[go: up one dir, main page]

RS57487B1 - Jedinjenja 3,4-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamida za tretman bolesti posredovanih sa enac - Google Patents

Jedinjenja 3,4-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamida za tretman bolesti posredovanih sa enac

Info

Publication number
RS57487B1
RS57487B1 RS20180833A RSP20180833A RS57487B1 RS 57487 B1 RS57487 B1 RS 57487B1 RS 20180833 A RS20180833 A RS 20180833A RS P20180833 A RSP20180833 A RS P20180833A RS 57487 B1 RS57487 B1 RS 57487B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
amino
methylbenzyl
propyl
diamino
hexyl
Prior art date
Application number
RS20180833A
Other languages
English (en)
Inventor
Susanne Elisabeth Berglund
Stephen Connolly
Martin Hemmerling
Nafizal Hossain
Anna Kristoffersson
Johan Rune Michael Lundkvist
Grigorios Nikitidis
Lena Elisabeth Ripa
Igor Shamovsky
Original Assignee
Astrazeneca Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astrazeneca Ab filed Critical Astrazeneca Ab
Publication of RS57487B1 publication Critical patent/RS57487B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/12—Drugs for disorders of the metabolism for electrolyte homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D241/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D241/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/28—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals with nitrogen atoms directly attached to ring carbon atoms in which said hetero-bound carbon atoms have double bonds to oxygen, sulfur or nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Opis
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na derivate pirazina koji imaju farmaceutsku aktivnost, na postupke za dobijanje takvih derivata, na farmaceutske sastave koji sadrže takve derivate i na upotrebu takvih derivata kao aktivnih terapijskih agenasa.
[0002] Hidracija epitelskog tkiva disajnih puteva pluća obezbeđuje efikasnu cilijarnu funkciju, i mukocilijarni klirens (MCC) predstavlja kritičan prvi mehanizam za odbranu disajnih puteva. Nefunkcionisanje odgovarajućeg mukoznog klirensa stvara zastoj sluzi i rizik od opstrukcije disajnih puteva i predispozicije za hronične bakterijske infekcije.
Hipersektracija sluzi, zgušnjavanje sluzi i smanjene stope mukocilijarnog klirensa su dobro utvrđene karakteristike patofiziologije cistične fibroze (CF) i hronične opstruktivne bolesti pluća (COPD), i značajno doprinose morbiditetu i mortalitetu bolesti. Slab MCC dovodi do opstrukcije disajnih puteva pomoću statične sluzi, što otežava funkciju pluća i služi kao nidus za infekciju koja olakšava kolonizaciju bakterija i dovodi do povećanih stopa i ozbiljnosti pogoršanja bolesti.
[0003] Patofiziologija CF je dobro karakterisana i uzrokovana je mutacijama gena regulatora transmembranske provodljivosti cistične fibroze (CFTR) koja dovodi do dehidratacije disajnih puteva, i ostaje jedan od najčešćih pogubnih naslednih poremećaja širom svita. Iako je CF kompleksno multi-organsko oboljenje, morbiditet i mortalitet se uglavnom određuju hroničnom opstruktivnom plućnom bolešću koja se razvija od priključivanja sluzi u ranom početku u malim disajnim putevima, hroničnom neutrofilnom upalom disajnih puteva i bakterijskom infekcijom.
[0004] Patofiziologija COPD je složena i slabo razumljiva. Sadašnje kliničke smernice opisuju COPD kao bolesno stanje koje karakteriše ograničenje protoka vazduha koje nije potpuno reverzibilno. Ograničenje protoka vazduha je obično progresivno i povezano sa abnormalnom upalnom reakcijom pluća na štetne čestice i gasove. Najvažniji izvor takvih čestica i gasova je duvanski dim. Pacijenti sa COPD imaju različite simptome, uključujući kašalj, otežan dah i prekomernu proizvodnju sputuma; takvi simptomi proističu iz disfunkcija više ćelijskih odeljaka, uključujući neutrofile, makrofage i epitelne ćelije.
[0005] Adekvatna hidratacija disajnih puteva je od ključnog značaja za održavanje MCC i odgovarajući sadržaj vode u sluzi. Regulacija hidratacije disajnih puteva je snažno vezana za pokretanje elektrolita i vodi preko sloja epitelnih ćelija. Pericilijarna tečnost (PCL) na epitelnoj površini disajnih puteva koja okružuje ciliju odvaja sloj viskozne sluzi od epitelne površine i olakšava cilijarne otkucaje. Pokazano je da je zapremina/dubina PCL-a jaka determinanta stope MCC.
[0006] ENaC (epitelni natrijumski kanal) je amiloridno osetljiv, nenaponski zatvoreni jonski kanal široko eksprimiran u epitelnom tkivu respiratornog, urinarnog, digestivnog, genitalnog sistema i kože. Sistemski, ENaC igra ključnu ulogu u homeostazi elektrolita i balansu zapremine tečnosti regulacijom Na<+>transport preko epitela bubrega. Kroz kontrolu transporta natrijuma, ENaC kontroliše osmotski gradijent preko epitela disajnih puteva i time reguliše zapreminu PCL. Blokiranje ENaC posredovanog transporta natrijuma smanjuje osmotski gradijent preko epitelnog tkiva, dovodi do zadržavanja vode na površini disajnih puteva (povećana zapremina PCL) i poboljšanje hidracije sluzi i MCC brzine.
[0007] Uloga ENaC kao ključnog regulatora zapremine površinske tečnosti disajnih puteva (ASL) i mukocilijarnog klirensa (MCC) in vivo postoji u literaturi. Studije o miševima α- β- i γ-ENaC (-/-) pokazuju kritičnu ulogu ENaC funkcije u klirensu perinatalne plućne tečnosti (Barker i dr., J. Clin. Invest., 1998.102(8):1634; Bonny and Hummler, Kidney Int., 2000. 57(4):1313; Pradervand i dr., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A., 1999.96(4):1732). EnaC βpodjedinica koja prekomerno eksprimira transgene miševe pokazuje povećanje apsorpcija Na<+>od strane disajnih puteva, smanjenje zapremine ASL, dehidrataciju sluzi i odloženi MCC. Miševi razvijaju ozbiljnu bolest pluća sa kliničkim karakteristikama sličnim CF i COPD, uključujući opstrukciju sluzi, metaplastiju peharastih ćelija, neutrofilnu upalu, defektni bakterijski klirens i emfizemu (Mall i dr., Nature Med., 2004.10:487; Mall i dr., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2007.177:730). Stopa smrtnosti među transgenim životinjama tokom prvih 20 dana života iznosi oko 50% zbog ekstenzivnog zakrčenja sluzi disajnih puteva što dovodi do asfiksije, ali smrtnost se značajno smanjuje primenom amilorida na pluća miševa 14 dana nakon rođenja (Mall i dr., ATS Poster abstract #G55, 2008).
[0008] Osim toga, ljudi sa Pseudohipoaldosteronizmom 1 (PHA1), bolesti uzrokovanom mutacijama gubitka funkcije u genomima koji kodiraju α- β- i γ-ENaC, pokazuju povećanu zapreminu ASL i povećanje regulacije MCC (Kerem i dr., N. Engl. Med., 1999.341:156). Lečenje normalnih pacijenata sa ENaC kanalom koji blokira jedinjenje amilorid, povećava zapreminu ASL i MCC stope (Sood i dr., Am. J. Crit. Care Med., 2003.167:158).
[0009] Amilorid i benzamil su farmaceutski aktivni derivati pirazina za koje je poznato da blokiraju epitelijalni natrijum kanal.
[0010] Poznata su kvaternarna aminska jedinjenja i α-razgranata kvaternarna aminska jedinjenja koja imaju snažnu lokirajuću aktivnost ljudskog ENac (Hunt i dr. Bioorg Med Chem Lett, 2012, 22(2) & 22(8)).
[0011] Ukratko, ova specifikacija opisuje, delom, jedinjenje formule (I):
gde:
R<1>je izabran od vodonika ili C1-4alkila;
m je 1 ili 2;
A je izabran od fenila ili heterociklila;
X je izabran od -C(=O)-, -C(=O)-NR<4>- ili -O-C(=O)-NR<5>-;
n je 2 ili 3;
R<2>je izabran od vodonika ili C1-8alkila;
R<3>je C5-6alkil-OH, gde je navedena C5-6alkil grupa dalje supstituisana sa dodatnim 3 ili 4 -OH grupama; i
R<4>i R<5>su izabrani od vodonika ili C1-4alkila;
ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0012] Ova specifikacija takođe opisuje, delom, farmaceutske sastave koji sadrže jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv adjuvant, razblaživač ili nosač.
[0013] Ova specifikacija takođe opisuje, delom, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji.
[0014] Ova specifikacija takođe opisuje, delom, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za tretman ili prevenciju bolesnog stanja posredovanog sa ENaC.
[0015] Ova specifikacija takođe opisuje, delom, jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u proizvodnji medikamenta za lečenje ili prevenciju bolesnog stanja posredovanog sa ENaC.
[0016] Ova specifikacija takođe opisuje, delom, postupak za lečenje ili prevenciju bolesnog stanja posredovanog sa ENaC kod sisara koji pati od ili je u opasnosti od naveden bolesti, što obuhvata davanje sisaru kom je potreban takav tretman terapeutski efikasne količina jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
[0017] Dalji aspekti pronalaska biće očigledni stručnjaku iz čitanja ove specifikacije.
[0018] Jedinjenja pronalaska mogu postojati u obliku soli ili u obliku koji nije so (tj. kao slobodna baza), i predmetni pronalazak pokriva i oblike soli i oblike koji nisu soli.
[0019] Jedinjenja opisana u ovoj specifikaciji mogu formirati kisele adicione soli. Generalno, kisela adiciona so može biti pripremljena pomoću različitih neorganskih ili organskih kiselina. Takve soli se obično mogu formirati pomoću, na primer, mešanja jedinjenja sa kiselinom (npr. stehiometrijskom količinom kiseline) korišćenjem različitih postupaka poznatih u struci. Ovo mešanje se može pojaviti u vodi, organskom rastvaraču (npr. etru, etil acetatu, etanolu, metanolu, izopropanolu ili acetonitrilu) ili vodenoj/organskoj smeši.
[0020] U sledećem aspektu pronalaska, kisele adicione soli su, na primer, trifluoroacetat, format, acetat ili hlorovodonična kiselina.
[0021] Obučena osoba će biti upoznata sa opštim principima i tehnikama pripreme farmaceutskih soli, kao što su one opisane u, na primer, Berge i dr., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977).
[0022] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu uključivati jedan ili više hiralnih (tj. asimetričnih) centara. U meri u kojoj struktura ili hemijski naziv u ovoj specifikaciji ne ukazuju na hiralnost, struktura ili naziv treba da obuhvate bilo koji pojedinačni stereoizomer (tj. svaki pojedinačni hiralni izomer) koji odgovara toj strukturi ili imenu, kao i svaku mešavinu stereoizomera (npr. racemat). U nekim otelotvorenjima jedan stereoizomer se dobija izolovanjem od smeše izomera (npr. racemata) koristeći, na primer, hiralno hromatografsko odvajanje. U drugim otelotvorenjima, jedan stereoizomer se dobija direktnom sintezom od, na primer, hiralnog početnog materijala.
[0023] Kada je u čvrstom kristalnom obliku, jedinjenje formule (I) može biti u obliku kokristala sa drugim hemijskim entitetom, a pronalazak obuhvata sve takve ko-kristale.
[0024] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu postojati kao solvat (kao što je hidrat), kao i nesolvatni oblici, a ovaj pronalazak pokriva sve takve solvate.
[0025] Jedinjenja i soli opisane u ovoj specifikaciji mogu da postoje u različitim tautomernim oblicima, a pronalazak obuhvata sve takve tautomerne oblike. „Tautomeri“ su strukturni izomeri koji postoje u ravnoteži nastali usled migracije atoma vodonika.
[0026] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji mogu biti izotopski označeni (ili „radiooznačeni“). U tom slučaju jedan ili više atoma se zamenjuje atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi. Primeri radionuklida koji mogu biti inkorporirani uključuju<2>H (takođe napisan kao „D“ za deuterijum),<3>H (takođe napisana kao „T“ za tricijum), 1<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O i<36>Cl . Radionuklid koji se koristi zavisiće od specifične primene tog derivata označenog sa radio-oznakom. Na primer, za označavanje receptora in vitro i analizu nadmetanja,<3>H ili<14>C su često korisni. Za primene radio-snimanja,<11>C je često koristan. U nekim otelotvorenjima, radionuklid je<3>H. U nekim otelotvorenjima, radionuklid je<14>C. U nekim otelotvorenjima, radionuklid je<11>C.
[0027] Alkil grupe i delovi su ravan ili razgranati lanac, npr. C1-8alkil, C1-6alkil, C1-4alkil ili C5-6alkil. Primeri alkil grupe su metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, t-butil, n-pentil, nheksil, n-heptil i n-oktil, kao što su metil ili n-heksil.
[0028] Heterociklil je nearomatični 5- ili 6-člani prsten koji sadrži jedan ili dva heteroatoma nezavisno odabrana od azota, kiseonika ili sumpora; ili njihov N-oksid, ili njihov S-oksid ili S-dioksid. Primer heterociklila je nearomatični 5- ili 6-člani prsten koji sadrži jedan ili dva atoma azota; ili njegov N-oksid ili njegov S-oksid ili S-dioksid, na primer, pirolidinil ili piperidinil, kao što je piperidin-4-il. Za izbegavanje sumnje, supstituenti na heterociklil prstenu mogu biti vezani preko bilo ugljenikovog atoma ili heteroatoma.
[0029] Izraz „farmaceutski prihvatljiv“ se koristi za karakterizaciju dela (npr. soli, doznog oblika ili ekscipijenta) kao pogodnog za upotrebu kod pacijenta.
[0030] U jednom posebnom aspektu R<1>je supstituisan na fenil grupu u položaju 2 u odnosu na tačku vezivanja na ostatak formule (I).
[0031] U sledećem aspektu R<1>je C1-4alkil.
[0032] U sledećem aspektu R<1>je metil.
[0033] U sledećem aspektu m je 1.
[0034] U još daljem aspektu A je izabran od fenila ili piperidinila.
[0035] U sledećem aspektu A je fenil.
[0036] U sledećem aspektu A je piperidinil.
[0037] U drugom aspektu X je -C(=O)-NR<4>-.
[0038] U daljem aspektu X je -C(=O)-NH-.
[0039] U jednom aspektu, kada grupa X je -C(=O)-NR<4>-, tada je karbonil od X vezan za A i amino grupa od X za (CH2)n. U drugom aspektu, kada grupa X je -C(=O)-NR<4>-, tada je amino grupa od X vezana za A i karbonil grupa od X za (CH2)n.
[0040] U jednom aspektu, kada grupa X je -O-C(=O)-NR<5>-, tada je etarski kiseonik od X vezan za A i amino grupa od X za (CH2)n. U drugom aspektu, kada grupa X je -O-C(=O)-NR<5>-, tada je amino grupa od X vezana za A i etarski kiseonik od X za (CH2)n.
[0041] U drugom aspektu grupa X je supstituisana za grupu A na 4 položaja relativna tački vezivanja za ostatak jedinjenja formule (I).
[0042] U drugom aspektu n je 2.
[0043] U daljem aspektu R<2>je C1-8alkil.
[0044] U još daljem aspektu R<2>je n-heksil.
[0045] U drugom aspektu, R<3>je C5alkil-OH, gde je navedena C5alkil grupa dalje supstituisana sa dodatne 3 -OH grupe.
[0046] U drugom aspektu, R<3>je C6alkil-OH, gde je navedena C6alkil grupa dalje supstituisana sa dodatne 4 -OH grupe.
[0047] U daljem aspektu R<3>je izabran od sledećeg:
[0048] U drugom aspektu, R<3>je izabran od sledećeg:
[0049] U daljem aspektu R<3>je izabran od sledećeg:
[0050] U drugom aspektu, R<3>je izabran od (2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil, (2S,3R,4R 5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil, (2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil ili (2R,3 S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil.
[0051] U daljem aspektu, R<3>je izabran od (2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil, (2S,3R,4R 5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil ili (2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil.
[0052] U drugom aspektu R<5>je vodonik.
[0053] U daljem aspektu, R<1>je C1-4alkil; m je 1 ili 2; A je fenil ili piperidinil; X je izabran od -C(=O)-, -C(=O)-NR<4>- ili -O-C(=O)-NR<5>-; n je 2 ili 3; R<2>je vodonik ili C1-8alkil; R<3>je C5-6alkil-OH, gde je navedena C5-6alkil grupa dalje supstituisana sa dodatne 3 ili 4 -OH grupe; i R<4>i R<5>su oba vodonik.
[0054] U daljem aspektu, R<1>je C1-4alkil; m je 1; A je fenil ili piperidinil; X je -C(=O)-NH-; n je 2; R<2>je C1-8alkil; R<3>je izabran od sledećeg:
[0055] U daljem aspektu, R<1>je C1-4alkil; m je 1; A je fenil; X je -C(=O)-NH-; n je 2; R<2>je C1-8alkil; i R<3>je izabran od sledećeg:
[0056] U daljem aspektu pronalaska, jedinjenja pronalaska pokazuju R stereohemiju na ugljenik centru obeleženom sa zvezdicom (*) u formuli (Ia) u nastavku:
[0057] Primer jedinjenja pronalaska je:
3,5-diamino-6-hloro-N-(2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-((2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil(2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(4-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5 -diamino-6-hloro-N-(2-(2-metilbenzil)-3 -((1-(3-(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil 2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil(2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-(3-(2-(heksil(2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0058] Dalji primer jedinjenja pronalaska je:
3,5-diamino-6-hloro-N-(2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(2-(2-metilbenzil)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil 2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-((4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-(3-(3-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0059] Dalji primer jedinjenja pronalaska je:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-(3-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid;
ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0060] Jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti od jedinjenja formule (II) prema šemi 1, gde su R<1>, R<2>, R<3>, A, X, m i n kako su definisani u formuli (I), i gde p = m-1.
a) NaH(OAc)3, AcOH, THF ili NaBH4, MeOH
[0061] Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti na način opisan u šemi 2 gde su R<1>, R<2>, R<3>, A, X, m i n kako su definisani u formuli (I), i gde Y je halogen, na primer, hlor, brom ili jod i p = m-1.
a) NaH ili K2CO3ili Cs2CO3ili DIEA, DMF.
[0062] Alternativno, jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti uvođenjem R<3>poslednji korak reduktivnom alkilacijom odgovarajućih polihidroksilovanih alkilaldehida kao što su heksoze ili pentoze (R<3>-aldehid), kako je opisano u šemi 3, i gde R<1>, R<2>, R<3>, A, X, m i n kako su definisani u formuli (I). Polihidroksialkil lanci prisutni u R<3>mogu biti zaštićeni sa bilo kojom odgovarajućom alkoholnom zaštitnom grupom, na primer kako je opisano od strane P. G. M. Wuts, Th. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley-Interscience, New York, 2006. Dalje, stručnjaku u oblasti će biti jasno, i kako je opisano u Primerima ovde, dodatne amino grupe prisutne u jedinjenjima formule (II) mogu biti zaštićene odgovarajućim amino zaštitnim grupama, na primer kako je opisano u Wuts i Greene (iznad), kao što je sa di-tertbutil dikarbonat (Boc) ili fluorenilmetiloksikarbonil (FMoc) zaštitnim grupama.
a) NaBH(OAc)3ili NaBH3CN, AcOH, THF ili NaBH4, MeOH
[0063] Jedinjenja formule (II) mogu se pripremiti enantioselektivno postupcima kako je opisano u šemi 5 (J. C. D. Müller-Hartwieg, L. La Vecchia, H. Meyer, A. K. Beck, D.
Seebach, Org. Synth. 85 (2008), 295.) ili postupkom prikazanim u šemama 4, i 6, gde je R<1>kako je definisano u formuli (I).
a) i) L-prolin, DMF, ii) NaBH4, MeOH; b) Ftalimid, PPh3, DEAD, THF; c) CH3NH2, EtOH, d) Boc2O, DCM, TEA; e) Pd(OH)2, H2, MeOH, 70 psi; f) (3-hloro-5-(1H-imidazol-1-ilkarbonil)pirazin-2,6-diamin, DIPEA, NMP; g) TFA, DCM; h) NaOH, THF.
a) Dialilkarbonat, Lipase PS-C Amano II, MTBE; b) Kisela (e.g. D-tartrat), rekristalizacija; c) 10M NaOH, MTBE; d) (BOC)2O, MTBE; e) LiBH4, Pd(PPh3)4, THF; f) CDI; iPrOAc; g) TFA, DCM; h) NaOH, THF.
[0064] Šeme 4, 5 i 6 opisuju pristup (R)-enantiomeru jedinjenja formule (II). Reakcije opisane u ovim šemama mogu se podjednako primijeniti i za pristup srodnom (S)-enantiomeru pomoću početnih materijala obrnute apsolutne konfiguracije ili enzima različite stereo specifičnosti.
[0065] Alternativno, jedinjenja formule (II) sa (S)-konfiguracijom mogu se pripremiti kako je prikazano u šemi 7.
a) CDI; iPrOAc; b) LiBH4, Pd(PPh3)4, THF.
[0066] Postupak opisan u koraku (a) od Šeme 6 obuhvata enzim posredovan desimetrizacijom diamina (III) koristeći dialilkarbonat.
[0067] Pogodni enimi za ovu reakciju uključuju lipaze, naročito lipaze koje potiču od Candida Antarctica ili Pseudomonas Cepacia. Pogodni enzimi uključuju IMM CALB (Candida Antartica Lipase B), IMM CALBY (Candida Antartica Lipase B), Novozym 435 (Candida Antarctica Lipase B), Amano Lipase PS-C1 (Pseudomonas Cepacia Lipase), Amano Lipase PS-IM (Pseudomonas Cepacia Lipase) i Amano Lipase PS-D (Pseudomonas Cepacia Lipase), kao što su Amano Lipase PS-C1, Amano Lipase PS-D i Amano Lipase PS-IM.
Reakcija se može izvesti u nizu polarnih i nepolarnih rastvarača i njihovih smeša, uključujući terc-butil dimetil etar (TBME), tetrahidrofuran (THF), metil-THF (MeTHF, na primer 2-metil-THF), heptane, cikloheksan i toluen, kao što je MeTHF. Reakcija se može izvesti na temperaturi od 0°C do 50°C, na primer od 15°C do 35°C, na primer oko 30°C. Enantiomerni višak dobijenih sirovih proizvoda može se opciono povećati procesima rastvaranja poznatim stručnjacima u oblasti, na primer kristalizacijom iz vinske soli. Takođe je ovde prikazan postupak za dobijanje jedinjenja formule (IV), gde R<1>je kao što je prethodno definisano (kao što je jedinjenje (R)-alil-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat):
koji obuhvata enzimski posredovanu desimetrizaciju diamina (III) u prisustvu diijalkarbonata, i opciono nakon toga izvršavanje enantiomernog rastvaranja. U sledećem aspektu, enzim je odabran od jednog koji potiče od Candida Antarctica ili Pseudomonas Cepacia, kao što su IMM CALB (Candida Antartica Lipase B), IMM CALBY (Candida Antartica Lipase B), Novozym 435 (Candida Antarctica Lipase B), Amano Lipase PS-C1 (Pseudomonas Cepacia Lipase), Amano Lipase PS-IM (Pseudomonas Cepacia Lipase) i Amano Lipase PS-D (Pseudomonas Cepacia Lipase). U drugom aspektu, enzim je odabran od Amano Lipase PS-C1, Amano Lipase PS-D i Amano Lipase PS-IM, kao što je Amino Lipase PS-IM. Takođe je obelodanjeno jedinjenje (R)-alil-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat.
[0068] U sledećem aspektu otkrivena je upotreba jedinjenja (R)-alil-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamata kao farmaceutskog međuproizvoda. U sledećem aspektu, obelodanjena je upotreba jedinjenja (R)-alil-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamata kao međuproizvoda u proizvodnji jedinjenja formule (I).
[0069] Detaljni postupci prema jedinjenjima pronalaska dalje su opisani u dole navedenim primerima.
[0070] Jedinjenja i soli opisani u ovoj specifikaciji obično se mogu koristiti u postupcima za lečenje različitih poremećaja kod životinja, posebno sisara. Sisari uključuju, na primer, ljude.
[0071] Jedinjenja iz ovog pronalaska i njihove farmaceutski prihvatljive soli imaju aktivnost kao farmaceutski sastavi, naročito kao modulatori ENaC i mogu se koristiti u lečenju bolesti disajnih puteva, bolesti kostiju i zglobova i drugih autoimunih i alergijskih poremećaja.
[0072] Bolesna stanja koja se mogu tretirati sa jedinjenjem pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli uključuju, ali se ne ograničavaju na, bolesti respiratornog trakta, kao što su: opstruktivne bolesti disajnih puteva uključujući: astmu, uključujući bronhijalnu, alergijsku, intrinzičnu, ekstrinzičnau uzrokovanu vežbanjem, uzrokovanu lekovima (uključujući aspirin i NSAID-uzrokovanu) i astmu uzrokovanu prašinom, i povremena i trajna i svih jačina, kao i drugi uzroci hiperaktivnosti disajnih puteva; hronična opstruktivna plućna bolest (HOBP); bronhitis, uključujući zarazni i eozinofilni bronhitis; emfizem; bronhiektaza; Cistična fibroza; sarkoidoza; farmerova pluća i srodnih bolesti; pneumonitis hipersenzitivnosti; plućna fibroza, uključujući alveolitis kriptogene fibroze, idiopatske intersticijalne pneumonije, idiopatsku plućnu fibrozu, fibrozu koja komplikuje antineoplastičnu terapiju i hroničnu infekciju, uključujući tuberkulozu i aspergilozu i druge gljivične infekcije; komplikacije transplantacije pluća; vaskulitske i trombotične poremećaje vaskulatura pluća i plućne hipertenzije; antitusivna aktivnost, uključujući lečenje hroničnog kašlja povezanog sa upalnim i sekretornim stanjima disajnih puteva, i jatrogeni kašalj; akutni i hronični rinitis, uključujući rinitis medicamentosa, i vazomotorski rinitis; višegodišnji i sezonski alergijski rinitis, uključujući rinitis nervosa (senska groznica); nazalna polipoza; akutna virusna infekcija, uključujući i prehladu, i infekcija zbog respiratornog sincicijskog virusa, gripa, koronavirusa (uključujući SARS) i adenovirusa; akutna povreda pluća; ili sindrom respiratornog distresa odraslih (ARDS).
[0073] U daljem aspektu pronalaska, bolesti respiratornog trakta koji se mogu tretirati sa jedinjenjem pronalaska, ili njegove farmaceutski soli, uključuju: hroničnu opstruktivnu plućnu bolest (COPD); bronhitis, uključujući zarazni i eozinofilni bronhitis; bronhiektazu; cističnu fibrozu; antitusivnu aktivnost, uključujući lečenje hroničnog kašlja povezanog sa upalnim i sekretornim stanjima disajnih puteva, i jatrogeni kašalj; astmu, uključujući bronhijalnu, alergijsku, intrinzičnu, ekstrinzičnu, uzrokovanu vežbanjem, uzrokovanu uzimanjem lekova (uključujući aspirin i NSAID-uzrokovanu) i astmu uzrokovanu prašinom, i povremenu i trajnu i svih jačina, kao i druge uzroke hiperaktivnosti disajnih puteva.
