PT2033635E - Derivados de ácidos gordos de cadeia curta para tratar o prurido - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO EPíGRAFE: "DISPOSITIVO DE ÁCIDOS GORDOS DE CADEIA CURTA PARA TRATAR O PRURIDO"

ANTECEDENTES DO INVENTO Âmbito do invento 0 presente invento diz respeito a uma forma de melhorar o prurido, e em particular ao uso de ácido fenilbutirico para a preparação de uma composição farmacêutica destinada a prevenir, tratar ou melhorar o prurido associado a doenças ou perturbações localizadas ou sistémicas.

Descrição da técnica associada

Como se sabe, a sensação subcutânea referida como prurido caracteriza-se por uma sensação desagradável de comichão na pele que conduz à escoriação. A escoriação é por vezes suficientemente grave para irritar e inflamar a pele dos indivíduos afectados. 0 prurido pode também caracterizar-se 1 como uma resposta uniformizada a uma grande variedade de estímulos físicos, químicos e/ou biológicos, que podem ser de natureza endógena ou exógena e estar associados a doenças dermatológicas específicas, como reacções alérgicas a medicamentos, picadas de insectos e alergénios ambientais, ou a uma doença sistémica, como a tirotoxicose, diabetes mellitus, uremia, anemia por deficiência em ferro, parasitose alucinatória, policitemia rubra vera, colestase e doença de Hodgkin. Embora ocorra geralmente ao nível da pele, o prurido pode também ocorrer em zonas não cutâneas, como as membranas mucosas. Por conseguinte, a causa do prurido pode ser multifactorial ou uma única doença subjacente. A fisiopatologia do prurido envolve os sistemas nervoso central e periférico, bem como a libertação de múltiplas citocinas e mediadores moleculares.

Quando o prurido tem origem na pele, as terminações nervosas sensoriais na junção derme epidérmica são estimuladas. A sensação de prurido é transmitida ao longo de fibras C desmielinizadas dedicadas, distintas das fibras que transmitem a dor e o tacto. A pele irritada transmite a sensação de prurido estimulando nervos locais na espinal medula. A partir daí, o estímulo desloca-se pelo tracto espinotalâmico lateral até ao tálamo, e em seguida até ao córtex cerebral, onde 2 provoca a sensação de prurido (Weldon D. Allergy Asthma Proc 28: 153-62, 2007). O receptor do peptídeo libertador de gastrina (GRPR), a histamina, a substância P e o factor de necrose tumoral α (TNF-α) parecem ter um papel importante na percepção do prurido (Sun YG, et al. Nature 448:700-703, 2007) . Além disso, para o mecanismo nervoso central onde é detectada a comichão, concluiu-se que os peptídeos opióides e o receptor μ estão envolvidos na ocorrência de prurido ou colestase, que responde à naloxona por via intravenosa (Jones EA, et al. JAMA 268:3359-62, 1992). Entretanto, os inibidores de recaptação da serotonina podem melhorar o prurido sistémico induzido por colestase, sugerindo que as vias serotonérgicas também são importantes na percepção da comichão. (Mayo MJ, et al Hepatology 45:666-74, 2007).

Por outro lado, determinou-se que substâncias libertadas localmente, incluindo a histamina, as taquicininas, a serotonina (5- hidroxitriptamina (5-HT)), o interferão (IFN) gama, a interleucina 2 (IL-2) e a IL-4 libertadas a partir de macrófagos, mastócitos ou células T activados no local de origem pruritoceptiva causavam os sintomas e sinais da sensação de comichão, da escoriação, tumefacção, erupção, urticária e/ou escamação (Greaves MW, et al. Lancet 348:938-40, 1996; Inagaki N, et al. Eur J Pharmacol 546:189-96, 2006). 3

Os indivíduos que sofrem de prurido induzido por uma doença dermatológica ou sistémica podem sofrer um agravamento do prurido ao «coçarem» excessivamente a zona afectada, de tal forma que a escoriação excessiva causa irritação, inflamação, formação de lesões e, possivelmente, infecção. Para o mecanismo periférico do prurido, foi definida a função da libertação múltipla de citocinas e mediadores moleculares na formação de sinais e sintomas de prurido na pele ou mucosa afectada. 0 prurido induzido por histaminas envolve receptores Hl (Davies MG, et al. Br J Clin Pharmacol 9:461-65, 1980). Nas terminações nervosas livres cutâneas de neurónios de nociceptores desmielinizados que dão início às sensações de prurido são encontradas taquicininas, em que se incluem os neuropeptídeos substância P, peptídeo relacionado com o gene da calcitonina e peptídeo intestinal vasoactivo. A 5-HT intradérmica pode evocar comichão e escoriação agindo nos receptores da 5-HT2 e da 5-HT3 (Nojima H, et al. J Pharmacol Exp Ther 306:245-52, 2003). Estas observações levaram à utilização de um antagonista dos receptores da 5-HT2 ou da 5-HT3 para tratar o prurido (Schworer H, et al. Lancet 341:1277, 1993). Quando administrada por via subcutânea, a IL-2 provoca uma sensação de comichão localizada intensa em indivíduos atópicos e normais (Wahlgren CF, et al. Arch Dermatol Res 287:572-80, 1995). A inibição da biossíntese da IL-2 por 4 agentes imunossupressores, como a ciclosporina A, alivia o prurido sentido na dermatite atópica (Wahlgren CF, et ai. Acta Derm Venereol (Stockh) 70:323-29, 1990).

