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PT832065E - N-(indole-2-carbonil)-glicinamidas e seus derivados como agentes antidiabeticos - Google Patents

N-(indole-2-carbonil)-glicinamidas e seus derivados como agentes antidiabeticos Download PDF

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PT832065E
PT832065E PT95918717T PT95918717T PT832065E PT 832065 E PT832065 E PT 832065E PT 95918717 T PT95918717 T PT 95918717T PT 95918717 T PT95918717 T PT 95918717T PT 832065 E PT832065 E PT 832065E
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PT
Portugal
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alkyl
chloro
mono
amino
indole
Prior art date
Application number
PT95918717T
Other languages
English (en)
Inventor
Judith L Treadway
William H Martin
Bernard Hulin
Dennis J Hoover
Douglas Phillips
Original Assignee
Pfizer
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Publication date
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Description

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DESCRIÇÃO "N-(INDOLE-2-CARBONIL)-GLICINAMIDAS E SEUS DERIVADOS COMO AGENTES ANTIDIABÉTICOS"
Antecedentes do Invento 0 presente invento refere-se a inibidores de fosforilase de glicogénio, a composições farmacêuticas que contêm os mesmos e à utilização destes inibidores para tratar os diabetes, hiperglicemia, hipercolesterolemia, hipertensão, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerose e isquemia do miocárdio, em mamíferos.
Apesar da recente de descoberta da insulina e da subsequente utilização alargada da mesma no tratamento da diabetes, e da última descoberta de e utilização das sulfonilureias (por exemplo Chlorpropamide™ (Pfizer), Tolbutamide™ (Upjohn), Acetohexamide™ (E.I. Lilly), Tolazamide™ (Upjohn) e biguanidas (por exemplo Phenformin (Ciba Geigy), Metformin (G. D. Searle)) como agentes hipoglicémicos orais, o tratamento dos diabetes continua pouco satisfatório. A utilização de insulina, necessariamente em cerca de 10% dos doentes diabéticos, nos quais os agentes hipoglicémicos sintéticos não são eficazes (diabetes do Tipo I, diabetes mellitus dependente da insulina), requer a administração de doses diárias múltiplas, normalmente por auto-injecção. A determinação da dosagem adequada de insulina requer cálculos frequentes do açúcar na urina ou no sangue. A administração de uma dose em excesso de insulina provoca hipoglicémia, com efeitos que vão desde anormalidades suaves na glicose do sangue até ao coma, ou mesmo morte. O tratamento da diabetes -2- -2-
ί mellitus não dependente da insulina (diabetes Tipo Π, NIDDM) consiste normalmente numa combinação de dieta, exercício, agentes orais, por exemplo sulfonilureias, e em muitos casos, insulina. Contudo, os hipoglicémicos disponíveis clinicamente podem ter outros efeitos lateriais que limitam a sua utilização. Em qualquer caso, onde um destes agentes pode falhar num caso individual, um outro pode ter sucesso. A necessidade contínua de agentes hipoglicémicos que apresentem menores efeitos secundários, ou que apresentem sucesso onde outros falharam, é claramente evidente. A aterosclerose, uma doença das artérias, é reconhecida como sendo a principal causa de morte nos Estados Unidos da América e na Europa Ocidental. A sequência patológica que conduz à aterosclerose e à doença cardíaca oclusiva é bem conhecida. O estádio mais recente nesta sequência é a formação de “camadas de gordura” na carótida, artérias coronárias e cerebrais e na aorta. Estas lesões apresentam uma cor amarela devido à presença de depósitos de lípidos encontrados principalmente nas células dos músculos lisos e em macrógrafos da camada mais interior das artérias e aorta. Além disso, é pressuposto que a maioria do colesterol encontrado dentro das camadas de gordura dá, por sua vez, origem ao desenvolvimento da “placa fibrosa”, que consiste em células de músculos lisos interior acumuladas carregadas de lípidos e envolvidas por lípidos extra-celulares, colagénio, elastina e proteoglicanos. As células mais a matriz formam uma tampa fibrosa que cobre um depósito mais profundo de deteritos de células e lípidos mais extra-celulares. O lípido é principalmente colesterol livre e esterificado. A placa fibrosa forma-se lentamente e é provável que com o tempo se torne calcificada e necrótica, avançando para a “lesão complicada” que é responsável pela oclusão arterial e pela tendência para a trombose mural (também conhecida por trombose lateral) e espasmo do músculo arterial que caracteriza a aterosclerose avançada. -3-
Evidências epidemiológicas confirmaram firmemenlc a liiperlipi-demia como um factor de risco principal na origem da doença cardiovascular (DCV) devido à aterosclerose. Nos últimos anos, leaderes da profissão médica voltaram a dar ênfase ao abaixamento dos níveis de colesterol no plasma, e no colesterol de lipoproteína de baixa densidade em particular, como uma etapa essencial na prevenção da DCV. Os limites superiores de “normal” são agora conhecidos como sendo significativamente mais baixos que anteriormente. Como resultado, grandes segmentos da população ocidental são agora considerados como de risco particularmente elevado. Estes factores de risco independentes podem ser a intolerância à glicose, hipertrofia ventricular, hipertensão e o facto de se ser do sexo masculino. A doença cardiovascular é especialmente predominante entre os indivíduos diabéticos, pelo menos em parte devido à existência de factores de risco independentes múltiplos nesta população. O tratamento bem sucessido da hiperlipidemia na população em geral, e nos indivíduos diabéticos em particular, é por isso de importância médica excepcional. A hipertensão (ou a pressão sanguínea elevada) é um estado que ocorre na população humana como um sintoma secundário de várias outras perturbações, tais como estenose arterial renal, feocromocitoma ou perturbações endócrinas. Contudo, a hipertensão é também uma evidência em muitos doentes nos quais o agente causador ou perturbador não é conhecido. Embora esta hipertensão “essencial” esteja frequentemente associada a perturbações tais como a obesidade, diabetes e hipertrigliceridemia, a relação entre estas perturbações não foi ainda esclarecida. Além disso, muitos doentes apresentam os sintomas de pressão sanguínea elevada com a completa ausência de outros sinais de doença ou perturbação. É sabido que a hipertensão pode conduzir directamente ao colapso ,/·«» -4- ,/·«» -4- *!·'» θ'* /* . *·*· r « V*· 1' < cardíaco, colapso renal e apoplexia (hemorragia cerebral). Estas doenças são capazes de causar a morte a curto prazo num doente. A hipertensão pode também contribuir para o desenvolvimento da aterosclerose e doença coronária. Estas doenças enfraquecem gradualmente um doente e podem conduzir à morte a longo prazo. A causa principal e exacta da hipertensão é desconhecida, se bem que há uma série de factores que se acredita contribuírem para o início da doença. Entre tais factores encontram-se o “stress, emoções descontroladas, libertação irregular de hormonas (a renina, a angiotensina e o sistema de aldosterona), excesso de sal e água devido ao mau funcionamento do rim, aumento da espessura das paredes e hipertrofia do sistema vascular que resulta em vasos sanguíneos constringidos e factores genéticos. O tratamento da hipertensão essencial tem sido realizado levando em consideração os factores atrás mencionados. Deste modo, desenvolveram-se uma ampla gama de beta-bloqueadores, vasoconstrictores, inibidores da enzima conversora de angiotensina e similares, os quais foram referenciados como anti-hipertensivos. O tratamento da hipertensão através da utilização destes compostos mostrou-se benéfica na prevenção das mortes de curto prazo, tais como colapso cardíaco, colapso renal e hemorragia cerebral. Contudo, o desenvolvimento da aterosclerose ou doença cardíaca devido à hipertensão durante períodos de tempo prolongados continua a ser um problema. Isto implica que, embora a pressão sanguínea elevada seja reduzida, a causa que está na origem da hipertensão essencial não reage a este tratamento. A hipertensão foi associada a níveis elevados de insulina no sangue, uma doença conhecida como hiperinsulinemia. A insulina, uma hormona de peptídeo cujas funções principais consistem em promover a utilização da -5-
glicose, a síntese das proteínas e a formação e armazenagem de lípidos neutros, também funciona no sentido de promover o crescimento da células vasculares e de aumentar a retenção de sódio renal, entre outras acções. Estas últimas funções podem ser efectuadas sem afectar os níveis de glicose e são causas conhecidas da hipertensão. O crescimento do sistema vascular periférico, por exemplo, pode provocar a constricção dos capilares periféricos; ao mesmo tempo, a retenção de sódio aumenta o volume sanguíneo. Deste modo, o abaixamento dos níveis de insulina nos hiperinsulinémicos pode evitar o crescimento vascular anormal e a retenção de sódio provocada pelos elevados níveis de insulina e desta forma aliviar a hipertensão. A hipertrofia cardíaca é um factor de risco significativo para o desenvolvimento da morte súbita, infecção do miocárdio e colapso cardíaco congestivo. Estes acidentes cardíacos são devidos, pelo memos em parte, ao aumento da susceptibilidade a danos do miocárdio após isquemia e reperfusão, os quais podem ocorrer em doentes externos, bem como em restabelecimentos perioperatórios. Existe uma necessidade médica ainda não obtida de evitar ou minimizar as consequências adversas perioperatórias do miocárdio, em especial o enfarte do miocárdio perioperatório. A cirurgia não cardíaca e cardíaca está associada aos riscos de enfarte do miocárdio e de morte. Cerca de 7 milhões de doentes submetidos a cirurgia não cardíaca são considerados como estando em risco, com incidências de mortes perioperatórias e complicações cardíacas graves tão elevadas como 20-25% em algumas séries. Além disso, dos 400.000 doentes submetidos anualmente a cirurgia de "by-pass" coronário, estima-se que o enfarte do miocárdio perioperatório ocorre em cerca de 5% e a morte em cerca de 1-2%. Não há correntemente terapia de drogas nesta área que reduza os danos nos tecidos cardíacos resultantes de isquemia do miocárdio perioperatório ou que aumente a resistência cardíaca aos acidentes isquémicos. Uma tal terapia é antecipada como sendo salvadora de vidas e diminuidora de hospitalizações, .Ό -6-
aumentadora da qualidade de vida e redutora dos custos com cuidados de saúde dos doentes de alto risco.
A produção de glicose hepática é um objectivo importante para a terapia NIDDM. O fígado é o principal regulador dos níveis de glicose no plasma no estado pós absorvente (jejum), e a taxa de produção de glicose hepática em doentes NIDDM é significativamente elevada em relação aos indivíduos normais. Igualmente, no estado pós-prandial (alimentado), situação em que o fígado tem um papel proporcionalmente mais pequeno no fornecimento total de glicose de plasma, a produção de glicose hepática é anormalmente elevada em doentes NIDDM.
A glicogenólise é um objectivo importante para a interrupção da produção de glicose hepática. O fígado produz glicose por glicogenólise (colapso do glicogénio do polímero de glicose) e gliconeogenese (síntese de glicose a partir de percursores 2- e 3-carbono). Várias linhas de evidência indicam que a glicogenólise pode dar uma contribuição importante para a produção de glicose hepática em NIDDM. Em primeiro lugar, no ser humano pós-absorvente normal, cerca de 75% da produção de glicose hepática é estimada resultar da glicogenólise. Em segundo lugar, os doentes com doenças de armazenagem de glicogénio de fígado, incluindo doença de Hers (deficiência de fosforilase de glicogénio), revelam hipoglicémia episódica. Estas observações sugerem que a glicogenólise pode ser um processo importante para a produção de glicose hepática. A glicogenólise é catalisada no fígado, músculo e cérebro por isoformas específicas dos tecidos da enzima fosforilase de glicogénio. Esta enzima parte a macromolécula de glicogénio para libertar a glicose-1-fosfato e uma nova macromolécula de glicogénio mais curta. Até à data foram referidos -7-
dois tipos de inibidores da fosforilase de glicogénio: glicose e análogos de glicose [Martin, J.L. et al. Biochemistrv 1991, 30, 10101] e cafeína e outros análogos de purina [Kasvinsky, P.J. et al. J. Biol. Chem. 1978,253, 3343-3351 e 9102-9106]. Estes compostos e os inibidores de fosforilase de glicogénio em geral foram postulados como tendo utilização potencial para o tratamento de NIDDM por diminuição da produção de glicose hepática e por abaixamento da glicémia. [ Blundell, T.B. et al. Diabetologia 1992, 35, Suppl. 2, 569-576 e Martin et al. Biochemistry 1991, 30,10101]. O mecanismo responsável pelos danos do miocárdio observados após isquemia e reperfusão não está totalmente compreendido. Foi referido (M.F. Allard, et al. Am. J. Physiol. 267, H66-H74, 1994) que “a redução de glicogénio pré-isquémico ... está associada a uma maior recolha funcional ventricular esquerda pos-isquémica em corações de ratazanas hipertrofiodas”.
Deste modo, embora existam uma variedade grande de terapias para a hiperglicemia, hipercolesterolemia, hipertensão, hiperinsulinemia, aterosclerose e isquemia do miocárdio, mantém-se uma necessidade contínua de terapias alternativas, assim como de investigação contínua neste campo da técnica para as mesmas.
Sumário do Invento
Este invento refere-se a um composto inibidor da fosforilase de glicogénio de fórmula I útil para o tratamento dos diabetes, hiperglicemia, hipercolesterolomia, hiperinsulinemia, hipertensão, hiperlipidemia, aterosclerose e isquemia do miocárdio.
Os compostos do presente invento possuem a fórmula I -8- β t
Fórmula I e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-drogas, em que a linha a tracejado (—) é uma ligação facultativa; A é -C(H)=, -C(alquilo (Ci-C4))=, C(halo)= ou -N=, quando a linha a tracejado (—) é uma ligação, ou A é metileno ou -CH(alquilo (C1-C4))-, quando a linha a tracejado (—) não é uma ligação;
Rb Rio ou Rn são independentemente H, halo, ciano, 4-, 6-, ou 7-nitro, alquilo (CrC4), alcoxi (C,-C4), fluorometilo, difluorometilo ou trifluorometilo; R2éH; R3 é H ou alquil (Cj-C5); R4 é H, metilo, etilo, n-propilo, hidroxi-alquilo (CVC3), alcoxi (CrC3) alquilo (C1-C3), fenil-alquilo (C]-C4), fenil-hidroxialquilo (CrC4), (fenil)(alcoxi (Ci-C4))(alquilo (Ci-C4)), tien-2- ou -3-il-alquilo (CrC4) ou fur-2- ou -3-il-al-quilo (CrC4), em que os referidos aneis de R,, são independentemente mono-, di-ou tri-substituídos no carbono por H, halo, alquilo (Ci-C4), alcoxi (Cj-C4), trifluorometilo, hidroxi, amino, ciano ou 4,5-di-hidro-lH-imidazol-2-ilo; ou R4 é pirid-2-, -3- ou -4-il-alquilo (CrC4), tiazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (Cj-C4), imidazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (CpQ), pirrol-2- ou -3-il-alquilo (CrC4), oxazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (CrC4), pirazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (CrC4), isoxazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (Ci-C4), isotiazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (CrC4), piridazin-3- ou -4-il-alquilo (C]-C4), pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-il-alqui-lo (Cj-C4), pirazin-2- ou -3-il-alquilo (CrC4), l,3,5-triazin-2-il-alquilo (CrC4) ou -9- -9-
íJfT V. - ;·'·ί i - -/---- · indol-2-alquilo (CrC4), em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (CrC4), alcoxi (Q-Q), amino, hidroxi ou ciano e em que os referidos substituintes são ligados ao carbono; ou R4 é Ri5-carboniloximetilo, em que o referido Rj5 é fenilo, tiazolilo, imidazolilo, ΙΗ-indolilo, furilo, pirrolilo, oxazolilo, pirazoílo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo ou 1,3,5-triazinilo, em que os referidos aneis R15 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos por halo, amino, hidroxi, alquilo (Ci-C4), alcoxi (CrC4) ou trifluorometilo e em que os referidos mono- e di-substituintes são ligados ao carbono; R5éH; R6 é carboxi, alcoxi (C1-C8)-carbonilo, benziloxicarbonilo, C(0)NR8R9 ou C(0)R12 em que R8 é H, alquilo (CrC6), cicloalquilo (C3-C6), cicloalquilo (C3-C6)-alquilo (Ci-C5), hidroxi ou alcoxi (CrC8); e R9 é H, cicloalquilo (C3-C8), cicloalquilo (C3-C8)-alquilo (CrC5), ciclo-alquenilo (C4-C7), cicloalquilo (C3-C7) alcoxi (Ci-C5), cicloalquiloxi (C3-C7), hidroxi, metileno-alquilo (CrC8) perfluorado, fenilo, ou um heterociclo, em que o referido heterociclo é piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, pira-nilo, piridinilo, piperidinilo, morfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzimidazolilo, tio-cromanilo ou tetra-hidrobenzotiazolilo, em que os referidos aneis de heterociclo são carbono-azoto ligados; ou R9 é alquilo (C,-C«) ou alcoxi (Ci-C8), em que o referido alquilo (CrC6) ou alcoxi (CrC8) é facultativamente mono-substituído por cicloalquen-1- -10-
-ilo(C4-C7), fenilo, tienilo, piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, iso-tiazolilo, piranilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, l-oxotiomorfolinilo, 1,1-dioxotiomorfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo ou indolilo e em que o referido alquilo (C]-C6) ou alcoxi (CpCg) são facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituídos por halo, hidroxi, alcoxi (CrC5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquilamino (Cj-Q), ciano, carboxi, ou alcoxicarbonilo (C,-C4); e em que os aneis R$ são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente no carbono por halo, alquilo (C]-C4), alcoxi (CrC4), hidroxi, hidroxialquilo (C,-C4), aminoalquilo (C,-C4), mono-N- ou di-N,N-alquilamino (CrC4) alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4) alquilo (Ci-C4), mono-N- ou di-N,N--alquilamino (CrC4), ciano, carboxi, alcoxi (Q-C5) carbonilo, carbamoílo, formilo ou trifluorometilo e em que os referidos aneis R$ podem facultativamente ser ainda mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (C(-C5) ou halo; com a condição de não se incorporar azoto quatemizado em qualquer heterociclo R9; R12 é morfolino, tiomorfolino, 1-oxotiomorfolino, 1,1-dioxotiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, l-oxotiazolidin-3-ilo, l,l-dioxotiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, pirazolidin-l-ilo, isoxazolidin-2-ilo, isotiazolidin-2-ilo, l,2-oxazetidin-2-ilo, oxazolidin-3-ilo, 3,4-di-hidroisoquinolin-2-ilo, l,3-di-hidroisoindol-2-ilo, 3,4--di-hidro-2H-quinol-l-ilo, 2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-ilo, 2,3-di-hidro-ben-zo[ 1,4]-tiazin-4-ilo, 3,4-di-hidro-2H-quinoxalin-1 -ilo, 3,4-di-hidro-benzo[c][1,2]-oxazin-1 -ilo, 1,4-di-hidrobenzo[d][ 1,2]oxazin-3-ilo, 3,4-di-hidro-benzo[e][1,2]-oxazin-2-ilo, 3H-benzo[d]isoxazol-2-ilo, 3H-benzo[c]isoxazol-l-ilo ou azepan-1--ilo, em que os referidos aneis R12 são facultativamente mono-, di- ou tri-substituídos independentemente por halo, alquilo (CrC5), alcoxi (Cj-C5), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino, formilo, carboxi, car-bamoílo, mono-N- ou di-N,N-alquil(C1-C5)-carbamoílo, alcoxi (C,-C6)-alcoxi (C1-C3), alcoxi (C1-C5) carbonilo, alcoxi (C1-C5)-carbonil-alquilo (CrC5), alcoxi (Cj-C4)-carbonilamino, carboxialquilo (C1-C5), carbamoilalquilo (C1-C5), mono--N- ou di-N,N-alquil (C1-C5)-carbamoil-alquilo (CrC5), hidroxialquilo (C1-C5), alcoxi (CrC4)-alquilo (Cj-C4), aminoalquilo (CrC4), mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC4)-amino-alquilo (Q-Q), oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (Q-C^-imino e em que não mais do que dois substituintes são seleccionados entre oxo, hidroxi--imino ou alcoxi (Cj-C^-imino e oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (C]-C6)-imino estão nos carbonos não aromáticos; e em que os referidos aneis R12 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (Cj-C5) ou halo; com a condição de quando R$ for alcoxicarbonilo (C1-C5) ou benziloxi-carbonilo, então Rj é 5-halo, 5-alquilo (CrC4) ou 5-ciano e R» é (fenil)(hidroxi)-alquilo (CrC4), (fenil)(alcoxi (CrC4))alquilo (Cj-C4), hidroximetilo ou Ar-alqui-lo (CrC2), em que Ar é tien-2- ou -3-ilo, fur-2- ou -3-ilo ou fenilo, em que o referido Ar é facultativamente mono- ou di-substituído independentemente por halo; com a condição de que quando Rl5 R10 e Rn são H, R4 não é imidazol-4-ilmetilo (cujos compostos são revelados em US 5 346 907; WO9406755; W090-US3630; EP0266950 e W08803022), 2-feniletilo (cujos compostos são revelados em JP03294253 e W093-GB614) ou 2-hidroxi-2-fenil-etilo; com a condição de que quando R8 e R9 são n-pentilo, Rj é 5-cloro, 5-bromo, 5-ciano, 5-alquilo (CrC5), 5-alcoxi (CrC5) ou trifluorometilo (cujos compostos são revelados em J. Med. Chem. (1991), 34 (12), 3350-9, WO 9100725, EP 336356 A2 e US 5,346,907); com a condição de que quando R12 é 3,4-di-hidroisoquinol-2-ilo, o referido 3,4-di-hidroisoquinol-2-ilo não é substituído por carboxialquilo (CrC4) (cujos compostos sâo revelados em WO 93-GB614), com a condição de que quando Rg é H e R9 é alquilo (Ci-C6), R9 não é substituído por carboxi ou alcoxi (Ci-C4)-carbonilo sobre o carbono, o qual está ligado ao átomo de azoto N ou NHR8 (cujos compostos são revelados em WO 9407815 A2 e EP 336356 A2); e com a condição de que quando ^ é carboxi e R,, R10, Ru e R5 são todos H. entào R4 não é benzilo ou H (cujos compostos são revelados em Pigulla, Joachini Licbigs Ann. Chem 1978:1390-1398), ou (fenil)(hidroxi)metilo, metilo, ctilo ou n-propilo.
Um primeiro grupo de compostos preferidos de fórmula I consistem naqueles compostos em que
Ri c 5-H, 5-halo, 5-metilo, 5-ciano ou 5-trifluorometilo;
Rio c R| 1 são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=; R2 e R3 são H; R4 é H, metilo, fenilalquilo (CrC2), em que os referidos grupos fenilo são mono- ou di-substituídos independentemente por H, halo, alquilo (C1-C4), alcoxi (C1-C4), trifluorometilo, hidroxi, amino ou ciano e em que os referidos grupos R4 são facultativa e adicionalmente mono-substituído por halo; ou R4 é tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), pirid-2-, -3- ou -4-ilalquilo (CrC2), tiazol-2-, 4- ou -5-ilalquilo (CrC2), imidazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), pirrol-2- ou -3-ilalquilo (Ci-C2), oxazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (C,-C2), pirazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), isoxazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), piridazin-3- ou -4-ilalquilo (Ci-C2), pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-ilalquilo (CrC2), pirazin-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) ou l,3,5-triazin-2-ilalquilo (CrC2), em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), amino ou hidroxi e os referidos mono- ou di-substituintes -13- estão ligados ao carbono; e R<5 é C(0)NR8R9 ou C(0)R12.
Dentro do anterior primeiro grupo de compostos preferidos de fórmula I está um primeiro grupo de compostos especialmente preferidos em que R4 é H, fenilalquilo (CpCJ, tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) em que os referidos aneis R4 são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; R*. éC(0)R12;e R12 é morfolino, tiomorfolino, 1-oxotiomorfolino, 1,1-dioxotiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, l-oxotiazolidin-3-ilo, l,l-dixotiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, isoxazolidin-2-ilo, isotiazolidin-2-ilo, l,2-oxazetidin-2-ilo, oxazolidin-3-ilo, l,3-di-hidroisoindol-2-ilo, ou azepan-l-ilo, em que os referidos aneis RI2 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, alquilo (CrC5), alcoxi (CrC5), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino, formilo, carboxi, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-alquil (C1-C5)-carbamoílo, alcoxi (C1-C5)-carbonilo, hidroxi-alquilo (CrC5), aminoalquilo (CrC4), mono-N- ou di-N,N-alquil (C,-C4)-amino--alquilo (Cj-C4), oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (Ci-C6)-imino, com a condição de que apenas os heterociclos R12 tiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, isoxazolidin--2-ilo, ou oxazolidin-3-ilo são facultativamente mono- ou di-substituídos por oxo, hidroxi-imino, ou alcoxi-imino (CrC6); e em que os referidos aneis Rj2 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (Cj-C5).
Dentro do grupo anterior de compostos especialmente preferidos encontram-se os compostos - 14-
[(1 S)-Benzil-2-(3-ludioxi-iminopirrolidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-(Cis-3,4-di-hidroxi-pinOlidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro--1 H-indole-2-carboxílico, [2-((3S,4S)-Di-hidroxi-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro--1 H-indole-2-carboxílico, [(1 S)-Benzil-2-(cis-3,4-di-hidroxi-piirolidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-(l,l-Dioxo-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-lH-in-dole-2-carboxílico, (2-Oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxí- lico, [(1 S)-(4-Fluoro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-((3RS)-hidroxipiperidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5--cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-Oxo-2-((lRS)-oxo-l-tiazolidin-3-il)-etil]-amida do ácido 5-cloro-1H--indole-2-carboxílico, [(lS)-(2-Fluoro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-((3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-(3-hidroxi-azetidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro- 1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-(3-hidroxi-imino-azetidin-l-il)-2-oxo-etil]-aimda do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, ou [(lS)-Benzil-2-(4-hidroxi-imino-piperidin-l-il)-2-oxo-etil]-aimda do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico. -15- -15-
r*
Dentro do grupo anterior de compostos especialmenle preferidos encontra-se um primeiro grupo de compostos especialmente preferidos, em que R4 éH;e R12 é tiazolidin-3-ilo, l-oxo-tiazolidin-3-ilo, l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo ou oxazolidin-3-ilo ou os referidos substituintes de R12 são facultativamente mono-ou di-substituídos independentemente por carboxi, alcoxicarbonilo (C1-C5), hidroxialquilo (Q-C3), aminoalquilo (C!-C3), mono-N- ou di-N,N-alquil (C1-C3)--amino-alquilo (CrC3) ou R12 é pirrolidin-l-ilo mono- ou di-substituído, em que os referidos substituintes são independentemente carboxi, alcoxi (C (-C5)-carbonilo, alcoxi (CrC5), hidroxi, hidroxialquilo (CrC3), amino, aminoalquilo (CrC3), mono-N-ou di-N,N,-alquil (CI-C3)-amino-alquilo (CpCy ou mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C4)-amino; e os aneis R12 são facultativa, adicional e independentemente di-substituídos por alquilo (CrC5).
Os compostos preferidos dentro do grupo imediatamente precedente de compostos especialmente preferidos são os compostos, em que a. R, é 5-cloro; R10 e Rn são H, e
Rj2 e cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; b. R! é 5-cloro; R10eRn sãoH, e
Rj2 é (3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; c. R! é 5-cloro; R10 e Ru são H; e R12 é l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo; d.
Ri é 5-cloro; R10 e Rn são H; e -16- -16-
c=-;.
Rj2 é tiazolidin-3-ilo; e e. R, é 5-cloro; R10eRn sãoH; e R12 é l-oxo-tiazolidin-3-ilo.
Dentro do grupo anterior de compostos especialmente preferidos está um segundo grupo de compostos especialmente preferidos, em que R4 é fenilmetilo, tien-2- ou -3-ilmetilo, em que os referidos aneis R4 são facultativamente mono- ou di-substituídos por fluoro; e R12 é tiazolidin-3-ilo, l-oxo-tiazolidin-3-ilo, l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo ou oxazolidin-3-ilo ou os referidos substituintes R12 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por carboxi ou alcoxi (Cj-C5)-carbonilo, hidroxialquilo (C1-C3), aminoalquilo (C1-C3) ou mono- ou di-N,N-alquil (C1-C3)-amino-alquilo (CrC3) ou R12 é azetidin-l-ilo mono- ou di-substituído ou pirrolidin-l-ilo mono-di-substituído ou piperidin-l-ilo mono- ou di-substituído, em que os referidos substituintes são independentemente carboxi, alcoxicarbonilo (C1-C5), hidroxialquilo (Cj-C3), aminoalquilo (Q-C3), mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC3)-amino alquilo (Q-C3), hidroxi, alcoxi (CrC5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (CVCsJ-amino, oxo, hidroxi-imino ou alcoxi-imino (C[-C5); e os aneis R12 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (C1-C5).
Os compostos preferidos dentro do grupo imediatamente precedente de compostos particularmente preferidos são os compostos em que a. Rj é 5-cloro; R10 e Ru são H;
Ri é 4-fluorobenzilo; R12 é 4-hidroxipiperidin-l-ilo; e - 17- ÂA -· ,íj··,-·' !V' a estereoquímica de carbono (a) é (S); b. Rj é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo; R,2 é 3-hidroxipiperidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); c. R, é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo; R12 é cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); d. Rj é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 é benzilo; R12 é 3-hidroxi-imino-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); e. Rj é 5-cloro; R10 e Rn são H; R, é 2-fluorobenzilo; R12 é 4-hidroxipiperidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); f. Rj é 5-cloro; R10 e Ru são H; R4 ébenzilo; R12 é (3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); g. R! é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo;
Rj2 é 3-hidroxi-azetidin-l-ilo; e
> I -18- ' r a estereoquímica de carbono (a) é (S); h. R! é 5-cloro;
Rio eRn são H; R4 ébenzilo; R12 é 3-hidroxi-imino-azetidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S); e i. R! é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo; R12 é 4-hidroxi-imino-piperidin-l-ilo e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
Um segundo grupo de compostos especialmente preferidos dentro do primeiro grupo de compostos preferidos são os compostos em que R4 é H, fenilalquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) em que os referidos aneis R* são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; R^ é C(0)NR8R9; e
Rg é H, alquilo (Q-Cj), hidroxi ou alcoxi (CrC4); e R9 é H, cicloalquilo (C4-C6), cicloalquil (C3-C6)-alquilo (CrC5), metileno-alquilo (C1-C3) perfluorado, piridilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, piperidinilo, benzotiazolilo ou tiocromanilo; ou Rç é alquilo (CpCs) em que o referido alquilo (CrC5) é facultativamente substituído por cicloalquenilo (C4-C6), fenilo, tienilo, piridilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomor-folinilo, 1-oxotiomorfolinilo ou 1,1-dioxotiomorfolinilo e em que o referido alquilo (C1-C5) ou alcoxi (CrC4) é facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituído por balo, hidroxi, alcoxi (C1-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino (C1-C5), ciano; carboxi, ou alcoxi (C1-C4)-carbonilo; -19-
e em que os anéis R9 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente no carbono por halo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), hidroxi, ami-no, mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC4)-ammo, carbamoílo, alcoxi (C!-C5)-carbonilo ou carbamoílo.
Dentro do segundo grupo imediatamente precedente de compostos cspccialmcntc preferidos encontram-se os compostos em que a. R, é 5-cloro; R,o c Rn são H; R4 é benzilo;
Rg é metilo; e Rç é 3-(dimetilamino)propilo; b. a cstereoquímica do carbono (a) é (S); R, é 5-cloro; R10 e Ru são H; R4 é benzilo;
Rg é metilo; e R9 é 3-piridilo; c. a estereoquímica do carbono (a) é (S);
Ri é 5-cloro; R10eR|, sãoH; R4 é benzilo; R8 é metilo; e R9 é 2-hidroxietilo; e; d. a estereoquímica do carbono (a) é (S);
Rj é 5-fluoro;
Ri0eRn sãoH; é 4-fluorofenilmetilo; -20- /Ο
Rg é metilo; e R9 é 2-morfolinoetilo;
Um terceiro grupo de compostos especialmente preferidos dentro do primeiro grupo de compostos preferidos são os compostos em que R4 é H, fenilalaquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-alquilo (C]-C2) em que os referidos aneis R4 são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; e C(0)NRgRçj e R8 é H, alquilo (C]-C5), hidroxi ou alcoxi (CrC4); e R9 é alcoxi (C,-C4) em que o referido alcoxi (CrC4) é facultativamente substituído por cicloalquenilo (C4-C6), fenilo tienilo, piridilo, pirrolidinilo, oxa-zolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1-oxotiomorfolinilo, ou 1,1-dioxotiomorfolinilo e em que 0 referido alquilo (C,-C5) ou alcoxi (CrC4) é facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituído por halo, hidroxi, alcoxi (Ci-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC5)-amino, ciano, carboxi, ou alcoxi (CrC4)-carbonilo; e em que os aneis R9 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente no carbono por halo, alquilo (Ci-C4), alcoxi (CrC4), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C4)-amino, carbamoílo, alcoxi (CrC5)-car-bonilo ou carbamoílo.
Dentro do terceiro grupo imediatamente precedente de compostos especialmente preferidos encontram-se os compostos em que a. R! é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo;
Rg é metilo; e R$ é 2-hidroxietoxi; -21 - * b. a estereoquímica do carbono (a) c (S); R] é 5-cloro; R10eRn sãoH; R, é 4-fluorofenilmetilo; R8 é metilo; e Rç, é metoxi; c. a estereoquímica do carbono (a) é (S); R, é 5-cloro;
RioeRnsãoH; R4 ébenzilo; R8 é metilo; e R9 é metoxi;
Um segundo grupo de compostos preferidos de fórmula I são aqueles compostos em que
Ri é 5-halo, 5-metilo, 5-ciano ou trifluorometilo;
Rio e R] 1 são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=; R2 e R3 são H; R4 é H, fenilalquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo ((VC2) em que os referidos aneis são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; e Ré é alcoxi (Ci-C5)-carbonilo.
Um terceiro grupo de compostos especialmente preferidos de fórmula I são aqueles compostos em que
Rj é halo, 5-metilo, 5-ciano ou trifluorometilo; R,0 e Rn são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=;
-22- ,ί'Β J R2 e R3 são H; R4 é H, metil ou fenilalquilo (Ci-C2), em que os referidos grupos fenilo são mono- ou di-substituídos independentemente por H, halo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), trifluorometilo, hidroxi, amino ou ciano, e em que os referidos grupos fenilo são adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por H ou halo; ou R4 é tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), pirid-2-, -3- ou -4-ilalquilo (CrC2), tiazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (Cj-C2), imidazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (Ci-C2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), pirrol-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), oxazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), pirazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), isoxazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), isotiazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), piridazin-3- ou -4-ilalquilo (Ci-C2), pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-ilalquilo (CpC2), pirazin-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) ou l,3,5-triazin-2-ilalquilo (CrC2) em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (CpC4), alcoxi (CrC4), amino ou hidroxi e em que os referidos mono- ou di-substituintes estão ligados ao carbono; e R$ é carboxi.
Dentro do terceiro grupo de compostos preferidos encontra-se um primeiro grupo de compostos especialmente preferidos em que Rio e Ru são H; e R4 éH.
Especialmente preferidos dentro do grupo particularmente preferido imediatamente precedente está um grupo em que Ri é 5-cloro. O presente invento refere-se também a composições farmacêuticas que compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula I e de um veículo farmaceuticamente aceitável.
As composições preferidas incluem composições farmacêuticas para o tratamento de doenças dependentes da fosforilase de glicogénio em mamíferos, as quais compreendem uma quantidade de tratamento de uma doença dependente de fosforilase de glicogénio de um composto de fórmula I e de um veículo farmaceuticamente aceitável.
Um outro aspecto deste invento é referente a composições farmacêuticas para o tratamento de diabetes, as quais compreendem uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de fosforilase de glicogénio de fórmula I; um ou mais agentes antidiabéticos tais como insulina e análogos de insulina (por exemplo insulina LisPro); GLP-1 (7-37) (insulinotropina) e GLP-1 (7-36)-NH2; Sulfonilureias e Análogos; cloropropamida, glibenclamida, tolbutamida, tolazamida, aceto-hexamida, glipizida , glimepirida, repaglinida, meglitinida; Biguanidas: metformina, fenformina; buformina; Antagonistas a2 e Imidazolinas: midaglizole, isaglidole, deriglidole, idazoxano, efaroxano, fluparoxano; Outros secretágogos de insulina: linoglirida, A-4166; Glitazonas: ciglitazona, pioglitazona, englitazona, troglitazona, darglitazona, BRL49653; Inibidores de Oxidação de Ácido Gordo: clomoxir, etomoxir; inibidores de α -Glucosidase: acarbose, miglitol, emiglitate, voglibose, MDL-25.637, camiglibose, MDL-73.945; β-Agonistas: BRL 35135, BRL 37344, Ro 16-8714, ICI D7114, CL 316.243; Inibidores de fosfodiesterase: L-386.398; Agentes abaixadores do nível de lípidos; benfluorex; Agentes Antiobesidade; fenfluramina; Vanadato e complexos de vanádio (por exemplo naglivan ) complexos de peroxovanádio; Antagonistas de Amilina; Antagonistas de
Glucagona; lnibidores de gluconeogenése; análogos de Somatostatina; Agentes Antilipolíticos; ácido nicotínico, acipimox, WAG 994; e facultativamente um veículo farmaceuticamente aceitável.
Um outro aspecto do invento é um método para o tratamento de diabetes num mamífero por administração da combinação de composições atrás descritas.
As doenças dependentes de fosforilase de glicogénio referem-se a perturbações que são mediadas, iniciadas ou mantidas, no todo ou em parte, pela clivagem da macromolécula de glicogénio pelas enzimas de fosforilase de glicogénio para libertar o glicose-1-fosfato e uma nova molécula de glicogénio encurtada. Estas perturbações são melhoradas por redução de ou caracterizadas por uma elevação da actividade de fosforilase de glicogénio. Exemplos incluem diabetes, hiperglicemia, hipercolesterolemia, hipertensão, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, aterosclerose e isquemia do miocárdio. O termo inibidor de fosforilase de glicogénio refere-se a qualquer substância ou agente ou a qualquer combinação de substâncias e/ou agentes que reduzem, retardam, ou eliminam a acção enzimática da fosforilase de glicogénio. A acção enzimática de fosforilase de glicogénio correntemente conhecida é a degradação de glicogénio por catálise da reacção reversível de uma macromolécula de glicogénio e fosfato inorgânico em glicose-1-fosfato e numa macromolécula de glicogénio que é um resíduo de glicosilo mais curto do que a macromolécula de glicogénio original (direcção para a frente da glicogenólise). O termo “tratamento” como é aqui utilizado abrange o tratamento preventivo (por exemplo profilático) e paliativo. -25- ?: ·>
Por halo pretende-se significar cloro, bromo, iodo ou fluoro.
Por alquilo pretende-se significar um hidrocarboneto saturado de cadeia linear ou ramificada. Exemplos destes grupos alquilo (assumindo o comprimento designado abrangem o exemplo particular) são metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, butilo terciário, pentilo, isopentilo, hexilo e iso-hexilo.
Por alcoxi pretende-se significar alquilo saturado de cadeia linear ou ramificada ligado através de um oxi. Exemplos de tais grupos alcoxi (assumindo o comprimento designado abrangem o exemplo particular) são metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, butoxi terciário, pentoxi, isopentoxi, hexoxi e iso-hexoxi. A expressão “sal aniónico farmaceuticamente aceitável” refere-se a sais aniónicos não tóxicos que contêm aniões tais como (mas não limitado a) cloreto, brometo, iodeto, sulfato, bissulfato, fosfato, acetato, maleato, fumarato, oxalato, lactato, tartarato, citrato, gluconato, metanossulfonato e 4-tolueno--sulfonato. A expressão “sal catiónico farmaceuticamente aceitável” refere-se a sais catiónicos não tóxicos tais como (mas não limitado a) sódio, potássio, cálcio, magnésio, amónio ou benzatidina (Ν,Ν’-dibenziletilenodiamina), colina, etanol-amina, dietanolamina, etilenodiamina, meglamina (N-metil-glucamina), beneta-mina (N-benzilfenetilamina), piperazina ou trometamina (2-amino-2-hidroxi-metil-l,3-propanodiol) protonadas. -26-
A expressão “pró-droga” refere-se a compostos que são precursores de drogas, os quais, a seguir à administração, libertam a droga in vivo através de um qualquer processo químico ou fisiológico (por exemplo, uma pró-droga ao ser trazida para o pH fisiológico é convertida na forma desejada de droga). Algumas pró-drogas exemplificativas após clivagem libertam o ácido livre correspondente, c lais resíduos formadores de éster hidrolisáveis dos compostos deste invento incluem, mas não lhes estão limitados, substituintes de ácido carboxílico (por exemplo. R<, c carboxi, ou Rg, Rt, ou R12 contêm carboxi) em que o hidrogénio livre c substituído por alquilo (Ci-C4), alcanoiloxi (C2-C12)-metilo, l-(alca-noiloxi)ctilo com 4 a 9 átomos de carbono, l-metil-l-(alcanoiloxi)-etilo com desde 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo com desde 3 a 6 átomos dc carbono, I -(alcoxicarboniloxi)etilo com desde 4 a 7 átomos de carbono, 1-me-til-l-(alcoxicarboniloxi)etilo com desde 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxi-carbonil)aminometiIo com desde 3 a 9 átomos de carbono, l-(N-(alcoxicarbo-nil)amino)etilo com desde 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotono-lactonilo, gama-butilacton-4-ilo, di-N,N-alquil (Cj-C2)-amino-alquilo (C2-C3) (tal como β-dimetilaminoetilo), carbamoil-alquilo (Ci-C2), N,N-di-alquil (CrC2)-car-bamoil-alquilo (C,-C2) e piperidino-, pirrolidino- ou morfolino-alquilo (C2-C3).
