RO111272B1

RO111272B1 - Derivati de glucocorticosteroizi, procedeu pentru prepararea acestora si compozitie farmaceutica,pe baza de acesti compusi

Info

Publication number: RO111272B1
Application number: RO93-01094A
Authority: RO
Inventors: Bengt Axelsson; Ralph Brattsand; Leif Kallstrom; Arne Thalen
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1991-02-04
Filing date: 1992-01-29
Publication date: 1996-08-30
Also published as: FI933451A0; EP0572451B1; HU221168B1; ES2114931T3; MX9200374A; US5614514A; JPH06505233A; CZ149593A3; CN1076606C; DE69224982T2; HUT64972A; UA43825C2; NO932762L; IL100542A; SK79793A3; TNSN92008A1; IS1653B; DK0572451T3; IE920167A1; FI933451A7

Description

Invenția de față se referă la derivați de glucocorticosteroizi, la un procedeu pentru prepararea acestora și la o compoziție farmaceutică pe bază de acești compuși.

Compușii activi, conform invenției, sunt antiinflamatorii și antialergici.

Deci obiectul invenției constă întrun glucocorticosteroid antiinflamator, imunosupresor și antialergic sau o compoziție farmaceutică a acestuia, cu activitate mare la locul de aplicare, de exemplu pe tractul respirator, pe piele, în tractul intestinal, la articulație sau la ochi, direcționând medicamentul către zone țintă delimitate, astfel inducând efecte sistemice glucocorticoidice scăzute.

Un alt obiect al invenției este de a oferi o compoziție farmaceutică conținând lipozomi incluzând un ester de acid gras al unui steroid activ din punct de vedere farmacologic, conform invenției, pentru a îmbunătăți eliberarea medicamentului și pentru a minimaliza efectele secundare ale terapiei.

Glucocorticosteroizii (GCS) sunt cele mai valoroase medicamente pentru ușurarea astmului și a rinitei. Este acceptat pe scară largă că GCS își exercită eficacitatea terapeutică prin acțiuni antiinflamatorii și antianafilactice în interiorul căilor respiratorii și a țesutului pulmonar. Utilizarea orală pe termen lung a GCS este împiedicată în bună măsură de efectele secundare grave în afara regiunii plămânului. In consecință, numai o parte mică dintre pacienții cu astm sau numai o parte mică dintre pacienții cu astm sau rinite suportă în mod curent terapia orală cu GCS prin inhalare. Totuși, și GCS-ul potențial inhalat în mod curent pe scară largă în utilizarea clinică - beclometason 17a, 21dipropionat și budesonid au mai degrabă o limită de siguranță îngrădită, pentru ambii au fost raportate acțiuni nedorite ale GCS în circulația generală pentru cele mai mari dintre dozele recomandate pentru inhalat.

Lipozomii sunt vezicule asemănătoare membranelor, constând dintr-o serie de straturi lipidice duble, concen2 trice, cu compartimente hidrofilice. Lipozomii au fost utilizați drept purtători pentru diverse tipuri de compuși din punct de vedere farmaceutic pentru a îmbunătăți eliberarea medicamentului și a minimaliza efectele secundare ale terapiei.

Glucocorticosteroizii sunt încorporați în lipozomi numai într-o concentrație mică și sunt reținuți în mică măsură în vezicule. Esterificarea GCS în poziția 21 cu acizi grași mărește gradul de încorporare și de reținere a steroidului în vezicule. S-a arătat că lanțul de acid gras acționează ca o ancoră hidrofobică care reține nucleul steroidului în grupele polare hidratate de la capete ale fosfolipidei și astfel îmbunătățește interacțiunea între glucocorticosteroid și lipozom.

Glucocorticocosteroizii încapsulați în lipozom pentru utilizare terapeutică au fost descriși (M.De Silva et.al., Lancet 813D (1979), 1320) în brevetul US 4693999, care conține formulări lipozomice ale glucocorticosteroizilor pentru inhalare.

In acest brevet, se revendică o compoziție farmaceutică cuprinzând lipozomi în combinație cu un compus având acțiune antiinflamatorie și antialergică cu formula următoare:

o

II

Q - O - C - R, în care Q este:

și R¹ este o grupă alchil cu catenă dreaptă sau liniară având 11 ... 19 atomi de carbon.

Un obiect al prezentei invenții este de a oferi noi compuși glucocorticosteroizi (GCS). Noii compuși sunt caracterizați prin capacitate antiinflamatorie imunosupresivă și antianafilactică la locul aplicării și au în mod

RO 111272 Bl deosebit o interacțiune în mod marcat îmbunătățită între această capacitate și activitatea care provoacă acțiunea GCS în afara regiunii tratate. Modul perfect de administrare a noilor compuși este prin inhalare, atunci când locul aplicării este situat în interiorul căilor respiratorii.

Un alt obiect al invenției este de a oferi o compoziție farmaceutică antiinflamatorie și antialergică conținând lipozomi cu ester steroidic, pentru administrarea locală, în primul rând pentru tractul respirator. O astfel de compoziție urmărește o îmbunătățire a proprietăților terapeutice a esterului steroidic prin prelungirea retenției locale în căile respiratorii și o direcționare a medicamentului către celulele țintă specifice.

Compușii din invenție sunt caracterizați prin formula generală structurală

CH₂OR₃

sau un component stereoizometric al acestuia, formulă în care poziția 1, 2 este saturată sau este o legătură dublă; R₃ este hidrogen sau catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 4 atomi de carbon; R₂ este un hidrogen, sau catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 10 atomi de carbon; R₃ este un radical acil având o catenă liniară sau ramificată, saturată sau nesaturată având 1 ... 20 atomi de carbon; X₃ este hidrogen sau halogen; X₂ este hidrogen sau halogen respectând următoarele condiții:

- 1) R, și R₂ nu sunt hidrogen în același timp;

- 2] X₃ și X₂ nu sunt hidrogen în același timp;

- 3) atunci când poziția 1, 2 este o legătură dublă, R_n și R₂ nu sunt în același timp metil;

- 4) atunci când poziția 1,2 este o legătură dublă, R₃ este un atom de hidrogen și R₂ este o catenă hidrocarbonatată liniară sau ramificată având 1 ... 10 atomi de carbon, R₃ este acil având 11 ... 20 atomi de carbon;

- 5) când poziția 1, 2 este saturată R₃ și R₂ sunt grupări metil, X₇este brom și X₂ este hidrogen sau fluor, R₃fiind acil cu 6 ... 20 atomi de carbon;

- 6) când poziția 1, 2 este saturată, R_n și R₂ reprezintă grupări metil, X₃ este hidrogen, X₂ este fluor, iar R₃ este un radical acil cu 6 .. 20 atomi de carbon.

Acilul este derivat de la : CH₃C00: acid acetic; C₂H₅C00H: acid propionic; C₃H₇C00H: acid butiric; C₄H_gC00H: acid valeric; CsH^COOH acid hexanoic; C₆H₁₃C00H: acid heptanoic; C₇H₁₅C0QH: acid octanoic; C₈H₁₇C00H: acid nonanoic; 0₉Η₁₉000Η: acid decanoic; C_1oH_igCOOH: acid caproic; C^H^COOH: acid lauric; C₁₂H₂₅COOH: acid tridecanoic; C₁₃H₂₇C00H: acid miristic; C₁₄H_2gCG0H: acid pentadecanoic;

C₁₅H₃₁C00H: acid palmitic; C₁₆H₃₃C00H: acid heptadecanoic; C₁₇H₃₅C00H: acid stearic; C₁₇H₃₃C00H: acidoleic

C_l7H₃₁C00H: acid linolic; C₁₇H_2gC00H: acid linoleic; C₁₈H₃₇COOH:acid nonadecanoic; C₁₉H_3gC00H:acid icosanoic.

Grupul acil preferat este derivat de la C_nH₂₃COOH: acid lauric; C₁₃H₂₇C00H: acid miristic; C₁₅H₃₁C00H: acid palmitic; C₁₇H₃₅C00H: acid stearic, C₁₇H₃₃COOH: acid oleic; C₁₇H₃₁CQ0H: acid linoleic; C₁₇H_2gC00H: acid lonoleic; și cel preferat este acidul palimitic.

O catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 4 atomi de carbon este de preferință o grupă alchil având 1 ... 4 atomi de carbon, mai preferată o grupă metil.

□ catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 10 atomi de carbon este de preferință o grupă alchil având 1 ... 10 atomi de carbon și mai preferabil 1 ... 4 atomi de carbon, în special o grupă metil sau propil.

Un atom de halogen, în descrierea conform invenției de față, este fluor, clor sau brom. Atomul de halogen preferat

RO 111272 Bl este fluor.

Compușii preferați, conform invenției, sunt cei în care, în formula I, poziția 1,2 este saturată R₁ este hidrogen sau o catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 4 atomi de carbon; R₂ este un hidrogen sau o catenă hidrocarbonatată liniară sau ramificată având

I ... 10 atomi de carbon;

R₃ este un radical alchil având o catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată, saturată sau nesaturată având 1 ...20 atomi de carbon; X_q este hidrogen sau halogen; X₂ este hidrogen sau halogen; și cu condiția ca;

- 1) R_n și R₂ să nu fie hidrogen în același timp, și

- 2) Χ_η și X₂ să nu fie în același timp hidrogen.

Compușii conform invenției, preferați în mod deosebit, sunt cei în care formula I: poziția 1, 2 este saturată; R_neste un atom de hidrogen; R₂ este o grupă propil; R₃ este un radical acil având

II ... 20 atomi de carbon; X_q este fluor; X₂ este fluor.

