RS57306B1 - Inhibitori dnk-pk - Google Patents

Description

Opis

TEHNIČKA OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja korisna kao inhibitori DNK-zavisne protein kinaze (DNK-PK). Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutski prihvatljive kompozicije koje sadrže jedinjenja pronalaska i kompozicije za upotrebu u lečenju kancera.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Jonizujuće zračenje (IR) indukuje različita oštećenja DNK od kojih su dvolančani prekidi (DSB) najcitotoksičniji. Ovi DSB mogu da vode ćelijskoj smrti putem apoptoze i/ili mitotičke katastrofe ako se ne poprave brzo i u potpunosti. Pored IR, određena hemioterapijska sredstva, uključujući inhibitore topoizomeraze II, bleomicin i doksorubicin, takođe izazivaju DSB. Ova oštećenja DNK predstavljaju okidač za složeni set signala u mreži odgovora na oštećenje DNK, čija je uloga da poprave oštećenu DNK i očuvaju vijabilnost ćelija i stabilnost genoma. U sisarskim ćelijama, dominantni put popravke za DSB je put nehomologog spajanja krajeva (NHEJ). Ovaj put funkcioniše bez obzira na fazu ćelijskog ciklusa i ne zahteva obrazac za ponovno spajanje pokidanih krajeva DNK. NHEJ zahteva koordinaciju mnogih proteina i signalnih puteva. Srž NHEJ sistema se sastoji od heterodimera Ku70/80 i katalitičke subjedinice DNK-zavisne protein kinaze (DNK-PKcs), koji zajedno čine aktivni enzimski kompleks DNK-PK. DNK-PKcs je član familije serin/treonin protein kinaza, fosfatidilinozitol 3-kinaza-povezanih kinaza (PIKK), koja obuhvata i ataksija–teleangiektazija–mutirani (ATM) protein, ataksija–teleangiektazija i Rad3-povezani (ATR) protein, mTOR, i četiri izoforme PI3K. Međutim, iako je DNK-PKcs u istoj familiji protein kinaza kao ATM i ATR, ove druge kinaze funkcionišu tako što popravljaju oštećenje DNK putem homologe rekombinacije (HR) i ograničene su na S i G2faze ćelijskog ciklusa. Dok ATM takođe ostvaruje svoju ulogu na mestima gde se nalaze DSB, ATR je angažovana na mestima jednolančanih prekida DNK.

[0003] Smatra se da se NHEJ odvija kroz tri ključna koraka: prepoznavanje DSB, obradu DNK kako bi se uklonili krajevi koji ne mogu da se vežu ili drugi oblici oštećenja na krajevima, i najzad ligaciju krajeva DNK. Prepoznavanje DSB se izvodi vezivanjem Ku heterodimera za neravne krajeve DNK nakon čega sledi privlačenje dva molekula DNK-PKcs na susedne strane DSB; ovo služi da zaštiti pokidane krajeve dok se ne angažuju dodatni enzimi za obradu. Nedavni podaci podržavaju hipotezu da DNK-PKcs fosforiliše enzim za obradu, Artemis, kao i samu sebe da bi pripremila krajeve DNK za dodatnu obradu. U nekim slučajevima DNK polimeraza može da bude potrebna da sintetiše nove krajeve pre koraka ligacije. Smatra se da autofosforilacija DNK-PKcs indukuje konformacionu promenu koja otvara centralnu šupljinu za vezivanje DNK, oslobađa DNK-PKcs sa DNK, i olakšava krajnju ponovnu ligaciju krajeva DNK.

[0004] Već neko vreme poznato je da su DNK-PK<-/->miševi hipersenzitivni na delovanje IR i da neki neselektivni mali molekulski inhibitori DNK-PKcs mogu da radiosenzitizuju razne tumorske ćelijske tipove sa širokim setom genetskih osnova. Iako je očekivano da će inhibicija DNK-PK radiosenzitizovati normalne ćelije u određenom stepenu, ova pojava je zapažena u manjem stepenu nego kod tumorskih ćelija, verovatno zbog činjenice da tumorske ćelije imaju više bazalne nivoe endogenog replikativnog stresa i oštećenja DNK (onkogenom-indukovani replikativni stres), i da su mehanizmi za popravku DNK manje efikasni u tumorskim ćelijama. Što je najvažnije, kombinacijom DNK-PK inhibitora, uz nedavni napredak u preciznoj dostavi fokusiranog IR, uključujući slikom kontrolisanu RT (IGRT) i intenzitetom zračenja modulisanu RT (IMRT), biće ostvaren poboljšani terapeutski prozor sa većim poštedom normalnog tkiva.

[0005] Inhibicija aktivnosti DNK-PK indukuje dejstva i u ćelijama koje se nalaze, i koje se ne nalaze u ćelijskom ciklusu. Ovo je veoma značajno budući da većina ćelija u solidnom tumoru nije u stanju aktivne replikacije u bilo kom datom trenutku, što ograničava efikasnost mnogih sredstava koja ciljno deluju na ćelijski ciklus. Jednako zanimljivi su skorašnji izveštaji koji sugerišu snažnu povezanost između inhibicije NHEJ puta i sposobnosti da se ubiju tradicionalno radiorezistentne kancerske stem ćelije (CSC). U nekim tumorskim ćelijama je pokazano da DSB u dormantnim CSC pretežno aktivira popravku DNK posredstvom NHEJ puta; veruje se da su CSC obično u fazi mirovanja ćelijskog ciklusa. Ovo može da objasni zašto polovina pacijenata sa kancerom može da doživi lokalni ili distalni recidiv tumora uprkos lečenju, budući da aktuelne strategije nisu u stanju da efikasno ciljno deluju na CSC. Inhibitor DNK-PK može da ima sposobnost da senzitizuje ove potencijalne metastatske progenitorske ćelije na delovanje IR i odabranih DSB-indukujućih hemioterapijskih sredstava.

[0006] S obzirom na učestvovanje DNK-PK u procesima popravke DNK, primena specifičnih DNK-PK inhibitornih lekova podrazumevala bi da oni deluju kao sredstva koja će poboljšati efikasnost hemoterapije, kao i radioterapije kancera. Prema tome, bilo bi poželjno razviti jedinjenja korisna kao inhibitori DNK-PK.

WO 2005/026129 se odnosi na 4,6-disupstituisana aminopirimidinska jedinjenja za upotrebu u lečenju različitih poremećaja.

WO 02/20500 se odnosi na jedinjenja za upotrebu u inhibiciji DNK-zavisne protein kinaze.

REZIME PRONALASKA

[0007] Nađeno je da su jedinjenja ovog pronalaska, i njihove farmaceutski prihvatljive kompozicije, efikasna kao inhibitori DNK-PK. Prema tome, pronalazak predstavlja jedinjenja opšte formule:

koja je uže definisana u patentnim zahtevima,

ili farmaceutski prihvatljivu so pomenutih jedinjenja, pri čemu je svaki od R1, Q, prstena A, i prstena B kao što je ovde definisano.

[0008] Pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje uključuju jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans, ili vehikulum. Ova jedinjenja i farmaceutske kompozicije su korisna za lečenje ili smanjivanje ozbiljnosti kancera.

[0009] Jedinjenja i kompozicije obezbeđene ovim pronalaskom su takođe korisna za ispitivanje DNK-PK u biološkim i patološkim fenomenima; ispitivanje unutarćelijskog prenosa signala posredovanog takvim kinazama; i uporednu procenu novih inhibitora kinaze.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Definicije i opšta terminologija

[0010] Kako se ovde koriste, primenjuju se sledeće definicije osim ukoliko nije drugačije naznačeno. U svrhu ovog pronalaska, hemijski elementi su identifikovani u skladu sa periodnim sistemom elemenata, CAS verzija, i Handbook of Chemistry and Physics, 75th Ed.

1994. Dodatno, opšti principi organske hemije opisani su u „Organic Chemistry“, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, i „March’s Advanced Organic Chemistry“, 5th Ed., Smith, M.B. i March, J., eds. John Wiley & Sons, New York: 2001.

[0011] Kao što je ovde opisano, jedinjenja prema pronalasku mogu izborno da budu supstituisana sa jednim ili više supstituenata, kao što su oni koji su uopšteno ilustrovani gore u tekstu, ili kao što je predstavljeno određenim klasama, podklasama i vrstama prema pronalasku. Jasno je da se izraz „izborno supstituisan“ koristi međusobno zamenljivo sa izrazom „supstituisan ili nesupstituisan“. Uopšteno, pojam „supstituisan“, bez obzira da li mu je prethodio pojam „izborno“, ili ne, odnosi se na zamenu jednog ili više radikala vodonika u datoj strukturi radikalom naznačenog supstituenta. Osim ako nije drugačije naznačeno, izborno supstituisana grupa može da ima supstituent na svakom položaju u grupi koji može da bude supstituisan. Kada više od jednog položaja u datoj strukturi može da bude supstituisano sa više od jednog supstituenta odabranog iz naznačene grupe, supstituent može da bude ili isti, ili različit na svakom položaju.

[0012] Kao što je ovde opisano, kada pojam „izborno supstituisan“ prethodi spisku, pomenuti pojam odnosi se na sve naredne supstitutabilne grupe na tom spisku. Na primer, ako je X halogen; izborno supstituisan C1-3alkil ili fenil; X može da bude ili izborno supstituisan alkil ili izborno supstituisan fenil. Slično, ako pojam „izborno supstituisan“ sledi nakon spiska, navedeni pojam odnosi se na sve supstitutabilne grupe na prethodnom spisku osim ako nije drugačije naznačeno. Na primer: ako je X halogen, C1-3alkil, ili fenil, gde je X izborno supstituisan sa JX , tada i C1-3alkil i fenil može da bude izborno supstituisan sa JX . Kao što je poznato nekome sa prosečnim znanjem u ovoj oblasti, grupe kao što su H, halogen, NO2, CN, NH2, OH, ili OCF3ne bi bile uključene jer nisu supstitutabilne grupe. Kao što je takođe očigledno stručnjaku u oblasti, heteroarilni ili heterociklični prsten koji sadrži NH grupu može da bude izborno supstituisan zamenom vodonikovog atoma supstituentom. Ako radikal ili struktura supstituenta nije identifikovana ili definisana kao „izborno supstituisana“, radikal ili struktura supstituenta je nesupstituisana.

[0013] Kombinacije supstituenata predviđene ovim pronalaskom su poželjno one koje rezultuju u obrazovanju stabilnih ili hemijski izvodljivih jedinjenja. Pojam „stabilna“, kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja se suštinski ne menjaju kada se podvrgnu uslovima koji omogućavaju njihovu proizvodnju, detekciju, i, poželjno, njihovo izdvajanje, prečišćavanje, i upotrebu u jednu ili više svrha koje su ovde opisane. U nekim primerima izvođenja, stabilno jedinjenje ili hemijski izvodljivo jedinjenje je ono koje se suštinski ne menja kada se čuva na temperaturi od 40°C ili manje, u odsustvu vlage ili drugih hemijski reaktivnih uslova, najmanje nedelju dana.

[0014] Pojam „alkil“ ili „alkil grupa“, kako se ovde koristi, označava ugljovodonični lanac pravog lanca (tj., nerazgranat) ili razgranat, supstituisan ili nesupstituisan, koji je potpuno zasićen. Osim ako nije drugačije naznačeno, alkil grupe sadrže 1-8 atoma ugljenika. U nekim primerima izvođenja, alkil grupe sadrže 1-6 atoma ugljenika, i u drugim primerima izvođenja, alkil grupe sadrže 1-4 atoma ugljenika (predstavljene kao „C1-4alkil“). U drugim primerima izvođenja, alkil grupe se karakterišu kao „C0-4alkil“ predstavljajući ili kovalentnu vezu ili C1-4alkil lanac. Primeri alkil grupa uključuju metil, etil, propil, butil, izopropil, izobutil, sek-butil i terc-butil. Pojam „alkilen“, kako se ovde koristi, predstavlja divalentnu ugljovodoničnu grupu zasićenog pravog ili razgranatog lanca i predstavljen je metilenom, etilenom, izopropilenom i slično. Pojam „alkiliden“, kako se ovde koristi, predstavlja divalentnu alkil vezujuću grupu pravog lanca. Pojam „alkenil“, kako se ovde koristi, predstavlja monovalentnu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca koja sadrži jednu ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza. Pojam „alkinil“, kako se ovde koristi, predstavlja monovalentnu ugljovodoničnu grupu pravog ili razgranatog lanca koja sadrži jednu ili više ugljenik-ugljenik trostrukih veza.

[0015] Pojam „cikloalkil" (ili „karbocikl“) odnosi se na monociklični C3-C8ugljovodonik ili biciklični C8-C12ugljovodonik koji je potpuno zasićen i ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula, i gde bilo koji pojedinačni prsten u navedenom bicikličnom prstenastom sistemu ima 3-7 članova. Pogodne cikloalkil grupe uključuju, ali nisu ograničene na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil.

[0016] Pojam „heterocikl“, „heterociklil“, „heterocikloalkil“, ili „heterociklični“ kako se ovde koristi odnosi se na monociklični, biciklični, ili triciklični prstenasti sistem u kome bar jedan prsten u sistemu sadrži jedan ili više heteroatoma, koji su isti ili različiti, i koji je potpuno zasićen ili koji sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti, ali koja nije aromatična, i koji ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula. U nekim primerima izvođenja, „heterocikl“, „heterociklil“, „heterocikloalkil“, ili „heterociklična“ grupa ima tri do četrnaest članova prstena u kome je jedan ili više članova prstena heteroatom nezavisno odabran od kiseonika, sumpora, azota, ili fosfora, i svaki prsten u sistemu sadrži 3 do 8 članova prstena.

[0017] Primeri heterocikličnih prstenova uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće monocikle: 2-tetrahidrofuranil, 3-tetrahidrofuranil, 2-tetrahidrotiofenil, 3-tetrahidrotiofenil, 2-morfolino, 3-morfolino, 4-morfolino, 2-tiomorfolino, 3-tiomorfolino, 4-tiomorfolino, 1-pirolidinil, 2-pirolidinil, 3-pirolidinil, 1-tetrahidropiperazinil, 2-tetrahidropiperazinil, 3-tetrahidropiperazinil, 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 1-pirazolinil, 3-pirazolinil, 4-pirazolinil, 5-pirazolinil, 1-piperidinil, 2-piperidinil, 3-piperidinil, 4-piperidinil, 2-tiazolidinil, 3-tiazolidinil, 4-tiazolidinil, 1-imidazolidinil, 2-imidazolidinil, 4-imidazolidinil, 5-imidazolidinil; i sledeće bicikle: 3-1H-benzimidazol-2-on, 3-(1-alkil)-benzimidazol-2-on, indolinil, tetrahidrokvinolinil, tetrahidroizokvinolinil, benzotiolan, benzoditian, i 1,3-dihidroimidazol-2-on.

[0018] Pojam „heteroatom“ se odnosi na jedan ili više kiseonika, sumpora, azota, ili fosfora, uključujući bilo kakav oksidovani oblik azota, sumpora, ili fosfora; kvaternizovani oblik bilo kog baznog azota; ili supstituisani azot heterocikličnog prstena, na primer N (kao u 3,4-dihidro-2H-pirolilu), NH (kao u pirolidinilu) ili NR+ (kao u N-supstituisanom pirolidinilu).

[0019] Pojam „nezasićeni“, kako se ovde koristi, označava da fragment ima jednu ili više jedinica nezasićenosti.

[0020] Pojam „alkoksi“, ili „tioalkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu, kao što je prethodno definisano, povezanu sa glavnim ugljeničnim lancem preko atoma kiseonika („alkoksi“) ili sumpora („tioalkil“).

[0021] Pojmovi „haloalkil“, „haloalkenil“, i „haloalkoksi“ označavaju alkil, alkenil, ili alkoksi, kao što to može da bude slučaj, supstituisan sa jednim ili više halogenih atoma. Pojam „halogen“ označava F, Cl, Br, ili I.

[0022] Pojam „aril“ korišćen sam, ili kao deo većeg fragmenta kao u „aralkil“, „aralkoksi“, ili „ariloksialkil“, odnosi se na monociklični, biciklični, ili triciklični karbociklični prstenasti sistem koji ima ukupno šest do četrnaest članova prstena, gde navedeni prstenasti sistem ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula, bar jedan prsten u sistemu je aromatičan, i gde svaki prsten u sistemu sadrži 4 do 7 članova prstena. Pojam „aril“ može da bude korišćen međusobno zamenljivo sa pojmom „arilni prsten“. Primeri arilnih prstenova uključuju fenil, naftil i antracen.

[0023] Pojam „heteroaril“, korišćen sam, ili kao deo većeg fragmenta kao u „heteroaralkil“, ili „heteroarilalkoksi“, odnosi se na monociklični, biciklični, ili triciklični karbociklični prstenasti sistem koji ima ukupno šest do četrnaest članova prstena, gde navedeni prstenasti sistem ima jednu tačku vezivanja za ostatak molekula, bar jedan prsten u sistemu je aromatičan, bar jedan prsten u sistemu sadrži jedan ili više heteroatoma nezavisno odabranih od azota, kiseonika, sumpora ili fosfora, i gde svaki prsten u sistemu sadrži 4 do 7 članova prstena. Pojam „heteroaril“ može da bude korišćen međusobno zamenljivo sa pojmom „heteroarilni prsten“ ili pojmom „heteroaromatičan“.

[0024] Sledeći primeri heteroarilnih prstenova uključuju sledeće monocikle: 2-furanil, 3-furanil, N-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, 5-imidazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 5-oksazolil, N-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidinil, 4-pirimidinil, 5-pirimidinil, piridazinil (npr., 3-piridazinil), 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, tetrazolil (npr., 5-tetrazolil), triazolil (npr., 2-triazolil i 5-triazolil), 2-tienil, 3-tienil, pirazolil (npr., 2-pirazolil), izotiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,3-triazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, pirazinil, 1,3,5-triazinil, i sledeće bicikle: benzimidazolil, benzofuril, benzotiofenil, indolil (npr., 2-indolil), purinil, kvinolinil (npr., 2-kvinolinil, 3-kvinolinil, 4-kvinolinil), i izokvinolinil (npr., 1-izokvinolinil, 3-izokvinolinil, ili 4-izokvinolinil).

[0025] Kao što je ovde opisano, veza nacrtana od supstituenta do centra prstena u sistemu sa više prstenova (kao što je dole prikazano) predstavlja supstituciju supstituentom na bilo kom supstitutabilnom položaju u bilo kom od prstenova u sistemu sa više prstenova. Na primer, struktura a predstavlja moguću supstituciju na bilo kom od položaja prikazanih u strukturi b.

[0026] Ovo se takođe primenjuje na sisteme sa više prstenova fuzionisane za izborne prstenaste sisteme (koji bi bili predstavljeni tačkastim linijama). Na primer, u strukturi c, X je izborni supstituent i za prsten A i za prsten B.

[0027] Ako, međutim, od dva prstena u sistemu sa više prstenova svaki ima drugačije supstituente nacrtane iz centra svakog prstena, tada, osim ako nije drugačije naznačeno, svaki supstituent predstavlja samo supstituciju na prstenu za koji je vezan. Na primer, u strukturi d, Y je izborni supstituent samo za prsten A, i X je izborni supstituent samo za prsten B.

[0028] Pojam „zaštitna grupa“, kako se ovde koristi, predstavlja one grupe koje su namenjene da zaštite funkcionalnu grupu, kao što je, na primer, alkoholna, amino, karboksil, karbonil, itd., od nepoželjnih reakcija tokom postupaka sinteze. Zaštitne grupe koje se uobičajeno koriste opisane su u Greene and Wuts, Protective Groups In Organic Synthesis, 3rd Edition (John Wiley & Sons, New York, 1999). Primeri grupa za zaštitu azota uključuju acil, aroil, ili karbamil grupe kao što su formil, acetil, propionil, pivaloil, t-butilacetil, 2-hloroacetil, 2-bromoacetil, trifluoroacetil, trihloroacetil, ftalil, o-nitrofenoksiacetil, α-hlorobutiril, benzoil, 4-hlorobenzoil, 4-bromobenzoil, 4-nitrobenzoil i hiralne pomoćnike kao što su zaštićene ili nezaštićene D, L ili D, L-aminokiseline kao što su alanin, leucin, fenilalanin i slično; sulfonil grupe kao što su benzensulfonil, p-toluensulfonil i slično; karbamatne grupe kao što su benziloksikarbonil, p-hlorobenziloksikarbonil, p-metoksibenziloksikarbonil, pnitrobenziloksikarbonil, 2-nitrobenziloksikarbonil, p-bromobenziloksikarbonil, 3,4-dimetoksibenziloksikarbonil, 3,5-dimetoksibenziloksikarbonil, 2,4-dimetoksibenziloksikarbonil, 4-metoksibenziloksikarbonil, 2-nitro-4,5-dimetoksibenziloksikarbonil, 3,4,5-trimetoksibenziloksikarbonil, 1-(p-bifenilil)-1-metiletoksikarbonil, α,α-dimetil-3,5-dimetoksibenziloksikarbonil, benzhidriloksikarbonil, tbutiloksikarbonil, diizopropilmetoksikarbonil, izopropiloksikarbonil, etoksikarbonil, metoksikarbonil, aliloksikarbonil, 2,2,2,-trihloroetoksikarbonil, fenoksikarbonil, 4-nitrofenoksi karbonil, fluorenil-9-metoksikarbonil, ciklopentiloksikarbonil, adamantiloksikarbonil, cikloheksiloksikarbonil, feniltiokarbonil i slično, arilalkil grupe kao što su benzil, trifenilmetil, benziloksimetil i slično i silil grupe kao što je trimetilsilil i slično. Poželjne N-zaštitne grupe su formil, acetil, benzoil, pivaloil, t-butilacetil, alanil, fenilsulfonil, benzil, t-butiloksikarbonil (Boc) i benziloksikarbonil (Cbz).

[0029] Osim ako nije drugačije prikazano ili navedeno, ovde prikazane strukture takođe su namenjene da uključuju sve izomerne (npr., enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione)) oblike strukture; na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, (Z) i (E) izomere dvostruke veze, i (Z) i (E) konformacione izomere. Prema tome, pojedinačni stereohemijski izomeri kao i enantiomerne, dijastereomerne i geometrijske (ili konformacione) smeše predmetnih jedinjenja pripadaju obimu pronalaska. Jedinjenja koja su nacrtana sa definisanim stereohemijskim centrima, obično upotrebom šrafirane ( ) ili podebljane ( ) veze, su stereohemijski čista, ali sa apsolutnom stereohemijom koja je i dalje nedefinisana. Takva jedinjenja mogu da imaju ili R ili S konfiguraciju. U onim slučajevima u kojima je apsolutna konfiguracija određena, hiralni centar/centri su obeleženi sa (R) ili (S) na crtežu.

