primer 5

1-{4-hloro-2-[1-(metilamino)etil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0168]

[0169] 1-(2-Acetil-4-hlorobenzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on (0,29 g, 0,88 mmol) je suspendovan u EtOH (99,5%, 2,0 mL) i smeši su dodati tetraisopropoksititanijum (0,52 mL, 1,79 mmol) i metanamin (2 M u THF, 2,68 mL, 5,36 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata i zatim je dodat natrijum tetrahidroborat (66,9 mg, 1,77 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, voda i NH3(2 M u MeOH) su dodati kako bi se pH prilagodio na 11. Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i zatim je talog filtriran i opran sa MeOH i EtOAc. Filtrat je uklonjen pod redukovanim pritiskom i proizvod je zatim prečišćen preparativnom HPLC na C18 koloni koristeći gradijent (0-30% MeCN u vodi, MeCN i FA, 95/5/0,2) kao mobilnu fazu. Tako je dobijeno 0,13 g (43%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ1,35 (d, 3H), 2,29 (s, 3H), 4,14 (q, 1H), 5,73 (q, 2H), 6,00 (d, 1H), 6,65 (d, 1H), 7,18 (dd, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 8,17 (s, 1H), 12,50 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 349[M+H]<+>.

Primer 6

1-{4-hloro-2-[(etilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0170]

(a) 1-Bromo-4-hloro-2-(dietoksimetil)benzen

[0171] U reaktor (5 L) je sipan trietil ortoformat (379 mL, 2278 mmol) pod atmosferom azota i zatim pod mešanjem, 2-bromo-5-hlorobenzaldehid (250 g, 1139 mmol) je dodat iz delova tokom 50 minuta. Reaktor je ohlađen tokom dodavanja kako bi se temperatura reakcije održala ispod 21°C. Smeša je mešana na 17°C tokom 3 sata, drugi deo trietil ortoformat (100 mL, 601 mmol) je dodat i mešanje je zatim nastavljeno tokom dodatna 3,5 sata. Heptan (300 mL) je dodat i smeša je filtrirana kroz celit. Filter kolač je opran sa heptanom (200 mL) i kombinovani rastvori su ispareni. Ostatak je ko-isparena četiri puta sa heptanom (200 mL) i zatim prečišćen iz delova silika gel fleš hromatografijom koristeći smešu koja sadrži EtOAc i heksan kao mobilnu fazu (gradijent, 0%-50% EtOAc). Tako je dobijeno 280 g (84%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,13 (t, 6H), 3,43 - 3,69 (m, 4H), 5,51 (s, 1H), 7,36 (dd, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,63 (d, 1H).

(b)4-hloro-2-(dietoksimetil)benzaldehid

[0172] U reaktor (5 L) su sipani 1-bromo-4-hloro-2-(dietoksimetil)benzen (251 g, 855 mmol) i 2-metiltetrahidrofuran (3 L) pod atmosferom azota i smeša je ohlađena do - 60°C. Rastvoru je dodat n-butilitijum (2,5 M u heksanu, 342 mL, 855 mmol) putem cevi. Nakon mešanja tokom 40 minuta, DMF (73 mL, 940 mmol) je dodat tokom period od 12 minuta.

Temperatura smeše je porasla do - 49°C tokom navedenog dodavanja. Smeša je mešana tokom 40 minuta i zatim je temperatura povećana do 0°C. Nakon dodatnih 30 minuta mešanja, voda (300 mL) je dodata tokom perioda od 5 minuta praćena sa polu-zasićenim rastvorom rasola (1,5 L). Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa 2-metiltetrahidrofuranom (1 L). Organski rastvori su oprani sa zasićenim rasolom, osušeni (MgSO4) i ispareni preko noći na 30°C. Tako je dobijeno 193 g jedinjenja iz naslova kao svetlo braon ulje sa čistoćom od 87% (81% efektivni prinos).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1,15 (m, 6H), 3,50 - 3,70 (m, 4H), 5,90 (s, 1H), 7,40 (dd, 1H), 7,70 (d, 1H), 7,80 (d, 1H).

