[go: up one dir, main page]

RS58375B1 - Steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije - Google Patents

Steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije

Info

Publication number
RS58375B1
RS58375B1 RS20190234A RSP20190234A RS58375B1 RS 58375 B1 RS58375 B1 RS 58375B1 RS 20190234 A RS20190234 A RS 20190234A RS P20190234 A RSP20190234 A RS P20190234A RS 58375 B1 RS58375 B1 RS 58375B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
rats
ethynyl
oxime
hydroxyandrostan
hepatic encephalopathy
Prior art date
Application number
RS20190234A
Other languages
English (en)
Inventor
Magnus Doverskog
Hanns Möhler
Vicente Felipo
Torbjörn Bäckström
Original Assignee
Umecrine Cognition Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Umecrine Cognition Ab filed Critical Umecrine Cognition Ab
Publication of RS58375B1 publication Critical patent/RS58375B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
    • A61K31/568—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol substituted in positions 10 and 13 by a chain having at least one carbon atom, e.g. androstanes, e.g. testosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
    • A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
    • A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
    • A61K31/216—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acids having aromatic rings, e.g. benactizyne, clofibrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4375—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having nitrogen as a ring heteroatom, e.g. quinolizines, naphthyridines, berberine, vincamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7016—Disaccharides, e.g. lactose, lactulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

Opis
Oblast pronalaska
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije.
Stanje tehnike pronalaska
[0002] Hepatična encefalopatija (HE) predstavlja ozbiljnu neuropsihijatrijsku i neurokognitivnu komplikaciju u akutnom i hroničnom oboljenju jetre. HE je značajni i rastući problem zdravstenog sistema zbog velike i rastuće prevalencije hroničnog oboljenja jetre. HE se karakteriše pogoršanjima u ciklusu spavanja-buđenja, kogniciji, memoriji, učenju, motornoj koordinaciji, svesti, smanjenim energetskim nivoima i promeni ličnosti, sa opsegom od minimalnog HE (MHE) do otvorenog HE (OHE). MHE se manifestuje sa kognitivnim narušavanjem i ima oštećujuće efekte na zdravlje koji su povezani sa kvalitetom života i sposobnostima za izvođenje kompleksnih zadataka kao što je vožnja. Dodatno, OHE se klinički manifestuje sa mentalnim i motornim poremećajima i simptomima koji imaju opsege od dezorij3ntecije preko sedacije i kome.
[0003] Steroidi koji se nalaze u prirodi su predmet intenzivnog metabolizma i obično nisu pogodni za oralno davanje. Metaboliti endogenih steroidnih hormona pregnenolona, progesterona, deoksikortikosterona, kortizona i kortizola, koji su poznati pod imenom pregnanoloni kao i metaboliti testosterona, androstenediona i dehidroepiandrosterona, su svi bili predmet različitih ispitivanja, da bi se najmanje delom objasnila njihova uloga u neurološkom signalnom sistemu kod sisara. Steroidni metaboliti indukuju simptome u CNS-u i poremećaje i steroidi deluju kao pozitivni modulatori na kompleks receptora gama-aminobuterne kiseline-hlorne jonofore (GABAA-R) i prema tome se zovu modulišući steroidi GABAAreceptora (GAMS).
[0004] Pokazano je da su određeni steroidi specifični pojačivači GABAAreceptora. Primeri ovih steroida mogu između ostalog da se nađu u WO 2008/063128. Neki od ovih steroida su potentni i pokazano je da npr. u farmakološkoj dozi imaju sposobnost za indukovanje amnezije, sedacije i anestezije. WO 99/45931 i WO 03/059357 prikazuju antagonističke efekte steroida. Wang et al.2000 (Acta Physiol Scand 169, 333-341) i Wang et al. 2002 (J Neurosci 22(9):3366-75) prikazuju antagonističke efekte 3β-OH-5α-pregnan-20-ona i drugih 3β-OH-5α/β pregnanskih steroida. WO2006/056794 i WO2010/144498 prikazuju upotrebu jedinjenja za lečenje dekompenzacije jetre, hepatične encefalopatije i portalne hipertenzije. Postoji potreba da se obezbede novi i efikasni terapeutski tretmani za hepatičnu encefalopatiju i za poremećaje koji su sa njom povezani.
Opis pronalaska
[0005] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije.
[0006] 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim pripada klasi jedinjenja koja su poznata pod imenom steroidni antagonisti koji moduliraju GABAA(GAMSAs).
[0007] Pronašli smo da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim može selektivno da inhibira pozitivnu modulaciju GABAAreceptora pomoću endogenih steroida kao što je alopregnanolon i tetrahidrodeoksikortikosteron (THDOC). Poznato je da ovi steroidi indukuju sedaciju, kognitivno narušavanje i motorne poremećaje, i njihova koncentracija u mozgu je povećana kod pacijenata sa hiperamonemijom koja se indukuje oboljenjem jetre i HE.
[0008] Međutim, takođe smo pronašli da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim nema antagonistički efekat prema dejstvu gama-aminobuterne kiseline (GABA) na GABAAreceptore. Ova iznenađujuća selektivnost predstavlja prednost sa aspekta bezbednosti kako inhibiranje vezivanja GABA za GABAAreceptore može da dovede do nepoželjnih efekata, uključujući konvulzije.
[0009] Osim toga, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim deluje i na α1 i α5 GABAApodtipove receptora i takođe može da ispolji pozitivni efekat na oba motorno i kognitivno oštećenje, i sedativni efekti koji nastaju iz prekomerne aktivacije GABAAreceptora. Pozitivni efekat 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima na motorno i kognitivno oštećenje je ilustrovan u dva životinjska modela HE (hiperamonemija i porto-kavnoj anastomozi kod pacova vidi u tekstu ispod).
[0010] Za razliku od postojećih tretmana za HE, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ne utiče na nivoe amonijaka in vivo. Prema tome, očigledno je da postoji potencijal za njegovu komplementarnu upotrebu u terapiji.
[0011] Prema tome, postoji dobra osnova da se veruje da je 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim posebno pogodan za treman HE i povezanih poremećaja.
Kratak opis nacrta
[0012]
Slika 1 pokazuje da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ne utiče na nivoe amonijka u krvi. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM 12 pacova po grupi, pri čemu su vrednosti koje se značajno razlikuju od kontrola naznačene zvezdicama; ***, p< 0,001. CV = kontrolni pacovi tretirani sa nosačem; HAV = hiperamonemični pacovi tretirani sa nosačem; HA+GAM = hiperamonemični pacovi tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
Slika 2 pokazuje da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim uspostavlja prostorno učenje hiperamonemičnih pacova u Radijalnom lavirintu. Slika pokazuje radne greške u radijalnom testu. Radne greške u bloku 1. Vrednosti su srednje vrednosti ± SEM 8 pacova po grupi. # p < 0,05 prema HAV. CV = kontolni pacovi koji su tretirani sa nosačem; HAV = hiperamonemični pacovi koji su tretirani sa nosačem; HA+GAM = hiperamonemični pacovi tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
Slika 3 pokazuje da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim, u testu Morisovog vodenog lavirinta (engl. Morris water maze), uspostavlja prostornu memoriju hiperamonemičnih pacova. Slika pokazuje da vreme da se nađe platforma u prvom danu ispitivanja dana 3. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM 8 pacova po grupi. HAV prema CV p = 0,052. CV = kontrolni pacovi tretirani sa nosačem; HAV = hiperamonemični pacovi tretirani sa nosačem; HA+GAM = hiperamonemični pacovi tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
Slika 4 pokazuje da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim uspostavlja motornu koordinaciju hiperamonemičnih pacova. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM 15 pacova po grupi. Vrednosti koje se značajno razlikuju od CV su naznačene *, p<0,05, vrednosti koje se značajno razlikuju od HAV su naznačene sa ###, p<0,001. CV = kontrolni pacovi tretirani sa nosačem; HAV = hiperamonemični pacovi tretirani sa nosačem; HA+GAM = hiperamonemični pacovi tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
Slika 5 pokazuje ukupne koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi. Ukupne koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi kod kontrolnih i hiperamonemičnih pacova 4 i 23 časova posle subkutane injekcije 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima u petom danu i tokom poslednje nedelje tretmana sa dnevnim injekcijama. HA= Hipermamonemične životinje.
Slika 6 obezbeđuje nevezane* koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u mozgu u kontrolnim i hiperamonemičnim pacovima 1-2 časova posle s.c. injekcije 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima posle sedam nedelja sa dnevnim injekcijama koncentracije 20 mg/kg.
*Nevezana koncentracija u mozgu = frakcija 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u mozgu koji nije vezan za proteinski nosač ili tkivo mozga.
Slika 7 obezbeđuje reprezentativna elektrofiziološka merenja koja pokazuju tetrahidrodeoksikortikosteronom (THDOC) pojačanu aktivaciju α1β2γ2L GABAAreceptora. HEK-293 ćelije koje eksprimiraju α1β2γ2L GABAAreceptore su izložene 30 µM GABA ili 30 µM GABA plus 100 nM THDOC 40 ms. Sa THDOC postoji 20 s pre-inkubacija pre primene THDOC GABA.
Slika 8 obezbeđuje reprezentativna elektrofiziološka merenja koja pokazuju 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksim (GAMSA) antagonizam THDOC pojačane aktivacije α1β2γ2L i α5β3γ2L GABAAreceptora i bez inhibicije GABA. A) 1 µM 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim antagonizam 100 nM THDOC pojačane aktivacije 30 µM GABA sa α1β2γ2L GABAAreceptorom, B) 1 µM 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ne antagonizuje 30 µM GABA aktivaciju α1β2γ2L GABAAreceptora C) 1 µM 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim antagonizam 200 nM THDOC pojačane aktivacije 0,3 µM GABA sa α5β3γ2L GABAAreceptorom; indikuje antagonizam THDOC efekta D) 1 µM 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ne antagonizuje 0,3 µM GABA aktivaciju α5β3γ2L GABAAreceptora.