[0074] U još jednom aspektu pronalaska, bolesna stanja koja se mogu tretirati sa jedinjenjem iz ovog pronalaska ili njegovom farmaceutskom soli, uključuju hroničnu opstruktivnu plućnu bolest (COPD), cističnu fibrozu, astmu, hronični bronhitis i bronhiektazu.
[0075] U još jednom aspektu pronalaska, bolesno stanje koje se može tretirati sa jedinjenjem pronalaska, ili njegovom farmaceutski soli, je hronična opstruktivna plućna bolest (COPD).
[0076] U jednom aspektu pronalaska dato je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za lečenje COPD.
[0077] U sledećem aspektu pronalaska dato je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u proizvodnji medikamenta za lečenje COPD.
[0078] U još jednom aspektu pronalaska, bolesno stanje koje se može tretirati sa jedinjenjem iz ovog pronalaska, ili njegovom farmaceutskom soli, jeste cistična fibroza (CF).
[0079] U jednom aspektu pronalaska dato je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za tretman CF.
[0080] U sledećem aspektu pronalaska dato je jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, u proizvodnji medikamenta za tretman CF.
[0081] Kada se jedinjenje ili so koja je opisana u ovoj specifikaciji daje za lečenje poremećaja, „terapeutski efikasna količina“ je količina koja je dovoljna da smanji ili potpuno ublaži simptome ili druge štetne efekte poremećaja; izleči poremećaj; preokrene, potpuno zaustavi ili usporava napredak poremećaja; ili smanjuje rizik od pogoršanja poremećaja.
[0082] U nekim otelotvorenjima u kojima se koristi kombinovana terapija, količina jedinjenja ili soli opisanih u ovoj specifikaciji i količini drugih farmaceutski aktivnih sredstava su, u kombinaciji, terapeutski efikasni za lečenje ciljanog poremećaja kod životinje pacijenta. U tom kontekstu, kombinovane količine su „terapeutski efikasna količina“ ako su, u kombinaciji, dovoljni kako bi se smanjili ili potpuno ublažili simptomi ili drugi štetni efekti poremećaja; izlečio poremećaj; preokrenuo, potpuno zaustavio ili usporio napredak poremećaja; ili smanjio rizik od pogoršanja poremećaja. Tipično, takve količine mogu odrediti stručnjaci u oblasti, na primer, počevši od opsega doziranja opisanog u ovoj specifikaciji za jedinjenje ili so, i odobrenog ili na drugi način objavljenog doznog opsega drugog farmaceutski aktivnog jedinjenja.
[0083] Kako bi se upotrebilo jedinjenje pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za terapeutski tretman sisara, kao što je čovek, pomenuti sastojak je normalno formulisan u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom kao farmaceutski sastav. Prema tome, u drugom aspektu ovaj pronalazak daje farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so (aktivni sastojak) i farmaceutski prihvatljiv adjuvant, razblaživač ili nosač.
[0084] U sledećem aspektu predmetna specifikacija opisuje postupak za pripremu navedenog sastava koji obuhvata mešanje aktivnog sastojka sa farmaceutski prihvatljivim adjuvantom, razblaživačem ili nosačem. U zavisnosti od načina primene, farmaceutski sastav će, na primer, sadržati od 0,05 do 99%w (procenat težine), kao što je od 0,05 do 80%w, na primer od 0,10 do 70%w, kao što je 0,10 do 50%w, aktivnog sastojka, svi procenti težine se baziraju na ukupnom sastavu.
[0085] Farmaceutsku sastavi ovog pronalaska mogu se primenjivati na standardan način za bolesno stanje koje je poželjno tretirati, na primer, lokalno (kao što su pluća i/ili disajni putevi ili koža), udisanjem, oralnom, rektalnom ili parenteralnom primenom. U ove svrhe jedinjenja ovog pronalaska mogu se formulisati pomoću sredstava poznatih u struci. Pogodan farmaceutski sastav ovog pronalaska je pogodan za oralnu primenu u jediničnoj doznoj formi, na primer tablete ili kapsulama koja sadrži između 0,1 mg i 1 g aktivnog sastojka.
[0086] Svaki pacijent može primiti, na primer, dozu od 0,0001 mgkg<-1>do 10 mgkg<-1>, na primer u rasponu od 0,005 mgkg<-1>do 5 mgkg<-1>, aktivnog sastojka dati, na primer, 1 do 4 puta dnevno.
[0087] U jednom aspektu pronalaska, obezbeđen je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje formule (I) u saradnji sa farmaceutski prihvatljivim adjuvantom, razblaživačem ili nosačem, koji je formulisan za inhalaciono primenjivanje (uključujući oralno i nazalno udisanje).
[0088] Jedinjenje formule (I) se može primenjivati pomoću odgovarajućeg uređaja za isporuku, na primer iz inhalatora sa suvim prahom, inhalatora sa odmerenom dozom, nebulizera ili uređaja za nazalnu isporuku. Takvi uređaji su dobro poznati.
[0089] Inhalatori za suv prah se mogu koristiti za primenu jedinjenja formule (I), samog ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, u kasnijim slučajevima ili kao fino odvojeni prah ili kao uređena smeša. Inhalator za suv prašak može biti jednokratna doza ili višekorisna doza i može koristiti suvi prah ili kapsulu koja sadrži prah.
[0090] Shodno tome, u jednoj realizaciji, jedinjenje formule (I) ili farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje formule (I), se primenjuje pomoću inhalatora sa suvim prahom (DPI).
[0091] DPI može biti „pasivan“ ili aktiviran dahom, ili „aktivan“ kada je prah raspršen nekim drugim mehanizmom, osim pacijentovog udisanja, na primer, unutrašnjim napajanjem kompresovanog vazduha. Trenutno su na raspolaganju tri tipa pasivnih inhalatora za suvi prah: inhalatori sa jednom dozom, inhalatori sa višestrukim jediničnim dozama ili višedozni (rezervoar) inhalatori. U uređajima sa jednom dozom, pojedinačne doze su date, obično u želatinskim kapsulama, i pre upotrebe treba da budu ubačene u inhalator, a primeri su Spinhaler® (Aventis), Rotahaler® (GlaxoSmithKline), Aeroliser™ (Novartis), Inhalator® (Boehringer) i Eclipse (Aventis) uređaji. Inhalatori sa višestrukim jediničnim dozama sadrže broj pojedinačno pakovanih doza, bilo kao više kapsula želatine ili u blisterima, a primeri su Diskhaler® (GlaxoSmithKline), Diskus® (GlaxoSmithKline), Nexthaler® (Chiesi) i Aerohaler® (Boehringer) uređaji. U višedoznim uređajima, lek se skladišti u rezervoaru iz kog se pojedinačne doze mere, a primeri su Genuair® (AstraZeneca), Turbuhaler® (AstraZeneca), Easyhaler® (Orion), Novolizer® (ASTA Medica), Clickhaler® (Innovata Biomed), Spiromax® (Teva) i Pulvinal® (Chiesi) uređaji.
[0092] Inhalabilni farmaceutski sastav za upotrebu u DPI može se pripremiti mešanjem fino podeljenog aktivnog sastojka (koji ima aerodinamički prečnik uglavnom jednak ili manji od 10 μm, kao što je jednak ili manji od 5 μm, npr. od 1 do 5 μm) sa nosač supstancom, na primer, mono-, di- ili polisaharidom, šećernim alkoholom ili drugim poliolom. Pogodni nosači su šećeri, na primer, laktoza, glukoza, rafinoza, melezitoza, laktitol, maltitol, trehaloza, saharoza, manitol; i skrob. Pogodno se čestice aktivnog sastojka drže čestica nosača kako bi se formirala uređena (interaktivna) praškasta mešavina. Čestice nosača mogu imati maseni srednji prečnik od 20 do 1000 μm, obično od 50 do 500 μm.
[0093] Alternativno, farmaceutski sastav koji se može inhalirati može se pripremiti obradom fino odvojenog praha (npr. sastoji se od fino podeljenog aktivnog sastojka i fino podeljenih čestica nosača) u sfere koje se rastvaraju tokom postupka inhalacije.
[0094] Mešavina praha može, prema potrebi, biti izdvojena u tvrdim želatinskim kapsulama, od kojih svaka sadrži željenu dozu aktivnog sastojka. Alternativno, smeša u prahu može se ubaciti u rezervoar višedoznog inhalatora, na primer, Genuair® ili Turbuhaler®.
[0095] U daljem otelotvorenju, jedinjenje formule (I) se primenjuje pomoću inhalatora sa odmerenom dozom, naročito inhalatora sa odmerenom dozom (pMDI) pod pritiskom. PMDI sadrži aktivnu supstancu kao pogodan rastvor ili suspenziju u kontejneru pod pritiskom. Aktivno se isporučuje aktiviranjem ventila na pMDI uređaju. Aktiviranje može biti ručno ili se aktivira dahom. U ručno aktiviranim pMDI uređajima korisnik aktivira kada udišu, na primer pritiskom odgovarajućeg mehanizma za otpuštanje na pMDI uređaj. Dahom aktivirani pMDI se aktiviraju kada pacijent udahne kroz ulaz pMDI. Ovo može biti povoljno jer je aktiviranje uređaja odmereno pacijentovim udisanjem i može rezultovati konzistentnijim doziranjem aktivne supstance. Primeri pMDI uređaja uključuju na primer Rapihaler® (AstraZeneca).
[0096] Inhalabilni farmaceutski sastav koji se može upotrebiti u pMDI može se pripremiti rastvaranjem ili dispergovanjem jedinjenja formule (I) u odgovarajućem propelantu, sa ili bez dodatnih ekscipijenata kao što su rastvarači (na primer etanol), surfaktanti, lubrikanti ili agensi za stabilizaciju. Odgovarajući propelanti sadrže ugljovodonik, hlorofluorougljik i hidrofluoroalkan (npr. heptafluoroalkan) propelante, ili smeše bilo kog takvog propelanta. Poželjni propelanti su P134a i P227, od kojih se svaki može koristiti sam ili u kombinaciji sa drugim propelantima i/ili surfaktantom i/ili drugim ekscipijentima.
[0097] U daljem otelotvorenju, jedinjenje formule (I) se primenjuje pomoću inhalatora sa odmerenom dozom u kombinaciji sa distankorom. Pogodni odstojnici su dobro poznati i uključuju Nebuchamber® (AstraZeneca) ili Volumatic® (GlaxoSmithKline).
[0098] U daljem otelotvorenju, jedinjenje formule (I) se primenjuje pomoću nebulizatora. Pogodni nebulizatori su dobro poznati i uključuju eFloW® (PARI GmbH).
[0099] Inhalabilni farmaceutski sastav za upotrebu u nebulizatoru može se dobiti dispergovanjem ili poželjno rastvaranjem jedinjenja formule (I) u pogodnom vodenom medijumu. Sastav može takođe uključiti, na primer, odgovarajuće podešavanje pH i/ili toničnosti, surfaktante i konzervanse. Na primer, odgovarajući sastav za inhalaciju iz nebulizatora sadrži jedinjenje formule (I) dispergovani u vodenom medijumu (mg/g u Mill-Q vodi) koja sadrži natrijum hlorid (9 mg/g); osušen limunskom kiselinom (0,0735 mg/g); natrijum citrat (0,19 mg/g); benzalkonijum hlorid (0,1 mg/g), EDTA (etilendiamin tetraacetatna kiselina, 0,1 mg/g) i polisorbat 80 (0,3 mg/g).
[0100] U daljem otelotvorenju, jedinjenje formule (I) se nazalno primenjuje kao sprej od odgovarajućeg aparata za nazalnu isporuku, na primer sprej pumpa ili MDI. Alternativno, jedinjenje se može primenjivati nazalno kao prašak koristeći pogodan DPI uređaj, npr.
Rhinocort®, Turbuhaler® (AstraZeneca).
[0101] Inhalabilni farmaceutski sastav koji se može koristiti u sprej pumpi ili MDI uređaju za nazalnu primenu mogu se pripremiti dispergovanjem ili poželjno rastvaranjem jedinjenja formule (I) u pogodnom vodenom medijumu. Sastav može takođe uključiti, na primer, odgovarajuće podešavanje pH i/ili toničnosti, surfaktante, konzervanse, arome lubrikanata ili modifikatore viskoznosti. Ukoliko su potrebni, mogu biti uključeni aditivi za poboljšanje apsorpcije iz nosne šupljine, kao što je pogodan bioadhezivni polimer. Pogodni sastavi suvog praha za isporuku nosača su kao što je prethodno opisano u smislu DPI isporuke. Međutim, tamo gde je poželjno ograničiti penetraciju jedinjenja u pluća i zadržati jedinjenje u nosnoj šupljini, možda će biti potrebno koristiti jedinjenje kao veću veličinu čestica, na primer sa prosečnim prečnikom čestica većim od oko 10 μm , na primer od 10 μm do 50 μm.
[0102] Shodno tome, predmetna specifikacija takođe obelodanjuje uređaj za inhalaciju (na primer inhalator sa suvim prahom, naročito inhalator sa suvim prahom sa više jediničnih doza ili pMDI inhalator) koji sadrži inhalabilni farmaceutski sastav iz ovog pronalaska.
[0103] Pronalazak se dalje odnosi na kombinovanu terapiju gde se jedinjenje prema pronalasku ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i drugi aktivni sastojak primenjuje istovremeno, sekvencijalno ili u smeši, za tretman jednog ili više gore navedenih stanja.
Takva kombinacija se može koristiti u kombinaciji sa jednim ili više drugih aktivnih sastojaka.
[0104] U daljem aspektu ovog pronalaska obezbeđen je farmaceutski sastav (na primer, za upotrebu kao lek za lečenje neke od bolesti ili stanja navedenih ovde, kao što je CF ili COPD) koji sadrži jedinjenje pronalaska, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i najmanje jedan dodatni aktivni sastojak izabran od:
a) agonista beta-adrenoceptora;
b) antagonist muskarinskog receptora;
c) antagonista muskarinskog receptora i agonista beta-adrenoceptora;
d) agonista receptora nalik toll-u (kao što su TLR7 ili TLR9 agonist)
e) antagonista adenozina;
f) agonista glukokortikoidnog receptora (steroidni ili nesteroidni);
g) p38 antagonista;
h) IKK2 antagonista;
i) PDE4 antagonista;
j) modulatora funkcije receptora hemokina (kao što je antagonist CCR1, CCR2B, CCR5, CXCR2 ili CXCR3 receptora);
k) CRTH2 antagonista; ili
l) osmolita, na primer jonskog osmolita, kao što je hipertonični rastvor kao što je definisano u nastavku.
[0105] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa agonistom beta-adrenoceptora (uključujući beta receptor podtipove 1-4) kao što su terbutalin (npr. kao sulfatna so), salmeterol (npr. kao ksinafoatna so), salbutamol (albuterol) (npr. kao sulfatna so), procaterol (npr. kao ugljovodonična so), pirbuterol (npr. kao acetatna so), orciprenalin (metaproterenol) (npr. kao sulfatna so), milveterol (npr. kao ugljovodonična so), levosalbutamol (levalbuterol) (npr. kao ugljovodonična so), abediterol, izoprenalin (izoproterenol) (npr. kao ugljovodonična so), indacaterol (npr. kao maleat so), vilanterol (npr. kao trifenatat (trifenilsirćetna kiselina) so), formoterol (npr. kao fumarat so, na primer fumarat dihidrat so), karmoterol, bitolterol (npr. kao mesilatna so), olodaterol, bedoradrin (npr. kao sulfatna so), bambuterol (npr. kao ugljovodonična so), arformoterol (npr. kao vinska so), PF-610355 (2-[3-[2-[[(2R)-2-hidroksi-2-[4-hidroksi-3-(metanesulfonamido)fenil]etil]amino]-2-metil-propil]fenil]-N-[[3-(4-hidroksifenil)fenil]metil]acetamid), N-(2-dietilaminoetil)-N-[2-[2-(4-hidroksi-2-okso-3H-1,3-benzotiazol-7-il)etilamino]etil]-3-[2-(1-naftil)etoksi]propanamid,N-cikloheksil-3-[2-(3-fluorofenil)etilamino]-N-[2-[2-(4-hidroksi-2-okso-3H-1,3-benzotiazol-7-il)etilamino]etil]propanamid, ili N-cikloheksil-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-okso-4H-1,4-benzoksazin-8-il)etilamino]etil]-3-[2-[3-(1-metilpirazol-4-il)fenil]etoksi]propanamid.
[0106] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa antagonistom muskarinskog receptora (na primer M1, M2 ili M3 antagonist, kao što je selektivni M3 antagonist) kao što su tiotropijum (npr. kao bromidna so), oksitropijum (npr. kao bromidna so), ipratropijum (npr. kao bromidna so), glikopironijum bromid (npr. kao racemska smeša stereoizomera, ili kao R,R-, R,S-, S,R-, ili S,S- stereoizomer, ili kao smeša koja sadrži dva ili više od R,R-, R,S-, S,R-, ili S,S-stereoizomera), aclidinijum (npr. kao bromidna so), GSK573719 (3-[2-[3-(5-cikloheksiloksikarbonil-tiofen-2-il)-ureido]-3-(4-hidroksifenil)-propionilamino]-1-(3 -hidroksi-benzil)-1-metil-piperidinium), BEA2180BR (hidroksi-di-tiofen-2-il-sirćetna kiselina 8-metil-8-aza-biciklo[3,2.1]okt-6-en-3-il ester) (npr. kao hidrobromidna so), [(3R)-1-[2-okso-2-(2-piridilamino)etil]hinuclidin-1-ijum-3-il] 1-fenilcikloheptankarboksilat (npr. kao bromidna so), ili 2-[(4-hlorofenil)metoksi]etil-[[2-[(R)-cikloheksil-hidroksi-fenilmetil]oksazol-5-il]metil]-dimetil-ammonijum (npr. kao napadisilatna so).
[0107] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa agensom koji je zajednički antagonist muskarinskog receptora (na primer M1, M2 ili M3 antagonist, kao što su selektivni M3 antagonist) i agonist beta-adrenoceptora kao što su PF4348235 ([1-[9-[[(2R)-2-hidroksi-2-[4-hidroksi-3-(metanesulfonamido)fenil]etil]amino]nonil]-4-piperidil] N-[2-(3-hloro-4-hidroksifenil)fenil]karbamat), 3-[2-[2-hloro-3-[[8-(2-etiltiazol-4-karbonil)-11-oksa-3,8-diazaspiro[5.5]undecan-3-il]metil]fenil]etoksi]-N-ciklopentil-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-okso-4H-1,4-benzoksazin-8-il)etilamino]etil]propanamid, N-butil-N-[2-[2-(5-hidroksi-3-okso-4H-1,4benzoksazin-8-il)etilamino]etil]-3-[2-[3-[2-[8-(2-izopropiltiazol-4-karbonil)-11-oksa-3,8-diazaspiro[5.5]undecan-3-il]etil]fenil]etoksi]propanamid, ili 7-[(1R)-2-[2-[2-fluoro-5-[[8-(2-izopropiltiazol-4-karbonil)-11-oksa-3,8-diazaspiro[5.5]undecan-3-il]metil]fenil]etilamino]-1-hidroksietil]-4-hidroksi-3H-1,3-benzotiazol-2-on.
[0108] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa agonista receptorom nalik toll-u (uključujući agonist od TLR7 ili TLR9) kao što su loksoribin (7-alil-2-amino-9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroksi-5-(hidroksimetil)tetrahidrofuran-2-il]-1H-purin-6,8-dion), metil 2-[3-[[3-(6-amino-2-butoksi-8-okso-7H-purin-9-il)propil-(3-morfolinopropil)amino]metil]fenil]acetat (npr. kao hidrobromid, ugljovodonična ili dimaleat so), 4-(dimetilamino)butil 2-[4-[[2-amino-4-metil-6-(pentilamino)pirimidin-5-il]metil]fenil]acetat (npr. kao disaharin, difumarna kiselina, di-1-hidroksi-2-naftojska kiselina ili mono-benzojeva kiselina so), ili 5'-TCG AAC GTT CGA AGA TGA TGA T (obelodanjen kao SEQ ID 171 u WO2004/0158179).
[0109] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa antagonistom adenozina kao što su regadenozon, ATL-313 (metil 4-[3-[6-amino-9-[(2R,3R,4S,5S)-5-(ciklopropilkarbamoil)-3,4-dihidroksi-tetrahidrofuran-2-il]purin-2-il]prop-2-inil]piperidin-1-karboksilat), ili apadenozon (metil 4-[3-[6-amino-9-[(2R,3R,4S,5S)-5-(etilkarbamoil)-3,4-dihidroksi-tetrahidrofuran-2-il]purin-2-il]prop-2-inil]cikloheksankarboksilat).
[0110] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa agonistom glukokortikoidnog receptora (steroidni ili nesteroidni) kao što su triamcinolon, triamcinolon acetonid, prednizon, mometazon furoat, loteprednol etabonat, fluticazon propionat, fluticazon furoat, fluocinolon acetonid, deksametazon cipecilat, desisobutiril ciklesonid, klobetasol propionat, ciklesonid, butiksocort propionat, budesonid, beclometazon dipropionat, alclometazon dipropionat, (1R,3aS,3bS,10aR,10bS,11S,12aS)-1-{[(cijanometil)tio]karbonil}-7-(4-fluorofenil)-11-hidroksi-10a,12a-dimetil-1,2,3,3a,3b,4,5,7,10,10a,10b,11,12,12atetradecahidrociklopenta[5,6]nafto[1,2-f]indazol-1-il 2-furoat, (1R,2R,3aS,3bS,10aS,10bR,11S,12aS)-10b-Fluoro-1-{[(fluorometil)sulfanil]karbonil}-7-(6-fluoropiridin-3-il)-11-hidroksi-2,10a,12a-trimetil-1,2,3,3a,3b,4,5,7,10,10a,10b,11,12,12atetradecahidrociklopenta[5,6]nafto[1,2-f]indazol-1-il metoksiacetat, 2,2,2-trifluoro-N-[(1S,2R)-2-[1-(4-fluorofenil)indazol-5-il]oksi-2-(3-metoksifenil)-1-metil-etil]acetamid, 3-[5-[(1R,2S)-1-(4H-1,3-benzodioksin-7-il)-2-(2,2-difluoropropanoilamino)propoksi]indazol-1-il]-N-(3-piridilmetil)benzamid, 3-[5-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoropropanoilamino)-1-(2,3-dihidro-1,4-benzodioksin-6-il)propoksi]indazol-1-il]-N-[(3R)-1,1-dioksotiolan-3-il]benzamid, ili 3-[5-[(1R,2S)-2-(2,2-difluoropropanoilamino)-1-(2,3-dihidro-1,4-benzodioksin-6-il)propoksi]indazol-1-il]-N-[(3R)-tetrahidrofuran-3-il]benzamid.
[0111] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa p38 antagonistom kao što su PH797804 (3-[3-Bromo-4-(2,4-difluoro-benziloksi)-6-metil-2-okso-2H-piridin-1-il]-4,N-dimetil-benzamid), lozmapimod, PF03715455 (1-[5-terc-butil-2-(3-hloro-4-hidroksifenil)pirazol-3-il]-3-[[2-[[3-[2-(2-hidroksietilsulfanil)fenil]-[1,2,4]triazolo[4,3-a]piridin-6-il]sulfanil]fenil]metil]urea), N-ciklopropil-4-metil-3-[6-(4-metilpiperazin-1-il)-4-okso-hinazolin-3-il]benzamid, ili N-ciklopropil-3-fluoro-4-metil-5-[3-[[1-[2-[2-(metilamino)etoksi]fenil]ciklopropil]amino]-2-okso-pirazin-1-il]benzamid.
[0112] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa inhibitorom fosfodiesteraze (PDE) kao što su metilksantanin uključujući teofilin i aminofilin ili selektivni inhibitor PDE izoenzima (uključujući PDE4 inhibitor ili inhibitor izoforma PDE4D) kao što su tetomilast, roflumilast, oglemilast, ibudilast, GPD-1116 (3-benzil-5-fenil-1H-pirazolo[4,3-c][1,8]naftiridin-4-on), ronomilast, NVP ABE 171 (4-[8-(2,1,3-benzoksadiazol-5-il)-1, 7-naftiridin-6-il]benzojeva kiselina), RPL554 (2-[(2E)-9,10-dimetoksi-4-okso-2-(2,4,6-trimetilfenil)imino-6,7-dihidropirimido[6,1-a]izohinolin-3-il]etilurea), CHF5480([(Z)-2-(3,5-dihloro-4-piridil)-1-(3,4-dimetoksifenil)vinil](2S)-2-(4-izobutilfenil)propanoat), ili GSK256066 (6-[3-(dimetilkarbamoil)fenil]sulfonil-4-(3-metoksianilino)-8-metil-hinolin-3-karboksamid).
[0113] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa IKK2 antagonistom kao što su 5-(2-izopropilizoindolin-5-il)-3-[1-(2-metoksietilsulfonil)-4-piperidil]-1H-indol-7-karboksilna kiselina.
[0114] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa modulatorom funkcije receptora hemokina kao što su antagonisti CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 ili CCR11 (za C-C porodicu), na primer CCR1, CCR2B ili CCR5 receptor antagonist; CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4 ili CXCR5 (za C-X-C porodicu), na primer CXCR2 ili CXCR3 receptor antagonist; ili CX3CR1 za C-X3-C porodicu. Na primer, predmetni pronalazak se odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska sa PS-031291 (pirolidin-1,2-dikarboksilna kiselina 2-[(4-hloro-benzil)-metil-amid] 1-[(4-trifluorometilfenil)-amid]), CCX-354 (1-[4-(4-hloro-3-metoksi-fenil)piperazin-1-il]-2-[3-(1H-imidazol-2-il)pirazolo[3,4-b]piridin-1-il]etanon), vikrivirok, maravirok, cenikrivirok, navariksin (2-hidroksi-N,N-dimetil-3-[[2-[[(1R)-1-(5-metil-2-furil)propil]amino]-3,4-diokso-ciklobuten-1-il]amino]benzamid), SB656933 (1-(2-hloro-3-fluoro-fenil)-3-(4-hloro-2-hidroksi-3-piperazin-1-ilsulfonil-fenil)urea), N-[1-[(3R)-3-(3,5-difluorofenil)-3-(1-metilsulfonil-4-piperidil)propil]-4-piperidil]-N-etil-2-(4-metilsulfonilfenil)acetamid, N-[2-[(2S)-3-[[1-[(4-hlorofenil)metil]-4-piperidil]amino]-2-hidroksi-2-metil-propoksi]-4-hidroksi-fenil]acetamid, 2-[2-hloro-5-[(2S)-3-(5-hlorospiro[3H-benzofuran-2,4'-piperidin]-1'-il)-2-hidroksi-propoksi]-4-(metilkarbamoil)fenoksi]-2-metil-propionska kiselina, N-[2-[(2,3-difluorofenil)metilsulfanil]-6-[(1R,2S)-2,3-dihidroksi-1-metil-propoksi]pirimidin-4-il]azetidin-1-sulfonamid, ili N-[2-[(2,3-difluorofenil)metilsulfanil]-6-[[(1R,2R)-2,3-dihidroksi-1-metil-propil]amino]pirimidin-4-il]azetidin-1-sulfonamid.