(c) Etil 3-{[4-hloro-2-(dietoksimetil)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat

[0173] U reaktor (10 L) je sipan 4-hloro-2-(dietoksimetil)benzaldehid (181 g, 649 mmol) i MeOH (1 L) i smeši je dodat DIPEA (92 g, 714 mmol) rastvoren u MeOH (100 mL). Etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorid (132 g, 648 mmol) je dodat zajedno sa MeOH (700 mL). Smeša je mešana na 20°C preko noći i zatim je HOAc (78 g, 1298 mmol) dodat.

Natrijum cijanoborohidrid (41 g, 649 mmol) je dodat iz nekoliko delova tokom perioda od 7 minuta sa mešanjem i hlađenjem, tako da temperatura nije porasla iznad 27°C. Rastvor je mešan tokom 40 minuta i zatim je dodata voda (1,8 L). Smeša je ekstrahovana dvaput sa CH2Cl2(1 L) i kombinovani organski rastvori su osušeni (K2CO3) i koncentrovani do zapremine od 1300 mL. Nakon četiri dana smeša je koncentrovana u prisustvu MeOH kako bi se dobio MeOH rastvor (otprilike 1 L) jedinjenja iz naslova. Materijal je korišćen u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4): δ1,20 (t, 6H), 1,30 (t, 3H), 3,25 (m, 1H), 3,40-3,60 (m, 5H), 4,20 (q, 2H), 4,40 (s, 2H), 5,60 (d, 1H), 5,65 (s, 1H), 6,70 (d, 1H), 7,20 (m, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,50 (d, 1H).

(d) 1-[4-hloro-2-(dietoksimetil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0174] MeOH rastvoru (otprilike 1 L) etil 3-{[4-hloro-2-(dietoksimetil)-benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilata (550 mmol) je polako dodat benzoil izotiocijanat (89 g, 677 mmol) tako da je temperatura reakcije održavana između 17°C i 22°C. Smeša je mešana tokom 15 minuta i drugi deo benzoil izotiocijanata (13,5 g, 82,5 mmol) je dodat i nakon dodatnog mešanja tokom 50 minuta, još jedan deo benzoil izotiocijanata (8 g, 50 mmol) je dodat. Smeša je mešana tokom 30 minuta i zatim Cs2CO3(383 g, 1177 mmol) je dodat tokom perioda od 15 minuta. Temperatura je povećana do 30°C tokom 30 minuta i zatim do 40°C tokom 20 minuta. Smeša mešana na 50°C tokom 4 sata i zatim na 10°C preko noći. HOAc (140 mL) je dodat na 10°C tokom perioda od 20 minuta i zatim je temperatura smeše povećana do 19°C. Formiranom talogu je polako dodata voda (1,4 L) i čvrst materijal je izolovan filtriranjem. Filter kolač je opran sa toluenom (2 L) i zatim osušen u vakuumu tokom 3 dana. Tako je dobijeno 201 g (80%, dva koraka) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ1,20 (m, 6H), 3,50-3,70 (m, 4H), 5,80 (s, 2H), 6,00 (s, 1H), 6,75 (d, 1H), 7,30 (m, 1H), 7,50 (s, 1H), 11,70-12,70 (b, 2H). MS (APCI+) m/z 395[M+H]<+>.

(e) 5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehid

[0175] Ohlađenoj smeši TFA (1,89 mL, 25,39 mmol) i CH2Cl2(8 mL) je dodat 1-[4-hloro-2-(dietoksimetil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on (1 g, 2,54 mmol). Ledena kada je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Formirani talog je izolovan filtriranjem i opran sa CH2Cl2dajući kao rezultat 0,69 g (85%) jedinjenja iz naslova kao čvrstu supstancu.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,02 (s, 2H), 6,09 (s, 1H), 6,88 (d, 1H), 7,31 (t, 1H), 7,60 (dd, 1H), 8,09 (d, 1H), 10,24 (s, 1H), 12,41 (s, 1H), 12,51 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 320[M+H]<+>.

(f) 1-{4-hloro-2-[(etilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0176] 5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1il)metil]benzaldehid (22 mg, 0,68 mmol) i etanamin (2 M u THF, 3,39 mL, 6,79 mmol) su rastvoreni u MeOH (5 mL) u mikrotalasnoj epruveti. Reakciona smeša je zagrejana mikrotalasnim zračenjem na 100°C tokom 5 minuta i zatim na 140°C tokom 75 minuta.

