RS55286B1 - Stabilna formulacija peksiganana - Google Patents

Description

OBLAST PRONALASKA

[0001]Pronalazak daje topikalne formulacije peksiganana koje ostaju hemijski i fizički stabilne uprkos dugotrajnom čuvanju, i postupke za pripremu istih.

OSNOVA PRONALASKA

[0002]Jedan od najvažnijih problema kod lečenja rana je infekcija. Inficirane rane odlažu proces zarastanja rana i povećavaju vreme hospitalizacije. Tnfekcije rana često dovode do sekundarnih infekcija, amputacija i čak smrti. Rasprostranjenost bakterija rezistetnih na antibiotik je naročito ozbiljan problem za lečenje infekcije rana. Ustvari, preko ekstenzivne dugotrajne upotrebe, većina antibiotika generiše rezistentne bakterije.

[0003]Jedan tip rane podložne infekciji su one povezane sa dijabetesom, uključujući dijabatičke čireve stopala, hronične rane koje se često razvijaju kod dijabetičkih pacijenata. Rane koje su rezultat dijabetičkih komplikacija su preovlađujuće. Dijabetes može da uključuje perifernu neuropatiju, i povećanje verovatnoće da inficirane rane neće moći da se leče sistemskim antibioticima. Može biti potrebno nekoliko meseci za zarastanje čira, stavljajući pacijenta u rizik od ponovne infekcije i novih infekcija, uključujući rizik od infekcije kosti (osteomijelitis) i/ili progresivne gangrene. Dijabetes, generalno, i dijabetička infekcija stopala, specifično, su glavni uzroci ne-traumatskih amputacija noge u razvijenom svetu, i čirevi stopala su sada najčešći uzrok hospitalizacija povezanih sa dijabetesom. Na taj način, infekcija rane je glavno opterećenje kako za pacijenta tako i za sistem zdravstvene zaštite.

[0004]Sistemski antibiotski tretmani se često koriste za lečenje infekcije rana. Međutim, sistemska terapija često dovodi do nekoliko sporednih efekata, naročito kod dijabetičkih pacijenata koji generalno imaju kompromitovanu funkciju bubrega i jetre. Pored toga, sistemska terapija često dovodi do rizika od nedovoljnog prodiranja kroz tkivo, kao posledica smanjenog snabdevanja krvlju na mestu rane. Najdostupniji sistemski antibiotici generišu rezistentne bakterije preko produžene upotrebe. Na taj način, efikasna topikalna terapija je često poželjna kao put primene za primenu antibiotskog sredstva na ranu.

[0005]Peksiganan je antimikrobni peptid širokog spektra za topikalnu primenu. On ima antimikrobnu aktivnost protiv Gram-pozitivnih i Gram-negativnih organizama koji obično inficiraju kožu i meko tkivo. Peksiganan ima korist od niskog potencijala za indukciju rezistencije i bez unakrsne rezistencije sa postojećim terapeutskim antibioticima, kao posledica njegovog mehanizma delovanja. Međutim, stabilna topikalna kompozicija peksiganana je veoma teška za formulaciju i nije trenutno dostupna.

[0006]Feibush et al. (Pharmaceutical Research, Vol. 17, pp. 197-204 (2000)) opisuju identifikaciju glavnih proizvoda razgradnje koji su formirani u toku studije stresa peksiganan acetata u formulaciji leka (1% peksiganan krema).

[0007]Lipsky et al. (Clinical Infectious Diseases, Vol. 47, No. 12, pp. 1537-1545 (2008)) opisuju topikalnu naspram sistemske antimikrobne terapije za lečenje blago inficiranih dijabetičkih čireva stopala. [00081WO 2009/070564 A2 se bavi kompozicijama peksiganana i postupcima za prevenciju infekcije u infection transkutanim oseo-integrisanim implantima.

[0009]Peptidi su često teški za formulisanje jer ispoljavaju hemijsku nestabilnost, usvajaju višestruke konformacije, teže da se samo-udružuju i takođe ispoljavaju složene fizičke nestabilnosti, naročito u topikalnom obliku. 1 hemijska i fizička stabilnost su kritični za efikasnu i komercijalnu farmaceutsku formulaciju. Nestabilna formulacija rezultira u gubitku potencije i slabom kvalitetu i komplajansu pacijenta. Topikalne formulacije, naročito, moraju da ostanu stabilne u kontejneru dok se čuvaju dugo i zatim kada se primenjuju na kožu. Na taj način, ostaje potreba za oblikom doze za topikalnu primenu peksiganana, koji obezbeđuje efikasan tretman infekcije rane, i koji ostaje hemijski i fizički stabilan tokom dugog čuvanja.

REZIME

[0010]Predmetni pronalazak prevazilazi probleme navedene u prethodnom tekstu i unapređuje stanje tehnike obezbeđivanjem stabilnih formulacija peksiganana za topikalnu formulaciju. Formulacije prema predmetnom pronalasku imaju povećanu hemijsku stabilnost i fizičku stabilnost tokom dužeg vremena.

[0011]Kao takav, predmetni pronalazak daje topikalnu formulaciju koja sadrži peksiganan ili njegovu kiselu adicionu so koja sadrži prvi hidrofilni surfaktant koji ima vrednost hidrofilo-lipofilne ravnoteže (HLB) između 12 i 17 i drugi hidrofobni surfaktant koji ima HLB vrednost između 3.5 i 5.5, pri čemu prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktanti sadrže od 1.5 % tež./tež. do 5.0 % tež./tež. formulacije i težinski odnos prvog prema drugom surfaktantu je takav da je mešana HLB između 12.5 i 14.5, pri čemu prvi hidrofilni surfaktant je polioskietilen(20)-sorbitanmonostearat (Tween® 60) i drugi hidrofobni surfaktant je sorbitanmonostearat (Span® 60).