[0115] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa inhibitorom leukotrien biosinteze, 5-inhibitor omlipoksigenaze (5-LO) ili antagonistom 5-lipoksigenaza aktivirajučeg proteina (FLAP) kao što su TA270 (4-hidroksi-1-metil-3-oktiloksi-7-sinapinoilamino-2(1H)-hinolinon), PF-4191834 (2H-piran-4-karboksamid, tetrahidro-4-[3-[[4-(1-metil-1H-pirazol-5-il)fenil]tio]fenil]-), setileuton, CMI977 (1-[4-[(2S,5S)-5-[(4-fluorofenoksi)metil]tetrahidrofuran-2-il]but-3-inil]-1-hidroksi-urea), fiboflapon (3-[3-tercbutilsulfanil-1-[[4-(6-etoksi-3-piridil)fenil]metil]-5-[(5-metil-2-piridil)metoksi]indol-2-il]-2,2-dimetil-propionska kiselina), GSK2190915 (1H-indol-2-propionska kiselina, 3-[(1,1-dimetiletil)tio]-1-[[4-(6-metoksi-3-piridinil)fenil]metil]-α,α-dimetil-5-[(2-piridinil)metoksi]-), licofelon, huiflapon (3-[3-terc-butilsulfanil-1-[(4-hlorofenil)metil]-5-(2-hinolilmetoksi)indol-2-il]-2,2-dimetil-propionska kiselina), veliflapon ((2R)-2-ciklopentil-2-[4-(2hinolilmetoksi)fenil]sirćetna kiselina), ABT080 (4,4-bis[4-(2-hinolilmetoksi)fenil]pentanska kiselina), zileuton, zafirlukast, ili montelukast.
[0116] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa CRTh2 antagonistom ili DP2 antagonistom kao što su ACT129968 (2-[2-[(5-acetil-2-metoksi-fenil)metilsulfanil]-5-fluoro-benzimidazol-1-il]sirćetna kiselina), AMG853 (2-[4-[4-(terc-butilkarbamoil)-2-[(2-hloro-4-ciklopropilfenil)sulfonilamino]fenoksi]-5-hloro-2-fluoro-fenil]sirćetna kiselina), AM211 (2-[3-[2-[[benzilkarbamoil(etil)amino]metil]-4-(trifluorometil)fenil]-4-metoksi-fenil]sirćetna kiselina), 2-[4-acetamido-3-(4-hlorofenil)sulfanil-2-metil-indol-1-il]sirćetna kiselina, (2S)-2-[4-hloro-2-(2-hloro-4-etilsulfonil-fenoksi)fenoksi]propionska kiselina, 2-[4-hloro-2-[2-fluoro-4-(4-fluorofenil)sulfonil-fenil]fenoksi]sirćetna kiselina, ili (2S)-2-[2-[3-hloro-4-(2,2-dimetilpirolidin-1-karbonil)fenil]-4-fluoro-fenoksi]propionska kiselina.
[0117] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa MK2 (MAPKAP kinaza 2) antagonistom kao što su varesplabid, PF-3644022 ((10R)-10-metil-3-(6-metilpiridin-3-il)-9,10,11,12-tetrahidro-8H-[1,4]diazepino[5',6':4,5]thieno[3,2-f]hinolin-8-on), ili 4-benzoil-D-fenilalanil-D-seril-D-tryptophil-D-seril-2,3,4,5,6-pentafluoro-D-fenilalanil-3-cikloheksil-D-alanil-D-arginil-D-arginil-D-arginil-D-glutaminil-D-arginil-D-arginin.
[0118] Predmetni pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa antagonist mijeloperoksidaze kao što su resveratrol, piceatannol, 3-[[(2R)-tetrahidrofuran-2-il]metil]-2-tiokso-7H-purin-6-on, ili 1-(2-izopropoksietil)-2-tiokso-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-on.
[0119] Ovaj pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa osmolitom. Kao što se ovde koristi, „osmolit“ je osmotički-aktivni mali molekul i namenjen je ad obuhvati i jonske i nejonske osmolite. U daljem aspektu pronalaska predviđena je kombinacija jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa jonskim osmolitom, kao što je hipertonski slani rastvor.
[0120] U još jednom aspektu ovog pronalaska obezbeđen je farmaceutski sastav (na primer, za upotrebu kao lek za lečenje neke od bolesti ili stanja navedenih ovde, kao što je CF ili COPD) koji sadrži jedinjenje pronalaska, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i najmanje jedan dodatni aktivni sastojak izabran od:
a) agonista beta-adrenoceptora;
b) antagonista muskarinskog receptora;
c) antagonista muskarinskog receptora i agonista beta-adrenoceptora; ili
d) agonista glukokortikoidnog receptora (steroidni ili nesteroidni); ili
e) osmolita, na primer jonskog osmolit, kao što je hipertonski slani rastvor. kao što je gore definisano.
[0121] U još jednom aspektu pronalaska, najmanje jedan dodatni aktivni sastojak je agonist beta-adrenoceptora. U drugom aspektu, bar jedan dodatni aktivni sastojak je antagonist muskarinskog receptora. U sledećem aspektu, najmanje jedan dodatni aktivni sastojak je agonist glukokortikoidnog receptora (steroidni ili nesteroidni). U još jednom aspektu, najmanje jedan dodatni aktivni sastojak je antagonist muskarinskog receptora i agonist betaadrenoceptora. U još jednom aspektu, najmanje jedan dodatni aktivni sastojak je osmolit.
[0122] Jedinjenja opisana u ovoj specifikaciji dalje su ilustrovana u sledećim primerima. Ovi primeri su dati samo ilustracijom i nisu ograničeni.
Skraćenice:
[0123]
aq Vodeni
(BOC)2O/Boc Di-tertbutil dikarbonat
CV Zapremina kolone
DEA Dietilamin
DEAD Dietilazadikarboksilat
DIPA Diizopropilamin
DIEA/DIPEA Diizopropiletilamin
ESI Elektrosprej jonizacija
FA Mravlja kiselina
FMOC/Fmoc Fluorenilmetiloksikarboni
HATU 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat
HBSS Henkov balansirani slani rastvor
HB TU 2-(1H-Benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HEPES 2-[4-(2-hidroksietil)piperazin-1-il]etanesulfonska kiselina
HPLC Tečna hromatografija visokih performansi
IPA Izopropilamin
LC/MS Tečna hromatografija-masena spektroskopija
MeTHF Metil-tetrahidrofuran
MTBE terc-Butil metil eter
NMP N-metilpirolidinon
Rt Vreme zadržavanja
sat. Zasićeno
SFC Hromatografija superkritične tečnosti
TBME terc-Butil metil eter
TEA Trietilamin
THF Tetrahidrofuran
wt-% težinski %
Opšti postupci
[0124] NMR spektri su zabeleženi na Bruker Avance, Avance II ili Avance III spektrometru na protonskoj frekvenciji od 400, 500 ili 600 MHz. Upotrebljen je JEOL EX-270 spektrometar ukoliko se javlja protonska frekvencija od 270 MHz. Centralni vrhovi hloroforma-δ (H 7,26 ppm), acetona (H 2,04 ppm), dihlorometana-d2 (H 5,32 ppm), CH3OD (H 3,30 ppm) ili DMSO-d6 (H 2,49 ppm) korišćeni su kao interne referenci. Mogu se javiti male varijacija hemijskih pomaka, kao što je dobro poznato u struci, kao rezultat varijacija u pripremi uzoraka, kao što su varijacije koncentracije analita i uključivanje ili ispuštanje aditiva (na primer, NMR standardi za testiranje ili trifluorosirćetna kiselina).
[0125] LC/MS eksperimenti su izvedeni korišćenjem Vaters Ackuiti UPLC sistema kombinovanog sa Vaters Ksevo K-ToF masenim spektrometrom u ESI modu. LC je rađena u dve postavke: 1) BEH C18 kolona (1,7 μm 2,1x50 mm) u kombinaciji sa gradijentom (2-95% B za 5 min) vodenog 46mM amonijum karbonata/amonijak pufera na pH 10 (A) i MeCN (B) sa brzinom protoka 1,0 ml/min.2) HSS C18 kolona (1,8 μm 2,1x50mm) sa gradijentom (2-95% B za 5 min) vodenog 10 mM FA/1 mM amonijak formatnog pufera na pH 3 (A) i MeCN (B) sa brzinom protoka od 1,0 ml/min.
[0126] Optička čistoća, naznačena kao enantiomerni višak (% ee), određena je hiralnom HPLC pomoću hromatografa serije Agilent 1100. Postupak A: Sistem opremljen Chiralpak IC 250k4,6 mm; 5μm. Kao mobilna faza heptan/iPrOH/etanolamin (60: 40: 0,1) sa brzinom protoka od 1 ml/min. Zapremina injektiranja je bila 10 μL, a detekcija jedinjenja izvršena je sa UV na 268 nm. Postupak B: Sistem sa Chiralpak IC 150x4,6 mm, 3μm. Kao mobilna faza CO2, 120 bar (A) i MeOH (0,5% DEA) (B) korišćen je u odnosu A/B od 80/20 sa brzinom protoka od 4 ml/min. Zapremina injekcije je 5 μL.
[0127] Priprema HPLC izvršena je sistemom Waters FractionLynx sa integrisanom MS detekcijom i opremljen sa Prep C18 OBD 5μm 19 x 150 mm kolonama od X-Bridge ili Sunfire. Alternativno je korišćen Gilson GX-281 sa integrisanom UV detekcijom, opremljen sa Kromasil C810μm, 20x250 ID ili 50x250 ID mm. Kao eluentni gradijenti primenjeni su voda/MeCN/AcOH (95/5/0,1) ili voda/0,05% TFA ili voda/0,1% NH4HCO3 (A) i MeCN (B).
[0128] Priprema SCF izvedena je pomoću Waters Prep100 SCF sistema sa integrisanom MS detekcijom, opremljen sa Waters Viridis 2-EP ili Phenomenex Luna Hilic, 30 x 250 mm, 5 μm. Kao eluentni gradijent CO2(100g/min, 120 bar, 40°C) (A) i MeOH/NH3 (20mM) ili MeOH (5% FA) ili MeOH (B).
[0129] Osim ako nije drugačije navedeno, početni materijali su bili komercijalno dostupni ili ranije opisani u literaturi. Svi rastvarači i komercijalni reagensi su bili laboratorijski ocenjeni i korišteni su kao primljeni, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0130] Hemijski nazivi kao što je opisano u dole navedenim primerima su generisani korišćenjem ChemDrav (Ultra 11) paketa za imenovanje. Obučena osoba će biti svesna da različiti paketi za imenovanje mogu proizvesti različita hemijska imena za isto jedinjenje. Samo za ilustraciju, hemijska imena koja su generisana za Primere 1 do 16 u nastavku korišćenjem paketa za imenovanje ACD/Name 2012 su, respektivno:
3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-2-(2-metilbenzil)-3-({[1-(3-{[(2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil]amino}propanoil)piperidin-4-il]metil}amino)propil]pirazin-2-karboksamid;
1-deoksi-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-ksilitol; 1-deoksi-1-{[2-({[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)piperidin-1-il]karbonil}amino)etil](heksil)amino}-D-glukitol;
3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-3-({[1-(3-{heksil[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil]amino}propanoil)piperidin-4-il]metil}amino)-2-(2-metilbenzil)propil]pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-3-({[1-(3-{heksil[(2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil]amino}propanoil)piperidin-4-il]metil}amino)-2-(2-metilbenzil)propil]pirazin-2-karboksamid;
1-deoksi-1-[{4-[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)piperidin-1-il]-4-oksobutil}(heksil)amino]-D-glukitol;
3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-2-(2-metilbenzil)-3-({[1-(3-{[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil]amino}propanoil)piperidin-4-il]metil}amino)propil]pirazin-2-karboksamid;
3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-3-({[1-(3-{heksil[(2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil]amino}propanoil)piperidin-4-il]metil}amino)-2-(2-metilbenzil)propil]pirazin-2-karboksamid;
1-deoksi-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-mannitol; 1-deoksi-1-[(2-{[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-glukitol; 1-deoksi-1-{[2-({[4-({[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)fenoksi]karbonil}amino)etil](heksil)amino}-D-glukitol;
1-deoksi-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}etil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-glukitol; 1-deoksi-1-[(2-{[4-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}etil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-ksilitol; 1-deoksi-1-[(2-{[4-({[(2S)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-ksilitol; 5-deoksi-5-[(2-{[4-({[(2S)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}metil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-ksilitol; 1-deoksi-1-[(2-{[3-(2-{[(2R)-3-{[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)karbonil]amino}-2-(2-metilbenzil)propil]amino}etil)benzoil]amino}etil)(heksil)amino]-D-glukitol.
Primer 1
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamid
[0131]
Korak 1
(R)-(9H-fluoren-9-il)metil(3-(4-(((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)piperidin-1-il)-3-oksopropil)karbamat
[0132]
[0133] Smeša (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamida (318 mg, 0,91 mmol) (Međuproizvod A), (9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-formilpiperidin-1-il)-3-oksopropilkarbamat (440 mg, 1,08 mmol) (Međuproizvod F) i sirćetne kiseline (80 µL, 1,40 mmol) u suvom THF (6 mL) je mešana na temperaturi okruženja tokom 30 minuta. Natrijum triacetoksiborohidrid (340 mg, 1,60 mmol) je dodat i reakciona smeša je mešana na 40°C tokom dodatnih 1,5 sata. Voda je dodata i smeša je mešana tokom 5 minuta i rastvarači su ispareni. Preostali materijal je podeljen između EtOAc i vode. Vodenoj fazi je dodat 10% NaHCO3(vodeni) dok nije dostignut pH 8-9. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrakovana nazad sa EtOAc. Kombinovan žute organske faze su osušene preko MgSO4, filtrirane i rastvarači su ispareni. Sirov proizvod je pročišćen pripremnom HPLC (Kromasil C8; H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2). Relevantni fragmenti su kombinovani i koncentrisani u vakuumu. 10% NaHCO3(vodeni) je dodat i vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc. Organska faza je osušena preko MgSO4, filtrirana i isparena. Preostalo lepljivo ulje je rastvoreno u DCM/Heptanu kako bi se posle isparavanja dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca, 196 mg (29%, čistoća 87%).
LC/MS: m/z 739 [M+H]<+>
Korak 2
(R)-3,5-diamino-N-(3-(((1-(3-aminopropanoil)piperidin-4-il)metil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid
[0134]
[0135] (R)-(9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)piperidin-1-il)-3-oksopropilkarbamat (196 mg, 0,27 mmol) (iz koraka 1) je rastvoren u DCM (5 mL) i tretiran sa piperidinom (0,5 mL). Rastvor je mešan na temperaturi okruženja tokom 3 sata i zatim isparen kako bi ostala žuta čvrsta supstanca.
[0136] Sirov materijal je rastvoren u THF (5 mL) i DIPEA (280 µL, 1,60 mmol) i tretiran sa (BOC)2O (0,141 mL, 0,61 mmol) u THF (1 mL). Smeša je mešana na temperaturi okruženja. Nakon 3 sata LC/MS je pokazala samo malu konverziju u mono-Boc zaštićen proizvod, većina je i dalje nereagovan amin. Veliki višak od DIPEA i BOC2(O) je dodat i smeša je mešana tokom 1 sata na temperaturi okruženja. MeCN (2-3 ml) je dodat kako bi se povećala rastvorljivost i smeša je zagrejana na 50°C tokom 2 sata zatim ostavljena na temperaturi okruženja tokom vikenda.
[0137] Isparljive materije su isparene u vakuumu i ostatak je podeljen između EtOAc i voda. Vodena faza je acidifikovana dodavanjem 0,5 M limunske kiseline. Rasol je dodat da pomogne razdvajanje od faze. Organska faza je oprana sa vodom i rasolom.
[0138] Rastvarač je isparen i ostatak je rastvoren u DCM i pročišćen fleš hromatografijom (EtOAc/heptan, gradijent 30 - 100% EtOAc). Rastvarači su ispareni kako bi se dobilo di-BOC zaštićeno jedinjenje iz naslova (96 mg).
[0139] Dobijen di-BOC-zaštićen materijal (96 mg) je rastvoren u DCM (2 mL) i tretiran sa TFA (0,5 mL), rastvor je mešan na temperaturi okruženja tokom 2,5 sata. Smeša je isparena, ostatak je rastvoren u vodi i pročišćen pripremnom HPLC (Kromasil C8;
H2O/MeCN/HCO2H 95/5/0,2 do 60/40/0,2 tokom 16 minuta). Sušenje zaleđivanjem dalo je jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (64 mg, 45%)
LC/MS: m/z 517 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 1,13 - 1,34 (m, 2H), 1,83 - 2,06 (m, 3H), 2,29 - 2,39 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,59 - 2,93 (m, 9H), 3,08 - 3,23 (m, 3H), 3,32 - 3,37 (m, 1H), 3,67 - 3,74 (m, 1H), 3,87 - 3,96 (m, 1H), 4,52 - 4,6 (m, 1H), 7,11 - 7,22 (m, 4H), 8,51 (s, 0,4H, ostatak mravlje kiseline).
Korak 3
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamid
[0140]
[0141] (R)-3,5-diamino-N-(3-(((1-(3-aminopropanoil)piperidin-4-il)metil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (900 mg, 1,74 mmol) je rastvoren u metanolu (10 mL). (2R,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentanal (261 mg, 1,74 mmol) je dodat, praćen sa pet kapi vode. Natrijum cijanoborohidrid (328 mg, 5,22 mmol) je zatim dodat i pH je prilagođen do ∼7,0 dodavanjem sirćetne kiseline. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Isparljive materije su uklonjen i rezultujući sirov proizvod je pročišćen pripremnom HPLC (H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 do 60/40/0,2 tokom 20 minuta).
Relevantni fragmenti su prikupljeni i osušeni smrzavanjem. Jedinjenje iz naslova je rastvoreno u 2M HCl (4ml) i osušeno smrzavanjem, procedura je ponovljena tri puta, dajući HCl so jedinjenja iz naslova (144 mg, 11%).
<1>H NMR (500 MHz, MeOD) δ 1,30 (ddd, 2H), 1,84 - 2,13 (m, 3H), 2,32 - 2,45 (m, 4H), 2,62 - 2,77 (m, 2H), 2,81 - 2,98 (m, 7H), 3,15 (dd, 1H), 3,26 (d, 2H), 3,32 - 3,42 (m, 2H), 3,58 -3,83 (m, 6H), 3,95 (t, 1H), 4,06 (dd, 1H), 4,55 (s, 1H), 7,05 - 7,33 (m, 4H).
Primer 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0142]
Postupak A
Korak 1
terc-butil((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0143]
[0144] (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Međuproizvod E, 1,23 g, 1,73 mmol), (2R,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentanal (0,521 g, 3,47 mmol) i DIPEA (0,303 mL, 1,73 mmol) su rastvoreni u MeOH (10 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (0,327 g, 5,20 mmol) i sirćetna kiselina (0,099 mL, 1,73 mmol) su dodati i mešanje je nastavljeno na 50°C tokom 3 dana. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, ugašena dodavanjem 8% NaHCO3 (vodeni), mešana tokom 15 minuta i zatim koncentrisana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (100 mL) i 8% NaHCO3 (vodeni) (50 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (100 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 20 - 60% acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 puferu tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 268 nm.
Jedinjenja je prikupljena i osušeni smrzavanjem kako bi se dobio terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1,21 g, 83%) kao bela čvrsta supstanca
LC/MS: m/z 843,5 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,74 - 0,85 (m, 3H), 1,12 - 1,27 (m, 6H), 1,27 - 1,45 (m, 11H), 2,20 (s, 3H), 2,25 - 2,35 (m, 1H), 2,39 - 2,66 (m, 6H), 2,9 - 3,06 (m, 1H), 3,06 - 3,51 (m, 12H), 3,53 - 3,6 (m, 1H), 3,6 - 3,72 (m, 1H), 4,2 - 4,68 (m, 5H), 6,97 (bs, 2H), 7,03 - 7,19 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,78 - 7,99 (m, 1H), 8,21 - 8,36 (m, 1H).
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0145]
[0146] Acetil hlorid (5,69 mL, 80,0 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj boci sa MeOH (20 mL). Smeša je mešana tokom 5 minuta i terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1,21 g, 1,43 mmol) je dodat.
Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata i je zatim isparena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid (1,17 g, 100%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 743,4 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,8 - 0,9 (m, 3H), 1,2 - 1,33 (m, 6H), 1,62 - 1,74 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,3 - 2,41 (m, 1H), 2,59 - 2,74 (m, 2H), 2,74 - 2,85 (m, 1H), 2,86 - 2,98 (m, 1H), 3,09 - 3,51 (m, 11H), 3,56 - 3,62 (m, 1H), 3,62 - 3,75 (m, 2H), 3,99 - 4,09 (m, 1H), 4,14 -4,29 (m, 2H), 4,58 (s, 4H), 7 - 7,21 (m, 6H), 7,62 (d, 2H), 7,92 (d, 2H), 8,27 (t, 1H), 8,91 - 9 (m, 1H), 9,16 (d, 2H), 9,52 (d, 1H).
Korak 3
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0147]
[0148] 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid (1,17 g, 1,43 mmol) je rastvoren u vodi (15 ml) i bazifikovan dodavanjem 10% Na2CO3 (vodeni) do pH ∼11. Proizvod je ekstrakovan sa EtOAc (5x70 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobila polu čvrsta supstanca/ulje. Ostatak je rastvoren u acetonitrilu/vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (1,02 g, 96%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 743,5 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,75 - 0,85 (m, 3H), 1,12 - 1,26 (m, 6H), 1,31 - 1,43 (m, 2H), 1,94 - 2,05 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,35 - 2,49 (m, 5H), 2,54 - 2,65 (m, 4H), 3,14 - 3,23 (m, 1H), 3,25 - 3,4 (m, 5H), 3,4 - 3,49 (m, 2H), 3,53 - 3,59 (m, 1H), 3,62 - 3,78 (m, 3H), 4,26 (d, 1H), 4,38 (d, 1H), 4,45 (t, 1H), 4,51 (d, 1H), 6,96 (bs, 2H), 7,03 - 7,14 (m, 4H), 7,40 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 8,24 - 8,37 (m, 2H).
Postupak B
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0149]
[0150] 5 L boca je napunjena sa rastvorom 4-formil-N-(2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)benzamida (Međuproizvod I, 133 g, 108,5 g aktivno, 0,26 mol) u EtOH (1500 mL), (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamida (Međuproizvod A, 108,8 g, 0,31 mol), EtOH (230 mL) i DIPEA (64,4 mL, 0,37 mol). Smeša je zagrejana do 40°C tokom 1 sata. Čist rastvor je napunjen sa AcOH (45,4 ml, 0,79 mol). Rastvor je mešan na 40°C tokom 20 minuta. Ovome je dodat NaCNBH3(23,2 g, 0,37 mol) kapanjem tokom 10 minuta, uz primećenu evoluciju gasa. Smeša je mešana na 40°C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, ugašena pažljivo sa zasićenim vodenim NaHCO3(3100 mL) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Smeša je ekstrakovana sa 10% MeOH/EtOAc (2 x 5000 mL) i 10% MeOH/DCM (5000 mL).
Organske faze su kombinovane i koncentrisane u vakuumu kako bi se dobilo 271 g sirovog materijala. NMR analiza je ukazala na otprilike 80% čistoću, sa NaCNBH3signalima prisutnim. Ostatak je rastvoren u DCM (12 L) i IPA (770 ml). Smeša je oprana sa smešom zasićenog vodenog NaHCO3(2700 ml) i vode (770 ml). Vodena faza je ekstrakovana sa DCM (1200 ml). Organska materija je kombinovana i koncentrisana u vakuumu kako bi se dobilo 298 g (191 g aktivno, 97%) kao žuta čvrsta supstanca. HPLC-MS ukazuje 88,0% čistoću.<1>H NMR ukazuje otprilike 60% čistoću, sa otprilike 27 težinskih % IPA i otprilike 8 težinskih % Međuproizvoda A.
[0151] Tako dobijena sirova supstanca (290 g, 235 mmol) je rastvorena u toplom MeOH (750 mL) i acetonitril (15 L) je dodat neprekidno uz isparavanje azeotropa iz smeše. Nakon što je otprilike 10 L rastvarača ispareno, preostala smeša koja sadrži gumeni talog je mešana tokom dodatnih 4 dana na sobnoj temperaturi.
[0152] Tečna faza je dekantovana od gumenog ostatka. Ostatku je dodato 2,5 L acetonitrila i nakon mešanja tokom 1 sata i acetonitril je dekantovan. Tako dobijena sirova supstanca (otprilike 175 g) je podvrgnuta konačnom pročišćavanju sa HPLC hromatografijom [CelluCoat 250x100 mm, 10µm; mobilna faza: MeOH / MeCN / TEA = 95:5:0,1; injektirana količina: 1,0 g / ciklus; vreme ciklusa: 3,5 minuta]. Prinos jedinjenja iz naslova: 148 g (77%). LC/MS: m/z 743,5 [M+H]<+>
<1>H NMR (600 MHz, DMSO; u slučaju atropizomernih vrhova, prijavljen je samo pomak glavnog atropizomera) δ 0,80 (t, 3H), 1,34 - 1,4 (m, 2H), 1,09 - 1,24 (m, 6H), 1,34 - 1,4 (m, 2H), 2,00 (s, 1H), 2,00 (s, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,36 - 2,42 (m, 1H), 2,43 - 2,49 (m, 4H), 2,51 -2,54 (m, 1H), 2,56 - 2,64 (m, 4H), 3,15 - 3,22 (m, 1H), 3,23 - 3,3 (m, 3H), 3,35 - 3,4 (m, 1H), 3,42 (s, 1H), 3,43 - 3,49 (m, 1H), 3,54 - 3,59 (m, 1H), 3,62 - 3,7 (m, 2H), 3,74 (d, 1H), 4,27 (s, 1H), 4,39 (s, 1H), 4,46 (t, 1H), 4,52 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,03 - 7,08 (m, 2H), 7,40 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 8,26 - 8,31 (m, 1H), 8,31 - 8,35 (m, 1H).
<13>C NMR (151 MHz, DMSO) δ 13,91, 19,04, 22,08, 26,48, 26,61, 31,27, 34,23, 37,42, 38,60, 41,55, 50,84, 53,06, 53,44, 54,55, 57,43, 62,65, 69,23, 71,12, 72,61, 112,95, 117,12, 125,54, 125,83, 126,89, 127,72, 129,63, 130,03, 132,85, 135,82, 138,74, 144,02, 152,69, 154,14, 165,55, 166,01.
[0153] Hiralna HPLC (postupak A; heptan/IPA/TEA 75:25:0,1): 98,9% ee, Rt = 14,75 minuta (R), 18,63 minuta (S).
