RS59831B1 - Nova jedinjenja imidazopiridazina i njihova upotreba - Google Patents

Description

Opis

[0001] Opisana su nova jedinjenja imidazopiridazina, njihove farmaceutske kompozicije, postupci za njihovo dobijanje, i njihova upotreba.

[0002] Za abnormalnost u PI3K (fosfatidilinozitol-3-kinaza)-posredovanom putu signalizacije se veruje da igra važnu ulogu u nastanku i razvoju različitih malignih tumora.

[0003] PI3Ks su porodica lipidnih kinaza koja fosforiliše 3'-hidroksi grupu Ptdlns (fosfatidilinozitol) i fosfoinozitide (fosforilisane derivate Ptdlns). Ovi enzimi su grupisani u 3 kategorije: klasa I, klasa II i klasa III, na osnovu njihove preferencije i strukture supstrata. Među ove tri kategorije, klasa I je detaljno proučena. Klasa I PI3Ks obuhvata dve podklase nazvane klasa IA i klasa IB. Postoje tri gena koji kodiraju katalitičke izoforme klase IA. Svaki kodira proteinski produkt od približno 110 kDa, označen p110α, p110β i p110δ. Ovi proteinski produkti grade stabilne heterodimere, tj. PI3Kα, PI3Kβ i PI3Kδ, sa regulatornim podjedinicama klase IA koje imaju najmanje pet izoforma (p85α, p55α, p50α, p85β i p55γ). Postoji jedan enzim klase IB, p110γ, koji se povezuje sa jedinstvenom regulatornom podjedinicom nazvanom p101. Zajedno ovaj dimer se ponekad naziva PI3Kγ.

[0004] Sve četiri katalitičke PI3K izoforme klase I pokazuju karakterističan obrazac ekspresije in vivo. P110α i p110β su široko eksprimirane, dok se p110γ i p110δ nalaze pretežno u leukocitima (Sundstrom TJ. i dr, Org. Biomol. Chem., 2009, 7, 840-850).

[0005] P110δ katalitička podjedinica klase IA PI3K može da igra bitnu ulogu u razvoju i aktivaciji mišjih B ćelija. Miševi sa manjkom P110δ pokazali su delimično blokiranje u ranom razvoju B ćelija na prelazu iz pro-B u pre-B, značajno smanjenje broja zrelih slezinskih B ćelija i skoro potpuno odsustvo B1 pod skupa zrelih B ćelija. Nekoliko B ćelija koje se mogu izolovati iz slezine miševa sa nedostatkom p110δ, ne uspevaju da se razmnožavaju posle klasteriranja BCR (B ćelijskog receptora) sa anti-IgM. Proliferacija takođe može biti smanjena kao odgovor na mitogene poliklonalnih B ćelijskih lipopolisaharida i anti-CD40. Miševi kojima nedostaje p110δ takođe ne uspevaju da uspostave efikasne reakcije antitela na TI-2 (T-nezavisni tip II) antigene (Okkenhaug K, Science.2002, 297:1031-4).

[0006] Disregulacija i preterana aktivacija signalnog puta PI3K/AKT pronađena je u ćelijama kancera. Specifična uloga p110δ u razvoju B-ćelija može ga učiniti obećavajućom metom leka za B-ćelijske limfoproliferativne poremećaje, kao što su HLL (hronična limfocitna leukemija) i NHL (ne-Hodgkinov limfom).

[0007] PI3Kδ je interno uključen u funkcije imunog sistema sisara poput transdukcije signala T-ćelija, B-ćelija, mastocita, dendritskih ćelija, neutrofila, NK ćelija i mononuklearnih fagocita. Veliki broj eksperimenata korišćenja inhibitora PI3Kδ ili životinja sa nedostatkom PI3Kδ dokazao je da PI3Kδ može da igra važnu ulogu u autoimunim bolestima poput respiratornih bolesti i reumatoidnog artritisa, na primer poput alergijske upale disajnih puteva [Nashed BF, i dr. Eur J Immunol. 2007;37(2):416-24] i akutne povrede pluća [Puri KD, i dr. Blood.

2004;103(9):3448-56]. Zbog svoje integralne uloge u funkcijama imunološkog sistema, PI3Kδ takođe može biti uključen u brojne bolesti povezane sa nepoželjnim imunološkim odgovorom poput alergijske reakcije, inflamatornih bolesti, angiogeneze posredovane inflamacijom, reumatoidnog artritisa, autoimunih bolesti poput lupusa, astme, emfizema i drugih respiratornih oboljenja.

[0008] Prethodne studije su pokazale da idelalisib (CAL-101), potentan i selektivan inhibitor PI3Kδ, ima široko antitumorsko dejstvo protiv ćelija kancera hematološkog porekla (Vanhaesebroeck B, Cancer Cell, 2014, 25:269-71). Patentne prijave, kao što su WO2005113556, US20130071212, i US20140179718, takođe otkrivaju jedinjenja koja su korisna kao selektivni inhibitori PI3Kδ za lečenje autoimune bolesti i kancera, naročito za lečenje hematoloških maligniteta.

[0009] WO2009/060197 otkriva niz imidazopiridazinskih jedinjenja koja su korisna u lečenju bolesti kod kojih je poželjna inhibicija protein kinaze (npr. porodica PIM kinaze ili PI3-K).

[0010] WO2008/138834 otkriva seriju supstituisanih jedinjenja imidazopiridazina kao inhibitore lipid kinaze PI3K.

[0011] WO2008/052734 otkriva seriju heterocikličnih jedinjenja kao anti-inflamatornih agenasa.

[0012] WO2010/007099 otkriva derivate 2-aminoimidazo[1,2-B]piridazina kao inhibitore PI3K za lečenje ili profilaksu imunoloških, inflamatornih, autoimunih ili alergijskih poremećaja.

[0013] WO2012/116237 otkriva heterociklična jedinjenja koja modulišu aktivnost PI3kinaze za lečenje bolesti i stanja povezanih sa aktivnosti PI3 kinaze.

[0014] CN101528748 otkriva seriju imidazopiridazina koji su korisni kao inhibitori pi3k lipidne kinaze.

[0015] Obezbeđena su jedinjenja koja modulišu PI3K, uključujući selektivnu modulaciju PI3Kδ za lečenje poremećaja koji se odnose na autoimunu bolest i kancer, naročito hematološki malignitet.

[0016] Specifično, obezbeđeno je jedinjenje formule (I):

i/ili njegovi solvati, racemske smeše, enantiomeri, dijastereomeri, tautomeri, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, pri čemu Ar, W, R1, R2, i m su kako je ovde definisano.

[0017] Takođe je obezbeđena farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od jedinjenja koja su ovde opisana) i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent (npr., farmaceutski prihvatljiv nosač).

[0018] Bolest koja reaguje na inhibiciju PI3K, izabrana je od inflamatornih bolesti, autoimunih bolesti i kancera.

[0019] Takođe je dato jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih jedinjenja) i/ili njegova ovde opisana farmaceutski prihvatljiva so za lečenje bolesti koja reaguje na inhibiciju PI3K.

[0020] Ovde opisan subjekt može da bude čovek ili životinja. U nekim realizacijama, ovde opisan subjekt je čovek.

[0021] Takođe je obezbeđeno jedinjenje formule (II), koje se može koristiti u pripremi jedinjenja formule (I):

i/ili njegove soli, i/ili racemske smeše ili njegovog enantiomera, pri čemu Ar i R2su definisani kao u formuli (I) i oba su definisani u daljem tekstu.

Kratak opis crteža

[0022]

Slika 1 prikazuje efekat jedinjenja 4 pripremljenog u primeru 1 na anti-IgD indukovanu aktivaciju B ćelija na način zavisan o dozi i na vremenski zavisan način kod ženskih Vistar pacova. Podaci aktivisane B ćelije predstavljeni su kao srednja vrednost ± SEM (n=3). Podaci koncentracije u plazmi su predstavljeni kao srednja vrednost ± SD (n=3). Podaci se analiziraju putem ANOVA, nakon čega sledi Danetov test prema grupi (vehikul anti-IgD). ## pokazuje p<0.01 prema grupi (vehikul PBS); ** pokazuje p<0.01 prema grupi (vehikul anti-IgD). Slika 2 prikazuje efekte jedinjenja 4 pripremljenog u primeru 1 na zapreminu šape kod CIA Vistar pacova. Zapremine zadnjih šapa dnevno su merene pletizmometrom. Podaci za zapremine šape predstavljeni su kao srednja vrednost ± SEM (n=6 za naivnu grupu, n=8 f za ostale grupe), ostale grupe su kontrolna grupa sa vehikulom, grupe sa jedinjenjem 4 za različite doze (QD) i pozitivna kontrolna grupa (QOD). Područje ispod krive (AUC) srednjeg oticanja šape analizira se jednosmernom ANOVA korišćenjem Sigmastat statističkog softvera, nakon čega sledi Fišerov test s najmanjom značajnom razlikom (LSD), i izračunavaju se p vrednosti. ## pokazuje p < 0.01 u odnosu na naivnu grupu; ** pokazuje p < 0.01 u odnosu na kontrolnu grupu.

Definicije

[0023] Kako se koriste u ovoj prijavi, sledeći reči, fraze i simboli uglavnom treba da imaju značenja kako sledi, osim u meri u kojoj je kontekst u kojem se koriste ukazuje drugačije.

[0024] Povlaka ( "-") koja nije između dva slova ili simbola se koristi za ukazivanje na tačku vezivanja za supstituent. Na primer, - O(C1-4alkil) je vezan preko kiseonika. Međutim, kada je tačka vezanja grupe očigledna stručnjacima iz ove oblasti, npr., halo supstituent, znak "-" može biti izostavljen.

[0025] Ukoliko nije jasno naznačeno drugačije, upotreba termina za jedninu i slično odnosi se na jedan ili više.

[0026] Termin "alkil" kako se ovde koristi odnosi na ravan ili razgranati zasićeni ugljovodonični radikal, te se bira od jednog koji sadrži 1-6 atoma ugljenika, a još dodatno poput 1-4 atoma ugljenika. Na primer, "C1-6alkil" spada u opseg "alkila" i odnosi se na alkil koji sadrži 1-6 atoma ugljenika. Primeri alkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metil ("Me"), etil ("Et"), n-propil ("n-Pr"), i-propil ("i-Pr"), n-butil ("n-Bu"), i-butil ("i-Bu"), s-butil ("s-Bu") i t-butil ("t-Bu").

[0027] Termin "alkenil" kako se ovde koristi odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični radikal izabran od jednog koji sadrži jednu ili više, na primer 1, 2, ili 3, C=C dvostruke veze, i takođe izabran od jednog koji sadrži 2-10, kao što je 2-6 atoma ugljenika, i dalje kao što je 2-4 atoma ugljenika. Na primer, "C2-6alkenil" spada u opseg alkenila i odnosi se na alkenil koji sadrži 2-6 atoma ugljenika. Primeri alkenil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, vinil, 2-propenil, i 2-butenil.

[0028] Termin "alkinil" kako se ovde koristi odnosi na ravan ili razgranati ugljovodonični radikal, izabran od jednog koji sadrži jednu ili više, na primer 1, 2, ili 3, C≡C trostrukih veza i takođe izabran od jednog koji sadrži 2-10 atoma ugljenika, kao što je 2-6 atoma ugljenika, dalje kao što je 2-4 atoma ugljenika. Na primer, "C2-6alkinil" odnosi se na alkinil koji sadrži 1C≡C trostruku vezu i takođe sadrži 2-6 atoma ugljenika. Primeri alkinil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil, 2-propinil, i 2-butinil.

[0029] Termin "halo" kako se ovde koristi obuhvata fluoro, hloro, bromo, i jodo, i termin "halogen" kako se ovde koristi fluor, hlor, brom i jod.

[0030] Termin "haloalkil" kako se ovde koristi odnosi se na alkil radikal, kako je ovde definisano, u kome jedan ili više, na primer 1, 2, 3, 4, ili 5, atoma vodonika su zamenjeni sa atomom halogena, atomi halogena su jednaki ili različiti jedan od drugog. U određenim realizacijama, termin "haloalkil" kako se ovde koristi odnosi se na alkil radikal, kako je ovde definisano, u kome su dva ili više, kao što su 2, 3, 4, ili 5 atoma vodonika zamenjeni atomima halogena, pri čemu su atomi halogena svi isti. U drugim realizacijama, termin "haloalkil" kako se ovde koristi odnosi se na alkil radikal, kako je ovde definisano, u kome su dva ili više atoma vodonika, kao što su 2, 3, 4, ili 5 atoma vodonika zamenjeni atomima halogena, halogeni atomi nisu svi jednaki jedni drugima. Primeri haloalkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -CF3, -CHF2, -CH2CF3, i slično.

[0031] Termin "alkoksi" kako se ovde koristi odnosi se na grupu -O-alkil, pri čemu je alkil kako je gore definisano. Primeri alkoksi grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, metoksi, etoksi, n-propiloksi, i-propiloksi, n-butiloksi, i-butiloksi, t-butiloksi, pentiloksi, i heksiloksi, uključujući njihove izomere.

[0032] Termin "cikloalkil" kako se ovde koristi odnosi se na zasićene ili delimično nezasićene ciklične ugljovodonične radikale koji mogu imati jedan ili više, kao što je 1 ili 2 prstena, i koji takođe mogu imati 3 do 12, kao što je 3 do 8, i dalje kao što je 3 do 6 atoma ugljenika. Na primer, "C3-8cikloalkil" odnosi se na cikloalkil koji sadrži 3-8 atoma ugljenika u prstenu. Primeri cikloalkilnih grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, i ciklooktil.

[0033] Termin "aril" kako se ovde koristi odnosi se na karbociklični ugljovodonični radikal monocikličnog prstena ili fuzionisanih prstena koji sadrže 6-12 atoma ugljenika u prstenu, pri čemu najmanje jedan prsten je aromatičan i nijedan od drugih prstenova je heteroaril kao što je definisano u daljem tekstu, i tačka vezivanja može biti na aromatičnom prstenu ili na ostalim prstenima. Primeri aril grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, fenil, naftalenil, 1,2,3,4-tetrahidronaftalenil, indenil, indanil, azulenil, kao što su fenil i naftalenil.

[0034] Kako se ovde koristi, "aril" ili "aromatični" sledi Hikelovo pravilo pri čemu je broj πelektrona jednak 4n+2 gde n je nula ili bilo pozitivan ceo broj do 6.

[0035] Termin "heterociklil" ili "heterociklični" ovde se odnosi na prsten odabran od 4- do 12-članih monocikličnih, bicikličnih i tricikličnih, zasićenih i delimično nezasićenih prstenova koji sadrže najmanje jedan atom ugljenika pored najmanje jednog heteroatoma, kao što je od 1-4 heteroatoma, dalje kao što je od 1-3, ili dalje kao što je 1 ili 2, heteroatoma, koji su izabrani od, na primer, od O, S, i N. T Tačka vezivanja heterociklila može biti na heteroatomu ili ugljeniku. "Heterociklil" ili "heterociklični" takođe se odnosi na monociklični prsten koji sadrži najmanje jedan heteroatom izabran između O,S, i N, ili fuzionisane prstenove pri čemu, u slučaju fuzionisanih prstenova, najmanje jedan prsten sadrži najmanje jedan heteroatom izabran između O,S, i N i nijedan drugi prsten nije heteroaril ili aril, i tačka vezivanja može biti na heterocikličnom prstenu ili na drugim prstenima.

[0036] Termin "heteroaril" kako se ovde koristi odnosi se na monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 5, 6 ili 7 atoma u prstenu, poželjno koji ima 6 atoma u prstenu, i koji sadrži jedan ili više, na primer 1, 2 ili 3, kao što je 1 ili 2 heteroatoma koji se nezavisno biraju od N, O, i S (kao što je N) u prstenu, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika; i biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 9 ili 10 atoma u prstenu, i sadrži jedan ili više, na primer, 1, 2, 3 ili 4, kao što je 1 ili 2 heteroatoma nezavisno odabranih od N, O, i S (kao što je N) u prstenovima, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični. Na primer, biciklični heteroaril uključuje 5- do 6-člani heterociklični aromatični prsten fuzionisan sa 5- do 6-članim cikloalkilnim prstenom, heterociklični prsten, ili arilni prsten pri čemu tačka vezivanja može biti na heteroaromatičnom prstenu ili na cikloalkil prstenu/heterocikličnom prstenu/arilnom prstenu.

[0037] Kada ukupan broj S i O atoma na heteroaril grupi premašuje 1, ti heteroatomi nisu susedni jedan drugom.

[0038] Heteroarilna grupa takođe uključuje one gde se N heteroatom javlja kao N-oksid, kao što su pirimidinil N-oksidi.

[0039] U nekim realizacijama, "heteroaril" u kome heteroatom(i) u prstenu je N atom(i) je ovde definisan kao heteroaril koji sadrži azot. Heteroaril koji sadrži azot grupu takođe uključuje one gde se N heteroatom javlja kao N-oksid, kao što je piridil N-oksidi

[0040] Primeri heteroaril grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridil, piridil N-oksid; pirazinil; pirimidinil, ; pirazolil; imidazolil; oksazolil; izoksazolil; tiazolil; izotiazolil; tiadiazolil; tetrazolil; triazolil; tienil; furil; piranil; pirolil; piridazinil; benzo[d]tiazolil, bezodioksolil, kao što je benzo[d][1,3]dioksolil; benzoksazolil, kao što je benzo[d]oksazolil; imidazopiridil, kao što je imidazo[1,2-a]piridil; triazolopiridil, kao što je [1,2,4]triazolo[4,3-a]piridil i [1,2,4]triazolo[1,5-a]piridil; indazolil, 2H- indazolil; pirolopirimidinil, kao što je pirolo[3,4-d]pirimidinil, 7H-pirolo[2,3-d]pirimidinil; pirazolopirimidinil, kao što je pirazolo[1,5-a]pirimidinil; tetrazolopiridil, kao što je tetrazolo[1,5-a]piridil; benzotienil; benzofuril; benzoimidazolinil; indolil; indolinil; purinil, kao što je 9H-purinil i 7H-purinil; kinolinil, izokinolinil, 1,2,3,4-tetrahidrokinolinil i 5,6,7,8-tetrahidroizokinolinil.

[0041] Primeri heteroarila koji sadrži azot grupu obuhvataju, ali nisu ograničeni na, pirolil; pirazolil; imidazolil; piridil; pirazinil; pirimidinil, pirimidinil N-oksid; piridazinil; pirolopirimidinil, kao što je pirolo[3,4-d]pirimidinil, 7H-pirolo[2,3-d]pirimidinil; purinil, kao što je 9H-purinil i 7H-purinil; kinolinil; indolil; i indazolil.

[0042] "Hidroksil" kako se ovde koristi odnosi se na -OH radikal.

[0043] "Merkapto" kako se ovde koristi odnosi se na -SH radikal.

[0044] "Okso" kako se ovde koristi odnosi se na =O radikal.

[0045] "Karboksil" kako se ovde koristi odnosi se na -C(O)-OH radikal.

[0046] "Cijano" kako se ovde koristi odnosi se na -CN radikal.

[0047] Kada strukture sadrže zvezdicu "*" kako je ovde opisano, jedinjenja predstavljena sa strukturama su hiralna jedinjenja, tj. jedinjenja su ili u R-konfiguraciji ili S-konfiguraciji. Konfiguracija jedinjenja može da se utvrdi korišćenjem različitih analitičkih tehnika, na primer sa monokristalnom rendgenskom kristalografijom i/ili optičkom polarimetrijom u skladu sa rutinskim protokolima od strane stručnjaka iz ovog polja tehnike.