Un alt compus preferat, conform invenției, este cel de formula I, în care poziția 1, 2 este o legătură dublă; R_qeste un atom de hidrogen; R₂ este o grupare propil, R₃ este o grupare palmitoil; X_q este fluor; X₂ este fluor.

Compusul cel mai preferat, conform invenției, are formula:

O

Compoziția farmaceutică, conform invenției, poate să fie fără lipozomi, compusul activ din compoziție este un compus de formula I, în care R₃ este un radical acil având 1 ... 10 atomi de carbon, preferabil 5 ... 10 atomi de carbon.

Componenții stereoizomerici individuali, prezenți într-un amestec steroid având formula (I) de mai sus, pot fi recunoscuți după cum urmează, datorită chiralității la atomul de carbon din poziția 22 și ținând cont de substituentul R₂.

(22)

Componentul stereoizomeric preferat are configurația 22 R.

Metode de preparare.

Esterii steroidici conform invenției au formula generală I de mai jos ;

o

II st - ocr₄ în care St este

Compoziția preferată, conform invenției, conține compusul preferat, conform invenției, în combinație cu lipozomi.

Un obiect al invenției este o compoziție farmaceutică conținând lipozomi, iar compusul activ din compoziție este compusul preferat de formula I, în care

R₃ este un radical acil având 11 ... 20 atomi de carbon.

și X_v X₂, R₁₍ R₂ au semnificațiile date mai sus, R₄ este o grupă alchil liniară sau ramificată, saturată sau nesaturată cu 1

... 19 atomi de carbon și poziția 1, 2 este saturată sau este o dublă

RO 111272 Bl

17a-butilidendioxi-6a, 9a-difluor-11 β, 21dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă, în 5 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat timp de 16 h la temperatura camerei. După evaporare, se adaugă 75 ml clorură de metilen și soluția se spală cu carbonat de potasiu 5% rece și cu soluție saturată de clorură de sodiu. Produsul brut după evaporare se purifică prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH - 20 (85 x 2,5 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 365...420 ml este colectată și evaporată, lăsând 57 mg (22RJ-21-acetoxi-16a, 17a-butilidedioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxipregna-4-en-

3,20-dionă. Se obține un compus având următoarele caracteristici: punct de topire 182 ... 189°C; [a]²⁵ _D = + 112,9 (c = 0,225, CH₂CI₂); greutate moleculară 510 (calculat 510,6); puritate: 99 % (analiza HPLC).

Exemplul 9. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21valeriloxipregna-4-en-3,2D-dionă. O soluție constând din 60 mg clorură de valeril în 5 ml dioxan, se adaugă în picătură la o soluție constând din 75 mg (22R)16a, 17a-butilidendioxi-6a, 9a-difluor-11 β-21dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă în 5 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat timp de 16 h la temperatura camerei. După evaporare, se adaugă 75 ml clorură de metilen și soluția se spală cu carbonat de potasiu apoi 5% și cu soluție saturată de clorură de sodiu. Produsul brut, după evaporare, este purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH20 (85 x 2,5 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 265... 325 ml este colectată și evaporată, lăsând 50 ml (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9adifluor-11 p-hidroxi-21-valeriloxipregna-4en-3,2O-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici : [a]²⁵ _D = +

109,4 (c= 0,212; CH₂CI₂); greutatea moleculară 552 (calculat 552,7). Puritate 99,8 % (analiză HPLC).

Exemplul 10. (22R)-16a, 17abutilidendioxi-6a,9a-difluoM 1 p-hidroxi-21capriloxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă. □ soluție din 0,2 ml clorură de decanoil în ml dioxan, se adaugă în picătură la o soluție din 100 g (22R)-16a, 17a- buti!idendioxi-6a,9a-difluor-11 β, 21 dihidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă în 6 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 [71 x 6,3 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea

1470...1725 ml este colectată și evaporată, rezultând 113 mg (22R)-16a, 17a-butilidensioxi-6a, 9a-difluor-11 βhidroxi-21 -capriloxipregna-1,4-dien-3,20dionă. Compusul are următoarele caracteristici: punct de topire 182 ... 184°C [a]²⁵ _D = + 71,5° (c= 0,186, CH₂CI₂), greutatea moleculară 620 (calculat 620,9), puritate: 97,7 % (analiză HPLC).

Exemplul 11. 6a, 9a-difluor11 β, 21 -dihidroxi-16a, 17a- [(1-metiletilidenjbis (oxi)pregna-4-en-3,20-dionă. □ suspensie din 0,9 g clorură de tri(trifenilfosfină) rodiu în 250 ml toluen degazat este hidrogenată timp de 45 min la temperatura camerei și presiune atmosferică. Se adaugă o soluție din 1,0 g fluocinolonă 16a,17a-acetonidă în 100 ml etanol absolut și se continuă hidrogenarea timp de încă 40 min. Produsul de reacție este evaporat și reziduul este purificat prin cromatografie rapidă pe bioxid de siliciu, utilizând drept fază mobilă acetonă - eter de petrol pentru a îndepărta cea mai mare parte a catalizatorului. Eluatul este evaporat și reziduul este purificat suplimentar prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH - 20 (72,5 x 6,3 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform.

Fracțiunea 3555...4125 ml se colectează și se evaporă, rezultând 0,61 g 6a, 9a<lifluor-11 β,21-dihidroxi-16a, 17a-(1-metiletildenJbis (oxi) pregna-4-en-

3,20-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici: punct de topire 146 ... 151°C; [a]²⁵ _D = + 124,5 (c = 0,220; CH₂CI₂); greutatea moleculară 454 (calculat 454,6); puritate: 98,5 % (analiză HPLC).

Exemplul 12. 6a, 9a-difluor-11 βhidroxi-16a, 17a-[(1 -metiletiliden(oxi)]-21 palmitiloxipregna-4-en-3,2CFdionă. O soluție din 2,1 ml clorură de palmitil în

RO 111272 Bl ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 320 mg 6a,9a-difluor-11 β,21dihidroxi-16α,17α- [(1 -metiletiliden) bis (oxi)]pregna-4-en-3,20-dionă în 30 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Lephadex LH - 20 (76 x 6,3 cm), utilizând drept fază mobilă heptan:cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 1035... 1260 ml se colectează și se evaporă, rezultând 158 mg 6 a,9a<iifluor-11 β-hidroxi-l 6a,1 ZatU -metietiliden)bis(oxi)]-21 -palmitiloxipregna-4-en-3,20-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici : punct de topire 82... 86°C; [a]²⁵ _D = + 85,3 (c = 0,232; CH₂CI); greutate moleculară 692 (calculat 692,9); puritate: 98,6 % (analiză-HPLC).

Exemplul 13. (22R)- și (22S)-21acetoxi-16a, 1 7a-butilidendioxi-6a-fluor11 β-hidroxipregna-4-en-3,20-dionă. 68 mg (22RSJ-16a, 17a-butilidendioxi-6afluor-11 β,21-dihidroxipregna-4-en-3,2Odionă se dizolvă într-un ml piridină. Se adaugă 1 ml anhidridă acetică și amestecul de reacție se agită la temperatura camerei timp de o oră, se toarnă peste apă cu gheață și se extrage cu 3 x 25 ml clorură de metilen. Extractul se usucă și se evaporă. Amestecul 22 RS rezidual este separat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm), utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunile 380 ... 400 ml (A) și 420 ... 440 ml (B) se colectează și se evaporă.

După precipitare din clorură de metilen eter de petrol fracțiunea A dă 14 mg (22S)-21-acetoxi-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β-(^ΓθχίρΓβ9η3-4-βη-

3,20-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici : punct de topire

179...186°C; [a]²⁵ _D = +86,2 (c = 0,188; CH₂CI₂) greutate moleculară 492 (calculat 492,6); puritate: 97,5% (analiză-HPLC).

Din fracțiunea B după precipitare se obțin 20 mg (22R)-21-acetoxi1 6a, 1 7a-butilidendioxi-6a-fluor-11 βhidroxipregna-4-en-3,2O-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici :

169 ... 172°C, [a]²⁵ _D = 139,0 (c =

0,200; CH₂CI₂); greutatea moleculară

492 (calculat 492,6); puritate 97,9 % (analiză HPLC).

Exemplul 14. (22RS)-16a,17abutilidendioxi-6a-fluor-11 β4^Γθχΐ-21palmitiloxipregna-4-en-3,20-dionă. La o suspensie constând din 1,4 g clorură de tri(trifenilfosfină) rodiu în 300 ml toluen se adaugă o soluție din 1170 mg 6afluor-ΙΙβ, 16a, 17a,21-tetrahidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă în 250 ml de etanol absolut. Amestecul este hidrogenat timp de 22 h la temperatura camerei și este evaporat. Reziduul este precipitat din acetonă-cloroform, rezultând 661 mg 6a-fluor-11 β,16α, 17α,21tetra hidroxi pregna-4-en-3,2O-dionă. Componentul obținut are următoarele caracteristici: greutate moleculară 396 (calculat 396,5); puritate : 96,6 % (analiză HPLC).

380 ml 6a-fluor-11 β, 16α, 17α, 21 -tetrahidroxipregna-4-en-3,20-dionă se adaugă în porțiuni la o soluție constând din 115 mg butanol și 0,2 ml acid percloric 70% în 50 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 6 h. Se adaugă 200 ml clorură de metilen și soluția se spală cu carbonat de potasiu apos 10 % și apă și se usucă. Reziduul se purifică după evaporare pe o coloană Sephadex LH-20 (87 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 420...500 ml este colectată și evaporată, rezultând 248 mg (22RS)-16a,17a-butilidendioxi6a-fluor-11 β_>21-dihidroxipΓegna-4-en-

3,20-dionă. Compusul obținut are următoarele caracteristici: punct de topire 85 ... 96°C; [a]²⁵ _D =+119,8 (c = 0,192; CH₂CI₂); greutatea moleculară 450 (calculat 450,6); puritate; 96,1 % (analiză HPLC); distribuția între epimerii 22R și -22S este 59/41 (analiză HPLC).