[0012]Poželjno, HLB vrednost prvog hidrofilnog surfaktanta je između 13 i 16, i poželjnije, HLB vrednost prvog hidrofilnog surfaktanta je 14.9. Poželjno, HLB vrednost drugog hidrofobnog surfaktanta je između 3.5 i 5.5, i poželjnije, HLB vrednost drugog hidrofilnog surfaktanta je 4.7.

[0013]Poželjno, prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže od 2 % tež./tež. do 4.5 % tež./tež. formulacije. Poželjnije, prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže oko 3.5 % tež./tež. formulacije.

[0014]Prema predmetnom pronalasku mešana HLB prvog hidrofilnog i drugog hidrofobnog surfaktanta je između 12.5 i 14.5. Poželjnije, mešana HLB prvog hidrofilnog surfaktanta i drugog hidrofobnog surfaktanta je 13.6. Takođe poželjno, mešana HLB prvog hidrofilnog surfaktanta i drugog hidrofobnog surfaktanta je 14.4.

[0015]Prema predmetnom pronalasku prvi hidrofilni surfaktant je polioksietilen (20)-sorbitan-monostearat (Tween® 60) i drugi hidrofobni surfaktant je sorbitanmonostearat (Span® 60).

[0016]U primeru izvođenja, stabilna topikalna formulacija može da sadrži 1.05 (% tež./tež.) peksiganan acetata; 20.0 (% tež./tež.) propilen glikola; 0.1 (% tež./tež.) etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA); 7.5 (% tež./tež.) stearil alkohola; 2.0 (% tež./tež.) cetil alkohola; 1.0 (% tež./tež.) izopropil miristata; 0.1 (% tež./tež.) butilovanog hidroksitoluena (BHT); 0.43 (% tež./tež.) sorbitanmonostearata (Span® 60); 3.07 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monostearata (Tween® 60); 0.1 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monooleata (Tween® 80) i (dovoljnu količinu) natrijum acetatnog pufera.

[0017]U sledećem primeru izvođenja, stabilna topikalna formulacija može da sadrži 1.05 (% tež./tež.) peksiganan acetata; 20.0 (% tež./tež.) propilen glikola; 0.1 (% tež./tež.) etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA); 6.0 (% tež./tež.) stearil alkohola; 2.0 (% tež./tež.) cetil alkohola; 3.0 (% tež./tež.) izopropil miristata; 0.1 (% tež./tež.) butilovanog hidroksitoluena (BHT); 0.17 (% tež./tež.) sorbitanmonostearata (Span® 60); 3.33 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monostearata (Tween® 60); 0.1 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monooleata (Tween® 80) i (dovoljna količina) natrijum acetatnog pufera.

[0018]U sledećem primeru izvođenja, predmetni pronalazak daje stabilnu topikalnu formulaciju za upotrebu u postupku lečenja infekcije kože ili rane koji sadrži topikalno nanošenje na pacijenta kod koga postoji potreba za tim na mesto infekcije efikasne količine formulacija prema predmetnom pronalasku.

DETALJAN OPIS

[0019]Sada je nađeno da mogu biti pripremljene topikalne formulacije koje sadrže peksiganan koje se hemijski i fizički stabilne. Dodatni aspekti predmetnog pronalaska će postati jasniji iz detaljnog opisa sledećih primera izvođenja.

[0020]Za svrhe predmetnog opisa, sledeći termini imaju sledeća značenja: Termin "aktivni sastojak" označava sastojak koji ima terapeutsku ili kozmetičku aktivnost.

[0021]Termin "topikalna primena" označava primenu na kožu, uključujući rane na koži, kosu, uši, mukozne membrane, rektalnu primenu, nazalnu primenu, kao i dentalnu primenu unutar oralne duplje.

[0022]Termin "stabilna formulacija" označava bilo koju formulaciju koja ima dovoljnu stabilnost da ima korst kao farmaceutsko sredstvo. Poželjno, formulacija ima dovoljnu stabilnost da omogući čuvanje na prikladnoj temperaturi, poželjno između 10°C i 30°C, tokom razumnog vremenskog perioda, poželjno duže od jednog meseca, poželjnije duže od tri meseca, čak poželjnije duže od šest meseci, i najpoželjnije duže od jedne godine. Poželjno, formulacija ostaje stabilna tokom vremena na sobnoj temperaturi,tj.,25°C.

[0023]Termin "fizička stabilnost" označava da se emulzija ulje u vodi drži zajedno, ne ispoljavajući nikakvo odvajanje između uljane i vodene faze, i bez značajnih promena u fizičkim osobinama proizvoda.

[0024]Termin "hemijska stabilnost" označava da su željeni procenti terapeutskog sredstva ostaju intaktni i procenat proizvoda razgradnje proizvedenih hemijskim putevima kao što je oksidacija ili hidroliza, u prihvatljivom nivou. Naročito, formulacija se generalno smatra hemijski stabilnom ako se koncentracije leka razlaže ne više od 10% posle dugotrajnog čuvanja na nameravanoj temperaturi čuvanja proizvoda, tj., važno je čuvati koncentraciju leka oko 90% za efikasan proizvod. Stabilnost posle dugotrajnog čuvanja može biti prikazana, na primer, upotrebom ubrzanih uslova, kao što je najmanje 6 na 40°C, kao što je indikativno za dugotrajno čuvanje na 25°C. Hemijska razgradnja može biti uzrokovana preko nekoliko mehanizama, uključujući hidrolizu, cepanje disulfidnih veza, pH, temperaturu, interakciju između sastojaka, oksidaciju i/ili razlaganje katalizovano svetlošću.