Natrijum tetrahidroborat (205 mg, 5,43 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana. Smeša je ugašena dodavanjem vode. Rastvarači su ispareni i sirov proizvod je pročišćen preparativnom HPLC koristeći gradijent od 0-30% MeCN u vodi/MeCN/FA (95/5/0,2).<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 1,10 (t, 3H), 2,65 (q, 2H), 3,85 (s, 2H), 5,76 (s, 2H), 6,10 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 7,19 (dd, 1H), 7,30 (d, 1H), 7,45 (d, 1H). MS (APCI+) m/z 349[M+H]<+>.

Primer 7

1-[2-(Aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0177]

[0178] 5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehid (pogledati Primer 6(e)) (194 mg, 0,61 mmol) je dodat smeši hidroksilamin hidrohlorida (46 mg, 0,67 mmol) i HOAc (80%, 4 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati i zatim je dodat cink (198 mg, 3,03 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 2 sata. Vodeni rastvor NaOH (1 M) je dodat kako bi se pH prilagodio na 12. Rastvarači su uklonjeni pod redukovanim pritiskom i ostatak je pročišćen preparativnom HPLC na C8 koloni koristeći gradijent od 5-45% MeCN u vodi, MeCN i FA (95/5/0,2) pufer.<1>H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 4,40 (s, 2H), 5,75 (s, 2H), 6,15 (d, 1H), 6,97 (d, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,34 (dd, 1H), 7,53 (d, 1H). MS (APCI+) m/z 321[M+H]<+>.

Primer 7, alternativna priprema

1-[2-(Aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0179]

[0180] Suspenzija 5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (pogledati Primer 6(e)) (500 g) i hidroksilamin hidrohlorida (88,1 g, 1,1 ekvivalent) u DMF (5000 mL) je zagrejana na 50°C tokom 3 sata. Reakciji je ohlađena do 18-25°C preko noći i rastvarač je uklonjen u vakuumu (maksimalna temperatura vodene kade 55°C) i voda (7500 mL) je dodata ostatku. 1 M NaOH (vodeni) je zatim dodat suspenziji kako bi se pH prilagodio na 10 (korišćeno je 2000 mL). Nakon mešanja tokom 1 sata, čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa vodom (2 x 1785 mL) i izvučena suva. Dalje sušenje u vakuumskoj peći na 45°C dalo je kao prinos međuproizvod oksim kao belu čvrstu supstancu (395,0 g). Suspenziji kombinovanih serija ovog materijala (450,7 g) u sirćetnoj kiselini (6760 mL) na 18-25°C, cink (50 g) je dodat. Reakcija je zatim zagrejana do 50-60°C. Dodatni cink (830,3 g, ukupno dodat 880,3 g, 10 ekvivalent) je dodat iz delova na 50-60°C. Reakcija je mešana na 50°C tokom 18 sati. Reakcija je filtrirana (vruća) i filtrat je koncentrovan u vakuumu (maksimalna temperatura vodene kade 55°C). Rezultujuća čvrsta supstanca je suspendovana u 20% HCl (vodeni, 3755 mL) tokom 1 sata na 18-25°C zatim filtrirana, opran sa 20% HCl (vodeni, 1500 mL) zatim vodom (2 x 1500 mL) i izvučena suva. Čvrsta supstanca je zatim uzeta u vodi (9014 mL) i MeCN (3155 mL). pH je prilagođen do 9-10 dodavanjem od 1 M NaOH (vodeni, 1120 mL). Gusta suspenzija je mešana tokom 30 minuta i čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa vodom (2 x 1300 mL) i izvučena suva. Dalje sušenje u vakuumskoj peći na 45°C dalo je kao prinos belu čvrstu supstancu (390,9 g, 91%).