O soluție constând din 0,21 ml clorură de palmitil în 3 ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 50 mg (22RS)-16a, 17a-butiliden dioxi-6a-fluor11 β. 21-dihidroxipregna-4-en-3,20-dionă în 6 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat peste noapte la temperatura camerei și este prelucrat ca în exemplul

RO 111272 Bl prezență de lactoză poate fi utilizată cu un conținut în lactoză în domeniul □ la

95% din compoziția finală.

Compoziția, conform invenției, și care este preferată în mod deosebit, conține lipozom și (22 R) - 16a, 17abutilidendioxi-6a, 9a-difluor-11 β -hidroxi21-palmitoiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. Căile de administrare pot fi sub formă de aerosoli pulbere, instilare, aerosoli nebulizați și presurizați.

Invenția de față prezintă avantajul obținerii unor compuși activi antiinflamatorii și antialergici, cu acțiune mărită.

Se dau, în continuare, exemple de realizare a invenției, cu următoarele explicații: în exemple se utilizează o viteză de deplasare de 2,5 ml.cm².h'¹ pentru determinările cromatografice preparative. Greutățile moleculare sunt determinate, în toate exemplele, prin spectrometria de masă cu ionizare chimică (CH₄ ca gaz reactiv) și punctele de topire sunt determinate la un microscop Leitz Wetzlar cu plită electrică. Analizele HPLC (Cromatografie Lichidă de înaltă Performanță) a fost realizată pe o coloană pBondapak C_ia (3OO x 3,9 mm i.d.) cu o viteză de scurgere de 1,0 ml/min și la rapoarte etanol/apă între 40 : 60 și 60 : 40 ca fază mobilă, dacă nu se precizează altfel.

Exemplul 1. (22R)-16a, 17abutilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. O soluție constând din 1,2 g clorură de palmitil în 10 ml de dioxan se adaugă în picătură la o soluție constând din 200 mg (22R) - 16a, 17a-butil-idendioxi-6a, 9a-difluor-11 p,21-dihidroxipregna-4-en-

3,20-dionă în 25 ml piridină. Amestecul de reacție se agită timp de 16 h la temperatura camerei. Se adaugă 150 ml clorură de metilen și soluția este spălată cu acid clorhidric 1M, carbonat de potasiu 5 % și apă și este uscat. Produsul brut, după evaporare, este purificat prin cromatografie pe o coloană - Sephadex LH-20 (87 x 2,5 cm) utilizând cloroform drept fază mobilă. Fracțiunea 210 ... 255 ml este colectată și evaporată, obținându-se 203 mg palmitiloxipregna -4-en-3,2O-dionă. Se obține un compus cu următoarele caracteristici:

punct de topire 87...90°C; greutatea moleculară 706 (calculat 707,0);

puritate: 96% (analiză-HPLC).

Exemplul 2. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6 a,9a-difluor 11 p-hidroxi-21palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. La o soluție din 50 mg (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă și 35 mg clorură de palmitil în 10 ml clorură de metilen se adaugă în picătură o soluție din 13 mg trietilamină în 2 ml clorură de metilen. Amestecul de reacție este agitat timp de 2 h la temperatura camerei. Se mai adaugă încă 50 ml clorură de metilen și amestecul de reacție este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH20 (85 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 210...250 ml este colectată și evaporată, dând 34 mg (22R) -1 6a, 17a-butil-idendioxi-6a,9adifluoro-11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-

4-en-3,2O-dionă. Se obține un compus având următoarele caracteristici: greutate moleculară 706 (calculat 797,0); puritate 95% (analiză-HPLC).

Exemplul 3. (22S)-16a, 17a-Butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. O soluție constând din 0,4 ml clorură de palmitil în 10 ml de dioxan se adaugă în picătură la o soluție constând din 70 mg (22SJ-1 6a, 1 7a-butiliden-dioxi-6a,9adifluor-11 p,21-dihidroxipregna-4-en-3,2Odionă în 25 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat timp de 16 h la temperatura camerei și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (87 x

2,5 cm] utilizând cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 225...265 ml se colectează și evaporă, dând 92 mg (22SJ-1 6α, ί 7a-butilidendioxi-6a,9adifluor-11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-4en-3,2O-dionă sub formă de ulei. Greutatea moleculară: 706 (calculat 707,0); puritate: 97% (analiză HPLC).

Exemplul 4. (22R)-16a,17a-Butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21miristiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. Clorurâ de miriștii se prelucrează prin refluxarea

RO 111272 Bl a 7,0 g acid miristic și a 9 ml clorură de tionil în 100 ml tricloretilenă timp de 3 h.

Solventul este apoi evaporat.

La o soluție din 51 mg (22RJ-

I 6a, 1 7a-butilidendioxi-6a,9a-difluor-

II p,21-dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă în 10 ml clorură de metilen, se adaugă 32 mg clorură de miriștii urmată de 13 mg trietilamină dizolvată în 5 ml clorură de metilen. Amestecul de reacție este agitat timp de 4 h la temperatura camerei. Se mai adaugă clorură de metilen și amestecul este spălat în mod succesiv cu acid clorhidric 0,1 M și apă (3 x 50 ml). După uscare și evaporare, reziduul este purificat prin cromatografie pe Kiesegel 60 Merck utilizând drept fază mobilă heptan: acetonă, 6:4, rezultând 27 mg (22RJ-16a, 17a-butilidensioxi6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21 -miristiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. Se obține un compus cu următoarele caracteristici: greutate moleculară 678 (calculat 678,9); puritate: 96,8% (analiză-HPLC).

Exemplul 5. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21 lauriloxipregna-4en-3,2O-dionă. La o soluție constând din 51 mg (22R)16a,17a-butilidendioxi-6a,9a-difluor11 p,21-hidroxipregna-4-en-3,2D-dionă în 5 ml clorură de metilen, se adaugă 28 mg clorură de laurii urmată de 13 mg trietilamină dizolvată în 2 ml clorură de metilen. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 3 h, se mai adaugă clorură de metilen și faza organică se spală în mod succesiv cu acid clorhidric, 0,1 M și apă (3 x 30 ml). După uscare și evaporare reziduul se purifică prin cromatografie pe Kieselgel 60 Merck utilizând drept fază mobilă hexan: acetonă, 6:4. Produsul obținut este purificat ulterior într-o a doua etapă cromatografică, utilizând drept fază mobilă eter de petrol: acetat de etil, 3:2, rezultând 33 mg (22R)-16a,17a-butiF idendioxi-6a-difluor-11 p-hidroxi-21lauriloxipregna-4-en-3,2O-dionă. Se obține un compus cu următoarele caracteristici: greutate moleculară 650 (calculat 650,8). Puritate: 96,9 % (θηθΙΐζθΉΡϋΞ:).

Exemplul 6. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluoro-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă. O soluție din 15 ml clorură de palmitil în 15 ml de dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 7D0 mg (22RJ-16a, 17abutiliden-dioxi-6a,9a-difluor-11 β,21dihidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionăîn 30 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (76 x 6,3 cm), utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea

1020...1350 ml este colectată și evaporată, rezultând 752 mg (22R)16a, 17a-butil-idendioxi-6a,9a-difluor-11 βhidroxi-21 -palmitiloxipregna-1,4-dien-

3,20-dionă. Se obține un compus având următoarele caracteristici ; punct de topire 141 ... 145°C; [a]²⁵ _D + 71,6 (c = 0,204; CH₂CI₂); greutate moleculară: 704 (calculat 704,9); puritate 97,7 % (analiză HPLC).

Exemplul 7. (22S)-16abutilidendioxi-6a,9a-difluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă. O soluție din 0,5 ml clorură de palmitil în 5 ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 150 ml (22S)-16a, 17a-butiliden-dioxi-6a,9a-difluor-11 β,21 -dihidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă în 10 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm), utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 215...315 ml este colectată și evaporată, rezultând 132 mg (22SJ-1 6a, 1 7a-butil-idendioxi-6a,9adifluor-11 β-h i d roxi-21-palmitil oxi pregna-

1,4-dien-3,2O-dionă. Se obține un compus având următoarele caracteristici: punct de topire 176...180°C; [a)²⁵ _D = +

47,5 (c = 0,198; CH₂CI₂); greutate moleculară 704 (calculat 704,9): puritate : 99 % (analiză HPLC).

Exemplul 8. (22R)-21-acetoxi16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluor-11 βhidroxipregna-4-en-3,2O-dionă. O soluție constând din 38 ml clorură de acetil în 5 ml dioxan, se adaugă în picătură la o soluție constând din 75 mg (22RJ-16a,

RO 111272 Bl legătură, sunt preparați prin oricare dintre următoarele metode alternative:

A. Reacția unui compus cu formula de mai jos:

St-OH în care St are definiția dată mai sus, cu un compus cu formula de mai jos: o

II r₄- coh în care R₄ are definiția dată mai sus.

Esterificarea compusului 21-hidroxi poate fi efectuată într-o manieră cunoscută, de exemplu prin reacția compusului 21-hidroxi inițial cu acidul carboxilic adecvat, în mod avantajos în prezența anhidridei trifluoracetice și preferabil în prezența unui catalizator acid, de exemplu acid p-toluensulfonic.

Reacția este realizată în mod avantajos într-un solvent organic, cum ar fi benzen sau clorură de metilen; reacția fiind realizată în mod convenabil la o temperatură de 20 ... 100°C.