[0025]Termin "terapeutski efikasna količina" označava količinu polipeptida koja je dovoljna da pokaže značajnu korist, npr., zarastanje rane, inhibiciju proliferacije, prevenciju ili poboljšanje bakterijske kontaminacije ili infekcije, ili povećanje stope zarastanja rane, inhibiciju proliferacije, prevenciju ili poboljšanje takve kontaminacije i infekcija. Poželjno, značajna korist je statistički značajna u poređenju sa kontrolom. Dovođenje u kontakt subjekta sa peksiganan polipeptidima može biti izvedeno sa količinom i tokom vremena koji su dovoljni da se smanji bakterijska infekcija ili prisustvo.

[0026] Termin "rana" kao što je ovde korišćen označava bilo koji tip povrede kod koje je koža iskidana, isečena, probušena ili oštećena na bilo koji način. Rana može biti akutna ili hronična. Hronične rane su one koje su uzrokovane relativno sporim procesom koji dovodi do oštećenja tkiva. Hronične rane obuhvataju, na primer, dekubitus, venske i dijabetičke čireve.

[0027] "Dijabetički čirevi" i "dijabetičke infekcije stopala", označavaju tipove nezarastajućih rana povezanih sa ljudima koji imaju dijabetes. Nezarastajuće rane dijabetičkog stopala se smatraju jednom od najznačajnijih komplikacija dijabetesa, predstavljajući glavno svetsko medicinsko, socijalno i ekonomsko opterećenje koje veoma utiče na kvalitet života pacijenta. Tipično, nedovoljna cirkulacija ili druge sistemske podrške tkiva uzrokuje njegovo slabljenje i raspadanje što dovodi do hronične rane. Kako su nezarastajuće rane povezane sa neadekvatnom cirkulacijom, venama sa slabom funkcijom, slabom konstrikcijom vena i kapilara spoljašnjih ekstremiteta, i nepokretnošću, nezarastajuće rane se najčešće javljaju kod starijih i kod ljudi sa dijebetesom. Dijabetičari često pate od nervnog oštećenja u svojim stopalima i nogama, omogućavajući razvijanje malih rana ili iritacija bez primećivanja istih. Imajući u vidu abnormalitete mikrovaskulature i druge sporedne efekte dijabetesa, potrebno je puno vremena da ove rane zarastu i zahtevaju specijalizovan pristup lečenju za pogodno zarastanje. Pored rane koja ne zarasta, infekcija može zatim da zahvati mesto dovodeći do hroničnog apcesa. Pošto je infekcija pogodila kritičnu tačku, infekcija može da se raširi lokalno ili da postane sistemska.

[0028] Termin "subjekat" kao što je ovde korišćen označava sisarsko subjekta, poželjno humanog subjekta, poželjnije humanog subjekta koji ima hroničnu ranu, npr. subjekta koji pati od dijabetesa.

[0029] Magainini su prirodni katjonski peptidi koji se nalaze u prirodi kod životinja. Oni imaju široki spektar antimikrobne aktivnosti preko njihove interakcije sa anjonskim fosfolipidima mikrobnih ćelija, što rezultira u prekidanju ćelijskih membrana. Peksiganan (takođe poznat kao MSI 78) je sintetički katjonski peptidni analog magainina 2, peptid odbrane domaćina izolovan iz kože. Hemijski sastav peksiganana je: H-G ly-Il i>Gty-Lys-Ric-Lču-Lvs-L^ TIe-Leu- Lyjs-Lys-NHi [SEQ ID NO: 1J.

[0030]Sekvenca peksiganana se sastoji od sedam prirodnih aminokiselina, od kojih šest imaju L-konfiguraciju, dok je sedma (glicin) optički neaktivna. Peptid je izolovan kao njegova acetatna so sa nešto rezidualne vode kao prirodni sastojci supstance leka.

[0031]Molekul je sintetisan kao pojedinačni diastereomer sa svim hiralnim centrima prethodno definisane stereohemije. Empirijska molekularna formula peksiganana je C122H210N32O22.

[0032]VidetiU.S. Patent br. 5,912,231

[0033]Peksiganan ima antimikrobnu aktivnost protiv Gram-pozitivnih (kao što je Staphvlococcus aureus otporan na meticilin (MRSA)) i Gram-negativnih organizama koji obično inficiraju kožu i meko tkivo. On ima nizak potencijal za indukciju rezistencije i nema unakrsnu rezistenciju sa postojećim terapeutskim antibioticima kao posledica njegovog mehanizma delovanja. Peksiganan deluje izazivajući lizu u ćelijama mikroba, na taj način delujući kao efikasan inhibitor proliferacije bakterija, uključujući bakterije rezistentne na antimikrobna sredstva. Peksiganan je efikasan u topikalnom tretmanu rana, gde inhibira proliferaciju bakterija u rani i leči bakterijsku infekciju. Poželjno, peksiganan se primenjuje u obliku kisele adicione soli, uključujući peksiganan acetat.

[0034] Na taj način, peksiganan je efikasan i poželjan tretman za infekcije rana. Međutim, stabilna topikalna formulacija pogodna za farmaceutsku primenu još uvek nije postignuta.

[0035] Hemijska nestabilnost usled dugotrajnog čuvanja je uobičajen problem sa peptidnim formulacijama. Tokom vremena, peptidi mogu da se razlože preko određenog broja mehanizama, uključujući deamidaciju, oksidaciju, hidrolizu, disulfidnu razmenu i racemizaciju. Za razliku od mnogih terapeutskih molekula, peptidi nemaju globularnu strukturu koja bi mogla da veže reaktivne grupe, i na taj način bočni lanci mnogih peptida su izoloženi reaktivnim vrstama kiseonika. Visok stepen fleksibilnosti peptidnog lanca može dovesti do visokih stopa deamidacije. Ponašanje auto-udruživanja zabeleženo kod peptida može dovesti do povećane hemijske nestabilnosti. Visoko auto-udružujući peptidi mogu čak da formiraju micele, što utiče na njihovu sposobnost da prođu kroz membrane.