Slika 9 ilustruje sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da uspostavi motornu koordinaciju kod hiperamonemičnih i PCS pacova. Motorna koordinacija se procenjuje upotrebom testa hodanja preko grede. (A) pokazuje da podaci za kontrolne (CV) ili hiperamonemične pacove (HAV) tretirane sa nosačem i za hiperamonemične pacove tretirane sa 3 (HA3), 10 (HA10) ili 20 (HA20) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom. (B) pokazuje podatke za lažno operisane kontrole (SM) PCS pacove tretirane sa nosačem i za PCS pacove tretirane sa 0,7 (PCS0.7) ili 2.5 (PCS2.5) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM broja pacova indikovanih ispod svakog stubića. Vrednosti koje se značajno razlikuju od kontrolnih ili lažno tretiranih pacova su naznačene zvezdicama. Vrednosti koje se značajno razlikuju od hiperamonemičnih ili PCS pacova koji su tretirani sa nosačima su naznačeni sa "a". * p< 0,05; a p< 0,05; aa p< 0,01; aaa p< 0,001.
Slika 10 ilustruje sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da uspostavi prostornu memoriju u Morisovom vodenom lavirintu kod hiperamonemičnih i PCS pacova. Memorija za prostorno učenje u Morisovom vodenom lavirintu se ispituje kod kontrolnih (CV) ili hiperamonemični (HAV) pacova koji su tretirani sa nosačem i za hiperamonemične pacove koji su tretirani sa 3 (HA3), 10 (HA10) or 20 (HA20) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom (A, B) i kod lažno operisanih kontrola (SM) ili PCS pacovima koji su tretirani sa nosačem i za PCS pacove koji su tretirani sa 0,7 (PCS0.7) ili 2,5 (PCS2.5) mg/kg 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom (C,D). (A,C) Kašnjenja u bekstvu (u sekundama) da bi se dostigla platforma tokom različitih sesija. (B,D) Vreme provedeno (%) u ispravnom kvadrantu tokom memorijskog testa. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM broja pacova naznačenih ispod svakog stubića. Vrednosti koje se značajno razlikuju od kontrolnih ili lažno tretiranih pacova su naznačene zvezdicama. Vrednosti koje se značajno razlikuju od hiperamonemičnih ili PCS pacova tretiranih sa nosačem su naznačene pomoću "a". * p< 0,05; a p< 0,05.
Slika 11 ilustruje sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da uspostavi prostorno učenje u radijalnom lavirintu kod hiperamonemičnih i PCS pacova. Prostorno učenje u radialnom lavirintu se ispituje u kontrolnim (CV) ili hiperamonemičnim (HAV) pacovima koji su tretirani sa nosačem i za hiperamonemične pacove koji su tretirani sa 3 (HA3), 10 (HA10) ili 20 (HA20) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom (A, B) i u lažno operisanim kontrolama (SM) ili PCS pacovima koji su tretirani sa nosačima i za PCS pacove koji su tretirani sa 0.7 (PCS0.7) ili 2.5 (PCS2.5) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom (C,D). (A,C) Radne greške tokom različitih sesija. (B,D) Radne greške u danima 1-2. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM broja pacova indikovanih ispod svakog stubića. Vrednosti koje su značajno različite od kontrolnih ili lažno tretiranih pacova su naznačene zvezdicama. Vrednosti koje su značajno različite od hiperamonemičnih ili PCS pacova koji su tretirani sa kontrolom su naznačene sa "a". * p< 0,05; a p< 0,05; aa p<0,01.
Slika 12 ilustruje sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da poveća spontanu motornu aktivnost tokom noći i delo uspostavi cirkadijalni ritam PCS pacova. Motorna aktivnost se ispituje u lažno operisanim kontrolama (SM) ili PCS pacovima koji su tretirani sa nosačem ili sa 0.7 (PCS0.7) ili 2.5 (PCS2.5) mg/kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom. Motorna aktivnost tokom svakog sata je prikazana pod A; odnos aktivnosti tokom noći i tokom dana u B i ukupne aktivnosti tokom dana ili noći u C. Svetla su isključena u 7:00 pm. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM 8 pacova po grupi. Vrednosti koje se značajno razlikuju od SM pacova su naznačene zvezdicama; * p< 0,05; ** p< 0,01; *** p< 0,001. Vrednosti koje se značajno razlikuju od PCS pacova su naznačene sa a; a p< 0,05.
Slika 13 ilustruje sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da normalizuje vertikalnu aktivnost tokom dana i da delimično uspostavi cirkadijalni ritam kod PCS pacova. Eksperiment se izvodi kao što se opisuje za Sliku 12 ali su prikazana vertikalna brojanja. Vrednosti su srednja vrednost ± SEM 8 pacova po grupi. Vrednosti koje se značajno razlikuju od SM pacova su naznačene zvezdicama; * p< 0,05; ** p< 0,01; *** p< 0,001. Vrednsti koje se značajno razlikuju od PCS pacova su naznačene sa a; a p< 0,05; aa p<0,01.
Slika 14 pokazuje izloženost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimu u plazmi i u mozgu tokom vremena ispitivanja ponašanje, kod hiperamonemičnih i PCS pacova. U A) hiperamonemičnim pacovima i B) PCS pacovima, ukupne koncentracije 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi su prikazane u µM. U C) hiperamonemičnim pacovima i D) PCS pacovima, koncentracije nevezanog 3a-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u mozgu su prikazane u nmol/kg. Primetite slična izlaganja u različitim modelima pacova sa upotrebljenim dozama, kod hiperamonemičnih pacova 3, 10 i 20 mg/kg/danu i u pacovima sa PCS 0,7 i 2,5 mg/kg/danu. Podaci su sa kraja ispitivanja, tj. Posle devet nedelja dnevnih tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom u susamovom ulju koje se daje s.c. jednom dnevno.
[0013] Pre nego što se predmetni pronalazak detaljno opiše, treba razumeti da terminologija koja se ovde koristi se koristi samo za svrhu opisivanja posebnih izvođenja i nije namenjena da bude ograničavajuća.
[0014] Primećuje se da, kao što se koristi u ovoj specifikaciji i priloženim zahtevima, oblici u jednini takođe uključuju reference množine osim ukoliko kontekst jasno ne ukazuje drugačije.
[0015] Termin "farmaceutska kompozicija" se koristi u njegovom najširem smislu, pri čemu obuhvata sve farmaceutski primenjive kompozicije koje sadrže najmanje jednu aktivnu supstancu i po potrebi nosače, adjuvanse, rastvarače, konstituente itd.
[0016] Termini "davanje" i "način davanja" kao i "put davanja" se takođe koriste u njihovom najširem smislu.
[0017] Jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim što se koristi u skladu sa pronalaskom može da se daje brojnim načinima koji uglavnom zavise od toga da li za lečenje stanja hepatične encefalopatije najviše odgovara lokalni, topikalni ili sistemski način davanja. Ovi različiti načini davanja su na primer topikalni (npr., na koži), lokalni (uključujući oftamološki i na različitim mukoznim membranama, na primer vaginalnom i rektalnom isporukom), oralni, parenteralni ili pulmonarni, uključujući gornje i donje respiratorne puteve. Priprema takvih kompozicija i formulacija je generalno poznata stručnjacima iz oblasti tehnike u farmaceutskim i oblastima za formulacije i može da se primeni na formulaciju kompozicije iz predmetnog pronalaska.
[0018] Sa terminom "antagonist" je označena supstanca koja ometa drugu supstancu, agonist, da indukuje njegov efekat. U ovoj prijavi termini antagonist i blokator se koriste naizmenično.
[0019] Sa terminom "Tip A hepatične encefalopatije" je obično nazačena hepatična encefalopatija koja je povezana sa akutnom inuficijencijom jetre, koja je uglavnom povezana sa cerebralnim edemom.
[0020] Sa terminom " Tip B hepatične encefalopatije " je obično nazačena hepatična encefalopatija (premošćavanjem) koje je prouzrokovano portnim-sistemskim šantom bez povezane intrinzične bolesti jetre.
[0021] Sa terminom "Tip C hepatična encefalopatija" je obično naznačena hepatična encefalopatija koja se pojavljuje kod pacijenata sa cirozom – ovaj tip je podeljen u epizodnu, trajnu i minimalnu encefalopatiju.
[0022] Sa terminom "minimalna hepatična encefalopatija" je obično naznačena hepatična encefalopatija koja ne vodi do klinički manifestne kognitivne disfunkcije, ali može da se pokaže neuropsihološkim ispitivanjima.
[0023] Sa terminom "manifestna hepatična encefalopatija" je obično naznačena klinički vidljiva hepatična encefalopatija koja se manifestuje kao neuropsihijatrijski sindrom sa širokim spektrom mentalnih i motornih poremećaja. Manifestna hepatična encefalopatija može da se pojavi epizodično, u periodima u satima ili danima kod pacijenata koji su prethodno bili stabilni ili pacijenti mogu da imaju trajne neuropsihijatrijske abnormalitete.
[0024] Sa terminom "hiperamonemija" je obično naznačen metabilički poremećaj koji se karakteriše sa viškom amonijaka u krvi.
[0025] Sa terminom "transplantacija jetre" je obično naznačena hirurška procedura kojom se uklanja obolela jetra kao posledica npr. akutne insuficijencije jetre ili ciroze, i zamenjuje se sa zdravom jetrom iz donra. U većini operacija transplantacije jetre se koriste jetre iz pokojnih donora ali jetra takođe može da dođe od živog donora (deo jetre zdrave osobe). Pacijenti sa npr. cirozom obično prolaze korz hepatičnu encefalopatiju i preoperativna hepatična encefalopatija je značajan predskazivač neuroloških komplikazija posle transplantacije.
[0026] Sa terminom "akutna-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre" je obično naznačena akutna dekompenzacija ciroze, najmanje jedna insuficijencija organa, ili pripada podgrupi sa visokom kratkotrajnom stopom smrtnosti.
[0027] Sa terminom "kompenzovana ciroza" je obično naznačena ciroza jetre bez bilo kog kliničkog dokaza ali može da uključi asimptomatske varikse jednjaka ili varikse želudca i rane simptome kao što je umor i gubitak energije, gubitak apetita i gubitak težine, mučnina ili abdominalni bol.
[0028] Sa terminom "dekompenzovana ciroza" je obično naznačena uznapredovala ciroza jetre sa opsegom kliničkih dokaza kao što su žutica, asciti, edem, hepatična encefalopatija, gastrointestinalna hemoragija, portna hipertenzija, bakterijske infekcije, ili bilo koja njihova kombinacija.
