RS105904A

RS105904A - Benzoilgvanidni derivatizovani fluorovanim cikloalkilima, postupak za njihovu proizvodnju i njihova primena kao leka

Info

Publication number: RS105904A
Application number: YUP-1059/04A
Authority: RS
Inventors: Heinz-Werner KLEEMANN
Original assignee: Aventis Pharma Deutschland Gmbh.,
Priority date: 2002-06-13
Filing date: 2003-06-02
Publication date: 2007-02-05
Also published as: AU2003250821B8; DE50311897D1; HRP20041175A2; RU2305093C2; JP2005529182A; MY130810A; TW200404768A; BR0312134A; ATE442353T1; MXPA04011361A; AU2003250821A1; CN1295213C; MA27234A1; CA2489245A1; MXPA04012231A; PE20040559A1; EP1515947A1; ZA200409418B; DK1515947T3; TWI291460B

Abstract

Benzoilgvanidini derivatizovani fluorovanim cikloalkilima formule (I) su pogodni da se koriste kao antiaritmijski lekovi sa kardioprotektivnom komponentom za profilaksu ili za lečenje srčanog infarkta, isto tako za lečenje angine pectoris. Oni inhibiraju takodje preventivno patofiziološke procese pri pojavi ishemijski indukovanih oštećenja, naročito pri pojavi ishemijski indukovanih srčanih aritmija i insuficijencije srca.

Description

Benzoilgvanidiniderivatizovani fluorovanim cikloalkilima, postupak za njihovu proizvodnju i njihova primena kao leka

Benzoilgvanidini derivatizovani fluorovanim cikloalkilima, postupak za njihovu proizvodnju i njihova primena kao leka, isto tako i lek koji sadrži ova jedinjenja.

Pronalazak se odnosi na jedinjenja formule I

u kojima označavaju:

X kiseonik, sumpor ili NR6; R6 vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili (CH2)k-CF3; k 0, 1, 2 ili 3; m nula, 1, 2 ili 3; n nula, 1, 2 ili 3; p nula, 1, 2 ili 3; q 1,2 ili 3; r nula, 1, 2 ili 3; pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2; Rl vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -<C>s<F>2s+i;

R(7), R(8) i R(9)

nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, alkil sa 1, 2 ili 3 C-atoma ili (CH2)t-CF3;

s 1,2, 3 ili 4;

t 0,1,2, 3 ili 4;

R2 vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili CF3;

R3 vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, CF3ili SOUR10;

u nula, 1 ili 2;

RIO alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili NR11R12;

Rl 1 i R12 nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik ili alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma;

R4 vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma F, Cl, -OR(13), -NR(14)R(15) ili

-CvF2v+h

R(13),R(14)iR(15)

nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, alkil sa 1, 2 ili 3 C-atoma ili -(CH2)W-CF3;

v 1,2, 3 ili 4;

w 0,1,2, 3 ili 4;

R5 vodonik ili F;

isto tako i na njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Prioritet imaju jedinjenja formule I, u kojima označavaju:

X kiseonik, sumpor ili NR6;

R6 vodonik, metil ili CH2-CF3;

m nula, 1 ili 2;

n nula, 1 ili 2;

p nula, 1 ili 2;

q 1 ili 2;

r nula, 1 ili 2;

pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2;

Rl vodonik, metil, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -CF3;

R(7), R(8) i R(9)

nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil, CF3ili CH2-CF3; R2 vodonik, F, Cl, metil ili CF3;

R3 -vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, CF3, S02CH3ili S02NH2; R4 vodonik, metil, F, Cl, -OR(13), -NR(14)R(15) ili -CF3; R(13),R(14)iR(15)

nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil, CF3ili CH2-CF3; R5 vodonik ili F;

isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Naročiti prioritet imaju jedinjenja formule I, u kojima označavaju: X kiseonik, sumpor ili NR6;

R6 vodonik, metil ili CH2-CF3;

m nula ili 1;

n nula, 1 ili 2;

p nula ili 1;

q 1 ili 2;

r nula ili 1;

pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2;

Rl vodonik, metil, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -CF3;

R(7) metil, CF3ili CH2-CF3;

R(8) i R(9)

nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil ili CH2-CF3; R2 vodonik, F ili Cl;

R3 CF3, S02CH3ili S02NH2;

R4 vodonik;

R5 vodonik ili F;

isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Sasvim posebnu prednost imaju sledeća jedinjenja formule I, koja su izabrana iz grupe: N-[4- (3,3- difluoro- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil-benzoil]-gvanidin, N-[4- (3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil-benzoil]-gvanidin, N-{4-[(3,3- difluoro- ciklobutil)- metil-amino]-5- metansulfonil-2- metil-benzoil}-gvanidin, i

N-{4-[(3,3- difluoro- ciklobutil)- metil-amino]-5- etansulfonil-2- metil-benzoil}-gvanidin

isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

Jedinjenja formule I, na primer, supstituenti Rl do R4, sadrže jedan ili više centara asimetrije, tako da ona mogu nezavisno jedna od drugih da budu kako u S-tako i u R-konfiguraciji. Ova jedinjenja mogu da budu prisutna u obliku optičkih izomera, kao diastereomeri, kao racemati ili kao smeše istih.

Priloženi pronalazak obuhvata i sve tautomerne oblike jedinjenja formule I.

Alkilni ostaci mogu da budu linearni ili razgranati. Ovo važi isto tako kada oni imaju supstituente ili kada se pojavljuju kao supstituenti drugih ostataka, primera radi, u fluorovanim alkilnim ostacima ili alkoksi ostacima. Primeri za alkilne ostatke su metil, etil, n-propil, izopropil (= 1-metiletil), n-butil, izobutil (= 2-metilpropil), sec-butil (= 1-metilpropil) i t-butil (= 1,1-dimetiletil). Prioritetni alkilni ostaci su metil, etil, n-propil i izopropil. U alkilnim ostacima mogu jedan ili više, na primer 1, 2, 3, 4 ili 5 atoma vodonika da budu supstituisani atomima fluora. Primeri za takve fluorovane alkilne ostatke su trifluormetil, 2,2,2-trifluoretil i pentafluoretil. Supstituisani alkilni ostaci mogu da budu supstituisani u bilo kojem položaju.

Prednost imaju jedinjenja formule I u kojima zbir od m, n, o, p, q i r iznosi 2 do 6. Pronalazak se dalje odnosi na jedan postupak za proizvodnju nekog jedinjenja formule I, koji je naznačen time, što sa gvanidinom reaguje neko jedinjenje formule II pri tome R(l) do R(5), isto tako m do r, imaju navedena značenja i L stoji na mestu za neku otparljivu grupu koja može da bude lako nukleofilno supstituisana.

Aktivirani kiselinski derivati formule II, pri čemu L označava neku alkoksi- grupu, prvenstveno metoksi grupu, fenoksi grupu, feniltio-, metiltio-, 2-piridiltio-grupu, neki azotov heterocikl, prvenstveno 1-imidazolil, dobijaju se povoljno na poznati način od hlorida karboksilne kiseline (formula II, L = Cl), koji se sa svoje strane isto tako na za sebe poznati način mogu da proizvedu od karboksilnih kiselina, koje se nalaze u njihovoj osnovi ( formula II, L = OH ), primera radi, sa tionil-hloridom.

Pored hlorida karboksilnih kiselina formule II (L = Cl ) mogu isto tako ostali aktivirani kiselinski derivati formule II da se proizvedu na sebi svojstven poznati način direktno od benzoevih kiselina, koje se nalaze u njihovoj osnovi ( formula II, L = OH ), kao metil-estar formule II sa L = OCH3tretiranjem sa gasovitom HC1 u metanolu, imidazoli formule II korišćenjem obrade sa karbonil-diimidazolom [L = 1-imidazolil, Staab, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1. 351 - 367 (1962)], mešani anhidridi sa Cl-COOC2H5ili tosil-hloridom u prisustvu trietilamina u nekom inertnom rastvaraču, isto tako putem aktiviranja benzoevih kiselina sa dicikloheksilkarbodiimidom (DDC) ili sa 0-[(ciano(etoksikarbonil)metilen)amino] -1,1,3,3-tetrametiluronium-terafluorboratom ("TOTU") [Proceedings of the 21. European Peptide Svmposium, Peptides 1990, Editors E. Giralt and D. Andreu, Escom, Leiden, 1991 ]. Niz metoda koje dolaze u obzir da se koriste za proizvodnju aktiviranih derivata karboksilnih kiselina formule II je naveden u podacima izvorne literatire u J. March, Advanced Organic Chemistrv, Third Edition ( John Wiley & Sons, 1985), strana 350.

