PT1622619E

PT1622619E - Combinações para o tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese

Info

Publication number: PT1622619E
Application number: PT47293667T
Authority: PT
Inventors: Anke Baum; Flavio Solca; Frank Hilberg; Gerd Munzert; Martin Friedrich Stefanic; Jacobus C A Van Meel
Original assignee: Boehringer Ingelheim Int
Priority date: 2003-04-29
Filing date: 2004-04-24
Publication date: 2013-10-03
Also published as: TWI378795B; EP1622619A2; AU2010236075B2; RS52143B; MY141119A; EP2826480A1; EA011888B1; KR20060008945A; TW200509931A; KR101150315B1; JP2010202658A; AU2004233576A1; NO20055605L; NZ543774A; EP1622619B1; AU2010236075A1; ME00306B; MEP46908A; CN1780627A; EA021757B1

Description

DESCRIÇÃO

"COMBINAÇÕES PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS QUE ENVOLVEM PROLIFERAÇÃO CELULAR, MIGRAÇÃO OU APOPTOSE DE CÉLULAS DE MIELOMA OU ANGIOGÉNESE"

Campo da invenção

Esta invenção refere-se ao tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese, que compreende a co-administração a uma pessoa com necessidade de tal tratamento e/ou o co-tratamento de uma pessoa com necessidade de tal tratamento, com quantidades eficazes de: (i) um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado; e (ii) pelo menos, um agente terapêutico natural, semi-sintético ou sintético, ou quimioterapêutico adicional; e/ou (iii) radioterapia ou radioimunoterapia.

Esta invenção refere-se também a composições farmacêuticas adequadas compreendendo quantidades eficazes de: (i) um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado; e (ii) pelo menos, um agente terapêutico natural, semi-sintético ou sintético, ou quimioterapêutico adicional; 1 e opcionalmente adaptadas para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, como uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese e, especialmente, para inibir o crescimento, sobrevivência e metástase tumoral.

Esta invenção refere-se também à utilização combinada de quantidades eficazes de: (i) um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado; e (ii) pelo menos, um agente terapêutico natural, semi-sintético ou sintético, ou quimioterapêutico adicional; para o fabrico de uma preparação farmacêutica combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese e, especialmente, para inibir o crescimento, sobrevivência e metástase tumoral, opcionalmente em combinação com um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia.

Esta invenção refere-se também à utilização de uma quantidade eficaz de um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado, para o fabrico de uma composição farmacêutica adaptada para um co-tratamento simultâneo, separado ou sequencial com radioterapia ou radioimunoterapia de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese e, especialmente, para inibir o crescimento, sobrevivência e metástase tumoral. 2

Antecedentes da invenção

Na última década, a actividade biológica de diversos tipos e sub-tipos da família do receptor de proteína tirosina-cinase foi caracterizada, tal como, por exemplo, o receptor do factor de crescimento epidérmico EGFR e os seus sub-tipos ErbB-2 e ErbB-4 (Brignola et al., Journal of Biological Chemistry, Vol. 277, N° 2, pp. 1576-1585, 2002) ou os receptores do factor de crescimento endotelial vascular VEGFR 1-3 conjuntamente com o seu ligando VEGF e os seus quatros sub-tipos conhecidos até à data (Jung et al., European Journal of Câncer, Vol. 38, pp. 1133-1140, 2002). Estudos semelhantes descritos em relatórios anteriores mostram que a sobreexpressão de alguns destes receptores está implicada em múltiplas formas de cancro. Por exemplo, os estudos proporcionaram evidências de que o factor de crescimento epidérmico EGF actua como um factor de crescimento em tumores e que o factor de crescimento endotelial vascular VEGF é um dos mediadores mais comuns de angiogénese tumoral, que é essencial para o crescimento e metástase de tumores sólidos. Têm sido assim avaliados e estão ainda a ser avaliados inibidores dos receptores para a terapia do cancro (ver, por exemplo, o artigo de Cerrington et al. In Advances in Câncer Research, Academic Press 2000, pp. 1-38).

Estudos recentes sugeriram também a combinação de diversos antagonistas de receptor conjuntamente ou numa combinação adicional com um agente quimioterapêutico ou radiação. Por exemplo, o documento WO 02/070008 sugere a combinação de um antagonista dirigido especificamente contra o receptor de VEGF com um antagonista dirigido especificamente contra o receptor de EGF, opcionalmente, conjuntamente com radiação ou um agente quimioterapêutico, para a inibição do crescimento tumoral. Como exemplo de antagonistas específicos adequados, o documento 1 WO 02/070008 divulga anticorpos monoclonais dirigidos contra o receptor de VEGF e anticorpos monoclonais dirigidos contra o receptor de EGF.

De modo semelhante, o documento WO 03/011837 divulga composições compreendendo inibidores de tirosina-cinase e um segundo composto terapêutico e o documento WO 03/022815 divulga derivados de indolinona como inibidores de tirosina-cinase que actuam em receptores de tirosina-cinases, assim como não receptores, e podem ser combinados com agentes quimioterapêuticos adicionais e radioterapia.

Assim, um grande número de antagonistas de receptor de proteina tirosina-cinase está actualmente em desenvolvimento clinico para o tratamento de cancro (ver, por exemplo, Expert Opinion Review of Laid & Cherrington in Expert Opin. Invest. Drugs, Vol. 12, N° 1, pp. 51-64, 2003). Contudo, a prova da eficácia destas substâncias, utilizadas isoladamente ou com outras terapias de cancro, no tratamento de doenças oncológicas, não foi ainda realizada, por causa de uma falta de beneficio adicional relativamente à terapia convencional ou por causa da descoberta de efeitos secundários inaceitáveis.

Por exemplo, foi recentemente publicado que um inibidor de angiogénese que foi já clinicamente testado, também conjuntamente com quimioterapia, nomeadamente o inibidor com nome de código SU5416, desenvolvido pela Pharmacia para o tratamento de cancro, foi associado com efeitos secundários perturbadores, nomeadamente eventos tromboembólicos (Ken Garber e Ann Arbor, Nature Biotechnology, Vol. 20, pp. 1067-1068, Nov. 2002). 2

Para o tratamento de doenças da natureza oncológica, foi já sugerido um grande número de agentes guimioterapêuticos gue podem ser utilizados como monoterapia (tratamento com um agente) ou como terapia de combinação (tratamento simultâneo, separado ou seguencial com mais de um agente) e/ou gue podem ser combinados com radioterapia ou radioimunoterapia. A este respeito, o agente quimioterapêutico significa um composto químico natural, semi-sintético ou sintético que, isoladamente ou com activação adicional, por exemplo, com radiações no caso de radioimunoterapia, inibe ou mata células em crescimento e que pode ser utilizado ou está aprovado para utilização no tratamento de doenças da natureza oncológica que são geralmente também denominadas como cancros. Na literatura, estes agentes são geralmente classificados de acordo com seu mecanismo de acção. A este respeito, pode ser feita referência, por exemplo, à classificação feita em "Câncer Chemotherapeutic Agents", American Chemical Society, 1995, W.O. Foye Ed.

