RS20060145A - Jedinjenja benzoimidazolona sa 5-ht4 receptor antagonističkim dejstvom - Google Patents

Abstract

Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I): ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i preparate koji sadrže ova jedinjenja i primenu ovih jedinjenja za proizvodnju leka za gastroezofagalno ref1uks oboljenje, gastrointestinalno oboljenje, poremećaj crevne pokretljivosti, ne-ulkusnu dispepsiju, funkcionalnu dispepsije, sindrom nadraženih creva (IBS), konstipaciju, dispepsiju, ezophagitis, oboljenje jednjaka, mučninu, oboljenje centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ovu bolest, kognitivni poremećaj, emezis, migrenu, neurološko oboljenju, kardiovaskularno oboljenju, srčani zastoj, srčanu aritmiju, dijabetes i sindrom apneje, Ova jedinjenja imaju 5-HT4 receptor agonistišku aktivnosti, i korisni su za lečenje gastroezofagalnog ref1uks oboljenja, ne-ulkusne dispepsije, funkcionalne dispepsije, sindroma naraženih creva ili sličnog kod sisara, posebno ljudi.

Description

JEDINJENJA BENZOIMIDAZOLONA SA 5-HT4RECEPTOR ANTAGONISTIČKIM

DESTVOM

Oblast tehnike

Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja benzomidazolona. Ova jedinjenja imaju selektivnu 5-HT4receptor agonističku aktivnost. Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutski preparat za lečenje oboljenja posredovana sa 5-HT4receptor aktivnošću.

Stanje tehnike

Generalno govoreći, nađeno je da su 5-HT4recetor agonisti korisni za lečenje različitih oboljenja kao stoje gastroezofagalno refluks oboljenje, gastrointestinalano oboljenje, poremećaj crevne pokretljivosti, ne-ulkusna dispepsija , funkcionalna dispepsija, sindrom nadraženih creva (IBS), konstipacija, dispepsija, ezofagitis, oboljenja jednjaka, mučnina, oboljenja centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ova bolest, kognitivni poremećaj, emezis, migrena, neurološko oboljenje, kardiovaskularno oboljenje, srčano zatajivanje, srčana aritmija, dijabetes i sindrom apneje (vidi TiPs, 1992, 13, 141; Ford A.P. D.W. et al.,Med. Res. Rev.,1993, 13, 633; Gullikson G.W. etal,Drug Dev. Res., 1992, 26, 405;Richard M. Eglen et. Al. TiPs, 1995, 16, 391; Blockaert J. Et al., CNS Drugs, 1, 6; Romanelli M.N. et al., Arzheim Forsch/Drug.Res., 1993, 43, 913; Kaumann A et al.,Naunyn- Schmiedberg ' s,1991, 344, 1 501Romanelli M. N. Et al., Arzheim Forsch/Drug Res., 1993, 43, 913). Takođe, Mosapride je poznat kao koristan za lečenje dijabetesa.

Poželjno je obezbediti 5-HT4receptor agoniste sa većom 5-HT4receptor agonističkom aktivnošću.

US5223511 opisuje jedinjenja benzimidazola kao 5-HT4 receptor antagoniste. Posebno jedinjenja predstavljena formulom:

VVO93/10827 opisuje jedinjenja benzimidazolona kao 5-HT4receptor antagoniste. Posebno, jedinjenja predstavljena sledećom formulom:

VV099/17772 opisuje jedinjenja benzimidazolona kao 5-HT4receptor agoniste i/i I i antagoniste. Posebno, jedinjenja predstavljea sledećom formulom:

WO98/0()449 opisuje jedinjenja benzimidazolona kao 5-HT4receptor agoniste i/ili antagoniste 5-HT3antagoniste. Posebno jedinjenja data sledećom formulom:

Postoji potreba za novim 5-HT4receptor agonistima koji su dobri kandidati za lek. Posebno, preferentna jedinjenja bi trebalo da se vezuju za 5-HT4receptor a da pri tome pokazuju mali afinitet za druge receptore i pokazuju funkcionalnu aktivnost kao agonisti. Trebalo bi da se dobro apsorbuju iz gastrointestinalnog trakta, budu metabolički stabilni i imaju povoljne farmakokinetičke osobine. Kada je ciljan nasuprot receptorima u centralnom nervnom sistemu, trebalo bi da slobodno pređu kroz krvnu barijeru u mozgu i kada je ciljan selektivno nasuprot receptorima u perifernom nervnom sistemu ne bi trebalo da pređu krvnu barijeru u mozgu. Trebalo bi da su netoksični i pokazuju malo sporednih efekata. Dalje, idealan kandidat za lek bi postojao u fizičkom obliku koji je stabilan, ne-hiigroskopan i lak za formulaciju.

Kratak opis pronalaska

Neočeikvano je nađeno da jednjenja predmetnog pronalaska imaju jaku slektivnu 5-HT4agonističku aktivnost i prema tome, su korisna za lečenje oboljenja nastala posredstvom 5-HT4receptorske aktivnosti kao što je gastroezofagalno refluks oboljenje, gastrointestinalano obol jenje, poremećaj crevne pokretljivosti, ne-ulkusna dispepsija , funkcionalna dispepsija, sindrom nadraženih creva (IBS), konstipacija, dispepsija, ezofagitis, oboljenja jednjaka, mučnina, oboljenja centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ova bolest, kognitivni poremećaj, emezis, migrena, neurološko oboljenje, kardiovaskularno oboljenje, srčani zastoj, srčana aritmija, dijabetes i sindrom apneje (posebno izazvan administracijom opoida).

Dalje, jedinjenja predmetnog pronalaska pokazuju smanjenu QT prolongaciju, uveođenjem polarne grupe u R<3>, formule (I). Poznato je daje QT prolongacija ima potencijalno odgovorna za izazivanje fatalnih srčanih aritmija Torsades de Pointes (TdP). Sposobnost da produži potencijalno trajanje srčane akcije je identifikovana kao da se javl ja usled dejstva na na HERG kalijum kanal. Na primer, lek povuče sa tržišta zbog QT prolongacije, kao što je Cisparid i Terfenadin, su poznati kao snažni blokatori HERG kali jum kanala (Expert Opinion of PhanTiacotherapy.; 2, pp947-973, 2000). Inhibitoma aktivnost na HERG kanalu je procenjena za afinitet za HERG tip kalijumov kanala je ispitana proverom [<3>H]dofetilid vezivanja, koji može predvideti inhibitornu aktivnost na HERG kanalu (Eur.J.Pharmacol., 430, ppl47-148, 2001).

Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da pokažu manju toksičnost, dobru apsorpciju, distribuciju, dobru rastvorljivost, manji afinitet za vezivanje proteina, manje lek-lek interakcije i dobru metaboličku stabilnost.

Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

gde

Het predstavlja heterocikličnu grupu sa jednim atomom azota za koji se B direktno vezuje i sadrži 4 do 7 atoma ugljenika, pri čemu je data heterociklična grupa nesupstitusiana ili supstituisana sa 1 do 4 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a';

A predstavlja alkilen grupu sa 1 do 4 atoma ugljenika;

B predstavlja kovalentnu vezu ili alkilen grupe sa 1 do 5 atoma ugljenika, i data alkilen grupa je nesupstituisana ili supstituisana okso grupom kada R<3>predstavlja heterocikličnu grupu;

R1 predstavlja izopropil grupu ili ciklopentil grupu;

R2 nezavisno predstavlja atom halogena ili alkil grupu sa 1 do 4 atoma ugljenika; nije OJ ,2,3 ili 4; i

R<3>predstavlja

(i) cikloelkil grupu sa 3 do 8 atoma ugljenika i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 5 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a<2>, ili (ii) heterocikličnu grupu sa 3 do 8 atoma i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 5 supstitenata nezavisno odabrana iz

skupa koji čine supstituenti p,

dati supstituentiasu nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe;

dati supstitenti u<2>su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, amino grupe, hidroksi - supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe i alkoksi grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika; i

dati supstituenti ($ su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe, amino grupe, alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, amino-supstituisane grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika i karbamoil grupe,

Takođe, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutski preparat za lečenje obolenja koja su posredovana 5-HT4receptorom, kod sisara, a obuhvata administriranie obolelom subjektu terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Dalje, predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske preparate za lečenje sledećih oboljenja gastroezofagalno refluks oboljenja, gastrointestinalano oboljenja, poremećaj crevne pokretljivosti, ne-ulkusna dispepsije , funkcionalna dispepsije, sindroma nadraženih creva (IBS), konstipacije, dispepsije, ezofagitisa, oboljenja jednjaka, mučnine, oboljenja centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ove bolesti, kognitivnog poremećaja, emezisa, migrene, neurološkog oboljenja, kardiovaskularnih oboljenja, srčanog zatajivanja, srčane aritmije, dijabetesa i sindrom apneje ili sličnog, a sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja benzimidazolona formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.

Takođe. predemtni pronalaza se odnosi i na postupak lečenja sisara, uključujući čoveka, za lečenje stanja posredovanih 5-HT4 receptorom, kod sisara, a obuhvata administriranje obolelom subjektu terapeutski efikasnu količinu jedinjenja formule (I) ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli. Dalje, predmetni pronalazak se odnosi i na lečenje prethodno navedenih stanja. Predmetni pronalazak se odnosi još i na jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za proizvodnju leka za lečenje obolenja posredovanih dejstvom 5-HT4receptom. Stanja nastala posredstvom desjtva 5-HT4receptora su ona koja obuhvataaju prethodno navedena ili poremećaje kao stoje ranije dato.

Takođe. predemtni pronalazak se odnosi na jedinjenja sledeće formule (2-A') ili njihove soli:

gde

R<:1>predstavlja atom vodonika ili N-zaštitnu grupu;

Het predstavlja heterocikličnu grupu sa jednim atomom azota za koji se B direktno vezuje i sadrži 4 do 7 atoma ugljenika, pri čemu je data heterociklična grupa nesupstitusiana ili supstituisana sa 1 do 4 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a<1>;

A predstavlja alkilen grupu sa 1 do 4 atoma ugljenika;

B predstavlja kovalentnu vezu ili alkilen grupe sa 1 do 5 atoma ugljenika, i data alkilen grupa je nesupstituisana ili supstituisana okso grupom kada R<3>predstavlja heterocikličnu grupu;

R<3>predstavlja

(i) cikloalkil grupu sa 3 do 8 atoma ugljenika i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 5 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a , ili (ii) heterocikličnu grupu sa 3 do 8 atoma i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 5 supstitenata nezavisno odabrana iz

skupa koji čine supstituenti p,

dati supstituenti a<1>su nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe;

dati supstitenti a<2>su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, amino grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe i alkoksi grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika; i

dati supstituenti p su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe, amino grupe, alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, amino-supstituisane grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika i karbamoil grupe,

Detaljan opis pronalaska

Kao što je ovde korišćen, izraz "heterocikličan" ili "Het", odnosi se na heterocikličnu grupe sa jednim atomom azota i sa 4 do 7 atoma ugljenika, kao što je

Kao što je ovde korišćen, izraz "alkilen" u "A" označava prav ili razgranat lanac zasićenih radikala sa 1 do 4 atoma ugljenika, uključujući, ali ni i ogrnaičvajući se na metilen, etilen, n-propilen, izopropilen, n-butilen, izobutilen, sec-butilen, terc-butilen. "Alkilen" u "A"preferentno označava metilen grupu, etilen grupu ili propilen grupu; odnosno metilen grupu ili etilen grupe; a najbolje metilen grupu.

Kao stoje ovde korišćen, izraz "alkilen" u "B" označava prav ili razgranat lanac zasićenih radikala sa 1 do 5 atoma ugljenika, uključujući, ali ne i ogranučeno na metilen, etilen, n-propilen, izopropilen, n4jutilen, izobutilen, sek-butilen, terc-butilen, n-pentilen, izopentilen, sek-pentilen, terc-pentilen. "Alkilen" u "B" preferentno predstavlja alkilen grupu sa 1 do 4 atoma ugljenika; odnosno alkilen grupu sa 1 do 3 atoma ugljenika; još preferentnije metilen ili etilen grupu; a najpreferentnije metilen grupu.

Kao što je ovde korišćen, izraz "halogen" u "R<2>" odnosi se na fluoro, hloro, bromo i jodo, preferentno fluoro ili hloro.

Kao sto je ovde korišćen izraz "alkil" u "R<2>", "alkil" u "hidroksi-supstituisanoj alkil grupi" i "alkoksi grupa sa 1 do 4 atoma ugljenika" u "supstituentima a ", "alkil" u

"supstituentima |3"; i "alkil" u " hidroksi supstituisanim alkil grupama" i "amino-supstituisana alkil grupa" u "supstituentima |3" označava prav ili razgranat lanac zasićenih radikala sa 1 do 4 atoma ugljenika. ali nije ograničen na metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, sek4wtil, ten>butil.

Kao što je ovde korišćen, izraz "cikloalkil" u "R<3>" označava cikloalkil grupu sa 3 do 8 atoma ugljenika, kao što je ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil i itd.

Kao što je ovde krišćen izraz "heterocikličan" u "R<3>", označava heterocikličan prsten koji sadrži jedan ili više heteroatoma u prstenu, preferentno ima 2 do 6 atoma ugljenika i 1 do 3 heteroatoma. uključujući aziridinil, azetidinil, piperidinil, morfolinil (uključujući morfolino). pirolidinol, pirazolidinil, piperazinil, tetrahidropirazolil, pirazolinil, tetrahidropiranil i itd.

Izraz "lečiti" kao stoje ovde korišćen, odnosi se na promenu , ublažavanje, inhibiranje napredovanja bolesti ili poremećaja ili na njihovu preventvu, na koje se ovaj izraz odnosi, ili jedan ili više simptoma ovih oboljenja ili stanja. Izraz "lečenje" kao što je ovde korišćen. odnosi se na sam čin lečenja, kao što je "lečiti" neposredno ranije i definisan.

Preferentno jedinjenja formule (1) u ovom slučaju je ono gde Het predstavlja heterociklične grupe odabrane od

gde je heterociklična grupa nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine a<1>supstituenti; i

A predstavlja alkilen grupu sa 1 do 3 atoma ugljenika.

Referentnije je jedinjenje formule (I) predmetnog pronalaska . gde

Hetpredstavlja grupu formule

, i ova je grupa nesupstituisana ili supstituisana

jednim supstituentom odabranim iz skupa koji čine a1 supstituenti;

A predstavlja alkilen grupu sa 1 do 2 atoma ugljenika.

B predstavlja kovalentnu vezu ili alkilen grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, i data alkilen grupa j e nesupstituisana ili supstituisana okso grupom kada je R<3>, heterociklična grupa;

R<2>nezavisno predstavlja atom halogena ili alkil grupu sa 1 do 2 atoma ugljenika, m je 0, 1 ili 2; i

R<3>predstavlja

(i) cikloalkil grupu sa 4 do 7 atoma ugljenika i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 3 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a , ih (ii) heterocikličnu grupu sa 4 do 7 atoma i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 3 supstitenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti p, Takođe preferentno jedinjenje formule (I) predmetnog pronalaska je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so gde Het predstavlja grupu formule

, i ova je grupa nesupstituisana ili supstituisana

jednim supstituentom odabranim iz skupa koji čine a<1>supstituenti;

A je metilen grupa;

B predstavlja kovalentnu vezu ili alkilen grupe sa 1 do 2 atoma ugljenika,

R<1>je izopropil grupa;

R<2>je nezavisno atom fluora, hlora ili metil; i

R<3>predstavlja

(i) cikloalkil grupu sa 5 do 7 atoma ugljenika i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 2 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine supstituenti a , ih (ii) heterocikličnu grupu sa 5 do 7 atoma i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 2 supstitenata nezavisno odabrana iz

skupa koji čine supstituenti p,

dati a2 supstitenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, amino grupe i alkoksi grupe sa 1 do 2 atoma ugljenika; i

dati p supstituenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 2 atoma ugljenika, karboksilne grupe, amino grupe, alkil grupe sa 1 do 2 atoma ugljenika, amino-supstituisane grupe sa 1 do 2 atoma ugljenika i karbamoil grupe,

Sledeće preferentno jedinjenje formule (I) predmetnog pronalaska je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so gde

Hetpredstavlja grupu formule

A je metilen grupa;

B je metilen grupa;

R1 je izopropil grupa;

R<2>je atom fluora; m je 0 ili 1; i

R3 predstavlja

(i) cikloalkil grupu sa 5 do 6 atoma ugljenika i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 2 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine a<2>supstituenti, ili (ii) heterocikličnu grupu sa 5 do 6 atoma i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 2 supstitenata nezavisno odabrana iz

skupa koji čine p supstituenti,

dati a<2>supstitenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe, i dati p supstituenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupei amino grupe.

Naredno preferentno jedinjenje formule (I) predmetnog pronalaska je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde

Hetpredstavlja grupu formule

A je metilen grupa;

Bje metilen grupa,

R1 je izopropil grupa;

R2 je atom fluora; mje 0; i

R3 predstavlja

(i) cikloheksil grupu supstituisanu sa 1 do 2 supstituenata nezavisno odabrana od hidroksi grupe ili amino grupe, ili (ii) heterocikličnu grupu od 6 atoma i data heterociklična grupa je supstituisana

hidroksi grupom ili amino grupom.

Sledeće preferentno jedinjenje formule (I) predmetnog pronalaska je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde

Hetpredstavlja grupu formule

A jc metilen grupa;

Bje metilen grupa,

R<1>je izopropil grupa;

R<2>je atom fluora; mje 0; i

R<3>predstavlja

(iii) cikloheksil grupu supstituisanu sa 1 do 2 hidroksi grupe (posebno dihidroksicikloheksil) ili (iv) heterocikličnu grupu supstituisanu sa 1 do 2 hidroksi grupe (posebno

hidroksitetrahidropiranil).

Ujedinjenjima formule (I) ili farmaceutski prihvatljivoj soli; R<2>preferentno predstavlja atom fluora, hlora, metilen grupu ili etilen grupu; preferentnije atom fluora, Mora, metil grupu; a najpreferentnije atom fluora.

Ujedinjenjima formule (I) ili farmaceutski prihvatljivoj soli; mje preferentno 0, 1 ili 2; bolje 0 ili 1; najbolje 0.

Preferentna individualna jedinjenja ovog pronalaska je: N-( (l-[(4dridroksitetrahidro-2H-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-lHd^enzimidazol-l-karboksamid; N-( {l-[(r/"(7/75'-l,4-dihidroksheksil)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-1 H-benzimidazol-1 -karboksamid;

N-(11 -[( cis-\,4-dihidroksiheksil)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-1 H-benzimidazol-1-karboksamid; i

6-fluoro-N-( {l-[(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l H-benzimidazol-1 -karboksamid,

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

Preferentno jedinjenje formule (2-A') predmetnog pronalaska je ona gde je R'\ atom vodonika ili z-butoksikarbonil grupa;

Hetpredstavlja grupu formule

A je metilen grupa; B je metilen grupa, i

R3 je hidroksitetrahidropiranil ili dihidroksicikloheksil.

Opšta sinteza

Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se dobiti različitim postupcima poznatim za dbijanja ove vrste jedinjenja, na primer, kao što je prikazana u sledećim reakcionim Shemama. Osim ako je drugačije naznačeno, Rl do R3 i m u sledećim reakcionim Shemama i diskusima asu kao što jc prethodno naznačeno. Izraz "zaštitna grupa" kao što je ovde dato, označava hidroksi ili amino zaštitnu grupu koja je odabrana od uobičajenih hidroksi i amino zaštitnih grupa opisanih u Protective Groups in Organic Svnthetis, T.VV.Greene et al. (John Wiley & Sons, 1991); Svi polazni materijali u opštim sintezama u daljem tekstu mogu biti komercijalno dostupni ili se mogu dobiti pomoćz uobičajenih metoda poznatim prosečnom stručnjaku.

Jedinjenje formule (I), gde je Het,

Je dobij eno prema sledećoj sintezi.

1 jedinjenja formule (I), gde je Het drugo nego

, mogu se dobiti na slične

načine ili prema postupcima poznatim prosećnom stručnjaku.

U Koracima la, lb, ld, 2a, 2c, 3a, 3c, 3d u sledećim Shemama, svaka reakcija se preferentno izvodi u orisustvu baze.Ne postoji posebno ograničenje za vrstu korišćene baze i može se koristiti svaka baza koja se obično koristi u reakcijama ove vrste. Baze koje se mogu kroistiti su. na primer, hidroksidi alkalnih metala, kao što je litijum hdroksid, natrij um hidroksid i kalijum hidroksid; karbonati alkalnih metala kao stoje natrij um karbonat i kalijum karbonat; hidridi alkalnih metala, kao stoje natrij um hidrid, kalijum hidnd i litijum hidnd; alkoksidi alkalnih metala, kao što je natrijum metoksiđ, natrij um etoksid, kalijum t-butoksid i litijum metoksid; alkil litijumi kao što je butil litijum imetil litijum; amidi litijuma, kao što su laitijum dietilamidi, litijum diizopropilamid i litijum bis(trimetilsilil)amid; hidrogenkarbonati alklanih metala, kao što je natrijum bikarbonat i kalijum bikarbonat; tercijemi organski amini, kao stoje trietilamin, dimetilanilin, piridin, 4-dimetilaminopirolidin, 1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-en, l,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en i N,N-diizopropiletilamin.

Sinteza benzimdazolona ( 1- A) :

Sledeća reakciona Shema ilustruje dobijanje jedinjenja benzimidazolona formule 1 -A:

U prethodnim formulama, Z je "halo", kao stoje atom hlora, broma ili joda.

Korak la

U Koraku 1 a, jedinjenja amina formule 1-3 se može dobiti reduktivnom animacijom jedinjenja alkanona (sa 1 do 4 atoma ugljenika), sa jedinjenjem amina formule 1-1 u prisustvu ili odsustvu redukcionog agensa ili metalnog agensa u inertnom rastvaraču.