[0048] Termin "izborni" ili "opciono" kako se ovde koristi da se naknadno opisani obrazac supstitucije, događaj ili okolnost može da se javlja ili se ne javlja, i da opis obuhvata slučajeve gde se javlja obrazac supstitucije i slučajeve u kojima se ne javlja. Na primer, "opciono supstituisan alkil" obuhvata oba "nesupstituisani alkil" i "supstituisani alkil" kako je ovde definisano. Stručnjaci će razumeti, u odnosu na bilo koju grupu koja sadrži jedan ili više supstituenata, da takve grupe nisu namenjene za uvođenju supstitucija ili supstitucionih obrazaca koji su sterično nepraktični, hemijski netačni, sintetički neizvodljivi i/ili inherentno nestabilni.

[0049] Termin "supstituisani" ili "supstituisani sa ......", kako se ovde koristi, znači da su jedan ili više vodonika na naznačenom atomu ili grupi zamenjeni sa jednim ili više izabranih iz naznačene grupe supstituenata, pod uslovom da se ne premaši normalna valenca određenog atoma. Kada je supstituent okso (tj., =O), tada su dva 2 vodonika na jednom atomu zamenjena sa okso. Kombinacije supstituenata i/ili promenljivih su dozvoljene samo ako takve kombinacije rezultiraju hemijski ispravnim i stabilnim jedinjenjem. Hemijski ispravno i stabilno jedinjenje podrazumeva jedinjenje koje je dovoljno robusno da preživi izolaciju iz reakcione smeše da bi bilo moguće identifikovati hemijsku strukturu jedinjenja, i takođe i dovoljno robusno da omogući sledeću formulaciju kao agens koji ima najmanje jednu praktičnu korisnost.

[0050] Osim ako nije drugačije naznačeno, supstituenti su imenovani u jezgru strukture. Na primer, treba razumeti da kada je (cikloalkil)alkil naveden kao mogući supstituent, tačka vezivanja ovog supstituenta na strukturu jezgra je u alkilnom delu.

[0051] Termin "supstituisan sa jednim ili više supstituenata" kako se ovde koristi označava da su jedan ili više vodonika na naznačenom atomu ili grupi nezavisno zamenjeni sa jednim ili više izabranih iz naznačene grupe supstituenata. U nekim realizacijama, "supstituisan sa jednim ili više supstituenata" označava da je određeni atom ili grupa supstituisana sa 1, 2, 3, ili 4 supstituenta nezavisno izabranih iz naznačene grupe supstituenata.

1

[0052] Podrazumeva se da će lice sa uobičajenim iskustvom u tehnici poznavati da neka od jedinjenja formule (I) mogu da sadrže jedan ili više hiralnih centara i prema tome mogu postojati u dva ili više stereoizomernih oblika. Racemati ovih izomera, pojedinačni izomeri i smeše obogaćene jednim enantiomerom, kao i dijastereomeri w kada postoje dva hiralna centra, i smeše koje su delimično obogaćene specifičnim dijastereomerima spadaju u obim ovog pronalaska. Nadalje će lice sa uobičajenim iskustvom u tehnici shvatiti da ovaj pronalazak obuhvata sve pojedinačne stereoizomere (npr. enantiomere), racemske smeše ili delimično rastvorene smeše jedinjenja formule (I) i, gde je to prikladno, njihove pojedinačne tautomerne oblike.

[0053] Drugim rečima, u nekim realizacijama, prikazani pronalazak obezbeđuje jedinjenja različitih stereoizomernih čistoća, tj., dijastereomernu ili enantiomernu čistoću, sa različitim "ee" ili "de." U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) (npr., kako je ovde opisano) ima enantiomernu čistoću od najmanje 60% ee (npr., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% ee, ili bilo koji raspon između nabrojanih vrednosti). U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) (npr., kako je ovde opisano) ima enantiomernu čistoću veću od 99.9% ee, koja se proteže sve do 100% ee. U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) (npr., kako je ovde opisano) ima dijastereomernu čistoću od najmanje 60% de (npr., 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.9% de, ili bilo koji raspon između nabrojanih vrednosti). U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) (npr., kako je ovde opisano) ima dijastereomernu čistoću veću od 99.9% de.

[0054] Termin "enantiomerni višak" ili "ee" označava koliko je prisutno jednog enantiomera u odnosu na drugi. Za smešu R i S enantiomera, procenat enantiomernog viška je definisan kao |R - S|<∗>100, gde su R i S odgovarajuće molarne ili težinske frakcije enantiomera u smeši tako da je R S = 1. Uz poznavanje optičke rotacije hiralne supstance, procenat enantiomernog viška je definisan kao ([a]obs/[a]max)<∗>100, gde [a]obs je optička rotacija smeše enantiomera i [a]max je optička rotacija čistog enantiomera.

[0055] Termin "diastereomerni višak" ili "de" označava koliko je prisutno jednog dijastereomera u odnosu na drugi i definisan je analogno sa enantiomernom viškom. Dakle, za smešu dijastereomera, D1 i D2, procenat dijastereomernog viška je definisan kao |D1 - D2|<∗>100, gde su D1 i D2 odgovarajuće molarne ili težinske frakcije dijastereomera u smeši tako da D1 D2 = 1.

[0056] Određivanje dijastereomernog i/ili enantiomernog viška je moguće korišćenjem različitih analitičkih tehnika, uključujući NMR spektroskopiju, hiralnu hromatografiju na koloni i/ili optičku polarimetriju u skladu sa rutinskim protokolima poznatim za lice sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

[0057] Racemati se mogu koristiti kao takvi ili mogu biti razdvojeni u njihove pojedinačne izomere. Rezolucija može da dovede do stereohemijski čistih jedinjenja ili smeša obogaćenih jednim ili više izomera. Metode za razdvajanje izomera su dobro poznate (cf. Allinger N. L. i Eliel E. L. u "Topics in Stereochemistry", Vol.6, Wiley Interscience, 1971) i uključuju fizičke metode kao što je hromatografija uz upotrebu hiralnog adsorbenta. Pojedinačni izomeri mogu se dobiti u hiralnom obliku iz hiralnih prekursora. Alternativno, pojedinačni izomeri mogu se hemijski odvojiti od smeše formiranjem dijastereomernih soli sa hiralnom kiselinom, kao što su pojedinačni enantiomeri 10-kamforsulfonske kiseline, kamforne kiseline, alfabromokamforne kiseline, vinske kiseline, diacetiltartarne kiseline, jabučne kiseline, pirolidon-5-karboksilne kiseline, i slično, koji frakciono kristališu soli, a zatim oslobađaju jednu ili obe rastvorene baze, opciono ponavljajući postupak, tako da se dobije jedan ili oba suštinski bez drugog; tj., u obliku koji ima optičku čistoću od, na primer, najmanje 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 99.5% po težini željenog stereoizomera. Alternativno, racemati se mogu kovalentno povezati sa hiralnim jedinjenjem (pomoćnim) da se proizvedu dijastereomeri koji se mogu razdvojiti hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom, nakon čega se hiralno pomoćno sredstvo hemijski uklanja kako bi se dobili čisti enantiomeri , kao što je poznato licu sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

[0058] Takođe, obezbeđena je farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja formule (I), kao što su oni opisane u nastavku i kao što je farmaceutski prihvatljiva so specifičnih jedinjenja koja su ovde prikazana, i metode za korišćenje takvih soli.

[0059] Termin "farmaceutski prihvatljiva so" ima nameru da označava so slobodne kiseline ili baze jedinjenja formule (I) koja nije toksična, biološki je podnošljiva, ili je na drugi način biološki pogodna za davanje subjektu. Za primere videti, generalno, S. M. Berge, i dr., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 1977, 66:1-19, i Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use, Stahl & Wermuth, Eds., Wiley-VCH i VHCA, Zurich, 2002.

[0060] "Farmaceutski prihvatljiva so" obuhvata, ali nije ograničena na, kisele adicione soli formirane sa jedinjenjem formule (I) sa neorganskom kiselinom, kao što je hidrohlorid, hidrobromid, karbonat, bikarbonat, fosfat, sulfat, sulfit, nitrat i slično; kao i sa organskom kiselinom, kao što je format, acetat, malat, maleat, fumarat, tartrat, sukcinat, citrat, laktat, metansulfonat, p-toluensulfonat, 2-hidroksietilsulfonat, benzoat, salicilat, stearat, i soli sa alkan-dikarboksilnom kiselinom formule HOOC-(CH2)n-COOH gde n je 0-4, i slično. Takođe, "farmaceutski prihvatljiva so" obuhvata bazne adicione soli formirane sa jedinjenjem formule (I) koje nose kiseli deo sa farmaceutski prihvatljivim katjonima, na primer, natrijumom, kalijumom, kalcijumom, aluminijumom, litijumom i amonijumom. Molarni odnos jedinjenja formule (I) prema kiselini ili katjonu u dobijenoj farmaceutski prihvatljivoj soli uključuje, ali nije ograničen na, 1:1, 1:2, 1:3, i 1:4.

[0061] Pored toga, ako je opisano ovde jedinjenje dobijeno kao kisela adiciona so, slobodna baza se može dobiti bazifikacijom rastvora kisele adicione soli. Suprotno tome, ako je proizvod slobodna baza, kisela adiciona so, naročito farmaceutski prihvatljiva adiciona so, može se dobiti rastvaranjem slobodne baze u pogodnom rastvaraču i tretiranjem rastvora kiselinom, u skladu sa konvencionalnim postupcima za pripremu kiselih adicionih soli iz baznih jedinjenja. Lice sa uobičajenim iskustvom u tehnici će prepoznati različite sintetske metodologije koje se mogu koristiti bez nepotrebnog eksperimentiranja za pripremu netoksičnih farmaceutski prihvatljivih kiselih adicionih soli.

[0062] Termin "solvati" znači adicione oblike rastvarača koji sadrže bilo stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu rastvarača. Neka jedinjenja imaju tendenciju da hvataju fiksni molarni odnos molekula rastvarača u čvrstom stanju, gradeći tako solvat. I Ako je rastvarač voda, formirani solvat je hidrat, kada je rastvarač alkohol, formirani solvat je alkoholat. Hidrati se formiraju kombinacijom jednog ili više molekula vode sa jednim od supstanci u kojima se voda zadržava molekulsko stanje kao H2O, takve kombinacije mogu da grade jedan ili više hidrata, na primer, hemihidrate, monohidrat i dihidrat, kao i promenljive hidrate.

1

[0063] Kako se ovde koristi, termini "grupa", "radikal" i "deo" su sinonimi i namenjeni su da označe funkcionalne grupe ili fragmente molekula koji se mogu vezati sa drugim fragmentima molekula.

[0064] Termin "aktivni sastojak" se koristi da označi hemijsku supstancu koja ima biološku aktivnost. U nekim realizacijama, "aktivni sastojak" je hemijska supstanca koja ima farmaceutsku korisnost. Praktična farmaceutska aktivnost u Sjedinjenim Državama može se uspostaviti odgovarajućim pretkliničkim ispitivanjima, bilo da je in vitro ili in vivo. Farmaceutska aktivnost dovoljna da bi je prihvatila regulatorna agencija, poput FDA u SAD-u, viši je standard od pretkliničkog ispitivanja. Ovakav viši standard farmaceutskih aktivnosti, čiji se uspeh uopšte ne može opravdano očekivati od pretkliničkih rezultata, može se utvrditi odgovarajućim i uspešnim randomizovanim, dvostruko slepim, kontrolisanim kliničkim ispitivanjima na ljudima.

[0065] Termini "lečenje", "tretiranje" ili "tretman" bolesti ili poremećaja, u kontekstu postizanja terapeutske koristi, odnosi se na davanje subjektu jedne ili više farmaceutski aktivnih supstanci, posebno jedinjenja formule (I) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kako je ovde opisano, kao što je ljudski subjekt, koji ima bolest ili poremećaj, ili ima simptom bolesti ili poremećaja, ili ima predispoziciju za bolest ili poremećaj, sa ciljem da izleči, leči, ublažava, olakšava, menja, poboljšava, ili utiče na bolest ili poremećaj, simptome bolesti ili poremećaja ili predispoziciju za bolest ili poremećaj. U nekim realizacijama, bolest ili poremećaj je kancer.

[0066] Termini "lečenje", "kontaktiranje" i "reagovanje" u kontekstu hemijske reakcije, znače dodavanje ili mešanje dva ili više reagensa pod odgovarajućim uslovima za proizvodnju naznačenog i/ili željenog proizvoda. Treba imati na umu da reakcija koja daje naznačeni i/ili željeni proizvod ne mora nužno da bude direktno rezultat kombinacije dva reagensa koji su prvobitno dodani, tj. može da bude jedan ili više intermedijara koji se proizvode u smeši, koji naposletku dovode do formiranja naznačenog i/ili željenog proizvoda.

[0067] Termin "efikasna količina" kako se ovde koristi odnosi se na količinu ili dozu agensa za inhibiranje PI3K dovoljnu da generalno dovede do terapeutske koristi kod pacijenata kome je potreban tretman bolesti ili poremećaja posredovanih s aktivnošću PI3K. Efikasne količine ili doze aktivnog sastojka iz predmetnog pronalaska mogu se utvrditi metodama kao što su modeliranje, studije eskalacije doze ili klinička ispitivanja, i uzimajući u obzir faktore, npr., način ili put primene ili isporuke lekova, farmakokinetiku agensa, težinu i tok bolesti ili poremećaja, prethodnu ili sadašnju terapija subjekta, zdravstveno stanje subjekta i reakciju na lekove i procenu lekara. Shodno tome, utvrđivanje efikasne doze nije generalno predvidljivo u Sjedinjenim Državama iz pretkliničkih eksperimenata. U stvari, doziranje može biti dovoljno nepredvidljivo da se razvijaju novi, nepredvidljivi režimi doziranja posle doziranja koja su prvobitno korišćena u slučajnim, dvostruko slepim, kontrolisanim, kliničkim ispitivanjima.

[0068] Primer doze je u opsegu od oko 0.0001 do oko 200 mg aktivnog agensa po kilogramu telesne težine subjekta po danu, kao što je od oko 0.001 do 100 mg/kg/dan, ili oko 0.01 do 35 mg/kg/dan, ili oko 0.1 do 10 mg/kg dnevno u jednoj ili podeljenim doznim jedinicama (npr., BID, TID, QID). Za čoveka od 70 kg, ilustrativni opseg za pogodnu količinu dozirana je od oko 0.05 do oko 7 g/dan, ili oko 0.2 do oko 5 g/dan. Jednom kada se poboljša pacijentova bolest ili poremećaj, doza se može prilagoditi za tretman održavanja. Na primer, doza ili učestalost davanja, ili oboje, mogu se smanjiti u zavisnosti od simptoma, do nivoa na kome se održava željeni terapeutski efekat. Naravno, ako su simptomi ublaženi na odgovarajući nivo, lečenje može prestati. Pacijenti, međutim, mogu da zahtevaju povremeni tretman na duži rok nakon bilo kakvog ponavljanja simptoma.

[0069] Termin "inhibicija" ili "inhibiranje" označava smanjenje bazne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa. Termin " inhibicija aktivnosti PI3K" je praktična farmaceutska aktivnost za svrhe ovog pronalaska i odnosi se na smanjenje u aktivnosti PI3K kao direktan ili indirektan odgovor na prisustvo jedinjenja formule (I) i/ili njegove ovde opisane farmaceutski prihvatljive soli, u odnosu na aktivnost PI3K u odsustvu jedinjenja formule (I) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Smanjenje aktivnosti može biti posledica direktne interakcije datog jedinjenja formule (I) i/ili njegove ovde opisane farmaceutski prihvatljive soli sa PI3K, ili zbog interakcije jedinjenja formule (I) i/ili njegove ovde opisane farmaceutski prihvatljive soli, sa jednim ili više drugih faktora koji zauzvrat utiču na aktivnost PI3K. Na primer, prisustvo jedinjenja formule (I) i/ili njegove ovde opisane farmaceutski prihvatljive soli, može smanjiti aktivnost PI3K direktnim vezivanjem za PI3K, izazivanjem (direktno ili indirektno) drugog faktora da smanjuje aktivnost PI3K, ili (direktno ili indirektno) smanjujući količinu PI3K prisutnu u ćeliji ili organizmu.

1

[0070] Termin "subjekt" kako se ovde koristi označava sisare i ne-sisare. Sisari znači bilo koji pripadnik klase sisara koji uključuje, ali nije ograničen na, ljude; primate koji nisu ljudi, kao što su čimpanze i drugi majmuni i vrste majmuna; domaće životinje poput goveda, konja, ovaca, koza i svinja; domaće životinje kao što su zečevi, psi i mačke; laboratorijske životinje uključujući glodare, kao što su pacovi, miševi i zamorci; i slično. Primeri sisara obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ptice i slično. Termin "subjekt" ne označava određeno dob ili pol. U nekim realizacijama, subjekt je čovek.

[0071] Uopšteno, termin "oko" je ovde korišćen za modifikaciju brojčane vrednosti iznad i ispod navedene vrednosti za varijansu od 20%.

[0072] Tehnički i naučni termini korišćeni ovde i koji nisu specifično definisani imaju značenje koje obično razume lice sa uobičajenim iskustvom u tehnici na koje se predmetni pronalazak odnosi.

[0073] Prema jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I):

i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i/ili solvate, racemičnu smešu, enantiomere, dijasteromere i njihove tautomere, pri čemu

Ar je

aril, pomenuti aril je karbociklički ugljovodonični radikal monocikličnog prstena ili fuzionisanih prstenova koji sadrže 6-12 atoma ugljenika u prstenu, pri čemu najmanje jedan prsten je aromatični i nijedan od ostalih prstenova nije heteroaril;

ili heteroaril, pomenuti heteroaril je monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 5, 6 ili 7 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 heteroatoma nezavisno izabrana između N, O, i S u prstenu, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika; ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 9 ili 10 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma u prstenovima nezavisno izabrana između N, O, i S, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični, kada ukupan broj S i O atoma u

1

heteroaril grupi prelazi 1, ti heteroatomi nisu susedni jedan drugom, i pomenuta heteroarilna grupa takođe obuhvata one gde se N heteroatom pojavljuje kao N-oksid;

svaki pomenuti aril i heteroaril je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine deuterijum, halo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -(C1-6alkil)OH, i -S(O)2(C1-6alkil);

W je izabran od heteroarila i -N(R3)heteroarila, pri čemu je pomenuti heteroaril monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži azot koji ima 5, 6 ili 7 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 heteroatoma, pri čemu heteroatom ili heteroatomi je/su atomi azota, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika; ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži azot koji ima 9 ili 10 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma, pri čemu heteroatom ili heteroatomi je/su atomi azota, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični; i pomenuta heteroarilna grupa takođe obuhvata one gde se N heteroatom pojavljuje kao N-oksid, i pomenuti heteroaril je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6alkil),-C(O)N(C1-

6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril; gde je navedeni 5- ili 6-člani heteroaril monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 5 ili 6 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2 ili 3 heteroatoma u prstenu nezavisno izabrana od N, O i S, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, kada ukupan broj S i O atoma u heteroaril grupi prelazi 1, ti heteroatomi nisu susedni jedan drugom, i svaki navedeni fenil ili navedeni 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, -SH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil);

R1je nezavisno izabran između H, halo, i C1-6alkil;

R2je izabran od C1-6alkil;

R3je H ili C1-6alkil ;

m je 1 ili 2.