[0029] Sa terminom "portna hipertenzija" je obično naznačen gradijent hepatičnog venskog pritiska koji prati cirozu jetre, sa ili bez udruženog transjugularnog intrahepatičnog porto-sistemskog odvoda (TIPS).
[0030] Sa terminom "prevencija" unutar ovog prikaza, je obično naznačena prevencija pojavljivanja bolesti ili stanja hepatične encefalopatije.
[0031] Sa terminom "ublažavanje" u ovom prikazu, je obično naznačeno smanjenje ili oslobođenje od bolesti ili poremećaja hepatične encefalopatije.
[0032] Pacijenti koji pate od hepatične encefalopatije mogu da pokazuju simptome uključujući, ali bez ograničenja, narušavanja ciklusa spavanja-buđenja, kognicije, memorije, učenja, motorne kooordinacije, svesti, smanjenih energetskih nivoa i promene ličnosti, kognitivnog narušavanja, dezorijantacije i kome.
[0033] Predmetni pronalazači su iznenađujuće pokazali da 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim može da bude koristan za lečenje hepatične encefalopatije.
[0034] U prvom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije.
[0035] U jednom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip A hepatične encefalopatije.
[0036] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip B hepatične encefalopatije.
[0037] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip C hepatične encefalopatije.
[0038] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je minimalna hepatična encefalopatija.
[0039] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je manifestna hepatična encefalopatija.
[0040] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuto jedinjenje za upotrebu je gde se pomenuta hepatična encefalopatija tretira kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre.
[0041] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuto jedinjenje za upotrebu je gde se pomenuta hepatična encefalopatija tretira kod pacijenta sa hroničnim oboljenjem jetre sa ili bez akutne-kahroničnoj insuficijenciji jetre.
[0042] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuto jedinjenje za upotrebu je za prevenciju ili ublažavanje hepatične encefalopatije, kao što je tip A hepatične encefalopatije, tip B hepatične encefalopatije, tip C hepatične encefalopatije, minimalne hepatične encefalopatije, manifestne hepatične encefalopatije, kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre, ili kod pacijenta sa hroničnim oboljenjem jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre.
[0043] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuto jedinjenje za upotrebu je obezbeđeno pre, tokom ili posle transplantacije jetre.
[0044] U drugom izvođenju pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata 3αetinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenu hepatične encefalopatije, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, ekscipijenata i/ili rastvarača.
[0045] Takođe je prikazano jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju portne hipertenzije. Pomenuta upotreba može takođe da bude prevencija ili ublažavanje portne hipertenzije. Pacijent sa portnom hipertenzijom obično pati od oboljenja jetre, kao što je hronično oboljenje jetre, ciroza ili akutna insuficijencija jetre.
[0046] Takođe je prikazan postupak za lečenje portne hipertenzije, koji obuhvata davanje farmaceutski efikasne količine 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pacijentu kome je potrebno. Pomenuti postupak može da bude u prevenciji ili ublažavanju portne hipertenzije. Pacijent sa portnom hipertenzijom obično pati od oboljenja jetre, kao što je hronično oboljenje jetre, ciroza ili akutna insuficijencija jetre.
[0047] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju dekompenzacije jetre. Pomenuta upotreba može takođe da bude prevencija ili ublažavanje dekompenzacije jetre. Pacijent sa dekompenzacijom jetre obično pati od oboljenja jetre, kao što je hronično oboljenje jetre ili se sumnja da ima događaj koji nagriza, kao što je gastrointestinalno krvarenje, infekcija, tromboza portne vene ili dehidracija.
[0048] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđena je upotreba jedinjenja 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u dobijanju leka za lečenje hepatične encefalopatije.
[0049] U jednom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip A hepatične encefalopatije.
[0050] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip B hepatične encefalopatije.
[0051] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je tip C hepatične encefalopatije.
[0052] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je minimalna hepatična encefalopatija.
[0053] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta hepatična encefalopatija je manifestna hepatična encefalopatija.
[0054] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta upotreba je gde se pomenuta hepatična encefalopatija tretira kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre.
[0055] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta upotreba je gde se pomenuta hepatična encefalopatija tretira kod pacijenta sa hroničnom insuficijencijom jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre.
[0056] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta upotreba je obezbeđena pre, tokom ili posle transplantacije jetre.
[0057] U drugom izvođenju pronalaska, pomenuta upotreba jedinjenja 3α-etinil-3-βhidroksiandrostan-17-on oksima, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u dobijanju leka, može da bude za prevenciju ili ublažavanje hepatične encefalopatije, kao što je tip A hepatične encefalopatije, tip B hepatične encefalopatije, tip C hepatične encefalopatije, minimalne hepatične encefalopatije, manifestne hepatične encefalopatije, kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre, ili kod pacijenta sa hroničnim oboljenjem jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre.
[0058] U drugom izvođenju ovog aspekta, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipijentima i ili rastvaračima. Pomenuta upotreba može takođe da bude u prevenciji ili ublažavanju hepatične encefalopatije.
[0059] Takođe je prikazano jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u inhibiranju ili lečenju simptoma koji su prouzrokovani hiperamonemijom.
[0060] Dalje izvođenje pronalaska je jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim za upotrebu u lečenju ili prevenciji hepatične encefalopatije, kao što je tip A hepatične encefalopatije, tip B hepatične encefalopatije, tip C hepatične encefalopatije, minimalne hepatične encefalopatije, manifestne hepatične encefalopatije, kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre, ili kod pacijenta sa hroničnim oboljenjem jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre; ppri čemu pomenuti tretman ili prevencija obuhvata istovremeno davanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, sa jedinjenjem koje snižava amonijak, kao što je rifaksimin, laktuloza, ornitin fenilacetat i glicerol fenilbutirat, poželjno jedinjenje koje snižava amonijak je rifaksimin ili laktuloza, i najpoželjnije jedinjenje koje snižava amonijak je rifaksimin.
[0061] Dalje izvođenje pronalaska je upotreba jedinjenja 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u dobijanju leka za lečenje ili prevenciju hepatične encefalopatije, kao što je tip A hepatične encefalopatije, tip B hepatične encefalopatije, tip C hepatične encefalopatije, minimalne hepatične encefalopatije, manifesne hepatične encefalopatije, kod pacijenta sa akutnom insuficijencijom jetre, ili kod pacijenta sa hroničnim oboljenjem jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj insuficijenciji jetre; pri čemu pomenuti tretman ili prevencija obuhvata istovremeno davanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, sa jedinjenjem koje snižava amonijak, kao što je rifaksimin, laktuloza, ornitin fenilacetat i glicerol fenilbutirat, poželjno jedinjenje koje snižava amonijak je rifaksimin ili laktuloza, i najpoželjnije, jedinjenje koje snižava amonijak je rifaksimin.
[0062] Dalji aspekt pronalaska je jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim, pri čemu jedan ili više atoma vodonika na svakom mogućem položaju supstituenta može da bude supstituisan deuterijumom ili tricijumom, za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije kao što je minimalna hepatična encefalopatija ili manifestna hepatična encefalopatija.
[0063] Dalji aspekt pronalaska je jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim, pri čemu jedan ili više atoma vodonika na svakom mogužem položaju supstituenta može da bude supstituisan deuterijumom ili tricijumom, za upotrebu testova koji uključuju određivanje koncentracije jedinjenja u tkivu ili tečnostima.
[0064] Prema predmetnom pronalasku, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim mogu da se daju preko jednog od sledećih načina davanja: intravenozno, nazalno, rektalno, bukalno, intravaginalno, perkutano, intramuskularno i oralno. Prema jednom izvođenju, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim se daje intavenozno. Prema drugom izvođenju, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim se daje nazalno. Perkutano davanje, upotrebom 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima koji je formulisan u obliku kreme, gela, i ulja ili u obliku sporo oslobađajućih adhezivnih medicinskih flastera, je drugi mogući oblik davanja, koji su slično pogodni za samostalno davanje lekova.
[0065] Farmaceutska kompozicija može da bude prilagođena ili podešena prema normalnim farmakološkim postupcima, koji obuhvataju efikasno farmaceutsko sredstvo u hemijskom obliku, koje je pogodno za odabrani način davanja, zajedno sa pogodnim adjuvansima, nosačima, rastvaračima i nosačima, koji se konvencionalno koriste i koji su dobro poznati stručnjacima iz oblasti tehnike. Adjuvansi i nosači koji se konvencionalno koriste za oralno davanje su naprimer sredstva za punjenje ili supsenziju ili sredstva za suspenziju kao što su titanijum dioksid, laktoza anhidrid, silicijum dioksid, koloidi silicijum dioksida, metilceluloza, magnezijum stearat, mikrokristalna celuloza i slično. Adjuvansi i nosači koji se konvencionalno koriste za intravenozno davanje su na primer sterilna voda za injekciju (WFI), sterilni puferi (na primer puferovanje rastvora do pH 7,4) rastvor albumina, lipidni rastvori, ciklodekstrini i slično. Adjuvansi i nosači koji se konvencionalno koriste za transdermalno davanje su na primer vazelin, tečni parafin, glicerol, voda, MCT ulje, susamovo ulje, biljna ulja i slično. Doza će se prirodno razlikovati u zavisnosti od načina davanja, posebnog stanja koje se leči ili željenog efekata, pola, starnosnog doba, težine i zdravstvenog stanja pacijenta, kao i mogućih drugih faktora, koji su procenjeni od strane lekara koji sprovodi lečenje.
[0066] Pronalazak će sada biti opisan brojnim ilustrativnim, ne-ograničavajućim primerima.
Primer 1.
Sinteza 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima
Korak 1: Sinteza 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-97-ona
[0067] 3,17-androstandion (5,0 mmol) je rastvoren u 50 mL suvog THF-a na sobnoj temperaturi (st) pod azotom. U kapima se dodaje etinil magnezijum bromid (1,1 ekviv) na st uz mešanje i rastvor se ostavlja na mešanju preko noći na st pod protokom azota. Rastvor se nakon toga gasi sa zasićenim NH4Cl(vod)i vodena faza se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 30 mL). Sakupljene organske faze isparavaju pod redukovanim pritiskom, i dobijeno ulje žute boje se rastvara u dihlorometanu, ispira sa slanim rastvorom i suši preko MgSO4. Rastvor se redukuje pod vakuumom, i ostatak se prečićava fleš hromatografijom na koloni od silike (1:4 dietiletar: dihlorometan), uobičajeni prinosi 65 mas %. Eventualni tragovi nusprodukata mogu da se uklone daljom rekristalizacijom iz dietiletra.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3-d6): δ 2.43 (s, 1H); 2.42 (m, 1H); 2.10-2.04 (m, 2H); 1.02 (m, 1H); 0.86 (s, 3H); 0.83 (s, 3H).