Reakcija se obično i preferentno odvija u prisustvu rastvarača. Ne postoji posebno ograničenje u vezi prirode rastvarača koji se koristi, pod uslovom da nema štetnih efekata na reakciju ili reagense i da može da rastvori reagens, do određenog stepena. Primeri odgovarajući vodenih ili nevodenih organskih rastvarača su: alkoholi, kao što je metanol. etanol ili izopropanol; etri, kao što je tetrahidrofuran (THF), dimetoksietan ili dioksan; acetonitril; N,N'-dimetilfomamid; dimetilsulfoksid; sirćetna kiselina i halogenizovani ugljovodonici, kao što je dihlormetan, dihloretan ili hloroform.

Reakcija se može odigrati u širokom opsegu temperatura i precozna temperature reakcije nije kritična za pronalazak. Preferantna temperatura reakcije zavisiće od faktora kao što su priroda rastvarača i upotrebljeni polazni materijali i reagensi. Međutim, generalno, uobičajeno je da se reakcija sa redukujućim agensima izvodi na temperaturi od -78°C do 1 0()"Cm odnosno od -20°C do 60°C. Vreme potrebno za reakciju može da varira, u zavisnosti od brojnih faktora, naročito temperature reakcije i prirode reagenasa i upotrebljenih rastvarača. Međutim, pod uslovom da se reakcija odvija pod preferentnim uslovima naznačenim u prethodnom tekstu, obično je doboljan period od 5 minuta do 1 nedelje, preferentno 20 minuta do 24 sata. U slučaju reakcije sa metalnim reagensom, praktično je da se reakcija izvodi na temperaturi od 20°C do 100°C, preferentno od oko 20°C do 60°C u trajanju od 10 minuta do 48 sati, preferentno 30 minuta do 24 sata.

Odgovarajući redukujući reagensi su oni koji se obično koriste za redukciju, uključujući na primer, natrijum borhidrid, natrijum cijanoborhidrid ili natrijum triacetoksiborhidrid.

Kombinacija metalnog reagensa i gasnog vodonika se takođe može primeniti kao reagens za redukciju. Primeri odgovarajućih metalnih reagenasa su paladijum-ugljenik, paladijumhidroksid-ugljenik, platinaoksid, platina-ugljenik, rutenijum-ugljenik, rodijum-aluminijumoksid i tris[trifenilfosfin]rodijumhlorid. Redukcija sa metalnim reagensom se mo\e izvesti u atomsferi vodonika pri pritisku od 1 do 100 atm, preferentno od 1 do 10 atm.

Ova redukcija se može izvesti posle formiranja odgovarajućeg enamna jedinjenja alkanona ili imina jedinjenja alkanona u reakciono inertnom rastvaraču, kao što je benzen, toluen ili ksilen, na temperaturi od 10 do 130°C, u trajanju od 1 sata do 1 nedelje.

Alterantivno, jedinjenja formule 1-3 se mogu dobiti alkilovanjem jedinjenja formule 1-1 pomoću alkil halida formule R-Z<1>, gde je Z, halo (halo je hloro, bromo ili jodo) pod istim uslovima kao što je prethodno dat (Korak ld), preferentno u prisustvu baze.

Korak lb

U ovom koraku, jedinjenje formule 1-3 se može dobiti alkilovanjem jedinjenja formule 1 -2 sa jedinjenjem R1-NH2.

Reakcija se može odigrati u širokom temperaturnom opsegu, a precizna temperatura reakcije nije kritična za pronalazak. Preferentna temperature reakcije zavisiće od faktora kao što je priroda rastvarača i polaznih materijala ili upotrebljenih reagenasa. Međutim, generalno govoreći, praktično je izvođenje reakcije na temperaturi od 0°C do 150°C, bolje od 20°C do 120°C. Vreme potrebno za reakciju može takođe veoma da varira, u zavisnosti od brojnih fakotra. naročito temperatura reakcije i priroda reagenasa i korišćenih rastvarača. Međutim, pod uslovom da se reakcija odvija pod preferentnim uslovima navedenim u ranijem tekstu, obično je dooljan period od 5 minuta do 48 sati, preferentno od 30 minuta do 48 sata.

Korak lc

Jedinjenja formule 1-4 može se dobiti redukcijom jedinjenja formule 1-3 sa odgovarajućim reagensom za redukciju, kao stoje natrijum borhidrid (NaBH4),litijumaluminijum hidrid (LAH), diboran, vodonik i metalni katalizator, gvožge i hlorovodonična kiselina, stano hlorid i hlorovodonična kiselina, zink i hlorovodonična kiselina, mravlja kiselina, boran dimetilsulfoksidni kompleks, boran-THF (preferentno vodonik i metalni katalizator) obično u višku, u reakciono inertnom rastvaraču kao što je metanol, etanol, propanol, butanol, tetrahdrofuran (THF) (Preferentno metanol ili etanol), generalno na temperaturi od -78°C do 60°C, preferentno od oko 0°C do 45°C u trajanju od 5 minuta do 24 sata, preferentno 60 minuta do 12 sati.

Korak ld

IJ koraku ld, jedinjenja amina formule 1-3 se može dobiti reduktivnom aminacijom jedinjenja alkanona, jedinjenjem amina formule 1-5 pod sličnim uslovima kao z koraku 1 a.

Alternativno, jedinjenje formule 1-4 se može dobiti alkilovanjem jedinjenja formule 1 - 5, jedinjenjem formule Z-R<1>.

Reakcija se može odigrati u širokom temperaturnom opsegu, a precizna temperatura reakcije nije kritična za pronalazak. Preferentna temperature reakcije zavisiće od faktora kao što je priroda rastvarača i polaznih materijala ili upotrebljenih reagenasa. Međutim, generalno govoreći, praktično je izvođenje reakcije na temperaturi od 0°C do 120°C, bolje od 0°C do 70°C. Vreme potrebno za reakciju može takođe veoma da varira, u zavisnosti od brojnih fakotra, naročito temperatura reakcije i priroda reagenasa i korišćenih rastvarača. Međutim, pod uslovom da se reakcija odvija pod preferentnim uslovima navedenim u ranijem tekstu, obično je dooljan period od 5 minuta do 48 sati, preferentno od 30 minuta do 48 sata.

Korak le

Jedinjenje formule 1-A može se dobiti ciklizacijom jedinjenja formule 1-4 odgovarajućim regensom za karbonilaciju kao što je karbonildiimidazol, trihlormetil hlorformat, trifozgen i urea (preferentno karbonildiimidazol), obično u višku, u reakciono inertnom rastvaraču kao što je dimetoksietan, dioksan, acetonitril, N,N'-dimetilformamid, dimetilsulfoksid, dihlormetan, dihloretan, hloroform ili tetrahidrofuran (THF) (preferentno THF), generalno na temperaturi od -78°C do 120°C, preferentno od oko 20°C do 100"C u trjanju od 5 minuta do 24 sata, preferentno od 60 minuta do 12 sati.

Alternativno, jedinjenje 1-A (gde je R1, izopropil prikazan u Shemi lb), mož se dobiti od jedinjenja alkenil-benzimidazolona formule 1-6 prema sledećoj Shemi lb, pod reakcionim uslovima poznatim prosečnom stručnjaku.

Sinteza Amino grupe ( 2- A) :

Sledeća reakciona Shema ilustruje dobijanje piperidina formule (2-A).

U prethodno datim formulama, PG je zaštitna grupa. Izraz "zaštitna grupa", kao što je ovde korišćen, označava amino zaštitne grupe opisane u Protective Groups on Organnic Svnthesis. T.W. Greene et al. (John Wiley & Sons, 1991). Tipične amino zaštitne grupe su benzil, C2H50(C=0)-, CH3(C=0)-, terc-butildimetilsilil (TBS), terc-butildifemlsilil benziloksikarbonil označen kao Z i terc-butoksikarbonil predstavljen kao t-Boc ili Boe.

Jedinjenje formule 2-2 može se dobiti alkilovanjem ili reduktivnom aminacijom jedinjenja formule 2-1 sa jedinjenjem formule alkil-R<3>, halo-R<3>ili H(C=0)-R<3>pod uslovima sličnim onim u Koraku la. kada -B-R3 predstavlja 4-hidroksitetrahidropiranilmetil, ovo alkilovanje se može izvesti pomoću l,6-dioksaspiro[2.5]oktana.

Zatim, nakon ove reakcije sledi uklanjanje zaštite kako bi se dobilo jedinjenje formule 1 -A. Ovo uklanjanje zaštite se može izvesti prema procedurama poznatim prosečnom stručnjaku pri čemu se dovija jedinjenje formule 2-A.

Alternativno, jedinjenje formule (2-A) se može dobiti od jedinjenja piperidina formule 2-3 prema sledećoj Shemi 2b pod reakcionim uslovima poznatim prosečnom stručnjaku.

Na primer, u koraku 2c, jedinjenje 2-4 se može dobiti alkilovanjem ili reduktivnom animacijom po, u suštini, istim uslaovim kao što je opisano u koraku 2a u Shemi 2a- Zatim, redukcija u koraku 2d se može izvesti u prisustvu reukcionog reagensa kao što je LiAlI-Lu reakciono inertnom rastvaraču, kao što je THF. Odgovarajući opseg temperatura kreće se od - 78"C do 100°C, preferentno od oko -30°C do oko 40°C.

Jedinjenja formule (1-A) mogu se pripremiti od piperidina formule 2-5 prema sledećoj Shemi 2c pod reakcionim uslovima poznatim prosečnom stručnjaku.

(A1 je kovalentna veza ili C\.:, alkilen)

Na primer u koraku 2e, jedinjenja 2-6 se mogu pripremiti alkilovanjem ili reduktivnom animacijom pod sličnim uslovima kao što je opisano u Koraku 2a u Shemi 2a. Zatim, redukvija u koraku 2f se može izvesti u prisustvu H2i katalizatora hidrogenizacije kao što je PtO?u reakciono inertnom rastvaraču kao što je THF. Odgovarajući opseg temperatura kreće se od -78°C do 100°C, preferentno od oko -30°C do oko 40°C.

Sinteza jedinjenja formule ( I) :

U sledećoj reakcionoj Shemi ilustrovano je dobijanje benzimidazolona formule I.

Korak 3 a:

Jedinjenje formule 3-1 se može dobiti karbonilacijom jedinjenja formule 1-A, jedinjenjem formule 2-A u prisustvu odgovarajućeg agensa za karbonilaciju kao što je karbonildiimidazol, trihlormetil hloroformat, trifozgen, 4-nitrofenil hlorformat ili urea (preferentno trifozgen), obično u vušku, u reakciono inertnom rastvaraču kao što je dimetoksietan, dioksan, acetonitril, N,N'-dimetilfonnamid, dimetilsulfoksid, dihlonuetan, dihloretan, tetrahidrofuran (THF), benzen, toluen ili hlroform (referentno TIIF), generalno na temperaturi od -78°C do 120°C, preferentno od 0°C do 90°C u trajanju od 5 minuta do 24 sata, preferentno 60 minuta do 12 sati.

Korak 3b:

Jedinjenje formule 3-2 je dobijeno uklanjanjem zaštite sa jedinjenja formule 3-1, kiselinom kao stoje hlorovodonik,

Korak 3c:

Jedinjenje formule (Ia) se može dobiti alkilovanjem ili reduktivnom aminacijom pod uslovima sličnim onim opisanim u Koraku 2a u Shemi 2a.

Alternativno, jedinjenje formule (Ia) se može dobiti od lakilbcnzimidazolona prema sledećoj Shemi 3b pod reakcionim uslovima poznatim prosečnom stručnjaku.

na primer, u koraku 3d, jedinjenje formule 1-A može da reaguje sa jedinjenjem formule 2-A u prisustvu reagensa za karbonilaciju, kao što je karbonildiimdazol, trihlormetil hloro format, trifozgen, 4-nitrofenil hlorformat iliurea (preferentno trifozgen), obično u višku u reakciono inertnom rastvaraču kao što je dimetoksietan, dioksan, acetonitril, N,N'-dimetilformamid, dimetilsulfoksid, dihlormetan, dihloretan, tetrahidrofuran (THF), benzen, toluen ili hlroform (referentno THF), generalno na temperaturi od -78°C do 120°C, preferentno od 0°C do 90°C u trajanju od 5 minuta do 24 sata, preferentno 60 minuta do 12 sati.

Jedinjenja formule 7 se mogu dobiti prema reakciji pooznatoj prosečnom stručnjaku. Na primer, jedinjenje formule 7 se može dobiti od jedinjenja formule 3 prema sledećoj Shemi 3c pod reakcionim uslovima poznatim prosečnom stručnjaku.

U prethodno datim Shemama la do 3c, primeri odgovarajućih rastvarača su smeše bilo koja dva ili više od rastvarača opisanih u svakom koraku.

Jedinjenja formule (I) i prethodno navedeni intermedijeri, mogu se dobiti, izolovati i prečistiti prema uobičajenim procedurama, kao što je destilacija, reklistalizacija ili hromatografsko prečišćavanje.

Optički aktivna jedinjenja predmetng pronalaska se mogu pripremiti na nekoliko načina. Na primer, optički aktivna jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu dobiti hromatografskim razdvjanjem, enzimskom rezolucijom ili frakcionom kristalizacijom krajnjeg proizvoda.

Nekoliko jedinjenja predmtnog pronalaska poseduje asimetrične centre. Tako, jedinjenja se mogu javiti kao odvojeni (+) i (-) optički aktivni oblici, kao i u obliku arcemata. Predmetni pronalazak obuhvata sve ove oblike. Individualni izomeri se mogu dobiti prema poznatim metodama, kao što je optički selektivna reakcija ili hromatografsko razdvajanje za dobijanje krajnjeg proizvoda ili njegovog intermedijera.

Predmet pronalaska takođe obuhvata izotopski obeležena jedinjenja, koja su identična onim navedenim za formulu (I), ali sa tom razlikom što je jedan ili više atoma zamenjeno atomom atomske mase ili amesnog broja kojise razlikuje od atomske mase masenog broja kojis e obično može naći u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu inkorporirati ujedinjenja pronalaska su izitopi, vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što je 2H, 3H, 13C, 1<4>C, 15N, 180, 170, 31P, 32P,<3>5S, 1<8>F, i 3<6>C1. Jedinjenja predmetnog pronalaskam, njihovi prolekovi, farmaceutski prihvatljivi etri ovih jedinjenja i farmaceutski prihvatljive soli ovih jedinjenja, estara ili prolekova koji sadrže prethodno navedene izotope i/ili druge izotope drugih atoma su takođe obuhvaćeni predmetom ovog pronalaska. Određena izotopski obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska, na primer ona u koja su inkorporirani radioaktivni izotpi kao stoje<3>H i<l4>C, su korisni za testiranje distribucije leka i/i li supstrata u tkivima. Izotopi tricijuma, tj.<3>H i ugljenika-14, tj. ?c su posebno prefrentni zbog lakoće prikazivanja i detektivnosti. Dalje, supstitucija težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H , može imati bolje terapeutsko dejstvo kao rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, povećanog ///vivopolu-života ili smanjenog doznog režima i, shodno tome, da budu preferentni u nekim slučajevima. Izotopski obeležena jedinjenja formule (I) predmetnog pronalaska i njihovi prolekovi se generalno mogu dobiti prema proceduri opisanoj u prethodno datim Shemema i/ili Primerima i Dobijanjima u daljem tekstu, i to zamenom izotopski obeleženog reagensa za ne-izotopksi obeležen reagens.

Predmetni pronalazak obuhvata i oblike soli jedinjenja (I) kao stoje dobij eno.

Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja formule (I) obuhvataju i njihove adicione soli (uključujući i njihove disoli) kiselina.

Farmaceutski prihvatljive netoksične soli jedinjenja formule (I) se mogu dobiti konvencionalnim tehnimama, na primer, reakcijom datog jedinjenja sa stehimetrijskom količinom odgovarajućeg hidroksida alkalnog ili zemno-alklanog metala (natrijum, kalijum, kalcij um i magenzijum) ili alkoksida u vodi ili odgovarjućem organskom rastvaraču kao stoje etanol, izopropanol, njihove smeše i slično.

Baze koje su korišćene za dobijanje farmceutski prihvatjivih adicionih soli baza kiselih jedinjenja predmetnog pronalaska formule (I) su one koje prave netoksične soli adicionih soli baza, tj. Soli koje sadrže farmaceutski prihvatljvie katjone, kao što je adenin, arginin, citozin. lizin, benctamin (tj. N-benzil-2- feniletilamin), benzatin (tj., N,N-dibenziletilencdiamin), hol ine, diolamin (tj., dietanolamin), etilenediamin, glukozamin, glicin, gvanidin, guanin, meglumin (tj., N-metilglukamin), nikotinamid, olamin (tj., etanolamin), omitine, prokame, prolin, piridoksin, serin, tirozin, valin i trometamin(tj., tris ili tris(hidroksimetil)aminometan). Adicione soli bazam se mogu dobiti prema konvencionalnim procedurama.

I pored toga što su određena jedinjenja predmetnog pronalaska, bazna jedinjenja, ona mogu formriati šitok opseg različiti soli sa različitim neorganskim i organskim kiselinama.

Kiseline koje se koriste za dobijanje farmaceutski prihvatljivih adicionih soli kiselina baznih jedinjenja predmetnog pronalaska formule (I) su one koje formiraju netoksične adicione soli kiselina, tj., soli koje sadrže farmaceutski prihvatljive anjone, kao što je hlorid. bromid, jodid, nitrat, sulfat ili bisulfat, fosfat, ili kiselin fosfat, acetat, laktat, citrat ili kiseli citrat, tartart ili bi-tartarat, sukcinat, malat, fumarat, glukonat, saharat, benzoat, metansulfonat, etansuflonat, benzensulfonat, p-toluensulfonat, adipat, aspartat, kamzilat, edizilat (tj. 1,2-etandisulfonat), astolat (tj. laurilsulfat), gluceptat (tj. glukoheptonat), glukonat, 3-hidroksi-2-naftoat, ksionofoat (tj., l-hidroksi-2-naftoat), izetionat,(tj., 2-hidroksietansulfonat), mukat(tj., galaktarat), 2-nafzilat(tj., naftalensulfonat, stearat, holat, glukuronat, glutamat, hipurat, laktobionat, lizinat, maleat, mandelat, napadizilat, nikatinat, poligalakturonat, salicilat, sulfosalicilat, tanat, triptofanat, borat, karbonat, oleat, ftalat i pamoat (tj., 1. l'-metilen-bis-(2-hidroksi-3-naftoat). Od navcdencih, prcferentni su edizilat (uključujući hemi-edizilat) i hidrohlorid. Soli adicionih kiselina se mogu dobiti prema konvencionalnim procedurama. Pregled odgovarajućih soli je dat u Bergeet al,J. Pharm. Sci., 66, 1-19, 1977. Predmetni pronalaza obuhvata soli jedinjenja formule (2-A') kao što su dobijena.

Jedinjenja formule (2-A') mogu formirati katjone. Katjoni jedinjenja formule (2-A') se mogu dobiti prema uobičajenim tehnikama, na primer, reakcijom jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće hidroksida alklanog ili zemnoalkalnog metala (natrijum, kalijum, kalcij um i magnezij um) ili alkoksida u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je etanol, izopropanol, njihove smeše i slično.

Baze koje se koriste za dobijanje adicionih soli baza kiselih jedinjenja formule (2-A') su one koje formiraju adicione soli baza. Ovakve adicione soli baza su farmaceutski prihvatljive adicione soli baza kao što je prethodno opisano i soli koje sadrže katjone kao što je trietilamin, piridin i amonijak.

Jedinjenja formule (2-A') mogu da formiraju širok spekat različitih soli sa različitim neorganskim kiselinama.

Kiseline koje se koriste za dobijanje adicionih soli kiselina jedinjenja formule (2-A') su one koje formiraju adicione soli kiselina. Ove kiseline su farmacutski prihvatljive adicione soli kiselina i soli koje sadrže anjone, kao stoje cijanid.

Predmetnom ovog pronalaska su takođe obuhvaćeni i bio-prekursori (takođe poznati pro-lekovi) jedinjenja formule (I). Bio-prekursor jedinjenja formule (I) je njegov hemijski derivat koji se lako konvertuje nazad u osnovno jedinjenje formule (I) u biološkim sistemima. Posebno, biokursor jedinjenja formule (I) je konvertovan nazad u osnovno jedinjenje formule (I) nakon što je bioprekursor administrirali, absorbovan od stane subjekat. npr. čoveka. Na primer. moguće je napraviti bio-prekursor jedinjenja formule (I) gde jedan ili oba i L i W sadrže hidroksi grupe stavranjem estra na hidroksi grupi. Kada samo jedan od L i W sadrži hidroksi grupu, samo moguć je samo mono-estar. Kada i L iW sadrže hidroksi, moguće je dobiti mono- i di-estre (koji mogu biti isti ili različiti). Tipični estri su jednostavni alkanoatni eastri, kao što su acetat, propionat, butirat, itd. Dodatno, kada L ili W sadrži hidroksi grupu, bio-prekursori se mogu dobiti konvertovanjem hidroksi grupe u aciloksimetil derivat (npr. pivaloiloksimetil derivat) reakcijom sa aciloksmetil halogenidom (npr. pivaloiloksimetil hlorid).

Kada jedinjenja formule (I) predmetnog pronalaska modu da formiraju solvate kao što su hidrati, ovi solvati su obuhvaćeni predmetom ovog pronalaska.

Jedinjenja formule (I) sa jednim ili više asimetričnih atoma ugljenika mogu da se jave u dva ili više izomerna oblika. Kada jedinjenje formule (I) sadrži alkenil ili alkenilen grupu, mogući su gemoetrijski cis/trans (ili Z/E) izomeri. Kada jedinjenje sadrži, na primer, keto ili oksm grupu ili aromatičnu grupu, može se javiti tautomerni izomerizam ('tatomerizam'). Sledi da jedno jedinjenje može da pokaže jednu ili više vrsta izomerizma.