Assim, no âmbito da presente invenção, as seguintes classes de agentes quimioterapêuticos são especialmente de interesse, embora não representem uma limitação:

• Pequenas moléculas sintéticas antagonistas do receptor do VEGF • Pequenas moléculas sintéticas antagonistas do receptor do factor de crescimento (GF) • Inibidores do receptor de EGF e/ou do receptor de VEGF e/ou dos receptores de integrina ou todos os outros receptores da proteína tirosina-cinase que não estão classificados como pequenas moléculas sintéticas • Inibidores dirigidos ao receptor de EGF e/ou ao receptor de VEGF e/ou aos receptores de integrina ou quaisquer outros 3 receptores da proteína tirosina-cinase que são proteínas de fusão • Compostos que interagem com ácidos nucleicos e que são classificados como agentes alquilantes ou compostos de platina • Compostos que interagem com ácidos nucleicos e que são

classificados como antraciclinas, como intercalantes de ADN ou como agentes de reticulação de ADN • Antimetabolitos • Antibióticos de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética do tipo bleomicina (antibióticos do grupo BLM) • Inibidores de enzimas transcritoras de ADN, especialmente

inibidores da topoisomerase I ou topoisomerase II • Agentes modificadores de cromatina • Inibidores de mitose, agentes antimitóticos ou inibidores do ciclo celular • Inibidores de proteossoma • Enzimas • Hormonas, antagonistas de hormonas ou inibidores de hormonas ou inibidores da biossintese de esteróides • Esteróides • Citocinas, citotoxinas selectivas a hipoxia, inibidores de citocinas, linfocinas, anticorpos dirigidos contra citocinas ou estratégias de indução de tolerância oral e parentérica • Agentes de apoio • Sensibilizadores e protectores químicos de radiação • Fármacos activados fotoquimicamente • poli- ou oligonucleótidos sintéticos • Outros agentes terapêuticos de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética ou quimioterapêuticos, tais como antibióticos citotóxicos, anticorpos que se dirigem para moléculas de superfície de célula cancerosas, inibidores de 4 metaloproteinases, inibidores de oncogenes, inibidores de transcrição genica ou tradução de ARN ou expressão proteica, ou complexos de elementos de terras raras

Classes adicionais de compostos, até agora não classificadas como agentes quimioterapêuticos, que são agentes terapêuticos de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, tais como fármacos não esteróides anti-inflamatórios, especialmente os inibidores da ciclooxigenase (COX) e, mais especificamente, os inibidores da COX-2, são também de interesse para terapias de combinação.

Mesmo se o conceito de combinar diversos agentes terapêuticos ou terapias tenha já sido sugerido e embora várias terapias de combinação estejam sob investigação e em ensaios clinicos, existe ainda uma necessidade para novos e eficientes agentes terapêuticos para o tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese e existe ainda uma necessidade para desenvolver mais combinações que podem mostrar eficácia aumentada e efeitos secundários reduzidos.

Estas doenças podem também ser de natureza oncológica, que inclui todos os tipos de neoplasias malignas ou cancros, ou de natureza não oncológica, tais como retinopatia diabética, artrite reumatóide ou psoríase.

Sumário da invenção

Verificou-se agora que a co-administração a uma pessoa com necessidade de tal tratamento e/ou o co-tratamento de uma pessoa com necessidade de tal tratamento com quantidades eficazes de 5 (i) um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado, e (ii) pelo menos um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou (iii) radioterapia ou radioimunoterapia, proporciona vantagens inesperadas no tratamento de tumores sólidos, a uma pessoa com necessidade de tal tratamento, com elevada eficácia, em comparação com a administração de qualquer destas substâncias isoladamente e/ou o tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia.

Além disso, verificou-se que o tratamento de combinação de acordo com a presente invenção é especialmente eficiente para inibir o crescimento, sobrevivência e metástase tumoral. 0 antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase é seleccionado de compostos específicos.

Entre os agentes terapêuticos de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética ou quimioterapêuticos, são preferidos compostos específicos. A doença tratada de acordo com a presente invenção é seleccionada de tumores sólidos, tais como cancros urogenitais (tais como cancro da próstata, cancros da célula renal, cancros da bexiga), cancros ginecológicos (tais como cancros do ovário, cancros do colo do útero, cancros do endométrio), cancro do pulmão, cancros gastrointestinais (tais como cancros colorrectais, cancro pancreático, cancro gástrico, cancros esofágicos, cancros hepatocelulares, cancros colangiocelulares), cancro da cabeça e da garganta, mesotelioma maligno, cancro da 6 mama, melanoma maligno ou sarcomas ósseos e de tecido mole. Numa forma de realização preferida, a doença é cancro da próstata sensível a hormona ou refractário a hormona, carcinoma do ovário ou cancro do pulmão de pequena célula.

Assim, a eficácia benéfica dos métodos de acordo com a invenção é baseada principalmente nos efeitos aditivos e sinérgicos do tratamento combinado, ou a uma tolerabilidade melhorada do tratamento pelo doente devido, por exemplo, à administração de doses mais baixos dos agentes terapêuticos envolvidos.

As vantagens inesperadas mencionadas acima podem também ser devidas a uma indução mais eficiente da apoptose pelo agente quimioterapêutico, assim que o sinal de sobrevivência constitutivamente activo do receptor de proteína tirosina-cinase, mediado pelo tumor, é inibido pelo antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado.

No caso da utilização de um antagonista de receptores da proteína tirosina-cinase ou de um inibidor de outros mediadores envolvidos na angiogénese, tais como, por exemplo, os factores de crescimento endotelial vascular (VEGF), os factores de permeabilidade vascular, o factor de crescimento do fibroblasto básico (bFGF), interleucina-6 (IL-6) ou interleucina-8 (IL-8), o factor de crescimento epidérmico (EGF) ou o factor de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), uma das vantagens do método e da composição de acordo com a presente invenção encontra-se no direccionamento do tratamento à vasculatura associada ao tumor em vez de ou conjuntamente com o próprio tumor, de modo a cortar a fonte de energia das células cancerosas. 7

Uma vantagem adicional é que uma indução ou restabelecimento da sensibilidade para o agente quimioterapêutico é esperada nos doentes tratados com a combinação de agentes quimioterapêuticos para os quais a sensibilidade é perdida no decurso do tratamento e de um antagonista de VEGFR. Isto é especialmente o caso de doentes que sofrem de mieloma múltiplo refractário e são tratados com esteróides como agente quimioterapêutico. Um tratamento de combinação com esteróides e um antagonista de VEGFR é esperado restabelecer a sensibilidade a esteróide de doentes que sofrem de mieloma múltiplo refractário.

De acordo com a presente invenção, uma preparação combinada sinérgica pretende compreender uma quantidade do antagonista do receptor de proteina tirosina-cinase seleccionado, ou de um seu polimorfo, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável deste composto activo, e uma quantidade do agente terapêutico, de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou de radioterapia ou radioimunoterapia, em que a quantidade dos agentes terapêuticos individuais isoladamente é insuficiente para conseguir o efeito terapêutico conseguido pela administração da combinação dos referidos agentes terapêuticos e em que os efeitos combinados das quantidades dos agentes terapêuticos são maiores do que a soma dos efeitos terapêuticos atingíveis com as quantidades dos agentes terapêuticos individuais.