Konverzija nekog aktiviranog derivata karboksilne kiseline formule II sa gvanadinom odigrava se na način koji poznaju stručnjaci, u nekom protonskom ili aprotonskom polarnom ali inertnom organskom rastvaraču. Pri tome su se pri konverziji metil-estra benzoeve kiseline ( II, L = OCH3) sa gvanadinom dobro pokazali metanol, izopropanol ili THF pri temperaturi od 20°C sve do temperature ključanja ovih rastvarača. Pri najvećem broju konverzija jedinjenja II sa gvanidinom, koji ne sadrži soli, povoljno se radi u aprotonskim inertnim rastvaračima kao što su TMF, dimetoksietan, dioksan ili DMF. Ali, isto tako, i voda može da se primeni kao rastvarač pri reagovanju jedinjenja II sa gvanadinom uz korišćenje neke baze kao, primera radi, NaOH.

U slučaju kada L označava Cl, podesno je da se radi uz dodatak neke supstance koja vezuje kiselinu, na primer, u obliku viška gvanidina u cilju vezivanja halogenovodonične kiseline.

Derivati karboksilne kiseline formule II mogu da se proizvedu iz jedinjenja formule III. Jedan deo derivata benzoeve kiseline formule III koji se nalaze u njihovoj osnovi je poznat i opisan je u literaturi. Nepoznata jedinjenja formule III mogu da se proizvedu po metodama koje su poznate u literaturi.

Uvođenje fluorcikloalkil-nukleofila u 4-položaj odvija se primenom nukleofilne aromatske supstitucije. Pri tome se koriste podesni zaštićeni derivati benzoeve kiseline formule III, kao na primer metil- ili etilestar. L' označava jednu otparljivu grupu koja se lako supstituiše preko nukleofilne aromatske supstituicije, kao stoje F, Cl, Br, J ili 0-S02CF3.

Dobijeni derivati benzoeve kiseline formule II se na kraju prevode primenom neke od gore opisane varijante procesa ujedinjenja formule I koja su definisana prema ovom pronalasku.

Benzoilgvanidini formule I su uopšteno slabe baze i mogu da vezuju kiseline uz stvaranje soli. Kao kiselinske adicione soli dolaze u obzir soli svih farmakološki prihvatljivih kiselina, primera radi halogenidi, naročito hidrohloridi, laktati, sulfati, citrati, tartarati, acetati, fosfati, metilsulfonati, p-toluolsulfonati.

Jedinjenja formule I su supstituisani acilgvanidini i inhibiraju ćelijski natrijum-protonski-antiport (Na<+>/H<+>-izmenjivač, NHE).

Jedinjenja formule 1, koja su definisana u ovom pronalasku, u odnosu na poznate benzoilgvanidine odlikuju se neobično povoljnim ADME (adsorpcija - distribucija- metabolizam - ekskrecija) -svojstvima, povezano sa izvanrednom aktivnošću u inhibiranju Na<+>/H<+>- izmene; ove povoljne osobine su posledica prisustva fluorovanih cikloalkilnih grupa.

U odnosu na neke poznate acilgvanidine ovde opisana jedinjenja ne ispoljavaju neželjena i štetna salidiuretska svojstva.

Na osnovu svojih NHE-inhibitorskih svojstava jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli podesna su za prevenciju i za lečenje obolenja, koja su se pojavila usled aktiviranja odnosno usled neke aktivirane NHE, isto tako i za obolenja, koja su prouzrokovana sekundarno usled oštećenja uslovljenih NH-izmenom.

Pošto NHE inhibitori pretežno deluju tako što utiču na regulaciju pH vrednosti u ćelijama, mogu ovi generalno na pogodan način da se kombinuju sa drugim jedinjenjima koja regulišu intraćelijsku pH-vrednost, pri tome kao partneri za kombinaciju dolaze u obzir inhibitori enzimske grupe karboanhidraze, inhibitori sistema koji transportu)u bikarbonatne jone, kao što su inhibitori natrijum-bikarbonat-kotransportera (NBC) ili hlorid-bikarbonat - izmenjivači zavisni od natrijuma (NCBE), isto tako NHE inhibitori sa inhibirajućim dejstvom na druge NHE-subtipove, jer preko njih mogu da se pojačaju ili da se moduliraju farmakološki releventni efekati regulacije pH-vrednosti ovde opisanih NHE-inhibitora.

Primena jedinjenja koja su definisana prema ovom pronalasku odnosi se na prevenciju i na lečenje akutnih i hroničnih bolesti u veterinarskoj i u humanoj medicini.

Tako su inhibitori NH-izmene, koji su definisani prema ovom pronalasku pogodni za lečenje obolenja, koja su nastala usled ishemije ili usled reperfuzije.

Ovde opisana jedinjenja usled njihovih farmakoloških osobina dolaze u obzir da se koriste kao antiaritmijska svredstva.

Zbog svoje kardio protektivne komponente NHE -inhibitori formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su izvanredno podesni za sprečavanje infarkta i za lečenje infarkta, isto tako i za lečenje angine pectoris, pri tome ona takođe preventivno inhibiraju ili jako umanjuju patofiziološke procese pri nastajanjima bolesti koje su indukovane ishemijom, naročito pri pojavi ishemijski indukovane srčane aritmije. Zbog njihovog zaštitnog delovanja u odnosu na patološka hipoksična i ishemijska stanja mogu jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koja su primenjena prema ovom pronalasku, usled inhibiranja ćelijske Na<+>/H<+->izmene da budu primenjena kao lek za lečenje svih akutnih ili hroničnih oštećenja nastalih kao posledica ishemije ili time indukovanih primarnih ili sekundarnih bolesti.

Ovo se odnosi i na njihovu primenu kao leka za operativne zahvate. Tako mogu ova jedinjenja da se primene pri transplantaciji organa, pri čemu se ova jedinjenja mogu da koriste kako za zaštitu organa kod davaoca pre i za vreme uzimanja, za zaštitu uzetog organa, primera radi, kod njegove obrade sa ili njegovog čuvanja u fiziološkom rastvoru, isto tako i pri prenošenju u organizam primaoca.

Jedinjenja koja su definisana ovim pronalaskom su isto tako dragoceni lekovi koji deluju zaštitno pri izvođenju angioplastičnih operativnih zahvata, primera radi, na srcu, kao i na perifernim organima i krvnim sudovima.

Pokazalo se, da su jedinjenja, koja su definisana ovim pronalaskom, lekovi sa izvanrednim delovanjem protiv aritmije opasne po život bolesnika. Podrhtavanja srčane komore prestaju i ponovo se uspostavlja fiziološki sinusni ritam srca.

Pošto NHE 1-inhibitori ne čuvaju samo efektivno ljudsko tkivo i organe, naročito srce, od oštećenja koja su prouzrokovana ishemijom i reperfuzijom, već i od citotoksičnog dejstva lekova, kakvu primenu oni nalaze u terapiji kancera i terapiji autoimunoloških oboljenja, kombinovano doziranje sa jedinjenjima formule I i/ili sa njihovim farmaceutski prihvatljivim solima je podesno da bi se inhibirala citotoksična, naročito kardiotoksična sporedna dejstva navedenih jedinjenja. Smanjenjem citotoksičnih efekata, naročito kardiotoksičnosti, usled lečenja kombinacijom sa NHEl-inhibitorima može osim toga da se poveća doza citotoksičnog terapeutskog sredstva i/ili da se produži lečenje sa takvim lekovima. Terapeutsko iskorišćenje jedne takve citotoksične terapije može da se znatno poveća primenom kombinacije sa NHE-inhibitorima.

Osim toga mogu NHE 1-inhibitori formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koji su definisani prema ovom pronalasku, da nađu primenu pri nekoj hiperprodukciji hormona štitaste žlezde koja oštećuje srce, kod tireotoksikoze, ili pri eksternom uvođenju hormona štitaste žlezde. Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su prema tome podesna da se koriste za poboljšanje terapije sa kardiotoksičnim lekovima.