B. Reacția unui compus cu formula de mai jos:

St-OH în care St are definiția dată mai sus, cu un compus cu formula de mai jos:

o II r₄- cx în care R₄ are definiția dată mai sus și X este un atom de halogen, cum ar fi clor, brom, iod sau fluor, sau o grupă o II - o - c - r₄ în care R₄ are definiția dată mai sus.

Compusul 21-hidroxi inițial poate fi tratat cu halogenură sau anhidrida de acid carboxilic adecvat, preferabil într-un solvent, cum ar fi hidrocarburile halogenate, de exemplu clorură de metilen sau eteri, de exemplu dioxan în prezența unei baze, cum ar fi trietilamină sau piridină, preferabil la temperatură joasă, de exemplu -5 până la +3Q°C.

C. Reacția unui compus cu formula de mai jos;

St-Y în care St are definiția data mai sus și Y este selectat dintre halogen, de exemplu

Cl, Br și I, sau dintre mesilat sau ptoluensulfonat, cu un compus cu formula de mai jos:

o

II e ® R₄ - CO A în care R₄ are definiția dată mai sus și A este un cation.

O sare a acidului carboxilic potrivit cu un metal alcalin, de exemplu litiu, sodiu sau potasiu, sau o sare trietilamoniu sau tributilamoniu poate fi supusă reacției cu un agent de alchilare potrivit, de formula St-Y. Reacția este realizată de preferință într-un solvent polar, cum ar fi acetonă, metiletilcetonă, dimetilformamidă sau dimetilsulfonid, în mod convenabil la o temperatură în intervalul 25 ... 100°C.

In oricare dintre metodele A - C, în cazul în care se dorește un epimer pur, poate fi necesară o etapă finală de reacție pentru a separa amestecul epimeric în componentele sale.

Preparate farmaceutice. Compușii conform invenției pot fi utilizați pentru diverse moduri de administrare locală, funcție de locul inflamației, de exemplu percutanal, parenteral sau pentru administrare locală în tractul respirator prin inhalare. Un scop important al tipului de formulare este de a atinge bioaccesibilitatea optimă a ingredientului steroidic activ. Pentru formulările percutanale acest lucru est realizat în mod avantajos dacă eteroidul este dizolvat în solvent cu activitate termodinamică mare. Acest lucru este obținut utilizând un sistem adecvat sau solvenți conținând glicoli potriviți, cum ar fi propilenglicol sau 1,3butandiol, fie ca atare, fie în combinație cu apă.

De asemenea, este posibil ca steroidul să fie dizolvat complet sau parțial într-o fază lipofilică cu ajutorul unui agent activ de suprafață drept solubilizator. Compozițiile percutanale pot fi un unguent, o cremă de ulei în apă, o cremă în ulei în apă sau o loțiune. In emulsie, sistemul conținând componentul activ dizolvat poate forma atât faza dispersă cât și pe cea continuă.

Steroidul poate exista de aseme

RO 111272 Bl nea în compozițiile de mai sus sub formă de substanță solidă, micronizată.

Aerosolii presurizați ai steroizilor sunt folosiți pentru inhalările nazale sau orale. Sistemul aerosol este astfel proiectat, încât fiecare doză eliberată conține 10 ... 1000 pg, preferați 20 250 pg steroid activ. Cei mai activi steroizi sunt administrați în doză cea mai scăzută a intervalului de dozare. Steroidul micronizat constă din particule în principal mai mici de 5 pm, care sunt suspendate într-un amestec propulsor în prezența unui dispersant, cum ar fi trioleat sorbitan, acid oleic, lecitină sau sare de sodiu a acidului dioctilsulfosuccinic.

Steroidul poate fi administrat de asemenea cu ajutorul unui inhalator de pulbere uscată.

O posibilitate este de a amesteca sterodul micronizat cu o substanță purtătoare cum ar fi lactoză sau glucoză. Amestecul pulverulent este distribuit în capsule de gelatină dure, fiecare conținând doza dorită de steroid. Capsula este plasată apoi într-un inahaltor de pulbere și doza este inhalată în căile respiratorii ale pacientului.

O altă posibilitate este de a prelucra pulberea micronizată sub formă de sfere care se distrug în timpul procedurii de dozare. Această pulbere sferică este încărcată în rezervorul de medicament într-un inhalator cu doze multiple, de exemplu Turbuhaler. O unitate de dozare măsoară doza dorită care este apoi inhalată de către pacient. Cu acest sistem, steroidul cu sau fără o substanță purtătoare este eliberat pacientului.

Steroidul poate fi inclus de asemenea în formulări destinate tratării bolilor inflamatorii ale intestinului, fie pe cale orală, fie pe cale rectală. Formulările pentru calea orală trebuie astfel alcătuite, încât steroidul este eliberat către părțile inflamate ale intestinului. Acest lucru poate fi realizat prin diverse combinații de principii enterice și/sau de principii de eliberare înceată sau controlată.

Prepararea de compoziții lipozomice. Lecitinele utilizate în această invenție au catene de acid gras de diferite lungimi și au prin urmare diferite temperaturi de tranziție de fază. Exemple de lecitine utilizate sunt cele derivate de la ou și soia și lecitine sintetice, cum ar fi dimiristil fosfatidilsolină (DMPC), dipalmitil fosfatidilcolină (DPPC) și distearil fosfatidilcolină (OSPC). Prin manipularea structurilor lecitinelor pot fi formulați purtători cu diverse proprietăți biodegradabile. Acest lucru va ușura prelungirea eliberării esterului steroidic necaptat.

Gradul de interacțiune a esterului steroidic, ca de exemplu vezicule de dipalmitil fosfatidilcolină (DPPC) depinde de lungimea catenei esterului, observânduse o interacțiune crescută pe măsură ce catena se lungește.

Includerea de colesterol sau derivați de colesterol în formulările lipozomice a devenit foarte obișnuită, datorită proprietăților sale de a mări stabilitatea lipozomului.

Stadiul inițial al preparării lipozomilor, conform cu prezenta invenție, poate fi condus în mod convenabil după procedeele descrise în literatură, adică componentele fiind dizolvate într-un solvent, de exemplu etanol sau cloroform care este apoi evaporat. Stratul lipidic rezultat este dispersat, apoi în mediul apos selectat, după care soluția este fie agitată, fie sonicată. Lipozomii din această invenție au de preferință un diametru între 0,1 și 10 pm.

In plus față de principala lipidă (lipide], formatoare de lipozom, care este de obicei fosfolipida, pot fi incluse și alte lipide (de exemplu colesterol sau stearat de colesterol] în cantitatea de O ... 40 % g (g din totalul lipidelor] pentru a modifica membrana lipozomului. In optimizarea capacității de preluare a lipozomului se poate încorpora un al treilea component care asigură o sarcină negativă (de exemplu dipalmitoil fosfatidilglicerol) sau o sarcină pozitivă (de exemplu acetat de stearilamină sau clorură de cetilpiridină).

Se poate utiliza un domeniu larg de proporții de esteri steroidic față de lipidă în timpul formării funcție de lipidă și de condițiile utilizate: uscarea (prin liofîlizare sau pulverizare] lipozomilor în

RO 111272 Bl

1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm], utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea

185...230 ml este colectată și evaporată, rezultând 42 mg (22RS)-16a, 17a-butilidensioxi-6a-fluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă sub formă de ulei. Compusul obținut are următoarele caracteristici: greutatea moleculară : 688 (calculat 688,97]; puritate: 99,0% și distribuția între epimerii 22R- și 22S- este de 15/85 (analiză HPLC).

Exemplul 15. (22R)-16α,17abutilidendioxi-6a-fluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. 225 mg (22RSJ-16a, 17a-butilidendioxi-6afluor-11 p,21-dihidroxipregna-4-en-3,2Odionă sunt separate prin HPLC preparativ în porțiuni pe o coloană pBondapak C₁₈(150 x 19 mm) utilizând drept fază mobilă etanol: apă, 40:60. Fracțiunile centrate la 265 ml (A) și 310 ml (B) sunt colectate și evaporate. După precipitare din clorură de metileneter de petrol a fracțiunii A, se obțin 68 mg (22R)1 6a, 1 7a-butilidendioxi-6-fluor-11 β, 21 dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă având următoarele caracteristici: punct de topire: 180 ... 192°C; [a]²⁵ _D = 138,9 (c = 0,144: CH₂CI₂); greutate moleculară 450 (calculat 450,6); puritate : 99,4 % (analiză HPLC).

Din fracțiunea B după precipitare se obțin 62 mg (22S)-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 p,21-dihidroxipregna4-en-3,2O-dionă având următoarele caracteristici: punct de topire: 168 ... 175°C; [a]²⁵ ₀ = +103,7 (c= 0,216;

CH₂CI₂); greutatea moleculară 450 (calculat 450,6); puritate: 99,5 % (analiză HPLC).

O soluție din 0,22 ml clorură de palmitil în 5 ml dioxan se adaugă în picătură 32 mg (22RJ-16a, 17a-butiliden-dioxi-6a-fluor-11 p,21-dihidroxipregna4-en-3,2O-dionă în 10 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat peste noapte la temperatura camerei și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (87 x

2,5 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 215...250 ml este colectată și evaporată, rezultând 38 mg (22R)-16a, 1 7a-butilidendioxi-6a-fluor11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-4-en-

3,20-dionă sub formă de ulei, având următoarele caracteristici: greutate moleculară 688 (calculat 688,97); puritate: 96% (analiză HPLC).

Exemplul 16. (22S)-16a, 17abutilidendioxi-6a-fluor-11 p-hidroxi-21palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. Intr-un ml de piridină se dizolvă 68 mg (22RS)1 6a, 1 7a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β,21 dihidroxipregna-4-en-3,2O-dionă. Se adaugă 1 ml anhidridă acetică și amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 1 h, apoi este turnat peste gheață cu apă și este extras cu 3 x 25 ml clorură de metilen. Extractul se usucă și se evaporă. Amestecul epimeric 22RS rezidual este scindat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm), utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunile 380...400 ml (A) și 420 - 440 ml (B) sunt colectate și evaporate.