Vista de um aspecto diferente, a presente invenção também se refere a uma combinação farmacêutica para o tratamento de tumores sólidos compreendendo um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase específico seleccionado e um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou uma radioterapia ou radioimunoterapia, como uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento das referidas doenças, opcionalmente, conjuntamente com um ou mais diluentes e/ou veículos farmaceuticamente aceitáveis.

Vista de um aspecto diferente, a presente invenção também se refere a um kit de preparação farmacêutica de combinação para o tratamento de tumores sólidos, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado, ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável, e uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, caracterizado por o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase estar compreendido dentro de um primeiro compartimento e o agente terapêutico natural, semi-sintético ou sintético, ou quimioterapêutico adicional estar compreendido dentro de um segundo compartimento, de modo que a administração a um doente com a sua necessidade pode ser simultânea, separada ou sequencial, estando o referido kit de preparação de combinação ainda opcionalmente adaptado para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia.

Numa forma de realização de acordo com a presente invenção, em cada compartimento do kit de preparação de combinação farmacêutica, cada substância activa é formulada para uma administração oral.

Vista de um outro aspecto, a presente invenção também proporciona assim a utilização de um antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado em combinação com um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou adaptado para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, para o 9 fabrico de uma preparação farmacêutica de combinação para o tratamento de doenças ou indicações aqui mencionadas anteriormente.

Dentro do significado da presente invenção, as quantidades eficazes de agentes terapêuticos e/ou de um tratamento terapêutico por radioterapia ou radioimunoterapia significa quantidades dos agentes e/ou do tratamento por radioterapia ou radioimunoterapia que são eficazes para atingir um efeito terapêutico quando utilizados em combinação.

Descrição detalhada da invenção • As doenças

Como aqui já anteriormente mencionado, as doenças que podem ser tratadas pela combinação de acordo com a presente invenção são todo o tipo de tumores sólidos, tais como cancros urogenitais (tais como cancro da próstata, cancros da célula renal, cancros da bexiga), cancros ginecológicos (tais como cancros do ovário, cancros do colo do útero, cancros do endométrio), cancro do pulmão, cancros gastrointestinais (tais como cancros colorrectais, cancro pancreático, cancro gástrico, cancros esofágicos, cancros hepatocelulares, cancros colangiocelulares), cancro da cabeça e da garganta, mesotelioma maligno, cancro da mama, melanoma maligno ou sarcomas ósseos e do tecido mole. 0 tratamento de combinação de acordo com a presente invenção é especialmente eficiente para inibir o crescimento, sobrevivência e metástase tumoral. 10

De interesse especial para a o tratamento de combinação é o tratamento do cancro da próstata sensível a hormona ou refractário a hormona, carcinoma do ovário, cancro do pulmão da célula não pequena, cancro do pulmão da célula pequena ou mieloma múltiplo. 0 antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado

De acordo com a presente invenção, o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado é, de um modo preferido, um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFR α e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR, c-Kit, e ainda um antagonista de um dos membros da família da src-tirosina-cinase e, especialmente, src, lck, lyn ou fyn, ou um seu polimorfo, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável. 0 antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado pode ainda ser um antagonista de, pelo menos, um complexo de uma cinase dependente de ciclina com a sua ciclina específica ou com uma ciclina virai, tais como CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8 e CDK9 com as suas ciclinas específicas A, Bl, B2, C, Dl, D2, D3, E, F, Gl, G2, Η, I e K, e/ou ainda um inibidor da secreção de IL-6 paracrina.

Numa forma de realização adicional de acordo com a presente invenção, a combinação das substâncias activas é pretendida para o tratamento de doenças oncológicas que envolvem angiogénese. A angiogénese tumoral desempenha um papel importante na progressão de malignidades humanas. Pensa-se que a inibição deste processo seja um ponto excelente de intervenção 11 terapêutica no tratamento de cancro. Foi demonstrado que a transdução de sinal através do receptor do factor de crescimento endotelial vascular 2 (VEGFR-2) desempenha um papel essencial na proliferação, sobrevivência e migração de células endoteliais na angiogénese tumoral. A este respeito, foram desenvolvidos antagonistas de baixo peso molecular potentes e oralmente disponíveis de VEGFR-2 como novos compostos que são úteis para o tratamento de doenças que envolvem proliferação celular, migração ou apoptose de células de mieloma ou angiogénese e, especialmente, como novos agentes terapêuticos de cancro. Estes antagonistas são assim inibidores da actividade do receptor. Alguns destes antagonistas são também antagonistas de mais receptores de factores de crescimento, tais como VEGFR-3, PDGFR Oí e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR, c-Kit e alguns também antagonistas dos membros da família da src-tirosina cinase src, lck, lyn e fyn.

Estes compostos são divulgados nos documentos WO 02/36564, WO 99/52869, WO 00/18734, WO 00/73297, WO 01/27080, WO 01/27081 e WO 01/32651. O seguinte composto é particularmente representativo e é um inibidor combinado de VEGFR-2 e lck utilizado como o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado dentro do significado da presente invenção. (T) (Z)—3—(1—(4—(N—((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)- N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona; assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. 12 0 composto (Τ) está descrito no documento WO 01/27081.

Especialmente representativo é assim o antagonista de baixo peso molecular potente e oralmente disponível de VEGFR 1 a 3, PDGFRa e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR e c-Kit, que é ainda um antagonista dos membros da família da src-torosina-cinase, especialmente, src, lck, lyn e fyn, ainda um antagonista do complexo das cinases dependentes de ciclina com as suas ciclinas específicas ou com uma ciclina virai e ainda um inibidor da secreção de IL-6 paracrina, divulgado, por exemplo, no documento WO 01/27081, como exemplificado no composto número 473, assim como os seus sais farmaceuticamente aceitáveis. Este composto, referido como (T) acima, é 3 — Z—[1—(4 — (N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona.

Quando comparado a outros compostos, este composto é ainda particularmente preferido devido à sua elevada potência como inibidor e a seu melhor perfil toxicológico. É particularmente preferido o sal de monoetanossulfonato deste composto, nomeadamente o sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[l-(4-(N-((4-metil-piperazin-1-i1)-metilcarbonil)-N-metil-amino) -anilina)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, divulgado, por exemplo, no Pedido de Patente Alemã DE 10233500.1 não publicado, documento PCT/03/07822 não publicado e Pedido de Patente U.S. 10/623971 não publicado.

De acordo com o que é divulgado no documento DE 10233500.1, documento PCT/03/07822 não publicado e no Pedido de Patente U.S. 10/623971 não publicado, o sal de monoetanossulfonato de 3 — Z —[1 — (4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)- 13 anilina)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona têm a seguinte estrutura química:

'3 0 Γόη o

Composto MES(T) (Sal de monoetanossulfonato do composto (T))

Este composto pode ser obtido selectivamente através de uma escolha adequada de condições de fabrico, de um modo preferido, na sua forma cristalina de hemi-hidrato.