[0036] Priroda peptida takođe dovodi do fizičke nestabilnosti u formulaciji. Sposobnost peptida da se auto-udružuju izaziva formiranje agreagat, što konačno dovodi do velikih formiranja agregata.

[0037] Predmetni pronalazak obezbeđuje stabilnu topikalnu formulaciju sposobnu da se prevaziđu ovi problemi povezani sa dugotrajnim čuvanjem peptidnih formulacija. Formulacije predmetnog pronalaska sadrže peksiganan i farmaceutski prihvatljive ekscipijente.

[0038] Kako se kompozicije koje su ovde opisane primenjuju topikalno, kompozicije mogu biti obezbeđene u obliku pogodnom za topikalnu primenu, uključujući, ali bez ograničenja na kreme, losione, meleme, gelove, masti ili rastvore, suspenzije, emulzije, sprejeve ili druge oblike pogodne za topikalnu primenu. Poželjno, formulacija je obezbeđena u obliku kreme ili gela.

[0039] Bilo koja pogodna doza peksiganana može biti primenjena preko postupaka predmetnog pronalaska. Poželjno, peksiganan je oblik kisele adicione soli i poželjno, oblik adicione soli je acetatni oblik. Primenjena doza će, naravno, varirati u zavisnosti od poznatih faktora, kao što su farmakodinamičke karakteristike određenog jedinjenja, soli ili kombinacije; starost, zdravlje ili telesna težina subjekta; priroda i stepen simptoma; metaboličke karakteristike leka i pacijenta, vrsta istovremenog tretmana; učestalost tretmana; ili željeni efekat. Poželjna koncentracija peksiganan acetata je 1-3% tež./tež. formulacije. Poželjnije, koncentracija je 1.05% tež./tež.

[0040] Topikalne formulacije koje su ovde opisane sadrže različite ekscipijente. Izabrani ekscipijenti generalno ne bi trebalo da talože peksiganan u korišćenim procentima, ne bi trebalo da izazivaju bilo kakve reakcije štetne za peksiganan, i trebalo bi da pomognu u zadovoljavajućoj solubilizaciji i disperziji peksiganana. Ekscipijenti mogu da obuhvataju, bez ograničenja, helatirajuća sredstva, sredstva za zgušnjavanje, antioksidanti, emulgatori, rastvarači, sredstva za omekšavanje, gelirajuća sredstva, sredstva za vlaženje, antimikrobni konzervansi, sredstva protiv penušanja i sredstva za podešavanje pH.

[0041]Formulacija prema predmetnom pronalasku sadrži najmanje dva emulgatora. Prvi emulgator je hidrofilni emulgator koji je Tween® 60 i drugi emulgator je hidrofobni emulgator koji je Span® 60.

[0042]Dodatni emulgatori, kao što su treći ili četvrti, ili više, emulgatori, mogu biti korišćeni pored prvog emulagtora i drugog emulgatora. Ovi dodatni emulgatori mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na, Tween® 80, metil glukozni seskvistearat, PEG-20 metil glukozidni seskvistearat, Steareth-21, polietilen glikol 20 sorbitan monostearat, polietilen glikol 60 sorbitan monostearat, polietilen glikol 80 sorbitan monostearat, stearet-20, cetet-20, PEG-100 stearat, natrijum stearoil sarkozinat, hidrogenisani lecitin, natrijum kokoilgliceril sulfat, natrijum stearil sulfat, natrijum stearoil laktilat, PEG-20 gliceril monostearat, saharozu monostearat, saharozu polistearati, poligliceril 10 stearat, poligliceril 10 miristat, stearet 10, DEA olet 3 fosfat, DEA olet 10 fosfat, PPG-5 Ceteth 10 fosfat natrijumovu so, PPG-5 cetet 10 fosfat kalijumovu so, stearet-2, PEG-5 sojino sterol ulje, PEG-10 sojino sterol ulje, dietanolamin cetil fosfat, sorbitan monostearat, dietilenglikol monostearat, gliceril monostearat, stearet-2 ili -100, stearinsku kiselinu ili njihove smeše.

[0043]Hidrofilno-lipofilna ravnoteža (HLB) emulgatora u uljanoj fazi takođe utiče na stabilnost. HLB je mera stepena do koga je supstanca hidrofilna ili lipofilna, određena izračunavanjem vrednosti za različite regione molekula. HLB vrednost od 0 odgovara potpuno hidrofobnom molekulu i vrednost od 20 odgovara potpuno hidrofilnom molekulu.

[0044]Neočekivano je nađeno da je odnos prvog emulgatora i drugog emulgatora važan za hemijsku stabilnost formulacije. Nađeno je da idealan odnos emulgatora obezbedio značajno poboljšanje u dugotrajnoj hemijskoj stabilnosti formulacije na temperaturama čuvanja. Dok je bilo jasno da podešavanje odnosa prvog i drugog emulgatora i na taj način podešavanje mešanog HLB dva emulgatora utiče na fizičku stabilnost, nije očekivano da ima bilo kakav efekat na hemijsku stabilnost. Međutim, pramenom odnosa prvog hidrofilnog emulgatora prema drugom hidrofilnom emulgatoru, nađeno je da formulacija ima veoma uvećanu hemijsku stabilnost posle dugotrajnog čuvanja.

[0045]Prvi hidrofilni emulgator ima HLB vrednost od između 12 i 17. Poželjnije, prvi hidrofilni emulgator ima HLB vrednost od između 13 i 16. Na primer, HLB prvog hidrofilnog emulgatora može biti 14.9.