[0074] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), pri čemu, W je izabran od heteroarila koji sadrži azot ili -N(R3) heteroarila koji sadrži azot, pri čemu pomenuti heteroaril koji sadrži azot je izabran iz grupe koju čine pirimidinil, pirolopirimidinil i purinil, i opciono je supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, fenil, i 5- ili 6-membered heteroaril; gde je svaki pomenuti fenil ili 5- ili 6-teročlani heteroaril

1

kao supstituent od W opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil).

U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), W je izabran od

svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril; gde je svaki pomenuti fenil ili 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil i -O(C1-6alkil).

U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), W je

koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil,-NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril; gde je svaki pomenuti fenil ili 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil).

U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), W je izabran od

svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine hloro, -CN, -NH2, -NH(C1-6alkil),-COOH, -C(O)NH2, fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, i tetrazolil; gde je svaki pomenuti fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, ili tetrazolil opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-

6alkil).

U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), W je

1

koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine hloro, -CN, -NH2, NH(C1-6alkil), -COOH,-C(O)NH2, fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, i tetrazolil; gde je svaki pomenuti fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, ili tetrazolil opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil).

[0075] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), Ar je izabran između fenil, naftil, piridil, pirazolil, kinolil, tienil, benzotiazolil, indolil, i 2,3-dihidro-1,4-benzodioksinil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine deuterijum, halo, -CN, C1-6alkil, -(C1-6alkil)OH, C1-6haloalkil, ili -S(O)2(C1-6alkil).

[0076] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), Ar je fenil ili piridil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -CN, i C1-6haloalkil.

[0077] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), Ar je fenil ili piridil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednim ili više halo, kao što je opciono supstituisan sa jednim ili više fluoro.

[0078] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), R2je C1-4alkil, dodatno kao što je metil i etil.

[0079] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), R3je H.

[0080] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), m je 1.

[0081] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I), formula (I) je formula (I-1),

[0082] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), W je izabran od heteroarila koji sadrži azot ili -N(R3) heteroarila koji sadrži azot, pri čemu pomenuti heteroaril koji sadrži azot je monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 6 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 N

1

heteroatoma u prstenu, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 9 atoma u prstenu, i sadrži 3 ili 4 N heteroatoma u prstenovima, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični, i pomenuti heteroaril koji sadrži azot je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil.

[0083] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), pomenuti heteroaril koji sadrži azot je izabran od pirimidinila, pirolopirimidinila, i purinila.

[0084] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), W je izabran od

svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril.

[0085] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), W je izabran od

svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine -CN, -NH2, i tetrazolil.

[0086] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), W je

koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil,-NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil.

2

[0087] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), W je

koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine-CN, -NH2, i tetrazolil.

[0088] U nekim realizacijama jedinjenja formule (I-1), Ar je izabran između fenil, naftil, piridil, pirazolil, kinolil, tienil, benzotiazolil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -CN, C1-6alkil, -(C1-6alkil)OH, i C1-6haloalkil.

[0089] Takođe, obezbeđeno je jedinjenje izabrano između Jedinjenja 1-9 i 11-82, kako je označeno u eksperimentalnom delu, i/ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.

[0090] U drugom aspektu, obezbeđena je farmaceutska kompozicija, koja sadrži jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih jedinjenja) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent (npr., farmaceutski prihvatljiv nosač).

[0091] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) (npr., bilo kojeg od ovde opisanih jedinjenja) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kako je ovde opisano za lečenje bolesti koje reaguju na inhibiciju PI3K inhibicijom navedene PI3K u navedenom subjektu.

[0092] U drugom aspektu, obezbeđena je upotreba jedinjenja formule (I) (npr., bilo kojeg od ovde opisanih jedinjenja) i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli kako je ovde opisano u proizvodnji leka za lečenje bolesti koje reaguju na inhibiciju PI3K.

[0093] U nekim realizacijama, pomenuta bolest koja reaguje na inhibiciju PI3K je inflamatorna bolest, autoimuna bolest, ili kancer.

[0094] U nekim realizacijama, pomenuta inflamatorna bolest ili autoimuna bolest je izabrana od reumatoidnog artritisa, hronične opstruktivne bolesti pluća (HOBP), alergijskog rinitisa, astme, lupusa, sistemskog eritemskog lupusa, psorijaze i multiple skleroze.

[0095] U nekim realizacijama, navedeni kancer je solidni tumor ili hematološki malignitet izabran između leukemije, multiplog mijeloma (MM), i limfoma.

[0096] U nekim realizacijama, pomenuta leukemija je odabrana od akutne limfocitne leukemije (ALL), akutne mijeloidne leukemije (AML), hronične limfocitne leukemije (HLL), i hronične mijeloidne leukemije (HML).

[0097] U nekim realizacijama, navedeni limfom je izabran između Hodgkinovog limfoma, ne-Hodgkinovog limfom (NHL), limfoma mantle ćelija (MCL), folikularnog limfoma, B-ćelijskog limfoma, T-ćelijskog limfoma, i difuznog B-krupnoćelijskog limfoma (DLBCL).

[0098] U drugom aspektu, obezbeđeno je jedinjenje formule (II) i/ili njegova so, i/ili njegova racemska smeša ili enantiomer, koji se mogu koristiti za proizvodnju jedinjenja formule (I) (npr., bilo kojeg od ovde opisanih jedinjenja),

;

pri čemu, Ar i R2su definisani kao u jedinjenju formule (I).

[0099] U nekim realizacijama, jedinjenje formule (II) i/ili njegova so je izabrano od:

Opšte metode sinteze za otkrivene realizacije

[0100] Jedinjenje formule (I) kako je ovde opisano i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je ovde opisano mogu se sintetisati iz komercijalno dostupnog polaznog materijala dobro poznatim postupcima u struci, uzeti zajedno sa obelodanjivanjem u ovoj patentnoj prijavi. Sledeće šeme ilustruju opšte postupke za dobijanje nekih od ovde opisanih jedinjenja.

2

Šema I

[0101] Kao što je prikazano u Šemi I, jedinjenje formule i-1 reaguje sa N,O-dimetilhidroksilaminom dajući amid jedinjenje formule i-2. Reakcijom jedinjenja formule i-2 sa M-H dobija se jedinjenje formule i-3, koje u Suzukijevom kuplovanju sa jedinjenjem formule ArB(OH)2(Ar je kako je ovde definisano) u prisustvu pogodnog paladijum katalizatora daje jedinjenje formule i-4. Pd-katalizovana C-C reakcija kuplovanja može se izvesti u pogodnim polarnim rastvaračima kao što su DMF, ACN, THF ili DMSO i slično, u pogodnim bazama kao što su TEA, DIPEA, Cs2CO3, KOAc i slično, korišćenjem katalizatora kao što je Pd(OAc)2, Pd(dppf)Cl2, Pd(PPh3)4ili Pd2(dba)3i slično. Zatim se sledeće reakcije izvode kako sledi:

1) reakcijom jedinjenja formule i-4 sa Grignardovim reagensom (alkil magnezijum halogenidom) pod pogodnim uslovima nastaje jedinjenje i-5, koje kondenzuje sa (R)-2-metilpropan-2-sulfinamidom i posle redukcije u prisustvu pogodnih reduktivnih reagensa daje jedinjenje formule i-7; ili

2) redukcijom jedinjenja formule i-4 u prisustvu odgovarajućih reduktivnih reagenasa rezultuje sa formiranjem jedinjenja i-5', koje kondenzuje sa (R)-2-metilpropan-2-sulfinamidom i posle reakcije sa Grignardovim reagensom (alkil magnezijum halogenidom) pod pogodnim uslovima daje jedinjenje formule i-7.

[0102] Jedinjenje formule i-7 deprotekcijom dovodi do formiranja jedinjenja formule i-8, koje ciklizacijom sa hloracetaldehidom u prisustvu baza kao što su NaHCO3i slično daje jedinjenje formule i-9, koje deprotekcijom rezultuje sa jedinjenjem formule i-10. Jedinjenje formule i-10 reaguje sa CI-V u prisustvu baze kao što je DIPEA i slično pod odgovarajućim uslovima, što rezultuje jedinjenjem formule i-11, koji prolazi dalju reakciju ili reakcije, kao što je halogenacija, pod pogodnim uslovima dajući jedinjenje formule (I).

2

Šema II

[0103] Kao što je prikazano u Šemi II, jedinjenje formule i-1 reaguje sa N,O-dimetilhidroksilaminom dajući amid jedinjenja formule i-2. Reakcijom jedinjenja formule i-2 sa M-H dobija se jedinjenje formule i-3. Zatim se sledeće reakcije izvode kako sledi:

1) redukcijom jedinjenja formule i-3 u prisustvu odgovarajućih reduktivnih reagenasa dolazi do građenja jedinjenja i-4, koje kondenzuje sa (R)-2-metilpropan-2-

2

sulfinamidom i posle reakcije sa Grignardovim reagensom (alkil magnezijum halogenidom) pod pogodnim uslovima daje jedinjenje formule i-6; ili

2) reakcijom jedinjenja formule i-3 sa Grignardovim reagensom (alkil magnezijum halogenidom) pod pogodnim uslovima nastaje jedinjenje i-4', koje kondenzuje sa (R)-2-metilpropan-2-sulfinamidom i posle redukcije u prisustvu pogodnih reduktivnih reagensa dobija se jedinjenje formule i-6.

[0104] Jedinjenje formule i-6 deprotekcijom i protekcijom daje jedinjenje formule i-8, koje ciklizacijom sa hloracetaldehidom u prisustvu baza kao što su NaHCO3i slično daje jedinjenje formule i-9. Jedinjenje formule i-9 Stilleovim kuplovanjem ili Suzuki kuplovanjem sa stananima ili ArB(OH)2(Ar je kako je ovde definisano) u prisustvu pogodnog paladijum katalizatora kao što je Pd2(dba)3i slično, pogodnim ligandima kao što je X-phos i slično, pod standardnim uslovima Stilleovog kuplovanja ili Suzukijevog kuplovanja daje jedinjenje formule i-10, koje deprotekcijom daje jedinjenje i-11. Jedinjenje formule i-11 reaguje sa CI-V V u prisustvu baze kao što je DIPEA i slično pod odgovarajućim uslovima, što rezultuje jedinjenjem formule i-12, koje prolazi dalju reakciju ili reakcije, kao što je kao što je halogenacija, pod pogodnim uslovima, dajući jedinjenje formule (I).

[0105] Ovako dobijena jedinjenja mogu se dalje modifikovati na njihovim perifernim pozicijama da daju željena jedinjenja. Transformacije sintetske hemije opisane su, na primer, u R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene i P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons (1999); L. Fieser i M. Fieser, Fieser i Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1994); i L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley & Sons (1995) i njihovim sledećim izdanjima.

[0106] Pre upotrebe, jedinjenje formule (I) i/ili njegova ovde opisana farmaceutski prihvatljiva so može biti prečišćeno hromatografijom na koloni, tečne hromatografije visokih performansi, kristalizacijom ili drugim odgovarajućim metodama.

2

Farmaceutske kompozicije i praktična upotreba

[0107] Jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih) i/ili njegova ovde opisana farmaceutski prihvatljiva so se koristi, zasebno ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih aktivnih sastojaka, da formulišu farmaceutske kompozicije. Farmaceutska kompozicija sadrži: (a) efikasnu količinu jedinjenja formule (I) i/ili njegova ovde opisanu farmaceutski prihvatljivu so; i (b) farmaceutski prihvatljiv ekscipijent (npr., farmaceutski prihvatljiv nosač).

[0108] Farmaceutski prihvatljiv nosač se odnosi na nosač koji je kompatibilan sa aktivnim sastojcima kompozicije (i u nekim realizacijama, sposoban da stabilizuje aktivne sastojke) i nije štetan za subjekta koji se leči. Na primer, agensi za rastvorljivost, kao što su ciklodekstrini (koji grade specifične, rastvorljive komplekse sa jedinjenjem formule (I) i/ili njegovom farmaceutski prihvatljivom soli koja je ovde opisana), mogu se koristiti kao farmaceutski ekscipijenti za isporuku aktivnih sastojaka. Primeri drugih nosača obuhvataju koloidni silicijum dioksid, magnezijum stearat, celulozu, natrijum lauril sulfat, i pigmente kao što je D&C Žuto # 10. Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači su opisani u Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, standardnom referentnom tekstu u tehnici.

[0109] Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih) i/ili ovde opisanu njegovu farmaceutski prihvatljivu so, može biti davana na razne poznate načine, kao što je oralno, topikalno, rektalno, parenteralno, b inhalacionim sprejom ili implantiranim rezervoarom. Termin "parenteralno" kako se ovde koristi uključuje supkutane, intrakutane, intravenske, intramuskularne, intraartikularne, intraarterijalne, intrasinovijalne, intrasternalne, intratekalne, intralezione i intrakranijalne injekcije ili infuzione tehnike.

[0110] Ovde opisana farmaceutska kompozicija može se pripremiti u obliku tablete, kapsule, kesice, dražeja, praha, granula, pastile, praha za rekonstrukciju, tečnog preparata ili supozitorija. U nekim realizacijama, farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (I) i/ili njegovu farmaceutski prihvatljiva so je formulisana za intravensku infuziju, topikalnu primenu ili oralnu administraciju.

[0111] Oralna kompozicija može biti bilo oralno prihvatljiv oblika doziranja, uključujući, ali ne ograničavajući se, tablete, kapsule, emulzije i suspenzije, disperzije i rastvore. Najčešće korišteni nosači za tablete obuhvataju laktozu i kukuruzni skrob. Agensi za podmazivanje, kao što je magnezijum stearat, takođe se obično dodaju u tablete. Za oralnu primenu u obliku

2

kapsula, korisni razblaživači obuhvataju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada se vodene suspenzije ili emulzije daju oralno, aktivni sastojak se može suspendovati ili rastvoriti u uljanoj fazi kombinovanoj sa agensima za emulgovanje ili suspendiranje. Po želji se mogu dodati određeni agensi za zaslađivanje, aromu ili boje.

[0112] U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može da bude prisutna u količini 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 400 i 500 mg u tableti. U nekim realizacijama, jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može da bude prisutna u količini 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 400 i 500 mg u kapsuli.

[0113] Sterilna injekciona kompozicija (npr., vodena ili uljana suspenzija) može biti formulisana prema tehnikama poznatim u tehnici korišćenjem pogodnih disperzionih agenasa ili agenasa za vlaženje (kao što je, na primer, Tween 80) i agenasa za suspendovanje. Sterilni injekcioni intermedijar može takođe biti sterilni injekcioni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među farmaceutski prihvatljivim nosačima i rastvaračima koji se mogu koristiti su manitol, voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum-hlorida. Pored toga, sterilna, fiksirana ulja se uobičajeno koriste kao rastvarač ili suspendirajući medijum (npr., sintetički mono- ili di-gliceridi). Masne kiseline, kao što su oleinska kiselina i njezini gliceridni derivati, korisne su u intermedijarima injekcijskih sredstava, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, poput maslinovog ulja ili ricinusovog ulja, posebno u njihovim polioksietilovanim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije takođe mogu da sadrže alkoholni razblaživač ili disperzant dugog lanca, ili karboksimetil celulozu ili slične disperzione agense.

[0114] Inhalacione kompozicije mogu biti pripremljene prema tehnikama koje su dobro poznate u tehnici farmaceutske formulacije i mogu biti pripremljene kao rastvori u fiziološkom rastvoru, korišćenjem benzil alkohola ili drugih pogodnih konzervansa, absorpcijom promotera za povećanje biodostupnosti, fluorougljenika, i/ili drugih agenasa za rastvaranje ili disperzionih agenasa poznatih u stanju tehnike.

[0115] Topikalna kompozicija može biti formulisana u obliku ulja, kreme, losiona, masti i slično. Pogodni nosači za kompoziciju obuhvataju biljna ili mineralna ulja, beli vazelin (beli

2

meki parafin), masti ili ulja razgranatog lanca, životinjske masti i alkohole velike molekulske težine (veće od C12). U nekim realizacijama, farmaceutski prihvatljiv nosač je onaj u kojem je aktivni sastojak rastvorljiv. Takođe mogu biti uključeni emulgatori, stabilizatori, humektansi i antioksidanti, kao i agensi koji daju boju ili miris, ako je potrebno. Pored toga, u tim lokalnim formulacijama se mogu primeniti pojačivači transdermalne penetracije. Primeri takvih pojačivača mogu se naći u američkim patentima 3,989,816 i 4,444,762.

[0116] Kreme se mogu formulisati iz smeše mineralnog ulja, samo-emulzifikujućeg pčelinjeg voska i vode u kojoj smeši je izmešan aktivni sastojak, rastvoren u maloj količini ulja, kao što je bademovo ulje. Primer takve kreme je ona koja sadrži, po težini, oko 40 delova vode, oko 20 delova pčelinjeg voska, oko 40 delova mineralnog ulja i oko 1 deo bademovog ulja. Mast se može formulisati mešanjem rastvora aktivnog sastojka u biljnom ulju, poput bademovog ulja, sa toplim mekim parafinom i ostavljanjem smeše da se ohladi. Primer takve masti je onaj koji obuhvata oko 30% mas.% bademovog ulja i oko 70 mas.% belog mekog parafina.

[0117] Pogodni in vitro testovi se mogu koristiti za procenu praktične korisnosti jedinjenja formule (I) i/ili ovde opisane njegove farmaceutski prihvatljive soli, u inhibiciji aktivnosti PI3Kδ. Jedinjenje formule (I) i/ili ovde opisana njegova farmaceutski prihvatljiva so može se dalje ispitivati radi dodatnog praktičnog korišćenja u lečenju raka ili autoimune bolesti pomoću in vivo testova. Na primer, jedinjenje formule (I) i/ili ovde opisana njegova farmaceutski prihvatljiva so može se primeniti na životinji (npr., mišji model) koji ima kancer ili autoimunu bolest i može se pristupiti njegovim terapijskim efektima. Pod pretpostavkom da su pretklinički rezultati uspešni, može se projektovati opseg doziranja i način davanja za životinje, kao što su ljudi.

[0118] Za jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih) i/ili ovde opisana njegova farmaceutski prihvatljiva so može se pokazati da ima dovoljnu pretkliničku praktičnu korisnost da bi zaslužili klinička ispitivanja za koje se nada da će pokazati koristan terapeutski ili profilaktički efekat, na primer, na primer, kod subjekata sa kancerom.

[0119] Kako se ovde koristi, termin "kancer" označava ćelijski poremećaj koji karakteriše nekontrolisana ili neregulisana proliferacija ćelija, smanjena diferencijacija ćelija, neodgovarajuća sposobnost da napada okolno tkivo, i/ili sposobnost da se uspostavi novi rast na ektopičnim mestima. Termin "kancer" obuhvata, ali nije ograničen na, solidne tumore i hematološke malignitete. Termin "kancer" obuhvata bolesti kože, tkiva, organa, kostiju, hrskavice, krvi i krvnih sudova. Termin "kancer" dalje obuhvata primarne i metastatske kancere.

[0120] Neograničavajući primeri solidnih tumora obuhvataju ka rak pankreasa; rak bešike; kolorektalni kancer; kancer dojke, uključujući metastatski kancer dojke; rak prostate, uključujući androgen-zavisan rak prostate i androgen-nezavisan rak prostate; rak bubrega, uključujući, npr., metastatski karcinom bubrežnih ćelija; hepatocelularni kancer; kancer pluća, uključujući, npr., ne-sitnoćelijski karcinom pluća (NSCLC), bronhioloalveolarni karcinom (BAC), i adenokarcinom pluća; rak jajnika, uključujući, npr., progresivni epitelni ili primarni karcinom peritoneje; karcinom grlića materice; kancer želuca; kancer jednjaka; rak glave i vrata, uključujući, npr., karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata; rak kože, uključujući npr., maligni melanom; neuroendokrini karcinom, uključujući metastatske neuroendokrine tumore; tumore mozga, uključujući, npr., gliom, anaplastični oligodendrogliom, multiformni glioblastom u odraslih, i anaplastični astrocitom u odraslih; rak kostiju; sarkom mekog tkiva; karcinom štitaste žlezde.