Primer 3
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0154]
[0155] Korak 1:
(9H-fluoren-9-il)metil2-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)etilkarbamat
[0156]
[0157] U 100-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su 9H-fluoren-9-ilmetil N-(2-aminoetil)karbamat ugljovodonik (1,50 g, 4,71 mmol, 1,0 ekvivalent), (2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-fenil-heksahidro-2H-pirano[3,2-d][1,3]dioksin-6,7,8-triol (1,51 g, 5,63 mmol, 1,20 ekvivalent), metanol (30 mL). Nakon mešanja gore navedene smeše tokom 30 minuta, NaBH3CN (590 mg, 9,39 mmol, 2,00 ekvivalent), AcOH (570 mg, 9,49 mmol, 2,0 ekvivalent) je dodat. Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat heksanal (530 mg, 5,29 mmol, 1,50 ekvivalent), praćen sa još NaBH3CN (450 mg, 7,16 mmol, 2,00 ekvivalent). Rezultujući rastvor je mešan tokom 5 sati na sobnoj temperaturi. Zatim je koncentrisan pod vakuumom. Rezultujuća smeša je oprana sa vodom, ekstrakovana sa etil acetatom i organski slojevi su kombinovani i osušeni preko Na2SO4. Čvrste supstance su filtrirane. Ovo je rezultovalo u 1,6 g (73%) jedinjenja iz naslova kao svetlo žuto ulje. LC/MS: m/z 619 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): 1,80 - 1,92 (m, 3H), 1,15 - 1,40 (m, 6H), 1,41 - 1,72 (m, 2H), 2,88 - 3,15 (m, 5H), 3,33 - 3,43 (m, 2H),3,55 - 3,61 (m, 1H), 3,67 - 3,83 (m, 1H), 3,85 - 4,12 (m, 3H), 4,22 - 4,40 (m, 4H), 5,57 (s, 1H), 7,33 - 7,65 (9H, m), 7,67 (d, 2H), 7,83 (d, 2H).
[0158] Korak 2:
(1R,2S)-3-((2-aminoetil)(heksil)amino)-1-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propan-1,2-diol
[0159]
[0160] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su 9H-fluoren-9-ilmetil N-(2-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil](heksil)amino]etil)karbamat (1,6 g, 2,59 mmol, 1,0 ekvivalent), metanol (10 mL), dietilamin (5 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Ostatak je primenjen na silika gel kolonu i eluiran sa amonijakom/MeOH (1:100). Ovo je rezultovalo u 600 mg (59%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 397 [M+H]<+>
Korak 3:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(2-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)heksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0161]
[0162] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (S)-(9H-fluoren-9-il)metil -3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Međuproizvod B, 400 mg, 0,60 mmol, 1,0 ekvivalent), trietilamin (177 mg, 1,75 mmol, 3,0 ekvivalent), trifozgen (173 mg, 0,58 mmol, 1,0 ekvivalent) u DCM (5 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 0,5 sata na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je oprana sa 3x10 mL vode. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom kako bi se dobio međuproizvod hloroformamid koji je dodat kapanjem (rastvoreno u DCM) rastvoru trietilamina (177 mg, 1,75 mmol, 3,0 ekvivalent) i (1R,2S)-3-[(2-aminoetil)(heksil)amino]-1-[(2R,4R, 5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3 -dioksan-4-il]propan-1,2-diol (347 mg, 0,88 mmol, 1,50 ekvivalent) u DCM (5 mL) je mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je pročišćen pripremnom TLC sa DCM/MeOH (10:1). Ovo je rezultovalo u 145 mg (22%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 1090 [M+H]<+>
Korak 4:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0163]
[0164] U 8-mL bocu, smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(2-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (144 mg, 0,13 mmol, 1,0 ekvivalent), etanol (0,5 mL), 4M HCl (3 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom. Ovo je rezultovalo u 120 mg (sirovog) jedinjenja iz naslova kao žuto ulje.
LC/MS: m/z 1002 [M+H]<+>
Korak 5:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0165]
[0166] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su 9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (120 mg, 0,12 mmol, 1,0 ekvivalent), dietilamin (2 mL) u N,N-dimetilformamid (4 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom. Sirov proizvod (100 mg) je pročišćen sa Prep-HPLC sa narednim uslovima (2#-AnalyseHPLC-SHIMADZU(HPLC-10)): Kolona, XBridge Prep C18 OBD Kolona,5um,19*150mm,; mobilna faza, voda sa 0,05%TFA i ACN (23,0% ACN sve do 33,0% u 15 minuta); Detektor, MS,UV 254 nm. Ovo je rezultovalo u 8 mg (7%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 780 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): 0,91- 0,95 (m, 3H), 1,27 - 1,38 (m, 8 sati), 1,81 -1,97 (m, 5H), 2,36 (s, 4H), 2,62-2,69(m, 1H), 2,86-2,96 (m, 7H), 3,31-3,55 (m, 3H), 3,63-3,68 (m, 6H), 3,70-3,83 (m, 6H), 4,05-4,17 (m, 3H), 7,13-7,20 (m, 4H)
Primer 4
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0167]
Korak 1 :
Benzil 3-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)propanoat
[0168]
[0169] U 100-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su 4-metilbenzen-1-sulfonska kiselina benzil 3-aminopropanoat (2,00 g, 5,69 mmol, 1,0 ekvivalent), (2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-fenilheksahidro-2H-pirano[3,2-d][1,3]dioksin-6,7,8-triol (2,29 g, 8,54 mmol, 1,5 ekvivalent), metanol (30 mL). Nakon 30 minuta, NaBH3CN (720 mg, 11,46 mmol, 2,00 ekvivalent), AcOH (680 mg, 11,32 mmol, 2,0 ekvivalent) je dodat. Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana, rastvorena sa etil acetatom i oprana sa vodom. Organski slojevi su osušeni preko nevodenog natrijum sulfata. Čvrste supstance su filtrirane. Uklanjanje rastvarača u vakuumu rezultovalo je u 1,9 g (77%) jedinjenja iz naslova kao bezbojno ulje koje je direktno korišćeno u sledećem koraku.
LC/MS: m/z 967 [M+H]<+>
[0170] Korak2:
Benzil3-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoat
[0171]
[0172] U 100-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su benzil 3-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil]amino]propanoat (1,90 g, sirovog), heksanal (660 mg, 6,59 mmol, 1,5 ekvivalent), metanol (30 mL). Nakon 30 minuta, NaBH3CN (550 mg, 8,75 mmol, 2,0 ekvivalent) i AcOH (530 mg, 8,83 mmol, 2,0 ekvivalent) su dodati. Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana, rastvorena sa etil acetatom i oprana sa vodom, organski slojevi su osušeni preko nevodenog natrijum sulfata. Čvrste supstance su filtrirane. Ostatak je primenjen na silika gel kolonu i eluiran sa etil acetatom/petrolej eterom (1:2). Ovo je rezultovalo u 1,3 g (57%) benzil 3-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil](heksil)amino]propanoata kao svetlo žuto ulje.
LC/MS: m/z 516 [M+H]<+>
Korak3:
3-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propionska kiselina
[0173]
[0174] U 100-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su benzil 3-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil](heksil)amino]propanoat (1,3 g, 2,52 mmol, 1,0 ekvivalent), Pd/C (5 wt%, 700 mg), etanol (20 mL). Gore navedenoj smeši, H2(g). Rezultujući rastvor je mešan pod atmosferom H2preko noći na sobnoj temperaturi. Čvrste supstance su filtrirane. Filtrat je koncentrisani pod vakuumom. Ovo je rezultovalo u 0,5 g (47%) 3-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil](heksil)amino]propionske kiseline kao bezbojno ulje.
LC/MS: m/z 426 [M+H]<+>
Korak 4:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0175]
[0176] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su 3-[[(2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-[(2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il]propil](heksil)amino]propionska kiselina (381,49 mg, 0,90 mmol, 3,00 ekvivalent), (S)-(9H-fluoren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Međuproizvod B, 200,0 mg, 0,30 mmol, 1,0 ekvivalent), HATU (170,5 mg, 0,45 mmol, 1,5 ekvivalent), DIEA (57,9 mg, 0,45 mmol, 1,5 ekvivalent), N,N-dimetilformamid (5 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Voda je dodata gore navedenoj smeša i suspenzija je ekstrakovana sa etil acetatom. Organski slojevi su kombinovani i oprani sa rasolom. Smeša je osušena preko nevodenog natrijum sulfata. Čvrste supstance su filtrirane i filtrat je isparen u vakuumu. Ostatak je pročišćen pripremnom TLC (DCM:MeOH=10:1). Relevantni fragmenti su prikupljeni i uklanjanje isparljivih materija rezultovalo je u 200 mg (62%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 1076 [M+H]<+>
Korak 5:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0177]
[0178] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 4, 200 mg, 0,19 mmol, 1,0 ekvivalent) i rastvor od HCl (4M u etanol, 2 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Isparavanje isparljivih materija rezultovalo je u 200 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 987 [M+H]<+>
Korak 6:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((I-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0179]
[0180] U 25-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 5200 mg, 0,20 mmol, 1,00 ekvivalent), metanol (6 mL), dietilamin (3 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom. Sirov proizvod (100 mg) je pročišćen sa Prep-HPLC sa narednim uslovima (Prep-HPLC-019): Kolona, XSelect CSH Prep C18 OBD Kolona,5um,19*150mm; mobilna faza, voda sa 0,05%TFA i MeCN (22,0% MeCN sve do 30,0% u 8 minuta, sve do 100% u 1 minutu, držanje 100% u 1 minutu, spuštanje do 22% u 2 minuta); Detektor, UV 254/220 nm. Ovo je rezultovalo u 38 mg (21%) od 3,5-diamino-6-hloro-N-[(2R)-3-([[1-(3-[heksil[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil]amino]propanoil)piperidin-4-il]metil]amino)-2-[(2-metilfenil)metil]propil]pirazin-2-karboksamid; trifluorosirćetne kiseline kao žuta čvrsta supstanca.
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0,95 - 0,97 (m, 3H), 1,22 - 1,50 (m, 8 sati), 1,70 - 2,10 (m, 5H), 2,30 - 2,51 (m, 4H), 2,63 - 2,81 (m, 2H), 2,88 - 3,16 (m, 7H), 3,16 - 3,20 (m, 2H), 3,34 -3,78 (m, 5H), 3,51-3,87 (m, 7H), 3,95 - 4,10 (m, 1H), 4,10 - 4,25 (m, 1H), 4,54 (d, 1H), 7,14 - 7,22 (m, 4H).
LC/MS: m/z 765 [M+H]<+>
Primer 5
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0181]
Korak1:
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-terc-butoksikarbonilaminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0182]
[0183] Boca (25 mL) je napunjena sa (S)-(9H-fluoren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamatom (Međuproizvod B, 300 mg, 0,45 mmol), 3-(terc-butoksikarbonilamino)propionska kiselina (100 mg, 0,53 mmol), DIPEA (145 mg, 1,13 mmol), HATU (342 mg, 0,9 mmol) i DMF (10 mL) je dodat. Reakcija je mešana tokom 6 sati na sobnoj temperaturi. Smeša je rastvorena sa 25 mL etil acetata i oprana sa vodom (3 x 25 mL). Organski sloj je osušen preko nevodenog Na2SO4. Talog je filtriran i filtrat je koncentrisani pod vakuumom. Dobijen sirov proizvod je pročišćen sa silika gel kolonom sa dihlorometanom/metanolom (20:1, v/v) kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (280 mg, 67%) kao svetlo žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 839 [M+H]<+>
Korak 2:
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil(1-(3-aminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0184]
[0185] U 50-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-tercbutoksikarbonilaminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (korak 1, 216 mg, 0,26 mmol, 1,0 ekvivalent) i vodonik hlorid (4M u metanol, 5 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Isparavanje isparljivih materija rezultovalo je u 190 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 739 [M+H]<+>
Korak 3:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0186]
[0187] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(3-aminopropanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (korak 2, 190 mg, 0,26 mmol, 1,0 ekvivalent), (3R,4S,5R)-oksan-2,3,4,5-tetrol (39 mg, 0,26 mmol, 1,0 ekvivalent), metanol (6 mL). Nakon 30 minuta, NaBH3CN (66 mg, 1,05 mmol, 4,0 ekvivalent) je dodat polako na 0°C. Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Zatim je heksanal (39 mg, 0,39 mmol, 1,0 ekvivalent) dodat, praćen sa još NaBH3CN (66 mg, 1,05 mmol, 4,0 ekvivalent). Rezultujući rastvor je mešan tokom 5 sati na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen kako bi se dobio sirov proizvod, koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez daljeg pročišćavanja.
LC/MS: m/z 957 [M+H]<+>
Korak 4:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0188]
[0189] U 50-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 3, 230 mg, 0,24 mmol, 1,00 ekvivalent), metanol (5 mL), dietilamin (0,5 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 3 sata na sobnoj temperaturi. Sirov proizvod je pročišćen sa Prep-HPLC sa narednim uslovima (Prep-HPLC-019): Kolona, XSelect CSH Prep C18 OBD Kolona,5um,19*150mm,; mobilna faza, voda sa 0,05%TFA i MeCN (18,0% MeCN sve do 35,0% u 8 minuta, sve do 100,0% u 1 minutu, držanje 100,0% u 1 minutu, spuštanje do 18,0% u 2 minuta); Detektor, UV 254/220 nm. Ovo je rezultovalo u 36,9 mg (16%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 735 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0,96 (d, 3H), 1,26-1,40 (m, 8 sati), 1,81-2,01(m, 5H), 2,37 (s, 4H), 2,62-2,94 (m, 9H), 3,17-3,47 (m, 7H), 3,55-3,78 (m, 6H), 3,98 (d, 1H), 4,15 (s, 1H), 4,56 (d, 1H), 7,14-7,21 (m, 4H).
Primer 6
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0190]
Korak 1:
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil ((1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0191]
[0192] U 50-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(piperidin-4-ilmetil)karbamat (Međuproizvod B, 900mg, 1,35 mmol), 4-((tercbutoksikarbonil)amino)buterina kiselina (821 mg, 4,04 mmol), HATU (2305 mg, 6,06 mmol), i DIEA (1,06 mL, 6,06 mmol) u DMF (10 mL) kako bi se dobio žuti rastvor. Rezultujući rastvor je mešan na 25°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je rastvorena sa EtOAc (50 mL), i oprana posle toga sa vodom (50 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen u vakuumu kako bi se dobio sirov proizvod. Sirov proizvod je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu, eluiran sa gradijentom od 20 do 70% EtOAc u petrolej eteru. Čisti fragmenti su ispareni do suvoće kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (834 mg, 73%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 853 [M+H]<+>
Korak 2:
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(4-aminobutanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0193]
[0194] (S)-(9H-fluoren-9-il)metil ((1-(4-((terc-butoksikarbonil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (korak 1, 834 mg, 0,98 mmol) je rastvoren u metanolskom rastvoru HCl (4M) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Rastvarač je isparen u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 753 [M+H]<+>
Korak 3:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0195]
[0196] U 25-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su (S)-(9H-fluoren-9-il)metil (1-(4-aminobutanoil)piperidin-4-il)metil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (korak 2, 250 mg, 0,33 mmol, 1,0 ekvivalent), acetalom zaštićen D-glukoza(2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-fenil-heksahidro-2H-pirano[3,2-d][1,3]dioksin-6,7,8-triol (133 mg, 0,50 mmol, 1,5 ekvivalent) i metanol (5 mL). Smeša je mešana tokom 30 minuta, zatim su dodati NaBH3CN (41 mg, 0,65 mmol, 2,0 ekvivalent) i AcOH (40 mg, 0,67 mmol, 2,00 ekvivalent). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo 210 mg (sirovog) od (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamata kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 1005 [M+H]<+>
Korak 4:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0197]
[0198] (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (210 mg, sirov) je rastvoren u MeOH (5 mL), heksanal (42 mg, 0,42 mmol, 2,00 ekvivalent) je dodat, praćen sa NaBH3CN (26 mg, 0,41 mmol, 2,00 ekvivalent) i AcOH (25 mg, 0,42 mmol, 2,00 ekvivalent). Rezultujuća smeša je mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi i zatim koncentrisana pod vakuumom. Ostatak je uzet sa vodom i ekstrakovan sa 3x20 mL etil acetata. Kombinovani organski slojevi i koncentrisani pod vakuumom i to je rezultovalo u 152 mg (67%) jedinjenja iz naslova kao sirovo žuto ulje.
LC/MS: m/z 1089 [M+H]<+>
Korak 5:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0199]
[0200] U 25-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 4, 152 mg, 0,14 mmol, 1,00 ekvivalent), HCl (4M u etanol, 5 mL) i etanol (1 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Isparavanje isparljivih materija rezultovalo je u 138 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuto ulje.
LC/MS: m/z 1002 [M+H]<+>
Korak 6:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((I-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0201]
[0202] U 25-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 4, 138 mg, 0,14 mmol, 1,0 ekvivalent), dietilamin (2 mL), N,N-dimetilformamid (2 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom. Sirov proizvod (110 mg) je pročišćen pripremnom HPLC sa narednim uslovima: Kolona, XSelect CSH Prep C18 OBD Kolona,5um,19*150mm,; mobilna faza, voda sa 0,05%TFA i MeCN (23% MeCN sve do 30% u 8 minuta, sve do 100% u 1 minutu, držanje 100% u 1 minutu, spuštanje do 23,0% u 2 minuta); Detektor, uv 254/220 nm.15,7 mg (13%) jedinjenja iz naslova kao trifluoroacetat je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 779,5 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): 0,92- 0,96 (m, 3H), 1,21 - 1,39 (m, 8 sati), 1,78 -2,03 (m, 7H), 2,36 (s, 4H), 2,61-2,69 (m, 4H), 2,87-2,93 (m, 5H), 3,13-3,31 (m, 5H), 3,32-3,36 (m, 1H), 3,63-3,77 (s, 6H), 3,78-3,96 (m, 1H), 4,15-4,18 (m, 1H), 4,84-4,86 (m, 1H), 7,13-7,20 (m, 4H).
Primer 7
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid
[0203]
Korak 1:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0204]
[0205] U 25-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (Primer 5 / korak 2, 20 mg, 0,27 mmol, 1,0 ekvivalent,) i acetalom zaštićen D-glukoza (2R,4aR,7R,8R,8aS)-2-fenilheksahidropirano[3,2d][1,3]dioksin-6,7,8-triol (218 mg, 0,81 mmol, 3,0 ekvivalent) u metanolu (5 mL).
Rezultujući rastvor je mešan tokom 0,5 sata na sobnoj temperaturi. NaBH3CN (34 mg, 0,54 mmol, 2,0 ekvivalent), AcOH (30 mg, 0,50 mmol, 2,0 ekvivalent) je dodat. Rezultujuća smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Gašenje sa vodom i ekstrakovanje rezultovalo je nakon uklanjanje rastvarača u 220 mg sirovog jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 992 [M+H]<+>
Korak 2:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0206]
[0207] U 25-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su (9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propilamino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 1, 200 mg, 0,20 mmol, 1,0 ekvivalent), etanol (1,5 mL) i HCl (4M u etanol, 5 mL). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi i zatim koncentrisani pod vakuumom. 180 mg sirovog jedinjenja iz naslova je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 904 [M+H]<+>
Korak 3:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamid
[0208]
[0209] U 25-mL bocu sa okruglim dnom smešteni su 9H-fluoren-9-ilmetil N-[(2S)-3-[(3,5-diamino-6-hloro-3,4-dihidropirazin-2-il)formamido]-2-[(2-metilfenil)metil]propil]-N-[[1-(3-[[(2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil]amino]propanoil)piperidin-4-il]metil]karbamat (korak 2, 180 mg, 0,20 mmol, 1,0 ekvivalent), dietilamin (2 mL) i N,N-dimetilformamid (4 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 4 sata na sobnoj temperaturi i nakon toga je koncentrisan pod vakuumom. Sirov proizvod (150 mg) je pročišćen pripremnom HPLC koristeći narednim uslovima: Kolona, XBridge Prep C18 OBD Kolona,5um,19*150mm,; mobilna faza, voda sa 0,05% TFA i ACN (16,0% ACN sve do 26,0% u 15 minuta); Detektor, MS,UV 254/220 nm. Ovo je rezultovalo u 15,5 mg (10%) od trifluoroacetat jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 681,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): 1,12- 1,43 (m, 2H), 1,87 - 2,12(m, 3H), 2,14(s, 4H),2,62-2,75(m, 2H),2,87-2,93(m, 7H), 3,01-3,19 (m, 3H), 3,31-3,37(m, 1H), 3,77-3,80 (m, 5H),3,87-3,95(m, 2H), 4,07-4,58(s, 1H), 4,80-4,96(d, 1H), 7,13-7,20(m, 4H).
Primer 8
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0210]
Korak 1:
(9H-fluoren-9-il)metil(S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(((2R,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0211]
[0212] Natrijum cijanoborohidrid (57,0 mg, 0,91 mmol) je dodat kapanjem smeši heksanala (45,5 mg, 0,45 mmol) i (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamata [pripremljen procedurom analognoj onoj koja je opisana u primeru 7 / korak 1; umesto toga počevši od acetalom zaštićenog D-manitol (2R,4aR,7S,8R,8aS)-2-fenilheksahidropirano[3,2-d][1,3]dioksin-6,7,8-triola] (300 mg, 0,30 mmol) u MeOH (20 mL). Rezultujući rastvor je mešan na 25°C tokom 4 sata. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Ostatak je pročišćen pripremnom TLC (DCM: MeOH = 25: 1) kako bi se dobilo (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamata (270 mg, 83%) kao žuta guma.
LC/MS: m/z 1076 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0,89 - 1,19 (m, 8 sati), 1,23 - 1,37 (m, 11H), 1,59 - 1,65 (m, 4H), 2,16 - 2,21 (m, 6H), 2,62 - 3,04 (m, 14H), 3,34 - 3,68 (m, 2H), 3,87 - 3,96 (m, 4H), 4,11 - 4,27 (m, 4H), 4,70 - 4,80 (m, 2H), 5,57 (s, 1H), 7,07 - 7,29 (m, 4H), 7,31 - 7,50 (m, 7H), 7,50 - 7,53 (m, 4H), 7,78 (d, 2H).
Korak 2:
(9H-fluoren-9-il)metil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat
[0214] (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)((1-(3-(((2R,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (270 mg, 0,25 mmol) je dodat do HCl (4M, vodeni, 15 mL) u etanolu (5 mL). Nakon mešanja na 25°C tokom 2 sata smeša je koncentrisana pod redukovanim pritiskom i dobilo se jedinjenje iz naslova (200 mg, 81%) kao žuto ulje.
LC/MS: m/z 987 [M+H]<+>
Korak 3:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0215]
[0216] Dietilamin (3 mL) je dodat do (9H-fluoren-9-il)metil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksi0heksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)karbamat (korak 2, 200 mg, 0,20 mmol) u DMF (6 mL). Rezultujuća smeša je mešana na 25°C tokom 2 sati.
Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Sirov proizvod je pročišćen pripremnom HPLC Kolona: X Most C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A:voda/0,05% TFA, mobilna faza B: ACN; brzina protoka: 20 mL/min; gradijent: 30% B do 70% B u 10 min; 254nm, kao eluent. Fragmenti koji sadrže željeno jedinjenje su isparena do suvoće kako bi se dobilo 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-(((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (23,5 mg) kao žuta guma.
LC/MS: m/z 765,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0,94 (t, 3H), 1,29 - 1,40 (m, 8 sati), 1,80 - 2,04 (m, 5H), 2,35 (s, 3H), 2,35 (m, 1H), 2,62 - 2,71 (m, 2H), 2,85 - 2,97 (m, 7H), 3,15 - 3,30 (m, 4H), 3,31 -3,69 (m, 4H), 3,71 - 3,83 (m, 6H), 4,03 - 4,06 (m, 2H), 4,86 - 4,87(m, 1H), 7,13 - 7,20 (m, 1H).
Primer 9
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0217]
Korak 1
terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0218]
[0219] (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Međuproizvod E, 500 mg, 0,70 mmol), (3S,4S,5S,6R)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraol (254 mg, 1,41 mmol) i DIPEA (0,123 mL, 0,70 mmol) su rastvoreni u MeOH (10 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (133 mg, 2,11 mmol) i sirćetna kiselina (0,040 mL, 0,70 mmol) su dodati i mešanje je nastavljeno tokom 18 sati i zatim na 50°C tokom 30 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, ugašena dodavanjem 3 M HCl (vodeni), mešana tokom 15 minuta i zatim je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (50 mL) i 8% NaHCO3(vodeni) (50 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (3x50 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 20 - 60% acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 pufera tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut.
Jedinjenja su detektovana sa UV na 268 nm. Jedinjenje je prikupljeno i osušeno smrzavanjem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (195 mg, 32%) kao bezbojna čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 873,6 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,76 - 0,85 (m, 3H), 1,13 - 1,27 (m, 6H), 1,3 - 1,44 (m, 11H), 2,21 (s, 3H), 2,24 - 2,38 (m, 1H), 2,39 - 2,53 (m, 4H), 2,57 - 2,66 (m, 2H), 2,77 (d, 1H), 2,91 - 3,06 (m, 1H), 3,06 - 3,41 (m, 8 sati), 3,43 - 3,49 (m, 1H), 3,51 (d, 1H), 3,55 - 3,65 (m, 3H), 4,23 - 4,55 (m, 5H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,18 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,78 - 7,99 (m, 1H), 8,27 - 8,37 (m, 1H).
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0220]
[0221] U ledenoj kadi ohlađenoj bočici sa MeOH (5 mL, 124 mmol) dodat je acetil hlorid (1,42 mL, 20 mmol) kapanjem. Smeša je mešana tokom 5 minuta i terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (190 mg, 0,22 mmol) je zatim dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata i je zatim isparena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (184 mg, 100%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 773,4 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,81 - 0,89 (m, 3H), 1,2 - 1,33 (m, 6H), 1,62 - 1,77 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,3 - 2,41 (m, 1H), 2,6 - 2,73 (m, 2H), 2,75 - 2,84 (m, 1H), 2,86 - 2,97 (m, 1H), 3,11 - 3,27 (m, 3H), 3,27 - 3,45 (m, 5H), 3,45 - 3,52 (m, 2H), 3,52 - 3,76 (m, 5H), 3,89 -3,99 (m, 1H), 4,03 - 4,48 (m, 7H), 6,88 - 7,23 (m, 6H), 7,63 (d, 2H), 7,93 (d, 2H), 8,26 (t, 1H), 8,93 - 9,02 (m, 1H), 9,13 - 9,34 (m, 2H), 9,55 (bs, 1H).
Primer 10
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0222]
Korak 1
terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0223]
[0224] (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (Međuproizvod E, 1,25 g, 1,76 mmol), (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraol (0,635 g, 3,52 mmol) i DIPEA (0,308 mL, 1,76 mmol) su rastvoreni u MeOH (10 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (0,332 g, 5,29 mmol) i sirćetna kiselina (0,101 mL, 1,76 mmol) su dodati i mešanje je nastavljeno tokom 40 sati na 50°C. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, ugašena dodavanjem 8% NaHCO3 (vodeni), mešana tokom 30 minuta i koncentrisana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (100 mL) i 8% NaHCO3(vodeni) (100 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (2x100 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 20 - 60% acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 puferu tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut.
Jedinjenja su detektovana sa UV na 268 nm. Jedinjenje je prikupljeno i osušeno smrzavanjem kako bi se dobio terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1,26 g, 82%) kao bela čvrsta supstanca
LC/MS: m/z 873,6 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,73 - 0,86 (m, 3H), 1,1 - 1,27 (m, 6H), 1,27 - 1,46 (m, 11H), 2,20 (s, 3H), 2,24 - 2,38 (m, 1H), 2,38 - 2,49 (m, 3H), 2,53 - 2,69 (m, 3H), 2,9 - 3,06 (m, 1H), 3,06 - 3,47 (m, 10H), 3,47 - 3,54 (m, 1H), 3,54 - 3,76 (m, 3H), 4,18 - 4,65 (m, 6H), 6,97 (bs, 2H), 7,03 - 7,19 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,78 - 8 (m, 1H), 8,24 - 8,37 (m, 1H).