Obuhvaćeni predmetom ovog pronalaska su svi izomeri, geometrijski izomeri i tautomerni oblici jedinjenja formule (I), ova jedinjenja pokazuju više od jedne vrste izomerizma i smeše jednog ili više njih. Takođe su obuhvaćene adicione soli kiselina ili baza gde je kontra jon optički kativan, na primer D-laktatili lizin ili racemski, na primer, DL-tartarat ili DL-arginin.

Cis/trans izomeri se mogu razdvojiti konvencionanim tehnikama dobro poznatim prosečnom stručnjaku, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom.

Konvencionalne tehnike za dobijanje/izolovanje individualnih enantiomera podrazumevaju hiralnu sintezu od odgovarajućih optički aktivnih prekursora ili razdvajanje racemata (ili racemata solu ili derivata) pomoću, na primer, hiralne hromatografije pod viskoim pritiskom (HPLC).

Alternativno, racemat (ili racemski prekursor) može da reaguje sa odgovarajućim optički aktivnim jedinjenjem, na primer, alkoholom ili u slučaju kada jedinjenje formule (I) sadrži kiselinsku ili baznu grupu, kiselina ili baza kao sto je vinska kiselina ili 1-feniletilamin. Dobijena dijastereoizmerna smeša se može razdvojiti hromatografijom i/ili frakcionom kristalizacijom i jedan ili oba dijastereoizoemra se mogu konvertovati u čiste enantiomere postupcima dobro poznatim prosečnom stručnjaku.

Stereoizomerni konglomerati se mogu razdvojiti konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnom stručnjaku-videti, na primer, "Stereochemistrv of Organic Compounds" by E L Eliel (Wiley, New York, 1994).

Jedinjenja pronalaska koja su za faarmaceutsku primenu mogu se adminisgtrirati kao kristalni ili amorfni proizvodi. Mogu se dobiti, na primer, kao čvrsti kolači, praškovi ili filmovi primenom metoda, kao što je na primer, taloženje ili sušenje uparavanjem. U ovu svrhu se takože može primeniti sušenje u mirkotalasna pećnici ili radiofrekvencom.

Mogu se administrirati sami ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih jedinjenja pronalaska ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih lekova (kao i sa njihovom kombinacijom). Generalno, administriraće se kao formulacija u kombinaciji sa jednim ili više farmeeutski prihvatljivih eksipijenasa. Izraz "eksipijens" je ovde korišćen, da opiše sve druge sastojke osim jedinjenja pronalaska. Izbro eksipijenasa će u mnogome zavsiti od faktora kao što je način administracije, efekat eksipijensa na rastvorljivost i stabilnost i prirode doznog oblika.

Farmaceutski preparati korisni za distribuciju jedinjenja predmetnog pronalaska i metoda za njihovo dobijanje će biti očigledni za prsečnog stručnjaka. Ovi preparati i metode za njihovod dobijanje mogu se naći na primer, u 'Remington's Pharmaceutical Sciences', 19th Edition (Mack Publishing Companv, 1995).

ORALNA ADMINISTRACIJA

Jedinjenja pronalaska se mogu administrirati, oralno. Oralna administracija može da obuhvati gutanje, tako da jedinjenje ulazi u gastrointestinalni trakt ili se može primeniti bukalna ili sublingvalna administracija, pri čemu jedinjenje ulazi u krvotok direktno iz usta.

Formulacije pogodne za oralnu administraciju uključuju čvrste formulacije kao što su

tablete, kapsule sa česticama, tečnosti, ili praškovi, pilule (uključujući one napunjene tečnošću), tablete za žvakanje, multi- i nano- čestice, gelovi, črvsti rastvori, lipozomi, filmovi (uključujućii muko-adhezive), ovule, sprejevi i tečne formulacije.

Tečne formulacije podrazumevaju suspenzije, rastvore, sirupe i eliksire. Ove formulacije se mogu upotrebiti i kao punjenja za meke i tvrde kapsule i obično sadrže nosač, na primer. vodu, etanol, polietilen glikol, propilen glikol, metilcelulozu ili odgovarajuća ulja i jedan ili više emulgatora i/ili agenasa za suspendovanje. Tečne formulacije se takođe mogu pripremiti rekonstitucijom čvrste formulacije , na primer, iz vrećice.

Jedinjenja pronalaska se takođe mogu koristiti u brzo-rastvarajućim, brzo-razlažućim doznim oblicima kao oni opisani u Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981-986 by Liangand Chen (2001).

Za dozne oblike u vidu tableta, u zavisnosti od doze, lek može da čini od 1 tež.% do 80 tež.% doznog oblika, odnosno od 5 tež. % do 60 tež. % doznog oblika. Pored leka, tableta obično sadrži dezintegrant. Primeri dezinetgranata su škrobni natrijum glikolat, natrijum karboksimetil celuloza, kalcijum karboksimetil celuloza, natrijum kroskarmeloza, krospovidon, polivinilpirolidon, metil celuloza, mikrokristalna celuloza, niža alkil-supstituisasana hidroksipropil celuloza, škrob, preželatinizirani škrob i natrijum alginat. Generalno, dizintegranti čine od 1 tež.% do 25 tež.%, preferentno od 5 tež.% do 20 tež.% doznog oblika.

Vezivno sredstvo se generalno koristi da doprinese kohezivnim kvalitetima formulacije

tableta. Odgovarajuća vazivna sredstva su mikrokristalna celuloza, želatin, šećeri, polietilen glikol, prirodne i sintetičke gume, polivinilpirolidon, preželatinizirani škrob, hidroksipropil

celuloza i hidroksipropil metilceluloza. Tablete takođe mogu da sadrže razblaživače, kao što je laktoza (monohidrat, monohidrat osušen rasrpšivanjem, anhidrovan i slično), manitol, ksilitol, dekstroza, sukroza, sorbitol, mikrokristalna celuloza, škrob i dvobazni kalcijum fosfat dihidrat. Tablete mogu takođe da sadrže površinski aktivne supstance, kao što je natrijum lauril sulfat i polisorbat 80 i glidante kao što je silicij um dioksid i talk. Kada je prisutna, površinski aktivna supstanca čini od 0.2 tež. % do 5 tež. % tablete, a glidant čini od 0.2 tež.% do 1 tež.%

tablete.

Tablete takođe sadrže sredstva za klizenje, kao što je magenzijum stearat, kalcijum stearat, cink stearat, natirjum stearil fumarat i smeše magnezijum stearata i natrijum lauiril sulfata. Sredstva za klizenje gneralno sadrže od 0.25 tež.% do 10 tež.%, preferentno od 0.5 tež.% do 3 tež.% tablete.

Drugi mogući dodaci su ant-oksidanti, boje, aromati, konzervansi i agensi za maskiranje ukusa.

Primer tableta sadrži do oko 80% leka, od oko 10% tež.% do oko tež.% vezivnog sredstva, od oko 0 tež.% do oko 85 tež.% razblaživača, od oko 2 tež. % do oko 10 tež.% sizintegranta i od oko 0.25 tež.% do oko 10 tež.% sredstvo za klizenje.

Smeša za tabletiranje se može komprimovati u tablete, direktno ili valjcima. Smeše za tabletiranje ili procije smeša mogu se pre tabletiranja , alternativno granulirati vlažnom-, suvom granulacijom ili granulacijom topljenjem, smrzavanjem istopa, ili ektrudiran pre tabletiranja. Finalna formulacija mmože da sadrži jedan ili više slojeva i može biti obložena ili neobložena; može se čak i kapsulirati.

Formulacija tableta je diskutovana u "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol. 1 by H. Lieberman and L. Lachman, Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X).

Čvrste formulacije za oralnu administraciju se mogu formulisati tako da budu sa trenutnim i/ili modifikovanim oslobađanjem. Formulacije sa modifikovanim oslobađanje su

one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem.

Odgovarajuće formulacije sa modifikovanim oslobađanjem zasvrhe predmetnog pronalaska su opisane u US Patent No. 6,106,864. Detalji drugih pogodnih tehnologija oslobađanja, kao što su disperzije velike energije i osmotske i obložene čestice, mogu se naći u Vermaet al,Pharmaceutical Technologv On-line, 25(2), 1-14 (2001). Primena gume za žvakanje radi postizanja kontrolisanog oslobađanja je opisana u WO 00/35298.

PARENTERALNA ADMINISTRACIJA

Jedinjenja pronalaska se takođe mogu administrirati direktno u krvoto, mišić ili u unutrašnji organ. Odgovarajući način parenteralne administracije podrazumeva intrvenoznu, intra-arterijsku, intraperitonealnu, intratekalnu, intravertikularnu, intrauretalnu, intrastemalnu, intrkranijalnu, intramuskularnu i subkutalnu. Pogodni aparati za parenteralnu administraciju su igle (uključujući mikroigle), injektore, injektore bez igle i infuzione tehnike.

Parenteralne formulacije su obično vodeni rastvori koji mogu da sadrže eksipijese kao što su soli, ugljenihidrati ipufernski agensi (preferentno do pH 3 do 9), ali za neke aplikacije, mogu se formulisati kao sterilni ne-vodeni rastvori ili kao sušeni oblik korišćen u kombinaciji sa odgovarajućim nosačem kao što je sterilna vode bez pirogena.

Dobijanje parenteralne formualcije pod sterilnim uslovima, na primer, liofilizacijom, može se jednostavno postići primenom standardnih farmaceutskih tehnika dobro poznatim prosečnom stručnjaku.

Rastvorljivost jedinjenja formule (I) korišćene za dobijanje parenteralnih rastvora sc može povećati primenom odgovarajućih tehnika za formulisanje, kao što je inkorporaci ja regensa za poboljšanje rastvorljivosti.

Formulacija za parenteralnu administraciju se može formulisati tako da bude sa trenutnim- i/ili modifikovanim oslobađanjem. Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem. Tako jedinjenja pronalaska se mog formulisati kao čvrsta, polu-čvrsta ili tioksoptrone tečnosti za admisnitraciju kao implantiran depo za modifikovano oslobađanje aktivnog jedinjenja. Primeri ovih formulacija su stentovi obloženi lekom i PGLA mikrosfere.

TOPIKALNA ADMINISTRACIJA

Jedinjenja pronalaska se takođe mogu administrirati topikalno na kožu, i to dermalno ili transdermalno. Tipične formulacije za ovu svrhu su gelovi, hidrogelovi, losioni, rastvori, melemi, praškovi,punjenja, pene, filmovi, flasteri za kožu, vaferi, implantati, suđeri, vlakna, zavoji i mikroemulzije. Takođe se mogu koristiti lipozomi. Tipični nosač su alkohol, voda, mineralna ulja, tečni vazelin, glicerin, polietilen glikol i propilen glikol. Takođe se mogu dodati i pospešivači penetracije - vidi na primer,, J Pharm Sci, 88 (10), 955-958 by Finnin and Morgan (October 1999).

Drugi načini za topikalnu administraciju su eletroporacija, jontoforeza, fonoforeza, sonoforeza i injekcija sa mikro-iglom ili injekcija bez mikroigle( e. g.Povvderjec<t>™, Bioject™,

etc).

Formulacija za topikalnu administraciju se može formulisati tako daje sa trenutnim i/ili modifikovanim oslobađanjem. Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem.

INTRANAZALNA ADMINITRACIJA/ ADMINISTRCIJA INHALIRANJEM

Jedinjenja pronalaska se takođe mogu administrirati intranazalno ili inhaliranjem, obično u obliku suvog praha (sam ili kao smeša, na primer, sa laktozom ili kao smeša partikula. na primer, smeša sa fosfolipidima, kao što je fosfatidilholin) uz pomoć inhalatora za suvi prah ili aerosolnog spreja iz kontejnera pod pritiskom, pumpe, spreja, raspršivača (preferentno raspršivač koji primenom elektrodinamike proizvodi finu maglu) ili nebulzator. sa ili bez primene odgovarajuće propelanta, kao što je 1,1,1,2-tetrafluoroetan ili 1,1.1,2.3,3,3-heptafluoropropan. Za intranazalnu primenu, prašak može da sadrži bioadhezivni agens, na primer, hitosan ili ciklodekstrin.

Kontejner pod pritiskom, pumpa, sprej atomizator ili raspršivač sadrže rastvor ili suspenziju jedinjenja pronalska sa na primer, etanolom, vodenim rastvorom etanola ili pogodnim alternativnim agensom za dispergovanje, rastvaranje ili za prduženo oslobađanie aktivne supstance, propelantom kao rastvaračem i po potrebi površinski aktivnom supstancom kao rastvaračem. kao što je sorbitan trioleat, oleinska kiselina i oligomlečna kiselina.

Pre primene u formulaciji za suvi prah ili suspeziju, lek je mikronizovan do veličine čestica pogone za distribuciju inhaliranjem (obično manje od 5 mikrona). Ovo se može postići jednim od odgovarajućih metoda drobljenja (usitnjavanja), kao što je mlevenje u spiralnom mlazu, mlevenje u fluidnom sloju , procesiranje superkritičke tečnosti za dobijanje nanočestica, homogenziacija pod visokim pritiskom ili sušenje raspršivanjem.

Kapsule (napravljene, na primer, od želatina ili HPMC), blisteri i kartridži za u inhalatorima ili insulflatorima se mogu tako formulisati da sadrže praškastu smešu jedinjenja pronalaska, odgovarajuću praškastu bazu kao što je laktoza ili škrob i modifikator performanse, kao što je 1-leucin, manitol i magnezijum stearat. Laktoza može biti anhidrovana ili u obliku monohidrata, preferentno ovog poslednjeg. Drugi odgovarajući eksipijensi su dekstran, glukoza, maltoza, sobitol, ksilitol, fruktoza, sukroza i trehaloza.

Odgovarajući rastvor formulacije za primenu u atomizatoru pomoću elektrodinamičke sile za proizvodnju fine magle može da sadrži od lpg do 20 mg jedinjenja pronalaska po aktivaciji i aktivacona zapremina može da varira od lpl do lOOul. Tipična formulacija može da sadrži jedinejnje formule (I), propilen glikol, sterilnu vodu, etanol i natrijum hlorid. Alternativni rastvarači koji semogu koristiti umesto propilen glikola su glicerol i polietilen glikol.

Odgovarajući aromati, kao što je mentol i levomentol ili zaslađivači kao što je saharin ili natrijum saharin, mogu se dodatiu ove formulacije pronalska za administraciju inhaliranjem/ intranazalnu administraciju.

Formulacije za adminsitraciju inhaliranjem/ intranazalnu adminsitraciju, mogu se formulisati tako da budu sa trentunim i/ili modifikovanim oslobađanjem, primenom na primer. poli(DL-melčna-koglikolne kiseline (PGLA). Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem.

U slučaju inhalatora svog praška i aerosola, dozna jedinica se može odmeriti pomoću ventila koji dostavlja (distribuira) odmerenu količinu. Jedinice u skladu sa pronalaskom su obično podešene tako da odmerena doza ili "uzdah" sadrži 1 do lOpg jedinjenja formule (1). Obično se ukupna dnevna doza kreće u opsegu od 50pg do 20 mg, a može se administrirati kao jedna doza ili , češće, u više podeljenih doza tokom dana.

REKT ALNA/ INTRA V AGINALNA ADMINSITRACIJ A

Jedinjenja pronalaska se mogu admisnitrirati rektalno ili vaginalno, na primer, u vidu supozitorija, pesara ili klistira. Kao tradicionalna baza za supozitorije koristi se kakaovo ulje, ali se po potrebi mogu koristiti različite alternative.

Formulacije za rektalnu/vaginalnu administraciju, može se formulisati se mogu formulisati tako da budu sa trenutnim i/ili modifikovanim oslobađanjem. Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem.

OKULARNA/ AURALNA ADMTSNITRACIJA

Jedinjenja ovog pronalaska se mogu adminsitrirati direktno u oko ili uvo, obično u vidu kapi mikronizovane suspenzije ili rastvora u izotoničnom, pH -podešenom, sterilnom rastvoru soli. Druge formulacije pogodne za okularnu i auralnu administraciju su masti, biorazgradivi (npr. apsropcioni gel suđeri, kolagen) i ne-biorazgradivi (npr. silikon) implanti, vaferi, sočiva i sistemi čestica ili vezikularni sistemi, kao što su niozomi ili lipozomi. Polimeri kao što su umrežena poliakrilna kiselina, polivinilalkohol, hijaluronska kiselina i polimer celuloze, na primer, hidroksipropilmetilceluloza, hidroksietilceluloza ili metil celuloza ili heteropolisaharidni polimer, na primer, gelan guma, se mogu inkorporirati zajedno sa konzervansima, kao što je benzalkonijum hlorid. Ove formulacije se takođe mogu distribuirati jontoforezom.

Formulacije za okularnu/auralnu administraciju mogu se formulisati tako tako da budu sa trenutnim i/ili modifikovanim oslobađanjem. Formulacije sa modifikovanim oslobađanjem one sa odloženim-, kontinuiranim-, pulsirajućim-, kontrolisanim-, ciljnim i programiranim solobađanjem.

DRUGE TEHNOLOGIJE

Jedinjenja pronalaska se mogu kombinovati sa rastvornim makromolekularnim entitetma (jedinicama), kao što je ciklodekstrin i njihovim odgovarajućim derivatima ili polimerima koji sadrže polietilen glikol, kako bi se poboljšala njihova rastvorljivost, brzina razlaganja, maskirao ukus, poboljšala biološka rspoloživost i/ili stabilnost z primenu u jednom od gore pomenutih načina administracije.

Nađeno je da su kompleksi lek-ciklodekstrin, na primer, generalno korisni za najveći borj doznih oblika i načina amidnistracije. Mogu se primeniti i inkluzioni i ne-inkluzioni kompleksi, kao alternativa direktnom kolpleksiranju sa lekom, ciklodekstrin se može koristi i kao pomoćni aditiv, tj. kao nosač, razblaživač ili rastvarač.U ovu svrhu najčešće se koriste alfa-, beta- i gma-ciklodekstrini, čiji se primeri mogu naći u Međunarodnim Patentnim Prijavama br. WO 91/11172, WO 94/02518 i WO 98/55148.

KOMPLETI

S obzirom na to da je poželjno administrirati kombinaciju aktivnih jedinjenja, na primer. za lečenje određene boelsti ili stanja, u okviru predmetnog pronalaska je i kombinacija dva ili više farmaceutska preparata, pri čemu barem jedan sadrži jedinjenje u skladu sa pronalaskom, u obliku kompleta koji je pogodan za ko-administraciju preparata.

Tako, komplet pronalaska sadrži dva ili više odvojena farmaceutska preparata, barem jedan sadrži jedinjenje formule (I) u skladu sa pronalaskom i sredstvo za odvojeno držanje datih preparata, kao što je kontejner, podeljena boca ili podeljena kutija od folije. Primer ovakovg kompleta je plister pakovanje korišćeno za pakovanje tableta, kapsula i si.

Komplet pronalaska je posebno koristan za administriranie različitih doznih oblika, na prime, oralno ili parenteralno, za administriranie odvojenih preparata u različitim doznim intervalima, ili za titraciju odvojenih preparata jedan protiv drugog. Obično se u kompletu nalaze uputstva za administraciju i mogu se priložiti uz takozvano "pomagalo za pamćenje".

DOZIRANJE

Za administraciju humanom pacijentu, ukupna dnevna doza jedinjenja pronalaska se obično kreće u opsegu od 0.05mg do lOOmg u zavisnosti, naravno, od načina administracije, preferentnije u opsegu od O.lmg do 50mg i joše preferentnije u opsegu od 0.5mg do 20mg. Na primer. oralna admisnitracija može da zahteva ukupnu dnevnu dozu od lmg do 20mg, dok intravenozna doza može da zahteva od 0.5mg do lOmg. Ukupna dnevna doza se može administrirati kao jedna ili više podeljenih doza.

Ove doze su zasnovane na prosečnom subjektu težine od oko 65kg do 75kg. Lekar će lako moći da odredi doze za subjekt čija je težina van ovog opsega, kao što su deca i stari ljudi.

Da bi se izbegla svaka nedoumica, reference na "lečenje" obuhvataju reference na kurativno, paliativno i profilaktičko lečenje.