După precipitare din clorură de metilen-eter de petrol a fracțiunii A, se obțin 14 mg (22S)-21-acetoxi-16a,17abutilidendioxi-6a-fluor-11 β-hidroxipregna4-en-3,2O-dionă având caracteristicile: punct de topire 179... 186°C; [a]²⁵ _D = 86,2 (c = 0,188; CH₂CI₂); greutate moleculară 492 (Calculat 492,6); puritate:

97,5 % (analiză HPLC).

După precipitarea fracțiunii B, se obțin 20 mg (22R)-21-acetoxi-16a,17abutilidendioxi-6a-fluor-11 β-hidroxipregna4-en-3,2O-dionă, având caracteristicile: punct de topire 169... 172°C; [a]²⁵ _D = +139,0 (c = 0,200; CH₂CI); greutate moleculară 492 (calculat 492,6); puritate : 97,9 % (analiză HPLC).

La o soluție constând din 14 mg (22S)-21-acetoxi-16 a, 17 a-butilidendioxi6a-fluor-11 β-hidroxipregna-4-en-3,2Odionă în 2 ml etanol se adaugă 2 ml acid clorhidric 2M. După agitare la 60°C timp de două ore, amestecul de reacție se neutralizează cu dicarbonat de sodiu apos saturat și se extrage cu 3 x 25 ml clorură de metilen. Extractele combinate

RO 111272 Bl sunt spălate cu apă, uscate și evaporate. Reziduul este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (87 x 215 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea

455...510 ml se colectează și se evaporă, dând 7 mg (22SJ-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 p,21-dihidroxipregna4-en-3,2O-dionă, având caracteristicile : greutate moleculară 450 (calculat 450,6); puritate : 96,6 %.

O soluție constând din 195 ml clorură de palmitil în 5 ml de dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 32 mg (22S)-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β21-hidroxipregna-4-en-3,2O-dionă în 10 ml piridină . Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 205 ... 245 ml se colectează și se evaporă rezultând 37 ml (22S)-1 6a, 17a-butilidendioxi-6afluor-11 β-Ι^Γθχί-21-ρ3ΐΓηίίίΙοχίρΓβρη3-4en-3,2O-dionă sub formă de ulei. Greutatea moleculară 688 (calculat 688,97). Puritate: 96,4 % (analiză HPLC).

Exemplul 17.(22RS)-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-1 1 β-h i d roxi-21 lauriloxipregna-4-en-3,2O-dionă. O soluție constând din 0,4 ml clorură de laurii în 3 ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție din 50 mg (22RS)-16a,17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β-21-dihidroxipregna4-en-3,2O-dionă în 6 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut se purifică pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 215...250 ml este colectată și evaporată, rezultând 15 mg de (22RSJ-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor11 i-hidroxi-21-lauriloxipregna-4-en-3,2O dionă având caracteristicile : punct de topire : 125... 143°C; [a]²⁵ _D = +92,8 (c = 0,208; CH₂CI); greutate moleculară 632 (calculat 632,9), puritate : 96,2 % (analiză HPLC). Distribuția între epimerii 22R- și 22S - este de 58/42 (analiză

HPLC).

Exemplul 18. (22RJ-16a, 17abutilidendioxi-6a-fluor-11 β-Ιιί0Γ0ΧΪ-2Τpalmitiloxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă. 400 mg 6a-fluor-11 a, 21 -tetrahidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă se adaugă în porțiuni la o soluție constând din 0,18 ml butanal și 0,2 ml acid percloric 70 % în 50 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 16 h. Se adaugă 200 ml clorură de metilen și soluția este spălată cu carbonat de potasiu apos 10 % și apă și este uscată. Reziduul, după evaporare, este purificat pe o coloană Sephadex LH20 (75 x 6,3 cm), utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea

2880.. .3300 ml este colectată și evaporată, rezultând 1209 mg de (22RS)-

I 6a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β,21dihidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionă, având caracteristicile: greutate moleculară 448 (calculat 448,5); puritatea

95.7 % și distribuția între epimerii 22Rși 22S- 55/45 (analiză HPLCV).

mg (22RS)-16a,17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β,21-dihidroxipΓegna-1,4dien-3,2O-dionă sunt cromatografiate pe o coloană Sephadex LH-20-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunile

1720.. .1800 ml (A) și 1960...2025 ml (B) sunt colectate și evaporate. Cele două produse sunt precipitate din clorură de metilen-eter de petrol. Produsul din fracțiunea A (12 mg) este identificat prin ¹H RMN și spectrofotometrie de masă a fi (22S)-16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-

II β,21^ΐΙ^Γθχίρ^η3-1,4-dien-3,20dionă, iar produsul din fracțiunea B (10 mg) drept epimerul 22R.

Epimerii au următoarele proprietăți: epimerul 22S are: punct de topire 172 ...180°C; [a]²⁵ _D = +62,3 (c = 0,132; CH₂CI₂); greutate moleculară 448 (calculat 448,5). Puritatea epimerilor este determinată prin analiză -HPLC ca fiind 98,9 % pentru epimerul -22S și

97.7 % pentru epimerul -22R.

La o soluție din 56 mg (22R)16a, 17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β,21dihidroxipregna-1,4-dien-3,2O-dionăîn 10 ml piridină se adaugă în picătură o soluție

RO 111272 Bl de 172 mg clorură de palmitil în 5 ml dioxenă.

Amestecul de reacție este agitat peste noapte la temperatura camerei și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 225...285 ml este colectată și evaporată, rezultând 31 mg de (22R)-16 a,17a-butilidendioxi-6a-fluor11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-1,4-dien-

3,20-dionă, având următoarele caracterisatici: punct de topire 95...100°C; [a]²⁵ _D = +68,0 (c = 0,200, CH₂CI₂); greutate moleculară 686 (calculat 686,95); puritate 97,7 % (analiză HPLC).

Exemplul 19. (22S)-1 6a, 1 7a-butilidendioxi-6a-fluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-1,4-diena-3,2O-dionă. La o soluție constând din 46 mg (22S)16a,17a-butilidendioxi-6a-fluor-11 β, 21 dihidroxipregna-1,4-dien-3,2Q-dionăîn 10 ml piridină se adaugă în picătură o soluție constând din 110 mg clorură de palmitil în 5 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 185 ... 225 ml este colectată și evaporată, rezultând 37 mg (22S)-16a,17a-butilidendioxi-6afluor-11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-1,4dien-3,2O-dionă, având caracteristicile: punct de topire 65...68°C; [a]²⁵ _D = + 53,0 (c = 0,200; CH₂CI); greutate moleculară 686 (calculat 686,95); puritate: 95,9 % (analiză HPLC).

Exemplul 20. 6a-fluor-11 β,21dihidroxi-16a, 17a-[(1 -metietiliden) bis (oxi)] pregna-4-en-3,2O-dionă. O suspensie din 2,1 g clorură de tri(trifenilfosfină) rodiu în 500 ml toluen este hidrogenată la temperatura camerei și presiunea atmosferică timp de 45 min, când catalizatorul se adaugă în soluție. Se adaugă o soluție din 2,0 g 6a-fluor11 ,p,21-dihidroxi-16a,17a[(1-metiliden) bis(oxi)] pregna-1,4-dien-3,2O-dionă în 1000 ml etanol absolut și hidrogenarea este continuată timp de încă 65 h.

Amestecul de reacție este evaporat și reziduul este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (71 x 6,3 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea

2010...2445 ml este colectată și evaporată, dând 1,51 g de 6a-fluor-11 β,21dihidroxi-1 6a, 1 7a-[(1 -metiletiliden) bis(oxi)]pregna-4-en-3,2O-dionă, având caracteristicile: punct de topire : 209... 219°C; [a]²⁵ _D = +133,5° (c = 0,230; CH₂CI₂) ; greutate moleculară 436 (calculat 436,5) ; puritate 99,6 % (analiză HPLC).

Exemplul 21. 6a-fluor-11 β-hidroxi-16a, 17a-[(1 -metiletiliden)bis(oxi)]-21 palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. La o soluție din 6a-fluor-11 β,21 -dihidroxi-16a, 17a-[(1 -metiletiliden)bis(oxi)]pregna-4-en-

3,20-dionă în 6 ml piridină, se adaugă în picătură 0,21 ml clorură de palmitil în 3 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (76 x 6,3 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 1035 ... 1230 ml este colectată și evaporată, rezultând 63 mg 6 a-fluor-11 β-hidroxi16a, 17a- (1-metiletiletiliden)bis(oxi]-21palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă având caracteristicile: punct de topire 99 ...101°C; [a]²⁵ _D = +89,8 (c = 0,206; CH₂CI₂); greutate moleculară 674 (calculat 674,94) ; puritate : 97,9 % (analiză HPLC).