Este composto é caracterizado por um ponto de fusão de T = 305 ± 5 °C (determinado por DSC = Calorimetria Diferencial de Varrimento, utilizando um instrumento Mettler-Toledo DSC82; velocidade de aquecimento: 10 K/min).

Para o fabrico do sal de monoetanossulfonato de 3 — Z—[1—(4 — (N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, pode ser utilizado um processo de acordo com o seguinte. O material inicial utilizado para preparar o sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)- 14 metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona pode ser a base livre 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona que pode ser obtida de acordo com um método conhecido da técnica anterior e descrito, por exemplo, no documento WO 01/27081.

Assim, num primeiro passo e de acordo com o que é descrito no documento WO 01/27081, a 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il) -metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona é preparada como se segue. 10,5 g (30,0 mmol) de l-acetil-3-(1-etoxi-l-fenilmetileno)-6-metoxicarbonil-2-indolinona (preparada como descrito no documento WO 01/27081) e 8,60 g (33,0 mmol) N-[(4-metil-piperazin-l-il ) -metilcarbonil]-N-metil-p-fenilendiamina (preparada como descrito no documento WO 01/27081) são dissolvidas em 80 mL de dimetilformamida e misturadas durante 1 hora a 80 °C. Após arrefecer, são adicionados 6,50 mL de piperidina e o todo é misturado durante mais 2 horas à temperatura ambiente. É adicionada água, o liquido sobre o precipitado resultante é aspirado e o precipitado é lavado outra vez com uma pequena quantidade de água. O residuo é suspenso em 200 mL de metanol, o liquido é aspirado e o residuo remanescente lavado com água fria e éter dietilico. O produto resultante é seco sob vácuo a 110 °C.

Produto recuperado: 12,4 g (77% do valor teórico)

Espectroscopia de IV: 1610, 1655, 1711 cirT1 TSmp. = 253 °C Fórmula molecular: C31H33N5O4

Espectrometria de massa-electrospray: m/z = 540 [M+H]+

Análise de elementos: 15 calculado C 68,99 H 6,16 N 12,98 encontrado C 68,32 H 6,29 N 12,85

Numa segundo passo e de acordo com o que o que é divulgado no documento DE 10233500.1, o sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilina)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona será obtido como se segue. 605 g (1,12 mol) de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona são suspensos em 9 litros de metanol e aquecidos a 50 °C. São adicionados 183,7 g (1,121 mol) de uma solução aquosa a 70% de etanossulfonato. A solução resultante é arrefecida até 40 °C e misturada com 4,5 litros de éter ter-butilmetilico. Ocorre cristalização após alguns minutos. De modo a se obter uma precipitação completa, o todo é misturado durante 16 horas à temperatura ambiente. Após arrefecer até uma temperatura de 10 °C, o liquido é aspirado, o precipitado é lavado com 2 litros de éter ter-butilmetilico e seco sob vácuo a 40 °C.

Produto recuperado: 638 g (87,6% do valor teórico) TSmp. = 305 ± 5 °C (DSC 10 k/min)

Pureza (medida por HPLC): 99,4%

Conteúdo de água: 1,0 bis 2,0% (KF) O sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il ) -metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona pode se dissolvido muito facilmente em agentes de solubilização fisiologicamente aceitáveis. 16

Além disso, o composto MES(T) está biodisponível oralmente em murganhos. 0 sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona inibe a cinase VEGFR-2 humana (huVEGFR-2) com uma IC50 de 21 nM, a cinase VEGFR-2 de murino (huVEGFR-2) com uma IC50 de 13 nM e a proliferação de células endoteliais estimuladas pelo VEGF (HUVEC: IC50 = 9 nM, HSMEC: IC50 = 12 nM) .

Além disso, FGFR-1 e PDGFRa, dois membros da família do domínio de cinase dividido de receptores importantes na sinalização angiogénica, são, além disso, inibidos por este composto com IC50 de 6 9 nM e 59 nM, respectivamente. 0 composto MES(T) é assim altamente selectivo quando testado contra um painel de numerosas cinases diferentes, como mostrado na seguinte tabela I.

Tabela I

Cinase IC50 [nM] huVEGFR-2 21 muVEGFR-2 13 VEGFR-3 13 InsR > 4000 IGF1R > 1000 EGFR > 50000 HER2 > 50000 FGFR1 69 FGFR3 137 17 (continuação)

Cinase IC50 [nM] PDGFRa 59 CDK1 > 10000 CDK2 > 10000 CDK4 > 10000 Lck 16 Lyn 195 Src 156 E também digno de nota que este antagonista especifico mostra uma inibição de longa duração do receptor VEGFR-2. Ao nivel molecular e celular, uma curta exposição do composto MES(T) a células (e. g., células endoteliais) é suficiente para inibir a activação da própria cinase de receptor e de moléculas de sinalização a jusante (e. g., a MAP cinase, MAPK) , assim como a proliferação celular durante pelo menos 32 h.

Os resultados da seguinte experiência evidenciam este efeito de inibição de longa duração. De modo a determinar a duração da inibição induzida por MES(T) no receptor, foram realizadas experiências de eliminação. As células HUVEC e NIH 3T3 KDR foram expostas a MES(T) durante um período de tempo limitado, o MES(T) foi removido por lavagem e a proliferação celular (HUVEC) ou a activação/fosforilação de VEGFR-2 foram analisados após vários períodos de tempo. Como mostrado na FIGURA 1, a autofosforilação de VEGFR-2 é bloqueada durante, pelo menos, 32 h após uma exposição de 1 hora com 50 nM de MES(T) . Após 8 h, 24 h e 32 h sem MES(T), as células foram outra vez estimuladas com VEGF e a activação do receptor foi analisada. Mesmo após 32 h não pode ser observada qualquer activação do receptor. Isto sugere fortemente que o MES(T) apresenta efeitos sustidos na cinase de 18 receptor, mesmo quando a concentração plasmática de MES(T) é muito baixa.

Os resultados da seguinte experiência de xenoenxerto in vivo evidenciam o efeito em células tumorais do composto MES(T). De modo a determinar este efeito, murganhos nude contendo tumores subcutâneos FaDu (os tumores FaDu são constituídos de células de carcinoma escamoso humano) foram tratados oralmente com o composto MES(T). Como mostrado na FIGURA 2, quando os murganhos foram tratados duas vezes semanalmente com uma dose de 100 mg/kg, pode ser observada uma redução de crescimento tumoral com um valor T/C (Tumor/controlo) de 31%. Ao aumentar a dose para 200 mg/kg oralmente duas vezes semanalmente, é esperado um efeito antitumoral ainda melhor.

Isto indica que este antagonista é particularmente adequado para uma co-administração e/ou co-tratamento sequenciais com outro agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico, e/ou radioterapia ou radioimunoterapia. O regime de tratamento programado com este antagonista pode ser, por exemplo, um tratamento alternado, dia sim/dia não, dia sim/dois dias não, semana sim/semana não ou mesmo duas semanas sim/duas semanas não. O sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona é assim, claramente, um inibidor da cinase VEGFR-2 potente e oralmente disponível e um agente antitumoral.