[0046]Drugi hidrofobni emulgator ima HLB vrednost od između 3.5 i 5.5. Poželjnije, drugi hidrofobni emulgator ima HLB vrednost od između 3.5 i 5.5. Na primer, HLB drugog hidrofobnog emulgatora može biti 4.7.

[0047]Prvbi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktanti zajedno mogu da sadrže od 1.5 do 5.0 % tež./tež. formulacije. Poželjno, prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže od 2 do 4.5 % tež./tež. formulacije. Poželjnije, prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže oko 3.5 % tež./tež. formulacije. Kada su prvi hidrofilni i drugi hidrofobni emulgator prisutni zajedno, Može biti merena mešana HLB dva emulgatora. Mešani HLB je izračunat uzimanjem izmerene srednje vrednosti pojedinačnih HLB vrednosti, kao što su izmerene preko procenta formulacije koji se sastoji od pojedinačnog emulgatora. Poželjno mešana HLB prvog hidrofilnog emulgatora i drugog hidrofobnog emulgatora je između 12.5 i 14.5. Takođe poželjno, mešana HLB prvog hidrofilnog surfaktanta i drugog hidrofobnog surfaktanta je 14.4. Predmetne formulacije mogu da obuhvataju helatirajuća sredstva. Poželjna helatirajuća sredstva obuhvataju, ali bez ograničenja na, na primer, etilendiamintetrasirćetnu kiselinu (EDTA), dinatrijum edetat i EDTA derivate, limunsku kiselinu i njihove smeše.

[0048]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju sredstva za zgušnjavanje, kao što se koriste za povećanje viskoziteta i/ili povećanje konzistencije. Poželjna sredstva za zgušnjavanje mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na, stearil alkohol, cetil alkohol, voskove, cetearet-20, cetearet-30, cetearil alkohol, cetet 20, cetostearil alkohol, cetil alkohol, cetil stearil alkohol i njihove smeše.

[0049]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju rastvarače. Poželjni rastvarači obuhvataju, ali bez ograničenja na, propilen glikol, vodu, izopropil alkohol, tečni vazelin, etar, petrol etar, alkohole( npr.,etanol i više alkohole), silikone, aromatike( npr.,toluen), alkane( npr.,pentan, heksan i heptan), ketone( npr.,aceton i metil etil keton), hlorisane ugljovodonike{ npr.,hloroform, ugljen tetrahlorid, metilen hlorid i etilen dihlorid), acetate( npr.,etil acetat), estre i ulja( npr.,izopropil miristat, diizopropil adipat i minearlno ulje) i njihove smeše. Rastvarač takođe može imati antimikrobne osobine.

[0050]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju konzervanse. Poželjni konzervansi mogu da obuhvataju, ali bez ograničenja na, fenoksietanol, parabene (kao što je metilparaben i propilparaben), propilen glikole, sorbate, derivate uree (kao što je diazolindinil urea) i njihove smeše.

[0051]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju sredstva za omekšavanje. Poželjna sredstva za omekšavanje obuhvataju, ali bez ograničenja na kaprilne/kaprinske trigliceride, ricinusovo ulje, kakao puter, diizopropil adipat, glicerin, gliceril monooleat, gliceril monostearat, gliceril stearat, izopropil miristat, izopropil palmitat, lanolin, lanolin alkohol, hidrogenisani lanolin, tečni parafini, linolenska kiselina, mineralno ulje, oleinska kiselina, beli vazelin, polietilen glikol, polioksietilen glikol masni alkoholni etri, polioksipropilen 15-stearil etar, propilen glikol stearat, skvalan, silikonska jedinjenja, stearil alkohol, urea i njihove smeše.

[0052]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju antioksidante. Poželjni antioksidanti obuhvataju, ali bez ograničenja na, butilovani hidroksitolunen (BHT), butilovani hidroksianizol (BHA), propil galat, koenzim Q10, ulje od ružmarina, zeleni čaj, likopen, ekstrakt semena grožđa, ekstrakt kore bora, Vitamin C, prirodni beta karoten, sintetički beta karoten, gama-orizanol (estri ferulne kiseline), selen, lutein i njihove smeše.

[0053]Predmetne formulacije mogu da obuhvataju puferujuća sredstva. Poželjna puferujuća sredstva obuhvataju, ali bez ograničenja na, acetatne pufere kao što je natrijum acetat, citratne pufere, fosfatne pufere, pufere mlečne kiseline, boratne pufere i njihove smeše. pH predmetnih formulacija je poželjno između 4.0 i 6.0. Poželjnije, pH predmetne formulacije je 5.0.

[0054]Radi primera, formulacija može da sadrži peksiganan acetat, propilen glikol, EDTA, stearil alkohol, cetil alkohol, izopropil miristat, BHT, 0.43 (% tež./tež.) Span 60, 3.07 (% tež./tež.) Tween 60, Tween 80 i natrijum acetatni pufer. Na primer, formulacija može biti:

[0055]Dodatna formulacija može biti:

Dodatna formulacija može biti:

Dodatna formulacija može biti:

Dodatna formulacija može biti:

Dodatna formulacija može biti:

[0056]Postupci za primenu topikalne formulacije poznati su stručnjaku iz date oblasti tehnike. Predmetni pronalazak daje postupak za lečenje infekcije kože ili rane koji sadrži topikalno nanošenje na pacijenta kod koga postoji potreba za tim na mesto infekcije efikasne količine formulacija prema predmetnom pronalasku.

[0057]Iako je predmetni pronalazak detaljno opisan u vezi sa specifičnim primerima, razume se da se različite modifikacije mogu praviti bez udaljavanja od duha pronalaska, i lako bi bile poznate stručnjaku iz date oblasti.