[0030] Osim ako nije drugačije navedeno, svi tautomerni oblici jedinjenja prema pronalasku pripadaju obimu pronalaska. Dodatno, osim ako nije drugačije navedeno, ovde prikazane strukture takođe su namenjene da uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo po prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju predmetne strukture osim zamene vodonika deuterijumom ili tricijumom, ili zamenu ugljenika ugljenikom obogaćenim sa<13>C ili<14>C pripadaju obimu ovog pronalaska. Takva jedinjenja su korisna, na primer, kao analitički alati, probe u biološki ogledi, ili kao DNK-PK inhibitori sa poboljšanim terapijskim profilom.

Opis jedinjenja pronalaska

[0031] U jednom aspektu, pronalazak prikazuje jedinjenja formule:

koja je uže definisana u patentnim zahtevima,

ili farmaceutski prihvatljivu so pomenutih jedinjenja, gde

Q je N ili CH;

R1 je vodonik, CH3, CH2CH3, ili R1 i ugljenik za koji je vezan obrazuje C=CH2grupu;

1

Prsten A je prstenasti sistem odabran od

Ċ

RA1 je vodonik, halogen, C1-4alkil, C0-4alkil-C3-6cikloalkil, C0-4alkil-ORA1a, C0-4alkil-SRA1a, C0-4alkilC(O)N(RA1a)2, C0-4alkil-CN, C0-4alkil-S(O)-C1-4alkil, C0-4alkilS(O)2-C1-1b

4alkil, C0-4alkil-C(O)ORA1b, C0-4alkilC(O)C1-4alkil, C0-4alkil-N(RA )C(O)RA1a, C0-4alkil-N(RA1b)S(O)2RA1a, C0-4alkil-N(RA1a)2, C0-4alkil-N(RA1b)(3-6-člani-cikloalkil), C0-4alkil-N(RA1b)(4-6-člani heterociklil), N(R<A1b>)C2-4alkil-N(RA1a)2, N(RA1b)C2-4alkil-ORA1a, N(RA1b)C1-4alkil-(5-10-člani helteroaril), N(RA1b)C1-4alkil-(4-6-člani heterociklil), N(RA1b)C2-4alkil-N(RA1b)C(O)RA1a, C0-4alkil-N(RA1b)C(O)C1-4alkil, C0-4alkil-N(RA1b)C(O)OC1-4alkil, C0-4alkil-(fenil), C0-4alkil-(3-10-člani heterociklil), C0-4alkil-C(O)-(4-6-člani heterociklil), C0-4alkilO-C0-4alkil-(4-6-člani heterociklil), C0-4alkil-(5-6-člani-heteroaril), C0-4alkil-C(O)-(5-6-člani heteroaril), C0-4alkil-O-C0-4alkil-(5-6-člani heteroaril), C0-4alkil-N(RA1a)(4-6-člani heterociklil), ili C0-4alkil-N(RA1b)(5-6-člani heteroaril), gde je svaki od navedenih RA1 heterociklil, prstenasti sistem odabran od aziridinil, oksetanil, tetrahidropiran, tetrahidrofuranil, dioksanil, dioksolanil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, pirolidindionil, morfolinil, piperidinil, piperazinil, piperazinonil, tetrahidrotiofenedioksidil, 1,1-dioksotietanil, 2-oksa-6-azaspiro[3.4]oktanil, ili izoindolinonil, gde je svaki od navedenih RA1 heteroaril, prstenasti sistem odabran od furanil, tiofenil, imidazolil, benzoimidazolil, oksazolil, oksadiazolil, tiazolil, pirazolil, tiadiazolil, piridinil, pirimidinil, pirazinil, triazolil, ili tetrazolil, i gde je svaka od navedenih RA1 alkil, cikloalkil, fenil, heterociklil, ili heteroaril grupa izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-2alkil grupe, C3-6cikloalkil grupom, fenil grupom, benzil grupom, alkenil- C0-2alkil grupom, alkinil-C0-2alkil grupom, do dve C0-

2alkilORA1b grupe, C0-2alkil-N(RA1b)2grupom, SC1-4alkil grupom, S(O)2C1-4alkil grupom, C(O)RA1b grupom, C(O)ORA1b grupom, C(O)N(RA1b)2grupom, -CN grupom, ili C4-6heterocikličnim prstenastim sistemom odabranim od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiran, piperidinil, ili morfolinil;

svaki RA1a je, nezavisno, vodonik, C1-4alkil, C3-6cikloalkil, C4-6heterociklil odabran od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiran, pirolidinil, ili piperidinil, C5-6heteroaril odabran od imidazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, tiofenil, tiazolil, piridinil, pirimidinil, ili pirazinil, ili dva RA1a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, gde je svaka od navedenih RA1a alkil, cikloalkil, heterociklil, ili heteroaril grupa izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-2alkil grupe, C3-6cikloalkil grupom, do dve C0-2alkil-ORA1b grupe, C0-2alkil-N(RA1b)2

1

grupom, SC1-4alkil grupom, C(O)RA1b grupom, C(O)ORA1b grupom, C(O)N(RA1b)2grupom, ili -CN grupom;

svaki RA1b je, nezavisno, vodonik, C1-2alkil, ili C3-4cikloalkil;

RA2 je vodonik, C1-4alkil, C0-4alkil-C3-6cikloalkil, C0-2alkil-(4-6-člani)heterociklil, C2-

4alkil-ORA2a, C0-2alkil-C(O)N(RA2a)2, CO-2alkil-S(O)2-C1-4alkil, C0-2alkil-C(O)OC1-

4alkil, C0-2alkil-C(O)-(4-6-člani)heterociklil, gde je svaka od navedenih heterociklil grupa odabrana od oksetanil, tetrahidropiran, tetrahidrofuranil, dioksanil, dioksolanil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, pirolidinedionil, morfolinil, piperidinil, piperazinil, piperazinonil, ili 1,1-dioksotietanil, i svaka od navedenih RA2 grupa osim vodonika je izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-2alkil grupe, C3-6cikloalkil grupom, alkenil-C0-2alkil grupom, alkinil-C0-2alkil grupom, do dve ORA2b grupe, C0-2alkil-N(RA2b)2grupom, SC1-4alkil grupom, S(O)2C1-4alkil grupom, C(O)RA2b grupom, C(O)ORA2b grupom, C(0)N(RA2b)2grupom, ili -CN grupom;

svaki RA2a je, nezavisno, vodonik, C1-4alkil, C5-6heteroaril odabran od imidazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, tiofenil, tiazolil, piridinil, pirimidinil, ili pirazinil, ili dva RA2a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil;

svaki RA2b je, nezavisno, vodonik, C1-4alkil, ili C3-4cikloalkil;

RA3 je vodonik ili C1-2alkil;

svaki RA4 je, nezavisno, deuterijum, halogen, CN, C1-4alkil, ili OC1-4alkil, gde je svaki RA4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-2alkil, ili dva RA4 zajedno sa umetnutim zasićenim atomom ugljenika obrazuju spiralni ciklopropil ili ciklobutil prsten;

n je 0-3;

Prsten B je prstenasti sistem odabran od

�

�

RB1 je vodonik, C1-4alkil, (CH2)0-1C3-6cikloalkil, C(O)C1-2alkil, (CH2)0-1-(4-6-člani)heterociklil prsten gde je navedeni heterociklični prsten odabran od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiran, dioksanil, dioksolanil, ili pirolidinonil, fenil, benzil, ili (CH2)1-2(5-6-člani)heteroaril prsten gde je navedeni heteroaril prsten odabran od piridinil, imidazolil, ili pirazolil, i gde je svaka od navedenih RB1 alkil, cikloalkil, fenil, benzil, heterociklil ili heteroaril grupa izborno supstituisana sa do tri 3 F atoma, do dve C1-2alkil grupe, dve negeminale OH grupe, ili jednom OC1-2alkil grupom;

RB2 je vodonik, C1-4alkil, OC1-4alkil;

svaki RB3 je, nezavisno, vodonik, halogen, C1-4alkil, C2-4alkenil, C2-4alkinil, CN, C(O)H, C(O)C1-4alkil, C(O)OC1-4alkil, C(O)C1-4alkil, C(O)NH2, C(O)NHC1-4alkil, C(O)NH(CH2)0-1C3-6cikloalkil, C(O)NHCH2oksetanil, C(O)NHCH2tetrahidrofuranil, C(O)NHCH2tetrahidropiranil, C(O)NHfenil, C(O)NHbenzil, C(O)NHOH, C(O)NHOC1-

4alkil, C(O)NHO(CH2)0-1C3-6cikloalkil, C(O)NHO(CH2)0-1oksetanil, C(O)NHO(CH2)0-

1tetrahidrofuranil, C(O)NHO(CH2)0-1tetrahidropiranil, C(O)NHOfenil, C(O)NHObenzil, NH2, NHC(O)C1-4alkil, OC1-4alkil, SC1-4alkil, S(O)C1-4alkil, ili 5-člani heteroaril prstenasti sistem odabran od furanil, tiofenil, imidazolil, pirol, pirazolil, i oksadiazolil, gde je svaka RB3 grupa osim vodonika ili halogena izborno supstituisana sa Cl, do tri F atoma, do dve negeminalne OH grupe, do dva OC1-2alkil, jednom NH2, jednom NHC1-

2alkil, jednom NHC(O)C1-2alkil, ili jednom N(C1-2alkil)2grupom;

svaki RB4 je, nezavisno, vodonik, halogen, C1-4alkil, OC1-4alkil, SC1-4alkil, NH2, NH(C1-

4alkil), N(C1-4alkil)2, NHC(O)C1-4alkil, C(O)OH, C(O)OC1-4alkil, C(O)NH2, C(O)NHC1-

4alkil, C(O)N(C1-4alkil)2, CN, morfolinil prsten, ili imidazolil prsten, gde je svaki RB4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-

2alkil grupom;

RB5 je vodonik, C1-4alkil, C(O)C1-4alkil, C(O)OC1-4alkil, C(O)NH2, C(O)NHC1-4alkil, ili C(O)N(C1-4alkil)2, gde je navedeni RB5 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-2alkil grupom i

RB6 je F ili C1-2alkil, ili dva RB6 i umetnuti atom ugljenika obrazuju spirociklopropil ili spirociklobutil prsten.

[0032] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima sledeću formulu, uže definisanu u patentnim zahtevima:

1

[0033] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima jednu od sledećih formula, uže definisanih u patentnim zahtevima:

[0034] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima jednu od sledećih formula, uže definisanih u patentnim zahtevima:

[0035] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

1

[0036] U sledećem primeru izvođenja za bilo koje jedinjenje formule I-A-1 do I-A-3, I-A-6 do I-A-7, ili I-A-9 do I-A-10, RA1 je C 1a1-4alkil, OC1-4alkil, ili N(RA1a)2, gde je svaki RA , nezavisno, vodonik ili C1-4alkil, ili dva RA1a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, gde je svaka od navedenih RA1 alkil ili heterociklil grupa izborno supstituisana sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve C1-

2alkil grupe, C3-6cikloalkil grupom, do dve C0-2alkil-ORA1b grupe, C0-2alkil-N(RA1b)2grupom, SC A1b

1-4alkil grupom, C(O)R grupom, C(O)ORA1b grupom, C(O)N(RA1b)2grupom, ili -CN grupom, gde je svaki RA1b, nezavisno, vodonik, C1-2alkil, ili C3-4cikloalkil.

[0037] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

1

[0038] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0039] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

2

ili

[0040] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

[0041] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0042] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

ili

[0043] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima jednu od sledećih formula, uže definisanih u patentnim zahtevima:

2

Ċ

[0044] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

ili

[0045] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula

[0046] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu

2

[0047] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

[0048] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0049] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

2

[0050] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0051] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

[0052] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

2

ili

[0053] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0054] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

2

[0055] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima sledeću formulu:

[0056] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

ili

2

[0057] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

ili

[0058] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima sledeću formulu, uže definisanu u patentnim zahtevima:

[0059] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima jednu od sledećih formula, uže definisanih u patentnim zahtevima:

ili

[0060] U jednom primeru izvođenja, jedinjenje ima jednu od sledećih formula, uže definisanih u patentnim zahtevima:

1

ili

[0061] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

2

[0062] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

[0063] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

[0064] Ovde je takođe opisano jedinjenje koje ima jednu od sledećih formula:

ili

4

[0065] U drugom primeru izvođenja, prsten B jedinjenja prema pronalasku je vezan za ostatak molekula, gde

i R1 je CH3;

osim kada je prsten B

gde

i R1 je CH3.

[0066] U drugom primeru izvođenja, Q je CH za jedinjenje prema pronalasku.

[0067] U drugom primeru izvođenja, prsten A jedinjenja prema pronalasku sadrži heterociklil ili heteroaril prsten.

[0068] U sledećem primeru izvođenja, prsten A je odabran od

[0069] U drugom primeru izvođenja, prsten A je odabran od

gde je RA2 vodonik, C1-4alkil, C0-2alkil-C3-6cikloalkil, C0-2alkil-(4-6-člani)heterociklil, C2-

4alkil-ORA2a, C0-2alkil-C(O)N(RA2a)2, C0-2alkil-S(O)2-C1-4alkil, ili C0-2alkil-C(O)OC1-4alkil, gde je svaki od navedenih heterociklila odabran od oksetan-2-il, azetidin-2-il, piperidin-4-il, ili 1,1-dioksotietan-2-il, i je svaka od navedenih RA2 grupa izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-2alkil grupe, do dve ORA2b grupe, C0-2alkil-N(RA2b)2grupom, C(O)RA2b grupom, C(O)ORA2b grupom, C(O)N(RA2b)2grupom, ili -CN grupom; svaki RA2a je, nezavisno, H, C1-4alkil, ili dva RA2a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil; svaki RA2b je, nezavisno, H ili C1-4alkil; i n je 0.

[0070] U još jednom primeru izvođenja, prsten A je odabran od

gde

RA2 je vodonik, C1-4alkil, C0-2alkil-C3-6cikloalkil, C0-2alkil-(4-6-člani)heterociklil, C2-4alkil-ORA2a, C0-2alkilC(O)N(RA2a)2, C0-2alkil-S(O)2-C1-4alkil, ili C0-2alkil-C(O)OC1-4alkil, gde je svaki od navedenih heterociklil odabran od oksetan-2-il, azetidin-2-il, piperidin-4-il, ili 1,1-dioksotietan-2-il, i svaka od navedenih RA2 grupa je izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-2alkil grupe, do dve ORA2b grupe, C0-2alkil-N(RA2b) 2b

2grupom, C(O)RA grupom, C(O)ORA2b grupom, C(O)N(RA2b)2grupom, ili -CN grupom; svaki RA2a je, nezavisno, H, C1-

4alkil, ili dva RA2a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil; svaki RA2b je, nezavisno, H ili C1-4alkil; i n je 0.

[0071] U još jednom primeru izvođenja, prsten A je odabran od

gde

RA1 je C1-4alkil, C0-4alkil-C3-6cikloalkil, C0-4alkil-ORA1a, C0-4alkil-C3-6cikloalkil, C0-4alkil-N(RA1a)2, N(RA1a)C2-4alkil-N(RA1a)2, gde je svaki od navedenih RA1 alkil ili cikloalkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, ili do dve C0-2alkil-ORA1b grupe; svaki RA1a je, nezavisno, vodonik, C1-4alkil, C(O)RA1b grupa, ili dva RA1a i umetnuti atom azota obrazuju 3-6-člani heterociklični prsten odabran od aziridinil, azetidinil, pirolidinil, pirolidinonil, piperidinil, piperidinonil, tetrahidropiridinil, piperazinil, ili morfolinil, gde je svaka od navedenih alkil ili heterociklil grupa RA1a izborno supstituisana sa do tri F atoma, do dve C1-

2alkil grupe, do dve ORA1b grupe, ili -CN grupom; svaki RA1b je, nezavisno, vodonik ili C1-

2alkil; svaki RA4 je, nezavisno, halogen, 2H, C1-4alkil, N(R1a)2, ili OC1-4alkil, gde je svaki RA4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-

2alkil grupe, i gde n predstavlja 0-3.

[0072] U još jednom primeru izvođenja, prsten A je odabran od

gde

svaki RA4 je, nezavisno, halogen, C1-4alkil, ili OC1-4alkil, gde je svaki RA4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil grupe, i gde n predstavlja 0-2.

[0073] U drugom primeru izvođenja, prsten B jedinjenja prema pronalasku sadrži heterociklil ili heteroaril prsten.

[0074] U jednom primeru izvođenja, prsten B je odabran od

gde

RB3 je C(O)NHC1-4alkil, gde je navedeni alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-2alkil; i svaki RB4 je, nezavisno, vodonik, 2H, F, C1-4alkil, ili OC1-4alkil, gde je svaki RB4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-2alkil grupom.

[0075] U sledećem primeru izvođenja, prsten A je

gde

RA1 je F, C1-4alkil, OC1-4alkil, OC0-4alkil-C3-5cikloalkil, NH2, NHC1-4alkil, NHC0-4alkil-C3-5cikloalkil, ili C0-4alkilheterociklil, gde je navedeni heterociklični prstenasti sistem odabran od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil, ili morfolinil, i svaki od navedenih alkil, cikloalkil, ili heterociklil je izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2aalkil grupe; svaki RA4 je, nezavisno, F, 2H, OC1-4alkil, ili NH2; i n predstavlja 0-2.

[0076] U drugom primeru izvođenja, prsten B je

ili

gde

svaki od RB3 i RB4 je, nezavisno, vodonik, halogen, ili C1-4alkil, gde je svaki od navedenih RB3 ili RB4 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, dve negeminalne OH grupe, ili jednom OC1-2alkil; RB5 je vodonik, C1-4alkil, C(O)C1-4alkil, C(O)OC1-4alkil, C(O)NH2, C(O)NHC1-4alkil, ili C(O)N(C1-4alkil)2, gde je navedeni RB5 alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil; i RB6 je F ili C1-2alkil, ili dva RB6 i umetnuti atom ugljenika obrazuju spirociklopropil ili spirociklobutil prsten.

[0077] U drugom aspektu, pronalazak predstavlja jedinjenje koje ima formulu

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, gde

X je N, CRA5;

RA1 je F, C1-4alkil, C3-5cikloalkil, OC1-4alkil, OC1-4alkil-C3-5cikloalkil, NH2, NHC1-4alkil, NHC1-4alkilC3-5cikloalkil, ili C0-4alkil-heterociklil, gde je navedeni heterociklični prstenasti sistem odabran od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiran, ili morfolinil, i svaki od navedenih alkil, cikloalkil, ili heterociklil je izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil;

svaki RA4 je, nezavisno, H ili 2H;

RA5 je vodonik, F, C1-4alkil, ili OC1-4alkil, gde je svaki od navedenih alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma ili do tri 2H atoma;

RB3 je C(O)NHC1-4alkil, gde je navedeni alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil; i

svaki RB4 je, nezavisno, vodonik, deuterijum, F, ili C1-4alkil.

[0078] U drugom aspektu, pronalazak predstavlja jedinjenje koje ima formulu

4

gde

X je N, CRA5;

RA1 je F, C1-4alkil, C3-5cikloalkil, OC1-4alkil, OC1-4alkil-C3-5Cikloalkil, NH2, NHC1-4alkil, NHC0-4alkilC3-5cikloalkil, ili C0-4alkil-heterociklil, gde je navedeni heterociklični prstenasti sistem odabran od oksetanil, tetrahidrofuranil, tetrahidropiran, ili morfolinil, i svaki od navedenih alkil, cikloalkil, ili heterociklil je izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil;

svaki RA4 je, nezavisno, H ili 2H;

RA5 je vodonik, F, C1-4alkil, ili OC1-4alkil, gde je svaki od navedenih alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma ili do tri 2H atoma;

RB3 je C(O)NHC1-4alkil, gde je navedeni alkil izborno supstituisan sa do tri F atoma, do tri 2H atoma, do dve negeminalne OH grupe, ili do dve OC1-2alkil; i

svaki RB4 je, nezavisno, vodonik, deuterijum, F, ili C1-4alkil

[0079] U drugom aspektu, pronalazak predstavlja jedinjenje odabrano iz grupe jedinjenja navedenih u tabeli 3.

Kompozicije, formulacije i primena jedinjenja pronalaska

[0080] U drugom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje prema bilo kojoj od formula koje su ovde opisane i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. U sledećem primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje prema tabeli 3. U sledećem primeru izvođenja, kompozicija dodatno sadrži dodatno terapijsko sredstvo.

[0081] Prema drugom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedinjenje ovog pronalaska ili njegov farmaceutski prihvatljiv derivat i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans, ili vehikulum. U jednom primeru izvođenja, količina jedinjenja u kompoziciji ovog pronalaska je takva da je efikasna u merljivoj inhibiciji DNK-PK u biološkom uzorku ili kod pacijenta. U drugom primeru izvođenja, količina jedinjenja u kompoziciju ovog pronalaska je takva da je efikasna u merljivoj inhibiciji DNK-PK. U jednom primeru izvođenja, kompozicija ovog pronalaska je formulisana za primenu kod pacijenta kome je takva kompozicija potrebna. U sledećem primeru izvođenja, kompozicija ovog pronalaska je formulisana za oralnu primenu kod pacijenta.

[0082] Pojam „pacijent“, kako se ovde koristi, označava životinju, poželjno sisara, i najpoželjnije čoveka.

[0083] Takođe treba razumeti da određena jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da postoje u slobodnom obliku za lečenje, ili gde je pogodno, u obliku farmaceutski prihvatljivog derivata. Prema predmetnom pronalasku, farmaceutski prihvatljiv derivat uključuje, ali nije ograničen na, farmaceutski prihvatljive soli, estre, soli takvih estara, ili bilo koji drugi adukt ili derivat koji nakon primene kod pacijenta kome je to potrebno može da obezbedi, neposredno ili posredno, jedinjenje kako je ovde inače opisano, ili njegov metabolit ili njegov ostatak. Kako se ovde koristi, izraz „metabolit ili njegov ostatak koji je inhibitorno aktivan“ znači da je metabolit ili njegov ostatak takođe inhibitor DNK-PK.

