PT1381382E - Métodos e composições para o tratamento de doenças oculares - Google Patents

Description

1

DESCRIÇÃO

"MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA O TRATAMENTO DE DOENÇAS OCULARES"

ÁREA TÉCNICA A presente invenção refere-se genericamente ao domínio da medicina e refere-se especificamente a métodos e composições para o tratamento de doenças oculares utilizando antagonistas dos receptores integrinas ανβ3 e/ou ανβ5. Mais especificamente, a invenção refere-se a métodos e composições para o tratamento de doenças oculares utilizando antagonistas dos receptores integrinas ανβ3 e/ou ανβδ em que as composições são administradas por injecção na esclerótica ocular.

CONTEXTO

As integrinas são uma classe de receptores celulares que se sabe ligarem-se a proteínas da matriz extracelular; em consequência, medeiam interacções célula-célula e célula-matriz extracelular, referidas genericamente como acontecimentos de adesão. Os receptores integrinas constituem uma família de proteínas através de membranas com características estruturais partilhadas, complexos heterodiméricos de glicoproteínas formados por subunidades α e β. É conhecido que uma classe de receptores integrinas, o receptor da vitronectina, denominado pela sua característica original de ligação preferencial à vitronectina, se refere a três integrinas diferentes, 2 designadas ανβι, ανβ3 e ανβ5. Horton, Int. J. Exp. Pathol., 71 : 741-759 (1990). A ανβι liga-se à fibronectina e vitronectina. A ανβ3 liga-se a uma grande variedade de ligandos, incluindo fibrina, fibrinogénio, laminina, trombospondina, vitronectina, factor de von Willebrand, osteopontina e sialoproteína I óssea. A ανβδ liga-se à vitronectina. Os papéis de adesão celular específicos que estas três integrinas desempenham nas muitas interacções celulares em tecidos ainda estão a ser investigados, mas é claro que há diferentes integrinas com diferentes funções biológicas.

Um sítio de reconhecimento importante no ligando para muitas integrinas é a sequência tripeptídica arginina-glicina-ácido aspártico (RGD). A RGD encontra-se em todos os ligandos identificados acima para as integrinas receptoras da vitronectina. Este sítio de reconhecimento RGD pode ser imitado por polipéptidos ("péptidos") que contêm a sequência RGD, e esses péptidos com RGD são inibidores conhecidos da função de integrinas.

Inibidores de integrinas que contêm a sequência RGD são revelados, por exemplo, no documento EP 0 770 622 A2. Os compostos descritos inibem em particular as interacções de receptores integrinas β3 e/ou β5 com ligandos e são particularmente activos no caso das integrinas ανβ3, ανβ5 e 3ιιβ3, mas também relativamente a receptores ανβι, ανβ6 e ανβδ · Estas acções podem ser demonstradas, por exemplo, de acordo com o método descrito por J. W. Smith et ai. em J. Biol. Chem. 265, 12267-12271 (1990). Adicionalmente, os compostos possuem efeitos anti-inflamatórios. 3

Com base em inibidores de integrinas contendo a sequência RGD foi disponibilizada uma pluralidade de antagonistas sem a sequência RGD. Esses inibidores de integrinas sem a sequência RGD são revelados, por exemplo Al, WO 96/18602 Al, WO 97/37655 Al, WO 97/45137 Al, WO 97/23451 Al, WO 97/23480 Al, WO 98/00395 Al, WO 98/14192 Al, WO 99/11626 Al, WO 99/15178 Al, WO 99/15508 Al, WO 99/44994 Al, WO 99/45927 Al, WO 00/03973 Al, WO Al. 00/09143 Al, WO 00/09503 em WO 96/00730 97/06791 Al, WO Al, WO 97/44333 98/30542 Al, WO Al, WO 99/26945 99/50249 A2, WO Al, WO 00/33838 O documento DE 1970540 Al revela aminoácidos aromáticos biciclicos que actuam como inibidores de integrinas dos receptores integrinas av, particularmente das integrinas ανβ3 e ανβδ. Os compostos são muito particularmente activos como antagonistas de receptores de adesão para o receptor da vitronectina ανβ3. Este efeito pode ser demonstrado, por exemplo, pelo método descrito por J. W. Smith et al. em J. Biol. Chem. 265, 11008-11013 e 12267-12271 (1990). O documento WO 00/26212 Al revela derivados cromenona e cromanona que actuam como inibidores de integrinas dos receptores integrinas av, particularmente das integrinas ανβ3 e ανβ5. Os compostos também são muito particularmente activos como antagonistas de receptores de adesão para o receptor da vitronectina ανβ3.