Kombinovane serije ovog materijala (1098,1 g) su rastvorene u DMSO (5490 mL) na 100-105°C. Rastvor je ohlađen do 70-80°C i poliran filtriranjem do druge posude. Temperatura rastvora je prilagođena do 75-80°C i EtOH (6560 mL) je dodat kapanjem na 75-80°C tokom 1 sata (kristalizacija se dogodila tokom dodavanja). Suspenzija je mešana na 70°C tokom 14 sati pre hlađenja do 18-25°C pri stopi od 10°C/sat, zatim je mešana tokom 1 sata. Čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa etanolom (4 x 3660 mL) i izvučena suva. Dalje sušenje u vakuumskoj peći dalo je kao prinos jedinjenje iz naslova kao beličastu čvrstu supstancu (870 g). Suspenzija (635,6 g) ovog materijala u vodi (9534 mL)/MeCN (3432 mL) acidifikovana je do pH 1 sa 2 M aq HCl (1907 mL). Nakon mešanja na 18-25°C tokom 1 sata, čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa vodom (3180 mL zatim 2 x 1990 mL) i izvučena suva. Vlažan kolač je suspendovan u vodi (9534 mL)/EtOH (3432 mL) i pH prilagođen do 9-10 (praćeno sa pH metrom) dodavanjem 1 M vodenog NaOH (∼2L). Suspenzija je mešana na 18-25°C tokom 1 sata uz održavanje pH na 9-10 kako je potrebno (koristeći 1 M vodeni NaOH). Čvrsta supstanca je filtrirana, oprana sa vodom (3150 mL zatim 2 x 1574 mL) i izvučena suva. Dalje sušenje u vakuumskoj peći na 45°C dalo je kao prinos jedinjenje iz naslova kao bele kristale (533,9 g),1H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 4,40 (s, 2H), 5,75 (s, 2H), 6,15 (d, 1H), 6,97 (d, 1H), 7,31 (d, 1H), 7,34 (dd, 1H), 7,53 (d, 1H). MS (APCI+) m/z 321[M+H]<+>.

[0181] LC ukazuje na čistoću od 98,4% bez nečistoća >0,5%. Karl Fischer titracija ukazuje na 1,19% vode.

[0182] Pomoću XRPD otkriveno je da je čvrsti ostatak kristalni, i tipični difraktogram je prikazan na Slici 5. Karakteristični položaji vrha su dati u nastavku.

[0183] XRPD obrazac 2-teta (°) 6,5 (m), 9,0 (m), 12,8 (vs), 16,8 (m), 18,0 (s), 23,5 (s), 25,6 (s), 26,3 (w), 30,5 (w), 34,0 (w).

Primer 8

1-{4-hloro-2-[(metilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0184]

[0185] Smeša 5-hloro-2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (pogledati Primer 6(e)) (1,00 g, 3,13 mmol) i metanamina (20 mL, 40,00 mmol) je zagrejana u mikrotalasnoj peći na 100°C tokom 20 minuta. Smeša je rastvorena sa MeOH i mešana na sobnoj temperaturi kada je natrijum tetrahidroborat (0,95 g, 25 mmol) dodat iz delova tokom 5 minuta. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, smeša je zagrejana do refluksa tokom 2 sata. Drugi deo natrijum tetrahidroborata (0,47 g, 12,5 mmol) je dodat i smeša je refluksovana tokom dodatnih 15 minuta. Rastvarač je uklonjen isparavanjem i ostatku su dodati voda (20 mL) i vodeni rastvor HCl (1 M, 10 mL) kako bi se pH prilagodio na 1. Smeša je ohlađena sa ledenom kadom i formirani talog je filtriran i opran sa vodom (100 mL). Filtrat je ohlađen sa ledenom kadom i pH je prilagođen do pH 9 koristeći vodeni NH3rastvor (12%, 6 mL). Talog je izolovan filtriranjem. Nakon sušenja u vakuumu, dobijeno je 700 mg (67%) željenog proizvoda kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 2,34 (d, 3H), 3,78 (s, 2H), 5,72 (s, 2H), 6,04 (t, 1H), 6,66 (d, 1H), 7,16 (dd, 1H), 7,27 (d, 1H), 7,41 (d, 1H). MS (APCI+) m/z 335[M+H]<+>.

Primer 9

1-(2-{(ciklobutilmetil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0186]

(a) Etil 3-{[2-(1,3-dioksolan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat

[0187] Rastvor etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat hidrohlorida (5,66 g, 29,69 mmol) u EtOH (30 mL) je tretiran sa DIPEA (6,22 mL, 35,63 mmol) i mešan tokom 10 minuta pre dodavanja HOAc (4,08 mL, 71,25 mmol) i natrijum cijanoborohidrida (2,80 g, 44,53 mmol). Rastvor 2-(1,3-dioksolan-2-il)benzaldehida (5,29 g, 29,69 mmol) u EtOH (20 mL) je zatim dodat kapanjem tokom perioda od 15 minuta. Rezultujuća suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je isparena u vakuumu i ostatak je tretiran sa vodom (200 mL) i ekstrahovan sa dihlorometanom (3 x 150 mL). Organski rastvor je filtriran kroz silika gel kolonu koristeći gradijent od EtOAc i CH2Cl2(0-100% EtOAc). Tako je dobijeno 12,63 g jedinjenja iz naslova kao sirov proizvod.