[0084] Kako se ovde koristi, izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ odnosi se na one soli koje su, u okviru ispravne medicinske procene, pogodne za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja, bez nepotrebne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično.

[0085] Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u stanju tehnike. Na primer, S. M. Berge et al., detaljno opisuju farmaceutski prihvatljive soli u J. Pharmaceutical Sciences, 66:1-19, 1977. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ovog pronalaska uključuju one izvedene iz pogodnih neorganskih i organskih kiselina i baza. Primeri farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih kiselih adicionih soli su soli amino grupe obrazovane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, sukcinska kiselina ili malonska kiselina, ili upotrebom drugih postupaka koji se koriste u ovoj oblasti kao što je jonska izmena. Druge farmaceutski prihvatljive soli uključuju soli adipate, alginate, askorbate, aspartate, benzensulfonate, benzoate, bisulfate, borate, butirate, kamforate, kamforsulfonate, citrate, ciklopentanpropionate, diglukonate, dodecilsulfate, etanesulfonate, formate, fumarate, glukoheptonate, glicerofosfate, glukonate, hemisulfate, heptanoate, heksanoate, hidrojodidne, 2-hidroksietansulfonate, laktobionate, laktate, laurate, lauril sulfate, malate, maleate, malonate, metansulfonate, 2-naftalensulfonate, nikotinate, nitrate, oleate, oksalate, palmitate, pamoate, pektinate, persulfate, 3-fenilpropionate, fosfate, pikrate, pivalate, propionate, stearate, sukcinate, sulfate, tartrate, tiocijanate, ptoluensulfonate, undekanoate, valerate, i druge. Soli izvedene iz odgovarajućih baza uključuju soli alkalih metala, zemnoalkalnih metala, amonijuma i N<+>(C1-4alkil)4. Ovaj pronalazak takođe predviđa kvaternizaciju bilo kojih grupa ovde opisanih jedinjenja koje sadrže bazni azot. Proizvodi koji su rastvorljivi u vodi ili ulju ili disperzabilni mogu da se dobiju takvom kvaternizacijom. Reprezentativne soli alkalnih ili zemnoalkalnih metala uključuju natrijumove, litijumove, kalijumove, kalcijumove, magnezijumove, i slično. Dodatne farmaceutski prihvatljive soli uključuju, gde je pogodno, netoksični amonijum, kvaternarni amonijum i katjone amina, obrazovane upotrebom protiv-jona kao što su halid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, C1-8sulfonat i aril sulfonat.

[0086] Kao što je gore opisano, farmaceutski prihvatljive kompozicije predmetnog pronalaska dodatno sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans, ili vehikulum, koji, kako se ovde koriste, uključuju bilo koji, i sve rastvarače, razblaživače, ili druge tečne vehikulume, pomoćna sredstva za dispergovanje ili suspendovanje, površinski aktivna sredstva, izotonična sredstva, sredstva za zgušnjavanje ili emulgovanje, konzervanse, čvrsta vezivna sredstva, lubrikanse i slično, prema tome šta odgovara određenom željenom doznom obliku. U Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st edition, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, i Enciklopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boilan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York, opisani su različiti nosači koji se koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih kompozicija i poznate tehnike za njihovu pripremu. Osim ako je bilo koji uobičajeni medijum nosača inkompatibilan sa jedinjenjima prema pronalasku, na primer ostvarivanjem bilo kog neželjenog biološkog dejstva ili drugačijom štetnom interakcijom sa drugom komponentom/komponentama farmaceutski prihvatljive kompozicije, njegova upotreba je obuhvaćena obimom ovog pronalaska.

[0087] Neki primeri materijala koji mogu da posluže kao farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju, ali nisu ograničeni na, jonske izmenjivače, glinicu, aluminijum stearat, lecitin, serumske proteine, kao što je humani serum albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinsku kiselinu, ili kalijum sorbat, smeše parcijalnih glicerida zasićenih biljnih masnih kiselina, vodu, soli ili elektrolite, kao što je protamin sulfat, dinatrijum hidrogen fosfat, kalijum hidrogen fosfat, natrijum hlorid, soli cinka, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, poliakrilate, voskove, blok polimere polietilenpolioksipropilena, lanolin, šećere kao što je laktoza, glukoza i saharoza; skrobove kao što je kukuruzni skrob i skrob krompira; celulozu i njene derivate kao što je natrijum karboksimetil celuloza, etil celuloza i celulozni acetat; sprašeni tragakant; slad; želatin; talk; ekscipijense kao što je kakao buter i voskovi za supozitorije; ulja kao što je ulje kikirikija, ulje semena

4

pamuka; suncokretovo ulje; susamovo ulje; maslinovo ulje; kukuruzno ulje i sojino ulje; glikole; kao propilen glikol ili polietilen glikol; estre kao što je etil oleat i etil laurat; agar; puferska sredstva kao što je magnezijum hidroksid i aluminijum hidroksid; alginsku kiselinu; vodu bez pirogena; izotonični fiziološki rastvor; Ringerov rastvor; etil alkohol, i fosfatno puferisane rastvore, kao i druge netoksične kompatibilne lubrikanse kao što je natrijum lauril sulfat i magnezijum stearat, kao i sredstva za davanje boje, sredstva za otpuštanje, sredstva za oblaganje, zaslađivače, sredstva za davanje arome i mirisa, konzervanse i antioksidanse koji mogu takođe da budu prisutni u kompoziciji, prema proceni osobe koja obavlja formulaciju.

[0088] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu da budu primenjene oralno, parenteralno, inhalacionim sprejem, topikalno, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili putem ugrađenog rezervoara. Pojam „parenteralno“, kako se ovde koristi, uključuje subkutanu, intravensku, intramuskularnu, intraartikularnu, intrasinovijalnu, intrasternalnu, intratekalnu, intraokularnu, intrahepatičku, intralezionalnu, epiduralnu, intraspinalnu, i intrakranijalnu injekciju ili infuzione tehnike. Poželjno, kompozicije se primenjuju oralno, intraperitonealno ili intravenski. Sterilni injektabilni oblici kompozicije ovog pronalaska mogu da budu vodena ili uljana suspenzija. Ove suspenzije mogu da budu formulisane u skladu sa tehnikama poznatim u ovoj oblasti upotrebom pogodnih sredstava za dispergovanje ili kvašenje i sredstava za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među pogodnim vehikulumima i rastvaračima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rastvor i izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodatno, sterilna, fiksna ulja se uobičajeno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje.

[0089] U ovu svrhu, bilo koje blago fiksno ulje može da bude korišćeno uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Masne kiseline, kao što je oleinska kiselina i njeni gliceridni derivati su korisni u pripremi injektabilnih formulacija, kao što su prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što je maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, posebno njihove polioksietilovane verzije. Ovi rastvori ili suspenzije ulja mogu da sadrže i razblaživače ili sredstva za raspršivanje na bazi alkohola dugog lanca, kao što je karboksimetil celuloza ili slična disperzivna sredstva koja se uobičajeno koriste u formulaciji farmaceutski prihvatljivih doznih oblika uključujući emulzije i suspenzije. Drugi uobičajeno korišćeni surfaktanti, kao što je Tweens, Spans i ostala sredstva za emulgovanje ili pojačivači biološke raspoloživosti koji se uobičajeno koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih, ili drugih doznih oblika mogu takođe da se koriste u svrhu formulacije.

[0090] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu da budu primenjene u bilo kom oralno prihvatljivom doznom obliku uključujući, ali bez ograničenja, kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvore. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, uobičajeno korišćeni nosači uključuju laktozu i kukuruzni skrob. Sredstva za podmazivanje, kao što je magnezijum stearat, se takođe tipično dodaju. Za oralnu primenu u obliku kapsula, korisni razblaživači uključuju laktozu i osušeni kukuruzni skrob. Kada su vodene suspenzije potrebne za oralnu upotrebu, aktivni sastojak se kombinuje sa sredstvima za emulgovanje i suspendovanje. Po želji, određeni zaslađivači, sredstva za davanje arome i boje mogu takođe da se dodaju.

[0091] Alternativno, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu da se primene u obliku supozitorija za rektalnu primenu. One mogu da se pripreme mešanjem sredstva sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensom koji je u čvrstom stanju na sobnoj temperaturi, ali je u tečnom obliku na rektalnoj temperaturi i stoga će se otopiti u rektumu kako bi se lek oslobodio. Takvi materijali uključuju kakao buter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[0092] Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu takođe da se primene topikalno, posebno kada ciljno mesto lečenja uključuje oblasti ili organe koji su lako dostupni za topikalnu primenu, uključujući bolesti oka, kože, ili donjeg intestinalnog trakta. Pogodne topikalne formulacije se lako pripremaju za svaku od ovih oblasti ili organa.

[0093] Topikalna primena za donji deo intestinalnog trakta može da bude ostvarena u formulaciji rektalne supozitorije (videti gore) ili u pogodnoj formulaciji klizme. Topikalnotransdermalni flasteri mogu takođe da se koriste.

[0094] Za topikalne primene, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu da budu formulisane u pogodnoj masti koja sadrži aktivni sastojak suspendovan ili rastvoren u jednom ili više nosača. Nosači za topikalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, propilen glikol, polioksietilen, jedinjenje polioksipropilena, emulgujući vosak i vodu. Alternativno, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu da budu formulisane u pogodni losion ili kremu koja sadrži aktivne sastojke suspendovane ili rastvorene u jednom ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Pogodni nosači uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, vosak cetil estar, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu.

4

[0095] Za oftalmičku upotrebu, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu da budu formulisane, npr., kao mikronizovane suspenzije u izotoničnom, sterilnom fiziološkom rastvoru sa podešenim pH ili drugom vodenom rastvoru, ili, poželjno, kao rastvori u izotoničnom, sterilnom fiziološkom rastvoru sa podešenim pH ili drugom vodenom rastvoru, bilo sa, ili bez konzervansa kao što je benzilalkonijum hlorid. Alternativno, za oftalmičke upotrebe, farmaceutski prihvatljive kompozicije mogu da budu formulisane u masti kao što je vazelin. Farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska mogu takođe da se primene pomoću nazalnog aerosola ili inhalacije. Takve kompozicije se pripremaju u skladu sa dobro poznatim tehnikama u oblasti farmaceutske formulacije i mogu da budu pripremljene kao rastvori u fiziološkom rastvoru, korišćenjem benzil alkohola ili drugih pogodnih konzervanasa, pokretača apsorpcije za poboljšanje biološke raspoloživosti, fluorougljenika, i/ili drugih uobičajenih sredstava za poboljšanje rastvorljivosti ili dispergovanje.

[0096] Najpoželjnije, farmaceutski prihvatljive kompozicije ovog pronalaska su formulisane za oralnu primenu.

[0097] Tečni dozni oblici za oralnu primenu uključuju, ali nisu ograničeni na, farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Pored aktivnih jedinjenja, tečni dozni oblici mogu da sadrže inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u ovoj oblasti kao što je, na primer, voda ili drugi rastvarači, sredstva za poboljšanje rastvorljivosti i sredstva za emulgovanje kao što je etil alkohol, izopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (posebno, ulja semena pamuka, kikirikija, kukuruza, klica, masline, ricinusa, i susama), glicerol, tetrahidrofurfuril alkohol, polietilen glikoli i estri masnih kiselina sorbitana, i njihove smeše. Pored inertnih razblaživača, oralne kompozicije mogu da uključuju i adjuvanse kao što su sredstva za kvašenje, sredstva za emulgovanje i suspendovanje, zaslađivači, sredstva za davanje arome i mirisa.

[0098] Injektabilni preparati, na primer, sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije mogu da budu formulisane u skladu sa poznatim stanjem tehnike upotrebom pogodnih sredstava za dispergovanje ili kvašenje i sredstava za suspendovanje. Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor, suspenzija ili emulzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butandiolu. Među prihvatljivim vehikulumima i rastvaračima koji mogu da se koriste su voda, Ringerov rastvor, rastvor natrijum hlorida prema SAD farmakopeji i izotonični rastvor

4

natrijum hlorida. Pored toga, sterilna, fiksna ulja se uobičajeno koriste kao rastvarač ili medijum za suspendovanje. U ovu svrhu bilo koje blago fiksno ulje može da bude korišćeno uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Dodatno, u pripremi injektabilnih formulacija koriste se masne kiseline kao što je oleinska kiselina.

[0099] Injektabilne formulacije mogu da budu sterilisane, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije, ili inkorporiranjem sterilizacionih sredstava u obliku sterilnih čvrstih kompozicija koje mogu da se rastvore ili disperguju u sterilnoj vodi ili drugom sterilnom injektabilnom medijumu pre upotrebe.

[0100] U cilju produžavanja dejstva jedinjenja predmetnog pronalaska, često je poželjno da se apsorpcija jedinjenja iz subkutane ili intramuskularne injekcije uspori. Ovo može da se postigne upotrebom tečne suspenzije ili kristalnog ili amorfnog materijala koji ima slabu rastvorljivost u vodi. Brzina apsorpcije jedinjenja tada zavisi od brzine njegovog rastvaranja koja, zauzvrat, može da zavisi od veličine kristala i kristalnog oblika. Alternativno, rastvaranjem ili suspendovanjem jedinjenja u uljanom vehikulumu postiže se odlaganje apsorpcije parenteralno primenjenog oblika jedinjenja. Injektabilni depo oblici se prave obrazovanjem matrica mikroinkapsuliranog jedinjenja u biorazgradivim polimerima kao što je polilaktid-poliglikolid. U zavisnosti od odnosa jedinjenja i polimera i prirode konkretnog polimera koji se koristi, brzina oslobađanja jedinjenja može da se kontroliše. Primeri drugih biorazgradivih polimera uključuju poli(ortoestre) i poli(anhidride). Depo injektabilne formulacije se takođe pripremaju okruživanjem jedinjenja lipozomima ili mikroemulzijama koje su kompatibilne sa telesnim tkivima.

[0101] Kompozicije za rektalnu ili vaginalnu primenu su poželjno supozitorije koje mogu da budu pripremljene mešanjem jedinjenja ovog pronalaska sa pogodnim neiritirajućim ekscipijensima ili nosačima kao što je kakao buter, polietilen glikol ili vosak za supozitorije koji je čvrst na sobnoj temperaturi, ali tečan na telesnoj temperaturi i stoga se topi u rektumu ili vaginalnoj šupljini i oslobađa aktivno jedinjenje.

[0102] Čvrsti dozni oblici za oralnu primenu uključuju kapsule, tablete, pilule, prahove i granule. U takvim čvrstim doznim oblicima, aktivno jedinjenje se meša sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom ili nosačem kao što je natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili a) puniocima ili ekstenderima kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i silicijumska kiselina, b) vezivnim sredstvima kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinilpirolidinon, saharoza, i akacija, c)

4

ovlaživačima kao što je glicerol, d) sredstvima za raspadanje kao što je agar-agar, kalcijum karbonat, skrob krompira ili tapioka skrob, alginska kiselina, izvesni silikati, i natrijum karbonat, e) sredstvima za usporavanje rastvaranja kao što je parafin, f) sredstvima za ubrzavanje apsorpcije kao što su kvaternarna amonijumova jedinjenja, g) sredstvima za kvašenje kao što je, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) sredstvima za apsorpciju kao što su kaolinska i bentonitna glina, i i) sredstvima za podmazivanje kao što je talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat, i njihove smeše. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblik može da sadrži i puferska sredstva.

[0103] Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu da se koriste i kao punioci u mekim i tvrdim želatinskim kapsulama upotrebom takvih ekscipijenasa kao laktoza ili mlečni šećer kao i polietilen glikola velike molekulske težine i slično. Čvrsti dozni oblici tableta, dražeja, kapsula, pilula, i granula mogu da budu pripremljeni sa prevlakama i omotačima kao što su enterične prevlake, prevlake za kontrolu oslobađanja i druge prevlake dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije. Oni mogu izborno da sadrže sredstva za zamućivanje i mogu da budu takve kompozicije da samo oslobađaju aktivno sredstvo/sredstva, ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, izborno, na odloženi način. Primeri za oblaganje kompozicija koje mogu da bude upotrebljene uključuju polimerne supstance i voskove. Čvrste kompozicije sličnog tipa mogu da se koriste i kao punioci u mekim i tvrdim želatinskim kapsulama upotrebom takvih ekscipijenasa kao laktoza ili mlečni šećer kao i polietilen glikola velike molekulske težine i slično.

[0104] Aktivna jedinjenja mogu takođe da budu u mikro-inkapsuliranom obliku sa jednim ili više ekscipijenasa kao što je gore navedeno. Čvrsti dozni oblici tableta, dražeja, kapsula, pilula, i granula mogu da budu pripremljeni sa prevlakama i omotačima kao što su enterične prevlake, prevlake za kontrolu oslobađanja i druge prevlake dobro poznate u oblasti farmaceutske formulacije. U takvim čvrstim doznim oblicima aktivno jedinjenje može da bude pomešano sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što je saharoza, laktoza ili skrob. Takvi dozni oblici mogu takođe da sadrže, kao uobičajenu praksu, dodatne supstance osim inertnih razblaživača, npr., sredstva za podmazivanje za tabletiranje i druga pomoćna sredstva za tabletiranje kao magnezijum stearat i mikrokristalna celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici mogu isto tako da sadrže puferska sredstva. Oni mogu izborno da sadrže sredstva za zamućivanje i mogu da budu takve kompozicije da samo oslobađaju aktivno sredstvo/sredstva, ili poželjno, u određenom delu intestinalnog trakta, izborno, na

4

odloženi način. Primeri kompozicija za oblaganje koje mogu da bude upotrebljene uključuju polimerne supstance i voskove.

[0105] Dozni oblici za topikalnu ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju masti, paste, kreme, losione, gelove, prahove, rastvore, sprejeve, inhalante ili flastere. Aktivni sastojak se meša pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i bilo kojim potrebnim konzervansima ili puferima koji mogu da budu potrebni. Oftalmička formulacija, kapi za uši, i kapi za oči su takođe obuhvaćene obimom ovog pronalaska. Dodatno, predmetni pronalazak obuhvata upotrebu transdermalnih flastera, koji imaju dodatnu prednost obezbeđivanja kontrolisane dostave jedinjenja u telo. Takvi dozni oblici mogu da budu napravljeni rastvaranjem, ili raspodeljivanjem jedinjenja u odgovarajućem medijumu. Sredstva za poboljšanje apsorpcije mogu takođe da se koriste za povećanje fluksa jedinjenja kroz kožu. Brzina može da bude kontrolisana ili obezbeđivanjem membrane za kontrolu brzine ili raspršivanjem jedinjenja u polimernoj matrici ili gelu.

[0106] Jedinjenja prema pronalasku su poželjno formulisana u jediničnom doznom obliku zbog jednostavnosti primene i ravnomernosti doze. Izraz „jedinični dozni oblik“, kako se ovde koristi, odnosi se na fizički odvojenu jedinicu sredstva pogodnu za pacijenta koji treba da se leči. Jasno je, međutim, da će odluku o ukupnoj dnevnoj primeni jedinjenja i kompozicija predmetnog pronalaska doneti nadležni lekar u okviru razumne medicinske procene. Specifični efikasni nivo doze za bilo kog konkretnog pacijenta ili organizam zavisiće od različitih faktora uključujući poremećaj koji se leči i ozbiljnost poremećaja; aktivnost specifičnog jedinjenja koje se koristi; specifičnu kompoziciju koja se koristi; starost, telesnu težinu, opšte zdravlje, pol i dijetu pacijenta; vreme primene, put primene, i brzinu izlučivanja specifičnog jedinjenja koje se koristi; trajanje lečenja; lekove koji se koriste u kombinaciji ili istovremeno sa specifičnim jedinjenjem koje se koristi, i sličnih faktora koji su dobro poznati u oblasti medicine.

[0107] Količina jedinjenja predmetnog pronalaska koja može da se kombinuje sa materijalima nosača da bi se proizvela kompozicija u pojedinačnom doznom obliku variraće u zavisnosti od domaćina koji se leči, konkretnog načina primene. Poželjno, kompozicije treba da budu formulisane tako da doza od između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/dan inhibitora može da bude primenjena kod pacijenta koji prima ove kompozicije.

[0108] U zavisnosti od konkretnog proliferativnog stanja ili kancera koji treba da se leči, dodatna terapijska sredstva, koja se normalno primenjuju za lečenje ili prevenciju tog stanja,

4

mogu takođe da budu prisutna u kompozicijama ovog pronalaska. Kako se ovde koristi, dodatna terapijska sredstva koja se normalno primenjuju za lečenje ili prevenciju konkretnog proliferativnog stanja ili kancera poznata su kao „odgovarajuća za bolest, ili stanje koje se leči“. Primeri dodatnih terapijskih sredstava su dati dalje u tekstu.

[0109] Količina dodatnog terapijskog sredstva prisutnog u kompozicijama ovog pronalaska neće biti veća od količine koja bi normalno bila primenjena u kompoziciji koja sadrži to terapijsko sredstvo kao jedino aktivno sredstvo. Poželjno količina dodatnog terapijskog sredstva u ovde opisanim kompozicijama će biti u opsegu od oko 50% do 100% količine koja je normalno prisutna u kompoziciji koja sadrži to sredstvo kao jedino terapijski aktivno sredstvo.

Upotrebe jedinjenja i kompozicija pronalaska

[0110] U jednom primeru izvođenja, pronalazak obezbeđuje jedan ili više inhibitora DNK-PK prema formuli I ili njenim podformulama (npr., formule I-A-1, I-A-2, ... do I-A-51, I-B-1, I-B-2, ... do I-B-42) ili inhibitor DNK-PK prema formuli II ili formuli III, za upotrebu u postupku sensitizacije ćelije na sredstvo koje indukuje oštećenje DNK, koji obuhvata korak dovođenja u kontakt ćelije sa jednim ili više inhibitora DNK-PK prema formuli I ili njenim podformulama (npr., formule I-A-1, I-A-2, ... do I-A-51, I-B-1, IB-2, ... do I-B-42) ili inhibitorom DNK-PK prema formuli II ili formuli III.