Os inibidores de integrinas foram sugeridos como principio farmaceuticamente activo em medicina humana e veterinária, em particular para a profilaxia e tratamento de várias perturbações. Foi especificamente sugerida a sua utilização 4 para o tratamento e profilaxia da circulação, trombose, enfarte cardiaco, arteriosclerose, inflamações, apoplexia, angina pectoris, perturbações tumorais, perturbações osteoliticas, especialmente osteoporose, angiogénese e perturbações resultantes de angiogénese, por exemplo, retinopatia diabética ocular, degenerescência macular, miopia, histoplasmose ocular, artrite reumática, osteoartrite, glaucoma rubeótico e também colite ulcerativa, doença de Crohn, esclerose múltipla, psoriase e restenose após angioplastia.

Doenças oculares resultantes de angiogénese são a principal causa de perda de visão na América. No caso da população com idade superior a 65 anos, a perda de visão deve-se predominantemente a degenerescência macular relacionada com a idade (DMI), ao passo que, no caso da população com idade inferior a 65 anos, se deve predominantemente a retinopatia diabética.

No Wall Street Journal de 6 de Março de 2000 é apresentado um artigo sobre a ocorrência e terapias correntes de DMI. De acordo com este artigo, a DMI afecta presentemente cerca de 12 milhões de americanos. A DMI destrói progressivamente a mácula, que é responsável pela visão central e visão da cor. Nalguns casos, a deterioração da visão central numa névoa indistinta pode ocorrer rapidamente em semanas ou meses. Há duas formas da doença, denominadas "atrófica" e "exsudativa". Apesar da DMI exsudativa afectar apenas 10% da população total com DMI, é responsável por 90% de todos os casos de cegueira relacionada com DMI.

Até há pouco tempo, o único tratamento para DMI exsudativa consistia em dirigir um feixe laser potente para os vasos 5 sanguíneos nocivos, para aquecê-los e coagulá-los. Todavia, apenas cerca de 15% dos pacientes com DMI exsudativa foram elegíveis para esta cirurgia a laser. Outras terapias estão presentemente na fase experimental. Numa abordagem, denominada terapia fotodinâmica, um laser pouco potente é combinado com a injecção de corante que absorve luz. Outra terapia é uma abordagem mais cirúrgica e é denominada "translocação da retina limitada". Nesta terapia, os vasos com fugas são destruídos com um laser de alta potência após separação e rotação da retina da parede externa do olho. 0 documento US 5,766,591 descreve a utilização de antagonistas de ανβ3 contendo RGD para o tratamento de pacientes nos quais ocorre neovascularização no tecido retiniano. Mais especificamente, é sugerida a utilização dos referidos antagonistas para o tratamento de pacientes com retinopatia diabética, degenerescência macular e glaucoma neovascular. No entanto, não são apresentados exemplos respeitantes a estas indicações. No que se refere à via de administração são apenas fornecidas informações gerais. São especificamente mencionadas a aplicação intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intra-cavidades e transdérmica. Em todos os casos são preferidos antagonistas de ανβ3 exibindo selectividade para ανβ3 relativamente a outras integrinas, como ανβ5. 0 documento WO 97/06791 AI descreve que antagonistas de ανβ5 também podem ser utilizados para inibir a angiogénese. Tal como foi sugerido para antagonistas de ανβ3 no documento US 5,766,591, são sugeridos antagonistas de ανβ5 para o tratamento de um paciente com retinopatia diabética, degenerescência macular e glaucoma neovascular. No que se 6 refere à via de administração, é especificamente mencionada a aplicação intravenosa, intra-ocular, intra-sinovial, intramuscular, transdérmica e oral. 0 documento WO 00/07565 AI descreve um método para aplicação de substâncias farmaceuticamente activas no olho via injecção intra-esclerótica na camada esclerótica. Como substâncias activas é mencionada, no documento WO 00/07565 Al, uma pluralidade de substâncias activas, incluindo bloqueadores de integrinas. Contudo, o termo bloqueador de integrinas é silencioso no que diz respeito ao tipo de receptores e refere-se a todas as substâncias que actuam como inibidores em qualquer uma das grandes classes de receptores heterodiméricos formados por subunidades α e β. Além disso, não são apresentados exemplos de bloqueadores de integrinas.