5-HT4agonist predemtnog pronalaska se može kombinovati sa drugim farmakološki aktivnim jedinjenjem ili sa dva ili više farmakološki aktivna jedinjenja, posebno u lečenju oboljenja gastroezofagalnog refluksa. Na primer, 5-HT4agonist, posebno jedinjenje formule (I) ili njegova fannaceutski prihvatljiva so ili solvat, kao stoje prethodno definisano, mogu se administrirati istovremeno, sekvencijalno ili odvojeno u kombinaciji sa jednim ili više agenasa odabranih od:

(i) histamin H2receptor antagonisti, npr. ranitidin , lafutidin , nizatidin , cimetidin , famotidin i roksatidin ; (ii) inhibitori protonske pump, npr. omeprazol, esomeprazol, pantoprazol, rabeprazol, tenatoprazol, ilaprazol i lansoprazol; (iii) antagonisti kiselinske pumpe, npr. soraprazan, revaprazan(YH-1885), AZD-0865, CS-526, AU-2064 i YJA-20379-8; (iv) smeše oralnih antacida, npr. Maalox<®>, Aludrox<®>i Gaviscon<8>'; (v) agensi za zaštitu mukoze, npr. polaprezinc, natrijum ekabet, rebamipid, teprenon, cetraksat, sucralfat, hloropilin-bakar i plaunotol; (vi) GABABagonisti, npr. baklofen i AZD-3355; (vii) cx2 agonisti, npr. clonidin , medetomidin , lofeksidin , moksonidin , tizanidin , guanfacin, guanabnz, talipeksol i deksmedetomidin ; (viii) Derivati ksantina, npr. Teofilin, aminofilin i doksofilin; (ix) Blokatori kalcijumovih kanala, npr. aranidipin, lacidipin, falodipin, azelnidipin, clinidipin, lomerizin, diltiazem, gallopamil, efonidipin, nisoldipin, amlodipin, lercanidipin, bevantolol, nicardipin, isradipin, benidipin, verapamil, nitrendipin, barnidipin, propafenon, manidipin, bepridil, nifedipin, nilvadipin, nimodipin, nifedipin i fasudil; (x) benzodiazepin agonisti, npr. diazepam, zaleplon, zolpidem, haloksazolam, clonazepam, prazepam, quazepam, flutazolam, triazolam, lormetazepam, midazolam, tofisopam, clobazam, flunitrazepam i flutoprazepam; (xi) analozi prostaglandina, npr. Prostaglandin, mizoprostol, treprostinil, ezoprostenol, latanoprost, iloprost, beraprost, enprostil, ibudilast i ozagrel; (xii) histamin H3agonisti, npr. R-alfa-metilhistamin i BP-294; (xiii) anti-gastrički agensi, npr. Anti-gastrin vakcina, itriglumid i Z-360; (xiv) 5-HT3antagonisti, npr. dolasetron, palonosetron, alosetron, azasetron, ramosetron, mitrazapin, granisetron, tropisetron, E-3620, ondansetron i indisetron; (xv) triciklični antidepresanti, npr. imipramin , amitriptilin, clomipramin , amoksapin i lofepramin ; (xvi) GABA agonisti, npr. gabapentin, topiramate, cinolazepam, clonazepam, progabide, brotizolam, zopiklon, pregabalin i eszopiklon; (xvii) opioidni analgetici, npr. morfin, heroin, hidromorfon, oksimorfon, levorfanol, lcvalorfan, metadon, meperidin , fentanil, kokain, codein, dihidrocodein, oksikodon. hidrokodon, propoksifene, nalmefene, nalorfm, nalokson, naltrekson, buprenorfin, butorfanol, nalbufin1pentazocin; (xviii) analozi somatostatina, npr. oktreotid, AN-238 i PTR-3173; (xix) aktivator Cl kanala: npr. lubiproston; (xx) inhibitori selektivne resorpcije serotonina, npr. sertralin, eskitalopram, fluoksetin, nefazodon, fluvoksamin , citalopram, milnacipran, paroksetin, venlafaksin, tramadol, sibutramin , duloksetin, desvenlafaksin i depocksetin; (xxi) antiholinergici, npr. diciklomine i hiosciamin ; (xxii) laksativi, npr. Trifvba*', Fvbogel<®>, Konsyl<®>, Isogel<®>, Rcgulair', Celevać'" i Normacol' : (xxiii) vlaknasti proizvodi, npr. Metamucil<*>;

(xxiv) antispasmodici, e.g.: mebeverin;

(xxv) antagonist dopamina, npr. metoklopramid, domperidon i levosulpirid;

(xxvi) holinergici, npr. neostigmin

(xxvii) AChE inhibitor: galantamin , raetrifonat, rivastigmin, itoprid i donpezil; (xxviii) antagonisti tahikinina (NK), posebno NK-3, NK-2 i NK-1 npr. antagonisti, nepadulant,

saredutant, talnetant, (aR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)benzil]-8,9,10,l l-tetrahidro-9-inetil-5-(4-metilfenil)-7H-[l,4]diazocino[2,l-g][l,7]naftridin-6-13-dion (TAK-637). 5-[[(2R,3S)-24(lR)-143,5-bis(trifluoromctil)fcnil]etoksi-3-(4-fluorofenil)-4-

morfolinil]metil]-l,2-dihidro-3H-l,2,4-triazol-3-on (MK-869), lanepitant, dapitant i 3-[[2-iTietoksi-5-(trifluorometoksi)fenil]metilamino]-2-fenil-piperidi (2S,3S).

Metod za procenu biološke aktivnosti:

Afiniteti vezivanja jedinjenja predmetnog pronalaska za 5-HT4receptor su određeni prema sledećoj proceduti.

Pripremanje membrane

Svinjske glave su dobijene iz klanice. Striatalna tkiva su disecirana, izmerena i homogenizovana u 15 zapremina 50mM ledeno-hladnog HEPES (pH 7.5) u Polytron bomogenizatru (30 sec pri najvećoj brzini). Suspenzija je centrifugirana na 48,000g i 4°C u trajanju od 15 min. Dobijene pločice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM ledeno-hladnog HEPES-a, podeljen u alkikvote i čuvan na -80°C.

Goveje glavse su takoje nabavljene iz klanice. Striatalna tkiva su disecirana, izmerena i homogenizovana u 20 zapremina 50 mM ledeno-hladnog Tris-HCl (pH 7.4) u Polvtron homogenizatoru (30 sec pri najvećoj brzini). Suspenzija je centrifugirana na 20,000g i 4°C u trajanju od 30 min. Dobijene pločice su resuspendovane u 15 zapremina 50 mM ledeno-hladnog Tris-HCl, pa ponovo na isti način homegenizovane i centri fugi rane . Dobijene pločice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM Tris-HCl, podeljene u alikvote i čvane na -80°C do upotrebe.

Cerebralna kortikalna tkiva su izvađena iz Sprague-Dawley (SD) pacova (Japan SLC), izmerena i stavljena u 10 zapremina 50 mM ledeno-hladnog Tris-HCl (pH 7.5). Zatim su homogenizovana u Polvtron homogenizatoru (30 sec pri najvećoj brzini) i zatim centrifirana na 48,000g i 4°C u trajanju od 15 min. Dobijene pločice su resuspendovane u 50 mM ledeno-hladnog Tris-HCl, opet na isti način homegenizovane i centrifugirane. Dobijene pločice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM Tris-HCl, podeljene u alikvote i čuvane na

-80°C do upotrebe.

Koncentracija proteina u homogenatima je određena Bradford-ovom metodom ili BCA protein metodom (Pierce) sa BSA kao standardom.

Test vezivanja:

Afinitet jedinjenja za svinjeske ili goveđe 5-HT4i rat 5-HT3receptore su određeni pomoću radio-obeleženog specifičnih liganada, GR 113808 ({l-[2-(metilsulfonil)etil]-4-piperidinil}[metil-<3>H]-li/-indole-3-carboksilat) i BRL 43694 (l-Metil-A^-(9-[metil-<3>H]-9-azabiciklo[3.3.1]non-3-il)-l/f-indazol-3-caboksamid). Jedinjenja su inkubirana sa 25-100 pM [<3>H]-GR 113808 (Amersham) i 0.6-1 mg proteina svinjskih ili goveđih striatalnih membrana suspendovanih u krajnjoj zapremini od 0.8-1 ml 50 mM Tris-HCl (pH 7.5). Nespecifično vezivanjeje određeno 10-50 uM 5-HT. Vezvianje 0.3 nM [<3>H]-BRL 43694 (NEN) je mereno upotrebom 400 ug proteina kortikalnih membrana pacova suspendovanih u krajnoj zapremini od 500 pl 50 mM Tris-HCl (pH 7.5). Nespecifično vezivanjeje određeno pomoću 10 uM 5-HT.

Kuglice e su inkubirane na sobnoj temperaturi na mućkalici u trajanju od 30min. Analize su zaustavljene brzom filtracijom pomoću Brandell sakupljača ćelija kroz Wallac-B filtere potopljene u 0.2% poli(etileniminu) na 4°C u trajanju od 60-90min. Filteri su isprani tri puta sal ml ledeno hladnog 50 mM HEPES-a, i osušeni u mikrotalasnoj na sobnoj temperaturi. Zatim su stavljeni u vreću i zagrevani sa meltileks scintilantom (Wallac) ili potopljeni u BetaplateScint (Wallac). Radiokativnost vezanog receptora je kvantifikovana pomoću Big-spot brojača, Betaplate brojača (Wallac) ili LS brojača (Packard).

Vezivanje humanog 5-HT4(1)

Humane 5-HT4((j) transfektovane HEK293 ćelije su pripremljene i gajene u laboratoriji. Sakupljene ćelije su suspendovane u 50 mM HEPES-u (pH 7.4 na 4°C) sa dodatim koktelom inhibitora proteaze (Boehringer, 1:1000 razblaženje) i homogenizovane pomoću ručnog set Polvtron PT 1200 aparata pn najvećoj brzini u trajanju od 30 sec na ledu. Homogenati su centrifugirani na 40,000 x g na 4 °C u trajanju od 30 minuta. Kuglice su zatim resuspendovane u 50 mM HEPES-u (pH 7.4 na 4°C) i centrifugirane još jednom na isti način. Dobijenje kuglice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM HEPES-a (pH 7.4 at 25 °C), homogenizovane, podeljen u alikvote i ;uvane na -80°C do upotrebe. Alikvot frakcija membrana je upotrebljen za određivanje koncentracije šproteina pomoću kompleta BCA za testiranje proteina (PIERCE) i ARVOsx plate čitač (Wallac).

Za eksperimente vezivanja, 25 ul test jedinjenja je inkubirano sa 25 ul [<3>H]-GR113808 (Amersham, krajnja konc. 0.2 nM) i 150 ul homogenata membrane i rastvori suspenzija WGA-SPA perli (Amersham) (10 ug proteina i lmg SPA perli/ćeliji (udubljenju) u trajanju od 60 minuta na sobnoj temperaturi. Nespecifično vezivanjeje određeno pomoću 1 uM GR113808 (Tocris) kranje koncentracije. Inkubacija je prekunuta centrifugiranjem na 1000 rpm.Radiokativnost vezanog receptoraje kvantifikovana pomoću MicroBeta plate brojača (Wallac).

Sva jedinjenja pripremljena u radnim primerima kao stoje opisano u daljem tekstu su testirana ovom metodom, i imaju vrednosti Ki od 0.3 nM do 30 nM što se tiče inhibicije vezivanja na 5-HT4receptor.

Vezivanje Humanog 5-HT4(2)

Humane 5-HT4(d) transfektovane HEK293 ćelije su pripremljene i gajene u laboratoriji. Prikupljene ćelije su suspendovane u 50 mM Tris puferu (pH 7.4 na 4°C) dopunjenje sa koktelom proteaza inhbitora (Boehringer, 1:1000 razblaženje) i homogenizovane pomoću Polvtron PT 1200 set aparata pri punoj brzini u trajanju od 30 sec na ledu. Homogenati su centrifugirani na 40,000 x g na 4 °C u trajanju od 10 min. kuglice su resuspendovane u 50 mM Tris puferu (pH 7.4 na 4 °C) i centrifugirane još jednom na isti način. Dobijene kuglice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM Tris pufera (pH 7.4 na 25 °C) koji sadrži 10 mM MgCh, homogenizovane, podeljene u alkikvote i čuvane na -80°C do upotrebe. Alikvoti frakcije membrana su upotrebljeni za određivanje konceracije proteina pomoću kompleta za analizu proteina BCA (PIERCE) i ARVOsx plate čitača (Wallac).

Za eksperimente vezivanja, 50 ul testiranih jedinjenja je inkubirano sa 50 ul [<3>H] 5-HT (Amersham, krajnje konc.8.0 nM) i 400 ul homogenata membrana (300 pg proteina/ epruveti) u trajanju od 60 minuta na sobnoj temperaturi. Nespecifično vezivanjeje određenopomoću 50 uM GR113808 (Tocris) pri krajnjoj koncentraciji. Sve inkubacije su prekinute brzom vakuum filtracijom u toku 0.2 % PEI potopljenih filter papera od staklenih vlakana, pomoću BRANDEL sakupljača, nakon čega slede tri ispiranja sa 50 mM Tris puferom (pH 7.4 na 25 °C). Radiaktivnost vezanog receptora je kvantifikovana pomoću Packard LS brojača za tečno scinitlaciono brojanje.

Sva jedinjenja u Primerima pokazuju afiniteta za 5HT4receptor.

Testiranje Funkcionalosti:

Prisustvo 5-HT4receptora u ezofagusu pacova i sposobnost da okazuje parcijalni agonizam u TMM preparatima je objavljen u literaturi (See G.S. Baxter et al. Naunvn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol (1991) 343: 439-446; M. Yukiko et al. JPET (1997) 283: 1000-1008; i J..T. Reeves et al. Br. J. Pharmacol. (1991) 103: 1067-1072). SPecifičnije, parcijalan agonistička aktivnost se može meriti perma sledećij procedurama.

Mužjak SD pacova (Charles River) težine 250-350g su omamljeni zatim ubijeni cervikalnom dislokacijom. Ezofagus je diseciran od stomaka neposredno proksimalno (uključujući delove stomaka do distalnog kraja) do nivoa traheje i zatim stavljen u svež Krebs-ov rastvor.

Spoljašnji sloj skeletalnih mišića je uklonjen u jednom komadu, guljenjem sa sloja glatkih mišića pomoću forcepsa (u smetu o stomaka ka traheji). Preostali sloj unutrašnjih mišića je poznat kao TMM. Ovaj je obrubljen na 2 cm od originalnog 'kraja stomaka', a ostatak je bačen.

TMM su okačeni kao cele otvorene cevi u longitudinom smeru u kupatilu od 5ml za organe napunjeno toplim (32°C) Krebs-om uy dopremanje vazduha. Tkiva su postavljena pod početni napon od 750mg i ostavljena d se ekvilibrišu 60 minuta. Tkiva su ponovo izložena naponu dva puta u intervalima od 15 minuta tokom perioda ekvilibracije. Brzina protoka je podešena na 2ml / min u toku ovog perioda.

Posle ekvilibracije, pumpa je isključena. Tkiva su izložena luM karbakolu i kontrahovana i postigla stabilna kontraktilni plato u toku 15 minuta. Tkiva su zatim izložena

dejstu 1 uM 5-HT (za ispiranje tkiva). Tkiva su opuštena kao odgovor na 5-HT veoma brzo- u toku 1 minuta. Čim je došlo do maksimalne relaksacije i merenja urađena, tkiva su ispirana pri maksimalnoj brzim (66ml/min) barem 1 minut,a dok originlana osnovna linija (pre-karbakola i 5-HT)se ne vrati (obično, osnovna linija pada ispod originalne posle prve ekvuilibracije). Brzina protoka je vraćena na 2ml/min i tkiva ostavljena 60 minuta.

Kumulativna kriva koncentracija-efekat (CEC) i 5-HT je konstruisana u opsegu od 0.1 nM do 1 pM, u inkrimentima jedinica polu-log( 5- HTkriva 1za analizu podataka). Vreme kontakta između doza iznosi 3 minute ili do postizanja platoa. Tkiva su reagovala brže što je rasla koncentracija 5-HT u kupatilu.. Na kraju krive, tkiva su isprana (najvećom brzinom) u nakraćem roku da bi se izbegla desenzitizacija receptora. Brzina pumpe je podešena na 2ml/min i tkiva su ostavlje 60 minuta.

Izvedena je druga CEC- ili u odnosu na 5-HT (za vreme kontrole tkiva), drugi 5-HT4agonist (standard) ili na test jedinjenje( kriva2zaanlizu podataka) Vreme kontakta varira za druge 5-HT4agonists i test jedinjenja i podešeno je prema ' individualnim reakcijama tkiva na svaki poseban reagens'. U tkivima izloženim testiranom jedinjenju, u kupatilo je dodata visoka koncetracija (1 pM) a 5-HT4antagonista (SB 203,186: 1 Zf-Indol-3-karoksilna kiselina, 2-( 1 - piperidiniljetil estar, Tocris) nakon poslednje koncentracije tstiranog jedinjenja. Ovo je urađeno da bi se videlo da li jedna od agonist-indukovanih relaksacija (opuštanja) (ukoliko su prisutne), reversna. SB 203,186 reversna 5-HT indukovana relaksacija, obnavljanjem originalna stepen kabakol-indukovanog tonusa tkiva.

Agonistička aktivnost testiranih jedinjenja je potvrđena pre-inkubiranim tkivima sa lOOnM standarda 5HT4antagonista kao što je SB 203,186. SB 203,186 je dodat u kupatilo 5 minuta pre dodatka carbakola prekrive 2.tkiva se moraju 'upariti' za analizu podataka tj. test jedinjenje bez SB 203,186 u jednom tkivu je poređeno sa test jedinjenjem u prisustvu SB 203.186 u odvojenom tkivu. Nije moguće ivestikrivu 3 tj..5-HT krivu 1, pa zatimkrivu 2(-SB 203.186) testiranog jedinjenja, nakon čega sledikriva 3(+ SB 203,186), testiranog jedinjenja.

Agonist-indukovano cAMP povišenjeu humanima5-HT4((j) transfektovanim HEK293 ćelijama

Humane 5-HT4(d) transfektovane HEK293 ćelije su gajene u laboratoriji. Ćelije su gajene na 37°C i 5% C02u DMEM kojem je dodato 10% FCS, 20 mM HEPES (pH 7.4), 200 u g/m I higromicina B (Gibco), 100 jedinica/ml penicilina i 100 pg/ml streptomicina.

Ćelije su gajene do 60-80% konfiuescencije. Jedan dan pre tretiranja jedinjenj ima dijaliziranim FCS (Gibco) je zamenjen za normalan i ćelije su inkubirane preko noći.

Jedinjenja su pripremljena u 96-to ćelijskoj ploči (12.5 pl/udubljenju). Ćelije su sakupljene sa PBS/1 mM EDTA, centrifugovane i isprane sa PBS. Na početku testiranja, kuglice ćelija su resuspendovane u DMEM kojem je dodato 20 mM HEPES, 10 uM pargilna (Sigma) i 1 mM 3-izobutil-l-metilksantina (Sigma) u koncentraciji od 1.6 x 10<5>ćelija/ml i ostavljene 15 minuta na sobnoj temperature. Reakcija je započeta dodatkom ćelija na ploče

(12.5 ul/udubljenju). Posle inkubacije od 15 minuta na sobnoj temperaturi, dodat je 1% Triton X-100 da bi se reakcija zaustavila (25 pl/udubljenju) i ploče su ostavljene 30 minuta na sobnoj temperaturi. Homogena fluorescentno-bazirana cAMP (Schering) detekcija sa vremenskim razlaganjem je urađena prema instrukcijama proizvođača. Korišćen je ARVOsx multilabel brojač (Wallac) da bi se izmerio HTRF (ekscitacija 320 nm, emisija 665 nm/620 nm, vreme kašnjenja 50 ps, vreme do pojavljivanja na ekranu ("window time") 400 ps).

Podaci su analizairani na osnovu odnosa intenziteta fluorescence svkog udubljenja na 620 nm

i 665 nm, nakon čega je urađena cAMP kvatifikacija pomoću standard krive cAMP. Pojačanje proizvodnje cAMP izazvano svakim jedinjenjemje normalizovano do količine cAMP koju proizvodi 1000 nM serotonin (Sigma).

Sva jedinjenja u primerima pokazuju 5HT4receptor agonističku activinost.

VezivanjeHumanog dofetilida

Humane HERG transfektovane HEK293S ćelije su pripremljene i gajene u laboratoriji. Prikupljene ćelije su suspendovane u 50 mM Tris-HCl (pH 7.4 at 4°C) i homogenizovane pomoću ručnog Polvtron PT 1200 set aparata_pri punoj brzini u trajanju od 20 sek na ledu. Hmogenati su centrifugirani na 48,000 x g na 4 °C u trajanju od 20 min. Kuglice su zatim reuspenovane, homogenizovane, i centrifugirane još jednom na isti način. Dobijene kuglice su resuspendovane u odgovarajućoj zapremini 50 mM Tris-HCl, 10 mM KC1, 1 mM MgCE (pH 7.4 na 4°C), homogenizovane, podeljene u alikvotei do upotrebe čuvane na -80°C. Alikvot frakcije membrana je korišćen za određivanje koncentracije proteina pomoću kompleta za analizu BCA proteina (PIERCE) i ARVOsx plate čitača(VVallac).

Testovi vezivanja su izvedeni pri ukupnoj zapremini od 200 ul u 96-ćelijskoj ploči. Dvadeset pl testiranih jedinjenja je inkubirano sa 20 pl [<3>H]-dofetilida (Amersham, krajnja konc. 5 nM) i 160 pl homogenata membrane (25 pg proteina) u trajanju od 60 minua na sobnoj temperaturi. Nespecifično vezivanjeje određeno pomoću 10 pM dofetilida u krajnjoj koncetraciji. Inkubacija je prekinuta brzim vakuum filtriranjem kroz 0.5% prethodno potopljen GF/B Betaplate filter korišćenjem Skatron cell sakupljača sa 50 mM Tris-HCl, 10 mM KC1, 1 mM MgCl2, pH 7.4 na 4°C. Filteri su osušeni, stavljeni u vrećice i koje su napunjene sa Betaplate Scint. Radioactivnost vezana za filter je izbrojana Wallac Betaplate brojačem.

Iherg testiranje

HEK 293 ćelije koje stabilno eksprimuju HERG kalijumov kanal su korišćene za elektrofiziološka ispitivanja. Methodologija za stabilnu transfekciju ovog kanala u HEK ćelijama se može naći u literaturi (Z.Zhou et al., 1998, Biophvsical journal, 74, pp230-241). Jedan dan pre izvođenja eksperimenta,ćelije su prikuljene iz sudova sa kulturom i nanete na staklo sa poklopcima u standardnom MEM medijumu sa 10% FCS. Nanete ćelije su čuvane u inkubatoru na 37°C u atmosferi 95%02/5%C02. Ćelije su ispitane 15-28hr posle prikupljanja.