[0111] Pronalazak dalje obezbeđuje inhibitor DNK-PK prema formuli I, formuli II, formuli III, ili njihovim podformulama, za upotrebu u postupcima potencijacije terapijskog režima za lečenje kancera. U jednom primeru izvođenja, terapijski režim za lečenje kancera uključuje terapiju zračenjem. Jedinjenja prema pronalasku su korisna u slučajevima kada je terapija zračenjem indikovana za poboljšanje terapijske koristi od takvog lečenja. Dodatno, terapija zračenjem je često indikovana kao pomoć hirurškoj intervenciji kod lečenja kancera. Cilj terapije zračenjem kada se koristi kao pomoćna terapija je smanjenje rizika od povratka bolesti i poboljšanje preživljavanja bez bolesti kada je primarni tumor pod kontrolom. Na primer, pomoćna terapija zračenjem je indikovana kod kancera, uključujući, ali bez ograničenja, kancer dojke, kolorektalni kancer, gastroezofagealni kancer, fibrosarkom, glioblastom, hepatocelularni karcinom, karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata, melanom, kancer pluća, kancer pankreasa, i kancer prostate kao što je opisano u nastavku.

[0112] Pronalazak takođe može da bude praktično korišćen uključivanjem drugog antikancerskog hemioterapijskog sredstva sa jedinjenjem prema pronalasku u terapijski režim za lečenje kancera, sa ili bez terapije zračenjem. Kombinacija DNK-PK inhibitornog jedinjenja prema pronalasku sa takvim drugim sredstvima može da pojača dejstvo hemioterapijskog protokola. Na primer, inhibitorno jedinjenje prema pronalasku može da bude primenjeno sa etopozidom ili bleomicinom, sredstvima za koje je poznato da izazivaju prekid DNK lanca.

[0113] Pronalazak se dalje odnosi na radiosensitizaciju tumorskih ćelija upotrebom jedinjenja formule I, formule II, formule III, ili njihovih podformula. Poželjna jedinjenja su ona kao što je opisano za farmaceutske kompozicije prema pronalasku. Jedinjenje koje može da „radiosensitizuje“ ćeliju, kako se ovde koristi, definiše se kao molekul, poželjno molekul niske molekulske težine, primenjen kod životinja u terapijski efikasnoj količini da bi se povećala osetljivost ćelija na elektromagnetno zračenje i/ili da bi se pospešilo lečenje bolesti koje mogu da se leče elektromagnetnim zračenjem (npr., X-zracima). Bolesti koje mogu da se leče elektromagnetnim zračenjem uključuju neoplastične bolesti, benigne i maligne tumore i kancerozne ćelije.

[0114] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje inhibitor DNK-PK kao što je, na primer, jedinjenje prema pronalasku, za upotrebu u postupcima za lečenje kancera kod životinja. Pronalazak je dalje usmeren na upotrebu u inhibiciji rasta kancerske ćelije, uključujući procese ćelijske proliferacije, invazivnosti i metastaziranja u biološkim sistemima. Jedinjenje prema pronalasku je za upotrebu kao inhibitor rasta kancerske ćelije. Poželjno, jedinjenja prema pronalasku se koriste za inhibiciju ili smanjenje rasta kancerske ćelije, invazivnosti, metastaze, ili incidence tumora kod životinja, kao što su sisari. Postupci prema pronalasku su takođe lako prilagodljivi za upotrebu u test sistemima, npr., za ispitivanje rasta kancerske ćelije i njegovih svojstava, kao i za identifikovanje jedinjenja koja utiču na rast kancerske ćelije.

[0115] Tumori ili neoplazme uključuju rast ćelija tkiva kod koga je umnožavanje ćelija nekontrolisano i progresivno. Neki oblici takvog rasta su benigni, ali drugi su označeni kao „maligni“ i mogu da dovedu do smrti organizma. Maligne neoplazme ili „kanceri“ se razlikuju od benignog rasta po tome što, pored toga što ispoljavaju agresivnu ćelijsku proliferaciju, mogu da nasele susedna tkiva i metastaziraju. Osim toga, maligne neoplazme se odlikuju time što ispoljavaju veći gubitak diferencijacije (veću „dediferencijaciju“) i po

1

njihovoj organizaciji jedne u odnosu na drugu i na tkiva koja ih okružuju. Ovo svojstvo se takođe naziva „anaplazija“.

[0116] Neoplazme koje mogu da se leče predmetnim pronalaskom takođe uključuju solidne tumore, tj., karcinome i sarkome. Karcinomi uključuju one maligne neoplazme izvedene iz epitelijalnih ćelija koje infiltriraju (naseljavaju) okolna tkiva i daju metastaze. Adenokarcinomi su karcinomi izvedeni iz žlezdanog tkiva, ili iz tkiva koja obrazuju prepoznatljive žlezdane strukture. Druga široka kategorija kancera uključuje sarkome, koji predstavljaju tumore čije ćelije su okružene fibrilarnom ili homogenom supstancom kao što je embrionsko vezivno tkivo. Pronalazak takođe omogućava lečenje kancera mijeloidnog ili limfoidnog sistema, uključujući leukemije, limfome, i druge kancere koji tipično nisu predstavljeni tumorskom masom, već su raspoređeni u vaskularnom ili limforetikularnom sistemu.

[0117] Aktivnost DNK-PK može da se poveže sa različitim oblicima kancera u, na primer, adultnoj i pedijatrijskoj onkologiji, sa rastom solidnih tumora/malignošću, miksoidnim karcinomima i karcinomima okruglih ćelija, lokalno uznapredovalim tumorima, metastatskim kancerom, humanim sarkomima mekog tkiva, uključujući Juingov sarkom, metastazama kancera, uključujući limfatične metastaze, karcinomom skvamoznih ćelija, posebno glave i vrata, karcinomom ezofagealnih skvamoznih ćelija, oralnim karcinomom, malignitetima krvnih ćelija, uključujući multipli mijelom, leukemijama, uključujući akutnu limfocitnu leukemiju, akutnu nelimfocitnu leukemiju, hroničnu limfocitnu leukemiju, hroničnu mijelocitnu leukemiju, i leukemiju vlasastih ćelija, efuzionim limfomima (limfomima vezanim za telesne šupljine), limfomom timusa, kancerom pluća, uključujući sitnoćelijski karcinom, T-ćelijskim limfomom kože, Hočkinovim limfomom, ne-Hočkinovim limfomom, kancerom adrenalnog korteksa, tumorima koji proizvode ACTH, nesitnoćelijskim kancerima, kancerom dojke, uključujući sitnoćelijski karcinom i duktalni karcinom, gastrointestinalnim kancerima, uključujući kancer želuca, kancer kolona, kolorektalni kancer, polipe udružene sa kolorektalnom neoplazijom, kancer pankreasa, kancer jetre, urološkim kancerima, uključujući kancer mokraćne bešike, uključujući primarne površinske tumore mokraćne bešike, invazivni karcinom tranzicionih ćelija mokraćne bešike, i mišićno-invazivni kancer mokraćne bešike, kancerom prostate, malignitetima ženskog genitalnog trakta, uključujući karcinom jajnika, primarne peritonealne epitelijalne neoplazme, cervikalni karcinom, kancere endometrijuma materice, vaginalni kancer, kancer vulve, kancer materice i solidne tumore u folikulu jajnika, malignitetima muškog genitalnog trakta, uključujući testikularni kancer i kancer penisa,

2

kancerom bubrega, uključujući karcinom renalnih ćelija, kancerom mozga, uključujući intrinzičke tumore mozga, neuroblastom, astrocitne tumore mozga, gliome, metastatsku invaziju tumorskih ćelija u centralnom nervnom sistemu, kancerima kostiju, uključujući osteome i osteosarkome, kancerima kože, uključujući maligni melanom, tumorsku progresiju humanih keratinocita kože, kancer skvamoznih ćelija, tiroidnim kancerom, retinoblastomom, neuroblastomom, peritonealnom efuzijom, malignom pleuralnom efuzijom, mezoteliomom, Vilmsovim tumorima, kancerom žučne kese, trofoblastnim neoplazmama, hemangiopericitomom i Kapošijevim sarkomom. Postupci za pojačavanje dejstva lečenja ovih i drugih oblika kancera obuhvaćeni su pronalaskom.

[0118] Pronalazak obezbeđuje postupak za inhibiciju aktivnosti DNK-PK u biološkom uzorku koji uključuje dovođenje u kontakt biološkog uzorka sa jedinjenjem ili kompozicijom prema pronalasku. Pojam „biološki uzorak“, kako se ovde koristi, označava uzorak izvan živog organizma i uključuje, bez ograničenja, ćelijske kulture ili njihove ekstrakte; materijal biopsije dobijen od sisara ili njegove ekstrakte; i krv, pljuvačku, urin, feces, semenu tečnost, suze, ili druge telesne tečnosti ili njegove ekstrakte. Inhibicija aktivnosti kinaze, naročito aktivnosti DNK-PK, u biološkom uzorku korisna je za različite svrhe poznate stručnjaku u ovoj oblasti. Primer uključuje, ali bez ograničenja, inhibiciju DNK-PK u biološkom testu. U jednom primeru izvođenja, postupak za inhibiciju aktivnosti DNK-PK u biološkom uzorku je ograničen na postupke koji nisu terapijski.

Priprema jedinjenja pronalaska

[0119] Kako se ovde koristi, sve skraćenice, simboli i konvencije su dosledne sa onim koje se koriste u savremenoj naučnoj literaturi. Videti, npr., Janet S. Dodd, ed., The ACS Stile Guide: A Manual for Authors and Editors, 2nd Ed., Washington, D.C.: American Chemical Society, 1997. Sledeće definicije opisuju termine i skraćenice koje su ovde korišćene:

BPin pinakolni estar boronske kiseline

Brine zasićeni rastvor NaCl u vodi

DCM dihlorometan

DIEA diizopropiletilamin

DMA dimetilacetamid

DME dimetoksietan

DMF dimetilformamid

DMSO metilsulfoksid

DTT ditiotreitol

EtDuPhos (2R,5R)-1-[2-[(2R,5R)-2,5-dietilfosfolan-1-il]fenil]-2,5-dietilfosfolan ESMS masena spektrometrija sa elektrosprej jonizacijom

Et2O etil etar

EtOAc etil acetat

EtOH etil alkohol

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HEPES 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonska kiselina

HPLC tečna hromatografija visokih performansi

IPA izopropanol

LAH litijum aluminijum hidrid

LC-MS tečna hromatografija-masena spektrometrija

LDA litijum diizoproiletilamid

Me metil

MeOH metanol

MTBE metil t-butil etar

NMP N-metilpirolidin

Pd(dppf)Cl21,1’bis(difenilfosfino)-ferocen dihloro-paladijum

Ph fenil

RT ili rt sobna temperatura

SFC superkritična fluidna hromatografija

SPhos 2-dicikloheksilfosfino-2’,6’-dimetoksibifenil

TBAI tetrabutilamonijum jodid

TBME terc-butilmetil etar

tBu tercijarni butil

THF tetrahidrofuran

TEA trietilamin

TMEDA tetrametiletilendiamin

VPhos [3-(2-dicikloheksilfosfanilfenil)-2,4-dimetoksifenil] sulfoniloksinatrijum

Opšti postupci sinteze

[0120] Uopšteno, jedinjenja ovog pronalaska mogu da budu pripremljena pomoću postupaka koji su ovde opisani ili pomoću drugih postupaka poznatih stručnjacima u ovoj oblasti.

4

Primer 1. Opšta priprema jedinjenja formule I

[0121] Jedinjenja formule I mogu da budu pripremljena kao što je prikazano ispod na šemi 1 - metod A. Prema tome, kao što je prikazano u koraku 1-i šeme 1, 4,6-dihloropirimidin reaguje sa aminom formule A u prisustvu baznog tercijarnog amina na povišenim temperaturama da bi se dobilo jedinjenje formule B. Kao što je prikazano u koraku 1-ii šeme 1, reakcija jedinjenja formule B sa pogodnom boronskom kiselinom ili boronatom formule C u prisustvu odgovarajućeg paladijumskog katalizatora proizvodi jedinjenja formule I. Postupci za pripremu boronata ili boronske kiseline iz aril ili heteroaril halida opisani su u Boronic Acids, ISBN: 3-527-30991-8, Wiley-VCH, 2005 (Dennis G. Hall, editor). U jednom primeru, halogen je brom i boronat se priprema reakcijom aril ili heteroaril bromida sa 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolanom. U narednim reakcijama kuplovanja, boronati ili boronske kiseline koje se tako obrazuju mogu da reaguju sa halopirimidinima u prisustvu paladijumskog katalizatora kao što je 1,1’bis(difenilfosfino)-ferocen dihloro-paladijum•dihlorometan [Pd(dppf)Cl2].

[0122] Alternativno, kao što je prikazano na šemi 1- metod B, redosled kuplovanja jedinjenja formule A i jedinjenja formule C do 4,6-dihloropirimidina može da bude preokrenut da bi se dobila jedinjenja formule I prema pronalasku.

[0123] Jedinjenja formule I mogu takođe da budu pripremljena korišćenjem boronatnog tipa kuplovanja prema Suzukiju da bi se obrazovala veza ugljenik-ugljenik između atoma ugljenika ostataka aromatičnog ili heteroaromatičnog prstena B i nezasićenog 2-ugljenika N-alilpirimidin-4-amina. U jednom primeru, kao što je prikazano na šemi 1 - metod C, jedinjenja formule D reaguju sa alilamin boronatima formule E da bi se dobila jedinjenja formule F. Sledeća reakcija boronata sa halidom aromatičnog ili heteroaromatičnog prstena B formule G rezultuje u jedinjenjima formule H, čija dvostruka veza može da bude redukovana da bi se obrazovala jedinjenja formule I.

[0124] Alternativno, kao što je prikazano na šemi 1- metod D, veza ugljenik-ugljenik između aromatičnog ili heteroaromatičnog B prstena i ostatka molekula u jedinjenjima formule I obrazuje se reakcijom vinil halida formule K i boronata B-prstena formule L. Kao i prethodno, dvostruka veza rezultujućeg jedinjenja formule H može da bude redukovana da bi se obrazovala jedinjenja formule I.

[0125] Kao što je prethodno pomenuto, intermedijeri boronata ili boronske kiseline mogu da budu pripremljeni reakcijom arila ili heteroarila, ili vinil halida sa 4,4,5,5-tetrametil-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolanom u prisustvu paladijumskog katalizatora kao što je 1,1’bis(difenilfosfino)-ferocen dihloropaladijum•dihlorometan [Pd(dppf)Cl2]. Na primer, u cilju pripreme boronatnih intermedijera prstena A formule O, mogu da se prate procedure prikazane u primeru 2.

Primer 2. Opšta priprema intermedijera prstena A formule O

[0126]

[0127] Kao što je prikazano u koraku 2-i šeme 2, rastvoru jedinjenja formule M (1 ekviv.) i K2CO3(3 ekviv.) u DMF (0.3 M) dodat je alkil bromid (2 ekviv.) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je zatim mešana na 80°C tokom 5 časova. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i filtrirana preko čepa od dijatomejske zemlje. Rezultujući kolač je opran sa EtOAc. Filtratu je dodata H2O i dve faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc i organska faza je oprana zasićenim rastvorom NaCl u vodi. Kombinovane organske faze su osušene preko Na2SO4i podvrgnute uparavanju. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 → 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio intermedijer N.

[0128] Kao što je prikazano u koraku 2-ii šeme 2, rastvor 5-bromo-pirazolo[3,4-b]piridina formule N (1 ekviv.), bis-pinakol borana (1.15 ekviv.), KOAc (3 ekviv.) u 2-metil-THF (0.3 M) degasiran je strujom N2tokom 20 minuta. Zatim je Pd(dppf)Cl2(0.05 ekviv.) dodat reakcionoj smeši. Rezultujući rastvor je zagrevan u čvrsto zatvorenoj epruveti na 120°C tokom 3 časa u uljanom kupatilu. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i filtriran preko čepa od medijuma Florisil®. Filtrat je podvrgnut uparavanju i rezultujuće jedinjenje formule O je proizvedeno. U mnogim slučajevima, ova jedinjenja mogu dalje da se koriste bez bilo kakvog dodatnog prečišćavanja.

[0129] Postupak prema primeru 2 može da se primeni za pripremu sledećih jedinjenja.

2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)etanol:

ESMS (M+H) = 289.43; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 0.4 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 4.63 (t, J = 4.6 Hz, 2H), 4.45 (s, 1H), 4.05 (t, J = 4.6 Hz, 2H) i 1.30 (s, 12H)

1-(2-metoksietil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin: ESMS (M+H) = 303.16; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.81 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 4.67 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.82 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.25 (s, 3H) i 1.30 (s, 12H)

1-(ciklopropilmetil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin: ESMS (M+H) = 301.14; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.79 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.44 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 4.35 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.35 (s, 12H) i 0.49 - 0.39 (m, 5H)

1-(tietan-1,1-dioksid)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin: ESMS (M+H) =350.37

N-etil-2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)etanamid: ESMS (M+H) =331.66

1-(2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)etil)pirolidin-2-on: ESMS (M+H) = 358.12

1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin: ESMS (M+H) = 302.16; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.19 (p, J = 7.2 Hz, 1H), 5.25 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 5.08 - 5.03 (m, 2H), 1.30 (s, 12H)

1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin: ESMS (boronska kiselina, M+H) =178.23; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ d 8.93 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 4.18 (s, 3H) i 1.29 (s, 12H)

etil 2-metil-2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)propanoat: ESMS (M+H) = 360.29;<1>H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.94 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 4.16 - 4.05 (m, 2H), 1.95 (s, 6H), 1.30 (s, 12H), 1.13 - 1.05 (m, 3H)

metil 2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazolo[3,4-b]piridin-1-il)etanoat: ESMS (M+H) =317.2; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.90 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.56 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 1.38 (s, 12H)

1

1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin:

ESMS (M+H) = 301.4; 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.72 - 8.52 (m, 1H), 8.41 - 8.28 (m, 1H), 7.71 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.64 (dd, J = 24.9, 3.5 Hz, 1H), 6.18 (dd, J = 13.6, 6.6 Hz, 1H), 5.30 - 5.02 (m, 4H), 1.28 (s, 12H)

2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin-1-il)etanol: ESMS (M+H) = 289.32

1-(ciklopropilmetil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin: ESMS (M+H) = 299.38

1-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirolo[2,3-b]piridin: ESMS (M+H) = 260.14; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 8.63 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H) i 1.30 (s, 12H)

2

2-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol-1-il)etanol: ESMS (M+H) = 289.33

1-(ciklopropilmetil)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol: ESMS (M+H) = 298.02

2-(3-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol-1-il)etanol: ESMS (M+H) = 302.22; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.18 - 8.04 (m, 1H), 7.70 (dd, J = 18.8, 8.1 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 20.1, 8.5 Hz, 1H), 4.36 (dt, J =9.4, 5.1 Hz, 2H), 4.22 - 3.96 (m, 2H), 2.58 - 2.47 (m, 3H), 1.20 (t, J = 2.0 Hz, 12H)

2-(4-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol-1-il)etanol: ESMS (M+H) = 302.22; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07-7.93 (m, 1H), 7.71 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 2H), 4.16 - 3.98 (m, 2H), 2.80 - 2.67 (m, 3H), 1.20 (s, 12H)

1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol: ESMS (M+H) = 301.34

3-metil-1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol: ESMS (M+H) = 315.57; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.49 - 7.41 (m, 1H), 5.74 (p, J = 7.1 Hz, 1H), 5.31 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 5.12 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.63 (d, J = 5.1 Hz, 3H), 1.40 (s, 12H)

4-metil-1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol: ESMS (M+H) = 315.57; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.06 (d, J = 21.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.32 - 7.20 (m, 1H), 5.76 - 5.63 (m, 1H), 5.24 (dd, J = 12.3, 5.7 Hz, 2H), 5.05 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.76 (s, 3H), 1.30 (s, 12H)

4

6-metil-1-(oksetan-3-il)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-indazol: ESMS (M+H) = 315.57; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.17 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 5.76 - 5.59 (m, 1H), 5.29 - 5.18 (m, 2H), 5.12 - 4.99 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 1.29 (s, 12H)

Primer 3. Priprema N-(2-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-il)etil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amina (Referentno jedinjenje 68)

[0130]

[0131] Kao što je prikazano u koraku 3-i šeme 3, rastvoru 2-bromofenola (15 g, 86.7 mmol) u DMF (180 mL) na 0°C dodat je 3-bromo-2-metil-prop-1-en (12.8 g, 9.61 mL, 95.37 mmol) praćen sa K2CO3(23.96 g, 173.4 mmol) i TBAI (384 mg, 1.04 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na RT tokom 24 časa i ugašena sa H2O (90 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc i organska faza je osušena nad Na2SO4. Uklanjanje isparljivih supstanci pod sniženim pritiskom dalo je 1-bromo-2-((2-metilalil)oksi)benzen (jedinjenje 2001, 19.12 g, 97% prinosa, bezbojna tečnost):<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.46 (dd, J = 1.5, 7.8 Hz, 1H), 7.18 - 7.13 (m, 1H), 6.81 - 6.73 (m, 2H), 5.09 (s, 1H), 4.93 (t, J = 1.1 Hz, 1H), 4.42 (s, 2H) i 1.78 (s, 3H) ppm. Ovaj materijal je korišćen u narednim reakcijama.

[0132] Kao što je prikazano u koraku 3-ii šeme 3, rastvor jedinjenja 2001 (13.8 g, 60.7 mmol), NaOAc (12.46 g, 151.9 mmol), tetraetilamonijum hlorid hidrata (13.4 g, 72.9 mmol), i natrijum formata (4.95 g, 72.9 mmol) u DMF (140 mL) je degasiran 30 minuta upotrebom struje N2. Dodat je Pd(OAc)2(682.1 mg, 3.04 mmol) i smeša je zagrevana do 90°C tokom 4 časa. Reakciona smeša je ohlađena do RT i razblažena sa Et2O (50 mL). Rezultujući rastvor je filtriran kroz dijatomejsku zemlju i filtrat je opran sa H2O i zasićenim rastvorom NaCl u vodi. Organska faza je osušena nad Na2SO4, koncentrovana pod sniženim pritiskom, i prečišćena pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 do 20% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran (jedinjenje 2002, 3.86 g, 43% prinosa) kao bezbojno ulje: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.03 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.81 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 0.7 Hz, 2H) i 1.27 (s, 6 H) ppm.