Odgovarajuće njihovom zaštitnom delovanju od ishemijski indukovanih oštećenja jedinjenja, koja su definisana prema ovom pronalasku, su podesna da se koriste kao lek za lečenje ishemija nervnog sistema, naročito centralnog nervnog sistema, pri tome ona dolaze u obzir na primer za lečenje moždanog udara ili edema mozga.

Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli dolaze u obzir da se koriste i za terapiju i za profilaksu obolenja i oštećenja, koje mogu da nastanu usled prenadraženosti centralnog nervnog sistema, naročito za lečenje bolesti u oblasti epilepsije, centralno nastalih kloničnih i toničnih spazmi, stanja psihičkih depresija, bolesti straha i psihoza. Pri tome mogu ovde opisani NHE -inhibitori da se koriste samostalno ili u kombinaciji sa drugim supstancama koje deluju antiepileptički ili sa antipsihotičnim aktivnim supstancama, ili sa inhibitorima karboanhidraze, primera radi, sa acetazolamidom, isto tako i sa drugim inhibitorima NH-izmene ili sa inhibitorima hlorid-bikarbonat- izmenjivača zavisnih od natrijuma (NCBE).

Nadalje jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koja se primenjuju prema ovom pronalasku, dolaze u obzir da se koriste isto tako za lečenja raznih oblika šokova, kao primera radi alergijskog, kardiogenog, hipovolemijskog i bakterijskog šoka.

Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu isto tako da

se koriste za prevenciju i za lečenje trombotičnih obolenja, pošto ona kao NHE-inhibitori mogu sama da inhibiraju agregaciju pločica. Nadalje mogu ona da uspore ili da spreče prekomerno oslobađanje medijatora zapaljenja ili zgrušavanja koje se dešava usled ishemije ili usled reperfuzije, naročitoWillebrand faktorai trombogenih selectin-proteina. Samim tim može patogeno dejstvo značajnih

trombogenih faktora da se smanji ili sasvim odstrani. Zbog toga NHE-inhibitori priloženog pronalaska se mogu da kombinuju sa drugim antikoagulacionim i/ili trombolitičnim aktivnim supstancama kao, primera radi, sa rekombinacionim ili prirodnim tissui plazmogenim aktivatorom, streptokinazom, urokinazom, acetil-salicilnom kiselinom, antagonistima" trombina, antagonistima faktora Xa, lekovima koji deluju fibrinolitično, antagonistima tromboksan receptora, inhibitorom fosfodiesteraze, antagonistima factor-Vlla, clopidogrelom, ticolopidinom idt. Jedna kombinovana primena prisutnih NHE-inhibitora sa NCBE-inhibitorima i/ili sa inhibitorima karboanhidraze, kao, primera radi, sa acetazolamidom je naročito korisna.

Nadalje jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, koja se primenjuju prema ovom pronalasku, odlikuju se jakim inhibirajućim dejstvom na proliferaciju ćelija, primera radi na ćelijsku proliferaciju fibroblasta i proliferaciju ćelija glatke muskulature krvnih sudova. Zbog toga dolaze u obzir da se jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli koriste kao dragocena terapeutska sredstva za obolenja kod kojih proliferacija ćelija predstavlja primarni ili sekundarni uzrok i mogu sledstveno tome da se koriste kao antiaterosklerotici, sredstva protiv hroničnog obolenja bubrega, sredstva protiv kanceroznih obolenja.

Moglo je da se pokaže, da primenom jedinjenja koja su definisana ovim pronalaskom može da se inhibira migracija ćelija. Stoga jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli dolaze u obzir da se koriste kao cenjena terapeutska sredstva za obolenja kod kojih migracija ćelija predstavlja neki primarni ili sekundarni uzrok, kao primera radi kod kanceroznih obolenja sa izraženom težnjom ka metastaziranju.

Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli nadalje se odlikuju usporavanjem ili sprečavanjem fibrotičnih obolenja. Ona su stoga podesna da se koriste kao odlična sredstva za lečenje fibroza srca, isto tako i fibroza pluća, fibroza jetre, fibroza bubrega i drugih fibrotičnih obolenja.

Ona mogu zbog toga da se koriste za lečenje hipertrofije i hiperplazije organa, primera radi, srca i prostate. Ona zbog toga dolaze u obzir da se koriste za prevenciju i za lečenje srčane insufiencije (congestive heart failure = CHF), isto tako i za lečenje i za prevenciju hiperplazije prostate odnosno hipertrofije prostate.

Pošto je kod bolesnika sa esencijalnom hipertonijom znatno povećan NHE, podesna su jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli za prevenciju i za lečenje visokog krvnog pritiska i za lečenje obolenja srčanog krvotoka. ?

Pri tome mogu ona da se koriste pojedinačno ili sa nekim partnerom koji je podesan za kombinaciju ili za formulaciju za lečenje visokog krvnog pritiska i obolenja srčanog krvotoka. Tako mogu, primera radi, da se kombinuju jedan ili više diuretika koji deluju kao tiazid, Loop-diuretika, antagonista aldosterona i pseudoaldosterona, kao hidrohlorotiazid, indapamid, politiazid, furosemid, piretanid, torasemid, bumetanid, amilorid, triamteren, spironolacton ili epleron. Nadalje mogu NHE-inhibitori ovog pronalaska da se koriste u kombinaciji sa antagonistima kalcijuma, kao primera radi što su verapamil, diltiazem, amlodipin ili nifedipin, isto tako sa ACE - inhibitorima, kao što su, primera radi, ramipril, enalapril, lisinopril, fosinopril ili captopril. Dalji pogodni partneri za kombinacije su i (5-blokatori kao što su metoprolol, albuterol idt, antagonisti angiotenzinreceptora i njegovih receptorskih subtipova kao lozartan, irbesartan, valsartan, omapatrilat, gemopatrilat, endotelin-antagonisti, renin-inhibitori, adenozin-receptoragonisti, inhibitori i aktivatori kalijumovih kanala kao što su glibenclamid, glimepirid, diazoksid, cromokalim, minoksidil i njihovi derivati, aktivatori mitohondrialnog ATP-senzitivnog kalijumovog kanala (mitoK(ATP) kanal), inhibitori Kvl.5 itd.

Pokazalo se, da NHE1 inhibitori formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli imaju znatno antiflogistično dejstvo i zbog toga mogu da se upotrebe kao antiinflamatorna sredstva. Pri tome pada u oči inhibicija oslobađanja medijatora zapaljenja. O<y>a jedinjenja mogu zbog toga sama ili u kombinaciji sa nekim antiflogistikom da se koriste pri prevenciji ili za lečenje hroničnih i akutnih inflamatornih obolenja. U svojstvu partnera za kombinaciju koriste se prvenstveno steroidana i nesteroidna antiinflamatorna sredstva. Jedinjenja koja su definisana prema ovom pronalasku mogu da se koriste za lečenje obolenja koja su prouzrokovana delovanjem protozoa, malarije i pileće kokcidoze.

Osim toga je pronađeno, da jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli pokazuju povoljan uticaj na lipoproteine u krvi. Opšte je poznato, da za pojavu arteriosklerotičnih promena u krvnim sudovima, naročito za pojavu koronarnih srčanih oboljenja, bitan faktor rizika predstavljaju suviše velike vrednosti masti u krvi, takozvana hiperlipoproteinemija. U cilju predohrane i regresije aterosklerotičnih promena od izvanrednog značaja je zbog toga sniženje povećanih vrednosti lipoproteina u krvi. Pored smanjenja nivoa ukupnog holesterola u krvi značajno je i smanjenje udela specifičnih aterogenih frakcija lipida ovog ukupnog holesterola, naročito low densitv lipoproteina (LDL ) i very low densitv lipoproteina (VLDL ), pošto ove frakcije lipida predstavljaju aterogeni faktor rizika. Nasuprot tome pripisuje se high densitv lipoproteinima da imaju zaštitnu funkciju od koronarnih obolenja srca. Odgovarajuće tome treba sredstva za sniženje lipida u krvi da budu u stanju ne samo da smanje ukupan holesterol, nego da smanje naročito VLDL i LDL frakcije holesterola u krvi. Sada je pronađeno, da NHE1 inhibitori u pogledu uticaja na nivo lipida u krvi pokazuju dragocena svojstva, koja mogu da se iskoriste u terapeutske svrhe. Tako oni snižavaju znatno povećane koncentracije LDL i VLDL u krvi, kakve se zapažaju, primera radi, kod povećanog dijetetskog uzimanja neke hrane bogate holesterolom i lipidima ili kod patoloških promena metabolizma materija, primera radi kod genetski uslovljenih hiperlipidemija. Oni mogu zbog toga da budu korišćeni u cilju profilakse i regresije aterosklerotičnih promena, pri čemu odstranjuju jedan uzročni faktor rizika. Ovde se ne ubrajaju samo primarne hiperlipidemije, nego isto tako određene sekundarne hiperlipidemije, kao što se na primer javljaju kod diabetesa. Nadalje jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli dovode do uočljive redukcije infarkta indukovanog anomalijama u metabolizmu i naročito do znatnog smanjenja indukovane veličine infarkta i stepena njegove težine.