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

Foi descoberto que inibidores de receptores integrinas ανβ3 e/ou ανβδ têm propriedades farmacológicas e fisico-quimicas particularmente úteis combinadas com boa tolerabilidade, pois podem ser utilizados, em particular, para profilaxia e tratamento de doenças oculares de um paciente originárias de angiogénese no olho, injectando o inibidor na camada esclerótica ocular.

Em conformidade, a invenção é dirigida a um método para a profilaxia e/ou tratamento de doenças oculares de um paciente originárias de angiogénese no olho, que compreende injectar na camada esclerótica ocular do referido paciente uma composição compreendendo uma quantidade 7 terapeuticamente eficaz de um inibidor de ανβ3 e/ou ανβ5 suficiente para inibir a angiogénese do olho, em que a injecção é feita no local da superfície exterior da esclerótica que recobre tecido retiniano.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade do inibidor suficiente para produzir uma inibição mensurável da angiogénese no tecido do olho quando injectada na camada esclerótica. Em geral, é este o caso quando o inibidor de ανβ3 e/ou ανβδ é utilizado numa quantidade desde cerca de 0,5 μg até cerca de 5 mg. O método da invenção pode ser especialmente utilizado para profilaxia e/ou tratamento de retinopatia diabética, degenerescência macular, miopia e histoplasmose.

Os inibidores de ανβ3 e/ou ανβδ a serem utilizados no método para profilaxia ou tratamento de doenças oculares consistem num composto de fórmula II:

em que R1 é H, alquilo com 1-6 átomos C ou benzilo, R2 é O o 0 1 o COOR6, COOR10, S02R6 ou S02R1q, R3 é H, Hal, OA, , NHR10, N(R10)2, -NH-acilo, -0 CN, N02, OR10, SR10, R2 ou CONHR10, R4 é H, =0, =S, Ci-C6-alquilo ou acilo, 8 8 R5

R 7

R R7 e R8, X, Y, Y w, z, R6

R 9 R11 A, A',

Ar é NH2, H2N-C(=NH) ou H2N-(C=NH)-NH, em que os grupos amino primários também podem estar dotados de grupos protectores de amino convencionais ou podem estar mono-, di- ou trissubstituidos com R10, CO-R10, COOR10 ou S02R10, ou R6, cada um independentemente do outro, estão ausentes ou são H, em conjunto, também formam uma ligação, cada um independentemente do outro, são =N-, -N-, 0, S, -CH2- ou =C-, com a condição de pelo menos uma das duas definições de X, ser =N—, -N-, 0 ou S, cada um independentemente do outro, estão ausentes, são 0, S, NR1, C(=0), CONH, NHCO, C(=S)NH, NHC(=S), C(=S), S02NH, NHS02 ou CA=CA', é um heterociclo mono- ou binuclear que tem 1 até 4 átomos N, 0 e/ou S e pode não estar substituído ou estar mono-, di- ou trissubstituído com Hal, A, -CO-A, OH, CN, COOH, COOA, C0NH2, N02, =NH ou =0, é H, Hal, OA, NHA, NAA' , NHacilo, Oacilo, CN, N02, SA, SOA, S02A, S02Ar ou S03H, é Η, A, Ar ou aralquilo com 7-14 átomos C, é H ou alquilo com 1-6 átomos C, cada um independentemente do outro, são H ou alquilo ou cicloalquilo não substituído ou mono-, di- ou trissubstituído com R9, cada um dos quais tem 1-15 átomos C e em que um, dois ou três grupos metileno podem estar substituídos com N, 0 e/ou S, é um sistema em anel aromático mono- ou binuclear não substituído ou mono-, di- ou trissubstituído 9 com A e/ou R9 possuindo 0, 1, 2, 3 ou 4 átomos N, O e/ou S,

Hal é F, Cl, Br ou I, e m, n, cada um independentemente do outro, são 0, 1, 2, 3 ou 4, e os respectivos sais fisiologicamente aceitáveis.