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0225]
[0226] Acetil hlorid (5,69 mL, 80,0 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj boci sa MeOH (20 mL). Smeša je mešana tokom 5 minuta i terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1,26 g, 1,44 mmol) je zatim dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata i zatim je isparena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid (1,29 g, 106%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 773,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,78 - 0,89 (m, 3H), 1,18 - 1,32 (m, 6H), 1,62 - 1,76 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 2,33 - 2,44 (m, 1H), 2,67 (d, 2H), 2,73 - 2,84 (m, 1H), 2,84 - 2,96 (m, 1H), 3,1 - 3,44 (m, 9H), 3,44 - 3,54 (m, 2H), 3,55 - 3,62 (m, 1H), 3,62 - 3,75 (m, 3H), 4,02 - 4,12 (m, 1H), 4,12 - 4,3 (m, 2H), 5,58 (bs, 5H), 6,91 - 7,21 (m, 6H), 7,64 (d, 2H), 7,94 (d, 2H), 8,25 (t, 1H), 8,97 - 9,06 (m, 1H), 9,28 (bs, 1H), 9,41 (bs, 1H), 9,70 (d, 1H).
Korak 3
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0227]
[0228] 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid (1,23 g, 1,45 mmol) je rastvoren u vodi (15 ml) i bazifikovan dodavanjem 10% Na2CO3 (vodeni) do pH ∼11. Proizvod je ekstrakovan sa EtOAc (6x70 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobila polu čvrsta supstanca/ulje. Ostatak je rastvoren u acetonitrilu/vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (1,08 g, 96%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 773,4 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,75 - 0,84 (m, 3H), 1,13 - 1,26 (m, 6H), 1,32 - 1,42 (m, 2H), 1,94 - 2,05 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,34 - 2,49 (m, 6H), 2,54 - 2,66 (m, 4H), 3,14 - 3,23 (m, 1H), 3,25 - 3,35 (m, 4H), 3,35 - 3,42 (m, 1H), 3,42 - 3,47 (m, 1H), 3,47 - 3,54 (m, 1H), 3,55 - 3,61 (m, 1H), 3,61 - 3,77 (m, 4H), 4,26 - 4,33 (m, 2H), 4,47 (d, 1H), 4,51 (d, 2H), 6,96 (bs, 2H), 7,04 - 7,14 (m, 4H), 7,40 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 8,26 - 8,37 (m, 2H).
Primer 11
4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil 2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat
[0229]
Korak 1:
(R)-4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil acetat
[0230]
[0231] U 50 mL kruškastu bocu su (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (Međuproizvod A, 1,6 g, 4,59 mmol) i 4-formilfenil acetat (0,753 g, 4,59 mmol) dodati do DCM (30 mL) kako bi se dobio žuti rastvor. Nakon mešanja tokom 1 sata natrijum triacetoksiborohidrid (3,89 g, 18,4 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno preko noći. Smeša je rastvorena sa DCM i oprana sa vodom i rasolom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobio sirov (R)-4-(((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil acetat (1,70g, 75%) kao žuta čvrsta supstanca. Proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg pročišćavanja.
LC/MS: m/z 467 [M+H]<+>
Korak 2:
(S)-4-((terc-butoksikarbonil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil acetat
[0232]
[0233] (BOC)2O (1,07 mL, 4,59 mmol) je dodat smeši (R)-4-(((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil acetat (1,9 g, 3,82 mmol) i Na2CO3(0,81 g, 7,65 mmol) u smeši rastvarača dioksan (25 mL)/voda (8 mL) na 0°C. Smeši je omogućeno da dostigne sobnu temperaturu i mešana je preko noći. Reakciona smeša je rastvorena sa EtOAc, i oprana sa zasićenim rasolom. Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen u vakuumu. Ostatak je pročišćen fleš hromatografijom na silika gelu koristeći gradijent od 10 do 40% EtOAc u petrolej eteru. Pure fragmenti su isparena do suvoće kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1,30 g, 57%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 597 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 1,47 (s, 9H), 2,25 - 2,2,51 (m, 7H), 2,54 - 2,65 (m, 2H), 3,05 - 3,22 (m, 2H), 3,31 - 3,39 (m, 2H), 4,13 - 4,45 (m, 2H), 6,93 - 7,00 (m, 2H), 7,06 - 7,10 (m, 6H).
Korak 3:
(S)-terc-butil 3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(4-hidroksibenzil)karbamat
[0234]
[0235] NaOH (0,174 g, 4,35 mmol) u vodi (8 mL) je dodat kapanjem ohlađenom rastvoru (S)-4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil acetata (1,3 g, 2,18 mmol) u MeOH (20 mL). Rastvor reakcije je mešan tokom 3 sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je acidifikovana sa 2M vodenim HCl. Reakciona smeša je ekstrakovana sa EtOAc i organska faza je oprana sa vodom i rasolom, osušena preko Na2SO4, filtrirana i isparena kako bi se dobilo sirovo jedinjenje iz naslova (1,20 g, 99%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 555 [M+H]<+>
Korak 4:
(S)-4-((terc-butoksikarbonil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil karbonohloridat
[0236]
[0237] U 50-mL bocu sa okruglim dnom je dodat (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-hidroksibenzil)karbamat (250 mg, 0,45 mmol), DIEA (0,354 mL, 2,03 mmol) do THF (10 mL) kako bi se dobio žuti rastvor. Smeša je ohlađena sa ledenom kadom i trifozgen (200 mg, 0,68 mmol) je dodat. Nakon mešanja tokom 1 sata reakciona smeša je sipana u vodu i ekstrakovana sa EtOAc (3 x 20 mL). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran i isparen kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (250 mg, 90%) kao žuto ulje.
LC/MS: m/z 617 [M+H]<+>
Korak 5:
terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-(((2-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)etil)karbamoil)oksi)benzil)karbamat
[0238]
[0239] 50-mL boci sa okruglim dnom su (1R,2S)-3-((2-aminoetil)(heksil)amino)-1-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propan-1,2-diol (primer 3 / korak 2, 96 mg, 0,24 mmol) i DIEA (0,064 mL, 0,36 mmol) rastvoreni u THF (10 mL) rezultujući u bezbojnom rastvoru. (S)-4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)fenil karbonohloridat (korak 4, 150 mg, 0,24 mmol) je dodat na 0°C. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakciona smeša je sipana u vodu (20 mL)i ekstrakovana sa EtOAc (3 x 20 mL).
Organske faze su osušene preko Na2SO4, filtrirane i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen pripremnom TLC (DCM: MeOH = 10: 1), kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (200 mg, 84%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 977 [M+H]<+>
Korak 6:
4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil 2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat
[0240]
[0241] U 25 mL bocu sa okruglim dnom terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-(((2-(((2S,3R)-2,3-dihidroksi-3-((2R,4R,5R)-5-hidroksi-2-fenil-1,3-dioksan-4-il)propil)(heksil)amino)etil)karbamoil)oksi)benzil)karbamat (korak 5, 200 mg, 0,20 mmol) je dodat do EtOH (1 mL) kako bi se dobio žuti rastvor. Vodeni HCl (4M, 3 mL) je dodat i rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 12 sati. Sirov proizvod je pročišćen pripremnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silika, 50 mm prečnik, 150 mm dužina), koristeći gradijent smanjujuće polarnosti vode (0,05% TFA) i MeCN kao eluent. Fragmenti koji sadrže željeno jedinjenje su ispareni do suvoće kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (28,0 mg, 13%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 789,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 0,79 - 0,99 (m, 3H), 1,25 - 1,55 (m, 6H), 1,69 - 1,91 (m, 2H), 2,25 - 2,45 (m, 4H), 2,51 - 2,84 (m, 1H), 2,81 - 3,01 (m, 3H,), 3,28 - 3,31 (m, 4H), 3,34 - 3,82 (m, 12H), 3,86 - 3,92 (m, 1H), 4,09 - 4,37 (m, 3H), 7,03 - 7,35 (m, 6H), 7,453 (d, 2H).
Primer 12
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0242]
Korak 1
EN06927-61
terc-Butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat
[0243]
[0244] (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (Međuproizvod D, 500 mg, 0,69 mmol), (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraol (249 mg, 1,38 mmol) i DIPEA (0,121 mL, 0,69 mmol) su rastvoreni u MeOH (5 mL) i mešani na 50°C tokom 40 minuta pre dodavanja natrijum cijanoborohidrida (130 mg, 2,07 mmol) i sirćetne kiseline (0,044 mL, 0,76 mmol). Mešanje je nastavljeno na 50°C tokom 21 sata i reakcionoj smeši zatim je omogućeno da se ohladi do sobne temperature. Reakcija je ugašena dodavanjem 8% NaHCO3(vodeni). Smeša je rastvorena u EtOAc (50 mL) i 8% NaHCO3(vodeni) (50 mL), mućkana i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (4x50 mL). Kombinovani organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 20 - 60% acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 puferu tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 265 nm. Jedinjenje je prikupljeno i osušeno smrzavanjem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (385 mg, 63%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 887,6 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,80 (t, 3H), 1,12 - 1,26 (m, 6H), 1,29 - 1,43 (m, 11H), 2,16 - 2,29 (m, 4H), 2,41 - 2,48 (m, 2H), 2,56 - 2,67 (m, 2H), 2,71 (t, 2H), 2,96 (dd, 1H), 3,02 - 3,42 (m, 12H), 3,44 (dd, 1H), 3,47 - 3,54 (m, 1H), 3,55 - 3,74 (m, 3H), 4,18 - 4,79 (m, 4H), 6,96 (bs, 2H), 7,06 - 7,19 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,8 - 7,97 (m, 1H), 8,24 - 8,34 (m, 1H).
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0245]
[0246] Acetil hlorid (1,42 mL, 20 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenom rastvoru MeOH (5 mL, 124 mmol). Rastvor je mešan tokom 5 minuta i zatim je dodat tercbutil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamatu (korak 1, 385 mg, 0,43 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata i zatim je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (369 mg, 99%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 787,4 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,78 - 0,88 (m, 3H), 1,17 - 1,31 (m, 6H), 1,6 - 1,74 (m, 2H), 2,23 - 2,39 (m, 4H), 2,64 - 2,75 (m, 2H), 2,75 - 2,87 (m, 1H), 2,87 - 2,99 (m, 1H), 3,05 (t, 2H), 3,09 - 3,44 (m, 11H), 3,44 - 3,54 (m, 2H), 3,55 - 3,75 (m, 4H), 4 - 4,1 (m, 1H), 4,69 (bs, 7H), 6,88 - 7,2 (m, 5H), 7,23 - 7,3 (m, 1H), 7,36 (d, 2H), 7,88 (d, 2H), 8,24 (t, 1H), 8,85 -9,16 (m, 3H), 9,63 (d, 1H).
Primer 13
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0247]
Korak 1:
terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat
[0248]
[0249] (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (Međuproizvod D, 500 mg, 0,69 mmol), (2R,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentanal (208 mg, 1,38 mmol) i DIPEA (0,121 mL, 0,69 mmol) su rastvoreni u MeOH (5 mL) i mešani na 50°C tokom 40 minuta pre dodavanja natrijum cijanoborohidrida (130 mg, 2,07 mmol) i sirćetne kiseline (0,044 mL, 0,76 mmol). Mešanje je nastavljeno na 50°C tokom 21 sata i zatim je omogućeno da se ohladi do sobne temperature. Reakcija je ugašena dodavanjem 8% NaHCO3 (vodeni). Smeša je rastvorena u EtOAc (50 mL) i 8% NaHCO3 (vodeni) (50 mL), mućkana i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (4x50 mL). Kombinovani organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 20 -60% acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 puferu tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 265 nm. Jedinjenje je prikupljeno i osušeno smrzavanjem kako bi se dobio terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (374 mg, 63%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 857,6 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,74 - 0,85 (m, 3H), 1,11 - 1,28 (m, 6H), 1,28 - 1,44 (m, 11H), 2,14 - 2,29 (m, 4H), 2,46 (dd, 2H), 2,55 - 2,65 (m, 2H), 2,71 (t, 2H), 2,96 (dd, 1H), 3,02 - 3,51 (m, 14H), 3,52 - 3,6 (m, 1H), 3,6 - 3,71 (m, 1H), 4,17 - 4,77 (m, 3H), 6,96 (bs, 2H), 7,05 - 7,2 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,8 - 7,97 (m, 1H), 8,23 - 8,34 (m, 1H).
Korak 2:
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid
[0250]
[0251] Acetil hlorid (1,42 mL, 20,0 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenom rastvoru MeOH (5 mL, 123,59 mmol). Rastvor je mešan tokom 5 minuta i zatim je dodat terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamatu (374 mg, 0,44 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata i zatim je koncentrisani u vakuumu. Ostatak je rastvoren u vodi i osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid dihidrohlorid (361 mg, 100%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 757,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1 - 1,09 (m, 3H), 1,39 - 1,53 (m, 6H), 1,84 - 1,95 (m, 2H), 2,50 (s, 3H), 2,53 - 2,62 (m, 1H), 2,86 - 2,97 (m, 2H), 2,97 - 3,07 (m, 1H), 3,09 - 3,2 (m, 1H), 3,22 - 3,73 (m, 15H), 3,77 - 3,96 (m, 3H), 4,23 - 4,32 (m, 1H), 4,84 (bs, 6H), 7,15 - 7,42 (m, 5H), 7,45 - 7,52 (m, 1H), 7,58 (d, 2H), 8,11 (d, 2H), 8,46 (t, 1H), 9,13 - 9,2 (m, 1H), 9,30 (d, 2H), 9,92 (d, 1H).
Primer 14
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid sirćetna kiselina
[0252]
Korak 1
terc-butil ((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0253]
[0254] (R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat, (Međuproizvod H) (163 mg, 0,23 mmol), (2R,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentanal (69,0 mg, 0,46 mmol) i DIPEA (0,040 mL, 0,23 mmol) su rastvoreni u MeOH (4 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (14,44 mg, 0,23 mmol) i sirćetna kiselina (0,039 mL, 0,69 mmol) su dodati i reakcija zagrejana do 50°C tokom 20 sati i zatim je omogućeno da se ohladi do sobne temperature. Reakcija je ugašena dodavanjem 8 % NaHCO3(vodeni) i mešani tokom 30 minuta. Rastvarač je koncentrisan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i 8 % NaHCO3(vodeni) (25 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (2x25 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x20 ID mm) koristeći gradijent od 30 - 70 % acetonitrila u H2O/ACN/AcOH 95/5/0,2 puferu, tokom 20 minuta sa protokom od 19 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 265 nm. Fragmenti proizvoda su prikupljeni i osušeni smrzavanjem kako bi se dobio terc-butil ((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (127 mg, 65,5 %) kao čvrsta supstanca.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,75 - 0,84 (m, 3H), 1,13 - 1,26 (m, 6H), 1,29 - 1,42 (m, 11H), 2,20 (s, 3H), 2,25 - 2,35 (m, 1H), 2,41 - 2,47 (m, 2H), 2,56 - 2,62 (m, 2H), 2,89 - 3,05 (m, 1H), 3,07 - 3,15 (m, 1H), 3,2 - 3,49 (m, 13H), 3,52 - 3,59 (m, 1H), 3,61 - 3,69 (m, 1H), 4,21 - 4,35 (m, 2H), 4,35 - 4,55 (m, 3H), 6,96 (bs, 1H), 7,04 - 7,19 (m, 6H), 7,71 (d, 2H), 7,77 - 7,98 (m, 1H), 8,24 - 8,32 (m, 1H).
MS ES<+>: m/z 843,4 [M+H]<+>
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid sirćetna kiselina
[0255]
[0256] Acetil hlorid (0,711 mL, 10 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj bočici sa MeOH (2,5 mL, 61,79 mmol) i mešan tokom 5 minuta pre dodavanja terc-butil ((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamata (127 mg, 0,15 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i zatim je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i 5 % Na2CO3(vodeni) (25 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (5x25 mL).
Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu.
Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x20 ID mm) koristeći gradijent od 5 - 45 % acetonitrila u H2O/ACN/AcOH 95/5/0,2 puferu, tokom 20 minuta sa protokom od 19 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 268 nm. Proizvod je osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (100 mg, 82 %) kao bleda čvrsta supstanca.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,77 - 0,83 (m, 3H), 1,13 - 1,25 (m, 6H), 1,32 - 1,41 (m, 2H), 1,90 (s, 4H), 1,96 - 2,05 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,35 - 2,55 (m, 6H), 2,55 - 2,63 (m, 4H), 3,14 - 3,23 (m, 2H), 3,24 - 3,4 (m, 9H), 3,4 - 3,49 (m, 4H), 3,56 (q, 1H), 3,62 - 3,71 (m, 2H), 3,74 (d, 1H), 6,96 (bs, 2H), 7,04 - 7,14 (m, 4H), 7,40 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 8,28 (t, 1H), 8,33 (t, 1H).
MS ES<+>: m/z 743,5 [M+H]<+>
Primer 15
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid sirćetna kiselina
[0257]
Korak 1
terc-bulil((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0258]
[0259] (R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat, (Međuproizvod G) (163 mg, 0,23 mmol), (2S,3R,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentanal (69,0 mg, 0,46 mmol) i DIPEA (40,1 µl, 0,23 mmol) su rastvoreni u MeOH i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (14,44 mg, 0,23 mmol) i sirćetna kiselina (39,5 µl, 0,69 mmol) su dodati i reakcija je zagrejana do 50°C tokom 20 sati i zatim je omogućeno da se ohladi do sobne temperature. Reakcija je ugašena dodavanjem 8 % NaHCO3(vodeni) i mešana tokom 30 minuta. Rastvarač je koncentrisan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i 8 % NaHCO3(vodeni) (25 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (5x25 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x20 ID mm) koristeći gradijent od 30 - 70% acetonitrila u H2O/ACN/AcOH 95/5/0,2 puferu, tokom 20 minuta sa protokom od 19 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 265 nm. Fragmenti proizvoda su prikupljeni i osušeni smrzavanjem kako bi se dobio terc-butil ((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2R,3 S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (135 mg, 69,7 %) kao čvrsta supstanca.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,79 (d, 3H), 1,16 (d, 6H), 1,36 (s, 11H), 2,20 (s, 3H), 2,31 (s, 1H), 2,50 (dt, 5H), 2,58 (s, 3H), 2,92 - 3,05 (m, 1H), 3,06 - 3,15 (m, 1H), 3,31 (s, 6H), 3,39 - 3,5 (m, 2H), 3,53 - 3,59 (m, 1H), 3,61 - 3,69 (m, 1H), 4,22 - 4,34 (m, 2H), 4,34 - 4,55 (m, 3H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,18 (m, 6H), 7,71 (d, 2H), 7,78 - 7,97 (m, 1H), 8,25 - 8,32 (m, 1H).
MS ES<+>: m/z 843,5 [M+H]<+>
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid sirćetna kiselina
[0260]
[0261] Acetil hlorid (0,711 mL, 10 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj bočici sa MeOH (2,5 mL, 61,79 mmol) i mešani tokom 5 minuta pre dodavanja terc-butil ((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)karbamata (135 mg, 0,16 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata i zatim je isparena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (25 mL) i 5 % Na2CO3(vodeni) (25 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (5x25 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu. Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x20 ID mm) koristeći gradijent od 5 - 45 % acetonitrila u H2O/ACN/AcOH 95/5/0,2 puferu, tokom 20 minuta sa protokom od 19 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 268 nm. Proizvod je osušen smrzavanjem kako bi se dobio 3,5-diamino-6-hloro-N-((S)-3-((4-((2-(heksil((2R,3S,4S)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (93 mg, 70,2 %) kao bleda čvrsta supstanca.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,76 - 0,83 (m, 3H), 1,14 - 1,25 (m, 6H), 1,31 - 1,42 (m, 2H), 1,91 (s, 3H), 1,95-2,06 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,35 -2,54 (m, 6H), 2,60 (dd, 4H), 3,14 -3,5 (m, 11H), 3,56 (q, 1H), 3,66 (dd, 2H), 3,74 (d, 1H), 6,96 (s, 2H), 7,04 - 7,14 (m, 4H), 7,40 (d, 2H), 7,74 (d, 2H), 8,28 (t, 1H), 8,33 (t, 1H).
MS ES<+>: m/z 743,4 [M+H]<+>
Primer 16
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-(3-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0262]
Korak 1
terc-butil (S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(3-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetil)karbamat
[0263]
[0264] U 50-mL bocu sa okruglim dnom su (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(3-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil) karbamat (međuproizvod D, 370 mg, 0,51 mmol) i (3R,4S,5S,6R)-6-(hidroksimetil)tetrahidro-2H-piran-2,3,4,5-tetraol (138 mg, 0,77 mmol) u MeOH (15 mL) kako bi se dobio žuti rastvor. Nakon mešanja gore navedene smeše tokom 30 minuta NaCNBH3(32,1 mg, 0,51 mmol) je dodat. Rezultujući rastvor je mešan na 50°C tokom 16 sati. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom kako bi se dobio sirov proizvod terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(3-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (500 mg, 110%) kao žuta čvrsta supstanca. Proizvod je korišćen u sledećem koraku direktno bez daljeg pročišćavanja.
LC/MS: m/z 887 [M+H]<+>
Korak 2
3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-(3-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)fenetilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid
[0265]
[0266] U 50-mL bocu sa okruglim dnom je terc-butil ((S)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(3-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (500 mg, 0,56 mmol) u HCl/MeOH (20 mL, 0,56 mmol) kako bi se dobio žuti rastvor. Rezultujući rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen pod redukovanim pritiskom. Sirov materijal je pročišćen pripremnom HPLC (Waters XBridge Prep C18 OBD kolona, 5µ silika, 50 mm prečnik, 150 mm dužina), koristeći smeše vode opadajuće polarnosti (koje sadrže 0,1% NH4HCO3) i MeCN kao eluente. Fragmenti koji sadrže željeno jedinjenje su ispareni do suvoće kako bi se dobilo 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((3-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid (87 mg, 20%) kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z 788 [M+H]<+>
<1>H NMR (300 MHz, CD3OD, 25°C): δ 0,85 - 0,91 (m, 3H), 1,15 - 1,35 (m, 6H), 1,39 - 1,59 (m, 2H), 2,12 - 2,25 (m, 1H), 2,31 (s, 3H), 2,57 - 2,89 (m, 13H, 3,29 - 3,33 (m, 2H), 3,38 -3,64 (m, 3H), 3,66 - 3,84 (m, 6H), 7,09 - 7,16 (m, 4H),7,38 (d, 2H), 7,70 - 7,73 (m, 2H).
Sinteza međuproizvoda
Međuproizvod A
(R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid [0267]
Korak 1:
Dimetil 2-(2-metilbenzil)malonat
[0268]
[0269] Reaktor je napunjen sa dimetil malonatom (6,00 kg, 45,4 mol) i metanolom (21,3 L).
25% NaOMe/MeOH (10,37 L, 45,2 mol) je dodat tokom 10 minuta i zatim je 2-metil benzilhlorid (4,26 kg, 30,3 mol) dodat tokom 1,5 sata, održavajući temperaturu reakcije ispod 30°C. Zasićen NH4Cl (53,1 L) je dodat reakciji, rezultujući u pH 8,5. Proizvod je ekstrakovan sa izopropil acetatom (3 x 25 L) i kombinovani organski slojevi su oprani sa 10% rasolom (10 L) i koncentrisani pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao ulje (8,63 kg, 68 težinskih %, 83%). Tako dobijeno jedinjenje iz naslova sadržalo je dialkilovani malonat. Čistoća sa HPLC: 86%.
LC/MS: m/z 237 [M+H]<+>
<1>H-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 7,17-7,05 (4H, m), 3,60 (6h, s), 3,82 (1H, t), 3,12 (2H, s), 2,21 (3H, s);<13>C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 169,5, 136,6, 136,3, 130,8, 129,5, 127,3, 126,4, 52,8, 52,0, 31,8, 19,4.
Korak 2
2-(2-Metilbenzil)malonamid
[0270]
[0271] Reaktor je napunjen sa dimetil-2-(2-metilbenzil)malonatom (korak 1, 5,9 kg, 68% wt, 17,0 mol) i metanolom (14,8 L).34% Amonijum hidroksid (24 L, 36 ekvivalent.) je dodat i reakcija je mešana na 25°C dok se nije smatrala završenom od strane HPLC analize. Čvrste supstance su filtrirane i zatim je MTBE (15,3 L) dodat. Nakon 30 minuta čvrste supstance su filtrirane, oprane sa MTBE (2 x 15,3 L) i osušene pod redukovanim pritiskom na 60°C kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (3,2 kg, 91%).
LC/MS: m/z 206,9 [M+H]<+>
<1>H-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 7,32-7,21 (2H, br s), 7,15-7,00 (6H, m), 3,33 (1H, t), 2,96 (2H, d), 2,28 (3H, s);<13>C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 171,0, 137,5, 136,0, 129,9, 128,9, 126,1, 125,6, 53,2, 32,5, 19,1.
Korak 3
2-(2-Metilbenzil)propan-1,3-diamin
[0272]
[0273] Reaktor je napunjen sa 2-(2-metilbenzil)malonamidom (1,32 kg, 6,40 mol) i THF (5,4 L). Viskozna smeša je ohlađena do 0°C i 1M boran-THF (25,6 L, 25,6 mol) je dodat tokom 2 sata, održavajući temperaturu reakcije ispod 2°C. Reakcija je zagrejana do 15°C i zatim je mešana na 50°C preko noći. Kada je HPLC analiza ukazala da je manje od 8% početnog materijala ostalo, reakciona smeša je ugašena u 4M KOH (8 L), održavajući temperaturu ispod 30°C. Organski sloj je koncentrisan pod redukovanim pritiskom i vodeni sloj je ekstrakovan dvaput sa MTBE (2 x 10 L). Kombinovani MTBE ekstrakti su dodati koncentrisanom organskom sloju i kombinovani organski slojevi su zatim napunjeni u rastvor 6M HCl (10 L), održavajući temperaturu ispod 30°C. Vodena faza je oprana sa MTBE (10 L) i zatim je bazifikovana sa 6M KOH (12 L). Vodena faza je ekstrakovana dvaput sa THF (10 L i zatim 5 L) i kombinovana organska faza je koncentrisana pod redukovanim pritiskom.
Toluen (5 L) je dodat i zatim azeotropom destilovan kako bi se uklonila preostala voda.
Smeša je zdrobljena sa toluenom (5 L) i čvrste supstance su filtrirane i oprane sa toluenom (3 L). Filtrat je koncentrisan pod redukovanim pritiskom dajući jedinjenje iz naslova kao slobodni amin (1,13 kg, 70% prinos). Čistoća sa HPLC: 91%.
LC/MS: m/z 179,0 [M+H]<+>
<1>H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,12-7,00 (4H, m), 2,72-2,59 (4H, m), 2,52 (2H, d), 2,27 (3H, s), 1,64 (1H, m), 1,48-1,25 (4H, br s);<13>C-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 139,0, 136,3, 130,5, 129,9, 126,2, 125,9, 44,7, 43,8, 34,3, 19,6.
Korak 4
2-(2-Metilbenzil)propan-1,3-diamin L-tartrat
[0274]
[0275] Sirovom diaminu (iz koraka 3) (1,62 kg, 9,1 mol) je dodat etanol (4 L). Rastvor L-vinske kiseline (1,62 kg, 10,8 mol) rastvoren u etanolu (11 L) je dodat, održavajući temperaturu ispod 40°C. Smeša je mešana na 25°C tokom 3 dana i tada su čvrste supstance filtrirane, oprane sa etanolom (2 x 2 L) i osušene pod redukovanim pritiskom na 50°C kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao njegova mono- L-vinska so (3,21 kg, kvantitativni prinos). Čistoća sa HPLC: 92,2%.