Embora os anti-histamínicos sejam amplamente usados para a supressão do prurido, a medida segundo a qual a supressão pode ser atribuída ao efeito secundário de sedação central, em vez do antagonismo histamínico local na pele, permanece pouco clara (Krause L, et ai. BMJ 287:1199-200, 1983). Inúmeros doentes referem prurido persistente mesmo com as terapêuticas anti-histamínicas, os antagonistas dos receptores da 5-HT e/ou os agentes imunossupressores actuais, uma vez que a maior parte é ineficaz no tratamento do prurido crónico e oferece apenas um alívio a curto prazo mediante efeitos secundários. 0 prurido pode ser bastante debilitante para alguns doentes. Por conseguinte, existe uma necessidade contínua de desenvolvimento de métodos e composições novos e melhorados para prevenir, tratar ou melhorar o prurido resultante de uma grande variedade de causas. 0 documento US 4,207,241 revela a utilização de derivados do ácido acético de 2-naftilo enquanto agentes anti-pruriginosos. O fenilbutirato, um ácido gordo de cadeia curta, foi aprovado 5 pela FDA enquanto medicamento órfão para defeitos congénitos com perturbação do ciclo da ureia para tratar a hiperamonemia (Brusilow SW, et al. N Engl J Med 310: 1630-4, 1984). No corpo humano, o fenil-butirato é metabolizado para fenilacetato através de β-oxidação. Subsequentemente, o fenilacetato é sujeito a conjugação com glutamina para formar fenilacetilglutamina, que serve de veiculo para a excreção de resíduos de azoto. Recentemente, também se descobriu que o fenilbutirato tem a capacidade de inibir a deacetilase, aumentar a acetilação em proteínas histonas e não-histonas, remodelar as estruturas de cromatinas e alterar as actividades de múltiplos factores transcricionais, resultando na modulação simultânea e epigenética de inúmeros genes e, consequentemente, no controlo de doenças (Marks PA, et al. J Natl Câncer Inst 92: 1210-6, 2000). Em estudos pré-clínicos e clínicos, os efeitos moduladores de genes do fenilbutirato apresentaram potencial terapêutico em diversos tumores hematológicos e sólidos, doenças genéticas hereditárias, como fibrose cística, anemia de células falsiformes, β-talassemia, adrenoleucodistrofia ligada ao cromossoma X, atrofia muscular espinal e doenças neurodegenerativas, senescência e doenças inflamatórias, como as doenças auto-imunes (Kemp S, et al. Nat Med 4: 1261-8, 1998; et al. Proc Natl Acad Sei USA 102: 11023-8, 2005; Kang HL, et al. Proc Natl Acad Sei USA 99:838-43, 6 2002; Blanchard F, et al. Drug Díscov Today 10; 197-204, 2005) . Adicionalmente, o fenilbutirato também pode agir como supervisor químico para proteger as células normais de lesões por stress oxidativo e prevenir a neurotoxicidade (Yam GH, et al. Invest Ophthalmol Vis Sei 48: 1683-90, 2007).

BREVE RESUMO DO INVENTO O invento oferece uma composição farmacêutica, bem como meios de prevenção, tratamento ou melhoria do prurido associado a doença ou perturbação cutânea, das mucosas ou sistémica, de acordo com as reivindicações anexas. É fornecida uma descrição detalhada nas seguintes formas de execução com referência aos esquemas apensos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS É possível compreender mais integralmente o presente invento lendo a descrição detalhada subsequente e os exemplos com referências aos esquemas em anexo, nos quais: A Figura 1 apresenta um gel de ácido fenilbutírico tópico a 2,5 % que alivia rapidamente o prurido associado a 7 perturbações cutâneas causadas por dermatite induzida por radiação, queimaduras solares, cicatrização pós-operatória, psoriase e dermatite atópica;