PRIMERI

[0058]Sledeće formulacije su testirane i primerima navedenim u daljem tekstu:

SASTAVIFORMULACIJE

[0059]

Primer 1: Hemijska stabilnost na6 i 11meseci

[0060]Formulacije 3216-6, 3216-10 i 3216-72 su testirane za hemijsku stabilnost. Stabilnost je određena upotrebom HPLC testiranja. Korišćeni hromatografski parametri bili su kao što sledi:

[0061]Mereno je razlaganje leka. Rezultati od jedanaest meseci i rezultati hemijske stabilnosti od osamnaest meseci su rezimirani u daljem tekstu. Prikazana je hemijska stabilnost sva tri na 25°C,tj.,sobnoj temperaturi. Kao što je navedeno u gornjem tekstu, testiranje 40°C za kraće vreme je indikativno za stabilnost na 25°C za duže vremenske periode. Testiranje formulacije na 40°C šest meseci smatra se indikativnim za stabilnost iste formulacije na 25°C dve godine.

[0062]Rezultati prikazuju da je peksiganan hemijski stabilniji u formulacijama 3216-10 i 3216-72 prema predmetnom pronalasku nego u formulaciji 3216-6 koja se koristi kao komparativna formulacija. Kao što je prikazano u daljem tekstu, koncentracija leka u 3216-6 je pala od 102.4% od naznačenog na t=0 (početna tačka) do 87%> za 6 meseci. Visoko je poželjno za komercijalnu formulaciju da održava koncentraciju leka iznad 90%> oznake, koja se smatra stabilnom. Ovo se postiže pomoću formulacija 3216-10 i 3216-72 prema predmetnom pronalasku.

[0063]Pored toga, na 40°C, zabeleženo je više razgradnje supstance leka u 3216-6 nego u 3216-10 i 3216-72. Na primer, na jedanaest meseci, ukupna količina proizvoda razgradnje zabeležena u formulacijama 3216-6 na 40°C je skoro dva puta veća od one zabeležene u formulaciji 3216-10 na 40°C. Ovo je značajna razlika u hemijskoj stabilnosti.

[0064]Rezultati prikazani u daljem tekstu pokazuju da bi formulacije 3216-10 i 3216-72 bile mnogo više hemijski stabilne na temperaturama skladištenja pri dugotrajnom čuvanju nego formulacija 3216-6. Razlika između formulacija 3216-10 i 3216-72 naspram 3216-06 leži u odnosu emulgatora.

Hemijska stabilnost peksiganan acetata u 1% kremama: 11 meseci

Primer2: Hemijska stabilnost na 18 meseci na 40°C

[0065] Hemijska stabilnost 3216-6, 3216-10 i 3216-72 je testirana na 40°C u trajanju od 18 meseci, prediktivno za dugotrajno čuvanje formulacija na 25°C. Zabeleženi su rezultati koji pokazuju da razlika između 3216-6 formulacije u poređenju sa 3216-10 i 3216-72 formulacijama prema predmetnom pronalasku na 40°C pokazuje značajnu razliku u broju proizvoda razlaganja. Drugim rečima, razlika u broju proizvoda razlaganja između 3216-6 formulacije (korišćene za poređenje) naspram formulacija 3216-10 i -72 na 18 meseci je veća nego razlika zabeležena između ovih istih formulacija na 11 meseci (prikazana u prethodnom tekstu u Primeru 1).

Primer 3: Fizička stabilnost

[0066] Fizička stabilnost formulacija je testirana za izgled, pH (čist), viskozitet na sobnoj temperaturi i izvedena je analiza aktivnog farmaceutskog sastojka.

[0067] Uzorci su testirani na 1, 2 i 3 meseca, na 5°C, 25°C i 40°C. Testiranje na 40°C obezbeđuje dobru indikaciju stabilnosti proizvoda koji bi bio čuvan dugo na 25°C. Zabeleženo je da se testiranje na 40°C tokom kratkog vremena kao što je šest meseci, smatra indikativnim za stabilnost na 25°C (tj., sobnoj temperaturi) tokom dužeg vremenskog perioda (dvadeset i četiri meseca).;tj.,obezbeđuje ubrzane uslove testiranja.

[0068] Ciklus zamrzavanja/topljenja sastojao se u čuvanju tri ili četiri kalendarska dana na - 20°C, nakon čega sledi čuvanje tri ili četiri kalendarska dana na sobnoj temperaturi; izvedena su ukupno tri ciklusa.

[0069] Mereni su izgled, pH i viskozitet. U vezi sa izgledom, poželjna je bela ili beličasta glatka krema, bez vidljivih odvajanja u posebne faze. U vezi sa pH, pogodna topikalna pH može da obuhvata pH između oko 4.5 i oko 8.

[0070] U vezi sa viskosti, izvedeno je merenje kreme na sobnoj temperaturi. Vrednosti viskoznosti uzoraka od 13 grama dobijene su na reometru opremljenom sa #29 osovinom, na 30 rpm, merenje je izvedeno na na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 minuta. Idealne viskoznosti obuhvataju opseg od 5000-40000 centipoaza, i poželjno su između 10000 i 20000 centipoza.

[0071] Rezultati, koji prikazuju ove parametre fizičke stabilnosti, bili su kao što sledi:

Primer 4: Testiranjestresa

[0072]Testiranje stresa od centrifugiranja je izvedeno da bi se pomoglo u proceni verovatnoće da se proizvod ne razlaže tokom dužeg čuvanja. Formulacije su testirane na stres u centrifugi, kao što je prikazano u daljem tekstu. Formulacija 3216-10 je bila identična formulaciji 3216-6 u svim aspektima osim odnosa dva emulgatora, Span 60 i Tween 60. U 3216-6, % tež./tež. odnos je 2:1.5, pri čemu je kod 3216-10 ovaj odnos promenjen do 0.43: 3.07. Ukupna količina dva emulgatora je ostala ista na 3.5% tež./tež. Međutim, podešavanje odnosa ta dva imalo je za rezultat bolju stabilnost. Formulacija 3216-10 je bila sposobnija da održava svoju fizičku celovitost u testu stresa kao što je dokazano preko vremena koje je potrebno da se pokaže odvajanje faze. U testu centrifugiranja na 25°C, dok je 3216-6 pokazala odvajanje posle 10 minuta na 5000g, 3216-10 je trebalo 60 minuta pod sličnim uslovima stresa da ispolji odvajanje. U sličnom testu izvedenom na 40°C (ubrzani uslovi), dok se 3216-6 odvojila posle 60 minuta, takvo odvajanje nije zabeleženo sa 3216-10.