Outras pró-drogas exemplificativas libertam um álcool de fórmula I em que o hidrogénio livre do substituinte hidroxi (por exemplo, R8, R9 ou R12 contêm hidroxi) é substituído por alcanoiloxi (C1-C6)-metilo, 1-(alcanoiloxi (Ci-C6))etilo, 1-metil-l-(alcanoiloxi (CrC6))etilo, alcoxi (CrC6)-carboniloxime-tilo, N-alcoxi (C1-C6)-carbonilaminometilo, succinoílo, alcanoílo (CrC6), a-ami-noalcanoílo (Ci-C4), arilacilo e α-aminoacilo, ou α-aminoacil-a-aminoacilo, em que as referidas porções α-aminoacilo são independentemente qualquer um dos ácidos L-amino naturais encontrados nas proteínas, P(0)(OH)2, -P(0)(Oalquil (Ci-C6))2 ou glicosilo (o radical que resulta da separação do hidroxilo do hemiacetal de um hidrato de carbono). -27-
Outras pró-drogas exemplifícativas podem ser, mas não lhes estão limitadas, derivados de fórmula I em que R2 é um hidrogénio livre que é substituído por R-carbonilo, RO-carbonilo, NRR’-carbonilo em que ReR’ são cada um independentemente alquilo CpC^, cicloalquilo (C3-C7), benzilo, ou R-carbonilo é um α-aminoacilo natural ou α-aminoacil natural-a-aminoacilo natural, -C(0H)C(0)0Y em que (Y é H, alquilo (C,-C6) ou benzilo), -C(OY0)Yi, em que Y0 é alquilo (CrC4) e Y, é alquilo (CpC6), carboxialquilo (Q-Q), aminoalquilo (CrC4) ou mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC6)-aminoalquilo, -C(Y2)Y3 em que Y2 é H ou metilo e Y3 é mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C6)-amino, morfolino, piperidin-l-ilo ou pirrolidin-l-ilo.
Outras pró-drogas exemplifícativas incluem, mas não lhes estão limitadas, derivados de fórmula I que suportam uma porção hidrolisável em r3, os quais libertam um composto de fórmula I em que R3 é um hidrogénio livre durante a hidrólise. Estas porções hidrolisáveis em R3 são/incluem 1-hidroxi-alquilo (CrC6) ou 1-hidroxi-l-fenilmetilo.
Como é aqui utilizado, as expressões “solvente inerte à reacção” e “solvente inerte” refere-se a um solvente que não interactua com os materiais de partida, reagentes, intermediários ou produtos de uma maneira que afecte adversamente a produção do produto desejado.
Um químico de especialização mediana reconhecerá que determinados compostos deste invento conterão um ou mais átomos que podem estar segundo uma configuração estereoquímica ou geométrica particular, dando origem a estereoisómeros e a isómeros configuracionais. Todos estes isómeros e misturas dos mesmos estão incluídos no âmbito deste invento. Hidratos dos compostos deste invento estão também incluídos como um aspecto do invento.
Um químico de especialização mediana reconhecerá que determinadas combinações de substituintes que contêm heteroátomos listados neste invento definem compostos que serão menos estáveis sob condições fisiológicas (por exemplo aqueles que contêm ligações acetal ou aminal). Deste modo, tais compostos são menos preferidos. O termo “anel Rx” em que x é um inteiro, por exemplo “anel R9”, “anel R12” ou “anel R4” como é aqui utilizado relativamente à substituição nos aneis, refere-se a porções em que o anel é Rx e também em que o anel está contido dentro de Rx.
Como é aqui utilizado, o termo mono-N- ou di-N,N-alquilo (CrCx)... refere-se à porção alquilo (CpCJ tomada independentemente quando é di-N,N-alquilo (C1-Cx)... (x refere-se a um inteiro).
Outras características e vantagens do presente invento tomar-se-ão evidentes a partir da memória descritiva e reivindicações que o descrevem.
Descrição Pormenorizada do Invento
De uma maneira geral, os compostos de fórmula I podem ser preparados por processos que incluem processos conhecidos nas técnicas da química, particularmente à luz da descrição aqui contida. Determinados processos para a preparação de compostos de fórmula I são proporcionados como características adicionais do invento e são ilustrados pelos seguintes esquemas de reacção. -29- (j { C*
ESQUEMA DE REACÇÃO I
,-íY" R10 R11
V -30-
lf
ESQUEMA DE REACÇÃO II COOEt
Condições de hidrólise
C00H
VlIIfi
-31 - ESQUEMA DE REACÇÃO III
-32-
ESQUEMA DE REACÇÃO IY
COOH XXIII
COOH XXIV
Ri2H r8r9nh
conr8r«
XXV C(0)R12
C0NR8R 9 i C(0)í
Illb
-33- ESQUEMA DE REACÇÃO V
IR3 XXXIII -34-
ESQUEMA DE REACÇÃO VI -34-
XLI I 1. PhCHO, reduzir 2. NaCNBH3/ composto carbonilo apropriado 3 . H2 exaustivo ,
Illa
-35-
.«w
De acordo com o Esquema de Reacção I, os compostos de Fórmula I, em que R1; R10, Ru, A, R2, R3, R4, R5 e R^ são como definidos atrás, podem ser preparados por qualquer um dos dois processos gerais. No primeiro processo, o composto de Fórmula I desejado pode ser preparado por acoplamento do ácido indole-2-carboxílico, ácido indolino-2-carboxílico ou ácido benzimidazole-2-car-boxílico de Fórmula II apropriado com a amina de Fórmula ΙΠ apropriada (i.e., acilação da amina). No segundo processo, o composto de Fórmula I desejado pode ser preparado por acoplamento do composto de Fórmula IV apropriado (i.e., um composto de Fórmula I em que R^ é carboxi) com o álcool apropriado ou amina de fórmula R8R9NH ou R12H, em que R8, R9 e R12 são como definidos atrás (i.e., acilação da amina ou do álcool). O primeiro processo (o acoplamento dos compostos II com os compostos de Fórmula III é tipicamente preferida quando R4 não é H e R5 é H.
Tipicamente, o composto de Fórmula II é combinado com o composto de Fórmula III (ou o composto de Fórmula IV é combinado com a amina apropriada (por exemplo Ri2H ou RsRgNH)) ou com álcool na presença de um agente de acoplamento adequado. Um agente de acoplamento adequado é um agente que transforma um ácido carboxílico em espécies reactivas que formam uma ligação amida ou éster por reacção com uma amina ou álcool, respectivamente. O agente de acoplamento pode ser um reagente que afecte esta condensação num processo de um só recipiente quando misturado conjuntamente com o ácido carboxílico e amina ou álcool. Se 0 ácido se destinar a ser condensado com um álcool, é preferível empregar um grande excesso do álcool como solvente de reacção, com ou sem a adição de 1,0 a 1,5 equivalentes de dime-tilaminopiridina. Reagentes de acoplamento exemplificativos são cloridrato de 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida-hidroxibenzotriazole (DEC/HBT), -36-
carbonildi-imidazole, diciclo-hexilcarbodi-imida/hidroxibciizotriazolc (HBT), 2--etoxi-1 -etoxicarbonil-1,2-di-hidroquinolma (EEDQ), carbonildi-imidazole/HBT, anidrído propanofosfónico (anidrido do ácido propanofosfónico, PP A) e cianeto de dietilfosforilo. O acoplamento é efectuado num solvente inerte, de preferência num solvente aprótico a uma temperatura entre cerca de -20°C e cerca de 50°C, durante cerca de 1 a cerca de 48 horas, na presença facultativa de uma base de amina terciária tal como trietilamina. Solventes exemplificativos incluem acetonitrilo, diclorometano, acetato de etilo, dimetilformamida e clorofórmio ou misturas dos mesmos. Um exemplo de um procedimento de acoplamento adequado é o Procedimento A, aqui mencionado (imediatamente antes dos EXEMPLOS). O agente de acoplamento pode também ser o agente que converte o ácido carboxílico num intermediário activado que é isolado e/ou formado numa primeira etapa e deixado reagir com a amina ou álcool numa segunda etapa. Exemplos destes agentes de acoplamento e intermediários activados são o cloreto de tionilo ou o cloreto de oxalilo para fonnar o cloreto de ácido, o fluoreto cianúrico para formar um fluoreto de ácido ou um cloroformato de alquilo tal como cloroformato de isobutilo ou de isopropenilo (com uma base de amina terciária) para formar um anidrido misto do ácido carboxílico. Se o agente de acoplamento for o cloreto de oxalilo, é vantajoso empregar uma pequena quantidade de dimetilformamida como co-solvente com um outro solvente (tal como diclorometano) para catalisar a formação do cloreto de ácido. Este cloreto de ácido pode ser ligado por mistura com o intermediário de Fórmula III num solvente apropriado conjuntamente com uma base apropriada. As combinações solvente/base apropriadas são por exemplo, diclorometano, dimetilformamida ou acetonitrilo ou misturas dos mesmos na presença de uma base de amina terciária, por exemplo trietilamina. Outras combinações de solvente/base apropriadas incluem água ou um álcool (C]-Cs) ou tuna mistura dos mesmos conjuntamente
-37- com um co-solvente tal como diclorometano, tetra-hidrofurano ou dioxano c uma base tal como carbonato de sódio ou de potássio, hidróxido de sódio, potássio ou lítio ou bicarbonato de sódio em quantidade suficiente para consumir o ácido libertado na reacção. A utilização de um catalisador de transferência de fase (tipicamente 1 a 10 mol %) tal como haleto de amónio quaternário (por exemplo brometo de tetrabutilamónio ou cloreto de metiltrioctilamónio) é vantajosa quando se emprega uma mistura de co-solventes apenas parcialmente miscíveis (por exemplo diclorometano-água ou diclorometano-metanol). A utilização destes agentes de acoplamento e a selecção apropriada de solventes e temperaturas são conhecidas dos especialistas na técnica, ou então podem ser prontamente determinados através da literatura da especialidade. Estas e outras condições exemplificativas úteis para o acoplamento de ácidos carboxílicos são descritas em Houben-Weyl, Vol XV, parte II, E. Wunsch, Ed., G. Theime Verlag, 1974, Stuttgart, e M. Bodansky, Princípios da Síntese de Peptídeos, Springer-Verlag Berlim 1984, e Peptídeos, Análise, Síntese e Biologia (ed. E. Gross e J. Meienhofer), Volumes 1-5 (Academic Press NI 1979-1983).
Os compostos de Fórmula IV, em que Rj, R10, Rn, A, R2, R3, R4 e R5 são como definidos atrás, podem ser preparados a partir do éster de Fórmula V correspondente (i.e., compostos de Fórmula I em que R$ é benziloxicaibonilo ou alcoxi (CrC5)-carbonilo) por hidrólise com um alcali aquoso a uma temperatura entre cerca -20°C e entre 100°C, tipicamente a cerca de 20°C, durante cerca de 30 minutos a cerca de 24 horas.
Altemativamente, os compostos de Fórmula IV podem ser preparados por activação de um ácido indolecarboxílico de Fórmula II com um agente de acoplamento (como descrito atrás), o qual proporciona um intermediário activado (tal como um cloreto de ácido, fluoreto de ácido, ou anidrido misto), o qual é então deixado reagir com um composto de Fórmula Π, -38-
V «Λ*· £. em que R3, R4 e R5 são como descritos anteriormente e R^ é carboxi, num solvente adequado, na presença de uma base adequada. Os solventes adequados incluem água, ou metanol, ou uma mistura dos mesmos, conjuntamente com um co-solvente tal como diclorometano, tetra-hidrofurano, ou dioxano. As bases adequadas incluem hidróxidos de sódio, potássio ou lítio, bicarbonato de sódio ou de potássio, carbonato de sódio ou de potássio, ou carbonato de potássio, conjuntamente com brometo de tetrabutilamónio (1 equivalente) numa quantidade suficiente para consumir o ácido libertado na reacção (geralmente a quantidade suficiente para manter o pH da reacção a um valor superior a 8). A base pode ser adicionada aos poucos conjuntamente com 0 intermediário activado para efectuar o adequado controlo do pH da reacção. A reacção é conduzida geralmente entre -20°C e 50°C. Os procedimentos de isolamento são adaptados por um especialista na técnica para remover as impurezas, consistem tipicamente na remoção de co-solventes miscíveis em água por evaporação, extracção de impurezas a um pH elevado com um solvente orgânico, acidificação para baixar o pH (1-2) e filtração, ou extracção do produto desejado com um solvente adequado, tal como acetato de etilo ou diclorometano. O composto de Fórmula V pode ser preparado por acoplamento do composto de Fórmula III apropriado, em que R$ é alcoxicarbonilo, ao composto de Fórmula II apropriado segundo um procedimento análogo ao descrito atrás (por exemplo, Procedimento A).
Altemativamente, os compostos de Fórmula I que contêm átomos de enxofre no estado de oxidação de sulfóxido ou de sulfona podem ser preparados a partir dos compostos de Fórmula I correspondentes que possuem o átomo de enxofre na forma não oxidada, por tratamento com um agente de oxidação adequado, tal como ácido m-cloroperoxibenzóico em diclorometano a uma temperatura entre cerca de 0°C e cerca de 25°C durante cerca de 1 a cerca de
-39-48 huras, pur utilização de cerca de 1 a cerca de 1,3 equivalentes para conversão no estado de oxidação de sulfóxido e mais do que cerca de 2 equivalentes para conversão no estado de oxidação de sulfona.
Alguns dos métodos de preparação aqui descritos podem exigir protecção de funcionalidade remota (i.e., amina primária, amina secundária, carboxilo em precursores de Fórmula I). A necessidade desta protecção vai variar, dependendo da natureza da funcionalidade remota e das condições dos métodos de preparação. A necessidade desta protecção é prontamente determinada por um especialista na técnica. A utilização destes métodos de protecção/desprotecção está também dentro do âmbito do técnico da especialidade. Para uma descrição geral dos grupos de protecção e da sua utilização, ver T. W. Greene, Protective Groups in Organic Svnthesis. John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1991.
Por exemplo, no Esquema de Reacção I, determinados compostos de Fórmula I contêm uma funcionalidade primária, amina secundária ou ácido carboxílico na parte da molécula definida por R$ que pode interferir com a reacção de acoplamento pretendida do Esquema de Reacção I, se o intermediário de Fórmula II ou a amina Ri2H ou RgRçNH for deixado desprotegido. Deste modo, a a funcionalidade amina primária, amina secundária ou ácido carboxílico podem ser protegidos, quando estiverem presentes nas porções R$ do intermediário de Fórmula ΠΙ amina R8R$NH ou R12H, por um grupo de protecção adequado durante a reacção de acoplamento do Esquema de Reacção I. O produto desta reacção de acoplamento num tal caso é um composto de Fórmula I que contenha um grupo de protecção. Este grupo de protecção é removido numa etapa subsequente para proporcionar 0 composto de Fórmula I. Os grupos de protecção adequados para a protecção de amina e de ácido carboxílico incluem aqueles grupos de protecção normalmente utilizados na síntese de peptídeos (tal -40-
como N-t-butoxicarbonilo, N-carbobenziloxi e 9-fluorenilmelilenoxicaibonilo para aminas e ésteres de alquilo inferior ou benzilo para ácidos carboxílicos) que não são quimicamente reactivos sob as condições de acoplamento descritas atrás (e que precedem imediatamente os Exemplos aqui apresentados como Procedimento A) e que podem ser removidos sem alterar quimicamente outra funcionalidade no composto de Fórmula I.
Os ácidos indole-2-carboxílicos e ácidos indolino-2-carboxílicos de partida utilizados no Esquema de Reacção I, quando não se encontram disponíveis comercialmente na técnica anterior (tal técnica está extensivamente publicada), encontram-se disponíveis por métodos sintéticos convencionais. Por exemplo, de acordo com o Esquema de Reacção Π, o éster de índole de Fórmula VII (cm que A não é azoto) pode ser preparado a partir do composto de Fórmula VI (cm que Q é seleccionado para se obter o desejado A como definido atrás, excepto para N) via uma síntese de índole de Fischer (ver The Fischer índole Svnthesis Robinson, B. (Wiley, Nova Iorque, 1982)) seguido de saponifícação do éster de indole de Fórmula VII resultante para produzir o ácido de Fórmula VII correspondente. A aril-hidrazona de partida pode ser preparada por condensação de um hidrazina prontamente disponível com o derivado de carbonilo apropriado ou por meio da reacção Japp-Klingeman (ver Oreanic reactions. Phillips, R. R., 1959,10, 143).
Altemativamente, o ácido indole-2-carboxílico de Fórmula VIIIA pode ser preparado por condensação de um composto de orto-metil-nitro de Fórmula IX com um éster de oxalato para produzir o éster de indole de Fórmula X seguida de redução do grupo nitro e de hidrólise subsequente.
Este processo de três etapas é conhecido como a síntese de indole de Reissert (Reissert, Chemische Berichte 1897, 30, 1030). Condições para -41 - realizar esta sequência, e referências à inesina, são descritas na literatura (Kermack, et al., J. Chem. Soc. 1921, 119, 1602; Cannon et al., J. Med. Chem. 1981, 24, 238; Julian, et al em Heterocyclic Compounds, vol 3 (Wiley, Nova Iorque, NI, 1962, R.C. Elderfield, ed) p 18). Um exemplo da implementação específica desta sequência é o dos Exemplos 10A-10C apresentado a seguir.
Os ácidos 3-halo-5-cloro-lH-indole-2-carboxílicos podem também ser preparados por halogenação dos ácidos 5-cloro-lH-indole-2-carboxílicos.
De acordo com o Esquema de Reacção III, os intermediários do ácido benzimidazole-2-carboxílico de Fórmula XI podem ser preparados por condensação de um composto de orto-diamino de Fórmula ΧΙΠ com ácido glicólico, seguido de oxidação do benzimidazole-2-metanol de Fórmula XII resultante (Bistrzycki, A. e Przeworski, G. Ber. 1912.45,3483).
Altemativamente (ao Esquema de Reacção Π), as indolinas substituídas de Fórmula XIV podem ser preparadas por redução dos índoles de Fórmula XV correspondentes com um agente de redução tal como magnésio em metanol a uma temperatura entre cerca de 25°C e cerca de 65°C, durante cerca de 1 a cerca de 48 horas (Esquema de Reacção ΠΙ).
Os ácidos indolinocarboxílicos de Fórmula XVI são preparados por saponificação do éster de Fórmula XVII correspondente (Esquema de Reacção ΠΙ). O éster de Fórmula XVII é preparado por redução do éster de índole de Fórmula VII correspondente com um agente de redução tal como magnésio em metanol, como descrito para a conversão do composto de Fórmula XV no composto de Fórmula XTV anterior. ί (· -42-
Os parágrafos seguintes descrevem formas de preparar as várias aminas que são utilizadas nos Esquemas de Reacção anteriores.
De acordo com o Esquema de Reacção IV, um alfa amino ácido de Fórmula XXIII pode ser protegido no azoto com um grupo de protecção apropriado (Pt) (por exemplo, t-Boc) para formar um composto de Fórmula XXIV. Um especialista na técnica pode seleccionar prontamente um grupo de protecção apropriado e um método para a sua introdução. Por exemplo, dois grupos de protecção comuns são t-Boc (introduzido por tratamento do aminoácido com dicarbonato de di-t-butilo num solvente adequado de preferência prótico ou numa mistura solvente com um pH elevado) e CBZ (introduzido por tratamento do aminoácido com cloroformato de benzilo num solvente adequado, de preferência prótico, ou numa mistura solvente e base). O composto de Fórmula XXIV é ligado (segundo um procedimento análogo ao processo de acoplamento descrito no Esquema de Reacção I) com uma amina RgRgNH ou HR12 apropriada para formar um composto de Fórmula XXV, o qual é então desprotegido, resultando no composto de Fórmula Illb (i.e., um composto de Fórmula III em que R* é C(0)R12 ou C(0)NR8R9). Se o grupo de protecção for t-Boc, por tratamento do composto de Fórmula XXV com um ácido num solvente adequado, de preferência aprótico. Os ácidos para esta desprotecção incluem HC1, MeS03H ou ácido trifluoroacético.
De acordo com o Esquema de Reacção V, um composto de Fórmula XXXI (amina de Fórmula ΠΙ N-protegida em que R$ é alcoxicarbonilo (Ci-Cg) ou benziloxicarbonilo) pode ser preparado a partir do aminoácido não protegido de Fórmula XXX correspondente via N-protecção (produzindo um aminoácido protegido de Fórmula XXXIII) seguida de esterificação. Por exemplo, o composto de Fórmula ΧΧΧΙΠ pode ser esterificado com o álcool apropriado e com um catalisador ácido tal como cloreto de hidrogénio ou cloreto
de tionilo, ou no caso de terc-bulanol, por tratamento do aminoácido com isobutileno e um catalisador ácido tal como ácido sulfurico concentrado ou por tratamento com um haleto de alquilo (por exemplo, cloreto de metilo) e uma base (por exemplo, carbonato de potássio). Altemativamente, a esterificação pode preceder a etapa de protecção.
De acordo com o Esquema de Reacção VI, os compostos de Fórmula XXX, em que R3 não é H, utilizados no Esquema de Reacção V podem ser preparados da forma seguinte. Os aminoácidos de Fórmula XLI podem ser preparados por N-alquilação dos aminoácidos (PT) protegidos de Fórmula XL por tratamento com uma base apropriada e um agente de alquilação. Os procedimentos específicos para esta alquilação são descritos por Benoiton, Can. J. Chem. 1977, 55, 906-910, e Hansen, J. Org. Chem. 1985, 50 945-950. Por exemplo, quando R3 é metilo, ePTé Boc, utilizam-se hidreto de sódio e iodeto de metilo. A desprotecção do composto de Fórmula XLI produz o composto de Fórmula XXX desejado.
Altemativamente, um aminoácido de Fórmula XLII pode ser N-alquilado por uma sequência de três etapas que envolve a benzilação redutora (tal como com benzaldeído, hidrogenação catalisada por Pd/C) para proporcionar o derivado mono-N-benzilo e a aminação redutora com o composto de carbonilo apropriado (por exemplo com formaldeído e cianoboro-hidreto de sódio) para introduzir R3 como metilo) para proporcionar o aminoácido N-benzil,N-R3-su-bstituído. O grupo de protecção N-benzilo é convenientemente removido (por exemplo por hidrogenação com um catalisador apropriado) para produzir o composto de Fórmula XXX. As condições específicas para este procedimento de alquilação de três etapas são descritas por Reinhold et al., J. Med. Chem., 1968, 11,258-260. -44-
<0 V V· Jr'™ L tf (·*" Λ A preparação imediatamente precedente pode tambérn ser empregue para introduzir uma porção R3 num intermediário de Fórmula Illa (que é um intermediário de Fórmula ΙΠ em que R3 é H).
Os aminoácidos utilizados nos presentes esquemas (por exemplo XL, XLII), se não estiverem disponíveis comercialmente, podem ser preparados por uma variedade de métodos conhecidos dos especialistas da técnica. Por exemplo, pode-se empregar a síntese de Strecker ou variações da mesma. Deste modo, um aldeído (R4 CHO), cianeto de sódio ou de potássio e cloreto de amónio reagem para formar o aminonitrilo correspondente. O aminonitrilo é hidrolisado com ácido mineral para formar o aminoácido de Fórmula XLII R4C(NH2)COOH desejado. Altemativamente, pode-se empregar o método de Bucherer-Berg, em que se forma uma hidantoína por aquecimento de um aldeído (R4CHO) com carbonato de amónio e cianeto de potássio, seguido por hidrólise (por exemplo, com hidróxido de bário em dioxano ao refluxo) com um ácido ou base para formar o aminoácido de Fórmula XLII R^ÍNH^COOH desejado.
Outros métodos para a síntese de α-aminoácidos são também referidos na literatura, o que permitirá que um especialista na técnica prepare o intermediário de Fórmula XLII R4C(NH2)COOH desejado para a síntese de compostos de Fórmula I. Métodos adequados para a síntese e/ou resolução de compostos de Fórmula XLII são encontrados em revistas e devem-se a Duthaler (Tetrahedron 1994, 50, 1539-1650), ou a Williams (R.M. Williams, Synthesis of optically active amino acids. Pergamon: Oxford, U.K., 1989).
Um método específico para a síntese de um intermediário de Fórmula XLII na forma enantiomérica a partir do intermediário R4X(X=C1, Br, -45- -45- c ·-£ ou I) correspondente é o procedimento de Pirrung e Krishnamurthy (J. Org. Chem. 1993, 58,957-958), ou o procedimento de 0’Donnell, et al., (J. Ambiente. Chem. Soc. 1989, 111, 2353-2355). Os intermediários R4X requeridos são prontamente preparados por muitos métodos familiares dos químicos especialista na técnica. Por exemplo, os compostos em que R4X é ArCH2X podem ser preparados por halogenação radical do composto ArCH3 ou por formilação do areno Ar-H e conversão do álcool no brometo.
Um outro método específico para a síntese do intermediário de Fórmula XLII na forma enantiomérica é o de Corey e Link (J. Ambiente. Chem. Soc. 1992, 114, 1906-1908). Deste modo, um intermediário de Fórmula R4COCCI3 é reduzido enantioespecificamente no intermediário R4CH(0H)CC13, o qual é convertido por tratamento com azeto e uma base num intermediário R4CH(N3)COOH, o qual é reduzido por hidrogenação catalítica no composto de Fórmula XLII desejado. A de triclorometilcetona requerida I^COCC^ é obtida por reacção do aldeído R4CHO com o anião triclorometido, seguida de oxidação (Gallina e Giordano, Synthesis 1989,466-468).
Um composto com a Fórmula R8NH2 ou RçNI^ é monoalquilado com um composto carbonilo correspondente a Rg ou R9, respectivamente, sob condições de aminação redutora apropriada, para proporcionar a amina de Fórmula RgRçNH. Para evitar a dialquilação, pode ser preferível proteger as aminas (R8NH2 ou Ι^ΝΗ2) com um grupo de protecção adequado PT para produzir R8(PT)NH ou R9(PT)NH, por exemplo por reacção com benzaldeído e um agente redutor. As aminas protegidas são monoalquiladas com um composto arbonilo correspondente a R$ ou Rs respectivamente, sob condições de aminação redutora adequadas, para produzir R8R9N(PT). O grupo de protecção (PT) é removido (por exemplo por hidrogenação catalítica exaustiva quando PT é benzilo) para produzir um composto de Fórmula RgR^NH. As condições de aminação redutora apropriadas estão disponíveis na literatura para um especialista na técnica. Estas condições incluem aquelas referidas por Borch et al. (J. Am. Chem. Soc. 1971, 2897-2904) e aquelas referidas por Emerson (Organic Reactions, Wiley: Nova Iorque, 1948 (14), 174), Hutchins et al. (Org. Prep. Proced. Int 1979 (11), 20, e Lane et al. (Synthesis 1975, 135). As condições de aminação redutora que favorecem a N-monoalquilação incluem aquelas referidas por Morales, et al. (Synthetic Communications 1984, 1213-1220) e Verardo et al. (Synthesis 1992 121-125). As aminas R8NH2 ou R9NH2 podem também ser monoalquiladas com R9X ou R8X, respectivamente, em que X é cloreto, brometo, tosilato ou mesilato. Altemativamente, um intermediário de Fórmula R8(PT)NH ou Rí>(Pt)NH pode ser alquilado com R^X ou R8X, e o grupo de protecção removido para proporcionar um composto de Fórmula R8Rt,NH. Métodos complementares podem ser empregues para preparar as aminas de Fórmula RgRgNH em que R8-NH ou R9-NH são ligados por oxigénio-azoto. Deste modo, um composto prontamente disponível de Fórmula alcoxicarbonil (CrC4)-NHOH ou NH2CONHOH é dialquilado sobre azoto e oxigénio por tratamento com base e um excesso de um agente de alquilação adequado (R-X) para proporcionar o alcoxicarbonil (Ci-C4)-N(R)OR correspondente que é então hidrolisado para proporcionar um composto de Fórmula RgRgNH (em que R8=R9=R). As condições adequadas, base e agente de alquilação incluem aqueles descritos por Goel e Krolls (Org. Prep. Proced. INt. 1987, 19, 75-78) e Major e Fleck (J. Am. Chem. Soc. 1928, 50, 1479). Altemativamente, a N-hidroxiureia (NH2CONH(OH) pode ser alquilada sequencialmente, primeiro sobre oxigénio para produzir NH2CONH(OR’), depois sobre azoto para produzir NH2CON(R”)(OR’), por tratamento sucessivo com agentes de alquilação R’X e R”X, respectivamente, na presença de uma base adequada. A base adequada e os agentes de alquilação incluem aqueles descritos por Kreutzkamp e Messinger (Chem. Ber. 100, 3463-3465 (1967) e Danen et al. (J. Am. Chem. Soc. 1973, 95, 5716-5724). A hidrólise destes derivados de hidroxiureia alquilados produz as aminas R’ONH2 e RONHR”, as quais correspondem a determinadas aminas de Fórmula RgRgNH. O químico especialista na técnica pode adaptar os procedimentos descritos neste parágrafo para outros agentes de alquilação R, R’ e R”-X para preparar outras aminas de Fórmula RgRgNH em que R8-N ou R9-N são ligados por oxigénio-azoto. Uno et al. (Synlett 1991, 559-560) descreve a adição catalisada por BF3 de um reagente organomctálico R-Li a uma oxima de Fórmula R’-CH=N-OR”, para proporcionar os compostos de Fórmula R’RCH-NH(OR”). Esta via pode também ser utilizada para proporcionar compostos de Fórmula RgRgNH em que um de RS-NH ou Rg-NH é ligado por oxigénio-azoto.
As pró-drogas deste invento, em que um grupo carboxilo num ácido carboxílico de Fórmula I é substituído por um éster, podem ser preparadas por combinação do ácido carboxílico com 0 haleto de alquilo apropriado na presença de uma base tal como carbonato de potássio num solvente inerte tal como dimetilformamida a uma temperatura de cerca de 0 a cerca de 100°C durante cerca de 1 a cerca de 24 horas. Altemativcamente, o ácido é combinado com 0 álcool apropriado como solvente na presença de uma quantidade catalítica de ácido tal como ácido sulfurico concentrado a uma temperatura de cerca de 20 a cerca de 120°C, de preferência ao refluxo, durante cerca de 1 hora a cerca de 24 horas. Um outro método é a reacção do ácido com uma quantidade estequiométrica do álcool na presença de uma quantidade catalítica de ácido num solvente inerte tal como tetra-hidrofurano, sendo a remoção concomitante da água produzida por meios físicos (por exemplo dispositivo Dean-Stark) ou químicos (por exemplo crivos moleculares).
As pró-drogas deste invento, em que uma função de álcool foi -48-
derivada como um éter, podem ser preparados por combinação do álcool com o brometo ou iodeto de alquilo apropriado na presença de uma base tal como carbonato de potássio num solvente inerte tal como dimetilformainida a uma temperatura de cerca de 0 a cerca de 100°C durante cerca de 1 a cerca de 24 horas. Os éteres de alcanoilaminometilo podem ser obtidos por reacção do álcool com bis-(alcanoilamino)metano na presença de uma quantidade catalítica de ácido num solvente inerte tal como tetra-hidrofurano, de acordo com o método descrito na Patente Norte Americana 4.997.984. Altemativamente, estes compostos podem ser preparados pelos métodos descritos por Hoffinan et al. em J. Org. Chem. 1994, 59, 3530.
Os ésteres de dialquilfosfato podem ser preparados por reacção do álcool com um clorofosfato de dialquilo na presença de uma base num solvente inerte, tal como tetra-hidrofurano. Os di-hidrogenofosfatos podem ser preparados por reacção do álcool com um clorofosfato de diarilo ou de dibenzilo, como descrito atrás, seguida de hidrólise ou hidrogenação na presença de um catalisador de metal nobre, respectivamente.
Os glicósidos são preparados por reacção do álcool e de um hidrato de carbono num solvente inerte tal como tolueno na presença de um ácido. Tipicamente, a água formada na reacção é removida à medida que vai sendo formada, como descrito anteriormente. Um procedimento alternativo é a reacção do álcool com um haleto de glicosilo protegido adequado na presença de uma base, seguida de desprotecção.
As N-(l-hidroxialquil) amidas, N-(l-hidroxi-l-(alcoxicarbonil)-metil) amidas ou os compostos em que R2 foi substituído por C(0H)C(0)0Y podem ser preparados pela reacção da amida ou indole de origem com o aldeído apropriado sob condições neutras ou básicas (por exemplo etóxido de sódio em -49- etanol) a temperaturas entre 25 e 70°C. Os N-alcoximetilindoles ou N-l-(al-coxi)alquilindoles podem ser obtidos por reacção do N-indole insubstituído com haleto de alquilo necessário na presença de uma base num solvente inerte. O l-(N,N-dialquilaminometil)indole, l-(l-(N,N-dialquilamino)etil)indole e as N,N--dialquilaminometil-amidas (por exemplo R3 = CH2N(CH3)2) podem ser preparados pela reacção do composto N-H de origem com o aldeído e amina apropriados num solvente alcóolico a 25 a 70°C.
As pró-drogas deste invento em que R2 e R3 são um carbono comum podem ser preparadas por reacção do composto progenitor (droga) com benzaldeído ou uma cetona ou o seu acetal dimetílico num solvente inerte na presença de uma quantidade catalítica de ácido com remoção da água ou metanol concomitante.
Os materiais de partida e reagentes para os esquemas de reacção atrás descritos (por exemplo, aminas, ácidos indolecarboxílicos substituídos, ácidos indolinocarboxílicos substituídos, aminoácidos), embora a preparação da maioria deles seja descrita anteriormente, estão também prontamente disponíveis ou podem ser facilmente sintetizados pelos especialistas na técnica por utilização de métodos convencionais da síntese orgânica. Por exemplo, muitos dos intermediários aqui utilizados para preparar os compostos de Fórmula I ou são, ou estão relacionados com, ou são derivados de aminoácidos naturais, dos quais há um grande interesse científico e necessidade comercial, e deste modo muitos destes intermediários encontram-se disponíveis comercialmente ou são referidos na literatura ou são facilmente preparáveis a partir de outras substâncias normalmente disponíveis por métodos que são referidos na literatura. Estes intermediários incluem, por exemplo, os compostos de Fórmula XXX, Fórmula XLII, Fórmula XXXTT e Fórmula ΧΧΧΙΠ.
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Alguns compostos de Fórmula I possuem átomos de carbono assimétricos e por isso são enantiómeros ou diastereómeros. As misturas diastereoméricas podem ser separadas nos seus diastereómeros individuais na base das suas diferenças físico-químicas por métodos conhecidos per se, por exemplo por cromatografia e/ou cristalização fiaccionada. Os enantiómeros (por exemplo, de Fórmula III, VIII ou IX) podem separados por conversão da mistura enantiomérica numa mistura diastereomérica por reacção com um composto opticamente activo apropriado (por exemplo, álcool), separação dos diastereómeros e conversão (por exemplo, por hidrólise) dos diastereómeros individuais nos enantiómeros puros correspondentes. Todos estes isómeros, incluindo diastereómeros, enantiómeros e misturas dos mesmos são considerados como parte deste invento.
Embora muitos compostos deste invento não sejam ionizáveis sob condições fisiológicas, alguns dos compostos deste invento são ionizáveis sob condições fisiológicas. Deste modo, por exemplo alguns dos compostos deste invento são ácidos e formam um sal com um catião farmaceuticamente aceitável. Todos estes sais estão dentro do âmbito deste invento e podem ser preparados por métodos convencionais. Por exemplo, eles podem ser preparados simplesmente por contacto das entidades ácidas e básicas, normalmente segundo uma relação estequiométrica, num meio aquoso, não-aquoso ou parcialmente aquoso, como for conveniente. Os sais são recolhidos por filtração, por precipitação com um não solvente seguido por filtração, por evaporação do solvente, ou, no caso de soluções aquosas, por liofilização, como for conveniente.
Além disso, alguns dos compostos deste invento são básicos, e formam um sal com um anião farmaceuticamente aceitável. Todos estes sais estão dentro do âmbito deste invento e podem ser preparados por métodos convencionais. Por exemplo, eles podem ser preparados simplesmente por η -51 - contacto das entidades ácidas e básicas, normalmente numa relação estequio-métrica, num meio aquoso, não aquoso ou parcialmente aquoso, como for conveniente. Os sais são recolhidos ou por filtração, ou por precipitação com um não solvente seguido por filtração, ou por evaporação do solvente, ou no caso de soluções aquosas, por liofilização, como conveniente. Além disso, quando os compostos deste invento formam hidratos ou solvatos, eles estão também dentro do âmbito do invento. A utilidade dos compostos do presente invento como agentes médicos para o tratamento de doenças metabólicas (tal como pormenorizado aqui) em mamíferos (por exemplo, seres humanos) é demonstrada pela actividade dos compostos deste invento em ensaios convencionais e em ensaios in vitro e in vivo descritos a seguir. Tais ensaios também proporcionam um meio pelo qual as actividades dos compostos deste invento podem ser comparadas com as de outros compostos conhecidos. Os resultados destas comparações são úteis para a determinação dos níveis de dosagem em mamíferos, incluindo seres humanos, para o tratamento destas doenças. A fosforilase de glicogénio de fígado humano purificado a (FGFHa) é obtida pelo seguinte procedimento.
Expressão e fermentação O FGFH cDNA é expresso a partir do plasmídeo pKK233-2 (Pharmacia Biotech. Inc., Piscataway, Nova Jersei) na estirpe E. Coli XL-1 Azul (Stratagene Cloning Systems, LaJolla, CA). A estirpe é inoculada em meio LB (que consiste em 10 g de triptona, 5 g de extracto de fermento, 5 g de NaCl e 1 ml de NaOH IN por litro) ao qual se adicionaram 100 mg/L de ampicilina, 100 mg/L de piridoxina e 600 mg/L de MnCl2 e é desenvolvida a 37°C para uma densidade -52- celular de OD550 = 1,0. Nesta altura, as células são induzidas com lmM dc isopropil-1 -tio-P-D-galactósido (IPTG). Ao fim de três horas após indução, as células são colhidas por centrifugação e as peletes de células são congeladas a -70°C, até serem necessárias para purificação.
Purificação de Fosforilase de Glicogénio:
As células nas peletes atrás descritas são ressuspensas em β -glicerolfosfato 25 mM (pH 7,0) com DTT 0,2 mM, MgCl2 1 mM, mais os seguintes inibidores de protease: 0,7 pg/mL Pepstatina A 0,5 pg/mL Leupeptina 0,2 mM Fluoreto de fenilmetilsulfonilo (PMSF), e 0,5 mM EDTA, é-lhes provocada lise por pré-tratamento com lisozima a 200 pg/mL e DNAase 3 pg/mL, seguida por sonicação em porções de 250 mL durante 5 x 1,5 minutos sobre gelo por utilização de um disruptor celular ultrassónico Branson Model 450 (Branson Sonic Power Co., Danbury CT). Os lisados são separados por centrifugação a 35.000 x g durante uma hora, seguida de filtração através de filtros de 0,45 mícrons. O FGFH na fracção solúvel dos lisados (estimado ser menos do que 1% da proteína total) é purificado por controlo da actividade enzimática (como descrito na secção Ensaio de Actividade de FGFHa mais adiante) a partir de uma série de etapas cromatográficas pormenorizadas a seguir.
Cromatografia de Afinidade Metálica Imobilizada (CAMD:
Esta etapa é baseada no método de Luong et al. (Luong et al. Jornal de Cromatografia (1992) 584, 77-84). 500 mL da fracção solúvel filtrada dos lisados celulares (preparados a partir de aproximadamente 160 g de peletes de -53- -53- -j· r /<ίν. células originais) são inlxoduzidos numa coluna de 130 inL de CAMI de Sepharose quelante (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, Nova Jersei) a qual foi carregada com CuCl2 50 mM e β-glicerofosfato 25 mM, NaCl 250 mM e imidazole 1 mM num tampão de equilíbrio de pH 7. A coluna é lavada com o tampão de equilíbrio até o A28o regressar à linha de base. A amostra é então eluída da coluna com o mesmo tampão contendo imidazole 100 mM para remover o FGFH ligado e outras proteínas ligadas. As fracções que contêm a actividade FGFH são reunidas (aproximadamente 600 mL) e adicionam-se ácido etilenodiaminotetraacético (AEDT), DL-ditiotreitol (DTT), fluoreto de fenilmetilsulfonilo (FPMS), leuptina e pepstatina A para se obterem concentrações respectivamente de 0,3 mM, 0,2 mM, 0,2 mM, 0,5 pg/mL e 0,7 μ g/mL. O FGFH reunido é dessalinizado sobre uma coluna de Sephadex G-25 (Sigma Chemical Co., São Luis, Missouri) equilibrada com 25 mM de Tris-HCl (pH 7,3), 3 mM de tampão DTT (Tampão A) para remover o imidazole e é armazenado sobre gelo até à segunda etapa cromatográfíca.