Exemplul 22. 9a-fluor-11 β,21dihidroxi-1 6a, 1 7 a[(1 -metiletiliden) bis(oxi]]pregna-4-en-3,2O-dionă. O soluție constând din 675 mg clorură de tri (trifenilfosfină)rodiu în 250 ml toluen este hidrogenată la temperatura camerei și presiunea atmosferică timp de 45 min. Se adaugă o soluție din 1 g triamcinolonă 16a, 17a-acetonidă în 100 ml etanol absolut și hidrogenarea este continuată timp de încă 40 h. Amestecul de reacție este evaporat și cea mai mare parte a catalizatorului este îndepărtată prin cromatografie rapidă cu acetonă: eter de petrol (p.f. 40 ... 50°C), 40:60 drept fază mobilă. Produsul brut este purificat suplimentar pe o coloană Sephadex LHRO

111272 Bl (72,5 x 6,3 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea

2746.. .3195 ml este colectată și evaporată, rezultând 404 mg 9a-fluor11 β,21 -dihidroxi-1 6a,1 7a-[(1-metil- 5 etiliden)bis(oxi)]pregna-4-en-3,2O-dionă, având caracteristicile : punct de topire

238.. . 241 °C; [a]²⁵ _D = + 145,2 (c = □,288; CH₂CI₂) greutate moleculară 436 (calculat 436,5); puritate: 99 % (analiză 10 HPLC).

Exemplul 24. (22RSJ-16a, 17abutilidendioxi-9a-fluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-4-en-3,2O-dionă. La o soluție din 100 mg butanol proaspăt 15 distilat și 0,2 ml acid percloric 70 % în 50 ml dioxan purificat și anhidrizat se adaugă, în porțiuni mici, cu agitare de-a lungul a 20 min, 340 mg de 9a-fluor1 ip,16a,17a,21-tetrahidropregna-4-en- 20

3,20-dionă. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de încă 5 h. Se adaugă 200 ml clorură de metilen și soluția este spălată cu carbonat de potasiu apos și apă și este 25 uscată pe sulfat de magneziu anhidru. Produsul brut obținut după evaporare este purificat pe o coloană Sephadex LH20 (72,5 x 6,3 cm] utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 2760 30 ...3195 ml este colectată și evaporată, rezultând 215 mg de (22RSJ-1 6a, 17abutiliden-dionă-9a-fluor-1 1 β-21dihidroxipregna-4-en-3,20-dionă. Compusul are următoarele caracteristici: 35 greutatea moleculară 450 (calculat 450,6); puritate: 97,4 % (analiză HPLC).

La o soluție din 40 mg (22RS)16a,17a-butilidendioxi-9a-fluoro-11 β,21 dihidroxipregna-4-en-3,20-dionă în 5 ml 40 piridină se adaugă în picătură 0,13 ml clorură de palmitil în 2,5 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut 45 este purificat pe o coloană Sephadex LH20 (87 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracțiunea 220...200 ml este colectată și evaporată, rezultând 42 mg (22RSJ-16a-17a-butilidendioxi-9a- 50 fluor-11 β-|·^Γθχΐ-21-ρ3ΐΓηΐίΐΙοχΐρ^η3-4en-3,2O<lionă sub formă de ulei. Greutatea moleculară 688 (calculat 688,97).

Distribuția între epimerii -22R și -22S este 61/39 (analiză HPLC).

Exemplul 25. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-1 1 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-4-en-3,20-dionă. 200 mg (22RS)-16a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-11 β-21^ΐΙ^τοχΐρ^π8-4-θη-3,20dionă este separat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (76 x 6,3 cm) utilizând drept fază mobilă un amestec 20:20:, heptan: cloroform: etanol. Fracțiunile 7560...8835 ml (A) și 8836... 9360 ml (B) sunt colectate și evaporate. Produsul din fracțiunea A (128 mg) este identificat prin ¹H-RMN și spectrometrie de masă ca fiind (22S]-16a, 17a-butilidendioxi-9-fluor-11 β,21-άίΐΊίάΓθχίρΓ69η3-4-βη-

3,20-dionă și produsul din fracțiunea B (50 mg) ca fiind epimerul 22R.

Epimerii au următoarele proprietăți: epimerul 22S are punct de topire 180...190°C; [a]²²D = + 105,6 (c = 0,214; CH2CI2); greutate moleculară 450 (calculat 450,6). Epimerul 22R are punct de topire 147...151 °C; [a]²²D = +

133,7 (c = 0,196; CH₂CIJ; greutate moleculară 450 (calculat 450,6). Puritatea epimerilor se determină prin analiza HPLC a fi 95,6 % pentru epimerul 22S și 98,2 % pentru epimerul 22R.

O soluție constând din 0,34 ml clorură de palmitil în 5 ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție constând din 50 mg (22RJ-16a, 17a-butilidendioxi9a-fluor-11 p,21-dihidroxipregna-4-en-

3,20-dionă în 10 ml piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea 180 ... 205 ml este colectată și evaporată, rezultând 36 mg de (22R)ί 6a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-11 β-21palmitiloxipregna-4-en-3,20-dionă sub formă de ulei. Compusul are caracteristicile următoare: puritate 96,3 % (analiză HPLC); greutate moleculară 688 (calculat 688,97).

Exemplul 26. (22S)-16a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-11 β4^Γθχΐ-21-ρ3ΐηηΐtiloxipregna-4-en-3,20-dionă. La o soluție

RO 111272 Bl constând din 41 mg (22S)-16a,17a-butilidendioxi-9a-fluor-11 p,21-dihidroxipregna4-en-3,20-dionă în 3 ml se adaugă în picătură o soluție din 0,14 ml clorură de palmitil în 15 ml dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă heptan: cloroform: etanol, 20:20:1. Fracțiunea

215...260 ml este colectată și evaporată, rezultând 26 mg (22S)-16a,17abutilidendioxi-9a-fluor-11 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-4-en-3,20-dionă sub formă de ulei. Compusul obținut are următoarele caracteristici: puritate: 91,4 % (analiză HPLC); greutate moleculară 688 [calculat 688,97).

Exemplul 27. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-1 1 p-hidroxi-21 palmitiloxipregna-1,4-dien-3,20-dionă. La o soluție constând din 25 mg (22R)16a, 17a-butilidendioxi-9a-fluor-11 β,21 dihidroxipregna-1,4-dien-3,20-dionă în 5 ml piridină se adaugă în picătură o soluție din 75 mg clorură de palmitil în 2,5 dioxan. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei peste noapte și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat pe o coloană Sephadex LH-20 (85 x 2,5 cm) utilizând drept fază mobilă cloroform. Fracția 235 ... 285 ml este colectată și evaporată, rezultând 27 mg de (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-9a, 11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-1,4-dien-

3,20-dionă cu următoarele caracteristici: punct de topire 116...121°C ; [a²⁵ _D = +67,4 (c = 0,172 ; CH₂CI); greutate moleculară 686 (calculat 687,0); puritate 96,5 % (analiză HPLC).

Exemplul 28. (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-21-caprililoxi-6a,9a-difluoro11 p-hidroxipregna-4-ena-3,20-dionă. La o soluție de (22R)-16a,17a-butilidendioxi6a,9a-difluoro-11 p,21-dihidroxipregna-4ena-3,20-dionă (64 mg) în 4 ml de clorură de metilen se adaugă clorură de caprilil (35 mg) și 4-dimetilaminopiridină (30 mg). Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei timp de 45 min. După evaporare, reziduul este purificat prin cromatografie pe o coloană

Merk Kiselgel 60 folosind heptan: acetat de etil 1:1 ca fază mobilă. Produsul obținut este mai departe purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH20 (85 x 2,5 cm i.d.) folosind cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 280...315 este colectată și evaporată și reziduul precipită din clorură de metilen : eter de petrol, obținându-se 28 mg de (22RJ-

I 6a,1 7a-butilidendioxi-21-caprililoxi6a,9a-difluoro-11 p-hidroxipregna-4-ena-

3,20-dionă, având caracteristicile: punct de topire 158...165°C, (a]²⁵ ₀ = + 103,7° (c = 0,216; CH₂CI₂); greutate moleculară, 594 (calculat 594,7); puritate 98,7 % (analiză HPLC).

Exemplul 29. (22R)-1 6a,17a-butilidendioxi-21 -capriloxi-6a,9a-difluoro-

II p-hidroxipregna-4-ena-3,20-dionă. □ soluție de clorură de capril (75 mg) în 2 ml dioxan se adaugă în picătură la o soluție de (22R)-16a, 17a-butilidendioxi6a,9a-difluoro-11 p,21-dihidroxipregna-4ena-3,20-dionă (60 mg) în 4 ml de piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei de-a lungul nopții și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm i.d.) folosind heptan : cloroform: etanol ca fază mobilă. Fracțiunea 245...315 ml este colectată și evaporată și reziduul precipită din clorură de metilen:eter de petrol, obținând 58 mg de (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-21capriloxi-6a, 9a-difluoro-11 p-hidroxipregna-4-ena-3,20-dionă având caracteristicile: punct de topire 168...171 °C; [a]²⁵ _D= + 93,7, (c = 0,302; CH₂CI₂); greutate moleculară 622 (calc.622,8). Puritate: 94,1 % (analize HPLC).

Exemplul 30. (22R)-16a,17a-butilidendioxi-21-capriloxi-6a,9a-difluoro11 p-hidroxipregna-4-ena-3,20-dionă. La o soluție de (22R)-16a,17a-butilidendioxi6a,9a-clifluoro-11 p-21-dihidroxipregna-4ena-3,20-dionă (60 mg) în 4 ml de clorură de metilen se adaugă clorură de capril (25 mg). Amestecul de reacție este agitat (a temperatura camerei timp de 30 min și este prelucrat ca în exemplul 1. După cromatografie pe Merck Kisegel 60 este mai departe purificat prin

RO 111272 Bl cromatografie pe coloană Sephadex LH20 (85 x 2,5 cm i.d.) folosind cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 300 ... 345 ml este colectată și evaporată și reziduul precipită din clorură de metilen: eter de petrol, obținându-se 20 mg de (22RJ16a,17a-butilidendioxi-21-capriloxi-6a,9adifluoro-11 p-hidroxipregna-4-ena-3,2Odionă având caracteristicile: punct de topire: 148...160°C; [a]²⁵ _D = + 107,3° ; (c = 0,232; CH₂CI₂); greutate moleculară 566 (calculat 566,7). Puritate 99,3 % (analize HPLC).