Korak 2: Sinteza 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima
[0068] 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on (10 mmol) je rastvoren u 5 mL dihlorometana i 50 mL etanola na sobnoj temperaturi i atmosferi vazduha, u balonu sa okruglim dnom zapremine 250 mL.4 ekviv. NH2OH hidrohlorida i 4 ekviv. natrijum acetata su rastvoreni u 5 mL H2O i zatim se dodaju u steroidni rastvor. Dodaje se 20 mL etanola i smeša je stavljena na refluks preko noći. Smeša je nakon toga ohlađena i rastvarač se uklanja pod redukovanim pritiskom. Ostatak bele boje se tretira sa 50 mL H2O i 50 mL dihlorometanom, vodena faza se ekstrahuje sa 3 x 30 mL dihlorometanom. Sakupljene organske faze se zatim suše preko MgSO4, cede i rastvarač se uklanja pod redukovanim pritiskom. Krajnji ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silike dihlorometanom: dietil etar 4:1, uobičajeni prinosi 95-100 % (kvantitativno).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3-d6): δ 2.51-2.47 (m, 2H); 2.43 (s, 1H); 1.00 (m, 1H); 0.80 (m, 1H); 0.90 (s, 3H), 0.83 (s, 3H).
Primer 2.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u životinjskom modelu hepatične encefalopatije
Tretman i raspored ispitivanja
[0069] U ovoj studiji se koristi životinjski model hronične hiperamonemije koji reprodukuje mnoge od kognitivnih i motornih promena koje su prisutne u hepatičnoj encefalopatiji. Pacovi su hranjeni sa amonijakom u hrani i posle dve nedelje ishrane sa hranom koja je obogaćena amonijakom razvili su simptome hepatične encefalopatije. Test hodanja na gredi je napravljen tokom 3-e i 4-e nedelje tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom dok test Morisovog vodenog lavirinta je napravljen tokom 4-5-e nedelje tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom i test radijalnog lavirinta je napravljen tokom 6-7-e nedelje tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
[0070] Studija je podeljena u dve serije sa životinjama (Wistar pacovi muškog pola), svake serije uključuju sledeće grupe; Kontrolne tretirane sa nosačem (CV, n=8 po serijama), Kontrolne tretirane sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom (C+GAM, n=8 po serijama), hiperamonemični pacovi tretirani sa nosačem (HAV, n=8 po serijama), hiperamonemični pacovi tretirani sa 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom (HA+GAM, n=8 po serijama). Jednom dnevno se izvodi tretman sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom na 20 mg/kg ili sa nosačem sa subkutanim injekcijama 1 ml/kg oko 9 a.m. Tretman počinje jednu nedelju posle početka sa ishranom koja sadrži amonijak i nastavlja se u celom eksperimentalnom periodu.
[0071] Prototipski proizvod 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima se priprema u obliku suspenzije u susamovom ulju na 20 mg/kg.
Prostorno učenje u Radijalnom lavirintu
[0072] Radijalni lavirint je dizajniran kao postupak kojim se ispituje prostorno učenje. Aparat se sastoji od centralne površine koja daje pristup osam krakova jednake veličine. Krakovi su dužine 70 cm i širine 10 cm i centralna površina je prečnika 30 cm. Lavirint je napravljen od crnog Perspex i uzdignut je 80 cm iznad poda. Svaki krak ima lateralne zidove sa visinom većom na bočnoj strani bliže centralnoj površini (30 cm) u odnosu na distalnu stranu (5 cm). U distalnom ekstremu svakog kraka, instalirana je udubljena čaša za pozicioniranje nagrade hranom (Hernandez-Rabaza V. et al 2010).
[0073] Da bi se pacovi navikli na lavirint, pacovima je omogućeno da istraže lavirint 10 minuta dva uzastopna dana u prisustvu udaljenih znakova (postera i objekata različite veličine), koji ostaju na mestu tokom treniranja.
[0074] Treniranje u radijalnom lavirintu se sastoji iz pet blokova svaki sa tri probe, koji se izvode tokom deset uzastopnih dana. Zadatak je bio da se lociraju četiri pelete, svaka postavljena na kraju različitog kraka prema slučajnoj konfiguraciji. Konfiguracije su specifične za svakog pacova i tokom treniranja se održavaju nepromenjivim. Broj prostornih referentnih grešaka i radne memorije su izračunati i izraženi kao broj referentne i radnih grešaka po bloku. Dodatno, indeks učenja se koristi za procenu učenja zadatka i definiše se kao broj ispravnih izbora-referentnim greškama (Hernandez-Rabaza et al.2010).
Rezultati
[0075] 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim je obnovio prostorno učenje hiperamonemičnih pacova u Radijalnom lavirintu. Hiperamonemični pacovi pokazuju smanjeno prostorno učenje i izvode više radnih grešaka u zadatku Radijalnog lavirinta. Prostorna memorija je u potpunosti obnovljena sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom (Slika 2).
Primer 3.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u životinjskom modelu hepatične encefalopatije
Tretman i raspored ispitivanja
[0076] Tretman i raspored ispitivanja su predstavljeni i primeru 2.
Prostorna memorija u Morisovom vodenom lavirintu
[0077] Lavirint je dizajniran kao postupak za ispitivanje prostornog učenja (Morris R. 1984). Test se izvodi upotrebom crnog kružnog bazena (160 cm prečnika, 40 cm visine) koji je proizvoljno podeljen u četiri kvadranta. Vodena neprozirnost se dobija dodavanjem crne boje. Providna Plexiglas platforma, 10 cm u prečniku, je potopljena 2 cm ispod površine vode na centar jednog kvadranta tokom sesija treninga (Monfort et al., European Journal of Neuroscience, 2007, 25, 2103-211).
[0078] Test se izvodi prema sledećem; prvi dan je dan pre treninga, pacovi se stavljaju u vodu dva puta samo na 30 s kako bi se prilagodili vodi. Zatim se pacovi treniraju da nauče fiksnu lokaciju nevidljive platforme tokom 3 dana. Svaka proba treninga uključuje postavljanje pacova u bazen okrenutog prema zidu ka jednom od tri kvadranta kojima nedostaje platforma. U svakoj probi se nasumično koriste različite početne tačke. Treniranje se sastoji iz pet plivanja dnevno. Svakoj životinji je omogućeno maksimalno 120 s pa pronađe platformu i ostavljena je 15 s na platformi, ukoliko pacov ne uspe da pronađe platformu tokom 120 s sprovodi se do platforme manuelno od strane osobe koja vrši eksperiment. Cilj ovog testa je da pacovi nauče gde je postavljena nevidljiva platforma i da je dostignu u najkraćem mogućem vremenu. Vreme, brzina i put koji su neophodni da se pronađe skrivena platforma je snimljen sistemom za video praćenje koji je obezbeđen od strane Viewpoint Company (Viewpoint 2.5, Champagne au Mont D’ Or, France) i koristi se kao mera učenja zadatka. Nakon 15 proba treniranja, platforma se uklanja iz bazena, pacovima je omogućeno plivanje 90 s u bazenu i snimljeno je vreme koje je provedeno u kvadrantu gde se platforma nalazi tokom treniranja.
Rezultati
[0079] 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim u potpunosti obnavlja prostornu memoriju hiperamonemičnih pacova u Morisovom vodenom lavirintu. Hiperamonemični pacovi pokazuju smanjenu memoriju i u odnosu na kontrole im je potrebno više vremena da pronađu platformu (Slika 3).
Primer 4.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u životinjskom modelu hepatične encefalopatije
Tretman i raspored testiranja
[0080] Tretman i raspored testiranja je predstavljen u primeru 2.
Motorna koordinacija u hodanju na gredi
[0081] U testu hodanja na gredi pacovi su trenirani da pređu uzdignuti, uski snop da dođu do zatvorene platforme za bekstvo. Greda je napravljena od glatkog okruglog drveta (prečnika 20 mm). Greda je uzdignuta 1 m fod poda. Parametri merenja motorne koordinacije su: iskliznuća stoplala (ili greške stopala) i kašnjenje u prelasku preko grede (Jover et al., 2006; Carter et al., 2010). Kako bi se pacov navikao, osoba koja izvodi eksperiment postavlja pacova na početak grede i pomaže pacovu da pređe grdu tri puta. Posle toga, test se sastoji iz tri uzastopne probe. Brojevi kada leva ili desna zadnja šapa skliznu sa grede se snimaju u svakoj probi ispitivanja.
Rezultati
[0082] 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim je u potpunosti povratio motornu ne-koordinaciju hiperamonemičnih pacova u testu hodanja na gredi. Hiperamonemični pacovi pokazuju motornu nekoordinaciju (povećan broj skliznuća = greške stopala) (Slika 4).
Primer 5.
Koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim u plazmi i moždanom tkivu posle egzogenog davanja
Dobijanje plazme
[0083] Krv je dobijena repa pacova (iz Primera 2) na kraju druge nedelje tretmana sa amonijakom i prve nedelje tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom i takođe iz vrata tokom žrtvovanja životinje. Da bi se plazma dobila dodat je EDTA 7,5 nM i centrifugiran na 1500 oum. tokom 5 minuta.
Određivanje amonijaka
[0084] Koncentracija amonijaka u uzorcima krvi se meri upotrebom Pocket chem BA (Woodley Equipment Company Ltd, United Kingdom), analizatora amonijaka. Uređaj omogućava trenutno ispitivanje i isporučuje rezultate u 3 minuta i 20 s. Takođe eliminiše potrebu za prethodnim obrađivanjem kao što je centrifugalno razdvajanje.
Žrtvovanje
[0085] Pacovi su žrtvovani dekapitacijom. Jedna polovina mozga uključujući mali mozak je sakupljena i konzervirana na -80°C za određivanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima. Izvršena je disekcija različitih oblasti mozga (mali mozak, korteks, hipokampus i strijatum) koji su konzervisani na -80°C za moguće određivanje GAMS.