Cromatografia de 5'-MFA-Sepharose: A amostra de FGFH dessalinizada reunida (aproximadamente 600 mL) é a seguir misturada com 70 mL de 5’-MFA-Sepharose (Pharmacia LKB Biotechnology, Piscataway, Nova Jersei) a qual foi equilibrada com o Tampão A (ver anteriormente). A mistura é suavemente agitada durante uma hora a 22°C, depois é embalada numa coluna e é lavada com o Tampão A até ο A280 regressar à linha de base. O FGFH e as outras proteínas são eluídas da coluna com Tris-HCl 25 mM, DTT 0,2 mM e 5’-monofosfato de adenosina (MFA) 10 mM a pH 7,3 (Tampão B). As fracções que contêm FGFH são reunidas a seguir à identificação por determinação da actividade enzimática (descrita a seguir) e visualização do M, aproximadamente 97 kdal de banda de proteína de FGFH por electroforese de gel de dodecilsulfato de sódio poliacrilamida (EGPA-SDS), -54- il .»>aa^gUf^o \ seguida de manchamcnto com prata (2D-silver Stain II “Daiichi Kit”, Daiichi Pure Chemicals Co., LTD., Tokyo, Japão) e reunião das mesmas. O FGFH reunido é dializado em β-glicerofosfato 25 mM, DTT 0,2 mM, AEDT 0,3 mM, NaCl 200 mM, tampão pH 7,0 (Tampão C) e é armazenado sobre gelo até à rcspcctiva utilização.
Determinação da Actividade da Enzima FGFH: A) Activacão de FGFH: Conversão de FGFHb em FGFHa
Antes da determinação da actividade da enzima FGFH, a enzima é convertida a partir da forma inactiva como expresso na estirpe E. Coli XL-1 Azul (designada por FGFHb) (Stragene Cloning Systems, La Jolla, Califórnia) na forma activa (designada por FGFHa) por fosforilação de FGFH por utilização de fosforilase quinase da forma seguinte:
Reaccão de FGFHb com Fosforilase Ouinase Imobilizada A fosforilase quinase (Sigma Chemical Company, São Luis, MO) é imobilizada sobre Affi-Gel 10 (BioRad Corp., Melvele, NI) de acordo com as instruções do fabricante. Em resumo, a enzima fosforilase quinase (10 mg) é incubada com pérolas de Affi-Gel lavadas (1 mL) em 2,5 mL de HEPES 100 mM e CaCl2 80 mM a pH 7,4 durante 4 horas a 4°C. As pérolas Affi-Gel são então lavadas uma vez com o mesmo tampão, antes de serem bloqueadas com HEPES 50 mM e éster metílico de glicina 1 M a pH 8,0 durante uma hora à temperatura ambiente. O tampão de bloqueamento é removido e substituído por HEPES 50 mM (pH 7,4), β-mercaptoetanol 1 mM e NaN3 a 0,2% para armazenamento. Antes da utilização para a conversão de FGFHb em FGFHa, as pérolas de fosforilase quinase imobilizadas de Affi-Gel são equilibradas por lavagem no -55- -55-
Çí tampão utilizado para levar a cabo a rcacção de quinase, o qual consiste em β -glicerolfosfato 25 mM, DTT 0,3 mM e AEDT 0,3 mM a pH 7,8 (tampão de ensaio de quinase). O FGFHb inactivo, parcialmente purificado, obtido da cromatografía de 5’-MFA-Sepharose anterior é diluído a 1:10 com o tampão de ensaio de quinase, depois é misturado com a enzima fosforilase quinase atrás mencionada que foi imobilizada sobre as pérolas de Affi-Gel. O NaATP é adicionado para 5 mM e MgCl2 para 6 mM. A mistura resultante é misturada suavemente a 25°C durante 30 a 60 minutos. A amostra é removida das pérolas e a activação em percentagem de FGFHb por conversão em FGFHa é estimada por determinação da actividade da enzima FGFH na presença e ausência de 3,3 mM de MFA. A percentagem da actividade da enzima FGFH devido à actividade da enzima FGFHa (independente de MFA) é então calculada como se segue:
Actividade FGFH - MFA % do FGFH total como FGFHa =-
Actividade FGFH - MFA B) Ensaio de Actividade de FGFHa A actividade hipoglicémica (também as outras actividades de tratamento/prevenção da doença/estado aqui descritas) dos compostos deste invento pode ser determinada indirectamente por estabelecimento do efeito dos compostos deste invento sobre a actividade da forma aclivada de fosforilase de glicogénio (GPa) por um de dois métodos: a actividade de fosforilase de glicogénio a é medida segundo a direcção para a frente por controlo da produção de glicose-1-fosfato a partir de glicogénio ou por seguimento da reacção inversa, medindo a síntese de glicogénio a partir de glicose-1-fosfato através da libertação -56-
de fosfato inorgânico. Todas as reacções são realizadas cm triplicado cm placas microtitulação de 96 cavidades e a variação da absorvância devido à formação do produto de reacção é medida ao comprimento de onda especificado a seguir, num Elisa Reader MCC/340 MKII (Lab Systems, Filândia), ligado a um Titertech Microplate Stacker (ICN Biomedical Co., Huntsville, Alabama).
Para medir a actividade da enzima FGFHa segundo a direcção para a frente, a produção de glicose-1-fosfato a partir de glicogénio é controlada pelo método geral ligado à multienzima de Pesce et al. [Pesce, Μ. A., Bodourian, S.H., Harris, R.C. e Nicholson, J.F. (1977) Clinicai Chemistry 23, 1711-1717] modificado da forma seguinte: 1 a 100 pg de fosforilase a, 10 unidades de fosfoglucomutase e 15 unidades de desidrogenase de glicose-6-fosfato (Boehringer Mannheim Biochemicals, Indianapolis, IN) são diluídos em 1 mL do Tampão A (descrito atrás). O Tampão A está ao pH 7,2 e contém HEPES 50 mM, KC1 100 mM, ácido etilenoglicoltetraacético (AEGT) 2,5 mM, MgCl2 2,5 mM, KH2P04 3,5 mM e ditiotreitol 0,5 mM. 20 μΐ desta substância de armazenagem é adicionada a 80μ1 do Tampão A, o qual contém 0,47 mg/mL de glicogénio, 9,4 mM de glicose e 0,63 mM da forma oxidada de fosfato de dinucleótido nicotinamida-adenina (FDAN+). Os compostos a serem testados são adicionados como 5 μΐ de solução em 14% de dimetilsulfóxido (DMSO) antes da adição às enzimas. A taxa fundamental de actividade da enzima de FGFHa na ausência de inibidores é determinada pela adição de 5 pL de 14% de DMSO e obtém-se uma taxa de inibição total da actividade da enzima FGFHa por adição de 20 pL de 50 mM da substância de ensaio de controlo positivo, cafeína. A reacção é continuada à temperatura ambiente por medição da conversão de FDAN+ oxidada para reduzir o FDANH a 340 nm.
Para medir a actividade da enzima FGFHa na direcção inversa, a conversão de glicose-1-fosfato em glicogénio mais fosfato inorgânico é medida -57- Λ· y r 3 ί' ) ’ pelo método geral descrito por Engers et al. [Engcrs, H.D., Shechossky, S. e Madsen, N.B. (1970) Can. J. Biochem. 48, 746-754] modificado da forma seguinte: 1 a 100 μg de FGFHa são diluídos para 1 mL no Tampão B (descrito a seguir). O Tampão B está ao pH de 7,2 e contém HEPES 50 mM, KC1, AEGT 2,5 mM, MgCl2 2,5 mM e ditiotreitol 0,5 mM. 20 pL desta substância de armazenagem é adicionada a 80 pL do Tampão B com 1,25 mg/mL de glicogénio, glicose 9,4 mM e glicose-1-fosfato 0,63 mM. Os compostos a serem testados são adicionados como 5 pL de solução em 14 % de DMSO antes da adição da enzima. A taxa fundamental de actividade da enzima FGFHa na ausência de inibidores adicionados é determinada pela adição de 5 pL de 14 % de DMSO e obtém-se uma taxa de inibição total da actividade da enzima FGFHa pela adição de 20 pL de 50 mM de cafeína. Esta mistura é incubada à temperatura ambiente durante 1 hora e o fosfato inorgânico libertado do glicose-1-fosfato é medido pelo método geral de Lanzetta et al. [Lanzetta, P.A., Alvarez, L.J., Reinach, P.S. e Candia, O.A. (1979) Anal. Biochem. 100, 95-97] modificado da forma seguinte: 150 pL de 10 mg/mL de molibdato de amónio e 0,38 mg/mL de malaquite verde em HC1 IN são adicionados a 100 pL da mistura de enzimas. Ao fim de 20 minutos de incubação à temperatura ambiente, a absorvância é medida a 620 nm.
Os compostos deste invento são adaptados prontamente à utilização clinica como agente hipoglicémicos. A actividade hipoglicémica dos compostos deste invento pode ser determinada pela quantidade de composto de ensaio que reduz os níveis de glicose relativamente a um veículo sem o composto de ensaio em ratinhos machos ob/ob. O ensaio também permite a determinação de uma dose eficaz mínima aproximada (DEM) para a redução in vivo da concentração de glicose no plasma nestes ratinhos para estes compostos de ensaio.
Uma vez que a concentração de glicose no sangue está fortemente -58-
χ^χ relacionada com o desenvolvimento de perturbações diabéticas, estes compostos em virtude da sua acção hipoglicémica, previnem, estabilizam e/ou regridem as perturbações diabéticas.
Ratinhos machos C57BL/6J-ob/ob de cinco a oito semanas de idade (provenientes do Jackson Laboratory, Bar Harbor, MED) são alojados, cinco por gaiola, sob práticas correntes de cuidados animais. Ao fim de um período de aclimatação de uma semana, os animais são pesados e recolhem-se 25 microlitros de sangue das cavidades retro-orbitais antes de qualquer tratamento. A amostra de sangue é imediatamente diluída a 1:5 com salina contendo 0,025% de heparina sódica, e é mantida em gelo para análise de metabolitos. Os animais são distribuídos em grupos de tratamento, de modo que cada grupo possua um meio similar para a concentração de plasma. Depois da distribuição por grupos, os animais são doseados por via oral e diariamente, durante quatro dias, com o veículo que consiste em: ou 1) metilcelulose a 0,25% p/v em água sem ajuste de pH; ou 2) Agente Tensio Activo de Copolímero de Blocos Pluronic PI05 (BASF Corporation, Parsippany, NI) a 0,1 % em salina a 0,1 % sem ajuste de pH. No dia 5, os animais são novamente pesados e depois doseados oralmente com o composto de ensaio ou com o veículo isoladamente. Todas as drogas são administradas conjuntamente com o veículo, o qual consiste em: ou 1) metilcelulose a 0,25% p/v em água sem ajuste de pH; ou 2) 10% de DMSO/0,1 % de Pluronic® PI05 (BASF Corporation, Parsippany, NI) em salina a 0,1% sem ajuste do pH. Os animais são então sangrados pela cavidade retro-orbital três horas depois para determinação dos níveis de metabolito no sangue. As amostras acabadas de recolher são centrífugadas durante dois minutos a 10.000 x g à temperatura ambiente. O sobrenadante é analisado relativamente à glicose, por exemplo, pelo Abbott VP™ (Abbott Laboratories, Diagnostics Division, Irving, TX) e VP Super System® Autoanalyzer (Abbott Laboratories, Irving), por utilização do sistema reagente de Ensaio A-Gent™ Glucose-UV (Abbott
Laboratories, Irving) (uma modificação do método de Richterich e Dauwaldcr, Schweizerische Medizinische Wochenschrift, 101, 860 (1971)) (método hexoquinase) por utilização de um padrão de 100 mg/dL. A glicose no plasma é então calculada pela equação:
Glicose no Plasma (mg/dL) = Valor da Amostra x J x 1,784 — 8,92 x Valor da Amostra em que 5 é o factor de diluição e 1,784 é o ajuste de hematócrito do plasma (assumindo que o hematócrito é 44%).
Os animais doseados com o veículo mantêm praticametne inalterados os níveis de glicose hiperglicémicos (por exemplo, maiores ou iguais a 250 mg/dL). Os animais tratados com doses adequadas dos compostos de ensaio apresentam níveis de glicose significativamente menores. A actividade hipoglicémica dos compostos de ensaio é determinada pela análise estatística (teste t não emparelhado) da concentração média de glicose no plasma entre o grupo do composto de ensaio e o grupo tratado com o veículo no dia 5. O ensaio anterior efectuado com uma gama de doses dos compostos de ensaio permite a determinação de um valor de dose eficaz mínima aproximada (DEM) para a redução in vivo da concentração de glicose no plasma.
Os compostos deste invento são prontamente adaptados para utilização clínica como agentes inversores da hiperinsulinemia, agentes diminuidores do nível de triglicérido e agentes hipocolesterolémicos. Esta actividade pode ser determinada pela quantidade do composto de ensaio que reduz os níveis de insulina, triglicéridos ou colesterol relativamente a um veículo de controlo, sem composto de ensaio em ratinhos machos ob/ob.
Uma vez que a concentração de colesterol no sangue está relacionada com o desenvolvimento de perturbações cardiovasculares, vasculares cerebrais ou vasculares periféricas, os compostos deste invento em virtude da sua -60- -60-
I |ί acção hipocolesterolémica, previnem, estabilizam e/ou fazem regredir a aterosclerose.
Uma vez que a concentração de insulina no sangue está relacionada com a promoção do crescimento das células vasculares e com o aumento da retenção de sódio renal (para além de outras acções, por exemplo a promoção da utilização da glicose) e estas funções são causas conhecidas da hipertensão, os compostos deste invento em virtude da sua acção hipoinsulinémica, previnem, estabilizam e/ou fazem regredir a hipertensão.
Uma vez que a concentração de triglicéridos no sangue contribui para os níveis totais de lípidos no sangue, os compostos deste invento em virtude da sua actividade de abaixamento dos triglicéridos previnem, estabilizam e/ou fazem regredir a hiperlipidemia.
Ratinhos machos C57BL/6J-ob/ob de cinco a oito semanas de idade (provenientes do Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME) são alojados, cinco por gaiola, sob práticas de cuidados animais correntes e alimentados ad libitum com uma dieta corrente para roedores. Ao fim de um período de aclimatação de uma semana, os animais são pesados e recolhem 25 microlitros de sangue das cavidades retro-orbitais antes de qualquer tratamento. A amostra de sangue é imediatamente diluída 1:5 com salina contendo 0,025% de heparina sódica, e é mantida em gelo para análise de glicose no plasma. Os animais são distribuídos por grupos de tratamento de modo que cada grupo possua um meio similar para a concentração de glicose no plasma. O composto a ser ensaiado é administrado por sonda oral na forma de uma solução a cerca de 0,02% a 2,0% (peso/volume (p/v)) em 1) ou 10% de DMSO/0,1% de Agente Tensioactivo de Copolímero de Blocos Pluronic® PI05 (BASF Corporation, Parsippany, NI) em salina a 0,1% sem ajuste de pH ou 2) metilcelulose a 0,25% p/v em água sem ajuste de pH. -61-
Doses diárias individuais (d.d.i.) ou duas doses diárias (d.d.d.) são mantidas durante 1 a 15 dias. Os ratinhos de controlo recebem a solução de 10% de DMSO/0,1% de Pluronic® PI05 em salina a 0,1% sem ajuste de pH ou metilcelulose a 0,25% p/v em água sem ajuste de pH apenas.
Três horas após a administração da última dose, os animais são sacrificados por decapitação e o sangue do tronco é recolhido em tubos separadores de soro de 0,5 mL contendo 3,6 mg de uma mistura de 1:1 peso/peso de fluorcto de sódio:oxalato de potássio. As amostras acabadas de recolher são ccntrifugadas durante dois minutos a 10.000 x g à temperatura ambiente e o soro sobrenadante é transferido e diluído a 1:1 volume/volume com uma solução de aprotinina 1 TIU/mL em salina a 0,1% sem ajuste do pH.
As amostras de soro diluídas são então armazenadas a -80°C até à análise. As amostras de soro diluídas descongeladas são analizadas quanto aos níveis de insulina, triglicéridos e colesterol. A concentração de insulina no soro é determinada por utilização de equipamentos Equate RIA INSULIN (método de anticorpos duplos; como especificado pelo fabricante) adquiridos na Binax, Portland Sul, ME. O coeficiente de variação interensaios é < 10%. Os triglicéridos de soro são determinados por utilização do Autoanalizador da Abbott VP™ e VP Súper System® (Abbott Laboratories, Irving, TX), por utilização do sistema de reagentes de Ensaio de Triglicéridos (Abbott Laboratories, diagnosties Division, Irving, TX) (método da enzima ligado a lipase; uma modificação do método de Sampson, et al., Clinicai Chemestry 21, 1983 (1975)). Os níveis totais de colesterol no sangue são determinados por utilização do Autoanalizador Abbott VP™ e VP Super System® (Abbott Laboratories, Irving, TX), e sistema de reagentes de Ensaio de Colesterol A-Gent (método de enzima ligado a esterase de colesterol; uma modificação do método de Allain, et al. Química Clínica 20, 470 (1974)) por utilização de -62- padrões de 100 e 300 mg/dL. Os níveis de insulina, de triglicéridos e de colesterol total no soro são então calculados pelas equações,
Insulina no soro (pU/mL) = valor da amostra x 2 Triglicéridos no soro (mg/dL) = valor da amostra x 2 Colesterol total no soro (mg/dL) = valor da amostra x 2, em que 2 é o factor de diluição.
Os animais doseados com o veículo mantêm praticamente inalterados os níveis elevados de insulina no soro (por exemplo 225 pU/mL), de triglicéridos no soro (por exemplo 225 mg/dL) e do colesterol total no soro (por exemplo 160 mg/dL), ao passo que os animais tratados com os compostos de ensaio deste invento apresentam de uma maneira geral níveis reduzidos de insulina, triglicéridos e de colesterol total no soro. A actividade diminuidora dos níveis de insulina, de triglicéridos e de colesterol total no soro dos compostos de ensaio é determinada por análise estatística (teste t não emparelhado) da concentração média de insulina, de triglicéridos e de colesterol total no soro entre o grupo do composto de ensaio e o grupo de controlo tratado com o veículo. A actividade de proporcionar protecção contra danos no tecido cardíaco para os compostos deste invento pode ser demonstrada in vitro ao longo das linhas apresentadas em Butwell et al., Am. J. Physiol., 264, H1884-H1889, 1993 e Allard et al., Am. J. Physio., 1994, 267. H66-H74. Experiências são levadas a cabo por utilização de uma preparação de coração de ratazana isolada isovolúmica, essencialmente como descrito no artigo atrás referenciado. Ratazanas machos normais Sprague-Dawley, ratazanas machos Sprague-Dawley tratadas de modo a apresentarem hipertrofia cardíaca através de uma operação de ligação aórtica, ratazanas machos fortemente diabéticas BB/W, ou ratazanas de controlo de idade correspondente não diabéticas BB/W são pré-tratadas com -63- heparina (1000 u, i.p.), seguida de pentobarbital (65mg/kg, i.p.). Após a anestesia profunda ter sido obtida como determinado pela ausência de um reflexo no pé, o coração é rapidamente extirpado e colocado em salina gelada. O coração é submetido a perfusão inversa através da aorta durante 2 minutos. A taxa cardíaca e a pressão ventricular são determinadas por utilização de um balão de látex no ventrículo esquerdo com um tubo de alta pressão ligado a um transdutor de pressão. O coração é submetido a perfusão com uma solução de perfusão que consiste em (mM)NaCl 118, KC1 4,7, CaCl21,2, MgCl2 1,2, NaHC03 25, glicose 11. O aparelho de perfusão está dotado de controlo apertado da temperatura por meio de banhos aquecidos utilizados para a solução de perfusão e para o encamisamento de água em tomo do tubo de perfusão para manter a temperatura do coração a 37°C. A oxigenação da solução de perfusão é proporcionada por meio de um oxigenador pediátrico de fibra oca (Capiax, Terumo Corp., Tokyo, Japão) imediatamente junto ao coração. Os corações são expostos à solução de perfusão ± composto de ensaio durante cerca de 10 minutos ou mais, seguindo-se 20 minutos de isquemia global e 60 minutos de reperfusão na ausência do composto de ensaio. As pulsações dos corações de controlo e dos tratados com o composto de ensaio são comparadas no período a seguir à isquemia. A pressão ventricular esquerda dos corações de controlo e dos tratados com o composto de ensaio é comparada no período a seguir à isquemia. No final da experiência, os corações são também submetidos a perfusão e manchados para se determinar a relação entre a área de enfarte e a área sob risco (% IA/AAR) como descrito a seguir.
Os efeitos terapêuticos dos compostos deste invento na prevenção dos danos nos tecidos cardíacos resultam de outro modo de uma ofensa isquémica podem também ser demonstrados in vivo ao longo das linhas apresentadas em Liu et al., Circulation, Vol. 84, No. 1, (Julho de 1991), como descrito especificamente aqui. Os ensaios in vivo testam a cardioprotecção do composto -64-
de ensaio em relação ao grupo de controlo que recebe o veículo salina. Como informação de suporte, note-se que breves períodos de isquemia do miocárdio seguidos de reperfusão das artérias coronárias protege o coração da isquemia do miocárdio aguda subsequente (Murry et al., Circulation 74: 1124-1136,1986). A cardioprotecção, como indicado pela redução do miocárdio enfartado, pode ser induzida farmacologicamente por utilização de agonistas do receptor de adenosina administrados intravenosamente em estudos de coelhos anestesiados, intactos, como um modelo in situ do pré-condicionamento isquémico do miocárdio (Liu et al., Circulation 84:350-356, 1991). O ensaio in vivo testa se os compostos podem induzir farmacologicamente a cardioprotecção, i.e., se reduzem a dimensão do enfarte do miocárdio, quando administrados parentericamente a coelhos anestesiados intactos. Os efeitos dos compostos deste invento podem ser comparados ao précondicionamento isquémico por utilização do agonista de adenosina Al, N6-1 -(fenil-2R-isopropil)-adenosina (PIA) que foi demonstrado induzir farmacologicamente a cardioprotecção em coelhos anestesiados intactos estudados in situ Liu et al., Circulation 84:350-356, 1991). A metodologia exacta é descrita a seguir. Cirurgia: Coelhos machos brancos da Nova Zelândia (3-4 kg) são anestesiados com pentobarbital sódico (30 mg/kg, i.v.). Uma traqueotomia é efectuada via uma incisão cervical central abdominal e os coelhos são ventilados com 100% de oxigénio por utilização de um ventilador de pressão positiva. Os catéteres são colocados na veia jugular esquerda para administração da droga e na artéria carótida esquerda para medições da pressão sanguínea. Os corações são então expostos através de uma toracotomia esquerda e coloca-se um laço (seda 00) em tomo de uma ramificação proeminente da artéria coronária esquerda. A isquemia é induzida por aperto do laço e colocação do mesmo em posição. A libertação do laço deixou que a área afectada fosse sujeita a reperfusão. A isqemia do miocárdio é evidenciada pela cianose regional; a reperfusão foi evidenciada pela hiperemia reactiva.
Protocolo: Uma vez que a pressão arterial e o ritmo cardíaco tenham ficado estáveis durante pelo menos 30 minutos, a experiência é iniciada. O pré-condicionamento isquémico é induzido por oclusão por duas vezes da artéria coronária durante 5 minutos, seguida por reperfusão durante 10 minutos. O pré-condicionamento farmacológico é induzido por infusão por duas vezes do composto de ensaio durante, por exemplo S minutos e permitindo um repouso durante 10 minutos antes de outra intervenção, ou por infusão do agonista de adenosina, PIA (0,25 mg/kg). A seguir ao pré-condicionamento isquémico, pré-condicionamento farmacológico ou a seguir a nenhum pré-condicionamento (veículo de controlo não condicionado), a artéria é ocludida durante 30 minutos e depois é submetida a reperfusão durante duas horas para induzir o enfarte do miocárdio. O composto de ensaio e PIA são dissolvidos em salina ou noutro veículo adequado e são administrados a 1 a 5 ml/kg, respectivamente.
Manchamento (Liu et al., Circulation 84:350-356, 1991): No final do período de reperfusão de duas horas, os corações são removidos rapidamente, são suspensos num aparelho de Langendorff, e são lavados durante um minuto com um jacto de salina normal aquecido até à temperatura do corpo (38°C). A sutura de seda utilizada como laço é então apertada fortemente para reocludir a artéria e uma suspensão de 0,5% de partículas fluorescentes (1-10 μτη) é infundida com o perfusato para manchar todo o miocárdio, excepto a área sob risco (ventrículo não fluorescente). Os corações são então congelados rapidamente e armazenados durante a noite a -20°C. No dia seguinte, os corações são cortados em fatias de 2 mm e manchados com cloreto de trifeniltetrazólio a 1% (CTT). Uma vez que o CTT reage com os tecidos vivos, esta mancha diferencia os tecidos vivos (tecidos vermelhos) dos tecidos mortos (tecidos com enfarte não manchados). A área com enfarte (não manchada) e a área sob risco (sem partículas fluorescentes) são calculadas para cada fatia de ventrículo esquerdo por utilização de um analizador de imagem pré-calibrado. Para normalizar os danos isquémicos para se obterem -66- Λ' / i ί-·. V. » d t 'tf!·. as diferenças na área sob risco entre corações, os dados são expressos como a relação da área com enfarte vs. a área sob risco (% AI/ASR). Todos os dados são expressos como a Média ± DMP e são comparados estatisticamente por utilização do factor ANOVA ou o teste t não emparelhado. A significância é considerada como p < 0,05. A administração dos compostos deste invento pode ser feita por meio de qualquer método que forneça um composto deste invento de preferência ao fígado e/ou tecidos cardíacos. Estes métodos incluem as vias orais, parentéricas, intraduodenais, etc. Normalmente, os compostos do presente invento são administrados em doses individuais (por exemplo, um vez ao dia) ou múltiplas.
Contudo, a quantidade e a altura de administração dos compostos estará dependente, evidentemente, do estado particular a tratar, do indivíduo a tratar, da gravidade do estado, da forma de administração e do julgamento do médico assistente. Assim, devido à variabilidade de doente para doente, as dosagens dadas a seguir são indicadores para que o médico possa titular as doses da droga para atingir a actividade (por exemplo, actividade de abaixamento do nível de glicose) que o médico considere apropriada para o doente. Ao pensar no grau de actividade desejado, o médico deve considerar uma série de factores tais como o nível de partida, outros factores de risco (cardiovascular), a presença de uma doença pré-existente, e idade do doente e respectiva motivação.
De uma maneira geral, uma dosagem eficaz para as actividades deste invento, por exemplo, glicose sanguínea, triglicéridos e actividades de abaixamento do nível de colesterol e actividades de regressão da hiperinsulinemia dos compostos deste invento, está na gama de 0,005 a 50 mg/kg/dia, de preferência de 0,01 a 25 mg/kg/dia e com maior preferência de 0,1 a 15 mg/kg/dia. -67-
De uma maneira geral, os compostos deste invento são administrados oralmente, mas a administração parentética (por exemplo, intravenosa, intramuscular, subcutânea ou intramedular) pode ser utilizada, por exemplo, quando a administração oral é inadequada para o objectivo presente, ou quando o doente é incapaz de ingerir a droga. A administração tópica pode também ser indicada, por exemplo, quando o doente sofre de perturbações gastrointestinais ou quando a medicação é melhor aplicada à superfície de um tecido ou órgão, como determinado pelo médico.
Os compostos do presente invento são geralmente administrados na forma de uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um dos compostos deste invento em conjunto com um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. Deste modo, os compostos deste invento podem ser administrados individualmente ou em conjunto em qualquer forma de dosagem convencional oral, parentérica ou transdérmica.
Para administração oral, uma composição farmacêutica pode tomar a forma de soluções, suspensões, comprimidos, pílulas, cápsulas, pós, etc. Os comprimidos que contêm vários excipientes tais como citrato de sódio, carbonato de sódio e fosfato de cálcio são empregues conjuntamente com vários desintegrantes, tais como amido e de preferência amido de batata e de tapioca e determinados silicatos complexos, em conjunto com agentes de ligação tais como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e acácia. Além disso, os agentes de lubrificação tais como estearato de magnésio, laurilsulfato de sódio e talco são frequentemente muito úteis para fins de fabricação de comprimidos. As composições sólidas de um tipo similar são também empregues como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina cheias macias e duras; os materiais preferidos neste contexto também incluem a lactose ou o açúcar de leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular. Quando as suspensões aquosas e/ou elixires são desejados para administração oral, os compostos deste invento podem ser combinados com vários agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes corantes, agentes emulsionadores e/ou agentes de suspensão, bem como com dilucntcs, tais como água, etanol, propileno glicol, glicerina e várias combinações dos mesmos. Para fins de administração parentérica, podem-se empregar soluções de óleo de sésamo ou de óleo de amendoim ou em propilcnoglicol aquoso, bem como soluções aquosas esterilizadas dos sais solúveis cm água correspondentes. Tais soluções aquosas podem ser tamponadas adequadamente, se necessário, e o diluente líquido tomado em primeiro lugar isotónico com uma quantidade suficiente de salina e glicose. Estas soluções aquosas são especialmente adequadas para fins de injecção intravenosa, intramuscular, subcutânea e intraperitoneal. Neste contexto, os meios aquosos esterilizados empregues são todos prontamente obtidos por técnicas padrão bem conhecidas dos especialista da técnica.
Para fins de administração transdérmica (por exemplo, tópica), preparam-se soluções esterilizadas diluídas, aquosas ou parcialmente aquosas (normalmente a uma concentração de cerca de 0,1% a 5%), que são de outra forma similares às soluções parentéricas anteriores.
Os métodos de preparação de várias composições farmacêuticas com uma determinada quantidade de ingrediente activo são conhecidos, ou serão evidentes à luz desta descrição, para os especialista desta técnica. Por exemplo, ver Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15a Edição (1975). -69-
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As composições farmacêuticas de acordo com este invento podem conter 0,l%-95% dos compostos deste invento, de preferência l%-70%. Em qualquer caso, a composição ou formulação a ser administrada conterá uma quantidade de um composto de acordo com o invento numa quantidade eficaz para tratar a doença/estado do indivíduo a tratar, i.e., uma fosforilase de glicogénio dependente da doença/estado.
Procedimentos Experimentais Gerais para os Exemplos 1-99 e 166-172
Os espectros de ressonância magnética nuclear (NMR) foram registados num espectrómetro XL-300 (Varian Co.s Paio Alto, Califórnia) ou Bruker AM-300 (Bruker Co., Billerica, Massachutts) a cerca de 23°C a 300 Mhz para protões e 75,4 MHz para núcleos de carbono. Os deslocamentos químicos são expressos em partes por milhão para campos mais baixos a partir de trimetilsilano. As ressonâncias referidas como permutáveis não apareceram numa experiência de NMR separada, em que as amostras são agitadas com várias gotas de D20 no mesmo solvente. Os espectros da espectrometria de massa por bombardeamento atómico rápido (FAB-MS) foram obtidos com um espectrómetro VG70-2505 (V4 analítico LTD., Wythanshaw, Manchester, U.K.) por utilização de uma matriz que consiste em 3:1 de ditiotreitol/ditioeritritol. Os MS por termopulverização (TSPMS) foram obtidos num espectrómetro Fisons Trio-1000 (Fisons Co., Valência, Califórnia) por utilização de ionização de amoníaco. Os espectros de massa por ionização química foram obtidos num instrumento da Hewlett-Packard 5989 (Hewlett-Packard Co., Paio Alto, Califórnia) (ionização de amoníaco, PBMS). Quando a intensidade dos iões que contêm cloro ou bromo é descrita, observa-se a seguinte relação de intensidade esperada (aproximadamente 3:1 para iões que contêm 35C1/37C1 e 1:1 para iões que contêm 79Br/81Br) e é dada apenas a intensidade do ião da massa inferior. A cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) foi efectuada com detecção de 214 nM sobre uma coluna de 250 x 4,6 mm Rainin Microsorb C-18 (Rainin Co., Wobum, Massachusetts) eluída isocraticamente por meio de um sistema de duas bombas/misturadoras que fornecem a mistura indicada de acetonitrilo e de KH2P04 0,1 M aquoso pH 2,1 (com H3P04), respectivamente, a 1,5 mL/min. As amostras foram injectadas numa mistura de 1:1 de acetonitrilo e de tampão fosfato pH 7,0 (0,025 M em cada Na2HP04 e KH2P04). As purezas em percentagem referem-se à percentagem de área total integrada normalmente durante uma operação de 10 a 15 minutos. Os pontos de fusão são não corrigidos e foram determinados num aparelho de determinação do ponto de fusão Buchi 510 (Buchi Laboratomms-Technik Ag., Flawil, Suiça), em que se obtiveram os pontos de fusão de 120,5-122°C para o ácido benzóico e 237,5-240,5°C para o ácido p-clorobenzóico (Aldrich 99 + % graus). A cromatografia de coluna foi levada a cabo com sílica gel Amicon (30 μΜ, dimensão de poros de 60A) (Amicon D Vision, W.R. Grace & Co., Beverly, Mass.) em colunas de vidro sob baixa pressão de azoto. A menos que indicado em contrário, os reagentes são utilizados como obtidos na fontes comerciais. A dimetilformamida, 2-propanol, tetra-hidrofurano e diclorometano utilizados como solventes de reacção estavam na forma anidra e foram fornecidos pela Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wisconsin). As microanálises foram efectuadas pelo Schwarzkopf Microanalytical Laboratory, Wooddside, NI. Os termos “concentrado” e “co-evaporado” referem-se à remoção de solvente a uma pressão de aspiração de água num evaporador rotativo com uma temperatura de banho inferior a 45 °C. As reacções conduzidas a “0-20°C” ou a “0-25°C” foram conduzidas com arrefecimento inicial do recipiente num banho de gelo isolado, o qual foi deixado aquecer até à temperatura ambiente durante várias horas. As abreviaturas “min” e “h” significam “minutos” e “horas” respectivamente.
Procedimento A (Acoplamento Peptídico por Utilização de DEC)
Uma solução 0,1-0,7 M da amina primária (1,0 equiv., ou um cloridrato de uma amina primária e 1,0 a 1,3 equivalentes de trietilamina por equiv de HC1) em diclorometano (a menos que especificado outro solvente), é tratada sequencialmente a 25°C com 0,95 a 1,2 equivalentes do ácido carboxílico especificado, 1,2 a 1,8 equivalentes de hidrato de hidroxibenzotriazole (normalmente 1,5 equivalentes em relação ao ácido carboxílico), e 0,95-1,2 equivalentes (correspondente em relação molar ao ácido carboxílico) de cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (DEC) e a mistura é agitada durante 14 a 20 horas, (ver Nota 1 seguinte). A mistura é diluída com acetato de etilo, é lavada 2 a 3 vezes com NaOH 1 ou 2N, 2 a 3 vezes com HC11 ou 2N (Nota 2), a camada orgânica é seca sobre MgS04, e é concentrada para proporcionar o produto em bruto que é purificado por cromatografia sobre sílica gel, trituração, ou recristalização, como definido por utilização dos solventes especificados. Os produtos purificados foram analizados por RP-HPLC e observou-se não terem uma pureza superior a 95%, a menos que referido em contrário. As reacções conduzidas a 0 a 25°C foram conduzidas com arrefecimento inicial no recipiente num banho de gelo isolado que foi deixado aquecer até à temperatura ambiente durante várias horas.
Nota 1: Em ligações de grande escala (> 50 mL de solvente), a mistura foi concetrada nesta altura e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo.
Nota 2: Se o produto contiver uma funcionalidade de amina ionizável, a lavagem com ácido é omitida. Excepções na utilização do Procedimento A são referidas individualmente (quando apropriado a seguir) normalmente entre parêntesis, imeditamente a seguir à refrerência ao Procedimento A. -72- Ρ
Exemplo 1 Éster metílico do ácido (2SVr(5-cloro-lH-indole-2--carbonilVaminol-3-fenil-propiónico O cloridrato de éster metílico de L-fenilalanina (77,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (77 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (0-25°C) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel em 10 e 20% de acetato de etilo-hexanos, para proporcionar a substância do título sob a forma de um sólido quase branco (22,12 g, 81%): pf 156-157 °C; HPLC (60/40) 9,5 minutos (98%); PBMS 357/359 (MH+, 100%). 'H NMR (CDC13) δ 9,40 (br 1H), 7,60 (d, 1H, J = ca. 1 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,3-7,2 (m, 4H), 7,13 (m, 2H), 6,74 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 6,62 (d, 1H, J = 7,5 Hz), 5,11 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,26 (m, 2H);
Anal. Cale. para C19H17C1N203: C, 63,96; H, 4,80; N, 7,85.
Encontrado: C, 64,24; H, 4,84; N, 8,02.
Exemplo 2 Ácido 2-IY 5-cloro-1 H-indole-2-carbonilV aminol-3-fenil-propiónico
LiOH 2M aquoso (33,10 ml) foi adicionado a uma solução de éster metílico do ácido (2S)-[(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propió-nico (21,47 g, 60 mmol) em THF (140 ml) a -5°C. Ao fim de meia hora, a mistura foi concentrada parcialmente, acidificada para pH 1 - 2 com HC1 6N, foi concentrada até à secura, e os sólidos foram lavados com água e depois com éter, para se obter um sólido incolor (18,78 g, 91%): pf 248 - 255°C; HPLC (60/40) 5,21 minutos (98%); TSPMS 343/345 (MH+, 100%). *H NMR (DMSO-dé) δ 12,85 (br, 1H), 11,75 (d, 1H, J = < 1 Hz), 8,84 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,35 - 7,14 (m, 7H), 4,65 (m, 1H), 3,20 (A de AB, 1H, J = 4,5, 13,9 Hz), 3,07 (B de AB, 1H, J = 10,8, 13,8 Hz); -73 -
Anal. Cale. para C18H15C1N203: C, 63,07; H, 4,41; N, 8,17.
Encontrado: C, 62,90; H, 4,60; N, 8,04.
Exemplo 3 Éster metílico do ácido \(5-cloro-1 H-indole-2-carbonilVaminol-acético O cloridrato de éster metílico de glicina (50 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (50 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A, substituindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi agitada em acetato de etilo (250 ml), hexanos (50 ml) e NaOH IN (50 ml) e a suspensão foi filtrada. O sólido foi lavado com NaOH IN, HC1 IN, água e acetato de etilo e foi seco: produção 11,5 g, 86%; pf 252-254°C com decomposição; *H NMR (DMSO-dé) δ 11,87 (br, 1H), 9,05 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 2.0 Hz), 7,45 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), 4,05 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 3,91 (s, 3H);
Anal. Cale. para C12HnClN203: C, 54,05; H, 4,16; N, 10,50.
Encontrado: C, 54,11; H, 4,23; N, 10,56.
Exemplo 4 Ácido f(5-cloro-lH-indole-2-carbonilVaminol-acético
Adicionou-se NaOH IN (35 ml) a uma suspensão de éster metílico do ácido [(5-cloro-lH-mdole-2-carbonil)-amino]-acétíco (8,0 g, 30 mmol) em THF (100 ml) e a mistura resultante foi agitada durante 18 horas a 25°C. A solução foi acidificada com HC1 6N (7 ml), a mistura foi concentrada, e os sólidos foram suspensos em água, filtrados e lavados com água (7,42 g, 98%): HPLC (60/40) 2,89 minutos (100%); ‘H NMR (DMSO-d*) δ 12,68 (br, 1H), 11,85 (br, 1H), 8,95 (t, 1H, J = 5,9 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,44 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), -74- 7,14 (d, 1H, J = < 2 Hz), 3,96 (d, 2H, J = 5,9 Hz).
Anal. Cale. para C„H9C1N203: C, 52,29; H, 3,59; N, 11,09. Encontrado: C, 52,26; H, 3,73; N, 11,20.
Exemplo 5 F2-((3RS)-Mdroxi-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etillaimda do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico 3-Pirrolidinol (1,25 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2--carbonil)-amino]-acético (1,19 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A, seguindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e HC1 2N, foi agitada durante 1 hora, a mistura foi filtrada e os sólidos resultantes foram lavados sucessivamente com HC1 2N, NaOH 2N e HC1 2N, foram secos, triturados com 1:1 de éter/hexanos e secos, proporcionando um sólido quase branco: Rendimento 280 mg, 73%; HPLC (60/40) 4,66 minutos (96%); PBMS 322/324 (MH+, 100%). lH NMR (DMSO-dé) δ 11,87 (br, 1H), 8,71 (q, 1H), 7,71 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,45 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 3,1, 8,8 Hz), 7,16 (s, 1H), 5,07 (d, 0,5H, J = 3,6 Hz), 4,97 (d, 0,5H, J = 3,1 Hz), 4,35 (m, 1H), 4,27 (m ,1H), 4,10 (t, 1H), 3,59 (m, 1H), 3,49 - 3,27 (m ,2H), 2,04 - 1,79 (m, 2H).
