RO110037B1

RO110037B1 - Antiviral or antibacterial compositions and infections treatment method with these thereof

Info

Publication number: RO110037B1
Application number: RO143941A
Authority: RO
Inventors: Witold Kiczka
Original assignee: Nika Health Products Inc
Priority date: 1988-05-26
Filing date: 1988-05-26
Publication date: 1995-09-29

Abstract

Invenția se referă la noi compoziții antivirale sau antibacteriene, care conțin, drept ingredient activ, 0,001 mg/ml... 20,0 mg/ml forma dimerică a unei enzime, de preferință, selectat dintre dimerul lizozimei și dimerul ribonucleazei și un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.The invention relates to us antiviral or antibacterial compositions which contain as active ingredient 0.001 mg / ml ... 20.0 mg / ml dimeric form of an enzyme, preferably, selected from the lysozyme dimer and the ribonuclease dimer and an acceptable carrier from a pharmaceutical point of view.

Description

110037 3 controlare a acestor efecte fitotoxice. De aceea, este de dorit să se elaboreze compoziţii bazate pe lisozimă, ribonuclează sau alte enzime similare, care să poată fi utilizate eficient, pentru a trata bolile provocate de virusuri, bacterii sau alte stări nocive, fără efectele citotoxice, constatate în mod uzual, atunci când se folosesc enzimele în forma lor monomeră.3 control of these phytotoxic effects. It is therefore desirable to develop compositions based on lysozyme, ribonuclease or other similar enzymes which can be used efficiently to treat diseases caused by viruses, bacteria or other harmful conditions without the usual cytotoxic effects, when using the enzymes in their monomeric form.

Conform prezentei invenţii, s-a descoperit că se poate prepara o compoziţie antivirală sau antibacteriană, având ca substanţă activă lisozimă, ribonucleaza sau alte enzime, care să nu manifeste efecte citotoxice, prin folosirea formelor dimere ale enzimelor. Prin prepararea compoziţiilor care utilizează ca ingredient activ un dimer al lisozimei sau al ribonucleazei şi un material suport, acceptabil farmaceutic, se pot trata cu succes o serie de boli infecţioase, fără efecte citotoxice apreciabile.According to the present invention, it has been discovered that an antiviral or antibacterial composition having lysozyme, ribonuclease or other enzymes which do not exhibit cytotoxic effects can be prepared by using the dimeric forms of the enzymes. By preparing compositions that use a lysozyme or ribonuclease dimer and a pharmaceutically acceptable carrier material as an active ingredient, a series of infectious diseases can be successfully treated without appreciable cytotoxic effects.

Compoziţiile antivirale şi antibac-teriene, conform prezentei invenţii, se pot prepara prin obţinerea, în primul rând, a lisozimei şi a ribonucleazei, în forma lor monomeră. Monomerii lisozimei (Catalog nr. 28260) şi monomerii ribonucleazei (Catalog nr. 34388) utilizaţi la prepararea compoziţiilor conform prezentei invenţii, s-au obţinut de la Serva Feine Biochemica, Gmbh und Cooperation, D 69-000, Heidelberg. Aceşti monomeri de enzime pot fi polimerizaţi în dimeri prin orice metodă cunoscută, utilizată curent în acest domeniu. Totuşi, se preferă în mod deosebit, polimerizarea enzimei efectuată şi descrisă în Biochemistry Journal 173, Carlson şi alţii, pp. 723 ... 737, (1978). Alte metode, cum ar fi cea descrisă în European Journal of Biochemistry 124, Sorrentino şi alţii, pp. 183 ... 189, (1982), pot fi de asemenea utilizate. S-a constatat de asemenea, că un dimer al ribonucleazei deosebit de folositor, care poate fi întrebuinţat în compoziţile din prezenta invenţie, este un dimer preparat din ribonucleaza pancreatică A, izolată din ţesuturile pancreatice animale. S-a constatat că acele compoziţii care conţin în calitate de ingredient activ un dimer al isozimei sau ribonucleazei şi un suport acceptabil farmaceutic sunt eficiente la tratarea unei varietăţi de boli bacteriene şi virale, fără efecte citotoxice nedorite. Aceste efecte 4 dăunătoare potenţiale s-au analizat în studii comparative, folosind atât formele monomere, cât şi cele dimere ale lisozimei şi ribonucleazei. In aceste studii, s-au administrat monomeri şi dimeri de lisozimă şi ribonuclează, în diferite concentraţii, la culturile de fibroblaste de rinichi de maimuţă verde (GMK - green monkey kidney). S-a observat că monomerul lisozimei s-a dovedit citotoxic asupra fibroblastelor după 24 h, la concentraţii de 0,1 mg/ml. După trei zile de incubare, s-a observat un efect citotoxic asupra fibroblastelor chiar la concentraţii de 0,01 mg/ml, care au afectat 50% din celulele incubate. După cinci zile, 75% din celule cultivate au fost afectate de activitatea citotoxică a monomerului lisozimei la concentraţii de 1,0 ... 0,1 mg/ml. Prin comparaţie, dimerul lisozimei nu a prezentat efect citotoxic la nici o concentraţie utilizată în aceste teste, nici chiar după o perioadă de şapte zile. Aceste studii au arătat că forma dimeră a lisozimei a fost de aproximativ 100 de ori mai puţin toxică pentru fibroblastele de GMK decât forma monomeră.The antiviral and antibacterial compositions of the present invention can be prepared by first obtaining lysozyme and ribonuclease in their monomeric form. Lysozyme monomers (Catalog No. 28260) and the ribonuclease monomers (Catalog No. 34388) used in the preparation of the compositions of the present invention were obtained from Serva Feine Biochemica, Gmbh und Cooperation, D 69-000, Heidelberg. These enzyme monomers can be polymerized in dimers by any known method commonly used in this field. However, enzyme polymerization is particularly preferred and described in Biochemistry Journal 173, Carlson et al., Pp. 723-737, (1978). Other methods, such as those described in European Journal of Biochemistry 124, Sorrentino et al., Pp. 183-189, (1982), may also be used. It has also been found that a particularly useful ribonuclease dimer which can be used in the compositions of the present invention is a dimer prepared from pancreatic A ribonuclease isolated from animal pancreatic tissues. It has been found that those compositions containing as an active ingredient an isozyme or ribonuclease dimer and a pharmaceutically acceptable carrier are effective in treating a variety of bacterial and viral diseases without undesirable cytotoxic effects. These potential harmful effects were analyzed in comparative studies, using both monomeric and dimeric forms of lisosome and ribonuclease. In these studies, lysozyme and ribonuclease monomers and dimers, at different concentrations, were administered to green monkeys kidney fibroblasts (GMK) cultures. The lysozyme monomer was found to be cytotoxic on the fibroblasts after 24 hours at concentrations of 0.1 mg / ml. After three days of incubation, a cytotoxic effect on fibroblasts was observed at concentrations of 0.01 mg / ml, which affected 50% of the incubated cells. After five days, 75% of the cultured cells were affected by the cytotoxic activity of lysozyme monomer at concentrations of 1.0 ... 0.1 mg / ml. By comparison, the lysozyme dimer did not show any cytotoxic effect at any concentration used in these tests, even after a seven day period. These studies have shown that the dimeric form of lisosome was about 100 times less toxic for GMK fibroblasts than the monomeric form.

Studiul cu privire la ribonuclează a arătat o lipsă a efectului citotoxic, similară, la forma dimeră. In acest studiu, ribonucleaza a dovedit că este citotoxică pentru fibroblastele GMK la o cultură de cinci zile la concentraţii mici, de 0,0001 mg/ml. După şapte zile de cultură, efectele citotoxice ale monomerilor ribonucleazei, la concentraţii de 0,01 mg/ml şi mai mari, au eliminat 100% celulele cultivate. Prin contrast, dimerul ribonucleazei nu a manifestat efecte citotoxice deloc asupra fibroblastelor de GMK, la toate nivelele de concentraţie, nici după o incubare de şapte zile. De aceea, s-a stabilit că, forma dimeră a ribonucleazei este de aproximativ 1 000 ... 10 000 de ori mai puţin toxică, pentru fibroblaste, decât forma monomeră. Aceste teste au demonstrat clar că efectele citotoxice, care de obicei însoţesc utilizarea formelor monomere ale enzimelor, cum sunt lisozimă şi ribonucleaza, pot fi virtual eliminate dacă aceste enzime sunt utilizate în formele lor dimere.The ribonuclease study showed a lack of similar cytotoxic effect to dimeric form. In this study, ribonuclease has been shown to be cytotoxic to GMK fibroblasts in a five day culture at low concentrations of 0.0001 mg / ml. After seven days of culture, the cytotoxic effects of ribonuclease monomers, at concentrations of 0.01 mg / ml and above, eliminated 100% of the cultured cells. By contrast, the ribonuclease dimer did not exhibit cytotoxic effects at all on GMK fibroblasts at all concentration levels even after a seven-day incubation. Therefore, it has been determined that the dimeric form of the ribonuclease is about 1,000-10,000 times less toxic for fibroblasts than the monomeric form. These tests have clearly demonstrated that the cytotoxic effects that usually accompany the use of monomeric forms of enzymes such as lisosime and ribonuclease can be virtually eliminated if these enzymes are used in their dimeric forms.