Em particular, o ingrediente activo a ser utilizado é: ácido (2S)—2—(2,2-dimetilpropiloxicarboxamido)— 3 —{3,4-di- hidro-2-[N-(2-imidazolil)carbamoíletil]-(2S)-2H-1,4-benzoxazino-3-ona-6-il}propiónico. A inibição da angiogénese após aplicação intra-esclerótica do composto pode ser demonstrada quantificando a neovascularização no olho após estimulação da angiogénese e subsequente aplicação intra-esclerótica do inibidor de ανβ3 e/ou ανβ5. Um modelo adequado para demonstrar o efeito inibidor de inibidores de ανβ3 e/ou ανβ5 na angiogénese é, por exemplo, o modelo de microbolsas na córnea de coelho descrito por Shaffer R. W. et al. em: "Molecular, Cellular, and Clinicai Aspects of Angiogenesis", Maragoudakis E. (editor), Plenum Press, Nova Iorque, página 241 e seguintes (1996). Neste modelo, a angiogénese é estimulada por implantação na córnea de esférulas de Hydron contendo uma citoquina estimuladora da angiogénese, tal como, por exemplo, factor de crescimento de fibroblastos (FGF) ou factor de crescimento vascular endotelial (VEGF). Após a implantação, o composto activo a ser testado é administrado por injecção intra-esclerótica paralímbica. Mede-se o efeito na neovascularização, após intervalos de tempo 10 predeterminados, por exame visual utilizando um microscópio, tirando fotografias e quantificação de fotografias auxiliada por computador.

Como alternativa à aplicação de angiogénese induzida por citoquinas, a indução da angiogénese também pode ser efectuada por fotocoagulação com laser, como descrito, por exemplo, por Murata T. et al., IOVS 4_1, página 2309 e seguintes (2000).

Outro objectivo da invenção consiste em proporcionar uma composição adequada para o método de profilaxia e tratamento de doenças oculares de um paciente originárias de angiogénese, que compreende injectar na camada esclerótica ocular do referido paciente uma composição que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor de ανβ3 e/ou ανβ5 suficiente para inibir a angiogénese do olho. A formulação usada para administração do composto na camada esclerótica ocular pode tomar qualquer forma adequada para aplicação na esclerótica por injecção com uma cânula de pequeno diâmetro adequada para injecção na camada esclerótica. Exemplos de formas de aplicações injectáveis são soluções, suspensões ou suspensões coloidais. A esclerótica é uma fina camada avascular compreendida por redes de colagénio altamente ordenadas que envolve a maior parte do olho de vertebrados. Uma vez que a esclerótica é avascular, pode ser utilizada como depósito de armazenamento natural de onde material injectado não pode ser rapidamente removido nem eliminado do olho. 11

Dependendo da forma de aplicação, o composto activo é libertado com um perfil de libertação imediata ou prolongada. É preferida uma formulação de libertação prolongada porque a frequência das injecções pode ser suplementarmente reduzida.

Uma possibilidade de se obter uma cinética de libertação prolongada é embutir ou encapsular o composto activo em nanoparticulas. As nanoparticulas podem ser administradas como um pó, uma mistura em pó com excipientes adicionados ou como suspensões. São preferidas suspensões coloidais de nanoparticulas porque podem ser facilmente administradas com uma cânula de pequeno diâmetro.

Nanoparticulas são partículas com um diâmetro desde cerca de 5 nm até cerca de 1000 nm. Tal como é aqui utilizado a seguir, o termo "nanopartículas" refere-se a partículas formadas por uma matriz polimérica onde o composto activo é disperso, também conhecidas como "nanoesferas", e também se refere a nanopartículas que são compostas por um núcleo contendo o composto activo que está envolvido por uma membrana polimérica, também conhecidas como "nanocápsulas". Para administração na esclerótica ocular são preferidas nanopartículas com um diâmetro desde cerca de 50 nm até cerca de 500 nm, em particular desde cerca de 100 nm até cerca de 200 nm.

Podem preparar-se nanopartículas por polimerização in situ de monómeros dispersos ou utilizando polímeros pré-formados. Uma vez que é frequente que polímeros preparados in situ não sejam biodegradáveis e/ou contenham produtos secundários com problemas toxicológicos graves, são preferidas nanopartículas de polímeros pré-formados. 12