HERG struje su ispitane uz pomoć standardnih tehnika za nametanje voltaže celime ćelijama ("patch clamp"). U toku eksperimenta ćelije su površinski perfundovane standardnim rastvorom sledećeg sastava (mM); NaCl, 130; KC1, 4; CaCl2, 2; MgCl2, 1; Glukoza, 10; HEPES, 5; pH 7.4 saNaOH. Registrovanje celih ćelija vršeno je amplifikatorom nametnute voltaže i elektrodama (patch pipettes) koje imaju otpor od 1-3 MOhm kada su napunjene standardnim unutrašnjim rastvorom sledećeg sastava (mM); KC1, 130; MgATP, 5; MgCb, 1.0; HEPES, 10; EGTA 5, pH 7.2 sa KOH. Za dalje eksperimente prihvaćene su samo one ćelije sa ulaznim otporima ispod 15MQ i otporima zaptivanja >1GQ. Kompenzacija serijskog otpora je primenjen na do maksimalno 80%. Nisu urađene korekcije usled gubitaka. Međutim, sasvim bezbedno se može koristiti kompenzacija za prihvatljiv ulazni otpor koji zavisi od veličine zabeleženih struja i nivoa serijskih otpora. Posle postizanja konfiguracije za celu ćeliju i dovoljne za dijalizu ćelija sa pipetiranim rastvorom (>5min), primenjen je standardni protokol na 'elije da bi se izazvale membranske struje. Protokol je sledeći. Membrana je depolarizovana do stalnog potencijala od -80mV do +20mV u trajanju od lOOOms. Nakon toga sledi rampa koja supšta voltažu (brzina 0.5mV msec"<1>) nazad do stalnog potencijala. Ovaj voltažni protkol ke primenjen naćelije, kontinualno tokom eksperimenta, svake 4 sekunde (0.25Hz). Tokom primene rampe, merena je amplituda pika izazvane struje iznosi oko -40mV. Onda kada je dostignuta izazvana stabilna reakcija u spoljašnjem rastvoru, dodat je nosač

(0.5% DMSO u standardnom spoljašnjem rastvoru) peristaličnom pumpom u trajanju 10-20 min. pod uslovom da postoje minimalne promene u amplituri reakcije izazvane struje u

sulovima kontrolisanim nosačem, primenjeno je testirano jedinjenje 0.3, 1, 3, lOpM u trajanju od 10 minuta. Period od 10 min obuhvata i vreme za koe rastvor prolazi kroz cev od rezrvoara sa rastvorom kroz pumpu do komore. Vreme izlaganja ćelija rastvoru jedinjenja iznosi više od 5min nako što koncetracija leka u komori postigne željenu koncetraciju. Na kraju, ćelije su

izložene visokoj dozi dofetilida (5uM), specifičnog IKr blokatora, da bi sc odredila endogena struja.

Svi eksperimenti su izvedeni na sobnoj temperaturi (23 ± 1°C). Izazvane membranske struje su zabeležene "on-line" na direktno na kompjuteru, profiltriran e a500-lKHz (Bessel - 3dB) i uzorkovane na l-2KHz pomoću amplifikatora nametnute voltaže i posebnog softvera za analizu podataka. A amplituda pika struje, do koje je došlo na oko -40 mV, je merana na kompjuteru, "off line".

Aritmetička srednja vrednost deset vrednosti amplituda je izračunata pod kontrolisanim uslovima i uprisustvu leka.. Procenat smanjenja Inu svakom eksperimentu je dobijn normalizacijom vrednosti za struju prema sledećoj formuli: In= (1-ID/Ic)xl00,gde je Id, srednja vrednost struje u prisustvu leka i lc je srednja vrednost pod kontrolisanim uslovim. Odvojeni eksperimenti su izvedeni za svaku koncentraciju leka ili vremenski podešenoj kontroli, i aritmeti;ka srednja vrednostiu svakom eksperimentu je definisana kao rezultat ispitivanja.

Polu-život u mikrozomima jetre čoveka (HLM)

Testirana jedinjenja (1 pM) su inkubirana sa 3.3 mM MgCl2i 0.78 mg/mL HLM (HL101) u 100 mM kalijum fosfatnog pufera (pH 7.4) na 37°C na 96-ćelijskoj ploči (sa dubokim udubljenima). Reakciona smeša je podeljena u dve grupe, ne-P450 i P450 grupu. NADPH je samo dodat u reakcionu smešu P450 grupe. Alikvot uzorka P450 grupe je kontrolisan u vremenskim intervalima od 0, 10, 30 i 60 min, gde vremenska tačka 0 min označva vreme kada je NADPH dodat u reakcionu smešu P450 grupe. Alikvot uzorka ne-P450 grupe je prikupljen u vremenskim tačkama -10 i 65 min. Prikupljeni alikvoti su ekstrahovani rastvorom acetonitrila koji sadrži unutrašnji standard. Staloženi p protein je centrifugiran (2000 rpm, 15 min). Koncentracija jedinjenja u supernatantu je merena LC/MS/MS sistemom.

Vrednost polu-života je dobijena crtanjem krive prirodnog logaritma odnosa površine ispod pikova jedinjenja/ unutrašnjeg standarda u odnosu na vreme. Nagib najbolje krive kroz tačke daje brzinu metabolizma (k). ovo je konvertovano u vrednosti za polu-život prema sledećim jednačinama:

Polu-život = ln 2 / k

Metodza modela pražnjenja creva kod pacova:

Efekat jedinjenja na pražnjenje creva kod pacova je ispitan prema modifikovanoj metodi D. A. Droppleman et al. (J. Pharmacol. Methods 4, 227-230 (1980)). Hrana, kalorični obroci bez masti, su pripremni]'eni prema metodi koju je opisao S. Ueki et al Arzneim.-Forsch./Drug Res. 49 (II), 618-625 (1999)). IGS-SD pacovi (Mužjaci, 7w, 230-270 g) su kupljeni kod Charles River Japan (Atsugi). Ovi pacovi su korišćeni u eksperimentima posle jednonedljen aklimatizacije. U ekspreimentima, pacovi nisu hranjeni 15 hr pre eksperimenta, ali su imali slobodan pristup vodi. Četrdesetpet minuta pre početka eksperimenta, uklonjena je voda iz kaveza kako pcovi ne bi konzumirali vodu. Pet minuta pre adminsitracije obroka za testiranje pacovima je dozirano test jedinjenje, cisaprid ili nosač (n=8-10) u zapremini od 0.1 ml po 100 g telesne težine. Cisaprid (3 mg/kg) je korišćen kao pozitivna kontrola za eksperiment. Pacovima je intubirano 3 ml obroka za testiranje gavage pa su vraćeni u kavez. Trideset minuta posle administracije obroka, pacovi su izloženi CO2. Posle laparotomije srednjeg dela, stomak je podvezanna donjem ezofagusnom spinkteru (LES) i pilorusu. Zatim je stomak izvađen i izmeren (A). Nakon otvaranja stomaka i njegovog ispiranja sa 0.9 % rastvorom soli, upijačem je uklonjen však tečnosti i ponovo je ozmeren (B). Posle sklanjanja pacova koji su jeli fekalije, brzina praženjenja creva za pojedinačne životinje je izračunata prema formuli: GE brzina (%)=(A-B)/težina testirane životinje.

Pražnjenje creva kod pasa pri svesti:

Hirurška operacija pasa je izvedena prema modifikovanoj metodi koju je opisao Z. Itoh et al. (Gastrocntcrol. Jpn., 12, 275-283 (1977)). Efekat test jedinjenja na pražnjenje creva kod pasa je ispitana prema modifikovanoj metodi koju je opisao N. Toshida et al.

(J.Pharmacol.Exp/Ther., 257, 781-787 (1991)).

Određivanje u stanju posta: Životinjama je impantiran trasdjuser za intubiranje, životinje su postile noć pre izvođenja eksperimenta. Pražnjenje creva je kontinualno beleženo sistemom telemetrije, 8 h posle administracije jedinjenja. Da bi se kvantifkovala promena u gastrointestinalnom pražnjenju, motorni indeks je određen kao oblast ispod kontrakcione krive tokom svaka 2 h podeljen sa visinom pika interdigestivne migrirajuće kontrakcije.

Određivanje u postprandialnom stanju: Životinjama je impantiran trasdjuser za intubiranje, životinje su postile noć pre izvođenja eksperimenta. Postprandialna mobilnost jc indukovana uvođenjem čvrste hrane (100 grama), i jedinjenje je administrirano 2 h kasnije. Crevno pražnjenje je kontinualno praćeno telemetrijskim sistemom, 8 h posle administracije jedinjenja. Motorni indeks je određen da bi se kvantifikovala promena u gastrointestinalnom pražnjenju kao površina ispod kontrakcionih krivi tokom perioda od lh podeljena sa površinom ispod contrakcionih krivih lh pre administracije jedinjenja.

Jedinjenja formule (I) predmetnog pronalaska su administerirane sisarima oralnim, parenteralnim ili topikalnim putem. Generalno, najpreferentnije je da se ova jedinjenja administriraju ljudima u dozama od 0.3 mg do 750 mg na dan, preferentno od 10 mg do 500 mg na dan, mada su varijacije neophodne u zavisnosti od težine is tanja subjekta koji se leci, stanja bolesti koje se leci i odabranog načina administracije. Tako ke, na primer, dozni nivo koji se kreće od 0.06 mg do 2 mg po kg telesne težine na danje najpreferentniji za lečenje inflamacije.

Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu administrirati sama ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačim ili razblaživačima na jedan od prethodno navedenih načina, i ovakva administration se može sprovesti kao jedna ili kao multiple doze. Detaljnije, novi terapeutski agensiopronalaska su admisnitrirani u širokom opsegu različitih doznih oblika, npr.., mogu se kombinovati sa različitim farmaceutski prihvatljivim inertnimnosačima u obliku tableta, kapsula, pilula, pastila, tvrdih bombona, praškova sprejeva krema, masti, supozitorija, želea, gelova, pasti, losiona, krema, vodenih suspenzija, rastvora za injkecije, eliksira, sirupa, i slično. Ovi nosači su čvrsti razblaživači ili punjača, sterilnog vodenog medijuma i različitih ne-toksičnih organskih rastvarača, itd. Dalje, oralfarmaceutski preparati se po poterbi mogu zasladiti ili aromatizovati. Generalno, terapeutski -efeikasna jedinjenja predmetnog pronalaska su priznati u takvim doznim oblicima da se nivo koncentracije kreće od 5% do 70% tež., preferentno 10% do 50% tež.

Za oralnu administraciju , tablete koje sadrže različite eksipijense, kao što je microkristalna celuloza, natrijum citrat, kalcijum karbonat, dikalijum fosfat i glicin se mogu koristiti zajedno sa različitim dizintegrantima kao što je škrob i preferentno kukruzni, krompirov ili tapioka škrob, alginska kiselina i određene kompleksne silkate, zajedno sa granulacionim vezivnim supstancama kao što je polivinilpirolidon, sukroza, želatin i akacija. Dodatno, za tabletiranje često su korisna sredstva za klizenje kao što je magnezijum stearat, natrijum lauril sulfat i talk. Čvrsti preparati slične vrste se mogu takođe primeniti kao punjenja za želatinske kapsule; preferentni materijali su laktoza ili mlečni šećer kao polietilen glikoli velike molekulske težine. Kada su za oralnu administraciju poželjne oralne suspenzije i/ili eliksiri, aktivna komponenta se može kombinovati sa različitim zaslađivačima ili aromatima, bojama ili izbeljivačima, i po želji sa emulgatorima i/ili agensima za suspendovanje kao i sa razblaživačima kao stoje voda

ehanol, propilen glikol, glicerin i njihove različite kombinacije.

Za parenteralnu administraciju, mogu se upotrebiti rastvori jedinjenja predmetnog pronalaska u susamovom ili kikiriki ulju ili u vodenom propilen glikolu. Vodeni rastvori bi terbalo da su puferovani (preferentno pH>8) po potrebi, a tečni rastvara; prvo podeseti da bude izotoničan. Ovi vodeni rastvori su pogodni za intravenozne injekcije. Uljani rastvori su pogodni za intra-artikularne, intra-muskularne i subkutanalne injekcije. Dobijanje ovih rastvora pod sterilnim uslovima se jednostavno postiže prema standardnim farmaceutskim tehnikama dobro poznatim prosečnom stručnjaku. Dodatno, moguće je administrirati jedinejnja predmetnog pronalaska kada se leče inflamatorna stanjakože i ov o se može postići kremama ili želeima, gelovim, pastama, mastima i sličnim, u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom.

Primeri

Pronalazak je ilustrovan sledećim, neograničavajućim primerima u kojimaosim ako je drugačije naznačeno: svi procesi izvedeni na sobnoj ili ambijentalnoj temperaturi, koja se kreće u opsegu od 18-25 °C; uparavanje rastvarača se izvodi na rotacionom uparivaču pod sniženim pritiskom sa temperaturom kupatila do 60 °C; reakcije su praćene tankoslojnom hromatografijom (tlc) i reakciona vremena su data samo kao ilustracija; date tačke topljenja (m.p.) su nekorigovane (može doći do polimorfizma na različitim tačkama topljenja); strukuraai čistoća svih izolovanih jedinjenja su proverene bar jednom od sledećih tehnika: tlc (Merck silica gel 60 F254precoated TLC plates or Merck NH2F2543precoated HPTLC plates), masena spektrometrija, nuklearna magnetna rezonanca (NMR), infracrveni apsorpcioni spektri (IR), mikroanaliza rendgenska difrakciona analiza metodom praha (PXRD). Prinosi su dati u ilustrativne svrhe . Brza hromatografija na koloni na Merck silica gel 60 (230-400 mesh ASTM) ili Fuji Silvsia Chromatorex<®>DU3050 (Amino Type, 30-50 pm). Podaci masenog spektra male rezolucije (EI) su dobijeni na Integrity (VVaters) masenom spektrometru ili Automass 120 (JEOL) masenom spektrometru. Podaci masenog spektra male rezolucije (ESI) su dobij eni na ZMD2 (Waters) masenom spektrometru ili Quattro II (Micromass) masenom spektrometru. NMR podaci su određeni na 270 MHz (JEOL JNM-LA 270 spectrometru) ili 300 MHz (JEOL JNM-LA300) u deuterisanom hloroformu (99.8% D) ili dimetilsulfoksidu (99.9% D) kao rastvaraču, osim ako je drugačije naznačeno, u odnosu na tetrametilsilan (TMS) kao unutrašnji standard u milionitim delovima (ppm); korišćene su uobičajene skraćenice: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, br. = širok, itd. IR spektri su mereni na Shimazu infrared spektrometrur (IR-470). Optičke rotacije su merene na JASCO DIP-370 Digital Polarimeter (Japan Spectroscopic CO, Ltd.). PXRD analiza je urađena na Rigaku RINT-TTR rendgenskom difraktometru za prah koji je opremljen automatskim samplerom, 2 teta-teta goniometrom, prorezima za divergenciju snopa, seukndarnim monohromatorom i scintilacionim brojačem. Uzorak je primerljen za analizu štavljenjem praha na aluminjumski držač uzorka. Uzorak je rotiran 60.00rpm i skeniran kao 47min. Hemijski simbli imaju svoja uobičajena značenja; b.p. (tačka ključanja ), m.p. (tačka topljenja), 1 (litar(litri)), ml (mililitar (mililitri)), g (gram(i)), mg(miligram(i)), mol (molovi), mmol (milimoli), eq. (ekvivalent(i)).

PRIMER 1:A^-({l-[(4-Hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperi din- 4- il} metil)- 3- izopropil-2-okso-2,3-

dihidro- 1 //- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Korak 1. ferc- Butil ({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil] piperidin- 4-

il| metil) karbamat

U mešani rastvorterobutil(piperidin-4-ilmetil)karbamata (22.3 g, 104 mmol) u metanolu dodat je l,6-dioksaspiro[2.5]oktan (14.2 g, 124 mmol, Satyamurthy, Nagichettiar et al.,Phosphorus Sulfur, 1984, 19,113) na sobnoj temperaturi.

Zatim je smeša zagrevana na 60°C u trajanju od 4h. Ispraljive komponente su uklonjene uparavanjem i dobijeno viskozno ulje je staloženo dodatkom smeše heksana i dietiletra. Talog je prikupljen filtracijom i rekristalisan iz smeše heksana i 2-propanola dajući traženo jedinjenje 14.2 g (42%) kao bezbojan prah.

MS (ESI) m/z: 329 (M+H<+>).

m.p.: 104°C.

H-NMR (CDC13)5: 1.23-1.31 (2 H, m), 1.44 (9 H, s), 1.51-1.69 (8 H, m), 2.27-2.38 (4 H, m), 2.83-2.88 (2 H, m), 3.00 (2 H, t, J=6.2 Hz), 3.70-3.85 (4 H, m).

Anal. Izrač. za C17H32N2O4: C, 62.17; H, 9.82; N, 8.53. Nađeno: C, 62.07; H, 9.92; N, 8.58.

Korak 2. 4-{[" 4-( Aminometil) piperidin- 1 - iljmetil} tetrahidro- 2//- piran- 4- ol

U rastvorterc-butil({l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)karbamata (50.28 g, 153 mmol) u metanolu dodata je 4N HC1 u dioksanu (200 mL, 800 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle 4h, ispraljivi matrijali su uklonjeni uparavanjem . dobijeni amorfna supstancaje staložena dodatkom dietil etar/metanol (5:1). Talog je sakupljen i potepeno dodat u ledeno hladan 6N NaOH aq. (200 mL). Smeša je ekstrahovana dihlormetan/metanolom (10:1) 4 puta. Kombinovane organske faze su isprane rastvorom soli, osušene iznad MgS04i koncentrovane dajući 24.90 g (99%) traženog jedinjenja kao svetio braon amorfnu supstancu.

MS (ESI) m/z: 229 (M+H<+>).

1 H-NMR (CDCI3) §: 1.19-1.28 (2 H, m), 1.44-1.63 (8 H, m), 1.65-1.71 (2 H, m), 2.32 (2 H, s), 2.35 (2 H, t, J=l 1.0 Hz), 2.57 (2 H, d, J=5.7 Hz), 2.85-2.90 (2 H, m), 3.70-3.81 (4 H, m).

Korak 3. A-(( l-[( 4- Hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil1piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-

okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

U mešanu smešu1 -izopropil-1,3-dihidro-2f/-benzimidazol-2-ona ( J. Med. Chem. 1999, 42, 2870-2880)(23.0 g, 130 mmol) i trietilamina (54.6 mL, 392 mmol) u tetrahidrofuranu (300 mL) posetepeno je dodat trifozgen (38.8 g, 130 mmol) u tetrahidrofuranu (200 mL) na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša zagrevana na 80°C u trajanju od 4h. Posle hlađenja ,u smešu je dodat rastvor 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2/f-piran-4-ola (korak 2 Primer 1) (24.9 g, 109 mmol) i trietilamina (45 mL, 109 mmol) u tetrahidrofuranu (500 mL). Zatim je smeša zagrevana 6h na 80°C. Posle hlađenja, zas. NaHCC>3 aq je dodat u smešu. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (500 mLx4). Ekstrakti su isprani rastvorom soli, osušeni iznad MgSC>4 i koncentrovani. Ostatak je hromatografisan na koloni od aminopropil-silika gela eluiranjem sa heksan/etil acetat (3:1) dajući 31.3 g (67%) tarženog jedinjenja kao beli čvrsti ostatak.

HNMR ( DMSO- d6)5 8.80 (1 H, br t,J =6.0 Hz), 8.06 (1 H, m), 7.41 (1 H, m), 7.19(1 H, dt,J=1.5, 7.7 Hz), 7.12 (1H, dt, J= 1.3,7.7 Hz), 4.64 (1H, septet, J=7.0 Hz), 4.08 (1 H, br s), 3.68-3.44 (4 H, m), 3.19 (2 H,t, J=6.0 Hz), 2.89 (2 H, m), 2.20 (2 H, br s), 2.09 (2 H, m), 1.68-1.10 (9 H, m), 1.47 (6 H, d,J=7.0 Hz).

MS (ESI) m/z: 431 (M+H<+>).

Anal. Izrač. za C23H34N404: C, 64.16; H, 7.96; N, 13.01. Nađeno: C, 64.13; H, 7.97; N, 12.99.

Korak 4.N -({ l-[(4-Hidroksitetrahidro-2//- piran- 4- il) metil] piperidin- 4- il} metil)-3-izopropil-2-

okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol-1-karboksamid hidrohlorid

U mešani rastvor A-({l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamida (27.0 g, 62 mmol) u metanolu (150 mL) dodat je 10% HCl-metanol (100 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 30min, ispraljivi matrijali su uklonjeni uparavanjem . Dobijeni amorf je staložen dodatkom etanol/dietiletra. Talog je rekristalisan iz etanol/dietiletra (1:1) dajući 26.5 g (90 %) traženog jedinjenja kao bezbojni prah.

'H-NMR (DMSO-d6)5: 1.49 (6 H, d, J=6.9 Hz), 1.50-1.70 (4 H, m), 1.76-1.91 (5 H, m), 3.00-3.12 (3 H, m), 3.15-3.45 (3 H, m), 3.60-3.70 (6 H, m), 4.61-4.69 (1 H, m), 5.46-5.49 (1 H, m),

7.13 (1 H, t, J=7.8 Hz) 7.20 (1 H, t, J=7.8 Hz), 7.42 (1 H, d, J=7.9 Hz), 8.07 (1 H, d, J=8.0 Hz), 8.86 (1 H, m), 9.61-9.81 (1 H, m)

MS (ESI) m/z: 431 (M+H<+>).

Anal. Izrač. za C23H35N404C1: C, 59.15; H, 7.55; N, 2.00. Nađeno: C, 58.81; H, 7.57; N, 11.85.

Alternativni način sinteze 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola je opisan u daljem tekstu.

Korak 1. Benzil ({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil] piperidin- 4- il} metil) karbamat

Smeša benzil (piperidin-4-ilmetil)karbamata (7.77 g, 31.3 mmol, Bose, D. Subhas et al.,Tetrahedron Lett.,1990, 3J_, 6903) i l,6-dioksaspiro[2.5]oktana (4.29 g, 37.6 mmol, Satyamurthy, Nagichettiar et al.,Phosphorus Sulfur,1984, _19, 113) u metanolu (93 mL) je mešana na sobnoj temperaturi, 20 h. Zatim je smeša refluksovana 8 h. Posle hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uparen uvakuumu.Ostatak je hromatografisan na koloni od silika gela eluiranjem sa metanol/dihlormetanom (1:20) dajući 5.60 g (49%) traženog jedinjenja kao bezbojno ulje.