Cercetările în continuare, au arătat că, în ciuda lipsei de efecte citotoxice apreciabile, lisozimă şi ribonucleaza, în forma lor dimeră, pot fi extrem de eficace la tratarea infecţiilor 110037 3 virale şi bacteriene. In testele la care s-au folosit ouă de găină fertilizate şi o boală a virusului Sendai, dimerul lisozimei s-a injectat intraamniotic, în ouă, la diferite concentraţii. In fiecare ou, s-au injectat de asemenea, două unităţi de virus Sendai. După incubaţie, fluidele amniotic şi alantoic s-au colectat din ouăle infectate şi cele martor şi s-au comparat. Aceste teste au arătat că dimerul lisozimei a fost capabil să inhibe replicarea virusului Sendai, cultivat în ouă de găină fertilizate, cu o vechime de zece zile, chiar la o concentraţie foarte mică de 0,01 mg/ml. Teste similare, folosind dimeri ai lisozimei şi ribonucleazei, au scos în evidenţă un efect bacteriostatic al acestor enzime dimere asupra bolilor datorate bacteriei Streptococcus.Further research has shown that despite the lack of appreciable cytotoxic effects, lysozyme and ribonuclease in their dimeric form can be extremely effective in treating viral and bacterial infections. In tests where fertilized hen eggs and Sendai virus were used, the lisosime dimer was injected intramuscularly into eggs at different concentrations. In each egg, two Sendai virus units were also injected. After incubation, amniotic and allantoic fluids were collected from infected and control eggs and compared. These tests showed that the lysozyme dimer was able to inhibit the replication of the Sendai virus, cultivated in fertilized hen eggs, ten days old even at a very low concentration of 0.01 mg / ml. Similar tests using lysozyme and ribonuclease dimers revealed a bacteriostatic effect of these dimeric enzymes on Streptococcus bacteria.

Compoziţiile preparate din dimerii lisozimei şi ribonucleazei, în conformitate cu prezenta invenţie, se pot utiliza pentru a trata o varietate de infecţii virale şi bacteriene. Compoziţiile se pot prepara într-o gamă variată de forme şi administrarea acestor compoziţii, conţinând enzime, se poate face intern sau extern, pentru un anumit pacient uman sau animal, în funcţie de boala care trebuie să fie tratată. Pentru bolile interne, cum ar fi infecţia urechii, mastita, infecţiile tractului stomacul sau vaginal, compoziţiile dimere din prezenta invenţie pot fi formulate adecvat şi administrate oral, intravenos, parenteral, prin supozitoare sau prin orice altă metodă care va permite soluţiei dimere să ajungă la aria infectată. Pentru condiţiile externe, cum ar fi bolile de piele virale sau bacteriene, rănile infectate, herpesurile sau bolile sexuale cu efecte externe, compoziţiile din prezenta invenţie se pot administra topic pacientului, în oricare din varietatea de forme corespunzătoare.Compositions prepared from the lysozyme and ribonuclease dimers in accordance with the present invention can be used to treat a variety of viral and bacterial infections. The compositions may be prepared in a wide variety of forms and the administration of these enzyme-containing compositions can be done internally or externally for a particular human or animal patient depending on the disease to be treated. For internal diseases such as ear infection, mastitis, stomach or vaginal tract infections, the dimeric compositions of the present invention can be formulated appropriately and administered orally, intravenously, parenterally, by suppository or by any other method that will allow the dimer solution to reach infected area. For external conditions such as viral or bacterial skin diseases, infected wounds, herpes, or sexually transmitted diseases, the compositions of the present invention may be administered topically to the patient in any of a variety of suitable forms.

Natura specifică a bolii sau infecţiei tratate va determina de aceea forma corespunzătoare a compoziţiei din prezenta invenţie. Pentru tratamentele externe, compoziţia poate fi administrată în forme diferite, de unguente, loţiuni, soluţii, uleiuri, etc. Dacă este necesară o utilizare internă, se pot întrebuinţa o serie de forme adecvate, cum sunt picăturile, tabletele, soluţiile, capsulele, etc. Forma specifică de compoziţie, aşa cum se va aplica pacientului, va determina de asemenea natura purtătorului acceptabil 4 farmaceutic, utilizat în compoziţie cu enzima dimeră. Printre numeroşii purtători adecvaţi (suporturi), care se pot întrebuinţa, sunt bazele hidrofile, soluţiile de săruri acceptabile fiziologic, apa, unsorile, pulberile, etc.The specific nature of the disease or infection being treated will therefore determine the appropriate form of the composition of the present invention. For external treatments, the composition may be administered in different forms, ointments, lotions, solutions, oils, etc. If internal use is required, a number of suitable forms, such as drops, tablets, solutions, capsules, etc. may be used. The specific composition of the composition, as will be practiced by the patient, will also determine the nature of the pharmaceutically acceptable carrier, used in the composition with the dimeric enzyme. Among the many suitable carriers (carriers) that can be used are hydrophilic bases, physiologically acceptable salt solutions, water, greases, powders, etc.

Tratamentul enzimatic al infecţiilor virale sau bacteriene, fără efecte citotoxice, este astfel asigurat prin prezenta invenţie prin administrarea pacientului, uman sau animal, a unei cantităţi eficiente de compoziţii dimere, prezentate mai sus. Prin cantitatea eficientă, se înţelege acea cantitate, care este necesară, pentru a produce efectele antivirale sau antibacteriene. Cantitatea necesară, pentru ca tratamentul să fie eficient, va diferi în fiecare caz, în funcţie de natura bolii tratate şi de forma compoziţiei dimere administrate. In general, compoziţia din prezenta invenţie este administrată la un nivel de dozare de la 0,01 până la 50,0 mg/kg greutate corporală, fiind preferat un domeniu de 1,0 până la 2,0 mg/kg greutate corporală. In cazul tratamentului topic, s-au dovedit eficiente unsorile preparate utilizând aproximativ 4,0 mg de dimer în aproximativ 200 ml soluţie apoasă, sau parafină sau propilenglicol, dacă s-au aplicat de 4 ... 5 ori pe zi. Dozele din aceste domenii trebuie să fie suficiente, pentru a trata o serie de boli virale sau bacteriene, fără efecte citotoxice dăunătoare, care ar însoţi tratamentele cu enzime monomere.The enzymatic treatment of viral or bacterial infections without cytotoxic effects is thus provided by the present invention by administering to the patient, human or animal, an effective amount of the dimeric compositions shown above. By effective amount is meant that amount, which is required, to produce antiviral or antibacterial effects. The amount necessary for the treatment to be effective will vary in each case, depending on the nature of the disease being treated and the form of the administered dimer composition. Generally, the composition of the present invention is administered at a dosage level of from 0.01 to 50.0 mg / kg body weight, with a range of 1.0 to 2.0 mg / kg body weight being preferred. In the topical treatment, the formulations prepared using about 4.0 mg of dimer in approximately 200 ml of aqueous solution or paraffin or propylene glycol were found to be effective if applied 4 to 5 times a day. Dosages in these areas should be sufficient to treat a number of viral or bacterial diseases without damaging cytotoxic effects that would accompany monomeric enzyme treatments.

Se prezintă, în continuare, 13 exemple, cu rolul de a ilustra prezenta invenţie.The following examples are illustrated by way of illustration of the present invention.

Exemplul 1. S-a făcut o cercetare comparativă privitor la efectul citotoxic al monomerilor şi dimerilor lisozimei şi ribonucleazei pancreatice A, pe o cultură de fibroblaste de rinichi de maimuţă verde (GMK). Aceste teste au fost efectuate prin aplicarea monomerilor şi a dimerilor pe cultură de fibroblaste la concentraţii de la 0,0001 până la 1,0 mg/ml. Culturile au fost apoi incubate, timp de şapte zile, după care s-a executat citotoxicitatea culturilor. Rezultatele acestor teste sunt prezentate în tabelele 1 şi 2.Example 1 A comparative study was performed on the cytotoxic effect of lysozyme and pancreatic ribonuclease A monomers and dimers on a green monkey kidney fibroblast (GMK) culture. These assays were performed by applying monomers and dimers to fibroblast culture at concentrations of 0.0001 to 1.0 mg / ml. The cultures were then incubated for seven days after which the cytotoxicity of the cultures was performed. The results of these tests are presented in Tables 1 and 2.