Jedinjenja koja su definisana prema ovom pronalasku nalaze zbog toga prvenstveno primenu za proizvodnju nekog medikamenta za lečenje hiperholesterinemije; za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i za lečenje aterogeneze; za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i za lečenje ateroskleroze; za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i za lečenje oboljenja koja se javljaju kao posledica povećanog nivoa holesterola, za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i lečenje oboljenja koja se javljaju kao posledica endotelialne disfunkcije, za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i lečenje hipertonije koju indukuje ateroskleroza, za proizvodnju medikamenta za prevenciju i lečenje tromboza koje se javljaju kao posledica ateroskleroze, za proizvodnju medikamenta za prevenciju i lečenje ishemijskih oštećenja koja nastaju usled hiperholesterinemije i endotelnih disfunkcija, i postishemijskih reperfuzionih oboljenja, za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i lečenje kardioloških hipertrofija i kardiomiopatija i congestivne insuficiencije srca (CHF), nastalih kao posledica hiperholesterinemije i endotelialne disfunkcije, za proizvodnju nekog medikamenta za prevenciju i lečenje spazmi koronarnih krvnih sudova i miokardialnog infarkta koji se javljaju kao posledica hiperholesteronemije i endotelialne disfunkcije, za proizvodnju nekog medikamenta za lečenje navedenih oboljenja u kombinacijama sa supstancama za sniženje krvnog pritiska, prvenstveno sa Angiotensin Converting Enzvme (ACE) - inhibitorima i angiotenzin-receptorskim antagonistima. Kombinacija nekog NHE-inhibitora formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli sa nekom supstancom za sniženje nivoa masti u krvi, prvenstveno sa nekim inhibitorom HMG-CoA-reduktaze (na primer sa lovastatinom ili sa prevastatinom), pri čemu poslednji daje svoj doprinos hipolipidemijskom dejstvu i na taj način povećava hipolipidemijska svojstva NHE - inhibitora formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, pokazuje se kao povoljna kombinacija sa pojačanim dejstvom i smanjenim unosom aktivne supstance.

Nadalje dovode jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli do delotvorne zaštite od oštećenja endotela različitog porekla. Zato što štite krvne sudove od sindroma endotelialne disfunkcije jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su dragoceni medikamenti za prevenciju i za lečenje spazmi koronarnih krvnih sudova, obolenja perifernih krvnih sudova, naročito za lečenje claudiocatio intermitten, aterogeneze i ateroskleroze, levoventrikularne hipertrofije i proširene kardiomiopatije, i tromboidnih oboljenja.

Osim toga je pronađeno da su benzoilgvanidini formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli podesni da se koriste za lečenje diabetičara koji nisu zavisni od insulina (NIDDM), pri čemu se potiskuje rezistencija na insulin. Pri tome može da bude povoljno da se u cilju pojačanja antidijabetskog dejstva i kvaliteta dejstva jedinjenja definisanih ovim pronalaskom ovi kombinuju sa nekim bigvanidom, kao što je metformin, sa nekim antidijabetskim sulfonil-karbamidom, kao što su gliburid, glimepirid, tolbutamid itd., sa nekim inhibitorom glukosidaze, sa nekim PPAP agonistom, kao što su rosiglitazon, pioglitazon itd., sa nekim insulinskim preparatom različitog oblika doziranja, sa nekim DB4 inhibitorom, sa nekim senzibilizatorom insulina ili sa meglitinidom.

Ne samo protiv akutnih antidiabetskih efekata, nego jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli deluju i protiv nastanka kasnijih diabetskih komplikacija i mogu zbog toga da se koriste kao lek za prevenciju i lečenje diabetskih kasnijih oštećenja, kao što su diabetska nefropatija, diabetska neuropatija, diabetska retinopatija, diabetska kardiomiopatija i drugih obolenja koja nastaju kao posledica diabetesa. Pri tome mogu ona da se povoljno kombinuju sa antidiabetskim lekovima upravo sad opisanim pod NIDDM-lečenje. Kombinacija sa nekim insulin om koji ima pogodan oblik za doziranje trebalo bi da dobije pri tome jedan poseban značaj.

NHE-inhibitori formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, definisani prema ovom pronalasku, pokazuju pored zaštitnih efekata u odnosu na akutne ishemijske slučajeve i posledične, isto tako akutno opterećujuće, reperfuzione slučajeve i još direktno terapeutsko cenjeno dejstvo u odnosu na obolenja i oštećenja celokupnog organizma sisara, koji su povezani sa pojavama hroničnog odvijanja procesa starenja i koji ne zavise od akutnih stanja nedostatka cirkulacije krvi i pojavljuju se pri normalnim neishemijskim uslovima. Pri ovim patološkim pojavama koje su prouzrokovane starošću, koje se pojavljuju u toku dugog vremena starosti, kao što je bolest, nemoć i samrt, koje se odnedavno mogu lečiti primenom NHE-inhibitorima, radi se o bolestima i smetnjama, koje su u najvećem obimu prouzrokovane promenama životno važnih organa i njhovih funkcija kao posledica starenja i u organizmu koji stari dobija na značaju.

Obolenja, koja su povezana sa funkcionalnim smetnjama uslovljenim starenjem, sa pojavama istrošenosti organa, su primera radi nedovoljan odgovor i reagovanje krvnih sudova na kontrakcione i relaksacione reakcije. Ovo smanjenje, kao posledica starosti, reagovanja krvnih sudova na kontrakcione i relaksirajuće stimulanse, koji predstavljaju esencijalni proces srčanog krvotoka i samim tim života i zdravija, može da se znatno ukloni odnosno smanji primenom NHE-inhibitora. Jedna važna funkcija i mera za održavanje reagovanja krvnih sudova je blokada odnosno sputavanje endotelialne disfunkcije, koja napreduje sa starenjem, koja može da se ukloni u velikoj meri primenom NHE-inhibitora. Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli samim tim su izvanredno podesni da se koriste za lečenje i za prevenciju napredujuće endotelialne disfunkcije koja je prouzrokovana starenjem, naročito od claudicatio intermittens.

Primer još jednog karakterističnog merila za proces starenja je smanjenje kontrakcije srca i smanjenje prilagođavanja srca na zahtevani kapacitet pumpanja srca. Ova smanjena sposobnost rada srca, kao posledica procesa starenja, su u najvećem broju slučajeva povezana sa jednom disfunkcijom srca, koja je između ostalog prouzrokovana uskladištenjem vezivnog tkiva u srčano tkivo. Ovo uskladištenje vezivnog tkiva je okarekterisano jednim povećanjem mase srca, povećanjem veličine srca i ograničenom funkcijom srca. Bilo je iznenađujuće, da"je takva vrsta starenja organa srca skoro potpuno mogla da se inhibira. Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli samim tim su izvanredno podesna za lečenje i prevenciju insufijencije srca, congestive heart failure (CHF).