As Figuras 2A a 2C mostram os perfis de expressão génica em células humanas Thl-Th2-Th3 com o fenilbutirato a suprimir simultaneamente a indução da expressão de múltiplas citocinas em células T activadas estimuladas com ΡΜΆ e ionomicina. Foram pré-incubadas células T Jurkat com fenilbutirato (1 mM) durante 24 horas e em seguida as mesmas foram estimuladas com ionomicina (1 μΜ) e PMA (10 ng/ml) durante 6 horas. Recorrendo a PCR em tempo real, foi analisada a expressão de um painel de genes associados às células T helper com ou sem estimulação de células T e tratamento com fenilbutirato. Este conjunto inclui genes das citocinas representativos das células Thl, Th2 e Th3, factores transcricionais de codificação de genes que regulam a expressão de citocinas, bem como outros marcadores de linfócitos T CD4+, genes envolvidos na activação de células imunes nas respostas imunes de tipo Thl e Th2, e genes envolvidos na resposta humoral antimicrobiana. Os resultados são a média ± Es de três determinações, expressas em vezes de indução (unidade relativa experimental/unidade relativa de controlo observadas na ausência de qualquer estimulo ou tratamento);

As Figuras 2D1 a 2D2 apresentam os vários genes em células humanas Thl-Th2-Th3. A Figura 3 é um ensaio de imunoprecipitação da cromatina (ChIP) que demonstra os efeitos moduladores do fenilbutirato sobre o estado das histonas que remodelam a estrutura de cromatina e a ligação de factores de transcrição que regulam a expressão genética. Os resultados demonstram que o sódio de 4-fenilbutirato foi eficaz, não apenas na modificação de histonas, mas também na diminuição da ligação de factores transcricionais de NFkB, NFAT e AP-1 para o promotor da IL-2 em células T Jurkat activadas estimuladas por ionomicina e PMA. Foi utilizado um anticorpo Anti-Spl como controlo negativo porque o Spl não se liga ao promotor da IL-2.

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO A descrição seguinte corresponde a um dos modos de realização do invento alvo de maior reflexão. Esta descrição é realizada com vista a ilustrar os princípios gerais do invento e não deve ser interpretada numa perspectiva limitada. É possível considerar o âmbito do invento com maior exactidão consultando as reivindicações apensas. 9 0 invento destina-se de um modo geral à utilização de ácido fenilbutirico para a preparação de uma composição farmacêutica para prevenir, tratar ou melhorar todos os tipos de prurido derivados de várias doenças e perturbações incluindo, entre outras, dermatoses alérgicas, dermatoses pruriginosas, dermatoses vasculares, perturbações das glândulas sebáceas, doenças auto-imunes, artrite reumatóide, lúpus eritematoso sistémico, esclerose sistémica progressiva, sindrome de Sjõgren, dermatomiosite, doença mista do tecido conjuntivo, dermatoses papuloescamosas, dermatoses bacterianas, dermatoses virais, infecções micóticas da pele, dermatoses granulomatosas, dermatoses parasitárias, dermatites esfoliativas, dermatoses bolhosas, dermatoses pigmentadas, dermatoses fotossensiveis, dermatoses causadas por doenças do colagénio, dermatoses devidas a doenças internas, xerose, urticária, dermatite atópica, eczema, vasculite, líquen simples crónico, psoríase, escabiose, pediculose corporal e púbica, esclerose múltipla, tirotoxicose, diabetes, insuficiência renal, uremia, anemia por deficiência de ferro, parasitose alucinatória, policitemia rubra vera, colestase, lesão, queimadura solar, cieiro, acne, picadas de insectos, dermatite ou mucosite induzidas por radioterapia ou quimioterapia, sindrome paraneoplásico, malignidade, cancro da pele primário e cancro da pele metastático. 10

Os segundos compostos para combinação com o ácido fenilbutirico incluem, entre outros, um anti-histaminico, um anti-colinérgico, um medicamento anti-inflamatório não esteróide, um esteróide, um agente anti-oxidante, uma vitamina, um modificador dos leucotrienos, um antagonista da interleucina, um inibidor de mastócitos, um anticorpo anti-IgE, um inibidor selectivo de recaptação da serotonina (ISRS), um antagonista dos receptores da 5-hidroxitriptamina (5-HT), um antibiótico, um inibidor da calcineurina, um inibidor da histona deacetilase, um antagonista dos receptores do peptideo libertador de gastrina, gabapentina e naloxona.

Os compostos do invento podem ser formulados como composições farmacêuticas. Estas composições podem ser administradas por via oral, parentérica, por spray de inalação, por via rectal, vaginal, intradérmica, transdérmica ou tópica em formulações de dosagem unitárias que contêm transportadores, adjuvantes e veículos não tóxicos convencionais e aceitáveis em termos farmacêuticos, conforme necessário. A administração tópica pode também implicar o recurso à administração por via transdérmica, como adesivos transdérmicos ou dispositivos de iontoforese. 0 termo «parentérico», conforme utilizado no presente documento, inclui injecção subcutânea, intravenosa, intramuscular ou intrasternal, ou ainda técnicas de perfusão. 11 A formulação dos medicamentos é debatida, por ex. em Hoover,

John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. , Easton, Penn. (1975), e Liberman, H.A. e Lachman, L., Eds. , Pharmaceutical Dosage Forms, Mareei Decker, Nova Iorque (1980) .