No que diz respeito a todos os aspectos da invenção, os antagonistas do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionados adequados são também metabolitos activos in vivo 19 do antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado. Por exemplo, um metabolito activo in vivo do antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase 3 — Z—[1—(4 — (N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona pode ser o composto 3-Z-[1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)- metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-carbonil-2-indolinona não esterifiçado. • 0 agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional

Este composto pode, de um modo preferido, ser seleccionado a partir das seguintes classes e exemplos de compostos ^ Moléculas pequenas antagonistas do receptor do factor de crescimento (GF)

Um composto preferido nesta classe é o derivado de quinazolina divulgado no documento WO 02/50043 como composto exemplificado do Exemplo 1(10), nomeadamente 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina, ou os seus tautómeros, estereoisómeros e sais, particularmente os seus sais fisiologicamente aceitáveis com ácidos inorgânicos ou orgânicos ou bases. É muito preferido o sal de ácido di-maleico deste composto, que pode ser facilmente obtido de acordo com o seguinte processo. 6,0 kg (12,35 mol) de 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l- 20 il]amino}-7-((Sj-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina são aquecidos até 70 °C em 84 litros de etanol. É adicionada uma solução de 2,94 kg (25,31 mol) de ácido maleico em 36 litros de etanol. No começo da cristalização, a mistura reaccional é arrefecida até 20 °C e agitada durante 2 horas. A mistura reaccional é arrefecida até 0 °C e agitada durante 3 horas. O precipitado é filtrado por sucção. O bolo de filtração é lavado com 19 litros de etanol e seco sob vácuo a 40 °C. > Compostos que interagem com ácidos nucleicos e que são classificados como agentes alquilantes ou compostos de platina

Os compostos que interagem com ácidos nucleicos e que são classificados como agentes alquilantes ou compostos de platina já foram descritos pela sua utilização para o tratamento de doenças de natureza oncológica. Um exemplo representativo é a carboplatina. > Inibidores de mitose, agentes antimitótcos ou inibidores do ciclo celular

As classes e os exemplos representativos de compostos de interesse são os fármacos anticancerosos de origem vegetal, tal como os taxanos (paclitaxel ou taxol, docetaxel ou taxotero).

Numa forma de realização adicionalmente preferida, de acordo com a presente invenção, o agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional é seleccionado do fármaco anticanceroso de origem 21 vegetal paclitaxel (taxol), docetaxel ou taxotero, do composto de platina carboplatina ou do derivado de quinazolina 4 — [ (3 — cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Numa forma de realização adicionalmente preferida, de acordo com a presente invenção, o agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional é seleccionado do derivado de quinazolina mencionado acima, divulgado no documento WO 02/50043 como composto exemplificado do Exemplo 1(10), nomeadamente 4-[ (3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina, ou os seus tautómeros, estereoisómeros e sais, particularmente os seus sais fisiologicamente e farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos ou orgânicos ou bases.

Numa forma de realização adicionalmente preferida, de acordo com a presente invenção, o agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional é seleccionado do sal de ácido di-maleico do composto 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(Ν,Ν-dimetilamino)-1-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina, ou os seus tautómeros ou estereoisómeros. • Terapia de radiaçao, radioimunoterapia ou radioimunoterapia pré-dirigida A radioterapia, radioimunoterapia ou radioimunoterapia pré-dirigida são utilizadas para o tratamento de doenças de natureza oncológica. "Radioterapia" ou terapia de radiação, 22 significa o tratamento do cancro e de outras doenças com radiação ionizante. A radiação ionizante deposita energia que lesiona ou destrói células na área a ser tratada (o tecido alvo) por lesão do seu material genético, tornando impossível que estas células continuem a crescer. A radioterapia pode ser utilizada para tratar tumores sólidos localizados, tais como cancros da pele, língua, laringe, cérebro, mama, pulmão ou colo do útero. Pode também ser utilizada para tratar leucemia e linfoma, i. e., cancros de células formadoras de sangue e do sistema linfático, respectivamente. Um tipo de radioterapia utilizado geralmente envolve fotões, e. g., raios X. Dependendo da quantidade de energia que possuem, os raios podem ser utilizados para destruir células cancerosas na superfície corporal ou mais profundamente no corpo. Quanto maior a energia do feixe de raios X, mais profundamente os raios X penetram no tecido alvo. Os aceleradores lineares e os betatrões são máquinas que produzem raios X de uma energia cada vez maior. A utilização de máquinas para focar a radiação (tal como raios X) num local de cancro é denominada radioterapia de feixe externo. Os raios gama são outra forma de fotões utilizados em radioterapia. Os raios gama são produzidos espontaneamente à medida que determinados elementos libertam radiação (tais como rádio, urânio e cobalto 60) enquanto se decompõem ou decaem. Uma outra técnica para distribuir radiação às células cancerosas é colocar implantes radioactivos directamente num tumor ou cavidade corporal. Isto é denominado radioterapia interna. A braquiterapia, irradiação intersticial e irradiação intracavitária são tipos de radioterapia interna. Neste tratamento, a dose de radiação está concentrada numa pequena área e o doente permanece no hospital durante alguns dias. A radioterapia interna é utilizada frequentemente para cancros da língua, útero e colo do útero. Uma técnica adicional é a irradiação intra-operativa, em que uma dose grande da radiação 23 externa é dirigida ao tumor e ao tecido circunvizinho durante a cirurgia. Uma outra abordagem é a radioterapia de feixe de partículas. Este tipo de terapia difere da radioterapia de fotão uma vez que envolve a utilização de partículas subatómicas de movimento rápido para tratar cancros localizados. Algumas partículas (neutrões, piões e iões pesados) depositam mais energia ao longo do trajecto que fazem através do tecido do que os raios X ou raios gama, provocando assim mais lesão às células que atingem. Este tipo de radiação é frequentemente referido como radiação de transferência linear de energia elevada (LET elevada). Os radio-sensibilizadores tornam as células tumorais mais susceptíveis de serem lesadas e os rádio-protectores protegem os tecidos normais dos efeitos da radiação. Hipertermia, a utilização de calor, pode também ser utilizada para sensibilizar o tecido à radiação. Uma outra opção envolve a utilização de anticorpos radio-marcados para distribuir doses de radiação directamente ao local do cancro (radioimunoterapia). Existem numerosos métodos disponíveis na técnica para ligar um radioisótopo a um anticorpo. Por exemplo, para a radioiodação do anticorpo, pode ser empregue um método como divulgado no documento WO 93/05804. Uma outra opção é utilizar uma molécula ligante entre o anticorpo e o radioisótopo, e. g., MAG-3 (documentos US 5082930, EP 0247866), MAG-2 GABA (documentos US 5681927, EP 0284071) e N2S2 (fentioato, documentos US 4897255, US 5242679, EP 0188256). Uma opção adicional é a radioimunoterapia pré-dirigida que pode ser utilizada para minimizar a toxicidade da radiação por separação do anticorpo de longa circulação e o radionuclido de eliminação rápida (Drugs of the future 2003, 28(2), pp. 167-173). Os protocolos detalhados para radioterapia estão prontamente disponíveis ao especialista (Câncer Radiotherapy: Methods and Protocols (Methods in Molecular Medicine), Huddart RA Ed., Human Press 2002) . 0 especialista sabe como determinar uma dosagem e um plano de aplicação apropriados, dependendo da natureza da doença e da constituição do doente. Em particular, o especialista sabe como avaliar a toxicidade limitadora de dose (DLT) e como determinar a dose máxima tolerada (MTD) em conformidade. • Terapias de co-administraçao e/ou co-tratamento A co-administração do antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado e do agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou o co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, tenciona incluir a administração e/ou o tratamento sequenciais no tempo ou a administração e/ou tratamento simultâneos. Para a administração e/ou o tratamento sequenciais, o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado pode ser administrado antes ou depois da administração do agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional, e/ou antes ou depois do tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia.