Dok je u predhodnim patentima i patentnim prijavama zaštićeno lečenje različitih, već nastalih oblika kanceroznih obolenja, bilo je sada izuzetno iznenađujuće da se ne mogu samo već nastala kancerozna obolenja da leče zaustavljanjem proliferacije ćelija, nego da se i učestalost nastajanja kancera uslovljenog starošću može u velikoj meri da uspori i spreči primenom NHE-inhibitora. Naročito je vredan pažnje nalaz da obolenja svih organa koja nastaju kao posledica starenja, a ne samo određenih oblika kancera, se ne pojavljuju odnosno se pojavljuju u znatno manjoj meri. Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli samim tim su izvanredno pogodna za lečenje i naročito za prevenciju od oblika raka koji nastaje usled starenja.

Sada primenom statističkih standardnih mera nije samo utvrđeno vremenski pomerano odlaganje nastajanja staračkih obolenja svih ispitivanih organa uključujući srce, krvne sudove, jetru itd., nego isto tako znatno odlaganje pojave staračkog raka. U velikom broju, iznenađujuće, dolazi i do jednog produžetka života u toj meri, koja do sada nije mogla da se dostigne primenom drugih grupa lekova odnosno primenom bilo koje prirodne supstance. Ovo jedinstveno delovanje NHE-inhibitora omogućava i to da se pored samostalne primene aktivne supstance na ljuduma i životinjama ovi NHE-inhibitori kombinuju sa drugim principima delovanja, merama, supstancama i prirodnim supstancama, koje imaju u osnovi drugi mehanizam delovanja i koji su primenjeni u gerontologiji. Takve klase aktivnih supstanci koje se koriste u gerontološkoj terapiji su: naročiti vitamini i supstance koje deluju antioksidaciono. Pošto postoji jedna korelacija između kalorijske opterećenosti odnosno uzimanja hrane i procesa starenja, može da se izvede kombinacija sa dijetetskim merama, na primer, sa sredstvima za sprečavanje apetita. Isto tako može da bude napomenjena jedna kombinacija sa lekovima za sniženje krvnog pritiska, kao i sa ACE-usporivačima, antagonistima angiotenzinreceptora, diureticima, Ca<+2->antagonistima itd. ili sa lekovima koji normalizuju metabolizam, kao što su sredstva za sniženje holesterina.

Jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli samim tim su izvanredno pogodna da se koriste u cilju prevencije promena tkiva uslovljenih starenjem i u cilju produženja života uz održavanje dobrog kvaliteta života.

Jedinjenja, koja su definisana ovim pronalaskom, su delotvorni inhibitori ćelijskog natrijum-proton-antiporta (Na<+>/H<+->izmenjivač ), koji kod mnogobrojnih obolenja (esencijalna hipertonija, ateroskleroza, diabetes itd. ) je povećan i u takvim ćelijama koje su lako dostupne za merenja, kao primera radi u eritrocitima, trombocitima ili leukocitima. Jedinjenja primenjena kako je definisano ovim pronalaskom su zbog toga podesna da se koriste kao izvanredno i jednostavno naučno sredstvo, primera radi, pri njihovoj primeni kao dijagnostičkog reagensa za određivanje i razlikovanje određenih vrsta hipertonije, ali isto tako i ateroskleroze, diabetesa i diabetskih kasnijih komplikacija, proliferacionih oboljenja itd..

Zaštićuje se nadalje medikament za humanu, veterinarsku ili fitoprotektivnu primenu koji sadrži jednu delotvornu količinu jedinjenja formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i dodacima, pojedinačno ili u kombinaciji sa drugim farmakološkim aktivnim supstancama ili lekovima.

Lekovi, koji sadrže jedinjenje formule I, mogu pri tome da budu primenjivani na primer oralno, parenteralno, intravenozno, rektalno ili putem inhaliranja, pri čemu optimalni način primene zavisi uvek od fenotipa oboljenja. Jedinjenja formule I mogu pri tome da budu primenjena samostalno ili zajedno sa galenskim pomoćnim supstancama, i to kako u veterinarskoj, tako isto i u humanoj medicini. Lekovi sadrže aktivne supstance formule I i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli uopšteno u jednoj količini od 0,01 mg do 1 g po jedinici za doziranje.

Koja pomoćna sredstva dolaze u obzir da se koriste za željenu formulaciju leka, treba da odluči stručnjak na osnovu svog predhodno stečenog stručnog znanja. Pored rastvarača, sredstava za geliranje, osnove za supozitorije, pomoćnih sredstava za tablete i drugih nosača aktivne supstance mogu, primera radi, da se koriste antioksidansi, dispergujuća sredstva, emulgatori, antipenušavci, sredstva za korigovanje ukusa, konzervansi, rastvarački posrednici ili boje.

U cilju dobijanja oblika pogodnog za oralne upotrebe aktivna jedinjenja se zajedno sa podesnim dodacima, kao što su nosači aktivne supstance, stabilizatori ili inertna sredstva za razblaživanje, mešaju i uobičajenim metodama pripremaju se u oblike pogodne za davanje pacijentu, kao što su tablete, dražeje, kapsule, vodeni, alkoholni ili uljni rastvori. U svojstvu inertnog nosača mogu da budu primenjeni na primer gumiarabika, magnezijum-oksid, magnezijum-karbonat, kalijum-fosfat, laktoza, glukoza ili škrob, naročito kukuruzni škrob. Pri tome može preparat da se granulira na suvo ili na mokro. Kao uljni nosači ili kao rastvarači dolaze u obzir da se koriste biljna ili životinjska ulja, kao suncokretovo ili riblje ulje.

Za subkutanu, intramuskularnu ili intravenoznu primenu pravi se po želji rastvor, suspenzija ili emulzija od aktivnih jedinjenja sa supstancama, koje su uobičajene za tu svrhu, kao što su rastvarački posrednici, emulgatori ili druga pomoćna sredstva. U svojstvu rastvarača dolaze u obzir da se koriste, na primer: voda, fiziološki rastvor natrijum-hlorida ili alkoholi, na primer etanol, propanol, glicerin, pored toga i rastvori šećera, kao što su rastvor glukoze ili rastvor manita, ali isto tako i mešavine različitih navedenih rastvarača.

Kao farmaceutske formulacije za davanje u obliku aerosola ili spreja dolazi u obzir da se koriste, na primer, rastvori, suspenzije ili emulzije aktivne supstance formule I u nekom rastvaraču, čija primena u farmaciji ne izaziva bilo kakvu sumnju, kao što su naročito etanol ili voda, ili smeša takvih rastvarača.

Formulacija prema potrebi može da sadrži i druga farmaceutska pomoćna sredstva kao što su tenzidi, emulgatori, stabilizatori, isto tako i neki potisni gas. Takav preparat sadrži aktivnu supstancu uobičajeno u jednoj koncentraciji od oko 0,1 do 10 mas. %, naročito od oko 0,3 do 3 mas. %.

Doziranje aktivne supstance formule I, koja se daje pacijentu kao lek, i učestalost davanja zavise od jačine dejstva i trajanja dejstva primenjenih jedinjenja; osim toga zavise i od vrste i jačine bolesti, koju treba lečiti, kao i od pola, starosti, težine i individualne reaktivnosti bolesnika kojeg treba lečiti..

U prošeku dnevna doza jednog jedinjenja formule I iznosi kod pecijenta teškog oko 75 kg najmanje 0,001 mg/kg, prvenstveno 0,01 mg/kg, do najviše 10 mg/kg, prvenstveno 1 mg/kg telesne mase. Kod akutnih naglih izbijanja bolesti, kao neposredno po doživljenom jednom srčanom infarktu, mogu da budu potrebna i još veća i pre svega češća doziranja. Naročito kod intravenozne primene, kao kod nekog pacijenta sa infarktom na intenzivnoj nezi, mogu da budu potrebne doze sve do 700 mg na dan. Dnevna doza može da bude podeljena na više, na primer, sve do 4 pojedinačne doze.