Exemplo 6 r2-(Cis-3.4-di-hidroxi-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carfaoxílico
Cloridrato de (3R,4S)-3,4-di-hidroxi-pirrolidina (o isómero cis ou meso, 1,79 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-acético (0,85 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (solvente de reacção 1:1 CH2C12 / DMF) seguindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi concentrada, o resíduo foi suspenso em 10 ml de EtOAc e 10 ml de NaOH 2N, os sólidos foram filtrados c lavados sucessivamente com NaOH IN aquoso, EtOAc, HC1 IN aquoso, H20 e éter. Esta sequência de lavagem foi repetida e os sólidos resultantes foram suspensos em EtOAc, foram agitados durante 1 hora, foram filtrados e secos: produção 252 mg, 88%; HPLC (60/40) 2,33 minutos (93%); TSPMS 338/340 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dô) δ 11,82 (s, 1H), 8,72 (t, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,45 (d, 1H), 7,20 (dd, III), 7,15 (s, 1H), 5,05 (d, 1H), 4,98 (d, 1H), 4,10 (m , 1H), 4,03 (m, 311), 3,68 (dd, 1H), 3,42 (dd, 1H), 3,33 (dd, 1H), 3,23 (dd, 1H).
Exemplo 7 f 2-(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etilTamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico 4-Hidroxipiperidina (0,83 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole--2-carbonil)-amino]-acético (0,8 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (solvente de reacção dimetilformamida-diclorometano) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi agitada com acetato de etilo HC1 2 N aquoso, a suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi lavado sucessivamente com HC1 2 N, NaOH 2 N aquoso, éter e foi seco: produção 180 mg, 68%; TSPMS 336/338 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dé) δ 11,84 (br, 1H), 8,68 (br, 1H), 7,71 (d, 1H), 7,43 (d, 1H), 7,17 (dd, 1H), 7,14 (s, 1H), 4,80 (br, 1H), 4,15 (m, 2H), 3,91 (m, 1H), 3,72 (m, 2H), 3,20 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 1,75 (m, 2H), 1,48 (m, 1H), 1,38 (m, 1H).
Exemplo 8 Γl-benzil-2-f3-hidroxi-pirrolidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico 3-Pirrolidinol racémico (2,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH--indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (1 mmol) foram acoplados de -76- 1}
V 2 k-ι acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, primeira lavagem com ácido e depois com base), e o produto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com 0,5 - 16% de etanol em diclorometano para proporcionar uma espuma incolor: Produção 260 mg, 63%; HPLC (60/40) 10%, 3,86 minutos; PBMS 412/414 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H22C1N303 + 0,2 H20: C, 63,60; H, 5,43; N, 10,11. Encontrado: C, 63,90; H, 5,93; N, 10,11.
Exemplo 9 (l-Dietilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico
Dietilamina (1,2 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH-indole-2-car-bonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,6 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (0 -25°C durante 2 dias), substituindo-se o seguinte tratamento: o produto em bruto foi suspenso em 1:1 clorofórmio/diclorometano, foi sonicado, filtrado para remover os sólidos, concentrado e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com 10, 20 e 30% de acetato de etilo em hexanos; Rendimento 14 mg, 6%; HPLC (60/40) 8,88 minutos (98%); PBMS 398/400 (MH+, 100%); *H NMR (CDC13) δ 9,31 (br, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,32 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,28 -7,18 (m, 7H), 6,87 (d, 1H, J = 1,4 Hz), 5,26 (m, 1H), 3,6 (m, 1-1,5 H), 3,2 - 2,9 (m, 4,5-5H), 1,07 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 1,02 (t, 3H, J = 7,2 Hz).
Anal. Cale. para C22H24C1N302 + 0,25 H20: C, 65,66; H, 6,14; N, 10,44. Encontrado: C, 65,61; H, 6,20; N, 10,11.
Exemplo 10 Éster de terc-butilo do ácido 4l2-r(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino1 -3-fenil-propionin -piperazina-1 -carboxílico O éster do ácido 1-piperazinocarboxílico (1,2 mmol) e o ácido 2-[ -77- i (5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,6 iumol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0-25°C, tempo de reacção de 4 dias, extracção em primeiro lugar com ácido e depois com uma base), e o produto em bmto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30% em hexanos para proporcionar uma espuma incolor: Rendimento 290 mg, 95%; HPLC (70/30) 6,23 min (99%); PBMS 512/514 (MH+, 100%); ‘H NMR (CDC13) δ 9,32 (br, 1H), 7,60 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,32 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,3-7,15 (m, ca. 7H), 6,87 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 5,33 (m, 1H), 3,65 - 2,9 (m de sobreposição, 9H), 2,70 (m, 1H), 1,43 (s, 9H).
Anal. Cale. para C27H31C1N404: C, 63,46; H, 6,11; N, 10,96.
Encontrado: C, 63,33; H, 5,97; N, 10,97.
Exemplo 11 ri-Benzil-2-(4-metilamino-piperidin-l-il)-2-oxo-etil1-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico
Cloridrato de dimetilamina (1,1, mmol), acetato de sódio (2,1 mmol), crivos moleculares 3 activados, e cianoboro-hidreto de sódio (0,25 mmol) foram adicionados por esta ordem a [l-benzil-2-oxo-2-(4-oxo-pipe-ridin-l-il)-etil]amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,21 mmol) em metanol (2 ml) a 0°C. Ao fim de 18 horas, a mistura foi concentrada, 0 resíduo foi recolhido em acetato de etilo, a solução resultante foi lavada com NaOH 2N e salmoura, foi seca com Na2S04 e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1-8% de etanol em diclorometano contendo 0,5% de NH4OH seguida de trituração com éter: Rendimento 82%; HPLC (60/40) 2,79 minutos (98%); PBMS 439/441 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dé) δ 11,75 (br, 1H), 8,94 (d, 0,5H, J = 8,8 Hz), 8,90 (d, 0,5H), 7,71 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,31 -7,20 (m, 6-7H), 7,17 (dd, -78- 1Η, J = 2,1, 8,7 Hz), 5,15 (m, 1H), 4,22 (m, 0,5H), 4,08 (m, 0,5H), 3,96 (m, 0,5H), 3,85 (M, 0,5H), 3,2 - 2,9 (m, 4H), 2,78 (m, 0,5H), 2,72 (m, 0,5H), 2,25 (s, 1,5H), 2,24 (s, 1,5H), 1,75 (m, 2H), 1,3 - 0,8 (m, 2H).
Anal. Cale. para C^H^CINA + 1,0 H20: C, 63,08; H, 6,40; N, 12,26. Encontrado: C, 63,18; H, 6,16; N, 12,46.
Exemplo 12 {1 -Benzil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etil)-amida de 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico
Morfolina (0,33 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH-indole-2-car-bonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,30 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 48 horas). O produto em bruto foi cromatografado sobre sílica gel eluída com 1:1 de acetato de etilo/hexanos, as fraeções desejadas foram concentradas, o resíduo foi dissolvido em clorofórmio e metanol e a solução resultante foi agitada durante 18 horas com aproximadamente 128 mg da resina dimetilammopiridina-polistireno (Fluka Chemical Co.). A solução foi filtrada, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter: Rendimento, 51%; HPLC (60/40), 5,92 min (98%); PBMS 412/414 (MH+, 100%); *H NMR (DMSO-cy δ 11,75 (br, 1H), 8,95 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,35 - 7,15 (m, 7H), 5,13 (m, 1H), 3,65 - 3,10 (m, 8H), 3,05 (m, 2H). Anal. Cale. para C22H22C1N303 + 0,33 H20: C, 63,23; H, 5,47; N, 10,06. Encontrado: C, 63,28; H, 5,32; N, 10,10.
Exemplo 13 (l-Butilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico A n-butilamina (0,66 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH-indole-2-car- -79- bonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,60 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C). O produto em bruto foi dissolvido em clorofórmio e metanol e a solução resultante foi agitada durante 18 horas com 50 mg de resina de dimetilaminopiridina-polistireno (Fluka Chemical Co.), a solução foi filtrada, concentrada e os sólidos foram triturados com éter: Rendimento 83%; HPLC (60/40) 8,88 minutos (92%); pf 192 - 193°C; TSPMS 398/400 (MH+, 100%); ‘H NMR (DMSO-dô) δ 11,71 (br, 1H), 8,70 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 8,10 (t, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,35-7,15 (m, 7H), 4,70 (m, 1H), 3,13 - 2,93 (m, 4H), 1,38 (m, 2H), 1,25 (m, 2H), 0,86 (t, 3H, J = 7,2 Hz);
Anal. Cale. para C22H24C1N302: C, 66,41; H, 6,08; N, 10,56.
Encontrado: C, 66,15; H, 6,04; N, 10,52.
Exemplo 14 íl-Benzi1-2-oxo-2-(4-oxo-piperidin-l-ilVetill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O mono-hidrato de 4-piperidona (2,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro--lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C), substituindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada com NaOH 2 N e HC1 2 N, a suspensão foi filtrada e os sólidos secos: Produção 111 mg, 26%; HPLC (60/40) 8,88 minutos (92%); PBMS 424/426 (MH+, 100%); pf 258 - 261°C; PBMS 424/426 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-4) δ 11,75 (br, 1H), 9,03 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,4 - 7,15 (m, 7H), 5,20 (m, 1H, J = 8,2 Hz), 3,88 (m, 1H), 3,73 (m, 3H), 2,5 - 2,22 (m, 3H), 2,05 (m, 1H).
Anal. Cale. para C23H22CIN3O3 + 0,75 H20: C, 63,16, H, 5,42; N, 9,61. Encontrado: C, 63,11; H, 5,15; N, 9,53.
Exemplo 15 (1 -Benzil-2-oxo-2-pirrolidin-l -il-etilVamida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico
Pirrolidina (0,35 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)--amino]-3-fenil-propiónico (0,31 mmol) foram acoplados de acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 140 horas) e 0 produto em bruto foi triturado com éter: Rendimento 89 mg, 71%; HPLC (70/30) 7,57 (98%); PBMS 396/398 (MH+, 100/80%);
Anal. Cale. para C22H22C1N302 + 0,33 H20: C, 65,75; H, 5,68; N, 10,48. Encontrado: C, 65,56; H, 5,81; N, 10,44.
Exemplo 16 (l-r/3-dimetilamino-propill-metil-carbamoin-2-fenil-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico N,N,N’-trimetil-l,3-diaminopropano (0,31 mmol) e o ácido 2-[(5--cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,28 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 120 horas) e o produto foi purificado por cromatografía sobre sílica gel eluída com 1 - 8% de etanol em diclorometano contendo hidróxido de amónio a 0,5%: Produção 86 mg, 69%; HPLC (40/60) 7,57 minutos (> 99%); pf 187 - 190,5°C; TSPMS 441/443 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C24H29C1N402 + 0,25 H20: C, 64,71; H, 6,68; N, 12,58. Encontrado: C, 64,73; H, 6,94; N, 12,86.
Exemplu 17 n-(3-Morfolin-4-il-propilcarbamoiD-2-fenil-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico 4-(3-Aminopropil)morfolina (0,34 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-1H--indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,30 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C), substituindo-se o seguinte tratamento: a reacção foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada três vezes com NaOH 2 N, uma vez com salmoura, foi seca sobre Na2S04, e foi concentrada. O resíduo foi agitado sob éter durante 1 hora, o sólido foi filtrado e seco: Produção de 125 mg, 87%; HPLC (60/40) 2,85 minutos (98%); PBMS 469/471 (MH+, 100/90%);
Anal. Cale. para C25H29C1N403 + 0,25 H20: C, 63,42; H, 6,28; N, 11,83. Encontrado: C, 63,31; H, 6,57; N, 12,04.
Exemplo 18 (l-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico
Cloridrato de dimetilamina (0,96 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH--indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,90 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 60 horas, lavados em primeiro lugar com o ácido e depois com a base), e o sólido resultante foi triturado com éter: Produção 320 mg, 99%; HPLC (60/40) 5,87 minutos (100%); pf 224 - 225°C; PBMS 370/372 (MH+, 100%). A amostra foi recristalizada a partir de acetato de etilo quente para análise (pf 224 - 225°C).
Anal. Cale. para C2oH2oC1N302 + 0,5 H20: C, 63,80; H, 5,84; N, 10,15. Encontrado: C, 63,81; H, 5,80; N, 10,21.
Exemplo 19 Γ2-(Υ3 R.4R)-di-hidroxi-pirrolidin-1 -il)-2-oxo-etin-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico (3R,4R)-3,4-di-hidroxipirrolidina (a partir de ácido tartárico não natural pelo procedimento descrito na Patente Norte Americana No. 4.634.775, 1,0 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-acético (1,1 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (solvente de reacção: dimetilformamida) substituindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi concentrada, diluída com 20 ml de acetato de etilo e 20 ml de NaOH 2 N, a suspensão foi agitada durante meia hora, foi filtrada e os sólidos resultantes foram lavados sucessivamente com NaOH 2N, água, HC1 IN e acetato de etilo: Rendimento 77%; HPLC (40/60) 10,7 minutos (99%); TSPMS 338/340 (MH+, 100%); *H NMR (DMSO-de) δ 11,84 (br, 1H, permuta), 8,72 (t, 1H, permuta), 7,72 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,74 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,1, 8,8 Hz), 7,16 (s, 1H), 5,26 (d, 1H, J = 4,4 Hz, permuta), 5,17 (d, 1H, J = 3,2 Hz, permuta), 4,04 (m, 3H), 3,92 (m, 1H), 3,66 (dd, 1H, J = 4,0, 10,8 Hz), 3,42 - 3,28 (m, 3H);
Anal. Cale. para C215H16C1N304 + 0,25 H20: C, 52,64; H, 4,86; N, 12,28. Encontrado: C, 52,61; H, 4,85; N, 12,23.
Exemplo 20 f2-/GS.4SVdi-hidroxi-pirrolidin-l-ilV2-oxo-etil1-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico (3S,4S)-3,4-di-hidroxipirrolidina (a partir de ácido tartárico natural pelo procedimento descrito na Patente Norte Americana No. 4.634.775, 1,0 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-acético (1,0 mmol) -83- I ., •\ .^ar-rf5.*.5ar*i«r ?· foram acoplados de acordo com o Procedimento A (solvente de reacção: dimetilformamida), substituindo-se o seguite tratamento: a reacção foi diluída com acetato de etilo e NaOH 2N, a suspensão resultante foi filtrada, os sólidos foram lavados com acetato de etilo, água e foram secos: Produção de 135 mg, 40%; HPLC (40/60) 7,29 minutos (98%); TSPMS 338/340 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dô) δ 12,1 (br, 1H), 8,86 (br, 1H), 7,71 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,17 (dd, 1H, J = 2, 8,8 Hz), 7,13 (s, 1H), 5,35 (br, 1H, permuta com D20), 5,28 (br, 1H, permuta com D20), 4,03 (m, 3H), 3,92 (s, 1H), 3,66 (dd, 1H, J = 4,11 Hz), 3,4 - 3,2 (m, 3H).
Anal. Cale. para C15H]6C1N304 + 1,5 H20: C, 49,39; H, 5,25; N, 11,52. Encontrado: C, 49,50; H, 5,04; N, 11,27.
Exemplo 21 n-Benzil-2-(4-metoximetoxi-piperidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico 4-Metoximetoxi-piperidina (1,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH--indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 de acetato de etil-hexanos: Produção 241 mg, 50%; HPLC (60/40) 7,67 minutos (94%); PBMS 470/472 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C25H28C1N304: C, 63,89; H, 6,01; N, 8,94.
Encontrado: C, 63,91; H, 6,00; N, 8,95.
Exemplo 22 r2-Fenil-1 -í2.2.6.6-tetrametil-piperidin-4-ilcarbamoiB-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico 2,2,6,6-tetrametil-piperidina (1,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH- -84- -indole-2-carbunil)-ainiuo]-3-feiiil-propiónico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. A espuma amarela resultante foi triturada com éter, 1:5 de diclorometano-éter. O sólido resultante foi dissolvido em dicloro-metano e a solução resultante foi tratada com 0,20 mL de HC1 4 N em dioxano. Formou-se um precipitado, o qual foi filtrado, lavado com diclorometano e seco: Produção 220 mg, 42%; HPLC (60/40) 3,19 minutos (96%); PBMS 481/483 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C27H33C1N402 + 1,5 H20: C, 59,56; H, 6,85; N, 10,29. Encontrado: C, 59,30; H, 6,90; N, 10,22
Exemplo 23 Éster de terc-butilo do ácido Π - (2-IY5-cloro-1 H-indole-2-carbonilVaminol -3-fenil-DroDÍonill-pirrolidin-(3RSVil)-carbâmico Éster de terc-butilo do ácido pirrolidina-3-carbâmico racémico (1,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 de acetato de etilo-hexanos: Produção 302 mg, 59%; PBMS 511/513 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C27H31C1N404: C, 63,46; H, 6,11; N, 10,96.
Encontrado: C, 63,32; H, 6,26; N, 10,89.
Exemplo 24 (2-Morfolin-4-il-2-oxo-etilVamida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico
Morfolina (1,0 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)--aminoj-acético (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. O sólido resultante foi suspenso em éter, foi filtrado e seco para proporcionar um sólido beje: Produção, 264 mg, 71%; HPLC (60/40) 3,28 minutos (100%); -85- TSPMS 322/324 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dé) δ 11,85 (s, 1H), 8,68 (t, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,1, 8,8 Hz), 7,16 (s, 1H), 4,17 (d, 2H, J = 5,7 Hz), 3,65-3,45 (m, 8H).
Anal. Cale. para C15H16C1N303 + 0,25 H20: C, 55,22; H, 5,10; N, 12,88. Encontrado: C, 55,22; H, 5,08; N, 12,82.
Exemplo 25 í(Metoxi-metil-carbamoil)-metill-amida do ácido 5 -cloro-1 H-indole-2-carboxílico
Cloridrato de metoximetilamina (1,0 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH--indole-2-carbonil)-amino]-acético (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. O sólido resultante foi suspenso em éter, filtrado e seco: Produção 158 mg, 53%; PBMS 296/298 (MH+, 100%); *H NMR (DMSO-dJ δ 11,82 (s, 1H), 8,77 (t, 1H, J = 6 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), 7,16 (s, 1H), 4,22 (d, 2H, J = 5,7 Hz), 3,76 (s, 3H), 3,14 (s, 3H).
Anal. Cale. para C13H14C1N303: C, 52,80; H, 4,77; N, 14,21.
Encontrado: C, 52,51; H, 4,82; N, 14,01.
Exemplo 26 Γ1 -Benzil-2-r4-dimetilamino-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxflico 4-Dimetilaminopiperidina (1,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro-lH--indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 5-30% de etanol em diclorometano contendo hidróxido de -86- ,-W,;
amónio a 0,5%, seguido de trituração com éter: Produção 21 mg, 5%; PBMS 453/455 (MH+, 100%); ’H NMR (DMSO-de) Ô 11,75 (br, 1H), 8,94 (m, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,45 - 7,10 (m, 8H), 5,17 (m, 1H), 4,63 (m), 4,38 (m), 4,03 (m), 3,50 (m), 3,15 - 2,8 (m), 2,51 (s, 3H), 2,50 (s, 3H).
Exemplo 27 (l-Benzil-2-oxo-2-piperazin-l-il-etil)-amida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico
Adicionou-se ácido trifluoroacético (4 ml) ao éster de terc-butilo do ácido 4- {2-[(5-cloro- lH-mdole-2-carbonil)-amino] -3-fenil-propionil}-piperazino-l-carboxílico (0,6 mmol) a 0°C e a solução resultante foi agitada durante 0,3 horas e foi concentrada. O resíduo foi dividido entre acetato de etilo e NaOH 2 N, a camada orgânica foi separada e lavada com salmoura, foi seca sobre Na2S04, foi concentrada e o sólido resultante foi triturado com éter: Produção 189 mg, 77%; HPLC (60/40) 2,63 minutos (99%); pf 166,5 - 168°C; TSPMS 411/413 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H23C1N402 + 0,5 H20: C, 62,93; H, 5,76; N, 13,34. Encontrado: C, 62,64; H, 5,52; N, 13,34.
Exemplo 28 Í2~(HRSV amino-pirrolidin-1 -ilV 1 -benzil-2-oxo-etin-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico HC1 4N em 1,4-dioxano (5 ml) foi adicionado ao éster de terc-butilo do ácido (l-{2-[(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propio-nil}-pirrolidin-(3RS-il)-carbâmico (0,5 mmol). A solução resultante foi agitada a 25°C durante 0,5 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter:
Produção 190 mg, 85%; HPLC (60/40) 2,62 minutos (98%); PBMS 411/413 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para Q^CINA + HC1 + 1,7 H20: C, 55,28; H, 5,78; N, 11,72. Encontrado: C, 55,14; H, 5,86; N, 11,45.
Exemplo 29 Ácido l-l(2RSy[Y5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-aminol -3 -fenil-propionil I -pinOlidino-(2S)-carboxílico Ácido trifluoroacético foi adicionado ao éster do terc-butilo do ácido 1 - {(2(RS)-[(5-cloro-1 H-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propionil} -pirro-lidino-(2S)-carboxílico (1,0 mmol) a 25°C. Ao fim de 1,5 horas, a reacção foi concentrada e o resíduo foi triturado em primeiro lugar com éter e depois com uma mistura de éter e hexanos. Produção 360 mg, 82%; HPLC (60/40) 4,84 minutos (99%); PBMS 440/442 (MH+, 40%), 396/398 (MH-44,100%);
Anal. Cale. para C23H22CIN3O4 + 0,8 H20: C, 60,81; H, 5,24; N, 9,25. Encontrado: C, 60,74; H, 5,42; N, 8,96.
Exemplo 29a Éster de terc-butilo do ácido l-12(R.SVl(5-cloro-lH-indole-2-carbnni1)-amino] -3-fenil-propionill-pirrolidino-(2S)-carboxílico O éster de t-butilo de L-prolina (2,0 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro--lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (2,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluindo-se com 1:2 de acetato de etilo-hexanos: Produção 611 mg, 62%; HPLC (60/40) 13,45 minutos (57%) e 14,46 minutos (41%).
Exemplo 30 ((1 SVmetilcarbamoil-2-tiazol-4-il-etilVaniida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico
Cloridrato de (S)-2-amido-N-metil-3-tiazol-4-il-propianamida (0,6 mmol) e o ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico (0,51 minol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacçào dimetil-formamida). O produto em bruto foi agitado em éter durante meia hora e depois foi filtrado proporcionando um sólido beje: 182 mg, 98%; HPLC (60/40) 3,41 minutos (98%); pf > 260°C (dec); TSPMS 363/365 (MH+, 100%); *H NMR (DMSO-4) δ 11,82 (br, 1H), 9,0 (d, 1H), 8,82 (br, 1H), 8,10 (br, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,44 - 7,38 (m, 2H), 7,21 - 7,15 (m, 2H), 4,80 (m, 1H), 3,24 (m, 1H), 3,05 (m, 1H), 2,60 (d, 3H).
Exemplo 30a
Cloridrato de (SV2-amino-N-metil-3-tiazol-4-il-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-metilcarbamoil-2-tiazol--4-il-etil)-carbâmico (248 mg, 0,87 mmol) foi dissolvido em HC14M-dioxano a 0 °C. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 202 g, 102%; HPLC (70/30) 2,41 minutos (96%).
Exemplo 30b fSV2-fN-t-ButoxicarbonilaminoVN-metil-3-tiazol-4-il-propionamida
Cloridrato de metilamina (1,2 mmol) e Boc-L-3-(4-tiazol)alanina (1,0 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de -89- reacção de 0 - 25°C, omitida a lavagem com ácido) c o produto foi utilizado sem purificação adicional. Produção, 250 mg, 88%.
Exemplo 31
Ester metílico do ácido (±)-IY5-cloro-lH-indole-2-carbonin-amino] -3-hidroxi-propiónico O cloridrato do éster metílico de D,L-serina (2,1 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, lavados em primeiro lugar com ácido e depois com NaHC03 saturado) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 10, 20, 40 e 60% de acetato de etilo em hexanos: Produção 565 mg, 95%; HPLC (60/40) 3,46 minutos (98%); pf 153 - 155°C; TSPMS 297/299 (MH+, 100/40%);
Anal. Cale. para C13H13C1N204·. C, 52,62; H, 4,42; N, 9,44.
Encontrado: C, 52,62; H, 4,54; N, 9,53.
Exemplo 32 (Y1 S)-dimetilcarbamoil-2-tiazol-4-il-etil)-amida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-tiazol-4-il-propanamida (0,43 mmol) e o ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico (0,40 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) e o produto em bruto foi triturado em primeiro lugar com 1:1 de éter-hexanos, e depois com hexanos. Rendimento 115 mg, 75%; HPLC (60/40) 3,72 minutos (99%); pf 198 - 202°C (contrai-se por inserção a 192°C); PBMS 377/379 (MH+, 100%); lH NMR (DMSO-d*) δ 11,75 (s, 1H), 9,02 (d, 1H, J = 2 Hz), 8,9 (d, 1H, J = 8,2 -90-
Hz), 7,7 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,41 (d, 1H, J = 6,7 Hz), 7,39 (s, 1H); 7,22 (s, 1H), 7,17 (dd, 1H, J = 2,2, 8,7 Hz), 5,30 (m, 1H), 3,24 (dd, A de AB, 1H, J = 7, 13 Hz), 3,16 (dd, B de AB, 1H, J = 8,5,16 Hz), 3,07 (s, 3H), 2,84 (s, 3H).
Anal. Cale. para C17H17C1N402S + 0,125 H20: C, 53,86; H, 4,59; N, 14,78. Encontrado: C, 53,92; H, 4,47; N, 14,42.
Exemplo 32a
Cloridrato de (Sl-2-amino-N.N-dimetil-3-tiazol-4-il-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-dimetilcarbamoil-2-tiazol--4-il-etil)-carbâmico foi dissolvido em HC1 4M-dioxanos a 0°C e foi agitado a 25 °C durante 2 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 3,06 g, 105%; HPLC (70/30) 2,12 minutos (97%); PBMS 200 (MH+, 100%).
Exemplo 32b Éster de terc-butilo do ácido (SV('l-dimetilcarbamoil-2-tiazol-4-il-etill-carbâmico O cloridrato de dimetilamina (1,2 mmol) e Boc-L-3-(4-tiazolil)-alanina (1,0 mmol) foi acoplado de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol de 1 - 16% em diclorometano contendo 0,5% de hidróxido de amónio. Produção 124 mg, 41%.
Exemplo 33 r(lS’>-benzil-2-((3R.4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5 -cloro-1 H-mdole-2-carboxílico O cloridrato de (3R,4S)-di-hidroxipiirolidina (0,5 mmol) e o ácido 5-cloro- lH-indole-2-carbuxílico (0,5 imnol) foram acoplados dc acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 2 - 10% em diclorometano. Produção 180 mg, 86%; HPLC (60/40) 3,14 minutos (98%); TSPMS 428/430 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dg) δ 11,75 (br, 1H), 8,94 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,72 (s, 1H), 7,4 -7,1 (m, 8H), 5,03 (d, 0,5H, J = 5 Hz), 4,95 (d, 0,5H, J = 5 Hz), 4,90 (d, 1H, J = 5 Hz), 4,87 (m, 1H), 4,08 (m, 0,5H), 4,00 (m, 0,5H), 3,88 (m, 1,5H), 3,5 - 3,3 (m, 2,5H), 3,2 (m, 0,5H), 3,0 (m, 2H).
Anal. Cale. para C22H22C1N304 + 0,25 H20: C, 61,11; H, 5,25; N, 9,72.
Calculado: C, 60,91; H, 5,46; N, 9,43.
Exemplo 33a
Cloridrato de (Cis-3.4Vdi-hidroxipiiTolidma O éster de terc-butilo do ácido cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidino-l-car-boxílico (1,99 g, 9,8 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano a 5°C e a suspensão resultante foi agitada a 25°C durante 1 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter, o que proporcionou um pó vermelho claro (1,30 g, 95%).
Exemplo 33b
Ester de terc-butilo do ácido cis-3.4-di-hidroxi-pirrolidina-l-cafboxílico
Uma solução do éster de terc-butilo do ácido 2,5-di-hidro--pirrole-l-carboxílico em bruto (10,5 g, 62,1 mmol) em tetra-hidrofurano (300 ml) foi tratada sequencialmente com tetróxido de ósmio (2,5% em t-butanol, 6 ml) e N-metilmorfolina-N-óxido a 25°C. Ao fim de 48 horas, adicionou-se uma solução aquosa a 10% de tiossulfato de sódio e a mistura foi agitada durante 30 minutos, foi parcialmente concentrada para remover o tetra-hidrofurano e a mistura aquosa resultante foi extraída duas vezes com éter. Os extractos etéreos -92-
foram lavados com tiossulfato dc sódio a 10%, IIC1 0,1 N, foram secos e concentrados para proporcionar um óleo alaranjado escuro que foi cromatografado sobre sílica eluída com etanol a 1%, 2%, 4%, 8% e 10% em diclorometano, para produzir um xarope âmbar (4,09 g).
Exemplo 33c Éster de terc-butilo do ácido 2.5-di-hidro-pirrole-l-carboxílico
Adicionou-se dicarbonato de di-t-butilo (83 g, 380 mmol) a uma solução de 3-pirrolina (contendo pirrolidina a 35%, 25 g, 362 mmol) em tetra-hidrofurano (500 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora e foi concentrada para produzir 76,2 g de um óleo amarelo que foi utilizado sem purificação.
Exemplo 34 Éster de terc-butilo do ácido (3Sl-lY5-cloro-lH-indole-2-carbonil)--aminol-4-(4-hidroxi-piperidin-1 -iD-4-oxo-butírico O éster de terc-butilo do ácido (S)-3-amino-4-(4-hidroxi-piperi-din-l-il)-4-oxo-butírico (0,8 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,8 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 25, 40, 50, 75 e 100% em hexanos. Produção 330 mg, 94%; HPLC (60/40) 4,18 minutos (97%); TSPMS 450/452 (MH+, 100%).
Exemplo 34a Éster de terc-butilo do ácido (S)-3-amino-4--(4-hidroxi-piperidin-1 -iD-4-oxo-butírico
Adicionou-se dietilamina (1,0 mmol) ao éster de terc-butilo do -93- ácido (3)-3-(911-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-4--oxo-butírico em dimetilformamida (5 ml) a 25°C. Ao fim de uma hora, a mistura de reacção foi concentrada, o resíduo foi suspenso em 1:1 de éter/diclorometano, foi filtrado e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1-50% de etanol em diclorometano contendo hidróxido de amónio a 0,5%. Produção 217 mg, 80%.
Exemplo 34b Ácido (S)-3-( 9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)-4--(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-4-oxo-butírico 4-Hidroxipiperidina (2,1 mmol) e o éster de β-t-butilo do ácido N-FMOC-L-aspártico (2,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (96 horas de tempo de reacção, lavados apenas com ácido) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 -4% em diclorometano. Produção 516 mg, 52%; HPLC (60/40) 5,33 minutos (93 %).
Exemplo 35 f(1 R)-benzil-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (R)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-3-fenil--propan-l-ona (3,1 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (3,4 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 60 horas) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 50, 75 e 100% em hexanos seguida por trituração com 1:1 de éter-hexanos. Produção 1,1 g, 84%; HPLC (60/40) 4,06 minutos (99%); PBMS 426/428 (MH+, 100%); -94- $r> * f i. " ?Ve;
Anal. Cale. para Cja^ClNjOs + 0,25 H20: C, 64,18; H, 5,74; N, 9,76.
Calculado: C, 64,28; H, 5,94; N, 9,41.
Exemplo 35a
Cloridrato de (R')-2-amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV 3-fenil-propan-1 -ona (R)-2-(N-t-butoxicarbonilamino)-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-3-fe-nil-propan-l-ona (12,5 mmol) foi dissolvido em HC1 4M a 0°C e a suspensão resultante foi agitada a 25°C durante 1 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 3,44 g, 97%.
Exemplo 35b (RV2-(N-t-butoxicarbonilamino)-1 -(4-hidroxi--piperidin-1 -iO-3-fenil-propan-1 -ona (R)-2-(N-t-butoxicarbonilamino)-3-fenil-propan-l-ona (14 mmol) e 4-hidroxipiperidina (21,5 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, lavadas primeiro com ácido e depois com uma base) e o produto foi utilizado sem purificação adicional. Produção 4,7 g, 94%; HPLC (60/40) 3,52 minutos (98%).
Exemplo 36 f2-(l.l-Dioxo-l-tiazolidm-3-iO-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato do 2-amino-l-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-etanona (1,0 mmol) e o ácido lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de -95- reacção de 60 horas) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e NaOH 2 N, o precipitado resultante foi recolhido e lavado com NaOH 2N, HC1 IN e água. Produção 135 mg, 42%; HPLC (60/40) 2,97 minutos (97%); PBMS 322 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C14H15N304S+ 0,25 H20: C, 51,60; H, 4,79; N, 12,90.
Calculado: C, 51,31; H, 4,66; N, 12,88.
Exemplo 36a
Cloridrato de 2-amino-l-n.ldioxano-l-tiazolidin-3-il)-etanona O éster de terc-butilo do ácido [2-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-)-2-oxo--etil]-carbâmico (11 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano a 0°C e a suspensão resultante foi agitada a 25 °C durante 1 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo triturado com éter. Produção 2,3 g, 100%.
Exemplo 36b
Ester de terc-butilo do ácido r2-n.l-dioxo-l-tiazolidin--3-il)-2-oxo-etill-carbâmico O ácido m-cloroperoxibenzóico (35 mmol) foi adicionado lentamente ao éster de terc-butilo do ácido (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-carbâ-mico (14 mmol) em diclorometano (35 ml) a 0°C. Depois da espuma ter dinuído, a mistura foi agitada durante mais 2,5 horas a 25°C. A mistura foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada três vezes com uma mistura 1:1 de NaHC03 aquoso saturado e com uma solução aquosa a 10% de NaS203, uma vez com NaHC03 saturado, foi seca, concentrada e o resíduo triturado com 1:1 de éter/hexanos. Produção 3,6 g, 92%. -96-
Exeiuplo 36c Éster de terc-butilo do ácido (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etilVcarbâmico
Tiazolidina (85 mmol) e Boc-glicina (57 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 60 horas) e o produto foi utilizado sem purificação. Produção de 12,7 g, 90%.
Exemplo 37 rnSVbenzil-2-(4-hidroxi-piperidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-3-fenil--propan-l-ona (0,65 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,73 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20, 30,40, 50, 75 e 100% em hexanos. Produção de 228 mg, 84%; HPLC (60/40) 3,57 minutos (98%); PBMS 410 (MH+, 100%); Anal. Cale. para + 0,25 H20: C, 66,73; H, 5,97; N, 12,15.
Calculado: C, 66,68; H, 6,19; N, 9,94.
Exemplo 38 |Y 1SVBenzil-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-amida do ácido 1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-3-fenil--propan-l-ona (3,4 mmol) e ácido lH-indole-2-caiboxílico (3,7 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 48 horas). O produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 50, 75 c 100% dc acetato de ctilo cm hexanos, seguido de trituração com 1:1 de éter-hexanos. Produção 1,14 g, 86%; HPLC (60/40) 3,52 minutos (98%); PBMS 392 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para + 0,25 H20: C, 69,77; H, 6,49; N, 10,61.
Calculado: C, 69,99; H, 6,72; N, 10,47.
Exemplo 39 |YlS)-(4-fluoro-benzil)-2-morfolin-4-il-2-oxo-etill-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico
Cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-fluoro-fenil)-l-morfolin-4-il-pro-pan-l-ona (0,48 mmol) e o ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico (0,48 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 48 horas, lavados em primeiro lugar com um ácido e depois com uma base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20, 30, 40, 50 e 75% em hexanos. Produção 189 mg, 95%; HPLC (60/40) 4,76 minutos (97%); PBMS 414 (MH+, 100%); 'H NMR (CDC13) δ 9,23 (br, 1H), 7,4 - 7,1 (m, 5H), 7,1 - 6,94 (m, 3H), 6,9 (d, 1H, J = 2 Hz), 5,30 (m, 1H), 3,72 - 3,48 (m, 5H), 3,42 (m, 1H), 3,03 (m, 4H). Anal. Cale. para C22H21F2N3O3: C, 63,92; H, 5,12; N, 10,16.
Calculado: C, 64,30; H, 5,34; N, 9,82.
Exemplo 39a
Cloridrato de (SV2-amino-3-(4-fluoro-fenilV l-morfolm-4-il-propan-1 -ona (S)-2-(N-t-Butoxicarbonilaimno)-3-(4-fluoro-fenil)-1 -morfolin-4-il--propan-l-ona (3,1 mmol) foi dissolvida em HC1 4M-dioxano a 0°C e a suspensão resultante foi agitada a 25°C durante 1 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 776 mg, 88%; HPLC (60/40) 2,31 minutos (99%). -98-
t "·*.
Exemplo 39b (SV2-(N-t-butoxicarbonilaTninoV3-(4-fluoro-fenilVl-morfolin-4-il-propan-l-ona
Morfolina (3,7 mmol) e (S)-Boc-4-fluorofenil-alamna (3,5 mmol) foram acoplada de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 60 horas, lavadas em primeiro lugar com ácido e depois com base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20,30 e 40% em hexanos. Produção 1,08 g de óleo, 87%.
Exemplo 40 rnSVBenzil-2-(l.l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-3-fenil--propan-l-ona (1,0 mmol) e o ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 48 horas, lavados em primeiro lugar com ácido e depois com uma base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20, 30,40 e 50% em hexanos. Produção de 404 mg, 94%; HPLC (60/40) 4,74 minutos (98%); PBMS 430 (MH+, 100%); *H NMR (CDC13) δ 9,53 (br, 0,5H), 9,44 (br, 0,5H), 7,44 (d, 0,5H, J = 9 Hz), 7,4 - 7,1 (m, 7H), 7,02 (m, 1H), 6,84 (s, 0,5H), 6,81 (s, 0,5H), 5,20 (m, 0,5H), 4,96 (m, 0,5H), 4,68 (d, 0,5H, J = 11 Hz), 4,52 (d, A de AB, 0,5H, J = 11,5 Hz), 4,37 (d, B de AB, 0,5H, J = 11,5 Hz), 4,20 (m, 0,5H), 4,03 (m, 0,5H), 3,80 (m, 0,5H), 3,50 (d, 0,5H, J = 11Hz), 3,3-3,0 (m, 4H), 2,69 (m, 0,5H). -99-
Exemplo 40a
Cloridrato de (S)-2-amino-1 -Π. 1 -dioxo-1 -tiazolidin-3 -il)-3-fenil-propan-1 -ona (S)-2-(N-t-Butoxicarbonilamino)-1-(1,1 -dioxo-1 -tiazolidin-3-il)-3--fenil-propan-l-ona foi dissolvida em HC1 4M-dioxanos a 0°C. A solução foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção de 866 mg, 84%.
Exemplo 40b (SV2-fN-t-ButoxicarbonilaminoV 1-(1.1 -dioxo-1--tiazolidin-3-ilV3-fenil-propan-1 -ona
Uma solução de ácido m-cloroperoxibenzóico (9 mmol) e o éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-benzil-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-carbâmico (3 mmol) em diclorometano (9 ml) foram aquecidos ao refluxo durante 6 horas. A mistura foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada três vezes com uma mistura 1:1 de NaS203 aquoso a 10% e NaHC03 aquoso saturado, foi seca e concentrada. A espuma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20,30 e 40% em hexanos, proporcionando uma espuma incolor (979 mg, 89% de rendimento).
Exemplo 40c
Ester de terc-butilo do ácido do fSWl-benzil--2-OXO-2-tiazolidin-3 -il-etil)-carbâmi co
Tiazolidina (38 mmol) e Boc-L-fenilalanina (19 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, lavadas com ácido e depois com uma base) e o produto foi utilizado com purificação adicional. Produção 5,5 g, 86%.
Exemplo 41 r2-(l.l-dioxo-l-tiazolidiii-3-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-çarboxílico
Cloridrato de 2-amino-l-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-etanona (1,0 mmol) e o ácido 5-fluoro- lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 48 horas) com o seguinte tratamento. A mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e HC1 IN, a suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi lavado com HC1 2 N, NaOH 2 N e água. O sólido filtrado foi fervido em acetona, foi filtrado e seco. Produção de 134 mg, 40%; HPLC (60/40) 3,06 minutos (97%); pf 239 - 241 °C (com descoloração); PBMS 340 (MH+, 70%), 357 (100%). 'H NMR (DMSO-dô) δ 11,74 (s, 1H), 8,82 (m, 1H), 7,43 (m, 2H), 7,17 (s, 1H), 7,05 (dt, 1H, J = 3,9 Hz), 4,86 (s, 1,2H), 4,52 (s, 0,8H), 4,27 (d, 0,8H, J = 5,5H), 4,13 (d, 1,2H, J = 6 Hz, sobreposto sobre m, 1,2H), 3,86 (t, 1,2H, J = 7,4 Hz), 3,58 (t, 0,8H, J = 7 Hz), 3,46 (t, 1,2H, J = 7,2 Hz).
Anal. Cale. para C14H14FN303S+ 0,6 H20: C, 48,02; H, 4,38; N, 12,00.
Calculado: C, 47,99; H, 4,04; N, 12,00.
Exemplo 42 (TI SVBenzil-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etilVamida do ácido 5-ciano-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-3-fenil-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona (4,0 mmol) e o ácido 5-ciano-lH-indole-2-carboxílico (4,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 48 horas) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção -101 - /'
foi diluída com acetato de etilo e HC1 2 N, o precipitado resultante foi recolhido por filtração, foi lavado com HC1 2 N e NaOH 2 N. O produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30,40 e 50% em hexanos. Produção 1,22 g, 75% (60/40) 4,74 minutos (97%); PBMS 405 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H20N4O2S + 0,5 H20: C, 63,90; H, 5,12; N, 13,55.