LC/MS: m/z 179,0 [M+H]<+>
<1>H-NMR (D2O, 270 MHz) δ 7,30-7,15 (4H, m), 4,27 (2H, s), 3,20-3,07 (2H, dd), 3,04-2,94 (2H, dd), 2,79 (2H, d), 2,41 (1H, m), 2,27 (3H, s);<13>C-NMR (D2O, 270 MHz) δ 178,4, 137,2, 135,7, 131,0, 130,0, 127,6, 126,7, 73,9, 40,5, 35,9, 32,8, 18,7.
Korak 5
(R)-Alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (1-(R))
[0276]
[0277] Reaktor je napunjen sa 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diamin L-vinskom soli (3,57 kg, 10,9 mol) i vodom (17 L).10M NaOH (17 L, 170 mol) je dodat, održavajući temperaturu reakcije ispod 25°C. Smeša je mešana tokom 30 minuta na 25°C tokom 3 dana i zatim je 2-MeTHF (14 L) dodat. Slojevi su razdvojeni i vodena faza je ekstrakovana sa 2-MeTHF (14 L). Kombinovana organska faza je osušena (natrijum sulfat), filtrirana i koncentrisana pod redukovanim pritiskom dajući slobodni diamin. Reaktor je napunjen sa slobodnim diaminom, 2-MeTHF (37,4 L) i dialil karbonatom (1,80 kg, 12,6 mol). Imobilisana Amano lipaza PS IM (5,61 kg, 3 wt ekvivalenti) je dodata iz delova tokom 30 minuta i temperatura je podešena na 30°C. Nakon 4 dana,<1>H NMR ukazuje da je manje od 5% početnog materijala preostalo i reakciona smeša je čisto filtrirana kroz Celite i koncentrisana pod redukovanim pritiskom kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (2,68 kg, 82% ee, 100% prinos). Čistoća sa HPLC: 84,7%.
LC/MS: m/z 263,1 [M+H]<+>
<1>H-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,15-7,05 (4H, m), 5,99-5,81 (1H, m), 5,80-5,60 (1H, br s), 5,35-5,15 (2H, m), 4,54 (2H, d), 3,40-3,14 (2H, m), 2,85-2,52 (4H, m), 2,29 (3H, s), 1,90-1,77 (1H, m), 1,50-1,10 (2H, br s);<13>C-NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 156,6, 138,1, 136,1, 133,0, 130,5, 129,7, 126,3, 125,9, 117,5, 65,4, 44,0, 43,4, 41,6, 34,2, 19,5.
Korak 6
(R)-Alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (1-(R)) D-vinska so.
[0278]
[0279] Sirov (R)-alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (2,68 kg, 10,2 mol) je dodat do EtOH (7,1 L). Rastvor D-vinske kiseline (1,53 kg, 10,2 mol) u EtOH (8 L) je dodat održavajući temperaturu ispod 25°C. Nakon otprilike 1 sata talog je počeo da se formira i smeši je omogućeno da se meša preko noći. MeCN (5 L) je dodat na 25°C i čvrste supstance su filtrirane, oprane sa MeCN (2 x 5 L) i osušene pod redukovanim pritiskom na 40°C kako bi se dobilo 2,94 kg jedinjenja iz naslova ((R) D-vinska so, 100% prinos) u stohiometrijskom odnosu baza/di-kiselina = 2:1. Čistoća sa HPLC: 91,6%.
LC/MS: m/z 263,1 [M+H]<+>
<1>H-NMR (DMSO-d6, 270MHz) δ 7,50 (1H, t), 7,22-7,05 (4H, m), 5,98-5,85 (1H, m), 5,35-5,12 (2H, m), 4,48 (2H, d), 3,95 (2H, s), 3,13-2,99 (2H, m), 2,90-2,79 (1H, m), 2,75-2,58 (2H, m), 2,26 (3H, s), 2,08 (1H, m);<13>C-NMR (DMSO-d6, 270 MHz) δ 174,6, 156,6, 137,4, 136,1, 133,7, 130,3, 129,7, 126,3, 125,8, 117,0, 71,8, 64,4, 65,5, 37,6, 32,7, 19,1, 18,9.
Hiralna HPLC (postupak A): 88,3% ee; r.t. = 11,14 minuta (S), 14,57 minuta (R).
Korak 7
(R)-alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0280]
[0281] 50 L sudu pod azotom dodata je voda (14,7 L) i MTBE (14,7 L), ovo je praćeno dodavanjem (R)-Alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (1-(R)) D-vinske soli (korak 6, 2940 g).10M NaOH (14,7 L) je dodat smeši i temperatura je održavana ispod 30°C. Smeša je mešana tokom 30 minuta, organske materije su razdvojene i vodeno re-ekstrakovane sa MTBE (14,7 L). Deo organske materije je koncentrisan u vakuumu (1 L) kako bi se dobio ekstrapoliran prinos od 1779 g, 95%.
LC/MS: m/z 263,1 [M+H]<+>
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,05-7,15 (4H, m), 5,80-5,99 (1H, m), 5,32-5,14 (m, 2H), 4,52 (d, 2H), 3,15-3,38 (m, 2H), 2,55-2,81 (m, 2H), 2,54 (d, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,76-1,87 (m, 1H).
Korak 8
(S)-alil terc-butil (2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diil)dikarbamat
[0282]
[0283] 50 L sudu pod azotom je dodat (R)-Alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil) karbamat (1740 g) rastvoren u MTBE (29,4 L). Ovo je praćeno dodavanjem trietilamina (922 mL). Smeša je ohlađena do 0°C i tretirana sa BOC-anhidridom (1600 mL, 1518 g) rastvorenim u MTBE (3,48 L). Reakcija je zagrejana do 20°C i mešana tokom 2 sata. Reakcija je ocenjena kompletnom sa<1>H NMR. Reakcija je napunjena sa vodom (8,7 L) i mešana tokom 15 minuta. Organske materije su razdvojene i oprane sa 5% limunske kiseline (8,7 L) i rasolom (8,7 L) pre sušenja preko magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrisane u vakuumu dajući jedinjenje iz naslova (2320 g, 94%).<1>H NMR ukazuje čistoću od >90%.
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,02-7,10 (m, 4H), 5,82-5,99 (m, 1H), 5,55 (t, 1H), 5,32-5,15 (m, 2H), 5,02 (t, 1H), 4,52 (d, 2H), 3,17-3,30 (m, 2H), 2,95-3,15 (m, 2H), 2,51 (d, 2H), 2,28 (s, 3H0, 1,87-1,95 (m, 1H), 1,43 (s, 9H).
Korak 9
(S)-terc-butil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0284]
[0285] 50 L sudu pod azotom je dodat (S)-alil terc-butil (2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diil)dikarbamat (2330 g) rastvoreno u DCM (12,9 L) i MeOH (10,3 L), ovo je praćeno dodavanjem Pd(PPh3)4(148,4 g). Reakciona smeša je ohlađena do 5°C i napunjena sa NaBH4(729 g) iz delova tokom perioda od 2 sata. Reakcija je zagrejana do 20°C i mešana je tokom 2 sata, reakciona smeša je pažljivo ugašena u vodi (46,6 L) i zatim je mešana tokom 20 minuta. Organske materije su razdvojene i vodeno re-ekstrakovane sa DCM (23,6 L). Kombinovane organske materije su osušene preko magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrisane u vakuumu kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (1679 g, 100% prinos (∼80% pure sa<1>H NMR).
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,02-7,15 (m, 4H), 5,22 (br s, 1H), 3,10-3,28 (m, 2H), 2,62-2,80 (m, 2H), 2,52 (d, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,75-1,82 (m, 1H), 1,92 (s, 9H), 1,30 (br s, 2H).
Korak 10
(S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil) karbamat
[0286]
[0287] 5 L sudu pod azotom su dodati 3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksilna kiselina (100 g), HBTU (202,8 g), THF (1200 mL) i DIPEA (111 mL). Reakciji je omogućeno da se meša tokom 24 sata na sobnoj temperaturi. Reakciji je dodat (S)-terc-butil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (korak 9, 148,6 g) rastvoren u THF (1,49 L). Treba uzeti u obzir da je reakcija egzotermovana sa 10°C tokom dodavanja. Reakciji je omogućeno da se meša tokom 24 sata na sobnoj temperaturi, LCMS ukazuje 5% preostalog adukta. Smeša je zagrejana do 35°C tokom 4 sata. LC/MS ukazuje 2% preostalog adukta. Reakcija je mešana tokom dodatnog 1 sata pre nego što je ohlađena do sobne temperature i koncentrisana u vakuumu. Ostatak je uzet u etil acetatu (1,5 L) i MTBE (1,5 L) i opran sa zasićenim NaHCO3(1 L), 5% limunske kiseline (700 mL) i rasolom (700 mL). Organske materije su osušene preko magnezijum sulfata, filtrirane i koncentrisane u vakuumu. Ostatak je uzet u MTBE (1L) i re-koncentrisan pre nego što je uzet u MTBE (500 mL) i dietil eter (500 mL) i filtriran kako bi se uklonile DIPEA soli. Filtrat je koncentrisani i analiza je ukazala da je nešto DIPEA soli preostalo. Ostatak je re-zdrobljen sa MTBE (750 mL) i dietil eterom (750 mL) i ponovo filtriran. Filtrat je koncentrisani kako bi se dobilo jedinjenje iz naslova (225 g, 94% (uzimajući u obzir rastvarač i TMU).
LC/MS: m/z 349,2 [M+H]<+>
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,46 (t, 1H), 7,13 (m, 4H), 5,52 (t, 1H), 5,22 (br s, 2H), 3,62-3,75 (m, 1H), 3,00-3,40 (m, 5H), 2,80 (s, 3H), 2,49-2,75 (m, 2H), 1,95-2,02 (m, 1H), 1,42 (s, 9H).
Korak 11
3,5-Diamino-N-[(2R)-3-amino-2-(2-metilbenzil)propil]-6-hloropirazin-2-karboksamid [0288]
[0289] 20 L okrugloj boci pod azotom je dodat (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil) karbamat (korak 10, 2215 g) u dioksan (6 L).
Smeša je mešana tokom 20 minuta do potpunog rastvaranja. Reakciji je zatim dodat 4M HCl u dioksanu (10 L). Reakcija je stvorila znatnu količinu gasova i temperatura je porasla do 35°C pre nego što je primenjeno hlađenje. Viskozni uljani talog je primećen u reakciji.
LC/MS reakcione smeše nakon 1 sata ukazuje završenu reakciju. Supernatant tečnost je dekantovana i koncentrisana u vakuumu. Uljana viskozna čvrsta supstanca je rastvorena u vodi (6 L) i kombinovana sa koncentrisanim supernatantim rastvorenim u vodi (2 L). Vodeno je oprana sa MTBE (5 L). Vodeno je zatim bazifikovana sa 10 M NaOH (2 L) i ekstrakovana sa 2-Me-THF (4 x 10 L). Organske materije su osušene, filtrirane i koncentrisane u vakuumu. Ostatak je zatim koncentrisani od MTBE (2 x 4 L) kako bi se uklonio preostali 2-MeTHF. Čvrsta supstanca je zdrobljena sa MTBE:heptanom (9 L:1,8 L) i omogućeno joj je da se meša tokom vikenda. Čvrsta supstanca je filtrirana i osušena u rerni na 40°C dajući jedinjenje iz naslova (1657 g, 96%).
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz) δ 7,60 (t, 1H), 7,08-7,15 (m, 4H), 5,75 (br s, 2H), 5,12 (b s, 2H), 3,38-3,45 (m, 2H), 2,52-2,82 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 1,80-1,98 (m, 2H), 1,20-1,28 (m, 2H).
Korak 12
(R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (2R,3S)-2-benzoil-3-(benzoiloksi)sukcinat
[0290]
[0291] 5 L sudu pod azotom je dodat 3,5-Diamino-N-[(2R)-3-amino-2-(2-metilbenzil)propil]-6-hloropirazin-2-karboksamid (127,4 g) i metanol (892 mL). Smeša je nežno zagrejana do 30°C dok se sva čvrsta supstanca nije rastvorila. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i (+)-dibenzoil-D-vinske kiselina (65,5 g) u metanolu (458 mL) je dodata. Reakciji je omogućeno da se meša, nakon ∼2 sata čvrsta supstanca je počela da se taloži. Reakciji je omogućeno da se meša tokom vikenda. Izopropil acetat (1,5 L) je dodat smeši i i mešanje je nastavljeno tokom 4 sata. Talog je zatim filtriran i opran sa izopropil acetatom (2 x 1L).
Čvrsta supstanca je zatim osušena u rerni tokom 3 dana na 40°C. Ukupno 147,5 g (74%) je dobijen u stohiometrijskom odnosu baza/di-kiselina = 2:1.
<1>H NMR (CDCl3, 270 MHz): δ 7,60 (t, 1H), 7,08-7,15 (m, 4H), 5,75 (br s, 2H), 5,12 (b s, 2H), 3,38-3,45 (m, 2H), 2,52-2,82 (m, 4H), 2,30 (s, 3H), 1,80-1,98 (m, 2H), 1,20-1,28 (m, 2H).
Hiralna HPLC (postupak A): 98,7% ee, Rt = 11,93 minuta (R), 14,24 minuta (S).
Korak 13
(R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid [0292]
[0293] (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (2R, 3S)-2-benzoil-3-(benzoiloksi)sukcinat (20 g, 38,46 mmol) je suspendovan u 2-metil-THF (200 mL) i vodi (200 mL) i ohlađen sa ledenom kadom. Natrijum hidroksid, 1 M (42,3 mL, 42,31 mmol) je dodat polako i smeša je zatim je mešana na 40°C dok sav materijal nije rastvoren. Smeša je ohlađena do sobne temperature i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa 2-metil-THF (2x200 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa rasolom (200 mL), osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu kako bi se dobio (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (13,3 g, 99%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 349,3 [M+H]<+>.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,50 (bs, 2H), 1,76 - 1,87 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,4 - 2,49 (m, 2H), 2,52 - 2,62 (m, 2H), 3,18 - 3,28 (m, 2H), 6,95 (bs, 2H), 7,04 - 7,17 (m, 4H), 8,14 (t, 1H).
Hiralna HPLC (postupak B): 99,3% ee, Rt = 11,55 minuta (S), 13,28 minuta (R).
+11,8 (c 1,0, MeCN).
Međuproizvod B
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamat
[0294]
Korak 1:
(R)-terc-butil 4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)piperidin-1-karboksilat
[0295]
[0296] U 50-mL bocu sa okruglim dnom, smešteni su smeša terc-butil 4-formilpiperidin-1-karboksilata (122 mg, 0,57 mmol, 1,00 ekvivalent) i 3,5-diamino-N-[(2R)-3-amino-2-[(2-metilfenil)metil]propil]-6-hloropirazin-2-karboksamida (Međuproizvod A, 200 mg, 0,57 mmol, 1,0 ekvivalent) u dihlorometanu (5 mL), smeša je mešana tokom 1 sata. Zatim je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (486 mg, 2,29 mmol, 4,00 ekvivalent). Rezultujući rastvor je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je oprana sa 3x10 mL vode, osušena preko nevodenog natrijum sulfata i koncentrisana pod vakuumom. Ovo je rezultovalo u 250 mg (80%) jedinjenja iz naslova kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 546 [M+H]<+>.
Korak 2:
(S)-terc-butil 4-(((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)piperidin-1-karboksilat
[0297]
[0298] FMOC-hlorid (19 mg, 0,07 mmol, 1,00 ekvivalent) u dioksanu (2,0 mL) je dodat kapanjem smeši (R)-terc-butil 4-((3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)piperidin-l-karboksilata (korak 1, 40 mg, 0,07 mmol, 1,0 ekvivalent) i Na2CO3(12 mg, 0,11 mmol, 1,5 ekvivalent) u vodi/dioksanu (1:2, 3 mL).
Rezultujući rastvor je mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi, ekstrakovan sa 3x5 mL etil acetata. Kombinovane organske faze su osušene preko nevodenog natrijum sulfata. Nakon uklanjanja rastvarača u vakuumu, 42 mg (75%) jedinjenja iz naslova je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 768 [M+H]<+>
Korak 3:
(S)-(9H-fluoren-9-il)metil 3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil(piperidin-4-ilmetil)karbamat
[0299]
[0300] U 25-mL bocu sa okruglim dnom smešten je rastvor (S)-terc-butil 4-(((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)piperidin-1-karboksilata (korak 2, 20 mg, 0,03 mmol, 1,0 ekvivalent) u HCl/MeOH (4M, 3 mL). Rezultujući rastvor je mešan tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Rezultujuća smeša je koncentrisana pod vakuumom. Ovo je rezultovalo u 15 mg (86%) 9H-fluoren-9-ilmetil N-[(2S)-3-[(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)formamido]-2-[(2-metilfenil)metil]propil]-N-(piperidin-4-ilmetil)karbamata kao žuta čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 668 [M+H]<+>
Međuproizvod C
(9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonik
[0301]
Korak 1
terc-butil (2-(benzil(heksil)amino)etil)karbamat
[0302]
[0303] N-benzilheksan-1-amin (2,69 g, 14,1 mmol), terc-butil (2-oksoetil)karbamat (4,48 g, 28,1 mmol) i DIPEA (2,46 mL, 14,1 mmol) su rastvoreni u MeOH (20 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta. Natrijum cijanoborohidrid (1,77 g, 28,1 mmol) i sirćetna kiselina (0,806 mL, 14,1 mmol) su dodati i mešanje je nastavljeno tokom 18 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem 8% NaHCO3(vodeni) i mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Rastvarač je koncentrisan u vakuumu. Ostatak je rastvoren sa vodom i ekstrakovan sa EtOAc (2x100 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na dve Biotage® KP-SIL 100g kolone. Gradijent od 5 - 50% od EtOAc u heptanu tokom 12 CV je korišćen kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio terc-butil (2-(benzil(heksil)amino)etil)karbamat (3,19 g, 68%) kao bezbojno ulje.
LC/MS: m/z: 335,6 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,84 - 0,92 (m, 3H), 1,19 - 1,35 (m, 6H), 1,38 - 1,66 (m, 11H), 2,43 (t, 2H), 2,52 (t, 2H), 3,09 - 3,21 (m, 2H), 3,56 (s, 2H), 4,83 - 4,93 (m, 1H), 7,22 - 7,37 (m, 5H).
Korak 2
terc-butil (2-(heksilamino)etil)karbamat
[0304]
[0305] terc-butil (2-(benzil(heksil)amino)etil)karbamat (3,19 g, 9,54 mmol) je rastvoren u MeOH (25 mL) i 20% Pd(OH)2/C (0,201 g, 0,29 mmol) je dodat. Reakcija je hidrogenizovana u Buchi hidrogenatoru na 4 bar i sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakcija se zaustavila. Još 20% Pd(OH)2/C (200 mg, 0,28 mmol) je dodato i hidrogenizacija nastavljena tokom 6 sati, hidrogenizacija se zaustavila. Katalizator je filtriran, opran sa MeOH i filtrat je koncentrisan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u MeOH (15 mL), 20% Pd(OH)2/C (250 mg, 0,36 mmol) je dodato i hidrogenizacija je nastavljena na 4 bar i sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Katalizator je filtriran, opran sa MeOH i filtrat je isparen u vakuumu. Reakcija je jednom ponovo rastvorena u MeOH, 20% Pd(OH)2/C (250 mg, 0,36) je dodat i hidrogenizacija nastavljena tokom 3 dana. Katalizator je filtriran, opran sa MeOH i filtrat je isparen u vakuumu kako bi se dobio terc-butil (2-(heksilamino)etil)karbamat (2,38 g, 102%) kao bezbojno ulje.
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,89 (t, 3H), 1,22 - 1,36 (m, 6H), 1,41 - 1,53 (m, 11H), 2,61 (t, 2H), 2,75 (t, 2H), 3,19 - 3,28 (m, 2H), 4,97 (bs, 1H).
Korak 3
(9H-fluoren-9-il)metil(2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)(heksil)karbamat
[0306]
[0307] Ledenom kadom ohlađenom rastvoru terc-butil (2-(heksilamino)etil)karbamata (2,38 g, 9,74 mmol) u DCM (40 mL) su dodati DIPEA (1,79 mL, 10,2 mmol) i (9H-fluoren-9-il)metil karbonohloridat (2,65 g, 10,2 mmol). Reakcija je mešana sa hlađenjem tokom 10 minuta i zatim na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Voda (20 mL) je dodata, mućkana i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa DCM (2x20 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100 g koloni. Gradijent od 5 -30% od EtOAc u heptanu preko 9 CV praćen sa 30% EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 264 nm.
Prikupljeni fragmenti su ispareni u vakuumu kako bi se dobio (9H-fluoren-9-il)metil (2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)(heksil)karbamat (3,70 g, 81%) kao bezbojno ulje.
LC/MS: m/z: 467,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,89 (t, 3H), 1,06 - 1,36 (m, 8 sati), 1,43 (s, 9H), 2,78 - 2,87 (m, 1H), 2,95 - 3,08 (m, 2H), 3,11 - 3,36 (m, 3H), 4,18 - 4,26 (m, 1H), 4,49 - 4,63 (m, 2H), 4,89 (bs, 1H), 7,3 - 7,36 (m, 2H), 7,41 (t, 2H), 7,59 (d, 2H), 7,77 (d, 2H).
Korak 4
(9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonik
[0309] Acetil hlorid (2,84 mL, 40,0 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj bočici sa MeOH (10 mL, 247 mmol) i mešan tokom 5 minuta. Ovaj rastvor je zatim dodat (9H-fluoren-9-il)metil (2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)(heksil)karbamatu (3,7 g, 7,93 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Rastvarač je koncentrisan u vakuumu kako bi se dobio (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonik (2,92 g, 91%) kao bela čvrsta supstanca
LC/MS: m/z: 367,3 [M+H]<+>
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 0,82 - 0,97 (m, 4H), 0,99 - 1,51 (m, 7H), 2,68 - 2,88 (m, 3H), 3,23 - 3,39 (m, 3H), 4,23 - 4,4 (m, 2H), 4,52 (d, 1H), 7,29 - 7,37 (m, 2H), 7,37 - 7,46 (m, 2H), 7,64 (d, 2H), 7,83 - 8,09 (m, 5H).
Međuproizvod D
(S)-terc-bulil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat
[0310]
Korak 1
Metil 4-(2-hidroksietil)benzoat
[0311]
[0312] 4-(2-hidroksietil)benzojeva kiselina (2,41 g, 14,5 mmol) je rastvorena u MeOH (5 mL) i H2SO4(0,06 mL, 1,13 mmol) je dodat. Reakcija je zagrejana u mikrotalasnoj peći na 120°C tokom 1 sata i zatim je isparena u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (150 mL), opran sa 8% NaHCO3 (vodeni) (150 mL), rasolom (50 mL), osušen sa faznim razdvajačem i isparen u vakuumu kako bi se dobio metil 4-(2-hidroksietil)benzoat (2,41 g, 92%) kao bledo ulje.
LC/MS: m/z: 181,0 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 2,94 (t, 2H), 3,88 - 3,94 (m, 5H), 7,32 (d, 2H), 7,97 - 8,02 (m, 2H).
Korak 2
Metil 4-(2-oksoetil)benzoat
[0313]
[0314] Metil 4-(2-hidroksietil)benzoat (2,41 g, 13,37 mmol) je rastvoren u DCM (50 mL) i Des-Martinov perjodinan (6,24 g, 14,7 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata i zatim je ugašena dodavanjem 15% Na2S2O3/NaHCO33:2 (vodeni) (50 mL) i mešana žustro tokom 30 minuta. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrakovana sa DCM (2x50 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 5 - 40% od EtOAc u heptanu preko 9 CV praćen sa 50% EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 245 nm. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio metil 4-(2-oksoetil)benzoat (0,880 g, 36,9%) kao žuta čvrsta supstanca.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 3,78 (d, 2H), 3,93 (s, 3H), 7,29 - 7,34 (m, 2H), 8,03 - 8,09 (m, 2H), 9,79 (t, 1H).
Korak 3
(S)-Metil 4-(2-((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzoat
[0315]
[0316] (R)-3,5-Diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (Međuproizvod A, 2,00 g, 5,56 mmol), metil 4-(2-oksoetil)benzoat (1,09 g, 6,12 mmol) i DIPEA (0,971 mL, 5,56 mmol) su rastvoreni u MeOH (4 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Natrijum cijanoborohidrid (1,05 g, 16,7 mmol) i sirćetna kiselina (0,318 mL, 5,56 mmol) su zatim dodati i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakcija je ugašena dodavanjem 8% NaHCO3(vodeni). Reakcija je rastvorena sa EtOAc (100 mL), mešana tokom 30 minuta i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (100 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa rasolom (50 mL), osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (20 mL) i BOC2O (1,290 mL, 5,56 mmol) je dodat. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5,5 sati i zatim je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 10 - 80% od EtOAc u heptanu preko 10 CV je korišćen kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 270 nm. Vrhovi proizvoda su prikupljeni i ispareni u vakuumu kako bi se dobio (S)-metil 4-(2-((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzoat (1,84 g, 54%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 611,4 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,36 (d, 9H), 2,15 - 2,26 (m, 4H), 2,45 - 2,49 (m, 2H), 2,75 (t, 2H), 2,93 (dd, 1H), 3,01 - 3,4 (m, 5H), 3,84 (s, 3H), 6,97 (bs, 2H), 7,05 - 7,17 (m, 4H), 7,21 (d, 2H), 7,82 (d, 2H), 7,85 - 7,94 (m, 1H).
Korak 4
(S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzojeva kiselina
[0317]
[0318] (S)-Metil 4-(2-((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzoat (1,84 g, 2,56 mmol) je rastvoren u MeOH (20 mL) i natrijum hidroksid (3,37 mL, 12,8 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 dana. Rastvarač (MeOH) je zatim koncentrisani u vakuumu. Voda (50 mL) i MeTHF (50 mL) su dodati i pH je prilagođen do ∼2 sa 3 M HCl (vodeni). Faze su razdvojene i vodena faza ekstrakovana sa L-MeTHF (50 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobio (S)-4-(2-((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzojeva kiselina (1,53 g, 100%) kao bleda čvrsta supstanca. LC/MS: m/z: 597,4 [M+H]<+>
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,33 (s, 9H), 2,21 (d, 4H), 2,38 - 2,49 (m, 2H), 2,73 (t, 2H), 2,83 - 3,43 (m, 6H), 6,84 - 7,26 (m, 8 sati), 7,78 - 7,98 (m, 3H), 12,80 (bs, 1H).