După cum se poate observa din tabelul 1, monomerul lisozimei a demonstrat că este citotoxic, asupra fibroblastelor, după 24 de h, la concentraţii de 0,1 şi 1,0 mg/ml. După trei zile de incubaţie, monomerul a manifestat efecte citotoxice asupra fibroblastelor, chiar la o concentraţie de 0,01 mg/ml, afectând 50% 110037 5 din celulele incubate. După cinci zile, 75% din celulele cultivate au fost afectate de activitatea citotoxică a monomerului lisozimei la concentraţii de 1,0 şi 0,1 mg/ml.As can be seen from Table 1, the lysozyme monomer has been shown to be cytotoxic to fibroblasts after 24 hours at concentrations of 0.1 and 1.0 mg / ml. After three days of incubation, the monomer exhibited cytotoxic effects on fibroblasts, even at a concentration of 0.01 mg / ml, affecting 50% 1100375 of the incubated cells. After five days, 75% of the cultured cells were affected by the cytotoxic activity of lysozyme monomer at concentrations of 1.0 and 0.1 mg / ml.

Prin contrast, forma dimeră a lisozimei 5 nu a prezentat efect citotoxic la nici o concentraţie utilizată în test, chiar după ce au trecut şapte zile de incubare. Studiile au demonstrat astfel că dimerul lisozimei se dovedeşte a fi de circa 100 de ori mai puţin 10 toxic asupra fibroblastelor de GMK decât monomerul lisozimei.By contrast, the dimeric form of lysozyme 5 did not show cytotoxic effect at any concentration used in the assay even after seven days of incubation. Studies have shown that the lysozyme dimer proves to be about 100 times less toxic to GMK fibroblasts than the lysozyme monomer.

Din tabelul 2, se poate constata că monomerul ribonucleazei pancreatice A s-a dovedit a fi citotoxic asupra fibroblastelor de 15 GMK, într-o cultură de cinci zile, chiar la concentraţii de numai 0,0001 mg/ml. După şapte zile de cultivare, efectul citotoxic al ribonucleazei pancreatice A, la concentraţii de 0,01 mg/ml şi superioare acesteia, a fost 20 suficient de puternic pentru a elimina în proporţie de 100% celulele cultivate. 6Table 2 shows that pancreatic ribonuclease A monomer has been shown to be cytotoxic to 15 GMK fibroblasts in a five day culture even at concentrations of only 0.0001 mg / ml. After seven days of cultivation, the cytotoxic effect of pancreatic ribonuclease A at concentrations of 0.01 mg / ml and above was 20 strong enough to remove 100% of the cultured cells. 6

Similar cu cazul dimerului lisozimei, forma dimeră a ribonucleazei pancreatice A nu a prezentat efect citotoxic asupra fibroblastelor de GMK, la nici o concentraţie utilizată în teste, pe o durată de şapte zile. Rezultatele au indicat astfel că dimerul ribonucleazei pancreatice A este de aproximativ 1 000 până la 10 000 de ori mai puţin toxic asupra fibroblastelor de GMK decât monomerul ribonucleazei pancreatice A.Similar to the case of the lysozyme dimer, the dimeric form of pancreatic ribonuclease A did not show a cytotoxic effect on GMK fibroblasts at any concentration used in the tests for seven days. The results indicated that pancreatic A ribonuclease dimer is approximately 1,000 to 10,000 times less toxic on GMK fibroblasts than pancreatic ribonuclease A monomer.

Exemplul 2. S-a studiat dimerul lisozimei, în ceea ce priveşte efectele sale antivirale. In experienţele făcute, dimerul lisozimei a fost injectat în ouă de găină fertilizate, cu o vechime de 10 zile, în concentraţii de 10,0, 1,0, 0,1, 0,01 şi 0,001 mg/ml. S-a adăugat o tulpină de virus Sendai (cu titrul de hemaglutinare = 1:128 HA) la fiecare concentraţie de dimer, într-o cantitate de două unităţi de hemaglutinare.Example 2 The lysozyme dimer was studied for its antiviral effects. In the experiments performed, the lysozyme dimer was injected into 10-day-old fertilized egg at concentrations of 10.0, 1.0, 0.1, 0.01 and 0.001 mg / ml. A strain of Sendai virus (with haemagglutination titer = 1: 128 HA) was added at each dimer concentration in an amount of two haemagglutination units.

Tabelul 1.Table 1.

Teste de citotoxicitate a monomerului şi dimerului de lisozinăCytotoxicity tests of lysozyme monomer and dimer

Tip de Concentraţie preparare mg/ml După 24 h După 3 zile După 5 zile După 7 zile Control 0 0 0 Lisozimă MONOMER 1,0 2 2 3 3 0,1 1 2 3 3 0,01 0 2 2 2 0,001 0 0 0 0 0,0001 0 0 0 0 Lisozimă DIMER 1,0 0 0 0 0 0,1 0 0 0 0 0,01 0 0 0 0 0,001 0 0 0 0 0,0001 0 0 0 0Type of Mixture Concentration mg / ml After 24 h After 3 days After 5 days After 7 days Control 0 0 0 Lysozyme MONOMER 1.0 2 2 3 3 0.1 1 2 3 3 0.01 0 2 2 2 0.001 0 0 0 0 0.0001 0 0 0 0 Lysozyme DIMER 1.0 0 0 0 0 0.1 0 0 0 0 0.01 0 0 0 0 0.001 0 0 0 0 0.0001 0 0 0 0

Testele au fost repetate de 3 ori pe o cultură de fibroblaste de rinichi de maimuţă verde 0 - citotoxicitate = 0%; 1 - citotoxicitate = 25%; 2 - citotoxicitate = 50%; 3 - citotoxicitate =75%; 4 - citotoxicitate =100%. 7 110037 8The tests were repeated 3 times on a culture of green monkey kidney fibroblasts 0 - cytotoxicity = 0%; 1 - cytotoxicity = 25%; 2 - cytotoxicity = 50%; 3 - cytotoxicity = 75%; 4 - cytotoxicity = 100%. 7 110037 8

Tabelul 2.Table 2.

Teste de ciîotoxidtate a ribonucleazei pancreatice A monomer şi dimerCiotoxide tests of pancreatic A monomer and dimer ribonuclease

Tip de Concentraţie După După După După preparare mg/ml 24 h 3 zile 5 zile 7 zile Control 0 0 0 0 Ribonuclează 1,0 1 2 4 4 pancreatică 0,1 0 1 3 4 MONOMER 0,01 0 0 3 4 0,001 0 0 2 3 0,0001 0 1 1 2 Ribonuclează 1,0 0 0 0 0 pancreatică 0,1 0 0 0 0 DIMER 0,01 0 0 0 0 0,001 0 0 0 0Type of Concentration After After After Preparation mg / ml 24 h 3 days 5 days 7 days Control 0 0 0 0 Ribonuclease 1.0 1 2 4 4 pancreatic 0.1 0 1 3 4 MONOMER 0.01 0 0 3 4 0.001 0 0 2 3 0.0001 0 1 1 2 Ribonuclease 1.0 0 0 0 0 pancreatic 0.1 0 0 0 0 DIMER 0.01 0 0 0 0 0.001 0 0 0 0

Testele au fost repetate de 3 ori, pe o cultură de fibroblaste de rinichi de maimuţă verde. 0 - citotoxicitate = 0%; 1 - citotoxicitate =25%; 2 - citotoxicitate =50%; 3 - citotoxicitate =75%; 4 - citotoxicitate = 100%.The tests were repeated 3 times on a culture of green monkey kidney fibroblasts. 0 - cytotoxicity = 0%; 1 - cytotoxicity = 25%; 2 - cytotoxicity = 50%; 3 - cytotoxicity = 75%; 4 - cytotoxicity = 100%.