Calculado: C, 64,18; H, 5,04; N, 13,47.
Exemplo 42a
Cloridrato de fS)-2-amino-3-fenil-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-benzil-2-oxo-2-tiazolidin--3-il-etil)-carbâmico (16 mmol) foi disolvido em HC1 4 M-dioxanos a 0°C, a solução foi agitada a 25 °C durante 1 hora, a reacção foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 4,2 g, 95%.
Exemplo 42b
Acido 5-ciano-1 H-indole-2-carboxílico O éster etílico do ácido 5-ciano-lH-indole-2-carboxílico (1,71 g, 8,0 mmol) foi adicionado a uma solução de etanol (10 ml) e de hidróxido de potássio (2 g) e a mistura resultante foi aquecida ao refluxo durante 1 hora. Aqueceu-se a água para dissolver o precipitado e adicionou-se HC1 6 N para levar o pH para 1. Formou-se um precipitado. A mistura foi arrefecida num banho de gelo, foi filtrada e o sólido incolor resultante foi lavado com água fria e foi seco (1,51 g). Suspendeu-se uma porção (1,4 g) em ácido acético quente (40 ml) e arrefeceu-se para se proporcionar um sólido que foi filtrado, lavado com acetato de etilo frio e foi seco: Produção 980 mg (70%); HPLC (60/40) 3,09 minutos (97%). -102-
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Exemplo 43 Γ( 1V Benzil-2-f 1.1 -dioxo-1 -tiazolidin-3-ilV2-oxo-etill-amida do ácido lH-indole-2-carboxílico
Cloridrato de (S)-2-amino-l-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-3-fenil--propan-l-ona (0,56 mmol) e o ácido lH-indole-2-carboxílico (0,56 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) e o produto foi triturado com 1:1 éter-hexanos. Produção 213 mg, 92%; HPLC (60/40) 4,15 minutos (99%); PBMS 412 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C2iH21N304S+ 0,5 H20: C, 59,99; H, 5,27; N, 9,99.
Calculado: C, 60,25; H, 5,27; N, 9,98.
Exemplo 44 12-(1.1 -dioxo-1 -tiazolidin-3-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de 2-amino-1-(1,1-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-etanona (0,6 mmol) e o ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico (0,6 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 120 horas) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e HC1 2N, recolheu-se o precipitado resultante por filtração, seguida de lavagem com HC1 2 N, NaOH 2 N, água e éter. Produção 110 mg, 52%; HPLC (60/40) 3,37 minutos (99%); pf 236 - 239°C (dec); PBMS 356/358 (MH+, 100%); *H NMR (acetona-dg) δ 11,0 (br, 1H), 7,66 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,55 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,21 (dd, 1H; J = 2,0, 8,7 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 2 Hz), 4,77 (s, 1,1 H), 4,49 (s, 0,9H), 4,37 (d, 0,9H, J = 5,3 Hz), 4,27 (d, ca. 1H, J = 5,3 Hz, sobreposto sobre m, ca, 1H), 4,04 (t, 1,1H, J = 7 Hz), 3,54 (t, 0,9H, J = 7 Hz), 3,40 (t, 1,1H, J = 7 Hz). -103 -
A
Anal. Caiu. para C14H14C1N304S+ 1,6 H20: C, 43,72; H, 4,51; N, 10,93. Calculado: C, 45,05; H, 3,88; N, 10,99.
Exemplo 45 í2-Qxo-2-tiazolidin-3-il-etil')-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de 2-amino-l-tiazolidin-3-il-etanona (3,1 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (3,4 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 120 horas), substituindo-se o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi agitada com acetato de etilo e HC1 2N, foi filtrada e o sólido filtrado foi lavado com HC1 2N, NaOH 2N e éter. Produção 988 mg; HPLC (70/30) 3,25 minutos (99%); pf 253 - 255 °C (dec, escurecimento a 243 °C); PBMS 324/326 (MH+, 100%); *H NMR (acetona-4) δ 11,03 (br, 1H), 7,88 (br, 1H), 7,66 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,54 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 7,21 (dd, 1H, J = 2, 8,3 Hz), 4,67 (s, 0,8H), 4,53 (s, 1,2H), 4,24 (m, 2H), 3,87 (t, 1,2H, J = 7 Hz), 3,78 (t, 0,8H, J = 7 Hz), 3,18 (t, 1,2H, J = Hz), 3,05 (t, 0,8H, J = 7 Hz).
Uma amosta foi recristalizada a partir de ácido acético para análise (pf 262 -264°C):
Anal. Cale. para C14H14C1N302S: C, 51,93; H, 4,36; N, 12,98.
Calculado: C, 51,78; H, 4,38; N, 12,95.
Exemplo 45a
Cloridrato de 2-amino-l-tiazolidin-3-il-etanona O éster de terc-butilo do ácido (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-car-bâmico (5,41 g, 22 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano (80 ml) a 0°C. A solução resultante foi agitada a 25°C durante 2 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 3,9 g, 97%.
Exemplo 46 ΓΠ SVBenzil-2-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxilico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-3-fenil--propan-l-ona (0,8 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,9 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, tempo de reacção de 48 horas) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 50, 75 e 100% em hexanos, e depois foi triturado a partir de 1:1 éter-hexanos. Produção 26 mg, 76%; HPLC (60/40) 4,09 minutos (99%); PBMS 426/428 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para ^H^ClNsCV+ 0,33 H20: C, 63,96; H, 5,76; N, 9,73.
Calculado: C, 63,90; H, 5,74; N, 9,58.
Exemplo 46a
Cloridrato de (Sl-2-amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -iD-3-fenil-propan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-benzil-2-(4-hidroxi-piperidin--l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (3,66 g, 10,5 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano (39 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção 3,06 g, 102%.
Exemplo 46b Éster de terc-butilo do ácido (S)-ri-benzil-2-(4-hidroxi--piperidin-1 -il)-2-oxo-etill-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (75 mmol) e Boc-L-fenilalanina (38 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 144 horas) e o produto foi utilizado sem purificação adicional. Produção 12,2 g, 96%; HPLC (60/40) 3,45 minutos (97%).
Exemplo 47 [nS)-Benzil-2-n.l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etill-amida do ácido 5-bromo-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-1-(1,1-dioxo-1-tiazolidin-3-il)-3-fenil--propan-l-ona (0,3 mmol) e o ácido 5-bromo-lH-indole-2-carboxílico (0,3 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, lavados em primeiro lugar com ácido e depois com uma base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluida com acetato de etilo a 30, 40 e 50% em hexanos. O produto foi recolhido sob a forma de uma espuma quase branca e foi triturada com 1:1 de éter - hexanos para proporcionar 107 mg, 73%; HPLC (60/40) 6,21 minutos (99%); PBMS 490/492 (MH+, 100%); *H NMR (CDC13) δ 9,53 (br, 0,5H), 9,44 (br, 0,5H), 7,78 (d, 0,5H, J = 2 Hz), 7,76 (d, 0,5H, J = 2 Hz), 7,4 - 7,2 (m, 7H), 7,10 (d, 0,5H, J = 9 Hz), 7,02 (d, 0,5H, J = 9 Hz), 6,86 (s, 0,5H), 6,81 (s, 0,5H), 5,21 (m, 0,5H), 4,95 (m, 0,5H), 4,62 (d, 0,5H, J = 11 Hz), 4,47 (d, A de AB, 0,5H, J = 13 Hz), 4,38 (d, B de AB, 0,5H, J = 13 Hz), 4,20 (m, 0,5H), 4,03 (m, 0,5H), 3,82 (m, 0,5H), 3,44 (d, 0,5H, J = 11 Hz), 3,33 - 3,0 (m, 4H), 2,70 (m, 0,5H).
Anal. Cale. para C21H2oBrN304S+ 0,2 H20: C, 51,06; H, 4,16; N, 8,51.
Calculado: C, 51,44; H, 4,36; N, 7,93.
Exemplo 48 r(lS)-Benzil-2-oxo-2-(3-oxo-pirrolidin-l-il)-etil-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-l-(2-amino-3-fenil-propionil)-pirrolidin-3-ona - 106-
(0,6 nimol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,6 mniol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, lavados primeiro com ácido e depois com base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 40 e 50 % em hexanos, seguido por trituração da espuma resultante com éter. Produção 112 mg, 45%; HPLC (60/40) 5,13 minutos (> 99 %); PBMS 410/412 (MH+, 100 %); ]H NMR (CDC13) δ 9,19 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,3 - 7,15 (m, 8H), 6,86 (m, 1H), 4,23 (m, 0,5H), 4,95 (m, 0,5H), 4,0 - 3,7 (m, 3H), 3,27 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 3,05 (m, 0,5H), 2,85 (d, 0,5H, J = 28 Hz), 2,45 (m, 1,5H), 2,15 (m, 0,5H).
Anal. Cale. para C22H2oC1N303 + 0,55 H20: C, 62,95; H, 5,07; N, 10,01. Calculado: C, 63,31; H, 5,09; N, 9,61.
Exemplo 48a
Cloridrato de CS)-1 -t2-amino-3-fenil-propionilVpirrolidin-3-ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-benzil-2-oxo-2-(3-oxo--pirrolidin-l-il)-etil]-carbâmico (552 mg, 1,7 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano (6,2 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter para proporcionar um sólido castanho claro. Produção, 482 mg, 108%.
Exemplo 48b Éster de terc-butilo do ácido (S)-ri-benzi1-2-oxo--2-(3 -oxo-pirrolidin-1 -il Vetil-carbâmico
Uma solução de dimetilsulfóxido (4,07 g, 52 mmol) e cloreto de oxalilo (3,61 g, 28 mmol) foram adicionados lentamente, por esta ordem, a diclorometano (50 ml) a -78°C. O éster de terc-butilo do ácido (S)-[ l-benzil-2-(3-hidroxi-pinOlidin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (24 mmol) em **"S -107-
t· <s> diclorometano (30 ml) foi adicionado à solução anterior via uma cânula, a temperatura de reacção foi levada até -30°C durante 0,5 horas, depois foi baixada para -78°C, seguida pela adição de trietilamina (118 mmol). A reacção foi então aquecida até 25°C, foi diluída com acetato de etilo, foi lavada três vezes com 1:1 de NaHC03 saturado/salmoura, os orgânicos foram secos sobre MgS04 e foram concentrados. A espuma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30,40 e 50% em hexanos para proporcionar uma espuma amarela clara (7,5 g, 95% de rendimento).
Exemplo 48c Éster de terc-butilo do ácido (S)-fl-benzil-2-(3RS)--hidroxi-pirrolidin-1 -ilV2-oxo-etil-carbâmico (±)-3-Pirrolidinol (75 mmol) e Boc-L-fenialalanina (38 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, lavados primeiro com ácido e depois com base) e o produto foi utilizado sem purificação. Produção 12,2 g, 96%; HPLC (60/40) 3,45 minutos (96%).
Exemplo 49 (YlSVBenziI-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-eti1Vamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-3-fenil-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona (2,6 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,6 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, tempo de reacção de 96 horas, lavados primeiro com ácido e depois com base). O produto em bruto foi triturado com 1:1 de éter-hexano e foi seco. Produção 966 mg, 91%; HPLC (60/40) 7,99 minutos (97%); PBMS 414/416 (MH+, 100%). -108 - 'η NMR (CDC13) δ 9,26 (br, 1H), 7,59 (m, 1H), 7,35 - 7,20 (m, 811), 6,84 (m, 1H), 5,14 (m, 1H); 4,61 (d, A de AB, 0,6H, J = 10,3 Hz), 4,52 (d, 0,4H, J = 11,6 Hz), 4,42 (d, B de AB, 0,6H, J = 10,3 Hz), 3,88 (m, 0,4H), 3,80 - 3,65 (m, ca 1,5H), 3,2 (m, ca. 2,5H), 3,04 (m, 0,4H), 2,95 - 2,8 (m, 1,2H), 2,63 (m, 0,6H). Anal. Cale. para C21H2oC1N302S+ 0,6 H20: C, 59,39; H, 5,03; N, 9,89.
Calculado: C, 59,39; H, 4,96; N, 9,52.
Exemplo 50 (Π SVBenzil-2-oxo-2-tiomorfolin-4-il-etilVamida do ácido 5 -cloro-1 H-indole-2-carboxí lico
Cloridrato de (S)-2-amino-3-fenil-l-tiomorfolin-4-il-propan-l-ona (2,6 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,6 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, lavados primeiro com ácido e depois com base). O produto em bruto foi então triturado com 1:1 de éter - hexanos e foi seco. Produção de 1,03 g, 94%; HPLC (60/40) 8,74 minutos (99%); PBMS 428/430 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H22C1N302S: C, 61,75; H, 5,18; N, 9,82.
Calculado: C, 62,04; H, 5,58; N, 9,78.
Exemplo 50a
Cloridrato de (S')-2-amino-3-fenil-l-tiomorfolin-4-il-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-bcnzil-2-oxo-2-tiomorfolin--4-il-etil)-carbâmico (17,8 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (67 ml) a 0°C, a solução foi agitada a 25°C durante 1 hora, a reacção foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 5,0 g, 98%; PBMS 251 (MH+, 100%). -109-
* *>*
Exemplo 50b Éster de terc-butilo do ácido ÍSWl-benzil-2-οχο--2-tiomorfolin-4-il-etilVcarbâmico
Tiomorfolina (38 mmol) e Boc-L-fenilalanina (19 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi concentrada, diluída com acetato de etilo, depois foi lavada primeiro com HC1 IN três vezes e depois com NaOH 2N, a camada orgânica foi seca sobre MgS04 e foi concentrada. A espuma resultante foi utilizada sem purificação adicional. Produção 6,3 g, 95%.
Exemplo 51 ΓΠ S)-Benzil-2-( 1.1 -dioxo-1 -tiazolidin-3-iH-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(l,l-dioxo-l-tiazolidin-3-il)-3-fenil--propan-l-ona (0,8 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,8 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°C, lavados primeiro com ácido e depois com base). O produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30, 40 e 50% em hexanos seguido por trituração com 1:1 de éter - hexanos. Produção 266 mg, 75%; HPLC (60/40) 5,52 minutos (> 99%); PBMS 446/448 (MH+, 100%); ‘H NMR (CDC13) δ 9,21 (br, 0,5H), 9,15 (br, 0,5H), 7,62 (br, 0,5H, J = 2 Hz), 7,60 (d, 0,5H, J = 2 Hz), 7,35 - 7,20 (m, 7H), 7,10 (d, 0,5H, J = 8,5 Hz), 7,02 (d, 0,5H, J = 8,5 Hz), 6,84 (d, 0,5H, J = 2 Hz), 6,81 (d, 0,5H, J = 2 Hz), 5,21 (m, 0,5H), 4,93 (m, 0,5H), 4,62 (d, 0,5H, J = 11 Hz), 4,47 (d, A de AB, 0,5H, J = 13 Hz), 4,39 (d, B de AB, 0,5H, J = 13 Hz), 4,22 (m, 0,5H), 4,03 (m, 0,5H), 3,83 (m, 0,5H), 3,44 (d, 0,5H, J = 11 Hz), 3,3 - 3,0 (m, 4H), 2,67 (m, 0,5H).
Exemplo 52 [nS)-í4-Cloro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-l-iD-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-cloro-fenil)-l-(4-hidroxi-pipe-ridin-l-il)-propan-l-ona (0,98 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,92 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 50, 75 e 100% em hexanos. Produção 362 mg, 86%; HPLC (60/40) 5,06 minutos (97%); pf 227 - 229°C; TSPMS 460/462 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H23Cl2N303: C, 60,01; H, 5,04; N, 9,13.
Calculado: C, 59,83; H, 5,18; N, 9,16.
Exemplo 52a
Cloridrato de (SV2-amino-3-(4-cloro-fenilV 1 -(4--hidroxi-piperidin-1 -ilVpropan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-(4-cloro-benzil)-2-(4-hidroxi--piperidin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (475 mg, 1,2 mmol) foi dissolvido em HC1 4M-dioxano (5 ml) a 0°C. A mistura foi agitada durante 1,5 horas a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 422 mg, 105%; TSPMS 283 (MH+, 100%).
Exemplo 52b Éster de terc-butilo do ácido (SVri-(4-cloro-benziD-2-(4-hidroxi--pjperidin-1 -ilV2-oxo-etill-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (2,6 mmol) e Boc-L-p-clorofenilalanina (2,5 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 e 3:1 de acetato de etilo/hexanos. Produção 662 mg, 69%.
Exemplo 53 r2-('4-hidroxi-piperidm-l-ilVnS)-('lH-imidazol-4-ilmetilV2-oxo-etil-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-3-(lH-imi-dazol-4-il)-propan-l-ona (0,7 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,7 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (tempo de reacção de 120 horas, omitiu-se a lavagem com ácido). O produto em bruto foi triturado duas vezes com éter, com 1:1 de éter-hexanos e o resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 5 - 20% em diclorometano contendo hidróxido de amónio a 0,5 %. Produção 232 mg, 81%; HPLC (40/60) 2,57 minutos (98%); PBMS 416/418 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C20H22CIN3O3 + 0,55 H20: C, 56,42; H, 5,47; N, 16,45. Calculado: C, 56,07; H, 5,65; N, 16,08.
Exemplo 53a
Cloridrato de /S)-2-amino-l-f4-hidroxi-piperidin-l-ilV -3-( 1 H-imidazol-4-il)-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-{2-(4-hidroxi-piperidin--1 -il)-2-oxo-1 - [ 1 -(tolucno-4-sulfonil)-1 H-imidazol-4-ilmetil]-ctil} carbâmico (512 mg, 10 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (3 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1,5 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 422 mg, 105%; TSPMS 283 (MH+, 100%). -112 -
Exemplo 53b r
Ester de terc-butilo do ácido (SV i2-(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-1 - Γ1 --(tolueno-4-sulfonilV 1 H-imidazol-4-ilmetin-etil \ -carbâmico A 4-hidroxipiperidina (303 mg, 3,0 mmol), trietllamina (394 mg, 3,9 mmol) e o cianofosfato de dietilo (636 mg, 3,9 mmol) foram adicionados por esta ordem a Boc-Nim-tosil-L-histidina (L Med. Chem. 30 536 (1987); 1,32 g, 3,9 mmol) a 25°C. Ao fim de 120 horas, a solução foi diluída com acetato de etilo, foi lavada duas vezes com NaOC03 saturado, foi seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluíuda com etanol a 1 - 8% em diclorometano. Produção, 517 mg, 35%; HPLC (50/50) 4,75 minutos (97%).
Exemplo 54
Ester (2S)-f(5-cloro-lH-indole-2-carbonilVaminol-3-(4-hidroxi-piperidin--l-ill-3-oxo-propílico do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-3-hidroxi-l-(4-hidroxi-piperidin-l-il)--propan-l-ona (0,89 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,85 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi isolado por cromatografia, conjuntamente com o análogo de serina mais polar (40%) sobre sílica gel eluída com etanol a 1 -16% em diclorometano. Produção 51 mg, 16%; HPLC (60/40) 7,06 minutos (96%); PBMS 348/350 (100%), 543/545 (MH+, < 5 %).
Anal. Cale. para C26H24CI2N4O5 + 0,57 H20: C, 56,40; H, 4,58; N, 10,12. Calculado: C, 56,79; H, 4,90; N, 9,65.
Exemplo 54a
Cloridrato de (S)-2-amino-3-hidroxi-l-(4-hidroxi-PÍperidin-l-il)-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-hidroximetil-2-(4-hidroxi- - 113- Ú -pipcridin-l-il)-2-oxo-ctil]-carbâmico (595 mg, 2,0 mmol) foi dissolvido em IIC1 4M - dioxanos (2 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 506 mg, 105%; EM 189 (MH+, 100%).
Exemplo 54b Éster de terc-butilo do ácido (S)-ri-hidroximetil-2--(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (6,7 mmol) e Boc-L-serina (6,4 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (tempo de reacção de 60 horas) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi concentrada, o resíduo foi dissolvido em clorofórmio e NaOH IN (6 ml) e a solução resultante foi extraída repetidamente (durante dez ou mais minutos) com clorofórmio. Os extractos de clorofórmio foram concentrados e o resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 - 16% em diclorometano. Produção 751 mg, 41%, HPLC (40/60) 2,72 minutos (96%).
Exemplo 55 f(lSV(4-Hidroxi-benzilV2-(4-hidroxi-piperidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico
O cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-hidroxi-fenil)-l-(4-hidroxi-piperi-din-l-il)-propan-l-ona (0,68 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,65 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada com NaOH IN (2 ml), a camada aquosa foi extraída três vezes com acetato de etilo, os extractos orgânicos foram combinados, foram lavados com HC1 IN, foram secos e concentrados. O -114-
resíduo foi purificado por cromatografia sobre sílica gel cluída com ctanol a 1 -16% em diclorometano. Produção, 150 mg, 52%; HPLC (60/40) 3,53 minutos (99%); PBMS 442/444 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H24C1N304 + 0,5 H20: C, 61,26; H, 5,59; N, 9,32.
Calculado: C, 61,52; H, 5,89; N, 8,98.
Exemplo 55a
Cloridrato de ÍSV2-amino-3-(4-hidroxi-fenin-l-(4--hidroxi-niperidin-1 -ilVpropan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-(4-hidroxi-benzil)-2-(4-hi-droxi-piperidin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (450 mg, 1,2 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (2 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 400 mg, 107%; EM 265 (MH+, 100%).
Exemplo 55b Éster de terc-butilo do ácido (SVri-(4-hidroxi-benzill-2-(4--hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (3,9 mmol) e Boc-L-tirosina (3,7 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, 60 horas de tempo de reacção) com o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e foi lavada uma vez com uma base, a camada de base foi acidificada com HC1 2N e foi extraída três vezes com clorofórmio, e os extractos de clorofórmio foram concentrados. A espuma resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 - 8% em diclorometano contendo NH4OH a 0,5%. Produção 550 mg, 41%; HPLC (40/60) 5,02 minutos (87%).
Exemplo 56 f 2-( 4-Hidroxi-piperidin-1 -iD-2-oxo-( 1 SVpÍDerídin-3-ilmetil-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico 0 dicloridrato de (S)-2-amino-l-(4-tódroxi-piperidin-l-il)-3-piri-din-3-il-propan-l-ona (0,8 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,7 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 - 16% em diclorometano. Produção de 26 mg, 8%; HPLC (50/50) 5,02 minutos (99%); PBMS 427/429 (MH+, 100 %);
Anal. Cale. para CjiH^CIKAí + 0,5 H20: C, 60,62; H, 5,55; N, 12,85. Calculado: C, 60,57; H, 5,74; N, 12,53.
Exemplo 56a
Dicloridrato de (S)-2-amino-l-(4-hidroxi-piperidin-l-iD-3-piperidin-3-il-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido de (S)-[2-(4-hidroxi-piperidin-l-il)--2-oxo-l-piperidin-3-ilmetil-etil]-carbâmico (367 mg, 1,05 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano a 0°C. A suspensão resultante foi agitada durante 1,5 horas a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 450 mg, 100%.
Exemplo 56b
Ester de terc-butilo do ácido (SVÍ2-f4-hidroxi-piperidin--1-Í1V2-OXO-1 -piperidin-3-il-metil-etin-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (2,9 mmol) e N-t-Boc-L-3-(3-piridil)alanina -116 -
(2,8 iiunol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (temperatura dc reacção de 0 - 25°C, 96 horas de tempo de reacção, lavagem com ácido omitida) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 - 8 % em diclorometano. Produção 454 mg, 46%; EM 350 (MH+, 100%).
Exemplo 57 Γ (1 R)-(4-Fluoro-benzilV2-(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-amida do ácido lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (R)-2-animo-3-(4-fluoro-fenil)-l-(4-hidroxi-piperi-din-l-il)-propan-l-ona (0,5 mmol) e o ácido lH-indole-2-carboxílico (0,5 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 -25°) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 25, 30, 50, 75 e 80% em hexanos. Produção 150 mg, 60%; HPLC (60/40) 3,66 minutos (97%); pf204 - 207°C; PBMS (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H24FN303: C, 67,47; H, 5,91; N, 10,26.
Calculado: C, 67,18; H, 6,03; N, 10,21.
Exemplo 57a
Cloridrato de (Rl-2-amino-3-(4-fluoro-fenilV -1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -ilVpropan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido de (R)-[l-(4-fluoro-benzil)-2-(4--hidroxi-piperidm-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (2,6 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (2 ml) a 0°C. A solução foi agitada durante 2 horas a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 920 mg, 124%; HPLC (60/40) 2,23 minutos (98%).
Exemplo 57b Éster de terc-butilo do ácido de (R)-ri-(4-fluoro-benzilV2-(4--hidroxi-piperidin-1 -il V2-oxo-etill-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (3,7 mmol) e (R)-N-t-Boc-p-fluoro-fenilala-nina (3,5 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A, obtendo-se uma espuma que foi utilizada sem purificação adicional. Produção 940 mg, 73%; HPLC (60/40) 3,64 minutos (95%); EM 367 (MH+, 100%).
Exemplo 58 r(lR)-(4-Fluoro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-l -il)-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (R)-2-amino-3-(4-fluoro-fenil)-l-(4-hidroxi-piperi-din-l-il)-propan-l-ona (0,6 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,6 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto em bmto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 50, 75 e 100% em hexanos. Produção 171 mg, 765%; HPLC (60/40) 4,23 minutos (97%); EM 444/446 (MH+, 100%); TSPMS 444/446 (MH+, 100%); ’Η NMR (CDC13) δ 9,20 (br, 1H), 7,57 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,33 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,3 - 7,2 (m, 2H), 7,14 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 6,85 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,05 -3,80 (m, 2H), 3,7 - 3,3 (m, 1,5 H), 3,25 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,93 (m, 0,5H), 1,9-1,7 (m, 2,5 H), 1,45 (m, 2H), 1,15 (m, 0,5H).
Anal. Cale. para C^CIF^C^ + 0,05 H20: C, 62,11; H, 5,23; N, 9,45. Calculado: C, 62,51; H, 5,66; N, 9,19.
Exemplo 59 \( 1 S)-í4-Fluoro-benzilV2-(4-hidroxi-piperidm-1 -ilV2-oxo-etin-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-fluoro-fenil)-l-(4-hidroxi-piperi- -118 - /<
ί.Λ e-i din-l-il)-propan-l-ona (0,5 mmol) e o ácido 5-fluoro-lH-indolc-2-carboxílico (0,5 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. O produto em bruto foi triturado uma vez com 1:1 de éter - hexanos e uma vez com hexanos. O sólido resultante foi fervido em acetato de etilo, a suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi filtrado. Produção 103 mg, 48%; HPLC (60/40) 3,69 minutos (95%); PBMS 428 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H23FN2O3 + 0,25 H20: C, 63,95; H, 5,48; N, 9,73.
Calculado: C, 63,93; H, 5,66; N, 9,87.
Exemplo 59a
Cloridrato de (SV2-amino-3-(4-fluoro-fenil)-l-(4--hidroxi-piperidin-1 -ilVpropan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido [(S)-1 -(4-fluoro-benzil)-2-(4--hidroxi-piperidin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (20,2 g, 55 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxanos (25 ml) a 25°C. Ao fim de 3 horas, precipitou um xarope espesso e adicionou-se mais HC1 4M - dioxanos (10 ml). A mistura foi agitada durante 2 horas, foi concentrada e o resíduo sólido foi suspenso em HC1 4M -dioxanos. Ao fim de 2 horas a 25°C, a mistura foi concentrada e o resíduo foi coevaporado duas vezes com éter. O sólido resultante foi agitado numa mistura de éter (75 ml) e hexanos (10 ml) a 25°C durante 18 horas, a mistura foi filtrada e o sólido filtrado foi lavado com 1:1 de éter - hexanos e foi seco para proporcionar um sólido higroscópico (16,3 g, 97%).
Exemplo 59b Éster de terc-butilo do ácido IYS1-1 -(4-fluoro-bePZÍl)--2-(4-hidroxi-piperidin-l-il)-2-oxo-etill-carbâmico 4-Hidroxipiperidina (0,29 mmol) e (S)-N-t-Boc-p-fluoro-fenilala- -119 -
nina (0,28 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A, proporcionando o produto em bruto sob a forma de uma espuma com 84% de rendimento. Uma porção deste material (81,6 g) foi dissolvida em acetato de etilo quente (400 ml) e adicionaram-se hexanos (25°C) à solução resultante até se obter uma ligeira turvação. A mistura foi aquecida até à fervura e a solução transparente resultante foi deixada arrefecer até 25°C durante a noite. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi lavado com acetato de etilo - hexanos e foi seco (68,1 g, 67%).
Exemplo 60 Éster de terc-butilo do ácido 1 - {(2S)-r(5-cloro-1 H-indole-2-carbonill-aminol-3--fenil-propionil)-(4RVhidroxi-pirrolidina-(2SVcarboxílico O cloridrato do éster benzílico do ácido l-((2S)-amino-3-feml-pro-pionil)-(4R)-hidroxi-pirrolidina-(2S)-carboxílico (0,56 mmol) e o ácido 5-cloro--lH-indole-2-carboxílico (0,53 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A ( temperatura de reacção de 0 - 25°C, 60 horas de tempo de reacção) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20, 30 e 50% em hexanos. Produção 26 mg, 8%; HPLC (60/40) 8,14 minutos (98%); PBMS 546/548 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para Cso^ClNjOs: C, 65,99; H, 5,17; N, 7,70.
Calculado: C, 66,14; H, 5,37; N, 7,60.
Exemplo 60a
Cloridrato do éster benzílico do ácido l((2SVamino-3-fenil--propionilV(4RVhidroxi-pinOlidina-(2SVcarboxílico O éster benzílico do ácido l-((2S)-terc-butoxicarbonilamino-3- -120 - -fenil-propionil)-(4R)-hidroxi-pirrolidina-(2S)-carboxílico (3,0 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção 1,16 g, 96%.
Exemplo 60b Éster benzilico do ácido l-K2SVterc-butoxicarbonilamino-3-fenil--propionil)-(4RVhidroxi-pirrolidma-(2SVcarboxílico O éster benzílico de trans-L-hidroxiprolina (3,15 mmol) e L-Boc--fenilalanina (3,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, 1:1 de diclorometano/dimetilformamida) e o produto foi utilizado sem purificação adicional. Produção 1,31, 99%; HPLC (60/40) 6,1 minutos (95%).
Exemplo 61
Kl SV (4-fluoro-benzil V2-( 4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxíHco O cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-fluoro-fenil)-l-(4-hidroxi-pipe-ridin-l-il)-propan-l-ona (0,051 mol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,051 mol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo -hexanos a 50%, 75%, 80% e 100%, proporcionando uma espuma (rendimento de 78%), HPLC (60/40) 4,21 minutos (99%). Uma porção deste material foi recristalizada por dissolução em acetato de etilo quente (aproximadamente 5-7 ml/g), e adição de um volume aproximadamente igual de hexanos ao refluxo, seguido por arrefecimento lento da solução a 25°C. O sólido foi filtrado e lavado com 1:4 de acetato de etilo : hexanos e foi seco (recolha de 70 -90 %): pf 175 - -121- 177°C; *H NMR (CDC13) Ô 9,41 (m, 0,5H), 9,36 (m, 0,5H), 7,59 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,37 (d, 1H, J = 8 Hz), 7,29 (dd, 1H, J = 2,9 Hz), 7,20 (dd, 1Hz, J = 2,0, 8,9 Hz), 7,14 (m, 2H), 6,95 (m, 2H), 6,86 (m, 1H), 5,34 (m, 1H), 4,05 (m, 0,5H), 3,90 (m, 1,5H), 3,65 (m, 0,5H), 3,45 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 3,10 (m, 2H), 2,93 (m, 0,5H), 1,88 (br, 1H, permuta com D20). 1,80 (m, 1,5H), 1,45 (m, 2H), 1,12 (m, 0,5H). PBMS 444/446 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C^H^CIF^C^ + 0,2 H20: C, 61,73; H, 5,27; N, 9,39.
Calculado: C, 61,40; H, 5,37; N, 9,11.
Exemplo 62 IY1 SVÍMetoxi-metil-carbamoil>2-piridin-3-il-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O dicloridrato de (2S)-amino-N-metoxi-N-metil-3-piridin-3-il-pro-pionamida (1,3 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,25 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 1:1 diclorometano / DMF) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo. Produção 313 mg, 65%; HPLC (60/40) 2,84 (99%); TSPMS 387/389 (MH+, 100%); ’H NMR (CDCI3) δ 9,1 (br, 1H), 8,48 (dd, 1H), 8,43 (m, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,50 (m, 1H, J = ca. 8 Hz), 7,37 (d, 1H, J = ca. 8 Hz), 7,23 (d, 1H), 7,18 (dd, 1H, J = ca. 8 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 8 Hz), 6,82 (d, 1H), 5,42 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,25 (s, 3H), 3,32 (dd, A de AB, 1H, J = ca. 7, 14 Hz), 3,10 (dd, B de AB, 1H, J = ca. 7, 14 Hz).
Anal. Cale. para C19Hi9C1N403+ 0,4 H20: C, 57,91; H, 5,07; N, 14,22.
Calculado: C, 58,19; H, 5,23; N, 13,82.
Exemplo 62a
Dicloridrato de (2SVamino-N-metoxi-N-metil-3-piridin-3-il-propionamida O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-(metoxi-metil-carbamoil)-2--piridin-3-il-etil]-carbâmico (1,5 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano a 0o C. A solução resultante foi agitada durante 2 horas a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção 390 mg, 95%.
Exemplo 62b Éster de terc-butilo do ácido (SVf l-(metoxi-metil-carbamoilV -2-pirídin-3-il-etil]-carbâmico O cloridrato de Ν,Ο-dimetil-hidroxilamina (1,7 mmol) e Boc-3--piridil-L-alanina (1,6 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 2:1 diclorometano/di-metilformamida, omitida a lavagem com ácido, Na2S04 foi utilizado para secagem). O resíduo foi triturado com éter, para proporcionar 428 mg (86% de rendimento) de um sólido amarelo.
Exemplo 63 Éster metílico do ácido (R.SV2-[T5-cloro-lH-indole-2-carbonill--aminol-3-(3-fluoro-fenill-propiónico O éster metílico do ácido (R,S)-2-amino-3-(3-fluoro-fenil)-pro-piónico (2,05 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,03 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 1:1 diclorometano/DMF) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 40% em hexanos. -123- /“ϊ ί ,Μ «a Ο resíduo foi triturado com 1:1 de éter - hexanos, e hexanos, obtendo-se um sólido quase branco (484 mg, 63%): HPLC (60/40) 8,13 minutos (95%); TSPMS 375/377 (MH+, 100%); 'H NMR (CDC13) δ 9,26 (br, 1H), 7,60 (d, 1H, J = ca. 1 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,25 (m, 2H), 6,95 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 6,77 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,63 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 5,08 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,28 (dd, 1H, A de AB, J = 5,7, 14 Hz), 3,21 (dd, 1H, B de AB, J = 5,5,14 Hz).
Anal. Cale. para C19H16C1FN203: C, 60,89; H, 4,30; N, 7,47.
Calculado: C, 60,79; H, 4,58; N, 7,18.
Exemplo 63a
Cloridrato de éster metílico do ácido (R.SV2-amino-3-(3-fluoro-fenilVpropiónico
Cloreto de trimetilsililo (1,07 g, 9,9 mmol) foi adicionado a uma suspensão de m-fluoro-DL-fenilalanina (0,404 g, 2,2 mmol) em metanol (4 ml) a 25°C. A solução resultante foi levada ao refluxo durante 1 hora, foi arrefecida e concentrada. O resíduo foi triturado com éter. Produção, 515 mg, 100%; HPLC (60/40) 2,31 minutos (95%).
Exemplo 64 IY1 SV(Metoxi-metil-carbamoilV2-tiofen-2-il-etil-amida de ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N-metoxi-N-metil-3-tiofen-2-il-pro-pionamida (1,2 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,2 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente da reacção 2:1 de diclorometano/dimetilformamida). O produto em bruto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 10, 20, 30 e 40 % em hexanos. Produção 375 mg, 80%; HPLC (60/40) /<v -124-6,36 miaulos (99%); PBMS 392/394 (MH+, 100%); 'H NMR (CDC13) δ 9,33 (br, 1H), 7,60 (d, 1H, J = ca. 1 Hz), 7,30 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,20 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), 7,15 (dd, 1H, J = 1, 5,0 Hz), 6,91 (dd, 1H, J = 3,4, 5,1 Hz), 6,86 (d, 1H, J = 1,6 Hz), 6,84 (d, 1H, J = ca. 2 Hz), 5,40 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,46 (dd, 1H, A de AB, J = 6,2, ca. 14 Hz), 3,37 (dd, 1H, B de AB, J = 6,2, ca. 14,2 Hz), 3,25 (s, 3H).
Anal. Cale. para C18Ht8ClN303S+ 0,25 H20: C, 55,14; H, 4,87; N, 10,15. Calculado: C, 55,41; H, 4,79; N, 10,17.
Exemplo 64a
Cloridrato de (S)-2-amino-N-metoxi-N-metil-3-tiofen-2-il-proDÍonamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-(metoxi-metil-carbamoil)-2--tiofen-2-il-etil]-carbâmico (1,3 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxanos (1 ml) a 0°C e a solução resultante foi agitada a 25°C durante 2 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter, para proporcionar um sólido amarelo (321 mg, 96%; HPLC (60/40) 2,24 minutos (98%); EM 215 (MH+, 100%).
Exemplo 64b Éster de terc-butilo do ácido (SV11 -(metoxi-metil-carbamoiD--tiofen-2-il-etill-carbâmico O cloridrato de Ν,Ο-dimetil-hidroxilamina (1,4 mmol) e Boc-(2--tienil)-L-alanina (1,3 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C), proporcionando o produto que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 426 mg, 104%. - 125 - 5
Exemplo 65 Éster metílico do ácido (RSV2-f(5-cloro-lH-indole-2-carbo-nil)-aminol-3-(4-fluoro-fenil)-propiónico O éster metílico do ácido (R,S)-2-amino-3-(3-fluoro-fenil)-pro-piónico (3,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,9 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 3:2 de diclorometano/dimetilformamida) e o produto em bruto resultante foi triturado com 1:1 de éter/hexanos. Produção 1,03 g, 92%: HPLC (60/40) 7,95 minutos (96%); PBMS (MH+, 100%); 'H NMR (CDC13) δ 9,30 (br, 1H), 7,60 (d, 1H, J = ca. 1 Hz), 7,35 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,25 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), 7,10 (m, 2H), 6,97 (m, 2H), 6,77 (d, 1H; J = 2 Hz), 6,62 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 5,06 (m, 1H), 3,78 (s, 3H), 3,27 (dd, 1H, A de AB, J = 8,14 Hz), 3,19 (dd, B de AB, J = 7,14 Hz).
Anal. Cale. para Ci9H16C1FN203: C, 60,89; H, 4,30; N, 7,47.
Calculado: C, 60,74; H, 4,36; N, 7,55.
Exemplo 66
Cloridrato de f2-í4-amino-fenilW 1 SVdimetilcarbamoil-etil-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O dicloridrato de (S)-2-amino-3-(4-amino-fenil)-N,N-dimetil-pro-pionamida (0,7 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,7 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A ( temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 3:1 diclorometano/DMF, lavados apenas com base) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com etanol a 1 -16% em diclorometano com NH4OH a 0,5%. As fraeções combinadas foram concentradas, dissolvidas em metanol a 0°C, a solução resultante foi tratada com HC11,01N (1,05 eq.). Ao fim de 5 minutos, a mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter, proporcionando um sólido alaranjado (79 mg, 29 % de rendimento): TSPMS 385/387 (MH+, 100%); - 126- % >«»*%* \
Anal. Cale. para C20H21ClN4O2 1,5 HC1: C, 54,65; H, 5,16; N, 12,75.
Calculado: C, 54,96; H, 5,53; N, 12,53.
Exemplo 66a
Dicloridrato de fS)-2-amino-3-(4-amino-fenilVN.N-dimetil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-[2-(4-amino-fenil)-l-dimetil-carbamoil-etil]-carbâmico (214 mg, 0,7 mmol) foi dissolvido em HC1 4M -dioxano (2 ml) a 0°C e a solução foi agitada durante 2 horas a 25°C. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 294 mg, 102%; PBMS 208 (MH+, 100%).
Exemplo 66b
Ester de terc-butilo do ácido (S)-r2-('4-amino-fenil)-l--dimetilcarbamoil-etill-carbâmico
Cloridrato de dimetilamina (2,04 mmol) e Boc-p-amino-L-fenil-alanina (1,7 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção de 4:1 de diclorometano/dimetilformamida, lavados apenas com uma base). O produto foi purificado por cromatografía sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 50,60, 70 e 100% em hexanos. Produção 226 mg, 42%; HPLC (70/30) 2,45 minutos (100 %).