Lista skraćenica:

ADME Absorpcija - distribucija - metabolizam - ekskrecija (izdvajanje) CDI Di-imidazol-l-il-metanon

DIP Diizopropiletar

DMF N,N-Dimetil-formamid

EE Etil-acetat (EtOAc)

El Electron impact

eq. Ekvivalent

ES Elektronsprav - j onizacij a

Et Etil

HEP n-Heptan

KOtBu Kalij um-2-metil-propan-2-olat

Me Metil

MeOH Metanol

mp Temperatura topljenja

NMP l-metil-pirolidin-2-on

MTB 2-metoksi-2-metil-propan

RT Sobna temperatura

THF Tetrahidrofuran

Primer 1:

N-[4-(3,3- difluoro- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil- benzoil]-gvanidin

a) (3,3- difluor- ciklobutoksimetil)-benzen

Rastvoreno je 20,0 g 3-benziloksi-ciklobutanona (Buli. Chem. Jpn. (1984), 57 (6),

1637) u 150 mL CH2C12i u taj rastvor pri sobnoj temperaturi ukapan je jedan rastvor koji sadrži 25,0 g [Bis(2-metoksietil)amino]-sumpor-trifluorida u 30 mL CH2C12. Mešano je u toku 5 h pri sobnoj temperaturi i na kraju je dodato 12,0 g

dietilamino-sumpor-trifluorida. U toku još 20 h mešano je pri RT, zatim je reakciona smeša oprana tri puta sa po 100 mL vode. Osušena je primenom Na2S04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Hromatografijom na silika-gelu primenom EE/HEP 3:1 i zatim destilacijom u loptastoj koloni dobijeno je 27,6 g bezbojnog ulja.

b) 3,3-difluor-ciklobutanol

Rastvoreno je 22,4 g (3,3- difluor- ciklobutoksimetil)-benzena u 100 mL dietiletra

i u rastvor je dodato 1,4 g 10 % Pd/C. U toku 5 h je vršeno hidriranje pri RT pri pritisku od 20 bar H2. Katalizator je opran sa 10 mL dietiletra i rastvor je destilisan. Dobijeno je 14,0 g produkta (temperatura ključanja 80 °C), u obliku smeše sa dietiletrom i toluenom. Ova smeša je bez naknadnog prečišćavanja korišćena za dalju konverziju.

c) 4-(3,3- difluor- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil- benzoeve kiseline-metilestar

Rastvoreno je 370 mg 4-fluor-5-metansulfonil-2-metil -benzoeve kiseline-metilestra, 297 mg 3,3-difluor-ciklobutanola i 1,47 g Cs2C03u 10 mL bezvodnog NMP i rastvor je mešan u toku 4 h pri temperaturi od 60 °C. Zatim je reakciona smeša razblažena sa 125 mL polukoncentrovanog vodenog rastvora NaHC03i tri puta je ekstrahovana sa po 100 mL EE. Osušena je primenom Na2S04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Izvršeno je hromatografiranje na silika-gelu primenom DIP i dobijeno je 380 mg bezbojnog ulja.

Rf (DIP) = 0,21 MS (DCI) :335

d) N-[4-(3,3- difluor- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil- benzoilj-gvanidin Napravljen je rastvor od 566 mg gvanidin-hlorida u 5 mL bezvodnog DMF i dodat

je ujedan rastvor koji sadrži 604 mg KOtBu u 5 mL bezvodnog DMF. Ovaj na takav način dobij eni rastvor gvanidina u DMF dodat je ujedan rastvor od 360 mg 4-(3,3- difluor- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil- benzoeve kiseline-metilestra u 5 mL DMF i smeša je mešana u toku 24 h pri RT. Reakciona smeša je razblažena sa 125 mL polukoncentrovanog vodenog rastvora NaHC03 i tri puta je

ekstrahovana sa po 80 mL EE. Osušena je primenom Na2S04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Hromatografijom na silika-gelu primenom EE/MeOH 5:1 dobijeno je 175 mg bezbojnih kristala, mp 273 °C (uz razlaganje).

Rf (EE/MeOH 5:1) = 0,50 MS (ES<+>): 362

Primer 2:

N-[4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil- benzoil]-gvanidin

a) 3,3-difluoro-ciklobutilamino, hidrohlorid

Rastvoreno je 16,7 g 3,3-difluoro-ciklobutankarboksilne kiseline (J. Org. Chem.

(1987) 52, 1872) u 180 mL CHC13i dotato je 36 mL H2S04(98 %). Smeša je zagrejana na temperaturu od 50 °C i pri toj temperaturi u toku 45 minuta je dodato u porcijama 16 g NaN3. Još je u toku 2 h mešano pri temperati od 50 °C, tada je smeša ohlađena na sobnu temperaturu i na kraju sipana je na 250 g leda. Ekstrahovana je tri puta sa po 100 mL dietiletra i tako je ponovo izolovano 0,7 g neproreagovane 3,3-difluoro-ciklobutankarboksilne kiseline. Vodena faza je podešena pomoću vodenog rastvora NaOH na pH = 12 - 13 i tri puta je ekstrahovana sa po 100 mL CH2C12. Organska faza je oprana još sa 100 mL vode, zatim je pomešana sa 130 mL vodenog rastvora 2N HC1 i otparljivi sastojci su odstranjeni u vakuumu. Dobijeno je 15,3 g bezbojne čvrste supstance, mp 315 °C (razlaganje).

b) N-(3,3-difluoro-ciklobutil)-metansulfonamid

Napravljena je suspenzija od 0,60 g 3,3-difluoro-ciklobutilamin -hidrohlorida u 40

mL CH2C12i pri RT dodato je 2,9 mL trietilamina. Pri tome je dobijen jedan bistar

rastvor. Potom je polako pri RT ukapano 1,0 mL metansulfonil-hlorida i reakciona smeša je ostavljena da stoji u toku 16 h pri toj temperaturi. Onda su odparljivi sastojci odstranjeni u vakuumu, ostatak je absorbovan u 200 mL EE kao i 100 mL zasićenog vodenog rastvora Na2C03i razdeljen. Organska faza je zatim oprana još 2 puta sa po 20 mL zasićenog vodenog rastvora NaHS04i 2 puta sa po 30 mL zasićenog vodenog rastvora Na2C03. Osušena je primenom MgS04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Dobijeno je 700 mg bezbojne smole.

Rf(EE) = 0,28 MS(DCI):186

c) 4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil-benzoeve kiseline-metilestar

Rastvoreno je 0,70 gN-(3,3-difluoro-ciklobutil)-metansulfonamida, 0,93 g 4-fluoro-5-metansulfonil-2- metil-benzoeve kiseline-metilestra i 1,5 mL N"-t-butil-N,N,N',N'-tetrametil-gvanidina u 10 mL NMP (bezvodni) i rastvor je mešan u toku 6 h pri temperaturi 150 °C. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena je primenom 200 mL EE i najpre je oprana 3 puta sa po 20 mL zasićenog vodenog rastvora NaHS04i potom 3 puta sa po 30 mL zasićenog vodenog rastvora Na2C03. Osušena je primenom MgS04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Hromatografijom na silika-gelu uz DIP dobijeno je 220 mg bezbojne pene.

Rf (DIP) = 0,31 MS (ES<+>): 334

d) 4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil-benzoeva kiselina Rastvoreno je 210 mg 4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2-metil-benzoeve kiseline-metilestra u 10 mL dioksana i dodato je 0,47 mL vodenog rastvora 2N NaOH. Mešano je u toku 18 h pri RT, na kraju su rastvarači odstranjeni u vakuumu. Ostatak je absorbovan u 10 mL vode, primenom vodenog rastvora HC1 podešen je na pH = 2 i tri puta je ekstrahovan sa po 20 mL EE. Osušen je primenom MgS04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Dobijeno je 196 mg čvrste amorfne supstance.

Rf(EE) = 0,40 MS(ES_):318

e) N-[4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil- benzoil]-gvanidin

Rastvoreno je 40 mg 4-(3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil-benzoeve kiseline u 1 mL DMF (bezvodni), pri RT dodato je 28 mg CDI i mešano je pri RT u toku 6 h i dobijen je intermedijarni imidazolid. Uporedo sa tim mešano je 72 mg gvanidin-hidrohlorida zajedno sa 70 mg KOtBu u 1 mL DMF (bezvodni) u toku 30 minuta pri RT. Ovaj rastvor gvanidin-baze na kraju je dodat u rastvor imidazolidai ostavljena je reakciona smeša da stoji u toku 18 h pri RT. Na kraju je razblažena sa 50 mL vode i primenom razblaženog vodenog rastvora HC1 podešen je pH na pH = 8, zatim je ekstrahovana 3 puta sa po 10 mL EE, osušena je primenom MgS04i rastvarač je odstranjen u vakuumu. Dobijeno je 37 mg čvrste amorfne supstance.