[0133] Kao što je prikazano u koraku 3-iii šeme 3, rastvoru TMEDA (3.93 g, 5.11 mL, 33.8 mmol) u Et2O (60 mL) dodat je sek-butil-litijum (22.3 mL 1.4 M, 31.2 mmol) na -78°C. Posle 10 minuta na -78°C, dodavan je u kapima tokom 15 minuta 3,3-dimetil-2H-benzofuran (jedinjenje 2002, 3.86 g, 26.0 mmol) u Et2O (60 mL). Posle 10 minuta, smeša je mešana na 0°C u toku 30 minuta. Zatim je rastvor ohlađen do -78°C i DMF (4.76 g, 5.04 mL, 65.1 mmol) je dodat u kapima. Reakciona smeša je mešana na -78°C tokom 10 minuta i zatim zagrevana do 0°C tokom 2 časa. Reakcija je ugašena sa 1N HCl (20 mL) i razblažena smešom heksan/Et2O (1:1,50 mL). Organske supstance su osušene preko Na2SO4i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobio 3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-karbaldehid (jedinjenje 2003, 4.1 g, 89% prinosa): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.14 (s, 1H), 7.53 (dd, J = 1.3, 7.8 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 1.3, 7.2 Hz, 1H), 6.90 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H) i 1.30 (s, 6H) ppm; ESMS (M+H) = 177.25.

[0134] Kao što je prikazano u koraku 3-iv šeme 3, rastvoru 3,3-dimetil-2H-benzofuran-7-karbaldehida (0.5 g, 2.837 mmol) u AcOH (11.1 mL) dodat je nitrometan (519.5 mg, 461.0 µL, 8.511 mmol) i amonijum acetat (546.7 mg, 7.092 mmol) na RT. Reakciona smeša je zatim zagrevana na 110°C tokom 2 časa. Reakciona smeša je potom ohlađena i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM, organska faza je oprana sa H2O i zasićenim rastvorom NaCl u vodi, osušena nad Na2SO4, koncentrovana pod sniženim pritiskom, i prečišćena pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 do 75% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (E)-3,3-dimetil-7-(2-nitrovinil)-2,3-dihidrobenzofuran (jedinjenje 2004, 160 mg, 34% prinosa) kao čvrsta supstanca žute boje:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.91 (q, J = 13.4 Hz, 2H), 7.14 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 6.88 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H) i 1.30 (s, 6 H) ppm; ESMS (M+H) = 220.02.

[0135] Kao što je prikazano u koraku 3-v šeme 3, rastvoru LiAlH4(4.01 mL 1M/THF, 4.01 mmol) dodat je (E)-3,3-dimetil-7-(2-nitrovinil)-2,3-dihidrobenzofuran (160 mg, 0.72 mmol) u THF (14.0 mL) na RT. Žuti rastvor je mešan na RT tokom 15 časova. Reakcija je ugašena veoma polako sa vodom (15 mL) i ekstrahovana sa Et2O i EtOAc. Organske supstance su osušene preko Na2SO4i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-il)etanamin (jedinjenje 2005, 139 mg, 99% prinosa): 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.90 (dd, J =6.2, 6.9 Hz, 2H), 6.79 - 6.71 (m, 1H), 4.15 (s, 2 H), 2.88 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.9 Hz, 2H) i 1.26 (s, 6H) ppm; ESMS (M+H) = 192.07.

[0136] Kao što je prikazano u koraku 3-vi šeme 3, rastvor 4,6-dihloropirimidina (111.6 mg, 0.726 mmol), 2-(3,3-dimetil-2H-benzofuran-7-il)etanamina (139 mg, 0.726 mmol), Na2CO3(231.1 mg, 2.180 mmol) u i-PrOH (5.56 mL) je čvrsto zatvoren u epruveti za mikrotalasnu peć i zagrevan na 90°C u uljanom kupatilu 18 časova. Reakciona smeša je filtrirana kroz čep dijatomejske zemlje, isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom, i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 do 100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 6-hloro-N-(2-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-il)etil)pirimidin-4-amin (jedinjenje 2006) kao bezbojno ulje: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.24 (s, 1H), 6.94 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 6.78 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.25 (s, 1H), 4.20 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.05 (d, J = 7.1 Hz, H), 3.47 (s, 2H), 2.83 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.50 (s, 2H) i 1.27 (s, 6H) ppm; ESMS (M+H) = 304.06.

[0137] Kao što je prikazano u koraku 3-vii šeme 3, rastvor -hloro-N-(2-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-il)etil)pirimidin-4-amina (60 mg, 0.197 mmol), 1-metil-4-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-piridil]piperazina (71.86 mg, 0.237 mmol), Na2CO3(296.2 µL 2M, 0.592 mmol), i [3-(2-dicikloheksilfosfanilfenil)-2,4-dimetoksifenil]sulfoniloksinatrijum (VPhos, 8.1 mg, 0.0158 mmol) u i-PrOH (1.6 mL) je degasiran upotrebom struje N2tokom 30 minuta. Dodat je Pd(OAc)2(0.88 mg, 0.0039 mmol) i rastvor je zagrevan do 90°C tokom 2 časa. Rastvor je koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 do 100% (10% MeOH/EtOAc) u heksanima) da bi se dobio N-(2-(3,3-dimetil-2,3-dihidrobenzofuran-7-il)etil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amin (jedinjenje 68, 32.4 mg, 36%) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.69 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.94 - 6.90 (m, 2H), 6.77 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.60 (s, 6H), 2.86 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.45 (s, 4H), 2.28 (s, 3H) i 1.27 (s, 6H) ppm; ESMS (M+H) = 445.09.

Primer 4. Priprema (S)-N-(2-(2-metoksifenil)propil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amina (Referentno jedinjenje 32)

[0138]

[0139] Kao što je prikazano u koraku 4-i šeme 4, rastvoru diizopropilamina (6.70 g, 9.28 mL, 66.2 mmol) u THF (60 mL) na -78°C pod N2dodat je n-butil-litijum (33.1 mL, 2.0 M u cikloheksanu, 66.2 mmol) i rastvor je mešan tokom 40 minuta. Rastvor 2-(2-metoksifenil)sirćetne kiseline (5.00 g, 30.1 mmol) u THF (30 mL) dodat je u kapima, zatim je reakcija ostavljena da se ugreje do sobne temperature tokom jednog časa. Reakcija je zatim ohlađena do -78°C i jodometan (4.27 g, 1.87 mL, 30.1 mmol) je dodat u reakcionu smešu u jednoj porciji. Reakcija je zagrevana do sobne temperature 18 časova, dodato je 15 mL vode, i organske supstance su sakupljene i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je zakišeljen sa 1N HCl i sirovi proizvod je ekstrahovan sa Et2O (3x). Kombinovane organske supstance su osušene preko MgSO4, filtrirane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (25 do 50% EtOAc u heksanima) da bi se dobila 2-(2-metoksifenil)propanoinska kiselina u vidu bele čvrste supstance (jedinjenje 2008, 4.86 g, 85% prinosa):<1>H NMR(CDCl3) δ 7.31-7.21 (m, 2H), 7.01-6.84 (m, 2H), 4.09 (q, J = 7.2 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 1.49 (d, J = 7.2 Hz, 3H).

[0140] Kao što je prikazano u koraku 4-ii šeme 4, rastvoru 2-(2-metoksifenil) propanoinske kiseline (1.50 g, 7.91 mmol) u THF (20 mL) na 0°C dodat je litijum aluminijum hidrid (31.6 mL, 0.5 M rastvor, 15.8 mmol) i reakcija je zagrevana do sobna temperature i mešana 3.5 časa. Posle uzastopnog dodavanja 0.7 mL vode, 0.7 mL 1M NaOH, 1.9 mL vode, i MgSO4da bi se izdvojila voda, reakciona smeša je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-(2-metoksifenil)-1-propanol kao bistra, bezbojna tečnost (jedinjenje 2009, 1.41 g, 96% prinosa):<1>H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.20 (m, 2H), 7.03-

6.87 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.67 (m, 2H), 3.54-3.42 (m, 1H), 1.54 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 1.29 (d, J = 7.1 Hz, 3H).

[0141] Kao što je prikazano u koraku 4-iii šeme 4, smeša 2-(2-metoksifenil)-1-propanola (1.31 g, 7.08 mmol), ftalimida (1.09 g, 7.44 mmol), i PPh3smole (3.43 g, 10.6 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi 15 minuta da bi se dozvolilo da smola nabubri. Dodat je diizopropilazodikarboksilat (2.29 g, 2.24 mL, 10.6 mmol) i reakcija je mešana tokom 18 časova. Reakciona smeša je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju, koja je zatim oprana sa EtOAc i DCM. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (10 do 20% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 2-(2-(2-metoksifenil)propil)izoindolin-1,3-dion kao bistro, bezbojno ulje (jedinjenje 2010, 2.15 g, kvantitativni prinos): 1H NMR (CDCl3) δ 7.81 (dd, J = 5.5, 3.0 Hz, 2H), 7.69 (dd, J = 5.5, 3.0 Hz, 2H), 7.34-7.24 (m, 1H), 7.19 (ddd, J = 8.1, 7.5, 1.7 Hz, 1H), 6.94 (td, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.2, 0.9 Hz, 1H), 4.03-3.69 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

[0142] Kao što je prikazano u koraku 4-iv šeme 4, mešanom rastvoru 2-(2-(2-metoksifenil)propil)izoindolin-1,3-diona (363 mg, 1.23 mmol) u MeOH (4.0 mL) dodat je hidrazin (39.4 mg, 38.6 µL, 1.23 mmol) i reakcija je mešana tokom 18 časova. Talog koji se obrazovao je filtriran, opran sa MeOH, i filtrat koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-(metoksifenil)-1-propanamin kao svetlo žuto ulje (jedinjenje 2011, 144 mg, 71% prinosa): 1H NMR (CDCl3) δ 7.27-7.13 (m, 2H), 6.95 (ddd, J = 18.2, 12.3, 4.6 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.39-3.18 (m, 1H), 2.86 (qd, J = 12.7, 6.8 Hz, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

[0143] Kao što je prikazano u koraku 4-v šeme 4, smeša 4,6-dihloropirimidina (817 mg, 5.49 mmol), 2-(2-metoksifenil)-1-propanamina (0.997 g, 6.03 mmol), i DIEA (2.13 g, 2.87 mL, 16.5 mmol) u izopropanolu (5.0 mL) je mešana 18 časova. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (25% EtOAc u heksanima) da bi se dobio 6-hloro-N-(2-(2-metoksifenil)propil)pirimidin-4-amin kao bezbojna čvrsta supstanca (jedinjenje 2012, 1.18 g, 77% prinosa): 1H NMR (CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 7.23 (dd, J = 12.0, 4.5 Hz, 2H), 7.03-6.87 (m, 2H), 6.41 (s, 1H), 5.42 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.67-3.18 (m, 3H), 1.35 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

[0144] Kao što je prikazano u koraku 4-vi šeme 4, smeša 6-hloro-N-(2-(2-metoksifenil)propil)pirimidin-4-amina (75.0 mg, 0.270 mmol), 1-metil-4-[5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-piridil]piperazina (jedinjenje 2007, 90.1 mg, 0.297 mmol), Pd(OAc)2(1.21 mg, 0.00540 mmol), [3-(2-dicikloheksilfosfanilfenil)-2,4-dimetoksifenil]sulfoniloksinatrijuma (VPhos, 11.1 mg, 0.0216 mmol), i Na2CO3(405 µL, 2 M, 0.810 mmol) u IPA (2 mL) je degasirana i ponovo napunjena sa N2(ponovljeno 2x), zatim zagrevana do 90°C tokom 4 časa. Reakciona smeša je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (90-100% EtOAc u heksanima) da bi se dobio N-(2-(2-metoksifenil)propil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amin kao bistro, žuto ulje (jedinjenje 2013, 48.0 mg, 42% prinosa): 1H NMR (CDCl3) δ 8.77 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 2H), 7.01-6.89 (m, 2H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.09 (bs, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.76-3.65 (m, 4H), 3.65-3.46 (m, 3H), 2.62-2.48 (m, 4H), 2.38 (s, 3H), 1.36 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

[0145] Kao što je prikazano u koraku 4-vii šeme 4, N-(2-(2-metoksifenil)propil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amin (30.0 mg, 0.0710 mmol) je prečišćen pomoću superkritične fluidne hromatografije upotrebom hiralne OJ kolone i eluiranjem sa 40% MeOH (0.2% DEA) u CO2da bi se dobio (S)-N-(2-(2-Metoksifenil)propil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amin kao beličasti ostatak (jedinjenje 32, 13.5 mg): 1H NMR (CDCl3) δ 8.77 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.14 (dd, J = 9.0, 2.5 Hz, 1H), 7.28-7.18 (m, 2H), 7.04-6.86 (m, 2H), 6.71 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.24 (d, J = 47.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.75-3.64 (m, 4H), 3.64-3.43 (m, 3H), 2.65-2.47 (m, 4H), 2.37 (s, 3H), 1.36 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

Primer 5. Priprema (S)-N-(2-(2-Metoksifenil)propil)-6-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-il)pirimidin-4-amina (Jedinjenje 2016)

[0146]

[0147] Hiralnost asimetričnog centra 1-ugljenika u ostacima 2-aminoetil-B-prstena može da bude utvrđena pripremom intermedijera analognih jedinjenju 2016 i upotrebom takvih intermedijera u pripremi jedinjenja prema pronalasku. Prema tome, hiralnost referentnog jedinjenja 34 utvrđena je pripremom jedinjenja 2009 kao smeše racemata koji imaju

1

enantiomerni višak značajno u korist (S)-konfiguracije. Videti Evans D.A. et al., in J. Am. Chem. Soc., Vol 104, 1737-1739 (1982). Prema tome, kao što je prikazano u koraku 5-i šeme 5, rastvoru 2-(2-metoksifenil)sirćetne kiseline (5.00 g, 30.1 mmol) i Et3N (6.70 g, 9.23 mL, 66.2 mmol) u THF (150 mL) na -15°C dodat je pivaloil hlorid (3.70 g, 3.78 mL, 30.7 mmol) i rezultujući rastvor je mešan tokom 15 minuta. Litijum hlorid (1.53 g, 36.1 mmol) i (4S)-4-benziloksazolidin-2-on (6.29 g, 35.5 mmol) su dodati rastvoru i reakcija je zagrevana do sobne temperature tokom 18 časova. Dodat je zasićeni amonijum hlorid i reakcija je ekstrahovana sa EtOAc (2x). Organski ekstrakti su kombinovani i oprani sa NaHCO3(zas.), zasićenim rastvorom NaCl u vodi, osušeni nad MgSO4, filtrirani, i zatim koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (15 do 30% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (4S)-4-benzil-3-[2-(2-metoksifenil)acetil]-oksazolidin-2-on (jedinjenje 2014, 7.11 g, 72.6% prinosa) kao bela čvrsta supstanca: 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.42-7.15 (m, 7H), 6.96 (dd, J = 15.6, 7.8 Hz, 2H), 4.79-4.65 (m, 1H), 4.44-4.09 (m, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.33 (dd, J = 13.3, 2.9 Hz, 1H), 2.84 (dd, J =13.3, 9.5 Hz, 1H).

[0148] Kao što je prikazano u koraku 5-ii šeme 5, rastvoru natrijum heksametildisilazida (NaHMDS, 5.06 g, 26.2 mmol) u THF (100 mL) pod atmosferom azota na -78°C dodat je (4S)-4-benzil-3-[2-(2-metoksifenil)acetil]oksazolidin-2-on (7.11 g, 21.9 mmol) i reakcija je mešana tokom 1.5 časova. Metil jodid (3.08 g, 1.35 mL, 21.7 mmol) je zatim dodat u kapima i mešanje nastavljeno na -78°C tokom 4 časa, zatim je reakcija zagrevana do sobne temperature tokom 18 časova. Reakcija je ohlađena do -20°C i ugašena sa NH4Cl (zas.). Organske supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom i vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (3x). Organski ekstrakti su kombinovani i oprani sa zasićenim rastvorom NaCl u vodi, osušeni nad MgSO4, filtrirani, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (5 do 25% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (4S)-4-benzil-3-[(2S)-2-(2-metoksifenil)propanoil]oksazolidin-2-on kao bela čvrsta supstanca sa vrednošću de od 9:1 (S/R). Čvrsta supstanca je zatim prečišćena putem superkritične fluidne hromatografije (SFC) na IC koloni (10% MeOH/CO2izokratski gradijent) da bi se dobio (4S)-4-benzil-3-[(2S)-2-(2-metoksifenil)propanoil]oksazolidin-2-on (jedinjenje 2015, 3.14 g, 41.8% prinosa) sa enantiomernim viškom od 99.9% pomoću analitićke SFC:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.41-7.20 (m, 7H), 6.96 (dd, J = 13.8, 6.6 Hz, 1H), 6.93-6.84 (m, 1H), 5.30 (q, J = 7.1 Hz,

2

1H), 4.68 (qd, J = 6.7, 3.5 Hz, 1H), 4.22-4.11 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.35 (dd, J = 13.3, 3.2 Hz, 1H), 2.82 (dd, J = 13.3, 9.7 Hz, 1H), 1.64-1.46 (m, 3H).

[0149] Kao što je prikazano u koraku 5-iii šeme 5, ledeno hladnom rastvoru (4S)-4-benzil-3-[(2S)-2-(2-metoksifenil)-propanoil]oksazolidin-2-ona (3.10 g, 9.13 mmol) u THF (183 mL) i MeOH (1.24 mL) dodat je LiBH4(9.13 mL 2.0 M rastvora, 18.3 mmol) i reakcija je mešana na 0°C tokom 2 časa, zatim zagrevana do sobne temperature tokom 18 časova. Dodat je rastvor NaOH (18.6 mL 2.0 M rastvora) i reakcija mešana dok se oba sloja nisu izbistrila. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa Et2O (2x). Organski ekstrakti su kombinovani i oprani sa H2O, zasićenim rastvorom NaCl u vodi, osušeni nad MgSO4, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen pomoću „flash“ hromatografije na silika gelu (0 do 20% EtOAc u heksanima) da bi se dobio (2S)-2-(2-metoksifenil)propan-1-ol (jedinjenje 2016, 1.49 g, 95.4% prinosa) kao bistra, bezbojna tečnost:<1>H NMR (300 MHz, CDC13) δ 7.30-7.19 (m, 2H), 6.98 (td, J = 7.5, 1.0 Hz, 1H), 6.95-6.86 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.83-3.63 (m, 2H), 3.56-3.38 (m, 1H), 1.84 (s, 1H), 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 3H); [α] 25.7

D+4.18 (c 1.11, CHCl3). Ova optička rotacija upoređuje se sa rotacijom za jedinjenje 2016 kao što je opisano kod Denmark SE et al. u J. Am. Chem. Soc. Vol. 132, pages 3612-3620 (2010) i kod Matsumoto T et al., u Bull. Chem. Soc. Jpn. Vol.58, 340-345 (1985).

[0150] Referentno jedinjenje 34 proizvedeno kao što je opisano na šemi 4 i razdvojeno pomoću preparativne SFC separacije na kraju sinteze upoređeno je sa istim jedinjenjem pripremljenim upotrebom hiralnog intermedijernog jedinjenja 1016 u cilju određivanja njegove apsolutne stereohemijske konfiguracije.

Primer 6. Priprema (S)-N-(2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)-6-(6-(metilamino)piridin-3-il)pirimidin-4-amina (Referentno jedinjenje 430)

[0151]

[0152] Kao što je prikazano u koraku 6-i šeme 6, terc-butil (2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)alil)karbamat (jedinjenje 1017, 1.455 g, 5.138 mmol), 7-hlorofuro[3,2-b]piridin (0.789 g, 5.138 mmol), NaHCO3(8.56 mL 1.2 M, 10.276 mmol), DMF (14.3 mL), i H2O (4.8 mL) su kombinovani. Rezultujuća smeša je pročišćavana azotnim gasom tokom 10 minuta. Dodat je Pd(dppf)Cl2(419.6 mg, 0.514 mmol) i reakcija je zagrevana do 120°C u mikrotalasnoj peći 30 minuta. Sirova reakciona smeša je filtrirana preko dijatomejske zemlje i čep za filtriranje je opran etil acetatom. Kombinovane organske supstance su osušene (Na2SO4) i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (0-20% EtOAc/heksani) da bi se dobio terc-butil (2-(furo[3,2-b]piridin-7-il)alil)karbamat (jedinjenje 1019, 0.94 g, 67% prinosa): LCMS = 275.26 (M+H); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.01 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.02 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.34 (d, J = 5.6 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H).

[0153] Kao što je prikazano u koraku 6-ii šeme 6, smeša terc-butil (2-(furo[3,2-b]piridin-7-il)alil)karbamata (0.940 g, 3.427 mmol), Pd/C (10%, 364.7 mg, 3.427 mmol), EtOAc (34.3 mL) i MeOH (34.3 mL) je mešana pod H2na 1 atm 16 časova. Reakciona smeša je filtrirana

4

kroz dijatomejsku zemlju i čep filtera je ispran smešom 1:1 EtOAc/MeOH. Kombinovani filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (0-100% EtOAc/heksani) da bi se dobio terc-butil (2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)karbamat (jedinjenje 1020, 0.711 g, 75% prinosa): LCMS = 279.47 (M+H); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.98 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 4.54 (s, 1H), 3.44 - 3.20 (m, 4H), 3.13 - 3.00 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.24 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

[0154] Kao što je prikazano u koraku 6-iii šeme 6, terc-butil (2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)karbamat (710 mg, 2.551 mmol) je rastvoren u HCl (19.13 mL 4 M rastvora u dioksanu, 76.53 mmol) i reakciona smeša je mešana 10 minuta. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom i rezultujući 2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propan-1-amin·2HCl (LCMS = 179.22 [M+H]) je korišćen u sledećoj reakciji kao takav.