Exemplo 67 ((1 SVDimetilcarbamoil-3-fenilr)ropilVamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-4-fenil-butiramida (0,76 -127 - mmol) e υ ácido 5-cloro-lH-indolc-2-carboxílico (0,76 nunol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 3:1 de diclorometano/DMF) e o produto foi purificado por cromatografía sobre sílica gel eluída com acetato de etilo 10, 20, 30, 40, 50 e 60% em hexanos. Produção 263 mg, 90%; HPLC (60/40) 7,12 minutos (99%); TSPMS 384/386 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C21H22CIN3O3: C, 65,71; H, 5,78; N, 10,95.
Calculado: C, 65,34; H, 5,93; N, 10,91.
Exemplo 67a
Cloridrato de fS)-2-amino-N.N-dimetil-4-fenil-butiramida O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-dimetilcarbamoil-3-fenil--propil)-carbâmico (235 mg, 0,8 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (2 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 1,5 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção 187 mg, 100%; HPLC (60/40), 2,31 minutos (99%).
Exemplo 67b Éster de terc-butilo do ácido de (SVd-dimetil-carbamoil-3-fenil-propilVcarbâmico O cloridrato de dimetilamina (1,0 mmol) e o ácido (S)-N-t-butoxi--carbonil-2-ammo-4-fenilbutírico (0,84 mmol) foram acoplados de acordo com Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 3:1 de diclorometano/DMF) proporcionando o produto que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 238 mg, 93%; HPLC (60/40) 5,98 minutos (97%).
Exemplo 68 IY1SVdimetil-carbamoil-2’(4-hidroxi-fenil)-etiI1-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxi1ico 0 cloridrato de (S)-2-amino-3-(4-hidroxi-fenil)-N,N-dimetil-pro-pionamida (1,05 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A ( temperatura de reacção de 0 - 25°C, solvente de reacção 2:1 de diclorometano/DMF, lavados apenas com ácido) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20, 40, 50 e 75% em hexanos seguida por trituração com éter. Produção 400 mg, 104%; HPLC (60/40) 3,93 (98%); pf 228 - 231°C (dec, amarelada a 210°C); TSPMS 386/388 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C2oH20C1N303 + 0,9 H20: C, 59,75; H, 5,47; N, 10,45.
Calculado: C, 61,05; H, 5,79; N, 10,08.
Exemplo 68a
Cloridrato de (SV2-amino-3-(4-hidroxi-fenilVN.N-dimetil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-[l-dimetilcarbamoil-2-(4-hidro-xi-fenil)-etil]-carbâmico (5,7 mmol; 18,5 mmol) foi dissolvido em HC14M - dio-xano (7 ml) a 0°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 3 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 5,23 g; HPLC (60/40) 3,32 minutos (98%).
Exemplo 68b Éster de terc-butilo do ácido (SVfl-dimetilcarbamoil--2-(4-hidroxi-fenil)-etill-carbâmico
Cloridrato de dimetilamina (79 mmol) e Boc-L-tirosina (66 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, 12:1 de dieloiometano/DMF como solvente da reacção, tempo de reacção de 60 horas) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 10,20, 30, 50 e 70% em hexanos. Produção 20,6 g, 102%; HPLC (60/40) 3,21 minutos (96%).
Exemplo 69 ((lS)-Metoxi-carbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (2S)-amino-N-metoxi-3-fenil-propionamida (1,02 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,02 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A. O resíduo foi triturado com éter para proporcionar um sólido amarelo claro. Produção, 160 mg, 36%; pf 210 - 213 °C (dec); PBMS 372/374 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C19H18C1N303+ 1,75 H20: C, 56,58; H, 5,37; N, 10,42. Calculado: C, 56,88; H, 5,09; N, 10,03.
Exemplo 69a
Cloridrato de f2SVamino-N-metoxi-3-fenil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-(metoxi-carbamoil)-2-fenil--etil]-carbâmico (200 mg, 0,68 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano a 0°C e a mistura foi agitada a 25°C. Ao fim de 0,5 horas, a mistura foi concentrada e o resíduo triturado com éter.
Exemplo 69b Éster de terc-butilo do ácido IY 1 S)-(metoxi-carbamoil')-2-fenil-etill-carbâmico O cloridrato de metoxiamina (83,5 mmol) e Boc-L-fenilalanina (20 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 e 2:1 de acetato de etilo/hexanos seguida por trituração com éter. Produção 1,80 g, 31%.
Exemplo 70 ((lRVMetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (R)-2-amino-N-metil-3-fenil-propionamida (0,84 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,84 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A ( temperatura de reacção de 0 - 25°C ). O produto em bruto foi triturado com diclorometano e depois com éter e foi seco. Produção 236 mg, 79%; HPLC (60/40) 4,63 minutos (97%); PBMS 356/358 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C19H18C1N302+ 0,25 H20: C, 63,33; H, 5,18; N, 11,66. Calculado: C, 63,37; H, 5,50; N, 12,06.
Exemplo 70a
Cloridrato de ÍR)-2-amino-N-metil-3-fenil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (R)-(l-metilcarbamoil-2-fenil-etil)--carbâmico (722 mg, 2,6 mmol) foi dissolvido em HC1 4M - dioxano (10 ml) a 0 C. A mistura foi agitada durante 1 hora a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter. Produção, 517 mg, 93%.
Exemplo 70b Éster de terc-butilo do ácido (RW l-metilcarbamoil-2-fenil-etilVcarbâmico O cloridrato de metilamina (3,1 mmol) e Boc-D-fenil-alanina (2,8 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A ( temperatura de -131-
rcacção dc 0 - 25°C, 144 horas de tempo de reacçõo, lavados primeiro com ácido e depois com base), proporcionando o produto que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 760 mg, 96%.
Exemplo 71 ((\ SVDimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5.6-dicloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (0,06 mmol) e o ácido 5,6-dicloro-lH-indole-2-carboxílico (0,06 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25° C, 96 horas de tempo de reacção). O produto em bruto foi triturado com 1:1 de éter - hexanos e foi seco. Produção 24 mg, 96%; HPLC (60/40) 8,05 minutos (97%); PBMS 405/407 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C20HI9Cl2N5O3+ 0,25 H20: C, 58,76; H, 4,81; N, 10,28. Calculado: C, 58,95; H, 4,89; N, 9,90.
Exemplo 71a
Cloridrato de (SV2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (l-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)--carbâmico (8,6 g, 29 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano (110 ml) a 0°C e a mistura foi agitada a 25°C durante 1 hora. A mistura foi concentrada e os sólidos foram triturados com éter. Produção, 6,2 g, 92%; PBMS 193 (MH+, 100%).
Exemplo 71b r
Acido 5.6-dicloro-1 H-mdole-2-carboxílico Pó de zinco (3,52 g, 54 mmol) foi adicionado lentamente a uma solução quente do ácido 3,4-dicloro-5-nitrofenilpirúvico (1,5 g, 5,4 nunol) em ácido acético (15 ml). Ao fim de alguns minutos, deu-se uma reacção vigorosa (exotérmica). A solução resultante foi aquecida até 80°C e a reacção ficou concluída (CCF). A mistura foi filtrada, os sólidos filtrados foram lavados com ácido acético e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi dissolvido em NaOH 2 N, a solução resultante foi lavada com éter (3x) e diclorometano (2x), foi acidificada para pH 1 com HC1 6N e foi extraída com acetato de etilo. Os extractos foram secos e concentrados para proporcionarem um sólido castanho claro (458 mg, 34%): HPLC (60/40) 5,31 (93%).
Exemplo 71c Ácido 3.4-dicloro-5-nitrofenilpirúvico
Adicionou-se etanol absoluto (25 ml) a 3 - 15°C a uma mistura agitada de metal de potássio (2,67 g, 68 mmol) em éter (100 ml). A solução resultante foi tratada a 3°C com uma solução de oxalato de dietilo (10,0 g, 62 mmol) durante 5-10 minutos, e a solução resultante foi agitada durante 30 minutos a 3°C e 25°C durante 18 horas. A mistura foi filtrada e o sólido resultante foi lavado com éter e foi seco (13,7 g). Este material (12,7 g) foi dissolvido em 400 ml de água quente, a solução foi arrefecida e extraída com éter. A camada aquosa resultante foi acidificada para pH 2 com HC1 concentrado e a camada de éter foi separada, seca e concentrada para produzir 7,5 g de um sólido que foi triturado com hexanos, proporcionando a substância do título sob a forma de um sólido amarelo (7,01 g, 41%).
Exemplo 72 (Y1 SVdimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-bromo-1 H-indole-2-carboxflico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (1,0 -133- > mmol) c o ácido 5-bromo-lII-indole-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados dc acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C ) e a espuma resultante foi triturada com éter/hexanos e foi seca. Produção 374 mg, 90%; HPLC (60/40) 6,17 minutos (98%); pf 199 - 201 °C; PBMS 414/416 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C2oH2oBrN302: C, 57,98; H, 4,82; N, 10,14.
Calculado: C, 58,07; H, 5,12; N, 10,08.
Exemplo 73 (Y1 S)-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-metil-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (1,0 mmol) e o ácido 5-metil-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C). O produto em bruto foi triturado com 1:1 de éter-hexanos e foi seco. Produção 302 mg, 87%; HPLC (60/40) 5,46 minutos (99%); pf 198,5 200 °C; PBMS 350 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C2iH23N302: C, 72,18; H, 6,63; N, 12,04.
Calculado: C, 72,14; H, 6,90; N, 12,11.
Exemplo 74 ((1 S)-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-metoxi-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (1,0 mmol) e o ácido 5-metoxi-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, 60 horas de tempo de reacção) e a espuma resultante foi triturada com éter. Produção 329 mg, 90%; HPLC (60/40) 4,27 minutos (99%); PBMS 366 (MH+, 100%); Anal. Cale. para C21H23N303+ 0,125 H20: C, 68,60; H, 6,37; N, 11,43. Calculado: C, 68,50; H, 6,34; N, 11,45.
Exemplo 75 (Π S)-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-caiboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (1,0 mmol) e o ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C, 60 horas de tempo de reacção), e o sólido resultante foi triturado com éter. Produção 320 mg, 91%; HPLC (60/40) 4,74 minutos (100%); pf 229,5 - 232 °C; PBMS 354 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C20H20FN3O2: C, 67,97; H, 5,70; N, 11,89.
Calculado: C, 67,88; H, 5,74; N, 11,71.
Exemplo 76 (nSVDimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-ciano-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2 amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (0,16 mmol) e o ácido 5-ciano-lH-indole-2-carboxílico (0,16 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C ) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 de acetato de etilo/hexanos. Produção 38 mg, 66%; HPLC (60/40) 4,08 minutos (97%); PBMS 361 (MH+, 100%); *H NMR (DMSO-íU δ 12,1 (br, 1H), 9,04 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 8,27 (s, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,43 (m, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,25 (m, 2H), 7,18 (m, 1H), 5,10 (m, 1H), $ y -135 - 3,03 (m, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,83 (s, 3H).
Anal. Cale. para C2,H20N4O2 + 0,5 H20: C, 68,28; H, 5,73; N, 15,17. Calculado: C, 68,51; H, 5,66; N, 14,85.
Exemplo 76a r
Acido 5-ciano-1 H-indole-2-carboxílico O éster de etilo do ácido 5-ciano-lH-indole-2-carboxílico (1,71 g, 8,0 nunol) foi adicionado a uma solução de etanol (10 ml) e de hidróxido de potássio (2 g) e a mistura resultante foi aquecida ao refluxo durante 1 hora. Adicionou-se água para dissolver o precipitado e adicionou-se HC16N para levar o pH para 1. A mistura foi arrefecida num banho de gelo, foi filtrada e o sólido incolor resultante foi lavado com água fria e foi seca (1,51 g). Uma parte (1,4 g) foi suspensa em ácido acético quente (40 ml) e foi arrefecida para proporcionar um sólido que foi filtrado, lavado com acetato de etilo frio e foi seco: Produção 980 mg, 70%; HPLC (60/40) 3,09 minutos (97%).
Exemplo 76b
Ester etílico do ácido 5-ciano-lH-indole-2-carboxílico Pó de zinco (57,8 g, 887 mmol) foi adicionado a uma suspensão quente do éster etílico do ácido 3-ciano-5-nitrofenilpirúvico (23,2 g, 88 mmol) em ácido acético (225 ml) e água (225 ml, atenção!, exotermia inicial vigorosa) a um caudal suficiente para manter o refluxo, tendo a reacção sido mantida ao refluxo durante 0,5 horas. A mistura foi filtrada, os sais filtrados foram lavados com ácido acético quente (150 ml) e o filtrado foi arrefecido durante a noite para proporcionar cristais que foram filtrados, lavados com 1:1 de ácido acético frio -água, e foram secos (10,11 g, 53%). O filtrado foi concentrado, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo, e a solução resultante foi lavada com bicarbonato
-136- fA 1 c de sódio aquoso saturado e salmoura, foi seca c concentrada para proporcionar uma segunda porção (5,05 g). O lote maior foi utilizado nas transformações subsequentes.
Exemplo 76c
Ester etílico do ácido 3-ciano-5-nitrofenilpirúvico
Uma solução de etóxido de sódio em etanol (a partir de 2,2 g, 400 mmol de metal de sódio em 400 ml de etanol) foi adicionada a 0°C a uma mistura de oxalato de dietilo destilado (120 g, 821 mmol) e de 3-metil-4-nitrobenzonitrilo (32 g, 197 mmol). A solução vermelha resultante foi aquecida a 40°C durante 18 horas. A mistura arrefecida foi diluída com água (600 ml) e acidificada com HC1 concentrado para pH 2,1. O precipitado que se formou foi recolhido por filtração da mistura a 13°C, foi seco e purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetona-hexanos a 15, 30 e 50%, proporcionando um sólido alaranjado que foi utilizado sem purificação (23,6, 31%). Recristalizou-se uma amostra a partir de acetato de etilo para caracterização.
Exemplo 77 ((l SVDimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (1,0 mmol) e o ácido lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção dc 0 - 25°C). O sólido resultante foi triturado com hexanos e depois com éter. Produção 272 mg, 81%; HPLC (70/30) 3,49 minutos (99%); pf 199 - 200°C; PBMS 336 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C2oH21N302: C, 71,62; H, 6,31; N, 12,53.
Calculado: C, 71,45; H, 6,39; N, 12,50.
Exemplo 78 [nS)-Benzi1-2-(3S.4SVdi-hidroxi-pirrolidin-l-ilV2-oxo-etil1-amidado ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico
Cloridrato de (3S,4S)-2-amino-l-(3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-il)-3--fenil-propan-l-ona (0,94 mmol) e o ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico (1,03 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (170 horas de tempo de reacção) e o produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo. Produção 150 mg, 37%; HPLC (60/40) 3,08 minutos (96%); 'H NMR (DMSOA) δ 11,73 (s, 1H), 8,90 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,30 (m, 2H), 7,30 - 7,1 (m, 5H), 5,22 (m, 1H), 5,13 (m, 1H), 4,91 (m, 1H), 3,97 (m, 1H), 3,91 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 3,5 - 3,2 (m, 2H), 3,00 (m, 2H).
Anal. Cale. para C22H22C1N304: C, 61,75; H, 5,18; N, 9,82.
Calculado: C, 61,65; H, 5,45; N, 9,17.
Exemplo 78a
Cloridrato de (3S.4SV2-amino-l-(3.4-di-hidroxi--pirrolidin-1 -ilV3-fenil-propan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido (3S,4S)-[l-benzil-2-(3,4-di-hidroxi--pirroldin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (360 mg, 1,00 mmol) foi dissolvidos em HC14 M - dioxano (4 ml) a 25°C durante 3 horas. A mistura foi concentrada e o sólido amarelo resultante foi triturado com éter e foi seco. Produção 304 mg, -138- ύ /< Ο
Exemplo 78b
Ester de terc-butilo do ácido M-henzil-2-(3.4-di-hidroxi--pirrolidin-1 -ilV2-oxo-etil1-carbâmico
Boc-L-Fenilalanina (2,2 mmol) e (3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidina (Patente Norte Americana N°. 4.634.775, exemplo 1C, 206 mg, 2,0 mmol) foram acopladas de acordo com o procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25° C), proporcionando um sólido incolor que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 431 mg, 61%.
Exemplo 79 IY1 SVBenzil-2-('3RS)-hidroxi-piperidin-l-ill-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de 2(S)-amino-l-((3RS)-hidroxi-piperidin-l-il)-3-fe-nil-propan-l-ona (570 mg, 2,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (429 mg, 2,2 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (solvente 5:2 de diclorometano - dimetilformamida) e o produto em bruto foi triturado com 1:1 de éter - hexanos. O sólido resultante foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com 3:2 e 2:1 de acetato de etilo/hexanos seguida por trituração com 1:1 de éter/hexanos. Produção 430 mg, 51%; HPLC (60/40) 3,45 minutos (95%);
Anal. Cale. para C23H24C1N303+ 0,125 C6H14: C, 65,32; H, 5,94; N, 9,62. Calculado: C, 65,01; H, 6,19; N, 9,22.
Exemplo 79a
Cloridrato de (2SVamino-1 -(3-hidroxi-piperídin-1 -ilV3-fenil-propan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-(3RS)-hidroxi-pipe- - 139- έ3·'. /?! i? 'Λ·*'’ ridin-l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (7,13 g, 20 mmol) foi dissolvido cm HC1 4M-dioxano (40 ml) a 25°C durante 3 horas. A mistura foi concentrada e o óleo resultante foi agitado sob éter durante 72 horas. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido foi lavado com éter e foi seco. Produção 5,64 g, 99%.
Exemplo 79b Éster de terc-butilo do ácido í(lS)-benzil-2-(3RSV -hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etill-carbâmico
Boc-L-fenilalanina (8,17 g, 30,8 mmol) e o cloridrato de 3-hidroxipiperidina (4,24 g, 30,8 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A, para proporcionar o composto do título sob a forma de um óleo que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 7,79 g, 73%.
Exemplo 80 IY1 SVBenzil-2-oxo-2-(3-oxo-piperidin- 1-ilVetil-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de 4-((2S)-amino-3-fenil-propionil)-piperazin-2-ona (140 mg, 0,5 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (98 mg, 0,5 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo e etanol a 2% em acetato de etilo seguida por trituração com éter. Produção 71 mg, 33%: HPLC (60/40) 3,53 minutos (100%); PBMS 425/427 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-de) δ 11,78 (br, 0,5H), 11,76 (br, 0,5H), 9,03 (m, 0,5H), 9,02 (m, 0,5H), 8,06 (m, 0,5H), 8,04 (m, 0,5H), 7,73 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,38 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,32 (m, 2H), 7,20 (m, 2H), 7,2 - 7,1 (m, 2H), 5,15 (m, 0,5H), 5,05 (m, 0,5H), 4,20 (d, 0,5H, J = 17 Hz), 4,08 (d, 0,5H, J = 17 Hz), 3,85 (d, 0,5H, J = 17 Hz), 3,9 (m, 0,5H), 3,6 (m, 2H), 3,2 - 2,9 (m, 4H).
Exemplo 80a
Cloridrato de 4-('(2SVamino-3-fenil-propionilVpiperazin-2-ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-oxo-2-(3-oxo-pipe-razin-l-il)-etil]-carbâmico (400 mg, 1,2 mmol) foi dissolvido em HC1 4M -dioxano (10 ml) a 25°C durante a 0,5 hora. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com diclorometano, foi triturada com éter e foi seca. Produção 340 mg, 103%.
Exemplo 80b Éster de terc-butilo í(1 S')-benzil-2-oxo-2-('3-oxo-pÍDerazin-1 -ilVetill-carbâmico
Boc-L-fenilalnina (530 mg, 2 mmol) e piperazin-2-ona (J. Am. Chem. Soc. 62 1202 (1940), 200 mg, 2 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (2:1 de diclorometano/dimetilformamida como solvente de reacção, lavados com NaOH 1 N após lavagens com ácido) e o produto foi utilizado sem purificação adicional. Produção 404 mg, 58%.
Exemplo 81 ((1 S')-metil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etili-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (2S)-amino-l-morfolm-4-il-propan-l-ona (195 mg, 1,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (195 mg, 1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (lavados com NaOH IN após lavagens com ácido), proporcionando o produto em bruto que foi triturado com éter e foi seco. Produção 150 mg, 45%; HPLC (60/40) 3,61 minutos (100%); PBMS 336/338 (MH+, 100%); ^5* -141 - /'Vi V.
Anal. Cale. para C16H18C1N303: C, 57,23; H, 5,40; N, 12,51.
Calculado: C, 57,01; H, 5,49; N, 12,24.
Exemplo 81a
Cloridrato de (2SVamino-l-morfolin-4-il-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido ((lS)-metil-2-morfolin-4-il-2-oxo--etil)-carbâmico (3,88 g, 15 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano (20 ml) a 25°C durante 1,25 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter e foi seco: Produção <2,51 g, 86%.
Exemplo 81b f
Ester de terc-butilo do ácido ((1 SVmetil-2-morfo1in-4-il-2-oxo-etilVcarbâmico
Boc-L-alanina (3,50 mg, 20 mmol) e morfolina (1,74 g, 20 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A (lavadas com NaOH IN após lavagens com ácido) proporcionando um óleo incolor que foi utilizado sem purificação adicional. Produção 3,94 g, 76%.
Exemplo 82 (Y1 SVmetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (2S)-amino-N-metil-3-fenil-propionamida (214 mg, 1,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (195 mg, 1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto em bruto foi triturado com éter e foi seco. Produção 160 mg, 45%; HPLC (60/40) 4,60 minutos (100%); ’H NMR (DMSO-dg) δ 11,70 (br, 1H), 8,73 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 8,08 (q, 1H, J = 4,6 Hz), 7,72 (d, 1H, J = 1,9 Hz), 7,39 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,32 (m, 2H), 7,25 - -142- <Γ\ 7,10 (m, 5Η), 4,68 (m, 1H), 3,10 (dd, A de AB, 1H, J = 4,2, 13 Hz), 2,96 (dd, III, J = 10,7, 13 Hz), 2,62 (d, 3H, J = 4,6 Hz).
Exemplo 82a
Cloridrato de f2SVarmno-N-metiI-3-feniI-propionamida O éster de terc-butilo do ácido [((lS)-l-metilcarbamoil-2-fenil--etil)-carbâmico (2,35 g, 8,45 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano (20 ml) a 25°C durante 2 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter e foi seco. Procedimento 1,70 g, 94%.
Exemplo 82b Éster de terc-butilo do ácido (Y1SV1 -metilcarbamoil-2-fenil-etilVcarbâmico BOC-L-fenilalanina (2,65 g, 10 mmol) e o cloridrato de metilamina (675 mg, 10 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (lavados com NaOH IN após lavagens com ácidos), produzindo o composto do título sob a forma de um sólido incolor que foi utilizado sem purificação adicional. Procedimento 2,41 g, 87%; HPLC (60/40) 3,83 minutos (100%).
Exemplo 83 [nS)-(metoxi-metil-carbamoilVetill-amida do ácido 5-Cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (2S)-amino-N-metoxi-N-metil-propionaimda (169 mg, 1,0 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (195 mg, 1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (lavados com NaOH IN após lavagens com ácido), para proporcionar o produto (290 mg, 94%): HPLC (60/40) 4,03 minutos (94%); PBMS 310/312 (MH+, 100%); - 143 -
Anal. Cale. para C14H,6C1N303: C, 54,29; H, 5,21; N, 13,57.
Calculado: C, 54,17; H, 5,26; N, 13,31.
Exemplo 83a
Cloridrato de (2SVamino-N-metoxi-N-metil-propionamida O éster de terc-butilo de [(lS)-(metoxi-metil-carbamoil)-etil] -carbâmico (3,55 g, 15,3 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano (20 ml) a 25 °C durante 0,75 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com éter e diclorometano e foi seco. Produção 2,2 g (86%).
Exemplo 83b
Ester de terc-butilo do ácido ll-lmetoxi-metil-carbamoilVetill-carbâmico L-BOC-alanina (3,50 g, 20 mmol) e o cloridrato de 0,N-dimetil--hidroxiamina (1,94 g, 20 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (lavados com NaOH IN após lavagens com ácido) e o sólido incolor resultante foi utilizado sem purificação adicional. Produção 3,71 g (80%).
Exemplo 84 (Y1 SVCarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-bromo-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de L-fenilalaninamida (835 mg, 4,17 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,0 g, 4,17 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A, substituindo o seguinte tratamento: a mistura de reacção foi diluída com acetato de etilo e NaOH 2N. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido recolhido foi lavado com acetato de etilo, NaOH 2N, HC1 2N, éter e foi seco. Produção 890 mg; PBMS 386/388 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para CigH16BrN302: C, 55,97; H, 4,18; N, 10,88.
Calculado: C, 55,69; H, 4,48; N, 10,48.
Exemplo 85 (Y1 S)-(,Metoxi-metil-carbamoilV2-fenil-eti1Vamida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de (2S)-amino-N-metoxi-N-metil-3-fenil-propionami-da (317 mg, 1,3 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (253 mg, 1,3 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (0 - 25°C, lavados primeiro com ácido e depois com uma base). O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30% e 40% em hexanos. A espuma obtida foi triturada com éter de isopropilo produzindo um sólido quase branco (356 mg, 71%): HPLC (60/40) 8,28 minutos (98%); Anal. Cale. para C2oH20C1N303: C, 62,26; H, 5,22; N, 10,89.
Calculado: C, 62,22; H, 5,60; N, 10,73.
Exemplo 85a
Cloridrato de (2SVamino-N-metoxi-N-metil-3-fenil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-(metoxi-metilcarbamoil)-2--fenil-etil]-carbâmico (2,97 g, 9,6 mmol) foi dissolvido em HC14M - dioxano (36 ml) a 0°C. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter e foi seco. Produção 2,27 g, 96%.
Exemplo 85b Éster de terc-butilo do ácido |Y 1 SXmetoxi-metil-carbamoiD--2-fenil-etin-caibâmico BOC-L-fenilalanina (4,0 g, 15,1 mmol) e o cloridrato de Ν,Ο-di-metil-hidroxilalamina (3,82 g, 15,1 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (0 - 25°C, lavados com ácido e depois com uma base). O óleo incolor resultante foi utilizado sem purificação (3,22 g, 69%).
Exemplo 86 Éster de terc-butilo do ácido (2RSV Γ(5-cloro-1 H-indole-2-carbamoil)--aminol-2-metil-3-fenil-propiónico O éster de terc-butilo do ácido 2-amino-2-metil-3-fenil-propiónico racémico (200 mg, 0,87 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (170 mg, 0,87 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (2:1 de diclorometano/dimetilformamida como solvente) e o produto purificado por cromatografia sobre sílica gel foi eluído com acetato de etilo a 10% em hexanos. Produção 286 mg, 89%; HPLC (60/40) 9,63 minutos (85%); TSPMS 371/373 (MH+, 100%); 'H NMR (CDC13) δ 9,31 (s, 1H), 7,57 (d, 1H, J = < 1 Hz), 7,37 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,20 (m, 4H), 7,04 (m, 2H), 6,84 (s, 1H), 6,66 (s, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,67 (A de AB, 1H, J = 13,5 Hz), 3,28 (B de AB, 1H, J = 13,5 Hz), 1,80 (s, 3H).
Exemplo 87 Ácido de /2RSVIY5-cloro-1 H-indole-2-carbonilV -aminol -2-metil-3 -fenil-proniónico
LiOH 2N aquoso (0,10 ml, 0,50 mmol) foi adicionado a uma solução do éster metílico do ácido (2RS)-[(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino] -2-metil-3-fenil-propiónico (132 mg, 0,36 mmol) em tetra-hidrofurano (8 ml) a 25°C. A solução resultante foi agitada durante 1 hora, foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo em água (15 ml). O pH foi ajustado para 1 com HC1 2N a 0°C. A camada orgânica foi separada, foi lavada com água e salmoura e foi seca, proporcionando uma espuma que foi utilizada sem purificação adicional (129 mg, 102%): HPLC (60/40) 4,42 minutos (99%); TSPMS 357/359 (MH+, 100%). 'H NMR (CDC13) δ 9,88 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,35 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,3 - 7,2 (τη, 5H), 7,16 (m, 2H), 6,75 (m, 1H), 6,67 (m, 1H), 3,57 (A de AB, 1H, J = 13,7 Hz), 3,42 (B de AB, 1H, J = 13,7 Hz), 1,80 (s, 3H).
Anal. Cale. para C19HI7C1N203 + 0,3 H20: C, 63,00; H, 4,90; N, 7,73.
Calculado: C, 63,38; H, 5,31; N, 7,42.
Exemplo 88 IY1 S)-Benzil-2-oxo-2-( 1 -oxo-1 -tiomorfolín-4-ilVetill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O ácido m-cloroperoxibenzóico (80 mg de 50%, 0,23 mmol) foi adicionado a 25°C a uma solução de ((lS)-benzil-2-oxo-2-tiomorfolin-4-il-etil)--amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (100 mg, 0,23 mmol) em diclorometano (2 ml). Ao fim de 1 hora, a mistura foi diluída com acetato de etilo e foi lavada três vezes com uma mistura 50/50 de bicarbonato de sódio aquoso saturado e tiossulfato de sódio aquoso a 10% e uma vez com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura e foi seca. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com etanol a 0,5 -8% em diclorometano para proporcionar o composto do título. Produção 76%; HPLC (60/40) 3,97 minutos (97%); pf 230 - 234°C; TSPMS 444/446 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H22C1N303 + 0,5 H20: C, 58,34; H, 5,12; N, 9,28.
Calculado: C, 58,41; H, 5,37; N, 8,90.
Exemplo 89 f Π SVBenzil-2-Γ 1.1 -dioxo-1 -tiomorfolin-4-in-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O ácido m-cloroperoxibenzóico (202 mg de 50%, 0,58 mmol) foi -147- *t ? adicionado a 25°C a uma solução de ((lS)-benzil-2-oxo-2-tiomorfoliu-4-il-etil)--amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (100 mg, 0,23 mmol) em diclorometano (2 ml). Ao fim de 1 hora, a mistura foi diluída com acetato de etilo e a solução resultante foi lavada três vezes com uma mistura 50/50 de bicarbonato de sódio aquoso saturado e tiossulfato de sódio aquoso a 10%, uma vez com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura e foi seca. O produto em bruto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 30%, 40% e 50% em hexanos, para proporcionar o composto de título. Produção 60%; HPLC (60/40) 5,69 minutos (98%); PBMS 460/462 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C22H22C1N304S+ 0,4 H20: C, 56,56; H, 4,92; N, 8,99.
Calculado: C, 56,77; H, 5,15; N, 8,60.
Exemplo 90 Γ (1SV Benzil-2-oxo-2-f 1 -oxo-1 -tiazolidin-3-il)-etill-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O ácido m-cloroperoxibenzóico (167 mg de 50%, 0,48 mmol) foi adicionado a 25°C a uma solução de (lS)-benzil-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)--amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (200 mg, 0,48 mmol) em diclorometano (4 ml). Ao fim de 0,5 horas, a mistura foi diluída com acetato de etilo e foi lavada com uma mistura 50/50 de bicarbonato de sódio aquoso saturado e tiossulfato de sódio aquoso a 10%, uma vez com bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura e foi seca. O produto em bruto foi concentrado para um sólido amarelo, depois foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com etanol a 1 - 8% em diclorometano e depois foi triturado com éter, proporcionando o composto do título. Produção 151 mg (73%); HPLC (60/40) 3,64 minutos (98%); PBMS 430/432 (MH+, 100%); ί -148-
Axial. Cale. para C2|H20ClN3O3S + 0,6 H20: C, 57,23; H, 4,85; N, 9,53. Calculado: C, 57,00; H, 4,85; N, 9,25.
Exemplo 91 f (1 S)-Benzil-2-( 3-hidroximino-pirrolidín-1 -iO-2-oxo-etiH-amidfl do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico O cloridrato de hidroxilamina (68 mg, 0,82 mmol) e carbonato de potássio (136 mg, 0,98 mmol) foram adicionados a uma solução de [ (lS)-benzil-2-oxo-2-(3-oxo-pirrolidin-l-il)-etil]-amida do ácido 5-cloro-lH-indo-le-2-carboxílico em etanol (5 ml) e água (1 ml) a 25°C. Ao fim de 48 horas, a mistura de reacção foi concentrada e o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo. A solução resultante foi lavada duas vezes com água e uma vez com salmoura, foi seca sobre Na2S04, e foi concentrada. As duas substâncias que pareceram ser os isómeros sin/anti oxima foram separados por cromatografia sobre sílica eluída com etanol a 2,5%, 5% e 10% em diclorometano.
Exemplo 91 (i)
Para o isómero menos polar:
Produção 48 mg (14%); HPLC (60/40) 4,69 minutos (97%); pf 216 - 220°C (escureceu a 210°C); PBMS 425/427 (MH+, 100%). ]H NMR (CDC13) δ 11,75 (br, 1H), 10,87 (s, 0,5H), 10,86 (s, 0,5H), 9,02 (m, III), 7,72 (d, III, J = 2,0 IIz), 7,4 - 7,1 (m, 8H), 4,95 (m, 0,5H), 4,85 (m, 0,5H), 4,40 (d, 0,5H, J = 15 Hz), 4,0 (m, 1,5H), 3,9 (m, 0,5H), 3,61 (m, 1H), 3,5 (m, 0,5H), 3,10 (m, 2H), 2,8 - 2,5 (m, 2H);
Anal. Cale. para C22H21C1N403: C, 62,19; H, 4,98; N, 13,19.
Calculado: C, 61,82; H, 5,07; N, 12,95. „ „'ΒΛ»«ΡΙ··
- 149-
Exemplo 91(ii)
Para o isómero mais polar:
Produção 69 mg (20%); HPLC (60/40) 6,78 minutos (>99%); pf 223 - 224°C (dec, tar); PBMS 425/427 (MH+, 100%). 'H NMR (DMSO-dô) δ 11,74 (br, 1H), 10,87 (s, 1H), 10,84 (s, 1H), 9,05 (d, 0,5H, J = 8,1 Hz), 8,99 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,4 - 7,1 (m, 8H), 4,97 (m, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,47 (d, 0,5H, J * 17 Hz), 3,95 (m, 1,5H), 3,87 (m, 0,5H), 3,65 - 3,4 (m, 1,5H), 3,10 (m, 2H), 2,7 - 2,5 (m, 2H).
Anal. Cale. para ^Η21αΝ403: C, 62,19; H, 4,98; N, 13,19.
Calculado: C, 61,85; H, 5,17; N, 13,16.
Exemplo 92 Π -Benzi l-2-oxo-2-piperidin-l-il-etiD-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de piperidina (0,34 mmol) e o ácido 2-[(5-cloro--lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico (0,30 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25°C). O produto em bruto foi cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20%, 30%, 40%, 50%, 75% e 100% em hexano para proporcionar uma separação parcial. As fraeções puras foram reunidas para produzirem 31 mg (25%) do composto do título: HPLC (60/40) 9,38 minutos (94%); PBMS 410/412 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H24C1N302+ 0,5 H20: C, 65,94; H, 6,02; N, 10,03.
Calculado: C, 65,70; H, 6,19; N, 9,66.
Exemplo 93
Carbamoilmetil-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxilico O éster metílico do ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino] -acético (100 mg, 0,40 mmol) foi adicionado a uma solução saturada de amónia em metanol (ca. 3 ml) a 25°C. A suspensão foi sonicada durante 1 hora e a solução resultante foi concentrada. O resíduo foi triturado com éter/hexanos e foi seco. Produção 77 mg, 77%; HPLC (60/40) 2,78 minutos (98%); PBMS 2532/254 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-dfi) 5 11,82 (br, 1H), 8,80 (t, 1H), 7,71 (d, 1H, J = ca. 1 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 7 - 8 Hz), 7,42 (br, 1H), 7,18 (dd, 1H, J = 7 - 8, ca. 2 Hz), 7,14 (s, 1H), 7,08 (br, 1H), 3,82 (m, 2H).
Anal. Cale. para CnH10ClN3O2+ 0,125 H2Or C, 52,03; H, 4,07; N, 16,55. Calculado: C, 52,05; H, 4,08; N, 16,63.
Exemplo 94 Ácido 1 -1 (2S)-r(5-bromo- lH-indole-2-carboniD-aminol-3--fenil-propionil)-pirrolidina-(2SVcarboxílico
Adicionou-se ácido trifluoroacético a uma solução do éster de terc-butilo do ácido l-{(2S)-[(5-bromo-lH-indole-2-cafbonil)-amino]-3-fenil--propionil}-pirrolidina-(2S)-carboxílico (345 mg, 0,64 mmol) em diclorometano (2 ml) a 0°C. Ao fim de 1 hora a 25°C, a mistura de reacção foi concentrada, triturada com éter e seca para proporcionar um sólido amarelo. Produção 273 mg, 88%; HPLC (70/30) 4,75 minutos (98%); TSPMS 484/486 (MH+, 100%); Anal. Cale. para C23H22BrN304+ 0,25 H20: C, 56,51; H, 4,64; N, 8,60.
Calculado: C, 56,28; H, 4,78; N, 8,26.
Exemplo 94a Éster de terc-butilo do ácido 1 - l(2SVf(5-bromo-1 H-indole-2-carbonilVaminol-3--fenil-propionil} -pirrolidina-( 2S Vcarboxílico O éster de terc-butilo de L-fenilalanina-L-prolina (333 mg, 1,0 mmol) e o ácido 5-bromo-lH-indole-2-carboxílico foram acoplados de acordo com o Procedimento A (72 horas de tempo de reacção). O produto foi purificado por cromatografia de coluna sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 15%, 20% e 30%, proporcionando uma espuma amarela pálida. Produção 428 mg (79%); HPLC (70/30) 5,84 minutos (81%).
Exemplo 95 (2-Qxo-2-( 1 RSVoxo-1 -tiazolidin-3-ilVetill-amida do ácido 5-cloro- lH-indole-2-carboxílico O ácido m-cloroperoxibenzóico (4,26 mg de 50%, 1,2 mmol) foi adicionado a 25°C a uma solução de (2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (400 mg, 1,2 mmol) em diclorometano (8 ml) a 25°C. Ao fim de 1 hora, a mistura foi diluída com acetato de etilo (ca. 80 ml) e a solução resultante foi lavada três vezes com uma mistura saturada aquosa 1:1 de NaHC03 e salmoura. A suspensão resultante foi filtrada e o sólido filtrado foi lavado com água e foi seco, proporcionando um sólido cristalino. HPLC (60/40) 2,52 minutos (98,5%); TSPMS 340/342 (MH+, 70%), 357 (100%); 'H NMR (DMSO-de) δ 11,82 (br, 1H), 8,84 (m, 1H), 7,73 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,43 (d, 1H, 8,7 Hz), 7,19 (dd, 1H, J = 2,0, 8,7 Hz), 7,18 (s, 1H), 4,92 (dd, 0,5H, J = 12,1 Hz), 4,71 (dd, 0,5H, J = 2,2, 13 Hz), 4,47 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 4,4 - 3,9 (m, 4,5H), 3,3 (m, 0,5H), 3,13 (m, 1H); 3,0 (m, 0,5H).
Anal. Cale. para CnH^Cl^C^S + 0,8 H20: C, 47,47; H, 4,44; N, 11,86. Calculado: C, 47,46; H, 4,07; N, 11,83. -152-
-152- S „Ό
Exemplo 96 Ácido l-l(2SVr(5-cloro-lH-indole-2-carbonilVaminol -3-feniI-propioniH-(4RVhidroxi-pirrolidina-f2SVcarboxílico
Adicionou-se LiOH 2 M em excesso a uma solução do éster benzílico do ácido l-{(2S)-[(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-pro-pioniI}-(4R)-hidroxi-pirrolidin-(2S)-carboxílico (215 mg, 0,40 mmol) em tetra-hidrofurano a 25°C. Ao fim de 2 horas, a mistura foi diluída com acetato de etilo e gelo e a mistura foi acidificada para pH 1 - 2 com HC1 6N. A camada acidificada foi extraída três vezes com acetato de etilo e as camadas orgânicas foram combinadas e secas. O resíduo foi triturado com éter e seco, para proporcionar um sólido incolor (190 mg, 106%): HPLC (60/40) 3,43 minutos (94%); TSPMS 456/458 (MH+, 100%);
Anal. Cale. para C23H22C1N305 + 0,5 C4H802: C, 60,06; H, 5,24; N, 8,40. Calculado: C, 60,27; H, 5,33; N, 8,13.
Exemplo 97 Éster metílico do ácido (S)-2-f(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino1-3--(1 H-indol-3-iloVpropiónico O cloridrato do éster metílico de L-triptofano (1,05 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (0 - 25°C, dimetilformamida como solvente de reacção) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 10%, 20%, 30%, 40%, 50% e 60% - hexanos, proporcionando uma espuma amarela. Produção, 79%; HPLC (60/40) 7,43 minutos (96%); 'H NMR (CDC13) Ô 11,78 (br, 1H), 10,85 (br, 1H), 8,93 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,73 (d, 1H, J - 1,9 Hz), 7,57 (d, 1H, J = 7,7 Hz), 7,41 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,32 (d, -153-
1Η, J - 8,0 Hz), 7,22 (m, 2H), 7,18 (dd, 1H, J = 2,1, 8,8 Hz), 7,06 (m, III), 6,99 (m, 1H), 4,74 (m, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,35 - 3,2 (m, 2H).