Os compostos activos podem ser administrados oralmente, bucalmente, parentericamente, por pulverização de inalação, rectal ou topicamente, sendo preferida a administração oral. A administração parentérica pode incluir injecções subcutâneas, intravenosas, intramusculares e intra-esternal e técnicas de infusão.

Os compostos activos podem ser administrados oralmente numa vasta variedade de diferentes formas de dosagem, i. e., podem ser formulados com vários veículos inertes farmaceuticamente aceitáveis na forma de comprimidos, cápsulas, pastilhas, 25 trociscos, rebuçados duros, pós, pulverizadores, suspensões aquosas, elixires, xaropes e semelhantes. Tais veículos incluem diluentes ou enchimentos sólidos, meios aquosos estéreis e vários solventes orgânicos não tóxicos. Além disso, tais formulações farmacêuticas orais podem ser apropriadamente adoçadas e/ou aromatizadas por meio de vários agentes do tipo habitualmente empregue para tais fins. Em geral, os compostos desta invenção estão presentes em tais formas de dosagem orais a níveis de concentração que variam desde cerca de 0,5% até cerca de 90% em peso da composição total, em quantidades que são suficientes para proporcionar as unidades de dosagem desejadas. Outras formas de dosagem adequadas para os compostos desta invenção incluem formulações de libertação controlada e dispositivos bem conhecidos daqueles que praticam no campo técnico.

Para fins de administração oral, podem ser empregues comprimidos contendo vários excipientes, tais como citrato de sódio, carbonato de cálcio e fosfato de cálcio conjuntamente com vários agentes de desintegração, tal como amido e, de um modo preferido, o amido de batata ou tapioca, ácido algínico e determinados silicatos complexos, conjuntamente com agentes de ligação, tais como polivinilpirrolidona, sacarose, gelatina e acácia. Além disso, podem também ser empregues agentes lubrificantes, tais como estearato de magnésio, laurilsulfato de sódio e talco ou composições de um tipo semelhante como agentes de enchimento em cápsulas de gelatina mole e dura; estão incluídos açúcar ou lactose do leite, assim como polietilenoglicóis de elevado peso molecular. Quando são desejadas suspensões aquosas e/ou elixires para administração oral, o ingrediente activo essencial nestas pode ser combinado com vários agentes edulcorantes ou aromatizantes, corantes ou pigmentos e, se assim desejado, agentes emulsionantes e/ou água, 26 etanol, propilenoglicol, glicerina e várias suas combinações semelhantes.

Para fins de administração oral, uma formulação farmacêutica especialmente adequada para o antagonista do receptor de cinase de proteína seleccionado de acordo com a presente invenção é cápsulas de gelatina mole. As cápsulas de gelatina mole adequadas para encapsulação de compostos farmacêuticos e o processo para a sua preparação são descritos, por exemplo, na Patente GB N° 395546, a Patente US N° 2720463, Patente US N° 2870062, Patente U.S. N° 4829057 e nas seguintes publicações: ANON (Verpack-Rundsch., Vol. 21, N° 1, Janeiro de 1970, pp. 136-138), Lachman et al. (The Theory and Practice of Industrial Pharmacy, Cap. 13, publicado por Lea & Febiger, 1970), Ebert (Soft Gelatine Capsules: A Unique Dosage Form, reprint from Pharmaceutical Technology, Outubro 1977) e R. F. Jimerson (Soft Gelatine Capsule Update, Drug Development and Industrial Pharmacy, Vol. 12 (8 & 9), pp. 1133-1144, 1986).

Para fins de administração parentérica, podem ser empregues soluções dos compostos em óleo de sésamo ou amendoim ou em propilenoglicol aquoso, assim como soluções aquosas estéreis dos sais farmaceuticamente aceitáveis correspondentes. Tais soluções aquosas devem ser apropriadamente tamponadas, se necessário, e o diluente liquido tornado isotónico com solução salina ou glucose suficiente. Estas soluções aquosas particulares são especialmente adequadas para fins de injecção intravenosa, intramuscular e subcutânea. Neste contexto, os meios aquosos estéreis utilizados são prontamente obtidos por técnicas correntes bem conhecidas dos especialistas na técnica. Por exemplo, a água destilada é utilizada habitualmente como o diluente liquido e a preparação final é passada através de um filtro bacteriano adequado, tal como um filtro de vidro 27 sinterizado ou um filtro de terra de diatomáceas ou de porcelana não vidrada. Os filtros preferidos deste tipo incluem o filtro de Berkefeld, de Chamberland e de disco metálico de asbesto de Seitz, em que o fluido é aspirado para um recipiente estéril com o auxilio de uma bomba de sucção. Devem ser realizados os passos necessários ao longo da preparação destas soluções injectáveis para garantir que os produtos finais são obtidos em condições estéreis.

Para fins de administração transdérmica, a forma de dosagem do composto ou compostos particulares pode incluir, a titulo de exemplo, soluções, loções, unguentos, cremes, géis, supositórios, formulações de libertação sustida de taxa limitada e dispositivos para esse fim. Tais formas de dosagem compreendem o composto ou os compostos particulares e podem incluir etanol, água, intensificador de penetração e veículos inertes, tais como materiais produtores de gel, óleo mineral, agentes emulsionantes, álcool benzílico e semelhantes.

De acordo com uma forma de realização, o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser administrado numa dosagem diária de modo que o nível plasmático da substância activa se encontre entre 10 e 500 ng/mL durante, pelo menos, 12 horas de um intervalo de dosagem de 24 horas.

De acordo com uma forma de realização adicional, o antagonista do receptor de proteína tirosina-cinase seleccionado ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser administrado numa dosagem diária entre 2 mg e 20 mg/kg de peso corporal. O agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional pode ser 28 administrado utilizando formas de dosagem, níveis de dosagem e dispositivos adequados bem conhecidos daqueles que praticam no campo técnico.

Como aqui já mencionado anteriormente, os protocolos detalhados para a radioterapia estão prontamente disponíveis ao especialista. 0 especialista sabe determinar uma dosagem e um plano de aplicação apropriados, dependendo da natureza da doença e da constituição do doente. Em particular, o especialista sabe como avaliar a toxicidade limitadora de dose (DLT) e como determinar a dose máxima tolerada (MTD).