[0155] Kao što je prikazano u koraku 6-iv šeme 6, suspenziji 2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propan-1-amin-2HCl i 4,6-dihloropirimidina (456.0 mg, 3.061 mmol) u i-PrOH (17.01 mL) dodat je Et3N (1.291 g, 1.778 mL, 12.76 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 80°C tokom 2 časa, ohlađena do sobne temperature, i raspodeljena između zasićenog vodenog NaHCO3i EtOAc. Vodeni sloj je dalje ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 mL) i kombinovane organske supstance su oprane sa H2O (50 mL) i zasićenim rastvorom NaCl u vodi (50 mL), osušene (Na2SO4), filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (0-100% EtOAc/heksani, zatim izokratski sa EtOAc) da bi se dobio 6-hloro-N(2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)pirimidin-4-amin (600.3 mg, 81% prinosa u dva koraka). Hiralno SFC prečišćavanje (20% MeOH pri 5 mL/min na koloni ChiralPak® AD-H (4.6 mm x 100 mm), 100 bar, 35°C, 220 nm) dalo je (S)-6-hloro-N-(2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)pirimidin-4-amin (jedinjenje 2021, 300 mg, SFC retenciono vreme 1.05 minuta): LCMS = 291.04 (M+H); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 8.00 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.36 (s, 1H), 5.24 (s, 1H), 4.71 (t, J = 8.9 Hz, 2H), 3.61 - 3.35 (m, 4H), 3.23 (dd, J = 14.0, 6.9 Hz, 1H), 1.35 (d, J= 6.9 Hz, 3H). Odgovarajući (R)-enatiomer je imao retenciono vreme od 1.25 minuta).

[0156] Kao što je prikazano u koraku 6-v šeme 6, (S)-6-hloro-N-(2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)pirimidin-4-amin (29.2 mg, 0.1003 mmol), N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin (30.7 mg, 0.2006 mmol), Na2CO3(150.4 µL 2 M vodenog rastvora, 0.3009 mmol), i i-PrOH (2.0 mL) su kombinovani i pročišćeni azotnim gasom tokom 10 minuta. Dodati su SPhos (rastvorljiv u vodi, 10.28 mg, 0.0201 mmol) i Pd(OAc)2(1.13 mg, 0.0050 mmol) i reakciona posuda je čvrsto zatvorena i zagrevana do 120°C u mikrotalasnoj peći 30 minuta. Reakciona smeša je filtrirana preko dijatomejske zemlje i filtrat je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću reverzno-fazne HPLC (0-30% CH3CN/H2O, 0.1%TFA). Dobijena TFA so je neutralizovana upotrebom kasete StratoShperes™ PL-HCO3MP-Resin da bi se dobio (S)-N-(2-(2,3-dihidrofuro[3,2-b]piridin-7-il)propil)-6-(6-(metilamino)piridin-3-il)pirimidin-4-amin (referentno jedinjenje 430, 23.8 mg, 65% prinosa): LCMS = 364.12 (M+H); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.83 (s, 2H), 8.41 (s, 1H), 7.90 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.61 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 3.66 - 3.40 (m, 2H), 3.26 - 3.12 (m, 3H), 2.86 (d, J = 4.5 Hz, 3H), 1.21 (d, J = 6.6 Hz, 3H).

Primer 7. Priprema (S)-N6-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil)-N2’ -metil-[4,5’-bipirimidin]-2’,6-diamina (Referentno jedinjenje 462)

[0157] Kao što je prikazano u koraku 7-i šeme 7, terc-butil-N-(2-bromoalil)-N-tercbutoksikarbonil karbamat (22.0 g, 65.4 mmol), 8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin (16.4 g, 62.3 mmol), i natrijum karbonat (13.2 g, 125 mmol) su mešani u DME/H2O (2:1, 246 mL) i smeša je pročišćavana azotnim gasom tokom 30 minuta. Nakon dodavanja 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II), dihlorometan kompleksa (1.53 g, 1.87 mmol), smeša je pročišćavana azotnim gasom tokom dodatnih 5 minuta. Reakciona smeša je zagrevana na 85°C tokom 2 časa nakon čega je dodat MTBE (400 mL) i voda (100 mL). Organske supstance su oprane zasićenim rastvorom NaCl u vodi, osušene nad MgSO4, filtrirane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, razblažene minimalnom količinom DCM, i prečišćene pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-50% EtOAc/heksani) da bi se dobio terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)alil]karbamat (jedinjenje 2022, 19 g, 74% prinosa): ESMS = 393.74 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.75 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.40 (m, 2H), 4.25 (m, 2H), 1.45 (s, 18H).

[0158] Kao što je prikazano u koraku 7-ii šeme 7, terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)alil]karbamat (18.9 g, 48.2 mmol) je mešan u EtOAc (200 mL) sa 10% paladijumom na uglju (550 mg, 5.14 mmol). Reakciona smeša je pročišćena od atmosfere koja je zamenjena vodoničnim gasom (3x) i mešana pod atmosferom vodonika 5 časova. Atmosfera je zamenjena azotnim gasom i smeša je filtrirana, koncentrovana do minimalne zapremine pod sniženim pritiskom, i prečišćena pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% EtOAc/heksani) da bi dala terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil] karbamat (jedinjenje 2023, 18.06 g, 95% prinosa): ESMS = 395.75 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.75 (d, 1H), 6.75 (d, 1H), 4.45 (s, 2H), 4.25 (m, 2H), 3.65-3.80 (m, 3H), 1.45 (s, 18H), 1.25 (3H).

[0159] Kao što je prikazano u koraku 7-iii šeme 7, terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin8-il)propil]karbamat (18.0 g, 45.6 mmol) je razblažen sa EtOH i alikvoti su prečišćeni pomoću superkritične fluidne hromatografije na koloni Chiralpak® za preparativnu IC (10 mm x 250 mm) eluiranjem sa 40% CO2/EtOH na 35°C i pritisku od 100 atmosfera sa protokom od 12 mL/min. Prvi pik za eluiranje (retenciono vreme = 6.61 minut) je sakupljen. Sve frakcije prvog pika su kombinovane i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil]karbamat (jedinjenje 2024, 7.74 g, 43% prinosa, enantiomerni višak = 97.9%)

[0160] Kao što je prikazano u koraku 7-iv šeme 7, (S)-terc-butil N-terc-butoksikarbonil-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil]karbamat (7.74 g, 39.8 mmol) je rastvoren u EtOH, dodata je HCl u IPA (60 mL 4 M rastvora, 240 mmol) i reakciona smeša je refluksovana 1 čas. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom do minimalne zapremine, dodat je Et2O, i rezultujuća suspenzija je mešana 16 časova. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio (S)-2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propan-1-amin, dihidrohlorid kao žućkasta čvrsta supstanca (jedinjenje 2025, 10.55 g, 100% prinosa): 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, 1H), 7.10 (d, 1H), 4.50 (m, 2H), 4.40 (m, 2H), 3.40 (m, 1H), 3.00 (m, 2H), 1.25 (d, 3H).

[0161] Kao što je prikazano u koraku 7-v šeme 7, (S)-2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propan-1-amin, dihidrohlorid (10.0 g, 49.5 mmol), 4,6-dihloropirimidin (8.11 g, 54.5 mmol), i TEA (15.03 g, 20.7 mL, 148.6 mmol) su mešani u NMP (125 mL) na 50°C tokom 3.5 časa. Reakciona smeša je ohlađena, dodato je 300 mL EtOAc, organske supstance su oprane vodom, osušene nad Na2SO4, filtrirane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, razblažene minimalnom količinom DCM, i prečišćene pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% EtOAc/heksani). Frakcije koje sadrže proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom dajući ulje koje je rastvoreno u vrućem MTBE. Hlađenje rastvora MTBE rezultovalo je talogom koji je sakupljen filtracijom i suspendovan u smeši 4:1 heksan/MTBE. Čvrsta supstanca je ponovo sakupljena filtracijom da bi se dobio 6-hloro-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil]pirimidin-4-amin (jedinjenje 2026, 10.78 g, 71% prinosa): ESMS = 307.21 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.33 (s, 1H), 7.78 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 4.44 (m, 2H), 4.34 - 4.21 (m, 2H), 3.50 (m, 3H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 3H).

[0162] Porcija 6-hloro-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil]pirimidin-4-amina je rekristalizovana iz toluena i rezultujući kristali su analizirani kristalografijom X-zraka, potvrđujući (S)-konfiguraciju. Difrakcija X-zraka na prahu (XRPD) pokazala je pikove na 8.75, 10.30, 14.15, 17.50, 18.30, 18.80, 20.75, 20.95, 23.10, 23.95, 24.60, 26.20, 26.90, 29.20, 29.95, 30.45, i 31.95 (2-teta skala).

[0163] Kao što je prikazano u koraku 7-vi šeme 7, 6-hloro-N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil]pirimidin4-amin (410 mg) je rastvoren u IPA (0.75 mL). N-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin-2-amin (23 mg) je dodat, nakon čega je dodato 2M Na2CO3(122 µL) i 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(II), dihlorometan kompleks (7 mg). Reakciona posuda je čvrsto zatvorena i zagrevana na 80°C preko noći. Smeša je ohlađena, razblažena etil acetatom, oprana vodom, osušena nad Na2SO4, filtrirana, koncentrovana pod sniženim pritiskom i prečišćena pomoću reverzno-fazne HPLC, 5-50% ACN/H2O/0.1% TFA. Frakcije koje sadrže čist proizvod su sakupljene, rastvorene u MeOH, propuštene kroz karbonatnu kasetu, i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-N<6>-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil)-N2’ -metil-[4,5’-bipirimidin]-2’,6-diamin (referentno jedinjenje 462): ESMS = 380.39 (M+H); 1H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8.75 (s, 2H), 8.47 (s, 1H), 7.65 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.46 - 4.34 (m, 2H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 3.59 (ddd, J = 12.0, 11.5, 7.3 Hz, 3H), 2.99 (s, 3H), 1.32 (d, J = 6.7 Hz, 3H).

Primer 8. Priprema (S)-N-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-]piridin-8-il)propil)-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin4-amina (Referentno jedinjenje 443)

[0164]

[0165] Kao što je prikazano u koraku 8-i šeme 8, N-(2-bromoalil)-6-(6-metil-3-piridil)pirimidin-4-amin (240 mg, 0.7792 mmol, jedinjenje 2027; koje je pripremljeno reakcijom 4-hloro-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidina sa 2-bromoprop-2-en-1-aminom pod baznim uslovima), 8-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2,3-dihidro-[1,4]dioksino [2,3-b]piridin (287.0 mg, 1.091 mmol) i Na2CO3(1.169 mL, 2 M, 2.338 mmol) su mešani u DMSO (5.945 mL). Dodat je Pd(dppf)Cl2(63.63 mg, 0.07792 mmol) i reakciona smeša je mešana na 100°C tokom 1 časa, zatim na RT tokom 16 časova. Nakon ovog vremena reakciona smeša je raspodeljena između EtOAc i vode, organske supstance su osušene nad Na2SO4, filtrirane, i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u DCM i prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (20-100% EtOAc/heksani, zatim 0-10% MeOH/DCM) da bi se dobio N-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)alil)-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-amin (jedinjenje 2028) kao žuto ulje: LCMS = 362.37 (M+H). Ovaj materijal je korišćen u sledećim reakcijama.

[0166] Kao što je prikazano u koraku 8-ii šeme 8, N-[2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)alil]-6-(6-metil-3-piridil)pirimidin-4-amin (150 mg, 0.4151 mmol) je rastvoren u MeOH i reakciona smeša je stavljena pod atmosferu H2. Nakon mešanja tokom 2 časa, smeša je filtrirana, koncentrovana pod sniženim pritiskom, i prečišćena pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-5% MeOH/DCM) da bi se dobio N-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil)-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-amin (jedinjenje 2029): LCMS = 364.39 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.00 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.20 (dd, J = 8.1, 2.3 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.43 (dd, J = 5.1, 3.0 Hz, 2H), 4.27 (dd, J = 5.1, 3.0 Hz, 2H), 3.56 (m, 3H), 2.62 (s, 3H), 1.32 (d, 3H).

[0167] Kao što je prikazano u koraku 8-ii šeme 8, N-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-b]piridin-8-il)propil)-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-amin je prečišćen pomoću superkritične fluidne hromatografije upotrebom kolone ChiralPak® IC™ (10 mm x 250 mm, 1/1 CO2/EtOH 35°C, 12 mL/min, 100 atm.) Frakcije proizvoda koji je prvi eluiran sa retencionim vremenom od 11.08 minuta su kombinovane da bi se dobio (S)-N-(2-(2,3-dihidro-[1,4]dioksino[2,3-]piridin-8-il)propil)-6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-amin (referentno jedinjenje 443).

Primer 9. Priprema (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan-2-il)kvinolin-4-karboksamida (Referentno jedinjenje 578)

[0168]

[0169] Kao što je prikazano u koraku 9-i šeme 9, u 4,6-dihloropirimidin (265.3 g, 1.781 mol) u 1.68 L DME dodat je CsF (241.5 g, 1.59 mol) i 700 mL vode. Smeša je pročišćavana azotnim gasom 30 minuta i dodat je Pd(PPh3)4(22.05 g 19.08 mmol). Rezultujući svetlo žuti rastvor je pročišćen azotnim gasom tokom dodatnih 40 minuta, zagrejan do refluksa, i rastvor 2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidina (140 g, 636.1 mmol u 420

1

mL DME) pročišćen azotom je dodavan u kapima tokom 1.6 časova. Rezultujući tamno crveni rastvor je refluksovan pod atmosferom azota 16 časova. Nakon ovog vremena smeša je ohlađena do RT i dodato je 300 mL vode. Smeša je zatim ohlađena do 5°C i mešana 40 minuta. Rezultujući talog (6-hloro-2’-metil-4,5’-bipirimidin, jedinjenje 2039) je sakupljen filtracijom, opran sa 50 mL vode, nakon čega je opran sa 150 mL EtOAc. Filtrat je razdvojen u dva sloja i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 1 L). Kombinovane organske supstance su osušene preko Na2SO4, koncentrovane pod sniženim pritiskom, razblažene sa 300 mL DCM, i prečišćene pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0 -100% EtOAc/DCM). Frakcije koje sadrže čist proizvod su koncentrovane pod sniženim pritiskom i koncentrat je obrađen sa 400 mL heksana da bi se dobilo jedinjenje 2039 kao čvrsta supstanca. Ovaj materijal je kombinovan sa čvrstim proizvodom koji je prethodno sakupljen i obrađen sa 400 mL smeše 1:1 THF/DCM. Rezultujuća suspenzija je zagrejana i preneta u levak za filtraciju koji sadrži čep od medijuma Florisil®. Čep je opran sa dodatnim 1:1 THF/DCM kako bi se rastvorio bilo kakav preostali čvrsti materijal i zatim opran sa 4:1 EtOAc/DCM (2 x 1L). Kombinovani filtrati su koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobila čvrsta supstanca ružičaste boje koja je triturisana sa 500 mL heksana, sakupljena filtracijom, i osušena pod sniženim pritiskom da bi se dobio 6-hloro-2’-metil-4,5’-bipirimidin (jedinjenje 2039, 88.8 g, 68% prinosa): LC-MS = 207.01 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.30 (s, 2H), 9.10 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H).

[0170] Kao što je prikazano u koraku 9-ii šeme 9, 2-bromoanilin (520 g, 3.023 mol) je otopljen na 50°C u peći i zatim dodat u reakcionu posudu koja sadrži sirćetnu kiselinu koja se meša (3.12 L). Metansulfonska kiselina (871.6 g, 588.5 mL, 9.069 mol) je zatim dodavana u toku 15 minuta. Reakciona smeša je zagrevana do 60°C i dodavan je metil vinil keton (377 mL, 1.5 ekviv.) tokom 5 minuta i reakciona smeša je mešana 1 čas na 90°C. Posle ovog vremena, dodato je još 50 mL (0.2 ekviv.) metil vinil ketona i reakciona smeša je mešana dodatnih 16 časova. Rezultujući tamno smeđi rastvor je ohlađen pomoću kupatila sa ledom i vodom i izliven u porcijama u mešani rastvor 50% tež./tež. vodenog rastvora NaOH (3.894 L, 73.76 mol) i leda (1 kg) koji se takođe hladio pomoću kupatila sa ledom i vodom. Led je po potrebi dopunjavan tokom dodavanja da bi se temperatura reakcije održala ispod 25°C. Kada je dodavanje bilo završeno, reakciona smeša (pH > 10) je mešana tokom 30 minuta uz hlađenje u vodenom kupatilu led/voda. Obrazovani talog je sakupljen filtracijom, opran vodom (2 L x 3) i rastvoren u DCM (4 L). Organske supstance su oprane vodom (2 L) i vodena faza podvrgnuta povratnoj ekstrakciji sa DCM (1 L). Kombinovane organske

2

supstance su osušene preko Na2SO4, filtrirane kroz čep silika gela (oko 2 L), eluirane sa DCM, a zatim 3% EtOAc/DCM, dok sav proizvod nije prošao kroz čep. Isparljive supstance filtrata su uklonjene na sniženom pritisku i ostatak je triturisan heksanima (oko 500 mL). Rezultujuća čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, oprana heksanima (4 x 500 mL), i osušena pod vakuumom da bi se dobio 8-bromo-4-metilkvinolin (jedinjenje 2030, 363 g, 54% prinosa) kao čvrsta supstanca svetlo drap boje: LC-MS = 222.17 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.91 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H).

[0171] Kao što je prikazano u koraku 9-iii šeme 9, selen dioksid (764.7 g, 6.754 mol) je apsorbovan u 3.25 L dioksana i 500 mL vode. Mešani rastvor je zagrevan do 77°C i 8-bromo-4-metilkvinolin (jedinjenje 2030, 500 g, 2.251 mol) je dodat u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana na refluksu 30 minuta i zatim ohlađena u vodenom kupatilu do oko 45°C, i na toj temperaturi je primećeno obrazovanje taloga. Suspenzija je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju koja je zatim oprana vrućim THF da bi se rastvorili bilo kakvi čvrsti ostaci. Filtrat je koncentrovan do minimalne zapremine pod sniženim pritiskom i 2M NaOH (2.81 L, 5.63 mol) je dodato da bi se dobila vrednost pH od 8 do 9. Reakciona smeša je mešana na ovom pH tokom 30 minuta. Nastali talog je sakupljen filtracijom i osušen na vazduhu preko noći da bi se dobio 8-bromokvinolin-4-karbaldehid (jedinjenje 2031) kao žućkasta čvrsta supstanca: MS = 236.16 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 10.52 (s, 1H), 9.34 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 9.05 (dd, J = 8.5, 1.2 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 8.5, 7.5 Hz, 1H). Ovaj materijal je korišćen kao takav u narednim reakcijama.

[0172] Kao što je prikazano u koraku 9-iv šeme 9, mešanoj suspenziji 8-bromokvinolin-4-karbaldehida (531.4 g, 2.25 mol) u THF (4.8 L) dodata je voda (4.8 L) i mononatrijum fosfat (491.1 g, 4.05 mol). Smeša je ohlađena do 5°C i, uz održavanje temperature reakcije ispod 15°C, natrijum hlorit (534.4 g, 4.727 mol) kao čvrsta supstanca je polako dodavan u porcijama u toku približno 1 časa. Nakon što je dodavanje završeno reakciona smeša je mešana na 10°C tokom 1 časa, nakon čega je u porcijama dodat 1N Na2S2O3(1.18 L) uz održavanje temperature ispod 20°C. Reakciona smeša je mešana na RT, nakon čega je THF uklonjen pod sniženim pritiskom. Rezultujući vodeni rastvor koji sadrži talog je obrađen zasićenim NaHCO3(oko 1 L) do postizanja pH od 3 do 4. Ova smeša je mešana dodatnih 15 minuta i čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, oprana vodom (2 x 1 L), oprana terc butil metil etrom (2 x 500 mL), i osušena u konvekcijskoj peći na 60°C u toku 48 časova. Dodatno sušenje pod visokim vakuumom je dalo 8-bromokvinolin-4-karboksilnu kiselinu (jedinjenje 2032, 530.7g, 94% prinosa od jedinjenja 1030) kao žućkasto-drap čvrstu supstancu: LC-MS = 252.34 (M+H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14.09 (s, 1H), 9.16 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.71 (dd, J = 8.6, 1.2 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 8.6, 7.5 Hz, 1H).

[0173] Kao što je prikazano u koraku 9-v šeme 9, suspenziji 8-bromokvinolin-4-karboksilne kiseline (jedinjenje 2032, 779.4 g, 3.092 mol) u DCM (11.7 L) dodat je anhidrovani DMF (7.182 mL, 92.76 mmol). Reakciona smeša je ohlađena do 10°C i oksalil hlorid (413 mL, 4.638 mol) je dodavan u kapima tokom 30 minuta. Reakciona smeša je mešana dodatnih 30 minuta po završetku dodavanja, preneta u bocu za uparavanje, i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Anhidrovani THF (2 L) je dodat i isparljive supstance su još jednom uklonjene pod sniženim pritiskom kako bi se uklonio sav preostali oksalil hlorid. Anhidrovani THF je dodat ostatku pod atmosferom azota i rezultujuća suspenzija intermedijera hlorida 8-bromokvinolin-4-karboksilne kiseline je sačuvana za kasniju upotrebu. Odvojeno, polazna reakciona boca je dobro pročišćena azotnim gasom da bi se uklonio sav preostali oksalil hlorid i boca je napunjena suvim THF (1.16 L). Posle hlađenja do 5°C, dodat je vodeni metil amin (2.14 L, 40% tež./tež. MeNH2/voda, 24.74 mol), nakon čega je dodato još THF (1.16 L). Ovom rastvoru je dodavana u porcijama, tokom 1 časa intermedijerna suspenzija hlorida kiseline, uz održavanje temperature reakcione smeše ispod 20°C tokom dodavanja. Posuda za uparavanje koja je korišćena za čuvanje hlorida kiseline isprana je anhidrovanim THF i vodenim MeNH2(500 mL) i ovo je dodato reakcionoj smeši, koja je ostavljena da postigne sobnu temperaturu 16 časova. Organske isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom i preostala uglavnom vodena suspenzija je razblažena vodom (1.5 L). Čvrste supstance su sakupljene filtracijom, oprane vodom dok filtrat nije imao vrednost pH manju od 11, oprane sa MTBE (2 x 800 mL), i osušene u konvekcijskoj peći na 60°C da bi se dobio 8-bromo-N-metil-kvinolin-4-karboksamid (jedinjenje 2033, 740.4 g, 90% prinosa) kao svetlo smeđa čvrsta supstanca: LC-MS = 265.04 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9.08 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.21 (dd, J = 7.5, 1.2 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.58 (dd, J = 8.5, 7.5 Hz, 1H), 2.88 (d, J = 4.6 Hz, 3H).