[0121] Neograničavajući primeri hematoloških maligniteta obuhvataju akutnu mijeloidnu leukemiju (AML); hroničnu mijeloidnu leukemiju (HML), uključujući ubrzanu HML i HML fazu blasta (HML-BP); akutnu limfoblastičnu leukemiju (ALL); hroničnu limfocitnu leukemiju (HLL); Hodgkinov limfom; ne-Hodgkinov limfom (NHL), uključujući folikularni limfom i limfom mantle ćelija; B-ćelijski limfom; T-ćelijski limfom; multipli mijelom (MM); Valdenstromovu makroglobulinemiju; mijelodisplastične sindrome (MDS), uključujući refraktornu anemiju (RA), refraktornu anemiju sa kružnim sideroblastima (RARS), refraktornu anemiju sa viškom blasta (RAEB), i RAEB u transformaciji (RAEB-T); i mijeloproliferativne sindrome.

[0122] U nekoj realizaciji, primeri hematoloških maligniteta obuhvataju leukemiju, kao što je akutna limfocitna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (HLL), i hronična mijeloidna leukemija (HML); multipli mijelom (MM); i limfom, kao što je Hodgkinov limfom, ne-Hodgkinov limfom (NHL), limfom mantle ćelija (MCL), folikularni limfom, B-ćelijski limfom, T-ćelijski limfom, i difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL).

1

[0123] Termin ""inflamatorna bolest" se odnosi na patološka stanja koja rezultuju sa inflamacijom, obično uzrokovanom sa neutrofilnom hemotaksom. Primeri takvih bolesti uključuju inflamatorne kožne bolesti uključujući psorijazu i atopijski dermatitis; sistemsku sklerodermu i sklerozu; reakcije povezane sa inflamatornom bolešću creva (IBD) (poput Kronove bolesti i ulceroznog kolitisa); ishemijske reperfuzijske poremećaje uključujući hiruršku reperfuzionu povredu tkiva, ishemijska stanja miokarda kao što je infarkt miokarda, zastoj srca, reperfuzija posle srčane hirurgije i stezanje nakon perkutane transluminalne koronarne angioplastike, moždani udar, i aneurizme trbušne aorte; cerebralni edem zbog moždanog udara; kranijalna trauma, hipovolemički šok; asfiksija; sindrom respiratornog distresa u odraslih; akutne povrede pluća; Behčetovu bolest; dermatomiozitis; polimiozitis; multiplu sklerozu (MS); dermatitis; meningitis; encefalitis; uveitis; osteoartritis; lupus nefritis; autoimune bolesti kao što je reumatoidni artritis (RA), Sjorgenov sindrom, vaskulitis; bolesti koje uključuju leukocitnu dijapedezu; upalni poremećaj centralnog nervnog sistema (CNS), sindrom povrede više organa koji je sekundaran u odnosu na septikemiju ili traumu; alkoholni hepatitis; bakterijsku pneumoniju; bolesti posredovane kompleksom antigen-antitelo uključujući glomerulonefritis; sepsu; sarkoidozu; imunopatološke odgovore na transplantaciju tkiva /organa; upalu pluća, uključujući pleuriju, alveolitis, vaskulitis, pneumoniju, hronični bronhitis, bronhiektaziju, difuzni panbronhiolitis, hipersenzitivni pneumonitis, idiopatsku plućnu fibrozu (IPF), i cističnu fibrozu; itd. Poželjne indikacije obuhvataju, bez ograničenja, hroničnu inflamaciju, autoimuni dijabetes, reumatoidni artritis (RA), reumatoidni spondilitis, urički artritis i druga artritična stanja, multiplu sklerozu (MS), astmu, sistemski eritemski lupus, sindrom respiratornog distresa u odraslih, Behčetovu bolest, psorijazu, hroničnu plućnu inflamatornu bolest, reakciju graft-versus-host, Kronovu bolest, ulcerativni kolitis, inflamatornu crevnu bolest (IBD), Alchajmerovu bolest, i pirezu.

[0124] Jedinjenje formule (I) i/ili ovde opisana njegova farmaceutski prihvatljiva sol može da se koristi za postizanje korisnog terapeutskog ili profilaktičnog efekta, na primer, kod subjekata sa autoimunom bolesti.

[0125] Termin "autoimuna bolest" se odnosi na bolest ili poremećaj koja proističe iz i/ili usmerenu protiv sopstvenih tkiva ili organa pojedinca, ili ko-odvojeno ili njihovu manifestaciju, ili na posledicu njihovog stanja. Primeri autoimunih bolesti uključuju, ali nisu ograničeni na, HOBP (hroničnu opstruktivnu bolest pluća), alergijski rinitis, lupus, mijasteniju gravis, multiplu sklerozu (MS), reumatoidni artritis (RA), psorijazu, inflamatornu bolest creva (IBD),

2

astmu i idiopatsku trombocitopeničnu purpuru, i mijeloidni proliferativni poremećaj, kao što je mijelofibroza, PV / ET (post-policitemija / esencijalna trombocitemija mijelofibroza).

[0126] U nekim realizacijama, inflamatorna bolest i autoimuna bolest obuhvata reumatoidni artritis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća (HOBP), alergijski rinitis, astmu, lupus, sistemski eritemski lupus, psorijazu, te multiplu sklerozu.

[0127] Pored toga, jedinjenje formule (I) (npr., bilo koje od ovde opisanih) i/ili ovde opisana njegova farmaceutski prihvatljiva so može se koristiti u kombinaciji sa dodatnim aktivnim sastojcima u lečenju kancera, inflamatorne ili autoimune bolesti. Dodatni aktivni sastojci mogu se zajedno davati odvojeno od jedinjenja formule (I) i/ili ovde opisane njegove farmaceutski prihvatljive soli ili zajedno sa takvim sastojkom u farmaceutskoj kompoziciji prema ovom opisu, kao što je proizvod kombinovanog leka sa fiksnom dozom. U jednoj realizaciji iz primera, dodatni aktivni sastojci su oni koji su poznati ili otkriveni kao efikasni u lečenju bolesti posredovanih aktivnosti PI3K, kao što je drugi modulator PI3K ili jedinjenje aktivno protiv drugog cilja povezanog sa određenom bolesti. Kombinacija može poslužiti za povećanje efikasnosti (npr., uključivanjem u kombinaciju jedinjenja koje potencira jačinu ili efikasnost jedinjenja formule (I) i/ili ovde opisane njegove farmaceutski prihvatljive soli), smanjenje jednog ili više sporednih efekata ili smanjiti potrebnu dozu jedinjenja formule (I) i/ili ovde opisanu njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

PRIMERI

[0128] Primeri koji slede su namenjeni da budu primer i ne treba ih smatrati da se ograničavajući na bilo koji način. Ako nije drugačije naznačeno, delovi su težinski delovi, temperatura je u stepenima Celzijusa, i pritisak je atmosferski ili blizu atmosferskog. Svi MS podaci dobijeni su sa uređajem Agilent 6120 i/ili Agilent 1100. Svi reagensi, osim intermedijara koji se koriste u ovom opisu su komercijalno dostupni. Svi nazivi jedinjenja osim reagensa generisani su u sa softverom Chemdraw 12.0.

[0129] U sledećim primerima, koriste se skraćenice ispod:

ACN Acetonitril

Boc tert-butoksikarbonil

Boc2O di-t-butil-dikarbonat

DAST Dietilaminosumpor trifluorid

DCM dihlorometan

DEA dietilamin

DMF N,N-dimetilformamid

DMA Dimetilacetamid

DIBAL-H Diizobutilaluminijum hidrid

DIPEA N,N-Diizopropiletilamin

EDCI 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid

EtOAc/EA etil acetat

Et3N trietilamin

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N;N'-tetra-metiluronijum heksafluorofosfat HBTU O-Benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametil-uronijum-heksafluoro-fosfat HOAc sirćetna kiselina

HOBT 1-hidroksibenzotriazol

ee enantiomerni višak

mL mililitar(i)

g gram(s)

mg miligram(i)

ng nanogram(i)

mol mol(i)

mmol milimol(i)

min minut(i)

h sat(i)

mCPBA 3-Hloroperoksibenzojeva kiselina

MeOH metanol

NaH Natrijum hidrid

NCS N-hlorosukcinimid

NMP N-metil-2-pirolidon

PE petroleum eter

Pd(dppf)Cl2[1,1'-Bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum(II)dihlorid

Pd2(dba)3tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)

Pd(PPh3)4tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)

PMB p-Metoksibenzil

PPh3trifenilfosfin

THF tetrahidrofuran

4

TFA Trifluorosirćetna kiselina

TFE trifluoroetanol

TsOH 4-metilbenzensulfonska kiselina

Xphos 2-dicikloheksilfosfino-2',4',6'-triizopropilbifenil

Primer 1

Sinteza jedinjenja 1-9 i 11-82

Jedinjenje 1

4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril [0130]

(A) 3-hloro-6-hidroksipiridazin-4-karboksilna kiselina

[0131] Rastvor 3,6-dihloropiridazin-4-karboksilne kiseline (10 g, 51.8 mmol) u vod. NaOH (2N, 200 mL) refluksovan je preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, reakcioni rastvor je zakiseljen sa rastvorom hlorovodonične kiseline pH≈1-2. Rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O/MeOH) dajući produkt (5.2 g, prinos 57%) u vidu žute čvrste supstance. MS (m/z):175 [M+H]<+>

(B) metil 3-hloro-6-hidroksipiridazin-4-karboksilat

[0132] U rastvor 3-hloro-6-hidroksipiridazin-4-karboksilne kiseline (5 g, 28.7 mmol) u MeOH (30 mL) dodata je koncentrovana H2SO4(1 mL). Rastvor je mešan na 100 °C preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O:MeOH=100:0 do 0:100) dajući produkt (5 g, prinos 93%) kao belu čvrstu supstancu. MS (m/z): 189 [M+H]<+>

(C) metil 6-hidroksi-3-fenilpiridazin-4-karboksilat

[0133] U smešu metil 3-hloro-6-hidroksipiridazin-4-karboksilata (5 g, 26.6 mmol), fenilboronske kiseline (6.49 g, 53.2 mmol) i KOAc (5.21 g, 53.2 mmol) u dioksanu (60 mL) i H2O (6 mL) pod atmosferom N2u balonu dodat je Pd(dppf)Cl2(1.08 g, 13.3 mmol). Smeša je mešana na 120 °C pod atmosferom N2preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (PE/EA=1/1) dajući sirovi produkt, koji je ponovo prečišćen fleš kolonskom hromatografijom (H2O/MeOH=100:0 do 0:100) da se dobije produkt (2.3 g, prinos 37.6%) kao belu čvrstu supstancu. MS (m/z): 231 [M+H]<+>

(D) metil 6-hloro-3-fenilpiridazin-4-karboksilat

[0134] Smeša metil 6-hidroksi-3-fenilpiridazin-4-karboksilata (2.3 g, 10 mmol) u POCl3(10 mL) mešana je na 110 °C tokom 6 sati. Dodatni POCl3je uklonjen u vakuumu i dodat je vod. NaHCO3. Smeša je koncentrovana dajući sirovi produkt, koji je zatim prečišćen kolonskom hromatografijom na silikagelu (PE/EA=3/1) dajući produkt (2 g, prinos 80.6%) u vidu crvene čvrste supstance. MS (m/z): 249 [M+H]<+>

(E) 6-hloro-3-fenilpiridazin-4-karboksilna kiselina

[0135] NaOH (0.64 g, 16.12 mmol) je dodat u rastvor metil 6-hloro-3-fenilpiridazin-4-karboksilata (2 g, 8.06 mmol) u MeOH (10 mL) i H2O (1 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Reakcioni rastvor je podešen rastvorom hlorovodonične kiseline do pH∼3. Smeša je koncentrovana dajući crvenu čvrstu supstancu sirovog produkta koji je korišćen za reakciju u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (m/z): 235 [M+H]<+>

(F) 6-hloro-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid

[0136] Smeša 6-hloro-3-fenilpiridazin-4-karboksilne kiseline (1.89 g, 8.06 mmol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (1.56 g, 16.12 mmol), HBTU (6.11 g, 16.12 mmol) i Et3N (2.44 g, 24.18 mmol) u DCM (15 mL) mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (PE/EA=3/1) dajući produkt (1.75 g, prinos 78.4%) u vidu žute čvrste supstance. MS (m/z): 278 [M+H]<+>

(G) N-metoksi6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid [0137] Smeša (4-metoksifenil)metanamina (1.74 g, 12.68 mmol) i 6-hloro-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (1.75 g, 6.32 mmol) u NMP (30 mL) mešana je na 130 °C preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature rastvor je ekstrahovan sa EA. Organska faza je koncentrovana i prečišćena sa fleš hromatografijom na koloni (H2O/MeOH=100:0 do 0:100) dajući produkt (1.8 g, prinos 75%) u vidu žute čvrste supstance. MS (m/z): 379 [M+H]<+>

(H) 6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-karbaldehid

[0138] U rastvor N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (1.8 g,4.76 mmol) u suvom THF (30 mL) na -20 °C pod atmosferom N2dodat je DIBAL-H (14.3 g,14.28 mmol) u kapima. Zatim je smeša zagrevana do sobne temperature i mešana još 4 sata. Posle toga smeša je ugašena sa vodenim NH4Cl i ekstrahovana sa EA. Organska faza je koncentrovana i prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (PE:EA=100:0 do 1:1) dajući produkt (0.7 g, prinos 46%) u vidu žutog ulja. MS (m/z): 320 [M+H]<+>

(I) (E)-N-((6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0139] Ti(OEt)4(3 mL) je dodat u rastvor 6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-karbaldehida (700 mg, 2.2 mmol) i 2-metilpropan-2-sulfinamida (399 mg, 3.3 mmol) u suvom THF (30 mL) pod atmosferom N2. Smeša je mešana na 100 °C preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je tretirana sa 2 mL H2O i filtrirana, filtrat je ekstrahovan sa EA, organski sloj je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O:MeOH=100:0 do 0:100) dajući produkt (450 mg, prinos 48%) u vidu žute čvrste supstance. MS (m/z): 423 [M+H]<+>

(J) N-(1-(6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0140] MeMgBr (1.07 mL, 3.21 mmol) dodat je u kapima u rastvor (E)-N-((6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida (450 mg, 1.07 mmol) u suvom THF (30 mL) pod atmosferom N2na 0 °C. Zatim je smeša mešana na 0 °C tokom dodatna 2 sata. Posle toga dodat je vod. NH4Cl da se ugasi reakcija, reakciona smeša je ekstrahovana sa EA. Organska faza je isprana sa zasićenim fiziološkim rastvorom, osušena preko anhidrovanog Na2SO4, i koncentrovana. Ostatak je korišćen za reakciju sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja. MS (m/z): 439 [M+H]<+>

(K) benzil (1-(6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)karbamat

[0141] Koncentrovani rastvor hlorovodonične kiseline (1 mL) dodat je u rastvor N-(1-(6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (469 mg, 1.07 mmol) u MeOH (15 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim koncentrovana da se ukloni dodatni rastvarač, osušena je dajući 5-(1-aminoetil)-N-(4-metoksibenzil)-6-fenilpiridazin-3-amin kao sirovi produkt, koji zatim je pomešan sa benzil (2,5-dioksopirolidin-1-il) karbonatom (533 mg, 2.14 mmol) i Et3N (3 mL) u DCM (20 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle toga reakciona smeša je tretirana sa H2O, ekstrahovana sa DCM. Organska faza je osušena na anhidrovanom Na2SO4, koncentrovana dajući sirovi produkt koji je korišćen za reakciju u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (m/z): 469 [M+H]<+>

(L) 5-(1-aminoetil)-6-fenilpiridazin-3-amin

[0142] Rastvor benzil (1-(6-((4-metoksibenzil)amino)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)karbamata (501 mg, 1.07 mmol) u CF3COOH (3 mL) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. Posle toga rastvor je podešen sa vod. Na2CO3do pH∼7, koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O:MeOH=100:0 do 0:100) dajući produkt (214 mg, prinos 93%). MS (m/z): 215 [M+H]<+>

(M) tert-butil (1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)etil)karbamat

[0143] U rastvor 5-(1-aminoetil)-6-fenilpiridazin-3-amina (214 mg, 1 mmol) i Et3N (0.5 mL) u EtOH (10 mL) dodat je di-tert-butil dikarbonat (218 mg, 1 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, posle kojih je smeša koncentrovana dajući sirovi produkt koji je korišćen za reakciju u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (m/z): 315 [M+H]<+>

(N) tert-butil (1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0144] U rastvor tert-butil (1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)etil)karbamata (314 mg, 1 mmol) u EtOH (10 mL) dodat je i NaHCO3(252 mg, 3 mmol) 2-hloroacetaldehid (3 mL, 40%). Smeša je mešana na 80 °C tokom 2 sata. Posle hlađenja do sobne temperature u rastvor je dodat vod. NaHCO3do pH∼8. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O : MeOH = 100:0 do 0:100) dajući produkt (90 mg, prinos 27%) u vidu žute čvrste supstance. MS (m/z): 339 [M+H]<+>

(O) 1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamin

[0145]

[0146] U rastvor tert-butil (1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat (45 mg, 0.13 mmol) u MeOH (3 mL) dodat je konc. rastvor HCl (0.2 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sat, zatim je koncentrovana dajući sirovi produkt koji je korišćen za reakciju u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS (m/z): 239 [M+H]<+>

(P) 4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril [0147] Smeša 1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamina (31 mg, 0.13 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (20 mg, 0.13 mmol), DIPEA (50 mg, 0.39 mmol) u n-BuOH (5 mL) mešana je na 130 °C preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O:MeOH=100:0 do 0:100) dajući produkt (45 mg, prinos 100%) kao belu čvrstu supstancu. MS (m/z): 357 [M+H]<+ 1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.055 (s, 1H), 8.012 (s, 1H), 7.881 (s, 1H), 7.711 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.642-7.618 (m, 2H), 7.494-7.441 (m, 3H), 5.440-5.389 (m, 1H), 1.401 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

Jedinjenje 2

4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0148]

[0149] Smeša 4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (35 mg, 0.1 mmol) i NCS (26 mg, 0.2 mmol) u CHCl3(10 mL) mešana je na 80 °C tokom 6 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (DCM/MeOH) dajući 15 mg ciljanog produkta. MS (m/z) = 391 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.032 (s, 1H), 7.882 (s, 1H), 7.715 (s, 1H), 7.667-7.643 (m, 2H), 7.491-7.474 (m, 3H), 5.445-5.391 (m, 1H), 1.408 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

Jedinjenje 3 i 4

(R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0150]

[0151] Racemično jedinjenje 2 je razdvojeno sa hiralnom HPLC da se bi se dobili optički čisti enantiomeri jedinjenja 3 i 4 (HPLC uslovi: kolona: daicel IA 4.6 x 250 mm; mobilna faza: EtOH/DEA = 100/0.10; brzina protoka = 1.0 mL/min; detektor: UV 254 nm). Prvi eluent (jedinjenje 4, S izomer, Rt=6.833 min) imalo je 100% ee, MS (m/z): 391 [M+H]<+>. Drugi eluent (jedinjenje 3, R izomer, Rt=12.51 min) imalo je 98.07% ee, MS (m/z): 391 [M+H]<+>.