Korak 2. 4- (| 4-( Amino meti ljpiperidin-1 - iljmetil} tetrahidro- 2/ f- piran- 4- ol

Smeša benzil ({l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)karbamata (5.60 g, 15.5 mmol, stepi) i paladijuma na atkivniranom ugljeniku (10 wt.%, 1.20 g) u metanolu (250 mL) je hidrogenivovana na sobnoj temperaturi, 20 h. Zatim je smeša profiltrirana kroz sloj Celita, i filtrat je koncentrovan uvakuumudajući 3.30 g (94%) traženog jedinjenja kao žućkasto ulje.

U nastavku sledi još jedan način sinteze 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//- piran-4-ola.

Korak 1, 14L( 4- hidroksitetrahidro- 2H- piran- 4- il) rnetil] piperidin- 44x:arboksarnid

Smeša trimetilsulfoksonium jodida (0.791 g, 3.52 mmol) i 2N-NaOH aq (1.76 mL, 3.52 mmol) u acetonitrilu (1.62 mL) je mešana 30 min na 50 °C. Zatim je u smešu dodat tetrahidro-4H-piran-4-on (0.324 g, 3.20 mmol) i dobijena smeša je mešana na 50°C, 3 h. Dodat je zas. NaCl aq. (10 mL) u rekacionu smeu na sobnoj temperaturi i organski sloje je ekstrahovan sa CH2CI2(20 mL), osušen iznad Na2S04, profiltriran i koncentrovan.

Nakon uklanjanjarastvarača, u ostatak su dodati MeOH (1.62 mL) i isonipecotamid (0.381 g, 2.88 mmol, smeša je mešana 14 h na 75°C u struji N2. Reakciona smeša je koncetrovana i ostatak je rekristalisan iy MeOH-acetonitrila daju'i 0.484 g (2.00 mmol) traženog jedinjenja kao beli čvrsti ostatak.

'H-NMR (300 MHz, DMSO-ć/6) 5 7.19 (br s, IH), 6.69 (br s, 1 H), 4.10 (s, 1 H), 3.70-3.50 (m, 4 H), 2.95-2.85 (m, 2 H), 2.20 (s, 2 H), 2.15-1.85 (m, 3 H), 1.65-1.50 (m, 6 H), 1.40-1.25 (m, 2 H).

Korak 2. 4-|[4-( Aminometil) piperidin- l- il]metil}tet rahidro- 2//- piran- 4- ol tozilat

U mešanu suspenziju NaBH4(0.505 g, 13.2 g) u trietilen glikol dimetil etru (12.8 mL) dodat je rastvor l-[(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)metil]piperidin-4-karboksamida (0.640 g, 2.64 mmol) i AcOH (0.765 mL, 13.2 mmol) u trietilen glikol dimetil etru (3.2 mL) u kapima na 80°C u struji N2. Reakcionoj smeši je dodata 2N-HC1 aq do pH vrednosti < 3, zatim je dobijena smeša mešana na sobnoj temperatur 1 h. dodat je u smešu CH2CI2(30 mL) i 2N-NaOH aq. do pH vrednosti organskog sloja od > 10. Organski sloje je tri puta ekstrahovan sa CH2CI2, i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2S04, profiltrirani i koncentrovani.

U prostali rastvor (traženo jedinjenje u trietilen glikol dimetil etru) 60°C dodat je rastvor monohidrat p-toluensulfonske kiseline (0.408 g, 2.11 mmol) u MeOH (1.28 mL), pa je zatim smeša ohlađena do sobne temperature. Dobijeni čvrsti ostatak je sakupljen usisavanjem i ispran heksaom dajući traženo jedinjenje (0.340 g, 0.849 mmol) kao beli čvrsti ostatak.

'H-NMR (300 MHz, DMSO-J6) 8 7.61 (br s, 2 H), 7.55-7.40 (m, 2 H), 7.15 -7.05 (m, 2 H), 4.11 (br s, 1 H), 3.70-3.45 (m, 4 H), 2.95-2.85 (m, 2 H), 2.68 (d, J = 7.0, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 2.22 (s, 2 H), 2.07 (t, J = 11.0, 2 H), 1.65-1.45 (m, 4 H), 1.55-1.35 (m, 1 H), 1.40-1.25 (m, 2 H), 1.30-1.10 (m, 2 H).

PRIMER 2.

N -( j l-[( 4- Hidroksitetrahidro- 2/^ piran- 4- il) metil] piperidin- 4- il} m

dihidro- 1 ij- benzimidazol- 14tarboksamid hemiedizilat

U mešani rastvorN-({ l-[(4-hidxoksitetrahidro-2//-piran-4-il)methy]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//dDenzimidazol-14xarboksamida 1.51 g (3.51 mmol) u etil acetatu (10 mL) i metanolu (10 mL) dodat je rastvor 1,2-etanedisulfonske kiseline dihidrat 397 mg (1.75 mmol) u metanolu (5.0 mL) i dobijena suspenzija je mešana 5 h na sobnoj temperaturi. Smeša je profiltrirana i prvi prinos je sušen u vakuumu, 5 h na 100 °C dajući 1.78 g sirovog proizvoda. 1.61 g sirovog proizvoda je rastvoreno u metanolu (20 mL) i u rastvor je dodat etil acetat (20 mL). Dobijena suspenzija je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Smeša je profiltrirana i prinos je sušen u vakuumu, 4 h na 100 °C dajući traženo jedinjenje 1.13 g (61%) u vidu bezbojnih kristala.

MS (ESI) m/z: 431 (M+H)<+>.

m.p.: 233 °C.

IR (KBr) n: 2866, 1738, 1683, 1558, 1373, 1217, 1028, 756 cm"<1>.

H NMR (DMSO-fifc) 6 8.96 (0.25 H, br s), 8.85 (1 H, br t,J=6.0 Hz), 8.61 (0.75 H, br s), 8.06(1 H, m), 7.43(1 H, m), 7.21 (1H, dt, J= 1.3, 7.7 Hz). 7.13(1 H, dt, J=1.2, 7.7 Hz), 5.26 (1 H, br s), 4.65 (1 H, septet,J=7.0 Hz), 3.74-2.92 (12 H, m), 2.64 (2 H, s), 2.00-1.35 (9 H, m), 1.47 (6 H, d, 7= 7.0 Hz).

Anal. izrač. za C23H34N4O4 • 0.5 C2H606S2: C, 54.84; H, 7.09; N, 10.66; S, 6.10. Nađeno: C, 54.50; H, 7.24; N, 10.60; S, 6.08.

PXRD difraktometar, ugao (2-Teta°): 10.2, 11.9, 16.3, 17.3, 17.6,21.8,24.2.

PRIMER 3.

3 - Izopropil-//- {[ 1 -( 2- morfolin- 4- il- 2- oksoetil) piperidin- 4- illmetil} - 2- okso- 2, 3 - dihidro- 1 H -

benzimidazol- 1 - karboksamid monooksalat

Traženo jedinjenje je dobijeno na način sličan onom opisanom u Koraku 3 Dobijanja 1 polazeći od 4-(hloracetil)morfolina (B. G. Hazra; V. S. Pore; S. P. Mavbhate,Org. Prep. Proced. Int.,1989,27, 355-8).

MS (ESI) m/z: 440 (M+H)<+>.

m.p.: 194.2 °C.

IR (KBr)v: 3443,2934, 1765, 1728, 1686, 1659, 1612,1551 cm"<1>.

'H-NMR (CDC13) (slobodna baza) 6: 9.00-8.88 (IH, m) 8.30-8.22 (IH, m), 7.23-7.12 (3H, m), 4.78-4.62 (IH, m), 3.66 (4H, s), 3.70-3.58 (4H, m), 3.32 (2H, t, J=6.3 Hz), 3.15 (2H, s), 2.94-2.84 (2H, m), 2.14-2.01 (2H, m), 1.86-1.23 (5H, m), 1.56 (6H, d, J=7.0 Hz). 1 H-NMR (DMSO-d6) (oblik soli) 8: 8.92-8.80 (IH, m) 8.07 (IH, d, J=7.7 Hz), 7.45 (IH, d, J=7.5 Hz), 7.26-7.06 (2H, m), 4.76-4.56 (IH, m), 4.10-2.60 (18H, m), 1.90-1.40 (3H, m), 1.49 (6H, d, J=6.9 Hz).

Anal. Izrač. za C25H35N508: C, 56.27; H, 6.61; N, 13.13. Nađeno: C, 56.25; H, 6.82; N, 12.98.

PRIMER 4.

3-Izopropil-7V- {[ 1 -( 3 - morfolin- 4- il- 3 - oksopropil) piperidin- 4- il"| metil} - 2- okso- 2, 3 - dihidro- 1 H -

benzimidazol-1 -karboksamid monooksalat

U smešu 3-izopropil-2-okso-<y>V-(piperidin-4-ilmetil)-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamida (150 mg, 0.474 mmol) i 4-(3-hlor-propanoil)-morfolina (G. Mattalia,; C. Serafini; U. Bucciarelli,Farmaco, Ed. Sci., 1976, 31, 457-67)(300 mg, 1.185 mmol) u 4.7 ml A^V-dimetilformamida dodat je trietilamin (0.23 ml, 1.659 mmol) i natrijum jodid (178 ml, 1.185 mmol). Reakciona smeša je mešana 6 dana na 90 °C. Reakciona smeša je zatim koncetntrovana uparavanjem . Ostatak je razblažen vodenim rastvorom NaHC0310 ml, ekstrahovan dihlormetanom 30 ml tri puta. Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad MgS04i koncentrovani. Preparativnom TLC (elutent: CHaCK/metanoHlO/l) dobijeno je amorfno ulje braon boje 130 mg (60%). Amorfni materijal (130 mg) je rastvoren u 3 ml metanola i povećana je kiselost dodatkom rastvora 24 mg oksalne kiseline u 2 ml MeOH. Smeša je koncentrovana . Kristalizacijom dobijenog ostatka iz AcOEt-EtOH cobijeno je 107 mg belog amorfnog traženog jedinjenja.

MS (ESI) m/z: 458 (M+H)+.

IR (KBr) v: 3443, 2941, 1732, 1697, 1686, 1647, 1638, 1558 cm"'. 1 H-NMR (CDC13) (slobodna baza) 8: 9.06-8.94 (IH, br) 8.24-8.19 (IH, m), 7.26-7.10 (3H, m), 4.76-4.64 (IH, m), 3.75-2.80 (10H, m), 2.60-1.30 (13H, m), 1.56 (6H, d, J=7.0 Hz). H-NMR (CDCI3) (oblik soli) 5: 9.10-9.00 (IH, m) 8.27-8.17 (IH, m), 7.33-7.12 (3H, m), 4.87-4.62 (IH, m), 3.78-2.65 (16H, m), 2.20-1.60 (7H, m), 1.56 (6H, d, J=6.9 Hz).

Anal. Izrač. za Cza^vN^VO^H^ »1.3^0: C, 51.21; H, 6.40; N, 10.74. Nađeno: C, 50.90; H, 6.26; N, 11.13.

PRIMER 5.

3- Izopropil- jV-{[ l -( 4- morfolin- 4- il- 4- oksobutil) piperidin- 4- il]metil|-2-okso-2,3-dihidro-l H-benzimidazol- 1 - karboksamid monooksalat

Traženo jedinjenje je dobijeno na na;in sli;an onom opisanom u Primeru 4 polezeći od 4-(4-hlor-butiril)-morfolina (Schlesinger; Prill; B. G.Hazra; J. Amer. Chem. Soc,1956,78,6123-6124).

MS (ESI) m/z: 472 (M+H)<+>.

IR (KBr) v: 3443, 1728, 1686, 1647-1616, 1551 cm-<1>.

H-NMR (CDCI3) (slobodna baza) 5: 9.02-8.88 (IH, m) 8.31-8.20 (IH, m), 7.22-7.04 (3H, m), 4.80-4.60 (IH, m), 3.66-3.56 (8H, m), 3.40-3.22 (2H, m), 3.00-2.88 (2H, m), 2.50-2.30 (6H, m), 2.00-1.20 (7H, m), 1.57 (6H, d, J=7.1 Hz).

'H-NMR (DMSO-d6) (oblik soli) 5: 8.93-8.79 (IH, m) 8.07 (IH, d, J=7.5 Hz), 7.44 (IH, d, J=7.5 Hz), 7.27-7.08 (2H, m), 4.75-4.58 (IH, m), 4.47-2.30 (18H, m), 1.90-0.90 (7H, m), 1.49 (6H, d, J=6.9 Hz).

Anal. Izrač. za C27H39N508: C, 57.74; II, 7.00; N, 12.47. Nađeno: C, 57.52; H, 7.03; N, 12.32.

PRIMER 6.

N -( { 1 -\( trans - 1,4-Dihidr oksiheksil) metillpiperidin- 4- il} metil)- 3 - izopropil- 2- okso- 2. 3 -dihidro-1 //- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Korak 1. ferc- Butil( l- oksaspiro[ 2. 51oct- 6- iloksi)difenilsilan

<1>( trans)<1>(c/s)<1>

U mešanu suspenziju natrijum hidrida (60% u mineral oil, 441 mg, 11.0 mmol) u DMSO (7 ml) dodat je trimetilsulfoksonium jodid (2.53 g, 11.5 mmol) na sobnoj temperaturi, i smeša je mešana 30min na sobnoj temperature. U ovu smešu je dodat rastvor4-{[ terc-butil(difenil)silil]oksi}cikloheksanona (Okamura, William H. et al.,J. Org. Chem.,1993, 58, 600-610, 3.53 g, 10.0 mmol) u DMSO-u (35 ml) u kapima na sobnoj temperature, smeša je mešana 2 h na sobnoj temperaturi. Zatim je smeša razblažena vodom(600 ml), i ekstrahovana dietiletrom (200 ml x 4). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, i koncentrovani uvakuumu. Ostatak je hromatografisan na koloni od silika gela eluiranjem sa «-heksan/etil acetat (1:10), i zatim prečišćen sa PTLC eluiranjem sa n-heksan/etil acetat (1:15) dajući 459 mg (13%,trans)i 390 mg (11%,cis)traženog jedinjenja kao bezbojna ulja

( trans)

'H-NMR (CDC13) 8: 7.70-7.66 (4 H, m), 7.46-7.35 (6 H, m), 4.03-3.97 (1 H, m), 2.63 (2 H, s), 2.07-1.63 (8 H, m), 1.08 (9 H, s).

( cis)

1 H-NMR (CDCI3) 5: 7.70-7.65 (4 H, m), 7.46-7.35 (6 H, m), 3.97-3.83 (1 H, m), 2.58 (2 H, s), 1.83-1.37 (8 H, m), 1.07 (9 H, s).

Korak 2. 7V-{[ l-({ rm»j,- 4-[ fe/- c- Butil( difenil) silil] oksi- l- hidroksicikloheksil} metil)- piperidin-4- il] metil}- 3- izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid.

Smeša ^erc-butil[(3R,6R)-l-oksaspiro[2.5]oct-6-iloksi]difenilsilana(Stepi, trans-

izomer, 283.0 mg, 0.772mmol) i 3-izopropil-2-okso-7V-(piperidin-4-ilmetil)-2,3-dihidro-l/f-benzimidazol-l-karboksamida (Dobijanje 1, korak 2, 2.48g, 0.0194mol) u MeOH (4 ml) je zagrevana 2 dana na 50°C uz mešanje. Posle hlađenja, reakciona smeša je uparena radi uklanjanja rastvarača, i ostatak je hromatografisan na silika gel koloni eluiranjem sa etil acetat /rc-heksanom (1:10) zatim metanol/dihlormetanom (1:20) dajući 308.1 mg (58 %) traženog jedinjenja kao bezboji sirup.

MS (ESI) m/z: 683 (M+H)<+>.

1 H-NMR (CDCI3) 8: 8.93 (1 H, m), 8.32-8.23 (1 H, m), 7.72-7.60 (4 H, m), 7.46-7.32 (6 H, m), 7.22-7.10 (3 H, m), 4.80-4.62 (1 H, m), 3.96 (1 H, m), 3.31 (2 H, t, J=6.26Hz), 2.92 (2 H, d, J=10.88 Hz), 2.45-2.29 (4 H, m), 1.85-1.65 (6 H, m), 1.65-1.43 (9 H, m, uključujući 6 H, d, J=7.09 Hz at 1.56 ppm), 1.43-1.25 (4 H, m), 1.06 (9 H, s).

Korak 3. Af-(( l-[( fr<an^- l, 4- Dihidroksicikloheksil) metil1piperidin- 4- il| metil)^

okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

Smešaterc-butil N- {[ 1 -({fra«5-44LrercdDutil(difenil)silil]oksi-1-hidroksicikloheksil} -metil)piperidin-4-il]metil}-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l^benzimidazol-l-karboksamida (234 mg, 0.343mol) i HC1 rastvora MeOH (50ml) je 4 h mešana na sobnoj temperaturi. Zatim je rastvarač uapern uvakuumu .Ostatku je povećana baznostdodatkom zasićenog vodenog NaHC03(30ml), ekstrahovan sa CH2CI2(30 ml X 3 puta) i kombinovani organski slojevi su osušeni iznad Na2S04. Uparavanjem rastvarača dobijenje ostatak , koji je hromatorafisan na NH-silika gel koloni, eluiranjem sa etil acetat /«-heksan (1:1-2:1) dajući 140.1 mg (92%) traženog jedinjenja kao bezbojni sirup.

MS (ESI) m/z: 445 (M+H)<+>.

<i>H NMR (CDCI3) 5 8.93 (1 H, br t, J=5.87 Hz), 8.32-8.20 (1 H, m), 7.25-7.03 (3 H, m), 4.80-4.62 (1 H, m), 3.94 (1 H, m), 3.31 (2 H, t, J=6.10 Hz), 2.89 (2 H, br d, J=l 1.53 Hz), 2.36 (2 H, s), 2.34 (2 H, t, J=11.86 Hz), 2.00-1.85 (2 H, m), 1.82-1.25 (18 H, m, uključujući 6 H, d, J=7.09 Hz na 1.56 ppm).

140.1 mg ovog sirupa je rastvoreno u HC1 rastvoru u MeOH (4 ml), concentrated, i osušeni uvakuumuat 50°C , 5h dajući 139.2 mg traženog jedinjenja kao žut amorfni čvrst ostatak.

MS (ESI) m/z: 445 (M+H)<+>.

<*>H NMR (DMSO-tft) 5 : 9.35-8.75 (IH, m), 8.86 (1 H, t, J-6.59 Hz), 8.07 (1 H, d, J=7.74 Hz), 7.44 (1 H, d, J=7.58 Hz), 7.22 (1 H, dt, J=1.15 Hz, 7.42 Hz), 7.14 (1 H, dt, J=1.32 Hz, 7.74 Hz), 5.04 (1 H, br s), 4.75-4.45 (1 H, m), 3.70 (1 H, br s), 3.59 (2 H, d, J=l 1.70 Hz), 3.50-2.90 (8 H, m), 1.90-1.57 (8 H, m), 1.57-1.30 (10 H, m, uključujući 6 H, d, J=6.92 Hz at 1.49 ppm)

IR(KBr): 3285, 2936, 2677, 1728, 1686, 1611, 1549, 1481, 1375, 1298, 1204, 1157, 1101, 1018,762 cm"<1>

Anal. Izrač. za C24H36N4O4-HCI-2H2O: C, 57.76; II, 7.88; N, 11.23. Nađeno: C, 57.54; H, 7.90; N, 11.21.

PXRD difraktometar, ugao (2-Teta°): 8.3, 14.5, 17.7, 18.3, 19.1, 26.4, 27.5.

PRIMER7.

A^l-[( c/, y- l, 4- Dihidroksiheksil)^

1 i7- benzimidazol- l - karboksamid hidrohlorid

Korak 1. 7VW[ l-({ c/, y- 4-[ efrc- Butil( dife^ piperidin-4-

il] metil|- 3- izopropil- 2- okso- 23- dihidro- l#- benzimidazol-l -karboksamid.

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoh za Korak 2 u Primeru 6 polezeći od/erc-butil[(3S,6S)-l-oksaspiro[2.5]oct-6-iloksi]difenilsilana (Primer 6, Korak 1, ds-izomer, 311.0 mg, 0.848 mmol) umesto terc-butil[(3R,6R)-l-oksaspiro[2.5]oct-6-iloksijdifenilsilana.

MS (ESI) m/z: 683 (M+H)+.

'H-NMR (CDC13) 5: 8.91 (1 H, t, J=5.87 Hz), 8.30-8.22 (1 H, m), 7.72-7.63 (4 H, m), 7.45-7.30 (6 H, m), 7.20-7.10 (3 H, m), 4.80-4.63 (1 H, m), 3.59 (1 H, m), 3.29 (2 H, t, J=6.24 Hz). 2.83 (2 H, d, J=l 1.74 Hz), 2.26 (2 H, t, J=l 1.55 Hz), 2.18 (2 H, s), 1.85-1.65 (4 H, m), 1.65-1.50 (11 H, m, uključujući 6 H, d, J=7.15 Hz at 1.56 ppm), 1.40-1.30 (2 H, m), 1.15-1.00 (11 H, m, uključujući 9 H, s, 1.05 ppm).

Korak 2. 7V-({ l-[( c/ M, 4- Dihidroksicikloheksil) m

2, 3- dihidro- 1 //- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj za Korak 3 u Primeru 6 polazeći od ^-{[l-dc/^-f/erc-butiKdifeniljsililjoksi -1-hidroksicikloheksil}- metiljpiperidin-4-il]metil}-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamida (295.0 mg, 0.432 mmol) umesto V-{[l-({^ra«5-4-[difenil(trimetilsilil)metoksi]-l-hidroksicikloheksil}metil)piperidin-4-il]metil}-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//- benzimidazol-1 -karboksamida.

MS (ESI) m/z: 445 (M+H)<+>.

<]>H NMR (CDC13) 5 8.93 (1 H, br t, J=5.60 Hz), 8.31-8.22 (1 H, m), 7.25-7.10 (3 H, m), 4.80-4.62 (1 H, m), 3.63-3.49 (1 H, m), 3.31 (2 H, t, J=6.10 Hz), 2.89 (2 H, br d, J=l 1.54 Hz), 2.33 (2 H, dt, J=1.81 Hz, 11.70 Hz), 1.85-1.60 (16 H, m, uključujući 6 H, d, J=7.09 Hz at 1.57 ppm), 1.45-1.18(4 H, m).