Nanopartícuias de polímeros pré-formados podem ser preparadas por diferentes técnicas, isto é, por evaporação da emulsão, deslocamento de solvente, precipitação por salificação e por emulsificação-difusão. A evaporação da emulsão é a técnica clássica de preparação de nanopartícuias a partir de polímeros pré-formados. De acordo com esta técnica, o polímero e os compostos activos são dissolvidos num solvente orgânico imiscível com água, que é emulsionado numa solução aquosa. Em seguida, a emulsão em bruto é exposta a uma fonte de alta energia, como dispositivos ultra-sónicos, ou é passada por homogeneizadores de alta pressão ou dispositivos de microfluidização, para reduzir a dimensão das partículas. Subsequentemente remove-se o solvente orgânico por calor e/ou vácuo, o que resulta na formação das nanopartículas com um diâmetro de cerca de 100 nm até cerca de 300 nm. Habitualmente, como solvente orgânico utiliza-se cloreto de metileno e clorofórmio devido à sua insolubilidade em água, boas propriedades de solubilização, emulsificação fácil e elevada volatilidade. No entanto, estes solventes são críticos no que se refere à sua tolerabilidade fisiológica. Além disso, a elevada força de cisalhamento necessária para reduzir a dimensão das partículas pode danificar o polímero e/ou o composto activo. O processo de deslocamento de solvente foi primeiramente descrito no documento EP 0 274 961 AI. Neste processo, o composto activo e o polímero são dissolvidos num solvente orgânico que é miscível com água em todas as proporções. Esta solução é introduzida numa solução aquosa que contém um estabilizador, com agitação suave, originando a formação espontânea de nanopartículas. Exemplos de solventes 13 orgânicos e estabilizadores adequados são acetona ou etanol, respectivamente, álcool polivinilico. Vantajosamente, podem evitar-se solventes clorados e força de cisalhamento. 0 mecanismo de formação de nanoparticulas foi explicado por turbulência interfacial gerada durante o deslocamento do solvente (Fessi H. et ai., Int. J. Pharm. 55 (1989) R1-R4). Recentemente foi revelada uma técnica de deslocamento de solvente, no documento WO 97/03657 Al, segundo a qual o solvente orgânico que contém o composto activo e o polímero é introduzido na solução aquosa sem agitação. A técnica de precipitação por salificação foi primeiramente descrita em WO 88/08011 Al. Nesta técnica, uma solução de um polímero insolúvel em água e um composto activo num solvente orgânico solúvel em água, especialmente acetona, é misturada com uma solução ou gel viscoso aquoso concentrado que contém um estabilizador coloidal e um agente de precipitação por salificação. À emulsão óleo em água resultante adiciona-se água numa quantidade suficiente para se difundir na fase aquosa e para induzir difusão rápida do solvente orgânico na fase aquosa, conduzindo a turbulência interfacial e formação de nanoparticulas. O solvente orgânico e o agente de precipitação por salificação que permanecem na suspensão de nanopartículas são subsequentemente eliminados por lavagem repetida com água. Alternativamente, o solvente e o agente de precipitação por salificação podem ser eliminados por filtração com fluxo cruzado.

No processo de emulsificação-difusão, o polímero é dissolvido num solvente orgânico parcialmente solúvel em água e saturado em água. Esta solução é misturada com uma 14 solução aquosa que contém um estabilizador, resultando numa emulsão óleo-em-água. A esta emulsão adiciona-se água, fazendo com que o solvente se difunda para a fase externa aquosa acompanhado da formação de nanoparticulas. Durante a formação de partículas, cada gotícula da emulsão conduz a várias nanoparticulas. Uma vez que este fenómeno não pode ser completamente explicado pelo efeito de convecção causado pela turbulência interfacial, foi proposto que a difusão do solvente orgânico a partir das gotículas da emulsão em bruto transporta moléculas da fase de composto activo e polímero para a fase aquosa, originando regiões locais supersaturadas de onde o polímero se agrega na forma de nanoparticulas (Quitanar-Guerrero D. et al., Colloid. Polym. Sei. 275 (1997) 640-647). Vantajosamente, podem utilizar-se como solventes orgânicos solventes farmaceuticamente aceitáveis, como carbonato de propileno ou acetato de etilo.