Jedinjenje 3:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.03 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.68 -7.61 (m, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 3H), 5.44 - 5.39 (m, 1H), 1.40 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Jedinjenje 4:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 8.04 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 2H), 7.53 - 7.44 (m, 3H), 5.48 - 5.37 (m, 1H), 1.40 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

4

Jedinjenje 4

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0152]

(A) 3,6-dihloro-N-metoksi-N-metilpiridazin4-karboksamid

[0153] U rastvor 3,6-dihloropiridazin-4-karboksilne kiseline (80.0 g, 0.41 mol), N,O-dimetilhidroksilamin hidrohlorida (58.0 g, 0.59 mol) i HBTU (302.0 g, 0.80 mol) u DCM (1.0 L) dodat je Et3N (160.0 g, 1.58 mol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom dodatnog 1 sata, i zatim je mešana na sobnoj temperaturi tokom 7 sati. Smeša je isprana sa vodom (200 mL x 3). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, a ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (PE:EA = 5:1 do 1:2) dajući 60 g 3,6-dihloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida. MS (m/z) = 236 [M+H]<+>.

(B) 3-hloro-N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metilpiridazin-4-karboksamid [0154] Smeša N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida (20.0 g, 0.08 mol) i (4-metoksifenil)metanamina (34.5 g, 0.25mol) u DMA (200 mL) mešana je na 50 °C tokom 16 sati. Smeša je sipana u vodu (200 mL), ekstrahovana sa EA (200 mL). Organska faza je isprana sa zasićenim rastvorom NaCl (200 mL x 3). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (PE : EA = 5 : 1 do 1 : 5) dajući 30 g sirovog produkta. MS (m/z) = 337 [M+H]<+>, 339 [M+2+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.30 - 7.16 (m, 2H), 6.89 - 6.76 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 5.46 (s, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.30 (s, 3H).

(C) N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid [0155] U rastvor 3-hloro-N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metilpiridazin-4-karboksamida (30.0 g, 0.09 mol) i fenilboronske kiseline (16.0 g, 0.13 mol) u dioksanu (300 mL) i vodi (30 mL) dodat je Pd(PPh3)4(5.1 g, 4.45 mmol) i KOAc (26.0 g, 0.26 mol) pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na 110 °C preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je sipana u vodu (300 mL), ekstrahovana sa EA (500 mL x 3). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 40 g ciljanog produkta. MS (m/z) = 379 [M+H]<+>.

(D) 6-amino-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid

[0156] Smeša N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (40.0 g, 0.10 mol) u CF3COOH (150 mL) mešana je na 80 °C tokom 3 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je rastvoren u DCM (200 mL), isprana sa zasićenim rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj je ekstrahovan sa (DCM 30% MeOH). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, te koncentrovan u vakuumu dajući 30 g sirovog produkta. MS (m/z) = 259 [M+H]<+>.

(E) 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid [0157] U rastvor 6-amino-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (30.0 g, 0.11 mol) i heksan-2,5-diona (66.0 g, 0.58 mol) u toluenu (300 mL) dodat je TsOH (2.0 g, 0.01 mol). Smeša je mešana na 120 °C preko noći sa Dean-Starkovom zamkom, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (PE : EA=5 : 1 do 2 :1) dajući 14 g produkta. MS (m/z) = 337 [M+H]<+>.

(F) 1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etanon

[0158] U rastvor 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (14.0 g, 0.04 mol) u suvom THF (150 mL) dodat je MeMgBr (27.7 mL, 0.082 mol) na -5 °C ∼ 0°C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 0 ∼ 10°C tokom dodatna 2 sata. Smeša je sipana u zasićeni rastvor NH4Cl, vodeni sloj je ekstrahovan sa EA (100 mL x 3). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu dajući 15 g sirovog produkta. MS (m/z) = 292 [M+H]<+>.

(G) (R,E)-N-(1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0159] U rastvor 1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etanona (15.0 g, 0.05 mol) i (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (9.3 g, 0.08 mol) u suvom THF (150 mL) dodat je Ti(OEt)4(23.0 g, 0.10 mol) pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 80 °C preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je sipana u vodu (100 mL), talog je filtriran i filtrat je ekstrahovan sa EA. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (PE : EA =5 : 1 do 1 : 1) dajući 12 g produkta. MS (m/z) = 395 [M+H]<+>.

(H) (R)-N-((S)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0160] U rastvor (R,E)-N-(1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamida (12.0 g, 0.03 mol) u suvom THF (150 mL) dodat je LiB(C4H7)3(6.08 mL, 0.06 mol) na -78 °C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na -78 °C tokom dodatna 2 sata. Smeša je sipana u zasićeni rastvor NH4Cl, vodeni sloj je ekstrahovan sa EA (100 mL x 3), organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen silikagel kolonskom hromatografijom (PE : EA =5 : 1 do 1 : 1) dajući 10 g naslovnog produkta. MS (m/z) = 397 [M+H]<+>.

(I) (R)-N-((S)-1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid [0161] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (8.0 g, 0.02 mol) u EtOH (40 mL) i vodi (40 mL) dodato je NH2OH·HCl (13.8 g, 0.20 mol), i NaHCO3(13.5 g, 0.16 mol). Smeša je mešana na 90 °C preko noći, i zatim ohlađena do sobne temperature. Smeša je tretirana sa vodenim NH3·H2O do pH = 8∼9. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 4.2 g naslovljenog produkta. MS (m/z) = 319 [M+H]<+>.

4

(J) (R)-2-metil-N-((S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)propan-2-sulfinamid [0162] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (4.2 g, 0.013 mol) u EtOH (50 mL) dodat je 2-hloroacetaldehid (5.15 g, 0.065 mol) i NaHCO3(2.1 g, 0.026 mol). Smeša je mešana na refluksu preko noći. Smeša je sipana u vodu (50 mL), vodeni slojevi su ekstrahovani sa DCM (50 mL x 3). Kombinovani organski sloj je koncentrovan u vakuumu dajući 6.5 g sirovog produkta. MS (m/z) = 343 [M+H]<+>.

(K) (S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamin

[0163]

[0164] U rastvor (R)-2-metil-N-((S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)propan-2-sulfinamida (6.5 g, 0.019 mol) u EA (20 mL) dodat je rastvor HCl u EA (20 mL, 2.44 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sat, zatim je smeša koncentrovana u vakuumu i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 4.2 g sirovog produkta. MS (m/z) = 239 [M+H]<+>.

(L) (S)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0165] U rastvor (S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamina (3.8 g, 0.016 mol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (3.7 g, 0.024 mol) u n-BuOH (40 mL) dodat je DIPEA (6.1 g, 0.048 mol). Smeša je mešana na refluksu preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 2.6 g naslovljenog produkta. MS (m/z) = 357 [M+H]<+>.

(M) (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0166] Smeša (S)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (4 g, 0.011 mol) i NCS (2.3 g, 0.017 mol) u CHCl3(40 mL) mešana na refluksu tokom 2 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (DCM/MeOH) dajući 1.8 g ciljanog produkta. MS (m/z) = 391 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.06 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.74 - 7.63 (m, 3H), 7.56 - 7.47 (m, 3H), 5.46 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 5.43 - 5.37 (m, 1H), 5.36 (s, 2H), 1.38 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

[0167] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupcima za Jedinjenje 4 korišćenjem odgovarajućih intermedijara i reagenasa pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

4

4

Jedinjenje 5 i 6

(R)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0168]

4

(A) 6-amino-3-hloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamid

[0169] U rastvor 3-hloro-N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metilpiridazin-4-karboksamid (Jedinjenje 4 (B), 7.4 g, 21.97 mmol) u TFA (20 mL) mešana na refluksu tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je sipan u zasićeni rastvor NaHCO3. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, ekstrahovana sa EA, i organski sloj je koncentrovan u vakuumu, a ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 3.84 g 6-amino-3-hloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida. MS (m/z) = 217 [M+H]<+>, 219 [M+2+H]<+>.

(B) 3-hloro-6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamid

4

[0170] U rastvor 6-amino-3-hloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida (3.84 g, 17.73 mmol) i heksan-2,5-diona (8.45 g, 65.91 mmol) u toluenu (100 mL) dodat je TsOH (2.0 g, 0.01 mol). Smeša je mešana na 120 °C preko noći sa Dean-Starkovom zamkom, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 4.2 g naslovnog produkta. MS (m/z) = 295 [M+H]<+>, 297 [M+2+H]<+>.

(C) 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamid [0171] U rastvor 3-hloro-6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida (4.2 g, 14.25 mmol) i fenilboronske kiseline (2.61 g, 21.37 mmol) u dioksanu (80 mL) i vodi (8 mL) dodat je Pd(PPh3)4i KOAc pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na 110 °C preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je sipana u vodu (300 mL), ekstrahovana sa EA (100 mL x 3). Kombinovani organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 4.3 g produkta. MS (m/z) = 337 [M+H]<+>

(D) 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-karbaldehid

[0172] U rastvor 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-N-metoksi-N-metil-3-fenilpiridazin-4-karboksamida (4.3 g, 12.78 mmol) u suvom THF (30 mL) dodat je DIBAL-H (19 mL, 19.17 mmol) pod atmosferom azota na -20 °C. Reakciona smeša je mešana na -20 °C tokom dodatnog 1 sata, te je zatim sipana u vodu (300 mL), i ekstrahovana sa EA. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 0.95 g naslovnog produkta. MS (m/z) = 310 [M+MeOH+H]<+>

(E) (R,E)-N-((6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0173] U rastvor 6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-karbaldehida (0.95 g, 3.43 mmol) i (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (0.62 g, 5.14 mmol) u suvom THF (20 mL) dodat je Ti(OEt)4(1.56 g, 6.85 mmol) pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na refluksu preko noći, zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je sipana u vodu (5 ml), talog je filtriran i filtrat je ekstrahovan sa EA. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je

4

prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 1.2 g naslovnog produkta. MS (m/z) = 381 [M+H]<+>

(F) (R)-N-((S)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid i (R)-N-((R)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0174] U rastvor (R,E)-N-((6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.2 g, 3.15 mmol) u suvom THF (20 mL) dodat je EtMgBr (1.58 mL, 4.73 mmol) na -78 °C pod atmosferom azota. Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 1 sat. Smeša je sipana u vodu (5 mL), ekstrahovana sa EA. Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silikagel koloni (PE: EA = 1:0 do 0:1) dajući dva produkta (prvi eluent je 0.47 g intermedijara I-7, drugi eluent je 0.18 g intermedijara I-8), jedan je (R)-N-((S)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid, a drugi je (R)-N-((R)-1-(6-(2,5-dimetil-1H-pirol-1-il)-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid. MS (m/z) = 411 [M+H]<+>

(G) (R)-N-((R)-1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid i (R)-N-((S)-1-(6-amino-3-fenilpiridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid [0175] U rastvor intermedijara I-8 dobijenog u reakciji poslednjem koraku (0.18 g, 0.04 mmol) u EtOH (2.5 mL) i vodi (2.5 mL) dodata je NH2OH·HCl (0.46 g, 6.58 mmol) i Et3N (0.44 g, 4.38 mmol). Smeša je mešana na 90 °C preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeši je dodat vod. NH3·H2O do pH je 8-9, i zatim je smeša koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 0.08 g intermedijara I-10. MS (m/z) = 333 [M+H]<+>. Intermedijar I-9 je pripremljen koristeći intermedijar I-7 pod istim uslovima.

(H) (R)-2-metil-N-((R)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)propan-2-sulfinamid i (R)-2-metil-N-((S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)propan-2-sulfinamid [0176] U rastvor intermedijara I-10 (80 mg, 0.24 mmol) u EtOH (5 mL) dodat je 2-hloroacetaldehid (0.32 mL, 1.92 mmol) i NaHCO3(40 mg, 0.48 mmol). Smeša je mešana na refluksu preko noći. Smeša je sipana u vodu (10 mL), vodeni slojevi su ekstrahovani sa EA (20 mL x 3). Kombinovani organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 67 mg intermedijara I12. MS (m/z) = 357 [M+H]<+>. Intermedijar I-11 je pripremljen koristeći intermedijar I-9 pod istim uslovima.

(I) (R)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propan-1-amin i (S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propan-1-amin

[0177]

[0178] U rastvor intermedijara I-12 (67 mg, 0.19 mmol) u EA (3 mL) dodat je rastvor HCl u EA (5 N, 1 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim je smeša koncentrovana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u MeOH, i zatim je učinjen baznim sa vodenim NH3·H2O. Ekstra rastvarač je uparen i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 30 mg intermedijara I-14. MS (m/z) = 253 [M+H]<+>. Intermedijar I-13 je pripremljen koristeći intermedijar I-11 pod istim uslovima.

(J) (R)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0179] U rastvor intermedijara I-14 (30 mg, 0.12 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (27 mg, 0.19 mmol) u n-BuOH (3 mL) dodat je DIPEA (31 mg, 0.24 mmol). Smeša je mešana na refluksu preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 30 mg intermedijara I-16. MS (m/z) = 371 [M+H]<+>. Intermedijar I-15 je pripremljen koristeći intermedijar I-13 pod istim uslovima.

(K) (R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0180] Rastvor intermedijara I-16 (30 mg, 0.08 mmol) i NCS (16 mg, 0.12 mmol) u CHCl3(4 mL) mešan je na refluksu tokom 2 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O

1

+ 0.5% NH3·H2O) dajući 24 mg jednog ciljanog jedinjenja 6. MS (m/z) = 405 [M+H]<+>. Drugo naslovljeno jedinjenje 5 je pripremljeno koristeći intermedijar I-15 pod istim uslovima.

Jedinjenje 5:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.03 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.73 - 7.69 (m, 3H), 7.53 - 7.50 (m, 3H), 5.29 - 5.25 (m, 1H), 1.83 - 1.71 (m, 2H), 0.80 (t, J = 6.6 Hz, 3H).

Jedinjenje 6:<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.04 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.72 (dd, J = 7.2 Hz, 2.4 Hz, 3H), 7.56 - 7.51 (m, 3H), 5.27 (dd, J = 9.4 Hz, 5.0 Hz, 1H), 1.76 (qdd, J = 12.4 Hz, 8.3 Hz, 6.1 Hz, 2H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

[0181] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupcima za Jedinjenja 5 i 6 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Tačnije, Jedinjenje 14 i 26 je dobijeno u skladu sa procedurama za Jedinjenje 5; Jedinjenja 18, 19, 24 i 25 su dobijena u skladu sa procedurama za Jedinjenje 6.

2

[0182] Retenciono vreme (Rt) gore navedenih jedinjenja testirano je pomoću hiralne HPLC. Uslovi R-HPLC su bili sledeći:

Kolona: daicel IA4.6 x 250 mm;

Mobilna faza: EtOH/DEA = 100/0.10;

Brzina protoka = 1.0 mL/min;

Detektor: UV 254 nm.

[0183] Rt jedinjenja 5 je 10.774 min, Rt jedinjenja 6 je 5.032 min, Rt jedinjenja 14 je 5.245 min, Rt jedinjenja 18 je 7.030 min, Rt jedinjenja 19 je 6.925 min, Rt jedinjenja 24 je 4.991min, Rt jedinjenja 25 je 20.884 min, Rt jedinjenja 26 je 14.505 min.

Jedinjenje 7 i 8

(R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0184]

(A) 3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-karbaldehid

4

[0185] U rastvor 3-hloro-N-metoksi-6-((4-metoksibenzil)amino)-N-metilpiridazin-4-karboksamida (10 g, 29.75 mmol) u suvom THF (120 mL) dodat je kap po kap diizobutilaluminijum hidrid (89 mL, 89.26 mmol) na 0 °C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Zatim je smeša ugašena sa zasićenim rastvorom NH4Cl, filtrirana, filtrat je ekstrahovan sa EA (50 mL x 3). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (PE: EA = 4 : 6) dajući 2.4 g ciljanog produkta. MS (m/z) = 310 [M+H]<+>, 312 [M+2+H]<+>.

(B) (R,E)-N-((3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0186] U rastvor 3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-karbaldehida (2.4 g, 8.66 mmol) i (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.6 g, 13 mmol) u suvom THF (30 mL) dodat je Ti(OEt)4(4 g, 17.32 mmol) pod atmosferom azota. Smeša je mešana na refluksu preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, sipana u vodu (20 mL), filtrirana i filtrat je ekstrahovan sa EA (30 mL x 3). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (PE: EA = 4 : 6) dajući 1.4 g naslovnog produkta. MS (m/z) = 381 [M+H]<+>, 383 [M+2+H]<+>.

(C) (R)-N-(1-(3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0187] U rastvor (R,E)-N-((3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.4 g, 3.68 mmol) u suvom THF (20 mL) dodat je MeMgBr (3.1 mL, 9.21 mmol) na -5 °C ∼ 0 °C pod atmosferom azota. Smeša je mešana na 0 ∼ 10 °C tokom 2 sata. Smeša je sipana u zasićeni rastvor NH4Cl, ekstrahovana sa EA (20 mL x 3). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu dajući 1 g sirovog produkta iz naslova. MS (m/z) = 397 [M+H]<+>, 399 [M+2+H]<+>.

(D) 5-(1-aminoetil)-6-hloropiridazin-3-amin

[0188] Rastvor (R)-N-(1-(3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (1 g, 2.52 mmol) u TFA (5 mL) mešan je kod refluksa tokom 3 sata. Zatim je smeša koncentrovana u vakuumu, i ostatak je podeljen između zasićenog rastvora NaHCO3i EA. Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EA (10 mL x 4). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan dajući 308 mg sirovog produkta iz naslova. MS (m/z) = 173 [M+H]<+>.

(E) tert-butil (1-(6-amino-3-hloropiridazin-4-il)etil)karbamat

[0189] Rastvor 5-(1-aminoetil)-6-hloropiridazin-3-amina (308 mg, 1.79 mmol), (Boc)2O (586 mg, 2.68 mmol) i Et3N(543 mg, 5.37 mmol) u DCM (5 mL) mešan je preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana na 20 °C i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH: H2O = 4 : 6) dajući 150 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 273 [M+H]<+>, 275 [M+2+H]<+>.

(F) tert-butil (1-(6-hloroimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0190] U rastvor tert-butil (1-(6-amino-3-hloropiridazin-4-il)etil)karbamat (150 mg, 0.55 mmol) u EtOH (5 mL) dodat je 2-hloroacetaldehid (0.245 mL, 1.38 mmol) i NaHCO3(185 mg, 2.2 mmol). Zatim je smeša zagrevana na refluksu i mešana preko noći. Zatim je smeša ohlađena, koncentrovana i prečišćena sa fleš hromatografijom na koloni (DCM : MeOH = 4 : 96) dajući 76 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 297 [M+H]<+>, 299 [M+2+H]<+>.

(G) tert-butil (1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0191] U rastvor tert-butil (1-(6-hloroimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamata (56 mg, 0.19 mmol) i 2-(dibutil(pentil)stanil)piridin (140 mg, 0.38 mmol) u dioksanu (2 mL) dodat je Pd2(dba)3(17 mg, 0.019 mmol), X-phos (18 mg, 0.038 mmol) i Na2CO3(61 mg, 0.57 mmol) pod atmosferom azota. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa i mešana tokom 4 sata. Zatim je smeša ohlađena, koncentrovana i prečišćena sa fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 55 : 45) dajući 20 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 340 [M+H]<+>.