Numa forma de execução, as preparações para o tratamento do prurido cutâneo destinam-se geralmente a oferecer uma condição de aumento da capacidade de controlo cutâneo. Existem categorias reconhecidas de formulações para composições cutâneas, incluindo cremes, pomadas, geles, sprays, loções, loções tónicas, champôs ou espumas, conforme mencionado anteriormente. Os sprays para a pele são geralmente compostos por copolímeros aerossolizados, como polivinilpirrolidona, acetato de vinilo e semelhantes, e podem também funcionar como loção de preparação. As preparações cutâneas em gel são semelhantes aos sprays na sua composição, mas sob a forma de gel e sem álcool, para além de revestirem a pele. A espuma para a pele é uma espuma libertada sob pressão a partir de um recipiente de aerossol. De acordo com o presente invento, o ácido fenilbutirico numa composição tópica de cuidados de pele deve estar preferencialmente presente numa concentração de 0, 00001 a 100, 00 % por peso relativamente ao peso total da composição, ou numa dosagem de 1 a 1000 mg. Uma composição de 12 cuidados tópicos para tratar o prurido de acordo com o presente invento pode ser formulada sob a forma de creme, pomada, gel, emoliente, spray, loção, loção tónica, champô ou espuma hidrofóbicos ou hidrofilicos, conforme referido anteriormente, adequando-se a adição de outros ingredientes apropriados para utilização em composições para cuidados da pele de tipos conhecidos na técnica, sendo que estes outros ingredientes podem incluir vaselina, ceras, lanolina, silicone, lipossomas, óleos vegetais e minerais, plastificantes, fragrâncias, conservantes, um agente de melhoria da penetração, um agente regulador do pH ou outros ingredientes adequados para composições tópicas. Estes ingredientes hidratam a pele, estabilizam o composto activo, aumentam o contacto entre o medicamento e a pele e a concentração local, controlam a libertação progressiva do medicamento e/ou ajudam a diminuir a ruptura da pele, prevenindo a atrofia, a fibrose e a infecção da pele, e promovendo a cicatrização de lesões. 0 invento inclui também meios para o tratamento de prurido cutâneo, conforme descrito no presente documento, que incluem uma composição que inclui, no mínimo, um ácido fenilbutírico juntamente com pelo menos um ou mais outros agentes, incluindo um anti-histamínico, um anti-colinérgico, um medicamento anti- 13 inflamatório não esteróide, um esteróide, um agente anti-oxidante, uma vitamina, um modificador dos leucotrienos, um antagonista da interleucina, um inibidor de mastócitos, um anticorpo anti-IgE, um inibidor selectivo de recaptação da serotonina, um antagonista dos receptores da 5-hidroxitriptamina, um antibiótico, um inibidor da calcineurina, um inibidor da histona deacetilase, gabapentina e naloxona, na qual os ingredientes activos estão presentes sob a forma livre ou sob a forma de um sal aceitável em termos farmacêuticos e, opcionalmente, pelo menos um transportador aceitável em termos farmacêuticos, para utilização sistémica ou tópica simultânea, separada ou sequencial.

Os sais adequados para os componentes a utilizar de acordo com o presente objecto são também aqueles com catiões inorgânicos, por exemplo sais metálicos alcalinos, em particular os sais de sódio, potássio ou amónia, sais com metais alcalino-terrosos, em particular sais de magnésio ou cálcio, bem como sais com catiões bi ou tetravalentes, por exemplo sais de zinco, alumínio ou zircónio. Também são considerados os sais com bases orgânicas, como os sais de diciclohexilamina, metil-D-glucamina; e sais com amino-ácidos, como arginina, lisina, histidina, glutamina, etc. Além disso, os grupos básicos que contêm azoto podem ser quaternizados com agentes como: 14 halogenetos de alquilo inferiores, como cloretos de metilo, etilo, propilo e butilo, brometos, e iodetos; sulfatos de dialquilo, como os sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo e diamilo; halogenetos de cadeia longa, como os cloretos de decilo, laurilo, miristilo e estearilo, brometos e iodetos; halogenetos para asma, como os brometos de benzila ou fenetil, e outros. Podem ser utilizados agentes formadores de sais, por exemplo alquilaminas de baixo peso molecular, como a metilamina, a etilamina ou a trietilamina. São assim obtidos produtos solúveis em água ou óleo ou dispersiveis. A quantidade de ingrediente activo que pode ser combinada com os materiais transportadores para produzir uma forma de dosagem única varia, dependendo do indivíduo e do modo de administração particular. A dosagem necessária varia, de acordo com uma série de factores conhecidos pelos especialistas da técnica, incluindo, entre outros, o(s) composto(s) utilizado(s), as espécies de indivíduos, o tamanho do indivíduo e a gravidade da doença associada ao prurido. Os compostos podem ser administrados numa dose única, em doses múltiplas ao longo de um período de 24 horas ou por perfusão contínua. Quando administrados por perfusão contínua, os compostos podem ser administrados por métodos bem conhecidos na técnica, tais como, entre outros, perfusão intravenosa gota 15 a gota, bomba de perfusão intravenosa, bomba implantável para perfusão ou quaisquer vias tópicas. A duração do tratamento varia, de acordo com diversos factores, por exemplo a duração e a gravidade das doenças cutâneas, das mucosas ou sistémicas que causam o prurido localizado ou generalizado. 0 tratamento do indivíduo apenas com ácido fenilbutírico ou em combinação com outros agentes do invento pode durar até desaparecer o prurido, ou o tratamento pode continuar durante toda a vida do indivíduo.