Com os métodos descritos acima podem formar-se nanoparticulas com vários tipos de polímeros. Para utilização no método da presente invenção, que envolve injectar a formulação na esclerótica ocular, são preferidas nanoparticulas feitas de polímeros biocompatíveis. O termo "biocompatível" refere-se a um material que, depois de introduzido num ambiente biológico, não exerce efeitos graves no ambiente biológico. Dos polímeros biocompatíveis são especialmente preferidos aqueles polímeros que também são biodegradáveis. 0 termo "biodegradável" refere-se a um material que, depois de introduzido num ambiente biológico, é degradado de forma enzimática ou química em moléculas mais pequenas, que subsequentemente podem ser eliminadas. 15

Polímeros biodegradáveis são bem conhecidos do experimentado na área. Exemplos são poliésteres de ácidos hidroxicarboxílicos, como poli(ácido láctico) (PLA), poli(ácido glicólico) (PGA), policaprolactona (PCL), copolímeros de ácido láctico e ácido glicólico (PLGA), copolímeros de ácido láctico e caprolactona, poli-épsilon-caprolactona, ácido poli-hidroxibutírico e poli(orto) ésteres, poliuretanos, polianidridos, poliacetais, polidi-hidropiranos, policianoacrilatos, polímeros naturais, como alginato e outros polissacáridos, incluindo dextrano e celulose, colagénio e albumina.

Os lipossomas são outro sistema de distribuição de fármacos que é facilmente injectável. Em conformidade, no método da invenção, os compostos activos também podem ser administrados na esclerótica ocular na forma de um sistema de distribuição em lipossomas. Os lipossomas são bem conhecidos do experimentado na área. Os lipossomas podem ser formados a partir de uma variedade de fosfolípidos, como colesterol, estearilamina de fosfatidilcolinas. Os lipossomas que podem ser utilizados no método da invenção abrangem todos os tipos de lipossomas, incluindo mas não se limitando a pequenas vesículas unilamelares, grandes vesículas unilamelares e vesículas multilamelares.

Exemplo

Examinou-se o efeito da aplicação intra-esclerótica de um inibidor de ανβ3 e/ou ανβ5 no modelo de microbolsas na córnea de coelho descrito por Shaffer R.W. (ver acima). Utilizou-se na experiência o inibidor de ανβ3 e/ou ανβ5 ácido (2 S)-2-(2,2-dimetilpropiloxicarboxamido)—3 —{3,4-di- hidro-2-[N-(2-imidazolil)carbamoíletil]-(2S)-2H-1,4- 16 benzoxazino-3-ona-6-il}propiónico. Para a indução da angiogénese utilizaram-se esférulas de Hydron contendo factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF). Procedeu-se à preparação de implantes que continham bFGF moldando Hydron [metacrilato de poli(hidroxietilo)] em cavilhas de Teflon especialmente preparadas com um núcleo de 5 mm perfurado nas suas superfícies. Em cada cavilha colocaram-se aproximadamente 12 μύ de material de moldagem, tendo sido polimerizado durante a noite numa hote esterilizada e depois esterilizado por irradiação ultravioleta. A experiência consistiu em 12 animais; em cada olho dos animais implantou-se uma esférula individual numa "bolsa" criada cirurgicamente no meio do estroma da córnea dos coelhos. 0 procedimento cirúrgico foi conduzido com técnica esterilizada utilizando um microscópio Wild modelo M691 equipado com um separador de feixe e uma câmara para registar fotograficamente as córneas individuais. Utilizou-se uma lâmina 69 Beaver para criar uma "bolsa" de 3 mm por 5 mm com uma profundidade de metade da espessura da córnea. 0 estroma foi dissecado perifericamente utilizando uma espátula e a esférula foi implantada com a sua margem periférica a 2 mm do limbo. Imediatamente após a implantação de esférulas de Hydron que continham bFGF, 6 dos 12 animais receberam em cada olho 100 μ]0 de uma solução de fármaco consistindo em 2,0 mg/mL de ácido (2S)-2-(2,2-dimetilpropiloxicarboxamido)— 3 —{3,4-di-hidro-2-[N-(2-imidazolil)carbamoíletil]-(2S)-2H-1,4-benzoxazino-3-ona-6-iljpropiónico solubilizado em solução salina tamponada com fosfato (PBS) por injecção intra-esclerótica paralímbica. Para fins comparativos conduziu-se o mesmo procedimento nos outros 6 animais utilizando apenas PBS. Após a implantação, 17 fotografaram-se os olhos e mediu-se a área de neovascularização após intervalos predeterminados. Apresentam-se nas tabelas 1 e 2 os resultados obtidos 5 e 7 dias pós-implantação.