(H) 1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamin

[0192]

[0193] U rastvor tert-butil (1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamata (20 mg, 0.059 mmol) u EA/MeOH (20 mL) dodat je rastvor 4N HCl u EA (0.059 mL, 0.236 mmol) na 0 °C. Smeša je zagrevana na 40 °C i mešana dodatnih 0.5 sata. Zatim je smeša koncentrovana u vakuumu i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/H2O 0.5% NH3H2O) dajući 9 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 240 [M+H]<+>.

(I) 4-amino-6-((1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0194] U rastvor 1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamina (9 mg, 0.037 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (9 mg, 0.056 mmol) u n-BuOH (3 mL) dodat je DIPEA (24 mg, 0.185 mmol). Smeša je mešana na refluksu preko noći. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 65 :35 0.5% NH3H2O) dajući 9 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 358 [M+H]<+>.

(J) (R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril i (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0195] Rastvor 4-amino-6-((1-(6-(piridin-2-il)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (9 mg, 0.025 mmol) i NCS (7 mg, 0.05 mmol) u CHCl3(2 mL) mešan je na refluksu tokom 1 sata. Smeša je ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen sa hiralnom preparativnom-HPLC (kolona: Daicel IA: 20<∗>250 mm; mobilna faza: 100% EtOH 0.1% DEA; brzina protoka: 8 mL/min; otkrivena talasna dužina: UV 254 nm;) dajući 1.8 mg jedinjenja 7 (Rt= 25.2 min) i 2 mg jedinjenja 8 (Rt = 29.1 min).

Jedinjenje 7: MS (m/z) = 392 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.70 (d, J = 4.9 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.01 (td, J = 7.8 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.53-7.52 (m, 1H), 5.76 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 1.51 (d, J = 7.0 Hz, 3H). Jedinjenje 8: MS (m/z) = 392 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.70 (ddd, J = 4.9 Hz, 1.7 Hz, 0.9 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 8.01 (td, J = 7.7 Hz, 1.8 Hz, 1H), 7.91 (dt, J = 7.8 Hz, 1.1 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.54-7.50 (m, 1H), 5.76 (q, J = 7.0 Hz,1H), 1.51 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

[0196] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupcima za Jedinjenje 7 i 8 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

[0197] Rt jedinjenja 28 je 9.443 min. Rt jedinjenja 29 je 11.080 min. Ova dva jedinjenja su razdvojena prema uslovima u postupku (J) za Jedinjenja 7 i 8.

Jedinjenje 20

(S)-9-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-9H-purin-6-amin

[0198]

(A) (S)-6-hloro-N<4>-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4,5-diamin

[0199] Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema procedurama za jedinjenje 4(L).

MS (m/z) = 366 [M+H]<+>

(B) (S)-6-hloro-9-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-9H-purin

[0200] Rastvor (S)-6-hloro-N<4>-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4,5-diamina (59 mg, 0.16 mmol) i trietoksimetana (0.5 mL) u EtOH (5 mL) mešan je na refluksu tokom 30 sati. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH/ H2O 0.5% NH3.H2O) dajući 42 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 376 [M+H]<+>

(C) (S)-9-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-9H-purin-6-amin

[0201] Rastvor (S)-6-hloro-9-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-9H-purina (42 mg, 0.11 mmol) u NH3.H2O (2 mL) reagovan je u mikrotalasnoj reakcionoj peći na 110 °C tokom 30 minuta. Zatim je smeša ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 26 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 357 [M+H]<+>

(D) (S)-9-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-9H-purin-6-amin [0202] Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema procedurama za jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 391 [M+H]<+>

<1>H NMR (400 MHz, dmso) δ 8.24 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.93 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 5H), 7.12 (s, 2H), 5.79 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 1.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

Jedinjenje 21

(S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(2H-tetrazol-5-il)pirimidin-4,6-diamin

[0203]

(A) (S)-N<4>-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(2H-tetrazol-5-il)pirimidin-4,6-diamin

[0204] Smeša jedinjenja 4 (L) (150 mg, 0.42 mmol), natrijum azida (165 mg, 2.55 mmol) i amonijum hlorida (135 mg, 2.55 mmol) u suvom DMF (4 mL) je zapečaćena u epruveti i reagovana je u mikrotalasnoj reakcionoj peći na 140 °C tokom 40 minuta. Zatim je smeša ohlađena do sobne temperature, koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni dajući 36 mg naslovnog produkta. MS (m/z) = 400 [M+H]<+>

(B) (S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(2H-tetrazol-5-il)pirimidin-4,6-diamin

[0205] Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema procedurama za jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 434 [M+H]<+>

<1>H NMR (400 MHz, dmso) δ 8.13 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.90 (s, 1H), 7.67 - 7.62 (m, 2H), 7.55 - 7.49 (m, 3H), 5.39 - 5.23 (m, 1H), 1.50 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

Jedinjenje 27

(S)-7-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin [0206]

(A) (S)-2-(4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-il)etanol

[0207] U rastvor (S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etanamina (jedinjenje 4(K), 100 mg, 0.42 mmol) i 2-(4,6-dihloropirimidin-5-il)etanol (122 mg, 0.63 mmol) u n-BuOH (5 mL) dodat je DIPEA (109 mg, 0.84 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120 °C preko noći, i zatim je mešana na sobnoj temperaturi. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH:H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 142 mg produkta. MS (m/z) = 395 [M+H]<+>.

(B) (S)-4-hloro-7-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin [0208] U rastvor (S)-2-(4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-il)etanola (100 mg, 0.25 mmol) u DCM (10 mL) dodat je Dess-Martin-ov perjodinan (322 mg, 0.76 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 sata, i zatim je sipana u zasićeni rastvor Na2S2O3(10 mL), ekstrahovana sa DCM (30 mL). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH:H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 55 mg produkta. MS (m/z) = 375 [M+H]<+>.

(C) (S)-7-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin [0209] Smeša (S)-4-hloro-7-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (55 mg, 0.15 mmol) u rastvoru amonijaka (3 mL) je zatvorena u reakcionu epruvetu, ozračena u mikrotalasnom reaktoru na 120 °C tokom 30 minuta, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH:H2O 0.5% NH3·H2O) dajući 35 mg produkta. MS (m/z) = 356 [M+H]<+>.

(D) (S)-7-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-amin [0210] Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema procedurama za jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 390 [M+H]<+>

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.10 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.79 - 7.78(m, 1H), 7.27 (s, 5H), 6.98 (s, 1H), 6.11 - 6.06 (m, 1H), 1.76 (d, J = 6.9 Hz, 4H).

Jedinjenje 30

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0211]

1

(A) 3,6-dihloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamid

[0212] U smešu 3,6-dihloropiridazin-4-karboksilne kiseline (100.0 g, 0.52 mol), N,O-Dimetilhidroksilamin hidrohlorida (60.6 g, 0.62 mol) i EDCI (118.8 g, 0.62 mol) u DCM (800 mL) u kapima je dodat Et3N (288 mL, 2.08 mol) na 0 °C. Zatim je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je isprana sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(1 L) i zasićenim fiziološkim rastvorom (1 L). Organski sloj je odvojen, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan dajući 99.7g sirovog produkta. Prinos: 81%. MS (m/z) = 236 [M+H]<+>, 238 [M+2H]<+>

2

(B) 6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamid [0213] Rastvor 3,6-dihloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida (100 g, 0.42 mol), HOBT (68 g, 0.51 mol) i Et3N (149 g, 1.48 mol) u DMA (800 mL) zagrevan je na 50°C. Posle 2 sata, TLC i LC-MS su pokazali da se početni materijal troši. Zatim je dodat N,N-Bis(4-metoksibenzil)amin (163 g, 0.64 mol) i smeša je mešana na 50°C preko noći. Zatim je smeša tretirana zasićenim fiziološkim rastvorom (1 L) i ekstrahovana sa EA (1 L x 3). Kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na silikagel koloni (PE: EA = 3: 1 do 1: 1) dajući 75 g produkta. Prinos: 40%. MS (m/z) = 457 [M+H]<+>.

(C) 1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etan-1-one

[0214] U mešani rastvor 6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloro-N-metoksi-N-metilpiridazin-4-karboksamida (9 g, 19.73 mmol) u suvom THF (100 mL) polako je dodat MeMgBr (9.9 mL, 29.6 mmol) na 5 °C ∼ 10 °C pod zaštitom azota. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Zatim je smeša sipana u zasićeni NH4Cl (30 mL) vodeni rastvor, vodeni slojevi su ekstrahovani sa EA (100 mL x 2), organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrisan u vakuumu dajući 7.7 g sirovog produkta koji je pripremljen za sledeći korak bez prečišćavanja. MS (m/z) = 412 [M+H]<+>.

(D) (R,E)-N-(1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0215] U rastvor 1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etan-1-ona (7.7 g, 18.73 mmol) i (R)-(+)-2-Metil-2-Propansulfinamida (2.5 g, 20.6 mmol) u suvom THF (80 mL) u kapima pod azotom dodat je Ti(OEt)4(6.4 g, 28.1 mmol). Smeša je zagrevana na refluksu preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je sipana u vodu (100 mL), talog je filtriran i filtrat je ekstrahovan sa EA (100 mL x 2), kombinovani organski sloj je osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (PE: EA = 2 : 1) dajući 7.9 g ciljanog jedinjenja u vidu bledo žutog ulja. Prinos: 81%. MS (m/z) = 515 [M+H]<+>.

(E) (R)-N-((S)-1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0216] U rastvor LiB(C4H7)3(39 mL, 38.42 mmol) u suvom THF (80 mL) dodat je (R,E)-N-(1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etiliden)-2-metilpropan-2-sulfinamid (7.9 g, 15.37 mmol) na -78°C pod azotom. Smeša je mešana na -78°C tokom 2 sata. Smeša je sipana u zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (200 mL), vodeni sloj je ekstrahovan sa EA(100 mL x 2), organski sloj je osušen i koncentrovan u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (PE : EA =65% : 35%) dajući 3.8 g jedinjenja u vidu bledo žutog ulja. Prinos: 48%. MS (m/z) = 518 [M+H]<+>.

(F) (R)-N-((S)-1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(3,5-difluorofenil)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0217] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (900 mg, 1.74 mmol) i 3,5-difluorofenilboronske kiseline (551 mg, 3.49 mmol) u dioksanu (6 mL) i vodi (2 mL) dodat je Pd(PPh3)4(201 mg, 0.174 mmol) i KOAC (511 mg, 5.22 mmol) pod azotom. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa i mešana preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je tretirana sa vodom, ekstrahovana sa EA (10 mL x 2). Organski sloj je osušen i koncentrovan u vakuumu, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (PE:EA=7:3) dajući 635 mg ciljanog jedinjenja. Prinos: 61%. MS (m/z) = 595 [M+H]<+>.

(G) (R)-N-((S)-1-(6-amino-3-(3,5-difluorofenil)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0218] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(3,5-difluorofenil)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (635 mg, 1.07 mmol) u AcOH (3.2 mL) dodata je kap po kap koncentrovana sumporna kiselina (1.6 mL) na 10 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Zatim je smeša lagano tretirana vodenim rastvorom NaOH (2 M, 45 mL) na 0 °C sve do pH= 8-9, i zatim ekstrahovana sa DCM (30 mL x 3), organski sloj je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen sa fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =6 :4 (+0.5% amonijaka)) dajući 165 mg ciljanog jedinjenja. Prinos: 44%. MS (m/z) = 355 [M+H]<+>.

(H) (R)-N-((S)-1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0219] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-amino-3-(3,5-difluorofenil)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (165 mg, 0.47 mmol) u EtOH (3 mL) dodat je 2-hloroacetaldehid

4

(55 mg, 0.70 mmol) i NaHCO3(79 mg, 0.94 mmol). Zatim je smeša zagrevana na refluksu i mešana preko noći. Zatim je smeša ohlađena, koncentrovana i prečišćena sa fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =7 : 3 (+0.5% amonijaka)) dajući 150 mg jedinjenja kao čvrstu supstancu. Prinos: 84%. MS (m/z) = 379 [M+H]<+>.

(I) (S)-1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etan-1-amin hidrohlorid [0220]

[0221] U rastvor (R)-N-((S)-1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamida (150 mg, 0.4 mmol) u EA (3 mL) dodata je HCl-EA (2 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, i zatim je smeša koncentrovana u vakuumu dajući 99 mg sirovog produkta kao bledo žutu čvrstu supstancu koja je korišćena za sledeći korak bez prečišćavanja. MS (m/z) = 275 [M+H]<+>.

(J) (S)-4-amino-6-((1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0222] U rastvor (S)-1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etan-1-amin hidrohlorida (99 mg, 0.36 mmol) i 4-amino-6-hloropirimidin-5-karbonitrila (84 mg, 0.54 mmol) u n-BuOH (3 mL) dodat je DIPEA (186 mg, 1.44 mmol). Smeša je mešana na refluksu preko noći. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =55 : 45 (+0.5% amonijaka)) dajući 95 mg ciljanog jedinjenja kao bledo žutu čvrstu supstancu. Prinos: 67%. MS (m/z) = 393 [M+H]<+>.

(K) (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0223] Rastvor (S)-4-amino-6-((1-(6-(3,5-difluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (95 mg, 0.24 mmol) i NCS (35 mg, 0.27 mmol) u CHCl3(3 mL) mešan je na 70 °C tokom 2 sata. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =7 : 3 (+0.5% amonijaka)) dajući 77 mg naslovnog jedinjenja kao čvrstu supstancu. Prinos: 75%. MS (m/z) = 427 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.10 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 7.96 - 7.86 (m, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 1H), 7.40 - 7.26 (m, 2H), 7.12-6.98 (m, 1H), 5.44 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.48 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

[0224] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 30 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

1

2

Jedinjenje 31

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(o-tolil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0225]

(A) (S)-5-(1-aminoetil)-6-(o-tolil)piridazin-3-amin

[0226] Rastvor (R)-N-((S)-1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(o-tolil)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30 (G)) (960 mg, 1.68 mmol) u CF3COOH (5 mL) se zagreva i meša pod refluksom tokom 1 sat. Nakon što je ohlađena do sobne temperature, smeša je koncentrovana u vakuumu, podešena na pH=9 sa amonijakom, koncentrovana i prečišćena sa fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =4 : 6 (+0.5% amonijak)) dajući 140 mg ciljanog jedinjenja kao bledo žutu čvrstu supstancu. Prinos: 37%. MS (m/z) = 229 [M+H]<+>.

(B) tert-butil (S)-(1-(6-amino-3-(o-tolil)piridazin-4-il)etil)karbamat

[0227] Rastvor (S)-5-(1-aminoetil)-6-(o-tolil)piridazin-3-amina (140 mg, 0.61 mmol) i (Boc)2O (200 mg, 0.92 mmol) u DCM (2 mL) mešan je preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša koncentrovana na 20 °C i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O =4 : 6 (+0.5% amonijak)) dajući 140 mg ciljanog jedinjenja kao bledo žutu čvrstu supstancu. Prinos: 70%. MS (m/z) = 329 [M+H]<+>.

(C) tert-butil (S)-(1-(6-(o-tolil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0228] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(H). MS (m/z) = 353 [M+H]<+>.

(D) (S)-1-(6-(o-tolil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etan-1-amin

[0229]

4

[0230] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30 (I). MS (m/z) = 253 [M+H]<+>.

(E) (S)-4-amino-6-((1-(6-(o-tolil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0231] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(J). MS (m/z) = 371 [M+H]<+>.

(F) (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(o-tolil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0232] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 405 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.08 (s, 1H), 7.90 - 7.66 (m, 2H), 7.53 - 7.16 (m, 4H), 5.33 -5.22 (m, 1H), 2.25 - 2.14 (m, 3H), 1.45 (d, J = 31.3 Hz, 3H).

[0233] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 31 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 33

(S)-4-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)-6-(metilamino)pirimidin-5-karbonitril

[0234]

(A) (S)-4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0235] (S)-1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etan-1-amin je pripremljen prema proceduri opisanoj za Jedinjenje 30 (I). Naslovno jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30 (J). MS (m/z) = 376 [M+H]<+>.

(B) (S)-4-(metilamino)-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0236] Smeša (S)-4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino) pirimidin-5-karbonitrila (55.0 mg, 0.146 mmol) i CH3NH2(35% u CH3OH) (2 mL) mašana je u mikrotalasnom reaktoru na 120 °C tokom 1.5 sata. Posle koncentrovanja, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom sa (H2O : MeOH=3 : 2 - 2 : 3) dajući 15.0 mg produkta kao belu čvrstu supstancu. Prinos 28%. MS (m/z) = 371 [M+H]<+>.

(C) (S)-4-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)-6-(metilamino)pirimidin-5-karbonitril

[0237] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 405 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.03 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 2H), 7.51 - 7.45 (m, 3H), 5.42 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 2.90 (s, 3H), 1.38 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

[0238] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 33 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 37

(S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(3-fluorofenil)pirimidin-4,6-diamin

[0239]

(A) (S)-5-bromo-6-hloro-N-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4-amin [0240] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(J). MS (m/z) = 431 [M+H]<+>.

(B) (S)-5-bromo-N<4>-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4,6-diamin

[0241] Smeša (S)-5-bromo-6-hloro-N-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4-amin (850 mg, 1.97 mmol), rastvor amonijum hidroksida (5 mL, 36%), i EtOH (2 mL) je zračena u mikrotalasnom reaktoru na 150 °C tokom 4 sata. Posle hlađenja do sobne temperature, smeša je koncentrovana u vakuumu dajući 1 g sirovog produkta koji je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. MS (m/z) = 441 [M+H]<+>.

(C) (S)-5-bromo-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4,6-diamin

[0242] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4(M). MS (m/z) = 446 [M+H]<+>.

(D) (S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(3-fluorofenil)pirimidin-4,6-diamin

[0243] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(F). MS (m/z) = 460 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.92 (s, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.76 - 7.64 (m, 3H), 7.62 - 7.45 (m, 4H), 7.25 - 7.04 (m, 3H), 5.37 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

[0244] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 37 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 42

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)(metil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0245]

(A) (S)-4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0246] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(J). MS (m/z) = 376 [M+H]<+>.

(B) (S)-4-hloro-6-(metil(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0247] (S)-4-hloro-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril (70 mg, 0.19 mmol) je rastvoren u anhidrovanom THF (4 mL). Smeša je ohlađena na 0 °C, i zatim joj je dodat NaH (60% suspendovan u mineralnom ulju, 11.2 mg, 0.28 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 0.5 sata, smeša je ponovno ohlađena na 0 °C, a tome je dodat CH3I (39.6 mg, 0.28 mmol) u kapima. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. U smešu je dodata H2O (8 mL) i mešana 5 minuta, zatim je ekstrahovana sa DCM.

Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa (DCM:MeOH=19:1-9:1) dajući 32.0 mg produkta kao belu čvrstu supstancu. Prinos 45%. MS (m/z) = 386 [M+H]<+>.

(C) (S)-4-amino-6-(metil(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0248] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 37(B). MS (m/z) = 371 [M+H]<+>.

(D) (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)(metil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0249] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4(M). MS (m/z) = 405 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.12 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.43 -7.37 (m, 2H), 7.31 - 7.23 (m, 3H), 6.25 (q, J = 6.7 Hz, 1H), 2.77 (s, 3H), 1.62 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

Jedinjenje 43

(R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0250]

(A) 3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-karbaldehid

[0251] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 7 i 8 (A). MS (m/z) = 310 [M+H]<+>, 312 [M+2+H]<+>.

(B) (R,E)-N-((3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)metilen)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0252] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 7 i 8 (B). MS (m/z) = 381 [M+H]<+>, 383 [M+2+H]<+>.

(C) (R)-N-(1-(3-hloro-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0253] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 7 i 8 (C). MS (m/z) = 411 [M+H]<+>, 413 [M+2+H]<+>.