EXEMPLO

Exemplo 1: Várias composições tópicas - pomada oleaginosa, creme e gel A. Preparaçao de uma pomada oleaginosa de fenilbutirato: 65 g de vaselina branca (Riedel-de Haen) , 15 g de álcool cetílico (Riedel-de Haen), 260 g de parafina mole (Merck), 155 g de parafina líquida (Merck) e 5 g de 4-fenilbutirato (Merck) foram misturados num recipiente e aquecidos a 70° C para formar uma pasta. A pasta foi agitada a 400 rpm durante 1 hora e em seguida arrefecida à temperatura ambiente. 16 B. Preparaçao do creme de fenilbutirato:

Parte I: 70 g de Tefose 63.RTM., 20 g de Superpolyst ate. RTM. , 10 g de Coster 5000.RTM, 15 g de Myriyol 318.RTM., 15 g de Coster 5088.RTM., e 15 g de GMS SE.RTM (todos disponíveis junto de fornecedores locais) foram misturados num recipiente e aquecidos a 70° C.

Parte II: 5, 739 g de 4-f enilbut irato de sódio (Triple Crown

America, Inc.), 0,125 g de metilparabeno (Merck), 0,075 g de propilparabeno (Merck) e 149,061 g de água desionizada foram misturados num recipiente e aquecidos a 70° C. A Parte II foi progressivamente acrescentada à Parte I e agitada continuamente a 400 rpm durante 5 minutos, de modo a formar uma mistura. Foram acrescentados à mistura e agitados durante 5 minutos 2 % de Stabileze QM.RTM (preparado dissolvendo 2 g de Stabileze QM.RTM. em 98 g de água desionizada, aquecendo e agitando a 70° C para formar uma pasta e arrefecendo à temperatura ambiente). O pH da mistura foi ajustado a 5,34 com 0,85 % de ácido fosfórico (Merck) e agitado a 600 rpm durante 20 minutos. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente. 17 C. Preparaçao do gel de fenilbutirato:

Parte I: foram misturados num recipiente e aquecidos a 70°C 10 g de Stabileze QM.RTM e 232,035 g de água desionizada.

Parte II. foram misturados num recipiente e aquecidos a 70 °C 5, 739 g de 4- fenilbutirato de sódio (Triple Crown America, Inc. ) , 0, 125 g de metilparabeno (Merck), 0,075 g de propilparabeno (Merck), 232,035 g de água desionizada e 20 g de NaOH a 10%. A Parte II foi acrescentada progressivamente à Parte I e agitada continuamente a 400 rpm durante 20 minutos, de modo a formar uma mistura. A mistura foi arrefecida à temperatura ambiente. D: Preparação da formulação lipossomal de fenilbutirato:

Nesta formulação lipossomal, foram utilizados fosfatidilcolina de gema de ovo (EPC) e colesterol em concentrações equimolares ou molares diferentes enquanto componentes lipídicos primários. Vários lipossomas localizados com 4-fenilbutirato foram obtidos variando o lípido: proporção de fenilbutirato. Os lipossomas foram preparados por hidratação por fina 18 película, dimensionados por extrusão de membranas e avaliados fisicamente.

Exemplo 2: Ácido fenilbutírico tópico na pela afectada com várias doenças para tratar o prurido.

Foi aplicado um gel de ácido f enilbut írico a 2,5% na pele afectada, seis vezes ao dia durante 1 semana. Cada grupo continha quatro doentes que preencheram um diário com registo de prurido, no qual atribuíam uma classificação à gravidade do prurido numa escala contínua de 0 (sem prurido) a 10 (o pior prurido imaginável) utilizando uma escala visual analógica (EVA) com pontos associados a expressões faciais para guiar a sua selecção (Mayo MJ, et al. Hepatology 45:666-74, 2007).