După administrarea dimerului lisozimei şi a virusului, ouăle au fost supuse incubării timp de 72 h la 37 °C. După perioada de incubaţie, s-au colectat lichidele amniotic şi alantoic din ouăle infectate şi s-au supus unui test de hemaglutinare, cu ajutorul micrometodelor, cu utilizarea unui set Takatsy şi a unor corpusculi de sânge de găină. Experienţele au fost apoi 30 repetate. Rezultatele obţinute în aceste încercări experimentale sunt prezentate în tabelul 3. După cum se poate observa din tabelul 3, dimerul lisozimei a inhibat replicarea 35 virusului Sendai, cultivat în ouăle de găină fertilizate cu o vechime de 10 zile, chiar la concentraţii de numai 0,01 mg/ml.Following administration of the lysozyme dimer and virus, the eggs were incubated for 72 hours at 37 ° C. After the incubation period, the amniotic and allantoic fluids from the infected eggs were collected and subjected to a haemagglutination test using micromethods using a Takatsy kit and hen blood corpuscles. Experiences were then repeated 30 times. The results obtained in these experimental experiments are shown in Table 3. As can be seen from Table 3, the lisosime dimer inhibited Sendai virus replication, cultivated in 10 days old fertilized hen eggs even at concentrations of only 0, 01 mg / ml.

Tabelul 3Table 3

Efectul dimerului lisozimei asupra tulpinei de virus SendaiThe effect of the lysozyme dimer on the Sendai virus strain

Concentraţia dime- Inhibarea hemaglutinării/test de hemaglutinare rului lisozimei pe celule de sânge roşu de găină, conform metodei Takatsy în mg/ml Septembrie 1987 Noiembrie 1987 10,0 + + + neinvestigat 1,0 + + + + + + 0,1 + + + + + + 0,01 + + + + + + 0,001 + + nu inhibă 110037 9 + + +- inhibare completă, 1 : 256; + + - inhibare limitată, 1 : 32.Hemagglutination inhibition / haemagglutination test for lysozyme in red blood cells according to the Takatsy method in mg / ml September 1987 November 1987 10.0 + + + uninvestigated 1.0 + + + + + + 0.1 + + + + + + 0.01 + + + + + 0.001 + + does not inhibit 110037 9 + + + - complete inhibition, 1: 256; + + - limited inhibition, 1: 32.

Testele s-au efectuat pe tulpina de virus Sendai. Titrul de hemaglutinare viral a 5 fost de 1 : 128 HA. Ca model experimental s-au folosit ouăle de găină fertilizate de 10 zile.The tests were performed on the Sendai virus strain. Viral haemagglutination titer of 5 was 1: 128 HA. Experimental model used fertilized hen eggs for 10 days.

La fiecare concentraţie de dimer de lisozimă, s-a adăugat o cantitate identică de 2 unităţi de hemaglutinare de virus Sendai. In acelaşi timp, 10 s-a efectuat şi un test de control cu dimer de lisozimă, pentru a constata dacă acesta are proprietăţi de hemaglutinare; rezultatele au fost negative. După aceea, au fost utilizate concentraţiile consecutive de dimer al lisozimei 15 plus 22 unităţi HA de virus, pentru a infecta intraamniotic 4 ouă de găină. Ouăle s-au supus incubaţiei timp de 72 h la 37°C. După perioada de incubaţie, fluidele amniotic şi alantoic s-au colectat din ouăle infectate. S-a 20 efectuat un test de hemaglutinare (micrometoda hemaglutinării), cu utilizarea setului/testului Takatsy şi a celulelor de sânge roşu de găină.At each lysozyme dimer concentration, an identical amount of Sendai hemagglutination units was added. At the same time, 10 a lysozyme dimer control test was performed to determine whether it had hemagglutinating properties; the results were negative. Thereafter, the consecutive dimers of lysozyme 15 plus 22 HA units of virus were used to infect 4 intramuscularly eggs of hen. The eggs were incubated for 72 hours at 37 ° C. After the incubation period, amniotic and allantoic fluids were collected from the infected eggs. A haemagglutination test (micromethod haemagglutination) was performed using the Takatsy test kit and the red blood cells of the hen.

Exemplul 3. Au fost verificate efectele formelor dimere ale lisozimei şi ale 25 ribonucleazei pancreatice A asupra bacteriilor, pe câteva tulpini patogenice, colectate de la vaci cu mastită. In tabelul 4, se prezintă efectul diferitelor concentraţii de dimer de lisozimă pe trei tulpini (Streptococcus agalac- 30 10 tiae, Streptococcus dysgalactiae şi S treptococ-cus liberis). Rezultatele acestor teste au dovedit că toate cele trei tulpini de Streptococcus sunt sensibile la activitatea dimerului lisozimei. Acest lucru a fost mai evident în cazul Streptococcus liberis, care a fost afectat de activitatea dimerului la o concentraţie de numai 1,25 mg/ml. Efectele bacteriostatice asupra altor tulpini de Streptococcus s-au observat la concentraţii începând de la aproximativ 10 mg/ml.Example 3 The effects of the dimeric forms of lisosome and 25 pancreatic ribonuclease A on the bacteria on several pathogenic strains collected from mastitis cows were verified. Table 4 shows the effect of different concentrations of lysozyme dimer on three strains (Streptococcus agalac 3010 thiae, Streptococcus dysgalactiae and S treptococcus liberis). The results of these tests have shown that all three strains of Streptococcus are susceptible to the activity of the lysozyme dimer. This was more evident in Streptococcus liberis, which was affected by dimer activity at a concentration of only 1.25 mg / ml. The bacteriostatic effects on other strains of Streptococcus were observed at concentrations starting at about 10 mg / ml.

In tabelul 5, sunt prezentate efectele dimerului ribonucleazei pancreatice A şi ale dimerilor lisozimei asupra tulpinilor de bacterii patogene, cultivate de la pacienţi umani. După cum se poate observa din tabel, dimerul ribonucleazei pancreatice A a fost cel mai eficace asupra tulpinilor de bacterii de Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli şi Proteus vulgaris, în special la concentraţii variind de la circa 5 la 10 mg/ml. S-a determinat că tulpinile de bacterii Staphylococcus şi Sterptococcus sunt sensibile la dimerul lisozimei, de asemenea la concentraţii de aproximativ 5 până la 10 mg/ml. Testele de sensibilitate au fost efectuate în concordanţă cu principiile internaţionale, general acceptate, recomandate de WHO.Table 5 shows the effects of the pancreatic A ribonuclease dimer and of the lysozyme dimer on pathogenic bacterial strains grown from human patients. As can be seen from the table, the pancreatic A ribonuclease dimer was most effective on bacterial strains of Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Proteus vulgaris, especially at concentrations ranging from about 5 to 10 mg / ml. Staphylococcus and Sterptococcus bacteria strains were determined to be sensitive to the lysozyme dimer, also at concentrations of about 5 to 10 mg / ml. Sensitivity tests were conducted in accordance with generally accepted international guidelines recommended by the WHO.

Tabelul 4. MIC - Concentraţia minimă inhibitoare de lisozimă DIMER Tulpinile bacteriene cultivate porovin din probe colectate de la vaci cu mastită.Table 4. MIC - Minimum inhibitory concentration of DIMER lysozyme The cultivated bacterial strains compare from samples collected from cows with mastitis.

Lisozimă DIMER; mg/mlLisosima DIMER; mg / ml

Tulpinile bacteriene 1,25 2,5 5,0 Streptococcus agalactiae + + + Streptococcus dysgalactiae + + + Streptococcus liberis - - - = neproliferarea bacteriilor = proliferarea bacteriilor n 110037 12 Tabelul 5. MIC - Concentraţia minimă inhibitoare de ribonuclează pancreatită A, DIMER mg/mlBacterial strains 1.25 2.5 5.0 Streptococcus agalactiae + + + Streptococcus dysgalactiae + + + Streptococcus liberis - - - = bacteria non-proliferation = bacterial proliferation n 110037 12 Table 5. MIC - Minimal inhibitory concentration of pancreatitis ribonuclease A, DIMER mg / ml

Tulpinile bacteriene cultivate provin din probe colectate de la pacienţiCultivated bacterial strains come from samples collected from patients

Ribonuclează pancreatită DIMER mg/ml Lisozimă DIMER mg/ml Tulpini bacteriene 2,5 5,0 10,1 20,0 2,5 5,0 10,0 20,0 Pseudomonas aeruginosa + + + + + Escherichia coli + + + + + + Proteus vulgaris + + . + + + + Staph. aureus /Tulpină standard 209/ + + + + 4- Staph. aureus 1 tulpină patogenică de la pacienţi + + + + + Staph. aureus tulpină MRSA nr. 11704 + + + + + + Staph. aureus tulpinĂ MRSA nr. 11708 + + + + + + Strept.pyogenes tulpină patogenică de la pacienţi + + + + + . _ - = neproliferarea bacteriei + = proliferarea bacteriei MSRA - Staphylococcus aureus rezistent la meticilină. 40Ribonucleate pancreatitis DIMER mg / ml Lysozyme DIMER mg / ml Bacterial strains 2.5 5.0 10.1 20.0 2.5 5.0 10.0 20.0 Pseudomonas aeruginosa + + + + + + Escherichia coli +++ + + Proteus vulgaris + +. + + + + Staph. aureus / Standard strain 209 / + + + + 4-Staph. aureus 1 pathogenic strain from patients + + + + + Staph. aureus strain MRSA no. 11704 + + + + + + Staph. aureus strain MRSA no. 11708 + + + + + + Strept.pyogenes pathogenic strain from patients + + + + +. _ - = non-proliferation of bacteria + = proliferation of bacteria MSRA - methicillin-resistant Staphylococcus aureus. 40