1

(D) (R)-N-((R)-1-(3-(3-fluorofenil)-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0254] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (C). MS (m/z) = 471 [M+H]<+>

(E) (R)-N-((R)-1-(6-amino-3-(3-fluorofenil)piridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0255] (R)-N-((R)-1-(3-(3-fluorofenil)-6-((4-metoksibenzil)amino)piridazin-4-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid (1.1 g, 2.34 mmol) je rastvoren u HOAc (5.5 mL). Smeša je ohlađena na 10 °C i lagano je kap po kap dodavana konc. H2SO4(2.75 mL). Posle mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1 sat, smeša je dodata kap po kap u rastvor NaOH (8.0 g) u ledenoj vodi (100 mL) i mešana 5 minuta, i zatim ekstrahovana sa DCM (100 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O : MeOH=3:2 - 2:3 (+0.5%NH3·H2O)) dajući 545.0 mg ciljanog produkta u vidu bledo smeđe čvrste supstance. Prinos 66%. MS (m/z) = 351 [M+H]<+>.

(F) (R)-N-((R)-1-(6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)-2-metilpropan-2-sulfinamid

[0256] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (J). MS (m/z) = 375 [M+H]<+>.

(G) (R)-1-(6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propan-1-amin hidrohlorid [0257]

[0258] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (K). MS (m/z) = 271 [M+H]<+>.

(H) (R)-4-amino-6-((1-(6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0259] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (L). MS (m/z) = 389 [M+H]<+>.

2

(I) (R)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3-fluorofenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)propil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0260] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 423 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.06 (s, 1H), 7.91 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.55 - 7.48 (m, 3H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 5.24 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 1.89 - 1.70 (m, 2H), 0.83 (t, J = 7.3 Hz, 3H).

[0261] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 43 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 51

(S)-6-amino-4-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)-5-cijanopirimidin 1-oksid

[0262]

[0263] U rastvor jedinjenja 4 (40 mg, 0.10 mmol) u DCM (10 mL) dodat je mCPBA (53 mg, 0.30 mmol) na 5 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 sati. Smeša je koncentrovana u vakuumu, i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O (+0.5% NH3·H2O)) dajući 15 mg naslovnog jedinjenja kao belu čvrstu supstancu, Prinos:36%; MS (m/z) = 407 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.20 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.60 - 7.58 (m, 2H), 7.50 - 7.47 (m, 3H), 5.44 - 5.39 (m, 1H), 1.47 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Jedinjenje 52

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karboksilna kiselina

[0264]

[0265] Jedinjenje 4 (50.0 mg, 0.13 mmol) rastvoreno je u vodenom rastvoru NaOH (2.0 mol/L, 2 mL) i dodat je EtOH (0.4 mL). Smeša je mešana na 60 °C preko noći, i zatim je ohlađena do sobne temperature. Dodata je hlorovodonična kiselina (2 mol/L) da bi se pH vrednost prilagodila na 8∼9. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (H2O:MeOH=3:2-1:2) dajući 60.0 mg produkta kao belu čvrstu supstancu. Prinos 95%. MS (m/z) = 410 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 10.49 - 10.38 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 3H), 7.68 - 7.64 (m, 1H), 7.53 - 7.46 (m, 3H), 5.33 - 5.22 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

Jedinjenje 53

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karboksamid

[0266]

4

[0267] (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino) pirimidin-5-karboksilna kiselina (20.0 mg, 0.049 mmol), NH4Cl (10.4 mg, 0.19 mmol) i HATU (37.2 mg, 0.098 mmol) je rastvorena u DMF (2 mL), zatim je polako dodat DIPEA (12.7 mg, 0.098 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni sa (H2O:MeOH=1:1-1:4) dajući 14.5 mg produkta kao belu čvrstu supstancu. Prinos 72%. MS (m/z) = 409 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.01 - 7.97 (m, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.73 - 7.68 (m, 2H), 7.67 -7.64 (m, 1H), 7.52 - 7.47 (m, 3H), 5.33 - 5.24 (m, 1H), 1.31 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

[0268] Sledeća jedinjenja su pripremljena prema postupku za Jedinjenje 53 koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 55

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)-2-hidroksipirimidin-5-karbonitril

[0269]

(A) (S)-4-hloro-2-(metilthio)-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0270] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30(J). MS (m/z) = 422 [M+H]<+>.

(B) (S)-4-amino-2-(metilthio)-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0271] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 37 (B). MS (m/z) = 403 [M+H]<+>.

(C) (S)-4-amino-2-(metilsulfonil)-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0272] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 51. MS (m/z) = 435 [M+H]<+>.

(D) (S)-4-amino-2-hidroksi-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0273] Smeša (S)-4-amino-2-(metilsulfonil)-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (150 mg, 0.34 mmol) i vodenog rastvora NaOH (2 mL, 2 N) u THF (5 mL) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 1 sat. Smeša je ekstrahovana sa DCM (20 mL X 3), kombinovani organski sloj je koncentrovan dajući 200 mg sirovog produkta koji je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. MS (m/z) = 373 [M+H]<+>.

(E) (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)-2-hidroksipirimidin-5-karbonitril

[0274] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 407 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.00 (s, 1H), 7.78 - 7.67 (m, 3H), 7.55 - 7.40 (m, 3H), 5.44 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.36 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Jedinjenje 69

(S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(2-hidroksifenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0275]

[0276] U rastvor (S)-4-amino-6-((1-(3-chioro-6-(2-metoksifenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (120 mg, 0.28 mmol, ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30) u DCM (3 mL) dodat je BBr3(1.4 mL, 1.4 mmol) u kapima na 0 °C. Smeša je mešana tokom 6 sati na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša ugašena sa MeOH, koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 7 : 3) dajući 36 mg naslovnog jedinjenja kao bledo žutu čvrstu supstancu. Prinos: 32%. MS (m/z) = 411 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.08 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.31 -7.19 (m, 2H), 6.93-6.82 (m, 2H), 5.39 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 1.53 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Jedinjenje 78

(S)-4-amino-6-((1-(3-fluoro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0278] U rastvor (S)-4-amino-6-((1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitrila (100 mg, 0.28 mmol) u CHCl3(15 mL) dodat je N-fluoro-N-(fenilsulfonil)benzensulfonamid (886 mg, 2.81 mmol). Smeša je mešana na refluksu tokom 32 sata. Smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je prečišćen tankoslojnom hromatografijom dajući 5 mg naslovnog jedinjenja kao belu čvrstu supstancu. MS (m/z) = 375 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 7.87 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.67 - 7.64 (m, 2H), 7.53 - 7.49 (m, 3H), 7.49 - 7.43 (m, 1H), 7.37 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.46 - 5.31 (m, 3H), 1.37 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

Jedinjenje 79

(hiralni)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0279]

(A) 5-(1-aminoetil)-6-hloropiridazin-3-amin

[0280] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30 (G). ((R)-N-(1-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-hloropiridazin-4-il)etil)-2-metilpropan-2-sulfinamid pripremljen je prema proceduri za jedinjenje 30 (E)).

(B) tert-butil (1-(6-amino-3-hloropiridazin-4-il)etil)karbamat

[0281] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 31 (B).

(C) tert-butil (1-(6-hloroimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0282] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 31 (C).

(D) tert-butil (1-(6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamat

[0283] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 30 (F). MS (m/z) = 397 [M+H]<+>.

(E) 2-(3-(7-(1-aminoetil)imidazo[1,2-b]piridazin-6-il)fenil)propan-2-ol

[0284]

[0285] Smeša tert-butil (1-(6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)karbamata (120 mg, 0.30 mmol) u TFE (3 mL) mešana je na 140 °C tokom 1 sat u mikrotalasnom reaktoru. Smeša je koncentrovana u vakuumu dajući 95 mg sirovog produkta koji je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. MS (m/z) = 297 [M+H]<+>.

(F) 4-amino-6-((1-(6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0286] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (L). MS (m/z) = 415 [M+H]<+>.

(G) 4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0287] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M).

(H) (chiral)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-(3-(2-hidroksipropan-2-il)fenil)imidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbonitril

[0288] Racemično jedinjenje G je razdvojeno sa hiralnom HPLC da se bi se dobili optički čisti enantiomeri jedinjenja 79 (HPLC uslovi: kolona: CHIRALPAK la 20 mm I.D. × 25 cm L; mobilna faza: EtOH/DEA = 100/0.10; brzina protoka = 8.0 mL/min; detektor: UV 254 nm). Eluent (Rf = 3.958 min) je 97.51% ee. MS (m/z): 449 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, dmso-6d) δ 8.26 (s, 1H), 7.87 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 7.78 - 7.76 (m, 2H), 7.60 - 7.58 (m, 1H), 7.43 - 7.72 (m, 2H), 7.21 (s, 2H), 5.19 - 5.11 (m, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.34 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

[0289] Jedinjenje 79 može da bude:

[0290] Sledeće jedinjenje je pripremljeno prema postupku za Jedinjenje 79 (G) koristeći odgovarajuće intermedijare i reagense pod odgovarajućim uslovima koji će biti prepoznati od strane lica sa uobičajenim iskustvom u tehnici.

Jedinjenje 81

(S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirimidin-4,6-diamin

[0291]

(A)(S)-N'-acetil-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbohidrazid

[0292] U rastvor (S)-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karboksilne kiseline (88 mg, 0.21 mmol), sirćetnog hidrazida (19 mg, 0.25 mmol), HATU (95 mg, 0.25 mmol) u DMF (2 mL) u kapima je dodat Et3N (64 mg, 0.63 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC i LC-MS su pokazali da se početni materijal troši. Zatim je smeša podeljena između vode (2 mL) i EA (5 mL). Organski sloj je odvojen i vodeni sloj je ekstrahovan sa EA (5 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovani dajući 70 mg sirovog produkta koji je korišćen za sledeći korak bez ikakvog prečišćavanja. MS (m/z) = 466 [M+H]<+>.

(B)(S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(5-metil-1,3,4-oksadiazol-2-il)pirimidin-4,6-diamin

[0293] U mešani rastvor (S)-N'-acetil-4-amino-6-((1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)amino)pirimidin-5-karbohidrazida (70 mg, 0.15 mmol) u suvom THF (3 mL) dodat je metil N-(trietilamonijumsulfonil)karbamat (89 mg, 0.38 mmol). Smeša je zagrevana i mešana tokom 3 sata na refluksu. Zatim je smeša ohlađena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš

1

hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 6 : 4) dajući 10 mg naslovnog jedinjenja. MS (m/z) = 448 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.25 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 2H), 7.54 - 7.50 (m, 3H), 7.22 (s, 2H), 5.24-5.17 (m, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.37 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Jedinjenje 82

(S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pirimidin-4,6-diamin

[0294]

(A) metil 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksilat

[0295] U rastvor etil 4,6-dihloropirimidin-5-karboksilata (5 g, 22.73 mmol) u MeOH (50 mL) u serijama je dodat natrijum metoksid (4.3 g, 79.55 mmol). Reakciona smeša je zagrevana i mešana preko noći na refluksu. Zatim je smeši dodata voda (50 mL) i ekstrahovana sa EA (50 mL x 2). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovani dajući 3.9 g sirovog produkta. Prinos: 88%. MS (m/z) = 199 [M+H]<+>.

(B) 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksilna kiselina

[0296] U rastvor metil 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksilata (3.9 g, 19.69 mmol) u MeOH (40 mL) dodat je rastvor NaOH (1.6 g, 39.38 mmol) u vodi (5 mL). Zatim je reakciona smeša zagrevana do refluksa i mešana tokom 2 sata. Posle hlađenja do sobne temperature, smeši je

2

dodata hlorovodonična kiselina (4 M, 10 mL) do pH=4-5. Talog je filtriran dajući 3.5 g naslovnog jedinjenja. Prinos: 95%. MS (m/z) = 185 [M+H]<+>.

(C) 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksamid

[0297] U rastvor 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksilne kiseline (2.5 g, 13.58 mmol), amonijak hlorida (864 mg, 16.3 mmol), HATU (6.2 g, 16.3 mmol) u DMF (30 mL) dodat je u kapima Et3N (4.1 g, 40.74 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. TLC i LC-MS su pokazali da se početni materijal troši. Zatim je smeša ugašena sa vodom (30 mL) i ekstrahovana sa DCM (50 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovani i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (DCM : MeOH =8 : 2) dajući 1.3 g naslovnog jedinjenja. Prinos: 51%. MS (m/z) = 184 [M+H]<+>.

(D) (E)-N-(1-(dimetilamino)etiliden)-4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksamid

[0298] Rastvor 4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksamida (1.3 g, 7.1 mmol) i N,N-Dimetilacetamid dimetil acetala (4.7 g, 35.5 mmol) u suvom toluenu (20 mL) je zagrevan do refluksa i mešan preko noći. Zatim je smeša koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (EA: MeOH = 7 : 3) dajući 715 mg naslovnog jedinjenja. Prinos: 40%. MS (m/z) = 253 [M+H]<+>.

(E) 5-(4,6-dimetoksipirimidin-5-il)-3-metil-1,2,4-oksadiazol

[0299] (E)-N-(1-(dimetilamino)etiliden)-4,6-dimetoksipirimidin-5-karboksamid (715 mg, 2.83 mmol) dodat je u rastvor hidroksilamin hidrohlorida (254 mg, 3.68 mmol) u vodeni rastvor NaOH (2 M, 2.4 mL, 4.81 mmol). Zatim su dodati dioksan (8 mL) i AcOH (5.6 mL, 99.05 mmol). Smeša je zagrevana na refluksu i mešana preko noći. Zatim je smeša ohlađena, koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 6 : 4) dajući 131 mg naslovnog jedinjenja. Prinos: 21%. MS (m/z) = 223 [M+H]<+>.

(F) 5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pirimidin-4,6-diol

[0300] U mešani rastvor 5-(4,6-dimetoksipirimidin-5-il)-3-metil-1,2,4-oksadiazola (131 mg, 0.59 mmol) u AcOH (0.2 mL) se polako dodaje koncentrovana hlorovodonična kiselina (0.2 mL) u kapima. Zatim je smeša zagrevana na 50 °C i mešana tokom 3 sata. Zatim je smeša ohlađena i koncentrovana, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni (MeOH : H2O = 15 : 85) dajući 71 mg naslovnog jedinjenja. Prinos: 62%. MS (m/z) = 195 [M+H]<+>.

(G) 5-(4,6-dihloropirimidin-5-il)-3-metil-1,2,4-oksadiazol

[0301] Rastvor 5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pirimidin-4,6-diola (71 mg, 0.36 mmol) u POCl3(1 mL) zagrevan je na 100 °C i mešan tokom 1 sat. Smeša je ohlađena i dodata vrlo polagano u ledenu vodu kap po kap. Vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (5 mL x 3). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovani dajući 54 mg naslovnog jedinjenja koje je korišćeno za sledeći korak bez ikakvog prečišćavanja. Prinos: 64% MS (m/z) = 231 [M+H]<+>.

(H) 6-hloro-5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pirimidin-4-amin

[0302] Rastvor 5-(4,6-dihloropirimidin-5-il)-3-metil-1,2,4-oksadiazola (54 mg, 0.23 mmol) u THF (1 mL) se uvodi u mehurićima kroz NH3tokom 5 minuta i meša se tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša koncentrovana dajući 36 mg naslovnog jedinjenja koje je korišćeno za sledeći korak bez ikakvog prečišćavanja. Prinos: 75%. MS (m/z) = 212 [M+H]<+>.

(I) (S)-5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)-N<4>-(1-(6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)pirimidin-4,6-diamin

[0303] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (L). MS (m/z) = 414 [M+H]<+>

(J) (S)-N<4>-(1-(3-hloro-6-fenilimidazo[1,2-b]piridazin-7-il)etil)-5-(3-metil-1,2,4-oksadiazol-5-il)pirimidin-4,6-diamin

[0304] Ovo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri za Jedinjenje 4 (M). MS (m/z) = 448 [M+H]<+>

<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.00 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.72-7.69 (m, 3H), 7.54 - 7.49 (m, 3H), 5.53 - 5.43 (m, 1H), 2.45 (s, 3H), 1.45 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Primer 2: Fluorescentno određivanje aktivnosti PI3K enzima

[0305] PI3K kinaze uključujući p110α/p85α i p110γ su nabavljene od Invitrogen, p110δ/p85α i p110β/p85α su iz kompanije Millipore.

[0306] Primarni skrining podaci i IC50vrednosti su izmerene korišćenjem testa Transcreener™ KINASE Assay (Bellbrook, Catalog # 3003-10K). Ispitivanje se može obaviti u skladu sa postupcima koje predlaže proizvođač. To je univerzalna, homogena tehnologija skrininga sa visokom propusnošću (HTS) koja koristi daleko-crvenu svetlost, konkurentna imunološka

4

analiza fluorescentne polarizacije zasnovana na detekciji ADP-a za praćenje aktivnosti enzima koji katalizuju reakcije prenosa grupe. Ukratko, test Transcreener KINASE Assay dizajniran je kao jednostavan dvodelni test krajnje tačke kako sledi:

1) Pripremanje 25uL reakcije kinaze: 25uL reakcija kinaze je izvedena pripremanjem reakcione smeše koja sadrži 10uL pufera kinaze (50 mM HEPES, 100 mM NaCl, 1 mM EGTA, 0.03% CHAPS, 3 mM MgCl2, i sveže dopunjeno 1 mM DTT), i 10 uL 30 uM PIP2 i 10 uM ATP, 5 uL rastvora testiranog jedinjenja (jedinjenje je rastvoreno u DMSO, konačne koncentracije jedinjenja u reakcionoj smeši bile su 1 uM, 0.3 uM, 0.1 uM, 0.037 uM, 0.012 uM, 0.0041 uM, 0.0014 uM i 0.0005 uM, i konačna koncentracija DMSO u reakcionoj smeši bila je 2%) ili 5 uL kontrola (2% DMSO). Reakciona smeša je dodata u željene bunariće na ploči sa 96-bunarića. Ploča je zapečaćena i inkubirana tokom 80 minuta na sobnoj temperaturi.

2) Zatim je u svaki bunarić dodato 25uL ADP smeše za detekciju. Ploča je ponovo zapečaćena i inkubirana 60 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je polarizacija fluorescencije izmerena pomoću uređaja Tecan Infinite F500 Reader.

[0307] Podaci su analizirani i IC50vrednosti su generisane korišćenjem softverskog dodatka za Microsoft Excel, Xlfit™ (verzija 5.3).

[0308] Stope inhibicije su izračunate kao što sledi: IH%= (ADP iznos ispod 2% DMSO bunarića - ADP iznos ispod bunarića za testirano jedinjenje) / ADP iznos ispod 2% DMSO bunarića × 100%.

[0309] Ispod su IC50(µM) vrednosti ili stope inhibicije (IH%) kod 1 µM za neka jedinjenja:

Primer 3: Inhibicija fosforilacije AKT u Ramosovoj ćelijskoj liniji

[0310] 6x10<4>/mL Ramosove ćelije (ATCC, CRL-1596; ćelije su kultivisane u RPMI1640 medijumu sa 10%FBS) su zasejane u ploču sa 96-bunarića (Beckman Dickinson, br.356692) kod 80 uL/bunariću, 4,800 ćelija/bunariću. Posle inkubacije od 3 sata na 37°C pod 5% CO2, Ramosove ćelije su tretirane sa 10uL/bunariću različitih koncentracija testiranog jedinjenja (konačne koncentracije testiranog jedinjenja: 1 uM, 0.3 uM, 0.1 uM, 0.037 uM, 0.012 uM, 0.0041 uM, 0.0014 uM i 0.0005 uM) ili 0.3% DMSO tokom 30 minuta, a zatim su stimulisane sa 10uL/bunariću 1ug/ml Anti-IgM(Jackson Immunoresearch, 709-006-073) tokom 15-20 minuta.