Tabela 1 Efeito de Uma Única Injecção (Dia 0) Intra-Esclerótica de Ácido (2S)-2-(2,2-dimetilpropil-oxicarboxamido)— 3 —{3,4-di-hidro-2 - [N-(2-imidazolil)carbamoíletil]-(2S)-2H-1,4-benzoxazino-3-ona-6-iljpropiónico em Angiogénese da Córnea Estimulada por bFGF, 5 Dias Pós-Implantação bFGF + solução de fármaco (100 μ]^; 2,0 mg/mL) bFGF + PBS (100 μΜ Coelho Área (mm2) Coelho Área (mm2) 6290 R 3, 47 6296 R 8,90 6290 L 26, 79 6296 L 12,15 6291 R 14, 76 6297 R 42,95 6291 L 7, 70 6297 L 8,63 6292 R 1, 00 6298 R 19,86 6292 L 0,88 6298 L 4,61 6293 R 8,19 6299 R 21,20 6293 L 2,26 6299 L 12, 75 6294 R 0,0 6300 R 34, 13 6294 L 7,31 6300 L 18,01 6295 R 15, 85 6301 R 31,61 6295 L 12, 45 6301 L 16,59 MÉDIA 8,39 19,28 D.P. 7, 96 11,58 E.P.M. 2,30 3,34 18

Aos 5 dias pós-implantação, a neovascularização foi inibida em 56,5% (p < 0,01) no grupo de animais que receberam solução de fármaco em comparação com o grupo de animais que receberam apenas PBS.

Tabela 2 Efeito de Uma Única Injecção (Dia 0) Intra-

Esclerótica de Ácido (2S)-2-(2,2-dimetilpropil-oxicarboxamido)-3-{3,4-di-hidro-2-[N-(2-imidazolil)carbamoiletil]-(2S)-2H-1,4-benzoxazino-3-ona-6-il}propiónico em Angiogénese da Córnea Estimulada por bFGF, 7 Dias Pós-

Implantação bFGF + solução de fármaco (100 μΕ; 2,0 mg/mL) bFGF + PBS (100 μΜ Coelho Área (mm2) Coelho Área (mm2) 6290 R 6,69 6296 R 11,37 6290 L 27, 96 6296 L 15, 01 6291 R 15, 58 6297 R 51, 08 6291 L 11,32 6297 L 14, 96 6292 R 2,09 6298 R 21, 73 6292 L 1,91 6298 L 6, 01 6293 R 11,93 6299 R 24, 08 6293 L 3,51 6299 L 16, 96 6294 R 0,0 6300 R 22,30 6294 L 11,56 6300 L 23, 85 6295 R 16,90 6301 R 33, 00 6295 L 14, 40 6301 L 19,27 MÉDIA 10,32 21,64 D.P. 8,03 11,57 E.P.M. 2,32 3,34 19

Aos 7 dias pós-implantação, a neovascularização foi inibida em 52,3% (p < 0,01) no grupo de animais que receberam solução de fármaco em comparação com o grupo de animais que receberam apenas PBS.

Os resultados obtidos demonstram claramente o efeito vantajoso da presente invenção. Apesar de ter sido administrada apenas uma única dose do inibidor de ανβ3 e/ou α,νβδ e da formulação do fármaco ter consistido somente numa solução, ocorreu inibição forte da neovascularização durante muitos dias.

Lisboa, 20 de Fevereiro de 2009

Claims (6)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Utilização de ácido (2 S)-2-(2,2-dimetilpropil- oxicarboxamido)—3 —{3,4-di-hidro-2-[N-(2-imidazolil) carbamoiletil]-(2S)-2H-1,4-benzoxazino-3-ona-6-il} propiónico, ou respectivos sais fisiologicamente aceitáveis, para o fabrico de uma preparação destinada à profilaxia e/ou tratamento de doenças oculares de um sujeito originárias de angiogénese no olho, em que a referida preparação se destina a ser injectada no local da superfície exterior da esclerótica que recobre tecido retiniano do olho do referido sujeito e compreende uma quantidade eficaz do referido inibidor que é suficiente para inibir a angiogénese do olho.

2. Utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida quantidade vai desde cerca de 0,5 μg até 5 mg.

3. Utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida doença ocular é retinopatia diabética.

4. Utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida doença ocular é degenerescência macular.

5. Utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida doença ocular é miopia.

6. Utilização de acordo com a Reivindicação 1, em que a referida doença ocular é histoplasmose ocular. Lisboa, 20 de Fevereiro de 2009