Korak 5
(S)-terc-Buiil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)fenetil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0319]
[0320] (S)-4-(2-((terc-Butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)etil)benzojeva kiselina (1,24 g, 1,77 mmol), 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum tetrafluoroborat (0,623 g, 1,94 mmol) i DIPEA (1,54 mL, 8,83 mmol) su rastvoreni u DCM (30 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta pre dodavanja (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonika (Međuproizvod C, 0,95 g, 2,12 mmol). Reakcija je mešana tokom 2,5 sata. Reakcija je oprana sa 8% NaHCO3 (vodeni) (150 mL). Vodena faza je ekstrakovana sa DCM (150 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 20 - 80% od EtOAc u heptanu preko 9 CV praćen sa 80% EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio (S)-terc-butil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)fenetil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (1,56 g, 93%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 945,6 [M+H]<+>
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,82 (t, 3H), 0,87 - 0,97 (m, 2H), 1 - 1,27 (m, 5H), 1,33 (s, 9H), 1,38 - 1,47 (m, 1H), 2,15 - 2,27 (m, 4H), 2,45 (dd, 1H), 2,69 (s, 2H), 2,81 - 2,89 (m, 1H), 2,9 - 3 (m, 1H), 3,01 - 3,41 (m, 11H), 4,15 - 4,27 (m, 2H), 4,48 (d, 1H), 6,96 (bs, 2H), 7,05 - 7,18 (m, 6H), 7,30 (t, 2H), 7,39 (t, 2H), 7,55 - 7,65 (m, 2H), 7,71 (dd, 2H), 7,8 - 7,97 (m, 3H), 8,37 - 8,51 (m, 1H).
Korak 6
(S)-terc-bulil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat
[0321]
[0322] (S)-terc-butil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)fenetil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (1,59 g, 1,68 mmol) je rastvoren u THF (15 mL) i piperidin (1,67 mL, 16,8 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata i zatim je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100 g koloni. Gradijent od 4 - 8% od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 5 CV praćen sa 8% od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 10 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)fenetil)karbamat (1,03 g, 85%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 723,6 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,84 (t, 3H), 1,19 - 1,44 (m, 17H), 2,15 - 2,29 (m, 4H), 2,45 (dd, 1H), 2,54 (t, 2H), 2,65 - 2,75 (m, 4H), 2,94 (dd, 1H), 3,02 - 3,18 (m, 2H), 3,18 - 3,3 (m, 3H), 3,3 - 3,4 (m, 4H), 6,97 (bs, 2H), 7,05 - 7,2 (m, 7H), 7,73 (d, 2H), 7,79 - 7,97 (m, 1H), 8,32 (t, 1H).
Međuproizvod E
(S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0323]
Korak 1
(S)-metil 4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzoat
[0324]
[0325] (R)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (Međuproizvod A, 2,17 g, 6,22 mmol), metil 4-formilbenzoat (1,12 g, 6,84 mmol) i DIPEA (1,09 mL, 6,22 mmol) su rastvoreni u MeOH (15 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Natrijum cijanoborohidrid (0,782 g, 12,4 mmol) i sirćetna kiselina (0,392 mL, 6,84 mmol) su zatim dodati i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Kada je posmatranje sa LCMS analizom pokazalo nedovršenu konverziju, metil 4-formilbenzoat (200 mg, 1,22 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno tokom 3 sata. Zatim su ponovo metil 4-formilbenzoat (200 mg, 1,22 mmol) i natrijum cijanoborohidrid (200 mg, 3,18 mmol) dodati i mešanje je nastavljeno tokom 18 sati. Reakcija je ugašena dodavanjem 8% NaHCO3 (vodeni). Rastvarač je koncentrisan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u EtOAc (250 mL) i 8% NaHCO3(vodeni) 250 mL), mućkan i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (250 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4 (s), filtrirane i isparene u vakuumu. Ostatak je rastvoren u DCM (50 mL), BOC2O (1,63 g, 7,46 mmol) je dodat i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Smeša je koncentrisana u vakuumu i zatim je pročišćena sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 20 - 80% od EtOAc u heptanu tokom 12 CV je korišćen kao mobilna faza. Proizvod je prikupljeni koristeći talasnu dužinu od 265 nm. Vrhovi proizvoda su ispareni u vakuumu kako bi se dobio (S)-metil 4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzoat (2,85 g, 77%) kao čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 597,5 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,36 (d, 9H), 2,21 (s, 3H), 2,24 - 2,38 (m, 1H), 2,45 - 2,57 (m, 2H), 2,95 - 3,3 (m, 4H), 3,83 (s, 3H), 4,33 - 4,51 (m, 2H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,17 (m, 4H), 7,22 (d, 2H), 7,76 - 7,96 (m, 3H).
Korak 2
(S)-4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzojeva kiselina
[0326]
[0327] (S)-metil 4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzoat (2,85 g, 4,77 mmol) je rastvoren MeOH (40 mL) i natrijum hidroksid, 3,8 M (6,28 mL, 23,9 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata i rastvarač (MeOH) je zatim koncentrisan u vakuumu. Voda (75 mL) i MeTHF (75 mL) su dodati i pH je prilagođen do ∼2 sa 3 M HCl (vodeni). Faze su razdvojene i vodena faza ekstrakovana sa MeTHF (75 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu kako bi se dobila (S)-4-(((tercbutoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzojeva kiselina (2,75 g, 99%) kao čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 583,4 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,32 - 1,42 (m, 9H), 2,20 (s, 3H), 2,24 - 2,38 (m, 1H), 2,5 - 2,55 (m, 2H), 2,92 - 3,36 (m, 4H), 4,27 - 4,54 (m, 2H), 6,97 (bs, 2H), 7,03 - 7,17 (m, 4H), 7,19 (d, 2H), 7,78 - 8 (m, 3H), 12,85 (bs, 1H).
Korak 3
(S)-terc-butil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)benzil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0328]
[0329] (S)-4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzojeva kiselina (1,61 g, 2,76 mmol), 2-(1H-benzo[d][1,2,3]triazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilizouronijum tetrafluoroborat (0,975 g, 3,04 mmol) i DIPEA (2,41 mL, 13,8 mmol) su rastvoreni u DCM (150 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta pre dodavanja (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonika (Međuproizvod C, 1,48 g, 3,31 mmol). Reakcija je mešana tokom 1,5 sata. Reakcija je oprana sa 8% NaHCO3 (vodeni) (100 mL). Vodena faza je ekstrakovana sa DCM (100 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 20 - 80% od EtOAc u heptanu tokom 12 CV praćen sa 80% EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio (S)-terc-butil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)benzil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (2,38 g, 93%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 931,5 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,82 (t, 3H), 0,86 - 0,96 (m, 1H), 0,99 - 1,27 (m, 6H), 1,27 - 1,48 (m, 10H), 2,19 (s, 3H), 2,23 - 2,35 (m, 1H), 2,45 - 2,54 (m, 2H), 2,8 - 2,9 (m, 1H), 2,9 -3,05 (m, 1H), 3,05 - 3,38 (m, 8 sati), 4,16 - 4,32 (m, 3H), 4,39 - 4,56 (m, 2H), 6,97 (bs, 2H), 7,02 - 7,18 (m, 6H), 7,30 (t, 2H), 7,39 (t, 2H), 7,60 (t, 2H), 7,64 - 7,76 (m, 2H), 7,78 - 7,99 (m, 3H), 8,37 - 8,52 (m, 1H).
Korak 4
(S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0330]
[0331] (S)-terc-butil 4-((2-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)(heksil)amino)etil)karbamoil)benzil(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (2,38 g, 2,55 mmol) je rastvoren u THF (25 mL) i piperidin (2,53 mL, 25,6 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 sati. Rastvarač je isparen u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100 g koloni. Gradijent od 2,5 - 8% od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 9 CV praćen sa 8% od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio (S)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (1,60 g, 88%) kao bleda čvrsta supstanca.
LC/MS: m/z: 709,5 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,84 (t, 3H), 1,17 - 1,31 (m, 6H), 1,31 - 1,45 (m, 11H), 2,20 (s, 3H), 2,24 - 2,37 (m, 1H), 2,51 - 2,57 (m, 3H), 2,68 (t, 2H), 2,91 - 3,06 (m, 1H), 3,06 -3,4 (m, 6H), 4,23 - 4,36 (m, 1H), 4,4 - 4,53 (m, 1H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,19 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,79 - 7,98 (m, 1H), 8,28 - 8,35 (m, 1H).
Međuproizvod F
9H-fluoren-9-il)metil (3-(4-formilpiperidin-1-il)-3-oksopropil)karbamat
[0332]
Korak 1:
(9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-(hidroksimetil)piperidin-1-il)-3-oksopropilkarbamat [0333]
[0334] Mešanom rastvoru piperidin-4-ilmetanola (200 mg, 1,74 mmol), 3-(((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonilamino)propionske kiseline (541 mg, 1,74 mmol) i HATU (660 mg, 1,74 mmol) u suvom DMF (5 mL) je dodat DIPEA (0,910 mL, 5,21 mmol). Žuta smeša je mešana na temperaturi okruženja preko noći. Reakciona smeša je rastvorena sa EtOAc (50 mL) i oprana sa 15% vodenim NaCl rastvorom (50 mL) i 30% vodenim NaCl rastvorom (50 mL). Rastvarači su ispareni i ostatak je pročišćen pripremnom HPLC. Nakon sušenja smrzavanjem ostatak je ponovo rastvoren u DCM i Heptan je dodat. Isparavanje dalo je jedinjenje iz naslova kao bezbojna čvrsta supstanca (378 mg, 53%).
LC/MS: m/z: 409 [M+H]<+>
1H NMR (500 MHz, DMSO) d 0,88 - 1,09 (m, 2H), 1,51 - 1,73 (m, 3H), 2,44 (t, 2H), 2,47 -2,52 (m, 1H DMSO vrh), 2,93 (t, 1H), 3,18 (dd, 2H), 3,23 (d, 2H), 3,80 (d, 1H), 4,20 (t, 1H), 4,29 (d, 2H), 4,37 (d, 1H), 7,21 (t, 1H), 7,33 (dt, 2H), 7,41 (t, 2H), 7,68 (d, 2H), 7,89 (d, 2H).
Korak 2
(9H-fluoren-9-il)metil (3-(4-formilpiperidin-1-il)-3-oksopropil)karbamat
[0335]
[0336] Rastvoru (9H-fluoren-9-il)metil 3-(4-(hidroksimetil)piperidin-1-il)-3-oksopropilkarbamata (362 mg, 0,89 mmol) u DCM (5 mL) je dodat čvrsti Des-Martinov perjodinan (413 mg, 0,97 mmol). Rezultujuća suspenzija je mešana na temperaturi okruženja tokom 2,5 sata. Reakcionoj smeši je dodat 10% Na2S2O3 (3 mL), 10% NaHCO3(3 mL) i DCM (2 mL), smeša je mešana žustro tokom 10 minuta i omogućeno joj je da se smiri.
Slojevi su razdvojeni i vodena faza koja sadrži nerastvorljive soli je ekstrakovana više puta sa DCM. Kombinovane organske faze su osušene preko MgSO4, filtrirane i rastvarači su ispareni kako bi ostao sirov proizvod (440 mg) koji je korišćen bez daljeg pročišćavanja. LC/MS: m/z: 407 [M+H]<+>
Međuproizvod G
(R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0337]
Korak 1
(R)-alil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0338]
[0339] (3,5-diamino-6-hloropirazin-2-il)(1H-imidazol-1-il)metanon, (858 mg, 3,59 mmol) i (R)-alil (3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (Međuproizvod A, Korak 5) (990 mg, 3,77 mmol) su suspendovani u NMP (15 mL) i zagrejani do 100°C tokom 4 sata. Reakcionoj smeši je omogućeno da se ohladi do sobne temperature. EtOAc (50 mL) i voda (50 mL) su dodati, mućkano je i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (2x50 mL). Kombinovane organske faze su oprane sa 0,1 M HCl (vodeni) (50 mL), vodom (2x50 mL), rasolom (50 mL), osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 20 - 80 % od EtOAc u heptanu preko 9 CV je korišćen kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 270 nm. Prikupljeni fragmenti su grupisani i isparena u vakuumu kako bi se dobio (R)-alil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (714 mg, 45,9 %) kao bleda čvrsta supstanca.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,9 - 2,02 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,41 - 2,55 (m, 2H), 2,91 -3,09 (m, 2H), 3,12 - 3,23 (m, 2H), 4,48 (d, 2H), 5,17 (d, 1H), 5,24 - 5,32 (m, 1H), 5,85 - 5,96 (m, 1H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,15 (m, 3H), 7,21 - 7,25 (m, 1H), 7,28 (t, 1H), 8,00 (t, 1H). LC/MS: m/z 433,3 [M+H]<+>
Korak 2
(S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid [0340]
[0341] (R)-alil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat (694 mg, 1,60 mmol), 1,3-dimetilpirimidin-2,4,6(1H,3H,5H)-trion (688 mg, 4,41 mmol), paladium (II) acetat (14,4 mg, 0,06 mmol) i trifenilfosfin (50,5 mg, 0,19 mmol) su rastvoreni u DCM (7 mL) i zagrejani do 35°C tokom 1,5 sata. Suspenzija je formirana. DCM (50 mL) i 5 % Na2CO3(vodeni) (50 ml) su dodati i smeša je mešana tokom 15 minuta. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrakovana sa DCM (50 mL).
Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu.
Jedinjenje je pročišćeno pripremnom HPLC na Kromasil C8 koloni (10 µm 250x50 ID mm) koristeći gradijent od 5 - 45 % acetonitrila u H2O/MeCN/AcOH 95/5/0,2 puferu tokom 20 minuta sa protokom od 100 mL/minut. Jedinjenja su detektovana sa UV na 270 nm.
Fragmenti proizvoda su prikupljeni i osušeni smrzavanjem kako bi se dobilo 586 mg soli sirćetne kiseline. So je mešana u EtOAc (50 mL) i 5 % Na2CO3(vodeni) tokom 15 minuta i faze su zatim razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (3x50 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobio (S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (411 mg, 73,5 %) kao svetlo žuta čvrsta supstanca. Hiralna čistoća: 60 % ee, određeno sa hiralnom SFC kolonom: ChiralPak IC (150x4,6 mm), 3µm veličina čestica, mobilna faza: 20 % MeOH/DEA 100:0,5 u CO2, 120 bar, stopa protoka 4 mL/minut.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,73 (bs, 2H), 2,01 - 2,12 (m, 1H), 2,50 (s, 3H), 2,64 - 2,73 (m, 2H), 2,76 - 2,86 (m, 2H), 3,4 - 3,53 (m, 2H), 7,19 (bs, 2H), 7,28 - 7,41 (m, 4H), 8,39 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349,2 [M+H]<+>
Korak 3
(R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamat
[0342]
[0343] (S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (1,19 g, 3,41 mmol), BOC2O (0,871 mL, 3,75 mmol) i DIPEA (0,596 mL, 3,41 mmol) su rastvoreni u DCM (100 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je oprana sa 0,1 M HCl (vodeni), osušena sa faznim razdvajačem i isparena u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 30 - 70 % od EtOAc u heptanu preko 9 CV praćen sa 70 % EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljeni koristeći talasnu dužinu od 268 nm. Proizvod je isparen u vakuumu kako bi se dobio (1,150 g, 75 %) kao bleda čvrsta supstanca.
[0344] Enantiomer je pročišćen koristeći hiralnu pripremnu HPLC (Kolona: ChiralPak AY (250x20 mm), 20µm veličina čestica, mobilna faza: heptan/EtOH/TEA 20/80:0,1, stopa protoka 120 m/min). Prvo eluirano jedinjenje je prikupljeno kako bi se dobilo 866 mg, Hiralna čistoća: 98,6 % ee. Optička rotacija
(acetonitril, c=1).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,38 (d, 9H), 1,88 - 2 (m, 1H), 2,23 (s, 3H), 2,39 - 2,49 (m, 2H), 2,83 - 2,93 (m, 1H), 2,93 - 3,03 (m, 1H), 3,09 - 3,23 (m, 2H), 6,89 (t, 1H), 6,97 (bs, 2H), 7,04 - 7,15 (m, 3H), 7,22 (d, 1H), 8,01 (t, 1H).
LC/MS: m/z 449,2 [M+H]<+>
Korak 4
(S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid [0345]
[0346] Acetil hlorid (1,422 mL, 20 mmol) je dodat kapanjem ledenom kadom ohlađenoj boci sa MeOH (5 mL, 123,59 mmol). Smeša je mešana tokom 5 minuta i zatim je dodata boci sa (R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)karbamatom (866 mg, 1,93 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta i zatim je isparena u vakuumu. Ostatak je mešan u EtOAc (125 mL) i 8 % NaHCO3(vodeni) (125 mL) tokom 15 minuta. Faze su razdvojene i vodena faza je ekstrakovana sa EtOAc (3x125 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa Na2SO4(s), filtrirane i isparene u vakuumu kako bi se dobio (S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (459 mg, 68,2 %) kao bleda čvrsta supstanca. Hiralna čistoća: 99 % ee, određeno sa hiralnim SFC kolona: Lux C4 (150x4,6 mm), 3µm veličina čestica, mobilna faza: 35 % EtOH/NH3100:0,5 u CO2, 120 bar, stopa protoka 4 mL/minut. Optička rotacija
(CHCl3, c=1).
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1,57 (bs, 2H), 1,78 - 1,88 (m, 1H), 2,26 (s, 3H), 2,39 - 2,48 (m, 2H), 2,52 - 2,62 (m, 2H), 3,18 - 3,28 (m, 2H), 6,95 (bs, 2H), 7,04 - 7,17 (m, 4H), 8,14 (t, 1H).
LC/MS: m/z 349,2 [M+H]<+>
Korak 5
(R)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzamido)etil)(heksil)karbamat [0347]
[0348] (S)-3,5-diamino-N-(3-amino-2-(2-metilbenzil)propil)-6-hloropirazin-2-karboksamid (215 mg, 0,62 mmol), (9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-formilbenzamido)etil)(heksil)karbamat (Međuproizvod H) (293 mg, 0,59 mmol) i DIPEA (0,103 mL, 0,59 mmol) su rastvoreni u MeOH (5 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. Natrijum cijanoborohidrid (38,8 mg, 0,62 mmol) i sirćetna kiselina (0,101 mL, 1,76 mmol) su zatim dodati i mešanje je nastavljeno tokom 3 sata. Reakcija je ugašena dodavanjem 8 % NaHCO3(vodeni). DCM (25 mL) i 8 % NaHCO3(vodeni) (25 mL) su dodati, mućkani i faze su razdvojene. Vodena faza je ekstrakovana sa DCM (25 mL). Kombinovane organske faze su osušene sa faznim razdvajačem i isparene u vakuumu.
[0349] Ostatak i BOC2O (0,150 mL, 0,65 mmol) su rastvoreni u DCM (5 mL) i mešani na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakciona smeša je koncentrisana u vakuumu. Proizvod je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 50g koloni.
Gradijent od 50 - 100 % od EtOAc u heptanu preko 9 CV je korišćen kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 265 nm. Fragmenti proizvoda su ispareni u vakuumu kako bi se dobio (R)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzamido)etil)(heksil)karbamat (511 mg, 93 %) kao bezbojni film.
<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,82 (t, 3H), 0,87 - 0,96 (m, 1H), 0,99 - 1,26 (m, 6H), 1,27 - 1,5 (m, 10H), 2,19 (s, 3H), 2,23 - 2,35 (m, 1H), 2,8 - 2,9 (m, 1H), 2,9 - 3,04 (m, 1H), 3,05 -3,39 (m, 10H), 4,16 - 4,32 (m, 3H), 4,39 - 4,57 (m, 2H), 6,88 - 7,18 (m, 8 sati), 7,30 (t, 2H), 7,39 (t, 2H), 7,55 - 7,76 (m, 4H), 7,77 - 7,99 (m, 3H), 8,37 - 8,52 (m, 1H).
LC/MS: m/z 931,4 [M+H]<+>
Korak 6
(R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat
[0350]
[0351] (R)-(9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-(((terc-butoksikarbonil)(3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)amino)metil)benzamido)etil) (heksil)karbamat (511 mg, 0,55 mmol) je rastvoreno u THF (5 mL) i piperidin (0,543 mL, 5,49 mmol) dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Rastvarač je isparen u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 50 g koloni. Gradijent od 2,5 - 8 % od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 9 CV praćen sa 8 % od (2 M amonijak u MeOH) u DCM preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen i isparen u vakuumu kako bi se dobio (R)-terc-butil (3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propil)(4-((2-(heksilamino)etil)karbamoil)benzil)karbamat (326 mg, 84 %) kao bleda čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 0,84 (t, 3H), 1,12 - 1,45 (m, 17H), 2,20 (s, 3H), 2,24 - 2,36 (m, 1H), 2,51 - 2,58 (m, 2H), 2,69 (t, 2H), 2,92 - 3,05 (m, 1H), 3,05 - 3,4 (m, 7H), 4,22 - 4,37 (m, 1H), 4,38 - 4,54 (m, 1H), 6,97 (bs, 2H), 7,03 - 7,18 (m, 6H), 7,72 (d, 2H), 7,79 - 7,98 (m, 1H), 8,28 - 8,35 (m, 1H).
LC/MS: m/z 709,4 [M+H]<+>
Međuproizvod H
(9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-formilbenzamido)etil)(heksil)karbamat
[0352]
[0353] 4-formilbenzojeva kiselina (0,81 g, 5,40 mmol) i 4-metilmorfolin (1,424 mL, 12,95 mmol) su rastvoreni u THF (10 mL) i ohlađeni sa ledenom kadom. Izobutil karbonohloridat (0,700 mL, 5,40 mmol) je dodat kapanjem, smeša je mešana tokom 30 minuta i (9H-fluoren-9-il)metil (2-aminoetil)(heksil)karbamat ugljovodonik (Međuproizvod C) (1,739 g, 4,32 mmol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2,5 sata. Rezultujuća suspenzija je ekstrakovana između EtOAc (50 mL) i voda (50 mL). Organska faza je oprana sa 5 % limunske kiseline (2x50 mL), 10 % Na2CO3(vodeni) (50 mL), rasolom (50 mL), osušena sa Na2SO4(s), filtrirana i isparena u vakuumu. Ostatak je pročišćen sa automatizovanom fleš hromatografijom na Biotage® KP-SIL 100g koloni. Gradijent od 20 -80 % od EtOAc u heptanu preko 9 CV praćen sa 80 % EtOAc u heptanu preko 3 CV su korišćeni kao mobilna faza. Proizvod je prikupljen koristeći talasnu dužinu od 260 nm.
Vrhovi proizvoda su ispareni u vakuumu kako bi se dobio (9H-fluoren-9-il)metil (2-(4-formilbenzamido)etil)(heksil)karbamat (1,690 g, 79 %) kao bela čvrsta supstanca
<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 0,82 - 0,95 (m, 3H), 1,08 - 1,46 (m, 8 sati), 3,02 - 3,21 (m, 3H), 3,48 - 3,64 (m, 3H), 4,16 - 4,25 (m, 1H), 4,51 - 4,74 (m, 2H), 7,2 - 7,42 (m, 5H), 7,5 -7,67 (m, 3H), 7,75 (d, 2H), 7,93 (q, 3H), 10,06 (s, 1H).
LC/MS: m/z 499,5 [M+H]<+>
Međuproizvod I
4-formil-N-(2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)benzamid [0354]
Korak 1
terc-butil 2-(heksilamino)etilkarbamat
[0355]
[0356] 10 L okrugla boca je napunjena sa heksilaminom (1020 mL, 7,76 mol), Na2CO3(206 g, 1,94 mol) i MeCN (2560 mL). Smeša je zagrejana do 70°C tokom 1 sata. Smeša je napunjena sa rastvorom terc-butil 2-bromoetilkarbamata (371,3 g, 289,6 g aktivno, 1,29 mol) u MeCN (740 ml) polako, tokom 1 1⁄2 sata. Reakcija je mešana na 70°C preko noći. Reakcija je ohlađena do 50°C i koncentrisana u vakuumu. Mešani ostatak je napunjena sa vodom (2100 mL) i EtOAc (4200 ml). Slojevi su razdvojene i organske faze su oprane sa vodom (3 x 2100 ml). Organske faze su koncentrisane u vakuumu i azeotropovane posle toga sa vodom (3 x 870 ml) i EtOH (3 x 870 ml) kako bi se dobilo 368,6 g (315,8 g aktivno, kvantitativni prinos) faze 1 kao bistro ulje.
1H-NMR (270 MHz, CDCl3,) δ 4,95 (1H, br s), 3,29 - 3,19 (m, 2H), 2,71 (t, 2H), 2,58 (t, 2H), 1,50 - 1,40 (br. m, 11H), 1,35 - 1,23 (m, 6H), 0,89 (t, 3H).
LC/MS: m/z 245 [M+H]<+>
Korak 2
terc-butil 2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etilkarbamat [0357]
[0358] 10 L okrugla boca je napunjena sa D-ksilozom (124,3 g, 0,83 mol), terc-butil 2-(heksilamino)etilkarbamatom (korak 1, 181,8 g, 155,8 g aktivno, 0,49 mol), EtOH (5000 ml) i DIPEA (110,8 ml, 0,64 mol). Smeša je zagrejana do 35°C tokom 1 sata, dok nije rastvorena. Rastvor je napunjen sa AcOH (36,5 mL, 0,64 mol) i rezultujuća smeša je mešana na 35°C tokom 15 minuta. Ovo je napunjeno sa NaCNBH3(56,1 g, 0,89 mol), kapanjem tokom 5 minuta na 35°C. Nije primećen razvoj egzoterma ili gasa. Reakcija je mešana na 35°C preko noći. Ovo je napunjeno sa NaCNBH3(8,0 g, 0,13 mol) i mešano na 35°C tokom 3 sata.
Reakciji je omogućeno da se ohladi do sobne temperature preko noći. Smeša je napunjena zasićenim vodenim NaHCO3(1600 mL) tokom 10 minuta, blago egzotermna reakcija je primećena. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom vikenda. EtOH je uklonjen u vakuumu i kombinovan sa drugom serijom iste razmere (181,8 g faza 1). Smeša je napunjena sa NaCl (311 g). Organske faze su ekstrakovane sa 10% MeOH/DCM (3 x 3000 ml) i kombinovane organske faze su koncentrisane u vakuumu. Rezultujući ostatak je pročišćen sa hromatografijom (SiO2, 7 kg), upakovan, opterećen i eluiran sa 5% MeOH/DCM 0,2% 7 N NH3u MeOH (35 L), 50% MeOH/DCM 0,2% 7 N NH3u MeOH (75 L), zatim ispran 65% MeOH/DCM 0,2% 7 N NH3u MeOH (20 L). Fragmenti koji sadrže proizvod su kombinovani, ispareni u vakuumu i azeotropovani sa MeOH (2 x 500 mL) kako bi se dobilo 387 g (366 g aktivno, 76%) subjedinjenja iz naslova kao žuta guma.
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6) δ 6,80 (br.s, 1H), 4,80 - 4,30 (br. m, 3H), 4,22 - 4,05 (br. m, 1H), 3,74 - 3,60 (br. m, 1H), 3,59 - 3,48 (m, 1H), 3,47 - 3,20 (m, 6H), 3,08 - 2,87 (br. m, 2H), 2,70 - 2,45 (br. m, 3H), 1,51 - 1,35 (m, 10H), 1,32 - 1,16 (m, 7H), 0,85 (t, 3H).
LC/MS: m/z 401 [M+H]<+>
Korak 3
(2R,3R,4S)-5-((2-aminoetil)(heksil)amino)pentan-1,2,3,4-tetraol
[0359]
[0360] Rastvor terc-butil 2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etilkarbamata (korak 2, 365 g, 345 g aktivno, 0,91 mol) u MeOH (520 ml) na sobnoj temperaturi je napunjen sa 4 M HCl u dioksanu (1710 ml, 6,84 mol) tokom 30 minuta, održavajući temperaturu < 31°C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata. Reakciona smeša je koncentrisana u vakuumu kako bi se dobilo 485,1 g (306 g aktivno, 95%) subjedinjenja iz naslova kao ljubičasto crn katran.