Com referência à Figura 1, o gel de ácido fenilbutirico a 2,5% aliviou rapidamente a sensação de comichão em 2-10 minutos e melhorou as EVA médias de 7,25 / 7 / 6, 75 / 8 e 7,75 para 2 / 1 / 1,5 / 2,5 e 2,25 em 1-2 dias em doentes com dermatite induzida por radiação, queimadura solar, cicatrização pós-operatória, psoríase ou dermatite atópica, respectivamente. Os sintomas de eritema, urticária, tumefacção e descamação relacionados com o prurido também diminuíram simultaneamente. 19

Exemplo 3: supressão de mediadores moleculares múltiplos associados ao prurido por 4-fenilbutirato de sódio 0 prurido é o problema mais importante em inúmeras doenças de pele alérgicas e inflamatórias. A barreira cutânea (stratum corneum) é um factor importante para determinar a natureza das respostas imunológicas a alergénios que se apresentam na superfície da pele.

As anomalias na função da barreira cutânea podem resultar em respostas de Thl, Th2 e Th2 a agentes infecciosos, químicos, ou antigénios proteicos, que induzem várias citocinas e mediadores moleculares na lesão da pele para causar sintomas e sinais de prurido. 0 perfil de citocinas produzido subsequentemente depende do tipo de estimulação alergénica. Foram identificados subconjuntos distintos de activação das células T helper por força das citocinas que produzem. As células Thl activadas produzem IFN-gama e IL-2. As células Thl regulam as reacções de hipersensibilidade de tipo retardado. As respostas das Thl são promovidas por libertação local da superfamília IL-2 de citocinas. Estas respostas são ainda melhoradas pela produção de IL-15 e IL-18. As células Th2 activadas produzem IL-4 e IL-10. As células Th2 medeiam respostas alérgicas e de anticorpos. As respostas das Th2 são 20 favorecidas pela produção local de IL-4, IL-33 e IL-18 em sinergia. Algumas citocinas, como a IL-3, GM-CSF (CSF2) e TNF-alfa são produzidas por ambos os subconjuntos Thl e Th2. Por outro lado, a IL-β é uma citocina pro-inflamatória segregada por células T activadas para estimular a resposta imunológica ao traumatismo, em especial a queimaduras ou outros danos nos tecidos que causam inflamação. As células Th3 estão associadas a uma regulação negativa da resposta imunológica. A fim de demonstrar se o fenilbutirato consegue suprimir citocinas múltiplas associadas a prurido, mediadores ou marcadores moleculares de só uma vez, analisou-se um conjunto de perfis de expressões genéticas recorrendo a PCR em tempo real (RT2 Profiler ™ PCR Array em células humanas Thl-Th2-Th3: APHS-034, SuperArray Bioscience Corporation).

As células T Jurkat foram tratadas na presença de concentrações crescentes de 4-fenilbutirato, ionomicina e/ou forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) durante 24-72 horas a 37°C. Nas doses de 1 mM de 4-fenilbutirato durante 48 horas, e 1 μΜ de ionomicina com 10 ng/ml de PMA incubadas durante 2 4 horas, não foram encontradas diferenças significativas por citometria de fluxo na proliferação de células, na citotoxicidade e na apoptose entre células de controlo e 21 células tratadas. No entanto, 48 horas após a estimulação com ionomicina (1 μΜ) com PMA (10 ng/ml) , as células T realizavam um ciclo completo e progrediam através das fases S, G2 e M do ciclo celular devido à indução do crescimento de células T e aos factores de sobrevivência (interleucinas), enquanto o pré-tratamento com fenilbutirato (1 mM) durante 24 horas preveniu quase por completo a entrada das células na fase S do ciclo celular.

As células T Jurkat não foram estimuladas ou foram estimuladas com ionomicina (1 μΜ) e PMA (10 ng/ml) durante 6 horas na ausência ou presença de pré-incubação do sódio de 4-fenilbutirato (1 mM) durante 24 horas, o ARN foi extraido e em seguida foi realizada uma RT-PCR para estabelecer o perfil da expressão de 84 genes associados a respostas das células Tgl-Th2-Th3 na tabela de genes (Figura 2) .