1) Ćelije su fiksirane sa 100 µL 4% prethodno zagrejanog paraformaldehida (2% konačna koncentracija), i inkubirane su tokom 45 minuta na sobnoj temperaturi.

2) Rastvor paraformaldehida je uklonjen. 100 µL ledeno hladnog metanola je dodato u svaki bunarić i ploča je ostavljena na 4°C tokom 30 min.

3) Ćelije su isprane tri puta sa 160 µL PBS.

4) 40 µL 1:350 razblaženja zečjeg anti-p-AKT(Ser<473>) antitela (Cell Signaling Technology, 4060L) u puferu za razblaženje antitela (1% BSA, u PBS) dodato je u svaki bunarić. Ploča je inkubirana preko noći na 4°C.

5) Ćelije su isprane 3 puta sa 160uL PBS.

6) 45 µL kozjeg anti zečjeg IgG Alexa488 antitela (Invitrogen, A11034) pri razređivanju 1:1,000 u puferu za razblaženje antitela (1% BSA, u PBS) dodato je u svaki bunarić. Ploča je bila prekrivena sa folijom da se ne drži na svetlosti i inkubirana je tokom 90 minuta na sobnoj temperaturi.

7) Ćelije su isprane 3 puta sa 160uL PBS.

8) U svaki bunarić dodato je 50 µL 1.5 µM rastvora propidijum jodida (Sigma: P4170) da se odredi broj ćelija (1.5 mM rastvora propidijum jodida je razblaženo sa 1:1,000 u PBS, i konačna koncentracija bila je 1.5 µM).

9) Ploča je inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta i zatim je zatvorena sa poklopcem.

10) Ploča je postavljena u Acumen Explorer i skenirana sa odgovarajućim podešavanjima instrumenta.

[0311] Podaci su analizirani i IC50vrednosti su generisane korišćenjem softverskog dodatka za Microsoft Excel, Xlfit™ (verzija 5.3).

[0312] Ispod su IC50(µM) vrednosti za neka jedinjenja:

Primer 4: Inhibicija PI3Kδ signalizacije u bazofilima iz pune ljudske krvi

1. Reagensi i materijali

[0313]

2. Metode

[0314]

1) Heparinizirana ljudska puna krv pomešana je i pipetirana u pločicu sa 96 bunarića sa vdnom, 100µL po bunariću.

2) 10 µL stimulacionog pufera (1 mg/mL radnog rastvora, konačna koncentracija rekombinantnog humanog IL-3: 20 ng/mL) je dodato u uzorke cele krvi u svaki bunarić i nežno je mešano. Uzorci su inkubirani tokom 20 minuta na 37°C.

3) 10 uL/bunariću razblaženja ispitnog jedinjenja (konačne koncentracije ispitivanog jedinjenja u bunariću: 1 uM, 0.3 uM, 0.1 uM, 0.037 uM, 0.012 uM, 0.0041 uM, 0.0014 uM i 0.0005 uM) ili nosača (0.2% DMSO) dodato je u svaki bunarić na ploči i ploča je inkubirana tokom 1.5h na 37°C.

4) 100 µL kozjeg anti-humanog IgE (1mg/mL radni rastvor, konačna koncentracija IgE: 0.31ug/mL) radnog rastvora dodato je u svaki bunarić u ploči. Vrtloženje svih bunarića jednom ili više puta i inkubiranje tokom 20 minuta na 37°C

5) Obeležavanje sa obojenim antitelom: Degranulacija je zaustavljena inkubacijom uzoraka na ledu tokom 5 min. U svaki bunarić dodato je 6 µL smeše obojenog antitela (anti-CD63-FITC i anti-IgE-PE). Vrtloženje i inkubiranje bunarića tokom 20 minuta u ledenom kupatilu, pokrivenom da se spreči izlaganje svetlosti.

6) Uzorci cele krvi su lizirani sa 300 µL RBC lizom (prethodno zagrejanom na sobnu temperaturu, 20 do 25°C). Vrtloženje i inkubiranje uzoraka tokom 15 minuta na sobnoj

1

temperaturi. Spinovanje ćelija (5 min, 250 x g, 4°C). Supernatant je aspiriran ostavljajući otprilike 100 µL u svakom bunariću.

7) Uzorci krvi su lizirani još jednom kao korak 6).

8) Pranje: Uzorci se isperu jednom sa 0,5 ml rastvora za pranje. Ploča je centrifugirana (5 min, 250 x g, 4°C). Supernatant je aspiriran ostavljajući otprilike 100 µL u svakom bunariću. Uzorak u svakom bunariću je još jednom ispran i centrifugiran još jednom kao gore.

9) 200 µL rastvora za fiksiranje (1% papraledehida u 1% BSA/PBS) dodato je u svaki bunarić. Ploča je inkubirana u pokrivenom ledenom kupatilu do analize.

10) Citometrijska analiza protoka: ćelije su analizirane protočnom citometrijom korišćenjem plavo-zelene eksitacione svetlosti (488nm argon-jonski laser, FACSCalibur, softver CELLQuest).

3. Analiza podataka

[0315] Podaci su analizirani i IC50vrednosti su generisane korišćenjem softverskog dodatka za Microsoft Excel, Xlfit™ (verzija 5.3).

[0316] Ispod su IC50(µM) vrednosti od nekih jedinjenja:

Primer 5: Test in vitro ćelijske proliferacije u ćelijskoj liniji SU-DHL-6

[0317] Testovi inhibicije rasta su izvedeni korišćenjem 10% FBS dodanog medijuma. Ćelije su zasejane u koncentraciji od 15000 ćelija/bunariću u ploči sa 96-bunarića. Razblaženja testiranog jedinjenja u različitim koncentracijama (krajnja koncentracija testiranog jedinjenja:

1 1

1 uM, 0.3 uM, 0.1 uM, 0.037 uM, 0.012 uM, 0.0041 uM, 0.0014 uM i 0.0005 uM) dodata su posle 24 sata. Rast je procenjen korišćenjem kita za brojanje ćelija-8 (CCK-8) (Dojindo,Cat#CK04) nakon što je testirano jedinjenje inkubirano tokom 72h. Apsorbancija je očitana na talasnoj dužini 450nm na uređaju Multiskan MK3 (Thermo).

[0318] Podaci su analizirani i IC50vrednosti su generisane korišćenjem softverskog dodatka za Microsoft Excel, Xlfit™ (verzija 5.3).

[0319] Ispod su IC50(µM) vrednosti od nekih jedinjenja:

Primer 6: Efekt jedinjenja 4 na aktivaciju B ćelija izazvanu anti-IgD antitelom u punoj krvi pacova

[0320] Aktivacija B ćelija (B220+) u punoj krvi pacova sa anti-IgD antitelom koaj dovodi do aktivacije preko Ig receptora poznata je da uključuje PI3K puteve i osetljiva je na modulaciju sa inhibitorima PI3Kδ. Razvijen je test farmakodinamike za procenu aktivnosti inhibitora PI3Kδ ex vivo nakon oralne primene inhibitora sa pacovima.

[0321] Vistar pacovi (ženski, 6-8 nedelja stari) su korišćeni u eksperimentima. Zavisnost od doze, vremensko trajanje studije i PKPD odnos jedinjenja 4 izvedeni su kod normalnih Vistar pacova. Jedinjenje 4 (0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3 mg/kg) rastvoreno ili suspendovano u nosaču (0.5% CMC-Na, pH2.1) davano je pacovima (3 pacova po dozi) oralno jednom. Kontrolna grupa (6 pacova) tretirana je smo sa nosačem. U određenim vremenskim tačkama (1 sat, 8 sati, 16 sati i 24 sata nakon primene), uzorci krvi su sakupljeni od pacova putem retro-orbitalnog krvarenja pod anestezijom izofluorana u heparinizirane epruvete. Krv sa heparinom protiv koagulisanja pomešana je sa anti-pacova-IgD, zatim je inkubirana na 37°C pod 5% CO2preko noći. Fluorescentni signal za CD86 na B220 (B ćelije) pozitivne ćelije detektiran je pomoću

1 2

protočnog citometra (BD FACSCalibur, BD Biosciences) i podaci su analizovani sa softverom CellQuest. Plazma je sakupljena radi merenja nivoa jedinjenja 4.

[0322] Kao što je prikazano na slici 1, jedinjenje 4 inhibiralo je anti-IgD indukovanu aktivaciju B ćelija u punoj krvi pacova, ex vivo, na dozno i vremenski zavisan način, u rasponu doze od 0.01 do 3 mg/kg (p<0.01). ED50vrednosti na 2 sata posle doziranja bile su < 0.01 mg/kg sa odgovarajućom EC50vrednosti od 1.487 ng/mL. Nivoi jedinjenja 4 u plazmi su proporcionalni dozi u rasponu doza od 0.01 mg/kg do 3 mg/kg. Posle pojedinačne oralne primene doze od 0.1 mg/kg, primećena je potpuna inhibicija aktivacije B ćelija (>90% inhibicije) tokom do 24 sata.

Primer 7: Efekat jedinjenja 4 u modelu artritisa izazvanog kolagenom II kod pacova (CIA)

[0323] Kolagenom indukovani artritis kod pacova je eksperimentalni model poliartritisa koji je široko korišćen za ne-kliničko testiranje brojnih anti-artritičnih agenasa koji su ili pod nekliničkim ili kliničkim testiranje ili se trenutno koriste kao terapeutski agensi u ovoj bolesti.

[0324] Zaštitni efekat jedinjenja 4 procenjen je u modelu artritisa izazvanog kolagenom II (CIA) kod pacova. Vistar pacovi su imunizovani intradermalno sa 200 µg goveđeg kolagena II emulgiranog u Freundovom nekompletnom adjuvansu (IFA, Sigma, US) na dan 0 i na dan 7. Izmerene su zapremine zadnjih šapa pre i posle imunizacije. Da bi se procenilo antiinflamatorno delovanje jedinjenja 4, ženke Vistar pacova sa utvrđenim artritisom izazvanim kolagenom tipa II su tretirane oralno (PO) sa jedinjenjem 4 (0.03, 0.1 i 1 mg/kg) ili nosačem (0.5% CMC-Na, pH 2.1) jednom dnevno (QD) tokom 7 dana (dani 10-16) posle indukcije sa kolagenom tipa. Naivna grupa nije primala ništa. YiSaiPu (10 mg/kg), fuzioni protein receptora faktora nekroze ljudskog tumora p75 Fc, primenjen je intraperitonealnom injekcijom na dane 10, 12 i 14 kao pozitivna kontrola. Studija je prekinuta na dan 18. Rezultati studije prikazani su na slici 2.

[0325] Kao što je prikazano na Slici 2, zapremina šapa pacova tretiranih imala je vrhunac na dan 16. Na kraju perioda tretmana, srednja zapremina je značajno smanjena za sve aktivne tretirane grupe u poređenju sa bolesnim životinjama tretiranim sa nosačem (p<0.01) izuzev kod najniže doze jedinjenja 4 (0.03 mg/kg)

1

[0326] Površina ispod krive (AUC) za srednje oticanja šapa tokom vremenskog profila korišćena je kao parametar za procenu efekta jedinjenja 4 na zapreminu šape tokom nekoliko dana doziranja. Za svaku grupu doza, određeno je procentualno smanjenje AUC u odnosu na obolele životinje tretirane nosačem kroz procenjeni opseg doza od 0.03 do 1 mg/kg. Smanjenje prečnika gležnja AUC za jedinjenje 4 bilo je u rasponu od 15.5% do 99.5% u odnosu na kontrole sa nosačem. U istoj studiji, tretman sa YiSaiPu (10 mg/kg, QOD) smanjilo je oticanje šape AUC za 81.6% u odnosu na životinje tretirane nosačem.

[0327] Zaključno, svakodnevno oralno lečenje sa jedinjenjem 4 pokazalo je korisne efekte zavisne od doze na parametre povezane sa utvrđenim artritisom izazvanim kolagenom tipa II kod pacova.

1 4

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

   i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri i njihovi tautomeri, naznačeno time što Ar je aril, pomenuti aril je karbociklički ugljovodonični radikal monocikličnog prstena ili fuzionisanih prstenova koji sadrže 6-12 atoma ugljenika u prstenu, pri čemu najmanje jedan prsten je aromatični i nijedan od ostalih prstenova nije heteroaril; ili heteroaril, pomenuti heteroaril je monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 5, 6 ili 7 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 heteroatoma nezavisno izabrana između N, O, i S u prstenu, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika; ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 9 ili 10 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma u prstenovima nezavisno izabrana između N, O, i S, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični, kada ukupan broj S i O atoma u heteroaril grupi prelazi 1, ti heteroatomi nisu susedni jedan drugom, i pomenuta heteroarilna grupa takođe obuhvata one gde se N heteroatom pojavljuje kao N-oksid; svaki pomenuti aril i heteroaril je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine deuterijum, halo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, C1-6haloalkil, -(C1-6alkil)OH, i -S(O)2(C1-6alkil); W je izabran od heteroarila i -N(R3)heteroarila, pri čemu pomenuti heteroaril je monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži azot koji ima 5, 6 ili 7 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 heteroatoma, pri čemu heteroatom ili heteroatomi je/su atomi azota, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika; ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji sadrži azot koji ima 9 ili 10 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma, pri čemu heteroatom ili heteroatomi je/su atomi azota, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični; i pomenuta heteroarilna grupa takođe obuhvata one gde se N heteroatom pojavljuje kao N-oksid, i pomenuti heteroaril je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6alkil), - C(O)N(C1- 6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril; gde je navedeni 5- ili 6-člani heteroaril monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 5 ili 6 atoma u prstenu, i sadrži 1, 2 ili 3 heteroatoma u prstenu nezavisno izabrana od N, O i S, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, kada ukupan broj S i O atoma u heteroaril grupi prelazi 1, ti heteroatomi nisu susedni jedan drugom, i svaki navedeni fenil ili navedeni 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, -SH, C1-6alkil, i -O(C1- 6alkil); R1je nezavisno izabran između H, halo, i C1-6alkil; R2je izabran od C1-6alkil; R3je H ili C1-6alkil; m je 1 ili 2.
2. 2. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što je W izabran od heteroarila koji sadrži azot ili -N(R3) heteroarila koji sadrži azot, pri čemu je pomenuti heteroaril koji sadrži azot izabran iz grupe koju čine pirimidinil, pirolopirimidinil i purinil, i opciono je supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), - COOH, -C(O)NH2, fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil; gde svaki pomenuti fenil ili pomenuti 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil).
3. 3. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što W je izabran od 1

   svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, -C(O)NH(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil; gde svaki pomenuti fenil i pomenuti 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-C6alkil), ili W je izabran od

   svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine hloro, -CN, -NH2, -NH(C1-6alkil), - COOH, -C(O)NH2, fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, i tetrazolil; gde je svaki pomenuti fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, i tetrazolil opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil); ili

   koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), -COOH, - C(O)NH2, fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil; gde je svaki pomenuti fenil i pomenuti 5- ili 6-teročlani heteroaril kao supstituent od W je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, i -O(C1-6alkil), ili W je 1

   koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine hloro, - CN, -NH2, NH(C1-6alkil), -COOH, -C(O)NH2, fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil i tetrazolil; gde je svaki pomenuti fenil, piridil, oksadiazolil, pirazolil, i tetrazolil opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, -OH, C1-6alkil, ili -O(C1-6alkil).
4. 4. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1-3, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što Ar je izabran između fenil, naftil, piridil, pirazolil, kinolil, tienil, benzotiazolil, indolil, i 2,3-dihidro-1,4-benzodioksinil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine D, halo, -CN, C1-6alkil, -(C1-6alkil)OH, C1-6haloalkil, i - S(O)2(C1-6alkil), na primer, Ar je fenil ili piridil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo (npr. fluoro), -CN, i C1-6haloalkil.
5. 5. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1-4, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, pri čemu R2je C1-4alkil, poželjno metil i etil; i/ili pri čemu R3je H; i/ili pri čemu m je 1.
6. 6. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1-5, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što formula (I) je formula (I-1),

   pri čemu R1, R2, Ar i W su kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1-5. 1
7. 7. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 6, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što W je izabran od heteroarila koji sadrži azot i -N(R3) heteroarila koji sadrži azot, pri čemu pomenuti heteroaril koji sadrži azot je monociklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 6 atoma u prstenu, i sadrži 1 ili 2 N heteroatoma u prstenu, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, ili biciklični aromatični ugljovodonični radikal koji ima 9 atoma u prstenu, i sadrži 3 ili 4 N heteroatoma u prstenovima, gde su preostali atomi u prstenu atomi ugljenika, pri čemu najmanje jedan od prstena je aromatični, i pomenuti heteroaril koji sadrži azot je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil, ili W je izabran od

   svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil, ili W je izabran od

   svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine -CN, -NH2, i tetrazolil; ili

   1 koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine fluoro, hloro, bromo, -CN, -OH, -SH, C1-6alkil, -NH2, -NH(C1-6alkil), -N(C1-6alkil)(C1-6alkil), fenil, i 5- ili 6-teročlani heteroaril izabran iz grupe koju čine piridil, pirazolil i tetrazolil, ili W je

   koji je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine -CN, -NH2, i tetrazolil.
8. 8. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 6 ili zahtevu 7, i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri, njihovi tautomeri, naznačeno time što Ar je izabran između fenil, naftil, piridil, pirazolil, kinolil, tienil, i benzotiazolil, svaki od kojih je opciono supstituisan sa jednom ili više grupa izabranih iz grupe koju čine halo, - CN, C1-6alkil, -(C1-6alkil)OH, i C1-6haloalkil.
9. 9. Jedinjenje formule (I) prema zahtevu 1, naznačeno time što je izabrano od:

   11

   11

   i farmaceutski prihvatljiva so bilo kog od njih, i/ili solvati, racemična smeša, enantiomeri, dijasteromeri i tautomeri bilo kojeg od njih.
10. 10. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što sadrži jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva 1-9, i/ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijent.
11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-9 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 10 naznačena time što se koristi kao lek.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-9 ili farmaceutska kompozicija prema zahtevu 10značena time što je za upotrebu u postupku za lečenje bolesti koja reaguje na inhibiciju PI3K u subjektu, pri čemu navedena bolest koja reaguje na inhibiciju PI3K je inflamatorna bolest, autoimuna bolest ili kancer.
13. 13. Jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 12, naznačena time što je navedena inflamatorna bolest ili autoimuna bolest izabrana od reumatoidnog artritisa, hroničnog opstruktivnog plućne bolesti (HOPB), alergijskog rinitisa, astme, lupusa, sistemskog eritemskog lupusa, psorijaze i multiple skleroze; navedeni kancer je solidan tumor ili hematološki malignitet izabran između leukemije kao što je limfocitna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (HLL) ili hronična mijeloidna leukemija (HML); multiplog mijeloma (MM); i limfoma kao što je Hodgkinov limfom, ne-Hodgkinov limfom (NHL), limfom mantle ćelija (MCL), folikularni limfom, B-ćelijski limfom, T-ćelijski limfom ili difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL).
14. 14. Jedinjenje formule (II)

    i/ili njegova so; i/ili njegova racemska smeša ili enantiomer; naznačeno time što su Ar i R2definisani kao u bilo kom od zahteva 1-9.
15. 15. Jedinjenje formule (II) prema zahtevu 14, naznačeno time što je izabrano od:

    i 11

    i soli bilo kojeg od njih. 11