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6) δ 8,41 (br. S, 3H), 4,20 - 3,00 (br. m, 16H), 1,77 - 1,62 (br. m, 2H), 1,37 - 1,17 (br. m, 6H), 0,87 (br. T, 3H).
MS ES: m/z 279 [M+H]<+>
Korak 4
4-formil-N-(2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipenlil)amino)etil)benzamid [0361]
[0362] 5 L okrugla boca je napunjena sa 4-formilbenzojevom kiselinom (107,6 g, 0,72 mol) i DMF (1400 ml) na sobnoj temperaturi. Ovo je napunjeno sa 4-metilmorfolinom (255,5 ml, 2,3 mol). Smeša je ohlađena do -15°C tokom 5 minuta. Ovo je napunjeno sa izobutil hloroformatom (93,4 ml, 0,71 mol) tokom 15 minuta, održavajući temperaturu reakcije < -10°C. Reakcija je mešana na -10°C do -15°C tokom 1 sata. U drugoj boci, (2R,3R,4S)-5-((2aminoetil)(heksil)amino)pentan-1,2,3,4-tetraol (korak 3, 383,9 g, 245,7 g aktivno, 0,71 mol) je rastvoren u DMF (1400 ml) i 4-metilmorfolinu (123 ml, 1,1 mol) na 45°C tokom 1 sata. Mešana anhidridna smeša je napunjena sa korakom 3 koji sadrži smešu tokom 15 minuta, održavajući temperaturu reakcije < -5°C. Rezultujućoj smeši je omogućeno da se zagreje do sobne temperature preko noći. Reakciona smeši je napunjena sa zasićenim vodenim NaHCO3(2500 ml) polako, tokom 30 minuta. Rezultujuća smeša je koncentrisana u vakuumu. Ostatak je napunjen sa zasićenim vodenim NaHCO3(1200 ml) i mešan sa DCM (4900 ml) tokom 10 minuta na sobnoj temperaturi. Slojevi su razdvojeni i vodeni je ekstrakovan sa 13% MeOH/DCM (2870 ml). Kombinovane organske faze su oprana sa zasićenim vodenim NaHCO3(1200 ml) i koncentrisane u vakuumu kako bi se dobilo 395,3 g. Ostatak je kombinovan sa 10 g sirovog materijala dobijenog od međuproizvod reakcije i pročišćen sa hromatografijom [SiO2, 3 kg; opterećen i pakovan sa 5% MeOH/DCM; eluiran sa 5% MeOH/DCM (30 L), 10% MeOH/DCM (20 L), 20% MeOH/DCM (10 L), 30% MeOH/DCM (30 L), 40% MeOH/DCM (20 L) i 100% MeOH (80 L)]. Fragmenti proizvoda su kombinovani (100 L) i koncentrisani u vakuumu kako bi se dobilo 138,4 g (112 g aktivno, 39% prinos) subjedinjenja iz naslova.<1>H NMR ukazuje 81,4 w/w% aktivnost sa otprilike 5,5% preostale formilbenzamid nečistoće. HPLC-MS analiza je ukazala na 97,4% čistoću. Mešani fragmenti (20 L) su kombinovani i koncentrisani u vakuumu kako bi se dobilo 46 g materijala sa čistoćom od 74,5% sa HPLC. Ovo je ponovo pročišćeno sa hromatografijom (SiO2, 600 g), elutirano sa 10%-30% MeOH/DCM (18 L). Fragmenti proizvoda su kombinovani i koncentrisani u vakuumu kako bi se dobilo dodatnih 21,0 g (20,3 g aktivno, 44%) subjedinjenja iz naslova.
1H-NMR (270 MHz, DMSO-d6): δ 10,08 (s, 1H), 8,60 (t, 1H), 8,02 (d, 2H), 7,97 (d, 2H), 4,70 - 4,20 (br. m, 4H), 3,66 - 3,52 (m, 2H), 3,46 - 3,34 (m, 8 sati), 2,65 - 2,58 (m, 2H), 2,51 -2,44 (m, 2H), 1,40 - 1,28 (br. m, 2H), 1,19 - 1,08 (m, 6H), 0,79 (t, 3H).
LC/MS: m/z 411 [M+H]<+>
Enzimska desimetrizacija 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diamina.
[0363] Ispitivana je enzimska desimetrizacija 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diamina koristeći dialilkarbonat i niz imobilisanih lipaza.
[0364] Ispitivanje sa imobilisanom lipazom: U rastvor 2-(2-metilbenzil)propan-1,3-diamina (0,60 g, 3,37 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) dodat je dialilkarbonat (0,507 mL, 3,53 mmol).
1,0 mL alikvota ovog rastvora dodato je u 10 ml epruvete sa čepom sa zavrtnjem koje sadrže enzime (0,02 g) opisane u Tabeli 1. Cevi su mućkane na 500 rpm/30°C tokom 3 dana. Svaka epruveta je uzorkovana i analizirana pomoću reverzne faze HPLC (4,6 k 50 mm Thermoquest Hypercarb, UV detekcija na 260 nm) i hiralne HPLC (4,6 k 250 mm Chiralpak IC3, UV detekcija na 260 nm).
[0365] Šest ispitanih lipaza pokazalo je više od 20% konverzije posle 3 dana (Tabela 1).
Tabela 1.
[0366] Ispitivanje rastvarača sa Amano Lipase PS-IM: Ispitivanje rastvarača sa Amano Lipase PS-IM izvedeno je u 20 relativnih zapremina rastvarača sa 1,1 ekvivalenta dialilkarbonata, 1 masenim ekvivalentom Amano PS-IM i 0,1 g 2-(2-methilbenzil)propan-1,3-diamina. Posle 6 dana na 30°C eksperimenti su uzorkovani koristeći iste postupke kao što je opisano za ispitivanje lipaze (Tabela 2).2-(2-Methilbenzil)propan-1,3-diamin nije bio veoma rastvorljiv u nepolarnim rastvaračima, kao što je metil t-butil eter, heptan i cikloheksan. Dodavanje THF svakom od rastvarača, međutim, omogućilo je da se diamin rastvara i testirane su smeše rastvarača od 1:1. Rezultati sugerišu da je 2-MeTHF dao najbolju enantioselektivnost, uprkos nekoj pozadinskoj reakciji. Kako bi se smanjila pozadinska karboksilacija u 2-MeTHF, eksperiment gramske skale je izveden na 30°C sa viškom Amano lipaze PS-IM (3 masena ekvivalenta imobilisane lipaze, 1,2 ekvivalenta dialilkarbonata, 20 vol.2-MeTHF). Reakcija je završena u roku od 3 dana i posle obrade, sirov (R)-monoalilkarbamat 1-(R) je izolovan sa 85% ee. Pretvaranje sirovog proizvoda u odgovarajuću D-tartarat so u etanolu povećalo je enantiomerni višak na 91,0% (58% ukupnog prinosa od diamina).
Tabela 2
Natrijumski kanal ENaC koristeći test sa komorom
[0367] Ljudske primarne bronhijalne epitelne ćelije koje su diferencirane na interfejsu vazduha i tečnosti (ALI) na snapvel propustljivim nosačima (MatTek Corporation, MA, USA, cat no AIR-100-SNP) su održavane u ALI kulturi u vlažnom inkubatoru na 37°C i 5% CO2. Basolateralni medijum (MatTek Corporation, MA, USA cat no AIR-100-MM-ASI) je promenjen svakog drugog dana. Sluz ili tečnost formirana na apikalnoj strani, nežno se aspirira svakog drugog dana kako bi se očuvale održivost i performanse ćelija.
[0368] Transepitalni napon između luminalne/apikalne i basolateralne membrane izmeren je u komori usisavanja sastavljenoj od vertikalnih, lokalno proizvedenih usisnih komora, DVC-1000 V/C stegi sa preamplifikatorima ( World Precision Instruments), kompletima elektroda (EK1, World Precision Instruments), Power Lab sa Chart5 softverom, vodena kada sa spoljnom cirkulacijom i sistem distribucije i regulacije gasa karbogena. Elektrode koje su korišćene u setovima su bile ručno napravljene korišćenjem 4% agaroze u 0,9% sterilnom NaCI prema preporuci proizvođača.
[0369] Komore za usisavanje su bile sastavljene sa praznom snapvel membranom (Costar 3407) i elektrode su zadržane u Krebovom puferu (SIGMA-ALDRICH cat no K3753) tokom jednog sata na 37°C u prisustvu 95% kiseonika i 5% ugljen-dioksida. Nakon ovog stepena ravnoteže sistem je kompenzovan za rezistenciju tečnosti i ulazni pomak.
[0370] Pre eksperimenta ALI kulture su procenjene za trans epitelijalnu električnu otpornost (TEER) sa EndOhm uređajem (World Precision Instruments), korišćene su ćelije koje pokazuju otpor između 400-600 Oma.
[0371] Uravnotežen komore ponovo su sklopljene snapvelom koji sadrži ALI ćelije, a nakon 20 minuta stabilne kumulativne doze jedinjenja se dodaju apikalnoj strani membrane. Posle finalne doze dodato je 10 μM benzamila kako bi se dostigao maksimum.
[0372] Sva test jedinjenja, uključujući referentno jedinjenje, razblažena su iz 10mM zaliha u 100% DMSO i dodata u neprozirne ploče sa 96 komorica (Greiner, Kat. Broj 651201). Serije razblaživanja od 12 doza su pripremljene u DMSO, počevši od 3μM, nakon čega sledi 10 koraka razblaživanja.
[0373] Chart5 za Windows softver je korišćen za merenje vrednosti struje kratkog spoja nakon svakog dodavanja jedinjenja. Podaci su preneti u Excel i analizirani pomoću IDBS XL-afit® 5,2 (ID Business Solutions Ltd). Molarna koncentracija test ili referentnog jedinjenja koja proizvodi 50% inhibiciju (kriva IC50) izvedena je pomoću podataka za fiksiranje na 4-parametarsku logističku funkciju oblika:
y = (A+((B-A)/(1+((10^C/x)^D))))
A Donji plato krive, tj. konačna minimalna y vrednost
B Gornji plato krive, tj. konačna maksimalna y vrednost
C log10x vrednost pri y vrednosti od 50%
D Hil faktor nagiba
x poznate x vrednosti
Tabela 1 pokazuje pIC50vrednosti za Primere 1 to 14.
Tabela 1
Procenjena mukozna permeacija creva korišćenjem Mono sloja Caco-2 ćelija [0374] Caco-2 ćelije se gaje u Dulbeko modifikovanom Iglovom medijumu (DMEM) na 96-komoričnim transvel polikarbonat umetcima membrana tokom 15 dana, dok se ne postignu konfluencija i diferencijacija. Nakon procene integriteta merenjem električne otpornosti duž monosloja, ćelije se dva puta ispiraju sa HBSS (25 mM HEPES, pH 7,4) i inkubiraju na 37°C tokom 30 minuta.
[0375] Osnovni rastvori test jedinjenja u DMSO su razblažena sa HBSS (koji sadrži 100 μM Lucifer Žute) kako bi se postigla konačna koncentracija od 10 μM; sve inkubacije se izvode u duplikatu. kako bi se utvrdila brzina transporta leka u apikalnom bazolateralnom pravcu (A do B) 100 μL rastvora test jedinjenja se dodaje u apikalni odeljak u umetku od Transvel. Bazolateralni odeljak se napuni sa 300 μL HBSS.
[0376] Za određivanje bazolaterala za apikalni transport (B do A), bazolateralni odeljak se puni sa 300 μL rastvora test jedinjenja i dodaje se 100 μL HBSS u apikalni odeljak.
[0377] Posle inkubacije ploče na 37°C u trajanju od 2 sata 50 μL iz svakog odeljka uklanja se i prenosi na 96 komorne ploče za merenje fluorescencije u odgovarajućem čitaču ploča pri 485 nm eksitaciji i 530 nm emisije praćenja integriteta monosloja. Za analizu propustljivosti test jedinjenja, 3 zapremine hladnog metanola dodaju se u svaki uzorak pufera i uzorci se centrifugiraju na 4 C tokom 15 minuta. Alikvot od 5 μL supernatanta se koristi za LC/MS/MS analizu.
[0378] Očigledna propustljivost (Papp, u jedinicama cm/s) može se izračunati pomoću sledeće jednačine
gde je VAzapremina (u mL) u komorici primaocu (0,3 mL za apijal za bazolater), površina je površina membrane (0,143 cm2 za HTS Transwell-96 Well Permeable Supports), a+i vreme je ukupno vreme transporta u s.
[0379] Očigledna propustljivost u apikalnom do bazolateralnom pravcu (medijana A do B Papp, 1E-6.cm/s) je merena za svaki od Primera 1 do 16. Nisu se mogle detektovati vidljive propustljivosti za bilo koji od primera u apikalnom-do-basolateralnom pravcu. Jedinjenja koja pokazuju nisku propustljivost mogu biti poželjnija za isporuku ENaC inhibitora putem inhalacije.

Claims (15)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):
    gde: R<1>je izabran od vodonika ili C1-4alkil; m je 1 ili 2; A je izabran od fenila ili heterociklila; X je izabran od -C(=O)-, -C(=O)-NR<4>- ili -O-C(=O)-NR<5>-; n je 2 ili 3; R<2>je izabran od vodonika ili C1-8alkil; R<3>je C5-6alkil-OH, gde je navedena C5-6alkil grupa dalje supstituisana sa dodatne 3 ili 4 -OH grupe; i R<4>i R<5>su nezavisno izabrani od vodonika ili C1-4alkila; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde R<1>je C1-4alkil i R<4>i R<5>su oba vodonik.
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, ili njegova farmaceutski prihvatljive soli, gde je A fenil.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, ili njegova farmaceutski prihvatljive soli, gde X je -C(=O)-NR<4>-.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde: R<1>je C1-4alkil; m je 1; A je fenil; X je -C(=O)-NH-; n je 2; R<2>je C1-8alkil; i R<3>je izabran od sledećeg:
    ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, ili njegova farmaceutski prihvatljive soli, gde je R<2>n-heksil.
  7. 7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 izabrano od: 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-(((1-(3-(((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metil)amino)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(4-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)butanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-2-(2-metilbenzil)-3-((1-(3-((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksilamino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((1-(3-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)propanoil)piperidin-4-il)metilamino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2R,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 4-(((R)-3-(3,5-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamido)-2-(2-metilbenzil)propilamino)metil)fenil 2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etilkarbamat; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroksiheksil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)fenetil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamida; ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je: 3,5-diamino-6-hloro-N-((R)-3-((4-((2-(heksil((2S,3R,4R)-2,3,4,5-tetrahidroksipentil)amino)etil)karbamoil)benzil)amino)-2-(2-metilbenzil)propil)pirazin-2-karboksamid, i koje ima formulu (Ia):
    , ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  9. 9. Farmaceutski sastav koji obuhvata jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, i farmaceutski prihvatljiv adjuvant, rastvarač ili nosač.
  10. 10. Jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, za primenu u terapiji.
  11. 11. Jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, za tretman bolesnog stanja posredovanog sa ENaC.
  12. 12. Jedinjenje formule (I), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, pri proizvodnji medikamenta za primenu u tretmanu bolesnog stanja posredovanog sa ENaC.
  13. 13. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 11 ili 12, gde bolesno stanje posredovano sa EnaC uključuje hroničnu opstruktivnu plućnu bolest (COPD), cističnu fibrozu, astmu, hronični bronhitis i bronhiektazu.
  14. 14. Jedinjenje, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema patentnom zahtevu 11 ili 12, gde je bolesno stanje posredovano sa EnaC hronična opstruktivna plućna bolest (COPD) ili cistična fibroza.
  15. 15. Kombinacija koja obuhvata jedinjenje formule (I), ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao što je zahtevano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, i jedan ili više agens izabran na spiska koji čine: • agonist beta-adrenoceptora; • antagonist muskarinskog receptora; • zajednički antagonist muskarinskog receptora i agonist beta-adrenoceptora; • agonist receptora nalik toll-u (kao što su TLR7 ili TLR9 agonist) • antagonist adenozina; • agonist glukokortikoidnog receptora (steroidni ili nesteroidni); • p38 antagonist; • IKK2 antagonist; • PDE4 antagonist; • modulator funkcije receptora hemokina (kao što je antagonist CCR1, CCR2B, CCR5, CXCR2 ili CXCR3 receptora); • CRTh2 antagonist; ili • osmolita, kao što je hipertonični slani rastvor. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20180833A 2014-03-18 2015-03-17 Jedinjenja 3,4-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamida za tretman bolesti posredovanih sa enac RS57487B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461954674P 2014-03-18 2014-03-18
PCT/GB2015/050765 WO2015140527A1 (en) 2014-03-18 2015-03-17 Chemical compounds
EP15713339.8A EP3119752B1 (en) 2014-03-18 2015-03-17 3,4-diamino-6-chloropyrazine-2-carboxamide compounds for the treatment of enac mediated diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS57487B1 true RS57487B1 (sr) 2018-10-31

Family

ID=52780553

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180833A RS57487B1 (sr) 2014-03-18 2015-03-17 Jedinjenja 3,4-diamino-6-hloropirazin-2-karboksamida za tretman bolesti posredovanih sa enac

Country Status (39)

Country Link
US (3) US9873678B2 (sr)
EP (1) EP3119752B1 (sr)
JP (1) JP6502469B2 (sr)
KR (1) KR102296041B1 (sr)
CN (1) CN106103423B (sr)
AP (1) AP2016009447A0 (sr)
AR (1) AR099790A1 (sr)
AU (1) AU2015233195B2 (sr)
CA (1) CA2941807C (sr)
CL (1) CL2016002303A1 (sr)
CR (1) CR20160479A (sr)
CY (1) CY1120509T1 (sr)
DK (1) DK3119752T3 (sr)
DO (1) DOP2016000232A (sr)
EA (1) EA029952B1 (sr)
ES (1) ES2679618T3 (sr)
GT (1) GT201600190A (sr)
HR (1) HRP20181123T1 (sr)
HU (1) HUE039425T2 (sr)
IL (1) IL247610B (sr)
LT (1) LT3119752T (sr)
ME (1) ME03056B (sr)
MX (1) MX368577B (sr)
NI (1) NI201600134A (sr)
NZ (1) NZ724063A (sr)
PE (1) PE20170205A1 (sr)
PH (1) PH12016501808B1 (sr)
PL (1) PL3119752T3 (sr)
PT (1) PT3119752T (sr)
RS (1) RS57487B1 (sr)
SG (1) SG11201607751SA (sr)
SI (1) SI3119752T1 (sr)
SM (1) SMT201800378T1 (sr)
SV (1) SV2016005278A (sr)
TR (1) TR201810207T4 (sr)
TW (1) TWI687410B (sr)
UY (1) UY36034A (sr)
WO (1) WO2015140527A1 (sr)
ZA (1) ZA201607136B (sr)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7608847B2 (ja) * 2021-01-27 2025-01-07 三菱瓦斯化学株式会社 エポキシ樹脂硬化剤、エポキシ樹脂組成物、及び塗料
GB202406247D0 (en) 2024-05-03 2024-06-19 Enterprise Therapeutics Ltd Compounds and pharmaceutical compositions

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3577418A (en) 1969-02-12 1971-05-04 Merck & Co Inc Pyrazinamide derivatives and processes for their preparation
US3573306A (en) 1969-03-05 1971-03-30 Merck & Co Inc Process for preparation of n-substituted 3,5-diamino-6-halopyrazinamides
IE52345B1 (en) 1981-02-02 1987-09-16 Ici Plc Alkanolamine derivatives
US4550111A (en) 1982-01-29 1985-10-29 Imperial Chemical Industries Plc Alkanolamine derivatives
GB8810933D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Heterocyclic compounds
GB8810934D0 (en) 1987-05-26 1988-06-15 Ici America Inc Amides
US4803206A (en) 1988-03-07 1989-02-07 Schering Corporation Antihypertensive acylpyrazines
GB8812342D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Bicyclic compounds
GB8812343D0 (en) 1988-05-25 1988-06-29 Ici America Inc Amino compounds
WO1998038167A1 (en) 1997-02-26 1998-09-03 Pfizer Inc. Heteroaryl-hexanoic acid amide derivatives, their preparation and their use as selective inhibitors of mip-1-alpha binding to its ccr1 receptor
GB9930557D0 (en) 1999-12-23 2000-02-16 Rolic Ag Optically active materials
BR0111158A (pt) 2000-05-12 2004-04-06 Genzyme Corp Composto e sais fisiológicos do mesmo, método para tratar uma condição mediana por tnf-a em um paciente
EP1453789A2 (en) 2001-11-08 2004-09-08 Elan Pharmaceuticals, Inc. N,n'-substituted-1,3-diamino-2-hydroxypropane derivatives
US6858615B2 (en) 2002-02-19 2005-02-22 Parion Sciences, Inc. Phenyl guanidine sodium channel blockers
US7154002B1 (en) 2002-10-08 2006-12-26 Takeda San Diego, Inc. Histone deacetylase inhibitors
US20040087571A1 (en) 2002-10-30 2004-05-06 Pfizer Inc Methods of using CCR1 antagonists as immunomodulatory agents
MXPA05006679A (es) 2002-12-20 2005-08-16 Pfizer Prod Inc Inhibidores de la proteina de transferencia de trigliceridos microsomales.
US6903105B2 (en) 2003-02-19 2005-06-07 Parion Sciences, Inc. Sodium channel blockers
EP1812378A2 (en) 2004-10-13 2007-08-01 University of Connecticut Cannabinergic lipid ligands
GB0511065D0 (en) 2005-05-31 2005-07-06 Novartis Ag Organic compounds
GB0526244D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
GB0526240D0 (en) 2005-12-22 2006-02-01 Novartis Ag Organic compounds
AU2008221263B2 (en) 2007-03-01 2012-02-23 Novartis Ag Pim kinase inhibitors and methods of their use
DE602008005140D1 (de) 2007-05-07 2011-04-07 Novartis Ag Organische verbindungen
AR069637A1 (es) 2007-12-10 2010-02-10 Novartis Ag Derivados de pirazinas
WO2009086303A2 (en) 2007-12-21 2009-07-09 University Of Rochester Method for altering the lifespan of eukaryotic organisms
CA2723938A1 (en) 2008-05-13 2009-11-19 Novartis Ag 3,5-diamino-6-chloro-pyrazine-2-carboxylic acid derivatives and their use as epithelial sodium channel blockers for the treatment of airway diseases
US9315449B2 (en) 2008-05-15 2016-04-19 Duke University Substituted pyrazoles as heat shock transcription factor activators
WO2009150137A2 (en) * 2008-06-10 2009-12-17 Novartis Ag Organic compounds
WO2011028740A1 (en) * 2009-09-03 2011-03-10 Glaxo Group Limited ENaC BLOCKERS
WO2011079087A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Glaxo Group Limited Enac blockers
US8372845B2 (en) 2010-09-17 2013-02-12 Novartis Ag Pyrazine derivatives as enac blockers
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
US9505735B2 (en) 2012-06-21 2016-11-29 Whitehead Institute For Biomedical Research Compounds for treating infectious diseases
HUE032891T2 (hu) 2012-12-17 2017-11-28 Parion Sciences Inc Klórpirazin-karboxamid-származékok nem kielégítõ nyálkahártya-hidratáció által elõsegített megbetegedések kezelésére
EP2931712B8 (en) 2012-12-17 2018-05-23 Parion Sciences, Inc. 3,5-diamino-6-chloro-n-(n-(4-phenylbutyl)carbamimidoyl) pyrazine-2- carboxamide compounds
ES2674665T3 (es) 2012-12-17 2018-07-03 Parion Sciences, Inc. Compuestos de 3,5-diamino-6-cloro-N-(N-(4-fenilbutilo)carbamimidoilo)-pirazina-2-carboxamida

Also Published As

Publication number Publication date
SMT201800378T1 (it) 2018-09-13
ZA201607136B (en) 2018-04-25
CA2941807C (en) 2023-03-07
UY36034A (es) 2015-09-30
KR20160127135A (ko) 2016-11-02
WO2015140527A1 (en) 2015-09-24
ES2679618T3 (es) 2018-08-29
CN106103423A (zh) 2016-11-09
HUE039425T2 (hu) 2018-12-28
CR20160479A (es) 2017-02-24
PT3119752T (pt) 2018-07-24
AP2016009447A0 (en) 2016-09-30
EP3119752A1 (en) 2017-01-25
NI201600134A (es) 2017-03-13
EA029952B1 (ru) 2018-06-29
MX2016011681A (es) 2016-10-28
PE20170205A1 (es) 2017-04-06
ME03056B (me) 2018-10-20
AU2015233195B2 (en) 2017-04-20
DOP2016000232A (es) 2016-10-16
US9873678B2 (en) 2018-01-23
US20180162838A1 (en) 2018-06-14
TR201810207T4 (tr) 2018-08-27
IL247610A0 (en) 2016-11-30
TWI687410B (zh) 2020-03-11
US10336725B2 (en) 2019-07-02
MX368577B (es) 2019-10-08
AR099790A1 (es) 2016-08-17
SV2016005278A (es) 2016-11-30
JP6502469B2 (ja) 2019-04-17
CN106103423B (zh) 2019-12-06
JP2017512830A (ja) 2017-05-25
CY1120509T1 (el) 2019-07-10
LT3119752T (lt) 2018-08-10
HRP20181123T1 (hr) 2018-09-21
US20190330187A1 (en) 2019-10-31
NZ724063A (en) 2018-02-23
GT201600190A (es) 2019-07-29
AU2015233195A1 (en) 2016-09-22
US10954211B2 (en) 2021-03-23
PL3119752T3 (pl) 2018-09-28
TW201620880A (zh) 2016-06-16
EA201691641A1 (ru) 2017-02-28
DK3119752T3 (en) 2018-07-30
CL2016002303A1 (es) 2017-01-13
CA2941807A1 (en) 2015-09-24
PH12016501808A1 (en) 2017-01-09
IL247610B (en) 2019-05-30
SG11201607751SA (en) 2016-10-28
SI3119752T1 (en) 2018-08-31
EP3119752B1 (en) 2018-05-16
KR102296041B1 (ko) 2021-08-30
PH12016501808B1 (en) 2017-01-09
US20170107195A1 (en) 2017-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11155532B2 (en) Cyclopropylamines as LSD1 inhibitors
US10442786B2 (en) Benzimidazole derivatives as bromodomain inhibitors
US10568879B2 (en) Dihydropyridoisoquinolinones and pharmaceutical compositions thereof for the treatment of inflammatory disorders
RS51650B (sr) Kinuklidinski derivati (hetero) arilcikloheptankarboksilne kiseline kao antagonisti muskarinskog receptora
HUE025198T2 (en) ENAC blocking pyrazine derivatives
JP6869176B2 (ja) Ｃｒｔｈ２アンタゴニストとしての化合物およびその使用
EA039607B1 (ru) Бензодиазолиевые соединения в качестве ингибиторов enac
EA017627B1 (ru) Хинуклидиновые производные в качестве антагонистов мускаринового м3 рецептора
US10954211B2 (en) Chemical compounds
RU2512318C2 (ru) Производные изохинолина, ингибирующие р38 киназу
BR112016021187B1 (pt) Compostos químicos e combinação compreendendo os mesmos
HK1230601B (zh) 吡嗪类化合物
HK1230601A1 (en) Pyrazine compounds
CN107405505A (zh) 用于治疗囊性纤维化的化合物