165.7 mg ovog sirupa je ratvoreno u HC1 rastvoru u MeOH (4 ml), koncentrovano, i osušeno uvakuumuna 50°C u trajanju o 5h, dajući 164.7 mg traženog jedinjenja kao žute amorfne supstance.

MS (ESI) m/z: 445 (M+H)<+>.

<I>H NMR (DMSO-ć/6) 8 : 9.30-8.90 (IH, m), 8.86 (1 H, t, J=5.93 Hz), 8.07 (1 H, d, J=7.58 Hz), 7.44 (1 H, d, J-7.58 Hz), 7.22 (1 H, dt, JM.48 Hz, 7.75 Hz), 7.15 (1 H, dt, J-1.15 Hz, 7.74 Hz), 4.75-4.58 (1 H, m), 3.70-2.90 (11 H, m), 1.90-1.67 (6 H, m), 1.67-1.20 (12 H, m, uključujući 6 H, d, J=6.92 Hz at 1.49 ppm).

IR(KBr): 3294,2936, 2673, 1728, 1686, 1611, 1545, 1479, 1375, 1298, 1203, 1158, 1134, 1101, 1051,762 cm"<1>

Anal. Izrač. za C24H36N4O4-HCI-5H2O: C, 54.79; H, 8.05; N, 10.65. Nađeno: C, 54.75; H, 7.88; N, 10.56.

PRIMER 8:6- Fluoro-. A/-({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2^

okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

Korak 1, 6- Fluoro- 7V-({ 1 -[(4-hidrok sitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metillpiperidin- 4- il} metil)- 3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri opisanoj za Korak 3 u Primeru 1 polzeći od 5-fluoro-l-izopropil-l,3-dihidro-277-benzimidazol-2-ona (I. Tapia et al.,J. Med. Chem., 1999, 42, 2880.)i 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 449 (M+H<+>).

'H-NMR (CDCI3) 8: 1.12-1.70 (8 H, m), 1.55 (6 H, d, J-7.0 Hz), 1.74(2 H, brd, 12.8 Hz), 2.31 (2 H, s), 2.35 (2 H, brt, J=l 1.9 Hz), 2.88 (2 H, brd, J=l 1.7 Hz), 3.30 (2 H, t, J=6.2 Hz), 3.70-3.85 (4 H, m), 4.62-4.75 (1 H, m), 6.90 (1 H, td, J=9.0, 2.4 Hz), 7.02-7.07 (1 H, m), 8.05 (IH, dd, J=9.5, 2.6 Hz), 8.85-8.92 (1 H, m).

Korak 2. 6-Fluoro-Ar-({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil1piperidin-4-il}metil)-3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- 1 7/ 7- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Traženo jedinjenje je pripremljeno prema proceduri opisanoj za Korak 4 u Primeru 1 od 6-fluoro-iV-({l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamida (korak 1 Primer 8).

MS (ESI) m/z: 449 (M+H<+>).

1 H-NMR (DMSO-d6) 8: 1.46 (6 H, d, 3=6. 9 Hz), 1.55-1.65 (4 H, m), 1.70-1.91 (4 H, m), 2.90-3.28 (8 H, m), 3.50-3.67 (6 H, m), 4.56-4.69 (1 H, m), 5.30-5.37 (1 H, m), 5.76 (1 H, s), 7.08 (1 H, td, J=9.0, 2.4 Hz), 7.44-7.49 (1 H, m), 7.85 (IH, dd, J=9.5, 2.5 Hz), 8.81-8.85 (1 H, m). Anal. Izrač. za C23H34FN4O4CI: C, 56.96; H, 7.07; N, 11.55. Nađeno: C, 57.00; H, 7.20; N, 11.43.

PXRD difraktometar, ugao (2-Teta°): 10.0, 14.6, 16.2, 18.5, 23.2, 25.3, 27.3.

PRIMER 9:5- fluoro- Ar-({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2i7- piran- 4- il)metil]pi peridin- 4- il| metil)- 3- izopropil- 2-

okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Korak 1. ( 5- fluoro- 2- nitrofenil) izopropilamin

U mešanu smešu 2,4-difluoro-l-nitrobenzena (4.77 g, 30 mmol) i K2CO3(4.14 g, 30 mmol) u THF -u (30 mL) dodat je izopropil amin (1.77g, 30 mmol) u THF-u (10 mL) na 0°C. Nakon mešanja od 13h, nerastvorni materijali su uklonjeni fitlracijom kroz sloj Celita i filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom dajući traženo jedinjenje (5.25 g, 88%) kao bledo žuto ulje.

MS (ESI) m/z: 405 (M+H<+>).

H NMR (CDCI3): 8 8.21 (1 H, dd, J= 9.3, 6.0 Hz), 6.48 (1 H, dd, J= 11.7, 2.6 Hz), 6.39-6.29 (1 H, m), 3.81-3.66 (1 H, m), 1.33 (6 H, d, J=6.4 Hz)

Korak 2. 6- fluoro- l- izopropil- 1. 3- dihidro-2//- benzimidazol- 2- on

Smeša (5-fluoro-2-nitrofenil)izopropilamina (Korak 1 Primer 9, 5.85 g, 30 mmol) i 10% Pd-C (600 mg) u MeOH je mešana u atmosferi gasnog vodonika na sobnoj temperaturi u trajanjuu od 12 h. katalizator je profiltriran kroz sloj Celita, i filtrat je uparen pod sniženim pritiskom. U ostatak je dodat 1, 1'-karboni ldiimidazol (4.5 g, 28 mmol) i THF (100 mL) i zatim mešan lOh na 100°C. Posle hlađenja, ispraljive materije su ukolnjene pod sniženim pritiskom i ostatak je particionisan između etilacetata i H2O. Posle ekstraksije sa etilacetatom

(3 puta), kombinovana organska faza je isprana rastvorom soli, osušena iznad MgSC>4 i koncentrovana. Ostatak je hromatografisan na koloni od silika gela eluiranjem sa heksan/etil acetatom (2:1) dajući 3.47 g (60%) traženog jedinjenja kao belu čvrstu supstancu.

MS (ESI) m/z: 195 (M+H<+>), 193 (M-H<+>).

H NMR (CDC13): 5 7.06-6.99 (1 H, m), 6.90 (1 H, dd, J=9.2, 2.4 Hz), 6.82-6.72 (1 H, m), 4.83-4.62 (1 H, m), 1.54 (6 H, d, J=7.1 Hz)

Korak 3. 5- fluoro- 7vr-( j l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metillpi peridin- 4- il| metil)-3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- li/- benzimidazol- l- karboksamid

U mešanu smešu 6-fluoro-l-izopropil-1,3-dihidro-2//-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 9, 0.58 g, 3 mmol) i p-nitrofenilhlorformata (0.66 g, 3.3 mmol) u dihlormetanu (15 mL) dodat je trietilamin (1.25 mL, 9.0 mmol) na sobnoj temperaturi.posle mešanja od 2h, u smešu je dodat rastvor 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1, 0.75 g, 3.3 mmol) u dihlormetanu (15 mL). Nakon mešanja od 4h, smeša je razblažen etil acetatom (100 mL). Zatim je organski sloj ispran sa 0.5 N NaOH aq. (10 mL), 5 puta i rastvorom soli, osušen iznad MgS04i koncentrovan. Ostatak je hromatografisan na aminopropil-silika gel koloni eluiranjem heksan/etil acetatom (3:1) dajući 0.97 g (79 %) traženo jedinjenje kao beli čvrsti ostatak.

MS (ESI) m/z: 449 (M+H<+>).

H NMR (CDCI3): 5 8.84-8.74 (1 H, m), 8.21-8.11 (2 H, m), 7.02-6.91 (2 H, m), 4.68-4.56 (1 H, m), 3.87-3.72 (4 H, m), 3.34-3.25 (2 H, m), 2.93-2.82 (2 H, m), 2.42-2.25 (4 H, m), 1.79-I. 68 (2 H, m), 1.67-1.29 (13 H, m).

Anal. izrač. za C23H33N4O4F: C, 61.59; H, 7.42; N, 12.49. Nađeno: C, 61.45; H, 7.33; N, 12.40.

PRIMER10: 5, 6- difluoro- jV-( n-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil] piperidin- 4- il} metil)- 3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Korak 1. 4, 5- difluoro- 7VT- izopropil- 2- nitroanilin

4,5-difluoro-2-nitroanilin (3.48 g, 20 mmol), 2,2-dimetoksipropan (11.9 mL, 100 mmol), i trifluorsirćetna kiselina (1.6 mL, 21 mmol) su rasstvoreni u toluenu (40 mL) i mešani 1 h na sobnoj temperature. Polako je dodat bor-piridinski compleks (2.12 mL, 21 mmol). Reakciona smeša je mešana 20 h. Rastvarač je uapren u vakuumu , i ostatku je dodata voda i ekstrahovan dihlormetanom. Organski ekstrakt je osušen (Na2S04) i koncentrovan u vakuumu . Ostatak je hromatografisan na aminopropil-silika gel koloni, eluiranjem sa heksan/etil acetatom (30:1) dajući 2.42 g (56%) traženog jedinjenja kao čvrsti ostatak svetio narandžaste boje.

'h NMR (CDC13): C 8.05 (1 H, dd, J=10.8, 8.6 Hz), 6.61 (1 H, dd, J=12.6, 6.8 Hz), 3.77-3.62 (1 H, m), 1.33 (6 H, d, J=6.2 Hz).

Korak 2. 5, 6- difluoro- l - izopropil- L3- dihidro- 2/-/- benzimidazol- 2- on

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 2 u Primeru 9 od 4.5- difluoro-.V-izopropil-2-nitroanilina (Korak 1 Primer 10).

MS (ESI) m/z: 213 (M+H<1>), 211 (M+H<1>).

H NMR (CDCI3): 5 7.00-6.89 (2 H, m), 4.76-4.57 (1 H, m), 3.86-3.69 (4 H, m), 3.31 (2 H, t, J=7.0 Hz), 2.95-2.82 (2 H, m), 2.35 (2 H, t, J= 13.7 Hz), 2.31 (2 H, s), 1.67-1.25 (10 H, m), 1.55(6 H, d, J=7.7 Hz).

Korak 3. 5, 6- difluoro- 7V-({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2/ f- piran- 4- il) metil] piperidin-4-il}metil)-3-

izopropil- 2- okso- 2, 3 - dihidro- 1 //- benzimidazol- 1 - karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 u Primeru 9 od 5.6- difluoro-l-izopropil-l,3-dihidro-2//-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 10) i 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 467 (M+H<+>).

H NMR (CDCb): 5 8.88-8.78 (1 H, m), 8.25-8.15 (1 H, m), 6.94-6.79 (2 H, m), 4.73-4.57 (1 H, m), 3.86-3.69 (4 H, m), 3.31 (2 H, t, J=7.0 Hz), 2.95-2.82 (2 H, m), 2.35 (2 H, t, J= 13.7 Hz), 2.31 (2 H, s), 1.67-1.25 (10 H, m), 1.55 (6 H, d, J=7.7 Hz).

Korak 4. S^- difluoro- Tv^ ll-^- hidro

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- li- f- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

A smeša 5,6-difluoro-/V-({1 -[(4-hidroksitetrahidro-2i/-piran-4-il)mctil]pipcridin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-17:/-benzimidazol-l-karboksamida (Korak 3 Primer 10. 113 mg, 0.242 mmol) i 10% HCl-metanola (5 mL) je mešana lh. Zatim su sniženim pritiskom uparene ispraljive komponente pod i ostatak je rekristalisan iz etanol-dietil etra dajući 88 mg (72 %) traženog jedinjenja kao bezbojnu prah.

MS (ESI) m/z: 467 (M+H<+>).

H NMR (DMSO-d6): 5 8.82-8.71 (1 H, m), 8.08-7.93 (1 H, m), 7.78-7.67 (1 H, m), 5.35-5.26 (1 II, m), 4.69-4.52 (1 H, m), 3.70-3.51 (6 H, m), 3.41-2.91 (7 H, m), 1.94-1.53 (8 H, m), 1.45 (6 H, d, J=7.0 Hz).

Anal. izrač. za C23H33N4O4F2CHH2O: C, 53.96; H, 6.69; N, 10.94. Nađeno: C, 53.67; H, 6.64; N, 10.89.

PRIMER 11:6- hlor-/ Vr-(! l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metinpiperidin- 4- il} metil)- 3- izopropd- 2-

okso- 273- dihidro- 1 //- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Korak 1. 6- hlor-/ V-({ l- r( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metillpiperidin- 4- il} metil')- 3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 Primera 9 od 5-hlor-l-izopropil-l,3-dihidro-2//-benzimidazol-2-ona (I. Tapia etal., J. Med. Chem.,42, 2880

(1999)) i 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 465 (M+H<+>).

H NMR (CDCh): 8 8.33-8.30 (1 H, m), 7.19-7.14 (1 H, m), 7.04-7.03 (1 H, m), 4.73-4.57 (1 H, m), 3.82-3.71 (4 H, m), 3.31 (2 H, t, J=6.4Hz), 2.95-2.83 (2 H, m), 2.41-2.29 (4 H, m), I. 79-1.68 (2 H, m), 1.67-1.25 (8 H, m), 1.54 (6 H, d, J=7.0 Hz).

Korak 2. 6- hlor- AA-({ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil] pipcridin- 4- il} mctil)- 3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- 1 - karboksamid hidrohlorid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 4 Primera 10 od 6-hlor-A<r->({l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l/7-benzimidazol-l-karboksamida (Korak 1 Primer 11)

MS (ESI) m/z: 465 (M+H<+>).

'h NMR (DMSO-d6): 8 8.84-8.76 (1 H, m), 8.10-8.07 (1 H, m), 7.51-7.45 (1 H, m), 7.32-7.25 (1 H, m), 5.38-5.32 (1 H, m), 4.73-4.56 (1 H, m), 3.70-3.55 (6 H, m), 3.41-2.91 (7 H, m), 1.95-1.58 (8 H, m), 1.48 (6 H, d, J=7.7 Hz).

Anal. izrač. za CV^N^CLZ-O.SHzO: C, 54.12; H, 6.91; N, 10.98. Nađeno: C, 53.85; H, 6.90; N, 10.78.

PRIMER 12:

5- hlor- Am l- r( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metillpiperidin- 4- illmetil)- 3- izopropil- 2-

okso- 2, 3- dihidro- 17/- benzimidazol- l- karboksamid

Korak 1. 5- hlor- A^- izopropil- 2- nitroanilin

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 1 Primera 10 od 5-hlor-2-nitroanilina.

'h NMR (CDCI3): 5 8.12 (1 H, d, J= 9.2 Hz), 6.84 (1 H, d, J=2.0 Hz), 6.57 (1 H, dd, J=9.2, 2.0 Hz), 3.81-3.71 (1 H, m), 1.33 (6 H, d, J=6.2 Hz)

Korak 2. 6- hlor- 1- izopropil- l, 3- dihidro- 2//- benzimidazol- 2- ona

Smeša 5-hlor-/vr-izopropil-2-nitroanilina (Korak 1 Primer 12, 0.76 g, 3.54 mmol), gvožđe (0.99 g, 17.7 mmol) i amonijum hlorid (0.38 g, 7.08 mmol) su suspendovani u etanolu (27 mL) i H20 (9 mL). Zatim je smeša zagrevana na 80°C, 3h. Posle hlađenja, nerastvorni matrijali su profiltrirani kroz sloj Celita, i filtrat je uparen pod sniženim pritisko. U ostatak je dodatN, N'-karbonildiimidazol (CDI, 0.57 g, 3.50 mmol) i THF (10 mL) i onda mešan 1 Oh na 100°C. Posle hlađenja, ispraljivi materijali su upreni pod sniženim pritiskom i ostatak je particionisan između etilacetata i H20. Posle ekstrakcije sa etilacetatom (3 puta), kombmovane organske faze su isprane rastvorom soli, osušene iznad MgS04i koncentrovane. Ostatak je hromatografisan na silika gel koloni eluiranjem sa heksan/etil acetatom (2:1) dajući 0.30 g (40%) traženog jedinjenja kao belu čvrstu supstancu.

H NMR (CDCh): 8 6.99-6.90 (2 H,m), 6.84-6.74(1 H, m), 4.94-4.77 (1 H, m), 1.64 (6 H,d,

.1=7.0 Hz)

Korak 3. 5- hlor- Ar-( { l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metinpiperidin- 4- iHmetil)- 3-

izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 Primera 9 od 6-hlor-1 -izopropil-l,3-dihidro-2/Y-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 12) i 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 465 (M+H<+>).

'h NMR (CDCL): 8 8.88-8.78 (1 H, m), 8.21-8.14 (1 H, m), 7.19-7.10 (2 H, m), 4.73-4.56 (1 H, m), 3.87-3.69 (4 H, m), 3.30 (2 H, t, J=6.2 Hz), 2.94-2.84 (2 H, m), 2.41-2.27 (4 H, m), I. 79-1.68 (2 H, m), 1.67-1.25 (11 H,m).

Anal. izrač. za C73H33N4O4CI: C, 59.41; H, 7.15; N, 12.05. Nađeno: C, 59.27; H, 7.10; N. 11.72.

PRIMER 13:A-( i l-(( 4- lhdroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil1piperidin- 4- il} metil)- 3- izopropil- 5- metil- 2-

okso- 2, 3- dihidro- l/ 7- benzimidazol- l- karboksamid

Korak 1. AMzopropil- 5- metil- 2- nitroanilin

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 1 Primera 9 od 2-fluoro-4-metil-1 -nitrobenzena.

'h NMR (CDCh): 5 8.12-8.01 (2 H, m), 6.63 (1 H, brs), 6.42 (1 H, d, J=10.3 Hz), 3.94-3.72 (1 H, m), 2.33 (3 H, s), 1.32 (6 H, d, J=6.4 Hz)

Korak 2. l- izopropil- 6- metil- l, 3- dihidro- 2//- benzimidazol- 2- ona

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u koraku 2 Primera 9 odN-izopropil-5-metil-2-nitroanilina (Korak 1 Primer 13).

MS (ESI) m/z: 191 (M+H<+>).

'h NMR (CDCh): 5 7.04-6.93 (2 H, m), 6.90-6.80 (1 H, m), 4.82-4.63 (1 H, m), 2.40 (3 H, s), I. 55 (6 H,d, .1=7.0 Hz).

Korak 3.N -( i1 -[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metiljpiperidin- 4- iUmetil)- 3-izopropil-5-

metil- 2- okso- 2, 3- dihidro- 17^- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 Primera 9 od 1 - izopropil-6-metil-1,3-dihidro-2#-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 13) i 4- |[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 445 (MfH<+>).

'h NMR (CDCh;): 5 8.97-8.84 (1 H, m), 8.10(1 H, d, .1= 8.8Hz), 7.01-6.93 (2 H, m), 4.76-4.58 (1 H, m), 3.85-3.69 (4 H, m), 3.30 (2 H, t, J=6.4 Hz), 2.94-2.82 (2 H, m), 2.41 (3 H, s), 2.43-2.27 (4 H, m), 1.80-1.68(2 H, m), 1.67-1.25 (11 H,m).

Anal. izrač. od C24H36N404: C, 64.84; H, 8.16; N, 12.60. Nađeno: C, 64.78; H, 8.29; N, 12.58.

PRIMER 14:N -({ 14( 4- hidroksitetrahidro- 277- piran- 4- il) metil1piperidin- 4- il) metil)- 3- izopropil- 4- meti1- 2-

okso- 2, 3- dihidro- l/ f- benzimidazol- l- karboksamid

Korak 1. A/-({ l-[( 44iidroksitetrahidro- 2H- piran- 4- il) metil1piperidin- 4- il} metil)- 3- izopropi

metil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 Primera 9 od 1-izopropil-7-metil-l,3-dihidro-2//43enzimidazol-2-ona (I. Tapia et al.,J. Med. Chem.,42, 2880

(1999)) i 4- ![4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 445 (M+H<+>).

'h NMR (CDCh): 5 9.11-8.97 (1 H, m), 8.17(1 H, d, J=7.7Hz), 7.10-6.88 (2 H, m), 4.99-4.82 (1 H, m), 3.91 -3.69 (4 H, m), 3.29 (2 H, t, J-6.2 Hz), 2.94-2.82 (2 H, m), 2.59 (3 H, s). 2.43-2.27 (4 H, m), 1.84-1.19 (7 H, m), 1.62 (6 H, d, J=6.8 Hz).

Anal. izrač. za C24H36N4O4: C, 64.84; H, 8.16; N, 12.60. Nađeno: C, 64.73; H, 8.35; N, 12.56.

PRIMER 15:N -( \ 1 -[( 4- ludroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metillpiperidin- 4- iUmetil)- 3- izopropil-4,5-dimetil-2- okso- 2, 3- dihidro- l/ 7- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

Korak 1. A- izopropil- 2, 3- dimetil- 6- nitroanilin

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 1 Primera 10 od 2,3-dimetil-6-nitroanilina.

H NMR (CDClj): 5 7.82 (1 H, d, J=8.6 Hz), 6.79 (1 H, d, J=8.4 Hz), 3.52-3.34 (1 H, m), 2.30 (3 H, s), 2.24 (3 H, s), 1.11 (6 H, d, J=6.2 Hz)

Korak 2. l- izopropil- 6, 7- dirnetil- l, 3- dihidro- 2//- benzimidazol- 2- on

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 2 Primera 9 odN-izopropil-2,3-dimetil-6-nitroanilina (Korak 1 Primer 15).

H NMR (CDCT): 8 7.11 (1 H, brs), 6.92-6.70 (1 H, m), 5.00-4.82 (1 H, m), 2.45 (3 H, s), 2.32 (3 H, s), 1.63 (6 H, d, J=7.0 Hz).