Exemplul 4. Efectul dimerului Iisozimei şi al dimerului ribonucleazei pancreatice A asupra proliferării liniilor celulare de K-562 Erythroleucemie a fost determinat prin aplicarea diferitelor concentraţii de dimeri la celulele din aceste linii. Rezultatele acestor teste sunt prezentate în tabelele 6 şi 7. Pe scurt, dimerul Iisozimei, la toate concentraţiile la care a fost folosit în 50 experimentări, a manifestat efecte citopatoge-nice puternice asupra celulelor de K-362. în plus, după cum se poate observa din tabelul 7, dimerul ribonucleazei pancreatice A a avut de asemenea un efect similar asupra liniei de celule eritroleucemice, dar numai la o concen traţie de 1,0 mg/ml.Example 4 Effect of Isomer Dimer and Pancreatic A ribonuclease dimer A on cell proliferation of K-562 Erythroleukemia was determined by applying different concentrations of dimers to the cells in these lines. The results of these tests are shown in Tables 6 and 7. In brief, the isozyme dimer at all concentrations in which it was used in 50 experiments showed strong cytopathic effects on K-362 cells. Additionally, as can be seen from Table 7, the pancreatic A ribonuclease dimer also had a similar effect on the erythrocele cell line but only at a concentration of 1.0 mg / ml.

Exemplul 5. S-a studiat efectul dimerului Iisozimei asupra mediului de otită purulentă la câini. Studiul s-a desfăşurat utili-45 zând 19 câini de diferite rase, cu forme variate ale bolii. Boala s-a caracterizat printr-un proces inflamatoriu, care în medie a durat 7 ... 14 zile, dar Intr-un caz, a durat 9 luni. La 7 dintre câinii testaţi, descărcarea purulentă din urechea inflamată s-a examinat pentru a identifica tulpinile de bacterii conţinute înainte de a se aplica tratamentul. Aceste probe de 55 cultivare au arătat prezenţa germenilor de Staphilococcus, de Blue pusbacillis, Pseudo-monas aeruginosa, Coccidia species şi diferite 110037 13 specii de bacili. Câinii îmbolnăviţi au manifestat diferite semne, că sufereau, cum ar fi scuturarea capetelor şi încercarea de a-şi atinge urechea infectată cu labele. In general, câinilor 5 le-a scăzut apetitul şi li s-a ridicat temperatura (39,2 ... 41,2°C). La 18 dintre câinii luaţi în studiu nu li s-a aplicat nici un tratament anterior cu mijloace farmaceutice. Unui câine, la care infecţia a persistat timp de 9 luni, i s- 10 au dat unele antibiotice, dar acestea nu au fost eficiente la tratarea stării sale. Câinii au fost trataţi cu o compoziţie conform prezentei invenţii, care a constat dintr-o soluţie de 20 mg dimer la lisozimă şi 15 14 25 ml sare fiziologică. Compoziţia s-a aplicat sub formă de picături, plasându-se câte 10 picături în urechea inflamată, de 4 sau 5 ori pe zi. După prima zi de tratament, s-a observat deja o îmbunătăţire simţitoare, câinii s-au simţit în aparenţă, mai confortabil, temperatura le-a scăzut şi au avut un apetit mai bun. Simptomele de inflamaţie purulentă au scăzut complet, între a treia şi a şasea zi de tratament. In cazul câinelui care fusese anterior tratat cu antibiotice, fără succes, timp de 9 luni, s-a reuşit cu succes vindecarea bolii după 10 zile. Astfel s-a demonstrat că dimerul lisozimei este eficient la tratarea otitei purulente la câini.Example 5 The effect of the isozyme dimer on the purulent otitis media in dogs was studied. The study was conducted using 45 puppies of 19 dogs of different breeds, with various forms of the disease. The disease was characterized by an inflammatory process that averaged 7 to 14 days, but in one case, it lasted 9 months. In 7 of the test dogs, purulent discharge from the inflamed ear was examined to identify strains of bacteria contained before the treatment was applied. These 55 cultures showed the presence of Staphylococcus spp., Blue pusbacillis, Pseudomonas aeruginosa, Coccidia species and various 110037 13 species of bacilli. The diseased dogs showed different signs that they were suffering, such as shaking heads and trying to reach their infected ear with their paws. Generally, dogs 5 have decreased their appetite and their temperature has risen (39.2 ... 41.2 ° C). 18 of the dogs studied did not receive any prior treatment with pharmaceutical agents. One dog, at which the infection persisted for 9 months, gave him some antibiotics, but they were not effective in treating his condition. The dogs were treated with a composition according to the present invention which consisted of a solution of 20 mg of dimer to lysozyme and 15 to 14 ml of physiological saline. The composition was applied as drops, placing 10 drops in the inflamed ear, 4 or 5 times a day. After the first day of treatment, there was already a noticeable improvement, the dogs felt more comfortable, the temperature had dropped and they had a better appetite. Symptoms of purulent inflammation decreased completely between the third and sixth day of treatment. In the case of a dog that had been previously treated with antibiotics, unsuccessfully for 9 months, the disease was successfully cured after 10 days. Thus, it has been shown that the lysozyme dimer is effective in treating purulent otitis in dogs.

Tabelul 6.Table 6.

Efectul dimerului lisozimei asupra proliferării liniilor celulare eritroleucemice K - 562.Effect of lysozyme dimer on proliferation of erythroceukemic cell lines K - 562.

Celulele liniei K-562 s-au utilizat la o concentraţie de 105 ml. Efectul a fost estimat după 24 h de cultură, la 37 °C şi cu o trecere de 5% C02.Cells of line K-562 were used at a concentration of 105 ml. The effect was estimated after 24 hours of culture at 37 ° C and with a 5% CO 2 passage.

Concentraţia dimerului lisozimei mg/ml Proliferarea celulelor K-562 în 24 h în cultură in vitro număr de celule procent celule moarte martor 190 000 2 ... 3% 1,0 liza celulelor 100% 0,1 107 000 95% 0,05 98 000 99%Lysozyme dimer concentration mg / ml K-562 cell proliferation in 24 h in vitro culture number of percent cells dead control cells 190 000 2 ... 3% 1.0 cell lysis 100% 0.1 107 000 95% 0.05 98 000 99%

Tabelul 7.Table 7.

Efectul dimerului ribonucleazei pancreatice A asupra proliferării liniilor celulare de eritroleucemie K-562.Effect of pancreatic ribonuclease A dimer on cell proliferation of erythro-leukemia cell lines K-562.

Celulele liniei K-562 s-au utilizat la o concentraţie de IO5 ml. Efectul a fost estimat după 24 h de cultură, la 37 °C şi cu un debit de 5% C02.The cells of line K-562 were used at a concentration of 10 ml. The effect was estimated after 24 h of culture at 37 ° C and with a 5% CO 2 flow rate.

Concentraţia dimerului Proliferarea celulelor de K-562 timp de ribonucleazei 24 h în cultură in vitro mg/ml număr de celule / procent de celule moarte martor 207 000 2 ... 5 1,0 68 000 74 0,1 140 000 14 0,05 150 000 7 110037 15Dimer concentration K-562 cell proliferation over ribonuclease 24 h in vitro culture mg / ml cell count / percent dead control cells 207 000 2 ... 5 1.0 68 000 74 0.1 140 000 14 0, 05 150 000 7 110037 15