Com base nas Figuras 2A a 2D e na Tabela 1, o f enilbut irato suprime por completo ou diminui significativamente a indução de citocinas Thl e genes associados (CCR5, CSF2, IFN-gama, IL12B, IL12RB2, IL18, IL18R1, IL2, IL2RA, IRF1, STAT4, TLR4, TLR6), de citocinas Th2 e genes associados (CCL11, CCL7, CCR2, CCR4, IL13, IL13RA1, IL1R1, IL1R2, IL4R, IL9, IRF4, MAF), de marcadores de activação de células T (BCL3, CD69, IL6, IL6R, 22 JAK2, LAT, TNFRSF9), da resposta imunológica de tipo T helper 1 (IL12B, IL18, IRF4, SFTPD, TLR4, TLR6), da resposta imunológica de tipo T helper 2 (IL18, IL4R, IRF4) e da resposta humoral anti-microbiana (CCL7, CCR2, IL12B, IL13, SFTPD) na activação de células T Jurkat induzidas por PMA/ionomicina. Por outro lado, o fenilbutirato aumenta a expressão do S0CS1, um supressor da sinalização de citocinas como resposta Th3, envolvido na regulação negativa das citocinas. A IL-1 e a IL-6 são citocinas pro-inflamatórias. A ligação de antigénios ao receptor de células T estimula a secreção de IL- 2 e a expressão dos receptores da IL-2. A interacção entre a IL-2 e a IL-2R estimula então o crescimento, a diferenciação e a sobrevivência de células T citotóxicas seleccionadas pelos antigénios. A IL-4 estimula a proliferação de células B e células T activadas, bem como a diferenciação de células CD4+T em células Th2, e induz a permuta de classe das células B para lgE. A IL-9 obtém várias funções nas células linfóides e nas linhagens de mastócitos, e pensa-se que desempenha um papel na asma. A IL-12 é conhecida como factor de estimulação das células T na resposta à estimulação antigénica, o que pode estimular o crescimento e a função das células T. A IL-13 segregada por muitos tipos de células, mas em particular por 23 células Th2, é um mediador importante da inflamação alérgica. A IL-18 trabalha em conjunto com a IL-12 para induzir a imunidade mediada por células após uma infecção com produtos microbianos, como os lipopolissacarídeos. Considerados em conjunto, os efeitos do fenilbutirato na inibição das complexas e correlacionadas vias da rede de sinalização de IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-9, IL-12, IL-13 e IL-18, e no aumento da expressão do S0CS1 (supressor da sinalização das citocinas) estão correlacionados com a recente descoberta no presente invento de que o fenilbutirato tem a capacidade de melhorar o prurido em alguns pruridos alérgicos e inflamatórios associados à dermatite.

Tabela 1. No mínimo uma diferença de 2 vezes na indução por estimulação de células T quando comparado com efeitos de controlo e efeitos supressores do fenilbutirato

Citocinas Thl e genes Estimulação mitogénica Fenilbutirato + associados estimulação mitogénica CCR5 2,68 0,98 CSF2 229,13 88,77 IFN-gama 126,24 99,18 IL12B 2,68 0,98 IL12RB2 2,68 0,98 IL18 2,68 0,98 IL18R1 19, 97 0,98 IL2 831,75 304,86 IL2RA 151,17 64, 98 IRF1 5, 86 1,7 SOCS1 4, 82 8,59 STAT4 7, 89 3,32 TLR4 2,68 0,98 TLR6 29,04 10, 43 Citocinas Th2 e genes associados CCL11 2,68 0,98 CCL7 2,68 1,04 CCR2 4,20 0,84 CCR4 7, 41 1,93 IL13 2,68 0,98 IL13RA1 2,68 0,98 IL1R1 11,31 3,92 IL1R2 2,25 0,82 IL4R 42,81 9,53 IL9 2,68 0,98 IRF 4 26, 17 16,50 MAF 2,68 0,98 Outros marcadores de activação de células T BCL3 58,08 19,73 CD69 87, 43 48,57 IL6 2,68 0,98 IL6R 2,68 0,98 JAK2 4, 72 2,27 LAT 3,12 1,57 SFTPD 2,68 0,98 TNFRSF9 89,26 13,01 A indução da expressão de citocinas múltiplas depende da activação coordenada de factores de transcrição, incluindo principalmente NFkB, NF-AT e AP-1 (Sancho R, et al. J Immunol 172:2341-51, 2004: Li-Weber M, et al. Eur J Immunol 34 :1111-18, 2004). Dado que a indução de citocinas é regulada 25 principalmente ao nivel transcricional, foi realizada a análise da imunoprecipitação de cromatina (ChIP) em células T Jurkat para determinar a ligação de NFkB, NF-AT e AP-1 ao promotor da IL-2. As células T Jurkat não foram estimuladas ou foram estimuladas com ionomicina (1 μΜ) e PMA (10 ng/ml) durante 6 horas na ausência ou presença de pré-incubação de sódio de 4-fenilbutirato (1 mM) durante 24 horas, tendo em seguida sido realizada a reticulação com formaldeído entre proteína, ADN e ChIP utilizando anticorpos anti-NFKB, NF-AT, AP-1 ou acetilo H3 (Santa Cruz) . Os iniciadores de PCR foram concebidos para amplificar o promotor da IL-2 humana: F 5'-GAGTTACTTTTGTATCCCCACCCCC (-317 a -292 no promotor da IL-2), R 5'-CCTGTACATTGTGGCAGGAGTTGAGG (+33 a 58). As amplificações de PCR utilizaram um protocolo de três passos com temperatura desnaturante de 90° C (30 s) , temperatura de hibridização do iniciador de 59° C (45 s) e temperatura de reacção enzimática de 72° C (30 s) durante 35 ciclos. Com base na Figura 3, o fenilbutirato afecta a estrutura de cromatina alterando o estado do acetilo H3 e diminui a ligação do ADN do NFkB, NF-AT e AP-1 ao promotor da 11-2, sugerindo assim que a supressão do fenilbutirato na expressão das citocinas durante a activação de células T pode ser mediada diminuindo a ligação de factores transcricionais aos promotores.