Korak 3.N -(\ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2//- piran- 4- il) metil1piperidin- 4- il} metil)- 3- izopropil-4, 5- dimetil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l/ 7- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

U mešanu smešu l-izopropil-6,7-dimetil-l,3-dihidro-2#-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 15, 204 mg, 1 mmol) i p-nitrofenilhlorformata (220 mg, 1.1 mmol) u dihlormetanu (7 mL) dodat je trietilamin (0.42 mL, 3.0 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja od 2h, u smešu je dodat rastvor 4-{[4-(aminometil)piperidin-l-il]metil}tetrahidro-2//-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1, 230 mg, 1.0 mmol) u dihlormetanu (3 mL). Posle mešanja od 4h, smeša je razblažena etil acetatom (50 mL). Zatim je organski sloj 5 puta ispran sa 0.5 N NaOH aq. (5 mL) i rastvorom soli, osušen iznad MgS04i koncentrovan. Ostatak je pro filtriran kroz sloj aminopropil-silika gela eluiranjem sa heksan/etil acetatom (3:1) i filtrat je koncentrovan. U smešu je dodat 10% HCl-metanol (5 mL) uz mešanje od lh. Zatim su ispraljive komponente uklonjene pod sniženim pritiskom i ostatak je rekristalisan iz etanol-dietil etra dajući 100 mg (20 %) traženog jedinjenja kao bezbojni prah.

MS (ESI) m/z: 459 (M+H<+>).

"h NMR (DMSO-d6): 8 8.96-8.87 (1 H, m), 7.84(1 H, d, J=8.3 Hz), 6.95 (1 H, d, .1=8.3 Hz), 5.34-5.21 (1 H, m), 5.01-4.86 (1 H, m), 3.69-3.53 (6 H, m), 3.41-2.91 (7 H, m), 2.45 (3 H, s), 2.28 (3 H,s), 1.87-1.70 (3 H, m), 1.67-1.48 (5 H, m), 1.52 (6 H,d, J=6.6 Hz).

Anal. izrač. zaC25H39N4O4C10.5H2O: C, 59.57; H, 8.00; N, 11.12. Nađeno: C, 59.53; H, 7.98; N, 11.10.

PRIMER 16:ć- fluoro- N- flH^- hidro

metil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid hidrohlorid

Korak 1. 4- fluoro- A/- izopropil- 5- metil- 2- nitroanilin

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 1 Primera 9 od l,4-difluoro-2-metil-5-nitrobenzena(T. Timothv etal., J. Med. Chem.,35, 2321 (1992)). MS (ESI) m/z: 213 (M+H+).

'h NMR (CDCh): 5 7.82 (1 H, d, J=10.3 Hz), 6.64 (1 H, d, J=6.4 Hz), 3.88-3.67 (1 H, m), 2.30 (3 H, s), 1.31 (6 H, d, J=6.4 Hz)

Korak 2. 5- fluoro- l- izopropil- 6- metil- l, 3- dihidro- 2i:/- benzimidazol- 2- on

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u koraku 2 Primera 9 od 4-fluoro-/V-izopropil-5-metil-2-nitroanilina (Korak 1 Primer 16).

MS (ESI) m/z: 209 (M+H+).

'h NMR (CDCh): 5 7.00-6.96 (1 H, m), 6.92-6.90 (1 H, m), 4.75-4.56 (1 H, m), 2.31 (3 H, s), 1.55 (6 H,d, .1=7.0 Hz).

Korak 3. 6- fluoro- Ar-(\ l-[( 4- hidroksitetrahidro- 2/ 7- piran- 4- il) metillpiperidin- 4- il } metil)- 3-

izopropil- 5- metil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l- karboksamid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 3 Primera 9 od 5-fluoro-l-izopropil-6-metil-l,3-dihidro-2//-benzimidazol-2-ona (Korak 2 Primer 16) i 4-{[4-(aminometiI)pipendm-l-il]metil}tetrahidro-2/7-piran-4-ola (Korak 2 Primer 1).

MS (ESI) m/z: 463 (M+H<+>).

'H NMR (CDCh): 6 8.92-8.83 (1 H, m), 7.96 (1 H, d, J=10.1 Hz), 6.91 (1 H, d, J=6.2 Hz), 4.75-4.56 (1 H, m), 3.85-3.70 (4 H, m), 3.30 (2 H, t, .1=6.4 Hz), 2.94-2.82 (2 H, m), 2.42-2.29 (7 H, m), 1.84-1.19 (7 H, m), 1.55 (6 H, d, .1=7.0 Hz).

Korak 4. ć- fluoro- A^- f { 14( 4- hidroksitetrahidro

izopropil- 5- mctil- 2- okso- 2, 3- dihidro- 177- benzirnidazol- 14xarboksarnid hidrohlorid

Traženo jedinjenje je dobijeno prema proceduri opisanoj u Koraku 4 Primera 10 od 6-lluoro-A^-(! 1 -[(44ndroksitetrahidro-2vt/-piran-4-il)metil]piperidin-4-il }metil)-3-izopropil-5-metil-2-okso-2,3-dihidro-l//43enzimidazol-14iarboksamida (Korak 3 Primer 16)

MS (ESI) m/z: 463 (M+H<+>).

H NMR (DMSO-d6): 5 9.55-9.11 (1 H, m), 8.89-8.74 (1 H, m), 7.77 (1 H, d, J=10.4 Hz), 7.40 (1 H, d, .1=6.6 Hz), 5.42-5.34 (1 H, m), 4.70-4.56 (1 H, m), 3.69-3.53 (6 H, m), 3.52-2.91 (7 H, m), 2.29 (3 H, s), 1.87-1.70 (3 H, m), 1.95-1.55 (8 H, m), 1.48 (6 H, d, J=6.8 Hz).

Anal. izrač. za C74H36N4O4FCI: C, 57.76; H, 7.27; N, 11.23. Nađeno: C, 57.47; H, 7.40; N, 11.05.

DOBIJANJE 1.

Korak 1. ferc- Butil 4-( { r( 3- izopropil- 2- okso- 2, 3- dihidro- l//- benzimidazol- l-il) karbonil1aminoh" netil) piperidin- l- karboksilat

U mešani rastvor1 -izopropil-1,3-dihidro-2//-benzimidazol-2ona ( J. Meci. Cheiv.1999,42,2870-2880) (3.00 g, 17.02 mmol) i trietilamina (7.12 ml, 51.06 mmol) u 70 ml tetrahidrofurana je dodat trifozgen (5.15 g, 17.02 mmol) u 14 ml tetrahidrofurana na sobnoj temperature. Reakciona smeša je refluksovana 19 sati. Smeša je zatim ohlađena do sobne temperature, pa je dodatferobutil 4-(aminometil)piperidin-l-karboksilat (J. Prugh, L. A. Birchenough i M. S. Egbertson,Synth. Commiin., 1992, 22, 2357-60)(3.28 g, 15.32 mmol) u 10 ml tetrahidrofurana. Reakciona smeša je refluksovana još 24 sata. Zatim ohlađena i povećana joj je baznost dodatkom vodenog zasićenog rastvora NaHC0350 ml, i ekstrahovana etil acetatom 100 ml tri puta. Kombinovani ekstrakti su isprani rastvorom soli, osušeni iznad MgS04i koncentrovani. Ostatak je hromatograifsan brzom hromatografijom (elutent: heksan/etil acetat=5/l do 1/2) pri čemu je dobijeno 3.99 g (62%) traženog jedinjenja kao bezbojno ulje.

'H-NMR (CDCh) 5: 9.04-8.88 (1 H, m), 8.83-8.20 (IH, m), 7.26-7.10 (3H, m), 4.80-4.60 (IH, m), 4.28-4.02 (2H, m), 3.32 (2H, t, J=6.1 Hz), 2.82-2.60 (2H, m), 1.94-1.10 (5H, m), 1.57 (6H, d, .1=7.1 Hz), 1.45 (9H,s).

Korak 2. 3- Izopi' opil- 2- okso- AL( piperidin- 4- ilmetil)- 2, 3- dihidro- l^- benzimidazol- l-karboksamid

Rastvor terc-butil 4-({[(3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l/7-benzimidazol-l-il)karbonil]amino}metil)piperidin-l-karboksilata (3.992 g, 9.58 mmol) u 50 ml 10% hlorovodoničnoj kiselini u metanolu i 10 ml koncentrovanoj hlorovodoničnoj kiselini je mešan na sobnoj temperaturi 18 sati. Smeša je zatim koncentrovana i povećana joj je baznost dodatkom vodenog rastvora Na2C03, ekstrahovana 3 puta sa po 100 ml CHCI3. Kombinovam ekstrakti su osušeni i koncen tro vani. Ostatak je hromatografisan brzom hromatografijom (NH-silika gel, elutent: CH2Ci2/metanol=100/l) dajući bezbojno ulje 2.272 g (75%) kao traženo jedi<n>jenj.

MS (ESI) m/z: 317 (M+H)+.

'H-NMR (CDCh) 8: 8.93 (IH, br), 8.32-8.22 (IH, m), 7.24-7.02 (3H, m), 4.80-4.61 (IH. m). 3.31 (211,1, .1=6.0 I Iz), 3.20-3.05 (211, m), 2.79-2.54 (2H, m), 1.84-1.52 (3H, m), 1.57 (614, d. .1=6.9 Hz), 1.36-1.13 (2H, m).

Korak 3. N- |[ l-( 3- Hidroksi- 3- metil- 2- oksobutil) piperidin- 4- il] metiU- 3- izopro pil- 2- okso- 2, 3-

dihidro- lH- benzimidazol- l- karboksamid, monooksalat so

Smeša 3-izopropil-2-okso-A^-(piperiđin-4-ilmetil)-2,3-dihidro-l/7-benzimidazol-l-karboksamid (250 mg, 0.790 mmol), l-bromo-3-hidroksi-3-metilbutan-2-on ( G. Bertram; A. Scherer; W. Steglich; W. Weber,Tetrahedron Lett., 1996, 37, 7955-7958)(181 mg, 1.343 mmol) i trietilamin (0.28 ml, 1.975 mmol) u 8 ml tetrahidrofurana je refluksovana 15 sati. Zatim je ohlađena i razblažen sa 100 ml etil acetat i isprana vodenim NaHCCh 20 ml, rastvorom soli, osušena iznad MgS04i koncentrovana. Brzom hromatografijom ostatka (elutent: CH2Cb/metanol= 100/1 do 30/1) dobijeno je bezbojno ulje 202 mg (61%). Ulje (202 mg) je rastvoreno u 3 ml metanola i zakišeljeno dodatkom rastvora 44 mg oksalne kiseline u l ml MeOH. Smeša je koncentrovana. Rekristalizacijom nastalog čvrstog ostatka iz EtOH-AcOEt kao traženo jedinjenje dobijen je beli čvrsti ostatak 246 mg

MS(ESI)m/z:417(M+H)<+>.

m.p.: 140.5°C.

IR (KBr) v: 3404, 3306, 2980, 2941, 1728, 1690, 1612, 1541 cm"'.

' H-NMR (CDCh) (slobodna baza) 5: 8.90 (IH, br) 8.30-8.20 (IH, m), 7.24-7.10 (3H, m), 4.78-4.61 (IH, m), 3.37 (2H, s), 3.33 (2H, t, J=6.3 Hz), 3.00-2.86 (2H, m), 2.22-2.06 (2H, m), 1.90-1.22 (5H, m), 1.57 (6H, d, J=7.0Hz), 1.35 (6H, s).

'H-NMR (DMSO-d6) (oblik soli) 5: 8.92-8.81 (IH, m) 8.07 (IH, dd, J=7.7, 6.8 Hz), 7.44 (IH, d, .1=7.7 Hz), 7.28-7.10 (2H, m), 4.74-4.60 (IH, m), 4.36 (2H, bv), 4.00-2.70 (6H, m), 1.90-1.44 (5H, m), 1.49 (6H, d, J=6.4 Hz), 1.24 (6H, s).

Anal. Izrač. za C^H^Og'OJC^O «1H20: C, 54.88; H, 7.08; N, 10.41. Nađeno: C. 55.26; H, 7.18; N. 10.07.

Claims (19)

1. Jedinjenje formule (I): gde: Het predstavlja heterocikličnu grupa sa jednim atomom azota, za koji se direktno vezuje B, i od 4 do 7 atoma ugljenika i ova heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 4 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koju čine a<1>supstituenti; A je alkilen grupa sal do 4 atoma ugljenika; B je kovalentna veza ili alkilen grupa sal do 5 atoma ugljenika, i ova alkilen grupa je nesupstituisana ili supstituisana okso grupom kada R<3>predstavlja heterocikličnu grupu; R<1>je izopropil grupa ili ciklopentil grupa; R2 nezavinos predstavlja atom halogena ili alkil grupu sal do 4 atoma ugljenika; m je 0, 1. 2, 3 ili 4; i R3 predstavlja (i) cikloalkil grupa sa 3 do 8 atoma ugljenika, i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 5 supstituenata nezavisno odabrana iz grupe koju čine a supstituenti ili (ii) heterociklična grupa sa 3 do 8 atoma, i ova heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana 1 do 5 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine fi supstituenti, dati a<1>supstituenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe i an amino grupe; dati a supstituenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, amino grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe i alkoksi grupe sal to 4 atoma ugljenika; i dati (3 supstituenti su nezavisno odabrani od hidroksi grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe, amino grupe, alkil grupe sal do 4 atoma ugljenika, amino-supstitutisane alkil grupe sal do 4 atoma ugljenika i karbamoil grupe, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

2. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 1, naznačeno time, što Het predstavlja heterocikličnu grupu odabranu od a data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine a<1>supstituenti i A predstavlja alkilen grupu sa 1 do 3 atoma ugljenika.

3. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva , prema zahtevu 1, naznačeno time. što Hetpredstavlja grupu formule 1 ova grupa je nesupstituisana ili supstituisana jednim supstituentom odabranim iz skupa koji čine ct'supstituenti ; A je alkilen grupa sal do 2 atoma ugljenika; B je alkilen grupa sa 1 do 4 atoma ugljenika, i data alkilen grupa je nesupstituisana ili supstituisana oksoo grupom kada R<3>predstavlja heterocikličnu grupu; R<2>nezavisno predstavlja atom halogena ili alkil grupu sa 1 do 2 atoma ugljenika; mje 0, 1 ili 2; i R3 predstavlja (i) cikloalkil grupu sa 4 do 7 atoma ugljenika, i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz grupe koju čine a<2>supstituenti ili (ii) heterociklična grupa sa 4 do 7 atoma, i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sal do 3 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine p supstituenti.

4. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 1, naznačeno time, što Hetpredstavlja grupu formule 1 ova grupa je nesupstituisana ili supstituisana jednim supstituentom odabranim iz skupa koji čine a1 supstituenti; A je metilen grupa; B je alkilen grupa sal do 2 atoma ugljenika; R1 je izopropil grupa; R2 je predstavlja atom fluora, atom hlora ili metil; i R"1 predstavlja (i) cikloalkil grupu sa 5 do 7 atoma ugljenika, i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine a supstituenti, ili (ii) heterociklična grupa sa 5 do 7 atoma, i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine p supstituenti, dati a supstituenti su nezavisno odabrani iz skupa koji čine hidroksi grupa, amino grupa i alkoksi grupa sa 1 do 2 atoma ugljenika; i dati (3 supstituenti su nezavisno odabrani iz skupa koji čine hidroksi grupa, hidroksi-supstituisana alkil grupa sa 1 do 2 atoma ugljenika, karboksilna grupa, amino grupa, amino-supstituisana alkil grupa sa 1 do 2 atoma ugljenika i karbamoil grupa.

5. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 1, naznačeno time, što Het predstavlja grupu formule A je metilen grupa; Bje metilen grupa; R<1>je izopropil grupa; R: je atom fluora; mje 0 ili 1; i R3 predstavlja (i) cikloalkil grupu sa 5 do 6 atoma ugljenika, i data cikloalkil grupa je supstituisna sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine a<2>supstituenti, ili (ii) heterocikličnu grupu sa 5 do 6 atoma, i data heterociklična grupa je je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana iz skupa koji čine P supstituenti, datiasupstituentisu nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe; idati p supstituentisu nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe.

6. Jedinjenje ih njegova farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 1, naznačeno time, što Hetpredstavlja grupu formule A je metilen grupa; B je metilen grupa; R1 je izopropil grupa; R"je atom fluora; mje 0; i R<3>predstavlja (i) cikloheksil grupu supstituisanu sa 1 do 2 supstituenta nezavisno odabrana iz od hidroksi grupe ili amino grupe, ili (ii) Heterocikličnu grupu sa 6 atoma, i data heterociklična grupa je supstituisana hidroksi grupom ili amino grupom.

7. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 6, naznačeno time. što R<3>predstavlja (i) cikloheksil grupu supstituisanu sa 1 ili 2 hidroksi grupe, ili (ii) tetrahidropiran grupu supsituisanu sa 1 ili 2 hidroksi grupe.

8. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so, prema zahtevu 7, naznačeno time, što je R3, hidroksitetrahidropiranil ili dihidroksicikloheksil.

9. Jedinj enj e, prema zahtevu 1, koj e j e odabrano od:N-({l-[(4-hidroksitetrahidro-^ dihidro- l//-benzimidazol-1 -karboksamid;N-(j1 -[( trans- l ,4-dihidroksiheksil)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamid;N-( i 1 -[( cis-1,4-dihidroksiheksil)metil]piperidin-4-il}mctil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-1 /7-benzimidazol-l-karboksamid; i 6-fluoro-A-( | l-[(4-hidroksitetrahidro-2//-piran-4-il)metil]piperidin-4-il}metil)-3-izopropil-2-okso-2,3-dihidro-l//-benzimidazol-l-karboksamid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

10. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so, prema jednom od prethodnih zahteva 1 do 9, naznačeno time, što je farmaceutski prihvatljiva so, hidrohlorid ili hemiedizilat.

11. Farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. prema jednom od zahteva 1 do 10, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.

12. Postupak za lečenje oboljenja oboljenja nastala posredstvom 5-HT4 receptorske aktivnosti, kod sisara , koji obuhvata administriranie obolelom subjektu terapeutski efikasnu količinu jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, prema jednom od zahteva 1 do 10.

13. Postupak lečenja oboljenja odabranih od gastroezofagalnog refluks oboljenja, gastrointestinalnog oboljenja, poremećaja crevne pokretljivosti, ne-ulkusne dispepsije, funkcionalne dispepsije, sindroma nadraženih creva (IBS), konstipacije, dispepsije, ezophagitisa, oboljenja jednjaka, mučnine, oboljenja centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ove bolesti, kognitivnog poremećaja, emezisa, migrene, neurološkog oboljenja, kardiovaskularnog oboljenja, srčanog zastoja, srčane aritmije, dijabetesa i sindroma apneje, koji obuhvata administrirali) e obolelom subjektu terapeutski efikasnu količinu jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, premajednom od zahteva 1 do 10.

14. Primenajedinjenje ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, premajednom od zahteva 1 do 10 za proizvodnju leka za lečenje oboljenja koja su nastala posredstvom 5-HT4receptoske aktivnosti, kod sisara.

15. Primena jedinjenja prema zahtevu 14, gde je dato stanje odabrano od gastroezofagalnog refluks oboljenja, gastrointestinalnog oboljenja, poremećaja crevnc pokretljivosti, ne-ulkusne dispepsije, funkcionalne dispepsije, sindroma nadraženih creva (IBS), konstipacije, dispepsije, ezophagitisa, oboljenja jednjaka, mučnine, oboljenja centralnog nervnog sistema, Alzheimer-ove bolesti, kognitivnog poremećaja, emezisa, migrene, neurološkog oboljenja, kardiovaskularnog oboljenja, srčanog zastoja, srčane aritmije, dijabetesa i sindroma apneje.

16. Jedinjenje formule (2-A'): naznačeno time, što R<:1>predstavlja atom vodonika ili N-zaštitna grupa; Het je heterociklična grupa sa jednim atomom azota, za koji se direktno vezuje B, i od 4 do 7 atoma ugljenika, i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 4 supstituenta nezaivsno odabrana iz skupa koji čine a<1>supstituenti; A je alkilen grupa sal do 4 atoma ugljenika; B je kovalentna veza ili alkilen grupa sa 1 do 5 atoma ugljenika , i dat alkilen grupa je nesupstituisana ili supstituisana okso grupom kada je R<3>, heterociklična grupa; R<3>predstavlja (i) cikloalkil grupu sa 3 do 8 atoma ugljenika, i data cikloalkil grupa je supstituisana sa 1 do 5 supstituenata nezaivsno odabrana iz skupa koji čine a<2>supstituenti, ili (ii) heterocikličnu grupu sa 3 do 8 atoma, i data heterociklična grupa je nesupstituisana ili supstituisana sa 1 do 5 supstituenata nezavisno odabrana iz skupa koji čine p supstituenti, datia<1>supstituentisu nezavisno odabrani od hidroksi grupe i amino grupe; dati a supstituentisu nezavisno odabrani od hidroksi grupe, amino grupe, hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, karboksilne grupe i alkoksi grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika; i dati P supstituentisu nezavisno odabrani od hidroksi grupe,hidroksi-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika , karboksilne grupe, amino grupe, alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika, amino-supstituisane alkil grupe sa 1 do 4 atoma ugljenika i karbamoil grupe, ili njegova so.

17. Jedinjenje ili njegova so, prema avhtevu 16, naznačeno time, što Ra predstavlja atom vodonika ili ćdjutoksikarbonil grupu; Het je grupa formule A je metilen grupa; B je metilen grupa; i R3 je hidroksitetrahidropiranil ili dihidroksicikloheksil.

18. Kombinacija jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli premajednom od zahteva 1 do 10, i drugog farmakološki aktivnog agensa.

19. Farmaceutski preparat koji sadrži jedinjenje ili njeovu farmaceutski prihvatljivu soprema jednom od zahteva 1 do 10, i i drugi farmakološki aktivan agens.