Exemplul 31. (22RJ-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluoro-11 p-hidroxi-21 propioniloxipregna-4-ena-3,2O-dionă. O soluție de clorură de propionil (150 mg) în 5 ml de dioxan se adaugă la o soluție de (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9adifluoro-11 p,21-dihidroxipregna-4-ena-

3,20-dionă (150 mg) în 10 ml de piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei de-a lungul nopții și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (70 x 6,3 cm), folosind cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 1485...1695 ml este colectată+ și evaporată și apoi purificată pe o coloană Sephadex LH-20 (75 x 6,3 cm) cu heptan: cloroform: etanol, 20:20:1, ca fază mobilă. Fracțiunea 1925...2235 ml este colectată și evaporată. Reziduul este precipitat din clorură de metilen: eter de petrol, obținându-se 109 mg de (22R)-1 6a,1 7a-butilidendioxi-6a,9adifluoro-11 p-hidroxi-21-propioniloxipregna4-ena-3,2O-dionă având caracteristicile : punct de topire : 206...212°C; (a]²⁵ _D =

115,7 (c = 0,216L CH₂CI₂); greutate moleculară 524 (calculat 524,6); puritate : 99,0 % (analiză HPLC).

Exemplul 32. (22RJ-16a,17a-butilidendioxi-21-butiriloxi-6a,9a-difluoro11 p-hidroxipregna-4-ena-3,20-dionă. O soluție de clorură de butiril (170 mg) în 5 ml de dioxan se adaugă în picătură la o soluție de (22RJ-16a,17a-butilidendioxi6a,9a-difluoro-11 p-21-dihidroxipregna-4ena-3,20-dionă (150 mg) în 10 ml de piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei de-a lungul nopții și este prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (70 x 6,3 cm) folosind cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 1440... 1740 ml este colectată și evaporată și apoi purificată pe o coloană Sephadex LH-20 (75 x 6,3 cm) cu heptan: cloroform: etanol, 20:20:1, ca fază mobilă. Fracțiunea

2010.. .2230 ml este colectată și evaporată. Reziduul este precipitat din clorură de metilen: eter de petrol, obținând 118 mg de (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-21-butiriloxi-6a,9a-difluoro-11 βhidroxipregna-4-ena-3,20-dionă având : punct de topire : 208...216°C; [α]^Ξ5 ₀ = +

114,4 (c = 0,216; CH₂CI₂); greutate moleculară 538 (calculat 538,6); puritatea: 99,4 % [analize HPLC).

Exemplul 33. (22R)-16a,17a-butilidendioxi-6a,9a-difluoro-11 β-|·^Γθχί-21valeriloxipregna-4-ena-3,20-dionă. O soluție de clorură de valeril (60 mg) în 5 ml de dioxan se adaugă în picătură la (22R)16a, 17a-butilidendioxi-6a,9a-difluoro-21dihidroxipregna-4-ena-3,20-dionă (75 mg) în 5 ml de piridină. Amestecul de reacție este agitat la temperatura camerei de-a lungul nopții și prelucrat ca în exemplul 1. Produsul brut este purificat prin cromatografie pe o coloană Sephadex LH-20 (85 x 2,5 cm) cu cloroform ca fază mobilă. Fracțiunea 265...325 ml este dizolvată în clorură de metilen și precipitată cu eter de petrol obținând 52 mg de (22R)-16a,17a-butiidendioxi-6a,9adifluoro-11 β-|-^Γθχΐ-21-ν3ΐ6πΙοχΐρ^ηθ-4ena-3,20-dionă; având punct de topire:

181.. . 185°C; [α]^Ξ5 ₀ = + 109,4 (c = 0,212; CH₂CI₂); greutatea moleculară 552 (calculată 552,7), Puritate : 99,8 % (analize HPLC).

Exemplul 34. Preparate farmaceutice. Următoarele exemple ilustrează formulări destinate pentru diferite forme de administrare locală. Cantitatea de steroid activ în formulările precutanale este în mod obișnuit 0,001 ... 0,2 % (g/g), preferabil 0,01 ... 0,1 % (g/g). Aceste preparate farmaceutice se realizează prin amestecarea ingredienților, după cum urmează:

RO 111272 Bl

32

Formularea 1. (Unguent) - Steroid, micronizat - Parafină lichidă - Parafină albă moale până la	0,025 g 10,0 g 100,0 g
Formularea 2. (Unguent) - Steroid - Propilen glicol - Sorbitan sesquioleat - Parafină lichidă - Parafină albă moale până la	0,025 g 5,0 g 5,0 g 10,0 g 100,0 g
Formularea 3 (Cremă ulei în apă). - Steroid - Cetanol - Monostearat gliceril - Parafină lichidă - Cetomacrogol 1000 - Acid citric - Citrat de sodiu - Propilenglicol - Apă până la	0,025 g 5.0 g 5,0 g 10,0 g 2,0 g 0,1 g 0,2 g 35,0 g ΪΟΟ,Ο g
Formularea 4 (Cremă ulei în apă). - Steroid, micronizat - Parafină albă moale - Parafină lichidă - Cetanol - Sorbimacrogol stearat - Sorbitan monostearat - Acid sorbic - Acid citric - Citrat de sodiu - Apă până la	0,025 g 15,0g 5,0 g 5.0 g 2,0 g 0,5 g 0,2 g 0,1 g 0,2 g 100,0 g
Formularea 5. (Cremă apă în ulei). - Steroid - Parafină albă moale - Parafină lichidă - Sorbitan sesquioleat - Acid sorbic - Acid citric - Citrat de sodiu	0,025 g 35,0 g 5,0 g 5.0 g 0.2 g 0,1 g 0,2 g

-Apă până la 100,0 g

Formularea 6. (Loțiune) - Steroid - Izopropanol - Carboxivinilpolimer -NaOH - Apă până la

0,25 mg 0,5 ml 3,0 mg g.s. 1,0g

RO 111272 Bl

Formularea 7 (Suspensie pentru injecție)

- Steroid, micronizat - Sodiu carboximetilceluloză - NaCl - Polioxietilen (20) sorbitan monooleat - Apă sterilă până la

0,05 ... 10 mg 7 mg 7 mg 0,5 mg 1,0 ml

Formularea 8. (Aerosol pentru inhalare orală și nazală)

Steroid, micronizat Sorbitan trioleat T riclorfluormetan Diclortetrafluormetan Diclordifluormetan

0,1 % g/g 0,7 % g/g 24,8 % g/g 24,8 % g/g 49,6 % g/g

Formularea 9. (Soluție pentru atomizare).

Steroid 7,0mg

Pripilenglicol5,0 g

Apă până la 10,0 g

Formularea 10. (Pulbere pentru inhalare).

O capsulă din gelatină este umplută cu un amestec din:

- Steroid, micronizat 20,0mg

- Lactoza 20,0mg

Pulberea este inhalată cu ajutorul unui dispozitiv pentru inhalare.

Formularea 11. (Pulbere pentru inhalare).

Pulberea sferică este încărcată într-un inhalator de pulbere în doze multiple. Fiecare doză conține:

- steroid, micronizat 0,1 mg

Formularea 12 (Pulbere pentru inhalare)

Pulberea sub formă de granule sferice este încărcată într-un inhalator de pulbere în doze multiple. Fiecare doză conține :

- steroid, micronizat - lactoza, micronizată

0,1 mg 1,0 mg

Formularea 13. (Capsule pentru tratarea intestinului subțire).

- Steroid - Sfere de zahăr - Aquacbat ECD 30 - Acetiltributil citrat - Polisorbat 80 - Eudragit L100-55 - Trietilcitrat -Talc - Antispumant NMS

1 ,□ mg 321,0 mg 6,6 mg 0,5 mg 0,1 mg 17,5 mg 1.8 mg 8.8 mg 0,01 mg

Formularea 14. (Capsule pentru tratarea intestinului gros).

- Steroid - Sfere de zahăr - Aquaooat ECD 30

2,0 mg 305,0 mg 5,0 mg

RO 111272 Bl

- Acetiltributil citrat

- Polysorbat 80

- Eudragit NE30D

- Polysorbat 80

- Eudragit NE3OD

- Eudragit S100 -Talc

0,4 mg

0,14 mg 12,6 mg

0,14 mg

12,6 mg

Formularea 15. (Clismă rectală)

- Steroid 0,02 mg

- Sodiu carboximetilceluloză 25,0 mg

- Edeteat desodic 0,5 mg

- Parahidroxibenzoat de metil 0,8 mg

- Parahidroxibenzoat de propil

- Clorură de sodiu

- Acid citric anhidru

- Polisorbat 80

-Apă, purificată până la

Formularea 16 (Formulare con* 15 ținând steroid legat de lipozom)

A. Prepararea unei formulări pentru instalație. 45 mg dipalmitilfosfatdilcolină sintetică, 7 mg dimiristilfosfatdilcolină, 1 mg dipalmitilfosfatidilglicerol și 20 1 mg (22R)-16a, 17a-butilidendioxi-6a,9adifluor-11 p-hidroxi-21-palmitiloxipregna-4ena-3,2Ckjionă se amestecă într-un tub de sticlă. Toate componentele se dizolvă în cloroform. Cea mai mare parte a 25 solventului este evaporată utilizând N₂ și apoi sub presiune redusă, ceea ce duce la formarea unui film subțire de componente lipidice pe suprafața tubului de sticlă. La lipide se adaugă o soluție 30 apoasă de NaCI 0,9 %. Formarea lipozomilor este realizată la o temperatură peste temperatura fazei de tranziție a lipidelor. Lipozomii se formează prin agitarea soluției. Suspensia rezultată 35 conține lipozomi cu mărimea de la foarte mic la 2 pm

B. Prepararea unei formulări pentru inhalare. Prepararea lipozomilor este realizată conform exemplului 1 în care so- 40 luția apoasă conține 10 % lactoză. Raportul între lactoză și lipidă este 7:3. Suspensia de pilozomi este congelată pe gheață uscată și este liofilizată. Produsul uscat este micronizat în particule cu un 45 diametru aerodinamic mediu al masei (MMAD) de cca. 2 pm.