Rf (EE/MeOH 10:1) = 0,12 MS (ES+) : 360

NHE-1 inhibicija određivana je na sledeći način:

FLIPR - istraživanje u cilju određivanja NHE-1 inhibitora pomoću merenja oporovka pH; u transficiranim ćelijama, koje eksprimiraju humani NHE-1 Istraživanje se izvodi u FLIPR (Fluorescent imaging plate reader) primenom mikrotitarskih ploča sa 96 udubljenja, crnih zidova i sa providnim dnom. Transficirane ćelije, koje eksprimiraju različite NHE - subtipove (parentalne ćelije LAP-1 kao posledica mutageneze i zatim selekcije nisu imale endogenu NHE-aktivnost) zasejane su predhodnog dana sa nekom gustinom od «25000 ćelija / udub ljenju.

[Medijum u kojem rastu transficirane ćelije (Iscove + 10 % fetalni serum teleta) sadrži dodatno G418 u svojstvu selekcionog antibiotika, kako bi se osiguralo postojanje transficiranih sekvenci.]

Pravo istraživanje počinje sa udaljavanjem medijuma za rast i dodavanjem pufera za punjenje (5 uM BCECF-AM [2',7'-bis-(karboksietil)-5-(i -6)-karboksifluorescein, acetoksimetil -estar] u 20 mM NH4C1, 115 mM holin-hlorida, 1 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 5 mM KC1, 20 mM HEPES, 5 mM glukoze; pH 7,4 [podešen sa KOH]) u količini od 100 uL/ udubljenju. Ćelije su tada inkubirane tokom 20 minuta pri temperauri od 37 °C. Ova inkubacija dovodi do punjenja ćelija sa fluorescentnom bojom, čiji intenzitet fluoresciranja zavisi od pHj, i punjenja ćelija sa NH4C1, što dovodi do njihovog blagog alkalizovanja.

[Boja koja ne fluorescira - predhodni stupanj BCFCF-AM kao estar prolazi kroz membrane. Preko esteraze oslobađa se stvarna boja BCECF, koja ne prolazi kroz membranu.]

Posle inkubacije koja je trajala 20 minuta pufer za punjenje, koji sadrži NH4C1 i slobodnu BCECF-AM, se odstrani primenom trostrukog pranja u uređaju za pranje ćelija (Tečan Columbus) uvek pranjem sa 400 uL pufera za pranje (133,8 mM holin-hlorida, 4,7 mM KC1, 1,25 mM MgCl2, 1,25 mM CaCl2, 0,97 mM K2HP04, 0,23 mM KH2P04, 5 mM HEPES, 5 mM glukoze; pH 7,4 [podešen sa KOH]). Zapremina ostatka preostalog u udubljenju iznosi 90 uL (moguće je 50 - 125 (iL). Ovaj korak pranja odstranjuje BCECF-AM i kao posledicu udaljavanja eksternih NH4<+>-jona dovodi do inraćelijskog zakišeljavanja (« pH; 6,3 - 6,4).

Pošto ravnoteža od unutarćelijskog NH4<+>sa NH3i H<+>se narušava udaljavanjem izvanćelijskog NH4<+>i preko prolaza NH3koji se zatim trenutno odvija kroz ćelijske membrane, proces pranja dovodi do toga da unutarćelijski H<+>ostaje, što je uzrok za unutarćelijsko zakišeljavanje. Ovo može da na kraju dovede do smrti ćelija, ako se dovoljno dugo zadržava. Na ovom mestu je važno, da pufer za pranje ne sadrži natrijum (<1 mM), pošto izvanćelijski natrij umovi j oni bi doveli do trenutnog oporavka pH; preko aktivnosti kloniranih NHE-izoformi.

Isto tako je važno, da svi korišćeni puferi (pufer za napajanje, pufer za pranje, pufer za regenerisanje) ne sadrže HC03-jone, pošto prisustvo bikarbonata bi moglo da vodi ka aktiviranju štetnih zavisnih od bikarbonata pHr regulacionih sistema, koji postoje u parentalnimLAP-1 ćelijama.

Mikrotitaske ploče sa zakišeljenim ćelijama prenose se tada (sve do 20 minuta posle zakišeljavanja) u FLIPR. U FLIPR se pobuđuje unutarćelijska fluorescentna boja pomoću svetlosti sa talasnom dužinom od 488 nm, koju proizvodi jedan argonski laser, i parametri merenja (kapacitet lasera, vreme osvetljavanja i blenda CCD-kamere ugrađene u FLIPR) izaberu se tako, da prosečnai fluorescentni signal po udubljenju iznosi između 30000 i 35000 relativnih jedinica fluorescentnosti.

Stvarno merenje u FLIPR počinje time, što softver upravlja tako da se svake dve sekunde pravi snimak sa CCD - kamerom. Posle deset sekundi sprovodi se obnavljanje unutarćelijskog pHsdodavanjem 90 uL pufera za regenerisanje (133,8 mM NaCl, 4,7 mM KC1, 1,25 mM MgCl2, 1,25 mM CaCl2, 0,97 mM K2HP04, 0,23 mM KH2P04, 10 mM HEPES, 5 mM glukoze; pH 7,4 [podešen saNaOH]) pomoću uređaja za pipetiranje za 96-udubljenja, koji je ugrađen u FLIPR.

Kao kontrola pozitivnog dejstva (100 % NHE -aktivnost) služila su udubljenja, kojima je dodat čist pufer za regenerisanje, kontrole negativnog dejstva (0 % NHE -aktivnost) dobile su pufer za pranje. U sva ostala udubljenja dodat je pufer za regenerisanje sa dvostruko koncentrisanom supstancom za testiranje. Merenje u FLIPR završava se posle 60 mernih tačaka (2 minuta).

Sirovi podaci se šalju u program ActivitvBase. Pomoću ovog programa izračunavaju se najpre NHE-aktivnosti za svaku testiranu koncentraciju supstance i iz toga vrednosti IC5oza supstance. Pošto tok oporavka pH; za vreme čitavog opita nije linearan, već na kraju usled smanjujuće NHE-aktivnosti se zakošava pri većim pH;-vrednostima, važno je, za izačunavanje merenja da se izabere deo u kojem je linearno povećanje fluorescentnosti kontrole pozitivnog dejstva.

Claims

1. Benzoilgvanidini derivatizovani fluorovanim cikloalkilima formule I naznačeni time, što u njima označavaju: X kiseonik, sumpor ili NR6; R6 vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili (CH2)k-CF3; k 0,1, 2 ili 3; m nula, 1, 2 ili 3; n nula, 1, 2 ili 3; p nula, 1,2 ili 3; q 1,2 ili 3; r nula, 1,2 ili 3; pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2; Rl vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -CsF2s+b

R(7), R(8) i R(9) nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, alkil sa 1, 2 ili 3 C-atoma ili (CH2)t-CF3; s 1,2, 3 ili 4; t 0, 1, 2, 3 ili 4; R2 vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili CF3; R3 vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, CF3ili SOUR10; u nula, 1 ili 2; RIO alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma ili NR11R12; Rl 1 i R12 nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik ili alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C- atoma; R4 vodonik, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, F, Cl, -OR(13), -NR(14)R(15) ili -<C>v<F>2v+i; R(13),R(14)iR(15) nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, alkil sa 1,2 ili 3 C-atoma ili -(CH2)W-CF3; v 1, 2, 3 ili 4; w 0,1,2, 3 ili 4; R5 vodonik ili F; isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

2. Jedinjenje formule I definisano prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time, što u njemu označavaju: X kiseonik, sumpor ili NR6; R6 vodonik, metil ili CH2-CF3; m nula, 1 ili 2; n nula, 1 ili 2; p nula, 1 ili 2; q 1 ili 2; r nula, 1 ili 2; pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2; Rl vodonik, metil, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -CF3;

R(7), R(8) i R(9) nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil, CF3ili CH2-CF3; R2 vodonik, F, Cl, metil ili CF3; R3 vodonik, F, Cl, alkil sa 1, 2, 3 ili 4 C-atoma, CF3, S02CH3ili S02NH2; R4 vodonik, metil, F, Cl, -OR(13), -NR(14)R(15) ili -CF3; R(13),R(14)iR(15) nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil, CF3 ili -CH2-CF3; R5 vodonik ili F; isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