Analiza koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima
[0086] Sakupljeni uzorci mozga i plazme su analizirani za koncentracije 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksima. Uzorci plazme i mozga su otopljeni na sobnoj temperaturi. Plazma je istaložena sa proteinom sa 3-puta zapremine acetonitrila i moždano tkivo se homogenizuje sa 1:4 razmerom tkiva: PBS (pH 7,4) i nakon toga se ekstrahuje sa 2-puta zapreminom metanola:acetonitrila (1:1) 20 min tokom sonifikacije. Nakon toga su uzorci potreseni i centrifugirani 10 min na 10000 x g (Heraeus Pico 17 centrifuga). Nakon toga je supernatant razblažen sa jednakom zapreminom PBS-a i zatim je analiziran. Neki uzorci su ponovo analizirani u 10-puta razblaženjima zbog previše visoke koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima. Razblaženja su napravljena sa rastvorom 37,5 mas% acetonitrila u PBS puferu.
[0087] Standardi su pripremljeni ubadanjem blank plazma/mozak homogenata u koncentracijama 0,5 - 5000 ng/ml i drugačije se tretiraju kao uzorci. Određivanje je napravljeno sa LC-MS.
Rezultati
[0088] Određivanje amonijaka: 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim nije uticao na nivoe amonijaka u krvi. Nivoi amonijaka u krvi su povećani kod pacova koji su hranjeni hranom koja sadrži amonijak (167±17 µM) u poređenju sa kontrolnim pacovima (47±3 µM). 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksim nije uticao na nivoe amonijaka kod kontrolnih pacova (55±7 µM) ili kod hiperamonemičnih pacova (139±15 µM) (Slika 1). Ovi rezultati su iznenađujući kako sve prethodne studije pokazuju efekat na simptome hepatične encefalopatije imaju smanjene nivoe amonijaka.
Određivanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima nakon izlaganja
[0089] U ovoj studiji ukupna koncentracija 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi se analizira u petom danu tretmana i poslednjoj nedelji tretmana sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima, četiri sata i 23 časova posle injekcije, redom. Koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi su prikazani na Slici 5 i kooncentracije u mozgu na Slici 6. U petom danu tretmana koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima su snižene 23 časova posle injekcije u odnosu na 4 časova posle injekcije, dok u poslednjoj nedelji tretmana slične koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksyandrostan-17-on oksima su pronađene redom i na 4 sata i 23 časova u obe grupe. U mozgu, slične koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima su pronađene u kontroli (91 ± 4,1 nmol/kg nevezano* 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima) i kod HA pacova (106 ± 15,4 nmol/kg nevezano* 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima), 1-2 h nakon poslednjeg tretmana (Sl. 6). Koncentracije pokazuju iznenađujuće visoke nivoe i stabilne koncentracije tokom 24 časova.
[0090] *Nevezana koncentracija u mozgu = frakcija 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u mozgu koja nije vezana za proteinski nosač ili tkivo mozga.
Primer 6.
Sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima da antagonizuje efekat THDOC ali ne GABA na GABAAreceptor.
Elektrofiziologija tehnikom nametnute voltaže na celoj ćeliji sa α1β2γ2L i a5β3y2L GABAAreceptorima
[0091] Za elektrofiziološka merenja Dynaflow® system sa Resolve čipom se koristi (Cellectricon, Göteborg, Sweden). HEK-293 ćelije su trajno transfektovane sa vektorima uključujući humani CMV promoter za konstitutivnu ekspresiju humanih α5, β3, i γ2L GABAAreceptorskih subjedinica (α5β3γ2L) ili humanih α1, β2, i γ2L GABAAreceptorskih subjedinica (α1β2γ2L). Korišćene ćelijske linije su odabrane prema dobrom reagovanju na GABA i na THDOC. Pre merenja ćelije su inkubirane 15 min na 37°C u 95% vazduhu 5% CO2u vanćelijskom rastvoru (EC) koji sadrži sledeće: 137 mM NaCl, 5,0 mM KCI, 1.0 mM CaCl2, 1,2 mM MgCl2, 10 mM HEPES, i 10 mM glukozu, 0,1 % DMSO pH 7,4. Prema tome odvojene ćelije se dodaju u EC rastvor u Dynaflow chip kupatilo.
[0092] Snimanja tehnikom nametnute voltaže na celoj ćeliji se izvode na sobnoj temperaturi (21-23°C, -17 mV sa kompenzacijom za potencijal tečne veze kao i u Haage et al., 2002; Neher, 1992). Generisani su komandni pulsevi i podaci su sakupljeni pomoću PClamp 9.0 softvera, DigiData 1322A konverter, i AxonPatch 200B (Axon Instruments, Foster City, CA). Patch elektrode (2-6 MΩ) su napunjene sa unutarćelijskim rastvorom (IC) uključujući: 140 mM Cs-glukonat, 3,0 mM NaCl, 1,2 mM MgCl2, 10 mM HEPES, 1,0 mM EGTA, 2 mM Mg-ATP, 0,1 % DMSO, pH 7,2.
[0093] THDOC i 3α-etinil-3β-hidroksandrostan-17-on oksim su rastvoreni u dimetil sulfoksidu (DMSO) i zatim su razblaženi sa EC rastvorom da ukljči 0,1% DMSO.
[0094] Različiti protokoli se koriste za različita elektrofiziološka merenja. Kao α1β2γ2L-GABAAreceptori in vivo su prisutni u sinapsi stanju koje je slično toj situaciji, korisi se kratka primena (40 ms) visoke GABA koncentracija (30 µM). Suprotno, α5β3γ2L-GABAAreceptori se nalaze vansinaptički, prema tome upotrebljeni uslovi su dugotrajna izlaganja (6 s) niskoj GABA koncentraciji (0,3 µM). Koncentracija EC75 THDOC je korišćena, tj. 100 nM sa studijama α1β2γ2L i 200 nM kada su procenjene ćelije koje eksprimiraju α5β3γ2L. Sa oba ćelijska tipa prethodno izlaganje sa THDOC ili THDOC plus 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim se koristi pre primene GABA.
[0095] Steroidni efekti u prisustvu GABA se normalizuju prema kontrolama da bi se izbegli efekti inter- i intraćelijskih varijacija u izmerenim parametrima, svaka ćelija se koristi kao svoja sopstvena kontrola i analizira se površina ispod krive (AUC).
Rezultat
[0096] Efekti 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na GABAAreceptor su ispitani sa elektrofiziološkim merenjima na rekombinovanim HEK293-ćelijama koje eksprimiraju humane varijante receptora.100 nM THDOC-pojaćana aktivacija α1β2γ2L GABAAreceptora u prisustvo GABA je prikazana na Sl 7.
[0097] 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim (1 µM) delom antagonizuje efekat THDOC i na α1β2γ2L i α5β3γ2L varijantama subjedinica GABAAreceptora (Slika 8 A i C). Sa α1β2γ2L receptorima 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim inhibira 29 ± 4,7 % THDOC pojačanje GABA (P< 0,001) i sa α5β3γ2L receptor inhibicije je 49 ± 4,7 % (P< 0,001, Tabela 1).
[0098] Suprotno, 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim (1 µM) ne antagonizuje GABA-aktivaciju GABAAreceptora (Sl 8 B i D). Ne postoji značajan efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na ili α1β2γ2L GABAAreceptoru (-3,1 ± 1,7 %, NS) ili α5β3γ2L GABAAreceptora (-3,8 ± 1,5 %, NS) kada je GABA jedini activator receptora (Tabela 1).
Tabela 1. Sposobnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima (GAMSA) da antagonizuje THDOC ali ne GABA na GABAAreceptor.
Primer 7.
Selektivnost 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima prema drugim ciljevima i receptorima.
[0099] Vezivanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima je određeno za receptore, jonske kanale i enzime, uključujući sve glavne klase neurotransmiterskih receptora. Ukupno 113 ciljeva su ispitani u duplikatu sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom na 10 µM (Perkin Elmer, Customized screen). Aktivnost vezivanja je definisana kao veća od ili jednaka sa 50% inhibicijom vezivanja liganda.
Rezultati
[0100] Na 10 µM 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ne pokazuje aktivnost vezivanja na bilo kojim ispitanim receptorima koji su u vezi sa neurotransmiterima, steroidnim receptorima, ili peptidnim receptorima.
Primer 8.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na motornu koordinaciju pacova sa HE i porto-kavnim anastomozama.
Tretman i raspored ispitivanja
[0101] Hronična hiperamonemija kod pacova. Wistar pacovi muškog pola (140-160 g) su napravljeni hiperamonemičnim preko davanja hrane koja sadrži amonijum acetat (30% po težini) (Felipo et al, European Journal of Biochemistry, 1988, 176, 567-571).
[0102] Porto-kavna anastomoza. Wistar pacovi muškog pola (220-240 g) su anestezirani sa izofluranom, i izvedena je kraj-na stranu porto-kavna anastomoza kao što je opisano od strane Lee i Fisher (Surgery, 1961, 50, 668-672). Kontrolni pacovi su lažno operisani; imali su portnu venu i donja šuplja vena je stegnuta u trajanju od 10 min.
[0103] Pacovi koji su podvrgnuti proceduri porto-kavne anastomoze su ovde naznačeni sa "PCS pacovi".
[0104] Preduzete su adekvatne mere da se životinjama minimalizuje osećaj bola i nelagode. Eksperimenti su odobreni od strane Comite de Experimentación y Bienestar Animal (CEBA) u našem centru i sprovedeni su u skladu sa vodičima Direktive evropske komisije (2010/63/EU) i španskog zakonodavsta (R.D.1201/2005) za brigu i održavanje eksperimentalnih životinja.
[0105] Tretman sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim u susamovom ulju se daje subkutanim injekcijama u leđa pacova, jednom dnevno. Dva različita skupa eksperimenata se izvode kod hiperamonemičnih pacova. U prvom skupu se koriste četiri grupe pacova: 1) kontrolni pacovi koji su injecirani sa nosačem; 2) hiperamonemični pacovi koji su injecirani sa nosalem; 3) kontrolni pacovi koji su injecirani sa 20 mg/Kg 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom i 4) hiperamonemični pacovi koji su injecirani sa 20 mg/Kg 3αetinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom.