(b) Etil 3-{(benzilkarbamotioil)[2-(1,3-dioksplan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat

[0188] Etil 3-{[2-(1,3-dioksolan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat (12,63 g, 39,92 mmol) je suspendovan u CH2Cl2(60 mL) i suspenzija je tretirana sa DIPEA (7,09 mL, 39,92 mmol). Smeša je mešana tokom 0,25 sati na sobnoj temperaturi i zatim je benzoil izotiocijanat (5,37 mL, 39,92 mmol) dodat. Nakon mešanja tokom 18 sati, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Tako je dobijeno 24,8 g sirovog jedinjenja iz naslova koje je u sledećem koraku korišćeno bez prečišćavanja.

(c) 1-[2-(1,3(Dioksolan-2-il)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0189] Etil 3-{(benzoilkarbamotioil)[2-(1,3-dioksolan-2-il)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat (24,8 g, 51,72 mmol) je rastvoren u MeOH (100 mL) i rastvor je tretiran sa natrijum hidroksidom (10,34 g, 258,6 mmol). Smeša je zagrejana do blagog refluksa i mešana tokom 3,5 sata. Nakon hlađenja, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je uzet u vodi, neutralizovan koristeći HCl (2 M) i smeša je ekstrahovana sa CH2Cl2(3 x 50 mL).

Kombinovani ekstrakti su oprani sa vodom (2 x 30 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni. Ostatak je mešana sa Et2O i talog je prikupljen i osušen pod vakuumom. Tako je dobijeno 1,2 g (12,3% tokom 3 koraka) jedinjenja iz naslova. MS (APCI+) m/z 330[M+H]<+>.

(d) 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehid

[0190] Rastvoru 1-[2-(1,3-dioksolan-2-il)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (1,2 g, 3,64 mmol) je dodat rastvor TFA (5,0 mL, 64,90 mmol) u CH2Cl2(30 mL) i smeša je mešana tokom noći. Reakciona smeša je refluksovana tokom 7 sata i zatim koncentrovana pod vakuumom. Toluen je dodat kako bi ko-ispario TFA. Osušena sirova supstanca je mešana sa Et2O usitnio proizvod koji je prikupljen filtriranjem i osušen pod vakuumom. Tako je dobijeno 1,02 g (98%) jedinjenja iz naslova kao čvrsta supstanca. MS (APCI+) m/z 286[M+H]<+>.

(e) 1-(2-{[(ciklobutilmetil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0191] Rastvor 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (100 mg, 0,35 mmol), DIEA (0,184 mL, 1,05 mmol) i ciklobutilmetanamina (128 mg, 1,05 mmol) u suvom NMP (3 mL) je mešan tokom 60 minuta zatim je tretiran sa natrijum borohidridom (19,89 mg, 0,53 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Rastvor je gravitacijom adsorbovan u 10 g SCX kolonu unapred napunjenu sa NMP i kolona je zatim oprana sa MeOH (100 mL). Sirov proizvod je eluiran koristeći rastvor NH3u MeOH (3 M, 50 mL). Rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je pročišćen na C8 koloni eluiranjem sa gradijentom od MeOH u vodi (0,1% TFA). Proizvod je suspendovana u dihlorometanu (2 mL) kako bi se dobilo 48 mg (38%) željenog jedinjenja kao čvrsta supstanca.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,70-3,20 (m, 9H), 4,35 (m, 2H), 5,78 (s, 2H), 6,06 (m, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,29 (t, 1H), 7,35 (m, 2H), 7,54 (d, 1H), 8,8 (b, 2H). MS (APCI+) m/z 355[M+H]<+>.