[0174] Kao što je prikazano u koraku 9-vi šeme 9, 8-bromo-N-metil-kvinolin-4-karboksamid (jedinjenje 2033, 722 g, 2.723 mol) i terc-butil-N-[2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)alil]karbamat (jedinjenje 2034, 925.4 g, 3.268 mol) su kombinovani u reakcionoj boci. Dodat je Na2CO3(577.2 g, 5.446 mol), nakon čega je dodata voda (2.17 L). Smeša je mešana

4

tokom 5 minuta, 1,4-dioksan (5.78 L) je dodat, i smeša je deoksigenovana propuštanjem struje mehurića azotnog gasa 30 minuta. Dodat je Pd(dppf) Cl2/DCM (44.47 g, 54.46 mmol) i deoksigenacija je nastavljena kao i prethodno dodatnih 30 minuta. Reakciona smeša je mešana na refluksu 16 časova, ostavljena da se ohladi do 70°C, i dodata je voda (5.42 L). Smeša je dalje ohlađena pomoću kupatila sa ledom i vodom i mešanje je nastavljeno na <10°C tokom 2 časa. Nastali talog je sakupljen filtracijom, opran vodom (3 x 1L), i opran sa TBME (2 x 1L). Rezultujući kolač taloga je razdvojen na dva jednaka dela. Svaki deo je rastvoren u THF/DCM (4 L) i sipan na čep od medijuma Florisil® (filtracioni levak od 3 L sa oko 1.5 L florisila, uz upotrebu DCM za kvašenje čepa). Čep je zatim ispiran sa MeTHF dok tankoslojnom hromatografijom nije utvrđeno da u filtratu nema više zaostalog proizvoda. Filtrati iz oba dela kolača su kombinovani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobila čvrsta supstanca narandžaste boje. Dodat je TBME (1 L) i rezultujuća suspenzija je filtrirana. Sakupljena čvrsta supstanca je oprana sa 800 mL TBME i osušena pod visokim vakuumom preko noći da bi se dobio terc-butil (2-(4-(metilkarbamoil)kvinolin-8-il)alil)karbamat (jedinjenje 2035, 653 g, 70% prinosa) kao beličasta čvrsta supstanca: LC-MS = 342.31 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.93 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.68 - 7.53 (m, 2H), 7.41 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 6.09 (br. s, 1H), 5.54 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.10 (br. s, 1H), 4.33 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.11 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 1.38 (s, 9H). Dodatni proizvod (34.9 g, 74% ukupnog prinosa) dobijen je koncentrovanjem filtrata pod sniženim pritiskom, rastvaranjem ostatka u THF, filtriranjem rastvora kroz čep od medijuma Florisil® kao i prethodno, pranjem čepa sa MeTHF, koncentrovanjem filtrata pod sniženim pritiskom, dodavanjem 250 mL TBME, mešanjem tokom 0.5 časova, sakupljanjem rezultujućeg taloga filtracijom, pranjem čvrste supstance sa EtOAc (40 mL), acetonitrilom (50 mL), i sušenjem čvrste supstance pod visokim vakuumom preko noći.

[0175] Kao što je prikazano u koraku 9-vii šeme 9, mešanoj suspenziji terc-butil (2-(4-(metilcarbamoil)kvinolin-8-il)alil)karbamata (jedinjenje 2035, 425 g, 1.245 mol) u EtOH (4.25 L) dodat je 5.5M HCl u iPrOH (1.132 L, 6.225 mol). Reakciona smeša je mešana na refluksu (unutrašnja temp. 76°C) 30 minuta, a zatim tokom 90 minuta tokom kojih je dopušteno da se ohladi do 40°C. Dodat je EtOAc (2.1 L) i smeša je mešana tokom dodatnih 2 časa. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, oprana sa EtOAc, i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio 8-[1-(aminometil)vinil]-N-metilkvinolin-4-karboksamid, dihidrohlorid (jedinjenje 2036, 357.9 g, 91% prinosa) kao drap čvrsta supstanca: LC-MS = 242.12 (M+H); 1H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 9.07 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.27 (dd, J = 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.89 (dd, J = 7.2, 1.5 Hz, 1H), 7.81 - 7.72 (m, 2H), 5.85 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 4.05 (s, 2H), 3.04 (s, 3H).

[0176] Kao što je prikazano u koraku 9-viii šeme 9, 8-[1-(aminometil)vinil]-N-metilkvinolin-4-karboksamid, dihidrohlorid (jedinjenje 2036, 168.8 g, 537 mmol) je mešan u MeOH (1.688 L) i dodat je TEA (114.2 g, 157.3 mL, 1.129 mol), nakon čega je dodato 5% Pd na BaSO4(22.88 g, 10.75 mmol). Atmosfera reakcione smeše je zamenjena vodoničnim gasom i reakcija je mešana pod 1 atmosferom vodonične atmosfere 16 časova. Pole ovog vremena, atmosfera vodonika je uklonjena i smeša filtrirana kroz dijatomejsku zemlju, koncentrovana pod sniženim pritiskom, i obrađena sa 800 mL vode i 250 mL DCM. Rezultujuća dvofazna smeša je intenzivno mešana dok se većina čvrstih supstanci nije rastvorila, rezultujući u gustoj smeši koja se stajanjem razdvaja. Vrednost pH vodenog sloja je proverena i nađeno je da iznosi pH = 8. Ovaj sloj je opran sa 3 x 500 mL DCM, pH je podešen na 14 sa 500 mL 6N NaOH, i sloj je ekstrahovan sa dodatnih 500 mL DCM. Vodeni rastvor je zatim obrađen sa 500 g NaCl i ekstrahovan sa dodatnih 500 mL DCM. Kombinovane organske supstance su osušene preko Na2SO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom da bi se dobio 8-(1-aminopropan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid [jedinjenje 2037 (racemska smeša) 104.2 g, 80% prinosa]: LC-MS = 244.43 (M+H); 1H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8.94 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H), 7.72 - 7.59 (m, 2H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.30 (h, J = 7.0 Hz, 1H), 3.04 (dd, J = 12.7, 7.0 Hz, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.90 (dd, J = 12.7, 6.9 Hz, 1H), 1.40 (d, J = 7.1 Hz, 3H).

[0177] Kao što je prikazano u koraku 9-ix šeme 9, dva racemata 8-(1-aminopropan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamida (referentno jedinjenje 137, 1380.5 g) su razdvojena pomoću hiralne HPLC. Prema tome, alikvoti od 260 mL racemske smeše (6 mg/mL) naneti su na kolonu Chiralpak AY™ (11 cm x 25 cm) i eluirani acetonitrilom (0.2% TEA) pri protoku od 400 mL/minutu. Eluirana su dva glavna pika. Pik 1 je imao retenciono vreme od 7.7 minuta, a pik 2 je imao retenciono vreme od 12.2 minuta kada su ispitivani primenom HPLC (Chiralpak AY-H™ kolona (4.6 mm x 250 mm) eluirani acetonitrilom (0.1% izopropilamin) pri protoku od 1 mL/min). Kombinovane frakcije pika 2 su sakupljene i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom da bi se dobio 8-[(1S)-2-amino-1-metil-etil]-N-metilkvinolin-4-karboksamid (578.3 g, 97.4% enantiomerni višak): specifična rotacija (10 mg/mL u MeOH, ćelija 100 mm) = 24.20; LC-MS = 244.19 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, metanold4) δ 8.94 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.02 (dd, J = 8.3, 1.6 Hz, 1H), 7.72 - 7.59 (m, 2H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.30 (h, J = 7.0 Hz, 1H), 3.05 (dd, J = 12.8, 7.1 Hz, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.90 (dd, J = 12.7, 6.9 Hz, 1H), 1.40 (d, J = 7.0 Hz, 3H). So HCl je obrazovana dodavanjem 5N HCl/IPA (220 mL, 1.100 mol) mešanom rastvoru 8-[(1S)-2-amino-1-metil-etil]-N-metil-kvinolin-4-karboksamida (244.5 g, 1.005 mmol) u 980 mL smeše 1:1 MeOH/DCM koji je hlađen u ledenom kupatilu. Ledeno kupatilo je uklonjeno i 1470 mL Et2O je dodato u porcijama. Talog je sakupljen filtracijom, opran sa Et2O i osušen pod visokim vakuumom da bi se dobio 8-[(1S)-2-amino-1-metil-etil]-N-metilkvinolin-4-karboksamid, hidrohlorid (jedinjenje 2038, 275.8 g 98.1% prinosa).

[0178] Kao što je prikazano u koraku 9-x šeme 9, mešanom rastvoru 4-hloro-6-(2-metilpirimidin-5-il)pirimidina (jedinjenje 2039, 60 g, 290.4 mmol) i 8-[(1S)-2-amino-1-metiletil]-N-metil-kvinolin-4-karboksamid, hidrohlorida (jedinjenje 2038, 82.87 g, 296.2 mmol) u THF (600 mL) dodata je voda (168.0 mL) i zatim 2M Na2CO3(vodeni) (363 mL, 726.3 mmol). Reakciona smeša je mešana na refluksu 16 časova. Rezultujući talog je solubilizovan dodavanjem 2M HCl. Rastvor je opran sa DCM (3 x 500 mL) što je praćeno sporim dodavanjem 6M NaOH do postizanja pH od 7. Reakciona smeša je mešana tokom 1 časa na RT. Rezultujući talog je sakupljen filtracijom i opran vodom (4 x 250 mL) i IPA (4 x 125 mL). Čvrsta supstanca je zatim osušena pod visokim vakuumom na 50°C tokom 16 časova da bi se dobio (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan-2-il)kvinolin-4-karboksamid (referentno jedinjenje 578, 102 g, 85% prinosa) kao svetlo drap čvrsta supstanca: LC-MS = 414.40 (M+H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 70°C) δ 9.14 (s, 2H), 8.95 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.34 (br. s, 1H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.28 (br. s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.52 (h, J = 7.0 Hz, 1H), 3.83 - 3.66 (m, 2H), 2.88 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 2.68 (s, 3H), 1.42 (d, J = 6.9 Hz, 3H).

Primer 10. Priprema (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-4’,6’-dideutero-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan-2-il)kvinolin-4-karboksamida (Referentno jedinjenje 844)

[0179]

[0180] Kao što je prikazano u koraku 10-i šeme 10, terc-butil (2-(4-(metilkarbamoil)kvinolin-8-il)alil)karbamat (jedinjenje 2035, 83 g, 243.1 mmol) je apsorbovan u EtOH i mešan 10 minuta. Rastvoru je dodat HCl/i-PrOH (5M, 194.5 mL, 972.4 mmol) na RT. Reakciona smeša je zagrejana do 60°C i mešana 2 časa. Nakon hlađenja, smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom nakon čega je voda u tragovima uklonjena azeotropski sa toluenom pod sniženim pritiskom. Trituracijom sa EtOAc dobijena je drap čvrsta supstanca (74 g) koja je rastvorena u smeši voda/THF (415 mL/300 mL). Natrijum bikarbonat (61.27 g, 729.3 mmol) je dodat u porcijama na RT i reakciona smeša je mešana 10 minuta po završetku dodavanja. Posle hlađenja do 0°C, anhidrid sirćetne kiseline (68.81 mL, 74.45 g, 729.3 mmol) u THF (120 mL) dodat je u kapima. Reakciona smeša je ostavljena da dostigne RT i mešana 12 časova. Razblaživanje vodom je proizvelo belu čvrstu supstancu koja je sakupljena filtracijom i oprana sa MTBE (2 x 500 mL). Filtrat je ekstrahovan sa EtOAc (4 x 500 mL) i kombinovani ekstrakti oprani zasićenim rastvorom NaCl u vodi (100 mL), osušeni nad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa MTBE (500 mL) i rezultujuća čvrsta supstanca kombinovana sa čvrstom supstancom sakupljenom filtracijom da bi se dobio 8-(3-acetamidoprop-1-en-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid (jedinjenje 2040, 42.4 g ukupno, 62% prinosa) kao beličasta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.96 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.72 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.21 - 7.96 (m, 2H), 7.69 - 7.56 (m, 2H), 7.53 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 5.35 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.30 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 2.87 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 1.80 (s, 3H).

[0181] Kao što je prikazano u koraku 10-ii šeme 10, pod atmosferom azota 8-(3-acetamidoprop-1-en-2-il)-N-metil-kvinolin-4-karboksamid (12.4 g, 43.77 mmol) i ciklookta-1,5-dien/(2R,5R)-1-[2-[(2R,5R)-2,5-dietilfosfolan-1-il]fenil]-2,5-dietil-fosfolan: rodijum(+1) katjon- trifluorometansulfonat (Rh(COD)(R,R )-Et-DuPhos-OTf, 316.3 mg, 0.4377 mmol) u metanolu (372.0 mL) su kombinovani i zagrevani do 35-40°C dok čvrste supstance nisu rastvorene. Reakciona smeša je smeštena u aparaturu za hidrogenaciju, atmosfera je zamenjena vodonikom, i smeša mućkana pod pritiskom od 100 psi vodonika na 50°C tokom 14 časova. Nakon hlađenja do RT, smeša je filtrirana kroz čep od medijuma Florisil®, koji je zatim opran sa MeOH (2 x 50 mL). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i sva voda u tragovima uklonjena putem azeotropa DCM pod sniženim pritiskom. Ostatak je triturisan sa 20% DCM u MTBE (2 x 100 mL) da bi se dobio (S)-8-(1-acetamidopropan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid (jedinjenje 2041, 11.0 g, 88 % prinosa, 96% enantiomerni višak) kao beličasta čvrsta supstanca:<1>H-NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8.97 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.88 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 7.73-7.54 (m, 2H), 7.52 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 14.3, 7.1 Hz, 1H), 3.55 - 3.32 (m, 3H), 2.86 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.28 (d, J = 7.0 Hz, 3H). Enantiomerni višak (e.e.) je određen hiralnom HPLC (ChiralPac IC, 0.46 cm x 25 cm], protok 1.0 mL/min, 20 minuta na 30°C (20:30:50 metanol/ etanol/ heksani i 0.1 % dietilamin) sa retencionim vremenom za (R)-enantiomer od 5.0 minuta, i za (S)-enantiomer od 6.7 minuta.

[0182] Kao što je prikazano u koraku 10-iii šeme 10, (S)-8-(1-acetamidopropan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid (11.0 g, 38.55 mmol) u 6M vodenom rastvoru HCl (192.7 mL, 1.156 mol) je zagrejan do 60°C. Nakon mešanja tokom 2 dana na ovoj temperaturi, reakciona smeša je ohlađena i dodato je još 20 mL 6M HCl. Mešanje je nastavljeno dodatna 2 dana na 70°C. Reakciona smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i pH je podešen do oko 11 sa 6M NaOH (vodeni). Vodena smeša je ekstrahovana sa 5% MeOH/DCM i kombinovani organski ekstrakti su oprani vodom (60 mL), zasićenim rastvorom NaCl u vodi (100 mL), osušeni nad natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod kao drap čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca je suspendovana u EtOAc (200 mL), ohlađena do 3°C u ledenom kupatilu, i 6M HCl/i-PrOH (30 mL) je dodata u porcijama da bi se dobio beli talog koji je sakupljen filtracijom. Čvrsta supstanca je oprana sa EtOAc (100 mL) i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio (S)-8-(1-aminopropan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid, dihidrohlorid [jedinjenje 2038, 7.8 g, 61% prinosa, 95% čistoće (5% jedinjenje 2041)] kao bela čvrsta supstanca. Ovaj materijal je korišćen kao takav u narednim reakcijama.

[0183] Kao što je prikazano u koraku 10-iv šeme 10, 8-[(1S)-2-amino-1-metil-etil]-N-metilkvinolin-4-karboksamid, hidrohlorid (jedinjenje 2038, 24.0 g, 72.86 mmol) je apsorbovan u THF (230 mL) i vodi (40 mL) i mešan 5 minuta. Natrijum karbonat (15.44g, 145.7 mmol) u 100 mL vode je dodat, i reakciona smeša je mešana 10 minuta. Dodat je 4,6-dihloropirimidin (12.18 g, 80.15 mmol) i reakciona smeša je zagrevana na refluksu na 66°C u trajanju od 2 časa. Reakciona smeša je ohlađena do RT, razblažena sa 200 mL EtOAc, organski sloj je izdvojen, i vodeni sloj je ekstrahovan sa 100 mL EtOAc. Kombinovane organske supstance su oprane vodom (60 mL), zasićenim rastvorom NaCl u vodi (100 mL), osušene nad Na2SO4, filtrirane kroz čep od silika gela (100 g), i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Rezultujući sirovi proizvod je triturisan sa 20% DCM u MBTE (200 mL), zatim MBTE (200 mL) da bi se dobio (S)-8-(1-((6-hloropirimidin-4-il)amino)propan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid (jedinjenje 2042, 23.15 g, 88% prinosa) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 70°C) δ 8.97 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.03 (d, J -8.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.66-7.55 (m, 1H), 7.52 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 6.63 (s, 1H), 4.46 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H), 3.67 (s, 2H), 2.90 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 1.40 (d, J = 7.0 Hz, 3H); [α] 24

D= 44.77 (c = 1.14, MeOH).

[0184] Kao što je prikazano u koraku 10-v šeme 10, rastvoru 4,6-dihloro-2-metil-pirimidin-5-amina (14.04 g, 78.88 mmol) mešanom u metanolu-d4(140.4 mL) dodata je mravlja kiselina d2(7.77 g, 161.7 mmol) i crni Pd (765 mg, 7.19 mmol, nakvašen u metanolu-d4), praćen trietilaminom (16.36 g, 22.53 mL, 161.7 mmol). Reakciona smeša je čvrsto zatvorena u epruveti i mešana na RT preko noći. Smeša je zatim filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Dodat je Et2O (250 mL) i smeša je mešana 1 čas na RT. Rezultujuće čvrste supstance su filtrirane i oprane sa Et2O (x2). Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio 4,6-dideutero-2-metil-pirimidin-5-amin (jedinjenje 2043, 5.65g, 65% prinosa) kao svetlo žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 5.25 (s, 2H), 2.40 (s, 3H). Ovo jedinjenje je korišćeno u narednim koracima bez dodatnog prečišćavanja.

[0185] Kao što je prikazano u koraku 10-vi šeme 10, 4,6-dideutero-2-metil-pirimidin-5-aminu (5.35 g, 48.14 mmol) u CH3CN (192.5 mL) dodat je dibromobakar (16.13 g, 3.38 mL, 72.21 mmol), a zatim t-butilnitrit (8.274 g, 9.54 mL, 72.21 mmol). Posle 1 časa, reakcija je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju sa dihlorometanom. Filtrat je opran vodom/zasićenim rastvorom NaCl u vodi (1:1), organski sloj je odvojen, vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom (2x), i kombinovani organski slojevi su filtrirani kroz dijatomejsku zemlju i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-10% EtOAc/heksani) da bi se dobio 5-bromo-4,6-dideutero-2-metil-pirimidin (jedinjenje 2044, 4.1 g, 49% prinosa): 1H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 2.64 (s, 3H).

[0186] Kao što je prikazano u koraku 10-vii šeme 10, smeša 5-bromo-4,6-dideutero-2-metilpirimidina (8.5 g, 48.57 mmol), bis(pinakolato)diborona (13.57 g, 53.43 mmol), i KOAc (14.30 g, 145.7 mmol) u 2-metiltetrahidrofuranu (102.0 mL) degasirana je pročišćavanjem azotom. Ovome je dodat dihloro-bis(tricikloheksilfosforanil)-paladijum (PdCl2[P(cy)3]2, 1.01 g, 1.364 mmol) i reakciona smeša je mešana u čvrsto zatvorenoj epruveti preko noći na 100°C. Smeša je filtrirana i filtrat je mešan sa Silabond® DMT silikom (SiliCikl, Inc., 0.58 mmol/g, 3.53 g) u trajanju od 1 časa. Smeša je filtrirana i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se dobio 2-metil-4,6-dideutero-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin (jedinjenje 2045, 13.6 g, 72% čistoće, glavni kontaminant je pinakol) kao svetlo žuto ulje:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 2.75 (s, 3H), 1.30 (s, 12H). Ovo jedinjenje je korišćeno u narednim koracima bez dodatnog prečišćavanja.

[0187] Kao što je prikazano u koraku 10-viii šeme 10, (S)-8-(1-((6-hloropirimidin-4-il)amino)propan-2-il)-N-metilkvinolin-4-karboksamid (2.542 g, 7.146 mmol), 2-metil-4,6-dideutero-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin (2.204 g, 7.146 mmol, 72%

1

po težini), Na2CO3(10.72 mL, 2 M (vodeni rastvor), 21.44 mmol), i Silacat® DPP Pd (SiliCikl, Inc., 1.429 g, 0.3573 mmol) su apsorbovani u dioksanu (30.00 mL), rastvor je pročišćavan azotnim gasom tokom 5 minuta, i reakciona smeša je mešana na 90°C tokom 16 časova. Smeša je filtrirana kroz dijatomejsku zemlju, koncentrovana pod sniženim pritiskom, rastvorena u DMSO, i prečišćena pomoću reverzno-fazne hromatografije (10-40% CH3CN/H2O, 0.1 % TFA). Frakcije proizvoda su kombinovane i DCM i MeOH su dodati, nakon čega je dodat 1N NaOH do dobijanja vrednosti pH veće od 7. Dobijeni rastvor je ekstrahovan sa DCM (2x) i kombinovani ekstrakti osušeni nad Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-4’,6’-dideutero-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan-2-il)kvinolin-4-karboksamid (referentno jedinjenje 844, 181 mg, 28 % prinosa) kao beličasta čvrsta supstanca:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 70°C) δ 8.95 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.01 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 4.51 (h, J = 7.2 Hz, 1H), 3.78 (m, 2H), 2.88 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 2.68 (s, 3H), 1.41 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

2

Primer 11. Priprema (S)-N-metil-8-(1-((6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-il)amino)propan-2-il)kvinazolin-4-karboksamida (Referentno jedinjenje 971)

[0188]

[0189] Kao što je prikazano u koraku 11-i šeme 11, 1-(2-amino-3-hidroksifenil)etanon (4.0 g, 26.5 mmol) i formamid (20 mL, 45 mmol) su zagrevani na 180°C pod mikrotalasnim zračenjem 45 minuta. Posle hlađenja, dodata je voda i reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (2% MeOH/DCM) da bi se dobio 4-metilkvinazolin-8-ol (jedinjenje 2046, 3.81 g, 90% prinosa) kao žuta čvrsta supstanca. Ovaj proizvod je korišćen u narednim reakcijama.