[0106] Kontrolni pacovi injecirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom nisu uključeni posle toga zbog toga što kod ovih pacova nije pronađen relevantni efekat.
[0107] U drugom skupu eksperimenata je upotrebljeno pet grupa pacova: 1) kontrolni pacovi injecirani sa nosačem; 2) hiperamonemični pacovi injecirani sa nosačem i 3-5) hiperamonemični pacovi injecirani sa 3, 10 ili 20 mg/Kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom. U svakom eksperimentu je korišćeno 6-8 pacova po grupi.
[0108] Za eksprimente koji su koristili PCS pacove, korišćene su sledeće grupe pacova: 1) Lažno tretirani pacovi koji su injecirani sa nosačem; 2) PCS pacovi injecirani sa nosačem; 3-4) PCS pacovi injecirani sa 0,7 ili 2.5 mg/Kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom. Broj pacova koji je korišćen u svakom eksperimentu je ili prikazan na odgvarajućoj Slici ili se daje u opisu odgovarjuće Slike.
Statistička analiza.
[0109] Prikazani podaci su srednja vrednsot ±SEM broja pacova indikovanih na svakoj Slici. Statistički značaj se procenjuje sa dvosmernom ANOVA i Bonferonijevim naknadnim-testom i sa Studentovim ttestom kada se poredi samo jedan parameter. Analize se izvode upotrebom GraphPad PRISM softvera zaWindows (GraphPad softver Inc., La Jolla, CA, USA).
Motorna koordinacija. Test hodanja na gredi.
[0110] Motorna koordinacija se ispituje kao što je opisano od strane Gonzalez-Usano et al (ACS Chemical Neuroscience, 2014, 19, 5(2), 100-105) upotrebom drvene grede (prečnika 20 mm). Pacovi su napravljeni da prelaze jedan metar dugu drvenu gredu koja je locirana približno jedan metar iznad zemlje, i broj grešaka stopala (skliznuća) se beleži od strane dva posmatrača. Pacovi su trenirani za test tako što se navode da prelaze gredu do pet puta pre nego što su merenja zabeležena. Broj grešaka stopala (skliznuća) je mera motorne ne-koordinacije.
Rezultati
[0111] Pokazano je da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ponovo uspostavlja motornu koordinaciju i kod hiperamonemičnih i PCS pacova.
[0112] Hiperamonemični pacovi pokazuju motornu ne-koordinaciju u testu hodanja na gredi, sa većim (p<0,05) brojem skliznuća (1,4±0,1) u odnosu na kontrolne pacove (1,0±0,1). Tretman sa 3αetinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ponovo uspostavlje motornu koordinaciju kod hiperamonemičnih pacova (Sl. 9A). Efekti su statistički značajni za doze od 3 mg/kg (0,8±0,1 iskliznuća, p<0,05) i 20 mg/kg (0,78±0,07 iskliznuća, p<0,05).
[0113] PCS pacovi takođe pokazuju motornu ne-koordinaciju u testu hodanja na gredi, sa većim (p<0,01) brojem iskliznuća (1,2±0,1) u odnosu na lažno operisane kontrolne pacove (0,71±0,07). Tretman sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom takođe ponovo uspostavlja motornu koordinaciju kod PCS pacova (Sl.9B). Broj skliznuća za dozu od 0,7 mg/kg je 0,75±0,10 (p<0,05 prema PCS pacovima). Na 2,5 mg/Kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim takođe poboljšava motornu koordinaciju, vraćanjem Vrednosti slično do lažno tretirani pacova (0,8±0,1 skliznuća; p prema PCS pacovima = 0,058) (Sl.9B).
Primer 9.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na prostornu memoriju i prostorno učenje kod pacova sa HE i porto-kavnu anastomozu.
Tretman i raspored testiranja
[0114] Tretman i raspored testiranja su predstavljeni u Primeru 8.
Prostorna memorija i učenje u testu Morisovog vodenog lavirinta.
[0115] Test se izvodi kao što je opisano od strane Monfort et al. (European Journal of Neuroscience, 2007, 25, 2103-2111) upotrebom kružnog bazena (160 cm prečnika, 40 cm visine) koji je proizvoljno podelje u četiri kvadranta. Posle pre-treninga, pacovi su trenirani da nauče fiksnu lokaciju nevidljive platforme tokom 3 dana. Trening je obuhvatao postavljanje pacova u bazen prema zidu u jednom od tri kvadranta koji nemaju platformu. U svakom ispitivanju se koristi se koristi slučajno odabrana polazna tačka. Trening se sastojao iz tri plivanja po danu. Svakoj žvotinji je omogućeno maksimum 120 sekundi da pronađe platformu i ostavljena je 20 sekundi na platformi. Ukoliko pacov nije uspeoda locira platformu tokom 120 sekundi ručno je vođen do platforme od strane osobe koja izvodi eksperiment. Vreme koje potrebno da se pronađe skrivena platforma se manuelno beleži i koristi se kao mera učenja zadatka. Prostorna memorija je ispitana 24 časova kasnije uklanjanjem platforme i merenjem vremena koje je pacov proveo u kvadrantu gde se nalazi platforma.
Rezultati.
[0116] Pokazano je da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim ponovo uspostavlja prostornu memoriju u testu Morisovog vodenog lavirinta kod hiperamonemičnih i PCS pacova.
[0117] Hiperamonemični pacovi pokazuju smanjenu prostornu memoriju u Morisovom vodenom lavirintu. Sve grupe pacova su naučile da pronađu platformu i kašnjenje da je dostignu je smanjeno tokom tri dana treniranja (Sl. 10A). Sposobnost učenja je blago smanjena kod hiperamoneničnih pacova, kojima je bilo potrebno više vremena u odnosu na kontrolu da dostignu platformu.
[0118] Prostorna memorija je znaćajno smanjena (p<0,05) kod hiperamonemičnih pacova. U memorijskom testu hiperamonemičnim pacovima je ostalo manje vremena (30±2% vremena) u desnom kvadrantu u odnosu na kontrolne pacove (39±2% vremena). Tretman sa 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom je ponovo uspostavio prostornu memoriju u Morisovom vodenom lavirintu kod hiperamonemičnih pacova. Procenti vremena provedenog u ispravnom kvadrantu su redom 41±4, 42±5 i 38±3, za 3, 10 i 20 mg/kg doza (Sl.10B).
[0119] PCS pacovi takođe pokazuju smanjenu prostornu memoriju u Morisovom vodenom lavirintu. Sve grupe pacova su naučile da pronađu platformu i kašnjenje da je dostignu je smanjeno tokom tri dana treniranja (Sl. 10C). Prostorna memorija je značajno smanjena (p<0,05) kod PCS pacova. U memorijskom testu PCS pacovi su proveli manje vremena (31±3% vremena) u desnom kvadrantu u odnosu na kontrolne pacove (41±2% vremena). Tretman sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom je uspostavio prostornu memoriju u Morisovom vodenom lavirintu kod PCS pacova. Procenti vremena provedenog u ispravnom kvadrantu su redom 34±4 i 39±3, za 0,7 i 2,5 mg/kg doza (Sl.10D).
Primer 10.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim na prostorno učenje pacova sa HE i porto-kavnu anastomozu.
Tretman i raspored testiranja
[0120] Tretman i raspored testiranja su predstavljeni u Primeru 8.
Prostorno učenje u testu Radijalnog lavirinta.
[0121] Aparat je sastavljen od centralne površine koja ima pristup osam krakova jednakih veličina. Krakovi su 70 cm dužine i 10 cm širine i centralna površina je 30 cm u prečniku. Distalni kraj svakog kraka imaju čašu koja sadrži nagradu sa hranom. Pacovima je dozvoljeno da istraže lavirint 10 minuta u dva uzastopna dana u prisustvu distalnih znakova da bi se adaptirali na lavirint. Trening u radijalnom lavirintu se sastoji iz tri ispitivanja po danu u šest uzastopnih dana. Zadatak je bio da se lociraju četiri pelete, svaka postavljena na kraju različitog kraka prema slučajnoj konfiguraciji kao što je opisano od strane Hernandez-Rabaza et al. (Addiction Biology, 2010, 15, 413-423). Broj radnih memorijskih grešaka (posete kracima koji su već posećeni u istom ispitivanju) su zabeleženi i izraženi kao radne greške.
Rezultati
[0122] Pronađeno je da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim uspostavlja prostorno učenje u testu radijalnog lavirinta.
[0123] Hiperamonemični pacovi pokazuju smanjeno prostorno učenje u radijalnom lavirintu. Kao što je prikazano na Sl. 11A, broj radnih grešaka je veći kod hiperamonemičnih nego kod kontrolnih pacova u danima 1-3. Sve grupe pacova su naučile su danima treninga i razlika između kontrolnih i hiperamonemičnih pacova nije značajna posle dana 3. (Sl. 11A). Broj radnih grešaka u danima 1-2 je bio veći kod (p<0,05) hiperamoneničnih (18±3 grešaka) nego kod kontrolnih pacova (1161.5 grešaka). Hiperamonemični pacovi koji su tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom ponašali su se kao kontrole. Broj grešaka (koji nije značajno različit od kontrola) je redom 6,5±2,8, 8,8±1,9 i 12±2, za 3, 10 i 20 mg/kg doza (Sl.11B-C).
[0124] PCS pacovi takođe pokazuju smanjeno prostorno učenje u radijalnom lavirintu. Kao što je prikazano na Sl. 11C, broj radnih grešaka je bio veći kod PCS pacova u odnosu na lažno tretirane pacove u danima 1 i 2. Sve grupe pacova su naučile u danima treniranja i razlika između lažno tretiranih i PCS pacova nije bila značajna posla dana 3. (Sl.11C). Broj radnih grešaka u danima 1-2 (Sl.
11D) je veći (p<0,01) kod PCS pacova (22±2 greške) u odnosu na lažno tretirane pacove (10±2 greške). Tretman PCS pacova sa 0,7 mg/Kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom nije bio dovoljan da unapredi učinak u radijalnom lavirintu (23±2 greške). Tretman sa 2,5 mg/Kg je u potpunosti normalizovao učinak PCS pacova u radijalnom lavirintu (11±1 greške, p<0,05 prema PCS).
Primer 11.
Terapeutski efekat 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na cirkadijalne ritmove i noćnu motornu aktivnost kod PCS pacova.