Exemplul 6. S-a analizat efectul dimerului lisozimei asupra vacilor. In studiu, au fost întrebuinţate şase vaci cu mastită. Aceste vaci au prezentat semne de boală, cum ar fi creşterea temperaturii peste 40,5°C şi o poftă de mâncare redusă. In toate cele şase cazuri, tratamentul a început în a doua zi de boală. înainte de a se administra compoziţiile, s-au colectat probe de lapte, pentru examenul bacterian. S-a constatat că culturile conţin microbi, cum ar fi Staphylococcus şi Streptococcus agalactiae. S-a administrat, fiecărei vaci, dimer al lisozimei, injectat cu seringă, în zonele infectate, în doze de 40 mg în soluţie de 50 ml sare fiziologică, de două ori pe zi. S-a constatat că, numai după 24 h, temperatura corpului a redevenit normală şi le-a revenit apetitul. După trei zile, toate vacile supuse tratamentului nu mai aveau simptome de boală. De aceea, tratamentul a fost contrinuat numai până la patru zile, după care analiza laptelui a demonstrat că microbii patogeni, descoperiţi înainte de tratament, dispăruseră. In plus, nu s-au găsit schimbări la lapte, care să indice o mastită subclinică. Nici una din vacile tratate nu a prezentat o scădere a producţiei de lapte şi nu s-au observat zone deschise la mameloane. După 24 h de tratament cu dimerul lisozimei, în laptele vacilor tratate, nu s-au găsit substanţe blocante. Dispariţia rapidă a simptomelor bolii, precum şi păstrarea integrală a capacităţii de a da lapte, au indicat astfel că dimerul lizosimei, în compoziţiile conform prezentei invenţii, poate fi utilizat cu succes la tratarea mastitelor bovine.Example 6 The effect of the lysozyme dimer on cows was analyzed. In the study, six cows with mastitis were used. These cows showed signs of disease, such as temperature rise above 40.5 ° C and low appetite. In all six cases, treatment started on the second day of the disease. Prior to administering the compositions, milk samples were collected for the bacterial examination. Crops have been found to contain microbes such as Staphylococcus and Streptococcus agalactiae. Each of the cows, injected with syringe lysozyme dimer in the infected areas, was dosed at 40 mg in 50 ml physiological saline twice a day. It was found that only 24 hours later, body temperature returned to normal and their appetite recovered. Three days later, all the cows subjected to treatment no longer had symptoms of disease. Therefore, treatment was contracted for up to four days, after which the milk analysis showed that the pathogenic microbes, discovered before treatment, had disappeared. In addition, there were no milk changes indicating a subclinical mastitis. None of the cows treated showed a decrease in milk production and no open areas were seen in the nipples. After 24 hours of lysozyme dimer treatment, no blocking agents were found in the treated cow's milk. The rapid disappearance of the symptoms of the disease as well as the full retention of the ability to give milk have shown that the lysosime dimer in the compositions of the present invention can be successfully used to treat bovine mastitis.

Exemplul 7. Infecţia cu parvovirusul canin (CPV) s-a tratat prin administrarea dimerului de lisozimă. La 27 câini, de diferite rase şi greutăţi, în vârstă de la 3 luni la 6 ani, medicii veterinari au constatat un simptom complex, tipic pentru infecţia cu parvovirus. Toate animalele, care au fost testate, au avut temperaturi ridicate (40 ... 41,6°C), stări de paroxism frecvente şi vomitări grave, scaune numeroase şi caracteristice de diaree fetidă, precum şi simptom de deshidratare şi de apatie. Animalele au produs de asemenea impresia de suferinţă intensă. Tratamentul a început în medie, între a treia şi a cincea zi de infecţie, în funcţie de cât de repede stăpânul animalului a adus bolnavul la postul veterinar. 16 Câinilor infectaţi li s-a dat dimer de lisozimă, într-o doză de 1 ... 2 mg pe kg greutate corporală, de două ori pe zi. Animalelor, care mai erau încă capabile să bea, li s-a administrat dimerul lisozimei în apă potabilă. Animalelor incapabile să bea, li s-a dat un preparat sub forma unei probe în soluţie de sare fiziologică.Example 7. Canine parvovirus infection (CPV) was treated by administering the lysozyme dimer. In 27 dogs of different breeds and weights, aged 3 months to 6 years, veterinarians found a complex symptom typical of parvovirus infection. All animals that were tested had high temperatures (40 ... 41.6 ° C), frequent paroxysmal states and severe vomiting, numerous and characteristic feathered diarrhea, as well as symptoms of dehydration and apathy. Animals also have the impression of intense suffering. Treatment began on average between the third and fifth day of infection, depending on how quickly the animal's master brought the patient to the veterinary post. 16 Infected dogs were given lysozyme dimer at a dose of 1 ... 2 mg per kg body weight twice a day. The animals, still able to drink, were given the lysozyme dimer in drinking water. Animals unable to drink were given a preparation as a sample in physiological salt solution.

Din cei 27 de câini supuşi tratamentului, 25 de câini şi-au recăpătat în întregime starea fizică normală, după 3 ... 5 zile de tratament. Ca o manifestare tipică este faptul că încă din prima zi s-a observat o scădere remarcabilă a numărului de scaune şi de vomitări şi la majoritatea câinilor, aceste simptiome au dispărut total, după două zile de tratament. La puţini câini, aceste simptome au dispărut chiar după prima doză de preparat. Nu s-au constatat efecte secundare, legate de administrarea compoziţiilor cu diametrul lisozimei la nici un animal. Aceste teste clinice arată că se pot folosi cu succes compoziţiile cu dimerul lisozimei, conform invenţiei, la câini infectaţi cu parvovirus.Of the 27 dogs treated, 25 dogs recovered their normal physical condition after 3 to 5 days of treatment. As a typical manifestation is that from the first day a remarkable decrease in the number of stools and vomitings was observed and in most dogs these symptoms disappeared altogether after two days of treatment. In few dogs, these symptoms disappeared right after the first dose. There were no side effects related to the administration of lysozyme diameter compositions to any animal. These clinical trials show that the lysozyme dimer compositions of the invention can be successfully used in dogs infected with parvovirus.

Exemplul 8. S-au examinat efectele compoziţiilor cu dimerul lisozimei, conform prezentei invenţii, asupra anumitor boli dermatologice, la fiinţele umane. Testele s-au efectuat pe câteva duzini de pacienţi umani, având vârsta între 15 şi 35 ani, care sufereau de diferite boli de piele, ce fuseseră tratate anterior, fără succes, prin metodele convenţionale. In acest grup, au fost identificate următoarele boli: furunculoză cronică - 2 cazuri, sicozisul tricofitic al bărbii - un caz, impetigo contagios -11 cazuri, acnee vulgară - 22 de cazuri, acnee rozacee - 6 cazuri şi ulcer varicos - 12 cazuri. La unii din pacienţii din acest grup, tratamentul a fost precedat de teste de cultură bacteriologică. In majoritatea vazurilor, din materialele colectate, s-a cultivat Staphylococcus aureus. Tratamentul a constat în administrarea de patru ori pe zi a unui unguent care conţine 4 mg dimer al lisozimei. Compoziţia preferată în mod special a acestui unguent este următoarea: 4,0 mg dimer al lisozimei, 25,0 mg alcool acetilsteariloxi, 10,0 mg parafină lichidă, 5,0 mg Spân 60, 8,0 mg Tween 60, 10,0 mg propilenglicol, 0,3 mg aseptină M, 0,16 mg aseptină P şi apă distilată până se ajunge la un volum de 200,0 ml. 110037 17Example 8 The effects of lysozyme dimer compositions of the present invention on certain dermatological diseases in human beings were examined. The tests were conducted on several dozen human patients aged between 15 and 35 years who were suffering from various skin conditions previously treated, unsuccessfully, by conventional methods. In this group, the following diseases were identified: chronic furunculosis - 2 cases, trichophytic chick sicosis - one case, contagious impetigo - 11 cases, vulgar acne - 22 cases, rosacea - 6 cases and varicose ulcer - 12 cases. In some patients in this group, treatment was preceded by bacteriological culture tests. In most poles, Staphylococcus aureus was harvested from the collected materials. The treatment consisted of four times daily administration of an ointment containing 4 mg of lysozyme dimer. The particularly preferred composition of this ointment is the following: 4.0 mg lysozyme dimer, 25.0 mg acetyl stearyloxy alcohol, 10.0 mg liquid paraffin, 5.0 mg Spin 60, 8.0 mg Tween 60, 10.0 mg of propylene glycol, 0.3 mg of asepine M, 0.16 mg of aseptic P and distilled water to a volume of 200.0 ml. 110037 17

La toţi pacienţii, diferitele stări ale pielii au dispărut în decurs de 10 ... 12 zile şi în unele cazuri, s-a observat curăţirea pielii după 3 zile. In cazul pacienţilor cu furunculoză cronică, tratamentul a durat până la 4 ... 5 săptămâni, iar la cei cu ulcer varicos, în general, au fost necesare 2 ... 12 săptămâni, pentru refacere, în funcţie de cât de gravă a fost starea pielii şi de când era persoana de bolnavă înainte de tratament. Rezultatele obţinute în acest studiu sugerează că dimerul lisozimei poate fi utilizat cu succes pentru o serie de boli de piele.In all patients, the various skin conditions disappeared within 10-12 days and in some cases skin cleansing was observed after 3 days. In patients with chronic furunculosis, the treatment lasted up to 4-5 weeks, and in those with varicose ulcer, generally 2 to 12 weeks were required for recovery, depending on how severe it was the condition of the skin and since the person was ill before treatment. The results obtained in this study suggest that the lysozyme dimer can be successfully used for a number of skin diseases.