Primer 10

1-{2-[(ciklobutilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0192]

[0193] Jedinjenje iz naslova je dobijeno kao čvrsta supstanca sa 49% prinosom počevši od 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (100 mg, 0,35 mmol) i ciklobutanamin (249 mg, 3,50 mmol) koristeći proceduru opisanu u Primeru 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,74 - 1,94 (m, 2H), 2,17-2,30 (m, 4H), 3,88 (s, 1H), 4,26 (s, 2H), 5,78 (s, 2H), 6,04 (t, 1H), 6,77 (d, 1H), 7,26 - 7,39 (m, 3H), 7,52 (dd, 1H), 9,09 (s, 2H), 12,41 (s, 1H), 12,52 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 341[M+H]<+>.

Primer 11

1-{2-[(ciklopentilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0194]

[0195] Jedinjenje iz naslova je dobijeno kao čvrsta supstanca sa 54% prinosom počevši od 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (100 mg, 0,35 mmol) i ciklopentanamina (0,35 mL, 3,50 mmol) koristeći proceduru opisanu u Primeru 9.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,40-2,80 (m, 8H), 3,70 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 5,79 (s, 2H), 6,04 (t, 1H), 6,79 (d, 1H), 7,20-7,40 (m, 3H), 7,54 (d, 1H) 8,85 (b, 2H). MS (APCI+) m/z 355[M+H]<+>.

Primer 12

1-(2-{[(2-Metilpropil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0196]

[0197] Jedinjenje iz naslova je dobijeno kao čvrsta supstanca sa 71% prinosom počevši od 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (100 mg, 0,35 mmol) i 2-metilpropan-1-amina (0,35 mL, 3,50 mmol) koristeći proceduru opisanu u Primeru 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,00 (d, 6H), 2,05 (m, 1H), 2,95 (m, 2H), 4,40 (m, 2H), 5,79 (s, 1H), 6,06 (dd, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,28 (t, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,58 (dd, 1H), 8,78 (b, 2H). MS (APCI+) m/z 343[M+H]<+>.

Primer 13

1-{2-[(Propan-2-ilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0198]

[0199] Jedinjenje iz naslova je dobijen kao čvrsta supstanca sa 33% prinosom počevši od 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]benzaldehida (100 mg, 0,35 mmol) i 2-metilpropan-1-amin propan-2-amina (0,45 mL, 5,61 mmol) koristeći proceduru opisanu u Primeru 9.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 1,36 (d, 6H), 3,55 (m, 1H), 4,39 (m, 2H), 5,79 (s, 1H), 6,05 (d, 1H), 6,78 (d, 1H), 7,27 (t, 1H), 7,36 (m, 2H), 7,54 (dd, 1H), 8,76 (b, 2H). MS (APCI+) m/z 329[M+H]<+>.

Primer 14

1-[2-(Aminometil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0200]

(a) 1-Bromo-2-(dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzen

[0201] Rastvor 2-bromo-5-(trifluorometil)benzaldehida (0,60 mL, 3,95 mmol), trietil ortoformata (1,316 mL, 7,90 mmol) i tetrabutilamonijum tribromida (0,019 g, 0,04 mmol) u EtOH (99,5%, 6 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 8 sati. Dodatni trietil ortoformat (1,32 mL, 7,90 mmol) i tetrabutilamonijum tribromid (0,019 g, 0,04 mmol) su dodati i reakciona smeša je mešana tokom dodatnih 15 sati.

[0202] Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom i ostatku su dodati vodeni rastvor zasićenog NaHCO3i EtOAc. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana dvaput sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni sa faznim separatorom i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom dajući kao rezultat 0,94 g (72%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,27 (t, 6H), 3,58 - 3,73 (m, 4H), 5,67 (s, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,69 (d, 1H), 7,93 (d, 1H).

(b) 2-(Dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzaldehid

[0203] Butilitijum (2,5 M u heksanu, 15,47 mL, 38,67 mmol) je dodat kapanjem rastvoru 1-bromo-2-(dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzena (11,5 g, 35,15 mmol) u THF (130 mL) na 78°C Pod atmosferom azota i rezultujući rastvor je mešan na -78°C tokom 30 minuta. DMF (4,06 mL, 52,73 mmol) je dodat kapanjem na -78°C. Reakcionoj smeši je omogućeno da se zagreje do sobne temperature i mešana je tokom 2 sata. Vodeni rastvor zasićenog NH4Cl je dodat i faze su razdvojene. Vodeni sloj je ekstrahovan dvaput sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni (fazni separator) i rastvarači su uklonjeni pod redukovanim pritiskom. Tako je dobijeno 9,0 g (33%) jedinjenja iz naslova.