Tretman i raspored testiranja
[0125] Tretman i raspored testiranja su predstavljeni u Primeru 8.
Cirkadijalni ritmovi spontane lokomotorne aktivnosti.
[0126] Motorna aktivnost je merena upotrebom aktimetra (Med Associates, S t. Albans, VT). Pacovi su individualno postavljeni u komoru za aktivnosti na otvorenom (43 x 43 x 31 cm), i motorna aktivnost je beležena kontinuirano tokom 14 dana u uslovima svetlost-mrak (L:D), 12h:12h. Podaci su beleženi u intervalima od 5 minuta. Motorna aktivnost je detektovana nizovima infracrvenih detektora pokreta, koji su postavljeni u tri pravca, x, y i z. Aparat je zabeležio jedan ambulantni broj kada je pacov prekinuo tri uzastopna infracervena detektora, u položaju x ili y. Vertikalni broj je zabeležen kada pacov prekine infracrvene detektore u z položaju. Softver dozvoljava merenje različitih parametara motorne aktivnosti, kao što su ambulatorna brojanja ili vertikalna brojanja (Ahabrach et al. Journal of Neuroscience Research, 2010, 88, 1605-14).
Rezultati.
[0127] Pronađano je da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim povećava spontanu motornu aktivnost tokom noći i da delimično obnavlja cirkadijalni ritam PCS pacova.
[0128] PCS pacovi pokazuju smanjenu motornu aktivnost (ambulatorna brojanja) tokom noći (aktivna faza pacova) pri čemu pokazuje 1849±176 brojanja, što je značajno niže (p<0,05) u odnosu na kontrolne pacove (4546±584 brojanja). 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim na 0,7 mg/kg blago povećava (p<0,05) aktivnost kod PCS pacova do 2652±275 brojanja. 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksim na 2,5 mg/kg ne pogađa ambunlatona brojanja (2235±170 brojanja 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima) (Sl.12A i 12C).
[0129] Odnos ambulatorne aktivnosti tokom noći prema aktivnosti tokom dana je smanjen kod PCS pacova, što je indikacija izmenjenog cirkadijalnog ritma (Sl.12B). Za kontrolne pacove ovaj odnos je 3.3±0.4 i smanjen je (p<0,001) kod PCS pacova do 0.8±0.16. PCS pacovikoji su tretirani sa 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom pokazali su delimično ali značajno poboljšanja (p<0,05) u odnosu aktivnosti noći/danu, pri čemu dostiže 1.7±0.2 i 1.6±0.3 za redom 0,7 i 2,5 mg/kg (Sl. 12B). Ovo indukuje delimično obnavljanje aktivnosti cirkadijalnog ritma.
[0130] Takođe je pronađeno da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim normalizuje vertikalnu aktivnost tokom dana i da delom obnavlja cirkadijalni ritam PCS pacova.
[0131] PCS pacovi pokazuju smanjenu vertikalnu aktivnost tokom noći (aktivna faza pacova) pri čemu pokazuju 561±108 brojanja, što je značajno niže (p<0,05) nego kod kontrolnih pacova (1228±138 brojanja). 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim na 0,7 mg/kg ili 2,5 mg/kg ne utiče na vetikalnu aktivnost tokom noći (redom 664±121 i 695±185 brojanja) (Sl.12A i 12C).
[0132] Suprotno, PCS rpacovi pokazuju povećanu vertikalnu aktivnost tokom dana pri čemu pokazuju 682±114 brojanja, što je značajno (p<0,05) više nego kod kontrolnih pacova (391±64 brojanja). 3αetinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim na 0,7 mg/kg ili 2.5 mg/kg u potpunosti normalizuje vertikalnu aktivnost tokom dana, pri čemu dostiže redom 339±47 i 424±44 brojanja. (Sl.12A i 12C).
[0133] Odnos vertikalne aktivnosti tokom noći prema aktivnosti tokom dana je takođe smanjen kod PCS pacova, što indikuje izmenjeni cirkadijalni ritam (Sl. 12B). Za kontrole ovaj odnos je 3.7±0.6 i smanjen je kod (p<0,001) PCS pacova do 0,8±0,01. PCS pacovi koji su tretirani sa 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom pokazuju delimično ali ne značajno poboljšanje (p<0,01) u odnosu aktivnosti noći/dana, pri čemu dostiže 2,1±0,4 i 1,9±0,6 za redom 0,7 i 2,5 mg/kg (Sl. 12B). Ovo indukuje delimično obnavljanje cirkadijalnog ritma vertikalne aktivnosti.
Primer 12.
Efekat tretmana 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na koncentraciju amonijaka u krvi kod hiperamonemičnih i PCS pacova.
Tretman i raspored testiranja
[0134] Tretman i raspored testiranja su kao što je predstavljeno u Primeru 8.
Određivanje amonijaka.
[0135] Amonijak u krvi se meri upotrebom kita II Arkray testa za amonijak (PocketChem BA, Arkray) upotrebom 20 µL sveže krvi prema specifikacijama proizvođača.
Rezultati
[0136] Nije pronađano da 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim utiče na nivoe amonijaka kod hiperamonemičnih i PCS pacova.
[0137] Nivoi amonijaka u krvi su povećani (p<0,001) kod hiperamonemičnih pacova 167±16 µM u poređenju sa kontrolama (47±3 µM). Tretman sa 20 mg/Kg 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom nije uticao na nivoe amonijaka kod hiperamonemičnih pacova (139±14 µM).
[0138] Slični rezultati su dobijeni kod PCS pacova. NIvoi amonijaka u krvi su povećani (p<0,001) kod PCS pacova (348±27 µM) u poređenju sa lažno tretiranim pacovima (125 ± 31 µM). Tretman sa 3αetinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimom nije uticao na amonijak u krvi, koji je ostao na 302 ± 30 i 294 ± 37 µM kod PCS pacova koji su redom tretirani sa 0,7 i 2,5 mg/Kg 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimom.
Primer 13.
Koncentracija 3α-Etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi i tkivu mozga kod hiperamonemičnih i PCS pacova posle perioda tretmana.
Tretman i raspored testiranja
[0139] Tretman i raspored testiranja su kao što je predstavljeno u Primeru 8.
Analiza izlaganja 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksimu.
[0140] Na kraju perioda tretmana plazma je sakupljena iz repne vene, i nakon žrtvovanja dekapitacijom mozgovi su sakupljeni i odmah zamrznuti na suvom ledu. Za analizu izlaganja 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima, tkivo mozga je homogenizovano sa 1:4 razmerom tkiva: PBS (pH 7,4) i zatim ekstrahovano sa 2-strukom zapreminom metanol:acetonitril (1:1), dok je plazma istaložena za protin sa 3-strukom zapreminom sa acetonitrilom. Analize su sprovedene od strane Waters ACQUITY UPLC Waters XEVO-TQS trostrukog kvadrupolskog masenog spektrometra (Admescope Oy, Oulu, Finska). Za računanja količine izlaganja slobodnom 3α-etinil-3βhidroksiandrostan-17-on oksimu u mozgu frakcija nevezanog (Fub) u homogenatima mozga je određena dijalizom, Fubu HA = 0,70 i Fubu PCS = 1,43% (Admescope Oy, Oulu, Finska).
Rezultati
[0141] Kod hiperamonemičnih pacova jednom dnevno davanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima na 3, 10 i 20 mg/Kg dovodi do dozno zavisnog izlaganja i u plazmi i u tkivu mozga. U vremenu testiranja ponašanja ukupne koncentracije 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima u plazmi su redom bile 0,34 ± 0,03, 1,08 ± 0,11, 1,95 ± 0,61 μM, redom, i u tkivu mozga koncentracije nevezanog 3α-etinil-3-β-hidroksiandrostan-17-on oksima su redom 6,1 ± 1,4, 11,6 ± 1,4, 23 ± 5 nmol/kg (Sl 14A).
[0142] Takođe kod PCS pacova izlaganja su bila zavisna od doze sa nižim dozama koje su korišćene kod ovih pacova, 0,7 i 2,5 mg/Kg, izlaganja su veoma slična onima kod hiperamonemičnih pacova. Ukupne koncentracije u plazmi su redom bile 0,48 ± 0,09, i 1,64 ± 0,30 μM, na 0,7 i 2,5 mg/kg/danu, i nevezane koncentracije u mozgu su redom bile 6,18 ± 0,97, i 17 ± 2 nmol/kg, u vremenu za ispitivanje ponašanja.

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksim
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije.
  2. 2. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu lečenje obuhvata prevenciju hepatične encefalopatije.
  3. 3. Jedinjenje za upotrebu, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuta hepatična encefalopatija je minimalna hepatična encefalopatija.
  4. 4. Jedinjenje za upotrebu, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuta hepatična encefalopatija je manifestna hepatična encefalopatija.
  5. 5. Jedinjenje za upotrebu, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuta hepatična encefalopatija je tip A hepatične encefalopatije.
  6. 6. Jedinjenje za upotrebu, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuta hepatična encefalopatija je tip B hepatične encefalopatije.
  7. 7. Jedinjenje za upotrebu, prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, pri čemu pomenuta hepatična encefalopatija je tip C hepatične encefalopatije.
  8. 8. Jedinjenje za upotrebu, prema bilo kom od zahteva 1 do 7, pri čemu se pomenuo jedinjenje daje pacijentu koji ima akutnu insuficijenciju jetre.
  9. 9. Jedinjenje za upotrebu, prema bilo kom od zahteva 1 do 7, pri čemu se pomenuo jedinjenje daje pacijentu koji ima hronično oboljenje jetre sa ili bez akutne-ka-hroničnoj inuficificijenciji jetre.
  10. 10. Jedinjenje za upotrebu, prema bilo kom od zahteva 1 do 9, pri čemu je pomenuto jedinjenje obezbeđeno ranije, tokom ili posle transplantacije jetre.
  11. 11. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 10, pri čemu treman sadrži istovremeno davanje 3α-etinil-3β-hidroksiandrostan-17-on oksima sa jedinjenjem koje snižava količinu amonijaka.
  12. 12. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 11, pri čemu jedinjenje koje snižava količinu amonijaka se bira iz grupe koja se sastoji od rifaksimina, laktuloze, ornitin fenilacetata i glicerol fenil butirata.