Exemplo 98 Éster metílico do ácido (±)-3-{(Y5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino] -acetil) -tiazolidina-2-carboxílico O cloridrato do éster metílico do ácido (±)-tiazolidino-2-carboxílico (1,02 mmol) e o ácido [(5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-acético (1,02 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (1:1 de diclorometano-dimetilformamida com solvente) e o produto em bruto foi triturado com 1:1 de éter-hexanos, proporcionando um sólido amarelo claro. Produção 79%; HPLC (60/40) 4,47 minutos (95%); TSPMS 383/384 (MH+, 100%). ‘H NMR (DMSO-d*) δ 11,82 (s, 1H), 8,85 (t, 1H, J = 7 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,43 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,18 (dd, 1H, J = 8,8, 2 Hz), 7,17 (s, 1H), 5,44 (s, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,1 (m, 1H), 3,95 (m, 1H), 3,34 (s, 3H), 3,3 (m, 2H).
Anal. Cale. para C,6H16C1N304S: C, 50,33; H, 4,22; N, 11,00.
Calculado: C, 50,56; H, 4,46; N, 10,89.
Exemplo 99 Ácido (±)-3-IIY 5-cloro-1 H-indole-2-carbonil)-amino1-ace-til 1 -tiazolidina-2-carboxílico
Uma solução do éster metílico do ácido 3-{[(5-cloro-lH-indole-2--carbonil)-amino]-acetil}-tiazolidina-2-carboxilico (196 mg, 0,5 mmol) em metanol (10 ml) foi tratada com NaOH 1 N aquoso (0,5 ml) a 25°C. Ao fim de 3 horas, adicionou-se mais NaOH 1 N (0,25 ml). A mistura foi agitada a 25°C durante a noite, foi concentrada, o resíduo foi agitado com acetato de etilo (30 t*Ν *...,*·* - 154-ml) e NaOH 1 N (5 ml) c a mistura resultante foi acidificada para pH 1,8 com HC1 6 N aquoso. A camada aquosa foi separada e foi extraída com acetato de etilo. As camadas orgânicas foram combinadas, secas e concentradas, proporcionando um sólido que foi triturado com éter - hexano 1:1 e foi seco. Produção 186 mg, 99%; HPLC (60/40) 3,13 minutos (98%); TSPMS 368/370 (MH+, 70%), 339 (100%). ‘H NMR (DMSO-dé) δ 11,80 (s, 1H), 8,84 (br, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,44 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,18 (dd, 1H), 7,17 (s, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,25 (m, 2H), 4,0 (m, 2H), 3,3 (m, 2H).
Exemplo 99a
Ester metílico do ácido (±)-tiazolidina-2-carboxílico
Uma mistura do ácido (±)-tiazolidina-2-carboxílico (1,58 g, 11,9 mmol) e clorometilsilano (5,1 g, 47 mmol) em metanol (22 ml) foi aquecida ao refluxo durante 5 horas, foi arrefecida e concentrada para proporcionar um sólido (2,19 g, 100%).
Exemplo 100 2-IY5-Cloro-1 H-indole-2-carbonil)-aminol-3-fenil-propionato de S-terc-butilo
Procedimento B A uma solução do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,50 g, 2,6 mmol), do cloridrato do éster de terc-butilo de L-fenilalanina (0,66 g, 2,6 mmol), trietilamina (0,36 ml, 2,6 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (0,16 g, 1,3 mmol) em diclorometano (20 ml) adicionou-se l-(3-dimetilamino-propil)-3-etil-carbodi-imida (0,73 g, 3,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, foi diluída com clorofórmio, foi lavada com HC1 2N, água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia de flash (acetona a 30% em hexanos) e foi obtido 155 como unia espuma amarela pálida (0,86 g, 85%).
Anal. Cale.: C, 66,25; H, 5,81; N, 7,03.
Calculado: C, 66,57; H, 6,11; N, 6,86.
Os seguintes exemplos (101 a 122) foram preparados por métodos análogos ao do Procedimento B.
Exemplo 101 2-f (5-Fluoro-1 H-indole-2-carbonil)-amino1-3-fenil-propionato de R-metiln A partir do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico e do éster metílico de D-fcnil-alanina. 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 3,22 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 5,10 (m, 1H), 6,62 (d, 6 Hz, 1H), 6,75 (d, 2 Hz, 1H), 7,05 (dt, 2 Hz, 1H), 7,10-7,15 (m, 2H), 7,25-7,40 (m, 4H), 7,73 (d, 2,1 Hz, 1H), 9,50 (br, 1H).
Exemplo 102 2-ÍY5.7-dicloro-1 H-indole-2-carbonil)-aminol-3-fenil-propionato de R-metilo A partir do ácido 5,7-dicloro-lH-indole-2-carboxílico e do éster metílico de D-fenilalanina. *H NMR (300 MHz, CDC13) δ 3,25 (m, 2H), 3,80/3,95 (s, 3H), 5,10 (m, 1H), 6,62 (d, 6 Hz, 1H), 6,69 (d, 2 Hz, 1H), 7,10 - 7,15 (m, 2H), 7,25 - 7,35 (m, 3H), 7,50 - 7,56 (s, 1H), 9,35 (br, 1H).
Exemplo 102a Ácido 5.7-dicloro-lH-indole-2-carboxílico A. 2.4-Diclorofenil-hidrazona de 2-oxopropionato de etilo
Uma mistura de 2,4-diclorofenil-hidrazina (1,0 g, 4,7 mmol), piru- -156-
valu dc etilo (0,53 ml, 4,7 nmiol), trietilamina (0,65 ml, 4,7 mmol) e etanol (5 ml) foi aquecida ao refluxo durante a noite. O solvente foi evaporado e o resíduo foi recolhido em clorofórmio. A solução foi lavada com água e salmoura e foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada, deixando um óleo (1,1 g, 98%). B. 5.7-Dicloro-lH-indole-2-carboxilato de etilo
Uma solução de 2,4-dicloro-fenilidrazona de 2-oxopropionato de etilo (1,1 g, 4,6 mmol) e de cloreto de zinco anidro (10 g, 74 mmol) em ácido acético glacial (12 ml) foi aquecida ao refluxo durante 1/2 hora. A mistura de reacção foi deitada em água e foi extraída duas vezes com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água e salmoura, foram secas sobre sulfato de magnésio e concentradas. O produto foi purificado por cromatografia de flash (acetato de etilo a 30% em hexanos) e foi obtido como um óleo (0,80 g, 67%). r C. Acido 5.7-dicloro-1 H-indole-2-carboxílico
Uma solução de 5,7-dicloro-lH-indole-2-carboxilato de etilo (0,80 g, 3,1 mmol) em NaOH 1 N (40 ml) e metanol (50 ml) foi aquecida ao refluxo durante 3 horas. O metanol foi removido no vácuo e o resíduo aquoso foi acidificado com HC1 1 N e foi extraído duas vezes com clorofórmio. Os extractos combinados foram lavados com água e salmoura, foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados num sólido (0,58 g, 76%).
Os seguintes ácidos indole carboxílicos foram preparados pela mesma sequência: ácido 4-cloro-5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico e o ácido 6-cloro-5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico (como uma mistura) a partir de 3-cloro-4-fluorofenil-hidrazina. - 157- t
Acido 5.7-difluoro-lH-indole-2-carboxílico a partir dc 2,4-difluorofenil--hidrazina.
Exemplo 103 2-IY5-Cloro-1 H-indole-2-carboni1Vamino]-3-feni1-propionato de (±)-etilo A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e do éster etílico de DLfenil-alanina. pf 146- 147°C.
Anal. Cale.: C, 64,61; H, 5,42; N, 7,54.
Calculado: C, 64,73; H, 5,26; N, 7,57.
Exemplo 104 n-Dimetil-l-carbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido S-3-bromo-5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 3-bromo-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de S-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida.
Anal. Cale.: C, 53,53; H, 4,27; N, 9,36.
Calculado: C, 53,51; H, 4,46; N, 9,38.
Exemplo 104a f
Acido 3-bromo-5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A uma solução do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,0 g, 10,2 mmol) em ácido acético (24 ml) adicionou-se uma solução de bromo (0,53 ml, 10,2 mmol) em ácido acético (16 ml). Ao fim de 20 minutos, a mistura foi deitada em água e foi extraída duas vezes com clorofórmio. Os extractos -158- combinados foram lavados duas vezes com água e salmoura, foram secos sobre sulfato de magnésio e foram concentrados. O produto foi obtido como um sólido (2,5 g, 89%).
Exemplo 104b
Cloridrato de ('SV2-amino-N.N-dimetil-3-fenil-propionamida A. Éster de tcrc-butilo do ácido (SV( 1 -dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVcar- bâmico A uma solução de terc-Boc-fenilalanina (10 g, 38 mmol), de cloridrato de dimetilamina (3,4 g, 41 mmol), trietilamina (5,8 ml, 42 mmol) e hidroxi-benzo-triazole (6,6 g, 49 mmol) em diclorometano (300 ml) adicionou-se l-(3-di-metilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (9,4 g, 49 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, depois foi temperada com HC12 N e foi concentrada. O resíduo foi recolhido em acetato de etilo e esta solução foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio e foi concentrada. O resíduo foi triturado em clorofórmio, o sólido foi filtrado e o filtrado foi concentrado num óleo (llg, 100%). B. Cloridrato de fSl-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida O éster de terc-butilo do ácido (S)-(l-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)--carbâmico (11,0 g, 38 mmol) foi dissolvido em acetato de etilo (125 ml) e borbulhou-se HC1 na solução durante 10 minutos. A solução foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente, e depois foi concentrada. O resíduo foi triturado em éter, o sólido foi filtrado e foi seco sob alto vácuo (8,6 g, 100%).
Exemplo 105 (l-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido S-5-cloro-4-nitro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 4-nitro-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e S-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida. 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,75 (s, 3H), 2,97 (s, 3H), 3,20 (m, 2H), 5,30 (m, 1H), 7,07 (d, 2 Hz, 1H), 7,24 - 7,32 (m, 5H), 7,40 (d, 7 Hz, 1H), 8,12 (br d, 7 Hz, 1H), 9,85 (br, 1H).
Exemplo 105a Ácido 4-nitro-5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A. Éster de etilo do ácido 2-(T4-cloro-3-nitro-fenilVhidrazonol-propiónico A uma solução de nitrito de sódio (2,17 g, 31 mmol) em água (60 ml) e HC1 concentrado (12 ml) a 0°C adicionou-se 4-cloro-3-nitroanilina (5,0 g, 29 mmol). Ao fim de 5 minutos, adicionou-se uma solução de metilacetoacetato de etilo (4,5 ml, 29 mmol) em água (60 ml), etanol (30 ml) e hidróxido de potássio a 50% (10 ml) e a mistura de reacção foi agitada durante a noite. O precipitado foi recolhido (7,0 g, 91%). B. 5-Cloro-4-nitro-lH-indole-2-carboxilato de etilo
Uma mistura do éster etílico do ácido 2-[(4-cloro-3-nitro-fenil)-hi-drazonj-propiónico (2,0 g, 6,7 mmol) e do ácido polifosfórico (7 g) foi aquecida a 90 - 110°C durante 2 horas. A mistura foi arrefecida, foi deitada sobre uma mistura gelo/água e o sólido foi recolhido. A cromatografia de flash (metanol a 1% em clorofórmio) proporcionou o composto do título (0,58 g, 32%) e 5-cloro-6-nitro-lH-indole-2-carboxilato (0,31 g, 17%). C. Ácido 4-nitro-5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O composto do título foi preparado por hidrólise do 5-cloro-4-nitro-lH-indole-2-carboxilato de etilo como descrito para a preparação do ácido 5,7-dicloro-lH-indole-2-carboxílico.
Exemplo 106 (1 -Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido S-7-nitro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 7-nitro-lH-indole-2-carboxílico e S-2-amino--N,N-dimetil-3-fenil-propionamida. 'H NMR δ 2,8 (s, 3H), 3,0 (s, 3H), 3,1 - 3,3 (m, 2H), 5,35 (q, 7 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,15 - 7,3 (m, 6H), 7,9 (d, 8 Hz, 1H), 8,2 (d, 8 Hz, 1H), 10,3 (br, 1H).
Exemplo 107 2-[Y5-Cloro-lH-indole-2-carbonil>aminol-3-fenil-butirato de (±Vmetilo A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e do éster metílico de DL-P-metilfenilalanina. pf 135 - 136°C.
Anal. Cale.: C, 64,78; H, 5,17; N, 7,56.
Calculado: C, 64,76; H, 5,26; N, 7,64.
Exemplo 108 ri-(2-fluoro-benzilV2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etill-amida do ácido (±V S-cloro11 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e -161- (±)-2-amino-3-(2-fluorofenil)-1 -tiazolldin-3-il-propan-1 -ona. pf216 - 217°C.
Anal. Cale.: C, 58,40; H, 4,43; N, 9,73.
Calculado: C, 58,45; H, 4,53; N, 9,71.
Exemplo 108a
Cloridrato de (±)-2-amino-3-f 2-fluorofenilV 1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona t A. Acido (íV2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2-fluoro-fenilVpropiónico A uma mistura de DL-3-fluoro-fenilalanina (1,0 g, 5,5 mmol) e trietilamina (1,14 ml, 8,2 mmol) em diclorometano (20 ml) adicionou-se dicarbonato de di-terc-butilo (1,4 g, 6,55 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, depois foi deitada em água, foi acidificada com HC1 1 N e foi extraída com clorofórmio. Os extractos combinados foram lavados com água e salmoura, foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados. O produto foi purificado por cromatografia de flash (clorofórmio/metanol/ácido acético, 89:10:1) e foi obtido como um sólido (1,28 g, 83%, pf 118- 119°C). B. Éster de terc-butilo do ácido Γ±νΓ1 -f2-fluorobenzilV2-oxo-2-tiazolidin-3--il-etill-carbâmico
A uma mistura do ácido 2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2-fluoro--fenil)-propiónico (0,50 g, 1,77 mmol), tiazolidina (0,15 ml, 1,94 mmol) e 4-dimetilamino-piridina (0,21 g, 1,77 mmol) em diclorometano (15 ml) adicionou-se EDC (0,44 g, 2,31 mmol). A mistura de reacção foi agitada durante a noite à temperatura ambiente, foi diluída com clorofórmio, foi lavada com HC1 2 N, água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio e foi concentrada. O produto foi purificado por cromatografia de flash (acetato dc ctilo a 30% cm hexanos) e foi obtido como um sólido incolor (0,39 g, 62%, pf 133 - 134 °C). C. Cloridrato de (±)-2-amino-3-(2-fluorofenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona
Fez-se borbulhar HC1 numa solução do éster de terc-butilo do ácido [l-(2-fluoro-benzil)-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil]-carbâmico (0,39 g, 1,1 mmol) em acetato de etilo (15 ml). A solução foi concentrada, o resíduo foi triturado em éter e o sólido foi filtrado e seco (0,27 g, 84%, pf 217 - 218°C).
Preparam-se as seguintes aminas por métodos análogos, na mesma sequência: (±)-2-Amino-3-(2-cloro-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona a partir de DL-2--cloro-fenilalanina (±)-2-Amino-3-(3-ciano-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona a partir de DL-3--ciano-fenilalanina (±)-2-Amino-3-(3-cloro-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona a partir de DL-3--cloro-fenilalanina (±)-2-Amino-3-(3-trifluorometil-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona a partir de DL-3-trifluorometil-fenilalanina (S)-2-Amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-3-(4-metoxi-fenil)-propan-1 -ona a partir de L-4-metoxi-fenilalanina.
Exemplo 109 ri-(2-cloro-benziP-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etin-amida do ácido (±1-- 5- cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de (±)-2--amino-3-(2-cloro-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona. pf 214 - 216°C.
Anal. Cale.: C, 56,26; H, 4,58; N, 9,37.
Calculado: C, 56,27; H, 4,54; N, 9,36.
Exemplo 110 í2-('3-Ciano-fenil)-l-ftiazolidina-3-carbonilVetil'|-amida do ácido (±V -5-cloro-1 H-indole-2-carboxilico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de (±)-2--amino-3-(3-ciano-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona. pf 183 - 184°C.
Anal. Cale.: C, 60,20; H, 4,36; N, 12,77.
Calculado: C, 60,11; H, 4,84; N, 12,43.
Exemplo 111 ri-f3-Cloro-benzilV2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etin-amida do ácido f±V -5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e (±)-2--amino-3-(3-cloro-fenil)-l-tiazolidin-3-il-propan-l-ona. pf 188 - 190°C.
Anal. Cale.: C, 56,26; H, 4,27; N, 9,37.
Calculado: C, 56,38; H, 5,04; N, 9,04.
Exemplo 112 Γ2-Oxo-2-tiazol idin-3 -i 1-1 -f3-trifluorometil-benzilVetil]-amida do ácido (±V -5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de (±)-2--amino-3-(3-trifluorometil-fenil)-1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona. pf 205 - 207°C.
Anal. Cale.: C, 54,83; H, 3,97; N, 8,72.
Calculado: C, 54,44; H, 4,14; N, 8,88.
Exemplo 113 Γ1 -(4-Metoxi-benzilV2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etil1-amida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxilico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de S-2--amino-3 -(4-metoxi-fenil)-1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona.
Anal. Cale.: C, 59,52; H, 5,00; N, 9,47.
Calculado: C, 60,00; H, 5,55; N, 8,90.
Espectrometria de Massa m/e 444 (M+ +1).
Exemplo 114
fl-(3-Cloro-benzilV2-(4-hidroxi-piperidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido (±V -5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de (±)-2--amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-3-(3-cloro-fenil)-propan-1 -ona. pf 98°C dec.
Exemplo 115 (l-Benzil-2-oxo-tiazolidin-3-il-etilVamida do ácido S-5-cloro-4-fluoro-lH-in-dole-2-carboxílico e (1 -benzil-2-oxo-tiazolidin-3-il-etil)-amida do ácido S-6-cloro-4-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir de uma mistura do ácido 5-cloro-4-fluoro-lH-indole--2-carboxílico e do ácido 6-cloro-4-fluoro-lH-indole-2-carboxílico e S-2-amino--3-fenil-1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona. pf 105- 125°Cdec.
Anal. Cale.: C, 58,40; H, 4,43; N, 9,73.
Calculado: C, 58,54; H, 4,59; N, 9,58. -165-
Exemplo 116
Ester metílico do ácido (+V2-f(5-cloro-lH-mdole-2-carbonilVaminol-propiónico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e do cloridrato do éster metílico de DL-alanina. pf 199-201°C.
Anal. Cale.: C, 55,63; H, 4,67; N, 9,98.
Calculado: C, 55,70; H, 4,75; N, 10,06.
Exemplo 117 Éster metílico do ácido (±y2-IY5-cloro-lH-indole-2-carbonil)-amino1-3-f4--(4.5-di-hidro-lH-imidazol-2-ilVfenil1-propiónico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e do éster metílico do ácido (±)-2-amino-3-[4-(4,5-di-hidro-lH-imidazol-2-il)-fenil]-pro-piónico. 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 3,1 - 3,3 (m, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,95 (s, 4H), 4,85 (m, 1H), 7,15 (s, 1H), 7,17 (d, 8 Hz, 1H), 7,40 (d, 8 Hz, 1H), 7,65 (d, 7 Hz, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,88 (d, 8 Hz, 1H), 9,10 (br d, 9 Hz, 1H), 10,5 (s, 1H), 11,8 (br s, 1H).
Exemplo 117a Éster metílico do ácido (íV2-amino-2-F4-(4.5-di-hidro-lH--imidazol-2-il)-feniH-propiómco A. Éster dietílico do ácido 2-acetilamino-2-f4-(4.5-di-hidro-lH-imidazol-2--ilVbenzill-malónico
Uma solução do ácido 2-acetilamino-2-[(4-metoxicarbonimidoil)- -166- -166- *Í
í . > Λ t> •«a. v 'va--bcnzil]-malónico, éster dietílico (G. Wagner et al. Pharmazie 1974, 29, 12) (5,3 g, 13 mmol) e etilenodiamina (4,8 g, 80 mmol) em etanol (100 ml) foi adicionada ao resíduo e o sólido foi filtrado e dissolvido em HC1 1 N quente. Após arrefecimento, o precipitado foi filtrado e seco (3,1 g). B. Dicloridrato do ácido f+)-2-amino-3-r4-(4.5-di-hidro-1H-imidazol-2-iiy -fenill-propiónico
Ao éster dietílico do ácido 2-acetilamino-2-[4-(4,5-di-hidro-lH--imidazol-2-il)-benzil]-malónico (3,0 g, 7,3 mmol) adicionou-se ácido acético glacial (50 ml) e HC1 3N (100 ml). A solução foi aquecida ao refluxo durante 3 horas, foi arrefecida e concentrada para um sólido branco que foi recristalizado a partir de metanol/éter (2,0 g, pf270 - 272°C dec.). C. Ester metílico do ácido f±)-2-amino-3-f4-(4.5-di-hidro-lH-imidazol-2-il)--fenill-propiónico O dicloridrato do ácido (±)-2-amino-3-[4-(4,5-di-hidro-lH-imida-zol-2-il)-fenil]-propiónico (0,50 g, 1,6 mmol) foi colocado em cloreto de tionilo (1 ml) e metanol (25 ml). A mistura foi aquecida até ao refluxo durante 30 minutos, altura em que se adicionou mais cloreto de tionilo (3 ml) e metanol (75 ml). Ao fim de mais 3 horas ao refluxo, a solução foi concentrada, o resíduo foi dissolvido numa pequena quantidade de metanol e adicionou-se acetato de etilo para induzir a precipitação. O sólido foi recolhido e seco (0,40 g, pf230°C dec.).
Exemplo 118 f(1 -Benzil-2-í4-hidroxi-piperidin-1 -ill-2-oxo-etill-amida do ácido (SV5.7-difluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5,7-difluoro-lH-indole-2-carboxílico e de -167 - (S)-2-amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-3-fcnil-propan-1 -ona. pf 95 - 110°C.
Exemplo 119 (1-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido S-4-cloro-5-fluoro-lH-in-dole-2-carboxílico e n-dimetilcarbamoil-2-fenil-etiO-amida do ácido S-6-cloro-5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir de uma mistura do ácido 5-cloro-4-fluoro-lH-indole--2-carboxílico e do ácido 6-cloro-4-fluoro-lH-indole-2-carboxílico, e de (S)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida. pf 200 - 210°C.
Anal. Cale.: C, 61,94; H, 4,94; N, 10,83.
Calculado: C, 62,21; H, 4,99; N, 10,84.
Exemplo 120 (l-Benzil-2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etilVamida do ácido ( SV 5.7-difluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5,7-difluoro-lH-indole-2-carboxílico e de (S)-2-amino-3-fenil-1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona. pf 175 - 185°C.
Anal. Cale.: C, 60,71; H, 4,61; N, 10,11.
Calculado: C, 60,79; H, 4,66; N, 9,93.
Exemplo 121 ri-Benzil-2-(l.l-dioxo-l-tiazolidin-3-in-2-oxo-etill-amida do ácido (SV5.7-difluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5,7-difluoro-lH-indole-2-carboxílico e do -168- cloridratu de (S)-2-amino-1-(1,1 -dioxo-1 -tiazolidin-3-il)-3-fcnil-propan-l-ona. pf 95- 110°C. EM 448 (MH+).
Exemplo 122
n-f2-Fluoro-benzil>2-í4-hidroxi-DÍperidin-l-ir)-2-oxo-etiH-amida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico Procedimento C A uma solução do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,49 g, 2,5 mmol), S-2-amino-3 -(2-fluoro-fenil)-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-propan-1 -ona (0,76 g, 2,5 mmol), trietilamina (0,35 ml, 2,5 mmol) e hidroxibenzotriazole (0,34 g, 2,5 mmol) em diclorometano (6 ml) adicionou-se l-(3-dimetilaminopropil)-3-etil-carbodi-imida (0,53 g, 2,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite, foi diluída com diclorometano, foi lavada com água, HC1 1 N e bicarbonato de sódio saturado, foi seca sobre sulfato de magnésio e foi concentrada. O produto foi purificado por cromatografia ''flash" (clorofórmio/me-tanol, 8:1) e foi obtido sob a forma de um sólido quase branco (0,82 g, 73%). pf 120 - 122°C.
Exemplo 122a
Cloridrato de (Sl-2-amino-3-(2-fluoro-fenil)-l-(4-hidroxi--piperidin-1 -ilVpropan-1 -ona A. (S)-2-terc-Butoxicarbonilamino-3-( 2-fluorofenilV 1 -tiazolidin-3-il-propan- -1-ona A partir de L-Boc-2-fluorofenilalanina e 4-hidroxipiperidina por um método análogo ao Procedimento C. -169-
3 I Β. Cloridrato de (SV2-amino-3-(2-íluoro-fenilV 1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV -propan-l-ona O composto do título foi preparado por reacção de L-2-terc-butoxicarbonilamino-3-(2-fluorofenil)-1 -tiazolidiii-3-Íl-propan-1 -ona com HC1, de acordo com o método análogo descrito no Exemplo 108a, etapa C. As seguintes aminas foram preparadas por métodos análogos com a mesma sequência: S-2-Amino-3-(4-metoxi-fenil)-1 -tiazolidin-3-il-propan-1 -ona S-2-Amino-3-(2-fluoro-fenil)-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-propan-1 -ona S-2-Amino-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-3-(4-metoxi-fenil)-propan-1 -ona S-2-Amino-3-(2-cloro-fenil)-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-propan-1 -ona S-2-Amino-3-(4-metoxi-fenil)-1 -morfolin-4-il-propan-1 -ona S-2-Amino-3-(4-metoxi-fenil)-1 -(4-acetil-piperazinil)-propan-1 -ona
Por meio de um processo análogo ao do Procedimento C, prepararam-se os seguintes exemplos (122-138).
Exemplo 123 Éster metilico do ácido f2SR.(3RSV2-lY5-cloro-lH-indole-2--carbonil~)-aminol-3-hidroxi-3-fenil-propiónico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e do éster metilico de (±)-treo-b-fenilserina. pf 196- 197°C.
Exemplo 124 ri-(4-Metoxi-benzilV2-oxo-2-tiazolidin-3-il-etin-amida do ácido S-5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico e de - 170- S-2-amino-3-(4-metoxi-fenil)-1 -liazolidin-3-il-propan-1 -ona. pf 90 - 115°C.
Anal. Cale.: C, 61,81; H, 5,19; N, 9,83.
Calculado: C, 60,94; H, 5,33; N, 10,01.
Exemplo 125 f 1 -f 2-Cloro-benzil V2-(4-hidroxi-piperidin-1 -ilV2-oxo-etin-amida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de S-2-amino--3-(2-cloro-fenil)-1 -(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-propan-1 -ona. pf 127- 129°C.
Exemplo 126 Γ1 -í4-Metoxi-benzilV2-morfolin-4-il-2-oxo-etill-amida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de S-2-amino--3 -(4-metoxi-fenil)-1 -morfolin-4-il-propan-1 -ona. pf 95 - 105°C.
Anal. Cale.: C, 62,51; H, 5,47; N, 9,51.
Calculado: C, 61,82; H, 6,05; N, 8,97.
Exemplo 127 r2-(4-acetil-piperazin-1 -ilV 1 -(4-metoxi-benzilV2-oxo-etill-amida do ácido S-5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de -171 - S-2-amino-3-(4-metoxi-fenil)-1 -(4-acctil-pipcrazinil)-propan-1 -ona. pf 120 - 135°C.
Anal. Cale.: C, 62,17; H, 5,64; N, 11,60.
Calculado: C, 62,76; H, 6,20; N, 10,44.
Exemplo 128 í-l-(Benzotiazol-2-ilcarbamoilV2-fenil-etill-amida do ácido S-5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-mdole-2-carbonil)-amino] -e-fenil-propiónico e de 2-amino-l,3-benzotiazole. pf 139- 141 °C.
Exemplo 129 n-Benzil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etilVamida do ácido S-5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fe-nil-propiónico e morfolina. pf 234 - 236°c.
Exemplo 130 flS-Benzil-2-oxo-2-('3.3.5RS-trimetilazepan-l-il')-etill-amida do ácido 5-fluoro-lH-indolc-2-carboxílico A partir do ácido 2-[(5-fluoro-lH-indole-lH-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e (±)-3,3,5-trimetilazepano. pf 125 - 127°C. -172 -
Anal. Cale.: C, 72,14; H, 7,18; N, 9,35. Calculado: C, 72,00; H, 7,58; N, 9,10.
Exemplo 131 riS-Benzil-2-f3RS-carbamoil-piperidin-l-iri-2-oxo-etin-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e 3-carbamoil-piperidina. pf 234 - 236°C.
Exemplo 132 Í2-Fenil-1 S-(tiocroman-4RS-ilcarbamoilVetill-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico
A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e de (±)-tiocroman-4-ilamina. pf 225 - 226°C
Anal. Cale.: C, 68,48; H, 5,11; N, 8,88.
Calculado: C, 68,40; H, 5,64; N, 8,61.
Exemplo 133 Γ1 -(5-Metil-isoxazol-3-ilcarbamoilV2-fenil-etill-amida do ácido S-5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e 5-metil-isoxazol-3-ilamina. pf 219-221 °C.
Exemplo 134 r2-Fenil-1 -(4.5.6.7-tetra-hidrobenzotiazol-2-ilcarbamoil Vetill-amida do ácido S-5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e de 4,5,6,7-tetra-hidro-benzotiazol-2-il-amina. pf 162- 165 °C.
Exemplo 135 Γ1 -(5-Metil-tiazol-2-ilcarbamoilV2-fenil-etil1-amida do ácido S-5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico e de 4-metil-tiazol-2-ilamina. pf 211 -213 °C.
Exemplo 136 Γ1 -(5-Metil-isoxazol-3-ilcarbamoilV2-fenil-etill-amida do ácido S-5-metil-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-metil-lH-indole-2-carbonil)-amino] -3-fenil-propiónico e de 5-metil-isoxazol-3-ilamina. pf 243 - 245 °C.
Anal. Cale.: C, 68,64; H, 5,51; N, 13,93.
Calculado: C, 68,29; H, 5,81; N, 14,05.
Exemplo 137 Γ2-(4-Acetil-pjperazin-1 -ill-1 -benzil-2-oxo-etill-amida do ácido S-5-metil-1 H-indole-2-carboxílico A partir do ácido S-2-[(5-metíl-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fe- nil-propiónico e de 1-piperazin-l-il-etanona. pf 221 - 223 °C.
Exemplo 138 (1 -Carbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico A partir do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico e de S-2-amino-3-fenil-propionamida. pf 257 - 258 °C.
Exemplos 139 e 140 (R-1 -Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido (2RSV2.3-di-hidro-lH-indole-2-carboxílico
A uma mistura do ácido DL-indolina-2-carboxílico (0,38 g, 2,3 mmol), Cloridrato (R)-2-amino-N,N-dimetil-3-fenil-propionamida (0,53 g, 2,3 mmol), hidroxibenzotriazole (0,66 g, 4,2 mmol) e trietilamina (0,32 ml, 2,3 mmol) em diclorometano (5 ml) adicionou-se EDC ( 0,64 g, 2,7 mmol). A solução foi agitada durante a noite, foi diluída em diclorometano, foi lavada com água e salmoura, foi seca sobre sulfato de magnésio e foi concentrada. Os dois produtos isoméricos foram separados por cromatografia de flash (EtOAc, depois com EtOAc/MeOH, 20:1).
Exemplo 139
Isómero menos polar (óleo, 0,23 g, 30%): 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,68 (s, 3H), 2,87 (s, 3H), 3,02 - 3,09 (m, 3H), 3,55 (dd, J = 10 Hz, 1H), 4,61 (m, 1H), 5,10 (q, J = 8 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,11 - 7,30 (m, 8H), 8,12 (br, 1H). EM (Cloridrato, NH3) 394 (M+ + 17). - 175-
Exemplo 140
Isómero mais polar (0,11 g, 14%): pf 136 - 140 °C.
Exemplos 141 e 142 (1 -S-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido (2RSV5-cloro2.3-di-hidro-lH-indole-2-carboxílico A uma solução de (l-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido S-5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (2,60 g, 7,0 mmol) em THF (20 ml) e metanol (20 ml) adicionou-se magnésio em porções (1,75 g, 73 mmol), a um caudal que mantivesse a reacção sem excesso de calor. Depois da reacção ter terminado, esta foi concentrada para um pequeno volume, o resíduo foi dividido entre HC1 1 N e acetato de etilo, as camadas de acetato de etilo combinadas foram lavadas com água e salmoura, foram secas sobre sulfato de magnésio e foram concentradas. Os produtos foram separados por cromatografía de flash (metanol a 1% em clorofórmio).
Exemplo 141
Isómero menos polar: *H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,61 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 3,00 - 3,02 (m, 3H), 3,47 (dd, J = 9,9 Hz, 6,4 Hz, 1H), 4,43 (m, 1H), 5,10 (q, J = 7,5 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,00 (s, 1H) 7,16 - 7,29 (m, 7H), 7,70 (br, 1H): EM (Cloridrato, NH3) 372 (M^ + 1).
Exemplo 142
Isómero mais polar: pf 125 °C dec. -176-
Exemplos 143 e 144 nR-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 2RS-5--cloro-2.3-di-hidro-lH-indole-2-carboxilico
Através de um método análogo ao do Exemplo 141 e 142, e utilizando-se (l-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido R-5-cloro-lH-in-dole-2-carboxílico, prepararam-se os dois diastereómeros.
Exemplo 143
Isómero menos polar: pf 122 - 124 °C dec.
Exemplo 144
Isómero mais polar: 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,70 (s, 3H), 2,83 (s, 3H), 2,77 - 2,97 (m, 3H), 3,40 (dd, J = 16,6 Hz, 10,8 Hz, 1H), 4,28 (m, 1H), 4,40 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,12 (q, J = 7,8 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,03 - 7,07 (m, 2H), 7,11 - 7,18 (m, 3H), 7,74 (d, J = 8,8 Hz, 1H).
Exemplo 145 nR-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 3-cloro- lH-indole-2-carboxílico A uma solução de (lR-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 2,3-di-hidro-lH-indole-2-carboxílico (isómero menos polar, 0,50 g, 1,42 nunol) em DMF (7,5 ml) adicionou-se N-clorossuccinimida (0,55 g, 1,42 mmol). Após agitação durante a noite, o solvente foi evaporado e o produto purificado
- 177- por cromatografia de flash (hexanos / acetato de etilo, 1:1). 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,55 (s, 3H), 2,80 (s, 3H), 3,05 - 3,20 (m, 2H), 5,32 (m, 1H), 7,10 - 7,25 (m, 6H), 7,30 (d, 7 Hz, 1H), 7,58 (d, 7 Hz, 1H), 8,11 (br d, 7 Hz, 1H), 10,20 (br, 1H). EM m/e 370 (M+ + 1).
Exemplo 146 (lS-dimetilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 3-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O composto do título foi preparado por um método análogo ao do Exemplo 145 a partir do isómero mais polar de (lR-dimetiIcarbamoil-2-fenil--etil)-amida do ácido 2,3-di-hidro-lH-indole-2-carboxílico. 'H NMR (300 MHz, CDC13) δ 2,55 (s, 3H), 2,85 (s, 3H), 3,05 - 3,20 (m, 2H), 5,32 (m, 1H), 7,10 - 7,25 (m, 6H), 7,35 (d, 7 Hz, 1H), 7,58 (d, 7 Hz, 1H), 8,11 (br d, 7 Hz, 1H), 10,30 (br, 1H). EM m/e 370 (M+ + 1).
Condições de HPLC para os Exemplos 147 - 165: Detector do comprimento de onda 215 nm. Tempo de retenção de HPLC (em minutos) a partir de uma coluna 3,9 x 150 mm da Waters Novapac C18. Eluente A = 50 mM KH2P03, pH 3; Eluente B = Acetonitrilo; Caudal 1,5 ml/minuto; Gradiente 90% de A /10% de B (5 minutos) a 40% de A / 60% de B (5 minutos de retenção). Os tempos de reterição de HPLC (RT) são expressos em minutos. O valor em percentagem dado é a percentagem da integração total devido ao pico específico. Por HPLC, 0 ácido de partida esteve presente numa quantidade inferior a 5% da integração total, a menos que indicado em contrário.
Exemplo 147 Ácido (S)-2-IY 5-fluoro-1 H-indole-2-carbonil)-aminol-3-fenil-propiónico A uma solução do ácido 5-fluoroindole-2-carboxilico (5,0 g, 28 -178- mmol) e cloreto de metileno (250 ml) adicionou-se o cloridraio de l-(3-dimctil-aminopropil)-3-etilcarbodi-imida (5,53 g, 27,9 mmol), cloridrato do éster de terc-butilo de L-fenilalanina (6,54 g, 27,9 mmol) e trietilamina (7,1 ml, 5,13 g, 51 mmol). Após agitação durante 40 horas à temperatura ambiente, a mistura de reacção foi lavada com um volume igual de água e depois com um volume igual de HC1 1 N. O ácido aquoso foi extraído com cloreto de metileno e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas sequencialmente com volumes iguais de água (duas vezes) e salmoura. A solução orgânica foi seca (MgS04), foi filtrada e concentrada para proporcionar o 2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino] -3-fenil-propionato de S-t-butilo (2,97 g, 31%). Este foi então diluído com cloreto de metileno (75 ml) e foi arrefecido a 0°C. Adicionou-se ácido trifluoroacético (8 ml) e a reacção foi então agitada à temperatura ambiente durante 2 dias e depois aquecida ao refluxo durante 6,5 horas. Depois de se deixar aquecer até à temperatura ambiente durante a noite, a solução foi concentrada até à secura para produzir um sólido castanho. Este foi então dissolvido numa quantidade pequena de éter e pentanos, foi filtrado para remover as partículas e concentrado para proporcionar o composto do título sob a forma de uma espuma castanha (2,65 g, produção quantitativa): pf 125 - 127 °C; HPLC RT 5,72; ião TSPMS (esperado) 327 (326); 'H NMR (CDC13) δ 9,0 (br s, 2H), 7,4 - 7,2 (m, 6H), 7,02 (dt, J = 2,4, 9,1 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,09 (q, J = 7,6 Hz, 1H), 3,35 (dd, J = 5,8, 7,6 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 5,8, 7,6 Hz, 1H).
Exemplo 148 Ácido f S)-2-f (5-metil-1 H-indole-2-carbonil)-aminol-3-fenil-propiónico
Uma repetição do procedimento anterior com o ácido 5-metilmdole-2-carboxílico (3,0 g, 17 mmol), cloreto de metileno (185 ml), cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (3,28 g, 17,1 mmol), -179- ? . b ♦. \ t ‘‘''Ui cloridrato do éster de terc-butilo de L-fenilalanina (4,01 g, 15,6 mmol) e trietila amina (4,5 ml, 3,31 g, 32,7 mmol) produziu o éster de t-butilo análogo (2,42, 41%). Após diluição com cloreto de metileno (60 ml) e ácido trifluoroacético (6,6 ml), a reacção foi aquecida ao refluxo durante 3 horas, foi deixada arrefecer até à temperatura ambiente durante a noite e foi concentrada. O produto em bruto foi misturado em acetato de etilo, foi filtrado para remover o material insolúvel e concentrado (duas vezes) para proporcionar o composto do título sob a forma de uma espuma castanha (2,54 g, produção quantitativa). HPLC RT 5,98; ião TSPMS (esperado) 323 (322); 'H NMR (CDC13) Ô 9,9 (br s, 1H), 8,5 (br s, 2H), 7,38 (s, 1H), 7,3 - 7,1 (m, 6H), 6,77 (m, 2H), 5,09 (q, J = 7,6 Hz, 1H), 3,35 (dd, J = 5,6, 7,6 Hz, 1H), 3,26 (dd, J = 5,6, 7,6 Hz, 1H), 2,43 (s, 3H).
Exemplo 149 (1-12-( 5-Metoxi-1 H-indole-3-ilVetilcarbamoin-2-fenil-etill -amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico A 5,0 μτηοΐ do ácido 2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3--fenil-propiónico (50 μΐ de uma solução 0,1 mM em dimetilformamida) adicio-nou-se cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (50 μΐ de uma solução 0,11 mM em DMF, 5,5 μιηοΐ). A reacção foi agitada durante 3 dias e depois foi concentrada até à secura. O produto em bruto foi dividido entre clorofórmio (0,5 ml) e água (0,25 ml) e a camada orgânica foi então concentrada para proporcionar o composto do título. Ião TSPMS (esperado) 499 (499); HPLC RT 6,78 (25%).
Os Exemplos 150 - 156, preparados analogamente ao Exemplo 149, utilizam o ácido 2-[(5-fluoro-lH-indole-2-carbonil)-amino]-3-fenil-propiónico e os Exemplos 157 - 163 utilizam o ácido 2-[(5-metil-lH-indole-2-carbanil)-ami-no ]-3-fenil-propiónico.
Exemplo 150 {l-[2-(lH-indol-3-iO-l-metil-etilcarbamoill-2-fenil-etill-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 482 (483); HPLC RT desconhecido, registaram-se vários pequenos picos; pureza est. < 10%; % SM (HPLC) ND.
Exemplo 151 ri-Benzil-2-I2-etil-piperidin-l-ilV2-oxo-etin-amida do ácido 5-fluoro- lH-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 420 (421); HPLC RT 6,61 (40%). Exemplo 152 (1 -Ciclo-hexilcarbamoil-2-fenilVamida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 408 (407); HPLC RT 6,60 / 7,11 (os dois maiores picos apresentam uma concentração mais ou menos igual); pureza est. (25%).