Farmacologie. Selectivitatea pentru activitatea antiinflamatorie locală poate fi exemplificată prin următorul mo- 50

0,2 mg 7,0 mg 1,8 mg 0,01 mg 1,0 mg del pentru căile respiratorii.

O fracțiune considerabilă din GGS ul inhalat se depune în faringe și este înghițită în cea mai mare parte sfârșind în intestin. Această fracțiune contribuie la efectele secundare nedorite ale steroidului întrucât acționează în afara zonei dorite pentru tratament (plămânul). Prin urmare, este avantajos să fie utilizat GCS cu o activitate antiinflamatorie locală mare în plămâni dar cu efecte GCS induse joase după administrare orală. Prin urmare s-au făcut studii pentru a determina efectele GCS după aplicare locală în plămân ca și după administrare perforată și diferențierea între acțiunile glucocorticosteroidice în regiunea tratată a plămânului și în afara acestei zone au fost testate după cum urmează.

Modele test

A) Model test pentru activitatea antiinflamatorie locală dorită asupra mucoase căilor respiratorii (lobul pulmonar stâng). Șobolani Sprague Dawley (250 gr) sunt anesteziați ușor cu EPHRANE și preparatul test glucocorticoidic (în lipozomi suspendați în saramură) într-un volum de 0,5 ml/kg este instilat chiar în lobul pulmonar stâng. După două ore este instilată în tractul traheic deasupra bifurcării o suspensie de Sephadex (5 mg/kg într-un volum de 1 mm/kg) astfel încât suspensia ajunge atât în lobul pulmonar stâng cât și în cel drept. După 20 h șobolanii sunt uciși și lobii pulmonari. stângi sunt disecați și

RO 111272 Bl cântăriți. Grupele de control primesc vehicul în loc de preparat glucocorticosteroidic și saramură în loc de suspensie Sephadex pentru a determina greutatea edemului cu Sephadex netratat cu medi- 5 cament și greutatea normală a plămânului.

B. Test model pentru efectul sistematic nedorit prin glucocorticosteroid absorbit pe cale orală. Șobolani Sprague 10 Dawley (250 g) sunt anesteziați ușor cu Ephrene și cu test preparat GCS în volum de 1,0 ml/kg, care este dat pe cale orală. După două ore este instilată o suspensie de Sephadex (5 mg/kg într-un 15 volum de 1 ml/kg) în tractul traheic deasupra bifurcației, astfel încât suspensia ajunge atât în lobul pulmonar stâng cât și în cel drept. Douăzeci de ore mai târziu, șobolanii sunt uciși și lobii pulmonari sunt 20 cântăriți. Grupele de control primesc vehicul în loc de preparat glucocorticosteroidic și saramură în loc de suspensie Sephadex pentru a determina edemul cu Sephadex cu medicament și greutate 25 normală.

Rezultatele studiului sunt date în tabelul 1. Profilul farmacologic al compușilor conform invenției a fost comparat cu cel al budisonil -21-palmitatul și cu cel al flumetazon-21-palmitatului în lipozomi. Toți steroizii conform invenției prezintă potența antiinflamatorie locală mai mare decât butesonid'21-palmitatul în lipozomi. Mai mult, rezultatele demonstrează de asemenea o selectivitate mai mare la plămâni a compușilor din invenție testați comparativ cu compușii precedenți selectați, deoarece doza cerută pentru a inhiba edemul pulmonar (ED₅₀) prin administrare orală a compușilor menționați mai sus este de 158 (exemplul 3), 247 (exemplul 7] și 559 (exemplul 1), ori mai mare, și a budesonid-21-palmitatului de 66 ori mari mare, iar a flumetazon-21-palmitatului de 8 ori mai mare decât doza necesară pentru a inhiba edemul pulmonar prin aplicarea locală la plămâni a medicamentelor.

Astfel se poate conchide că, compușii conform invenției sunt foarte potriviți pentru tratament local al tulburărilor inflamatorii ale pielii și a diverselor cavități ale corpului (de exemplu plămâni, nas, intestin și încheieturi).

Tabelul 1

Efectele glucocorticosteroizilor testați în lipozomi asupra edemului pulmonar model indus de Sephadex la șobolan. Rezultatele sunt date În legătură cu grupul corespunzător de control dat de Sephadex.

Compus conform exemplului	ED₅₀ (administrare în plămânul stâng; nmol/kg] Lob pulmonar stâng*¹	ED₅₀ (p.c.adm. nmol/kg) plămân*¹	Raport administrare administrare oral/local
Butesonid-21palmitat (RS)	23	1520	66
Flumetazon-21palmitat	2,2	18	8
7	2,3	568	247
6	1.8	-	-
3	3,5	554	158
1	1.5	839	559

x) EDsq doză de glucocorticosteroid pentru a reduce cu 50 % edemul

Claims

Revendicări

1. Derivați de glucocorticosteroizi sau un stereoizomer al acestora caracterizați prin aceea că au formula 5 generală (I):

în care poziția 1, 2 este o legătură saturată sau o legătură dublă; R₇ este hidrogen sau o catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată având 1 ... 4 atomi 20 de carbon; R₂ este hidrogen sau o catenă hidrocarbonată având 1 ... 10 atomi de carbon; R₃ este acil având o catenă hidrocarbonată liniară sau ramificată, saturată sau nesaturată cu 4 ... 25 20 atomi de carbon; unul dintre X₇ și X₂este fluor, iar celălalt este hidrogen sau fluor, respectând următoarele condiții:

- î) R₁ și R₂ să nu fie simultan hidrogen; 30

- 2) când poziția 1, 2 este o legătură dublă, R₃ și R₂ să nu fie simultan grupări metil;

- 3) când poziția 1, 2 este o legătură dublă, R₃ este un atom de 35 hidrogen și R₂ este o catenă liniară hidrocarbonată sau ramificată având 1 ... 10 atomi de carbon, R₃ este acil având 11

... 20 atomi de carbon;
2. Derivat conform revendicării 1, 40 caracterizat prin aceea că au formula structurală generală (I) în care poziția -

1,2 este saturată.
3. Derivat conform revendicărilor

1 sau 2, caracterizat prin aceea că, R₃ 45 este un radical acil având 11 ... 20 atomi de carbon.
4. Derivat conform revendicărilor

1 sau 2, caracterizat prin aceea că, R₃este un radical acil având 4 ... 10 atomi 50 de carbon.
5. Derivat conform revendicării 3, caracterizat prin aceea că, poziția -1,2 este saturată, R₃ este un atom de hidrogen, R_a este o grupă propil, R₃ este o grupă palmitoil, X₃ este fluor și X₂ este fluor.
6. Derivat conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că, poziția 1,2 este o legătură dublă, R₅ este un atom de hidrogen, R₂ este o grupă propil, R₃este o grupă palmitoil, X₇ este fluor și X₂este fluor.
7. Derivat conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că are formula structurală generală (la) de mai jos:

o
8. Procedeu pentru prepararea derivaților cu formula generală structurală (I), caracterizat prin aceea că, un compus de formula generală (II): (II) în care: R_n, R₂, X, și X₂ sunt definiți ca mai sus, se supune reacției cu un compus de formula generală (III) :

R₄C00H (III) în care R₄ este un radical alchil saturat sau nesaturat liniar sau ramificat cu 3 ... 19 atomi de carbon, iar dacă se obține un amestec epimeric, aceasta se poate separa în componentele stereoizomerice, dacă se dorește.
9. Procedeu pentru prepararea derivaților cu formula generală structurală (I), caracterizat prin aceea că, un compus de formula generală (IV):

RO 111272 Bl în care R_v R₂, X, și X₂ sunt definiți ca mai sus, se supune reacției cu un compus cu formula generală (V):

R₄C00X (V) în care R₄ este definit ca mi sus și X este un atom de halogen sau un radical 00CR₄, iar dacă se obține un amestec de epimeri, aceasta se poate separa în componentele stereoizomerice, dacă se dorește.
10. Procedeu pentru prepararea derivaților cu formula generală structurală [I], caracterizat prin aceea că, un compus de formula generală (VI):

în care R,, R₂, Xt și X₂ sunt definiți ca mai sus și Y este halogen, mezilat sau ptoluensulfonat, se supune reacției cu un compus de formula generală (VII): R₄C00X® A® în care R₄ este definit ca mai sus și A^eeste un cation: după care dacă compusul astfel obținut este un amestec epimeric și se dorește un epimer pur, amestecul epimeric este separat în componentele sale stereoizomerice.
11. Procedeu conform oricăreia dintre revendicările 8 până la 10, caracterizat prin aceea că este preparat un derivat având caracteristicile din revendicările 2...7.
12. Compoziție farmaceutică, caracterizată prin aceea că, conține 0,001 ... 0,2 % (g/g) steroid activ, care este asociat cu un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.
13. Derivat de glucocorticosteroizi conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se utilizează drept substanță activă la prepararea unui medicament cu activitate inflamatorie sau antialergică.
14. Derivat de glucocorticosteroizi conform revendicării 1, caracterizat prin aceea că se utilizează în tratamentul afecțiunilor inflamatorii alergice la mamifere, inclusiv la om, prin administrarea unei doze eficace de compus cu formula generală (I).