  13. 13. Jedinjenje za upotrebu prema zahtevu 11 ili zahtevu 12, pri čemu jedinjenje koje snižava količinu amonijaka se bira iz grupe koja se sastoji od rifaksimina i laktuloze.
  14. 14. Jedinjenje za upotrebu prema bilo kom od zahteva 11 do 13, pri čemu jedinjenje koje snižava količinu amonijaka je rifaksimin.
  15. 15. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje kao što se definiše prema zahtevu 1, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipijensima i/ili rastvaračima, za upotrebu kao što se definiše u bilo kom od zahteva 1 do 14.
RS20190234A 2014-01-29 2015-01-14 Steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije RS58375B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE1450089 2014-01-29
EP15705691.2A EP3099306B1 (en) 2014-01-29 2015-01-14 Steroid compound for use in the treatment of hepatic encephalopathy
PCT/GB2015/050060 WO2015114308A1 (en) 2014-01-29 2015-01-14 Steroid compound for use in the treatment of hepatic encephalopathy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS58375B1 true RS58375B1 (sr) 2019-03-29

Family

ID=52544513

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190234A RS58375B1 (sr) 2014-01-29 2015-01-14 Steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije

Country Status (25)

Country Link
US (3) US20160339040A1 (sr)
EP (1) EP3099306B1 (sr)
JP (1) JP6543633B2 (sr)
KR (1) KR102324667B1 (sr)
CN (2) CN106163528A (sr)
AU (1) AU2015212606B2 (sr)
BR (1) BR112016017620A2 (sr)
CA (1) CA2935015C (sr)
CY (1) CY1121464T1 (sr)
DK (1) DK3099306T3 (sr)
ES (1) ES2714563T3 (sr)
HR (1) HRP20190251T1 (sr)
HU (1) HUE042242T2 (sr)
IL (1) IL246496B (sr)
LT (1) LT3099306T (sr)
ME (1) ME03351B (sr)
MX (1) MX2016008851A (sr)
PL (1) PL3099306T3 (sr)
PT (1) PT3099306T (sr)
RS (1) RS58375B1 (sr)
RU (1) RU2684616C2 (sr)
SI (1) SI3099306T1 (sr)
SM (1) SMT201900133T1 (sr)
TR (1) TR201901687T4 (sr)
WO (1) WO2015114308A1 (sr)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3099306T3 (en) 2014-01-29 2019-03-18 Umecrine Cognition Ab STEROID RELATIONSHIP TO USE IN THE TREATMENT OF HEPATIC ENCEPHALOPATHY
TWI748936B (zh) 2015-01-12 2021-12-11 瑞典商優鎂奎認知Ａｂ公司 新穎化合物
US10278977B2 (en) 2016-06-06 2019-05-07 Umecrine Cognition Ab Methods for treating hypersomnolence
EP3668927B1 (en) 2017-09-12 2024-03-20 ETH Zurich Transmembrane ph-gradient polymersomes for the quantification of ammonia in body fluids
CN111432805B (zh) * 2017-11-27 2023-02-17 梅克里内科尼蒂翁公司 3α-乙炔基-3β-羟基雄甾烷-17-酮肟的药物制剂
EP4079307A1 (en) * 2021-04-20 2022-10-26 Umecrine Cognition AB New medical use
US20230134958A1 (en) * 2021-10-29 2023-05-04 Umecrine Cognition Ab New medical treatment
EP4389129A1 (en) 2022-12-22 2024-06-26 Umecrine Cognition AB 3a-ethynyl-3beta hydroxyandrostan 17-one oxime for treating parkinson's disease and l-dopa-induced dyskinesia
WO2025252725A1 (en) 2024-06-04 2025-12-11 Umecrine Cognition Ab Novel pharmaceutical formulation of golexanolone
WO2025252724A1 (en) 2024-06-04 2025-12-11 Umecrine Cognition Ab Novel pharmaceutical formulation of golexanolone

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2713061A (en) 1951-04-06 1955-07-12 Schering Ag 3-methyl androstanes
FR1463755A (fr) 1960-01-26 1966-07-22 Nouveaux stéroïdes de la série de l'androstane et leur procédé de préparation
US3173932A (en) 1962-11-02 1965-03-16 American Cyanamid Co 15-substituted estra-1, 3, 5(10)-trienes
FR2685332A1 (fr) 1991-12-20 1993-06-25 Roussel Uclaf Nouveaux 19-nor sterouides ayant en position 11beta une chaine thiocarbonee, leur procede de preparation et les intermediaires et leur application a titre de medicaments.
AU698834B2 (en) 1993-05-24 1998-11-12 Purdue Pharma Ltd. Methods and compositions for inducing sleep
JP3877961B2 (ja) 1998-03-11 2007-02-07 ベクストルム，トルビエーン Ｃｎｓ疾患の治療におけるエピアロプレグナノロン
WO2002100877A1 (en) 2001-06-11 2002-12-19 Southwest Foundation For Biomedical Research Novel 2-alkoxyestradiol analogs with antiproliferative and antimitotic activity
GB0129260D0 (en) 2001-12-06 2002-01-23 Eisai London Res Lab Ltd Pharmaceutical compositions and their uses
SE0104423D0 (sv) * 2001-12-27 2001-12-27 Umecrine Ab Pregnane steroids and their use in the treatment of CNS disorders
JP5116479B2 (ja) 2004-11-26 2013-01-09 ユーシーエル ビジネス ピーエルシー オルニチンならびにフェニルアセテートまたはフェニルブチレートを含む、肝性脳症を治療するための組成物
WO2007103162A2 (en) * 2006-03-01 2007-09-13 Samaritan Pharmaceuticals, Inc. Structure based drug design of steroidogenesis inhibitors
WO2008063128A1 (en) * 2006-11-21 2008-05-29 Umecrine Ab The use of pregnane and androstane steroids for the manufacture of a pharmaceutical composition for the treatment of cns disorders
GB0711948D0 (en) * 2007-06-20 2007-08-01 Bionature E A Ltd Neurosteriod compounds
CN101585862B (zh) * 2008-05-20 2014-12-17 梅克芳股份公司 甾族化合物
ES2770308T3 (es) * 2008-10-02 2020-07-01 Salix Pharmaceuticals Ltd Procedimientos de tratamiento de encefalopatía hepática
US20120157526A1 (en) 2009-06-08 2012-06-21 Ucl Business Plc Treatment of portal hypertension and restoration of liver function using l-ornithine phenylacetate
EP3019074B1 (en) 2013-09-30 2018-08-29 Horizon Therapeutics, LLC Diagnosing, grading, monitoring, and treating hepatic encephalopathy
DK3099306T3 (en) 2014-01-29 2019-03-18 Umecrine Cognition Ab STEROID RELATIONSHIP TO USE IN THE TREATMENT OF HEPATIC ENCEPHALOPATHY

Also Published As

Publication number Publication date
CY1121464T1 (el) 2020-05-29
CA2935015A1 (en) 2015-08-06
DK3099306T3 (en) 2019-03-18
RU2016127558A3 (sr) 2018-09-27
WO2015114308A1 (en) 2015-08-06
PT3099306T (pt) 2019-03-21
BR112016017620A2 (pt) 2017-08-08
SMT201900133T1 (it) 2019-05-10
US20180015103A1 (en) 2018-01-18
RU2684616C2 (ru) 2019-04-10
CN113185566A (zh) 2021-07-30
PL3099306T3 (pl) 2019-06-28
ES2714563T3 (es) 2019-05-29
AU2015212606B2 (en) 2019-11-21
US9801894B2 (en) 2017-10-31
AU2015212606A1 (en) 2016-07-14
NZ721622A (en) 2020-11-27
US20160339040A1 (en) 2016-11-24
CA2935015C (en) 2022-05-31
US20170056416A1 (en) 2017-03-02
US10342804B2 (en) 2019-07-09
RU2016127558A (ru) 2018-03-05
CN106163528A (zh) 2016-11-23
KR20160105922A (ko) 2016-09-07
TR201901687T4 (tr) 2019-02-21
IL246496B (en) 2019-09-26
IL246496A0 (en) 2016-08-31
EP3099306A1 (en) 2016-12-07
WO2015114308A8 (en) 2016-07-21
JP6543633B2 (ja) 2019-07-10
KR102324667B1 (ko) 2021-11-10
JP2017507113A (ja) 2017-03-16
LT3099306T (lt) 2019-03-12
ME03351B (me) 2019-10-20
SI3099306T1 (sl) 2019-03-29
EP3099306B1 (en) 2018-12-12
MX2016008851A (es) 2017-03-23
HRP20190251T1 (hr) 2019-04-05
HUE042242T2 (hu) 2019-06-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RS58375B1 (sr) Steroidno jedinjenje za upotrebu u lečenju hepatične encefalopatije
JP6266587B2 (ja) Ｃｂ１受容体のアンタゴニスト
Smith et al. Pregnenolone sulfate as a modulator of synaptic plasticity
JP2017507113A5 (sr)
JP6876047B2 (ja) ミトコンドリアの活性酸素種（ｒｏｓ）産生に関連する疾患の治療のための化合物
JP2023525570A (ja) 肝障害の併用処置
Fang et al. In vivo inhibition of neuropeptide FF agonism by BIBP3226, an NPY Y1 receptor antagonist
Harvey et al. Rapid responses to aldosterone in the kidney and colon
NZ721622B2 (en) Steroid compound for use in the treatment of hepatic encephalopathy
HK1228753B (en) Steroid compound for use in the treatment of hepatic encephalopathy
HK1228753A1 (en) Steroid compound for use in the treatment of hepatic encephalopathy
Capasso et al. Functional Interference of Dexamethasone on Some Morphine Effects: Hypothesis for the Steroid-Opioid Interaction: An Updated
AU2018434358A1 (en) Allosteric modulators of the mu opioid receptor
Nardi et al. Recent developments in the pharmacology of epithelial Ca2+-activated K+ channels
Kacher Role of the cholesterol hydroxylase enzyme CYP46A1 in cholesterol metabolism and neuroprotection in Huntington's disease
Kinter et al. The Vasopressin Antagonist Sk&F 105494 Inhibits Desmopressin-Stimulated Clotting Factor Release in Vivo
Farb Conor C. Smith, Terrell T. Gibbs &
Harvey et al. Victoria McEneaney, Warren Thomas