Exemplo 153 l2-Fenil-l-r(tiofen-2-ilmetill-carbamoin-etill-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 422 (421); HPLC RT 7,50 (50%). -181 -
Exemplo 154 Γ1 -Benzil-2-f 3.4-di-hidro-1 H-isoquinolin-2-ilV2-oxo-etil1-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 442 (441); HPLC RT 6,78 (35 %), 5 % SM.
Exemplo 155 Γ1 -(2-Ciclo-hexen-l-il-etilcarbamoilV2-fenil-etill-amida do ácido 5-fluoro-lH-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 434 (433); HPLC RT 6,27 / 6,60 (os dois maiores picos apresentam uma concentração mais ou menos igual); pureza est. (35 %), 5 % SM.
Exemplo 156 [l-(5-Ciano-pentil-carbamoilV2-fenil-etil1-amida do ácido 5-fluoro-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 421 (420); HPLC RT 6,61 / 7,71 (Os dois maiores picos apresentam uma concentração mais ou menos igual); (40%).
Exemplo 157 r2-Fenil-l-('tiocroman-4-ilcarbamoilVetill-amida do ácido 5 -metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 470 (470). -182- ?! 1
Exemplo 158 (T-Ciclo-hexilcarbamoil-2-fenil-etil)-amida do ácido 5-metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 404 (404); HPLC KT 6,21 (70%). Exemplo 159 (1 -Benzil-2-morfolin-4-il-2-oxo-etil)-amida do ácido 5 -metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 392 (391); HPLC RT 6,86 (50%). Exemplo 160 n-Benzil-2-oxo-2-pirrolidin-l-il-etilVamida do ácido 5-metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 376 (375); HPLC RT 6,50 (40%).
Exemplo 161 {2-Fenil-1 - ff tiofen-2 -ilmetill-carbamoill -etil I -amida do ácido 5-metil- lH-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 418 (417); HPLC RT 7,89 (70%). Exemplo 162 Γ1 -( 5-ciano-pentilcarbamoilV2-fenil-etil1-amida do ácido 5-metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 417 (417); HPLC RT 6,49 / 6,88 (Os dois maiores picos apresentam uma concentração mais ou menos igual); (40%). -183 -
Exemplo 163 (1 -Ciclopentilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-metil-1 H-indole-2-carboxílico Ião TSPMS (esperado) 390 (389); HPLC RT 6,96 (55 %).
Exemplo 164
Ester metílico do ácido 12-íí5-cloro-lH-indole-2-carbonilVaminol -3 -fenil-propionilaniino \ -acético A 5,0 mmol do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (50 ml de uma solução 0,1 M em acetonitrilo) adicionou-se o cloridrato de l-(3-dimetil-aminopropil)-3-etilcarbodi-imida (50 ml de uma solução 0,10 M em acetonitrilo, 5.0 mmol), 1-hidroxibenzotriazole (50 ml de uma solução 0,10 M em acetonitrilo, 5.0 mmol), seguidos de éster metílico do ácido (2-amino-3-feniI-propionil-amino)-acético (50 ml de uma solução 0,10 M em acetonitrilo, 5,0 mmol). A reacção foi agitada durante a noite a 80°C e depois foi concentrada até à secura para proporcionar o composto do título. HPLC RT 8,15 (65 %).
Exemplo 165 Éster benzílico do ácido 2-(S1-Γ(5-cloro-1 H-indole-2--carbonilVaminol-3-fenil-propiónico O composto do título foi preparado por substituição do éster benzílico de L-fenilalanina pelo éster metílico do ácido (2-amino-3-fenil--propionil-amino)-acético por meio de um método análogo ao do Exemplo 164. HPLC RT 8,13 (40 %).
Exemplo 166 Γ(1SVBenzil-2-G-hidroxi-azetidin-1 -iD-2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxilico O cloridrato de 2-amino-l-(3-hidroxi-azetidin-l-il)-3-fenil-propan--1-ona (1,18 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (1,18 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (diclorometano-dimetilformamida 4:1 como solvente de reacção) e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 25%, 50%, 75% e 100% - hexanos, para proporcionar a substância do título como uma espuma incolor (104 mg, 22%). Uma mistura (180 mg) de produtos menos polares foi também isolada. Substância do título: HPLC (60/40) 4,18 minutos (97%); TSPMS 398/400 (MH+, 100%);
Exemplo 166a
Cloridrato de (2SVamino-1 -(3-hidroxi-azetidin-1 -ill-3-fenil-propan-1 -ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-(3-hidroxi-azetidin-l--il)-2-oxo-etil]-carbâmico (515 mg, 1,6 mmol) foi dissolvido em HC1 4N -dioxano, a mistura foi agitada 2 horas a 25°C, foi concentrada e o resíduo foi co-evaporado com éter, proporcionando um solução incolor (415 mg, 100%).
Exemplo 167 \( 1 SVBenzi1-2-(3-hidroxi-imino-azetidin-l-ilV2-oxo-etin-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico IJma solução de [(lS)-benzil-2-(3-oxo-azetidin-l-il)-2-oxo-etil] -amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (produto do Exemplo 170, 50 - 185- - 185-
C/ mg, 0,13 mmol), tri-hidrato de acetato de sódio (43 mg, 0,32 mmol) e o cloridrato de hidroxilamina (18 mg, 0,25 mmol) em metanol (2 ml) foi aquecida ao refluxo durante 8 horas e concentrada. O resíduo foi dividido entre diclorometano e NaHC03 aquoso saturado. A camada orgânica foi separada e seca produzindo um sólido incolor que foi triturado com éter-hexanos e foi seco (Produção 36 mg, 69%): HPLC (50/50) 6,74 min (99%); TSPMS 411/413 (MH+, 10%), 180 (100%); 'H NMR (DMSO-de) δ 11,75 (br, 1H), 11,10 (s, 0,5H), 11,08 (s, 9,5H), 8,99 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,73 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,4 - 7,1 (m, 8H), 5,0 (m, 1H), 4,8 -4,5 (m, 4H), 3,1 (m, 2H).
Exemplo 168 \( 1 S)-Benzil-2-(4-hidroxi-imino-piperidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico
Uma mistura de [(lS)-Benzil-2-oxo-2-(4-oxo-piperidin-l-il)-etil] -amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (406 mg, 0,96 mmol), cloridrato de hidroxilamina (80 mg, 1,15 mmol) e carbonato de potássio (159 mg, 1,15 mmol) em etanol (6 ml) e água (1 ml) foi agitada a 25°C durante 18 horas e concentrada. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução resultante foi lavada com água e foi seca (411 mg, 98%): HPLC (60/40) 5,13 minutos (97%); TSPMS 439/441 (MH+, 100%); 'H NMR (DMSO-de) δ 11,75 (br, 1H), 10.45 (s, 0,5H), 10,44 (s, 0,5H), 9,00 (m, 1H), 7,72 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,40 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,35 - 7,15 (m, 7H), 5,17 (m, 1H), 3,8 - 3,5 (m, 4H), 3,1 (m, 2H), 2.45 (m, 2H), 2,25 (m, 2H).
Exemplo 168a [USVBenzil-2-oxo-2-(4-oxo-piperidin-l-ilVetin-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico A [(1 S)-benzil-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do -186 - i ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (Exemplo 46, 669 mg) foi adicionada numa só porção a 0°C a uma mistura de cloridrato de l-(3-dimetilaminopro-pil)-3-etilcarbodi-imida (DEC, 1,80 g, 9,4 mmol) e ácido dicloroacético (307 mg, 1,5 mmol) em tolueno anidro (e ml) e dimetilsulfóxido anidro (e ml). A mistura foi agitada a 0 - 20°C durante 2 horas, foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada duas vezes com HC1 IN, duas vezes com NaHC03 saturado aquoso, foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica gel eluída com acetato de etilo a 25%, 50% e 75% - hexanos, proporcionando uma espuma (424 mg, 64%).
Exemplo 169 Γ(1 S)-Benzil-2-( 1.3-di-hidro-isoindol-2-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5 -cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de 2-amino-l-(l,3-di-hidro-isoindol-2-il)-3-fenil-pro-pan-l-ona (0,20 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,20 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 5%, 10%, 20% e 50% - hexanos (55 mg, 62% de rendimento): HPLC (70/30) 6,58 minutos (90%); TSPMS 44/446 (MH+, 50%), 180 (100%). 'H NMR (CDC13) δ 9,25 (br, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,45 (m, ca. 1H), 7,3 - 7,1 (m, ca. 11H), 6,90, 5,25 (m 1H), 5,0 (d, 1H, ca. 16 Hz), 4,85 (d, 1H, J = ca. 16 Hz), 4,70 (d, 1H, J = ca. 16 Hz), 4,20 (d, 1H, J = 16 Hz).
Exemplo 169a
Cloridrato de (2SVamino-l-( 1.3-di-hidro-isoindol-2-ilV3-fenil-propan-l-ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-(l,3-di-hidro-isoin-dol-2-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (88 mg) foi dissolvido em HC14N - dioxano frio -187 -
fiJ tf ϊ t-i (1,5 ml), foi agitado durante 2 horas a 25°C, e a mistura foi concentrada. O resíduo foi triturado com éter e foi seco (65 mg, 91%). TSPMS 267 (MH+, 100%).
Exemplo 169b Éster de terc-butilo do ácido Γ(1 SVbenzil-2-( 1.3-di-hidro-isoindol-2-il)-2-oxo-etil 1-carbâmico N-t-Boc-L-fenilalanina (1 mmol) e isoindolina (J. Org. Chem. 1988, 53, p. 5382, 70 - 80 % de pureza, 1 mmol) foram acopladas de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20% e 50% - hexanos, proporcionando um óleo âmbar (88 mg, 23%): TSPMS 367 (MH+, 100%).
Exemplo 170 rnS)-Benzil-2-(3-oxo-azetidin-l-ilV2-oxo-etill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de l((S)-amino-3-fenil-propionil)-azetidin-3-ona (3,2 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (3,2 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (temperatura de reacção de 0 - 25 °C) e a espuma amarela resultante foi purificada por cromatografia sobre sílica gel eluída com acetato de etilo a 20%, 30%, 40% e 50% em hexano, proporcionando a substância do título sob a forma de uma espuma incolor (600 mg, 47%): HPLC (60/40) 5,09 minutos (98%); TSPMS (MH+, 100%); *H NMR (CDC13) δ 9,14 (br, 1H), 7,62 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,4 - 7,2 (m, 7H), 7,11 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,85 (m, 1H), 4,90 (m, 1H), 4,78 (m, 2H), 4,63 (m, 1H), 3,65 (m, 1H), 3,25 (dd, 1H, A de AB, J = 5,1,12,9 Hz), 3,10 (dd, 1H, B de AB, J = 10,12,9 Hz). - 188- ( ϊ \
Exemplo 170 A
Cloridrato de l-((2SVamino-3-fenil-propionilVazetidin-3-ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-oxo-2-(3-oxo-aze-tidin-l-il)-etil]-carbâmico (297 mg, 0,9 mmol) foi dissolvido em HC1 4N - dio-xano (3 ml). A solução resultante foi agitada a 25°C durante 2 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter e foi seco (196 mg, 82%).
Exemplo 170B Éster de terc-butilo do ácido IY lSVbenzil-2-oxo-2-(3--oxo-azetidin-1 -ilVetill-carbâmico O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-(3-hidroxi-azetidin--l-il)-2-oxo-etil]-carbâmico (320 mg, 1 mmol) foi adicionado numa só porção a uma mistura de cloridrato de l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodi-imida (DEC, 575 mg, 3 mmol) e do ácido dicloroacético (192 mg, 1,5 mmol) em tolueno anidro (2 ml) e dimetilsulfóxido anidro (2 ml). A mistura foi agitada a 0 - 20°C durante 1 hora, foi diluída com acetato de etilo, a solução resultante foi lavada com HC1 IN e duas vezes com NaHC03 aquoso saturado, foi seca e concentrada para proporcionar um sólido incolor (304 mg, 96%).
Exemplo 170C Éster de terc-butilo do ácido \( 1 S>benzil-2-(3-hidroxi--azetidin-1 -il)-2-oxo-etin-carbâmico O cloridrato de 3-hidroxiazetidina (J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1968, p. 93, 27 mmol) e N-t-Boc-L-fenilalanina (27 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A, proporcionando a substância do título sob a forma de uma espuma incolor (8,15 g, 93%). -189- /
Exemplo 171 (l-Dimetilcarbamoil-2-fenil-etilVamida do ácido 5-cloro-1 H-benzoimidazole-2-carboxílico O cloridrato de (S)-2-amino-N,N-dimetil-2-fenil-propionamida (2,0 mmol) e ácido 5-cloro- lH-benzoimidazole-2-carboxílico (Crowther et al., J. Chem. Soc. 1949, p.1268, 2,0 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A e o produto foi purificado por cromatografia sobre sílica gel eluída com 1:1 de acetato de etilo - hexanos (235 mg, 63%): HPLC (60/40) 4,92 minutos (91%); PBMS 371/373 (MH+, 100%); ’h NMR (CDC13) δ 11,25 (br, 0,6H), 10,9 (br, 0,4H), 8,36 (m, 1H), 7,78 (d, 0,4H, J = 7,72 (d, 0,6H, J = 8,8 Hz), 7,52 (d, 0,6H, J = 2 Hz), 7,41 (d, 0,4H, J = 8,4 Hz), 7,35 - 7,1 (m, 6H), 7,35 (m, 1H), 3,16 (m, 2H), 2,90 (s, 3H), 2,68 (s, ca. 2H), 2,67 (s, ca. 1H).
Exemplo 172 Γ1 -Benzil-2-oxo-2-(2-oxo-oxazolidin-3-ilVetill-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico O cloridrato de 3-((2S)-amino-3-fenil-propionil)-oxazolidin-2-ona (0,50 mmol) e o ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico (0,50 mmol) foram acoplados de acordo com o Procedimento A (3:1 de dimetilformamida-dicloro-metano como solvente de reacção) e o produto foi triturado com 2:1 de éter-hexanos e foi seco (130 mg, 63%): HPLC (60/40) 6,22 minutos (95%); TSPMS 429/431 (45%, MH+ NH3), 412/414 (30%, MH+), 325/327 (100%). 'H NMR (DMSO-ty δ 11,68 (br, 1H), 8,92 (d, 1H, J = 8,5 Hz), 7,75 (s, 1H), 7,42 (m, 3H), 7,26 (m, 3H), 7,18 (m, 2H), 5,83 (m, 1H), 4,50 (m, 2H), 4,0 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,95 (m, 1H). -190 -
Exemplo 172a
Cloridrato de 3((2SVamino-3-fenil-t>ropionir)-oxazolidin-2-ona O éster de terc-butilo do ácido [(lS)-benzil-2-oxo-2-(2-oxo-oxazo-lidin-3-il)-etil]-carbâmico (2,29 g, 6,68 mmol) foi dissolvido em HC1 4N -dioxano (10 ml) a 0°C. A solução resultante foi agitada a 25°C durante 2 horas, foi concentrada e o resíduo foi triturado com éter e foi seco (1,98 g, 107%):
Exemplo 172b Éster de terc-butilo do ácido f(lSVbenzil-2-oxo-2--f2-oxo-oxazolidin-3-ill-etill-carbâmico N-butil-lítio (2,35 M em hexanos, 11,5 ml) foi adicionado a -78°C a uma solução de 2-oxazolidinona (2,04 g, 23,4 mmol) em tetra-hidrofurano (25 ml). Ao fim de 30 minutos a -78°C, a solução foi tratada com o éster de N-hidroxissuccinimida de N-t-Boc-L-fenilalanina (9,31 g, 25,7 mmol) em tetra-hidrofurano (10 ml) e a mistura agitada foi deixada aquecer até 25°C durante a noite. Adicionou-se água e a mistura resultante foi concentrada, o resíduo foi dissolvido em acetato de etilo e a solução resultante foi lavada duas vezes com NaOH IN, uma vez com água e uma vez com salmoura, foi seca e foi concentrada. O resíduo foi cromatografia sobre sílica gel eluída em 25% e 50% de acetato de etilo em hexanos, proporcionando um sólido incolor (3,42 g, 44%).
Deve-se entender que este invento não está limitado aos modelos de realização descritos, e que se podem efectuar várias alterações e modificações sem se sair do espírito e âmbito deste novo conceito, como definido pelas reivindicações seguintes.
Lisboa, 21 de Novembro de 2001
ALBERTO CANELAS
Agente Oficia! da Propriedade Industrial ’ RUA VÍCTCR CORDON, i4
ΌΠΛ I IQROA i

Claims (36)

  1. -1 - REIVINDICAÇÕES 1. Um composto de Fórmula I
  2. 2. Um composto como referido na reivindicação 1, em que R] é 5-H, 5-halo, 5-metilo, 5-ciano ou 5-trifluorometilo; R10 e R, ] são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=; R2 e R3 são H; R4 é H, metilo, fenilalquilo (CrC2), em que os referidos grupos fenilo são mono- ou di-substituídos independentemente por H, halo, alquilo (Cj-C4), alcoxi (C1-C4), trifluorometilo, hidroxi, amino ou ciano e em que os referidos grupos R4 são facultativa e adicionalmente mono-substituído por halo; ou R4 é tien-2- ou -3-ilalquilo (Ci-C2), pirid-2-, -3- ou -4-ilalquilo (CrC2), tiazol-2-, 4- ou -5-ilalquilo (CrC2), imidazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (Q-Q), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), pirrol-2- ou -3-ilalquilo (Ci*C2), oxazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), pirazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (Ci-C2), isoxazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), piridazin-3- ou -4-ilalquilo (CpCy, pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-ilalquilo (CrC2), pirazin-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) ou l,3,5-triazin-2-ilalquilo (Cj-C2), em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (C1-C4), alcoxi (CrC4), amino ou hidroxi e os referidos mono- ou di-substituintes estão ligados ao carbono; e R^ e C(O)NRgRi) ou C(0)Rj2.
  3. 3. O composto como referido na reivindicação 2, em que R4 é H, fenilalquilo (C,-C2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CpCy, fur-2- ou -3-ilalquilo (C,-C2) em que os referidos aneis R4 são mono- ou di-substituídos -6-
    independentemenle por H ou íluoro; Ró e C(0)Rl2; e R12 é morfolino, tíomorfolino, 1-oxotíomorfolino, 1,1-dioxotiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, l-oxotiazolidin-3-ilo, l,l-dixotiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, isoxazolidin-2-ilo, isotiazolidin-2-ilo, l,2-oxazetidin-2-ilo, oxazolidin-3-ilo, 1,3-di-hidroisoindol-2-ilo, ou azepan-l-ilo, em que os referidos aneis RI2 são facultatívamente mono- ou di-substi-tuídos independentemente por halo, alquilo (CrC5), alcoxi (C1-C5), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Q-Cs^amino, formilo, carboxi, carbamoílo, mono-N- ou di-N,N-alquil (C1-C5)-carbamoílo, alcoxi (Ci-C5)-carbonilo, hidroxi-alquilo (CrC5), aminoalquilo (C1-C4), mono-N- ou di-N,N-alquil (Q-C^-amino--alquilo (CrC4), oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (Ci-C6)-imino, com a condição de que apenas os heterociclos R12 tiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, isoxazolidin--2-ilo, ou oxazolidin-3-ilo são facultativamente mono- ou di-substituídos por oxo, hidroxi-imino, ou alcoxi-imino (Cj-Cg); e em que os referidos aneis R12 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (CrC5).
  4. 4. O composto como referido na reivindicação 3, em que R4 é H;e R12 é tiazolidin-3-ilo, l-oxo-tiazolidin-3-ilo, l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo ou oxazolidin-3-ilo ou os referidos substituintes de R12 são facultativamente mono-ou di-substituídos independentemente por carboxi, alcoxicarbonilo (CrC5), hidroxialquilo (Ci-C3), aminoalquilo (CrC3), mono-N- ou di-N,N-alquil (C!-C3)--amino-alquilo (CrC3) ou R12 é pirrolidin-l-ilo mono- ou di-substituído, em que os referidos substituintes são independentemente carboxi, alcoxi (C1-C5)-carbonilo, alcoxi 1) -7- ~¥S- ‘i (Q-C5), hidroxi, hidroxialquilo (CrC3), amino, aminoalquilo (CrC3), inono-N-ou di-N,N,-alquil (Ci-C3)-amino-alquilo (CrC3) ou mono-N- ou di-N,N-alquil (CpC^-amino; e os aneis R12 são facultativa, adicional e independentemente di-substituídos por alquilo (CrC3).
  5. 5. O composto como referido na reivindicação 3, em que R4 é fenilmetilo, tien-2- ou -3-ilmetilo, em que os referidos aneis R4 são facultativamente mono- ou di-substituídos por fluoro; e R12 é tiazolidin-3-ilo, l-oxo-tiazolidin-3-ilo, l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo ou oxazolidin-3-ilo ou os referidos substituintes R!2 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por carboxi ou alcoxi (Ci-C5)-carbonilo, hidroxialquilo (Ci-C3), aminoalquilo (CrC3) ou mono- ou di-N,N-alquil (C]-C3)-amino-alquilo (Cj-C3) ou R12 é azetidin-l-ilo mono- ou di-substituído ou pirrolidin-l-ilo mono-di-substituído ou piperidin-l-ilo mono- ou di-substituído, em que os referidos substituintes são independentemente carboxi, alcoxicarbonilo (Cj-Q), hidroxialquilo (Ci-C3), aminoalquilo (CrC3), mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C3)-amino alquilo (C]-C3), hidroxi, alcoxi (C1-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino, oxo, hidroxi-imino ou alcoxi-imino (CrC5); e os aneis RI2 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (C]-C5).
    5 Fórmula I e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-drogas, em que a linha a tracejado (—) é uma ligação facultativa; A é -C(H)=, -C(alquilo (Ci-C4))=, C(halo)= ou -N=, quando a linha a tracejado (—) é uma ligação, ou A é metileno ou -CH(alquilo (Ci-C4))-, quando a linha a tracejado (—) não é uma ligação;
    Rb R10 ou R,, são independentemente H, halo, ciano, 4-, 6-, ou 7-nitro, alquilo (CrC4), alcoxi (Cj-C4), fluorometilo, difluorometilo ou trifluorometilo; R3 é H ou alquil (CpCs); R4 é H, metilo, etilo, n-propilo, hidroxi-alquilo (CrC3), alcoxi (CrC3) alquilo (CrC3), fenil-alquilo (CrC4), fenil-hidroxialquilo (CrC4), (fenil)(alcoxi (CrC4))(alquilo (CrC4)), tien-2- ou -3-il-alquilo (CrC4) ou fiir-2- ou -3-il-al-quilo (CrC4), em que os referidos aneis de R4 são independentemente mono-, di-ou tri-substituídos no carbono por H, halo, alquilo (CrC4), alcoxi (C]-C4), trifluorometilo, hidroxi, amino, ciano ou 4,5-di-hidro-lH-imidazol-2-ilo; ou R4 é pirid-2-, -3- ou -4-il-alquilo (CrC4), tiazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (Ci-C4), imidazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (CpQ), pirrol-2- ou -3-il-alquilo (CrC4), oxazol-2-, -4- ou -5-il-alquilo (C,-C4), pirazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (Ci-C4), isoxazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (C1-C4), isotiazol-3-, -4- ou -5-il-alquilo (C,-C4), piridazin-3- ou -4-il-alquilo (C1-C4), pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-il-alqui-lo (CrC4), pirazin-2- ou -3-il-alquiIo (C1-C4), l,3,5-triazin-2-il-alquilo (C1-C4) ou indol-2-alquilo (CrC4), em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), amino, hidroxi ou ciano e em que os referidos substituíntes são ligados ao carbono; ou R4 é R15-carboniloximetilo, em que o referido R|5 é fenilo, tiazolilo, imidazolilo, ΙΗ-indolilo, furilo, pirrolilo, oxazolilo, pirazoílo, isoxazolilo, isotiazolilo, piridilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo ou 1,3,5-triazinilo, em que os referidos aneis RI5 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos por halo, amino, hidroxi, alquilo (CrC4), alcoxi (CVC4) ou trifluorometilo e em que os referidos mono- e di-substituintes são ligados ao carbono; R5éH; R$ é carboxi, alcoxi (Cj-Cg)-carbonilo, benziloxicarbonilo, C(0)NR8R9 ou C(0)R12 em que Rg é H, alquilo (C,-C6), cicloalquilo (C3-C6), cicloalquilo (C3-C6)-alquilo (CrC5), hidroxi ou alcoxi (CrC8); e R9 é H, cicloalquilo (C3-C8), cicloalquilo (C3-C8)-alquilo (C1-C5), ciclo-alquenilo (C4-C7), cicloalquilo (C3-C7) alcoxi (CrCj), cicloalquiloxi (C3-C7), hidroxi, metileno-alquilo (Ci-C8) perfluorado, fenilo, ou um heterociclo, em que o referido heterociclo é piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, pira-nilo, piridinilo, piperidinilo, morfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzimidazolilo, tio-cromanilo ou tetra-hidrobenzotiazolilo, em que os referidos aneis de heterociclo são carbono-azoto ligados; ou R9 é alquilo (CrC6) ou alcoxi (Q-Cg), em que o referido alquilo (CrC6) ou alcoxi (C[-C8) é facultativamente mono-substituído por cicloalquen-1--ilo(C4-C7), fenilo, tienilo, piridilo, furilo, pirrolilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, isoxazolilo, iso-tiazolilo, piranilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1-oxotiomorfolinilo, 1,1-dioxotiomorfolinilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piperazinilo, 1,3,5-triazinilo ou indolilo e em que 0 referido alquilo (CrC6) ou alcoxi (CrC8) são facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituídos por halo, hidroxi, alcoxi (C]-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquilamino (Q-C5), ciano, carboxi, ou alcoxicarbonilo (C1-C4); e em que os aneis R9 são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente no carbono por halo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), hidroxi, hidroxialquilo (CrC4), aminoalquilo (CrC4), mono-N- ou di-N,N-alquilamino (CrC4) alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4) alquilo (Ci-C4), mono-N- ou di-N,N--alquilamino (C)-C4), ciano, carboxi, alcoxi (C1-C5) carbonilo, carbamoílo, formilo ou trifluorometilo e em que os referidos aneis R9 podem facultativamente ser ainda mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (CrC5) ou halo; com a condição de não se incorporar azoto quatemizado em qualquer heterociclo R$; R12 é morfolino, tiomorfolino, 1-oxotiomorfolino, 1,1-dioxotiomorfolino, tiazolidin-3-ilo, l-oxotiazolidin-3-ilo, l,l-dioxotiazolidin-3-ilo, pirrolidin-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-l-ilo, piperazin-4-ilo, azetidin-l-ilo, l,2-oxazinan-2-ilo, pirazolidin-l-ilo, isoxazolidin-2-ilo, isotiazolidin-2-ilo, l,2-oxazetidin-2-ilo, oxazolidin-3-ilo, 3,4-di-hidroisoquinolin-2-ilo, l,3-di-hidroisoindol-2-ilo, 3,4--di-hidro-2H-quinol-1 -ilo, 2,3-di-hidro-benzo[l ,4]oxazin-4-ilo, 2,3-di-hidro-ben-zo[l,4]-tiazin-4-ilo, 3,4-di-hidro-2H-quinoxalin-l-ilo, 3,4-di-hidro-benzo[c][l,2]- oxazin-1 -ilo, 1,4-di-hidrobenzo[d] [ 1,2]oxazin-3-ilo, 3,4-di-hidro-benzo[e] [1,2]-oxazin-2-ilo, 3H-benzo[d]isoxazol-2-ilo, 3H-benzo[c]isoxazol-l-ilo ou azepan-1--ilo, em que os referidos aneis R12 são facultativamente mono-, di- ou tri-substituídos independentemente por halo, alquilo (CrC5), alcoxi (Q-C5), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino, formilo, carboxi, car-bamoílo, mono-N- ou di-N,N-alquil(CrC5)-carbamoílo, alcoxi (CrC6)-alcoxi (C1-C3), alcoxi (C,-C5) carbonilo, alcoxi (Cj-Cs^carbonil-alquilo (Q-C5), alcoxi (C1-C4)-carbonilamino, carboxialquilo (C1-C5), carbamoilalquilo (Q-Q), mono--N- ou di-N,N-alquil (C,-C5)-carbamoil-alquilo (C1-C5), hidroxialquilo (CrC5), alcoxi (CrC4)-alquilo (CrC4), aminoalquilo (CrC4), mono-N- ou di-N,N-alquil (CrC4)-amino-alquilo (CrC4), oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (CrC6)-imino e em que não mais do que dois substituintes são seleccionados entre oxo, hidroxi--imino ou alcoxi (CrC6)-imino e oxo, hidroxi-imino ou alcoxi (Cj-C^-imino estão nos carbonos não aromáticos; e em que os referidos aneis RI2 são facultativa e adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por alquilo (Ci-C5) ou halo; com a condição de quando Ré for alcoxicarbonilo (C1-C5) ou benziloxi-carbonilo, então R, é 5-halo, 5-alquilo (CrC4) ou 5-ciano e R4 é (fenil)(hidroxi)-alquilo (CrC4), (fenil)(alcoxi (C]-C4))alquilo (CrC4), hidroximetilo ou Ar-alqui-lo (Ci-C2), em que Ar é tien-2- ou -3-ilo, fur-2- ou -3-ilo ou fenilo, em que o referido Ar é facultativamente mono- ou di-substituído independentemente por halo; com a condição de que quando Rj, R10 e Rn são H, R4 não é imidazol-4-ilmetilo, 2-feniletilo ou 2-hidroxi-2-feniletilo; com a condição de que quando Rg e Rg são n-pentilo, Rj é 5-cloro, 5-bromo, 5-ciano, 5-alquilo (Ci-C5), 5-alcoxi (CrC5) ou trifluorometilo; com a condição de que quando R12 é 3,4-di-hidroisoquinol-2-ilo, o referido 3,4-di-hidroisoquinol-2-ilo não é substituído por carboxialquilo (CrC4); com a condição de que quando R8 é H e R9 é alquilo (CrC6), Rg não é substituído por carboxi ou alcoxi (Ci-C^-carbonilo sobre o carbono, o qual está ligado ao átomo de azoto N ou NHR9; e com a condição de que quando R$ é carboxi e R1} R10, Ru e R5 são todos H, então R4 não é benzilo, H, (fenil)(hidroxi)metilo, metilo, etilo ou n-propilo.
  6. 6. O composto como referido na reivindicação 3, caracterizado por ser selecciondo entre [(lS)-Benzil-2-(3-hidroxi-iminopirrolidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5 -cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-(Cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro--1 H-indole-2-carboxílico, [2-((3S,4S)-Di-hidroxi-pirrolidiii-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro--1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-(cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidm-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-(l,l-Dioxo-tiazolidin-3-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-lH-in-dole-2-carboxílico, (2-Oxo-2-tiazolidin-3-il-etil)-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxí- lico, [(1 S)-(4-Fluoro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-((3RS)-hidroxipiperidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5--cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [2-Oxo-2-((lRS)-oxo-l-tiazolidin-3-il)-etil]-amida do ácido 5-cloro-lH--indole-2-carboxílico, [(1 S)-(2-Fluoro-benzil)-2-(4-hidroxi-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [(1 S)-Benzil-2-((3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-(3-hidroxi-azetidin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro- 1 H-indole-2-carboxílico, [(lS)-Benzil-2-(3-hidroxi-imino-azetídin-l-il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-lH-indole-2-carboxílico, ou [(1 S)-Benzil-2-(4-hidroxi-imino-piperidin-1 -il)-2-oxo-etil]-amida do ácido 5-cloro-1 H-indole-2-carboxílico.
  7. 7. O composto como referido na reivindicação 4, em que Rj é 5-cloro; R10eRn sãoH, e R12 é cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo. -9- .>λ'Ή
  8. 8. Ο composto como referido na reivindicação 4, em que R, é 5-cloro; Rio e R,, são H, e R12 é (3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo.
  9. 9. O composto como referido na reivindicação 4, em que R, é 5-cloro; R10 e Ru são H; e R12 é l,l-dioxo-tiazolidin-3-ilo.
  10. 10. O composto como referido na reivindicação 4, em que R, é 5-cloro; R10 e Ru são H; e R12 é tiazolidin-3-ilo.
  11. 11. O composto como referido na reivindicação 4, em que R, é 5-cloro; R10eRn sãoH; e R12 é l-oxo-tiazolidin-3-ilo.
  12. 12. O composto como referido na reivindicação 5, em que Rj é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 é 4-fluorobenzilo; R12 é 4-hidroxipiperidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  13. 13. O composto como referido na reivindicação 5, em que -10-
    R, é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 é benzilo; R12 é 3-hidroxipiperidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  14. 14. O composto como referido na reivindicação 5, em que R] é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 é benzilo; R12 é cis-3,4-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  15. 15. O composto como referido na reivindicação 5, em que Rj é 5-cloro; R10 e Ru são H; R4 é benzilo; Rj2 é 3-hidroxi-imino-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  16. 16. O composto como referido na reivindicação 5, em que Rj é 5-cloro; Rjo e Ru são H; R4 é 2-fluorobenzilo; R12 é 4-hidroxipiperidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  17. 17. O composto como referido na reivindicação 5, em que Ri é 5-cloro; Rt0 e Rn são H; - 11 - f: R4 é benzilo; Rj2 é (3S,4S)-di-hidroxi-pirrolidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  18. 18. O composto como referido na reivindicação 5, em que R, é 5-cloro; R10eRn sãoH; R4 é benzilo; R12 é 3-hidroxi-azetidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  19. 19. O composto como referido na reivindicação 5, em que Ri é 5-cloro; R10 e Ru são H; R4 é benzilo; R)2 é 3-hidroxi-imino-azetidin-l-ilo; e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  20. 20. O composto como referido na reivindicação 5, em que R! é 5-cloro; Rl0eRM sãoH; R4 é benzilo; R,2 é 4-hidroxi-imino-piperidin-l-ilo e a estereoquímica de carbono (a) é (S).
  21. 21. O composto como referido na reivindicação 2, em que R, é H, fenilalquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) em que os referidos aneis R4 são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; Ré éC(0)NR8R$;e R8 é H, alquilo (CrC5), hidroxi ou alcoxi (CrC4); e R, é H, cicloalquilo (C4-C6), cicloalquil (C3-C6)-alquilo (C1-C5), metileno-alquilo (C,-C3) perfluorado, piridilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, piperidinilo, benzotiazolilo ou tiocromanilo; ou R9 é alquilo (CrC5) em que o referido alquilo (Q-C5) é facultativamente substituído por cicloalquenilo (C4-C6), fenilo, tienilo, piridilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomor-folinilo, 1-oxotiomorfolinilo ou 1,1-dioxotiomorfolinilo e em que o referido alquilo (CpC5) ou alcoxi (Cj-Q) é facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituído por halo, hidroxi, alcoxi (C]-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (C1-C5)-amino (CrC5), ciano; carboxi, ou alcoxi (CVCO-carbonilo; e em que os aneis Rg são facultativamente mono- ou di-substituídos inde-pendentemente no carbono por halo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (C1-C4)-amino, carbamoílo, alcoxi (C1-C5)-carbonilo ou carbamoílo.
  22. 22. O composto como referido na reivindicação 2, em que R4 é H, fenilalaquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-alquilo (C,-C2) em que os referidos aneis R4 são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; Ré éC(0)NR8Rg;e R8 é H, alquilo (CrC5), hidroxi ou alcoxi (CrC4); e Rg é alcoxi (CrC4) em que o referido alcoxi (Ci-C4) é facultativamente substituído por cicloalquenilo (C4-C6), fenilo tienilo, piridilo, pirrolidinilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, 1-oxotiomorfolinilo, ou 1,1-dioxotiomorfolinilo e em que o referido alquilo (Cj-C5) ou alcoxi (Cj-C4) é facultativa, adicional e independentemente mono- ou di-substituído por halo, hidroxi, alcoxi (Ci-C5), amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Ci-C5)-amino, ciano, carboxi, ou alcoxi (CrC4)-carbonilo; e em que os aneis Rg são facultativamente mono- ou di-substituídos inde-pendentemente no carbono por halo, alquilo (CrC4), alcoxi (CrC4), hidroxi, amino, mono-N- ou di-N,N-alquil (Q-GO-amino, carbamoílo, alcoxi (Ci-C5)-car-bonilo ou carbamoílo.
  23. 23. O composto como referido na reivindicação 21, em que R, é 5-cloro; R|0 e Rn são H; R4 ébenzilo; R8 é metilo; e R9 é 3-(dimetilamino)propilo.
  24. 24. O composto como referido na reivindicação 21, em que a estereoquímica do carbono (a) é (S); R, é 5-cloro; R,0 e R| j sao H; ébenzilo; R8 é metilo; e Rx, é 3-piridilo.
  25. 25. O composto como referido na reivindicação 21, em que a estereoquímica do carbono (a) é (S); R, é 5-cloro; R10 e Rn são H; R4 ébenzilo; R8 é metilo; e Rg é 2-hidroxietilo.
  26. V.. -14- 26. 0 composto como referido na reivindicação 21, em que a estereoquímica do carbono (a) é (S); R, é 5-fluoro; R10 e Rn são H; R4 é 4-fluorofenilmetilo; R8 é metilo; e R9 é 2-morfolinoetilo.
  27. 27. O composto como referido na reivindicação 22, em que R] é 5-cloro; R10 e Ri 1 são H; R4 é benzilo; Rg é metilo; e R9 é 2-hidroxietoxi.
  28. 28. O composto como referido na reivindicação 22, em que a estereoquímica do carbono (a) é (S); Rt é 5-cloro; Rio e Ri 1 são H; R4 é 4-fluorofenilmetilo; R8 é metilo; e R9 é metoxi.
  29. 29. O composto como referido na reivindicação 22, em que a estereoquímica do carbono (a) é (S).
  30. 30. O composto como referido na reivindicação 1, em que Ri é 5-halo, 5-metilo, 5-ciano ou trifluorometilo; Rio e Rn são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=; R2eR3 sãoH; R4 é H, fenilalquilo (CrC2), tien-2- ou -3-ilalquilo (CrC2), fur-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) em que os referidos aneis são mono- ou di-substituídos independentemente por H ou fluoro; e é alcoxi (CpCs^carbonilo.
  31. 31. O composto como referido na reivindicação 1, em que Rt é halo, 5-metilo, 5-ciano ou trifluorometilo; Rio e Ri 1 são cada um independentemente H ou halo; A é -C(H)=; R2 e R3 são H; R4 é H, metil ou fenilalquilo (CrC2), em que os referidos grupos fenilo são mono- ou di-substituídos independentemente por H, halo, alquilo (C1-C4), alcoxi (C]-C4), trifluorometilo, hidroxi, amino ou ciano, e em que os referidos grupos fenilo são adicionalmente mono- ou di-substituídos independentemente por H ou halo; ou R4 é tien-2- ou -3-ilalquilo (Ci-C2), pirid-2-, -3- ou -4-ilalquilo (Ci-C2), tiazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (Ci-C2), imidazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (Ci-C2), fur-2- ou -3-ilalquilo (Ci-C2), pirrol-2- ou -3-ilalquilo (Ci-C2), oxazol-2-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), pirazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (Ci-C2), isoxazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), isotiazol-3-, -4- ou -5-ilalquilo (CrC2), piridazin-3- ou -4-ilalquilo (CrC2), pirimidin-2-, -4-, -5- ou -6-ilalquilo (C,-C2), pirazin-2- ou -3-ilalquilo (CrC2) ou l,3,5-triazin-2-ilalquilo (CrC2) em que os referidos heterociclos R4 precedentes são facultativamente mono- ou di-substituídos independentemente por halo, trifluorometilo, alquilo (Ci-C4), alcoxi (CrC4), amino ou hidroxi e em que os referidos mono- ou di-substituintes estão ligados ao carbono; -16- ;Τν, R5 é Η;e Rg é carboxi.
  32. 32. O composto como referido na reivindicação 31, em que Rio e RM são H; e R4 éH.
  33. 33. O composto como referido na reivindicação 32, em que Ri é 5-cloro.
  34. 34. Uma composição farmacêutica, que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  35. 35. A composição farmacêutica como referida na reivindicação 34 para o tratamento de doenças dependentes da fosforilase de glicogénio em mamíferos, que compreende uma quantidade de tratamento de uma doença dependente de fosforilase de glicogénio de um composto da reivindicação 1 e um veículo farmaceuticamente aceitável.
  36. 36. Uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de a) um inibidor de fosforilase de glicogénio, tal como reivindicado na reivindicação 1; b) um agente anti-diabético seleccionado entre insulina, e análogos da insulina; insulinotropina; Sulfonilureias e análogos; Biguanidas; Antagonistas-a2 e Imidazolinas; Secretágogos de insulina; Glitazonas; Inibidores de Oxidação de Ácidos Gordos; Inibidores de a-Glucosidase; β-Agonistas; Inibidores de fosfodiesterase; Agentes diminuidores de Lípidos; Agentes -17- Antiobesidade; Vanadato e complexos de vanádio e complexos de peroxovanádio; Antagonistas de Amilina; Antagonistas de Glucagona; Inibidores de Gluconeogenése; Análogos de Somatostatina; agentes Antilipóticos; e c) facultativamente um veículo farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 21 de Novembro de 2001
    C ALBERTO CANELAS Agente Oficiai cia Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA
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