Estudos de combinação in vitro e in vivo que mostram a potência para inibir a proliferação e/ou para induzir a apoptose de células tumorais

Nos seguintes exemplos de combinações, experiências in vitro com linhas celulares representativas ou experiências in vivo com murganhos nude que contêm tumores específicos, ilustram a potência da combinação de um antagonista da proteína tirosina-cinase seleccionado com um agente quimioterapêutico adicional e/ou com radioterapia para inibir a proliferação de células endoteliais ou tumorais e/ou para induzir a apoptose de células tumorais. Estes exemplos são assim ilustrativos da presente invenção.

Exemplos de combinações 1. Combinação de um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFRa e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR ou c-Kit, que é ainda um 29 antagonista de um membro da família da src-tirosina-cinase, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e de um antagonista duplo do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGF) e do receptor do factor de crescimento epidérmico humano de tipo 2 (HE de tipo 2), para o tratamento do cancro da próstata, cancro do pulmão da célula não pequena ou cancro colorrectal. A seguinte experiência foi realizada de modo a investigar o efeito de uma terapia de combinação com doses subóptimas de um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFROÍ e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR ou c-Kit, que é ainda um antagonista de um membro da família da src-tirosina-cinase, nomeadamente, o sal de dicloreto de (Z)—3—(1—(4—(N—((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona (composto referido como C12(T)), que é o sal de dicloreto do composto (T) exemplificado acima, e um antagonista duplo do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGF) e do receptor do factor de crescimento epidérmico humano de tipo 2 (HE de tipo 2), nomeadamente o composto 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofurano-3-iloxi)-quinazolina, (composto referido como inib. EGFR/HER2 e descrito no documento WO 02/50043 como o composto exemplificado do Exemplo 1(10)), na redução do crescimento tumoral, em comparação com monoterapias nas mesmas doses.

Para este fim, murganhos nude (NMRI nu/nu) foram injectados subcutaneamente com células SKOV-3 (carcinoma de ovário humano). Os murganhos que contêm tumores estabelecidos foram aleatorizados em grupos de controlo e de tratamento (N=10). Os murganhos no grupo de controlo apenas receberam a solução 30 veículo (0,5% de Natrosol), o segundo grupo foi tratado diariamente per os com 15 mg/kg de inib. EGFR/HER2, o terceiro recebeu uma vez diariamente 50 mg/kg de C12(T) e o quarto grupo de murganhos foi tratado com a combinação de 15 mg/kg de inib. EGFR/HER2 e 50 mg/kg de C12(T). A Figura 3 mostra os resultados da experiência. O tratamento diário per os foi realizado inicialmente durante 31 dias. Neste ponto temporal alguns dos murganhos do grupo de controlo continham tumores maiores que 2000 mm3 e, deste modo, tiveram que ser sacrificados. A razão calculada de tumor tratado para tumor de controlo (T/C) neste ponto temporal foi de 35% para o grupo tratado com 15 mg/kg de inib. EGFR/HER2, 32% para o grupo tratado com 50 mg/kg de C12(T) e 13% para o grupo tratado com a combinação. Este resultado demonstra claramente o efeito antitumoral da combinação de um inibidor de VEGFR-2 e um de EGFR/HER-2 in vivo. Além disso, a continuação do tratamento até que ao dia 64 mostra um crescimento tumoral extremamente lento no grupo de combinação em comparação com o grupo de tratamento único, onde os tumores estão consequentemente a crescer até tamanhos comparáveis como os tumores tratados com controlo. A partir dos resultados desta experiência, pode ser assim concluído que a combinação de compostos que se direccionam para diferentes mecanismos envolvidos e importantes para o crescimento tumoral, tal como o inibidor de VEGFR-2 C12(T), inibindo a angiogénese tumoral, e inibidor EGFR/HER-2 e inib. Combinados, EGFR/HER2, inibindo a sinalização proliferativa através do receptor de tirosina-cinases de classe I, tem uma eficácia antitumoral sinérgica. 31 2.

Combinação de um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFRa e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR ou C-Kit, que é ainda um antagonista de um membro da família da src-tirosina-cinase, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (o composto MES(T)) e de um fármaco anticanceroso de origem vegetal (paclitaxel ou taxol), para o tratamento do carcinoma do ovário, cancro do pulmão da célula pequena ou cancro da próstata. 3. Combinação de um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFRa e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR ou c-Kit, que é ainda um antagonista de um membro da família da src-tirosina-cinase ou um seu sal farmaceuticamente aceitável (o composto MES(T)), e de um fármaco anticanceroso de origem vegetal (taxotero) para o tratamento do cancro da próstata. 4. Combinação de um antagonista de, pelo menos, um receptor seleccionado de VEGFR 1 a 3, PDGFRa e β, FGFR1, 2 e 3, EGFR, HER2, IGF1R, HGFR ou C-Kit, que é ainda um antagonista de um membro da família da src-tirosina-cinase, ou um seu polimorfo, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável (o composto MES(T)), e de um composto de platina (carboplatina) para o tratamento do carcinoma do ovário ou cancro do pulmão da célula não pequena.

Essencialmente, para o tratamento de doenças oncológicas, a lógica subjacente para o tratamento de combinação de acordo com a presente invenção é que existe uma vantagem terapêutica para o doente canceroso de combinar moléculas que actuam 32 mecanisticamente e específicas com conceitos terapêuticos de actuação mais ampla nas seguintes formas: • Através da combinação, as células alvo terão menos possibilidades de sobreviver através de possíveis mecanismos de escape; • Quando comparadas às doses utilizadas numa monoterapia, devido a um efeito aditivo ou sinérgico da combinação, as respectivas doses requeridas dos fármacos podem ser reduzidas; • 0 planeamento dos respectivos fármacos numa combinação reduz a probabilidade das células tumorais desenvolverem resistências contra os fármacos, conduz a uma melhor distribuição de determinados fármacos ao tumor (redução da pressão intratumoral) e pode activar mais vias de morte nas células tumorais.

Assim, ao se dirigirem para diferentes estruturas e compartimentos celulares, espera-se que as terapias de combinação de acordo com a presente invenção proporcionem um benefício clinicamente relevante na sobrevivência ou no tempo de progressão tumoral para maiores populações de doentes do que as correspondentes monoterapias. Como um resultado da terapia antiangiogénica específica com, por exemplo, o composto MES(T), parece que os tumores são menos capazes de recuperar da lesão provocada pela quimioterapia convencional. Além disso, ao bloquear os efeitos do VEGF na permeabilidade vascular, parece ocorrer um declínio da pressão intersticial em tumores, permitindo uma maior penetração dos fármacos citotóxicos. A terapia de manutenção com um agente antiangiogénico específico, tal como, por exemplo, o composto MES(T), após cito-redução convencional, parece também resultar numa consolidação da resposta obtida com a terapia citotóxica. Esta abordagem é 33 substanciada por evidência pré-clinica de que combinações de compostos antiangiogénicos com terapias citotóxicas resultam em actividade antitumoral sinérgica.