Primer5: Priprema formulacije peksiganana

[0073] Korak 1: Natrijum acetatni pufer je pripremljen mešanjem prečišćene vode, natrijum acetat trihidrata i glacijalne sirćetne kiseline.

Korak 2: U glavnoj proizvodnoj posudi, spojeni su propilen glikol, polisorbat 60 i približno 85% natrijum acetatnog pufera. Smeša je zagrevana do 65-70°C uz mešanje lopaticom. Temperatura je održavana.

Korak 3: U drugoj posudi, stearil alkohol, cetil alkohol, sorbitan monostearat, izopropil miristat i BHT su spojeni, i zagrevani do 65-70°C uz mešanje da bi se osiguralo da se sav čvrsti materijal istopio. Temperatura je održavana.

Korak 4: U trećoj posudi, ostatak natrijum acetatnog pufera, polisorbat 80, dinatrijum edetat i peksiganan acetat su spojeni i zagrevani do 35-45°C uz mešanje sve dok nije dobijen bistar rastvor. Temperatura je održavana.

Korak 5: Sa homogenizacijom, uljana faza iz koraka 3 je lagano dodavana u vodenu fazu iz koraka 2.

Korak 6: Zagrevanje je zaustavljeno. Homogenizacija je nastavljena. Emulzija je hlađena do 55°C upotrebom ledenog kupatila.

Korak 7: Homogenizacija je zaustavljena i emulzija je uklonjena iz ledenog kupatila.

Korak 8: Započeto je mešanje lopaticom. Faza leka iz koraka 4 je dodata u emulziju u koraku 7.

Korak 9: Uz kontinuirano mešanje lopaticom, serija je hlađena do sobne temperature.

Korak 10: Zabeležena je pH. Ako je neophodno, pH je podešena do 5.0±0.2 upotrebom 10%) HC1 ili 10%o NaOH. Proizvod je mešan sve dok nije postao gladak i homogen.

Primer 6: Priprema i prečišćavanje peksiganan acetata aktivnog sastojka

[0074]Aktivni sastojak, peksiganan acetat, je obezbeđen kao liofilizovani prašak.

[0075]Prekursor peksiganan acetata u vidu peptid-smole je proizveden upotrebom opšteg postupka opisanog u Merrifield (Solid Phase Peptide Svnthesis. I. The Svnthesis of a Tetrapeptide. J. Am. Chem. Soc. 1963 85 (14): 2149-2154), sa manjim modifikacijama, a-amino grupa svake aminokiseline je zaštićena sa Fmoc grupom osetljivom na bazu, dok su funkcionalne grupe bočnog lanca zaštićene grupama koje su osetljive na kiselinu. Sinteza je izvedena upotrebom Fmoc-Rink Amidne smole (supstitucija: približno 0.7 meq/g) kao početna podloga od smole za proizvodni proces. Standardna Fmoc-hemija je korišćena za sklapanje peptidnog lanca, upotrebom sledećeg opšteg ciklusa: • uklanjanje N-terminalne Fmoc-grupe početne smole ili poslednje aminokiseline dodate upotrebom 20% (zapr./zapr.) rastvora piperidina u DMF; • ispiranje sa DMF;

• spajanje sledeće aminokiseline upotrebom DIC u prisustvu HOBt; i

• ispiranje sa DMF.

[0076]Posle uklanjanja Fmoc-grupe i ispiranja sa DMF, mali uzorak smole je uklonjen i podvrgnut kontroli procesa u toku ninhidrinovog testa, testa sa bojom koji meri rezidualne grupe amina vezane za smolu. Test je bio pozitivan da bi se potvrdilo prisustvo slobodne grupe amina.

[0077]Ovaj ciklus je ponovljen sa odgovarajućim aminokiselinskim derivatima,tj.,Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ile-OH i Fmoc-Gly-OH. Monitoring u toku ninhidrinovog testa, izveden je na kraju svakog ciklusa sinteze kao procena koraka spajanja. Negativan rezultat testa ukazao je na odsustvo slobodnih amina (potpuno spajanje). Ako je nađeno daje test pozitivan, što ukazuje na neodreagovali amin (nepotpuno spajanje), reakcija spajanja može biti produžena, ponovno spajanje zaštićenog aminokiselinskog derivata može biti izvedeno ili može biti izvedena acetilacija (blokiranje), upotrebom anhidrida sirćetne kiseline u prisustvu D1EA.

[0078]Smola je isprana sa IPA i sušena pod strujom azota da bi se dobio zaštićeni peptid-smola prekursor peksiganan acetata. Proizvod je odvojen od smole i istovremeno deprotektovan tretmanom pod-serija peptid-smola prekursora sa smešom TFA i vode (TFAiFLO, približno 95:5, zapr./zapr.) približno dva i po časa na temperaturi sredine. Smola je zatim uklonjena filtracijom, isprana dodatnim TFA, i kombinovani filtrati su koncentrovani rotacionim isparavanjem. Sirovi proizvod je istaložen dodavanjem koncentrovanih filtrata u MTBE, izolovan filtracijom, ispran na filteru sa MTBE, i sušen do konstantne težine u vakuumskoj peći na temperaturi sredine.