3. Jedinjenje formule I definisano prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačeno time, što u njemu označavaju: X kiseonik, sumpor ili NR6; R6 vodonik, metil ili CH2-CF3; m nula ili 1; n nula, 1 ili 2; p nula ili 1; q 1 ili 2; r nula ili 1; pri tome zbir od m, n, p, q i r iznosi najmanje 2; Rl vodonik, metil, F, Cl, -OR(7), -NR(8)R(9) ili -CF3;

R(7) metil, CF3ili CH2-CF3;

R(8) i R(9) nezavisno jedan ostatak od drugog vodonik, metil ili CH2-CF3; R2 vodonik, F ili Cl; R3 CF3, S02CH3ili S02NH2; R4 vodonik; R5 vodonik ili F; isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

4. Jedinjenja formule I definisana prema jednom ili više patentnih zahteva 1, 2 i 3, naznačena time, što su izabrana iz grupe: N-[4- (3,3- difluoro- ciklobutoksi)-5- metansulfonil-2- metil-benzoilj-gvanidin, N-[4- (3,3- difluoro- ciklobutilamino)-5- metansulfonil-2- metil-benzoil]-gvanidin, N-{4-[(3,3- difluoro- ciklobutil)- metil-amino]-5- metansulfonil-2- metil-benzoilj-gvanidin, i N-{4-[(3,3- difluoro- ciklobutil)- metil-amino]-5- etansulfonil-2- metil-benzoilj-gvanidin isto tako i njihove farmaceutski prihvatljive soli.

5. Jedinjenje formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom ili više patentnih zahteva 1 do 4 u cilju primene u svojstvu medikamenta.

6. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom ili više patentnih zahteva 1 do 4 za proizvodnju nekog leka za lečenje ili za profilaksu akutnih ili hroničnih oštećenja, obolenja ili indirektnih posledičnih obolenja organa i tkiva, koja su indukovana ishemijskim ili reperfuzionim zbivanjima, za lečenje ili za profilaksu aritmija, opasnih po život treptanja srčanih komora, srčanog infarkta, angine pectoris, za lečenje ili za profilaksu ishemijskih stanja srca, ishemijskih stanja perifernog i centralnog nervnog sistema ili moždanog udara ili ishemijskih stanja perifernih organa i tkiva, za lečenje ili za profilaksu stanja šoka, obolenja, kod kojih proliferacija ćelija predstavlja primarni ili sekundarni uzrok, kancera, metastaze, hipertrofije prostate odnosno hiperplazije prostate, ateroskleroze ili anomalija u metabolizmu masti, visokog krvnog pritiska, naročito esencijalne hipertonije, obolenja centralnog nervnog sistema, naročito obolenja, koja rezultiraju usled prenadraženosti centralnog nervnog sistema, kao što je epilepsija ili centralno izazvanih grčeva, obolenja centralnog nervnog sistema, naročito stanja straha, depresija ili psihoza, za lečenje ili za profilaksu od non insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) ili diabetskih kasnijih komplikacija, tromboza, obolenja usled endotelialne disfunkcije, od claudicatio intermittens, za lečenje ili profilaksu fibroznih obolenja unutrašnjih organa, fibroznih obolenja jetre, fibroznih obolenja bubrega, fibroznih obolenja krvnih sudova i fibroznih obolenja srca, za lečenje ili profilaksu srčane insuficijencije ili congestive heart failure, akutnih ili hroničnih inflamatornih _ obolenja, obolenja, koja su prouzrokovana preko protozoa, malarije i pileće kokcidioze i za primenu pri hirurškim operacijama i transplantacijama organa, za konzerviranje i čuvanje transplantanata za hirurške namene, za sprečavanje promena tkiva prouzrokovanih starenjem, za proizvodnju jednog leka usmerenog protiv starenja ili za produžavanje života, za lečenje i smanjenje kardiotoksičnog dejstva u tireotoksikozi ili za proizvodnju nekog dijagnostičkog sredstva.

7. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom ili više patentnih zahteva 1 do 4 u kombinaciji sa drugim lekovima ili aktivnim supstancama za proizvodnju jednog leka za lečenje ili profilaksu akutnih ili hroničnih oštećenja, obolenja ili indirektnih posledičnih obolenja organa i tkiva, koja su prouzrokavana ishemijskim ili reperfuzionim zbivanjima, za lečenje ili profilaksu aritmija, smrtno opasnih treptanja srčanih komora, srčanog infarkra, angine pectoris, za lečenje ili profilaksu ishemijskih stanja srca, ishemijskih stanja perifernog i centralnog nervnog sistema ili moždanog udara ili ishemijskih stanja perifernih organa i tkiva, za lečenje ili profilaksu stanja šoka, obolenja, kod kojih proliferacija ćelija predstavlja primarni ili sekundarni uzrok, kancera, metastaze, hipertrofije prostate odnosno hiperplazije prostate, ateroskleroze ili anomalija u metabolizmu, visokog krvnog pritiska, naročito esencijalne hipertonije, obolenja centralnog nervnog sistema, naročito obolenja, koja rezultiraju zbog prenadraženosti centralnog nervnog sistema, kao što je epilepsija ili centralno izazvani grčevi, obolenja centralnog nervnog sistema, naročito stanja straha, depresija ili psihoza, za lečenje ili profilaksu od non insulin dependent diabetes mellitus (NIDDM) ili diabetskih kasnijih komplikacija, tromboza, obolenja kao posledice endotelialne disfunkcije, od claudicatio intermittens, za lečenje ili profilaksu fibroznih obolenja unutrašnjih organa, fibroznih obolenja jetre, fibroznih obolenja bubrega, fibroznih obolenja krvnih sudova i fibroznih obolenja srca, za lečenje ili profilaksu srčane insuficijencije ili congestive heart failure, akutnih ili hroničnih inflamatornih obolenja, obolenja, prouzrokovanih protozojama, malarije i pileće kokcidioze i za primenu pri hirurškim operacijama i transplantacijama organa, za konzerviranje i čuvanje transplantanata za hirurške namene, za sprečavanje promena tkiva prouzrokovanih starenjem, za proizvodnju jednog leka usmerenog protiv starenja ili za produžavanje života, za lečenje i za smanjenje kardiotoksičnog dejstva u tireotoksikozi ili za proizvodnju jednog dijagnostičkog sredstva.

8. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema patentnom zahtevu 7 u kombinaciji sa kardiotoksičnim i citotoksičnim lekovima ili aktivnim supstancama za proizvodnju jednog leka sa smanjenim kardiotoksičnim i citotoksičnim svojstvima.

9. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli samostalno ili u kombinaciji sa drugim lekovima ili aktivnim supstancama prema patentnom zahtevu 6 i/ili 7 za proizvodnju jednog leka za lečenje ili za profilaksu akutnih ili hroničnih oštećenja, obolenja ili indirektnih posledičnih obolenja organa i tkiva, koja su prouzrokovana ishemijskim ili reperfusionim slučajevima.

10. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli samostalno ili u kombinaciji sa drugim lekovima ili aktivnim supstancama prema patentnom zahtevu 6 i/ili 7 za proizvodnju jednog leka za lečenje po život opasnih treperenja srčanih komora.

11. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli samostalno ili u kombinaciji sa drugim lekovima ili aktivnim supstancama prema patentnom zahtevu 6 i/ili 7 za proizvodnju jednog leka za lečenje ili za profilaksu metastaza.

12. Primena jednog jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli samostalno ili u kombinaciji sa drugim lekovima ili aktivnim supstancama prema patentnom zahtevu 6 i/ili 7 za proizvodnju jednog leka za lečenje ili za profilaksu fibroznih obolenja srca, srčane insuficijencije ili congestive heart failure.

13. Lek za humanu, veterinarsku i/ili fitoprotektivnu primenu koji sadrži jednu delotvornu količinu jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom ili više patentnih zahteva 1 do 4 zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i dodacima.

14. Lek za humanu, veterinarsku i/ili fitoprotektivnu primenu koji sadrži jednu delotvornu količinu jedinjenja formule I i/ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema jednom ili više patentnih zahteva 1 do 4 zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i dodacima u kombinaciji sa drugim farmakološki aktivnim supstancama ili lekovima.