Legenda das Figuras FIGURA 1

Inibição da fosforilação de VEGFR-2 após exposições variadas do composto MES(T) em células NIH3T3 KDR. 0 painel superior mostra uma transferência de Western sondada com um anticorpo específico para os resíduos de tirosina fosforilados (α-PY). 0 painel inferior mostra uma transferência de Western utilizando um anticorpo específico para VEGFR-2 (α-KDR). FIGURA 2

Evolução do volume tumoral em murganhos nude que contêm tumores FaDu subcutâneos, não tratados (linha tracejada), tratados oralmente duas vezes semanalmente com uma dose de 50 mg/kg de composto MES(T) (linha preta) ou tratados oralmente duas vezes semanalmente com uma dose de 100 mg/kg de composto MES(T) (linha cinzenta). FIGURA 3

Evolução do volume tumoral em murganhos nude que contêm tumores SKOV-3 de cancro de ovário subcutâneo, não tratados (traços), tratados diariamente per os com 15 mg/kg de inib. EGFR/HER2 (triângulos), tratados diariamente com 50 mg/kg de 34 C12(T) (quadrados) ou tratados com a combinação de 15 mg/kg de inib. EGFR/HER2 e 50 mg/kg de C12(T) (losangos).

Lisboa, 26 de Setembro de 2013 35

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Combinação farmacêutica compreendendo quantidades eficazes de (i) (Z)—3—(1—(4—(N—((4-metil-piperazin-l-il)-metil-carbonil)-N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e (ii) um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional seleccionado do grupo consistindo no antagonista duplo de EGFR/HER2 4-[ (3-cloro-4- fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetil-amino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidro-furan-3-iloxi)-quinazolina ou um sal farmaceuticamente aceitável, seus tautómeros ou estereoisómeros, o composto de platina carboplatina e os fármacos anticancerosos de origem vegetal paclitaxel ou docetaxel, e opcionalmente adaptada para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, na forma de uma preparação combinada para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento de tumores sólidos.
2. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que (i) é o sal de monoetanossulfonato de
3 —Z— [1— (4— (N— ( (4 — metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona. 1 3. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que (ii) é seleccionado do antagonista duplo de EGFR/HER2 4-[(3-cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-1-οχο-2-buten-l-il]amino)-7-((S)-tetra-hidrofuran-3-iloxi)-quinazolina ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou os seus tautómeros ou estereoisómeros.
4. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que (ii) é seleccionado do sal de ácido di-maleico de 4 —[(3 — cloro-4-fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetilamino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidrofuran-3-iloxi)-quinazolina ou os seus tautómeros ou estereoisómeros.
5. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que (ii) é seleccionado do composto de platina carboplatina.
6. Combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, em que (ii) é seleccionado dos fármacos anticancerosos de origem vegetal paclitaxel ou docetaxel.
7. Combinação farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que a preparação combinada é para utilização no tratamento de cancros urogenitais, cancros do pulmão, cancros gastrointestinais, cancro da cabeça e garganta, mesoteliomas malignos, cancro da mama, melanoma maligno ou sarcomas ósseos e de tecido mole.
8. Kit de preparação de combinação farmacêutica para utilização no tratamento de tumores sólidos, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de 2 (i) (Z)—3—(1—(4—(N—((4-metil-piperazin-l-il)-metil-carbonil)-N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e (ii) um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional seleccionado do grupo consistindo no antagonista duplo de EGFR/HER2 4-[(3-cloro-4- fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetil-amino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidro-furan-3-iloxi)-quinazolina ou um sal farmaceuticamente aceitável, os seus tautómeros ou estereoisómeros, o composto de platina carboplatina e os fármacos anticancerosos de origem vegetal paclitaxel ou docetaxel, e opcionalmente adaptada para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, caracterizado por (i) estar compreendido dentro de um primeiro compartimento e (ii) estar compreendido dentro de um segundo compartimento, de modo que a administração a um doente com a sua necessidade possa ser simultânea, separada ou sequencial.
9. Kit de preparação de combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, em que (i) é o sal de monoetanossulfonato de 3-Z-[l-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona. 3
10. Kit de preparação de combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 8 ou 9, em que a formulação de (i) é para administração oral.
11. Utilização de uma combinação farmacêutica ou um kit de preparação de combinação farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para o fabrico de um medicamento, adaptado opcionalmente para um co-tratamento com radioterapia ou radioimunoterapia, para tratar tumores sólidos, num corpo de mamífero humano ou não humano.
12. Utilização de uma quantidade eficaz de (i) (Z)—3—(1—(4—(N—((4-metil-piperazin-l-il)-metil-carbonil)-N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, ou um seu polimorfo, metabolito ou sal farmaceuticamente aceitável, e (ii) um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional seleccionado do grupo consistindo no antagonista duplo de EGFR/HER2 4-[(3-cloro-4- fluorofenil)amino]-6-([4-(N,N-dimetil-amino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino)-7-((S)-tetra-hidro-furan-3-iloxi)-quinazolina ou um sal farmaceuticamente aceitável, seus tautómeros ou estereoisómeros, o composto de platina carboplatina e os fármacos anticancerosos de origem vegetal paclitaxel ou docetaxel, para o fabrico de uma preparação farmacêutica de combinação, opcionalmente adaptada para um co-tratamento com 4 para radioterapia ou radioimunoterapia, para utilização simultânea, separada ou sequencial no tratamento de tumores sólidos, num corpo de mamífero humano ou não humano.
13. Utilização de acordo com a reivindicação 12, em que (i) é o sal de monoetanossulfonato de 3 — Z—[1—(4—(N-((4-metil- piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona.
14. Combinação farmacêutica ou um kit de preparação de combinação farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, para utilização no tratamento de tumores sólidos, num corpo de mamífero humano ou não humano, opcionalmente com radioterapia ou radioimunoterapia.
15. Preparação farmacêutica de combinação ou um kit de preparação de combinação farmacêutica compreendendo uma quantidade eficaz de (i) (Z)-3-(l-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-fenilamino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, e (ii) um agente terapêutico de ocorrência natural, semi-sintética ou sintética, ou quimioterapêutico adicional seleccionado do grupo consistindo no antagonista duplo de EGFR/HER2 4-[ (3-cloro-4- fluorofenil)amino]-6-{[4-(N,N-dimetil-amino)-l-oxo-2-buten-l-il]amino}-7-((S)-tetra-hidro-furan-3-iloxi)-quinazolina ou um sal farmaceuticamente aceitável, seus tautómeros ou estereoisómeros, o composto de platina 5 carboplatina e os fármacos anticancerosos de origem vegetal paclitaxel ou docetaxel, para utilização no tratamento simultâneo, separado ou sequencial de tumores sólidos, num corpo de mamífero humano ou não humano, opcionalmente com radioterapia ou radioimunoterapia.
16. Preparação farmacêutica de combinação ou o kit de preparação de combinação farmacêutica de acordo com a reivindicação 15, em que (i) é o sal de monoetanossulf onato de 3-Z-(1-(4-(N-((4-metil-piperazin-l-il)-metilcarbonil)-N-metil-amino)-anilino)-1-fenil-metileno]-6-metoxicarbonil-2-indolinona. Lisboa, 26 de Setembro de 2013 6