Exemplul 9. S-au tratat diferite boli infecţioase ale regiunii genitale, folosind o compoziţie cu dimer al lisozimei, conform prezentei invenţii. Nouă femei, având vârsta între 25 şi 49 ani, au fost tratate în aceste teste, şapte paciente având vaginită cronică, o pacientă abces Douglas şi una bartholinită. Pacientelor cu vaginită cronică li s-au dat supozitoare intravaginale conţinând 10 mg dimer de lisozimă în 2 cmc de bază hidrofilă. Supozitoarele s-au administrat de 2 ori pe zi, timp de 7 zile. La toate pacientele, s-a observat o dispariţie totală a inflamaţiei zonei genitale. In plus, au dispărut totodată leucoreea şi alte simptome. Pacientei cu abcesul Douglas i s-au dat 20 mg dimer de lisozimă în 5 ml soluţie 0,9% de NaCl, de 2 ori pe zi, într-o perioadă de 4 zile. Soluţia s-a aplicat direct pe cavitatea Douglas. înaintea fiecărei administrări de dimer de lisozimă, s-a scos conţinutul purulent din cavitatea Douglas. Aceste culturi au indicat prezenţa streptococului hemolitic şi a bacteriei E.coli. Temperatura anormal de ridicată a corpului pacientei s-a redus la valori normale în decurs de 24 h, după prima administrare a dimerului lisozimei şi simptomele de durere au încetat în acest interval de timp. In a patra zi, după a doua administrare a compoziţiei cu dimerul lisozimei, nu s-a mai găsit nimic în cavitatea Douglas. In acest caz, s-a produs o reapariţie a bolii, după trei săptămâni, dar administrându-se în cavitatea Douglas alte două doze de dimer al lisozimei, s-a putut ajunge ca procesul bolii să fie controlat.Example 9 Various infectious diseases of the genital region were treated using a lysozyme dimer composition of the present invention. Nine women, aged between 25 and 49, were treated in these trials, seven patients with chronic vaginitis, one patient with Douglas abscess and one bartholinitis. Patients with chronic vaginitis were given intravaginal suppositories containing 10 mg of lysozyme dimer in 2 cmc of hydrophilic base. Suppositories were administered twice daily for 7 days. In all patients, a complete disappearance of the genital area was observed. In addition, leucorrhea and other symptoms have also disappeared. The Douglas Abscess patient was given 20 mg of lysozyme dimer in 5 ml of 0.9% NaCl solution, 2 times a day, over a 4-day period. The solution was applied directly to the Douglas cavity. Prior to each administration of lysozyme dimer, purulent content was removed from the Douglas cavity. These cultures indicated the presence of hemolytic streptococci and E.coli bacteria. The abnormally high body temperature of the patient was reduced to normal within 24 hours after the first administration of the lysozyme dimer and the pain symptoms ceased during this time. On the fourth day, after the second administration of the lysozyme dimer composition, nothing was found in the Douglas cavity. In this case, a recurrence of the disease occurred, after three weeks, but in the Douglas cavity two more doses of the dimer of the lisosome, the disease process could be controlled.

Pacienta cu bartholinită s-a tratat cu o doză de 20 mg dimer de lisozimă în 1 cmc soluţie 0,9% de NaCl, care s-a administrat imediat în glanda ce supura, după aspirarea 18 conţinutului purulent al ei. După 4 zile, această pacientă s-a vindecat complet. Fiind supusă observaţiei încă timp de 4 luni, boala nu a mai reapărut. Aceste teste clinice arată că dimerul lisozimei are un efect terapeutic extrem de binefăcător, în cazul unor anumite boli infecţioase ale regiunii genitale la femei. In plus, reiese că va fi posibil să se trateze local abcesele prin administrarea dimerului lisozimei imediat în cavităţile cu conţinut purulent.The bartholinite patient was treated with a dose of 20 mg of lysozyme dimer in 1 cm 0.9% NaCl solution, which was immediately administered to the suppressing gland after suction 18 of its purulent content. After 4 days, this patient has completely healed. Being subject for observation for 4 months, the disease did not reappear. These clinical trials show that the lysozyme dimer has an extremely beneficial therapeutic effect for some infectious genital diseases in women. In addition, it appears that it will be possible to treat the abscesses locally by administering the lysozyme dimer immediately in purulent cavities.

Exemplul 10. S-a studiat efectul soluţiei cu dimer al lisozimei asupra rănilor infectate. S-a luat un grup de 4 pacienţi cu răni post-operatorii infectate; două femei după laparotomie, o femeie după amputarea degetului de la picior, datorită necrozei în cursul angiopatiei diabetice şi un bărbat, după amputarea extremităţii inferioare, datorită bolii lui Burger. In toate cazurile, aplicările de umiditate şi spălările cu o soluţie de 20 mg dimer al lisozimei în 5 ml soluţie 0,9% NaCl s-au efectuat de 4 ori pe zi. La pacientele cu răni ce supurau după laparotomie, vindecarea completă s-a produs după o perioadă de 4 şi 6 zile. La ceilalţi pacienţi, vindecarea s-a produs după 21 de zile şi respectiv după 5 luni. Aceste teste au arătat că dimerul lisozimei poate fi uzilizat ca mijloc terapeutic, fără efecte secundare, în tratamentul rănilor infectate post-operatorii.Example 10 The effect of the lysozyme dimer solution on the infected wounds was studied. A group of 4 patients with infected post-operative wounds was taken; two women after laparotomy, a woman after amputation of the toe due to necrosis during diabetic angiopathy and a man after amputation of the lower extremity due to Burger's disease. In all cases, moisture applications and washes with a solution of 20 mg of lysozyme dimer in 5 ml of 0.9% NaCl solution were performed 4 times a day. In patients with lethargy wounds, complete healing occurred after a period of 4 and 6 days. In the other patients, healing occurred after 21 days and 5 months respectively. These tests have shown that the lysozyme dimer can be used as a therapeutic agent without side effects in the treatment of post-operative infections.

Exemplul 11. S-au supus observaţiilor clinice, paciente cu herpes genital, tratate cu compoziţie de dimer al ribonucleazei A. In grupul supus studiului, au fost cuprinse 5 paciente, care erau femei între 23 şi 36 ani. La patru dintre ele, boala apăruse pentru prima oară, în timp ce la a cincea femeie, boala apărea pentru a treia oară. Toate pacientele erau în perioada de formare a băşicilor, care în mod normal are loc între a treia şi a cincea zi de la declanşarea bolii şi se plângeau de durere foarte puternică în regiunea perineală, în special în timpul urinării. La toate pacientele, s-a găsit umflarea şi infectarea labiei, precum şi numeroase pustule umplute cu un lichid tulbure pe membranele mucoasei labiale şi pe pielea exterioară a organului şi a regiunii anale. La toate pacientele, nodulii inghinali limfatici erau măriţi şi dureroşi.Example 11. Clinical observations, genital herpes patients treated with the ribonuclease A dimer composition were submitted. In the study group, 5 patients were enrolled, who were women between 23 and 36 years of age. In four of them, the disease first appeared, while in the fifth woman, the disease appeared for the third time. All patients were in the period of bladder formation, which normally takes place between the third and fifth days of the onset of the disease and complained of very severe pain in the perineal region, especially during urination. In all patients, swelling and infection of the labia was found, as well as numerous pustules filled with a cloudy fluid on the membranes of the labial mucosa and on the outer skin of the organ and anal region. In all patients, lymph nodes were enlarged and painful.