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Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES Ia - Utilização de uma quantidade eficaz de ácido fenilbutirico e/ou de um sal aceitável em termos farmacêuticos e/ou um respectivo solvato para a preparação de uma composição farmacêutica para a prevenção, o tratamento ou a melhoria do prurido associado a uma doença ou perturbação cutânea, sistémica ou das mucosas, sendo que a composição farmacêutica inclui ainda opcionalmente um transportador aceitável em termos farmacêuticos. 2a - Utilização, segundo a reivindicação 1, na qual a doença ou perturbação é seleccionada a partir de um grupo composto por dermatoses alérgicas, dermatoses pruriginosas, dermatoses vasculares, perturbações das glândulas sebáceas, perturbações auto-imunes, artrite reumatóide, lúpus eritematoso sistémico, esclerose sistémica progressiva, sindrome de Sjõgren, dermatomiosite, doença dos tecidos conjuntivos, dermatoses pápulo-escamosas, dermatoses bacterianas, dermatoses virais, infecções micóticas da pele, dermatoses granulomatosas, dermatoses parasitárias da pele, dermatites esfoliativas, dermatoses bolhosas, dermatoses pigmentadas, dermatoses fotossensiveis, dermatoses causadas por doenças do colagénio, dermatoses devidas a doenças internas, xerose, urticária, 1 dermatite atópica, eczema, vasculite, líquen simples crónico, psoriase, escabiose, pediculose corporal e púbica, esclerose múltipla, tirotoxicose, diabetes, insuficiência renal, uremia, anemia por deficiência de ferro, colestase, parasitose alucinatória, policitemia rubra vera, lesão, queimadura solar, cieiro, acne, picadas de insectos, dermatite ou mucosite induzidas por radioterapia ou quimioterapia, sindrome paraneoplásico, malignidade, cancro da pele primário e cancro da pele metastático. 3a - Utilização segundo uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada por o ácido fenilbutírico estar presente numa quantidade de entre cerca de 0, 00001 % e cerca de 100,00% por peso da formulação. 4a - Utilização segundo uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada por a composição farmacêutica constituir um creme, um gel, uma loção, uma pasta, uma pomada, um emoliente, um lipossoma, uma nanoesfera, uma loção tónica, um colutório, uma solução bucal, um champô, uma espuma, um spray, uma compressa, uma cápsula, um comprimido, um pó, um granulado, uma solução, uma suspensão, um adesivo ou um agente oclusivo de condicionamento da pele. 5a — Utilização segundo uma ou mais das reivindicações 2 anteriores caracterizada por a composição farmacêutica incluir um agente de melhoria da penetração, ou um agente de regulação do pH para oferecer uma formulação com um pH de 3,0 a 13,0. 6a - Utilização segundo uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada por a composição farmacêutica ser administrada em combinação com um segundo agente que inclui um anti-histamínico, um anti-colinérgico, um medicamento anti-inflamatório não esteróide, um esteróide, um agente anti-oxidante, uma vitamina, um modificador dos leucotrienos, um antagonista da interleucina, um inibidor de mastócitos, um anticorpo anti-IgE, um inibidor selectivo de recaptação da serotonina (ISRS), um antagonista dos receptores da 5-hidroxitriptamina (5-HT), um antibiótico, um inibidor da calcineurina, um inibidor da histona deacetilase, um antagonista dos receptores do peptídeo libertador de gastrina, gabapentina e naloxona, ou uma combinação dos mesmos. 7a — Utilização segundo uma ou mais das reivindicações anteriores, caracterizada por a composição farmacêutica e o segundo agente serem simultânea ou sequencialmente administrados de forma sistémica ou tópica. Lisboa, 22 de Novembro de 2011 3