-(c) Etil 3-{[2-(dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat [0204] Etil 3-amino-1H-pirol-2-karboksilat (5,02 g, 32,58 mmol) je rastvoren u EtOH (99,5%, 110 mL) i rezultujućem rastvoru je dodat DIPEA (5,67 mL, 32,58 mmol) praćen sa HOAc (3,73 mL, 65,16 mmol). Reakciona smeša je ohlađena do -10°C i zatim je dodat natrijum cijanotrihidroborat (2,46 g, 39,09 mmol). 2-(Dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzaldehid (9 g, 32,58 mmol) rastvoren u EtOH (99,5%, 10 mL) je zatim polako dodat. Reakciona smeša je mešana na 0°C i zatim mešana tokom 16 sati, tokom čega je temperaturi omogućeno da poraste do sobne temperature. Voda je dodata i smeša ekstrahovan sa toluenom. Vodena faza je dalje ekstrahovana dvaput sa toluenom i kombinovani organski slojevi su oprani sa rasolom, osušeni kroz fazni separator i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Proizvod je pročišćen preparativnom HPLC koristeći C8 kolonu i koristeći smešu koja sadrži gradijent (50%-100%) MeCN u vodi, MeCN i amonijum acetat pufer (0,1 M). Nakon četiri injekcije, dobijeno je 4,5 g (33%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 1,25 (td, 4H), 1,34 (t, 3H), 3,51 - 3,7 (m, 5H), 4,31 (dd, 2H), 4,57 (s, 2H), 5,60 (dd, 1H), 5,66 (s, 1H), 6,68 (s, 1H), 7,53 (d, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,85 (s, 1H), 8,09 (d, 1H). MS (APCI+) m/z 414[M+H]<+>.

(d) 1-[2-(Dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0205] Etil 3-{[2-(dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzil]amino}-1H-pirol-2-karboksilat (4,3 g, 10,38 mmol) je rastvoren u MeOH (40 mL) i rezultujućem rastvoru je dodat benzoil izotiocijanat (1,40 mL, 10,38 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 minuta i zatim je dodat Cs2CO3(7,27 g, 22,31 mmol). Smeša je mešana na 60°C tokom 6 sati i zatim je rastvarač uklonjen pod redukovanim pritiskom. Voda i dihlorometan su dodati i vodena faza je dalje ekstrahovana triput sa CH2Cl2. Organski slojevi su kombinovani i rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je usitnjen sa Et2O. Formirana suspenzija je mešana tokom 4 sata i čvrsta supstanca je izolovana filtriranjem. Čvrste supstance su oprane sa Et2O kako bi se dobilo 3,46 g (78%) jedinjenja iz naslova.<1>HNMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 1,22 (t, 6H), 3,55 - 3,72 (m, 4H), 5,89 (s, 3H), 5,95 (s, 1H), 6,94 (d, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,59 (d, 1H), 7,83 (s, 1H), 12,38 (s, 2H). MS (APCI-) m/z 426[M-H]-.

(e) 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]-5-(trifluorometil)benzaldehid

[0206] Smeša TFA (2,90 mL, 39,07 mmol) i CH2Cl2(12 mL) je ohlađena do 0°C i rastvoru je dodat 1-(2-(dietoksimetil)-4-(trifluorometil)benzil)-2-tiokso-2,3-dihidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-on (1,67 g, 3,91 mmol). Ledena kada je uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Rezultujući čvrsta supstanca je filtrirana i oprana sa CH2Cl2dajući kao rezultat 1,31 g (95%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 6,09 - 6,16 (m, 3H), 7,08 (d, 1H), 7,31 (t, 1H), 7,89 (dd, 1H), 8,41 (d, 1H), 10,34 (s, 1H), 12,44 (s, 1H), 12,52 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 352[M-H]-.