Tratamentul a constat din aplicarea unui unguent care conţine dimer al ribonu- 110037 19 cleazei A de patru sau cinci ori pe zi, în zonele cu pustule sau infectate, ale mucoasei membranelor. Unguentul aplicat a avut următoarea compoziţie: 4,0 mg dimer al ribonucleazei, 25,0 mg alcool acetilsteriloxi, 10.0 mg parafină lichidă, 5,0 mg Spân 60, 8,0 mg Tween 60,10,0 mg propilenglicol, 0,3 mg aseptină M, 0,16 mg aseptină P şi apă distilată într-o astfel de cantitate încât să ajungă la 200.0 ml. Pacientele cărora li s-a făcut tratamentul cu dimerul au relatat că, după câteva minute şi în cel mai rău caz, în decurs de o oră de la prima aplicare a unguentului, durerea s-a diminuat substanţial şi a dispărut total în următoarele 10 ... 20 h. Examenul fizic a demonstrat că, la patru dintre paciente, schimbările patologice au dispărut după trei zile de tratament. La cealaltă pacientă, stările patologice au fost eliminate total, după cinci zile. La nici una din aceste paciente, nu au mai apărut noi pustule după aplicarea unguentului care conţine dimerul ribonucleazei pancreatice A. Studiul de mai sus arată că unguentele conţinând dimerii din prezenta invenţie, pot fi utilizate cu succes la tratamentul herpesurilor genitale.The treatment consisted of the application of an ointment containing the ribonucleotide dimer of four times or five times a day in areas with pustules or infected membranes of the membranes. The ointment applied had the following composition: 4.0 mg of ribonuclease dimer, 25.0 mg of acetylsteriloxyl alcohol, 10.0 mg of liquid paraffin, 5.0 mg of 60, 8.0 mg of Tween 60.10.0 mg of propylene glycol, 0.3 mg of asepine M, 0.16 mg of asepine P and distilled water in an amount to reach 200.0 ml. The patients treated with dimer reported that after a few minutes and at worst within one hour of the first application of the ointment, the pain diminished substantially and disappeared altogether within the next 10 ... 20 h Physical examination showed that in four of the patients the pathological changes disappeared after three days of treatment. In the other patient, the pathological conditions were completely eliminated after five days. In none of these patients, new pustules occurred after application of the ointment containing the pancreatic A ribonuclease dimer. The above study shows that the dimer ointments of the present invention can be successfully used in the treatment of genital herpes.

Exemplul 12. Mai mult de 100 pacienţi au fost trataţi pentru herpesul labial, utilizând compoziţiile din prezenta invenţie, aceştia având diferite vârste. La toate pacientele, simptomele au inclus umflarea regiunii buzei superioare, înroşirea şi numeroase pustule umplute cu un fluid tulbure. Toate pacientele s-au plâns de durere în piele, în zonele afectate de boală şi în plus, ele au avut o senzaţie de tensiune în ţesăturii. Tratamentul a cuprins aplicarea locală, de patru până la cinci ori pe zi, a unui unguent conţinând dimerul ribonucleazei pancreatice A.Example 12 More than 100 patients were treated for the herbal herpes, using the compositions of the present invention, those of different ages. In all patients, the symptoms included swelling of the upper lip region, redness and numerous pustules filled with a cloudy fluid. All the patients complained of pain in the skin, in the areas affected by the disease and in addition they had a feeling of tension in the fabric. The treatment included local application, four to five times a day, of an ointment containing pancreatic A ribonuclease dimer.

Toate pacientele tratate, fără excepţie, au confirmat că durerea şi tensiunea din ţesuturi a dispărut repede. Totala dispariţie a durerii a avut loc în cursul următoarelor câteva ore, după cum s-a observat în cazurile de herpes genital. Examinările fizice au arătat că umflăturile şi pustulele au dispărut în 2...3 zile. In cazuri individuale, au fost necesare până la 5 zile, pentru restabilirea completă şi pentru ca întregul proces de însănătoşire să fie definitiv. De asemenea, s-a constatat că la pacientele al căror tratament a început din 20 prima zi de boală, bolile de piele, cum sunt umflarea, iritaţiile şi papulele au dispărut total după 24 h. O altă observaţie a fost aceea că, persoanele care au suferit frecvent de reapariţia acestei boli, au avut perioade prelungite între reapariţiile bolii şi că revenirea simptomelor a fost mai blândă de fiecare dată. In nici un caz, nu s-au observat efecte secundare.All patients treated, without exception, confirmed that pain and tension in the tissues quickly disappeared. The total disappearance of pain occurred within the next few hours, as has been seen in cases of genital herpes. Physical examinations showed that swellings and pustules disappeared within 2 to 3 days. In individual cases, it took up to 5 days for complete restoration and for the whole recovery process to be complete. It was also found that in patients whose treatment started on the first day of the disease, skin diseases, such as swelling, irritation and papules, disappeared altogether after 24 hours. Another observation was that people who had suffered frequent recurrence of this disease, had prolonged periods between the recurrences of the disease and that the return of the symptoms was milder every time. Under no circumstances were side effects observed.

Exemplul 13. S-au efectuat cercetări clinice asupra a 6 pacienţi cu herpesuri de zona zoster, care au fost trataţi cu o compoziţie de dimer conform prezentei invenţii. In 5 cazuri, boala a evoluat într-o manieră tipică, iar în al şaselea caz, a avut complicaţii speciale, care vor fi discutate în continuare. Aceşti pacienţi au fost trataţi cu un unguent conţinând dimerul ribonucleazei pancreatice A şi tratamentul s-a început în a treia sau a patra zi de la declanşarea bolii. Unguentul a fost aplicat de 4...5 ori pe zi.Example 13 Clinical investigations were performed on six shingles herpes patients treated with a dimer composition of the present invention. In 5 cases, the disease evolved in a typical manner, and in the sixth case, it had special complications, which will be discussed further. These patients were treated with an ointment containing the pancreatic A ribonuclease dimer and the treatment started on the third or fourth day after the onset of the disease. The ointment was applied 4 ... 5 times a day.

In toate cazurile, durerea a dispărut total în interval de 24...48 h. S-a observat că pustulele s-au uscat complet după 3...4 zile şi pe această bază, s-a decis ca tratamentul să fie terminat. In următoarele câteva zile, aspectul pielii s-a refăcut complet. La nici unul dintre pacienţi, durerea nu a persistat după primele 24...48 h, iar iritarea pielii nu a reapărut la trei pacienţi, care au rămas sub observaţie mai mult de un an. La un pacient, aşa cum s-a arătat mai sus, s-a produs o dezvoltare neobişnuită a bolii, din punct de vedere clinic. O femeie în vârstă de 42 ani, care fusese tratată de cancer pulmonar, utilizându-se cobaltoterapia, avea sistemul imunologic serios redus. Pe lângă simptomele obişnuite ale herpesurilor de zona zoster, s-a constatat şi o împrăştiere a pustulelor pe întregul corp. Tratamentul utilizând compoziţia cu dimerul ribonucleazei din prezenta invenţie, a fost complet eficient la această pacientă cu imunitatea micşorată, femeia prezentând completa dispariţie a pustulelor după câteva zile. Rezultatele cu deplin succes, de la această pacientă, precum şi de la ceilalţi membri ai grupului testat, au demonstrat eficacitatea dimerului ribonucleazei pancreatice A împotriva herpesurilor zoster, cauzate de virusurile Varicella.In all cases, the pain completely disappeared within 24-48 hours. It was observed that the pustules were completely dried after 3 to 4 days and on this basis it was decided to complete the treatment. In the next few days, the appearance of the skin has completely recovered. In none of the patients, the pain persisted after the first 24-48 hours and the skin irritation did not reappear in three patients who remained under observation for more than one year. In one patient, as shown above, there has been an unusual development of the disease from a clinical point of view. A 42-year-old woman who had been treated with lung cancer using cobalt therapy had the immune system seriously reduced. In addition to the common symptoms of herpes zoster, there has been a spread of pustules all over the body. The treatment using the ribonuclease dimer composition of the present invention was fully effective in this patient with reduced immunity, the woman showing complete disappearance of the pustules after a few days. The results with complete success from this patient, as well as from the other members of the group tested, demonstrated the efficacy of pancreatic A ribonuclease dimer against herpes zoster caused by Varicella viruses.

Claims

An antiviral or antibacterial composition, characterized in that as an active ingredient contains 0.001 ... 20.0 mg / ml of the dimeric form of an enzyme, preferably selected from the lysozyme dimer and the ribonuclease dimer, and a carrier pharmaceutically acceptable.

Composition according to claim 1, characterized in that the dimer is the dimer of pancreatic A ribonuclease.

Composition according to Claim 1, characterized in that the pharmaceutically acceptable carrier is a hydrophilic base, preferably a physiologically acceptable saline solution, in particular a solution of 0.5 ... 1.5% of NaCl. 22

A composition according to claim 1, wherein the dimer is at a concentration of 0.02 mg / ml, and the pharmaceutically acceptable carrier is an ointment, preferably containing water, paraffin and propylene glycol.

The composition of claim 1, wherein the dimer is at a concentration of 0.8 mg / ml in 5 mg / ml saline.

Method of treating infections with antiviral or antibacterial compositions according to any one of claims 1 to 5, characterized in that they are administered internally or externally in a dose comprised between 0.01 and 50.0 mg / kg body, preferably 1.0 to 2.0 mg / kg body weight. Chairman of the Invention Commission: Farm. Pentelescu Elena Examiner: biochim. Creţu Adina Group 4 Price lei 1-8oc Computerized editing and editing - OSIM Printed at: "Autonomi Societatea Informatica SAT SRL