[0190] Kao što je prikazano u koraku 11-ii šeme 11, rastvoru 4-metilkvinazolin-8-ola (4.87 g, 30.40 mmol) u DCM na 0°C dodat je cezijum karbonat (9.9 g, 40 mmol) i N-fenilbis(trifluorometansulfinimd (PhN(Tf)2, 14.12 g, 39.52 mmol). Rashladno kupatilo je uklonjeno i reakciona smeša je mešana preko noći na RT. Organske supstance su oprane vodom, sa 5% HCl, zatim sa 5% NaHCO3. Kombinovani vodeni ispirci su podvrgnuti povratnoj ekstrakciji sa DCM (3x) i kombinovane organske supstance osušene nad Na2SO4, filtrirane, i prečišćene pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-50% EtOAc/heksani) da bi se dobio 4-metilkvinazolin-8-il trifluorometansulfonat (jedinjenje 2047, 8.60 g, 93% prinosa) kao smeđa čvrsta supstanca:<1>H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.33 (s, 1H), 8.17 (dd, J = 8.4, 1.3 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 7.9, 1.3 Hz), 7.70 (t, J - 8.1 Hz), 3.02 (s, 3H); 19F-NMR (282 MHz, CDCl3) δ -73.5.

[0191] Kao što je prikazano u koraku 11-iii šeme 11, 4-metilkvinazolin-8-il trifluorometansulfonat (1.19 g, 4.07 mmol) i selen dioksid (1.0 g, 9.0 mmol) su apsorbovani u 15 mL piridina i reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 4 časa. Reakciona smeša je razblažena sa 100 mL THF i dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU, 3.1 g, 8.14 mmol). Posle mešanja na RT tokom 30 minuta, dodat je 2M rastvor metilamin/THF (5.0 mL, 10.0 mmol). Reakciona smeša je mešana na RT tokom 1 časa i isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je apsorbovan u DCM i opran zasićenim NH4Cl. Vodeni ispirak je podvrgnut povratnoj ekstrakciji sa DCM (2x) i kombinovane organske supstance osušene nad Na2SO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% DCM/heksan) da bi se dobio 4-(metilkarbamoil)kvinazolin-8-il trifluorometansulfonat (jedinjenje 2048, 982 g, 72% prinosa) kao žućkasta čvrsta supstanca: LC-MS = 335.88 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.65 (dd, J = 8.6, 1.4 Hz, 1H), 9.47 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.89 (dd, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 8.6, 7.8 Hz, 1H), 3.13 (d, J = 5.1 Hz, 3H); 19F-NMR (282 MHz, CDCl3) δ -73.5.

[0192] Kao što je prikazano u koraku 11-iv šeme 11, rastvor terc-butil N-[2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)alil]karbamata pročišćen azotom (jedinjenje 2034, 990 mg, 3.5 mmol), 4-(metilkarbamoil)kvinazolin-8-il trifluorometansulfonata (980 mg, 2.9

4

mmol), Na2CO3(3 mL 2 M (vodeni rastvor), 5.9 mmol) i Pd(dppf)Cl2(119 mg, 0.14 mmol) u DMF (35 ml) zagrevan je na 100°C tokom 3 časa. Posle hlađenja do RT, reakciona smeša sipana u vodu i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Ekstrakti su oprani zasićenim rastvorom NaCl u vodi (2x). Vodena faza je ponovo ekstrahovana sa EtOAc, i organski ekstrakt opran zasićenim rastvorom NaCl u vodi (2x). Kombinovane organske supstance su osušene preko Na2SO4, filtrirane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (EtOAc/heksan 0-50%) da bi se dobio terc-butil (2-(4-(metilkarbamoil)kvinazolin-8-il)alil)karbamat (jedinjenje 2049, 392 mg, 39% prinosa) kao žućkasta čvrsta supstanca. LC-MS = 343.13 (M+H);<1>H NMR (300 MHz, Hloroform-d) δ 9.47 (dd, J = 8.6, 1.4 Hz, 1H), 9.30 (s, 1H), 8.31 - 8.12 (m, 1H), 7.91 ? 7.81 (m, 1H), 7.69 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 5.31 (s, 1H), 5.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 5.3, 2.0 Hz, 2H), 3.10 (d, J = 5.1 Hz, 3H), 1.37 (s, 9H).

[0193] Kao što je prikazano u koraku 11-v šeme 11, rastvor terc-butil N-[2-[4-(metilkarbamoil)kvinazolin-8-il]alil]karbamata (200 mg, 0.58 mmol) u DCM (10 mL ) obrađen je sa TFA (2 mL). Posle mešanja od 2 časa na RT, reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio 8-[1-(aminometil)vinil]-N-metil-kvinazolin-4-karboksamid, trifluroacetat (jedinjenje 2050, 207 mg, 100% prinosa): LC-MS = 243.07 (M+H). Ovaj proizvod je korišćen u narednim reakcijama kao takav.

[0194] Kao što je prikazano u koraku 11-vi šeme 11, suspenzija 4-hloro-6-(6-metil-3-pyridil)pirimidina (70 mg, 0.289 mmol), 8-[1-(aminometil)vinil]-N-metilkvinazolin-4-karboksamid, trifluroacetata (70 mg, 0.20 mmol) i Na2CO3(92 mg, 0.86 mmol) je zagrevana na 100°C u trajanju od 60 časova. Posle hlađenja, isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom, ostatak je rastvoren u DCM, i organske supstance oprane vodom. Vodena faza je podvrgnuta povratnoj ekstrakciji sa DCM (2x) i kombinovane organske supstance su osušene nad Na2SO4, filtrirane i koncentrovane, i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću „flash“ hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-6% MeOH/DCM) da bi se dobio N-metil-8-(3-((6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-il)amino)prop-1-en-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 2051, 48 mg, 58% prinosa): LC-MS = 412.09 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.46 (dd, J = 8.7, 1.5 Hz, 1H), 9.35 (s, 1H), 9.03 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.39 - 8.14 (m, 2H), 7.84 (dd, J = 7.1, 1.5 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 8.7, 7.1 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.24 5.93 (m, 1H), 5.59 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 3.09 (d, J = 5.1 Hz, 3H), 2.63 (s, 3H).

[0195] Kao što je prikazano u koraku 11-vii šeme 11, N-metil-8-(3-((6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-il)amino)prop-1-en-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (48 mg, 0.12 mmol) u MeOH (2 mL) i Rh(COD)(R,R)-Et-DuPhos-OTf (3 mg) su kombinovani u staklenoj epruveti. Reakciona smeša je pročišćena vodoničnim gasom, zatim mešana pod atmosferom od 100 psi vodonika 24 časa na 60°C u Parr reaktoru pod visokim pritiskom od nerđajućeg čelika. Posle hlađenja i zamene reakcione atmosfere azotom, reakciona smeša je filtrirana kroz Fluorisil®, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-5% MeOH/DCM) da bi se dobio (S)-N-metil-8-(1-((6-(6-metilpiridin-3-il)pirimidin-4-il)amino)propan-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (referentno jedinjenje 971, 25 mg, 49% prinosa): LC-MS = 414.07 (M+H); 1H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 9.29 (s, 1H), 8.86 (br. s, 1H), δ 8.80 (dd, J = 8.6, 1.3 Hz, 1H), 8.37 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.04 - 7.87 (m, 1H), 7.71 (dd, J = 8.6, 7.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.71 (br. s, 1H), 4.51 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 4.10 - 3.60 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.58 (s, 3H), 1.48 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

Primer 12. Priprema (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-4’,6’-dideutero-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan-2-il)kvinazolin-4-karboksamida (Referentno jedinjenje 984)

[0196]

[0197] Kao što je prikazano u koraku 12-i šeme 12, 8-[1-(aminometil)vinil]-N-metilkvinazolin-4-karboksamid, trifluoroacetat (850 mg, 2.39 mmol) je rastvoren u THF (30 mL). Rastvor je obrađen sa Et3N (2.4 mL, 17.5 mmol) i anhidridom trifluorosirćetne kiseline (0.5 mL, 3.8 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 15 časova na RT. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak suspendovan u vodi, ekstrahovan sa EtOAc (3x), i kombinovane organske supstance osušene nad Na2SO4, filtrirane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% EtOAc/heksani) da bi se dobio N-metil-8-(3-(2,2,2-trifluoroacetamido)prop-1-en-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 2052, 783 mg, 97% prinosa): LC-MS = 338.99 (M+H). Ovaj materijal je korišćen u narednim reakcijama kao takav.

[0198] Kao što je prikazano u koraku 12-ii šeme 12, N-metil-8-(3-(2,2,2-trifluoroacetamido)prop-1-en-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (700 mg, 2.07 mmol) u MeOH (35 mL) i Rh(COD)(R,R)-Et-DuPhos-OTf(50 mg) su smešteni u staklenu epruvetu. Reakciona smeša je pročišćena vodoničnim gasom i mešana pod atmosferom od 100 psi vodonika 24 časa na 60°C u Parr reaktoru pod visokim pritiskom od nerđajućeg čelika. Posle hlađenja, reakciona atmosfera je pročišćavana azotom. Reakciona smeša je filtrirana kroz Fluorisil®, filtrat koncentrovan pod sniženim pritiskom, i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% EtOAc/heksani) da bi se dobio (S)-N-metil-8-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)propan-2-il)kvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 2053, 317 mg, 45% prinosa): LC-MS =338.99 (M+H).

[0199] Kao što je prikazano u koraku 12-iii šeme 12, rastvor (S)-N-metil-8-(1-(2,2,2-trifluoroacetamido)propan-2-il)kvinazolin-4-karboksamida (200 mg, 0.588 mmol), K2CO3(406 mg, 2.94 mmol) u MeOH (10 mL) i voda (0.5 mL) su zagrevani na 60°C tokom 1 časa. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom i osušena pod visokim vakuumom da bi se dobio (S)-8-(1-aminopropan-2-il)-N-metilkvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 2054). LC-MS: 245.09 (M+), koji je korišćen u narednim reakcijama kao takav.

[0200] Kao što je prikazano u koraku 12-iv šeme 12, jedinjenje 2054 je suspendovano u iPrOH (10mL) i dodat je 4,6-dihloropirimidin (130 mg, 0.80 mmol). Suspenzija je zagrevana na 90°C tokom 1 časa. Posle hlađenja, isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u EtOAc, opran vodom, i vodena faza je podvrgnuta povratnoj ekstrakciji sa EtOAc (2x). Kombinovane organske supstance su osušene preko Na2SO4, filtrirane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, i prečišćene pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-50% EtOAc/heksani) da bi se dobio (S)-8-(1-((6-hloropirimidin-4-il)amino)propan-2-il)-N-metilkvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 2055, 153 mg, 73% prinosa): LCMS = 354.97, 357.00 (M+H); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.55 -9.16 (m, 2H), 8.27 - 8.07 (m, 2H), 7.87 - 7.70 (m, 1H), 7.61 (ddd, J = 8.7, 7.2, 3.8 Hz, 1H), 4.35 (q, J = 7.0 Hz, 1H), 3.49 (m, 1H), 3.02 (dd, J = 5.1, 1.7 Hz, 3H), 1.42 (d, J =7.0 Hz, 3H).

[0201] Kao što je prikazano u koraku 12-v šeme 12, smeša (S)-8-(1-((6-hloropirimidin-4-il)amino)propan-2-il)-N-metilkvinazolin-4-karboksamida (60 mg, 0.27 mmol), 2-metil-4,6-dideuterijum-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidina (jedinjenje 2042, 96 mg, 0.27 mmol), 2M Na2CO3(vodeni) (0.3 mL), i Pd(dppf)Cl2(8 mg) u dioksanu (5 mL) zagrevana je pod mikrotalasnim zračenjem na 110°C tokom 1 časa. Isparljive supstance su uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je suspendovan u vodi i ekstrahovan sa EtOAc (3x). Kombinovane organske supstance su osušene preko Na2SO4, filtrirane, koncentrovane pod sniženim pritiskom, i ostatak prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu pod srednjim pritiskom (0-100% EtOAc/heksani) da bi se dobio (S)-N-metil-8-(1-((2’-metil-4’,6’-dideutero-[4,5’-bipirimidin]-6-il)amino)propan2-il)kvinazolin-4-karboksamid (jedinjenje 984, 85mg, 71%): LC-MS = 417.13 (M+H); 1H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 9.30 (s, 1H), 8.80 (dd, J = 8.5, 1.3 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 8.6, 7.3 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 4.52 (q, J = 7.1 Hz, 1H), 3.95-3.76 (m, 2H), 3.01 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 1.49 (d, J = 7.0 Hz, 3H).

[0202] Tabele 1 i 2 obezbeđuju strukture i podatke o analitičkim svojstvima za referentna jedinjenja 1 do 984 (prazna polja označavaju da test nije izveden).

Tabela 1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

11

11

11

11

11

11

11

12

12

12

12

12

12

12

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

14

14

14

14

14

14

14

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

21

21

21

21

21

21

21

22

22

22

22

22

22

22

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

24

24

24

24

24

24

24

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

2

21

22

2

24

2

2

2

2

2

1

2

4

1

11

12

1

14

1

1

1

1

1

2

21

22

2

Tabela 2

24

2

2

2

2

2

1

2

4

4

41

42

4

44

4

4

4

4

4 Tabela 3

1

2

4

1

2

4

1

2

4

Biološki testovi za jedinjenja prema pronalasku

Primer 12. Test inhibicije DNK-PK

[0203] Ispitivana je sposobnost jedinjenja da inhibiraju DNK-PK kinazu upotrebom standardnog radiometrijskog testa. Ukratko, u ovom testu kinaze, ispituje se prenošenje terminalnog 33P-fosfata u 33P-ATP na peptidni supstrat. Test je izveden u pločama sa 384 bunarčića do finalne zapremine od 50 µL po bunarčiću koja sadrži približno 6 nM DNK-PK, 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 25 mM NaCl, 0.01% BSA, 1 mM DTT, 10 µg/mL isečene dvolančane DNK (nabavljena od proizvođača Sigma), 0.8 mg/mL DNK-PK peptida (Glu-Pro-Pro-Leu-Ser-Gln-Glu-Ala-Phe-Ala-Asp-Leu-Trp-Lys-Lys-Lys, nabavljenog od proizvođača American Peptide) i 100 µM ATP. Prema tome, jedinjenja prema pronalasku su rastvorena u DMSO da bi se napravili 10 mM polazni štok rastvori. Zatim su napravljena serijska razblaženja u DMSO da bi se dobili finalni rastvori za test. Alikvot od 0.75 µL DMSO ili inhibitora u DMSO su dodati u svaki bunarčić, nakon čega je dodat rastvor supstrata za ATP koji sadrži<33>P-ATP (nabavljen od proizvođača Perkin Elmer). Reakcija je započela dodavanjem DNK-PK, peptida i dvolančana DNK. Posle 45 minuta, reakcija je ugašena sa 25 µL 5% fosforne kiseline. Reakciona smeša je preneta u PH ploče sa 384 bunarčića za MultiScreen HTS (nabavljene od proizvođača Millipore), ostavljena jedan čas da se veže, oprana tri puta 1% fosfornom kiselinom. Nakon dodavanja 50 µL Ultima Gold™ visoko efikasnog scintilacionog reagensa (nabavljen od proizvođača Perkin Elmer), uzorci su izmereni u scintilacionom i luminiscentnom brojaču za ploče Packard TopCount NXT (Packard BioScience). Vrednosti Kisu izračunate upotrebom programa Microsoft Excel Solver macros za prilagođavanje podataka kinetičkom modelu za kompetitivnu čvrsto vezujuću inhibiciju.

[0204] Svako od jedinjenja 1 do 1090 ima vrednost Kimanju od 0.30 mikromolova za inhibiciju DNK-PK.

Svako od jedinjenja 1, 8, 11, 16, 28, 30, 32, 34-38, 40-46, 55, 57, 60, 63, 73, 79-80, 82-87, 91-92, 94, 96-105, 107, 109-110, 114-123, 125-128, 130-142, 144-159, 165-168, 172-180, 182-183, 186, 188-189, 193-195, 197-206, 208-211, 213-215, 217-218, 220, 222-223, 225, 227-228, 232-233, 235-243, 245-250, 252-266, 268-279, 283-287, 289-290, 293-294, 296, 299, 303-304, 307-328, 331-333, 338-342, 345-349, 351, 353-370, 372, 375-378, 382, 385, 387-396, 398-402, 405-409, 412, 414, 416-420, 423-424, 429-432, 434-438, 441-445, 447, 449, 451-454, 456-460, 462, 464-467, 469, 472, 475-481, 483-486, 490, 493-495, 497, 501-505, 508-510, 513-515, 519, 522-524, 526-527, 535-538, 541, 545-546, 549-550, 553-557, 559, 561-563, 568-569, 572-597, 603-608, 612-615, 618-620, 622-625, 627-628, 630, 632-639, 641-642, 644-645, 648-652, 654-662, 666-667, 669-685, 689, 697-698, 701-724, 726-738, 740-743, 746-759, 762-772, 774-783, 785, 787, 789-795, 797-805, 807-886, 889-964, 966-979, 981-1002, 1004-1039, 1042-1048, i 1050-1092 ima vrednost Kimanju od 0.030 mikromolova za inhibiciju DNK-PK.

Primer 13. Dejstva na vijabilnost ćelija nakon zračenja

[0205] Za procenu delovanja jedinjenja prema pronalasku na senzitizaciju na zračenje u kombinaciji sa jonizujućim zračanjem (IR), ispitan je širok panel ćelijskih tipova kroz više tipova tumora i genetskih osnova. Ćelije su inkubirane sa DMSO il referentnim jedinjenjem 578 tokom 30 minuta i zatim izložene različitim dozama zračenja (0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 i 16 Gy). Vijabilnost ćelija je procenjivana na 6 dana upotrebom CellTiter-Glo® (Promega, Inc). Vrednosti EC50(Gy) nastale u prisustvu DMSO ili jedinjenja 578 u kombinaciji sa IR prikazane su u tabeli 4. Referentno jedinjenje 578 je imalo dejstvo senzitizacije na zračenje kancerskih ćelijskih linija osetljivih na zračenje, sa EC50pomeranjima u opsegu od 1.7 do 10.6 puta. Ispitivane ćelijske linije glioblastoma pokazale su se, uglavnom, manje osetljivim na zračenje i, stoga su pokazale manju senzitizaciju na zračenje sa referentnim jedinjenjem 578 u ovom testu. Sa izuzetkom ćelijske linije normalnih humanih fibroblasta, HS68, samo marginalna senzitizacija na zračenje je primećena u ćelijskim linijama humanih fibroblasta (HFL1, IMR90 i MRC5) i ćelijskoj liniji normalnih epitelijalnih ćelija, ARPE19, normalnih humanih bronhijalnih epitelijalnih ćelija (NHBE), i glatkih epitelijalnih ćelija disajnih puteva (SAEC). Jedinjenje 578 je imalo minimalno dejstvo na vijabilnost ćelija kao pojedinačno sredstvo ili u kombinaciji sa zračenjem kod DNK-PK null SCID ćelijske linije miša. Ovi podaci sugerišu da inhibicija DNK-PK rezultuje u opsežnoj senzitizaciji na zračenje u mnogim različitim tumorskim ćelijskim tipovima.

Tabela 4. Dejstvo jedinjenja 578 na EC50posle zračenja

Primer 14. Efikasnost in vivo

[0206] Efikasnost referentnog jedinjenja 578 in vivo procenjivana je na OD26749 subkutanom ksenograftskom modelu NSCLC. Ovaj primarni NSCLC tumor je dobijen od pacijenta sa slabo diferenciranim adenokarcinomom i serijski je pasažiran u SCID miševima pre ovog ispitivanja. Golim miševima su hirurški implantirani delovi od po 150 mg tumora OD26749 u pasaži 3 (P3). Jonizujuće zračenje celog tela (IR, 2 Gy/tretmanu) primenjeno je korišćenjem dualnog izvora Cezijuma 137 i započeto kada su tumori dostigli približno 350 mm. Zapremine tumora su merene dva puta nedeljno tokom trajanja ispitivanja. Antitumorska efikasnost je izražena kao %T/C (tumor/kontrola) dok je regresija izražena kao %T/Ti, smanjenja zapremine tumora u poređenju sa polaznom zapreminom tumora.

[0207] Referentno jedinjenje 578 [u 16% Captisol®+ HPMC/PVP] primenjeno je oralno (dva puta dnevno u 0 i 4 časa) u dozama od 25, 50, 100 mg/kg i (jednom dnevno) u dozi od 200 mg/kg, 19. dana posle implantacije. Pojedinačna doza od 2 Gy IR celog tela data je 15 minuta posle primene jedinjenja. Kontrolnim životinjama je dat vehikulum oralno, dva puta dnevno (0 i 4 časa). Isti režim je ponovljen 26. dana posle implantacije.

[0208] Do 30. dana posle implantacije, referentno jedinjenje 578 u dozi od 100 mg/kg dva puta dnevno u kombinaciji sa IR zračenjem celog tela dozom od 2 Gy indukovalo je značajno povlačenje (%T/Ti od -3.1; P < 0.001) u poređenju sa samim IR, dok su sve grupe tretirane dozama od 25 i 50 mg/kg, dva puta dnevno i 200 mg/kg, jednom dnevno, pokazale značajnu inhibiciju rasta tumora (%T/C od 25.6, 11.7 i 6.5, redom).

1

Claims (12)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, naznačeno time što je jedinjenje odabrano iz grupe koja se sastoji od:

   2

   �

   �

   �

   �

   i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.
2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
4. 4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
6. 6. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.
7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u senzitizaciji ćelije na sredstvo koje indukuje oštećenje DNK.
8. 8. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u potencijaciji terapijskog režima za lečenje kancera kod pacijenta.
9. 9. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, naznačeno time što terapijski režim obuhvata terapiju zračenjem.
10. 10. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu prema patentnom zahtevu 8, naznačeno time što terapijski režim obuhvata antikancersko hemioterapijsko sredstvo.
11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u lečenju kancera kod pacijenta.
12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja sadrži navedeno jedinjenje, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu prema patentnom zahtevu 8 ili 11, naznačeno time što kancer predstavlja kancer dojke, kolorektalni kancer, gastro-ezofagealni kancer, fibrosarkom, glioblastom, hepatocelularni kancer, kancer glave i vrata, melanom, kancer pluća, kancer pankreasa, ili kancer prostate. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5