[0079]Sirovi peksiganan iz prethodnog koraka je prečišćen pomoću preparativne RP-HPLC procedure iz dva koraka, na C18 reverzno-faznom silicijum dioksidu, u toku čega je čistoća frakcija procenjivana pomoću analitičke HPLC. U prvom koraku procesa, pod-serije sirovog proizvoda su posebno ponovo rastvorene u razblaženom, vodenom rastvoru sirćetne kiseline (približno 10%, zapr./zapr.), rastvor je filtriran i nanet na preparativnu HPLC kolonu koja je isprana metanolom i ekvilibrisana sa 0.1 M vodenim rastvorom trietilamonijum fosfata, pH 2.3 (TEAP). Proizvod je eluiran upotrebom gradijenta acetonitrila u TEAP puferu, sa monitoringom pomoću ultraljubičastog zračenja (UV) na 230 nm. Dobijene frakcije su analizirane pomoću postupka HPLC u procesu i kombinovane na takav način da je čistoća u skladu sa zahtevima za kontrole u procesu. Frakcije sa čistoćama manjim od kontrolnih kriterijuma u procesu mogu biti reciklirane preko gore navedene the procedure ili odbačene.

[0080]U drugom stadijumu prečišćavanja, sakupljeni polu-prečišćeni peptid iz prvog koraka prečišćavanja je razblažen i sipan na preparativnu kolonu, koja je ekvilibrisana sa 0.1 % vodenim rastvorom TFA. Proizvod je eluiran upotrebom gradijenta acetonitrila u 0.1 % vodenom rastvoru TFA sa praćenjem pomoću UV na 230 nm. Rezultirajuće frakcije su analizirane pomoću postupka HPLC u procesu i kombinovane na takav način da je čistoća bila u skladu sa zahtevima za kontrole u procesu. Frakcije sa čistoćama manjim od kriterijuma za kontrole u procesu mogu biti reciklirane preko gore navedene procedure ili odbačene.

[0081]Sakupljene frakcije iz prečišćavanja od dva koraka su liofilizovane posebno da bi se dobile pod-serije TFA soli prečišćenog proizvoda, koje su čuvane pod hlađenjem pre prevođenja u acetatnu so u sledećem koraku procesa.

[0082]Prečišćena TFA so proizvoda iz prethodnog koraka prečišćavanja je prevedena u acetatnu so pomoću jono-izmenjivačke procedure upotrebom Dowex 1 X 2-100 smole. Rastvor sakupljenih pod-serija u razblaženom vodenom rastvoru sirćetne kiseline (približno 10%, zapr./zapr.) je propuštan kroz kolonu pakovanu sa viškom Dowex 1 X 2-100 (acetatni oblik), koja je zatim isprana dodatnim vodenim rastvorom sirćetne kiseline da bi se potpuno izolovao proizvod.

[0083] Sakupljeni eluenti iz koraka izmene protiv-jona su filtrirani i liofilizirani do sušenja da bi se dobila acetatna so peksiganana.

Claims (7)

1. Topikalna formulacija koja sadrži peksiganan ili njegovu kiselu adicionu so koja sadrži prvi hidrofilni surfaktant koji ima vrednost hidrofilno-lipofilne ravnoteže (HLB) između 12 i 17 i drugi hidrofobni surfaktant koji ima HLB vrednost između 3.5 i 5.5, pri čemu prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže od 1.5 % tež./tež. do 5.0 % tež./tež. formulacije i težinski odnos prvog prema drugom surfaktantu je takav da je mešana HLB između 12.5 i 14.5, pri čemu je prvi hidrofilni surfaktant polioksietilen(20)-sorbitanmonostearat (Tween® 60) i drugi hidrofobni surfaktant je sorbitanmonostearat (Span® 60).

2. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže od 2 % tež./tež. do 4.5 % tež./tež. formulacije.

3. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što prvi hidrofilni i drugi hidrofobni surfaktant sadrže oko 3.5 % tež./tež. formulacije.

4. Topikalna formulacija prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što, mešana HLB prvog hidrofilnog i drugog hidrofobnog surfaktanta je 13.6.

5. Stabilna topikalna formulacija koja sadrži: (i) 1.05 (% tež./tež.) peksiganan acetata (ii) 20.0 (% tež./tež.) propilen glikola (iii) 0.1 (% tež./tež.) etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) (iv) 7.5 (% tež./tež.) stearil alkohola (v) 2.0 (% tež./tež.) cetil alkohola (vi) 1.0 (% tež./tež.) izopropil miristata (vii) 0.1 (% tež./tež.) butilovanog hidroksitoluena (BHT) (viii) 0.43 (% tež./tež.) sorbitanmonostearata (Span® 60) (ix) 3.07 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monostearata (Tween® 60) (x) 0.1 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monooleata (Tween® 80) i (xi) (dovoljna količina) natrijum acetatnog pufera.

6. Stabilna topikalna formulacija koja sadrži: (i) 1.05 (% tež./tež.) peksiganan acetata (ii) 20.0 (% tež./tež.) propilen glikola (iii) 0.1 (% tež./tež.) etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) (iv) 6.0 (% tež./tež.) stearil alkohola (v) 2.0 (% tež./tež.) cetil alkohola (vi) 3.0 (% tež./tež.) izopropil miristata (vii) 0.1 (% tež./tež.) butilovanog hidroksitoluena (BHT) (viii) 0.17 (% tež./tež.) sorbitanmonostearata (Span® 60) (ix) 3.33 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monostearata (Tween® 60) (x) 0.1 (% tež./tež.) polioksietilen(20)-sorbitan-monooleata (Tween® 80) i (xi) (dovoljna količina) natrijum acetatnog pufera.

7. Stabilna topikalna formulacija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 za upotrebu u postupku za lečenje infekcije kože ili rane.