(f) 1-[2-(Aminometil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0207] 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]-5-(trifluorometil)benzaldehid (195 mg, 0,55 mmol) je dodat smeši hidroksilamin hidrohlorida (42 mg, 0,61 mmol) u HOAc (80%, 4 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i cink (181 mg, 2,76 mmol) je dodat. Nakon mešanje na 60°C tokom 1,5 sata, smeša je ohlađena i pH je prilagođen do 12 sa vodenim NaOH (1 M). Rezultujući talog je prikupljen filtriranjem. Proizvod je pročišćen preparativnom HPLC na C8 koloni koristeći gradijent od 5-45% MeCN u vodi, MeCN i FA (95/5/0,2). Tako je dobijeno 70 mg (36%) željenog jedinjenja.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 4,37 (s, 2H), 5,81 (s, 2H), 6,11 (s, 1H), 6,93 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,89 (s, 1H), 8,36 (s, 2H), 12,47 (s, 1H), 12,56 (s, 1H).

Primer 15

1-{2-[(Metilamino)metil]-4-(trifluorometil)benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on

[0208]

[0209] 2-[(4-okso-2-tiokso-2,3,4,5-tetrahidro-1H-pirolo[3,2-d]pirimidin-1-il)metil]-5-(trifluorometil)benzaldehid (214 mg, 0,61 mmol) i metanamin (2 M u MeOH, 3,03 mL, 6,06 mmol) su rastvoreni u MeOH (5 mL) i rezultujući rastvor je prebačen u mikrotalasnu epruvetu. Reakciona smeša je zagrejana na 100°C tokom 5 minuta i zatim rastvorena sa THF (5 mL). Natrijum tetrahidroborat (183 mg, 4,85 mmol) je dodat iz malih delova tokom 2 minuta. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i zatim ugašena dodavanjem vode. Rastvarači su ispareni i sirov proizvod je pročišćen preparativnom HPLC na C18 koloni koristeći gradijent od 15-55% MeCN u vodi, MeCN i 0,1 M NH4OAc pufer (95/5/0,2), zatim ponovo prečišćen koristeći gradijent od 0-30% MeCN u vodi, MeCN i FA (95/5/0,2). Tako je dobijeno 62 mg (28%) jedinjenja iz naslova.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 2,42 (s, 3H), 3,94 (s, 2H), 5,85 (s, 2H), 6,10 (d, 1H), 6,88 (d, 1H), 7,32 (d, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,76 (s, 1H), 8,19 (s, 1H). MS (APCI+) m/z 369[M+H]<+>.

Claims (16)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I)

   gde R<1>je H, F, Cl ili CF3; R<2>je H, CH3ili C2H5; i R<3>je H, CH3, C2H5, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek-butil, terc-butil, ciklopropil, ciklopropilmetil, ciklobutil, ciklobutilmetil ili ciklopentil; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde R<1>je Cl.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde R<2>je CH3.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde R<2>je H.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde R<3>je H.
6. 6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 gde atom ugljenika za koji je R<2>vezan ima R-konfiguraciju kada R<2>je CH3ili C2H5.
7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 1-{2-[(1R)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on:

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 1-{2-[(1R)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3 ,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on:
9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 1-[2-(aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on:
10. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je 1-[2-(aminometil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on:
11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 izabrano iz grupe koju čine 1-{2-[(1R)-1-aminopropil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-[2-(1-aminoetil)-4-hlorobenzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{2-[(1S)-1-aminoetil]-4-hlorobenzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{4-hloro-2-[1 -(metilamino)etil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{4-hloro-2-[(etilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{4-hloro-2-[(metilamino)metil]benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-(2-{[(ciklobutilmetil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-(2-[(ciklobutilamino)metil]benzil[-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{2-[(ciklopentilamino)metil]benzil[-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-(2-{[(2-metilpropil)amino]metil}benzil)-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-(2-[(propan-2-ilamino)metil]benzil[-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-[2-(aminometil)-4-(trifluorometil)benzil]-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; 1-{2-[(metilamino)metil]-4-(trifluorometil)benzil}-2-tiokso-1,2,3,5-tetrahidro-4H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so.
12. 12. Farmaceutski sastav koja sadrži jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 11 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, opciono u smeši sa farmaceutski prihvatljivim adjuvansom, razblaživačima ili nosačem.
13. 13. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 11, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
14. 14. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 11, za upotrebu za tretman srčane insufijencije.
15. 15. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 11, za upotrebu za tretman srčane insufijencije sa redukovanom ejekcionom frakcijom.
16. 16. Jedinjenje prema bilo kom patentnom zahtevu od 1 do 11, za upotrebu za tretman srčane insufijencije sa očuvanom ejekcionom frakcijom.